TWI255185B - Novel compounds - Google Patents

Description

I255185 ⑴ 玖、發明說萌 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、内容、實施方式及圖式簡单篆 I術領域 本發明係有關新穎化合物、其製法、含有該等化合物之 醫藥組成物及其用於治療之用途。 志_前技術 化學激肽於多種疾病及病症包括氣喘及過敏病以及自 體免疫病理例如類風濕性關節炎以及動脈粥狀硬化症之 免疫及發炎反應上扮演重要角色。此等小型分泌分子具冑 8 - 14 kDa蛋白質不斷在成長中之超族，該超族係以保有四 個半胱胺酸部分為特徵。化學激肽亞族可再劃分為兩大族 各具，有特徵性結構部分，亦即Cys-X-Cys(C-X-c)及 Cys-Cys(C-C)家族。可基於插入半胱胺酸殘基之NH-近端 對間之單一胺基酸以及基於序列之類似性加以區別。 C-X-C化學激肽包括數種親核基團之強力化學誘引齊j 以及活化劑，例如介白質-8(IL-8)以及親核基團活化胜肽 2(NAP-2)。 C-C化學激肽包括單核細胞以及淋巴細胞之強力化學誘 引劑，但非親核基團之強力化學誘引劑，例如人類單核細 胞趨化性蛋白質U(MCP-1 、 MCP-2及MCP-3)、 RANT ES(對活化之調節，正常T細胞之表現及分泌）、趨伊 紅素（eotaxin)以及巨噬細胞發炎蛋白質Ια及10(MIP-1 α 及 MIP-1 /3 )。 研究顯示化學激肽之作用係經由G蛋白偶合受體亞族 媒介，該等受體包括定名為CCR1、CCR2、CCR2A、 1255185

(2) CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、 CCR9、CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3 及 CXCR4 之受 體。此等受體代表藥物發展的良好標的，可調整此等受體 之作用劑將可用於治療例如前述病症及疾病。 國際專利申請案第PCT/SE01/0 1377號說明具有ΜΙΡ-1β 化學激肽受體活性之下式化合物

其中 m為 0、1、2 或 3 ; 各個R1分別表示鹵原子、氰基、硝基、羧基、羥基、C3-C6 環烷基、C「C6烷氧基、烷氧羰基、Ci-Cs鹵烷基、 C「C6鹵烷氧基、-NR9R10、c3-c6環烷基胺基、C/C6烷硫 基、Κ6烷基羰基、Ci-Cs烷基羰基胺基、磺醯胺基、CVC6 烷基磺醯基、-C(0)NRuR12、-NR13C(0)-(NH)PR14、苯基 或烷基其視需要經以羧基或Cl_c6烷氧羰基取代； p為0或1 ; Z1表示鍵結或（CH2)q基團，此處q為1或2; Z2表示鍵結或CH2基團，但Z1及Z2非同時表示鍵結； Q表示氧或硫原子或CH2或NH基團； R2表示

1255185 (3)

(R 16、 基團； n為Ο、1或2 ; 各個R3分別表示Ci-Cs烷基、CrCs烷氧羰基、-CH2OH 或叛基； 一 R4、R5、R6及R7各自分別表示氫原子或Ci-Cs烧基，或 R4、R5、R6及R7共同表示伸烷基鏈其聯結兩個其附 接至碳原子而形成一個4至7員飽和碳環，或R5、R6及R7 表示氫原子以及R4及R8與其附接之碳原子共同形成一個5 或6員飽和碳環； R8表示氫原子、烷基或聯結至R4(定義如前）； R9及R1G各自分別表示氫原子烷基，或R9及R1G 與其附接之氮原子共同形成一個4至7員飽和雜環； R11及R12各自分別表示氫原子或一個視需要經以 烷氧羰基取代之Ci-Cs烷基； R13表示氫原子或烷基； R14表示氫原子或視需要經以羧基、烷氧基或C「C6 烷氧羰基取代之Ci-Cs烷基。 R15表示羧基、（：！-06烷氧基、CrG烷基羰基、C「C6烷 氧羰基氧羰基Ci-Q烷基或-NR17R18、-NHS02CH3、 -c(o)nr17r18、-nhc(o)nr17r18、-oc(o)nr17r18、-och2c(o)nr17r18

