TW201607534A - 治療困難梭狀芽孢桿菌相關感染用硫肽化合物 - Google Patents

Abstract

本發明係相關於一種硫肽化合物，變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類，其被提供以用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的治療或預防。本發明亦相關於困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染的治療或預防的方法，該方法包含給藥予對其有需要的對象治療有效量的化合物變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類。本發明亦相關於一藥學組成物，該組成物包含變異球菌黴素P1以及至少一藥學上可接受的載體，以用於困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染的治療或預防之用途。

Description

治療困難梭狀芽孢桿菌相關感染用硫肽化合物

本發明係相關於硫肽化合物，特別是用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的預防或治療的變異球菌黴素P1（Micrococcin P1）。本發明係相關於困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的治療或預防方法，該方法係經由給藥予對其有需要的對象治療有效量之變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類。

困難梭狀芽孢桿菌（Clostridium difficile ,C. difficile ）為一種革蘭氏陽性、厭氧性的、 桿狀、形成孢子、產生細胞毒素的細菌，其為抗生素相關性腹瀉（AAD）與AAD的嚴重表現，偽膜性結腸炎（pseudomembranous colitis）的主要致病因素。在其孢子形式中，困難梭狀芽孢桿菌抗高溫、紫外線、常見的滅菌技術與抗生素。因為其形成孢子的性質，細菌可以在腸胃道中保留較長的時間，而有助於抗生素治療停用的感染之復發。 在美國，困難梭狀芽孢桿菌是抗生素相關性腹瀉15%至20%的案例，以及近乎所有偽膜性結腸炎的案例的原因（Michael Schroeder et al., American Family Physician, 2005, 71, 5, 921-928）。困難梭狀芽孢桿菌的產毒菌株編碼兩個大分子量的外毒素：為腸毒素的毒素A，以及細胞毒素的毒素B（L. Clifford McDonald et al., Emerging Infectious Diseases, 2006, 12, 3, 409-415）。毒素A與B為困難梭狀芽孢桿菌的主要致病因素。這些毒素與腸道上皮細胞表面受體結合，並且經由胞飲作用（endocytosis）的過程得以轉位至細胞的細胞溶質中。一旦進入細胞內，毒素經糖基化並且將G蛋白的RhoA家族去活化。RhoA 的糖基化作用導致細胞骨架的毀壞並且造成細胞死亡。 困難梭狀芽孢桿菌相關疾病（C. difficile associated disease, CDAD）是一種伴隨老年人口死亡率高達25%的嚴重症狀。 CDAD經常經由廣效抗生素（broad spectrum antibiotics）例如頭芽孢菌素（cephalosporin）、氟喹諾酮類（fluoroquinolone）與克林達黴素（clindamycin）的使用之結腸微生物菌群瓦解而引起，其容許困難梭狀芽孢桿菌的產毒菌株生長以及菌株的毒素A與B的產生。困難梭狀芽孢桿菌感染（Clostridium difficile infection, CDI）係主要在醫院與長期照護設施獲得，特別是經歷抗生素治療的病患。在過去數十年間，於已開發國家困難梭狀芽孢桿菌感染（CDI）的案例已大幅增加。在光是美國，於1993至2008年間醫院獲得CDI案例的數目增加了300%（Agency for Healthcare Research and Quality News and Numbers, January 25, 2012）。 在過去數年，已報導困難梭狀芽孢桿菌的新超毒性菌株NAP1/BI/027。超毒性菌株NAP1/BI/027產生更高量的毒素A與B，以及稱為二元毒素（binary toxin）的額外毒素，使得此菌株更為強大而難以治療所造成的感染。不久前已觀察到困難梭狀芽孢桿菌的超毒性菌株的爆發，其已造成嚴重疾病的比率增加、更頻繁的復發以及死亡率增加（David B et al., Clinical Infectious Diseases, 2007, 45, 222-227）。 對CDAD或CDI的治療目前使用的療法包括抗生素，例如硝基甲嘧唑乙醇（metronidazole）、萬古黴素（vancomycin）、非達黴素（fidaxomicin）與替考拉寧（teicoplanin）的使用。與現今療法相關的主要問題包括不完全的回應率（response rate）、增加的再感染機會以及復發率。在由多重抗藥性細菌所致感染的治療中，這些抗生素，特別是萬古黴素的廣泛使用亦已增加抗藥性的出現機率。目前正在開發的CDAD與CDI治療的治療藥劑包括CB-183,315（Cubist）、MK-3415A（Merck & Co.）、雷莫拉寧（Ramoplanin）（Nanotherapeutics）、阿克特單抗（Actoxumab）（Merck & Co.）與SMT-19969（Summit）。困難梭狀芽孢桿菌毒素結合化合物Tolevamer（Genzyme）近來已在CDAD治療的第III期臨床開發。其他治療藥劑例如尼塔唑奈得（nitazoxanide）（Romark）與 IMM-308 (Immuron) 目前亦還在對CDAD的治療進行調查。考量到困難梭狀芽孢桿菌感染的發生率增加，對困難梭狀芽孢桿菌感染的進一步治療選擇的持續需求仍然存在。 本發明提供了變異球菌黴素P1作為困難梭狀芽孢桿菌相關感染治療之新的治療選擇。本發明的發明者已發現變異球菌黴素P1，一種硫肽化合物，對細菌困難梭狀芽孢桿菌是具活性的，且因而該化合物在困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染的治療會是有用的。

