TW584562B - Non-aqueous polar aprotic peptide formulations - Google Patents

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584562 A7 B7 五、發明説明（1 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 相關申請案之對照 本案依35 1；_3.(：.119(€)之規定，請求於1996年7月3日之 美國申請案系列案第60/022,699號之優先權，其揭示併入本 文中以供參考。 發明範疇 本發明係關於胜肽化合物之安定非水性極性非質子性調 配物，尤其是高濃度胜肽化合物之調配物。 發明背景 本發明説明書中參照到下列參考資料之相關部分係以角 括派（[])中之编號表示。 1· Zoladex (goserelin acetate implant), Physician's Desk Reference，50th Edition，pages 2858-2861 (1 996). 2.美國專利第3,914,412號，核發於1975年10月21曰。 3·美國專利第4,547,3 70號，核發於19 85年10月15日。 4.美國專利第4,661，472號，核發於1987年4月28日。 5/美國_利第4,689,396號、核發於1987年8月25日。 6.美國專利第4,851，3 85號，核發於1989年7月25曰。 7·美國專利第5,1 98,533號，核發於1993年3月30曰。 8. 美國專利第5,480,868號，核發於1996年1月2日。 9. WO92/2071 1，公告於 1992 年 11 月 26曰 ° 10. W095/00168，公告於 1995年1 月5 日。 11. W095/04540，公告於 1995年2 月 16EI 。 12. ”Stability of Gonadorelin and Triptorelin in Aqueous -4 一 (請先閱讀背面之注意事_ π本頁) .絮. 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（2 ) Solution", V.J. Helm, B.W. Muller, Pharmaceutical Research, 7/12, pages 1253-1256 (1990). 13. ’’New Degradation Product of Des-Glyl〇-NH2-LH-RH- Ethylamide (Fertirelin) in Aqueous Solution 丨丨， J. Okada, T. Seo，F. Kasahara，K.Takeda，S. Kondo, J.of Pharmaceutical Sciences, 80/2, Pages 167-170 (1991). 14. "Characterization of the Solution Degradation Product of Histrelin， a Gonadotropin Releasing Hormone (LHRH) Agonist' A.R. Oyler，R.E. Naldi，J.R. Lloyd， D. A. Graden， C. J. Shaw, M.L. Cotter, J. of Pharmaceutical Sciences, 80/3, pages 27 1-275( 1 99 1 ). 15. ’’Parenteral Peptide Formulations: Chemical and Physical Properties of Native Luteinizing Hormone-Releasing Hormone (LHRH) and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solution”，M.F. Powell，L.M. Sanders, A. Rogerson, V. Si. 3 Pharmaceutical Research, 8/10> pages 1258-1263(1991). 16. "Degradation of the LHRH Analog Nafarelin Acetate in Aqueous Solution", D.M. Johnson, R.A. Pritchard, W.F. Taylor，D. Conley，G. Zuniga，K.G. McGreevy， Inti. J. of Pharmaceutics, 31? pages 125-129(1986). 17. "Percutaneous Absorption Enhancement of Leuprolide”， M.Y. Fu Lu? D. Lee, G.S. Rao, Fharmaceutical Research, 9/12, pages 1 575-1576(1 992). -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事 ，寫本頁) -裝· T訂

584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（3 ) 18 .Lutrepulse (gonadorelin acetate for IV injection)， Physician’s Desk Reference, 50th Edition，pages 980-982(1996). 19. Factrel (gonadorelin Hcl for subcutaneous or IV injection)，Physician’s Desk Reference, 50th Edition， pages 2877-2878(1996). 20. Lupron (leuprolide acetate for subcutaneous injection)， Physician’s Desk Reference， 50th Edition, 2555-2556(1996). 21. Lupron depot (leuprolide acetate for depot suspension)， Physician's Desk Reference, 50th Edition, pages 2556-2562 (1996). 22·"Pharmaceutical Manipulation of Leuprorelin Acetate to Improve Clinical Performance"，H. Toguchi，J. of Inti. Medical Research, 18, pages 35-41 (1990). 23 .^Long-Term Stability of Aqueous Solutions of Luteinizing Hormone-Releasing Hormone Assessed by an In-Vitro Bioassay and Liquid Chromatography' Y.F. Shi? R.J. Sherins, D. Brightwell, J.F. Gallelli, D.C. Chatterji, J. of Pharmaceutical Sciences, 73/6, pages 819-821 (1984). 24. "Peptide Liquid Crystals: Inverse Correlation of Kinetic Formation and Thermodynamic Stability in Aqueous Solution’’，M.F. Powell，J. Fleitman，L.M. —6 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） (請先閲讀背面之注意事 本頁) 裝. 訂

