TWI253935B - Drug complex - Google Patents

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TWI253935B
TWI253935B TW088108351A TW88108351A TWI253935B TW I253935 B TWI253935 B TW I253935B TW 088108351 A TW088108351 A TW 088108351A TW 88108351 A TW88108351 A TW 88108351A TW I253935 B TWI253935 B TW I253935B
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TW
Taiwan
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group
compound
gly
pharmaceutical
drug
Prior art date
Application number
TW088108351A
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English (en)
Inventor
Hiroshi Susaki
Kazuhiro Inoue
Hiroshi Kuga
Original Assignee
Daiichi Seiyaku Co
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Publication date
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Description

1253935 A7
五、發明說明（1 ) [技術領域] (請先閲讀背面之生意事項再填寫本頁) 本發明係有關-種由多糖衍生物等藥物載體與抗腫瘤 劑等醫藥化合物介由n分子結合之藥物複合體者。 [背景技術] 使用於治療肺癌或消化器官癌等固態癌或白血病等血 癌之抗腫瘤劑，係由靜脈内投藥或口服投藥等投藥路徑全 身投藥後移動至特定之腫瘤部位而阻礙或抑制癌細胞之增 生’發揮治療效果。然@，在一些場合，全身投藥之抗腫 瘤劑，可能快速由血液中被吸收至肝臟。網内系器官、或 者被快速地排泄至尿中，因而降低金中濃度而限制其移動 至腫瘤部位。另外，通常抗腫瘤劑本身移動至腫瘤部位之 選擇性（腫瘤選擇性）低，致抗腫瘤劑之分佈遍及全身各種 細胞或組織，而對正常細胞或組織產生細胞毒性作用，因 此經常發生嘔吐、發燒、或脫毛等副作用之問題。因此， 思圖尋求開發有效且可選擇性地使抗腫瘤劑移動至腫瘤部 位的手段。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 以手段之一，有人提議使用具有羧基之多糖衍生物為 藥物載體，該方法係园多糖衍生物結合至抗腫瘤劑上時不 但可減緩抗腫瘤劑在血中之消失，亦可提高移動至癌組織 之方向性。例如國際公開W094/19376號公報中揭示一種 藥物複合體，其中在含羧基多糖之羧基上結合胜肽鏈（胺 基酸數1至8)，該胜肽鏈再介由亞德里亞黴素 (doxorubicin)、道諾黴素（dounorubicin)、絲裂黴素 (mitomycin)C或博萊徽素（bleomycin)等結合。另外，特 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公·釐） 1 310635 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 i、發明說明（2 ) 公平7-84481號公報揭示一種藥物複合體，係羧甲基化之 甘露葡聚糖衍生物介由許夫氏（Schiff’s)塩基或醯胺結合而 導入上述抗腫瘤劑者。以類藥物複合體之特徵為不僅比藥 物载體上結合的抗腫瘤劑本身具有更優良之抗腫瘤效果， 同時其毒性、副作用亦減輕。 另外，在使用多醇化多糖衍生物為藥物載體之藥物複 合體相關之技術方面，另有「多糖-胜肽-亞德里亞徵素複 合體之相關研究•多糖衍生物血中安定性與抗腫瘤效果的 關係」（第10次B本DDS學會演講摘要集，279，1994); 「多糖·胜肽-亞德里亞徵素複合體之相關研究•體内動態 與抗腫瘤效果」（第9次B本藥物動態學會年會演講摘要 集，292，1994);第19次研究開發動向研習會（醫藥品機 構主辦）摘要集，D_9，1995 ;及「多糖載體對腫瘤之藥物 輸送相關研究」（第12次膠體•界面技術研討會，曰本化 學會，演講摘要集，51，1兮95)等報告。又，另外亦有研 究開發對-胺节氧基羰基結合胜肽基之藥劑（Dubowchik， G.M·，Tetrahedron Lett·，38，5257，5261，1997)，作為抗腫 瘤劑結合於抗體等之技術，但尚未報告將具有上類藥物載 體應用在藥物複合體上。 [發明之開示] 本發明人等對多糖衍生物等藥物載體介由含1至8個 胺基駿之間隔基與抗腫瘤劑等醫藥化合物結合之藥物複合 體刻意進行研究，結果成功地提供一種藥物複合體，可以 部位選擇性地使抗腫瘤劑等醫藥化合物移動至目的組織 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 3106S5 ϋ ϋ n ϋ ϋ ϋ I %ϊ n I sf ϋ I · n ·ϋ ί ϋ I ϋ 一-口、· ϋ ϋ ϋ i^i ϋ ί ml I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（5 ) 衍生物的上述藥物複合艚，R3 ^ 後σ骽，R為由2至8個胺基酸結合成 胜肽之間隔基之上述藥物複合體；γ為可具取代基的對伸 苯基上述藥物複合體；Υ為未取代之對_伸苯基之上述藥 物複合體；含羧基之多糖衍生物為絲C"烷基葡聚糖 聚醇之上述藥物複合體；構成羧基Ci 4烷基葡聚糖聚醇 之葡聚糖聚醇係在實質上可完全聚醇化之條件下處理葡聚 糖知到之葡聚糖聚醇之上述藥物複合體；叛基Cl_4烧基 葡聚糖聚醇為叛基甲基葡聚糖聚醇之上述藥物複合體；醫 藥化合物為抗腫瘤劑或消炎劑之上述藥物複合體；由A-R-NH· Y-CHfO-CO·與醫藥化合物之胺基結合之上述藥物 複合體以及醫藥化合物為（13,93)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基·4_甲基_1H，12H-苯并[de]fl比喃并[3，，49:6,7]吲 哚并[l，2-b]喹啉_10，13(9只，1511)_二酮之上述藥物複合體。 [圖式之簡單說明] 第1圖示本發明藥物複合體（實例1)的GPCC凝膠滲透 層析儀）圖。 第2圖示本發明藥物複合體（實例1)的紫外線吸收光 譜。 第3圖示本發明藥物複合體（實例5)的GPC圖。 第4圖示本發明藥物複合體（實例5)的紫外線吸收光 譜。 第5圖示本發明藥物複合體（實例7)的GPC圖。 第6圖示本發明藥物複合體（實例7)的紫外線吸收光 譜0 K-----— 裝--------訂-------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 5 310635 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（6 ) 【發明實施之最佳形態] 本發明提供之藥物複合體可如式⑴齡一 所不：A-R-NH-Y_
CiV〇-C〇_Q。式中Q示醫藥化合物 q〜茂暴，本發明藥物 複合體中所含的醫藥化合物殘基可例舉如抗腫瘤劑/消炎 劑、抗菌劑等，具有治療及/或預防包括人類之哺乳類疾 病的藥劑之醫藥化合物的主要構造部份，亦即至少包含在 醫藥作用表現上不可欠缺的部份。事實上 貝上可使用在該醫 藥化合物者不限於上述者，只要具有可與a_r_NH_y
Cl-o-co-所示之羰基結合有關之i或2個以上的反 官能基（例如：胺基、叛基、經基、硫醇基、醋基等)者均 可使用做醫藥化合物。在本說明書中稱之為醫藥化合物 時，亦包括含有本身具有醫藥作用之化合物的主要2造作 為部份構造者，亦包含可在生物體内再產生該化合物之前 驅藥物化合物者。 本說明書中所指之醫藥化合物的殘基，在假定A_R_ NH_ Y-CHrO-CO·所示基中之羰基與醫藥化合物殘基之結 合係由醫藥化合物中反應性官能基與A_R_NH_Y_CHr〇 COOH所示之羧基反應（例如脫水聚合等）而形成之場合， 係指結合後得自醫藥化合物而存在藥物複合體中之部份構 造。其例如醫藥化合物示為D-NH2, D-NH-D，，D-OH， 及D-SH之場合，醫藥化合物之殘基分別可示為β_ΝΗ_， -D-N(D’）·，D_〇-，及D_S_，而使用該醫藥化合物之藥物 複合體則可分別示為A_R-NH-Y-CH2-0-C0-NH_D， ‘紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公t ) -------I ^--------t-------11^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 6 1253935
五、發明說明（7 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 NH-Y-CH2-〇-CO-N(D’）-D，A-R-NH-Y-CH2-0-CO-〇-D 及 AHH-Y-CH2-0-C0-S-D。實際上，A-R-丽-Y-CH2-0-C0- 所示之基與醫藥化合物殘基之結合種類並不僅限於上述 者。 醫藥化合物可例舉如：亞德里亞徵素、道諾徵素、絲 W徵素C、博萊徵素、環胞唆（CyCl〇Cytidine)、長春花新 驗（vincristine)、長春花驗（vinbiastine)、氨甲嗓呤 (methotrexate)，白金系抗腫瘤劑（氣氨鉑或其衍生物）、紅 豆杉醇（taxol)或其衍生物，喜樹驗（campt〇eine)或其衍 生物（特開平6-87746號公報中記載之抗腫瘤劑、最好是 使用申請專利範圍第2項中記載之（13,93)-1-胺基-9-乙基-5-氰-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基_1H，12H_苯并Ide]吡喃并 [3’，4’:6,7]骄噪并[1，2-61嗤琳_10，13(州，15丑)-二酮等）^ 腫瘤劑。另外，例如：琥拍酸氫化可體松、琥珀酸氫潑尼 松等固醇類消炎劑’或梅菲納敏酸（mefenamic acid)、福 陸菲鈉敏酸（flufenamic acid)、第克羅菲納克（diclofenac)、 伊布普羅芬（ibuprofen)、第諾歷定（Tinoridine)等非固醇類 消炎劑之殘基亦佳。 Y所示之伸苯基可任意使用鄰伸苯基或對-伸苯基。 伸苯基上具有取代基時，取代基之種類及取代基之數目及 取代位置並無特別服制。可以存在伸苯基環上之取代基可 例舉如：低級烷基（直鏈或支鏈Cw烷基，或環狀c3_6烷 基等。