在一方面，本發明係相關於化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類；用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的治療的用途。 在本發明的另一方面，提供了困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染治療的方法，該方法包含給藥予對其有需要的病患治療有效量之變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類。 在本發明的又一方面，提供了抑制困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體生長的方法，該方法包含將困難梭狀芽孢桿菌生物體與足以抑制困難梭狀芽孢桿菌生物體生長之量的化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類接觸。 在本發明的又另一方面，提供了提供困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關感染或疾病預防的方法，該方法包含給藥予對其有需要的對象足以達到困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的預防之量的變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類。 在本發明的進一步方面，提供了困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染治療的方法，該方法包含將治療有效量之化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類，連同一或更多進一步的治療活性劑給藥予對其有需要的對象。 在本發明的另一方面，提供了提供困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關感染或疾病預防的方法，該方法包含將足以達到困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的預防之量的變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類伴隨致腹瀉抗生素（diarrhoea causing antibiotic）給藥予對其有需要的對象。 在本發明的又另一方面，提供了一種藥學組成物，該組成物包含變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類，以及至少一種藥學上可接受之載體，以用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的治療之用途。 在本發明的進一步方面，提供了變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類的用途，以用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的治療。 在本發明的再一方面，提供了變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類的用途，以用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的治療之藥劑的製造。 從下列描述中，本發明的這些與其他方面與優勢對本領域的技術人員而言將更為顯著。

在一具體實施例中，本發明提供一化合物，具有下列結構的變異球菌黴素P1；或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類；用於困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關感染或疾病的治療或預防之用途。定義： 所列於下者為應用於如同整份說明書與附加的方面中所使用的用語（除非其於特定的例子中另有限制）之個別的或是為較大群組的部分之定義。它們非一般的定義且僅相關地用於此申請書中。 除非上下文中清楚地另外指明，單數形式「一（a）」、「一（an）」以及「此（the）」包括複數的形式。 如同本文所使用地，該用語「藥學上可接受的」意指載體或鹽類必須與配方中的其他成分相容，並且對其接受者無害。 如同本文所使用地，該用語「藥學上可接受之載體」意指無毒性且惰性、與較佳地為哺乳動物，更佳地為人類之受試者相容的稀釋劑、賦形劑、膠囊材料或製劑輔劑，並且此載體適於將活性劑運送至目標位置而不終止藥劑的活性。 該用語「治療有效量」如同本文中所使用地，意指當給藥予需要此類治療的對象時，足以提供治療的益處之變異球菌黴素P1或其互變異構物或其藥學上可接受之鹽類的量，該益處包括困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關感染或疾病的預防、治療或改善；這樣變異球菌黴素P1或包含變異球菌黴素的組成物之任何有毒的或有害的效果被其治療有益效果抵消了。精確的期望治療效果將根據疾病狀態、給藥的配方、個體的年齡、性別與體重，以及為本領域具一般技藝之技術人員所理解的許多其他因素(例如並行療法的性質)而改變。 互變異構性（tautomerism）可定義為單一化合物以兩種可容易地相互轉換的結構存在的現象，這兩個結構在至少一個原子核的相對位置明顯地不同，通常是氫。該用語「互變異構物（tautomers）」如同本文所使用地，意指兩個可容易相互轉換的結構，這兩個結構在至少一個原子核的相對位置明顯地不同，通常是氫。當兩結構在關於氫的相對位置上不同時，生成的互變異構物稱為酮-烯醇（keto-enol）互變異構物。 用語「足夠量」與「以足夠的量」交替使用且相對於抑制困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體的生長，意指足以顯著地誘發困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體的生長抑制之變異球菌黴素P1或包含變異球菌黴素P1的組成物的量。 該用語「治療（treating）」、「治療（treat）」或「治療（treatment）」如同本文所使用地具有其普通或慣用的意義，並且包括減輕感染或疾病、減緩現存疾病的進展、減弱或治癒現存的疾病（例如，抗菌相關性腹瀉或偽膜性結腸炎）。 該用語「預防（prophylaxis）」如同本文所使用地具有其原始或慣有的意義，並且包括抑制在病患中困難梭狀芽孢桿菌的生產性或進行性感染的發展，其中在變異球菌黴素P1或包含本發明之變異球菌黴素P1的組成物之給藥後，預防持續至少約1至約50或更多天。對困難梭狀芽孢桿菌的生產性或進行性感染的發展的抑制意謂著相對沒有給藥變異球菌黴素P1或包含本發明之變異球菌黴素P1的組成物的對象，對象中困難梭狀芽孢桿菌感染的嚴重性被降低了約20%至約100%。 該用語「接觸」意為廣泛地指將困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體與變異球菌黴素P1攜至足夠地接近，使得該化合物能夠對細菌細胞發揮效果。可將化合物運送至困難梭狀芽孢桿菌生物體的位置，或可將化合物置於困難梭狀芽孢桿菌生物體行經的或被攜往接觸的位置。技術人員將了解用語「接觸」包括化合物與困難梭狀芽孢桿菌間的物理性交互作用，以及不需要物理性交互作用的交互作用。 該用語「對象」如同本文所使用地意指一動物，較佳地為哺乳動物，且最佳地為人類。本文所使用的用語「哺乳動物」意指「哺乳綱」的溫血脊椎動物，其包括人類，其以毛髮覆蓋於皮膚、雌性供餵養幼兒之生產乳汁的乳腺為特徵。該用語哺乳動物包括而不限於例如貓、狗、馬、兔、熊、狐狸、狼、猴、鹿、老鼠、豬以及人類等動物。 將該用語「困難梭狀芽孢桿菌相關疾病（CDAD）」、「困難梭狀芽孢桿菌相關感染」以及「困難梭狀芽孢桿菌感染（CDI）」被交替使用，並且意指由革蘭氏陽性、形成孢子、厭氧性的、產生細胞毒素的桿菌之困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）所造成的例如抗菌或抗生素相關性腹瀉、偽膜性結腸炎、腹瀉、或結腸炎的感染或疾病。 