584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7__ 五、發明説明（4 ) * Sanders V.C. Sir Pharmaceutical Research, ll/9? pages 1352-1354 (1994). 25. "Solution Behavior of Leuprolide Acetate，an LHRH Agonist， as Determined by Circular Dichroism Spectroscopy"，M.E. Powers，A. Adejei，M.Y. Fu Lu， M.C. Marinirig, Inti. J. of Pharmaceutics, 108? pages 49-55 (1994). 26. "Preparation of Three-Month Depot Injectable Microspheres of Leuprorelin Acetate Using Biodegradable Polymers", Pharmaceutical Research, 1 1/8, pages 1 143-1 147 (1994). 上述公告，專利或專利申請案之揭示全部併入本發明中 供作參考資料，即，各公告，專利或專利申請案之用語係 特定地且個別地併入本文中供作參考。 促黃體激素釋放激素（LHRH)，如熟知的促性腺激素釋 放激素（GnRH)，係爲結構如下之十胜肽： * * / β / pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2. 其由下視丘分泌並結合至腦下垂體、促黃體激素（LH)及促 濾泡激素（FSH)之接受子。LH及FSH因此刺激性腺合成類 脂醇激素。許多的LHRH同系物係爲已知，包括相關於 LHRH之胜肽，其係作爲激動劑及彼等作爲拮抗劑者⑴〗^ 。：LHRH同系物已知係有用於治療與激素有關之疾病，如 前列腺癌、良性前列腺肥大、子宮内膜組織異位形成、子 呂肌瘤、子4纖維瘤、早熟性發身期或乳癌及作爲避孕劑 - 1 - 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公董） ~ (請先閲讀背面之注意事 本頁) .裝· 訂 線 584562 五、發明説明（5) [8 ] °激動劑LHRH- 相騎化合物及拮抗劑LHRH-相關化合 物兩者以持續釋放投藥係爲較佳，前者係於重複投藥後減 少可利用接受子的數量而抑制類脂醇激素之產生，後者财 必需連續投藥以持久抑制内生性LHRH[ 8 ]。 藥物持續而非經腸的輸送，尤其是胜肽藥物，提供了許 多優點。使用植入性裝置於多種藥_或其他有益試劑的^ 續輸送係爲習知。典型的裝置像，例如，描述於美國專利 案第5,〇34，？29; 5,057,3 18及5，1 10,596號中者。此等專利之 每一揭示皆列入本發明中參考。 通¥ ’胜肽包括LHRH-相關化合物，其口服之生物利用 性是低的[16-17]。 訂 一般市售之LHRH，其同系物及相關化合物之水性調配物 ，其係供作非經腸注射液，通常含有相當低濃度之 相關化合物（0.05-5毫克/毫升），及包含如甘露醇或乳糖等 賦形劑[18-20]。此等LHRH-相關化合物之詞配物必須冷 藏貯存或僅可短期貯存於室溫。 經投藥而可於超過丨-3裇月期間持續釋放的1^11札相關 化合物之可利用性貯存調配物，包括置於圓筒中供作皮下 注射而由分散於D，L_乳酸及羥基乙酸共聚物墓質之 15%LHRH-相關化合物所組成之調配物⑴，及由微粒子組 成之調配物，其含有^^札相關化合物及明膠組成的核心 ，其外圍包覆著D，L-乳酸及禮基乙酸共聚物基質組成的殼 層此等微粒子懸浮於稀釋液中而甩於皮下注射或肌内注 射[21，26丨。此等產物必須貯存於室溫或更低之溫度。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公羡） 584562 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（6 ) LHRH-相關化合物之水性調配物已知具有化學及物理之不 安定性，且於照射後會降解P2-1 6，22-251。 已知爲安定性之調配物（約五年），係爲濃度極低 (25pg/ml)之水性缓衝溶液（10mM緩衝液，離子強度〇 15) ’該溶液僅能貯存於不高於室溫之溫度（25。〇[ 1 5]。 因而需要胜肽之安定性調配物。 發明概述 本發明提供安定之非水性調配物，其係爲胜肽化合物溶 於極性非質子性溶劑之溶液。尤其是，其係濃度爲至少約 1 0%胜肽之調配物。此等安定性調配物可長期貯存於高溫 (即37°C )，尤其係用於植入性輪送裝置以長期輸送藥物（ 即1-12個月或更長）。 一方面’本發明提供胜肽化合物之安定非水性調配物， 該調配物包含至少一種胜肽化合物溶於至少一種極性非質 子性溶劑，特佳之調配物包括至少钓1〇%(w/w)胜肽化合 物0 另一方'面，本發明提供叙備胜肽化合物之安定非水性調 配物之方法，該方法包含溶解至少一種胜肽化合物於至少 一種極性非質子性溶劑中，棱佳之調配物包含至少約 10%(w/w)胜肽化合物。 進一步’本發明提供治療罹患病症之實驗者之方法，其 症狀可經投藥胜肽化合物而減輕，該方法包括投藥有效量 之含至少一種胜肽化合杨溶於至少一種極性非質子性溶劑 的安定非水性調物给實驗者。 一 9 一 (請先閲讀背面之注意事 Γ本頁) -裝_ 、11 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（7) 圖式簡要説明 圖1説明80°C下兩個月後，以逆向高效液相層析法（Rp_ HPLC)測定4〇%留普來醋酸鹽（1?upr〇lide acetate)溶於二曱 亞礙（甲亞颯（methyl sulfoxide)或DMSO)溶液之安定性。 圖2表示以圖1相同樣品注入，以大小排除層析法（“π exclusion chromatograph，SEC)測定，此圖顯示溶液中具 有極少之的凝集，此凝集包括二聚物及三聚物產物，並無 較高等級之凝集物。 圖3代表阿瑞尼士（Arrhenius)圖，其顯示4〇%留普來醋 酸鹽溶於二甲亞職（DM SO)之溶液中留普來之損失。 圖4説明tf存於80 °C，6個月後，40%留普來溶於二甲亞 石風溶液在化學及物理上之安定性。 圖5説明在37°C，50°C，65。(：及8(TC下貯存超過6個月期間 ，40%留普來醋酸鹽溶於二甲亞砜（DMS〇)之溶液中留普 來之損失。 圖6説明37C下’超過9個月後，40 %留普來醋酸鹽於二 甲亞颯溶’液在化學上的安走性。 圖7説明80°C時，增加胜肽留普來於二甲亞咸溶液之濃 度’安定性亦增加。 圖8説明80°C時，增加40%留普來·二甲亞砜調配粉之水 分舍量，其安定性減少。 圖9説明，顯示於圖8之調配物中，增加水分含量使得化 學降解產物增加。 本纸張尺度適用巾@g家標準（CNS ) ( 210X297公釐）