1255185 、-NHC(0)0R19 或-NHC(0)R20 基團； t為 Ο、1、2或 3 ; 各個R16分別表示鹵原子、氰基、硝基、羧基、羥基、 C3-C6環烧基、Ci-C6烧氧基、Ci-C6烧氧讓基、Ci_C6鹵烧 基、Κ6鹵烷氧基、-NR21R22、C3-C6環烷基胺基、Ci-Cs 烷硫基'Ci-Cs烷基羰基、烷基羰基胺基、磺醯胺基、

Ci-Cs烷基磺醯基、-c(o)nr23r24、-nr25c(o)(nh)vr26、苯基、 或視需要經以羧基或Ci-Cs烷氧羰基取代tCi-Cs烷基； R17、R18各自分別表示氫原子或視需要經以羧基或CrCs 烷氧羰基取代之Ci-Cs烷基，或R17及R18與其附接之氮原 子共同形成為4至7員飽和雜環； R19表示氫原子或視需要經以羧基或Ci-Cs烷氧羰基取 代之C 1 - C 6烧基， R2G表示Ci-Cs烷基、c2-c6烯基、c3-c6環烷基、金剛烷 基、c5-c6環烯基、苯基或包含至少一個選自氮、氧及硫 之雜原子之飽和或未飽和5至1 0員雜環族環系，其各自可 視需要經以一個或多個分別選自硝基、羥基、酮基、鹵原 子、羧基、CrCs烷基、CVC6烷氧基、C「C6烷硫基、CVC6 烷基羰基、CrL烷氧羰基、苯基及-NHC(0)-R27之取代基 取代； R21及R22各自分別表示氫原子或C^-Cs烷基，或R21及R22 與其附接之氮原子共同形成為一個4至7員飽和雜環； R23及R24各自分別表示氫原子或視需要經以（^-^烷氧 罗炭基取代之Ci_C6烧基，

F 1255185 v為0或1 ; R25表示氫原子或CVC6烷基； R26表示氫原子或視需要經以叛基、Ci_C6烧氧基或Ci-C6 烷氧羰基取代iCi-Cs烷基；以及 R27表示烷基、胺基或苯基； 及其醫藥上可接受之鹽及溶劑媒合物。 國際專利申請案第PCT/SE01/01377號之化合物分解之代 謝路徑研究，顯示形成數種不同代謝產物。其中一種代謝 路徑中，化合物（藥物）與葡萄糖酸反應形成葡萄糖甞。葡 萄糖酸化可提高藥物之水中溶解度，因而有助於藥物經由 腎臟排泄。較佳主要代謝產物經過葡萄糖酸化。 今日出乎意外地發現屬於國際專利申請案第 PCT/SE01/01377號之一般教示範圍之某些化合物於活體内 具有優異穩定性，結果導致其經由葡萄糖酸化路徑之代謝 增加。 發明内容 因此根據本發明提供一種下式化合物 (R1)

〇H ① 其中 -10 - 1255185

(6) m為Ο、1或2 ; 各個R1分別表示鹵原子或氰基；以及 R2表示氫原子或曱基； 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物。 本發明化合物也可作為鉀通道阻斷劑，於hERG反應中 呈陽性反應；須注意此種活性於活體内可能造成ECG(心 電圖）變化。 不欲受任何特定理論所限，相信本發明化合物之有利性 質至少部分係由於式（I)化合物右側苯環存在有羥基取代 基以及羥基取代基之附接點之故。 本發明之具體實施例中，m為1，R1表示鹵原子例如氟、 氣、溴或碘原子，特別氯原子例如相對於C H2鍵聯基結合 碳原子位於苯環4位置。 本發明之另一具體實施例中，R2表示曱基。 本發明之又一具體實施例中，化合物為 4-({(2S)-3-[2-(乙酿胺基）-5-經基苯氧基]-2 -經基-2-曱基 丙基}銨基）-1-(4-氯芊基）哌啶或其醫藥上可接受之鹽或 溶劑媒合物。 此外，本發明提供一種製備如上定義之式（I)化合物或其 醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物之方法，該方法包含 (a)下式化合物 (R1)

