TWI459953B - 提高蛹蟲草產能及有效成份之固態培養基組合物 - Google Patents

Description

提高蛹蟲草產能及有效成份之固態培養基組合物

一種可提高蛹蟲草有效成份之固態培養基成份及方法，利用培養過程中添加動物性蛋白、植物性蛋白、益生菌發酵液或中藥萃取物來培育蛹蟲草，加上適當之培養環境，已達到縮短培育時間、提升蛹蟲草子實體的產能及提高有效成分蟲草素(cordycepin)含量。

蟲草是我國的一種名貴野生中藥材，具有補虛損、益精氣、保肺、益腎、止血化痰、滋補強壯等功效，蟲草與人參、鹿茸列為中國三大補藥。如西元1757年《本草從新》中就有「冬蟲夏草甘平保肺，益腎，補精髓，止血化痰，已勞咳，治膈症皆良」的記載。中醫認為，蟲草入肺腎二經，既能補肺陰，又能補腎陽，主治腎虛，陽萎遺精，腰膝酸痛，病後虛弱，久咳虛弱，勞咳痰血，自汗盜汗等，是唯一的一種能同時平衡、調節陰陽的中藥。全世界已知蟲草類有350餘種，在中國大陸目前有62種，但最為昂貴的只有冬蟲草和北蟲草。古語曰：寧要蟲草一把，不要金玉滿車；民間則稱之為「活黃金」。

在「本草從新」及「本草網目拾遺」中記載的冬蟲夏草(Cordyceps sinensis) 就是野生蟲草的一種，有記載的蟲草屬約略有300多種，但迄西元1993年止已報導的中國產蟲草僅約60餘種。冬蟲夏草是一種珍貴的藥用真菌，具有較高的醫療、保健及經濟 價值，因此在中國大陸許多中醫研究所、藥學研究所、蠶業科學研究所、大學及醫院...等，紛紛投入有關蟲草的研究，成果豐碩，而研究培育出來的蟲草，便稱為人工蟲草。目前這些人工蟲草大致分為四類：

(一)冬蟲夏草(Cordyceps sinensis) ：野生冬蟲夏草的寄主為蝙蝠蛾(Hepialus oblifurous chuet Wang) ，無性階段是中華被毛孢菌(chirsutella sinensis )。人工培育者多數為各種蟲草菌的菌絲體及其發酵產物，其成份和藥理作用雖與野生冬蟲夏草相類似，但其間差異仍大。

(二)蛹蟲草(Cordyceps militaris) ：蛹蟲草的寄主為柞蠶蛹，無性階段為蛹草擬青霉(pascilomyces militarae )。將蛹草菌接種在柞蠶蛹上，所形成之蛹蟲草子實體，稱為蛹蟲草(即蠶蛹蟲草)。

(三)古尼蟲草(Cordyceps gunnii) ：是一種寄生蝙蝠蛾幼蟲的大型蟲草。子座從寄主頭部生出，柄白色，長1至9公分，粗0.5至0.6公分，頂部一般灰色至灰黑色，長卵圓形至柱狀，單生，二叉分枝或成簇著生，一般大小約8至22公厘×5至8公厘，成熟時與柄的界限分明，無不孕頂端。子囊殼擬卵形或安瓿瓶形，0.7至0.9公厘×0.2至0.3公厘，埋生，成熟時孔口外露。寄生於土中蝙蝠蛾科(Hepiaidae)昆蟲的幼蟲上。古尼蟲草菌為古尼擬青霉(pascilomyces gunnii )，可在一般培養基中形成子囊殼的子實體。

(四)蟬草(Cordyceps.sobolifera) ：又名蟬花或蟬茸，寄主為蟬的幼蟲體，子座單生或2至3個分叉，從寄主頭部前端生出，長2至6公分，棍棒狀或鹿角狀，初灰白色，後淡黃色至黑褐色。全草入藥，有明目之效。我國江南各省均有分佈。該草系利用蟬草菌在蛋白質等成份之培養基上生長培育，目前已能工業化生產。

