TWI409077B

TWI409077B - 新穎抗菌化合物

Info

Publication number: TWI409077B
Application number: TW096111699A
Authority: TW
Inventors: Badrinath Mahajan Girish; David Grorge Saji; Vasant Ranadive Prafull; Dutt Satyanarayan Mishra Prabhu; Sankaranarayanan Eyyammadichiyil Sreekumar; Mukund Panshikar Rajan; Namdeo Sawant Satish; Krishna Sridevi; Sivakumar Meenakshi; Pari Koteppa; Mary Thomas Becky; Eruch Patel Zarine; Vishwakarma Ram; Govind Naik Chandrakant; D Souza Lisette; Devi Prabha
Original assignee: Piramal Life Sciences Ltd; Council Scient Ind Res
Priority date: 2006-04-18
Filing date: 2007-04-02
Publication date: 2013-09-21
Also published as: CN101495131A; RU2444526C2; ES2440791T3; BRPI0709833A2; RU2008143525A; TW200812607A; CN101495131B; DK2010202T3; PT2010202E; NZ571636A

Description

新穎抗菌化合物

【發明領域】

本發明與一種新穎化合物PM181104有關，其具有抗菌活性，並且是利用將屬於庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的微生物進行發酵所獲得。本發明進一步與製造該化合物PM181104的程序有關，也與屬於庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的微生物有關，也與包含該新穎化合物PM181104的製藥合成物以作為一種作用要素，以及使用於藥劑中以治療及避免由細菌感染所引起的疾病有關。本發明包含該化合物PM181104的所有立體異構物形式與所有互變體形式，以及製藥上可接受鹽類與像是其本身酯類與醚類的衍生物。

【發明背景】

對於像是青黴素抗生素、巨環類抗生素、奎諾酮類抗生素與萬古霉素等多數抗菌藥劑所呈現的抗菌性質，已經逐漸變為一種全球化的重要健康議題(Trends in Microbiology,1994,2,422－425)。在臨床實習中最明顯的問題是對於甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)感染發生率的增加。目前，用於有效治療多重抗性甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)感染的只有萬古霉素。然而，有許多報告顯示，在某些甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)分離物中具有萬古霉素抗性(Antimicrobial Agents and Chemotherapy,1998,42,2188－2192)。最近浮現的另一臨床相關多重藥物抗性細菌群則為腸球菌，其中某些也具有萬古霉素抗性。萬古霉素抗性腸球菌(VRE)感染的出現也對於治療者造成一種兩難的情況。結合一種名為利奈唑酮(Linezolid)抗生素的噁唑烷酮化合物與鏈腸菌素，則為一種用來治療甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)感染的新藥選擇。然而，這些噁唑烷酮(Clinical Infectious Diseases,2003,36,supplement 1,S11－S23；Annals of Pharmacotherapy,2003,37,769－74)、鏈腸菌素結合物(Current Drug Targets Infectious Disorders,2001,1,215－25)與多種醣胜肽(Clinical Infectious Diseases,2003,36,supplement 1,S11－S23)的抗性，需要具有替代目標或活動模型以進行藥劑的擴充發展。重要社群內鏈球菌肺炎 感染病原體對於盤尼西林與其他抗生素的安裝(mounting)抗性也逐漸變成全球化的健康議題。多種抗藥性結核分枝桿菌 菌株的問題也已經在許多國家中浮現。抗院內與社群內病原體的浮現與散佈也逐漸成為全球公共問題的重要威脅。

急迫需要的是發現一種新的化合物，其能夠作為治療細菌感染病患的藥劑，特別像是甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)與萬古霉素抗性腸球菌(VRE)等多重抗藥性細菌。

【發明總結】

本發明與一種新穎精鍊化合物有關(在此標示為PM181104)，其由屬於庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的微生物發酵培養基所分離，並具有抗菌活性。

本發明也與PM181104的所有立體異構物形式與所有互變體形式有關，也與其製藥上可接受鹽類與其本身酯類與醚類衍生物有關，並(如在此所描述)以結構式I所表示。

該化合物PM181104與同分異構物、製藥上可接受鹽類與其本身酯類與醚類衍生物對於治療及防止由細菌，特別像是甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)與萬古霉素抗性腸球菌(VRE)等多重抗藥性細菌所引起的疾病是有用的。

本發明進一步與製藥合成物有關，其包括該化合物PM181104、同分異構物、製藥上可接受鹽類與其酯類與醚類衍生物，以作為一種治療由細菌，特別像是甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)與萬古霉素抗性腸球菌(VRE)等多重抗藥性細菌所引起醫治情況的作用要素。

本發明進一步與由屬於庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的微生物，生產該化合物PM181104與其同分異構物的程序有關。

本發明也與生產屬於庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的微生物有關，其用於培養該化合物PM181104與其同分異構物。

【本發明詳細敘述】

本發明提供一種新穎抗菌化合物PM181104，也包含該化合物PM181104所有立體異構物形式與所有互變體形式，以及其製藥上可接受鹽類與像是其本身酯類與醚類的衍生物。

據此，本發明與具有下述結構式I的新穎抗菌化合物有關：其中，R＝氫原子(PM181104)、烷基、烷羰基、(HO)₂ PO－、烷基－OPO(OH)－、(烷基－O)₂ PO－、環烷基、環烷羰基、芳香族羥基、芳香族羥碳基、雜環基、以及雜環羰基。

當在此所使用時，該術語”烷基”不管單獨使用或是作為一取代群的部分時，都意指為飽和脂肪族群的根，其涵蓋直鏈狀與分支鏈狀烷基群。此外，除非另外陳述，該術語”烷基”包含非取代烷基群與由一或多個不同取代物所取代的烷基群。在較佳實施例中，一直鏈狀或分支鏈狀烷基在其骨幹中具有20或少於20個的碳原子(例如，對於直鏈狀而言C₁ 至C₂₀ ，對於分支鏈狀而言C₃ 至C₂₀ )。包含從1至20個碳原子的烷基殘餘基範例為：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十四基、十七基與二十基，所有這些殘餘基的同分異構物：異丙基、異丁基、1－甲基丁基、異戊基、新戊基、2,2－二甲基丁基、2－甲基戊基、3－甲基戊基、異己基、2,3,4－三甲基己基、異癸基、第二丁基或第三丁基。取代烷基也意指為一烷基殘餘基，其中利用取代物置換一或多個氫原子，例如，取代1、2、3、4或5個氫原子，取代物則例如像是鹵素、氫氧根、磺酰基、烷氧基、環烷基、氰基、疊氮、氨基、醯氧基、雜環基、芳烷基、芳香族羥基或像是氮－(7硝基苯－2－氧雜－1,3－二唑－4－基)氨基(NBD)或氟硼二吡咯(BODIPY)群等的螢光群。