nh2 -11 - (II) 1255185 ⑺

其中m及R1定義如式（I)， 與下式化合物反應

其中R3表示氫原子或適當保護基以及R2定義如式（I);或 (b )下式化合物

其中m、R1及R2定義如式（I)， 與下式化合物反應

其中R4表示氫原子或適當保護基；或 (c)下式化合物 -12 - 1255185 ⑻

〇(VI) 其中m及R1定義如式（I)， 與下式化合物反應

其中R5表示氫原子或適當保護基以及R2定義如式（I); 以及視情況需要，於（a)、（b)或（c)之後，形成式（I)化合 物之醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物。 本發明方法可方便地於溶劑例如有機溶劑如醇（如曱醇 或乙醇）烴（如田苯）或乙腈，於例如1 5 °C或以上之溫度例 如2 0至1 2 0 °C範圍之溫度進行。 式（II)、（III)、（IV)、（V)、（VI)及（VII)化合物為市面上 可得且為參考文獻眾所周知或容易使用已知技術製備。 熟諳技藝人士須瞭解於本發明方法中，起始反應劑或中 間化合物之某些官能基例如羥基或胺基須藉保護基保 護。如此式（I)化合物之製備於適當階段涉及一或多個保 護基之去除。 -13 - 1255185

(9) &能基之保護以及脫去保護說明於「有機化學保護 」 JW.p McOmie編輯，普南（Plenum)出版社（1973年） 以及「+ 有機合成保護基」，第2版，T.W. Greene及P.G.M. W U t S， 成利科技公司（1 9 9 1年）。 上式（1)化合物可轉成其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合 ^ 較佳為酸加成鹽例如氫氯酸鹽、三氟乙酸鹽（例如二- 二 备 一氣乙酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、反丁烯二酸鹽、 順丁烯二酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、曱烷磺酸 鹽或對甲笨磺酸鹽。 式（I)化合物可能以立體異構形式存在。須瞭解本發明涵 盖全部式（1)化合物之幾何異構物及光學異構物（包括阿 托異構物（atropisomers))及其混合物包括外消旋混合物 之用途。互變異構物及其混合物之用途也構成本發明之一 特色。較佳光學異構物為（S)·對映異構物。 式（I)化合物具有作為藥物之活性，特別作為化學激肽受 體（特別ΜIP -1 α化學激肽受體）活性調節劑，可用於治療 自體免疫病、發炎、增生及過度增生疾病以及免癌媒介病 包括移植器官或組織排斥以及後天免疫缺乏症候群（愛滋 病）。 此等疾病例如為： (1)(呼吸道）氣道疾病包括慢性阻塞性肺疾（C 〇 p D)例如 不可逆性C Ο P D ;氣喘例如支氣管性、過敏性、内因性、 外因性以及塵蟎性氣喘，特別慢性或習慣性氣喘（例如晚 期氣喘以及氣道高度反應性）；支氣管炎；急性、過敏性、 -14- 1255185