584562 A7 B7 五、發明説明（8 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 發明詳細説明 本發明係關於非可預期的發現，即溶解胜肽化合物於非 水性極牲非質子性溶劑可得到安定調配物。先前已知的胜 肽化合物之調配物，係含有如edta或抗壞血酸等賦形劑 之稀釋的緩衝水溶液，其必須貯存於低溫（4_25χ )，否則 會經由如酸/鹼催化之水解反應、去胺化反應、消旋反應 友氧化反應等降解途徑而形成降解產物。相反的，本發明 請求之調配物於高溫（3 7。(： · 8 〇)及高濃度（即至少約丨〇 % ) 可安定胜肽化合物。 標準的胜肽及蛋白質調配物由稀釋水溶液組成。通常可 藉由改變一或多種下列方式而達到藥物之安定性：pH，缓 衝液形式，離子強度，賦形劑（EC>TA，抗壞血酸等）。於 此等調配物中，其降解途徑（水澥，去醯胺化，消旋化）需 要水而無法完全安定。相反的，本發明中，胜肽調配於例 如二甲亞砜（DMSO)及二甲基甲醯之非水性溶液 ’顯示其較彼等調配於水中具有化學及物理安定性。二甲 亞颯及二甲基甲醯胺係爲$慮之極性非質子溶劑。非質子 落劑因其於降解反應缺乏貢獻質子之能力而預期其可降低 降解速率。相反的，溶劑較水具極性（例如，水之偶極茏 爲1.85，二甲亞颯爲3.82及二曱基甲醯胺爲3.96)可幫助安 定速率決定步驟並增加降解速率因而可預期其可增加降解 速率。然而，頃發現極性非質子溶劑之總效應通常可安定 胜肽溶$。 本發明包括使用如二甲亞職或二甲基甲醯胺之非水性， (請先閲讀背面之注意事 本頁)

1 - ....... I m ί · 裝· 、1Τ -11 - 本紙張Λ度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ___________五、發明説明（9) c 非質子溶劑而安定胜肽調配物而抗拒化學及物理降解^本 發現包括瞭解使用二甲亞颯或二甲基甲醯胺用語改善胜肽 於廣範圍調配條件下之安走性，包含高濃度及高溫，因此 使得胜肽於植入性輸送裝置中之胜肽輸送係爲可能且可實 行0 可改善胜肽於廣範圍調配條件之總安定性，包含高濃度 及高溫，如泚使得胜肽於長期植入性遞送笨置之遞送係爲 可能且可實行。 A.定義： 本文中所用之下列用語具有下述意義： 用語”化學安定性”意指經由如氧化作用或水解作用等化 學途控而形成之降解產物的可接受百分比。尤其係指3 71 兩個月後，調配物若形成不超過2〇%之裂解產物則視爲化 學安定性者。 用語”物理安定性”意指形成聚集（即二聚物，三聚物及 較大形式）之可接受百分比·。尤其係於3 7°C二個月·後，調 配物形成不超過約1 5%之$集則可視爲物理安定性。 用語••安定性調配物”意指或相當於高溫之條件）、 一個月後’保有至少約65%化學及物理之安定性胜肽化合 物。尤其較佳之調物係爲於此等條件下，可保留至少約 80%化學及物理安定性之彼等胜肽。特別較佳之安定調配 物係彼等經輻射（即伽瑪、貝它或電子束）滅菌後，不發生 降解作用者。 用語"胜肽"及/或”胜肽化合物，’意指高達約5〇個胺基酸 -12 - 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（2丨0><297公餐） ' -- (請先閲讀背面之注意事Ϊ -裝-- r本頁) 訂

584562 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（10) 殘基以醯胺鍵（CONH)鍵結在一起之聚合物。其包括同系 物、衍生物、激動劑、拮抗劑及醫藥上可接受之鹽皆含於 此用ϋ·之列。此用語亦包括具有D -胺基酸，經修飾、衍生 或非天然產生的D-或L-構形及/或腺擬單元作爲部分結構 之胜瓜及/或胜肽化合物。 用语’ LHRH相關化合物"意律促黃體激素釋放激素 (LHRH)及其同系物與醫藥可接受之鹽。八，九及十胜肽 之LHRH激動劑及拮抗劑係包含於” Lhrh相關化合物”此用 語中，例如天然之LHRH，尤其較佳的LHRH相關化合物係 包括 LHRH，留普來（leupr〇lide)，高色寧（gosereiin)，内 服寧（nafarelin)及其它已知活化的激動劑與拮抗劑[^丨]。 用吾π咼濃度"意指至少钓10%(w/w)及最高達⑶扣相關 化合物之最大溶解度。 用語π賦形劑"意指調配物中或多或少包含之惰性物質， 其以稀釋劑或媒劑形式添加，或用以定形或增加堅度。賦 形劑與例如乙醇等溶劑之區別處係後者可用以溶解調配物 中之藥物，賦形劑與例如士ween 20之非離子性界面活性劑 之區別處在於後者可用於使藥物可溶於調配物，賦形劑與 例如苯醇或對曱基或對乙基羥苯酸之區別處則在於後者可 用於避免或抑制微生物之生長。 用語"極性非質子溶劑”意指不含酸姓氫且不當作氫施予 者之極性落劑。極性非質子溶劑之實例有二甲亞颯（DMSO) ’ 一甲基曱醯胺（DMF)，六甲亞磷三醯胺（HMPT)及主甲 基 p比洛酮（n-methyl pyirolidone)。 (請先閲讀背面之注意事 本頁) •裝·