當在此使用時，該術語”環烷基”意指為一種包含3至10個碳原子的飽和單或二環環狀系統，而較佳的是在該環狀結構中具有3、4、5、6或7個碳原子。含有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基殘餘基範例為環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基。此外，除非特別陳述，該術語”環烷基”包含未取代環烷基與利用一或多個相同或不同群集所取代的環烷基，該群集則從以下所選擇：鹵素、氫氧根、烷氧基、烷基、環烷基、氰基、氨基、氨烷基、醯氧基、雜環基、芳烷基或芳香族羥基群。

當在此使用時，該術語”芳香族羥基群”意指為一種具有最多為10個環碳原子的單環或二環碳氫化合物群，其中至少一存在的碳環是具有一共軛π電子系統。碳₆ 至碳₁₀ 芳香族羥基殘餘基的適當範例則包含苯基、萘基或聯苯基，特別是苯基與萘基。一般來說，例如苯基與萘基的芳香族羥基殘餘基可以選擇性地利用最多五個相同或不同的一或多個取代物所取代，該取代物則從以下所選擇：鹵素、烷基、氫氧根、醯氧基、氨基、取代氨基、氰基。

該術語”雜環基”意指為一種飽和、部分飽和或芳香族單環或多環雜環系統，其包含5、6、7、8、9或10個環原子，其中1、2或3個為相同或不同的雜原子，該雜原子則從以下所選擇：氮、氧與硫。這種雜環基群集的適當範例則為吡啶基、哌嗪基、咪唑基、吡咯烷基與嗎啉基。在多環群集中，雜環基可以包括融合環或是橋接環，在融合環中兩鄰近環形共同擁有二或多個碳原子，而在橋接環該環則透過非相鄰原子所結合。在多環群集中，雜環基較佳的是包括兩融合環(二環)，其中之一為5或6元雜環，而另外一個也為5或6元雜環。二環雜環群集的範例則包含苯並噁唑基、喹啉基、異喹啉基、咔唑基、吲哚基、異吲哚基、吩噁嗪基、苯並噻唑基、苯並咪唑基、苯並呋咱基與苯唑呋喃基。雜環基殘餘基一般來說可以選擇性地利用一或多個相同或不同的取代物所取代，該取代物則從以下所選擇：鹵素、烷基、氫氧根、氨基、醯氧基、取代氨基、氰基。

根據本發明較佳實施例，在該結構式I中的R群可以為氫原子、CH₃ CH₂ CH₂ CO、CH₃ (CH₂ )₁₅ CH₂ CO或。

根據一更佳實施例，由上述結構式I(其中R＝氫原子)所表示的該新穎化合物PM181104可以從屬於庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的微生物發酵培養基所分離，並接著進行精鍊。

該新穎化合物PM181104具有分子式為C₆₉ H₆₆ N₁₈ O₁₃ S₅ (分子量為1514)，並可以利用其任一種或多種物理化學與頻譜性質而給予特徵，像是以下所討論的高效液相層析技術(HPLC)、質譜(MS)、紫外線(UV)、紅外線(IR)與核磁共振(NMR)分譜資料。

以經說明該新穎化合物PM181104的結構，並利用高效液相層析技術(HPLC)、質譜(MS)、紫外線(UV)、紅外線(IR)與核磁共振(NMR)分譜資料給定其完整特性。其結構則利用標示為PM181104的¹⁵ 氮與¹³ 碳生物活性三維(3D)核磁共振研究加以確認。

該化合物PM181104與其酯類與醚類衍生物為抵抗細菌的一種新活性抗生素，特別對於像是甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)與萬古霉素抗性腸球菌(VRE)等多重抗藥性細菌。

可以用來生產該化合物PM181104的微生物是一種庫剋菌種(ZMA B－1/MTCC 5269)的菌株，此後將稱作為培養菌號ZMA B－1，其從在印度Tamil Nadu海岸Palk灣中所採集的海生樣本所分離。

本發明進一步提供從培養菌號ZMA B－1生產該化合物PM18110、其突變體與其變形體的程序，包括以下步驟：於含有碳與一或多種氮來源及選擇性滋養無機鹽及/或微量元素的一中性媒介中，在浸沒有氧情況下，培養該培養菌號ZMA B－1；從該培養基分離出該化合物PM181104；以及利用在相關領域中所一般使用的精鍊步驟精鍊該化合物PM181104。

當在此所使用時，該術語”突變體”意指為一種帶有突變的有機體或細胞，這是一種野生型的替代顯型。

當在此所使用時，該術語”變形體”意指為一種獨特的有機體，其可與該物種的任意標準型之間進行區別。

可以利用培養菌號ZMA B－1本身的菌落型態、溼室觀測與革蘭氏染色反應，進行培養菌號ZMA B－1的初步辨識，培養菌號ZMA B－1為PM181104的生產者。在含有1.5%瓊脂的瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)上進行該分離培養菌號ZMA B－1菌株的顯微鏡研究，並在攝氏25度下進行1、2、3天的潛伏期觀測。

在含有1.5%瓊脂的瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)上進行培養，其將發展為具有平滑表面、橘黃色、規則邊界與柔軟硬度的2毫米直徑菌落。在此媒介中並未觀測到可擴散的色素。在位相差光學顯微鏡下，球菌可於400×大小下被觀測。該球菌也被良好分離及隔離。其具有革蘭氏陽性及非動性。所觀測的型態將此有機體分類為微球菌科族的一員。利用現有在美國國立生物技術信息中心(NCBI)網址(URL：http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)上所能取得的序列，比較其核醣體核糖核酸(rRNA)並進行此分離體的辨識。培養菌號ZMA B－1已經被寄存在細菌菌株保存中心(MTCC)中，其位於世界智慧財產權組織(WIPO)所承認國際寄存機構的Institute of Microbial Technology,Sector 39-A,Chandigarh-160 036,India，並具有財產自然增益編號MTCC 5269。

應該瞭解的是，除了在此描述的特定微生物以外，像是使用包含X射線、紫外射線等等誘導有機體突變的化學或物理物質所產生的突變體，以及其基因構成已經利用分子生物技術所調整的有機體，也可以加以培養以生產該化合物PM181104。

對於能夠生產根據本發明化合物的適當突變體或變形體篩選，可以由高效液相層析技術(HPLC)及/或在該培養基中所累積作用化合物的生物活性決定所確認，舉例而言，利用測試該化合物抗菌活性的方式。