(10) 萎縮性鼻炎及慢性鼻炎包括乾酪樣鼻炎、肥厚性鼻炎、化 濃性鼻炎、乾性鼻炎及藥物性鼻炎；膜性鼻炎包括格鹵布 性鼻炎、纖維性鼻炎以及假膜性鼻炎以及腺病性鼻炎；季 節性鼻炎包括神經性鼻炎（乾草熱）及血管運動性鼻炎；結 節病、農夫肺及相關疾病、纖維狀肺以及特發性間質性肺 炎； (2)(骨骼與關節）類風濕性關節炎、血清陰性脊椎關節病 (包括強直性脊椎炎、乾癬性關節炎以及賴特氏病）、艮歇 特氏病、修格連氏病以及系統性硬化； (3 )(皮膚）乾癬、異位性皮炎、接觸性皮炎及其它濕疹性 皮炎、脂漏性皮炎、扁平苔癬、天疱瘡、大皰性天疱瘡、 大皰性表皮鬆解、蓴麻療、皮血管炎、金管炎、紅斑、表 皮嗜伊紅性血球增多、葡萄膜炎、簇狀禿髮以及春季型結 膜炎； (4) (胃腸道）腹腔病、直腸炎、嗜伊紅血球性胃腸炎、肥 大細胞病、克隆氏病、潰癌性結腸炎、食物誘發之過敏而 對腸道遠端造成影響例如偏頭痛、鼻炎及濕疹； (5) (其它組織及系統疾病）多發性硬化、動脈粥狀硬化、 後天免疫缺乏症候群（愛滋病）、紅斑性狼瘡、系統性狼 瘡、紅斑、橋本式曱狀腺炎、重症肌無力、第I型糖尿病、 腎病症候群、嗜伊紅血球性筋膜炎、IgE過高症候群、結 節性麻風、希扎麗（sezairy)症候群以及特發性血小板缺乏 性紫瘢； (6)(同種異體移植物排斥）例如於腎、心、肝、肺、骨髓、 1255185 (ii)

皮膚及角膜移植後之急性及慢性同種異體移植物排斥；以 及慢性移植物對宿主病； (7) 癌症特別非小細胞肺癌（NSCLC)以及鱗狀肉瘤； (8) 隨著化學激肽濃度的升高而血管新生之疾病（例如 NSCLC);以及 (9) 囊性纖維變性、中風、心、腦、末梢四肢之再灌流 傷害以及敗血病。 如此，本發明提供如前文定義之式（1)化合物或其醫氟上 可接X之鹽或溶劑媒合物用於治療。 又另一特色，本發明提供如前文定義之式（1)化合物或其 醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物用於製造治療用藥。 於本說明書中，除非特別有相反指示，否則「治療」一 詞也包括「預防」。如此「治療」及「治療性」因作對應 解譯。 本發明也提供一種於患有或有發炎病風險病人治療發 炎疾病之方法，包含對病人投予治療有效量之如前文定義 之式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物。 本發月也提供一種於患有或有呼吸道疾病風險病人治 療：吸道疾病之方法，包含對病人投予治療有纟量之如前 文定義之式⑴化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合 物。 供刚述治療用，招·兹杰 sn. ί又樂劑置當然將隨使用之化合物、杈樂 才旲式、期望之治痒ϋ a ^ m 摩M及適應症改變。式（I)化合物每曰劑 量係於0.001亳克/千古r 克至30亳克/千克之範圍。 -16 - 1255185 ⑼ 寧酬續買: 式（I)化合物及其醫藥上可接受之鹽及溶劑媒合物可就 此使用，但通常係呈醫藥組成物形式投藥，該醫藥組成物 中，式（I)化合物/鹽/溶劑媒合物（活性成分）係結合醫藥上 可接受之輔劑、稀釋劑或載劑。依據投藥模式而定，醫藥 組成物較佳包含〇.〇5至99 %w(百分重量比），更佳0.05至 80 %w，又更佳0.10至70 %w以及又更佳0.10至50 % w活性 成分，全部重量百分比皆係以總組成物為基準。 本發明也提供一種醫藥組成物，包含如前文定義之式_(1) 化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物組合醫藥上 可接受之輔劑、稀釋劑或載劑。 本發明進一步提供一種製備本發明之醫藥組成物之方 法，包含混合如前文定義之式（I)化合物或其醫藥上可接 受之鹽或溶劑媒合物與醫藥上可接受之輔劑、稀釋劑或載 劑。 醫藥組成物可呈溶液劑、懸浮液劑、七氟烷噴霧劑以及 乾粉調配物等劑型局部投藥（例如投予肺臟及/或呼吸道 或皮f );或系統性投藥，例如以錠劑、膠囊劑、糖漿劑-、 散劑或粒劑劑型經口投藥，或以溶液劑或懸浮液劑劑型經 腸道外投藥，或經皮下投藥或以栓劑劑型經直腸投藥或經 皮投藥。 現在進一步參照後述實施例舉例說明本發明。 實施例1 4-({(2S)-3-[2-(乙醯胺基）-5-羥基苯氧基]-2-羥基-2-甲 基丙基}銨基）-1-(4-氣芊基）二（2,2,2-三氟乙酸）哌啶鑌 1255185 (13) 發輯諕礪磺1