蛹蟲草(Cordyceps militaris)與冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)同是子囊菌門、核菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬的真菌，又稱北蟲草或是北方蟲草、蛹草、蠶蛹蟲草、鱗蛹蟲草、北冬蟲夏草，是寄生於昆蟲幼體或蛹體上所形成的一種假菌核，學名為Cordyceps militaris ，世界性分佈天然資源數量很少。蛹蟲草型態上及培養方式與冬蟲夏草有相當的差異，真正的冬蟲夏草均為野生，無法以人工培養，冬蟲夏草僅可寄主於蝙蝠蛾幼蟲，蛹蟲草的寄主範圍較為廣泛，蛹蟲草的孢子一般會飛散在葉片或土壤中，當磷翅目的幼蟲在取食時將孢子食入，隨後孢子發芽，菌絲纏繞菌體，當蟲體化蛹時，蟲體會死亡，子座即從蛹中長出，因此得名蛹蟲草。蛹蟲草一般為單生子座或數個從寄主頭部生出，也有蟲體節部長出，為橘紅色或橘黃色，頂部呈棒狀的子座，人工培養蛹蟲草的外型與天然蛹蟲草相似，但長度與寬度略大，一般長度平均為5至7公分。早於西元1951年，Cunningham et al等學者率先於蛹蟲草中分離出有效成分蟲草素Cordycepin〔3' -deoxyadenosine〕，在西元1997年後的許多研究中，蛹蟲草被 學者證實具有與冬蟲夏草相同的功效，有抗腫瘤、活化、調節免疫系統與改善呼吸系統、腎功能、心血管、肝臟及性功能等功效。提高人體免疫調節作用有增強了單核巨噬細胞的吞噬能力、增強體液免疫功能、對細胞免疫起免疫調節作用及增強自然殺手細胞(natural killer cell)的活性。

目前生物學家多能利用生物科技方法將蛹蟲草菌接種至家蠶或柞蠶蛹進行人工大量培育，藥效、藥理與野生種相似甚至更好。由於蛹蟲草與我們家喻戶曉的冬蟲夏草(Cordyceps sinensis )同屬蟲草屬，因其為蟲草屬的模式種，為國內外學者普遍接受。野生蛹蟲草是一種具有藥用、滋補功能的珍貴中藥材，自西元1986年以來，吉林省蠶業研究所和長春中藥廠，從野生蛹蟲草(亦稱蛹草)子座中分離出蛹草菌，人工接種到蠶蛹上而形成的一種人工培育的蟲草。由於蛹蟲草的寄主廣泛，野外採集之蛹蟲草往往會有寄主或菌株品系不同的問題產生，故以人工栽培的蛹蟲草使以純化的菌株進行感染，故具有品質一致的優點，因此得以獲得成功和系列產品的開發，為滋補保健食品、功能食品和藥源開闢了新的途徑。隨著科技的進步，其栽培、應用前景十分廣闊。有學者把蛹蟲草菌接種在液體培養基中，從培養基中可分離出蟲草素，產量為25毫克/公升。在固體培養基中可得蛹草菌粉，其中可分離到麥胚脂醇、麥角固醇、D-甘露醇(5.37%)、蟲草素(0.016%)、腺嘌呤(0.007%)、腺苷(0.016%)、尚有氨基酸、微量元素等。

北冬蟲夏草(蛹蟲草)所含蟲草素及生命元素硒均遠遠高於其他野生蟲草，並且含豐富的麥角固醇、多醣及氨基酸等多種營養成份。研究顯示在用抗腫瘤、抗病毒、抗疲勞、治療心律失常、調節脂類代謝、增強免疫機能等方面都有明顯效果。對人體的泌尿系統、免疫系統、呼吸系統、造血系統、心血管系統、代謝系統、中樞神經系統的調節具有十大藥理作用而初露鋒芒。在高科技培養的環境裡，蟲草的生長過程不受自然界不利條件的影響，有效成份不受損失，所以品質優良且較為穩定。經檢測人工培養蟲草的主要營養與藥用成分均與野生蟲草的含量相當甚至更高。現代科學驗證蛹蟲草不僅具有特殊的營養價值，而且有明顯的藥用價值。其中尤以蟲草酸、蟲草素、蟲草多醣和SOD等多種生物活性物質的藥用價值最為顯著。蟲草酸(甘露醇)可以顯著地降低顱壓，促進身體新陳代謝，因而使腦溢血和腦血栓病症得到緩解。蟲草素是一種具有抗菌活性的核苷類物質，對核多聚腺苷酸聚合酶有很強的抑製作用。在DNA轉錄mRNA過程中使mRNA成熟障礙，抑制癌細胞的生長。並有降血糖的作用。蟲草多糖是一種高度分枝的半乳甘露聚糖，它能促進淋巴細胞轉化，提高血清IgG的抗體含量和機體的免疫功能，增強機體自身抗癌抑癌的能力。SOD(超氧化物歧化酶)可以消除機體內超氧自由基，具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。此外，蛹蟲草還含有豐富的硒(Se)，這種微量元素已被大家公認是人體必需的微量元素，是麩胱甘肽(GSH)的活性中心，以硒半胱氨酸的形式連接在酶蛋白的肽鏈上，保護細胞 膜的穩定性的正常的通透性，並刺激免疫球蛋白和抗體的產生，增強機體免疫和抗氧化能力。同時，大量的科學實踐證明硒可以明顯地抑制癌細胞的生長。

