ES2261773T3

ES2261773T3 - Derivados de piperidina como bloqueantes del canal de potasio.

Info

Publication number: ES2261773T3
Application number: ES02793633T
Authority: ES
Inventors: Tomas Eriksson; Ghazi Noori
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2001-12-14
Filing date: 2002-12-11
Publication date: 2006-11-16
Anticipated expiration: 2022-12-11
Also published as: CY1106132T1; TWI255185B; PT1499590E; MY128924A; AU2002359122A1; ATE325095T1; TW200409631A; EP1499590B8; DE60211223T2; CA2487365C; CA2487365A1; EP1499590B1; SE0104251D0; HK1071134A1; EP1499590A1; DE60211223D1; WO2003051839A1; DK1499590T3

Abstract

Un compuesto de fórmula en la que m es 0, 1 ó 2; cada R1 representa independientemente halógeno o ciano; y R2 representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Derivados de piperidina como bloqueadores del canal de potasio.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos, a procedimientos para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en terapia.

Las quimioquinas desempeñan un papel importante en respuestas inmunes e inflamatorias en diversas enfermedades y trastornos, que incluyen asma y enfermedades alérgicas, así como patologías autoinmunes tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis. Estas pequeñas moléculas segregadas son una superfamilia creciente de proteínas de 8-14 kDa caracterizadas por un motivo conservado de cuatro cisteínas. La superfamilia de quimioquinas puede dividirse en dos grupos principales que exhiben motivos estructurales característicos, las familias Cys-X-Cys (C-X-C) y Cys-Cys (C-C). Éstas se diferencian sobre la base de una inserción de un solo aminoácido entre el par de restos de cisteína proximales a NH y la semejanza de secuencias.

Las quimioquinas C-X-C incluyen varios quimioatrayentes y activadores potentes de los neutrófilos tales como interleuquina-8 (IL-8) y el péptido 2 activador de los neutrófilos (NAP-2).

Las quimioquinas C-C incluyen potentes quimioatrayentes de monocitos y linfocitos, pero no de los neutrófilos, tales como las proteínas quimiotácticas de los monocitos humanos 1-3 (MCP-1, MCP-2 y MCP-3), RANTES (Reguladas por Activación, Expresadas y Segregadas por las Células T Normales), eotaxina y las proteínas inflamatorias de los macrófagos 1\alpha y 1\beta (MIP-1\alpha y MIP-1\beta).

Estudios realizados han demostrado que las acciones de las quimioquinas están mediadas por subfamilias de receptores acoplados a la proteína G, entre los cuales se encuentran los receptores designados CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CXCR1, CXCR2, CXCR3 y CXCR4. Estos receptores representan dianas satisfactorias para desarrollo de fármacos, dado que los agentes que modulan estos receptores podrían ser útiles en el tratamiento de trastornos y enfermedades tales como las arriba mencionadas.

La Solicitud de Patente Internacional nº PCT/SE01/01377 describe compuestos que tienen actividad receptora de quimioquina MIP-1\alpha, que tienen la fórmula

1

en la que:

m es 0, 1, 2 ó 3;

cada R^{1} representa independientemente halógeno, ciano, nitro, carboxilo, hidroxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxi C_{1}-C_{6}, -NR^{9}R^{10}, cicloalquilamino C_{3}-C_{6}, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilcarbonilo C_{1}-C_{6}, alquilcarbonilamino C_{1}-C_{6}, sulfonamido, alquilsulfonilo C_{1}-C_{6}, -(O)NR^{11}R^{12}, -NR^{13}C(O)-(NH)_{p}
R^{14}, fenilo, o alquilo C_{1}-C_{6} sustituido opcionalmente con carboxilo o alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6};

p es 0 ó 1;

Z^{1} representa un enlace o un grupo (CH_{2})_{q} en el que q es 1 ó 2;

Z^{2} representa un enlace o un grupo CH_{2}, con la condición de que Z^{1} y Z^{2} no representan ambos simultáneamente un enlace;

Q representa un átomo de oxígeno o azufre o un grupo CH_{2} o NH;