該用語「抗菌相關性腹瀉」或「偽膜性結腸炎」如同本文中所使用地意指在接受以抗生素、化療或改變腸道中的正常菌群之其他藥物的治療後所導致的感染或疾病。 該用語「致腹瀉性抗生素」如同本文中所使用地，意指由微生物生產或由合成生成的物質，此物質選擇性地抑制另一微生物的生長，並因而用以治療由細菌與其他微生物造成的感染，其長期給藥導致腹瀉。此類抗生素的範例包括但不限於頭孢菌素類（cephalosporin）例如頭孢羥胺芐（cefadroxil）、頭孢唑林（cefazolin）、頭孢胺芐（cephalexin）、頭孢克洛（cefaclor）、頭孢噻吩（cefoxitin）、頭孢丙烯（cefprozil）、頭孢呋辛（cefuroxime）、氯碳頭孢（loracarbef）、頭孢地尼（cefdinir）、頭孢托侖（cefditoren）、頭孢克肟（cefixime）、頭孢哌酮（cefoperozone）、頭孢噻肟（cefotaxime）、頭孢泊肟酯（cefpodoxime）、頭孢他啶（ceftazidime）、頭孢布烯（ceftibuten）、頭孢唑肟（ceftizoxime）、頭孢曲松（ceftriaxone）、頭孢吡肟（cefepime）；氟化喹啉酮類（fluoroquinolone）例如左氧氟沙星（levofloxacin）、氧氟沙星（ofloxacin）、環丙沙星（ciprofloxacin）、洛美沙星（lomefloxacine）、諾氟沙星（norfloxacin）、莫西沙星（moxiflaxacin）、曲伐沙星（trovafloxacin）；大環內酯類（macrolide）例如阿奇黴素（azithromycin）、克拉黴素（clarithromycin）地紅黴素（dirithromycin）、紅黴素（erythromycin）、醋竹桃黴素（troleandomycin）；青黴素類（penicillin）例如阿莫西林（amoxicillin）、氨芐青黴素（ampicillin）、卡本西林（carbenicillin）、氯噻青黴素 （cloxacillin）、二氯噻青黴素（dicloxacillin）、乙氧萘青黴素（nafcillin）、苯唑青黴素（oxacillin）、青黴素G（penicillin G）、青黴素V（penicillin V）、哌拉西林（piperacillin）、替卡西林（ticarcillin）；磺胺類（ulphonamide）例如 磺胺米隆（mafenide）、磺胺醋醯（sulfacetamide）、磺胺甲二唑（sulfamethizole）、柳氮磺吡啶（ sulfasalazine）、磺胺異噁唑（sulfisoxazole）；克林黴素（clindamycin）；磷黴素（fostomycin ）與利奈唑胺（ linezolid）。 該用語「芽孢桿菌屬（genus Bacillus）」意指大量多樣的、桿狀革蘭氏陽性細菌，其可以是絕對好氧菌或兼性厭氧菌，並且對酵素過氧化氫酶（catalase）檢測為陽性。它亦是厚壁菌門（Firmicutes）的一員。此屬的成員能夠產生內孢子，能保持休眠狀態，因此它們可抵抗不利的環境條件。困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）屬於厭氧芽孢桿菌種。 該用語「藥學上可接受之鹽類」意在包括以酸類或鹼類製備的化合物變異球菌黴素P1之鹽類。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽或有機鹼鹽類。藥學上可接受之有機鹼加成鹽包括衍生自有機鹼者，例如離胺酸、精胺酸、胍以及諸如此類者。藥學上可接受的酸加成鹽包括衍生自無機酸類者，例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸以及諸如此類者，以及衍生自有機酸類的鹽類，例如乙酸、丙酸、草酸、馬來酸、苯甲酸、琥珀酸、富馬酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸、甲磺酸等。 化合物變異球菌黴素P1為屬於芽孢桿菌屬（培養株編號E8800076a）的土壤細菌之發酵產物。用於化合物變異球菌黴素P1的生產、屬於芽孢桿菌屬（培養株編號E8800076a）的細菌的培養株係由印度旁遮普邦Hoshiyarpur的農地與池塘盆地所收集的土壤樣品中分離的。 經由檢查菌落特徵、革蘭氏染色並且使用16S rRNA基因定序來進行培養株編號E8800076a的鑑識。根據供專利程序的目的之國際微生物存放的布達佩斯條約，培養株編號E8800076a已存放於細胞科學國家中心（NCCS, NCCS Complex, University of Pune Campus, Ganeshkhind, Pune 411 007, Maharashtra, India），其為一個世界智慧財產權組織（World Intellectual Property Organization, WIPO）承認的國際寄存機構（International Depository Authority, IDA）並且已給定登錄號MCC0015。 此化合物，變異球菌黴素P1具有分子式C₄₈ H₄₉ N₁₃ O₉ S₆ （分子量1144.46g/mol）並且以其物理化學與光譜特性例如高效液相層析法（HPLC）、質譜（MS）、紫外線（UV）、遠紅外線（IR）以及如同下文討論的核磁共振（NMR）光譜數據的一或更多者為特徵。 將如上所指出地分離之變異球菌黴素P1的結構經由離子阱質譜儀器中的MS/MS分段圖形（MS/MS fragmentation pattern）測定。經由文獻（David Lefranc et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 4198 – 4201）中所報導的¹ H NMR化學位移與變異球菌黴素P1的¹ H NMR數值之比較以確認結構。 來自培養株編號E8800076a的變異球菌黴素P1的生產程序，該程序包含步驟： (i)          將培養株編號E8800076a在營養液中的浸沒式需氧條件下生長，該營養液包含一或更多碳源以及一或更多氮源以及隨選地營養素無機鹽類及/或微量元素，以獲得包含變異球菌黴素P1的培養液； (ii)          由培養液中分離化合物變異球菌黴素P1；並且 (iii)        萃取並且純化化合物變異球菌黴素P1。 經由使用相關領域中通常使用的純化步驟來進行涉及變異球菌黴素P1的純化之步驟(iii) 。典型地，可經由管柱層析技術純化變異球菌黴素P1。   變異球菌黴素P1的生產係經由以25 ˚C至35 ˚C範圍的溫度以及大約6至8的pH下，伴隨以50 rpm至150 rpm的速度下攪拌發酵30 h至60 h以培養培養株編號E8800076a而進行。較佳地，以28 ˚C至30 ˚C範圍的溫度以及6.4至7.4的pH下，伴隨以90 rpm至110 rpm的速度之攪拌培養40-50 h 。 經由培養培養株編號E8800076a在合適的營養液中、本文中所描述的條件，較佳地在浸沒式需氧條件下，舉例來說在振盪的燒瓶中以及在實驗室的發酵槽中進行變異球菌黴素P1的生產。