TWI252107B

TWI252107B - Pharmaceutical compositions and kits for hematopoietic usage

Info

Publication number: TWI252107B
Application number: TW088107193A
Authority: TW
Inventors: Barbara P Wallner; Barry Jones; Glenn T Miller; Sharlene Adams
Original assignee: Piint Therapeutics Inc
Priority date: 1998-05-04
Filing date: 1999-05-03
Publication date: 2006-04-01
Also published as: US6770628B2; KR20010052302A; CA2331122A1; US20050037976A1; AU770319B2; AU770319C; NZ507730A; US20070135354A1; JP2002513762A; US7067489B2; BR9910251A; IL139247A0; WO1999056753A1; US6300314B1; PE20000481A1; NO20005488L; AU2004202138A1; EP1075266A1; MY132924A; NO20005488D0

Description

1252107 A7 B7 五、發明説明（/ ) 發明背長 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明係關於一種製造增加造血細胞數目的方法及產品，以使造血細胞數目回復。至一預設的正常値，可用以治療造血細胞不足且用於培育造血細胞之體外方法。 PT-100乃是一種由纈氨酸-脯氨酸硼酸所組成之二元胜肽(ValboroPro)，其被設計爲與細胞表面受體CD26反應。 CD26是一種表現於許多細胞類型表面上之第II型跨膜蛋白質，這類細胞包括淋巴細胞(Marguet，D· et al·, 尨餘肌}/皿训卯/· 3:209-215)、造血細胞(Vivier，I. Et al·，/ Immunol. 147:447-454 (1991); Bristol, et al., /. Immunol. 149:367 (1992))、胸腺細胞（Dang，N.H. et al_，/· 147:2825-2832 (1991); Tanaka, T. et al., /. Immunol. 149:481-486 (1992); Darmoul, D. et al., /. Biol. Chem. 267:4824-4833 (1992))、小腸刷狀緣膜及內皮細胞。連接在細胞表面之 CD26乃是一種涎醣蛋白質，且其大半的質量均位於細胞外部。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製目前被硏究的最淸楚的是周邊T細胞上的CD26， CD26在此細胞上係作爲T細胞活化時一種有效的共同刺激訊號(costimulatory signal)。當T細胞被活化時即可增加細胞表面上 CD26 的表現（Dong, R.P. et al·，Ce// 9:153-162 (1996); Torimoto, Y. et al., /. Immunol 147:2514 (1991); Mittrucker, H-W. et al., Eur. J. Immun. 25:295-297 (1995); Hafler, D. A. et al., J. Immunol. 142:2590-2596 (1989); Dang, N.H. et al·，/· /逝144:409 (1990))。目前也已知在嚼鼠 _____3- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1252107 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（h ) 動物之造血及淋巴發育上CD26是一個重要之具調節功能的表面受體（Vivier，I. et al·，/·/现卯/· 147:447-454 (1991)。CD26的一級結構在許多物種間的相似度很高 (〇gata，S· et al·, /·历〇/·0?⑽· 264:3596-3601 (1998))。人類 CD26似乎與調節胸腺細胞活化、分化及成熟有關（Dang， N.H. et al., J. Immunol. 147:2825-2832 (1991); Kameoka, J. et al·，Blood 85:1132-1137 (1995))。我們曾提出證據顯示 CD26 可被表現於人類及鼠類之造血系統內。 CD26乃是一種外酵素，其活性與一種具高受質專一性的絲氨酸類的外胜肽酶，即二元胜肽基胜肽酶IV (DPP-IV) 相同。如果蛋白質上倒數第二的氨基酸是脯氨酸或是丙氨酸(某些情況下）時，其可由蛋白質上將N-端的二元胜肽切下（Fleischer，Β· 7>21觀/7〇/· 15:180 (1994))。PT-100 是 DPP-IV活性的一種強力抑制劑。 PCT的先前技藝W〇94/03055曾揭露藉由施用DPP-IV 抑制劑來製造增加造血細胞數目的方法。但此報導中的方法每公斤體重至少需使用1毫克的劑量以達到增加造血細胞數目的目的。該報導同時也教示抑制劑係被施用在造血細胞數目不足的哺乳動物身上。該報導同時也建議可同時施用細胞激素與抑制劑’以增加個體內造血細胞之製造。發明摘述本發明係基於許多令人驚訝且意料之外的發現上。意料之外，已發現依據本發明有用的藥劑可刺激基質細胞製造生長因子。同樣也是意料之外’已發現依據本發明有用本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）、τ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1252107 A7 B7 五、發明説明（>) 的藥劑可刺激原始造血代細胞(primitive progenitor cells)的增生，但不會直接刺激已定型代細胞的分化及增生。同樣也是意料之外，已發現依據本發明有用的藥劑可以較先前技藝教示所預期更低的劑量來施用。另一項意料之外的發現是，依據本發明有用的藥劑可加速經造血細胞抑制劑處理後造血細胞回復所需要的時間。另一項意料之外的發現是，依據本發明有用的藥劑可在非常低的劑量，使嗜中性白血球的量回復到正常，與目前世界上通用的商用產品相比至少是一樣快，除了本發明藥劑可採口服，而商用產品( 其代表超過10億美金之市場)則需採注射方式使用。這些預期外的結果對治療及實驗硏究上均非常重要。本發明目的之一方面係提供一種在一個體上刺激造血的治療方法。本發明涉及在一亟需治療的個體上施用一有效量的藥劑，以增加其體中造血細胞或成熟血球細胞數目，其中該施用量低於每天每公斤體重1毫克，且該藥劑乃是式I的化合物。依據本發明有用的藥劑乃是式I的化合物：

式I

Xi 、X2 其中m是介於〇至i〇間的整數，包括0與10在內； —r—|-------~_— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1 / -Ai~'N-G — B、 I I H〗0 6H2 H2 本紙張尺度適用中關家襟準（CNS ) A4規格（21Gx297公釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明（1) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 擇性的將將所收集到的細胞於體外進行培育。該藥劑及較佳的藥劑如上述。在一具體實施例中，體外培育係在該藥劑以一刺激所收集細胞進行增生的有效藥劑量下進行。在另一具體實施例中，所收集細胞之培養基周圍的藥劑濃度低於每公升ΠΤ8莫耳，並低於每公升1〇_9莫耳，甚至低於每公升10“°莫耳。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明的另一方面是提供一種刺激基質細胞產生生長因子之方法。本方法涉及以一有效量能刺激基質細胞產生生長因子的藥劑來接觸該基質細胞。該藥劑及較佳的藥劑如上述。在一具體實施例中，基質細胞乃是能支持初期代細胞生長之一體外基質細胞層，且進而包括在這些基質細胞存在下進行幹細胞的培育。在另一具體實施例中，該基質細胞係位於個體內。在另一具體實施例中，生長因子是粒細胞群落生成刺激因子。在其他具體實施例中，該生長因子係選自由 IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-11、IL-17 、TP〇、EP〇、MCSF、GMCSF、FLT-3酉己體禾口幹糸田胞因子所組成的族群中。在一體內具體實施例中，該藥劑係以低於每天每公斤體重1毫克的量施用至個體上。在另一具體實施例中，幹細胞係在無外加之粒細胞群落生成刺激因子存在下進行培育。在重要具體實施例中，這些幹細胞是骨髓或胸腺基質細胞。本發明的另一方面是提供一種套組，其用來治療因使用造血細胞抑制劑使造血細胞含量遠低於正常値的個體，或預防個體因使用造血細胞抑制劑而導致造血細胞或成熟