有研究學者對蠶蛹蟲草進行藥化、藥理、毒理分析測定，指出人工培育的蠶蛹蟲草，不但無毒，且具有明顯的鎮靜、抗疲勞、抗腫瘤、抑制癌細胞及雄性激素等作用，可增強機體免疫功能等。另有學者針對蠶蛹蟲草的藥化、藥理研究顯示，具有抗疲勞、抗惛厥作用，可提高淋巴細胞轉化率，增強小鼠免疫能力，對Lewis肺癌有抑製作用，體外實驗證明對喉癌細胞有殺滅作用，並能使大鼠血漿睪丸酮含量增高，使大鼠體重及包皮腺、精囊、前列腺的重量顯著增加，有明顯的雄性激素作用。

有關蟲草的研究正蓬勃發展，其中研究較多者為冬蟲夏草與蛹蟲草。冬蟲夏草(Cordyceps sinensis )是由蟲草菌寄生在蝙蝠蛾幼蟲體內，生長發育而成；而蛹蟲草(Cordyceps militaris )則是由蛹蟲草菌寄生在昆蟲的蛹上發育而成。冬蟲夏草的寄主專一性非常高，而蛹蟲草則可感染較廣泛的寄主。冬蟲夏草已被學者證明具有抗腫瘤、活化或調節免疫系統、改善呼吸系統、腎功能、心血管、肝臟及性功能等功效，並對冬蟲夏草傳統療效如滋肺、補腎及增強精力等深入探討；蛹蟲草則在西元1997年後漸漸被學者証實具有與冬蟲夏草相同的功效，且根據研究結果顯示，蛹蟲草之菌絲體與冬蟲夏草菌絲體之成份頗為相似。然而野生的冬蟲夏草其產量有限，採集不易，加上人們瘋狂搜尋挖掘冬蟲夏草，導致 生態環境的破壞，因而與冬蟲夏草齊名的蛹蟲草在國際上日益受到人們的關注。研究學者對於野生冬蟲夏草化學成分的研究較多，而對人工蛹蟲草化學成分研究較少。加上研究結果證明菌絲體僅具有一些活性，其功效或主要成分仍與子實體大不相同，且菌絲體品質往往隨著培養基之組成份、培養條件或培養方式改變，造成中藥界在用藥時難以菌絲體取代實際的蟲草，故生物學家一直希望能以人工培養方式培養出與野生種相似的冬蟲夏草及蛹蟲草。

蛹蟲草(北冬蟲夏草菌)是一種較嗜低溫的真菌，高溫會抑制其生長。由於自然生產的資源有限，年產量明顯逐年減少，目前已不敷市場的需求。因此，如何發展人工培養技術，以滿足市場的需求，事實上存在著一個極大的商機。

然而存在於蛹蟲草子實體中之蟲草素含量遠較菌絲體為高，但培養之瓶頸在於生成子實體之時間較長(約需二個月)，子實體之出菇率低且變異率高，若能大幅提高子實體之育成率與子實體中之蟲草素含量，則具有極高產業應用價值。

有鑑於此，為解決上述問題，本發明提供一種提高蛹蟲草產能及有效成份之固態培養基組合物及方法，其特徵在於利用添加動物性蛋白(牛奶、肉汁萃取物、胎牛血清、魚粉、魚精、蠶蛹、紅蚯蚓)、植物性蛋白、益生菌發酵液(乳酸菌發酵液、真菌發酵液)、中藥材萃取液等，於PCB培養液混合均勻後，再加入活化的 蛹蟲草菌種源菌絲體備製為接菌液，接種蛹蟲草菌液至固態培養基中進行暗培養與光培養的蛹蟲草子實體之固體培養方法，進而提升蛹蟲草子實體的產能、縮短培養時間及提高有效成分蟲草素(cordycepin)含量。