R^{2} representa un grupo

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n es 0, 1 ó 2;

cada R^{3} representa independientemente un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}, -CH_{2}OH o carboxilo;

R^{4}, R^{5}, R^{6} y R^{7} representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, o R^{4}, R^{5}, R^{6} y R^{7} representan juntos una cadena alquileno C_{1}-C_{4} que enlaza los dos átomos de carbono a los cuales están unidos aquéllos para formar un carbociclo saturado de 4 a 7 miembros, o R^{5}, R^{6} y R^{7} representan cada uno un átomo de hidrógeno y R^{4} y R^{8} junto con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un carbociclo saturado de 5 a 6 miembros;

R^{8} representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C_{1}-C_{6} o está enlazado a R^{4} como se define arriba;

R^{9} y R^{10} representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, o R^{9} y R^{10} junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un heterociclo saturado de 4 a 7 miembros;

R^{11} y R^{12} representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido opcionalmente con alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6};

R^{13} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6};

R^{14} representa un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido opcionalmente con carboxilo, alcoxi C_{1}-C_{6} o alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6};

R^{15} representa un grupo carboxilo, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquilcarbonilo C_{1}-C_{6}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}, alcoxi(C_{1}-C_{6})carbonilalquilo C_{1}-C_{6}, o un grupo -NR^{17}R^{18}, -NHSO_{2}CH_{3}, -C(O)NR^{17}R^{18}, -NHC(O)NR^{17}R^{18}, -OC(O)NR^{17}R^{18}, -OCH_{2}(O)NR^{17}R^{18}, -NHC(O)OR^{19}, ó -NHC(O)R^{20};

t es 0, 1, 2 ó 3;

cada R^{16} representa independientemente halógeno, ciano, nitro, carboxilo, hidroxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxi C_{1}-C_{6}, -NR^{21}R^{22}, cicloalquilamino C_{3}-C_{6}, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilcarbonilo C_{1}-C_{6}, alquilcarbonilamino C_{1}-C_{6}, sulfonamido, alquilsulfonilo C_{1}-C_{6}, -C(O)NR^{23}R^{24}, -NR^{25}C(O)(NH)_{v}R^{26}, fenilo, o alquilo C_{1}-C_{6} sustituido opcionalmente con carboxilo o alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6};

R^{17} y R^{18} representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido con carboxilo o alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}, ó R^{17} y R^{18}, junto con el átomo de hidrógeno al que están unidos, forman un heterociclo saturado de 4 a 7 miembros;

R^{19} representa un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido con carobxilo o alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6};

R^{20} representa un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, adamantilo, cicloalquenilo C_{5}-C_{6}, fenilo o un sistema de anillo heterocíclico de 5 a 10 miembros, saturado o insaturado, que comprende al menos un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de nitro, hidroxilo, oxo, halógeno, carboxilo, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilcarbonilo C_{1}-C_{6}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}, fenilo y -NHC(O)R^{27};

R^{21} y R^{22} representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, o R^{21} y R^{22}, juntos con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un heterociclo saturado de 4 a 7 miembros;

R^{23} y R^{24} representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido con alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6};

V es 0 ó 1;

R^{25} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6};

R^{26} representa un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido opcionalmente con carboxilo, alcoxi C_{1}-C_{6} o alcoxicarbonilo C_{1}-C_{6}; y

R^{27} representa un grupo alquilo C_{1}-C_{6}, amino o fenilo;

y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos.

Estudios de las vías metabólicas, en las que se degradan los compuestos de la Solicitud de Patente Internacional nº PCT/SE01/01377, revelan la formación de varios metabolitos diferentes. En una de tales vías, el compuesto (fármaco) reacciona con ácido glucurónico para formar glucurónidos. La glucuronidación aumenta la solubilidad del fármaco en agua, y facilita así la excreción renal del fármaco. Se prefiere si el metabolito principal está glucuronidado.

Ahora se ha encontrado sorprendentemente que ciertos compuestos dentro de la enseñanza general de la Solicitud de Patente Internacional nº PCT/SE01/01377 tienen, entre otras, propiedades de estabilidad ventajosas in vivo, lo que conduce a su mayor metabolismo vía la ruta de glucuronidación.