Q 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!〇χ297公釐） 1252107 Α7 Β7 五、發明説明（1) 且甚至低於2的劑量所組成。本發明的這些及其他方面將詳述於下。附圖簡簞圖1係一種可供5天療程使用的醫療包裝物，該包裝物可用來治療因癌症化療所造成的骨髓抑制或貧血。圖2係顯示經環磷醯胺處理後之老鼠內嗜中性白血球再生之圖。所示劑量的ΡΤ-100及生理食鹽水係以管飼法導入。未經環磷醯胺處理之老鼠體內之絕對嗜中性白血球値平均約爲每毫升190 X 104個細胞，如水平虛線所示。圖3係顯示經環磷醯胺處理後之老鼠於皮下注射ΡΤ-100後’其嗜中性白血球再生之圖。生理食鹽水及ΡΤ-100 係連續5天以每天二次方式導入。未經環磷醯胺處理之老鼠體內之絕對嗜中性白血球値平均約爲每毫升185 X 104個細胞，如水平虛線所示。圖4係顯示經環磷醯胺處理後之老鼠於皮下注射ρτ_ 100及粒細胞群落生成刺激因子後，其嗜中性白血球再生之圖。溶於生理食鹽水之ΡΤ-100係以管飼法導入，而 GCSF則是以皮下注射方式施用，連續5天。未經環磷醯胺處理之老鼠體內之絕對嗜中性白血球値平均約爲每毫升 190 X 104個細胞，如水平虛線所示。圖5係顯示ΡΤ-100劑量數對經環磷醯胺處理後之老鼠內嗜中性白血球再生之圖。指定濃度之ΡΤ-100係每天一次或每天二次，連續5天以經皮下注射方式施用。未經環磷醯胺處理之老鼠體內之絕對嗜中性白血球値平均約爲每毫本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ2办公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1252107 五、發明説明（1ϋ) 升200 X 104個細胞，如水平虛線所示。圖6係顯示ΡΤ-100施用期間對經環磷醯胺處理後之老鼠嗜中性白血球數絕對値及其細胞數恢復速率的影響之圖。PT-100(5pg/每天二次)係以管飼法於指示時間導入經環磷醯胺處理後之老鼠體內。水平虛線所顯示爲未經環磷醯胺處理之老鼠體內之絕對嗜中性白血球數目平均値。圖7係顯示PT-100施用期間對經環磷醯胺處理後之老鼠嗜中性白血球再生的影響之圖。ΡΤ-100(2μ2/每天二次）、或生理食鹽水係以管飼法於指示時間導入老鼠體內。未經環磷醯胺處理之老鼠體內之絕對嗜中性白血球値平均約爲每毫升194 X 104個細胞，如水平虛線所示。圖8係顯不在長期培育分析法(Long-term culture assay) 中細胞對PT-100處理後其形成細胞群落的能力之圖。將人類骨髓細胞在有或無指示量之PT-100存在下，於LTC培育 4星期，並接著在半固體培養基中繼續培育2星期。圖9係顯示PT-100可刺激正常老鼠脾臟進行造血之圖〇圖10係顯示PT-100可刺激人類基質細胞製造G-CSF 之圖。發明詳沭

本發明係關於刺激造血細胞的增生、分化及活動性。本發明對所欲求者爲刺激造血細胞增生、分化及活動時非常有用°造血細胞之活動性的特徵在於初期代細胞在骨髓內之增生，及這些細胞會對移動劑(諸如G-CSF、GM-CSF 本尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 x 29化釐) '"~~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1252107 A7 B7 五、發明説明（11) 等)反應而募集全周圍。依據本發明有用的藥劑可抑制造血細胞不足，或使具造血細胞不足之個體內造血細胞及成熟血球細胞數目回到正常値。當用於個體內補充或製造一免疫系統時，這類藥劑可與造血細胞植入物（諸如骨髓或周邊血液植入物）一同使用。這類藥劑更進而可作爲一免疫激發劑來使用。這類藥劑與培育供治療及硏究使用的細胞在體外一起使用也同樣有用。如此所述，個體意指人類、及包括狗、貓、綿羊、山羊、馬、牛、豬及嚼齒動物在內的非人類靈長類動物。本發明的一個重要方面涉及回復或預防個體內造血細胞數目不足。這類不足係起因於諸如因基因異常、疾病、壓力、化療(例如以細胞毒素藥物、類固醇、免疫抑制藥物等進行治療)及輻射照射等所引起。本發明一般來說對回復因使用造血細胞抑制劑所引起的造血細胞數目不足相當有用。一種由細胞外施用(例如藥物或輻射照射處理)的造血細胞抑制劑可造成個體內造血細胞和/或成熟血球細胞減少。在此所述的造血細胞係指粒細胞(如前骨髓細胞、嗜中性白血球、嗜伊紅白血球及嗜鹼性白血球）、紅血球、網狀細胞、血小板(如巨核細胞、生成血小板之巨核細胞及血小板）、淋巴細胞、單核白血球、樹突狀細胞及巨噬細胞。成熟血球細胞包括成熟的淋巴細胞、血小板、紅血球、網狀細胞、粒細胞及巨噬細胞。在本發明的某些重要觀點中，依據本發明有用的藥劑可增加嗜中性白血球、紅血球及血度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210/29%^¾^ "" —.—Ik----JP-------^------gf 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1252107 A7 B7 五、發明説明（k) 小板數目。與嗜中性白血球有關，本發明藥劑可用來治療除藥物或輻射照射所引起之嗜中性白血球減少症、慢性自發性嗜中性白血球減少症及週期性嗜中性白血球減少症。本發明的一個重要方面係使個體內造血細胞含量目回復一”正常値”或”保護値”。在此所指之一”正常値”係指一控制族群的含量，較好是包括與受處理個體有類似特徵的其他個體，比如說年齡。”正常値”含量也可以指一個範圍 ’例如當一族群係用於獲得該個體所屬特定組之基礎値。也可將族群分組，比方說分成四組，最低的一組內乃是由具有最少造血細胞之個體所組成，而最高的一組內乃是由具有最多造血細胞之個體所組成。因此，”正常値”可視所選特定族群而有所不同。較好是，正常値係指那些從未罹患造血細胞異常且看起來健康的個體內的含量。這種”正常値”，可當作預設値，作爲考量一個體該屬於那一類別之用。習知技藝人士可藉由一般常規的實驗即可定出適當的範圍及類別。可以該範圍內之平均値或其他預選値作爲一正常的預設値。同樣的，也可以個體在以造血抑制劑處理前之含量作爲一預設値。一般來說，嗜中性白血球的正常値範圍約在每微升 1800-7250個細胞間(平均値爲3650);嗜鹼性白血球的正常値約在每微升0-150個細胞間(平均値爲30);嗜伊紅白血球細胞的正常値約在每微升0-700個細胞間(平均値爲150) ;巨噬細胞的正常値約在每微升200-950個細胞間(平均値爲430);淋巴細胞的正常値約在每微升1500-4000個細胞本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) %

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1252107 A7 五、發明説明（D) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 間(平均値爲2500);紅血球細胞的正常値約在每微升4.2 X 106 - 6.1 X 106個細胞間；血小板的正常値約在每微升133 X 1〇3 - 333 X 103個細胞間。前述範圍可信度均在95%以內。醫界已針對某些狀況已建立特定的預設値。例如，輕微嗜中性白血球減少症的特點是每微升約有1000-2000個細胞，中度嗜中性白血球減少症特點是每微升約有500-1000個細胞，嚴重嗜中性白血球減少症特點則是每微升含 500個以下的細胞。同樣的，以成人來說，當淋巴細胞數低於1500時即被視爲一種醫療上不欲見到的狀況。對兒童而言，該數値則是3000以下。習知技藝人士應能很輕易的推出其他預設値。依據本發明有用的藥劑可用來建立或重建這類包括正常値在內的預設値。造血細胞的保護値乃是指可提供患者臨床利益所需的細胞數目。所需細胞數目可等於或低於”正常値”。習知技藝人士應很淸楚這類所需細胞數目。例如，嗜中性白血球的保護値應高於1000，較好是至少有1500。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明的另一項觀點是，在此有用的藥劑可以低於先前技藝所述劑量來施用。特別是，已知本發明藥劑意外的可以低於每天每公斤體重1毫克以下的劑量來施用。特別是，本發明藥劑已成功的以每天每公斤體重0.1毫克的劑量被施用，該劑量是先前技藝所述劑量的十分之一。習知技藝人士將能很輕易的體認出本發明在治療時只需較少物質因而降低副作用之危險性的優點。同樣的，本發明藥物產品也有製造成本更低廉的優點。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21(^291^釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明（丨y) 整治療包裝物，該套組詳述於下。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製依據本發明另一方面，可縮短個體因使用造血細胞抑制劑所造成該個體內造血細胞數目低於正常値的時間。意料之外的，已知依據本發明有用的藥劑可刺激基質細胞製造生長因子。例如，可刺激基質細胞製造粒細胞群落生成刺激因子(GCSF)。GCSF係可專門刺激嗜中性白血球的分化，其不會影響其他已定型之造血細胞的分化或增生，這些細胞包括諸如嗜伊紅白血球、肥大細胞及巨噬細胞在內之粒細胞。(但是已知其在體外可加成性的與其他細胞素一起影響多功能幹細胞(pluripotent stem cells)的增生，雖然此項觀察其體內效應目前仍未知）。由於基質細胞並非快速分化的細胞且一般不會嚴重的受到造血細胞抑制劑的影響，因此可將依據本發明有用的藥劑幾乎同時或在以造血細胞抑制劑處理前施用至個體上，以刺激基質細胞產生生長因子，在造血細胞抑制劑處理後該充分存在的生長因子可幫助造血細胞再生。在先前技藝中，這類處理通常幾乎是被延到造血細胞抑制劑處理後才進行。如此所述，”幾乎同時” 係指在造血細胞抑制劑處理後24小時內。較好是，依據本發明有用的藥劑係在造血細胞抑制劑處理後2小時內被施用，如果其是在施用造血細胞抑制劑後才施用。如果其是在施用造血細胞抑制劑前使用，則其施用時間需與造血細胞抑制劑施用期間愈接近，才能在接受過造血細胞抑制劑處理後的日子提高基質細胞所產生的生長因子量。本發明另一方面的係與一個體之處理有關，該處理係本^尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29^釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明（[k) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 爲了使該個體能接受後續其他藥劑處理作準備。意料之外的，已知依據本發明有用的藥劑可刺激原始、未定型之造血代細胞增生，但不會直接刺激已定型之代細胞分化。已知這類細胞可包括或不包括CD34+細胞在內。CD34+細胞爲血液產物中表現CD34之細胞表面標誌物的不成熟細胞’ 且一般深信亦包括那些具自我更新能力及可分化成所有成熟細胞類形之細胞次族群。因依據本發明有用的藥劑可刺激這類能自我更新之細胞的增生’本發明有用於預備接受其他外加生長因子及細胞激素處理之個體’該生長因子及細胞素可使這類未定型代細胞分化成其最終之代細胞類型。同樣的，可將依據本發明有用的藥劑施用於一個體上，以便在由該個體身上取出這些細胞以進行移植或再浸潤前，擴張該個體的造血細胞數目並移動該類細胞。這類細胞可供硏究之用，或供體外治療之用或在有或無增加細胞數目情形下將這類細胞重新引入該個體中。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製依據本發明有用的藥劑可與爲達某特定目的所特別選用之外加生長因子及細胞激素一同使用。例如，若希望刺激某特定類型之造血細胞，則可使用能促進該特定類型之造血細胞增生及分化的生長因子及細胞激素。因此，已知包括11^1、11^2、11^3、11^4、11^5、11^6、11^7、11^9、11^ 10、IL-11、IL-12、IL-13及IL-17在內的白介素均與淋巴細胞的分化有關。白介素-3及白介素-4均與肥大細胞之分化有關。粒細胞巨噬細胞群落刺激生長因子(GNCSF)、白介素-3及白介素-5均與嗜伊紅白血球之分化有關。GMCSF、本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ297公釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明（（1) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 巨噬細胞群落刺激生長因子(MCSF)及白介素-3均與嗜中性白血球的分化有關。GMCSF、白介素_3、白介素-6、白介素-11及TPO均與血小板的分化有關。Flt3配體則與樹突狀細胞生長有關。GMCSF、白介素-3及紅血球生成素則與紅血球分化有官。最後，能維持造血之原始、多功能代細胞的自我更新需要SCF、Flt3配體、G-CSF、IL-3、IL-6及 IL-11的存在。習知技藝人士應很淸楚達成所欲求效果之各類組合方式。因依據本發明有用的藥劑可刺激原始、未定型之造血代細胞，因此這類藥劑可與前述任一類別的藥劑合用來刺激某一特定類型造血細胞的增生。習知技藝人士應熟悉前述這些因子，及大部分都是市面上買得到的。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明也有許多體外用途。保存或擴張造血代細胞，或在體外增加其形成群落單元的能力。依據本發明可得到的一種益處乃是以依據本發明有用的藥劑來刺激造血代細胞。另一項可得到的益處乃是在體外培育造血代細胞時，該藥劑可能對基質細胞產生的效果。體外培育造血代細胞一般係在有基質細胞存在下進行。一般來說，在沒有生長因子支持下，基質細胞無法在體外存活、增生或分化一段很長的時間。基質細胞層可供給這類生長因子供培育造血細胞之用，作法是藉著以基質細胞在體外培育造血代細胞或提供造血代細胞這類含基質細胞狀況的培養基。可以用依據本發明有用的藥劑來處理基質細胞，以使基質細胞製造並釋出生長因子。讓依據本發明有用的藥劑與基質細胞在生長基本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 1252107 五、發明説明Uf) 中一同培育一段足夠長的時間，讓基質細胞能將生長因子釋放至生長基中。之後可以該生長基來添加至造血代細胞或其他造血細胞的培育物中。造血細胞係以一般傳統進行細胞培育的生長基來進行培育。包括諸如RPMI、DM、ISCOVES等在內的生長基。習知技藝人士應很淸楚這類細胞培育條件。這類條件一般係指許多因素的組合(如溫度、C〇2及〇2含量、營養狀況等 )°習知技藝人士應很容易即可決定出足夠增加細胞數目的時間，該時間並可依所播下的細胞數目及所添加的生長因子量及依據本發明有用的藥劑量而有所變化。體外培育造血細胞可增加這類未定型代細胞其形成細胞群落的潛力。這類細胞可獲自內含源自造血來源細胞之任何血液產物或器官中。在以依據本發明有用的藥劑進行培育前或培育後，可以習知技藝人士熟悉的方法來增加粗或未分餾血液產物中富含造血代細胞特性的細胞數目。本發明特別重要的一項目的係關於以所述藥劑來治療嗜中性白血球減少症的用途。許多意外的結果使本發明對治療嗜中性白血球減少症特別有效。首先，本發明藥劑可刺激未定型代細胞的增生。其次，本發明藥劑可剌激基質細胞產生GCSF，其係爲一種對嗜中性白血球之製造及分化相當關鍵的生長因子。因此，使用本發明藥劑，患者可得到刺激代細胞及促使這類細胞分化成嗜中性白血球的雙重好處。在紅血球及血小板上也可觀察到類似的效果。因此，基於上述意外的發現，以本發明藥劑處理以回復嗜中性 — ----20_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（21〇X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ ♦ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1252107 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（ή ) 白血球、紅血球及血小板數目也構成了本發明另一項獨立特點。本發明也係關於裝有可治療諸如嗜中性白血球減少症這類造血細胞不足之完整療程所需的套組。如上述，很意外的發現每天的劑量數及全部劑量數對經造血細胞抑制劑處理後造血細胞的回復有良好的影響。這些意料外的結果也是導致這類裝有完整療程所需之本發明藥劑之醫療配量器硏發的主因。因此，可促進患者的服從度，且整個處方即可涵蓋於單一包裝中。一般來說，一旦接獲醫師處方後，藥師會以藥物個別的將每一配量器充塡完畢。因本發明配量器包括整個療程且永遠包括一特定數量的固態口服劑量形式，該包裝物並可預先以能治療某一醫療目之適當單元數目的藥物進行充塡。醫療配量器乃是一種界定複數個醫療儲存空間的包裝物，每一空間均能裝置一單獨的藥物單元。一個完整的治療療程係裝在複數個醫療儲存空間中。界定複數個醫療儲存空間的包裝物可以是任何一種形式之可拋棄式藥學包裝物或在其個別空間中能裝載藥物的硬紙板。該包裝物較好是一種由僵硬紙板、泡狀紙張及強化指張類的硬紙板所構成的泡狀包裝物。這類硬紙板乃是習知技藝人士所熟知的。圖1顯示一種裝有供完整療程所需之能治療嗜中性白血球減少症之較佳的醫療配量器(1)。日期顯示表(2)顯示那一天該取那一個個別之藥物單元服用。此係標示在藥物包 —-----21 ___________ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1252107 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（〆）裝物的第一面上。劑量顯示表(3)係標示於與藥物包裝物的第一面垂直之第二面上，並示出何時該服用那一個劑量單元。劑量單元(4)係以泡狀包裝方式包含在配量器中。此特定包裝物顯示出5天的療程，每天2個劑量。如上述之藥學製備物係以有效量的方式被施用。有效量視施用模式、治療狀況及欲求效果而定。如上述也將視階段狀況、個體身體狀況及年齡、同時施用之治療性質，及一般醫療執業人員熟知的因素而有所不同。對藥學應用而言，其係足以達到欲求醫療效果之量。在某些情況下，此係能增加造血細胞或成熟血球細胞數値之量。在其他情況下，其係使細胞數目增加至一預計値之量。本發明的另一項功能係能改善使用造血細胞抑制劑治療後所產生的影響。如果藥劑係以預防方式使用，相對於未受該藥劑處理之動物而言，該藥劑可降低個體可能損失之造血細胞量。如果該藥劑係以預防或即刻方式使用，其可縮短一類型造血細胞回復到至少是保護値、較好是正常値之時間，此係相對於只以抑制劑而非該藥劑處理之動物細胞數目超過保護値或正常値所需之時間。一般來說，本發明活性化合物劑量範圍約從每天每公斤體重0.01毫克至每天每公斤體重1毫克間。可採用許多施用途徑。一^般來說’本發明方法可以任何醫學上可接受的施用途徑來施用，意指在不會引起臨床上無法接受之副作用且能產生活性化合物有效量之任何施用模式。這類施用模式包括口服、直腸、表面局部塗抹、鼻腔、皮膚間或本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

1252107 A7 B7 五、發明説明（>\ ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 注射途徑。”注射”一詞包括皮下、血管內、肌肉內或灌注。血管內或肌肉內途徑並不特別適合長期治療及預防。但是卻很適合緊急情況下使用。對患者來說最方便的是按劑 .量表服用的口服形式。（參見Remington’s Pharmaceutical Science，18th edition，1990, pp 1694-1712 ;在此以參考文獻方式倂入本文中）。習知技藝人士可在毋需實驗的情況下即可決定出製造劑量所需之參數及條件。適於口服的組成物可以諸如膠囊、藥錠、藥劑這類不連續的單元形式存在，每一個單元中均含有一預先定出量之活性藥劑。其他的組成物包括懸浮於液態水溶液或非水溶液之懸浮液，例如糖漿、甘香酒劑及乳化劑。

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製注射劑的製備包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液及乳化液。非水溶液溶劑的例子包括丙二醇、聚乙二醇、諸如橄欖油類的植物油、諸如油酸乙酯類的可注射有機酯類。水溶性載體包括水、酒精類/水溶液、乳化液或懸浮液，包括生理食鹽水及緩衝液。注射用載體包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖液、右旋糖及氯化鈉、乳酸化之林格氏液或固定油。血管內載體包括流體及營養補充物、電解質補充物(諸如那些以林格氏右旋糖液爲底之物質)及其類似物。也可存有諸如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、及惰性氣體等之防腐劑及其他添加物。當以諸如血管內施用之模式施用時可使用較低的劑量。當個體接受了初期劑量後的反應並不充分時，可使用患者可容忍之較高劑量(或以一種不同、更能局部傳送途徑來造成較高的有效劑量）。可考慮每 ------2S- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1252107 A? B7 五、發明説明（VI) 天施用多重劑量。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 或者和藥學上可接受之載體與藥劑合倂使用。”藥學上可接受之載體，，一詞係指一或多種適於用在人類身上之可相容的固態或液態充塡物、稀釋物或包裹物質。”載體”一詞係指一種天然或合成之有機或無機組成物，且所倂入之該活性組成物可促進其應用。藥學組成物之組成分也能與本發明分子及其本身混合，使其間沒有任何足以傷害所欲求藥學效果之反應存在。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製施用時，本發明之藥學製備劑係以藥學上可接受的量及藥學上可接受的組成物來施用。這類製備一般常規性的可包括鹽類、緩衝劑、防腐劑、相容載體、或者其他藥學、上可接受的藥劑。當用於藥物上時’鹽類需爲藥學上可接受的，但無法輕易的以任何一種藥學上可接受的鹽來製備此之藥學上可接受的鹽類且仍在發明範疇內。這類藥理上及藥學上可接受的鹽類包括，但不限於，那些由下列酸所製成之鹽類：氯酸、溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、順丁烯二酸、醋酸、水楊酸、檸檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。藥學上可接受的鹽類也可以用鹼金屬或鹼土金屬的鹽類來製備，諸如其鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。其他的傳送系統可包括時間釋放、延長釋放或持久性釋放之傳送系統。這類系統可避免重複施用該藥劑’增加個體及醫師的方便。可用的釋放傳送系統有許多種且均爲習知技藝人士所熟知。他們包括諸如聚（糖交酯）、草酸酯共聚物、聚己內酯、聚酯醯胺、聚鄰酯類、聚羥基應酸及 _^_；_____ 94___ 本紙掁尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明（>〕）聚酐等之聚合物爲底的系統。含藥物之前述聚合物微膠囊如美國專利申請案5,075，109中所述。傳送系統也包括非聚合物式的系統：含諸如膽固醇、膽固醇酯類之固醇物及諸如單-、雙-及三酸甘油酯類之脂肪酸的油脂；水性凝膠釋放系統；sy las ted system ;及以胜狀爲底之系統；繼塗覆物 ;以傳統結合劑及輔劑壓縮成之藥錠；部分融合之殖入物等類似物。特定範例包括，但不限於：（a)腐蝕性系統，其中之藥劑係包含於一種如美國專利申請案第4,452,775、 4,667,014、4,478,034及5,239,660號所述之基質中，和⑻二擴散系統，其中一活性成份係以一控制速率由諸如美國專利申請案第3,832,253及3,854,480號所述之聚合物中擴散出去。此外，也可採用幫浦式的硬體傳送系統，某些適合當做植入物使用。對慢性病的治療而言，長期持久性的釋放系統可能特別適合。如此所述之”長期釋放”，意指該植入物係被建構並安排成可傳送治療有效量的活性成份至少30天，且較好是60天。習知技藝人士應熟悉所謂的長期持久性釋放系統，此包括上述之釋放系統。窗施例吾人已藉由一系列體內硏究不範了纈氨酸-硼酸脯氨酸 (ValBoroPro, PT-100)具有可縮短老鼠體內因化療所造成骨髓抑制情形的能力。在這些硏究中’老鼠被由腹膜中注射了低於致死劑量之每公斤體重220毫克環磷醯胺(第丨天) 。這種處理會使老鼠血球細胞數目在第4天時到達最低點本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1252107 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（yf) ° 72小時(弟3天)後將老鼠分成3組。其中一^組以管飼法或皮下注射方式注入所示劑量之ΡΤ-1〇〇，一組以皮下注射方式注入G-CSF ’弟3組則以口服或皮下注射方式接受生理食鹽水作爲控制組。所使用G-CSF劑量爲〇Q4pg/劑量 (4 gg/公斤/天），該劑量乃是文獻中硏究G-CSF對老鼠影響所用劑量以及相當於癌症患者所使用的劑量。每天施用兩次連續施用5天或如所示期間。在第4-8天對每隻老鼠採取血液樣品，在某些實驗則是於第13或17天才採取血液樣品。每一個時間點均對4或5隻老鼠取樣。在以Gimsa 染色的血液抹片上計數其全部或個別之白血球數目。對嗜中件白血珑之再生之ρτ-100割畺圖2數據，經環磷醯胺處理後之老鼠在環磷醯胺處理後第3天開始，每天2次經口服接受〇·1μ2、2μ2或5μ2之 ΡΤ-100或生理食鹽水，連續5天至第7天。每天接受2次 2μ2或5μ2 ΡΤ-100之老鼠，其嗜中性白血球回復的速率要早過接受1或2天生理食鹽水處理之老鼠，而相較於生理食鹽水處理之控制組老鼠而言，每天2次0.1μ2 ΡΤ-100的處理則不會顯著增加嗜中性白血球回復的速率。每天接受 2次2pg或5μ2 ΡΤ-100之老鼠，在第5天其絕對嗜中性白血球値(ANC)即可回復至正常，而接受生理食鹽水處理之控制組老鼠則至第7天才回復正常。在第5天時’老鼠總計已接受了 4個劑量的ΡΤ-100(分別在第3天及第4天）。在第5、6及7天額外施用的ΡΤ-100，則可進一步增加 ANC 値。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 1252107 A7 _____B7 五、發明説明卜Γ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 當經由皮下注射方式施用ΡΤ-100,其對嗜中性白血球回復速率的效果與口服施用時類似。如第3圖數據，老鼠係經由皮下注射1至20μ2之ΡΤ-100，每天2次，連續5天，並於第4-8天、第17天測定其血球細胞數目。對每天2 次接受5pg、1〇μ§或20μ§ ΡΤ-100之老鼠，其嗜中性白血球回復的速率要快過接受接受生理食鹽水處理之控制組老鼠。而每天2次lpg ΡΤ-100則無明顯效果。在ΡΤ-100處理後，可結論PT-100確可加速經環磷醯胺處理後之老鼠其嗜中性白血球的再生。比駿PT-100及G-CSF對嗜中性白血球再生的影· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製目前以G-CSF來促進接受化療之癌症患者體內嗜中性白血球的再生。G-CSF對老鼠的影響已經是眾所周知，因此可當作闡明以PT-100刺激老鼠體內造血機制的一種參考。圖4數據乃是PT-100及G-CSF刺激嗜中性白血球再生的比較。經環磷醯胺處理後之老鼠，於第3天開始每天2次經管飼法施用2μ2 PT-100或經皮下注射〇.〇4yg G-CSF(該劑量相當於患者身上及大部分嚼齒動物硏究報告中所用的劑量），連續施用5天。並於第4-8天、第13天測定其血球細胞數目。以PT-100及G-CSF來處理老鼠，在處理階段可刺激其嗜中性白血球至類似的程度。處理結束後，到第13天 ANC値會降低至正常値。雖然PT-100對嗜中性白血球的重建也有類似效果，但其作用機制卻與G-CSG不同。不僅 PT-100係作用在不同的細胞受體上，而且其還可刺激那些本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 1252107 五、發明説明（4) 不受G-CSF影響之初期人類造血代細胞的生長。所施用PT-100的割畺歎Γ 爲定出能使嗜中性白血球回復至最佳狀況所需的劑量，經環磷醯胺處理後之老鼠在環磷醯胺處理後第3天開始，每天1次或2次經皮下注射接受所示之PT-100劑量，連續5天。如圖5所示，每天2次施用所示兩種劑量，較每天1次更能促進嗜中性白血球的回復速率。 PT-100的施用期限在上述實驗中，老鼠係以PT-100連續處理5天。欲定出以PT-100處理較短期間是否足以回復嗜中性白血球數，經環磷醯胺處理後之老鼠在環磷醯胺處理後第3天開始，每天2次經管飼法接受5μ§、2μ§或1μ§ PT-100(間隔6小時)劑量，連續1、2、3或5天。並於第4_8天測定其血球細胞數目。相較於施用鹽水的控制組而言，施用PT-100 —天即足以加速嗜中性白血球的重建。但額外施用PT-100二或三天可進一步增加其回復速率。施用5pg劑量之數據示於圖6 〇連續施用PT-100四或五天不會比只施用三天者更明顯增加嗜中性白血球的回復速率或ANC値(每天2次施用2μ§ 劑量之數據示於圖7)。圖6及圖7的結果顯不PT-100對嗜中性白血球再生的影響係發生於治療初期，並延續直至ANC値達到界於1〇〇〇及1400間爲止。重複施用會影響初期嗜中性白血球回復時 ___________ 28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •—

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1252107 Α7 Β7 五、發明説明（i) 之動力學，但不會顯著改變施用3天後所能達到的ANC値〇吾人可結論說，相較於施用鹽水的控制組而言，PT-100在施用1天後即可促進嗜中性白血球的重建。每額外施用一天，直到三天’均可加速嗜中性白血球的重建。第 4或第5天則不會明顯增加ANC値或重建時之動力學。人龉浩血細朐在體外的反臌造血係由一群可自我重生並分化成爲造血代細胞 (HPCs)之造血幹細胞(HSCs)來支持。HPCs係已命定會分化成爲某特定細胞，該細胞在體外半固態培養基上生長超過 2星期以上時，即可經由其細胞群落外形而被鑑別出來。於半固態培養基群落分析中所培養之細胞群落，其係依功能被定義成群落式-或快速生長式單元，包括BFU-E及 CFU-E(會分化成紅血球之細胞）、GFU-GM(會分化成粒細胞 /單細胞之細胞）、BFU-MK和CFU-MK(會分化成巨核細胞之細胞)及CFU-GEMM(多功能代細胞）。雖然對能影響最終分化之諸如G_CSF的鑑別因子而言，半固態培養基群落分析是一種相當有價値的工具，其並不會評估原始造血代細胞(PHPCs)之增生潛力或其自我重生的性質(Dexter，T.A. et al·，Acta Hemat. 62:299-305 (1979); Chen，B.P. et al·， Immunological Reviews，157:41-51 (1997))。評估一種化合物或生長因子對PHPCs的影響係首先由 Dexter 所提出（Dexter Τ· M. et al·，J. Cell Physiol. 91:335-344 (1977)) ’他並且描述了半固態基質群落分析與長期群落培 —_'______29 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1252107 A7 B7__ 五、發明説明（>(f) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 育(LTC)。LTC係在預先形成可提供造血生長因子之基質細胞層上開始。已被大量用於體外檢視老鼠及人類造血之用，以評估測試化合物產生LTC-Ics的能力。 PT-100對人類造血細胞生長的影響係在2週的CFU細，及4和5週並採用了人類骨髓、周邊血液或臍帶血液細胞的LTC分析中進行檢視。PT-100不會刺激2週之半固態培養基分析產生CFUs，顯示PT-100不會影響已命定分化成爲成熟血球之代細胞的分化。此結果也顯示PT-100刺激體內嗜中性白血球再生的機制及其細胞內標的，均與此分析中可刺激CFU生成的G-CSF不同。在可測試對初期代細胞影響之LTC分析中，PT-100明顯的增加所有三種細胞來源其非常初期代細胞的生長。再者，數據也顯示PT-100對 PHPCs的影響，就如LTC-Ics的增加係出現在培育4週(第 8圖）、5週及6週(數據未示出)後。此時，較不原始之代細胞已進入分化末期並已喪失在半固態培養基中形成群落的能力。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製對LTC分析而言，以正篩選方式由人類骨髓細胞、周邊血液或臍帶血液細胞中藉MAC分離系統將CD34+細胞分離出來。爲建立基質細胞餵食層，以Mydocult長期培育基質培育人類骨髓細胞2星期。在使用前一天，以溶於LTC 培養基、並經輻射照射處理之所示PT-100濃度與吸附之基質細胞進行隔夜培育。將分離出之CD34+細胞覆於基質細胞層上並於有或無所示PT-100量下培育30天。培育終了再藉由添加了生長因子(幹細胞因子、GM-CSF、IL-3及紅 ______30__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明（1) 血球生成因子）之半固態培養基（甲基纖維素）來分析代細胞數目。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 14天後，於甲基纖維素培養基中決定骨髓細胞、紅血球細胞、母細胞及多系群落代細胞(分別爲CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-GEMM群落）的總數。圖8人類骨髓細胞培育物的數據顯示在4週之LTC分析中，隨著劑量’ PT-100可增加能於半固態培養基中形成群落之代細胞數目。此顯示ρτ-100可刺激原始造血代細胞的生長。同樣的，將周邊血液或臍帶血液細胞中分離出來的 CD34+細胞在經輻射照射處理過的基質細胞層中培育30天。一如骨髓細胞中所觀察到的，ΡΤ-100可增加周邊血液或臍帶血液細胞中4和5週之LTC-ICs至類似的程度’顯示 PT-100同樣也能刺激來自這些細胞中之原始造血代細胞的生長(數據未示出）。 PT-100不會刺激Η定型代細胞的分化經濟部智慧財產局員工消費合作社印製首先讓人類骨髓細胞富含CD34+細胞，並在37°C、有或無所示PT_100濃度下以每個培養孔200個CD34+細胞的濃度於無血淸之x-vivo 15培養基中(Biowhittaker)培育4小時。將事先培育過的CD34+細胞添加入內含次佳濃度之重組人類生長因子(5微毫克/毫升之幹細胞因子、1微毫克/毫升之GM-CSF、1微毫克/毫升之IL-3、0.3單元/毫升之紅血球生成因子(Stem Cell Technologies, Vancouver, BC))、溶於 Iscove’s MDM培養基之0.9%甲基纖維素中。以和預培育過 31 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1252107 A7 B7 五、發明説明 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 程中相同之濃度將PT-100添加至培養基中。在37°c下，將甲基纖維素混合物以二重複方式培育在35毫米的培養皿中 14天。於倒立式顯微鏡下計數代細胞群落（CFU-E，CFU-GM，CFU-GEMM及BFU-E)數目。PT-100不會刺激未定型代細胞的分化。刺激正常老鼠脾臟內之浩血經濟部智慧財產局員工消費合作社印製每天2次經皮下注射或口服對6-8週大之BALB/c雌鼠施用生理食鹽水或所示PT-100劑量，連續施用5天。於第 6天時將動物犧牲並於無菌狀況下取下其脾臟。將脾臟打碎成單細胞懸浮液，接著以Tris氯化銨(pH 7.2)溶液進行處理以便將紅血球溶解。以細胞計數器數算所得脾臟細胞，並以每毫升5 X 106個細胞濃度懸浮於添加了 2%熱去活胎牛血淸之Iscov’s Modified Eagle培養基(IMDM)中。在每3 毫升之 Methocult™GF M3434(Stem Cell Technologies, Vancouver，BC，Canada)中添加了 0·3毫升的脾臟細胞液，其係爲一種用來分析老鼠代細胞群落、內含重組細胞素之甲基纖維素培養基。劇烈混合該培養基，而後將1.1毫升混合物以二重複方式培育在無菌之35毫米的培養皿中，每個培養皿中含5 X 105個脾臟細胞。於37°C、內含95%空氣 /5%C〇2之潮濕空氣下培育7天。CFU-E係依照製造商說明書在2天後才進行計算，而BFU-E ' CFU-GM及CFU-GEMM則是在7天後才計算。以細胞計數器數算出的總脾臟細胞數來計算每隻老鼠、每個脾臟的絕對CFU値 (absolute CFU/spleen)。第9圖的數據係來自每一個劑量組 s^^__—____^22_ ______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 1252107 ______ B7__ 五、發明説明（7丨）中3隻老鼠、每個脾臟的的平均CFU±SD値。PT-100可刺激經檢測之所有型式代細胞群落進行造血。

PT-100誘發人類骨髓某晳細朐製浩G-CSF 自骨髓中純化單核細胞並以長期培育之培養基（Stem Cell Technologies, Inc.，Vancouver，B.C.)進行培育 2 週’在 1 週後只以新鮮的培養基餵食一次。以胰蛋白酶-EDTA取下所培育的基質細胞並以每個培養孔1〇6個細胞的濃度培養在35毫米、有或無10·5Μ之PT-100於1毫升培養基的組織培養盤中。1天後收集培養液。以QuanUkme高敏免疫分析藥劑(R + D systems，Minneapolis，MN)來分析上淸液中的人類 G-CSF。第10圖顯示PT-100對所培育之人類基質細胞製造 G-CSF之影響。PT-100可刺激這類細胞製造G-CSF。已有許多發表的製程描述如何製造L-纈氨酸-R-硼酸脯氨酸(L-Val-R-boroPro)(Kelly，T.A·，et al.，/· /4ττ7· Π993) 115:12537-12638; Coutts, S.J., et al., J. Med. Chew. (1996) 39:2087-2094; Beak，P·，et al·，7¾如力Moo 价rs， (1989) 30:1197; Bean, F.R., et al., /. Amer. Chem. Soc. (1932) 54:4415)。較好是已純化的異構物。參見美國專利第 4,935,493及5,462,928號，其內容在此以參考文獻方式倂入文中。本發明已藉實施例詳加描述，習知技藝人士應知在不悖離本發明精神範疇下，本發明可作許多修改或變化。此類修改、變化或等效替換均應仍視爲落在本發明專利申請範圍內。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Claims

1252107 94. ί·2ΐ

Α8 Β8 C8 D8 •申請專利範圍 1 · 一種在個體內刺激造血作用的醫藥組成物，其包含可有效增加個體內造血細胞而非成熟淋巴球數目的藥劑含量，其中該藥劑是經口施用每天低於每公斤體重1毫克含量，且其中該藥劑是式I化合物 N——c I : A H2 one _H2 HIC ——c -Αι—N-H2C、 Η -G— I .CH2 、x2 /CH2 H2 其中m是介於0至10間的整數，包括0與10在內；a及 A!爲L-型氨基酸殘基，使得括弧內每一重複性單元中的A 可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的C乃是以L-型組態存在；界於A與N、Ai與C、及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一乂^與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團。 2 ·如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該個體之造血細胞含量低於正常値，且其中該量係有效恢復該類造血細胞含量至一預設正常値或保護値。 3 ·如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該個體係於18小時內施用至少兩劑該組成物。 4 ·如申請專利範圍第2項之醫藥組成物，其中該個體患有嗜中性白血球減少症，且其中該量係有效恢復嗜中性白血球含量至一預設正常値或保護値。 5 ·如申請專利範圍第2項之醫藥組成物，其中該個 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 裝、IT·. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 x 297公釐) 07 1Χ 2 5 2 A8B8C8D8