以下之含低級烷基部份的取代基亦相同）、鹵化低 級烷基（氯化甲基、三氟甲基等）、羥低級烷基(羥甲基等）、 i--IV--- - I I I----^-------Ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 7 310635 1253935 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 a 340635 A7 B7 五、發明說明（8 ) 低級烷氧基（甲氧基、乙氧基等）、低級烯基（乙烯基、烯 丙基等）、低級炔基（炔丙基等）、羥基、鹵素原子（氟原子、 氯原子、溴原子、或碘原子之任意者均可）、羧基、烷氧 羰基（甲氧羰基等）、烷醯基（乙醯基等）、鹵烷醯基（三氟乙 醯基等）、芳基（苯基、萘基等）、芳烷基（苯甲基等）、芳氧 基（苯氧基等）、芳烷氡基（苄氧基等）、芳醯基（苯甲醯基 等）、雜芳劑（毗啶基、喹啉基尊）、胺基、單或二低級烷胺 基、胺基甲醯基、硝基、氰基、低級烷基亞磺醯基、低級 烷基磺醯基、硫醇基、或低級烷硫基等，但並不限定於此。 伸苯基之環上存在2個以上取代基時其可相同或不 同。另外，該埤代基上亦可又具有另外之丨或2個以上官 能基。此種取代基具體舉例如··氣苯基、甲基胺基甲醯基、 氣苯甲基、烷氧苯甲基等。γ所示之伸苯基以經取代或未 取代之對-伸苯基為佳，特別是未取代之對·伸苯基為佳， 特別是未取代之對-伸苯基更佳。 R示間隔基。在本說明書中所用之間隔基一詞，意指 本發明之藥物複合體之部份構造，由i個胺基酸或2至8 個胺基酸形成而存在於高分子藥物载體與醫藥化合物殘基 之間的部份，其功能為在醫藥化合物不游離之組織或血液 中使醫藥化合物殘基可保持於藥物載體上，而在須游離出 醫藥化合物之組織（例如：腫瘤組織等）中則可由酵素性分 解而游㈣醫藥化合物。間隔基可以使用含】個胺基酸之 間隔基或含2至S個胺基酸分子結合成胜肽之間隔基。該 間隔基具有1胺純殘f指胺基酸之胺基及羰基分龍 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G x 297公釐） 一-------- --------^------I --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（9 ) 去1個氫原子及1個羥基之殘基），或含2至8個胺基酸 結合之胜肽的寡胜肽殘基（指N端之胺基及C端之羧基分 別移去1個氫原子及i個羥基之殘基）形態，而位於（：端（含 1個胺基酸之間隔基時則為羧基）以胜肽結合於ΝΗ_γ_ ch2-o-co-q 者。 一般A所示之藥物載體與間隔基之結合，係由藥物 載體之羧基與寡胜肽間隔基之况端（間隔基含丨個胺基酸 時為胺基）形成胜肽結合而成。事實上，間隔基與藥物載 體之結合並不限於上述胜肽結合，亦可為其他化學結合或 利用1或2個以上之間隔基結合。其例如間隔基中以含1 個或2個以上之碳酸化合物殘基（例如琥始酸等雙碳酸之 殘基等）作為構成單位且兩末端為羧基之間隔分子時，即 可以利用藥物載體中之反應性胺基等結合。 間隔基以含2至6個胺基酸之寡胜肽殘基為佳。但構 成間隔基之胺基酸種類並無特別限制，可例舉如L_或D_ 胺基酸，使用L-胺基酸較佳，α-胺基酸之外，亦可使用 召-丙胺酸、ε -胺基己酸、7 -胺基丁酸等。以α —胺基酸 以外之胺基酸，最好位在間隔基中接近藥物載體之位置。 使用含寡胜舦為間塥基時，其胺基黢序列並無特別限 制，例如可使用所示之雙胜肽殘基的間隔基（X示疏 水性胺基酸之殘基，Ζ示親水性胺基酸殘基、-Χ_ζ-意指 疏水性胺基酸（X)與親水性胺基酸（Ζ)各結合成胜肽之Ν末 端部份及C末端部份，且自該雙胜肽之Ν末端之胺基及 C末端之羧基分別移除1個氫原子及1個羥基所得的殘 r---- 壯衣--------訂-------1·線 C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 9 310635 1253935 A7 B7 五、發明說明（10 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 基），或含該雙胜肽殘基作為部份胜肽序列之間隔基。疏 水性胺基酸可例舉如使用苯丙胺酸 '酪胺酸、白胺酸等， 親水性胺基酸可例舉如使用··甘胺酸、丙胺駿等。間隔基 上可具有該雙胜肽殘基之重複序列（例如：-χ-ζ_χ_ζ_，_χ_ ζ-χ-ζ-χ-ζ-等）。 使用含此種雙胜肽構造為間隔基時，間隔基在被認為 富於胜肽酶之腫瘤部位或發炎部位上被加水分解，而可在 短時間内在該部位游離出高濃度之醫藥化合物，因此，含 上述雙胜肽間隔基結合醫藥化合物所形成之部份構造為本 說明藥物複合體之較佳部份構造。醫藥化合物之殘基若使 用依賴濃度表現抗腫瘤作用之抗腫瘤劑（即濃度越高，表 現之抗腫瘤作用越強的抗腫瘤劑：濃度依賴型抗腫瘤劑， 例如：亞德里亞徽素）殘基時，最好使用-所示之上述 雙胜肽殘基之間隔基或含該雙胜肽殘基作為部份胜肽序列 之間隔基。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 另外’即使使用之醫藥化合物殘基為必須保持一定 濃度以上作用聘間之抗腫瘤劑（例如氨甲喋呤等）時，但亦 有依使用之上述間隔基而達成高抗腫瘤效果時，一般並不 限於上述間隔基，而必須由抗腫瘤劑在體内動態之特徵或 毒性等觀點選擇適宜之間m基。同聘，一般對增生快速之 癌種，最好選擇短時間可以游離高濃度醫藥化合物之上述 間隔基。尤其本發明之藥物複合體中，實質上間隔基部份 之酵素性分解為控制醫藥化合物游離速度的階段，由適當 之間m基酵素性分解速度的觀點選擇，可以容易地達成醫 |本紙張尺度刺巾關家鮮（CNS)A4規格 121() χ 297_"公f A7 1253935 B7 ________ 五、發明說明（11 ) 藥化合物期望之游離速度。 可以利用作為間隔基之寡胜狀’具體可例舉如特開平 11-92405號公報之表1所載者，該寡胜肽適於作為本發明 之間隔基。 A所示之藥物載體，除多糖衍生物外，亦可使用合成 高分子等。至於多糖衍生物及合成高分子，只要對生體不 具有實質性毒性、而具有藥物載體作用者均可使用。例如 已往在藥物複合體製造上可利用之多糖衍生物及合成高分 子，均可以利用在本發明之藥物複合體中。可例舉如：具 羧基之多糖衍生物適於使用在本發明之藥物複合體中，而 多醇化多糖衍生物尤為適合。另外，合成高分子可例舉如： 聚乙二醇類；聚楚胺酸、聚天冬按駿、或聚離胺酸等聚胺 基酸類；或N-(2-經丙基）甲基丙稀醯胺衍生物等聚乙稀化 合物之衍生物。 更具體地說，具觀基之多糖衍生物可例舉多糖類或 其經化學性或生物性修飾之衍生物、只要在分子中帶有叛 基者均可使用。例如：透明質酸、果膠酸、藻酸、軟骨素、 肝素等多糖類，此外，支鏈澱粉、葡聚糖、甘露聚糖、幾 丁質、菊糖、左聚糖、木聚糖、何拉伯聚糖、甘露葡聚糖、 幾丁寡糖、支鏈澱粉等多糖之對部份或全部羥基導入帶羧 基之官能基者均可使用。 例如：羥基經羧基基化或羥基與多塩基酸之一 的羧基以S曰鍵結者均適於使用。另外，上述多糖類經聚醇 化後，再導入帶有幾基之官能基者亦可使用。在本說明書 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(_21〇 X 297公替- i ; 11 3L0635 --------------- I裝--------訂-------τ 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 _B7 五、發明說明（12 ) 中使用之“多糖衍生物，，一詞 °』必須以取廣義地加以解 :’除含糖為主要部份之多糖化合物外，亦包括多掩化合 之壤狀糖部份或完全開環得到之化合物（例如聚醇化合 物等）。此多糖衍生物中，以使 口 乂便用羧基Cb4烷基葡聚糖聚 。或綾基Ci·4烷基支鏈澱粉聚醇等為佳。以下即以利用 缓基Ch院S葡聚糖聚醇之場合更具體地說明本發明之 藥物複合體的m造，但本發明之藥物複合體中藥物载體並 不限於使用魏基C^4燒基葡聚糖聚醇。 製造本發明中藥物載體使用之羧基c14烷基葡聚糖 聚醇的聚醇化度並無特別限制，但最好構成羧基C"烷 基葡聚糖聚醇之葡聚糖聚醇係在實質上可完全地聚醇化之 條件下處理葡聚糖所得而具有足以作為DDS化合物使用 程度之聚醇化的葡聚糖聚醇。 製造羧基Cw烷基葡聚糖聚醇時使用之葡聚糖的種 類並無特別之限制，只要是α 結合者任何比例均 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 了 例如·可以使用a-D-1 ·6-結合比例為85%以上，90 %以上，或95 %以上之葡聚糖。葡聚糖之分子量並無特 別限制，可為例如：10，ϋ00程度至2,〇〇〇,〇〇〇程度者而 取好是用5ϋ，ϋ〇ϋ程度至so〇,ooo程度者。構成羧基Ci 4 烷基葡聚糖聚醇中羧基Ci *烷基之Cw烷基，可以使用 直鍵或支鏈之Cw烷基，具體可使用甲基、乙基、正丙 基、異丙基、正丁基、第二丁基等，最好使用甲基。 以葡^^糖為起始原料時’可將葡聚糖依序與大為過 量之過硪酸鈉及硼氳化鈉作用，即可製造得實質上完全聚 本紙張尺度適时國國家標準（g)A4規格（210 X 297公爱） 12 31063$
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 五、發明說明（13 ) 醇m聚糖之聚醇化並不限於上 达方法，可採用業者悉知之任何方法•羧基Ci 4院基化可 以例如對葡聚糠聚醇之羥基以氯乙酸、溴乙酸、β _氯丙 酸、广甲基冬氣丙酸、氯丙酸'"基氣丙酸、 =丁，、^氯丁酸、卜氣丁酸等®化院基羧酸， 或取好疋以氯乙酸對葡聚糖聚醇之羥基作用，將羥基部份 或完全羧基Cl_4烷基化。 例如：將葡聚糖聚醇溶解於不發生反應之惰性溶劑 例如·水、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞楓等）中，再於 鹼（例如氫氧化鈉，氫氧化鉀尊）存在下，添加鹵化Ci4烷 基羧酸或其塩，在冰冷卻下至1〇〇°C程度之溫度範園中反 應數分鐘至數目即可。導入之羧基Cm烷基的程度，例 如適當選擇羧基Cl_4烷基化之反應溫度或使用之鹵素化
Cw烷基碳酸藥劑及鹼的量可以簡單地調整，此均為業者 所知之手段。對葡聚糖聚醇之羥基進行羧基烷基化 程度並無特別限制，可例舉如構成糖殘基之〇 〇〗至2 〇