用來分離並培養生產該化合物PM181104培養菌號ZMAB-1的媒介及/或中性媒介，較佳的是包含碳、氮與中性無機鹽的來源。舉例而言，碳來源可以是澱粉、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、果糖；、糖蜜、甘油、乳糖或半乳糖之一或多種。較佳的碳來源則為葡萄糖。舉例而言，氮來源可以是豆粉、花生粕、酵母菌萃取物、牛肉萃取物、蛋白、麥芽萃取物、玉米漿、動物膠或casamion酸之一或多種。較佳的氮來源則為蛋白與酵母菌萃取物。舉例而言，該中性無機鹽的來源可以是氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、氯化鍶、溴化鉀、氟化鈉、磷酸氫鈉、磷酸氫鉀、磷酸二鈉、碳酸鈣、碳酸氫鈉、矽酸鈣、硝酸銨、硝酸鉀、硫酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硝酸鐵或硼酸鐵。碳酸鈣、氯化鈉與氯化鎂是較佳的。

可以將培養菌號ZMA B－1保存在溫度範圍攝氏21度至35度以及酸鹼值大約6.5至8.5的範圍之間。一般來說，將培養菌號ZMA B－1保存在攝氏27度至29度以及酸鹼值大約7.4至7.8的範圍之間。該良好生長的培養物也可以保存於攝氏4至8度之間的冷藏庫之中。

可以在溫度範圍攝氏25度至35度以及酸鹼值大約6.5至8.5的範圍之間，於每分鐘200至280轉下進行20至55小時的培養菌號ZMA B－1菌種培養。一般來說，培養菌號ZMA B－1菌種是在溫度範圍攝氏29度至31度以及酸鹼值大約7.4至7.8的範圍之間，於每分鐘230至250轉下進行24至48小時的培養。

可以在溫度範圍攝氏26度至36度以及酸鹼值大約6.5至8.5的範圍之間，於每分鐘60至140轉及每分鐘吹氣100至200公升下，進行24至96小時的發酵，以利用培養該培養菌號ZMA B－1的方式進行該化合物PM181104的生產。一般來說，培養菌號ZMA B－1是在溫度範圍攝氏30度至32度以及酸鹼值大約7.4至7.8的範圍之間，於每分鐘90至110轉及每分鐘吹氣140至160公升下，進行40至72小時的培養。

可以在此描述的條件下，於一適當中性培養液中利用培養該培養菌號ZMA B－1的方式進行該化合物PM181104的生產，較佳的是在浸沒有氧的情況下，舉例而言，以一種振蕩瓶法以及在實驗室中發酵的方式進行生產。該化合物PM181104的發酵與生產進行可以利用高效液相層析技術(HPLC)加以偵測，並利用已知的細菌瓊脂平板擴散檢驗方式，測量對於葡萄球菌及/或腸球菌的培養液生物活性。較佳的培養菌是一種抗藥性菌株的葡萄球菌 3066，在文獻中其為一種β－內醯胺，較佳的培養菌也可以是一種糞腸球菌 R2(VRE)，其具有抗萬古黴的特性。在所形成的培養液中，該化合物PM181104存在於該培養過濾液中，也存在於細胞質中，並可以利用像是溶液萃取與管柱層析法等已知的分離技術加以分離。因此，該化合物PM181104可以從該培養過濾液復原，其利用一種與水不互混溶劑在酸鹼值5至9的範圍下進行萃取，或是藉由聚合樹脂進行厭水反應層析法的方式，或是利用在酸鹼值5至9範圍下的離子交換層析法方式所進行，該不互混溶劑則像是石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二乙醚或丁醇，該聚合樹脂或則像是”Diaion HP－20”(Mitsubishi Chemical Industries Limited,Japan)、”Amberlite XAD”(Rohm and Haas Industries U.S.A)、活性炭。該作用材料可以從該細胞質萃取，其利用一種像是甲醇、丙酮、乙睛、正丙醇或異丙醇的與水互混溶劑，或是一種像是石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二乙醚或丁醇的與水不互混溶劑。一種另外的選擇是以一種從石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙睛、正丙醇、異丙醇或丁醇所選擇的溶劑萃取完整的培養液。一般來說，該作用材料是從完整的培養液中利用乙酸乙酯加以萃取。利用萃取物的濃縮與凍乾便可以獲得該天然的作用材料。

本發明的該化合物PM181104也可以從該天然材料復原，其使用下述技術任一項的分餾法：正相層析法(使用氧化鋁或矽膠凝體做為固定相；使用像是石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、三氯甲烷、甲醇或其結合物等做為洗提液；並使用像是三乙胺(NEt₃ )的胺類做為添加劑)；反相層析法(使用像是二甲基辛基癸基甲矽烷基矽膠凝體(RP－18)或是二甲基辛基甲矽烷基矽膠凝體(RP－8)等的反相矽膠凝體做為固定相；使用像是水、緩衝液(舉例而言：磷酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽(酸鹼值2至8))與有機溶劑(舉例而言：甲醇、乙睛、丙酮、四氫呋喃或這些溶劑的結合)等做為洗提液)；凝膠穿透層析法(使用在像是甲醇、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、或其結合物的溶劑中像是Sephadex LH－20(Pharmacia Chemical Industries,Sweden)、TSKgelToyopearl HW(TosoHaas,Tosoh Corporation,Japan)的樹脂，或是在水中的SephadexG－10與G－25)；或是利用逆向流層析法(使用由二或多種溶劑所構成的二相洗提液系統，這些溶劑像是水、甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、四氫呋喃、丙酮、乙睛、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、苯與甲苯)。這些技術可以被重複、單獨或是結合使用。一種典型的方法為利用反相矽膠凝體(RP－18)所進行的層析法。

該化合物PM181104與其本身的同分異構物都可以被轉換成為其製藥上可接受的鹽類，這些都於本發明所考慮。可以由本領域一般技術者所熟知的標準程序所準備該鹽類，舉例而言，像是鈉鹽與鉀鹽，都可以利用一種適當的鈉或鉀鹽基處理該PM181104與其同分異構物的方式進行準備，像是氫氧化鈉、氫氧化鉀。

利用結構式I所表示的該化合物PM181104，其酯類與醚類可以利用文獻中所給定的方式加以準備(Advanced Organic Chemistry,1992,4^th Edition,J.March,John Wiley & Sons.)。可以由文獻(J.Med.Chemistry,1992,35,145－151)中所描述的方法準備其酯類。在本發明一較佳實施例中，對於R為烷基、環烷基、芳香族羥基或雜環基且具有結構式I的化合物而言，可以在一結合媒介與一鹽基的催化劑存在下，使化合物PM181104與一適當的酸加以反應所獲得，該結合媒介則像是二環己基二亞醯銨(DCC)，該催化劑則像是4－二甲氨基吡啶(DMAP)，而該適當的酸則具有分子式RCOOH；其中R為烷基、環烷基、芳香族羥基或雜環基。