以高效液相層析法（HPLC）並且經由使用瓊脂孔擴散法（agar well diffusion assay）對細菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）209P菌株、抗二甲苯青黴素金黃色葡萄球菌（MRSA）菌株、抗萬古黴素腸球菌（VRE）以及綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa ）菌株測量培養液的生物活性，以監控化合物變異球菌黴素P1的發酵與生產的過程。在生成的培養液中，化合物變異球菌黴素P1存在於培養濾液以及細胞團塊中，並且將其使用已知的分離技術例如溶劑萃取以及管柱層析法而被分離。使用醋酸乙酯將化合物變異球菌黴素P1由整個培養液中萃取出來。萃取物的濃縮提供了具活性的粗材料。使用快速層析法經由分餾接著以RP製備型HPLC將化合物變異球菌黴素P1從粗材料回收（正相Si）。 本領域的技術人員將意識到對化合物變異球菌黴素P1而言，互變異構物是有可能的。因此，可根據本發明提供化合物變異球菌黴素P1的所有可能互變異構物以供使用。 可將化合物變異球菌黴素P1轉變為其藥學上可接受之鹽類。可經由本領域的技術人員已知的標準步驟製備藥學上可接受之鹽類，舉例來說，可經由將變異球菌黴素P1以合適的鈉或鉀的鹼類例如氫氧化鈉或氫氧化鉀處理，以製備像是鈉或鉀鹽的鹽類。可經由將鹽類與鹼類或酸類接觸並且以傳統方式分離母體化合物，以再生變異球菌黴素P1的中性形式。 在本發明的上下文中，提供用於困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的變異球菌黴素P1亦可由商業來源或根據本領域所揭露之程序，舉例來說David Lefranc et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 4198 – 4201來合成而獲得。 在本發明的一具體實施例中，該化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類對困難梭狀芽孢桿菌具有活性，因而發現在困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的治療之用途。 在另一具體實施例中，本發明提供了困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的治療或預防的方法，該方法包含給藥予對其有需要的對象一治療有效量之變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類。 本發明進一步地相關於包含一治療有效量之化合物變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類，及藥學上可接受之載體的藥學組成物，以用於困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的治療。 根據本發明，較佳地將變異球菌黴素P1提供為困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的治療之用。 在一具體實施例中，困難梭狀芽孢桿菌相關感染可能是輕度感染。 在一具體實施例中，困難梭狀芽孢桿菌相關感染可能為中重度感染。 在一具體實施例中，困難梭狀芽孢桿菌相關感染可能為嚴重的感染。 在一具體實施例中，困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病可選自：抗生素相關性腹瀉（AAD）、偽膜性結腸炎、腹瀉或結腸炎。 在一具體實施例中，困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病可選自：抗生素相關性腹瀉（AAD）或腹瀉。 在一具體實施例中，困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病可選自：偽膜性結腸炎或結腸炎。 根據一具體實施例，可將以給藥治療有效量的變異球菌黴素P1之困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的治療方法採用為具有或處於發展困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病風險的病患之初始治療，或可將其採用來治療起始治療（例如，以硝基甲嘧唑乙醇、萬古黴素或其他傳統上使用的治療劑）已失敗的對象，以全力地治療抗生素相關性細菌型腹瀉或困難梭狀芽孢桿菌的感染。舉例來說，當對象被對硝基甲嘧唑乙醇、萬古黴素或其他傳統上使用的治療劑中的一或更多者具抗性的困難梭狀芽孢桿菌生物體寄生時，可採取治療病患的該用途。 在一具體實施例中，本發明提供了供困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關感染或疾病的預防方法，該方法包含給藥予對其有需要的病患變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類；將其以一足以達成困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的預防的量與一致腹瀉抗生素同時使用。 致腹瀉抗生素包括但不限於頭孢菌素類（cephalosporin）例如頭孢羥胺芐（cefadroxil）、頭孢唑林（cefazolin）、頭孢胺芐（cephalexin）、頭孢克洛（cefaclor）、頭孢噻吩（cefoxitin）、頭孢丙烯（cefprozil）、頭孢呋辛（cefuroxime）、氯碳頭孢（loracarbef）、頭孢地尼（cefdinir）、頭孢托侖（cefditoren）、頭孢克肟（cefixime）、頭孢哌酮（cefoperozone）、頭孢噻肟（cefotaxime）、頭孢泊肟酯（cefpodoxime）、頭孢他啶（ceftazidime）、頭孢布烯（ceftibuten）、頭孢唑肟（ceftizoxime）、頭孢曲松（ceftriaxone）、頭孢吡肟（cefepime）；氟化喹啉酮類（fluoroquinolone）例如左氧氟沙星（levofloxacin）、氧氟沙星（ofloxacin）、環丙沙星（ciprofloxacin）、洛美沙星（lomefloxacine）、諾氟沙星（norfloxacin）、莫西沙星（moxifloxacin）、曲伐沙星（trovafloxacin）；大環內酯類（macrolide）例如阿奇黴素（azithromycin）、克拉黴素（clarithromycin）地紅黴素（dirithromycin）、紅黴素（erythromycin）、醋竹桃黴素（troleandomycin）；青黴素類（penicillin）例如阿莫西林（amoxicillin）、氨芐青黴素（ampicillin）、卡本西林（carbenicillin）、氯噻青黴素 （cloxacillin）、二氯噻青黴素（dicloxacillin）、乙氧萘青黴素（nafcillin）、苯唑青黴素（oxacillin）、青黴素G（penicillin G）、青黴素V（penicillin V）、哌拉西林（piperacillin）、替卡西林（ticarcillin）；磺胺類（sulphonamide）例如 磺胺米隆（mafenide）、磺胺醋醯（sulfacetamide）、磺胺甲二唑（sulfamethizole）、柳氮磺吡啶（ sulfasalazine）、磺胺異噁唑（sulfisoxazole）；克林黴素（clindamycin）；磷黴素（fostomycin ）與利奈唑胺（ linezolid）。 