棘圍，取好疋0 · 1至1 0之範圍。如此即可以調配緩基C 烷基葡聚糖聚醇之鈉塩或鉀塩等鹼金屬塩形態的水溶液。4 上述調配之鹼金屬塩形態的多糖衍生物之外，亦可以 使用有機胺塩形態之多糖衍生物為藥物載體之原料。因為 有機胺塩形態之多糖衍生物，本質上可以高濃度溶解於不 含水之有機溶劑中，可用此種塩進行非水相反應，有些時 候可明顯提高反應效率。有機胺塩之使用可例舉如：二 —^乙 胺、三甲胺、三乙醇胺等脂肪族胺類，另外之N_甲基 --------------裝 -------訂-------I -線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 13 310635 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 »06-35 A7 五、發明說明（I4 17各咬、N-甲基六氫啦咬、N-甲基嗎琳 '二甲胺基耻咬等脂 王衣式或方香族胺類之塩、乳化四甲基錢、氣化四乙基銨等 四級銨塩。 多糖衍生物由鈉塩轉換為有機胺塩可以使用離子交換 樹脂進行。例如將羧基甲基葡聚糖聚醇之鈉塩溶解於水 中’再以水自填充Bio-Rad AG50W_X2(200_400網目，h+ 型）樹脂之管柱溶出後，再添加三乙基胺等有機胺後冷;東 乾燥即可。另外，亦可將羧基曱基葡聚糖聚醇之鈉塩溶解 於水中，再通過三乙銨型樹脂之單一步驟即可轉換。 本發明之藥物複合體，可例如依適當的方法由R，_ NH-Y-CH^O-CO-Q(式中各定義同上述定義）所示之化合物 製造’再視需要去除保護基後，使間隔基之N末端胺基 與羧基甲基葡聚糖聚醇之羧基結合成酸醯胺鍵結而製造。 例如：N末端受保護之胜肽化合物與nh2-Y_CH2_OH之胺 基結合成醯胺鍵結，再視需要延長胜肽鏈後，可將c〇_x 部份或c〇-Q部份導入羥基中。導入c〇-x部份時，X再 轉換為Q即可。導入CO-X部份時使用之反應劑，可以 使用對_硝基苯基二碳酸酯，對-頌基苯基氣甲酸酯（X相 當於對确基苯氧基），1，1，-羰基二咪唑（X相當於咪唑基） 等。導入CO-Q部份之方法，可以碳醯氣對Q作用得到 C1_C0_Q、以對_硝基苯基氯甲酸塩對Q作用得到X-CO-Q(X 相當於對-硝基苯氧基）。另外，R，-NH_Y_CH2_〇-C〇-X轉 換為r’-nh-y-ch2-o-c〇-q時，使醫藥化合物或受保護 之醫藥化合物反應，依需要亦可視X及Q之種類在反應 ‘狀度翻中關家鮮（CNS)A4規格公髮）--- -------.---i---裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 310635 A7 五、發明說明（15 系中添加三乙基胺 '二異丙基乙基胺等鹼類，或羥基 苯并三唾等活化劑。之後，依保護基之種類以適當方法去 除保護基即可得到目的物。保護基之種類及去除之方法可 例舉如 T.W· Green and P.G.M· Wuts，“Protective Groups in Qrganic Synthesis，2nd ed·”，John Wiley & Sons，Inc.(1991) 等之中記載的方法。例如：在第三丁基羰基之場合，可使 用二氟乙酸、乙酸、甲酸尊酸類，或最好使用甲酸等較弱 之酸，在三苯甲基之場合，可使用乙酸尊酸類。9_苟基甲 基羧基之場合，可使用哌畊等鹼類。 醯胺結合之形成，可使用在胜肽鏈合成上使用之一般 脫水縮合劑，可舉例如：N，N，_二環己基碳化二亞胺（DCC) 之N，N’-二環烷基碳化二亞胺類，^乙基_3_(3_二甲胺丙基） 碳化二亞胺（EDAPC)等碳化二亞胺衍生物，羥基苯并三 唑（HOBT)之苯并三唑衍生物以外，亦可以使用丨_乙氧基 羰基-2-乙氧基_1，2·二羥__(EEDQ)等。此外，亦可活性 酯法或酸齒法等進行反應。 多糖衍生物在非水相進行反應時，本質上不含水之 有機溶劑，只要可溶解反應物種（多糖衍生物之有機胺塩 及游離或塩形態之H-R-NH· Y-CH^O-CO-Q : H-R示未受 保護之N末端）者均可。例如以使用n，N，·二甲基甲醯胺、 二甲基亞楓、乙醯胺、N_甲基地咯烷酮、環丁碼等為佳。 導入藥物載體之醫藥化合物殘基的量並無特別限制，但須 以醫藥化合物殘基之種類，及藥物複合體在體内之動態、 藥效、及毒性之觀點適當地選擇。一般可選擇在〇1至3〇 卜紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑽χ 297公董） .---一----^--------^---------^ (請先閱讀背面之沒意事項再填寫本頁) 1253935 A7 B7
五、發明說明（16 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 重量％ ’最好是在2至15會吾命 〜你重里^程度之範圍。導入藥物 載體上醫藥化合物殘A γ |， 殘土之比例丌以例如吸光度分析等簡 單地測定。 一另外本發明之藥物複合體的製造方法更具體之例 不於實施例中。業者可根據上述一般說明及實施例中之具 體說明，適S選擇起始原料及反應試藥，另再依需要加以 修飾或改變反應條件或程序，即可製得上述化學式⑴包 含之本發明藥物複合體。 本發明之藥物複合體的特徵為可依照醫藥化合物殘 基之種類（例如··抗腫瘤劑或消炎劑等醫藥化合物之殘 基），在腫瘤部位或發炎部位等之局部專一地表現期望之 醫藥活性，且可減少壓醫藥化合物本身帶有之毒性。例如 含有羧基甲基葡聚糖聚醇作為多糖衍生物部份之藥物複合 體具有極佳之血管滲透性，因此具有腫瘤選擇性及炎症部 位選擇性。 另外，本發明之藥物複合體同時具有之特徵為間隔 基部份經腫瘤部位或炎症部位之蛋白酶(胜肽酶）行酵素性 加水分解時，其胺基苯氧基甲醯胺上之胺基甲酸酿鍵即被 加水分解。因此，本發明之藥物複合體，游離後其醫藥化 合物上源自間隔基子之胺基酸完全不留存，但如此並不損 及醫藥化合物本身之藥效。同時，本發明之藥物複合體亦 有由間隔基種類之選擇可以達成醫藥化合物適當游離速度 之特徵。 含本發明之藥物複合體的藥品，通常可以冷;東乾燥 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------,---.--- ^--------^-------I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（Π ) 品等形態填充於藥瓶箄，担 导 &供作為臨床使用時溶解型注射 用或點滴用製劑等非口服和溢 才又藥用製劑，但藥品製劑型陣並 不限於上述形態。製造+汴制如4 ^ 迷製劑時，可使用例如溶解辅劑、
pH調節劑、安定劑箄蚩M 別寻業界可利用之製劑用添加物。上述 藥品之投藥置並益转^努丨丨你 …、特別限制，但通常須考慮構成醫藥化合 物殘基之醫藥化合物的投筚詈道 又聚里 導入藥物複合體中之醫藥 化合物殘基置、病惠無能a — - t狀態及疾病之種類等而決定。例如 在特開平6-87746公報之申讀專利範圍第2項中記载以導 入約6重量％程度比例的抗腫瘤劑殘基之藥物複合體投藥 時’以非口服投藥而言-般對體表面積w每日每次施用 約為0.1至lOOmg程度，最好是】至3〇mg範圍，各重 複3至4週。 本發明另一目的，係提供下列一般式（n)所示之化合 物：R’_丽-Y-CH2-0_CO-Q(式中，R，示】個胺基酸或含2 至8個胺基酸結合成胜肽，而其N末端受保護亦或未受 保護之基；Y示可含取代基之伸苯基；Q示醫藥化合物殘 基）。此化合物中，γ示未取代之對_伸苯基，R，示 Gly-Phe-Gly-或 H-Gly-Gly_Gly_Phe^，醫藥化合物最好 是（1S，9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟- 二氫_9-羥基-4 -甲基- 1只，211_苯并_1毗喃并[3，，4，:6,71蹲〇杂并[1，2_1)1喹啉-1〇，13(9Η，15Η)二酮化合物。 另外，本發明亦提供下列一般式（皿）所示之化合物： A-R-NH-Y-CIVO-CO-X[式中，A示高分子藥物載體；R 不含1個胺基酸之間隔基或2至8個胺基酸結合成胜狀^ ‘紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） . ·----------^---------^ (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（18 ) 間隔基；Y示可具取代基之伸苯基；X示羥基，-〇_m(m 不羥基之保護基）或離去基]。羧基保護基的種類並無特別 限制’可使用業者可以利用者。另外，離去基可以使用任 何具有對羧酸之碳具取代反應之離去基，其例可舉如：氣 原子、溴原子等鹵素原子、乙氧基等烷氧基、對-甲苯續 醯氡基等芳香磺醯氧基等。同時，式（Π)及式（瓜）中之γ、 Q、或R等記號均與式（I)中之說明同義。此式（1[)及式（皿) 所示化合物可使用作製造本發明之藥物複合體的中間物。 [實施例] 以下以實施例具體說明本發明，但本發明之範圍並不 限於下列實施例。 實施例中羧基甲基葡聚糖聚醇之羧基甲基化度（構成 糖殘基之羧基甲基取代度）係將羧基甲基葡聚糖聚醇之鈉 塩轉換為游離型後，再溶解於0.1N氫氧化鈉水溶液，以 〇·1Ν塩酸滴定求得。羧基甲基葡聚糖聚醇可使其鈉塩之水 溶液通過附Bio-Bad AG50W_x 2(H+)型管柱，溶液經冷珠 乾燥後作為樣品使用。將該樣品溶解於預定量之過量〇」N 氳氧化鈉水溶液中，再以酚酞為指示劑以〇 1N塩酸滴定。 樣品之採取量為s(mg)、Ό.1Ν氫氧化鈉水溶液之預量過量 為a(ml)、0.1N塩酸之滴定量為b(mi)時，緩基甲基化度 可以式l3.4(a_b)/[s-58(a_b)l求之。另外，藥物之導入量（重 量％ )可利用藥物之專一性吸收由吸光度分析（362ηπι附近） 求得。此外’凝膠過濾法操作依下列條件進行（管柱：TSK gel G400 PWXL、移動相·· Ό·1Μ NaC1，流速：〇.·/ιηίη， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ΗΘ635 ----------：---裝----I---訂-----I I ---線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1253935
五、發明說明Ο9 ) 管柱溫度：40°C)。 DX-8951係特開平6_87746號公報申請專利範圍第2 項中記載之醫藥化合物[(1S，9S)-1胺基-9-乙基-5-氟_2,3_ 二氩-9-羥基-4_甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3，，4，：6 7]吲 11朵并[1，2-1)]喹琳_10，13(911，1511)-二酮1，-(：〇-〇14951所示 者為該醫藥化合物之1-位的胺基與_co·所示之羧基形成 胜肽鍵結者。因此可以理解DX-895 1係以開環型或閉環 型之一或混合型態的内醋環存在。另外，下述反應式中所 示之糖鏈的組成單位内已導入1個或2個羧基甲基，但在 此所示者係以糖鏈為組成單位之一例，故應可明瞭本發明 之藥物複合體的藥物載體部份並非重複上述組成單位組 成。同時，實施例中之化合物號碼係對應於以下反應式中 化合物之號碼。例如：實施例5中之化合物2a相當於反 應式中之化合物2a，此反應式中之構造式的胜肽部份則 以GGFG之化合物示之（反應式中記載為胜。 --------r---Γ I, --------a叮-------,—Ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 19 300635 1253935 A7B7 五、3务明說明（20 R1° r2o°-
Rlf R2: -H, -CH2COONa, -CH2CO-GGFG-NH
ch3 F
Boc= (CH3)3COCO- 〇 -CHoCO-GGFG-ΝΉ
ch3 F
jX0H
Boc'胜I 太-H.