可以利用文獻(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,1994,vol 4,Mo.21,2567－2572)中所給定的方式準備該磷酸酯類。醚類則可以利用在US Patent No.7,022,667中所描述的方法所準備，其在此都整合為參考文獻。

該化合物PM181104對於廣範圍的細菌菌株而言具有一種抗菌活性。該化合物PM181104、立體異構物、製藥上可接受鹽類與像是其本身酯類與醚類衍生物，都可以單獨或一起使用製藥或是製藥合成物的形式施加至動物之中，像是施加至包含人類的哺乳動物。據此，本發明也與用於製藥的該化合物PM181104、其立體異構物、其製藥上可接受鹽類與其衍生物有關，本發明也與使用該化合物PM181104、其立體異構物、其製藥上可接受鹽類與其衍生物，製造具有抗菌活性的藥劑有關。

本發明進一步與一種製藥合成物有關，其包含該化合物PM181104及/或立體異構物及/或製藥上可接受鹽類及/或其本身酯類與醚類衍生物的有效量，也包含也一製藥上可接受媒介物。做為製藥準備中有效成分的該化合物PM181104或立體異構物或製藥上可接受鹽類或其衍生物的有效量，一般則從0.01毫克至100毫克的範圍。

本發明也與一種準備藥劑的方法有關，該藥劑包含該化合物PM181104及/或立體異構物及/或製藥上可接受鹽類及/或其衍生物，用以治療與避免由細菌感染所引起的疾病。

本發明的該化合物對於做為抗菌媒介是特別有用的。據此，本發明與使用該化合物PM181104及/或立體異構物及/或製藥上可接受鹽類及/或其衍生物有關，用以製造治療與避免由細菌感染所引起疾病的藥劑。本發明化合物則是針對由屬於葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌或芽孢桿菌種等細菌所造成感染的細菌感染治療。

該術語”葡萄球菌種”意指為一種革蘭氏陽性反應的細菌，其透過顯微鏡觀看時呈現為一種像葡萄般的叢集，當在血液瓊脂平板上生長時，呈現為大、圓的金黃色β型溶血菌落。金黃色葡萄球菌 ，其屬於葡萄球菌種，會引起多種化膿(膿形成)的感染，像是瘡、麥粒腫與癤病等的外表皮膚損害；更嚴重的感染則像是肺炎、乳腺炎、靜脈炎、腦膜炎與尿道感染；而深層感染則像是骨髓炎與心內膜炎。金黃色葡萄球菌 也是外傷與院內醫學裝置有關感染等院內感染的一種主要因素。金黃色葡萄球菌 也會造成因為釋放腸毒素至食物中所引起的食物中毒，以及因為釋放超抗原至血流中所引起的中毒休克併發症狀。

該術語”鏈球菌種”意指為厚壁菌門成員、球屬的一種革蘭氏陽性反應細菌。鏈球菌為乳酸菌。鏈球菌種則能夠感染像是腦膜炎、細菌肺炎、心內膜炎、丹毒與壞死性筋膜炎(”噬肉性”細菌感染)等的疾病。

該術語”腸球菌種”意指為厚壁菌門的一種乳酸菌。其為革蘭氏陽性的球菌，並通常成對出現(雙極球菌)。腸球菌為官能性厭氧微生物。腸球菌為最常造成院內感染的細菌之一。腸球菌也發展為具有抵抗抗生素的能力，像是具有抵抗全達黴素與萬古黴素的能力。

該術語”芽孢桿菌種”意指為一種大量分散棒形革蘭氏陽性反應的細菌，其藉由周鞭毛鞭狀體移動，並具有好氧性。其也為厚壁菌門的成員之一。此屬的成員具有製造內芽孢的能力，對於不喜愛的環境條件具有高度抗性。屬於芽孢桿菌種的仙人掌桿菌 引起兩類型的食物源性中毒。一種形式為具有噁心、嘔吐與腹部抽筋的症狀。第二形式主要則具有腹部抽筋與腹瀉的特徵。屬於芽孢桿菌種中枯草桿菌 的感染則包含病人在折衷免疫狀態下的菌血症、心內膜炎、肺炎與敗血病。

本發明的化合物可以利用口服、鼻服、局部性地、皮下地、肌肉內的、通過靜脈的方式，或是以任何施加模式所施加。

含有PM181104或其立體異構物、或其製藥上可接受鹽類或其衍生物的製藥合成物，也可以具有其他的製藥活性物質，其可以利用混和該作用化合物與一或多種藥理學上容許輔助劑及/或輔藥的方式加以準備，像是混和潤濕劑、溶解劑或是緩衝物質，該溶解劑則像是表面活性劑、展色劑、張性劑、過濾劑、著色劑、遮蔽香料、潤滑劑、崩解劑、稀釋液、黏結劑、塑化劑、乳化劑、軟膏基劑、軟化劑、糊劑、聚合物、脂質、油質、複合溶劑、錯化劑，並將該混和物轉換成為一種適當的製藥形式，像是藥片、膜衣藥片、膠囊、細粒、粉末、乳膏、軟膏、凝膠、糖漿、乳膠、懸浮液，或是適合對病人注射的溶液形式。

可能提到的輔助劑及/或輔藥範例則像是氫化蓖麻油、泊洛沙姆、氯化苯二甲羥銨、烷基硫酸鹽、葡萄糖、甘油、硬脂酸鎂、聚乙二醇、澱粉、葡聚糖、乳糖、纖維素、羥甲基纖維素鈉、滑石粉、瓊脂、礦物油、動物油、植物油、有機與礦物蠟、石蠟、凝膠、丙二醇、苯甲醇、二甲基乙醯胺、乙醇、聚醇、乳化劑Tween 80、solutol HS 15及水。

也可以以適當的形式，例如膠囊的形式，在沒有展色劑或稀釋液的情況下施加該作用物質。

習慣上，於一特定情況中所適用的該藥草形式與該施加方法與該劑量範圍，與用來治療的物種以及該各別情況或疾病的狀態有關，並可以使用本領域中已知的方法最佳化。平均來說，一病人每天使用的作用化合物劑量為每公斤0.0005毫克至15毫克，一般來說為每公斤0.001毫克至7.5毫克。