作為藥學組成物中的活性成分，化合物變異球菌黴素P1或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類的治療有效量正常地由大約1 mg至大約2000 mg，較佳地由大約1 mg至大約1000 mg，更佳地由大約5 mg至大約750 mg。 在一具體實施例中，本發明係相關於抑制困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體生長的方法，該方法包含將困難梭狀芽孢桿菌生物體與足以抑制困難梭狀芽孢桿菌生長之量的變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類接觸。 在一具體實施例中，本發明係相關於抑制困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體生長的方法，該方法包含將困難梭狀芽孢桿菌生物體與足以抑制困難梭狀芽孢桿菌生長之量的藥學組成物接觸，該藥學組成物包含化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類。 抑制困難梭狀芽孢桿菌生物體生長的方法可為在活體外、在活體內或兩者，該方法包含將生物體與足以抑制細菌困難梭狀芽孢桿菌生長之量的化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類或一藥學組成物接觸。 在一具體實施例中，本發明係相關於抑制困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體生長的方法，該方法包含在體外將困難梭狀芽孢桿菌生物體與足以抑制困難梭狀芽孢桿菌生長之量的化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類接觸 。 在一具體實施例中，本發明係相關於抑制困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）生物體生長的方法，該方法包含在體內將困難梭狀芽孢桿菌生物體與足以抑制困難梭狀芽孢桿菌生長之量的化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類接觸。 在一具體實施例中，本發明係相關於化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類的用途，其用於由困難梭狀芽孢桿菌造成之感染或疾病的治療之藥劑的製造。 本發明進一步地提供困難梭狀芽孢桿菌造成之疾病或感染的治療方法，該方法包含將一治療有效量之化合物變異球菌黴素P1，或其互變異構物，或其藥學上可接受之鹽類，連同一或更多進一步的治療活性劑給藥予對其有需求的對象。該進一步的治療活性劑可選自硝基甲嘧唑乙醇（metronidazole）、萬古黴素（vancomycin）、非達黴素（fidaxomicin）與替考拉寧（teicoplanin）。 本發明之化合物可以口服、經鼻、局部、皮下、肌肉內、靜脈內或經由其他給藥模式給藥。 可將包含變異球菌黴素P1或其互變異構物或藥學上可接受之鹽類的藥學組成物經由混合活性化合物（例如變異球菌黴素P1）與一或更多藥學上可接受的輔劑及/或賦形劑(例如潤溼劑、增溶劑例如界面活性劑、媒液、等滲劑、填充劑、著色劑、掩蔽調味劑、潤滑劑、崩解劑、稀釋劑、黏合劑、增塑劑、乳化劑、軟膏基劑、潤膚劑、增稠劑、聚合物、脂質、油、助溶劑或錯合劑)來製備；並且將混合物轉變成合適的藥學形式，例如片劑、包衣片劑、膠囊、顆粒、粉末、乳霜、軟膏、凝膠、糖漿、乳劑、懸浮液或適用於腸外給藥的溶液。 可使用的輔劑及/或賦形劑的範例為克雷莫弗（cremophor）、普洛沙瑪（poloxamer）、氯化烷基二甲基芐基銨（benzalkonium chloride）、月桂基硫酸鈉、右旋糖、甘油、硬脂酸鎂、聚乙二醇（polyethylene glycol）、澱粉、糊精、乳糖、纖維素、羧甲基纖維素鈉、明膠、滑石、瓊脂、礦物油、動物油、植物油、有機與礦物蠟、石蠟、凝膠、丙二醇、苯甲醇、二甲基乙醯胺、乙醇、聚乙二醇（polyglycol）、聚山梨醇酯80（tween 80）、Solutol HS15以及水。   將如此變異球菌黴素P1不用無媒液或稀釋劑而以合適的形式(例如以膠囊)給藥亦可為有可能的。 腸胃外給藥的配方可能是水性或非水性等滲無菌注射溶液、懸浮液或脂肪乳劑的形式。用來注射的腸胃外形式必須具有容易注射性存在的程度之流體特性。這些溶液或懸浮液可從無菌的濃縮液體、粉末或顆粒製備。 使用於腸胃外製劑的賦形劑亦包括但不限於穩定劑（例如碳水化合物、胺基酸與聚山梨醇酯，例如5%葡萄糖）、增溶劑（例如西曲溴銨（cetrimide）、多庫酯鈉（sodium docusate）、甘油單油酸酯、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和聚乙二醇（PEG））、界面活性劑（例如聚山梨酸酯、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、泊洛沙姆與克雷弗莫^TM ）、緩衝液（例如乙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、胺基酸以及諸如此類）、抗氧化劑與防腐劑（例如丁基化羥基苯甲醚（BHA）、丁基化羥基甲苯（BHT）、龍膽酸、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉與包含硫的試劑例如亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、硫甘油、巰基乙酸鹽以及諸如此類）、等滲劑（用於調節生理相容性）、懸浮或黏度劑、抗菌劑（例如地莫醇（thimersol）、芐索氯銨（benzethonium chloride）、苯扎氯銨（benzalkonium chloride）、苯酚、甲酚與氯丁醇）、螫合劑以及給藥助劑（例如局部麻醉劑、抗發炎劑、抗凝血劑、延長的血管收縮劑以及增加組織滲透性的藥劑）以及其組合物。使用疏水性載體的腸胃外製劑包括，舉例來說，脂肪乳劑與包含脂質、脂質球體、泡囊、顆粒與脂質體的製劑。脂肪乳劑包括除了上述的賦形劑外，脂質與水相，以及添加劑例如乳化劑（例如磷脂質、泊洛沙姆以及聚山梨醇酯和聚氧乙烯蓖麻油）以及滲透劑（例如氯化鈉、甘油 、山梨糖醇、木糖醇與葡萄糖）。脂質體包括天然或衍生的磷脂質與隨選地穩定劑，例如膽固醇。 在一具體實施例中，變異球菌黴素P1的腸胃外單位劑量形式可以是合適載體中之無菌密封的安瓶或無菌預裝載之針筒的變異球菌黴素P1現成溶液。合適的載體隨選地包含如上述提及之賦形劑中的任何一者。 替代地，變異球菌黴素P1的單位劑量可以濃縮液、粉末或顆粒形式，以用於在輸送的時間臨時以適當的藥學上可接受之載體(例如無菌水)重新配製。