/r〇H IT0
Boc- mt -HN 3a, 3b, 3c 2a, 2b, 2c
--------L---Γ ·裝--------訂-------！線(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
CH3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 20 310635 1253935 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（21 )
實例1 :羧基甲基葡聚糖聚醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-p-C6H4-CH2-0-C0-DX8951 之合成 將葡聚糠T500(20g，Pharmacia公司製造，分子量500K) 溶解於0.1M乙酸緩衝溶液（ρΗ5·5，2000ml)中，再加入過 碘酸鈉（66.Og)之水溶液（2000ml)。4eC下遮光攪拌10日後， 再加入乙二醇（14.0ml)，並攪拌隔夜。反應液以SM氫氧 化鈉水溶液調整至pH7。再加入硼氫化鈉（2Sg)溶解後， 攪拌隔夜。反應液於冰水浴中以乙酸調整至pH5.5後於4 °C下攪拌1小時，再以SM氫氧化鈉水溶液調整為ρΗ7·5。 得到之水溶液再以Biomax-50膜由限外過濾法脫塩。將不 通過膜之殘留溶液冷凍乾燥後，即得葡聚糖聚醇（10.5g)。 此物質之分子量（凝膠過濾，支鏈澱粉標準）為159K。 將此葡聚糖聚醇（7.5g)加入氫氧化鈉（31.5g)溶於水 (22 5ml)所得之水溶液中，於室溫下溶解。此溶液再於冰 水浴中加入氣乙酸（45g)溶解後，於室溫下反應隔夜。將 --------r---ί‘裝--------訂-------！線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 21 310 必5 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农 A7 B7 五、發明說明（22 ) 此反應液以乙酸調整為pH8後，以Biomax-50膜由限外 過濾法脫塩。未通過膜之殘留溶液經冷凍乾燥後即得羧基 甲基葡聚糖聚醇之鈉塩(S·5g)。此物質之分子量（凝膠過 濾，支鏈澱粉標準）為274K，羧基甲基化度為0.4。 將1·乙氧魏基·2_乙氧基·1，2-二經嗤琳（989mg)加入 Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-〇H(S75mg)、4-胺基苯曱醇 (492mg)、N，N_二甲基甲醯胺（10ml)之混合物中。於室溫 下攪拌反應隔夜後，將反應液減壓乾燥。殘渣以矽膠管柱 層析（溶離液：二氯甲烷：甲醇=96 ·· 4溶液）精製後即得 800mg之化合物（2) 〇 MMR (DMS0-d6)5: 9.73 (s, 1H)3 8.38 (s, 1H)5 8.17 (d, 1H3 J=7.2Hz), 7.91-7.93 (m5 1H), 7.56 (d, 2H, J=8.0Hz), 7.24-7.26 (in, 4H), 7.24 (d, 2H, J~8.0Hz), 7.17-7,20 (m, 1H), 4.50-4.54 (m3 1H), 4.44 (s5 2H)3 3.66-3.94 (m, 3H)， 3.63 (dd， 1H， J:4.8，16.7Hz)， 3.56 (d， 2H， J=5.6Hz)， 3.09 (dd， 1H， J=4.8，13.5Hz)， 2.83 (dd， 1H， J:9.6313.5Hz)， 1.38 (s， 9H)· 化合物（2)(465mg)、二（4-硝基苯基）碳酸酯（522mg)、 二異丙基乙基胺（0.224ml)、4-(二甲胺基）¾啶（10.5mg)及 四氫咲喃（3ml)之混合物於室溫下攪拌反應4日，反應液 再減壓乾燥。殘渣以矽膠管柱層析（溶離液：二氯曱烷： 甲醇=99:1溶液）精製後即得205mg之化合物（3)。 Ή-'NMR (DMS0-d6)(5 : 9.88 (s, 1H), 8.40-8.42 (m, 1H), 8.31 (d3 2H, J=9.5Hz), 8.27-8.28 (m5 1H), 7.92-7.94 (m, 1H), 7.67 (d, 2H3 J=7.9Hz), 7.55 (d, 2H3 J=9.5Hz)， 7.41 (d， 2H， J=7.9Hz)3 7·24-7.26 (m， 4H)， 7.17-7.20 (m， 1H)， 6.93-6.95 (m5 1H)5 5.25 (s3 1H), 4.50-4.53 (m5 1H), 3.77-3.95 (m5 3H)? 3.61-3.66 (m, 1H), 3.55-3.57 (m3 2H), 3.08 (dd, 1H, J=4.8,13.5Hz), 2.83 (dd5 1H， J=9.5，13.5Hz)， 1.38 (s， 9H). -------L----:--.裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 22 310635 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 A. B7 五、發明說明（23 ) 化合物（3)(185mg)、DX-8951之甲烷磺酸塩（152mg)、 1-羥基苯并三唑（54mg)、二異丙基乙基胺（〇.〇93ml)及N，N-二甲基甲醯胺（20ml)之混合物在室溫下攪拌反應2日後反 應液減壓濃縮至乾。殘渣以石夕膠管柱層析（溶離液：二氣 甲烷：甲醇二96:4溶液）精製後，所得之黃色固體再次以石夕 膠管柱層析（溶離液相：含0.5%乙酸之二氣甲烷：甲醇 =97:3溶液）精製後即可得130mg之化合物（4)。 Η-MR (DMS0-d6)<5: 9.84 (s3 1H)，8.40-8.41 (m，1H)，8.19 (d，1H3 J:8.0Hz)3 8.04 (d, 1H, J=8.8Hz), 7.92-7.93 (m, 1H), 7.74 (d5 1H, J^ll.lHz), 7.63 (d3 2H, J~8.0Hz), 7.37 (d, 2H, J=8.0Hz), 7.32 (s, 1H), 7.24-7.26 (in, 4H), 7.16-7.20 (in, 1H), 6.94-6.95 (m3 1H)3 6.48 (s, 1H), 5.46 (d3 1H5 J=16.7Hz)3 5.41 (d3 1H, J=16.7Hz), 5.24-5.34 (m5 3H), 5.08 (sy 2H), 4.49-4.52 (m3 1H), 3.92 (dd, 1H, J=5.6,16.7Hz), 3,85 (dd, 1H, J=5.6,16.7Hz), 3.78 (dd, 1H, J-5.6,16.7Hz), 3.63 (dd, 1H, J=4.8,16.7Hz), 3.54-3.56 (m, 1H), 3.31-3 33 (m, 2H)3 3.08 (dd5 1H，J=4,8，13.5Hz)，2.83 (dd，1H，J=10.3，13.5Hz)’，2.38 (“，3H)，’ 1.86-1.89 (m5 2H)5 1.37 (s3 9H), 0.88 (t, 3H, J=7.2Hz)
Mass (FAB); m/e 797 (M+l) 將化合物（4)(98mg)溶於三It：乙酸（1.5ml)中，放置1.5 小時。反應液中再滴入乙醚（30ml)，濾取沈澱。再以乙醚 洗淨即得lOOmg之化合物（5)。 Ή-NMR (DMS0-d6) (5: 9.86 (s3 1H)5 8.48-8.61 (m, 2H), 8.37 (d3 1H5 J=8.3Hz), 8.00-8.20 (m5 1H), 7.75 (d5 1H5 J=10.7Hz), 7.66 (d5 2H5 J-8.8Hz), 7.41 (d5 2H，J=8.8Hz)，7·37 (s3 1H)，7.24-7.27 (m，4H)，7.17-7.19 (m，1H)，6.48 (s， 1H)， 5.72 (d， 1H， J二19·0Ηζ)， 5.33-5.48 (瓜，3H)， 5.23-5.30 (m3 1H)3 5.08-5·11 (m ,2H)，4.58-4.61 (m，1H)，3.84-3.99 (m，3H)，3:71 (dd，1H， J-4.9,16.6Hz), 3.56-3.66 (m3 2H)3 3.22-3.30 (m5 1H), 3.12-3.18 (m5 1H), 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公爱) II -- 23 310635 ------------I 裝----I---訂-------I ·線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1253935
五、發明說明（24 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3·〇9-3·11 (m，1H)，2.78183 (m，1Η)，2·46_2·57 (m，1H)，2·38 (s3 3H)， 2.18-2.23 (m3 1H), 1.82-1.93 (m5 2H), 0.90 (t3 3H, J-7.3Hz) 化合物（5)(95mg)溶解於水（5ml)及甲醇（l〇ml)中。再 將上述所得之羧基甲基葡聚糖聚醇之鈉塩（6 0 Omg)溶於水 (10ml)及甲醇（2〇mi)之溶液加入此溶液中。再加入水溶性 碳化二亞胺（26mg)、1_羥基苯并三唑（i5mg)後，以〇.1當 量氳氧化鈉水溶液調整為pH7.0。於室溫下攪拌2小時後， 再加入水溶性碳化二亞胺（13mg)，室溫下反應隔夜。將水 (5〇t)ml)加入反應液中，再以限外過濾膜10K(Filtron公司 製造）限外過濾。不通過膜之殘留溶液再以〇. 1N氫氧化鈉 水溶液調至pH9，再通過過濾膜（〇.l6/zm，Filtron公司製 造）。通過之溶液再以Biomax-50膜以限外過濾法脫塩。 不通過膜之殘留溶液再以Millipore濾膜（0.22私m)過濾 後，冷凍乾燥即得490mg之化合物（6)。將本化合物溶於 〇·1Μ氯化鈉水溶液後，以GPC(管柱：東曹-TSK Gel PW-4000X1溶劑：O.lMNaCl，流速： 0 8mi/min)分析之結果， 及本化合物之紫外線吸收光譜（0.1M Tris緩衝液， pHlOO，0.2Omg/ml)各示於第1圖及第2圓。本化合物之 醫藥化合物殘基的含量根據在0.1M Tris緩衝液 (ρΗ10·0) :乙腈=7:3中366nm下之吸光度定量為2.3% (W/W) 〇 實例2 :藥物複合體上醫藥化合物之游離 將實例1中所得之藥物複合體於37t：之Meth A(murine fibrosarcoma Meth A)均質細胞中或緩衝溶液中 :1·裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 24 ^0635 1253935 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（25 ) 溶解（378 // g/ml)，經20小時後定量游離之DX-8951。對 照化合物則使用未介由對-胺基苄氧基羰基結合間隔基與 DX-S951所製成之化合物。結果示於表1中。所示之藥物 游離量係游離藥物量對使用藥物複合體中之藥物量百分比 (%)。本發明之藥物複合體可在弱酸性之均質細胞中快速 游離，但在緩衝液中則幾乎不游離。另一方面，對照化合 物在弱酸性之均質細胞中只有極少量游離，但在緩衝液中 則幾乎完全不游離。 表 1 反應系 實例1之化含#r 肾照化合物 Meth A均質細胞(ρΉ4.5) 37.7 0.106 Meth Α均質細胞（pH5.5) 3«.1 0.034 Meth A均質細胞(Ph6.5) 4.25 0.000 緩衝液(ρΉ4.5) 0.190 0.000 緩衝液（ρΗ5.5) 0.178 0.000 緩衝液(ρΗ6·5) 0.171 0.000 緩衝液(ρΗ7·5) 0.138 —— 大白鼠血衆 0.186 —— —:未測試 實例3 : Meth A植癌大白鼠對實例1藥物複合體之最大 耐受量（MTD，Maximum Tolerated Dose) 將Meth A細胞移植於BALB/C系大白鼠使其成Meth A植癌大白鼠，再於第20日以實例1之藥物複合體單次 投藥。投藥後定時測定體重、觀察有無因毒性死亡，將最 大體重減少率、死亡率整理於表2中。所示之投藥量為換 算成DX-S兮51之無水游離鹼的重量。在以2.5mg/kg投藥 --------ί----T!裝--------訂--------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 25 310635 1253935 A7