Según la presente invención, se proporciona por lo tanto un compuesto de fórmula

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en la que

m es 0, 1 ó 2;

cada R^{1} representa independientemente halógeno o ciano; y

R^{2} representa un átomo de hidrógeno, o un grupo metilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

Se ha encontrado también que los compuestos de la invención actúan como bloqueadores del canal de potasio, y dan positivo en un ensayo de hERG; se debe notar que tal actividad puede dar lugar a cambios in vivo del ECG (electrocardiograma).

Sin estar atados a ninguna teoría particular, se cree que las propiedades ventajosas de los compuestos de la invención son debidas, al menos en parte, a la presencia del, y al punto de unión del, grupo sustituyente de hidroxilo en el anillo bencénico, a la izquierda de la molécula, en la fórmula (I).

En una realización de la invención, m es 1 y R^{1} representa un átomo de halógeno, tal como un átomo de flúor, cloro, bromo y yodo, particularmente un átomo de cloro, por ejemplo en la posición 4 del anillo bencénico con relación al átomo de carbono al que se une el grupo enlazante de CH_{2}.

En otra realización de la invención, R^{2} representa un grupo metilo.

En una realización adicional de la invención, el compuesto es 4-({(2S)-3-[2-(acetilamino)-5-hidroxi-fenoxi]-2-hidroxi-2-metilpropil}amonio)-1-(4-cloro-bencil)piperidina, o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

La presente invención proporciona además un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo, como se define anteriormente, que com-
prende:

(a): hacer reaccionar un compuesto de fórmula

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: en la que m y R^{1} son como se definen en la fórmula (I), con un compuesto de fórmula

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: en la que R^{3} representa un átomo de hidrógeno o un grupo protector adecuado, y R^{2} es como se define en la formula (I); o

(b): hacer reaccionar un compuesto de fórmula

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: en la que m, R^{1} y R^{2} son como se definen en la fórmula (I), con un compuesto de fórmula

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: en la que R^{4} representa un átomo de hidrógeno o un grupo protector adecuado; o

(c): hacer reaccionar un compuesto de fórmula

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: en la que R^{5} representa un átomo de hidrógeno o un grupo protector adecuado, y R^{2} es como se define en la fórmula (I);

: y opcionalmente, después de (a), (b) o (c), formar una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del compuesto de fórmula (I).

El procedimiento de la invención puede llevarse a cabo convenientemente en un disolvente, v.g. un disolvente orgánico tal como un alcohol (v.g. metanol o etanol), un hidrocarburo (v.g. tolueno), o acetonitrilo, a una temperatura de, por ejemplo, 15ºC o superior, tal como una temperatura comprendida en el intervalo de 20 a 120ºC.

Los compuestos de fórmulas (II), (III), (IV), (V), (VI) y (VII), están disponibles comercialmente, son bien conocidos en la bibliografía, o pueden prepararse fácilmente utilizando técnicas conocidas.

Se apreciará por los expertos en la técnica que, en el procedimiento de la presente invención, ciertos grupos funcionales tales como los grupos hidroxilo o amino en los reactivos de partida o compuestos intermedios pueden precisar estar protegidos por grupos protectores. Así, la preparación de los compuestos de fórmula (I) puede implicar, en una etapa apropiada, la eliminación de uno o más grupos protectores.

La protección y desprotección de grupos funcionales se describe en "Protective Groups in Organic Chemistry", recopilado por J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973) y "Protective Groups in Organic Síntesis", 2ª edición, T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience (1991).

Los compuestos de la fórmula (I) anterior pueden convertirse en una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, preferiblemente una sal de adición de ácidos tal como un hidrocloruro, trifluoroacetato (por ejemplo, ditrifluoroacetato), hidrobromuro, fosfato, acetato, fumarato, maleato, tartrato, citrato, oxalato, metanosulfonato o p-toluenosulfonato.