本發明亦提供一種蛹蟲草固態培養方法，包含菌種活化、蛹蟲草液態培養基製備、接菌液配方製備、蛹蟲草固態培養基製備、與光/暗靜置培養等步驟。

另一方面，本發明亦提供一種最佳蛹蟲草固態培養環境條件，其條件為培養溫度攝氏18至25度、培養溼度70至90百分比。

有關本發明的特徵與實作，茲以最佳實施例詳細說明如下：

1.材料製備 1.1蛹蟲草菌種活化

將存放攝氏負80度(℃)的蛹蟲草(購自食品工業研究所BCRC32219)冷凍小管取出，置入水浴槽中以攝氏22度(℃)水浴解凍；於無菌操作台，以接種環將冷凍小管中的菌絲液接種到PCA培養基，並置入培養箱中以攝氏22度(℃)培養7至14天。

1.2蛹蟲草液態培養基製備

秤取胰化蛋白腖(Tryptone)5.0公克(g)、酵母萃取物 (Yeast extract)2.5公克(g)、右旋葡萄糖(Dextrose)1.0公克(g)、蒸餾水(Distilled water)1.0公升(L)，以滅菌釜滅菌攝氏121度(℃)，20分鐘，放置24小時以上，確定滅菌完全後備用。

1.3添加物製備：

(1)動物/植物性蛋白：將牛奶、肉汁萃取物(如：Beef extract)、胎牛血清(FBS)、魚粉、魚精、蠶蛹、活體紅蚯蚓(Eisenia andrei) 、豆類植物(選自黃豆、毛豆及豌豆所組成之群組)、植物(選自禾本植物之小麥、稻米、玉米、大麥、高梁所組成之群組)等洗淨、過濾(0.45μm)後，進行冷凍乾燥並細化研磨。

(2)益生菌發酵液：益生菌係選自乳酸菌屬、雙歧桿菌屬、芽孢菌屬、枯草桿菌及酵母菌所組成之群組，如乳酸菌發酵液、真菌發酵液等。

(3)中藥材萃取液，中藥材係選自人參、枸杞子、當歸、川芎、白芍、熟地黃、生地黃、黃耆、黨參、天麻、淡菜、蓮子、芡實、山藥、茯苓、山植、烏梅、胡桃、松子、胖大海、百合、銀耳、白果、薤白、薏苡仁、黑棗、丁香、山奈、桂皮、花椒、大茴香、小茴香、桂枝、橘皮、冬蟲夏草(菌絲體)、甘草、豆蔻、砂仁、紅棗、菊花、黃精、白朮、荷葉、酸棗仁、雞內金、龍眼肉、綠豆、芝麻及大豆所組成 之群組。

1.4蟲草接菌液製備：

接菌液製備分為：(一)PCB接菌液：將已活化之蛹蟲草菌接種於PCB(Plate Count Broth)培養基中，並培養於攝氏20至24度環境中，以每分鐘90轉(rpm)進行搖瓶培養3至7天後即可作為接菌液使用；(二)BR-PCB接菌液：將各種添加物之乾燥粉末秤取1至5公克(g)加到500毫升(ml)PCB培養液中，以均質機PCB培養液中的動物性蛋白均勻打散，以接種環勾取已活化之蛹蟲草菌種源菌絲體，置入動物性蛋白接菌液中，將已接種動物性蛋白的接菌液置入培養箱，以攝氏20至24度，每分鐘90轉(rpm)進行搖瓶培養3至7天後即可作為接菌液使用。

1.5蛹蟲草固態培養基製備：

固態培養基有可分為三種：(一)穀物培養基：秤取30至40公克(g)的穀物培養基(白米或糙米或燕麥等，以白米尤佳)置入玻璃瓶中，加入30至40毫升(ml)的R.O.水，輕晃瓶身，使R.O.水完全浸溼穀物培養基，蓋上玻璃瓶瓶蓋，以高壓滅菌方法(攝氏121度(℃)，30分鐘)進行培養基滅菌。滅菌完成後，於固態培養基溫度低於攝氏50度(℃)前將玻璃瓶的瓶蓋完全 鎖緊後冷卻至常溫。滅菌後穀物培養基高度約為2.5至3.5公分，水分為50至70百分比(%)。