五、發明說明（沉） 時只有輕微之體重減少，而以IQmg/kg投藥時則可觀察 到全體受毒死亡，因此可知實例1之MTd為5至 7.5mg/lcg 〇 / // . // , // nw 2 2 0 0 0 表 2 合物 投 I量BWLmaxX%)陶 Nb 對照組 0 <& 例1 30 17.9122] 10 32.8J26] 2.5 2.2{22] 0.625 <α 0.156 <0 a 體重之最大藏少率（括I内為測得最大藏少率之^ ) <0示未觀察有減少體重。 15 死亡大白鼠/使用大白鼠 實例4 :實例1藥物複合體之抗腫瘤活性 將 Meth A 細胞（murine fibrosarcoma Meth A)移植於 BALB/c系大白鼠使其成]Vteth A植癌大白鼠，在移植後 第7 a以實例1之藥物複合體單次投藥。再於笫21曰測 定腫瘤之重量，評估對腫瘤之抑制效果及毒性。結果示於 表3中。表中*示德奈特測定之有意差（***ρ<〇.〇〇ι， "P<0.01)，投藥量所示為DX-8951換算為無水游離鹼之 重量，IR示腫瘤縮小率。可知實例1之藥物複合體依用 量可發揮腫瘤縮小效果。 -----------：--”裝--------訂-------•線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 26 310635 1253935 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（27 ) 表 3 化合物 投藥量 (mg/kg) 腫瘤重量 平均值(g) IR(%) BWLmaxa (%)_】 Nb 對照組 & 2.315ib0.366 & <σ 0/6 實例1 7.5 0纖±0搬林* 100 24.8[15] 2/6 0/6 (本發明） 5 0 卿 ±0·004辦 99 2.9[13] 2.5 0.061 ±0.016*林 97 <0 0/6 1.25 0.610土0.180*** 74 0.3[8] 0/6 0.625 1.247土0.280*** 46 <0 0/6 體:重之最大威少率（括弧內為齔察有最九減少之曰 死亡大白鼠/使用大白鼠 實例5:使用甲酸為脫保護劑合成羧基甲基葡聚糖聚醇-Giy_Gly-Phe:Gly_NH-p-C6H4-CH2-0_C0-DX8951 將葡聚糖T500(20g，Pharwacia公司製造，分子量500K) 溶解於ϋ·1Μ乙酸緩衝液（PH5.5，2000ml)中，再加入過碘 酸鈉（66.0g)之水溶液（2000ml)。遮光並於4°C下攪拌10曰 後’再加入乙二醇（14.0ml)，搜拌膈夜。再以8M氫氧化 納水溶液調整反應液為PH7。再加入硼氫化鈉（28g)溶解 後’攪拌膈夜。反應液以冰冷卻，再以乙酸調整為pH5.5 後在4°C攪拌1小時，再以8M氫氧化鈉水溶液調整為 ρΗ7·5。所得水溶液再以Bi〇max-50膜之限外過濾法脱塩。 將不通過膜之殘留溶液冷凍乾燥，即得葡聚糖聚醇 (10.5g)。該物質之分子量（凝膠過濾、支鏈澱粉標準）為 159K 〇 在該葡聚糖聚醇（7·5g)中加入以水（225ml)溶解氫氧化 -----------1 — ·裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 27 340d35 1253935 A7 ~~-----^___ 五、發明說明〇 ) (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 鈉（31.5g)所得之水溶液，於室溫溶解。再於冰浴下將單 氣乙酸（45g)加入此溶液中，室溫下反應隔夜。此反應液 以乙酸調整至PH8後，以Biomax-50膜行限外過濾法脫 塩。不通過膜之殘留溶液經冷束乾燥即得羧基甲基葡聚糖 聚醇之鈉塩（S.5g)。此物質之分子量（凝膠過濾，支鏈澱粉 標準）為274K’羧基甲基化度為〇4。將1-乙氧幾基_2-乙 氧基-1，2·二經喹琳（989mg)加入 Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-OHCWSmg) 、 4·胺基 苯甲醇（492mg) 、 N，N-二甲基 甲醯胺 (10ml)之混合物中。室溫下攪拌反應隔夜後，反應液減壓 濃縮至乾。殘渣經矽膠管柱層析（溶離液··二氣甲烷：甲 醇=96:4溶液）精製後即得化合物2a(800mg)。 H-NMR (DMSO-d6)d: 9.73 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.17 (d, 1H, J，7.2Hz)5
7.9卜7.93 (m, 1H)，7·56 (d，2H，J:8.0Hz), 7·24-7·26 (m，4H)，7.24 (d，2H J=8.0Hz), 7.17-7.20 (m, 1H), 4.50-4.54 (m3 1H), 4.44 (s, 2H), 3.66-3.94 (m 3H)，3.63 (dd，1H，J二4·8, 16·7Ηζ)，3·56 (d，2H，J=5.6Hz)，3.09 (dd，1H3 J:4 8 13.5Hz)， 2·83 (dd， 1H， J=9.6, 13·5Ηζ)， 1.38 (s， 9H)· ’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 化合物2a(465mg)、二（4-硝基苯基）碳酸塩（522mg；)、 二異丙基乙胺（0.224ml)、4-(二甲胺基）毗啶（10.5mg)及四 氫呋喃（3ml)之混合物於室溫下攪拌反應4日，反應液再 減壓濃縮至乾。殘渣經矽膠管柱層析（溶離液：二氣曱烷： 甲醇=99··1溶液）精製後即得化合物3a(205mg)。
Ή-NMR (DMS0-d6)(5: 9·88 (s，1H)，8·40-8.42 (m，1H)，8.31(d，2H，J=9.5Hz) 8.27-8·28 U，1H)，7.92-7.94 (瓜，1H)，7·67 (d，2H，J二7·9Ηζ)，7.55 (d，2H J=9.5Hz)，7.41 (d，2H，J=7.9Hz)，7·2[7·26 (m, 4H)，7·17-7·20 (瓜，1H)’ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 28 310635 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（29 ) 6.93-6.95 (m5 1H)5 5.25 (S) 1H)5 4.50-4.53 (m, 1H), 3.77-3.95 (m, 3H), 3.61-3.66 (m，1H)，3.55-3.57 (m3 2H)，3.08 (dd，1H，J二4.8, 13.5Hz)，2.83 (dd， 1H, J=9.5, 13.5Hz)3 1.38 (s, 9H). 將化合物3a(lB5mg)DX-S95 1之甲烧磧酸塩（1 52mg)、 1-羥基苯并三唑（5411^)、二異丙基乙胺（〇.〇931111)及1^，>1-二甲基甲醯胺（20ml)之混合物在室溫下攪拌反應2日，反 應液減壓乾燥至乾。殘渣再以石夕膠管柱層析（溶離液··二 氯曱烷：甲醇=96:4溶液）精製。所得之黃色頂體再次以矽 膠管柱層析（溶離液：含0.5%乙酸之二氯甲烷：甲醇=97:3 溶液）精製後即得化合物4a(130mg)。 Ή-腿 _(^)心 9·84 (s3 1H)，8暑8.41 (m，1H)，8.19 (d，1H，J:8.〇Hz)， 8·04 (d，1H，J=8.8Hz)，7·92-7·93 (m，1H)，7.74 (d3 1H，7·63 (d， 2H，J=8.0Hz), 7.37 (d3 J=8.0Hz)，7·32 (s，1H)，7.24-7.26 (m，4H)， 7.16-7.20 (m, 1H), 6.94-6.95 (ιη5 1H), 6.48 (s, 1H), 5.46 (d, 1H, J^16.7HZ) 5.41 (d，1H，J=16.7Hz)5 5.24-5·34 (瓜，3H)，5.08 (s，2H)，4.49-4.52 1H) 3·92 (dd3 1H，J=5.6, 16·7Ηζ)3 3·85 (dd3 1H，J=5.6, 16·7Ηζ)，3·78 (dd，m J二5.6, 16.7Hz)，3.63 (dd，1H，J=4.8, 16·7Ηζ)3 3.54-3.56 (m5 1H)，3·3卜3 33 (m，2H)，3.08 (dd3 1H，J=4.8, 13·5Ηζ)，2.83 (dd，1H，J:10.3, 13·5Η2)3 2 38 (s， 3H), 1.86-1.89 (m， 2H)， 1.37 (s， 9H)3 0.88 (t5 3H， J:7.2Hz)· 將化合物4a(2OOmg)溶於甲酸（4ml)中，放置2小時。 再將反應液滴入乙醚（40ml)中。再以乙醚洗淨沈澱物gp得 化合物 5a(198mg)。 Ή-NMR (D_-ds)(5: 9·90 (s，1H)，8.48-8.50 U，1H)，8.33-8.36 (心⑻， 8.27-8.30 (m, 2H), 8.00-8.08 (m, 1H), 7.74-7.76 (m, 1H), 7.63 (d, 1H, J-8e2Hz)3 -------·---l·!