、1T 本紙張凡度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 -—_____ ______B7_ 五、發明説明（~~~~--- 用語•，非水性質子性溶劑"意指非水性溶劑，其含有接於 氧或氮的氫使得其可形成氫鍵或施予質子。非水性質子枉 溶劑之實例爲聚乙二醇(PEGs) ’丙二醇(PG)，聚乙㈣ 酮（pvp)，甲氧丙晞醇（刪G)，甘油及甘祿醇（_。如〇1)。 B ·調配物製備乂 本發明係爲胜肽化合物溶於極性非質子性溶劑之非水性 調配物，其於高溫係可長期間維持安定者。標準的稀釋水 性胜肽及蛋白質調配物需要調整緩衝形式、離子強度、pH 及賦形劑（例如，EDTA及抗壞血酸）以達到安定。相反的 ，本發明請求之調配物係利用非水性極性非質子性溶劑而 達成胜肽化合物之安定性。特定言之，本發明之調配物凝 供士足的局濃度（至少約1 Q%w/w)之化合物。 可用於本發明中以調配胜肽及胜肽化合物之例子，包括 彼等具有生物活性或可用於治療疾病或其它病理症狀之胜 肽。其包括，但不限於，促腎上腺皮質激素，血管收縮素 I友 II ’ 如房利納尿胜肽（atriai natriuretic peptide)，旁貝 * * ； . /〆 素（bombesin)，緩激肽，抑鈣激素，小腦激素（cerebeUin) ，代若啡（dynophin A)，阿爾法及貝它腦内啡，内皮素 (endothelin)，五肽素（enkephalin)，上皮細胞生長因子， 弗提瑞寧（fertirelin)，濾泡的促性腺激素釋放胜肽，歸樂 寧（galan in)，升糖激素，勾多瑞寧（gonad orel in)，促性腺 激素，高色寧，生長激素釋放胜肽，西斯瑞寧（histrelin) ，胰島素，留普來，LHRH，蠕動素，内服寧，神經張力 素，催產激素，體制素，物質P，腫瘤壞死因子，吹普多 -14 二 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） [ Γ^-- (請先閲讀背面之注意事寫本頁) 丨訂

584562 五、發明説明（i2) 經濟部中央標準局員工消費合作社印策 & T (triptorelm)及血官增壓素。亦可使用上述之同系物、 衍生物、拮抗劑、激動劑及醫藥上可接受之鹽。 .有用於本發明之調配物與方法中之胜肽化合物，可爲鹽 類之开/式’較佳爲醫藥可接受之鹽類。有用之鹽類係熟習 此·^技者已知，且包括無機酸、有機酸、無機鹼或有機 驗之鹽。較佳之鹽類爲醋酸鹽。 較佳用於本發明之胜肽化合物係爲可迅速溶於非水性質 子性落劑者。技藝人士可根據其溶解度而很容易地決定可 利用之化合物，即，該化合物必需溶解至少之可接受量於 非水性質子性溶劑中，該溶解量可爲醫藥上之有效量。特 佳之落解度爲至少約丨0%(w/w)，特佳之胜肽化合物爲 LHRH-相關化合物包括留普來及留普來醋酸鹽。 胜肽之配比依化合物，欲治療之症狀，化合物溶解度， 預期劑量及投藥期間而異（例如，The Pharmac〇i〇gical Basis of Therapeutics，吉爾曼等人，第 7版（1 985)及 Pharmaceutical Sciences，瑞明頓，第 18 版（ 1990)，其揭 示於此作爲參考）。高濃反調配物中胜肽之濃度範圍可自 至少約1 0%至化合物之最大溶解度。相關之範圍係自約 20%至約60%〇/w)，較佳範圍爲自約30%至約5〇%(w/w)及 最佳範圍爲約35%至約45%(w/w)。 未預期地發現到增加溶於非水性極性非質子溶劑中之胜 肽濃度，可增加胜肽調配物之安定性。例如圖7所示， 5，10,20及40%留普來於二甲亞砜溶液於80°C下貯存8週，定 期取樣並分析測定留普來保留之百分比，含高濃度留普來 -15 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210父29：7公釐） (請先閲讀背面之注意事Ϊ .裝-- r本頁)

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-IJ n IJ1 584562 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（13) 之調配物較含低濃度留普來之調配物呈現安定性。 通常，本發明之安定性調配物係經由將治療上有效量之 所要胜肽簡早溶解於所選之非水性極性非質子溶劑。較佳 之非水性極性非質子溶劑包含二甲亞颯及二甲基甲醯胺。 如圖8所示，增加本發明之胜肽調配物所含之水會增加 胜肽之降解。其顯示此降解增加主要可因化學降解產物增 加，輿凝集維持相對恆定（圖9 )。 頃發現非水性極性質子溶劑如PEG，PG及PVP可視需要 而添加至本發明所請求之調配物中。 C ·方法 頃發現胜肽化合物之安定非水性調配物可經由胜肽化合 物並調配於非水性極性非質子溶劑而製備。 本發明已測試此等胜肽化合物調配物，特別是lhrh^ 關化合物留普來之調配物，係經由將其於高溫加速熟成後 並測定調配物之化學及物理安定性。此等研究結果（見於 例如、表II及圖1，2,4及6)説明此等調配物於37。〇下貯存大約 或遍過一年仍具安定性。^ 本發明中亦實驗如上述製備之胜肽化合物調配物於2 5兆 拉德（megarad)伽瑪射線照射後之安定性。結果如表爪所 不’在此種照射後，此等調配物維持作學及物理安定性。 以電子束照射調配物亦發現其維持安定性。 如表I所示，我們亦實驗多種胜肽調配物之安定性，特別 是留普來，高色寧，LHRH，血管收縮素！，緩激肤，抑每 激素，五肽素，胰島素，神經張力素，物質p，胰蛋白酶 (請先閲讀背面之注意事¥ .裝—— 'r本頁)