Los compuestos de fórmula (I) son susceptibles de existir en formas estereoisómeras. Se entenderá que la invención abarca el uso de todos los isómeros geométricos y ópticos (incluyendo atropisómeros) de los compuestos de fórmula (I) y mezclas de los mismos, con inclusión de racematos. El uso de tautómeros y mezclas de los mismos forman también un aspecto de la presente invención. Los isómeros ópticos preferidos son los enantiómeros (S).

Los compuestos de fórmula (I) tienen actividad como productos farmacéuticos, en particular como moduladores de la actividad de los receptores de quimioquinas (especialmente del receptor de quimioquinas MIP-1\alpha), y pueden utilizarse en el tratamiento de enfermedades autoinmunes, inflamatorias, proliferativas e hiperproliferativas y enfermedades mediadas inmunológicamente con inclusión del rechazo de órganos o tejidos trasplantados y el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA).

Ejemplos de estas afecciones son:

(1): (aparato respiratorio) enfermedades de las vías respiratorias que incluyen enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) tal como COPD irreversible; asma, tal como asma bronquial, alérgica, intrínseca, extrínseca y por polvo, particularmente asma crónica o inveterada (v.g. asma tardía e hiper-sensibilidad de las vías respiratorias); bronquitis; rinitis aguda, alérgica, atrófica y rinitis crónica con inclusión de rinitis caseosa, rinitis hipertrófica, rinitis purulenta, rinitis seca y rinitis medicamentosa; rinitis membranosa, con inclusión de rinitis cruposa, fibrinosa y pseudomembranosa y rinitis escrofulosa; rinitis estacional con inclusión de rinitis nerviosa (renitis polínica) y rinitis vasomotora; sarcoidosis, pulmón de granjero y enfermedades afines, pulmón fibroide y neumonía intersticial idiopática;

(2): (huesos y articulaciones) artritis reumatoide, espondiloartropatías seronegativas (con inclusión de espondilitis anquilosante, artritis psoriásica y enfermedad de Reiter), enfermedad de Behcet, síndrome de Sjogren y esclerosis sistémica;

(3): (piel) psoriasis, dermatitis atópica, dermatitis de contacto y otras dermatitis eczematosas, dermatitis seborreica, liquen plano, pénfigo, pénfigo buloso, epidermólisis bulosa, urticaria, angiodermas, vasculitis, eritemas, eosinofilias cutáneas, uveítis, alopecia areata y conjuntivitis primaveral;

(4): (tubo digestivo) enfermedad celíaca, proctitis, gastroenteritis eosinofílica, mastocitosis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, alergias relacionadas con los alimentos que tienen efectos alejados del intestino, v.g. migraña, rinitis y eczema;

(5): (otros tejidos y enfermedad sistémica) esclerosis múltiple, ateroesclerosis, Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA), lupus eritematoso, lupus eritematoso sistémico, tiroiditis de Hashimoto, miastenia grave, diabetes tipo I, síndrome nefrótico, fascitis por eosinofilia, síndrome de hiper-IgE, lepra lepromatosa, síndrome de Sézary y púrpura trombocitopénica idiopática;

(6): (rechazo de aloinjertos) agudo y crónico después de, por ejemplo, trasplante de riñón, corazón, hígado, pulmón, médula ósea, piel y córnea; y síndrome crónico de rechazo inverso;

(7): cánceres, especialmente cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) y sarcoma escamoso;

(8): enfermedades en las cuales la angiogénesis está asociada con niveles elevados de quimioquinas (v.g. NSCLC); y

(9): fibrosis quística, accidente cerebrovascular agudo, lesión de reperfusión en el corazón, cerebro, miembros periféricos y septicemia.

Así pues, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente en esta memoria, para uso en terapia.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente en esta memoria, en la fabricación de un medicamento para uso en terapia.

En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "terapia" incluye también "profilaxis" a no ser que se hagan indicaciones específicas en sentido contrario. Los términos "terapéutico" y "terapéuticamente" deben interpretarse en conformidad con ello.

Para los usos terapéuticos arriba mencionados, la dosis administrada variará, por supuesto, con el compuesto empleado, el modo de administración, el tratamiento deseado y el trastorno de que se trate. La dosis diaria del compuesto de fórmula (I) puede estar comprendida en el intervalo de 0,001 mg/kg hasta 30 mg/kg.