後續則提供本發明的描述範例，其並非用來限制本發明觀點：

範例1

從海生來源分離培養菌號ZMA B－1 a)該分離培養基的成分：瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)(利用1.5%的瓊脂加以瓊脂化)動物消化組織5.0公克、酵母萃取物1.0公克、檸檬酸鐵0.1公克、氯化鈉19.45公克、氯化鎂8.8公克、硫酸鈉3.24公克、氯化鈣1.8公克、氯化鉀0.55公克、碳酸氫鈉0.16公克、溴化鉀80.0毫克、氯化鍶34.0毫克、硼酸22.0毫克、矽酸鈉4.0毫克、氟化鈉2.4毫克、硝酸銨1.6毫克、磷酸氫二鈉8.0毫克、瓊脂粉末15.0公克、雙重蒸餾水1.0公升，最終酸鹼值(於攝氏25度下)為7.4至7.8。

b)程序：以水肺潛水方式，從印度Tamil Nadu海岸Palk灣大約三公尺深的地方收集該海綿狀物樣本，spirastrella inconstans var.digitata (Dendy)。利用無菌海水洗滌該海綿狀物樣本，並立刻轉換至無菌聚乙烯容器之中。該容器則儲存在攝氏零下20度，並維持在攝氏0度下傳輸至實驗室以進行進一步的研究。抵達實驗室之後，該海綿狀物樣本便儲存在至少攝氏0度以下，並在稍後於分離該培養菌之前解凍至室溫(攝氏25±2度)。將該海綿狀物樣本無菌切割成為2×2公分的片段，並在25毫升無菌試管中懸浮於5毫升的無菌海水之中。使該試管進行30秒的渦轉；排出該海水並添加入乾淨的海水。重複三次同樣的處理。最後，排出該海水而該海綿狀物片段被放置在含有以上提到分離媒介[瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)(利用1.5%的瓊脂加以瓊脂化)]的培養皿上。於室溫(攝氏25±2度)下培養該培養皿，直到在培養皿中可以觀察到生長為止。根據菌落特徵的基礎加以分離在該培養皿上生長的菌落，並在含有以上提到分離媒介[瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)(利用1.5%的瓊脂加以瓊脂化)]的培養皿上形成條紋狀。該分離動作將被重複進行再次培養，直到獲得純粹的培養菌號ZMA B－1為止。該培養菌號ZMA B－1便因此從該成長的微生物中分離為一單一分離體。

範例2

培養菌號ZMA B－1的淨化a)該分離培養基的成分：瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)(利用1.5%的瓊脂加以瓊脂化)消化蛋白質5.0公克、酵母萃取物1.0公克、檸檬酸鐵0.1公克、氯化鈉19.45公克、氯化鎂8.8公克、硫酸鈉3.24公克、氯化鈣1.8公克、氯化鉀0.55公克、碳酸氫鈉0.16公克、溴化鉀0.08公克、氯化鍶34.0毫克、硼酸22.0毫克、矽酸鈉4.0毫克、氟化鈉2.4毫克、硝酸銨1.6毫克、磷酸氫二鈉8.0毫克、瓊脂15.0公克、去礦物質水1.0公升，酸鹼值(於攝氏25度下)為7.4至7.8。

b)程序：在15毫米直徑培養皿中於瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)(利用1.5%的瓊脂加以瓊脂化)上獲得該培養基。在該培養皿上的生長則在瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216)(利用1.5%的瓊脂加以瓊脂化)斜面上形成條紋狀。該斜面將在攝氏25度下培養兩天。將來自該斜面床上方部分的單一菌落之一轉換至新的斜面。該斜面同樣在攝氏25度下培養兩天。接著這些都為了基本抗感染篩選的目的進行搖瓶發酵。

範例3

生產者菌株始養菌號ZMA B－1的維持a)該培養基的成分(瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216))：消化蛋白質5.0公克、酵母萃取物1.0公克、檸檬酸鐵0.1公克、氯化鈉19.45公克、氯化鎂8.8公克、硫酸鈉3.24公克、氯化鈣1.8公克、氯化鉀0.55公克、碳酸氫鈉0.16公克、溴化鉀0.08公克、氯化鍶34.0毫克、硼酸22.0毫克、矽酸鈉4.0毫克、氟化鈉2.4毫克、硝酸銨1.6毫克、磷酸氫二鈉8.0毫克、瓊脂15.0公克、去礦物質水1.0公升，酸鹼值(於攝氏25度下)為7.4至7.8。

b)在利用加熱方式完全溶解該要素之後，將形成的溶液分配至試管之中，並於攝氏121度下進行30分鐘的消毒。冷卻該試管，並接著於一斜面位置中凝固。隨著該培養菌號ZMA B－1的生長，該瓊脂斜面則藉由一線圈回路形成條紋狀，並在攝氏27至29度下培養直到觀察到一良好生長為止。將良好生長的培養菌儲存在攝氏4至8度下的冷藏室之中。

範例4

以搖瓶方式進行培養菌號ZMA B－1的發酵a)種子媒介的成分(瓊脂培養基2216(Zobell Marine Broth 2216))：消化蛋白質5.0公克、酵母萃取物1.0公克、檸檬酸鐵0.1公克、氯化鈉19.45公克、氯化鎂8.8公克、硫酸鈉3.24公克、氯化鈣1.8公克、氯化鉀0.55公克、碳酸氫鈉0.16公克、溴化鉀0.08公克、氯化鍶34.0毫克、硼酸22.0毫克、矽酸鈉4.0毫克、氟化鈉2.4毫克、硝酸銨1.6毫克、磷酸氫二鈉8.0毫克、去礦物質水1.0公升，酸鹼值(於攝氏25度下)為7.4至7.8。

b)將上述的媒介分配40毫升的量至一500毫升的錐形燒瓶中，並在攝氏121度下進行30分鐘的壓力鍋施壓。將該燒瓶冷卻至室溫，且每一燒瓶都利用在該斜面上良好生長生產菌株(培養菌號ZMA B－1)的菌環進行接芽，並於攝氏30(±1)度下在一旋轉搖動器上進行每分鐘230至250轉的搖動，並維持24至48小時，以產生種子培養菌。

c)生產媒介的成分：消化蛋白質5.0公克、酵母萃取物1.0公克、檸檬酸鐵0.1公克、氯化鈉19.45公克、氯化鎂8.8公克、硫酸鈉3.24公克、氯化鈣1.8公克、氯化鉀0.55公克、碳酸氫鈉0.16公克、溴化鉀0.08公克、氯化鍶34.0毫克、硼酸22.0毫克、矽酸鈉4.0毫克、氟化鈉2.4毫克、硝酸銨1.6毫克、磷酸氫二鈉8.0毫克、去礦物質水1.0公升，酸鹼值(於攝氏25度下)為7.4至7.8。

d)於500毫升容量錐形燒瓶中分配40毫升的生產媒介，並在攝氏121度下進行30分鐘的壓力鍋施壓，冷卻至攝氏29至30度，並利用範例4b中所提及的種子媒介進行結種。

e)發酵參數：溫度為攝氏29至30度；以每分鐘230至250轉進行轉動；收穫時間為48至72小時。

使用瓊脂井擴散方法測試抵抗萬古霉素抗性腸球菌 R2(VRE)及/或甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌 (MRSA)菌株的生物活性，決定在發酵培養基中的該化合物PM181104的生長。該培養基的收穫酸鹼值為7.0至8.0。獲得該培養基，並使用完整的培養基做為生物活性測試，其為在該發酵培養基中該化合物PM181104的存在指標。