裝--------訂-------——線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 29 3l〇eas 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（30 ) 7.31-7.39 (m, 3H)5 7.21-7.25 (m3 5H), 7.15-7.20 (m5 1Η)/5.43-5.48 (m5 2H)5 5·22-5.33 (in，3H)，5.08 (s，2H)，4·51-4·53 (瓜，1H)，3,93 (dd, 1H3 16·5Ηζ)， 3.80-3·90 (瓜，2H)， 3.64-3·72 (瓜，3H)， 3.20-3.25 (m， 1H)， 3.09-3.13 (m，1H)3 3·0:7 (dd3 1H，J:4丄 13·8Ηζ)3 2·81 (dd3 1H，J:10丄 13.8Hz)，2.37 (s， 3H)， 2.15-2.22 (m， 2H)， 1.82-1.88 (m， 2H)3 0.88 (t， 3H， J:7.3Hz) 將化合物5a(190mg)溶解於水（5ml)及甲醇（10ml)中。 再將實例1所得之羧基甲基葡聚糖聚醇之鈉塩（l.Og)溶於 水（10ml)及甲醇（5ml)中之溶液加入此溶液中。再加入1-羥基苯并三唑（44mg)、1-乙基·3-(3·二甲基胺基丙基）-碳 化二亞胺（39mg)後，以0.1當量之氫氧化鈉水溶液調整為 ρΗ7·0。室溫下攪拌3小時後，再加入1-乙基-3-(3-二甲 胺基丙基）碳化二亞胺（22mg)。室溫下攪拌1.75小時後， 再加入1-乙基-3·(3·二甲胺基丙基）碳化二亞胺（llmg)，再 於室溫下反應隔夜。反應液以0.1當量氫氧化鈉水溶液調 整為ρΗ8·9後，以Biomax-50膜限外過濾法脫塩。不通過 膜之殘留溶液再以Millipore過滤膜（0.22从m)，過濾後經 冷凍乾燥即得化合物6a(700mg)。第3圖及第4圖所示各 為本化合物溶解於〇·1Μ氣化鈉溶液後，以GPC(管柱： 東曹 _TSK Gel PW-4000XL、溶劑：含 20% 乙腈之 0.1M NaCl 水溶液、流連：〇.8ml/min)分析之結果，及本化合物之紫 外線吸收光譜（〇·1Μ Tris緩衝液，pH9.0，0.10mg/ml)。本 化合物中醫藥化合物殘基之含量，根據其在01M Tris緩 衝液（pHl 0·0)··乙腈=7:3中之366nm吸光度定量為3.3% (W/W) 〇 實例6 :以甲酸為脫保護劑合成羧基甲基葡聚糖聚醇-Gly- -------------•裝 i 1 ! II I 訂--— — — — --線 C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 30 310635 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（31 )
Gly，Gly_Phe-NH-p-C6H4-CH2~*〇-CO-DX895 1 將葡聚糖T500(20g，Pharmacia公司製造，分子量500K) 溶解於0.1M乙酸緩衝溶液（pH5.5, 2000ml)中，再添加過 碘酸鈉（66.0g)之水溶液（2000ml)。再於4T：下遮光攪拌10 曰後，添加乙二醇（14.Omi)，攪拌隔夜。反應液再以8M 氫氧化鈉水溶液調整為pH7。再加入硼氫化鈉（28g)，溶 解後攪拌隔夜。反應液以冰冷卻且以乙酸調整為ΡΗ5·5， 於4下攪拌1小時後，以8Μ氫氧化鈉水溶液調整為 ρΗ7.5。所得水溶液以Biomax-50膜經限外過濾法脫塩。 不通過膜之殘留液冷凍乾燥後即得葡聚糖聚醇（10.5g)。 此物質之分子量（膠體過濾，支鏈澱粉標準）為159K。 將氫氧化鈉（3 1.5g)溶於水（225ml)所得之水溶液加入 此葡聚糖聚醇（7.5g)中，室溫下溶解，在冰冷卻下將單氣 乙酸（45g)加入此溶液中溶解後，再於室溫下反應隔夜。 此反應液以乙酸調成ρΗ8後，以Biomax-50膜經限外過 濾法脫塩。不通過膜之殘留溶液經冷凍乾燥，即得羧基甲 基葡聚糖聚醇之鈉塩（8.5g)。此物質之分子量（凝膠過濾、 支鏈澱粉標準）為274K，羧基甲基化程度為0.4。 將1-乙基-3-(3-二基胺基丙基）-碳化二亞胺（571 mg)加 入 Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-OH(lOOOmg)、4-胺基苯甲基醇 (324mg)、1-羥基苯并三唑（464mg)、N，N-二甲基甲醯胺 (10ml)之混合物中。再於室溫下攪拌反應隔夜，反應液減 壓乾燥。殘渣以矽膠管柱層析C溶離液：二氣甲烷：甲醇 =921溶液）精製後即得化合物2b(1220mg)。 -----------:1 I裝--------訂----------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 31 310635 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 A7 ----------B7___ 五、發明說明（32 ) lH-NMR (DMS0-d6)d : 9.91 (s5 1H), 8.25 (d5 1H, J-3.7Hz)5 8.08-8.20 (m5 2H), ^.54 (d3 2H3 J=8.3Hz), 7.25-7.29 (m, 4H), 7.23 (d, 2H5 J-8.3Hz), 7.16-7.21 U，1H)，6.95 (t，1H, J=5.9Hz)，5.08 (d5 1H，J=5.9Hz)，4.62-4·67 (m5 1H), 4.44 (d3 2H， J:5.9Hz)， 3.74 (dd， 1H， J:4.9, 5.4Hz)， 3.65 (dd， 1H， J:5.9， 16.6Hz)，3.59 (d3 2H，J=5.4Hz)，3.07 (dd，1H，J=5.4, 13.7Hz)，2.90 (dd, 1H， J=9.3， 13·7Ηζ)， 1.37 (s， 9H)· 化合物21)(116〇11^)、二（4-硝基苯基）碳酸塩（13 0311^)， 一異丙基乙胺（0.555 ml)、4-(二甲胺基）哦咬（2 6 mg)及四氫 咲喃（10ml)之混合物於室溫下攪拌反應4曰，反應液減壓 濃縮至乾。殘渣以矽膠管柱層析（溶離相：二氣甲烷；甲 醇=96:4溶液）精製後即得化合物3b(650mg)。 lH-NMR (DMS0-d6)(5: 10.07 (s, 1H)5 8.31 (d, 1H, J=8.8Hz), 8.24-8.25 (m3 1H), 8.09-8.12 (m，2H)，7.65 (d，2H，J=8.3Hz)，7.56 (d，2H，J=8.8Hz)，7·42 (d， 2H, J-8.3Hz)5 7.27-7.28 (m, 5H), 7.18-7.19 (m3 1H), 6.95 (s5 1H)5 5.68-5.73 (m5 1H), 5.25 (s, 2H), 4.64-4.69 (m, 1H), 3.58-3.79 (m, 6H), 3.08 (dd, 1H, J二4·9，13·7Ηζ)，2·91 (dd，1H，J=9.8，13·7Ηζ)，1·37 (s5 9H). 化合物3b(5 7 6mg)、DX-8951之甲烷磺酸塩（497mg)、 1-羥基苯并三唑（113111§)、二異丙基乙胺（〇.3031111)及]^，：^- 二甲基甲醯胺（10ml)之混合物於室溫下攪拌反應隔夜後， 反應液減壓濃縮至乾。殘渣再以矽膠管枉層析（溶離液： 含0.5%乙酸之二氣甲烷：甲醇=92:8溶液）精製後即得化 合物 4b(290mg)。 %醒（DMSO-dJ(5: 10.01 (s3 1H)，8·24 (d, 1H, J=9.8Hz)，8.09-8.13 (m，2H)， 8·05 (d，1H，J=8.8Hz)，7.74 (d，1H，J=10.7HZ)，7.61 (d，2H，J=8.3Hz)，7·37 ------------—裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 32 3^106^5 1253935 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（33 ) (d5 2H5 J^8.3Hz)5 7.32 (s, 1H), 7.24-T.27 4H)3 7.17-7.19 (m5 1H), 6.94 (s， 1H)， 5.47 (d3 1H， J=16.1Hz), 5.42 (山 1H， J=16.1Hz)， 5.31 (d， 1H， J=19.5Hz)3 5.27-5.29 (m3 1H), 5.24 (d5 1H, 5·09 2H^ 4.62-4.67 (m, 1H), 3.73-3.78 (m, 2H), 3.66 (d, 1H, 3*63 (d^ 1H^ J=5.4Hz), 3.53^3.59 (., 2H), 3.23-3.27 (,5 2H), 3.〇T 1H，^4.9, 13.7Hz), 2.90 (dd5 1H，J=9.8, 13.7Hz)，2.37 (s，3H)，2.17-2.23 (m，2H)，111.90 (m，2H)，1.36 將化合物4b(200mg)溶於甲酸(4ml)中’放置2小時。 將此反應液再滴入乙醚（40ml)中。沈殿物以乙鍵洗淨後即 得化合物5b(198mg)。 !H-NMR (DMS0-d6)(5: 10.06 (s5 1H)5 8-20-8.41 (m, 3H), 8.07 (d, 1H, J=8.7Hz), 7.75 (d3 1H, J=7.8Hz), 7.61 (d, 2H, J=8.3Hz), 7.37 (d, 2H3 J=8.3Hz)3 7.32 (s3 1H)，7.21-7.30 (m，5H)，7.18-7.20 (m，1H)，5.41-5.48 (瓜，2H)3 5.23-5.33 (m，3H)，5.08 (s，2H)，4.62-4.65 (m，1H)，3·77 (s，2H), 3.72-3.76 (m，1H)， 3.63 (dd，1H3 J=5.0, 16.5Hz)，3.58-3.60 (m，1H)，3.40 (dd, 1H，J=6.9, 13.7Hz)， 3.20-3.23 (m, 1H), 3.10-3.13 (m, 1H), 3.06 (dd, 1H, J=5.0, 13.7Hz), 2.90 (dd, 1H3 J=9.6, 13.7Hz)3 2.37 (s, 3H)5 2.15-2.22 (m, 2H), 1.84-1.90 (m3 2H), 0.88 (d， 1H， J=6.9Hz). 將化合物5b(100mg)溶於水及甲醇（10ml)中。再將此 溶液加入實例1所得之羧基甲基葡聚糖聚醇之鈉塩 (llOOmg)溶於水（10ml)及甲醇（20ml)之溶液中。再加入1β 經基苯并三唑（15mg)、1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基）_碳化 二亞胺（26mg)後，以〇·ΐ當量之氫氧化鈉水溶液調為 ρΗ7·0。於室溫下攪拌2小時後，再加入1-乙基-3-(3•二 甲胺基丙基）-碳化二亞胺（25mg)。室溫下攪拌丨5小時後， 再加入1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基）_碳化二亞胺（1311^)， ------------—裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 33 310635 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 A7 B7 五、發明說明（34 ) 於室溫下反應隔夜。以0.1當量氫氧化鈉水溶液調整反應 液之pH為8.5後，再以Biomax-50膜行限外過濾法脫塩。 不通過膜之殘留溶液以Millipore濾膜（0.22//m)過濾後， 再冷凍乾燥之。所得之非定形物，再以Sep_Pak C1S管柱 組（瓦特茲公司製造）及Bio-Rad AG50W-X8(Na+型）管枉精 製後再以Biomax-50膜行限外過濾法脫塩。不通過膜之殘 留溶液再以Mil lip ore濾膜（0.22 // m)過濾後，經冷;東乾燥 後即得合化物6b(405mg)。本化合物中醫藥化合物殘基之 含量根據在〇·1Μ Tris緩衝液（ρΗ10·0):乙腈=7:3中以 366nm吸光度定量之結果為1.7% (W/W) 〇 實例7 :使用甲酸為脫保護劑，合成羧基甲基葡聚糖聚醇 _Gly_Gly-NH-p-C6H4-CH2-0-C0-DXS951 將葡聚糖T50t)(20g，Pharwacia公司製造，分子量500K) 溶解於〇· 1M乙酸緩衝液（pH5.5，2000ml)中，再加入過破 酸鈉（66.0g)之水溶液（2000ml)。4°C下遮光攪拌10日後， 再加入乙二醇（14.0ml)攪拌膈夜。反應液以8M氫氧化鈉 調整為pH7。加入硼氫化鈉（28g)並溶解後攪拌隔夜。反 應液於冰浴中以乙酸調整為ρΗ5·5，再於4°C下攪拌1小 時後，以8M氫氧化鈉水溶液調整為pH7.5。所得之水溶 液以Biomax-50膜行限外過濾法脫塩。不通過膜之殘留溶 液冷凍乾燥後，即得葡聚糖聚醇（10.5g)。此物質之分子 量（凝膠過濾，支鏈澱粉標準）為195K。 將氫氧化鈉（3 1.5g)溶於水（225ml)中所得之水溶液加 入該葡聚糖聚醇（7.5g)_，室溫下使其溶解。此溶液於冰 ------------’《裝--------訂-------.—線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 34 3-106S5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 A7 B7 五、發明說明（35 ) 浴下加入單氯乙酸（45g)並溶解後，於室溫下反應隔夜。 此醋酸調整此反應液為PH8後，再以Biomax-50膜行限 外過濾法脫塩。不通過膜之殘留溶液經冷凍乾燥後即得羧 基甲基葡聚糖聚醇之鈉塩（8·5g)。此物質之分子量（凝膠過 濾，支鏈澱粉）為274K，羧基甲基化度為〇·4。 將1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基）_碳化二亞胺（4·05g)加 入 Boc-Gly-Gly-OH(2.3g)、4-胺基苯甲醇（2.0g)、1-羥基 苯并三唑（3.29g)、Ν，Ν-二甲基甲醯胺（20ml)之混合物中。 於室溫下攪拌反應隔夜後，反應液減壓乾燥。殘渣再以矽 膠管柱層析（溶離液：二氣甲烷；甲醇=94:6溶液）精製後 即得化合物2c(2.9g)。 Ή-ΝΜ (DMS0-d6)c5: 9.75 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.54 (d, 2H3 J^8.3Hz), 7.23 (d，2H，J=8.3Hz)，7.07 (s，1H)，5.09 (t，1H，J二8·6Ηζ)，4.44 (d3 2H，J=8.6Hz)， 3.88 (s， 2H)， 3.60 (s， 1H)， 1.39 (s， 9H). 化合物2c(1.0g)，二（4-硝基苯基）碳酸酯（2.72g)，二 異丙基乙胺（1.17ml)，4-(二甲胺基）fl比啶（55mg)及四氫呋喃 (50ml)之混合物於室溫下攪拌反應3曰後，將反應液減壓 濃縮至乾。殘渣再以矽膠管柱層析（溶離液：二氣甲烷： 甲醇=96··4溶液）精製後即得化合物3c(376mg)。 lH-NMR (DMS0-d6)(5: 9.92 (s5 1H)3 8.31 (d, 1H3 J=9.3Hz)3 8.14-8.25 (m3 2H)3 7·65 (d，2H，J:8-3Hz)3 7·56 (d，2H3 J=9.3Hz)，7·41 (d5 2H，J:8.3Hz)，7.05 (d，1H，J=5.4Hz)，5.25 (s，2H)，3.91 (d3 2H，J=4.9Hz)，3·61 (d，2H，村.他）， 1.40 (s， 9H). 化合物3c(33Smg)、DX-8951之甲烷磺酸塩（400mg)、 --------------,.裝--------訂-------Ί_線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 35 310635 A7 1253935 B7__ 五、發明說明（36 ) 1-羥基苯并三唑曱苯（lt)9mg)、二異丙基乙胺（0 243ml)及 N，N-二甲基甲醯胺（20ml)之混合物於室溫下授拌反應隔夜 後，反應液減壓濃縮至乾。殘渣以矽膠管柱層析（溶離液·· 含0.5%乙酸之二氯甲烷：甲醇=94:6溶液）精製後即得化 合物 4c(460mg)。 [H-MR (DMS0-d6)(5 : 9·84 (s，1H)，8.13-8.15 (m，1H)，8.04 (d3 1H3 J:8.8Hz)， 7.73 (d, 1H, J-10.7Hz), 7.60 (d, 2H, J-8.3Hz)3 7.37 (d, 2H3 J-8 3Hz) 7 32 (s3 1H)，7·04 (d，1H，J=5.9Hz)，6·48 (s，1H)，5.46 (d，1H, J=16.1Hz)，5·41 (d5 1H, J=16.1Hz), 5.31 (d, 1H, J=19.0Hz), 5.26-5.29 (m5 1H)3 5.24 (d5 1H, J=19.0Hz)3 5.08 (s, 2H), 3.90 (d5 2H, J=4.9Hz), 3.61 (d3 2H, J=5.9Hz) 3.07-3.12 (m, 2H), 2-37 (s, 3H), 2.15-2.23 (m, 2H), 1.83-1.92 (m, 2H)3 1.39 (s， 9H)， 0.89 (d， 1H， J=7.3Hz)· 化合物4c(100mg)溶於甲酸（4ml)中，放置2小時。再 將反應液滴入乙醚（40ml)中。沈澱物以乙醚洗淨後即得化 合物 5c(98mg)。 Η-舰（DMSO-dJ (5: 10.02 (s，1H)3 8.24-8.30 (m，3H)3 8.05-8.09 (m，1H) 7.73-7.76 (m3 2H)3 7.59 (d5 2H3 J-6.6Hz)3 7.34-7.38 (m3 3H), 6.51 (s5 ih) 5.41-5.49 (m? 2H), 5.24-5.31 (m, 3H)5 5.08 (s, 2H), 3.95 (s3 ZE)\ 3.28 (s, 2H)3 313.14 (m5 2H)，2·39 (s，3H)，2.U-2.28 (瓜，2H), 1.86-1·90 (m，2队 0.90 (d5 1H, J=6.0Hz). 3 將化合物5c(95mg)溶解於水（15ml)及甲醇（15ml)中。 再將實例1所得之羧基甲基葡聚糖聚醇之鈉塩（1〇〇〇mg)溶 於水（15ml)及甲醉（15ml)中之溶液加入此溶液中。再加入 1-羥基苯并三唑（28mg)、1-乙基_3-(3-二甲胺基丙基）_碳化 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G X 297公爱）" -------- 弘 34船5 ------------1裝--------訂--------—線*. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1253935 A7 B7 五、發明說明（37 ) 二亞胺（53mg)後，以0.1當量氫氧化鈉水溶液調整為 口117.0。室溫下攪拌3小時後，再加入1-乙基-3-(3-二甲 胺基丙基）-碳化二亞胺（26mg)。室溫下攪拌1.5小時後， 再加入1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基）-碳化二亞胺（1211^)， 室溫下反應隔夜。以0.1當量之氫氧化鈉水溶液調整反應 液為pH8.5後，以Biomax-50膜行限外過濾法脫塩。不通 過膜之殘留溶液以Millipore濾膜（0.22 " m)過濾後，冷凍 乾燥。所得之非定形物，再以Sep-Pak C18管柱組（瓦特茲 公司製造）及Bio-Rad AG50W-XS(Na+型）管柱精製後，再 以Biomax-50膜行限外過濾脫塩。不通過膜之殘留溶液再 以Millipore濾膜（0.22//m)過濾後，冷凍乾燥即得化合物 6c(58 8mg)。第5圖及第6圖所示分別為本化合物溶解於 0.1M氯化鈉水溶液中，以GPC(管柱：東曹-TSK Gel PW· 40Ot)XL，溶劑：含20%乙腈之0.1M NaCl水溶液、流速： 0.8ml/min)分析之結果及本化合物之紫外線吸收光譜 (Ό1Μ Tris緩衝液，pH9.0，0.12mg/m卜本化合物之醫藥 化合物殘基之含量根據其在0.1 M Trie緩衝液（pH 10.0): 乙腈=7:3中366nm下之吸光度定量為3·3% (W/W)。 實例8 :藥物複合體中醫藥化合物之游離 將實例5、6及7所得之藥物複合體溶解於371之Meth A(murive fibrosarcoma Meth A)均質細胞中或緩衝液中，20 小時後再定量游離之DX-S951。比較化合物則使用間隔化 合物與DX-S951不介由對-胺基节氧基羰基結合所製造之 化合物。表4所示為結果。所示之藥物游離量為游離之藥 -----------Γ -裝--------訂-------—線 (請先閱讀背面之沒意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 37 310635 A7 1253935 B7____ 五、發明說明（38 ) 物量對使用之藥物複合體中的藥物量百分比（％ )。實例5、 6、及7之藥物複合體在弱酸性之均質細胞中可快速游離， 但在緩衝液中幾乎不游離。另一方面，比較化合物在弱酸 性之均質細胞中只有極少量游離，但在緩衝液中則完全不 游離。 表 4 實例5 實例6 實例7 對照化合物 Meth A均質細胞(ρΗ4·5) 110.69 15.48 0.44 0.85 Meth Α均質細胞(pH5·5) 110.31 4.97 0.37 0.12 Meth A均質細胞(Ph6.5) 42.71 1.78 0.55 0.01 緩衝液(pH4.5) 0.79 0.12 0.15 0.00 緩衝液(pH5.5) 0.71 0.19 0.12 0.00 缓衝液(pH6.5) 0.8 0.23 0.16 0.00 血黎 0.13 0.51 0.12 0.00 實例9 : Meth A植癌大老白鼠對實例5、實例6及實例7 之藥物複合體的最大耐受量（MTD，Maxium Tolerated Dose) 將Meth A細胞移植於BALB/C系大白鼠製作成Meth A植癌大白鼠，於第13日時單次投藥實例5、實例6及 實例7所得之藥物複合體。投藥後，定時測定體重、觀察 有無因毒性死亡，最大體重減低率、死亡率整理於表5。 投藥量所示為換算成DX_8951之無水游離鹼的重量。 ------------裝--------訂-------——線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 38 310635 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（39 ) 表 5 化合物 投藥髮 BWLmax^fday} 對照組 0 <0 例5 10 27.1[1«] 5 28.6[18] 2.5 28.9[20] 1.25 5.0{18] 0.625 2.0{14] 例6 10 27.1118] 5 24.0[1«] 2.5 22.1[20] 1.25 2.4[14] 例7 30 14.6116] 20 14.2116] 10 13.7[16] 5 25.4{18] 2.5 31.01211 ώτ 3 33333333333333 N////// / // // // / ο 3330033003333 a 體重之最大減少率（括弧内為測得最大減少之曰） <0示為未觀察有體重減少組。 b 死亡大白鼠/使用大白鼠 由投藥量所觀察之體重減輕及死亡率推算各複合體之 MTD如下： 表 6 MID(mg/kg) 實例5 1.25-2.5 實例6 2.5 實例7 <2.5 實例5所得之藥物複合體的MTD為實例1所得藥物 複合體約為MTD(參照實例3)的1/3，使用實例1所得藥 物複合體時，其相關為DX495 1的游離率（參照實例2之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------—裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 39 1253935 A7 _______B7__ 五、發明說明（40 ) 表）為使用實例5所得藥物複合體時DX-8 951之游離率約 1/3(參照實例8之表） 實例10 :實例5及實例6所示複合體之抗腫瘤活性 將Meth A細胞移植於Balb/C系大白鼠製作成Meth A植癌大白鼠，在移植後第7曰時單次投藥實例1，實例 5及實例6所示之藥物複合體。於第21日時測定腫瘤之 重量’評话其對腫瘤之抑制效果及毒性。結果示於表中。 表中，*示德奈特有意差（***?<0 00卜**1)<〇〇卜*1)<〇〇5)， 投藥量所示為換算為DX-8951之無水游離鹼的重量ir示 腫瘤之縮小率。顯示實例5及實例6所示之藥物複合體可 依用量發揮腫瘤之縮小效果。 另外之相關為實例5所示藥物複合體之最小有效用量 為實例1所示藥物複合體最小有效用量之約1/3，腫瘤均 質細胞中DX-895 1之游離率（參照實例2及實例8之表）及 Meth A受癌大白鼠之MTD(參照實例3之表及實例9之表） 可觀察具有同樣之不相關性。 ------------.}裝-------—訂！ 線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 S10635 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1253935 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（41 ) 表 7 化合物 投藥量 腫瘤重量平均值(g) IR(%) BWLmax^ Nb 對照組 0 2.64 士 0.417 0 <0 0/6 實例1 7.5 Ό.005士 0.003*〃 100 26·φ6] 2/6 5 0.004 土❹力仍*# 100 4·0[13] 0/6 2.5 0·031±0·014 … 99 <0 0/6 1.25 0.775±(Χ207*** 71 <0 0/6 0.625 1.489±0.215** 43 <0 0/6 實例5 1.S75 0.011 ±0.003#* 100 12.3[13] 0/6 L25 G.G1&土&.004*** 100 <0 0/6 0.625 0.328土0.164*** 88 <0 0/6 03125 1.128-±0.173*** 57 <α 0/6 0.15625 2.394±0.231 9 <0 0/6 實例6 2.5 0.012 土 0.04*^ 100 25.9[13] 3/6 1.25 G.G16土G.0(^*** 99 <0 0/6 0.625 0.272±0.066*** 90 <0 0/6 Q3125 1.419土0.163*** 46 <0 0/6 0.15625 1·645±0·191* 37 <0 0/6 a 體重之最大減少率（括弧内為觀測最大減少之曰） <0示為未觀察有體重減少者。 b 死亡大白鼠/使用大白鼠 [產業上利用性] 本發明之藥物複合體，其特徵為抗腫瘤劑或消炎劑等 醫藥化合物對腫瘤部位等可選擇性地移動，醫藥化合物可 在該部位上快速游離。另外，游離後醫藥化合物上源自間 隔基部份之胺基酸不留存，因此可確切發揮醫藥化合物預 期之藥效。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------”裝--------訂---------•線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 41 3^10635

Claims (1)

1253935 i A + I母修(更)正本一 第8810835 1號專利申請案 申請專利範圍修正本 (94年11月11曰） 1· 一種下式所示之藥物複合體^ A-R_NH-Y-CH2-0-C0-Q (式中，A示羧基C〗-4烷基葡聚糖聚醇；R示選自 GGFG、GGGF、GGLM、GGFCit、GGIL、GGVG、GGIG、 GGMG、GGPL、GGPI、GGPG、GGPA、GGPV、GGPP、 PV、PI、GG、P、V、G、I、Cit 中任一種之間隔基；γ 示對-伸笨基；Q示（1)具有能與上述羰基鍵結之1或2 個以上之反應性官能基之醫藥化合物或（2)具有1或2 個以上之選自胺基、羧基、羥基、硫醇基及酯基所成组 群之官能基之醫藥化合物（其中，具有2個以上之官能 基時’官能基可為相同或不同）），係僅藥物被切斷而游 離者。 2·如申請專利範圍第1項之藥物複合體，其中r係含2 至8個胺基酸結合成胜肽之間隔基者。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 3·如申請專利範圍第1項之藥物複合體，其中構成幾基 C1 -4烧基1〇 ^糖聚醇之葡聚糖聚醇係在實質上可以完 全地聚醇化之條件下處理葡聚糖所得之葡聚糖聚醇者。 4·如申請專利範圍第3項之藥物複合體，其中羥基cl4 烷基葡聚糖聚醇係羧基甲基葡聚糖聚醇者。 5. —種用於抗腫瘤之醫藥組成物，其係包含申請專利範圍 _第1項至第4項中任一項的藥物複合體。 尺度用中 @ 國家標$ (CNS) A4規格（21G X 297[釐） '-— 1 if ^ 1253935 H3 6.如申請專利範圍第1項至第5項中任一項的藥物複合 體’其中含胺基酸之醫藥化合物係藉由該胺基與 A-R-NH-Y-CH2-〇-CO-結合者。 7·如申請專利範圍第6項之藥物複合體，其中醫藥化合物 係（IS，9S)-1-胺基-9 -乙基-5-氣- 2,3-二氫-9-經基-4 -甲 基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’:6,7]吲哚并[i，2-b]唼 啉-1〇，13(9Η，15Η>二酮者。 8·如申請專利範圍第7項之藥物複合體，其中r為 -Gly，Gly_Phe-Gly-者。 9·如申請專利範圍第7項之藥物複合體，其中r為 -Gly-Gly-Gly-Phe-者。 10•如申請專利範圍第1項之藥物複合體，係為具有藥物輸 送系統（DDS)功能之DDS化合物。 11·如申請專利範圍第〗〇項之藥物複合體，其中醫藥化合 物係（18,98)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-經基-4-曱 基-11^，12]^苯并[(1€]吡喃并[3，，4，:6,7]吲哚并[〗，2-1)]喹 啉-10513(9Η，15Η)_ 二酮者。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 12.如申請專利範圍第η項之藥物複合體，其中r係 -Gly-Gly-Phe-Gly-者。 13·如申请專利範圍第π項之藥物複合體，其中r係 -Gly-Gly-Gly-Phe-者。 14· 一種下式所示之化合物： R，mCH2-0-C0-Q (式中，R’示選自 GGFG、GGGF、GGLM、GGFCit、 本紙張尺ϋ用中國國家標準（CNS) A4規袼（ 210 X 297公釐） 2(修正本） 310635 1253935 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 L GGIL、GGVG、GGIG、GGMG、GGPL、GGPI、GGPG、GGPA、GGPV、GGPP、PV、PI、GG、P、V、G、I、 Cit中任一種之間隔基而其_ n末端被保護或未被保護 之基；Y示對-伸苯基；Q示（1)具有能與上述羰基鍵結 之1或2個以上之反應性官能基之醫藥化合物或（2)具 有1或2個以上之選自胺基、叛基、經基、硫醇基及酯 基所成組群之官能基之醫藥化合物（其中，具有2個以 上之g此基時’官能基可為相同或不同））。15·如申請專利範圍第14項之化合物，其中γ係對_伸苯 基，R’示Η-Gly-Gly-Phe-Gly·之基，醫藥化合物為(18.98) -1-胺基-9-乙基-5-氣-2,3-二氮-9-經基-4-甲基 -1H，12H-苯并[de]吡嚙并[3，，4，:6,7]吲哚并[1，2-1>]喹啉 -1〇，13(9Η，15Η)-二酮者。 16·如申請專利範圍第14項之化合物，其中γ係對伸苯 基’ R’示H- Gly-Gly-Gly-Phe-之基，醫藥化合物為(18.98) -1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氩-9-羥基-4-曱基-111，12}1-苯并[(1€]吡喃并[3’54’:657]吲哚并[152-1)]喹啉 -1〇，13(9Η，15Η> 二嗣者。 17.—種下式所示之化合物： a-r-nh-y-ch2-o-co-x [式中，A示魏基C^4烧基葡聚糖聚醇；r示選自GGFG、GGGF、GGLM、GGFCit、GGIL、GGVG、GGIG、 GGMG、GGPL、GGP卜 GGPG、GGPA、GGPV、GGPP、 PV、PI、GG、P、V、G、I、Cit 中任一種之間隔基；Y 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（ 21() x 297公t) 1. (1%. X 4* Λ 1253935
示對-伸笨基’· X示經基、_〇_M(M示經基之保護基）或 離去基]。 18.如f請專利範圍第14項至第17項中任一項的化合物， 係用以製造如申請專利範圍第j項至第7項中任一項之 藥物複合體者。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 X 297公釐） 4 “象不士、
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