〇 N-(4 -曱氧基-2-{ [(2 S )-2 -曱基環氧乙烷基]甲氧基}苯 基）乙醯胺

N-(2 -羥基-4-曱氧基苯基）乙醯胺（1.04克，5.74毫莫 耳），（25)-2-[(3-硝基苯氧基）甲基]環氧乙烷（2.04克，7.46 毫莫耳）及碳酸鉋（2.80克，8.61毫莫耳）於無水二甲基甲醯 胺（1 2.5毫升）之懸浮液於室溫攪拌5小時，然後分溶於乙 酸乙酯及水。萃取後，合併有機相經脫水及真空濃縮。殘 餘物於矽膠以庚烷：乙酸乙酯1 : 1洗提，藉急速層析術純 化 獲得小標題化合物（1. 19克，82.6%產率）。 APCI-MS: m/z 252(MH+). lH-NMR(CDCl3, 400 MHz): 5 8.18(d, 1H, J=8.8 Hz), 7.72(bs? 1H), 6.52(dd，1H，J=2.6及8.8 Hz)，6.50(dd，1H，J=2.6及6·0 Hz)，4」0(d，1H， J二qll.O Hz)，3.96(d，1H，J二 11.0 Hz)，3.78(s，3H)，2.92(d，1H，J=4.6 Hz)， 2.78(d，1H，J=4.6 Hz)，2.19(s，3H)，1.48(s，3H). ii) 4-({(2S)-3-[2-(乙醯胺基）-5 -曱氧基苯氧基]-2-羥基 -2-甲基丙基}銨基）-1-(4-氯芊基）二（2,2,2-三氟乙酸）哌啶 -18-

1255185 (14)

N-(4 -曱氧基-2-{[(2S)-2-甲基環氧乙烧基]甲氧基}苯基） 乙酸胺（182毫克，0.72毫莫耳）及1_(4_氯芊基）-4_17底咬胺 (163毫克，0.72毫莫耳）於乙醇（7.5毫升）之混合物於80 °C 攪拌8小時，然後於室溫攪拌隔夜。反應混合物經濃縮及 藉反相Η P L C純化，獲得小標題化合物，；東乾後主一·-二氟 乙酸鹽（377毫克，74.4%產率）。 APCI-MS:m/z 476(MH+)，自由態鹼。 lU^MR(CO3OOy 400 MHz): 5 7.49(m? 4H)? 7.26(d, lH, J=8.6 Hz), 6.63(d，1H，J=2.4 Hz)，6.57(dd，1H，J=2.4及8.6 Hz)，4.3(s，2H)，3.95(q， 2H，J=9.6 Hz)，3.79(s，3H)，3.59(d，2H，J=12.8 Hz)，3.44(m，1H)，3.10(m， 3H)，2.40(d，2H，J=13.4 Hz)，2.12(s，3H)，2.04(m，2H)，1.40(s，3H). iii) 4-({(2S)-3-[2-(乙醯胺基）-5 -羥基苯氧基]-2 -羥基 -2-甲基丙基}銨基）-1-(4-氯芊基）二（2,2,2-三氟乙酸）哌啶 鑌 4-({(2S)-3-[2-(乙醯胺基）-5-甲氧基苯氧基]-2 -羥基-2-甲基丙基}銨基）-1-(4-氣芊基）二（2,2,2-三氟乙酸）哌啶鑌 (I85毫克，〇·26毫莫耳）分溶於乙酸乙酯及1M水性氫氡化 鈉。水相以乙酸乙酯萃取，合併有機相經脫水及濃縮。冷 ((TC)殘餘自由態鹼於無水二氯甲烧（15亳升）之經授拌溶 液使用1 Μ三溴化硼於二氣甲烷（1 · 5 8毫莫耳）處理。讓混入 物達到室溫隔夜。加入甲醇獲得澄清溶液，混合物經濃 縮。粗產物藉HP LC纯化，凍乾後獲得標題化合物（86毫 克，48%)。 1255185 ⑼ APCI-MS: m/z 462(MH+)，自由態鹼。 ^-NMRCCDsOD, 400 MHz): 5 7.49(m? 4H)? 7.09(d? 1H? J=8.4 Hz), 6.51(d，1H，J=2.4 Hz)，6.41(dd，1H，J=2.4及8.4 Hz)，4.30(s，2H)，3.90(dd， 2H，J=9.6 及 13.4 Hz)，3.37-3.64(m，4H)，3.10(m，3H)，2.39(bd，2H， J=13.1 H)，2.11(s，3H)，2.03(m, 2H)，1.39(s，3H). THP-1趨化性檢定分析 引言 本檢定分析測定MIP-1 α化學激肽於人類單核細胞系 ΤΗΡ-1提引出之趨化反應。實施例化合物係以其抑制對標 準濃度ΜΙΡ-1 α化學激肽之趨化反應之能力加以評比。 方泽 Τ Η Ρ · 1細胞培養 細胞於3 7 °C由冷凍之整分中快速解凍，再懸浮於2 5厘米 燒瓶，燒瓶内含有5毫升RPMI-1640培養基，補充固它美斯 (Glutamax)及1 0%加熱去活化之胎牛血清而不含抗生素 (RPMI+10%HIFCS)。於第三日，拋棄培養基且更換新鮮培養 基。 THP-1細胞例行於RPMI-1640培養基培養，該培養基補充 1 0 %經加熱去活化之胎牛血清及固它美斯但不含抗生 素。細胞之最理想生長要求每3天繼代培養一次，以及最 低次培養密度為4 X 1 0D細胞/毫升。 趨化檢定分析 由燒瓶内取出細胞，於RPMI+10%HIFCS +固它美斯藉離心 洗滌。然後細胞以2x 1 07細胞/毫升再懸浮於新鮮培養基 -20- 1255185

(16) (ίΙΡΜΙ·Μ0%ΗΙΡΟ5+固它美斯），於培養基内加入凱欣 (calcein)-AM(5微升備用溶液至1亳升獲得終濃度5χ10-6 Μ。溫和混和後細胞於3 7 於二氧化碳孵育器内培養3 〇 为鐘。然後細胞以培養基稀釋至50亳升，及於4〇〇Xg藉離 心洗滌兩次。然後經過標記之細胞以1χ1〇7細胞/毫升濃度 再fe浮’且於3 7 C於濕化二氧化唆醉育器内與等容積 ΜΙΡ-1 α拮抗劑（10·10Μ至ΙΟ·%終濃度）共同培養3〇分鐘。 使用神經探針（Neuroprobe) 9 6孔趨化板採用8微米濾紙（型 錄編號1 0 1 - 8)進行趨化試驗。3 0微升補充各種不同濃度括 抗劑或媒劑之化學誘引劑加至板之下孔，重複三次。然後 濾紙小心置於頂上，然後預先與對應濃度拮抗劑或媒劑共 同培養之細胞2 5微升添加至濾纸表面。然後板於濕化二氧 化碳孵育器内於3 7 t培養2小時。然後留在表面之細胞藉 吸附去除，全板於2000 rpm離心10分鐘。然後去除濾紙， 利用與凱欣- AM結合之細胞產生的螢光來定量已經遷移 至下孔之細胞。然後細胞遷移係以扣除反應劑空白之後之 螢光單位表示，數值係經由將該螢光值與已知數目加標記 細胞之螢光值比較而被標準化成為遷移百分比。枯抗劑效 果係以遷移細胞數目比較媒劑值之抑制百分比計算。 h£RG編碼钾诵道抑制試驗 本檢定分析決定試驗化合物抑制尾電流流經人類醚-阿 哥哥相關基因（hERG)編碼鉀通道之能力。 可表現hERG編碼通道之人胚胎腎（ΗΕκ)細胞於鷹氏最 低必需培養基（EMEM ;西格瑪爻力胥（Sigma-Aldrich)型錄編 1255185

(17) 號M227 9)生長，培養基補充10%胎牛血清（拉伯狄克 (Labtech)國際公司；產品編號4-101-500)，mi不含 血清補充物（卵技術公司；產品編號70916)以及〇4毫克/ 毫升精尼堤辛（Geneticin) G418(西格瑪亞力胥公司；型錄編 號G7 0 3 4)。實驗前一或二日，使用標準組織培養方法， 使用亞秋得斯（Accutase)(TCS生物公司）將細胞由組織培養 瓶中卸下。然後置於放置於1 2孔板各孔内之蓋破片上，且 以2毫升生長培養基覆蓋。 對各個記錄後之細胞，含細胞之蓋玻片置於波派斯 (Perspex)隔間底部，波派斯隔間含有浴溶液（泉見下文） 且處於室溫（約20 °C )。波派斯隔間固定於反相相對比顯微 鏡平台。恰在蓋玻片置於隔間後，將浴溶液由重力饋料之 貯器以每分鐘約2毫升速率灌注入隔間内經歷2分鐘時 間。隨後停止灌注。 97微吸量官拉製為（蘇特（Sutter)儀器公司）由硼 :s欠孤破螭管（GC12〇F，哈佛儀器公司）製造之插線吸量 官内部填裝吸量管溶液(參見後文）。吸量管經由銀/氣化 银線接線至插線杏於士 子深灭敦大為（FT穌沛奇（Ax〇patch) 2〇〇B，艾克 員（X〇I1)儀為公司）之頭平台。頭平台之地線接到地電 極也電極係由銀/氣化銀線埋置於含〇 8 5 %氯化鈉組成之 3 %瓊脂組成。 /、’田胞你从插線夾技術記錄全細胞組態。「初步試驗階段」 ；_亳伏特（由放大器設定）之維持電壓進行且對串聯 ^ 電合控制做適當調整；於初步試驗階段後使用電氣 -22- 1255185 (18)

生理軟體（Clampex，艾克頌儀器公司）設定維持電壓（-80 毫伏特）且傳輸電壓計晝。此種傳輸計晝每1 5秒施加一次 且包含1秒步進至+4 0毫伏特，接著為1秒步進至-50毫伏特 組成。對各個施加電壓計畫之電流反應藉放大器於1千赫 茲經過低通濾波。然後經由將來自放大器之類比信號使用 類比/數位轉換器數位化之後，於線上獲得濾波信號。然 後數位化信號捕捉於執行Clamp ex軟體（艾克頌儀器公司） 之電腦。於維持電壓以及步進至+40毫伏特，於1千赫兹 抽樣電流。然後對其餘電壓計晝設定抽樣率為5千赫茲。

浴溶液及吸量管溶液之組成、pH、及滲透度列表如後。 鹽 吸量管溶液（毫伏特） 浴溶液（毫伏特） NaCl 讎 137 KC1 130 4 MgCl2 1 1 CaCl2 1.8 HEPES 10 10 葡萄糖 10 Na2ATP 5 一 EGTA 5 參數 吸量管 浴 pH 7.18-7.22 7.40 pH調整使用 1M KOH 1M NaOH 滲透度（毫滲透度） 275-285 285-295 -23 - 1255185 (19) 由+40毫伏特步進至-50毫伏特hERG編碼卸通道尾電流 振幅係藉Clampex軟體（艾克頌儀器公司）於線上記錄。尾 電流振幅穩定後，含試驗物質媒劑之浴溶液施用於細胞。 若媒劑之施用對尾電流振幅未造成顯著影響，則製作對化 合物之累進濃度效應曲線。 各試驗化合物濃度效應係以於指定濃度之試驗化合物 存在下尾電流振幅占於媒劑存在下尾電流振幅之百分比 定量。 試驗化合物強度（IC 5G)之測定方式係使用標準資料匹配 套裝軟體將組成濃度-效應曲線之抑制百分比數值匹配入 四參數希爾方程式測定。若於最高試驗濃度所見抑制程度 未超過5 0%，則未產生強度值，則引述於該濃度之抑制百 分比值。 下表顯示前述實施例1化合物與三種比較化合物A、B及 C於hERG編碼鉀通道抑制試驗進行試驗所得結果：