範例5

以搖瓶方式進行用於發酵的種子培養菌準備a)媒介的成分：消化蛋白質5.0公克、酵母萃取物1.0公克、檸檬酸鐵0.1公克、氯化鈉19.45公克、氯化鎂8.8公克、硫酸鈉3.24公克、氯化鈣1.8公克、氯化鉀0.55公克、碳酸氫鈉0.16公克、溴化鉀0.08公克、氯化鍶34.0毫克、硼酸22.0毫克、矽酸鈉4.0毫克、氟化鈉2.4毫克、硝酸銨1.6毫克、磷酸氫二鈉8.0毫克、去礦物質水1.0公升，酸鹼值(於攝氏25度下)為7.4至7.8。

b)將上述的媒介分配200毫升的量至一1公升的錐形燒瓶中，並在攝氏121度下進行30分鐘的壓力鍋施壓。將該燒瓶冷卻至室溫，且每一燒瓶都利用在該斜面上良好生長生產菌株(培養菌號ZMA B－1)的菌環進行接芽，並於攝氏30(±1)度下在一旋轉搖動器上進行每分鐘230至250轉的搖動，並維持24至48小時，以產生種子培養菌。

範例6

發酵罐中該培養菌號ZMA B－1的培養a)該生產媒介的成分：葡萄糖500公克、酵母萃取物11.0公克、消化蛋白質4.0公克、牛肉萃取物4.0公克、碳酸鈣5公克、氯化鈉2.5公克、去礦物質水1.0公升，酸鹼值(在殺菌之前)為7.6。

b)將250公升的生產媒介放置於300公升的發酵罐中，並放入80毫升的丙烯酸聚醇樹脂做為抗起泡劑，並於攝氏121度下進行30分鐘的原處殺菌，冷卻至攝氏29至31度，並利用範例5b中所提及的6公升種子培養菌進行結種。

c)發酵參數：溫度為攝氏30至32度；以每分鐘100轉進行轉動；收穫時間為44至66小時。

使用瓊脂井擴散方法測試抵抗萬古霉素抗性腸球菌 R2(VRE)及/或甲氧苯青黴素抗藥性金黃色葡萄球菌 (MRSA菌株)的生物活性，決定在發酵培養基中的該化合物PM181104的生長。該培養基的收穫酸鹼值為7.0至8.0。獲得該培養基，並使用完整的培養基進行該化合物PM181104的分離與淨化。

範例7

該化合物PM181104的分離與淨化利用在一玻璃容器中攪拌的方式，使用醋酸乙酯獲得並提煉範例6的完整培養基(240公升)。使用盤堆分離器(Alfa－laval,model No.LAPX404)分離該有機層，並將其濃縮以獲得該天然萃取物(296公克)。利用石油醚(3X1公升)攪拌獲得的天然材料並進行超音波處理30分鐘，將其過濾以獲得不可溶殘餘物(38公克)，以後續方法利用真空液相層析法進行層析。

將該不可溶殘餘物(35.5公克)溶解於甲醇與乙睛的混和物(3：1，400毫升)中，並將其preadsorb於LiChroprep RP－18[25至40微米，40公克]上，並與LiChroprep RP－18[25至40微米，110公克]吸收劑一起塞擠，供應至一玻璃質過濾漏斗(G－4等級：10公分×10.5公分)。首先以中央真空系統利用水(4公升)進行洗提，並接著以水：甲醇(1：1，5公升)、甲醇(3公升)、甲醇：乙睛(2.5公升)及乙睛加以洗提。利用對於腸球菌 R2及/或金黃色葡萄球菌 3066的生物鑑定及/或解析高效液相層析技術(HPLC)進行淨化的監測。該化合物PM181104則在甲醇及甲醇：乙睛及乙睛餾分中被偵測。類似的餾分則堆積並濃縮以獲得半純粹材料(1.826公克)。

利用下述條件，以重複預備高效液相層析技術(HPLC)的方式進行最終的淨化：管柱：Eurospher RP－18(10微米，32×250毫米)洗提液：乙睛：水(56：44)流率：每分鐘50毫升偵測(紫外線)：220奈米保持時間：12至14分鐘

利用對於腸球菌 R2及/或金黃色葡萄球菌 3066的生物鑑定及/或解析高效液相層析技術(HPLC)進行餾分純化的檢查。含有該化合物PM181104的洗提液便在減壓情況下堆積並濃縮，去除溶劑並獲得600毫克的純粹化合物。

該化合物PM181104的物理化學與頻譜性質外觀：白色非結晶固體熔點：大於攝氏300度(分解)可溶性：甲醇、二甲基亞碸(DMSO)高效液相層析分析(HPLC)：滯留時間5.61分鐘管柱：Kromasil C18(5微米；150×4.6毫米內徑)(管柱溫度攝氏40度)移動相：乙睛：水(1：1)注入體積：10微升(在移動相中為濃度每毫升0.1毫克)流率：每分鐘1毫升偵測：220奈米高分辨電噴質譜分析(HR－ESI(＋)MS m/z)：1515.3737(M＋H)分子式：C₆₉ H₆₆ N₁₈ O₁₃ S₅ 分子量：1514紫外線(甲醇)：205.2、220.6與306.2奈米(參考第1圖)紅外線(溴化鉀)：3368、2981、1654、1516、1429、1314、1199、1269、1074、1034、805、580公分^－1 (參考第2圖)¹ 氫核磁共振頻譜：參考表格1與第3圖¹³ 碳核磁共振頻譜：參考表格2與第4圖

該化合物PM181104的生物學評估

試管內檢驗

範例8

試管內藥效是利用該化合物PM181104抗菌菌株的最低抑菌濃度(MIC)決定所建立，其利用美國國家臨床檢驗標準委員會(2000)準則所提到的宏觀培養基稀釋法[Journal of Anti－microbial Chemotherapy,2002,50,125－128(交叉參考文獻8：Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically－Fifth Edition：Approved Standard M7－A5.NCCLS,Wayne,PA,USA)]所進行。除非特別說明，對於該檢驗而言使用Mueller－Hinton培養基做為中性媒介。在所有試管內實驗中，則採用利奈唑酮(由Glenmark Pharma Ltd所製造；Batch no：K2005028)的已知標準。對於貯存溶液的準備而言，將該化合物PM181104溶解於三氯甲烷中(需要總體積的5%)，並使用甲醇加以稀釋(需要總體積的95%)。