除了上述提及的賦形劑，粉末形式隨選地包括填充劑（例如甘露醇、甘胺酸、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、羥乙基澱粉、聚蔗糖與明膠）以及冷凍（cryoprotectant）或凍乾保護劑（lyoprotectant）。 可將包含變異球菌黴素P1的藥學組成物以無菌製劑的形式提供以供靜脈注射使用。無菌製劑可包含變異球菌黴素P1伴隨隨選地一或更多添加物，包括增溶劑或界面活性劑，其中變異球菌黴素P1可溶解於或懸浮於任何常用的靜脈注射液，並且經由輸注給藥。靜脈注射液包括但不限於生理食鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、5%葡萄糖水溶液或林格氏液。 可將包含變異球菌黴素P1的藥學組成物溶解並且在藥學稀釋劑例如注射用水（WFI）、生理食鹽水或5%葡萄糖水溶液中給藥。藥學組成物的適合的不溶形式可以鹼類水溶液的懸浮液或藥學上可接受的油基例如長鏈脂肪酸的酯類如油酸乙酯來製備並給藥。 概括來說，給藥的劑量視給藥模式、給藥製劑、病情的嚴重程度（由困難梭狀芽孢桿菌造成的感染或疾病）或其病理學，以及動物的體重及/或所需的生理反應性質而定。因此，變異球菌黴素P1的每日劑量可能視根據症狀的病情嚴重程度（由困難梭狀芽孢桿菌造成的感染或疾病）、用以給藥活性成分或化合物的製劑與措施，以及要實行的給藥模式而改變。對於給定的病患的特定劑量經常是由治療病患的醫生判斷而設定。然而，在本發明的上下文中，變異球菌黴素P1的治療有效及/或足夠的量典型地可由大約0.5 mg/kg體重至大約100 mg/kg體重的範圍，較佳地在1 mg/kg至50 mg/kg，更佳地在5 mg/kg至30 mg/kg的範圍。在某些具體實驗例中，用於單一劑量或不頻繁劑量的治療有效量為大約1 mg/kg 至 35 mg/kg體重。在一些情況中，可使用低於0.5 mg/kg體重或高於100 mg/kg體重的劑量 。 適當的給藥頻率可視變異球菌黴素P1的給藥是否為了困難芽孢桿菌相關感染或疾病的治療或預防的目的而變化。具有困難梭狀芽孢桿菌感染的病患之治療、困難梭狀芽孢桿菌感染的預防或避免的劑量給藥頻率包括每日四次、三次、二次或一次；以及每隔一日、每三日、每週一次、每十日、每月或每兩個月的該劑量。在本發明的某些方法與具體實施例中，單一劑量或多劑量（例如2、3、4、5或6劑）可足以達到所需的結果。在其他具體實施例中，治療時程可能需要數日之內的多劑量給藥；舉例來說，在1-15日或更多日內，每日4、3、2或一次劑量的給藥。 視給藥的措施而定，可將劑量一次全部給藥，例如以膠囊的口服劑型，或將劑量緩慢地在一段時間給藥，例如以靜脈內給藥。 一種藥學組成物，其包含化合物變異球菌黴素P1，亦可伴隨其他治療活性劑給藥予對象。可與化合物變異球菌黴素P1結合使用的治療活性劑可能為抗微生物劑，例如硝基甲嘧唑乙醇（metronidazole）、萬古黴素（vancomycin）、非達黴素（fidaxomicin）與替考拉寧（teicoplanin）。 提供下列非限制性的範例以描述本發明較佳的具體實施例。這些範例不應被解釋成限制本發明的範圍。 使用下列縮寫或用語於本文： ATCC               :     美國菌種保存中心； (NH₄ )₂ SO₄ :     硫酸銨； CLSI                 :     臨床及實驗室標準協會（Clinical and Laboratory Standards Institute）； K₂ HPO₄ :     磷酸氫二鉀； g                        :     公克； h                        :     小時； HPLC                :     高效液相層析法； FeSO₄ .7H₂ O            :     七水合硫酸鐵（II）； MgCl₂ .6H₂ O      :     六水合氯化鎂； min                    :     分鐘； mL                     :     毫升； mm                    :     毫米； MRSA               :     抗甲氧苯青黴素金黃色葡萄球菌； MIC                  :     最低抑菌濃度； L                        :     公升； rpm                          :     每分鐘轉數； SBA                  :     補充布魯氏菌瓊脂； VRE                  :     抗萬古黴素腸球菌； VVM                 :     每單位體積氣體通氣量。範例 1 ： 來自土壤的培養株編號 E8800076a 之分離： i. 分離培養基的組成物： 硫酸銨 [(NH₄ )₂ SO₄ ] 1.0 g、磷酸氫二鉀（K₂ HPO₄ ）5.0 g、富馬酸3.0 g；甲酸鈉3.0 g；酵母萃取物1.0 g；氯化鎂六水合物（MgCl₂ .6H₂ O）0.2 g；硫酸亞鐵七水合物（FeSO₄ .7H₂ O）0.02 g；巰基乙酸鈉0.5 g；刃天青1.0 mg；瓊脂粉末1.5-2.0 %與蒸餾水1.0 L（pH 7.2）。ii. 程序： 將複合土壤樣本自印度旁遮普邦霍斯希亞爾普爾的農地與池塘盆地農地收集。將土壤樣本收集於無菌塑料袋，並且將袋子標示註明時間、日期與樣本收集地點。 在實驗室，將每個土壤樣本以具pH 7.2的無菌磷酸鹽緩衝液依序稀釋，以獲得10^-2 至10^-4 稀釋液。將這些稀釋液畫線於包含上述分離培養基的培養皿中。將畫線的培養皿於30 ˚C培養，直到可見的微生物菌落出現於盤中。將生長於盤中的菌落於於包含上述分離培養基的培養皿中以四區畫線分離。將分離物重複繼代培養直到獲得純種的細菌培養株。自分離的純種培養株中篩選培養株E8800076a 。範例 2 :培養株編號 E8800076a 之純化 i.培養基的組成物： 硫酸銨 [(NH₄ )₂ SO₄ ] 1.0 g、磷酸氫二鉀（K₂ HPO₄ ）5.0 g、富馬酸3.0 g；甲酸鈉3.0 g；酵母萃取物1.0 g；氯化鎂六水合物（MgCl₂ .6H₂ O）0.2 g；硫酸亞鐵七水合物（FeSO₄ .7H₂ O）0.02 g；巰基乙酸鈉0.5 g；刃天青1.0 mg；瓊脂粉末1.5-2.0 %與蒸餾水1.0 L（pH 7.2）。ii. 程序： 將生長於培養皿的菌落畫線於上述培養基的斜面。將此斜面於30 ˚C下培養2天。將來自斜面上部的單一菌落轉移至新鮮的斜面。將此斜面於30 ˚C下培養2天。範例 3 ：培養株 E8800076a 的維持 i.培養基的組成物： 硫酸銨 [(NH₄ )₂ SO₄ ] 1.0 g、磷酸氫二鉀（K₂ HPO₄ ）5.0 g、富馬酸3.0 g；甲酸鈉3.0 g；酵母萃取物1.0 g；氯化鎂六水合物（MgCl₂ .6H₂ O）0.2 g；硫酸亞鐵七水合物（FeSO₄ .7H₂ O）0.02 g；巰基乙酸鈉0.5 g；刃天青1.0 mg；瓊脂粉末1.5-2.0 %與蒸餾水1.0 L（pH 7.2）。 ii.程序： 將上述培養基分配於試管中並於121 °C滅菌30 min。冷卻試管並且讓其於傾斜位置凝固。以金屬絲環將培養株編號E8800076a生長畫線於瓊脂斜面，並且於27 °C至29 °C培養直到觀察到良好的生長。