.-"! IJ. · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五

原及血管增壓素，係藉由溶解（七舍 、 叫岭解（或g試落解）它們於非水性 極性非質子溶劑二甲亞砜中，拉基认上、w T 接耆於1¾溫加速熟成後，再 實驗它們而測試調配物之安^性。其結果以37χ下之半衰 期表示於表！中，並假定Ea=22.2仟卡/莫耳。在試驗條件下 ，大範圍的受測胜肽可溶於二甲亞射並維持減。—般 的熟習技藝者可使用-般程序而輕易測定料胜肽在特定 非水性極性非質子溶射之溶解度輯㈣液之安定性。 表I :胜肤調配物亞砜中之安定性 40%南色寧 5 年（80°C) 20% LHRH 8.2 年(65〇C) 20%血管收縮素I 4.2 年(65°C) 5%血管收縮素I 4·1 月（50°C) 20%緩激肽 2·9 月（65°C) 40%抑鈣激素 不溶（80°C) 20%抑鈣激素 2.4 月（80°C) 5%抑鈣激素 2月，100%安定性（5(TC) 10%五肽素 1·9 月（80〇C) 5%五肽素 2.6 月（5(TC) 20%胰島素 不溶性膠 5%神經張力素 5 月(50。〇 5%物質Ρ 3.0 月（50°C) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事 寫· 本頁) .髮- • Ί— 111 !· · .一 584562 Α7 Β7 五、發明説明（15) 40%胜肽於二甲亞砜之調配物於37°C，50°C，65°C及80°C 下貯存6個月，經測定溶液中胜肽之總損失量，顯示其呈 現非線性阿瑞尼士（ Arrhenius)動力學，顯示此等調配物於 高溫之安定性。於37°C分析此等數據可得14.4個月之t9〇， 其顯不37°C時之安定性非常好0 溫度影響本發明調配物之降解速率及降解產物比例？留 普來·二甲亞砜調配物之研究顯示於65。〇及8(rc下之氧化 作用爲主要化學降解途徑。相反的，於37°C及50°C，此等 調配物之主要降解路線爲水解及同分翼構化。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 40%騰蛋白酶原 不溶性結晶/膠體（6 5 °C / 8 0 °C ) 20%胰蛋白酶原 不溶性膠（65°C) ~~ 5 %胰蛋白酶原 5.9 月(65°C) ~ 40%血管增壓素 分解（80°C) 20%血管增壓素 11.8天(80°C) ~ * 3 7 C下之半衰期，假定 Ea=22.2什卡/莫卑

本發明中亦非可預期地發現本發明之胜肽調配物係爲靜 菌劑（即抑制細菌生長），释菌劑（即使細菌死亡）及殺孢子 劑（即殺死孢子）。特別的、，50-400毫克/亳升之留普來調 配物呈現靜菌，殺菌及殺孢子活性。樣品之安定性並不會 被細菌影響，包括細菌死亡並溶裂釋出之酶，並不會影響 產ρα之士定性。此説明此等調也物並不有益於酶的活性。 某些胜肽，例如抑鈣激素及留普來，已知係爲物理不安 一 18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇χ297公釐） 584562 A7 B7 五、發明説明（工6) 疋性者’當其調配於水溶液時呈現凝集，膠化及纖維化。 改善物理安定性可增加生物利甩性，減輕敏感及免疫反應 ，並可輕易使用於非經腸投藥，包括使用植入性藥物輪送 系統投藥。 吾人非可預期地發現添加極性非質子性溶劑如二甲亞砜 於特定胜肽如留普來，高色寧及抑鈣激素調配於本發明之 非水性極性非質子溶劑中不會凝膠。甚至於3 7 t下1 2個 月後亦操發現凝膠。顯然地，其是因爲非水性运性非質子 性4劑可使胜肽形成隨意螺線/ α螺旋構形而不會再摺疊成 貝匕（Ρ) ^板結構’因而不會凝膠化。因此，此等溶劑具 有抗凝膠化效應σ 本發明之主要觀點爲含有胜肤化合物溶於極性非質子溶 劑之非水性溶液可於高溫長期維持化學及物理安定性，此 等調配物甚至於高溫仍爲夫定。因此，此等調配物之優點 爲其可船運及於室溫或以上之溫度下長期貯存。其亦適合 用於植入性輸送裝置。 本發‘實例之揭示 下述方法用於進行下面實例之研究。 L製備留普來醋醴轉汶治 稱重留普來醋酸鹽（例如得自Mallinckrodt，St. Louis， Missouri)並攪拌或離心而溶解適當濃度（w/w)於媒劑 (DMSO，DMF，DMSO/PEG，DMSO/PG 或 DMSO/PVP)。 無水二甲亞砜係指二甲亞砜調配物製備於低水分環境（即 無水氮氣）。 一 19 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事 裝-- 〜寫本頁}