Los compuestos de la fórmula (I) y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables pueden utilizarse por sí mismos, pero generalmente se administrarán en forma de una composición farmacéutica en la cual el compuesto/sal/solvato de fórmula (I) (ingrediente activo) está en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá preferiblemente desde 0,05 hasta 99% p (por ciento en peso), más preferiblemente desde 0,05 hasta 80% p, todavía más preferiblemente desde 0,10 hasta 70% p, y aún más preferiblemente desde 0,10 hasta 50% p, de ingrediente activo, estando basados todos los porcentajes en peso en la composición total.

La presente invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente en esta memoria, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona adicionalmente un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de la invención, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente en esta memoria, con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar tópicamente (v.g. al pulmón y/o las vías respiratorias o a la piel) en la forma de disoluciones, suspensiones, aerosoles con heptafluoroalcanos y formulaciones de polvo seco; o por vía sistémica, v.g. por administración oral en la forma de comprimidos, cápsulas, jarabes, polvos o gránulos, o por administración parenteral en la forma de disoluciones o suspensiones, o por administración subcutánea o por administración rectal en la forma de supositorios o por vía transdérmica.

La invención se explicará adicionalmente a continuación con referencia al siguiente Ejemplo ilustrativo.

Ejemplo 1

Di(2,2,2-trifluoroacetato) de 4-({(2S)-3-[2-(acetil-amino)-5-hidroxifenoxi]-2-hidroxi-2-metilpropil}amonio)-1-(4-clorobencil)piperidinio

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I) N-(4-Metoxi-2-{[(2S)-2-2-metiloxiranil]metoxi}fenil)-acetamida

Se agitó a temperatura ambiente durante cinco horas un suspensión de N-(2-hidroxi-4-metoxifenil)acetamida (1,04 g, 5,74 mmoles), (2S)-2-[(3-nitrofenoxi)-metil]oxirano (2,04 g, 7,46 mmoles) y carbonato de cesio (2,80 g, 8,61 mmoles) en dimetilformamida seca (12,5 ml), y después se repartió entre acetato de etilo y agua. Tras la extracción, las fases orgánicas combinadas se secaron y se concentraron a vacío. El resíduo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre sílice, eluyendo con heptano:acetato de etilo, 1:1, para dar el compuesto del subtítulo (1,19 g, 82,6% de rendimiento).

APCI-MS: m/z 252 (MH^{+}).

RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 8,18 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,72 (bs, 1H), 6,52 (dd, 1H, J = 2,6 y 8,8 Hz), 6,50 (dd, 1H, J = 2,6 y 6,0 Hz), 4,10 (d, 1H, J = q 11,0 Hz), 3,96 (d, 1H, J = 11,0 Hz), 3,78 (s, 3H), 2,92 (d, 1H, J = 4,6 Hz), 2,78 (d, 1H, J = 4,6 Hz), 2,19 (s, 3H), 1,48 (s, 3H).

II) Di(2,2,2-trifluoroacetato) de 4-({(2S)-3-[2-(acetilamino)-5-metoxifenoxi]-2-hidroxi-2-metilpropil}-amonio)-1-(4-clorobencil)piperidinio

Se agitó a 80ºC durante 8 horas una mezcla de N-(4-metoxi-2-{[(2S)-2-metiloxiranil]metoxi})acetamida (182 mg, 0,72 mmoles) y 1-(4-clorobencil)-4-piperidinamina (163 mg, 0,72 mmoles) en etanol (7,5 ml), y después a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante HPLC de fase inversa para dar el compuesto del subtítulo como un ditrifluoroacetato después de la liofilización (377 mg, 74,4% de rendimiento).

APCI-MS: m/z 476 (MH^{+}) para la base libre.

RMN ^{1}H (CD_{3}OD, 400 MHz): \delta 7,49 (m, 4H), 7,26 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,63 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,57 (dd, 1H, J = 2,4 y 8,6 Hz), 4,3 (s, 2H), 3,95 (q, 2H, J = 9,6 Hz), 3,79 (s, 3H), 3,59 (d, 2H, J = 12,8 Hz), 3,44 (m, 1H), 3,10 (m, 3H), 2,40 (d, 2H, J = 13,4 Hz), 2,12 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,40 (s, 3H).