(二)固態BR穀物培養基：秤取30至40公克(g)的穀物培養基(白米或糙米或燕麥等，以白米尤佳)置入玻璃瓶中，加入30至40毫升(ml)的R.O.水，輕晃瓶身，使R.O.水完全浸溼穀物培養基，蓋上玻璃瓶瓶蓋，以高壓滅菌方法(攝氏121度(℃)，30分鐘)進行培養基滅菌。滅菌完成後，於固態培養基溫度低於攝氏50度(℃)前將玻璃瓶的瓶蓋完全鎖緊後冷卻至常溫。滅菌後穀物培養基高度約為2.5至3.5公分，水分為50至70百分比(%)。於穀物培養基中均勻加入0.1至1g動物性蛋白質粉末備用。

(三)液態BR穀物培養基：秤取30至40公克(g)的穀物培養基(白米或糙米或燕麥等，以白米尤佳)置入玻璃瓶中，加入30至40毫升(ml)的R.O.水，輕晃瓶身，使R.O.水完全浸溼穀物培養基，蓋上玻璃瓶瓶蓋，以高壓滅菌方法(攝氏121度(℃)，30分鐘)進行培養基滅菌。滅菌完成後，於固態培養基溫度低於攝氏50度(℃)前將玻璃瓶的瓶蓋完全鎖緊後冷卻至常溫。滅菌後穀物培養基高度約為2.5至3.5公分，水分為50至70百分比(%)。於穀物培養基中均勻加入濃度0.01%至0.5%動物性蛋白質製備液備用。

2.固態培養基接種觀察生長情形並分析蟲草子實體所含蟲草素之差異情形： 2.1固態培養基接種之生長情形

吸取已培養3至7天之蟲草接菌液1至5毫升(ml)均勻加入培養基表面。將已接種接菌液之固態培養基移入暗培養室，以溫度攝氏18至25度(℃)，溼度70至90百分比(%)進行培養5至7天，待固態培養基表面長出白色菌絲體，且菌絲體約佔固態培養基表面積2/3時，即將固態培養移放到有照光設備的培養環境，進行光照培養。進行照光培養，其光照強度至少500勒克斯(lux)以上，且照光時間約8至15小時/天，將培養環境控制為溫度攝氏18至25度(℃)，溼度70至90百分比(%)。

本實驗之實驗組分別為：

(一)對照組：穀物培養基+蛹蟲草培養液

(二)實驗組：PCB-BR穀物培養基+蛹蟲草培養液

上述實驗組與對照組，以相同培養環境及培養條件進行培養，以蟲草子實體長度為7公分為培養終點，觀察兩組於暗培養階段、照光培養階段不同時期之生長情形，並分析蟲草子實體所含蟲草素之差異情形。

兩組於暗培養階段，觀察菌絲體菌絲分佈情形，如圖1A所示實驗組菌絲體幾乎佈滿培養基，但圖1B所示對照組約只 生長2/3培養基表面。

兩組於光培養階段，觀察菌絲體菌絲分佈情形，於第2天實驗組白色菌絲轉為黃色，且菌絲已幾乎長滿穀物培養基中，如圖2A所示，但對照組白色菌絲轉為黃色，但仍也部份穀物培養基尚未長滿菌絲，如圖2B所示；第8天實驗組菌絲顏色呈金黃色並已有出菇現象，如圖2C所示，對照組菌絲顏色呈鵝黃色且尚未有出菇，如圖2D所示；第18天實驗組多數出菇，如圖2E所示，對照組僅部分出菇，如圖2F所示；第26天實驗組與對照組如圖2G、H所示；第50天實組蟲草子實體長度已達7公分，如圖2I所示，對照組蟲草子實體長度尚未達7公分，如圖2J所示。

添加動物性蛋白之實驗組(此例為活體蚯蚓粉)，於固態培養子實體生長時間較對照組短。子實體長度平均7公分，實驗組所需培養時間約50天，而對照組所需時間約60天。

2.2子實體重量及蟲草素含量

依據培養終點為蟲草子實體長度為7公分進行子實體重量及蟲草素含量分析，添加動物性蛋白之實驗組，於每瓶固態培養瓶的子實體重量較對照組重。實驗組每瓶固態培養子實體重量(溼重)平均為10.62±1.31公克(g)/瓶，對照組每瓶固態培養子實體重量(溼重)平均為8.18±0.90公克(g)/瓶；添加動物性蛋白之實驗組，蛹蟲草子實體的蟲草素(cordycepin)較對照組高。實驗組子實體之乾品蟲草素為0.8百分比(%)， 對照組子實體之乾品蟲草素為0.5百分比(%)，兩組於重量上具有統計顯著差異(P=0.0089)，結果如圖3所示。