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-25 -

Claims (1)

1. 吃厂年/月>4日修(更)正本j |松5每取 L—f 號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(95年1月） 拾、申請專利範圍 1 . 一種下式化合物，

   m為0、1或2 ; 各個R1分別表示鹵原子或氰基；以及 R2表示氫原子或甲基； 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物。 2 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中m為1以及R1表示 鹵原子。 3 ·如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中m為1以及R1 表示氯原子。 4 ·如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R2表示甲基。 5 .如申請專利範圍第1項之化合物，該化合物為： 4-({(2S)-3-[2-(乙醯胺基）-5-羥基苯氧基]-2-羥基-2· 甲基丙基}敍基）-1-(4 -氣卞基）旅17定或其醫樂上可接受 之鹽或溶劑媒合物。 6 .如申請專利範圍第5項之化合物，其中該醫藥上可接受 之鹽為一種選自氫氯酸鹽、三氟乙酸鹽、氫溴酸鹽、磷 酸鹽、乙酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、酒石酸 82307-950126.doc 1255185

   酸鹽、乙酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、酒石酸 鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、曱烷磺酸鹽及對曱苯磺酸鹽之 7 .如申請專利範圍第5或6項之化合物，其中該醫藥上可接 受之鹽為一種二-三氟乙酸鹽。 8.—種製備如申請專利範圍第1項定義之式（I)化合物或其 醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物之方法，該方法包含 (a)使下式化合物

   其中m及R定義如式（I)， 與下式化合物反應

   其中R3表示氫原子或適當保護基，及R2定義如式（I); 或 (b)下式化合物

   (IV) 82307-950126.doc -2- 1255185

   其中m、R1及R2定義如式（I)， 與下式化合物反應

   其中R4表示氫原子或適當保護基；或 (c)使下式化合物

   〇(VI) 其中m及R1定義如式（I)， 與下式化合物反應 〇

   (VII) 其中R5表示氫原子或適當保護基以及R2定義如式（I); 以及視情況需要，於〇)、（ b)或（c)之後，形成式（I)化 合物之醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物。 9 . 一種用以治療其中調理化學激肽受體活性有利之人類 82307-950126.doc 1255185

   疾病或症狀之醫藥組成物，其包含一種如申請專利範圍 第1至7項中任一項之式（I)化合物或其醫藥上可接受之 鹽或溶劑媒合物組合醫藥上可接受之輔劑、稀釋劑或載 劑。 ία—種製備如申請專利範圍第9項之醫藥組成物之方法， 包含混合如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化 合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物與醫藥上可 接受之輔劑、稀釋劑或載劑。 11. 如申請專利範圍第1、2、5及6項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物，其係用以治療其 中調理化學激肽受體活性有利之人類疾病或症狀。 12. —種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物於製造用以治療 其中調理化學激肽受體活性有利之人類疾病或症狀之 藥物之用途。 13. —種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物於製造類風濕性 關節炎治療用藥之用途。 14. 一種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物於製造慢性阻塞 性肺疾治療用藥之用途。 15. —種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物於製造氣喘治療 用藥之用途。 82307-950126.doc 1255185

   16. —種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物於製造多發性硬 化治療用藥之用途。 17. —種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物用於製造用以治 療患有或有發炎疾病可能的病人之發炎疾病之醫藥之 用途。 18. —種如申請專利範圍第1至7項中任一項之式（I)化合物 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑媒合物用於製造用以治 療患有或有呼吸道疾病可能的病人之呼吸道疾病之醫 藥之用途。 82307-950126.doc