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 584562 Α7 Β7 五、發明説明（.I7 ) .除非另有註釋，留晋來游離鹼含量係經由效力値之分析 規格而得，其値爲37%，如所預期，其相當於4〇%之留普 來醋酸鹽。 存池之製備 知植入性輸运裝置之貯存池（揭示於例如美國專利申請 案系列案號第08/5953761號，併入衣文中供作參考）充滿適 當的留普來溶&。將_配物充滿&或聚合物製成之野存池 並於每一端以聚合拴塞住。充滿的貯存池接著以聚合箔袋 密封並置於安定性試驗烘箱。 其應注意到此等裝置的貯存池中之調配物係完全與外界 環境隔離。 向-HPLCiRP-HPrr、 使用梯度沖提逆向HPLC分析所有安定性樣品之留普來 濃度及％尖峰面積，其中使用具冷藏（4χ)的自動送樣器， 以使樣品之分解最小化。所使用之色層分析條件列於下面 RP-HPLC色層分析條件 -n HI m · (請先閃讀背面之注意事- 本頁) ，裝. 訂 管柱 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 流速 注射體積 檢測 留普來滯留時間

HaiSil C18 ，4.6x250 毫米，s/N 5103051 0.8毫升分鐘- 20微升 21 Onm 25-30分鐘之間 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（is 移動相 A=100毫莫耳鱗 B = 90%乙腈/水 分鐘0 ——^~~85 85 15 h 克:_::不同濃度之留普來 克〜升之間’隨著安定性樣品'進行試驗。安㈣^ 標準套組排在一起，標準套組之間 w V .〇 . 烏/、有不超過40侗之樣 -將位於無效體積與45分鐘之間的所有尖峰予以積分。 留普來標準液之積分面積係以濃度函料製成圖。作爲安 定性樣品之各留普來濃度接著使料㈣料算。記錄並 以樣品時間點之函數緣圖留普來尖峰之％尖净面積，留普 來則 < 沖提尖峰總値（標示爲"其它（〇thers)")及留普來後 之冲提尖峰總値（標示爲"凝集（aggregates)„)。 ^^A^j^I^jgj^toc：hn)mat()g『anhv，SEg) 使用具冷藏的自動送樣器之等梯度溶液SEC分析儀（4Ό) ’分析所選擇的安定性樣品之❶/❶尖峰面積及分子量。所使 用的色層分析條件列於下面。

丨 (請先閲讀背面之注意事本頁) •裝‘ -訂 件條 析分 層 色 C Ε 敘述 參數 一 管柱 Pharmacia 胜肽，HR 10/30，l〇x3〇0 毫 米 流速 0.5毫升分鐘-1 _____ 注射體積 20微升 _一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 584562 A7 B7 五、發明説明（i9

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 2 1 Onm 約25分鐘 --Γ------;— lOQmM磷酸銨，pH2.〇，2⑻ ____，30% 乙腈 — 1 1 ........圓丨 I . .. _ 大小排除管柱之無效體積及總體積對分子量的計算係爲 必要，BioRad高分子量標準品及〇 1%丙酮係用以分別測定 操效體積及總體積。記綠Bi〇Rad標準品及丙酮尖峰中的第 一根尖峰之滯留時間，並使用下述方程式轉換成體積單位 。此等値於特別的SEC管柱及HPLC系統係爲常氩，於每次 SEC官柱及HPLC系統改變時，則重新測定無效體積及總體 積。安定性樣品之後接著進行標準品測定。標準品混合物 含有大約0.2毫克/毫升之下列胜肽：Bui^in(MW=449)， WLFR胜肽（MW=619)，血管收縮素（MW=11们）， GRF(MW=5108)及細胞色素c(mw=12394)。選用此等標 準品係因其與留普來分子量成顺序排列及具有鹼性之等電 點（9 · 8 - Π . 0)，與留普來相似。 * » •产 ' / 記綠所有尖峰之尖峰面積％，使用下述方程式計算所分 離物種之分子量。 Vs=流速（毫升/分鐘）x樣品尖峰之滯留時間（分鐘） Vo=流速（毫升/分鐘）χ無效體積尖蜂之滞留時間（分鐘） Vt==流速（亳升/分鐘）χ總體積尖+之滯留時間（分鐘） Kd=Vs-V〇/Vt-V〇 其中： -22 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（21〇χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事- π本頁) •裝· 584562 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（20) Vs =標準品或樣品體積 Vo=無效體積 Vt =總體積 Vs計算每一胜肽之標準尖峰。使用先前測定之Vt及Vq値 計算每一胜肽標準品之Kd値。使用logMW對Kd·1作圖之 線性迴歸線測定安定性樣品中每一尖峰之分子量，並記錄 安定性樣品之％尖峰面積。 5.儀器與材料 用於RP-HPLC及SEC之儀器與材料如下： Waters Millennium HPLC系統包括717自動送樣器，626 幫浦，6000S控制器，900光二極體陣列偵測器及414折射 指數偵測器（Waters ChromatQgraphy，Milford，ΜA)。 HPLC小瓶，48位置及96位置（Waters Chroinatography， Milford，ΜΑ)。 Haisil C18，120A，5 μτη 4.6x250mm HPLC 管柱 (Higgins Analytical，Mountain View，CA) 〇 Pharmacia胜肽，HRIO/^O SEC 管柱（Pharmacia Biotech ，Piscataway，NJ) o 以下實例係用以説明本發明，然並非以任何方式限制本 發明之範圍。 實例1 留普來醋酸鹽調配物之增加安定性研究 以上述方法製備含40%(w/w)留普來醅酸鹽（相當於約 3 7%留普來游離鹼）溶於媒劑之調配物，並如上述用其充 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八顿洛（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事' 寫 π本頁) -裝. 訂 線 584562 B7 五、發明説明（21) 滿植入藥物輸送裝置之貯存池。所有貯存池皆以鈦製成。 充滿的雾置在烘箱（Precision Scientific or Thelco)中於 高溫（80°C)下貯存7天以〜促進熟成。此相當於37°C下約1·5 年或室溫（25°C)下約4年。 使用上述之RP-HPLC及SEC分析樣品並測定此熟成的調 配物之化學與物理安定性。 結果表示於表II，其説明此等水性調配物可保持LHRH-相關化合物留普來之安定性。於每一例中，至少保留65% 留普來。