將良好生長的培養株以冷藏儲存於4 °C至8 °C。範例 4 ： 培養株 E8800076a 的菌落特徵 以目視描述此培養株菌落的特徵。結果如下：           菌落尺寸       :     2 mm 菌落形狀       :     圓形 質地               :     光滑（整體） 突出狀態       :     具有中央突起 顏色               :     檸檬黃 黏液               :     無產生黏液範例 5 ：震盪燒瓶中培養株 E8800076a 的發酵作用 i.種子培養基的組成物 （Tryptic Soy Broth, Merck, 目錄號61938105001730） 葡萄糖 2.5 g、酪蛋白酵素水解產物17.0 g、木瓜消化大豆粉（papaic digest of soybean meal）3.0 g、氯化鈉5.0 g、二磷酸氫鉀2.5 g、軟水1.0 L，pH 7.1-7.5。 ii.程序： 將上述步驟i中的種子培養基以每瓶20 mL的量分配至250 mL錐形燒瓶 中，並且於121 ˚C下置於壓力鍋20 min。將燒瓶冷卻至室溫，並且以一滿環直接自斜面取下的生長良好之生產菌株（E8800076a）接種至每個燒瓶中。將燒瓶於30 ˚C下在旋轉震盪器以230 rpm至250 rpm培養24-48 h，以提供種子培養株。 iii.生產培養基 [SM12(I)] 的組成物： 葡萄糖 50.0 g、酵母萃取物11.0 g、氯化鈉2.5 g、碳酸鈣5.0 g、蛋白腖4.0 g、牛肉萃取物4.0 g、軟水1.0 L、pH 7.4-7.6。 iv.程序： 將容量1000 mL的錐形燒瓶中的200 mL 生產培養基於121 ˚C下置於壓力鍋20 min。將燒瓶冷卻至室溫並且將範例5 (ii)中所提到之5 % (v/v)的種子培養株接種至每個燒瓶中。將培養株的發酵燒瓶於29 ˚C至30˚C下在旋轉震盪器以200 rpm培養48-72 h 。 v.    使用瓊脂孔擴散法（agar well diffusion assay）對細菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）209P菌株、抗二甲苯青黴素金黃色葡萄球菌（MRSA）菌株、抗萬古黴素腸球菌（VRE）以及綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa ）菌株測試培養液的生物活性，以測定發酵培養液中的變異球菌黴素P1的生產。收穫時間的培養液pH為6.4-7.4的範圍。收穫培養液，並且使用整個培養液於生物活性測試，以測定發酵培養液中化合物變異球菌黴素P1的存在。範例 6 ：震盪發酵燒瓶中之種子培養株的製備 i.培養基的組成物 （Tryptic Soy Broth, Merck, Catalogue No. 61938105001730）：   葡萄糖 2.5 g、酪蛋白酵素水解產物17.0 g、木瓜消化大豆粉（papaic digest of soybean meal）3.0 g、氯化鈉5.0 g、二磷酸氫鉀2.5 g、軟水1.0 L、pH 7.1-7.5。 ii.程序： 將上述步驟i中的培養基以每瓶200 mL的量分配至1000 mL錐形燒瓶 中，並且於121 ˚C下置於壓力鍋20 min。將燒瓶冷卻至室溫，並且以一滿環斜面上的生長良好之生產菌株（E8800076a）接種至每個燒瓶中，並且將燒瓶於29 ˚C 至30 ˚C下在旋轉震盪器以230 rpm至250 rpm震盪22-26 h，以提供種子培養株。範例 7 ：發酵槽中培養株 E8800076a 的培養： i. 生產培養基的組成物： 葡萄糖 50.0 g、酵母萃取物11.0 g、氯化鈉2.5 g、碳酸鈣5.0 g、蛋白腖4.0 g、牛肉萃取物4.0 g、軟水1.0 L、pH 7.4-7.6。ii. 程序： 將12.0 L發酵槽中9.0 L的生產培養基連同作為消泡劑之0.04 % desmophen於121 °C下原位滅菌 30 min。將發酵槽冷卻至溫度29 °C 至30 °C並且以200 mL範例6中的種子培養株種植。iii. 發酵參數： 溫度29 °C至30 °C，攪拌100 rpm，曝氣0.5 vvm，收穫時間 44-50 h。使用瓊脂孔擴散法（agar well diffusion assay）對細菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）209P菌株、抗二甲苯青黴素金黃色葡萄球菌（MRSA）菌株、抗萬古黴素腸球菌（VRE）以及綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa ）菌株測試培養液樣本的生物活性，以測定發酵培養液中的變異球菌黴素P1的生產。收穫時間的培養液pH為6.4-7.4的範圍。收穫培養液，並且使用整個培養液於化合物變異球菌黴素P1的分離與純化。範例 8 ：化合物變異球菌黴素 P1 的分離與純化： 來自範例7中所提到的三個發酵批次之全部的發酵液（27 L）被收獲，並且使用醋酸乙酯經由在一玻璃容器中攪拌以萃取。有機層被分離，並且在低於50 °C真空的狀態下濃縮，以獲得15.3 g的粗製萃取物。 使用120 g Si（Redi-Sep）卡匣作為固定相（stationary phase），以及二氯甲烷：甲醇梯度作為移動相而讓粗製萃取物先經過正相（Si）快速層析法。梯度條件記載於下列表格1。表格 1 ： 正相層析法的梯度條件 將化合物變異球菌黴素P1以4.8 %的甲醇沖提，將系統在此維持梯度，其被保持，直到完成沖提。偵測波長為210 與 254 nm，且流速為60 mL/min。以溶劑系統二氯甲烷：甲醇（90：10）的TLC分析分餾物。在快速層析法後，帶有所需化合物之分餾物的量為 0.6 g，其HPLC純度82 %。 以反相條件的製備型HPLC進行進一步的純化，以C₁₈ 管柱（Technokroma: 50 x 250 mm, 10 微米顆粒尺寸）作為固定相，及移動相(有水：乙腈（伴隨兩者中的0.1%甲酸）梯度)。梯度條件記載於下列表格2。表格 2 ：反相製備型HPLC的梯度條件 以50%乙腈條件下沖提出31 mg 所需化合物(純度98.2 %)。 根據其離子阱質譜（ion trap mass spectrometry）分析中的MS/MS分段圖形（MS/MS fragmentation pattern）認定此化合物為變異球菌黴素P1。進一步地，變異球菌黴素P1的結構係由進行¹ H NMR化學位移與文獻（David Lefranc et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 4198 – 4201）中所報導的變異球菌黴素P1的¹ H NMR數值比較來確認。表格 3 ：DMSO-d6 的¹ H NMR化學位移比較表 * 與溶劑波峰重疊 HRMS（ESI -ve 模式）：1142.2778變異球菌黴素 P1 的生物性測試 體外 試驗 範例 9 ： 經由最小抑制濃度（MIC）測定建立變異球菌黴素P1對困難梭狀芽孢桿菌（由美國菌種保存中心（ATCC），USA獲得）的多種臨床分離株的體外效力。此外，亦於Wilkens-Chalgren瓊脂培養基測試變異球菌黴素P1。