結果：結果顯示於下列表格3，並說明該化合物PM181104具有治療細菌感染的效力。

表格3：該化合物PM181104抗菌菌株的最低抑菌濃度(MIC)

在表格3中所使用的縮寫為：S：葡萄球菌 E：腸球菌 B：桿菌

活有機體內檢驗活有機體內藥效是利用該化合物PM181104抗菌菌株的保護劑量(PD)決定所建立，代表在使用雄性或雌性Balb/C老鼠的三個動物模型中的抗菌活性。

所使用的模型為具有一般目的效能測試模型以及器官/組織特定效能測試模型。所使用的一般目的效能測試模型為系統性感染模型(敗血病)以及局部性感染模型(嗜中性球減少大腿模型)。為了效能測試所使用的器官/組織特定感染模型則為腎臟、肺臟感染以及皮膚濃瘡模型。

範例9

系統性感染模型以懸浮在生理食鹽水(0.85%氯化鈉)中，過夜生長的抗藥性金黃色葡萄球菌 E710(MRSA)培養菌，利用~10⁸ 至10⁹ 菌落形成單位的量將動物進行腹膜內感染。如範例14中所描述的方式準備氫化蓖麻油－甲醇形式中的PM181104溶液。在感染之後立即進行每公斤5毫克、2.5毫克與1.25毫克劑量溶液的腹膜內施加。每一實驗群都具有十隻動物。對於敗血病模型而言，PM181104的PD₁₀₀ 則決定為每公斤5毫克，以與標準抗菌的利奈唑酮(由Glenmark Pharma Ltd所製造；Batch no：K2005028)所顯示PD₁₀₀ 為每公斤25毫克進行比較。

範例10

嗜中性球減少大腿模型在利用金黃色葡萄球菌 E710進行感染之前，分別在96小時與24小時利用二氯甲基二乙酸(每公斤150毫克與100毫克)使老鼠具有嗜中性球減少症。該動物是以懸浮在生理食鹽水(0.85%氯化鈉)中，過夜生長的抗藥性金黃色葡萄球菌 E710(MRSA)培養菌，利用~10⁷ 菌落形成單位的量所感染。每一實驗群都具有六隻動物。如範例14中所描述的方式準備氫化蓖麻油－甲醇形式中的PM181104溶液。在感染後兩小時以每公斤5毫克的劑量進行溶液腹膜內施加。在不同時間點犧牲該動物，並取出其大腿組織以決定該能發育總量。在6小時時間點處於每公斤5毫克的PM181104劑量下可觀察到大約對數1階的減少，這與每公斤25毫克劑量所進行標準抗菌的利奈唑酮(由Glenmark Pharma Ltd所製造；Batch no：K2005028)之間為可比較的。

範例11

腎臟感染模型在感染前7天對Balb/C老鼠進行0.2毫升的2%λ角叉菜腹膜內施加。將過夜生長的對數期糞腸球菌 ATCC 47077培養菌調整為大約每毫升10⁹ 菌落形成單位，並以0.2毫升的體積對老鼠進行腹膜內施加。如範例14中所描述的方式準備氫化蓖麻油－甲醇形式中的PM181104溶液則在感染後4小時、24小時與48小時對老鼠進行腹膜內施加。在感染後72小時，犧牲該動物並取出其腎臟以決定該細菌負載量。於每公斤5毫克的PM181104劑量下可觀察到細菌總量大約對數1階的減少，這與每公斤25毫克劑量所進行標準抗菌的利奈唑酮(由Glenmark Pharma Ltd所製造；Batch no：K2005028)以及每公斤150毫克劑量的氯化氫萬古黴素(由HiMedia所製造；Catalogue no：RM217－500mg；Lot no：06－0350)之間為可比較的。

範例12

肺臟感染模型在感染之前兩天與5天以腹膜內施加每公斤200毫克二氯甲基二乙酸的方式使Balb/C老鼠具有嗜中性球減少症。在感染當天該老鼠將被麻醉，並利用金黃色葡萄球菌 E710對數期培養菌懸浮液所感染，該懸浮液具有每毫升約為10⁶ 至10⁷ 菌落形成單位的細菌密度。在感染後24與36小時以腹膜內施加的方式施加該第一與第二個別藥劑劑量。在感染後48小時，對該動物進行人道安樂死並以無菌方式收集其肺臟，以決定細菌的能發育總量。在此模型中，測試如範例14中所描述方式所準備氫化蓖麻油－甲醇形式中每公斤5毫克劑量的PM181104溶液。使用兩種標準抗菌的利奈唑酮(感染後24小時施加每公斤80毫克單一劑量)與氯化氫萬古黴素(感染後24與48小時施加兩次每公斤110毫克劑量)做為正向控制組。PM181104所顯示的細菌抑制活性與利奈唑酮(由Glenmark Pharma Ltd所製造；Batch no：K2005028)標準之間為可比較的。氯化氫萬古黴素(由HiMedia所製造；Catalogue no：RM217－500mg；Lot no：06－0350)則顯示一種殺菌曲線。在與未治療控制組動物相比之下，利用PM181104所治療的動物肺臟中，其細菌總量大約呈現對數2階的差異。

範例13

皮膚濃瘡模型以過夜生長的抗藥性金黃色葡萄球菌 E710(MRSA)培養菌，利用大約10⁸ 菌落形成單位的量感染將Balb/C老鼠進行皮下感染。該細菌則懸浮於生理食鹽水(0.85%氯化鈉)中的2%載體cytodex小珠1：1混和物中。如範例14中所描述的方式準備氫化蓖麻油－甲醇形式中的PM181104溶液。該溶液在感染後兩小時便以每公斤2.5毫克、5毫克與10毫克的劑量進行腹膜內施加。每一實驗群都具有六隻動物。在濃瘡形成之後，犧牲該動物並獲得其皮膚以決定該能發育總量。於每公斤5毫克的PM181104劑量下可觀察到細菌總量為大約對數1階的減少，這與每公斤50毫克劑量所進行標準抗菌的利奈唑酮(由Glenmark Pharma Ltd所製造；Batch no：K2005028)之間為可比較的。

該化合物PM181104的形成

範例14

以下述一般方式準備可注射形式：以1：1(重量)的方式混和甲醇與氫化蓖麻油聚氧乙烯。為達此目的，加入PM181104並使其渦轉。該混和物則在攝氏25度下進行超音波處理。利用加入水(90%)的方式稀釋該混和物(考慮為10%的組成)，並再次使其渦轉而獲得該可注射形式。

該化合物PM181104的衍生物

範例15

PM181104的丁酸酯衍生物對二氯乙烷(2毫升)中的PM181104溶液(0.13公克、0.085毫莫耳)加入丁酸(0.008微升、0.085毫莫耳)、二環己基二亞醯銨(DCC，0.018公克、0.085毫莫耳)，與4－二甲氨基吡啶(DMAP，0.002公克、0.016毫莫耳)的催化劑量，並在氮氣環境中攪拌該反應緩和物18小時。對該反應混和物加入冷水，並分離該有機體層；利用二氯乙烷(3×50毫升)取出該水相層，有機體萃取物則堆積並利用水(2×30毫升)加以洗淨。該有機體層則透過無水硫酸鈉加以乾燥並濃縮。該天然產物則使用管柱層析法[矽膠凝體(60至120網目)、三氯甲烷中的3%甲醇]加以淨化，以獲得白色固體權利化合物。產出：0.11公克(81%)；高分辨電噴質譜分析：1585(M＋H)

PM181104的丁酸酯衍生物顯示對於糞腸球菌R－2(VRE)細菌菌株的最低抑菌濃度(MIC)為每毫升2.5微克。

範例16

PM181104的硬脂酸酯衍生物對二氯乙烷(2毫升)中的PM181104溶液(0.12公克、0.079毫莫耳)加入硬脂酸(0.022微升、0.079毫莫耳)、二環己基二亞醯銨(DCC，0.016公克、0.079毫莫耳)，與4－二甲氨基吡啶(DMAP，0.002公克、0.016毫莫耳)的催化劑量，並在氮氣環境中攪拌該反應緩和物6小時。對該反應混和物加入冷水，並分離該有機體層；利用二氯乙烷(3×50毫升)取出該水相層，有機體萃取物則堆積並利用水(2×30毫升)加以洗淨。該有機體層則透過無水硫酸鈉加以乾燥並濃縮。該天然產物則使用管柱層析法[矽膠凝體(60至120網目)、三氯甲烷中的3%甲醇]加以淨化，以獲得白色固體權利化合物。產出：0.1公克(71%)；高分辨電噴質譜分析：1781(M＋H)

PM181104的硬脂酸酯衍生物顯示對於糞腸球菌R－2(VRE)細菌菌株的最低抑菌濃度(MIC)為每毫升1.25微克。

範例17

PM181104的菸鹼酸酯衍生物對二甲基甲酰胺(1毫升)中的PM181104溶液(0.02公克、0.013毫莫耳)加入菸鹼酸(0.008公克、0.065毫莫耳)、二環己基二亞醯銨(DCC，0.014公克、0.065毫莫耳)，與4－二甲氨基吡啶(DMAP，0.0008公克、0.0065毫莫耳)的催化劑量，並在氮氣環境中攪拌該反應緩和物18小時。去除該溶劑並對殘餘物加入10毫升的二氯乙烷。該未溶解尿素被過濾，並以水(2×10毫升)洗淨該過濾物。該有機體層則透過無水硫酸鈉加以乾燥並濃縮至乾燥。該天然產物則使用管柱層析法[C－18反相管柱(Eurospher,20奈米)，水中的55%乙睛]加以淨化，以獲得白色固體權利化合物。產出：0.11公克(56%)；高分辨電噴質譜分析：1621(M＋H)

該PM181104的菸鹼酸酯衍生物將對細菌菌株加以測試。結果顯示於以下表格4中，並說明該化合物PM181104的菸鹼酸酯衍生物具有治療細菌感染的效力。

第1圖顯示化合物PM181104的紫外線吸收頻譜。

第2圖顯示化合物PM181104的紅外線吸收頻譜。

第3圖顯示在二甲基亞碸－d₆ (DMSO－d₆ )中，化合物PM181104的¹ 氫核磁共振頻譜。

第4圖顯示在二甲基亞碸－d₆ (DMSO－d₆ )中，化合物PM181104的¹³ 碳核磁共振頻譜。

Claims

一種新穎化合物，其具有如下述結構式I之結構：其中R=氫原子、、C₁ -C₂₀ 烷羰基以及6元雜環羰基，或是其本身的一立體異構物、或一互變體、或是一製藥上可接受之鹽類。
如申請專利範圍第1項所述的新穎化合物，其中該新穎化合物為PM181104，其中在結構式I中，R為氫原子、或是其本身的一立體異構物、或一互變體、或是一製藥上可接受之鹽類。
如申請專利範圍第2項所述的新穎化合物，其中該新穎化合物為PM181104、或是其本身的一立體異構物或一互變體，其具有抗菌活性，該化合物是分離自屬於庫剋菌種的微生物發酵培養基(ZMAB-1/MTCC 5269)，其特徵在於：(a)分子量為1514、(b)分子式為C₆₉ H₆₆ N₁₈ O₁₃ S₅ 、(c)紫外線頻譜如第1圖所示、 (d)紅外線頻譜如第2圖所示、(e)¹ H核磁共振頻譜如第3圖所示、(f)¹³ C核磁共振頻譜如第4圖所示。
如申請專利範圍第1項所述的新穎化合物，其中R選自 CH₃ CH₂ CH₂ CO、CH₃ (CH₂ )₁₅ CH₂ CO或。
一種用於製造如申請專利範圍第2項中所述之新穎化合物PM181104的製程，其包括以下步驟：(a)於含有碳源與氮源的一營養媒介中，在浸沒好氧條件下，培養該微生物庫剋菌種(ZMAB-1/MTCC5269)或是其變形體或突變體其中之一，以產生該化合物PM181104，(b)自該發酵培養基分離出該化合物PM181104，以及(c)純化該化合物PM181104。
如申請專利範圍第5項所述的製程，進一步包括下列步驟：將該化合物PM181104轉換成為其製藥上可接受之鹽類。
一種製藥組成物，包括一有效劑量之如申請專利範圍第1項所述的化合物，其具有至少一製藥上可接受之輔藥、或是一添加物或一輔助劑。
如申請專利範圍第7項所述的製藥組成物，其中該製藥組成物的形式為藥片、膜衣藥片、膠囊、細粒、粉末、乳膏、軟膏、凝膠、乳膠、懸浮液，或是用於注射之溶液。
一種如申請專利範圍第1項所述的新穎化合物用以製造用於治療由屬於葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌或芽孢桿菌種的細菌所引起的一細菌感染的一藥劑之用途。
如申請專利範圍第9項所述的新穎化合物之用途，其中該細菌是屬於葡萄球菌或腸球菌種。
如申請專利範圍第10項所述的新穎化合物之用途，其中屬於葡萄球菌種的該細菌具有抗甲氧苯青霉素性。
如申請專利範圍第10項所述的新穎化合物之用途，其中屬於葡萄球菌種的該細菌具有抗萬古黴素性。
如申請專利範圍第10項所述的新穎化合物之用途，其中屬於腸球菌種的該細菌具有抗萬古黴素性。