表II 8O°C下7天後，留普來醋酸鹽極性非質子t周配物於鈦貯存 池之安定性 調配物 7天後之留普來。/〇 40%於二曱亞颯 92 4 0°/〇於二甲亞颯/聚乙二醇（50/5 0) 90 40%於二甲亞颯/丙二醇（50/50) 86 . ; 1 ， 40%於二甲亞颯/聚乙烯吡咯酮（50/50) 93 40%於二甲基甲醯胺 91 40%於無水二曱亞砜 89 實例2 經照射之留普來醋酸鹽調配物之安定性研究 以上述方法製備含40%(w/w)留普來醋酸鹽溶於二甲亞颯 中之調配物，並如上所述將其充滿植入性藥物輸送裝置之 一 24 — 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請先閱讀背面之注意事¥ Γ寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 584562 A7 B7 五、發明説明（22) 貯存池。所有貯存池以鈦材料製成。 充滿的裝置運送至 Sterigenics(Tustin，Calfornia)，於 Sterigenics Tustin Main Cell以三階段搬運箱（t〇te b〇x)照 射，使用鈷60使其接受2.5兆拉德伽瑪射線照射。在表ΙΠ中 ，樣品標上"冷（cold)"係經船運並於乾冰中照射。樣品接 著如實例1實驗而增進熟成，於第〇及第7天取樣並如上述 使用RP-HPLC及SEC分析以測定經照射調配物之化學與物 理士足性。樣品標上”冷（cold)π係爲船運並於乾冰中照射 。樣品接著如例1進行加速熟成，於第〇及第7天取樣並如 上述使用RP-HPLC及SEC分析以測定經照射_配物之化學 與物理安定性。 結果表示於表III，其説明此等留普來醋酸鹽調配物於照 射後係爲安定。於每一例中，至少保留65%留普來及低产 之凝集物生成。 -又 表III 經2.5兆;拉德伽瑪射線照’射後，4〇%(w/w)留普來醋酸鹽 極性非質子性調配物於鈦貯存池中之安定性 (請先閱讀背面之注意事 ¾本頁) -裝·

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4^格（ -25 - 584562 A7 B7 五、發明説明（23 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Λ § ο •吞 l· * 〇 冷 l· -c .矣 o •冷 .1» -6 % 1， -a ，冷 1» -8 士 § l· -5 -£X o 冰· 十· 卜 •λ JX • o 1« % 七 iv Jp .备 P :許 5 * ? # :今 C0 C0 CD CD σ o g z b CiD αι CD CD g _v ο 〇 ，卜· 9m0 i r Ο (D CO In CO CD cn o CO CO •JW 〇 CD (D _i. CD •CD 〇 〇 CD •CD 〇 ω m ο 〇 In o cn 〇 〇 CD 〇 / o •03 〇 ro 〇 〇 •Ol 小 I CD _ CO —X o CD p g CD cn CD CD c〇 CD C3 cn CO Μ •旁 ϋϊ CD ro i〇 〇 ΓΟ CD .求 小 > .转 λ 6 2 (請先閱讀背面之注意事 π本頁) -裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） 584562 A7 五、發明説明 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實例3 田.羞來醋酸鹽過配物之改善長期查定性研索 製備40%留普來（w/w)於二曱亞颯中之溶液並將其注 貯存池中，於80°C下貯存兩個月並以上述方法分析。結果 見於圖l(RP-HPLC)及圖2(SEC)，其顯示回收81 1%留1 來，只有14.6%化學降解及5.1%物理凝集。 曰 留普來醋酸鹽溶液經製備、注入、貯存於8〇。〇下6個月 並以上述方法分析。圖4係爲留普來及其化學及物理降解 產物於超過六個月後回收之圖形，其説明本發明中所有起 始之胜肽物質及此等調配物於8 (TC顯示良好之安定性。此 三個元素之總數亦以質量平衡表之。圖5爲此等數據之自然對數圖，顯示此等調配物於超過全部受測溫度範圍時呈 現線性動力學。 如上所述方法製備及分析40%留普來醋酸鹽溶液，其化 學安定性表於圖6。於37 °C下9個月後，存有超過 90%(93·5%)之留普來及少於5%(29%)之化學降解產物（圖 中以"早’丨early表示）以及士於5 %(2 3%)之物理凝集形成（圖中以"晚"late表示並根據Rp_HPLC圖譜且符於SEC數據者）〇 製備40%留普來醋酸鹽（w/w)於二甲亞砜之溶液、將其 注入貯存池並貯存於37。(：，5〇Ό，65148〇ό下，並使用 如上所述之RP-HPLC進行分析。將所得結果依Physicai Pharmacy. Physical Chemical Principle in thePharmaceutical Sciences，3rd e4.，Martin et al·，Chapter C請先閲讀背面之注意事 本頁) -裝· 訂 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 584562 A7 - — --— —— _ · B7 五、發明説明（25 ) ' 14(1 983)中所述之方法外霄 乃古冲算，其顯不二甲亞砜調配物 普來之損失呈現非缓性。甘奴缺、人 田 F深〖生。其數據列於下面且其阿瑞尼士 (Arrhenius)圖表示於圖3。