III) Di(2,2,2-trifluoroacetato) de 4-({(2S)-3-[2-(acetilamino)-5-hidroxifenoxi]-2-hidroxi-2-metilpropil}-amonio)-1-(4-clorobencil)piperidinio

Se repartió di(2,2,2-trifluoroacetato) de 4-({(2S)-3-[2-(acetilamino)-5-metoxifenoxi]-2-hidroxi-2-metil-propil}a-
monio)-1-(4-clorobencil)piperidinio (185 mg, 0,26 mmoles) entre acetato de etilo e hidróxido de sodio acuoso 1M. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo, y la fase orgánica combinada se secó y se concentró. La disolución fría (0ºC), agitada, de la base libre residual en diclorometano seco (15 ml) se trató con tribromuro de boro 1M en diclorometano (1,58 mmoles). La mezcla se dejó alcanzar la temperatura ambiente toda la noche. Se añadió metanol para obtener una disolución clara, y la mezcla se concentró. El producto bruto se purificó mediante HPLC para dar, después de la liofilización, el compuesto del título (86 mg, 48%).

APCI-MS: m/z 462 (MH^{+}) para la base libre.

RMN ^{1}H (CD_{3}OD, 400 MHz): \delta 7,49 (m, 4H), 7,09 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,51 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,41 (dd, 1H, J = 2,4 y 8,4 Hz), 4,30 (s, 2H), 3,90 (dd, 2H, J = 9,6 y 13,4 Hz), 3,37-3,64 (m, 4H), 3,10 (m, 3H), 2,39 (bd, 2H, J = 13,1H), 2,11 (s, 3H), 2,03 (m, 2H), 1,39 (s, 3H).

Ensayo de Quimiotaxis de THP-1 Introducción

El ensayo midió la respuesta quimiotáctica suscitada por la quimioquina MIP-1\alpha en la línea de células monocíticas humanas THP-1. El compuesto del Ejemplo se evaluó para determinar su capacidad para deprimir la respuesta quimiotáctica a una concentración estándar de la quimioquina MIP-1\alpha.

Métodos Cultivo de las células THP-1

Las células se descongelaron rápidamente a 37ºC a partir de partes alícuotas congeladas, y se resuspendieron en un matraz de 25 cm que contenía 5 ml de medio RPMI-1640 complementado con Glutamax y 10% de suero de ternero fetal desactivado por calentamiento sin antibióticos (RPMI + 10% de HIFCS). El día 3, se desecha el medio y se reemplaza con medio reciente.

Las células THP-1 se cultivan normalmente en medio RPMI-1640 complementado con 10% de suero de ternero fetal desactivado por calentamiento y glutamax, pero sin antibióticos. El crecimiento óptimo de las células requiere que las mismas se sometan a pasadas cada tres días, y que la densidad mínima de subcultivo sea 4x10+5 células/ml.

Ensayo de quimiotaxis

Se retiraron las células del matraz y se lavaron por centrifugación en RPMI + 10% de HIFCS + glutamax. Se resuspendieron luego las células a 2x10^{7} células/ml en medio reciente (RPMI + 10% de HIFCS + glutamax) al que se añadió calceína-AM (5 \mul de disolución madre a 1 ml para dar una concentración final de 5x10^{-6} M). Después de mezclar suavemente, las células se incubaron a 37ºC en una incubadora de CO_{2} durante 30 minutos. Las células se diluyeron luego hasta 50 ml con el medio, y se lavaron dos veces por centrifugación a 400xg. Las células marcadas se resuspendieron luego a una concentración celular de 1x10 células/ml y se incubaron con un volumen igual de antagonista de MIP-1\alpha (10^{-10} M hasta 10^{-6} M de concentración final) durante 30 minutos a 37ºC en una incubadora de CO_{2} humidificada.

La quimiotaxis se realizó utilizando placas de quimiotaxis Neuroprobe de 96 pocillos que empleaban filtros de
8 \mum (No. catálogo 101-8). Se añadieron 30 microlitros de agente quimioatrayente, complementado con diversas concentraciones de antagonistas o de vehículo, a los pocillos inferiores de la placa, por triplicado. El filtro se dispuso luego encima cuidadosamente, y se añadieron después 25 \mul de células, preincubadas con la concentración correspondiente de antagonista o vehículo, a la superficie del filtro. La placa se incubó luego durante 2 horas a 37ºC en una incubadora con CO_{2} humidificada. Las células que quedan en la superficie se retiraron luego por adsorción, y la placa entera se centrifugó a 2000 rpm durante 10 minutos. Se retiró luego el filtro, y las células que habían migrado a los pocillos inferiores se cuantificaron por la fluorescencia de calceína-AM asociada a las células. La migración celular se expresó luego en unidades de fluorescencia después de sustracción de la prueba en blanco de reactivos, y los valores se normalizaron a % de migración por comparación de los valores de fluorescencia con el de un número conocido de células marcadas. El efecto de los antagonistas se calculó como % de inhibición cuando el número de células que habían migrado se comparó con el vehículo.

Ensayo de inhibición del canal de potasio codificado por hERG

Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la corriente de cola que fluye a través del canal de potasio codificado por el gen humano relacionado con el éter a-go-gó (hERG).

Se hicieron crecer células de riñón embriónico humano (HEK), que expresan el canal codificado por hERG, en Medio Esencial Mínimo de Eagle (EMEM; número de catálogo M2279 de Sigma-Aldrich), complementado con suero de ternero fetal al 10% (Labtech International; número de producto 4-101-500), suplemento libre de suero M1 al 10% (Egg Technologies; número de producto 70916) y 0,4 mg/ml de Geneticina G418 (número de catálogo G7034 de Sigma-Aldrich). Uno o dos días antes de cada experimento, las células se despegaron de los matraces del cultivo de tejido con Accutase (TCS Biologicals), usando métodos de cultivo de tejido estándares. Después se pusieron sobre cubreobjetos de vidrio que descansan en pocillos de una placa de 12 pocillos, y se cubieron con 2 ml del medio de crecimiento.

Para cada célula registrada, se colocó un cubreobjetos de vidrio, que contiene las células, en el fondo de una cámara Perspex que contiene una disolución de baño (véase más abajo) a temperatura ambiente (\sim 20ºC). Esta cámara se fijó a la altura de un microscopio de contraste de fase, invertido. Inmediatamente después de colocar el cubreobjetos en la cámara, se perfusionó la disolución del baño en la cámara, desde un depósito alimentado por gravedad, durante dos minutos a una velocidad de \sim 2 ml/min. Después de este tiempo, se detuvo la perfusión.

Se rellenó una pipeta de pinzamiento zonal, hecha de tubo de vidrio de borosilicato (GC120F, Harvard Apparatus), que usa un retractor de micropipeta P-97 (Sutter Instrument Co.), con disolución para pipeta (véase más abajo). La pipeta se conectó a la etapa de cabeza del amplificador del pinzamiento zonal (patch clamp) (Axopatch 200B, Axon Instruments), vía un alambre de plata/cloruro de plata. La tierra de la etapa de toma de señal se conectó al electrodo de tierra. Éste consistió en un alambre de plata/cloruro de plata embebido en agar al 3% completado con cloruro sódico al 0,85%.

La célula se registró en la configuración de célula completa de la técnica de pinzamiento zonal. Tras la etapa de "adaptación", que se realizó a un potencial de mantenimiento de -80 mV (ajustado por el amplificador), y tras el ajuste apropiado de los controles de la resistencia en serie y de la capacitancia, se usó un programa de ordenador para electrofisiología (Clampex, Axon Instruments) para establecer un potencial de mantenimiento (-80 mV), y para suministrar un protocolo de voltaje. Este protocolo se aplicó cada 15 segundos, y consistió en una etapa de 1s hasta +40 mV, seguido de una etapa de 1s hasta -50 mV. La respuesta de la corriente a cada protocolo de voltaje impuesto se filtró a baja pasada por el amplificador a 1 kHz. La señal filtrada se adquirió entonces, en línea, digitalizando esta señal análoga desde el amplificador con un análogo al convertidor digital. La señal digitalizada se capturó entonces en un ordenador que funciona con el programa Clampex (Axon Instruments). Durante el potencial de mantenimiento y la etapa hasta +40 mV, la corriente se muestreó a 1 kHz. La velocidad de toma de muestras se ajustó entonces a 5 kHz para el resto del protocolo del voltaje.

Las composiciones, pH y osmolaridad de la disolución del baño y de la pipeta se tabulan a continuación.

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Sal	Disolución de la pipeta (mM)	Disolución del baño
NaCl	-	137
KCl	130	4
MgCl_{2}	1	1
CaCl_{2}	-	1,8
HEPES	10	10
Glucosa	-	10
Na_{2}ATP	5	-
EGTA	5	-

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Parámetro	Pipeta	Baño
pH	7,18 - 7,22	7,40
pH ajuste con	KOH 1M	NaOH 1M
Osmolaridad (mOsm)	275-285	285-295

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La amplitud de la corriente de cola del canal de potasio codificado por hERG, tras la etapa desde +40 mV hasta -50 mV, se registró en línea mediante el programa de ordenador Clampex (Axon Instruments). Tras la estabilización de la amplitud de la corriente de cola, se aplicó a la célula la disolución del baño que contiene el vehículo para la sustancia de ensayo. Teniendo en cuenta que la aplicación del vehículo no tuvo ningún efecto significativo sobre la amplitud de la corriente de cola, se construyó entonces una curva de efecto frente a concentración acumulativa para el compuesto del ensayo.

El efecto de cada concentración de compuesto de ensayo se cuantificó expresando la amplitud de la corriente de cola en presencia de una concentración dada de compuesto de ensayo como porcentaje de aquél en presencia de vehículo.

La potencia del compuesto de ensayo (IC_{50}) se determinó ajustando los valores del porcentaje de inhibición que conforman la curva de concentración y efecto a una ecuación de Hill de cuatro parámetros, usando un paquete de ajuste de datos estándar. Si el nivel de inhibición observado a la concentración de ensayo más elevada no superó el 50%, no se produjo un valor de potencia, y se dio un valor de porcentaje de inhibición a esa concentración.

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Las siguiente tabla muestra los resultados que se obtuvieron cuando el compuesto del Ejemplo 1 anterior y tres compuestos de comparación, A, B y C, se ensayaron en el ensayo de inhibición del canal de potasio codificado por hERG.

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Claims

1. Un compuesto de fórmula

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12

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en la que

m es 0, 1 ó 2;

cada R^{1} representa independientemente halógeno o ciano; y

R^{2} representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo;

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que m es 1, y R^{1} representa un átomo de halógeno.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que m es 1 y R^{1} representa un átomo de cloro.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R^{2} representa un grupo
metilo.

5. Un compuesto según la reivindicación 1, que es:

4-({(2S)-3-[2-(acetilamino)-5-hidroxifenoxi]2-hidroxi-2-metilpropil}amonio)-1-(4-clorobencil)-piperidina,

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

6. Un compuesto según la reivindicación 5, en el que la sal farmacéuticamente aceptable es una sal seleccionada de hidrocloruro, trifluoroacetato, hidrobromuro, fosfato, acetato, fumarato, maleato, tartrato, citrato, oxalato, metanosulfonato y p-toluenosulfonato.

7. Un compuesto según la reivindicación 5 ó 6, en el que la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de ditrifluoroacetato.

8. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según se define en la reivindicación 1, que comprende:

(a): hacer reaccionar un compuesto de fórmula

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(b): hacer reaccionar un compuesto de fórmula

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(c): hacer reaccionar un compuesto de fórmula

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9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para uso en terapia.

12. Uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones humanas en las cuales es beneficiosa la modulación de la actividad de un receptor de quimioquinas.

13. Uso de un compuesto de la fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de la artritis reumatoide.

14. Uso de un compuesto de la fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica.

15. Uso de un compuesto de la fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento del asma.

16. Uso de un compuesto de la fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple.