TWI243829B - Oligopeptides and the pharmaceutical composition containing said oligopeptides as hair-growth-enhancing agents - Google Patents

Description

1243829 五、 發明說明 ( 1 ) 技 術 領 域 本 發 明 爲 關 於 具 有 毛 髮 成 長 促進作 用 之寡 肽 及 含 有 該 寡 肽 爲 有 效 成 分 之 毛 髮 促 進 劑 〇 技 術 背 景 上 皮 組 織 正 常 形 態 的 形 成 受 到存在於 上皮 組 織 周 圍 的 間 葉 細 胞 衍 生 因 子 控 制 之 事 已 被 揭示， 又 由起 因 於 上 皮 組 織 之 形 態 異 常 的 疾 病 多 因 間 葉 細 胞的異 常 ，因 此 對 於 間 葉 細 胞 控 制 上 皮 組 織 形 態 形成 的 機 制之了 解 ，成 爲 有 趣 之 事 〇 妖 J \ \\ 而 關 於 上 皮組 織 形 態 形 成 的控制 j 發現有 —^ 群物 質 在 複 雜 系 統 中 受 到 時 間 與 空 間 的 控制， 而欲分 離 彼 等 物 質 J 解 析 其 功 能 爲 極 困 難 之 事 ， 又 欲單純 化 上皮 組 織 形 態 形 成 之 模 型 實 驗 室 的 架 構 亦 爲 困 難 等之理 由 ，因 此 此 領 域 硏 究 中 至 今 曰 亦 未 見 進 展 〇 爲 了 瞭 解起因 於 上皮 組 織 形 態 形 成 之 疾 病 的 發 病 機 序 或 確 此 等 疾病之 治 療方 法 等 ， 期 望 能 了 解 上 皮 組 織 之 形 態 形成 的 控 制機制 0 在 此 情 況 下 J 分 離 - 純 化 關 於上皮 組 織形 態 形 成 之 控 制 的 表 嗎 啡 (e P 1 mo r p h i η ) (特開平 〔6-2529ί ;號公幸 g ) 〇 此 物 質 爲 277 至 289 個 氨 基 酸 所 形成 之蛋白 質 ，作 爲 核 蛋 白 質 之 生 理 活性 物 質 ， 主 要 由 間 葉 細 胞生物 合 成之 事 係 以 明 朗 〇 又 表 嗎 啡 具 有 作 用 於 上 皮 細 胞 而促進 上 皮組 織 形 態 形成 之 作 用 以 及在 表 嗎 啡 姐 j \ \\ 功 能 之 情形下 Μ 法進 行 正 常 的 組 織 形 成 之 事 亦 已 明 朗 〇 就 表 嗎 啡 的 構 造 而 表 嗎 .3- 啡分子 爲 大構 造 上 區 分 爲 4 1243829 五、發明說明（2) 個片段之事已被發現（歐洲專利公開0698666號）。即構成 表嗎啡全長之寡肽可區分爲N端之捲曲螺旋區域（1 )、功 能部位（2 )、捲曲螺旋區域（3 )，及C端之疏水性區域。此 等之片段中，就功能區域（人的表嗎啡爲N端之第104-187 號之氨基酸的特定區域）而言，此區域關於細胞連接，與 表嗎啡之生理活性的發現有密切之關係已被揭示（上述之 歐洲專利公報）。 表嗎啡具有促進正常形態形成之作用，因此，此物質被 期待爲預防或治療起因於形態形成異常之疾病等之醫藥， 或做爲育毛劑等醫藥之有效成分。然而，由哺乳類動物獲 得之天然型表嗎啡難溶於生理食鹽水等之水性溶劑，在醫 藥實用性供予上有其困難。因此，爲了實質上維持天然型 表嗎啡之形態形成的促進作用，嘗試創造溶解性優良之表 嗎啡衍生物。例如，除去C端疏水性區域的修飾體（片段 123)等係已周知（特開平6 - 25295號公報）。 已知具有表嗎啡部分構造之多肽作用於上皮細胞而促進 上皮組織形態形成（國際公開W098 / 22 505號）。此多肽爲 可溶解於生理食鹽水等之水性溶劑之多肽，而上述之刊物 中亦教示該多肽具有毛髮成長促進作用。然而，以往對於 爲此多狀的部份構造之更短片段而g ’其生物活性完全未 知。 發明之揭示 本發明之課題爲提供具有毛髮成長促進作用之寡肽。本 1243829 五、發明說明（3) 發明之另一課題爲提供含有上述寡肽爲有效成分之醫樂或 毛髮成長促進劑。 本發明者欲解決上述之課題而蓄意努力之結果，發現爲 表嗎啡部分構造之寡肽具有優良之毛髮成長促進作用，遂 完成本發明。 即本發明爲提供選自下列寡肽（1 )及（2 )所表之寡肽： ⑴下列之氨基酸序列（I ):

Lys-Ser-I le-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu 下列之氨基酸序列（I I ):

Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu 下列之氨基酸序列（I 11 ):

Ser-I le-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp 下列之氨基酸序列（IV):

Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln 下列之氨基酸序列（V ):

Ser-I le-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp 下列之氨基酸序列（VI ):

Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys 下列之氨基酸序列（VII): I le-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu 下列之氨基酸序列（VIII): 下列之氨基酸序列（I X ): 1243829 五、發明說明（4) Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu ； ⑵具有上述氨基酸序列（I )至（IX )中1至數個氨基酸有缺 失、取代、及/或插入之氨基酸序列的寡肽、與上述氨 基酸序列（I)至（IX)所表之寡肽具有同樣毛髮成長促進 作用之寡肽， 以及，上述（1)或（2)寡肽之修飾寡肽，與上述氨基酸序 列（I )至（I X)所表之寡肽具有同樣毛髮成長促進作用之修 飾寡肽所構成之群中的寡肽或其鹽。 上述發明之較佳態樣爲，上述氨基酸序列（I )至（I X)所 表之寡肽或該寡肽之修飾寡肽、與上述氨基酸序列（I )至 (I X)所表之寡肽具有相同毛髮成長促進作用之修飾寡肽或 彼等鹽。較佳者爲，上述氨基酸序列（I I )至（V )所表之寡 肽或該寡肽之修飾寡肽、與上述氨基酸序列（I I )至（V)所 表之寡肽具有相同毛髮成長促進作用之修飾寡肽或彼等鹽 。更佳態者爲上述氨基酸序列（I)至（IX)所表之寡肽，特 佳爲上述氨基酸序列（I )或上述氨基酸序列（I X)所表之寡 肽或其鹽，皆由本發明所提供。。 修飾之寡肽可列舉爲生物素化之寡肽，較佳之修飾寡肽 爲介有間隔或未介有間隔之生物素結合於N端之寡肽。又 修飾之寡肽可列舉由寡肽中半胱氨酸殘基之氫硫基二量化 之寡肽。 由另一觀點，提供包含上述任一種之寡肽或其生理學之 容許鹽作爲有效成分之醫藥。此醫藥對哺乳類動物爲有效 1243829 五、 發明說明（6) 對 値 〇 爲 了 實 施 發明之最佳形態 本 發 明 提供之上述氨基酸序列（I )所表之寡肽爲國際 公 開 W098 / 22505號揭示之由寡肽（I I )C端之1 1個氨基酸 所 形成 之 寡 肽。上述氨基酸（I I )所表之寡肽相當於除去上 述 氨 基 酸 序 列（I )自N端之1個氨基酸殘基（Ly s )的寡肽。 又 上 述 氨 基 酸序列（I I I )至（VI )所表之寡肽爲除去氨基酸 序 列 (I I)所 表之寡肽自C端各1個、2個、3個、4個氨基 酸 的 寡 肽 〇 又上述氨基酸序列（VII)至（IX)所表之寡肽爲 除 去 氨 基 酸 序列（I I )所表之寡肽自N端各1個、2個、3 個 氨 基 酸 的 寡肽。又上述氨基酸序列（I)至（XI)所表之寡 肽 具 有 下 列 實施例具體所示之毛髮成長促進作用。不拘泥 於 任何 特 定 理論，但氨基酸序列（VI )之C端之半胱氨酸必 須 具 有活性 〇 本 發 明 之範圍包含，上述氨基酸序列（I)至（IX)中1 至 數 個 氨 基 酸缺失、取代、及/或插入的氨基酸序列之寡 肽 1 具 有 與 上述氨基酸序列（I )至（I X)所表之寡肽相同之 毛 髮 成 長 促 進作用之寡肽（以下，此寡肽稱爲「改變寡肽」 ) 〇 又 上 述 氨基酸序列（I )至（I X)所表之寡肽或上述之改 變 寡 肽 的 修 飾寡肽，具有與上述氨基酸序列（I )至（I X )所 表 之 寡 肽相 同之毛髮成長促進作用之修飾寡肽亦包含於本 發 明 之 範 圍 。上述之改變寡肽或修飾寡肽具有與上述氨基 酸 序 列 (I )至（IX)所表之寡肽相同之毛髮成長促進作用， -8- 依

1243829 五、發明說明（1 0 ) 率地通過皮膚角質層經皮吸收’亦可結合適當之界面活性 劑或脂溶性物質等與霜劑等。上述之毛髮成長促進劑的投 予量視使用目的、製劑形態、有效成分之種類等適當地選 擇，如可參考本說明書之實施例中具體顯示之投予量而予 以選擇。 實施例 以下爲本發明由具體實施例具體之說明，但本發明之範 圍不限定爲以下實施例。 例1 使用Fmo c之固相法合成上述氨基酸序列（I I )所示之寡 肽（以下實施例中稱爲「pep7」）。又N端以生物素修飾合 成修飾寡肽（以下實施例中稱爲「b7」）。合成之各寡肽可 由高速液體層析法（HPLC)純化，由HPLC及Mass測定純度 爲90%以上。 HPLC之條件爲以下所列。 管柱：0DS-UG3(單節0DS、野村化學工廠）內徑1 .0mm， 全長1 0 0mm 測定：室溫（2 5 °C ) 檢出：UV 214 nm，280nm 溶出溶劑：溶劑A及溶劑B之梯度（溶劑A : 0 · 1 %三氟 乙酸；溶劑· B : 90%乙腈/ 〇 . 1 %三氟乙酸，5分鐘後（溶劑 B : 0% )至5 5分鐘（溶劑B : 5 5% )之直線濃度調配） 流速：75ml/ml -12- 1243829 五、發明說明（14) 對寡肽 b7Z\ Cl、b7Z\ C2、b7Z\ C3、b7Z\ C4 及 b7A C5、 b7ANl、b7AN2及b7AN3之IL-8的誘導活性評估如第3 圖。去除N端之氨基酸，I L - 8的分泌量多少有減少，但去 除C端之氨基酸至4個仍可維持IL-8的分泌量。另一方 面，去除C端之氨基酸至5個時IL-8的分泌量會急驟下 降。由此結果，去除自C端之氨基酸至4個，或去除自N 端之氨基酸至3個，亦與寡肽b7有相同之育毛活性。又 第4圖所示，ΙΙ-mer之寡肽bk7亦顯示與寡肽b7相同之 I L - 8的誘導活性。 例4 以NHS-生物素或NHS-LC-生物素（匹亞斯公司製）依說明 書之條件將寡肽pep7之N端生物素化。使用NHS-生物素 時，寡肽之N端與生物素間之間隔物導入-0-C0-(CH2)4-(13.5A)，使用NHS-LC-生物素時，寡肽之N端與生物素 間之間隔物導入-0-C0-(CH2)5-NH-C0-(CH2)4- (22.4 A)。 使用此等之生物素化寡肽，同例3之方法測定IL-8的分 泌量，此等之寡肽具有與寡肽b7相同之IL-8的誘導活性 。此結果爲，將寡肽N端直接生物素化者與介有間隔物生 物素化者具有相同之育毛活性，與未導入生物素之寡肽相 比，皆顯示活性化之現象。 產業上可利用性 本發明之寡肽具有毛髮成長促進作用，有效爲毛髮成長 促進劑等之醫藥的有效成分。 -16- 1243829 V：：> 乂+·'、 ·，《·<·>»，，- ·Φ^·- (©·«*—'·*'!/·· ·'.-"-.·*">τ-Ήϋίν-； ·."' 序列 <110> Suinitofflo Electric Industries, Ltd. <120〉寡肽 <130> A11151M <160> 9 <210〉 1 <211〉 11 <212> PRT <213〉人 <400> 1

Lys Ser lie Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu 11 <210〉 2 <211〉 10 <212> PRT <213〉人 <400> 2

Ser lie Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu 10 <210〉 3 <211〉 9

<212> PRT <213〉人 <400> 3

Ser lie Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp 9

<210> 4 <211> 8 <212> PRT 1/3 1243829 <213> 人 <400> 4

Ser lie Glu Gin Ser Cys Asp Gin 8 <210> 5 <211〉 7

<212> PRT <213> 人 <400> 5

Ser lie Glu Gin Ser Cys Asp 7 <210〉 6 <211〉 6 <212> PRT <213〉人 <400> 6

Ser lie Glu Gin Ser Cys 6 <210> 7 <211〉 9

<212〉 PRT <213〉人 <400> 7 lie Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu 9 <210〉 8 <211〉 8 <212> PRT <213〉人 <400> 8

Glu Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu 8 2/3 1243829 <210> 9 <211> 7 <212〉 PRT <213〉人 <400> 9

Gin Ser Cys Asp Gin Asp Glu 7 3/3

Claims (1)

1243829 六、申請專利範圍第90 1 1 3 462號「寡肽及含有該寡肽作爲毛髮成長促進劑 之醫藥組成物」專利案 (2005年7月20日修正）Λ申請專.利範圍：1 . 一種寡肽或其鹽，係選自下列寡肽（1 )及（2 ):⑴下列之氨基酸序列（I ): Lys-Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu 下列之氨基酸序列（I I ): Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu 下列之氨基酸序列（I I I ): Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp 下列之氨基酸序列（IV): Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln 下列之氨基酸序列（V ): Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp 下列之氨基酸序列（VI): Ser-Ile-Glu-Gln-Ser-Cys 下列之氨基酸序列（V I I ): Ile-Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu 下列之氨基酸序列（VIII): Glu-Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu，或 下列之氨基酸序列（IX): Gln-Ser-Cys-Asp-Gln-Asp-Glu ； -1- 1243829 六、申請專利範圍 ⑵上述氨基酸序列（I )至（丨X )中具有丨至數個氨基酸經 缺失、取代、及/或插入氨基酸序列，且與上述氨基 酸序列（I )至（IX)所示之寡肽具有相同毛髮成長促進 作用之寡肽， 以及’上述（1 )或（2 )寡肽經生物素化修飾或經半胱氨 酸殘基之氫硫基二量化修飾，且與上述氨基酸序列（j ) 至（I X)所示之寡肽具有同樣毛髮成長促進作用之修飾 寡肽所構成之群。 2 .如申請專利範圍第1項之寡肽或其鹽，其中修飾寡肽爲 生物素化寡肽。 3 ·如申請專利範圍第2項之寡肽或其鹽，其中修飾寡肽爲介 有間隔物，或未介有間隔物在N端結合生物素之寡肽。 4 .如申請專利範圍第1項之寡肽或其鹽，其中修飾寡肽爲 由該寡肽之半腕氨酸殘基之氫硫基二量化之寡肽。 5 ·如申請專利範圍第1項之寡肽或其鹽，其爲氨基酸序列 (I )至（IX)所示之寡肽或經修飾之該寡肽，且具有與上 述氨基酸序列（I)至（IX)所示之寡肽具有相同毛髮成長 促進作用。 6 ·如申請專利範圍第5項之寡肽或其鹽，其中修飾寡肽爲 生物素化寡肽。 7 .如申請專利範圍第6項之寡肽或其鹽，其中修飾寡肽爲介 有間隔物，或未介有間隔物在N端結合生物素之寡肽。 8 .如申請專利範圔第5項之寡肽或其鹽，其中修飾寡肽爲 -2 - 1243829 六、申請專利範圍 阻斷上述調配之半胱氨酸殘基之氫硫基之寡肽，或爲由 上述調配之半胱氨酸殘基之氫硫基二量化之寡肽。 9 .如申請專利範圍第1項之寡肽或其鹽，其爲氨基酸序列 (I)至（IX)所示之寡肽。 1 〇 . —種作爲毛髮成長促進劑之醫藥組成物，其係含有如申 請專利範圍第1至8項中任一項之寡肽或其生理上容許 鹽爲有效成分者。 -3-