雖然已說明且描述了本發明之實施例，但是熟悉此項技術者可作各種修改及改良。並不意欲將本發明限制於如所說明之特殊形式，且所有不背離本發明之精神及範圍的修改都屬於如隨附之申請專利範圍中所界定之範圍內。

綜觀上述，本發明以其整體之組合與特徵而言，既未曾見諸於同類產品中，申請前亦未公開，誠已符合專利法之法定要件，依法提出發明專利之申請。

圖1A 實驗組於暗培養階段之生長情形；圖1B 對照組於暗培養階段之生長情形；圖2A 照光培養階段第2天實驗組之生長情形；圖2B 照光培養階段第2天對照組之生長情形；圖2C 照光培養階段第8天實驗組之生長情形；圖2D 照光培養階段第8天對照組之生長情形；圖2E 照光培養階段第18天實驗組之生長情形；圖2F 照光培養階段第18天對照組之生長情形；圖2G 照光培養階段第26天實驗組之生長情形；圖2H 照光培養階段第26天對照組之生長情形；圖2I 照光培養階段第50天實驗組之生長情形；圖2J 照光培養階段第50天對照組之生長情形；以及 圖3 蟲草子實體重量統計數據。

Claims (6)

1. 一種提高蛹蟲草有效成份之蛹蟲草固態培養基組合物，其係於一接菌液中添加一添加物，該接菌液為PCB培養液活化之蛹蟲草菌液，且該添加物之添加比例係為每500毫升之接菌液添加1~5克之添加物，該添加物為動物性蛋白、植物性蛋白、益生菌發酵液及中藥萃取物，該動物性蛋白係選自牛奶、肉汁萃取物、胎牛血清、魚粉、魚精、蠶蛹及紅蚯蚓所組成之群組，該植物性蛋白係選自豆科植物之黃豆、毛豆及豌豆所組成之群組，或選自禾本植物之小麥、稻米、玉米、大麥、高梁所組成之群組，該益生菌發酵液中益生菌係選自乳酸菌屬、雙歧桿菌屬、芽孢菌屬、枯草桿菌及酵母菌所組成之群組，該中草藥萃取物之中藥材係選自人參、枸杞子、當歸、川芎、白芍、熟地黃、生地黃、黃耆、黨參、天麻、淡菜、蓮子、芡實、山藥、茯苓、山植、烏梅、胡桃、松子、胖大海、百合、銀耳、白果、薤白、薏苡仁、黑棗、丁香、山奈、桂皮、花椒、大茴香、小茴香、桂枝、橘皮、冬蟲夏草(菌絲體)、甘草、豆蔻、砂仁、紅棗、菊花、黃精、白朮、荷葉、酸棗仁、雞內金、龍眼肉、綠豆、芝麻及大豆所組成之群組，該蛹蟲草菌種係選自食品工業研究所BCRC32219。
2. 一種提高蛹蟲草有效成分之蛹蟲草固態培養基組合物，其係以每30~40克之穀物培養基添加0.1~1克之動物性蛋白質的比例，於該穀物培養基中添加該動物性蛋白質，該穀物培養基為 白米、糙米或燕麥，該動物性蛋白係選自牛奶、肉汁萃取物、胎牛血清、魚粉、魚精、蠶蛹及紅蚯蚓所組成之群組。
3. 如申請專利範圍第1或2項所述之蛹蟲草固態培養基組合物，其中該蛹蟲草固態培養基組合物之培養溫度係為攝氏18至25度。
4. 如申請專利範圍第1或2項所述之蛹蟲草固態培養基組合物，其中該蛹蟲草固態培養基組合物之培養溼度係為70至90百分比。
5. 如申請專利範圍第1或2項所述之蛹蟲草固態培養基組合物，其中該蛹蟲草固態培養基組合物之光照培養中光照強度至少500勒克斯。
6. 如申請專利範圍第1或2項所述之蛹蟲草固態培養基組合物，其中該蛹蟲草固態培養基組合物係經洗淨、過濾、萃取、冷凍乾燥、細化研磨與滅菌之過程。