-Αι一N-H2C、申請專利範圍體的紅血球細胞含量低於正常値，且其中該量係有效恢復紅血球細胞含量至一預設正常値或保護値。 6 ·如申請專利範圍第2項之醫藥組成物，其中該個體的血小板含量低於正常値，且其中該量係有效恢復血小板含量至一預設正常値或保護値。 7 ·如申請專利範圍第1、2、3、4、5或6項中之醫藥組成物，其中該藥劑爲纈氨酸.酸脯氨酸(ValBoroPro)。 8·—種縮短個體因使用造血細胞抑制劑而使體內造血細胞或成熟血球細胞含量遠低於正常値的時間之醫藥組成物，其包含可有效增加個體內造血細胞或成熟血球細胞數目的藥劑含量，其中該藥劑係在施用造血細胞抑制劑之前或與造血細胞抑制劑實質上同時施用的，且其中該藥劑是經口施用每天低於每公斤體重1.0毫克含量，且其中該藥劑是式I化合物 Xi 、X2 XH2 H2 其中m是介於〇至10間的整數，包括〇與在內；A及 A!爲L-型氮基酸殘基，使得括弧內每一重複性單元中的A 可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的C乃是以L-型組態存在；界於A與N、A!與C、及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一 X!與χ2分別是一羥基或是在生理pH値下、於 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫未頁) 訂：線本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 χ 297么愛） 1252107 I D8 六、申請專利乾圍水溶液中可被水解成經基的基團。 9 ·如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中造血細胞抑制劑的施用會導致該個體內造血細胞含量遠低於正常値，且其中該量係有效恢復該類造血細胞含量至一預設正常値或保護値。 1〇·如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該個體係於18小時內施用至少兩劑該組成物。 1 1 ·如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該造血細胞抑制劑會降低該個體內嗜中性白血球的數目，且其中該量係有效恢復嗜中性白血球含量至一預設正常値或保護値。 1.2 ·如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該造血細胞抑制劑會降低該個體內紅血球數目，且其中該量係有效恢復紅血球含量至一預設正常値或保護値。 1 3 ·如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該造血細胞抑制劑會降低該個體內血小板數目，且其中該量能有效恢復血小板含量至一預設正常値或保護値。 1 4 ·如申請專利範圍第8、9、1〇、n、12或13項中之醫藥組成物，其中該量係每天每公斤體重〇.丨毫克。 1 5 ·如申請專利範圍第8、9、10、11、π或13項中之醫藥組成物，其中該藥劑爲纈氨酸_硼酸脯氨酸 (ValBoroPro) 〇 16·種爲個體接受造血細胞抑制劑治療預作準備之醫樂組成物，其包括能刺激該個體製造生長因子之藥劑 3 本紙張尺度適用t國¥^標準〈^^3从4規格(21(^ 297公釐)~ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁) .1Γ: 線 1252107 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍含量，其中該藥劑是在個體接受造血細胞抑制劑之前施用，其中該藥劑是式I化合物 A—N- H 0 I I! -C—C- h2c、 .CH2 -A1——N-J、 H y l /X1 -G — ,CH2 X2 H2 h2 其中m是介於0至10間的整數，包括0與10在內；a及 Aj爲L·型氨基酸殘基，使得括弧內每一重複性單元中的A 可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的C乃是以L-型組態存在；界於A與>^、人1與0及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一乂：與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團。 1 7 ·如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該生長因子爲粒細胞群落生成刺激因子。 1 8 ·如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該施用量係低於每天每公斤體重1毫克。 1 9 ·如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該藥劑係於18小時內施用至少兩劑至個體身上。 2〇·如申請專利範圍第16項之醫藥組成物藥劑能刺激基質細胞製造生長因子。 2 1 ·如申請專利範圍第16、17、18、19或20項中之醫藥組成物，其中該藥劑爲纈氨酸-硼酸脯氨酸 (ValBoroPro) 〇 2 2 ·如申請專利範圍第1項的醫藥組成物，且其中該藥其中該 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁) -έ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) 1252107 - C8 DS --—-—----—--- -----—-- 六、申請專利範圍劑係於第一個18小時內以2或3劑組成之第一個攝生法 (regimen)被施用。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁) 2 3 ·如申請專利範圍第22項之醫藥組成物，其中該藥劑係於第二個18小時內以2或3劑組成之第二個攝生法 (regimens)被施用，且其中該第二個攝生法的施用時間係與第一個攝生法的施用時間互相錯開。 2 4 ·如申請專利範圍第23項之醫藥組成物，其中該藥劑係於第三個18小時內以2或3劑組成之第三個攝生法 (regimens)被施用，且其中該第三個攝生法的施用時間係與第一、二個攝生法的施用時間互相錯開。 2 5 ·如申請專利範圍第24項之醫藥組成物，其中該藥劑係於第四個18小時內以2或3劑組成之第四個攝生法 (regimens)被施用，且其中該第四個攝生法的施用時間係與第一、二、三個攝生法的施用時間互相錯開。 2 6 ·如申請專利範圍第25項之醫藥組成物，其中該藥劑係於第五個18小時內以2或3劑組成之第五個攝生法被施用，且其中該第五個攝生法的施用時間係與第一、二、三及四個攝生法的施用時間互相錯開。 2 7 ·如申請專利範圍第22、23、24、25或26項中之醫藥組成物，其中該個體的嗜中性白血球含量低於正常値，且其中該量係有效恢復嗜中性白血球含量數目至一預設正常値或保護値。 2 8 ·如申請專利範圍第22、23、24、25或26項中之醫藥組成物，其中每一攝生法的用量係每天每公斤體重 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4规格(21〇 x 297公釐〉 AH B8 C8 D8 1252107 申請專利範圍 0.1毫克。 2 9 ·如申請專利範圍第22、23、24、25或26項中之醫藥組成物，其中該藥劑爲纈氨酸-硼酸脯氨酸 (ValBoroPro) 〇 3 0 · —種用於製備一用於重新引入個體內的個體細胞之醫藥組成物，其包括能有效刺激或動員造血細胞之藥劑含量，其中該個體細胞係收集自該個體的造血細胞並在以該醫藥組成物處理後引入該個體內，其中該藥劑乃是式I的化合物 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁) N- C- H2C、 XH2 -Α—Ν' H2C、 -i-erX1 χ2 -έ .CH2 η2 H2 線其中m是介於0至10間的整數，包括0與10在內；Α及 Aj爲L·型氨基酸殘基，以使括弧內每一重複性單元中的A 可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的c乃是以型組態存在；界於A與N、A1與C、及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一 X!與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團° 3 1 ·如申請專利範圍第3〇項之醫藥組成物，其中所收集的細胞係在存在能刺激該所收集細胞增生之有效量的藥劑下培育於體外。 3 2 ·如申請專利範圍第項之醫藥組成物，其中用本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)Α4規格(210 X 297夂爱) 1252107 A8 BS C8 D8 六、申請專利範圍於刺激或動員造血細胞之藥劑的濃度係低於每公升10·δ莫耳。 3 3 ·如申請專利範圍第30、31或32項中任一項之醫藥組成物，其中該藥劑爲纈氨酸··硼酸脯氨酸 (ValBoroPro) 0 3 4 · —種刺激基質細胞製造生長因子的醫藥組成物，其包含能有效刺激該基質細胞製造生長因子的藥劑含量，其中該藥劑乃是式I的化合物 A—N- I H2C、 -c—Ο Ι ,CH2 —N-H2C、 -pB： .01-(2 \ x2 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁) h2 h2 線其中m是介於0至10間的整數，包括〇與10在內； A及八！爲L-型氨基酸殘基，以使括弧內每一重複性單元中的A可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的c乃是以L-型組態存在；界於A與N、A1與C、及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一 X!與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團。 3 5 ·如申請專利範圍第34項之醫藥組成物，其中該基質細胞乃是體外一層可支持細胞生長的基質細胞，且進一步包括將幹細胞在該等基質細胞存在下培育。 3 6 ·如申請專利範圍第34項之醫藥組成物，其中該等基質細胞乃是位於一個體內，且該藥劑係以低於每天每公斤體重1毫克的量經口施用於個體。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) 1252107 S C8 D8 I " " 1" - 六、申請專利範圍 : 3 7 ·如申請專利郭圍弟34項之醫樂組成物，其中該生長因子爲粒細胞群落生成刺激因子。 3 8 ·如申目靑專利郭圍弟3 6項之醫樂組成物，其中言亥藥劑係以每天每公斤體重〇·1毫克的施用量施用於個體上。 3 9 ·如申請專利範圍第34、35、36、37或38項中任一項之醫藥組成物，其中該藥劑爲纈氨酸-硼酸脯氨酸 (ValBoroPro) 0 4 0 ·如申目靑專利朝圍弟3 5項之醫樂組成物，其中言亥等幹細胞係培育在沒有外加生長因子存在的環境中。 4 1 ·如申請專利範圍第35項之醫藥組成物，其中該等幹細胞係培育在沒有外加之粒細胞群落生成刺激因子存在的環境中。 4 2 · —種改善一個體因接受造血抑制劑治療所造成影響的一種治療用套組，其包含：一藥劑的第1劑量及以該藥劑治療一個體的使用說明，其可與造血細胞抑制劑幾乎同時使用或是在造血細胞抑制劑使用前施用，且一藥劑的第2劑量及以該藥劑治療一個體的使用說明，其僅於施用造血細胞抑制劑後才使用，且其中該藥劑乃是式I的化合物 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁) 線 ·· B8 C8 D8

-Αι—N- I H2C、 m 1252107 申請專利範圍 Η x I /Λ1 -G— X2 XH2 H2 其中m是介於0至10間的整數，包括0與10在內； A及八1爲L-型氨基酸殘基，以使括弧內每一重複性單元中的A可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的C乃是以L-型組態存在；界於A與^^、々1與0及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一 X!與X2分別是一羥基或是在生理pH値下·、於水溶液中可被水解成羥基的基團，且其中各劑量係低於每天每公斤體重1.0毫克。 4 3 ·如申請專利範圍第42項之套組，其中該第2劑量乃是2至7個攝生法(regime)，且每一個攝生法係由於 18小時內施用2或3劑該藥劑所組成。 4 4 ·如申請專利範圍第42項之套組，其中各劑量係每天每公斤體重0.1毫克。 4 5 ·如申請專利範圍第42、43或44項之套組，其中該藥劑爲纈氨酸-硼酸脯氨酸(ValBoroPro)。 4 6 ·如申請專利範圍第42、43或44項之套組，其中該套組是用來治療或抑制嗜中性白血球減少症。 4 7 ·如申請專利範圍第45項之套組，其中之套組是用來治療或抑制嗜中性白血球減少症。 4 8 ·如申請專利範圍第42、43或44項之套組，其中該套組是用來治療或抑制血小板不足。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫未頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格(210 X 297公釐） 07 Ί1 2 5 2 A 8 8 99 ABCD 六、申請專利範圍 4 9 ·如申請專利範圍第45項之套組’其中該套組是用來治療或抑制血小板不足。 5〇·如申請專利範圍第42、43或44項之套組，其中之套組是用來治療或抑制紅血球不足。 5 1 ·如申請專利範圍第45項之套組’其中該套組是用來治療或抑制紅血球不足。 5 2 · —種治療造血細胞或成熟血球細胞含量低於正常値之個體的套組，該套組包含：一個內含一完整劑量的包裝物，該劑量使造血細胞或成熟血球細胞類型的含量回復到至少一保護値，該包裝物係由以下物質所構成一藥劑的第1劑量，該劑量係以一有效量在第1天之第一個18小時可經口施用於該個體，一藥劑的第2劑量，該劑量係以一有效量在第2天之第二個18時內經口施用於該個體，選擇性之該一藥劑的第3劑量，該劑量係以有效量在第3天之第三個18小時經口施用於該個體，選擇性之該藥劑的第4劑量，該劑量係以有效量在第 4天之第四個18小時可經口施用於該個體，選擇性之該藥劑的第5劑量，該劑量係以有效量在第 5天之第五個18小時可經口施用於該個體，選擇性之該藥劑的第6劑量，該劑量係以有效量在第 6天之第六個18小時可經口施用於該個體，擇性之读樂劑的第7劑量，該劑量係以有效量在第 10 本纸張尺度用中國國家標準(石NS〉A4規格(210 X 297公17 ' --- (請先閲讀背面之注意事項再填寫未頁)

、言線 07 1A 2 5 2 8 8 8 8 ABCD 申請專利範圍 7天之第七個18小時可經口施用於該個體其中該藥劑乃是式I的化合物 A—N- Η 〇 I II -C—C- H2C、 .CH2 -A1—N-I H2C、 H y I /X1 •G-B、 | X2 H2 H2 其中m是介於0至10間的整數，包括0與10在內； A及八}爲L-型氨基酸殘基，以使括弧內每一重複性單元中的A可以是不同的氨基酸殘基；與B鍵結的C乃是以L-型組態存在；界於A與N、A1與C、及A1與N間的鍵結爲胜肽鍵；且每一 X!與X2分別是一羥基或是在生理pH値下、於水溶液中可被水解成羥基的基團，且其中該藥劑係以低於每天每公斤體重1.0毫克的劑量存在，且可有效回復造血細胞或成熟血球細胞類型的含量到一預設正常値或一保護値。 5 3 ·如申請專利範圍第52項之套組，其主要僅由第 1、2、3、4及5劑量所組成。 5 4 ·如申請專利範圍第52項之套組，其主要僅由第 1、2、3及4劑量所組成。 5 5 ·如申請專利範圍第52、53或54項之套組，其中每一劑量係由於各別的18小時內施用2或3劑該藥劑所組成。 5 6 ·如申請專利範圍第52、53或54項之套組，其中每一劑量係每天每公斤體重0.1毫克。 11 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格(2 ΙΟ X 297公釐） 07 11 2 5 2 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍 5 7 ·如申請專利範圍第52、53或54項之套組，其中該藥劑爲顯氨酸·•硼酸脯氨酸(ValBoroPro)。 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 5 8 · —種改善造血細胞抑制劑對個體所造成影響的套組，該套組內包含：一藥劑的第1劑量，其係於第1天經口施用至一個體上，及一藥劑的第2劑量，其係於第2天經口施用至一個體上， .選擇性之該藥劑的第3劑量，其係以一有效量於第3 天之第三個18小時內經口施用至一個體，選擇性之該藥劑的第4劑量，其係以一有效量於第4 天之第四個18小時內經口施用至一個體，選擇性之該藥劑的第5劑量，其係以一有效量於第5 天之第五個18小時內經口施用至一個體，選擇性之該藥劑的第6劑量，其係以一有效量於第6 天之第六個18小時內經口施用至一個體，選擇性之該藥劑的第7劑量，其係以一有效量於第7 天之第七個18小時內經口施用至一個體，其中之合倂劑量是一有效改善一造血細胞抑制劑對個體所造成影響的量，且其中每一劑量係低於每天每公斤體重1毫克。 5 9 ·如申請專利範圍第58項之套組，其主要僅由第 1、2、3、4及5齊丨J量所組成。 6〇·如申請專利範圍第58項之套組，其主要僅由第 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格(210 x 297公釐） 1252107 雜 C8 D8 六、申請專利範圍 1、2、3及4齊!J量戶斤組成。 6 1 ·如申請專利範圍第58、59或60項之套組，其中每一劑量係由在個別天數使用的2或3劑該藥劑所組成。 6 2 ·如申請專利範圍第58、59或60項之套組，其中該藥劑爲纈氨酸-硼酸脯氨酸(ValBoroPro)。 6 3 ·如申請專利範圍第61項之套組，其中該藥劑爲纈氨酸-硼酸脯氨酸(ValBoroPro)。 6 4 ·如申請專利範圍第1、8、16、30、34或項中任一項之醫藥組成物，其中該量係低於每天0.1 mg/kg體重。 6 5、如申請專利範圍第42或58項之套組，其中每個劑量係低於每天0.1 mg/kg體重。 6 6、如申請專利範圍第52項之套組，其中每個劑量的量係低於每天0.1 mg/kg體重。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫未頁)

-ία 線本紙張尺度適用中國國家標準（CMS)Α4規格(210 X 297公釐）