此培養基支持大部分厭氧菌的生長。材料與方法 測試化合物 將變異球菌黴素P1儲存於4°C直到進行試驗。使用DMSO作為變異球菌黴素P1貯存溶液（濃度為2560 μg/mL）製備的溶劑。 使用下列標準品： 生物體： 對困難梭狀芽孢桿菌15個臨床菌株測試變異球菌黴素P1。試驗的測試生物體為臨床分離株或由美國菌種保存中心（ATCC，USA）所獲得之參考菌株。本試驗包含的品管生物體為鬆脆桿菌0123（Bacteroides fragilis 0123,B. fragilis ）[ATCC 25285] 以及困難梭狀芽孢桿菌4381（Clostridium difficile 4381（ATCC 700057）。用於厭氧菌的生長與感受性測試的生長與測試培養基為臨床及實驗室標準協會（CLSI）所建議者 [Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria; Approved Standard—Seventh Edition, CLSI document M11-A7, 2007]。將測試生物體維持冷凍於-80 °C。將分離株於補充布魯氏菌瓊脂盤（目錄編號R01255，批號320066, Remel）繼代培養，並且在Bactron II厭氧箱（Sheldon Manufacturing, Inc.）於35 °C至36 °C下培養48 h。培養基 厭氧菌的瓊脂稀釋MIC試驗所採用的參考培養基為布魯氏瓊脂（Becton Dickinson, Sparks, MD；目錄號211086，批號1160559），其以氯化血紅素（Sigma, 批號099K1183） 、維生素K₁ （Sigma，目錄號V3501-1G；批號108K1088）以及5%裂解綿羊血（Cleveland Scientific, 批號130145）補充。此外，使用Wilkins-Chalgren瓊脂（Becton- Dickinson; 目錄號218051, 批號9110652）分析變異球菌黴素P1。最小抑制濃度（ MIC ）試驗程序 使用參考瓊脂稀釋方法分析厭氧菌[Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria; Approved Standard—Seventh Edition, CLSI document M11-A7, 2007]。以手工製備變異球菌黴素P1或標準品的稀釋。以手工製備變異球菌黴素P1補充的瓊脂盤。類似地，以手工製備標準品補充的瓊脂盤。在分析之前將生物體於Bactron II 厭氧箱中生長48 h 。在接種後，將以變異球菌黴素P1補充的瓊脂盤與以標準品補充的瓊脂盤於35 °C的Bactron II厭氧環境（5 % 氫、5 %二氧化碳、90 %氮）下培養48 h。根據CLSI指南[Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria; Approved Standard—Seventh Edition, CLSI document M11-A7, 2007]讀取MIC。結果 將於補充布魯氏菌瓊脂（SBA）培養基的MIC結果總結於表格4。將於Wilkens-Chalgren瓊脂培養基的MIC結果總結於表格5。當於參考SBA培養基中測試時，品管菌株與標準品的MIC數值均在規定的品管範圍之內，從而驗證了此試驗程序，除了以0.03 µg/mL測試的非達黴素或低於較低範圍的一稀釋之外 [Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-second Informational supplement. CLSI document M100-S22]。對於Wilkens-Chalgren瓊脂沒有品管指南，雖然品管菌株與標準品的MIC數值係在為補充布魯氏菌瓊脂建立的範圍之內或剛好超出範圍。 變異球菌黴素表現出對困難梭狀芽孢桿菌所有15個臨床菌株之有效活性，伴隨其MIC範圍0.06 – 2 µg/mL。抑制50 %測試菌株（MIC₅₀ ）的所需濃度為 0.5 µg/mL。抑制90 %測試菌株（MIC₉₀ ）的所需濃度為 1 µg/mL。根據體外活性與MIC範圍來看，變異球菌黴素P1較抗生素萬古黴素並且相比於抗生素硝基甲嘧唑乙醇。變異球菌黴素P1未如窄頻譜抗生素非達黴素一樣有效。 雖然MIC₉₀ 維持於1µg/mL，化合物變異球菌黴素P1在Wilkens-Chalgren培養基中顯得稍微更具活性。結論 化合物變異球菌黴素P1為困難梭狀芽孢桿菌有效的抑制劑，具有優於萬古黴素以及可相比於硝基甲嘧唑乙醇的活性。表格 4 ：變異球菌黴素P1與標準品對使用補充布魯氏菌瓊脂培養基（SBA）的厭氧菌之MIC（µg/mL） ¹ ：MIC數值的範圍；² ：抑制50%測試菌株所需的濃度；³ ：抑制90%測試菌株所需的濃度；⁴ ：美國菌種保存中心；⁵ ( )：臨床及實驗室標準協會品管菌株的可接受限制； NA：不適用。表格 5 ：變異球菌黴素P1與標準品對使用Wilkens-Chalgren瓊脂培養基的厭氧菌之MIC（µg/mL） ¹ ：MIC數值的範圍；² ：抑制50%測試菌株所需的濃度；³ ：抑制90%測試菌株所需的濃度；⁴ ：美國菌種保存中心；⁵ ( )：臨床及實驗室標準協會品管菌株的可接受限制； NA：不適用。

無

無

無

Claims (8)

1. 一種困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染的該治療或預防的用途的化合物，其中該化合物為具有下列結構的變異球菌黴素P1；或其一互變異構物，或其一其藥學上可接受之鹽類。
2. 如申請專利範圍第1項的該用途的化合物，其中該所述化合物係以足以達成困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的預防的一量與一致腹瀉抗生素同時使用。
3. 如申請專利範圍第1項或申請專利範圍第2項的該用途的化合物，其中該困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染係選自抗生素相關性腹瀉、偽膜性結腸炎、腹瀉或結腸炎。
4. 一種用於困難梭狀芽孢桿菌相關感染或疾病的該治療或預防之用途的藥學組成物，其包含一治療有效量之該化合物變異球菌黴素P1，或其一互變異構物或其一藥學上可接受之鹽類；及一藥學上可接受之載體，將該藥學組成物。
5. 一治療有效量之該化合物變異球菌黴素P1的用途，該化合物變異球菌黴素P1具有下列結構之，或其一互變異構物，或其一藥學上可接受之鹽類；供用於困難梭狀芽孢桿菌相關疾病與感染的該治療或預防之用途的一藥劑之該製造。
6. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該所述化合物係以足以達成困難梭狀芽孢桿菌（C. difficile ）相關疾病或感染的預防的一量與一致腹瀉抗生素同時使用。
7. 如申請專利範圍第5項或申請專利範圍第6項所述之用途，其中該困難梭狀芽孢桿菌相關疾病或感染係選自抗生素相關性腹瀉、偽膜性結腸炎、腹瀉或結腸炎。
8. 如申請專利範圍第5項或申請專利範圍第6項所述之用途，其中將該化合物變異球菌黴素P1，或其一互變異構物，或其一藥學上可接受之鹽類單獨地或伴隨一或更多進一步的治療活性劑使用。