(請先聞讀背面之注意事 本頁) •裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 以上述方法製備40%留普來醋酸鹽（w/w)溶於二甲亞砜， 二甲亞砜/ 水（95:5，90:1〇，70:30，5〇:5〇及3〇:7〇)與水中 之調配物並於8CTC下培養7天，第〇天及第7天時以傅立業 轉移紅外線式分光光度計（F〇urier Transfer Spectroscopy，FTIR)進行分析。 結果顯示所有受測調配物經增進熟成後，留普來之結構 構形改變極少。通常，在二甲亞砜調配物中，胜肽結構主 要爲隨機螺線或α螺旋’而在水中之調配物，胜肽結構主 要爲β摺板。 上述實施本發明各具體實施例之改良模式，係可由技藝 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 線 584562 A7 B7 五、發明説明（26 ) · 人士依本發明之敎示即可得知。上述實施例並非以限制本 發明之範®，而僅爲例示之用，本發明之範圍係以下列申 請專利範圍啶義。 (請先閱讀背面之注意事 π本頁) -裝.

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ 297公釐）

Claims (1)

1. 584562 A8 B8 C8 D8

   第861039386號專利申請案 令文申請專利範圍修正本（90年6月） $、申請專利範圍 1 · 種胜肤化合物之安定非水性組合物，其包含： a)至少一種胜肽化合物；及 发1 T-T W至少一種極性非質子溶劑。 ;，2·根據申請專利範圍第1項之組合物，其包含至少 10%(w/w)之胜肽化合物。 ,3.根據申請專利範圍第1項之組合物，其包含至少 3 0%(w/w)之胜肽化合物。 ^ ·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該胜肽化合物 ^ 係為LHRH-相關化合物。 f·根據申請專利範圍第4項之組合物，其中該胜肽化合物 % 係選自由留普來（leuprolide) ，LHRH ，内月艮寧 (nafarelin)及高色寧（g0serelin)所組成之群。 6. 根據申請專利範圍第1項之組合物，其於8 〇 °c至少可安 定2個月。 7. 根據申請專利範圍第1項之組合物，其於3 7 °C下可安定 至少3個月。 8. 根據申請專利範圍第1項之組合物，其於3 7。〇下可安定 至少一年。 9.根據申請專利範圍第1項之組合物，其適合用於植入性 藥物輸送裝置。 10·根據申請專利範圍第1項之組合物，其進一步包含非水 性質子性溶劑。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) IT 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 584562 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 1 1.根據申请專利範圍第1項之組合物，其中該極性非質子 溶劑係選自由二甲亞颯及二甲基甲醯胺所組成之群。 1 2.根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該極性非質子 溶劑可提供抗凝膠化效果。 1 3 ·根據申請專利範圍第1項之組合物，其由3 〇 %至 5 0%(w/w)之LHRH-相關化合物留普來醋酸鹽溶於二甲 亞石風所組成。 14 ·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中留普來及二甲 亞颯以3 7 0亳克留普來溶於1毫升二甲亞戚之比例組成 〇 1 5 .根據申請專利範圍第1項之組合物，其經照射後係為安 定。 16· —種製備申請專利範圍第1項之安定性非水性調配物之方法， 包含溶解至少一種胜肽化合物於至少一種極性非質子溶 劑。 17.根據申請專利範圍第16項之方法，其中溶解至少 10%(w/w)之胜肽化合物。 1 8.根據申請專利範圍第丨6項之方法，其中溶解至少 3 0%(w/w)之胜肽化合物。 19·根據申請專利範圍第16項之方法，其中該胜肽化合物 係為LHRH-相關化合物。 20.根據申請專利範圍第1 9項之方法，其中該胜肽化合物 -2- 本紙張尺度適用中國國家棣準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 584562 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 係選自留普來（leupr〇lide)，LHRH，内服寧（nafarelin) 及南色寧（goserelin)所組成之群。 2 1.根據申凊專利範圍第1 6項之方法，進一步包括添加非 水性質子溶劑之步驟。 22·根據申请專利範圍第Μ之方法，其中％%至5〇%(w/w) 之LHRH相關化合物留普來醋酸鹽（ieilpr〇lide acetate) 係溶於二甲亞砜中。 23·根據申請專利範圍第16項之方法，其中37〇毫克留普來 係溶於1毫升二甲亞砜。 24.根據申請專利範圍第1項之組合物，係用於治療罹患經 投藥胜肽化合物而可減輕症狀的患者。 25 ·根據申請專利範圍第24項之組合物，其中該投藥係為 非經腸之投藥。 26·根據申請專利範圍第24項之組合物，其中之投藥係為 長期連續投藥。 27·根據申請專利範圍第26項之組合物，其中之投藥係使 用植入性藥物輸送裝置而完成。 經濟部中央標準局負工消費合作社印装 28·根據申請專利範圍第24項之組合物，其中該症狀係為 前列腺癌及該胜肽化合物係為留普來（leupr〇lide)。 29.根據申請專利範圍第28項之組合物，其中每天投藥至 少約80微克之留普來（leupr〇lide)。 3 0.根據申請專利範圍第29項之組合物，其中每天連續投 -3- 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） A8 B8 C8 D8 申請專利範固 藥<期間係選自由3個月，6個月及12個月所組成之群 〇 1根據申凊專利範圍第3 0項之組合物，其中該每天投藥 期間’係使用植入性藥物輸送裝置完成連續投藥。 J ·根據申請專利範圍第24項之組合物，其中該症狀係為 則列腺癌及該胜肽化合物係為LHRH拮抗劑。 (請先閲讀背面之注意事項再填· T I * I _ _ 經濟部中央標率局員工消費合作社印策 本紙张尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐）