TW446560B - Pharmaceutical compositions for use in inhibiting colon tumors - Google Patents

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^ 44656 Ο 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 Α7 Β7_五、發明説明（1 ) 發明背景 結腸癌，包括直腸與結直腸之腺癌，原發性或轉移性腺 癌等。係當前疾病發生之主要健康課題。預計25分之一 美國人其畢生之年會發展某些形式之結勝癌。Sugarbaker, P. Η，等人.，in Cancer，DeVita，V.T.，等人.（Eds.), Lippincott Publ. Philadelphia，pp. 795-884(1985) 0 治療上，廣泛使用外科手術會有良好、混合或較不利結 果。明確言之，結腸癌病患中宥扃部進展或轉移疾病，預 後極不利且有高之死亡率與罹病率。 已試用藥物治療但結果不佳。抗贅瘤化合物，5 -氟尿嘧 啶（5-FU)係治療結腸癌之主要選用藥，且其用途已證實僅 有勉強作用》5-FU可暫時減少結腸腫瘤大小但少有證據顯 示病患存活時間有實質上延長或得到治療（以減輕5年期間 爲主）》曾對轉移至肝臟病患施用5-FU化療但觀察到僅 25 %或更少情形有暫時改良，且整體上存活無顯著影響。 LaMont, J.T.及 Isselbacher, K,.，in Harrisonfs Principles of Internal Medicine (10 版）McGraw-Hill, New York，p. 1764, (1983)。儘管5-FU之勉強作用，相信無其它藥物或组合療 法 g 示更有效作用。Sugarbaker P.H.等人.，supra. Wooley， P.V·，等人，New Eng. J. Med.，312:1465(1985)。 亦評估藥物療法治療人類癌症如人類結腸癌異種移植 系，其中人類腫瘤連續異種移植入免疫缺失者，稱作“裸” 鼠，然後，試驗該鼠對特定藥物之反應。Giovanella, B.C. 等人·，Cancer 5(7):1 146 (1983)。這些研究所得數據強烈支 (請先閱違背面之史意事項再，_lr本頁) 訂 本紙張尺度逍用中國國家橾準（CNS)A4规格（210X297公釐） ^ 446560 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消费合作社印取 五、發明説明（2 ) 持異種移植人類腫瘤（包括結腸腫瘤）植入免疫缺失哺乳動 物（如裸鼠）之可行性當作試驗抗癌藥劑有效之預測模式。 於簡便臨床試驗中用天然源之生物鹼、喜樹鹼之鈉鹽評 估進一步可治療癌症之病患的毒性作用。Gottlieb, G.A., 等人.，Cancer Chemoterapy Rep. 54 ： 461 (1970) » 雖然治病 療患之中間存活率由約二個月增至3 · 5 +個月但由此研究 中少有結論引出。 喜樹鹼衍生物或類似物已合成立用於老鼠中當作抗血癌 劑（見如 Wani，M.C·，等人.，J. Med, Chem. 23 : 544，1980 : Wani M.C·，等人，J· Med. Chem. 30:1774(1987);及Wani, M. C.等人.，J. Med. Chem. 30:2317 (1987) » 美國專利4,473,692及4,545,880中，Miyasaka等人揭示10-經取代喜樹檢衍生物及其製法。10-經取代喜樹鹼衍生物 據氣擁有抗腫瘤活性且與母趙喜樹驗化合物相較能減少或 稍具毒性。Miyasaka等人未揭示特定腫瘤標的物亦未指出 使用其1 0 -經取代喜樹檢化舍物可減少或稍具毒性之程 度。 近來，酶’人類拓樸異構酶I檢驗於不同人類癌症如血 癌.、淋巴癌，Potmesil M.等人，Cancer Res. 48:3537 (1988) »已知人類拓樸異構酶I係單體蛋白質且有ι00,000 道可呑之明顯分子量。於不同DNA處理情形中（複製、轉 錄及重组）臆測該酶之迴旋狀功能。已純化哺乳類拓樸異 構晦I鬆弛正向超螺旋及負向超螺旋DNA，其機制涉及暫 時裂開二個DN Α股中任一股且形成共償拓樸異構酶ΐ- ---)-- -I I : II ^^1 ! - I I - I (請先閲请背面之泫意事項本頁) 本紙張尺度逋用中國國家橾窣（CNS > Α4%格（210X297公釐〉 44656 Ο Α7 _____Β7__ 五、發明説明（3 ) DNA複合物。此複合物中，酶共償聯結至已裂開dNA主 幹之3、鱗酿基端。 近來，揭示在癌组織（如結直腸腺癌之手術檢體）中拓樸 異構酶I之酶量較正常粘膜之酶量平均較高（Hsiang，γ Η， 等人，Proc Ann Meet of the Amer. Assoc. Cancer Res. 29 : 172 (1988)摘要β雖然指出拓樸異構酶：可當作此病症（結直腸 癌）之化療另一標的，但完全沒有揭示或建議任何特定拓 樸異構酶I交互作用藥物。 … 由病患進行結腸癌之昔知治療（如手術切除或用5 _ F U之 化學療法）非常差的5年存活率觀之，·使用藥物或化合物有 效治療人類惡性結腸腫瘤，接著手術（例如協助建立診斷 及移除大量癌）之新方式發現極有用。藥物治療對已有轉 移或擴散至不同器官之病病患者亦有幫助故以手術移除所 有癌組織不適當。 發明摘述 本發明提供一種抑制哺乳頰結腸癌之方法，其係將有效 量化合物;[投與所需哺乳動物 ---- n n n I I (請先閔请背面之.¾意事項再¥本頁) 17 線 M濟部中央標準局貝工消费合作社印浆

-* fi — 本紙佚尺度適用中圃國家榇準（CNS ) M规格（2丨0><297公着 > 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印掣 44656 Ο Α7 Β7 五、發明説明（4 ) 〇 0 “ t 3 1丨 丨丨 其中R1及R3分別爲氩、-CH3 '-CHCVCe烷基）或-C-Ar， 其中Ar係任意經取代苯基； R2係選自吡咯啶、六亞甲亞胺基及Ν -六氩吡啶基；或其 醫藥上可接受鹽或溶劑合物。 發明詳述 本發明係關式I之之2 -苯基-3-芳醯基苯幷嘍吩（苯幷„塞 吩）選擇基困用於抑制結腸癌之發現。 實施本發明方法係將可有效抑^彳結腸癌之式I化合物或 其醫藥可接受鹽或溶劑合物之劑量施於所需之人。術語 "抑制"其一般所接受之意義，包括禁止、預防、制止及延 緩、中止或逆轉進展性、嚴重性或所得症狀或作用β 羅西芬（Raloxifene)係Ri及r3爲氩且以爲丨_六氫吡啶基之 本發明化合物之鹽酸鹽，乃一核調節分子。業經顯示，羅 西¥可與雖激素受趙結合，由於其可阻斷雄激素活化子宮 組織及雄激素依賴性乳癌之用’是-以最初被認爲係具抗 -雌激素功能及藥學活性之分子。羅西芬確可阻斷雌激素 在某些細胞中之作用；然而’在其他細胞中，羅西芬則可 活化與雌激素所活化之相同基因，並展現相同之藥學活 性’如骨質疏鬆症，高脂血症。因此，羅西芬被稱爲具混 合共效劑·拮抗劑性質之抗-雌激素。羅西芬所展現之獨特 五與雖激素不同之性質現被認爲係由於羅西芬-峰激素受 體複合物對各種基因功能之獨特活化及/或抑制作用與雌 激素-雌激素受體複合物對該等基因功能之活化及/或抑作 本紙張尺度通用中困困家標準（CNS ) A4規格（210X297^^7 (請先閲使背面之ii.寒項再.V本頁) .絮. 丁 . --¾ 44656 Ο 經濟部中央梯準局負工消費合作社印策 Α7 _______Β7五、發明説明（5 ) 用相反之故。因此，維然羅西芬與雌激素係利用及競爭相 同之受想’但二者之基因調節產生之藥學結果並非可輕易 預知者’各自不同。不過’這並不表示該作用機制必然係 全部或部份經由動情素受體本身所調介者。 一般，該化合物係與習用之佐劑，稀釋劑或載劑一起調 配，壓縮成錠劑，或製成便於口服酏劑或溶液劑，或藉肌 肉或靜脈注射途徑施用=該化合物可經皮施用，且可調製 成延遲釋放劑型等。 本發明方法所用化合物可依已知之方法製備，如美國專 利第4，133,814,418,068及4,380,635號所詳述者，此等文獻 爲本文之參考。大趙而言，該方法係以具6_經基及2_(4_ 經基表基）基團之苯并[b]>»塞吩爲起始物。該起始化合.物經 保護、醯化及去保護而形成式I化合物。前述美國專利揭 示此等化合物之製備實例《視情況經取代之苯基包括苯基 及經C丨-Ce娱•基、CVC4娱•氧基、經基、硝基、氣、氟或三 (氟或氣）甲基單或二取代之苯基。, 本發明方法所用之化合物可與廣泛種類之有機及無機酸 及磁·形成醫藥可接受酸及驗加成鹽，其包括常用於藥劑化 學孓生理可接受鹽》此等鹽類亦構成本發明之一部份。用 於形成鹽之典型無機酸包括鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝 酸’硫酸，鱗酸及次濟酸等。亦可使用衍生自有機酸之 鹽，該有機酸諸如脂族單元及二元幾酸，經苯基取代之烷 酸，經燒酸及經烷二酸，芳族酸，及脂族及芳族續酸。因 此，醫藥可接受鹽包括乙酸鹽，苯乙酸鹽，三氟乙酸鹽， -8 - 本紙張尺度適用中國囷家揉率（CNS ) Α4说格（2丨0X297公釐） · " 44656 0 經濟部中央樑準局員工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6 ) 丙烯酸鹽，抗壞血酸鹽，苯甲酸費，氣苯甲酸鹽，二確基 苯甲酸鹽’羥基苯甲酸鹽’甲氧基苯甲酸鹽，甲基苯甲酸 鹽’ 〇 -乙醯氧基苯曱酸登，茶-2-苯甲酸鹽，溪化物，異 丁酸鹽，苯丁酸鹽羥基丁酸鹽，丁炔-1，4 -二酸鹽， 己炔-1,4-二酸鹽’癸酸鹽，辛酸鹽’氣化物，肉桂酸 鹽，檸檬酸鹽，甲酸鹽，反丁烯二酸鹽，羥乙酸鹽，庚酸 鹽，馬尿酸鹽，乳酸鹽，蘋果酸鹽，順丁烯二酸鹽，幾丁 烯二酸鹽’丙二酸鹽，笨乙醇畝鹽，甲磺酸鹽，於驗酸 鹽，異菸鹼酸鹽，硝酸鹽’草酸鹽，酞酸鹽，對酞酸鹽， 磷酸鹽’單氫磷酸鹽’二氫磷酸鹽，偏磷酸鹽，焦鱗酸 鹽’丙炔酸鹽，丙酸鹽’苯丙酸鹽，水揚酸鹽，癸二酸 鹽’琥泊酸鹽’辛二酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，焦硫酸 鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磺酸鹽，苯磺酸鹽，對_溪 苯磺酸鹽，氣苯磺酸鹽’乙磺酸鹽，2 -羥基乙續酸鹽，甲 磺酸鹽，葚-1-磺酸鹽’莕-2-磺酸鹽，對甲-苯磺酸鹽， 二甲苯磺酸鹽，及酒石酸鹽等。較佳之鹽爲鹽酸鹽。 醫藥可接受之酸加成鹽通常係藉式（1)化合物與等莫耳 或過量之酸反應而形成。反應物通常係於相容之溶劑中混 合’如乙謎或苯。該鹽通常係於約1小時至1〇日内由溶液 中析出’可藉過濾或習知之方法汽提溶劑而使之分離。 佘用於形成s之驗包括兔氧化按’驗金屬及驗土金屬氫 氧化物’碳酸鹽，及脂族及一級，二級及三級胺，，脂族二 胺。特別可用於製備加成鹽之鹼包括氫氧化銨，碳酸鉀， 甲胺，二乙胺，乙二胺及環己胺。 -9 - 本紙張尺度財S®家料（CNS)纟视格（21GX297公4 ) --- (諳先閲诊背面之"注意事項本頁) ^6 經濟部中央樣孪局員工消费合作社印策 44656 Ο Α7 Β7 五、發明説明（7 ) 醫藥可接受鹽與彼等所衍生化合物相較，通常具較高之 溶解度性質，因此較易配製成液體或乳劑。 醫藥調配物可藉此技藝已知之方法製備。例如，可使化 合物與常用賦形劑，稀釋劑或載劑調製成錠劑，膠囊劑， 懸浮液劑及粉劑等。適用於該調配物之賦形劑，稀釋劑及 載劑包括：填料及増量劑，如殿粉，糖，甘露醇及妙酸衍 生物；黏合劑，如羧甲基纖維素及他種纖維素衍生物，蕩 故鹽，明勝及聚乙缔说洛咬明：濕湖劑，如甘油；崩解 劑，如碳酸鈣及碳酸氫鈉；溶離延遲劑，如石蠟；吸收加 速劑，如四級按化合物；界面活性劑，如鮮蝶醇，甘油單 硬脂酸酯；乂附載劑，如高嶺土及膨土；及潤滑劑，如滑 石粉，硬脂酸鈣及鎂，與固態聚乙二醇。 該化合物亦可製成便於口服之酏劑或溶液劑，或適於非 經腸道施用之溶液劑，如用於肌肉，皮下或靜脈注射。此 外，該化合物適於製成延遲釋放劑型或類似者。該劑型可 製作使活性成份僅於腸道或較佳係於腸道之特定部位釋 放，可能的話係於一段時間内釋放。可使用例如聚合性物 質及蠟作爲包衣，外膜及保護性基質。 作制結腸癌所需之本發明式I化合物之特定劑量依病症 之嚴重性，施用途徑，與相關因素而異，其可由醫師所決 定。一般而言，可接受之每日有效劑量介於約0.1至約 1000毫克，更典型爲介於約50至約200毫克。需洽療之個 體每日服用該劑量一至約三次，或視需要更多次，以有效 抑制結腸癌。 -10 本纸張尺度適用中國鼷家揉隼（CNS > A4規格（210XW7公釐)~ {請先聞修背面之.注意事項本頁) 訂 «4656 0第中 86100香32號身文說明丨書修泊 - 32號專利修娜漂|4是) A7 B7 五、發明说明（ 8 如帶有像六氫吡啶環等之驗性基囷之藥劑之習用施用 法，一般較佳者係施用呈酸加成鹽之式I化合物》亦宜將 化合物口服路徑投藥。下示口服劑型可適用於該目的。 調配物 下文調配物中"活性成份"係指式I化合物。 調配物1 :明膠膠囊 以下示成份製備硬殼明膠膠囊： 成份 活性成份 澱粉，NF 澱粉可流動粉末 0.1-1000 0-650 0-650 石夕嗣液體，350厘泡 0-15 將成份摻合，通過美國篩目第45號篩，並將其填充 殼明膠膠囊中。 已製備之羅西芬膠囊調配物之實例如下： 調配物2 ：羅西芬膠囊 至硬 <請先閲讀背面之注^'項再4寫本頁) - 丁 經濟部+央棣準局貝工消費合作社印策 1 112 225.3 .7

成份 羅西芬 澱粉，NF 澱粉可流動粉末 矽酮液體，350厘沲 調配物3 :羅西芬膠囊 本紙張尺度適用中®B家橾率（CNS )八4規《格（210X297公釐） 4 4 6 5 6 0 A7 B7 五、發明説明（9 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印^ 成份 量（毫克/膠囊） 羅西芬 5 澱粉，NF 108 澱粉可流動粉末 225.3 矽酮液體，3 5 0厘沲 1.7 調配物4 :羅西芬膠囊 成份 - 量（毫克/膠囊） 羅西芬 ~ 10 澱粉，NF 103 澱粉可流動粉末 225.3 矽酮液體，3 5 0厘沲 1.7 調配物5 :羅西芬膠囊 成份 量（毫克/膠囊） 羅西芬 5 0 澱粉，NF . -150 澱粉可流動粉末 397 矽酮液體，350厘沲 3.0 丰述特定調配物可依合理差異而改變。 用下示成份製備錠劑調配物： 調配物6 :錠劑 成份 量（毫克/錠劑） 活性成份 0.1-1000 -12- 本紙張尺度適用中因國家標準（CNS ) A4現格（210X297公釐） (請先閲氣背面之注意事項苒 —柒\本 頁) ► 446560 A7 B7 五、發明説明（1〇 ) 微晶纖維素 發煙二氧化矽 硬脂酸 0-650 0-650 0-15 混合各成份，將之壓製成錠 或者’依下示者製備每錠含0.1，1000毫克活性成份之錠 劑： 3¾ .配翌丄:錢劑 成份 活性成份 澱粉 微晶纖維素 聚乙缔e比洛咬酮 (1 0 %水溶液） 羧甲基纖維素鈉 硬脂酸鎂 滑石粉 量（毫克/錠劑） 0.1-1000 45 35 4 4.5 0.5 ---------弟— (請先聞後背面之ii-意事項再/本頁) -il 線· 經濟部中央標準局負工消費合作杜印製 使活性成份，澱粉及纖姙素通過美國篩目第45號篩，充 分蟲合=混合聚乙烯吡咯啶酮溶液與生成之粉末，然後通 過美國篩目第14號篩》於50-60 *C下乾燥所得顆粒，通過 美國篩目18號篩。然後將先前通過美國篩目第6〇號篩之 複甲基纖維素鈉，澱粉，硬脂酸鎂及滑石粉加至顆粒中， 淚合後，於製錠機上壓製成錠。 依下示者製備每5毫升劑量含0.1-1 〇〇〇毫克藥劑之懸浮 3 本紙伕尺度埴用中國國家橾準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐） ^ 44656 Ο A7 B7 五、發明説明（11 ) 液： 調配物8 :懸浮液 成份 活性成份 羧曱基纖維素鈉 糖漿 笨甲酸溶液 香料 色素 純化水 量（毫克/5毫升） 0J-1000 毫克 50毫克 1.25毫克 0.10毫升 足量 足量 加至5毫升 —---------秦 I — (諳先閱说背面之：1!1意事項真本頁) 經濟部中央橾隼局貝工消費合作社印m. 使藥劑通過美國篩目第45號篩，使其與竣甲基纖維.素鈉 及糖漿混合，形成均勻糊劑。以些許水稀釋苯曱酸溶液， 香料及色素’搜拌中加入，然後加入足量之水至所需體 積。 硬纖维腫瘤係纖維性來源之稀有非轉移腫瘤。臨床相關 4 建議類固醇激素可能在這些腫瘤之天然病史中扮演一角 色：女子發於帶+孩年齡之婦女病患且這些腫瘤之消退與 停經或抗雌激素療法有關》 * 此工作之目標係確認硬纖維腫瘤原位細胞之雌激素受體 及評估式I化合物對初步培養之硬維維腫瘤細胞的作用。 由於有時硬纖維腫瘤發展於家族腺瘤息肉症（F人Ρ)'之病 患，其可在結腸或直腸癌中惡化，吾等已試驗化合物I a對 腺癌細胞系（HCT8)及结腸生體檢體之纖維細胞之細胞生 本紙張尺度逋用中國國家搮準（CNS >八4規<格（2I0X297公釐） 4 4 6 5 6 0 A7 ________B7_ 五、發明説明（12 ) 長的抑制作用。 化合物I a係式I化合物，其中R2係吡咯啶基且R1及尺3係 氫。 用完整細胞進行結合研究。將硬纖維腫瘤置於生長培養 基（Coon氏改良Ham氏F12補充10% FCS)之6槽盤》24小時 後’用穩定不變狀態培養基（無酚紅）取代生長培養基且將 細胞维持在缸餓歷2 4小時β然後用1毫升無酚紅含25 HEPES及0.5% EtOH(結合緩衝痢）之培養基培育細胞1小 時’並増加[3H] 17/3 E2之濃度（0.05-10 nM)有無500倍過量 未標記17/5 E2與化合物la β培育後，用800微升结合緩衝 剞沖洗細胞二次且在7(TC用IN NaOH溶胞3 0分》然後在各 槽中加入4N HC1供中和。以液態閃爍顯微鏡測量放射性。 以Scatchard分析評估E R結合親和性及結合能力。 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印裝 ---------絮-- (请先Μ说背*之>ΐ·意Ϋ項具本瓦) 所有後續步驟係在0-4。(：時進行》在多穩元件均句機中 用二次1 0秒猝發均勻粉碎組織，以3 〇秒冷凍期間於下列 緩衝劑：10 mM Tris-Ηα，5 n>M EDTA，10 mM鉬酸鈉，10 硫蘇糖醇’ 10%甘油（v/v)，pH 7.4中分離。在7000克時 離心均質2 0分且倒掉丸粒，在105000 g時再離心上，清液 60分以得到雌激素受體分析之細胞液。依Bradford方法決 定細胞液蛋白質。爲了雌激素受體評估，在4·(：，0.05-5 mM [3Η]17々Ε2之濃度有無500倍過量未標記170 Ε2及化合 物I a時培育細胞液1 6小時》以Scatchard分析評估E R結合 親和性及結合能力。 將細胞置於8 X 104細胞密度之6個槽盤供生長培養基之 -1 5 - 本紙張尺度遘用中國國家樣準（CNS ) A4*t格（210X297公釐) " 4 46 56 0 A7 ___B7_ 五、發明説明（13 ) 槽。2 4小時後，於生長培養基（無紛紅，補充〇丨％ DMF， 0.1 /i EtOH 及化合物 I a 之不同濃度（2x ，5x 1(Τ6Μ，10·6Μ))中刺激細胞。 培育細胞6天，用胰蛋白/乙二胺四乙酸溶液分離，然後 在顯微鏡上計數以評估生長。使用相同方法對結腸癌原位 母纖維細胞系及HCT8細胞系：此系係在rpmi中培養並在 刺激後培育4天。 用酶聯結免疫分析法（EUSA)洳量培養基内膠質型I與細 胞層。在無補充Coon氏改良Ham F12培養基（含5〇微克/毫 升抗壞血酸及100微克/毫升/3胺丙殖基延胡索酸鹽）培育 細胞2 4小時。 收培養基且0.1 Μ碳酸鹽/竣酸氫鹽緩衝劑（pH 9.6)適當 稀釋然後用來塗覆ELISA盤，在4 X過夜，培育ELISA盤於 3 7°C ’含5%奶粉之PBS(PBSBlotto)l,5小時以飽和非特定 結合位址，於3 7 °C，含特定多純系抗體之PBS Blotto 2小 時，及於37°C，含山羊抗免IgG-鹼性磷酸鹽共軛複合物之 PBS BI〇tto(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) e 經濟部中央樣準局工消費合作社印装 ----------^II (請先閱讀.背&之ίΐ·意事項苒\本頁) 然後在室溫將檢體曝至10%二乙醇胺（pH 9.8)，其具有 5 0微克/毫升Mg++及1毫克/毫升磷酸對硝苯酯當作鹼性磷 酸鹽之受質。在405 nM讀光密度且以標準曲線爲主計算濃 度。收單層細胞於0.5N NaOH且以聲音決定細胞第I型膠蛋 白。然後以0.1 Μ碳酸鹽/碳酸氩鹽（pH 9.6)稀釋細‘胞萃取 物五用來塗覆ELISA盤。分析標準體與檢體三次。表達結 果成微克蛋白質/微克細胞DNA »分光螢光測量DNA含 -1 6 - 本紙乐尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4规格（210X297公羡)

4 5 ^C|6100832號專利申請案 中文說明書修正頁(88年4月） 五、發明説明（14) 量° 用[3H] 17 yS E2當配體對原硬纖維腫瘤細胞和硬纖維腫瘤 之冷凍檢體進行結合實驗。 實驗中’ [3H]17召E2結合稍（約10%)被500倍過量未標記 雌激素及化合物U置換。用電腦結合程式LIGAND(Munson P. J.，’Rodbard D. Anal. Biochem, 1980; 107:220-39.)對[3H]17 /3 E2結合數據做Scatchard分析顯示由硬纖維腫瘤之生體檢 體製備之三個不同培養物及二個不同細胞液中有ER出 現。 在生長分析中，於曝露至化合物I a之不同濃度時刺激硬 纖維腫瘤原位細胞。結果係細胞生長抑制隨化合物I a濃度 而增加（表1 )。用HCT8細胞系（表2 )及用結腸癌母纖維細 胞系（表3 )得到相似結果。 以化合物I a之劑量-依附方式抑制硬纖維腫瘤細胞，化 合物u之濃度為i〇-5m，5 X ιο·6μ，ιο·6μ而在1(Γ5Μ濃度時 有最大抑制作用（表4)。 化合物I a可以僅在非常高濃度（超過5 0 0倍）置換結合至 硬纖維腫瘤組織之17办E2。 化合物I a可在微莫耳濃度時顯著抑制硬纖維腫瘤細胞。 此外，在相似濃度，化合物抑制人類結腸癌所衍生表皮及 母纖維細胞之增生。 在原培養基之硬纖維腫瘤細胞中化合物U亦顯著減少第 I型膠原蛋白產生。 在用雌激素反應性元素轉染硬纖維腫瘤細胞受試之所有 '17- 本紙依尺度適用中囷國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公* ) (請先W讀背面之注WM?·#^寫本頁) -4. 訂 經濟部中央標準局員工消费合作社印策 4 46 5 6 0 A7 B7 五、發明説明（15 ) 條件（電穿孔，C a/P沈澱，脂質體）下，細胞受 不適合"活體外"分析。 致 導 經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 表1 化合物Ia(Mol/L) X l〇"4 對照組 12.3 2.10'5 0.1 ΙΟ5 2.8 5.10'6 7.0 10'6 表2· 10.0 化合物Ia(Mo丨/L) - 細胞X ίο-4 對照組 150 2.10'5 3 10」 71 5.10'6 表3 115 化合物IaiMol/L) 包 x l(T4 對照組 7.6 2.10·5 0.1 10'5 5.4 5.10'6 6.3 10·6 7.6 表4 DNA DNA 膠蛋白 膠蛋白 (OD.) I型 I型 (pg^t) (u g/μ gDNA) 對照組 4.85 ±0.32 1.36±0.06 47.82±4.15 35.00±1.41 化合物k 1 μ Μ 8.20±0.23 1.97±0.05 43.78±5,23 2200±1.46 化合物Ia5/iM 6.90±0.50 1.85土024 38.01±6.24 20.50±0.61 化合物IalO/ίΜ 7·90±1.46 1，96土0.29 35.16±2_44 18.00±1.41 値 ρθ.005 ρθ.005 p<0.005 (請先55谁$ V注意事項K f本頁) -18' 本紙張尺度逋用中國國家標率（CNS )从規格（210x297公釐}

Claims (1)

1. 446560 第86100832號專利申請案 中文申請專利範圍修正本(卯年4只、莒 Α8 Β8 修正 本年月 補充 90.4*30 Β 六、申請專利範圍 1. 一種用於抑制哺乳類結腸癌之醫藥組合物，包含具有 下式化合物

   其中R丨及R3分別為氫、_CH3、-丨i-(c丨-C6烷基）或-丨ά-ΑΓ 其中Ar係任意經取代苯基； ΐ - 4] ί ^^^1 ml nn I ^^1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 R2係選自吡咯啶、六亞甲亞胺基及Ν-六氫吡啶基；或 其醫藥上可接受鹽及其溶劑合物。 2·根據申請專利範園第1項之醫藥组合物，其中該哺乳類 係人* 3，根據申請專利範困第1項之醫藥組合物，其中該化合物 係其鹽酸鹽。 經濟部中央揉準局員工消費合作社印策 4.根據申請專利範圍第1項之醫藥组合物，其中該化合物 係 本紙張尺度逍用中躏國家樣準（CNS )从嫌雇（210X297公釐） 446560 AS Β8 C8 D8 六、申請專利範圍

   或其鹽酸鹽。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印簟 本紙張尺度逋用中困國家揉準（CNS ) A4*t格（210X297公釐） I修正 ^本年为日 89. 12. 13 公-告本 一乂 4 C4 (89年12月修正頁）446560 申請曰期 86. 1. 25. 案 號 86100832 類 别 (以上各棚由本居墙註） .墨專利説明書 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 、發日月幺砬 新型名％ 中 文 抑制結腸腫瘤之醫藥組合物 英 文 "PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR USE IN INHIBITING COLON TUMORS" 姓 名 1. 利亞路易沙布蘭迪 2. 法蘭希斯哥拓尼里 _ 發明λ 一、創作 國 籍 住、居所 1-2.均義大利 1. 義大利佛蘭斯市莫塔班諾路3 16號 2. 義大利佛蘭斯市蘇爾瑪利亞希里特路13號 姓 名 (名稱） 美國禮來大藥廠 國 藉 美國 三、申請人 住、居所 (事務所) 美國印第安那州印第安那普利市禮來公司中心 代表人 姓 名 彼得.G.史君格 -1 - 本紙張尺度適用中國囷家標準（CNS) A4規烙（2丨Ο X 297公笼） «4656 0第中 86100香32號身文說明丨書修泊 - 32號專利修娜漂|4是) A7 B7 五、發明说明（ 8 如帶有像六氫吡啶環等之驗性基囷之藥劑之習用施用 法，一般較佳者係施用呈酸加成鹽之式I化合物》亦宜將 化合物口服路徑投藥。下示口服劑型可適用於該目的。 調配物 下文調配物中"活性成份"係指式I化合物。 調配物1 :明膠膠囊 以下示成份製備硬殼明膠膠囊： 成份 活性成份 澱粉，NF 澱粉可流動粉末 0.1-1000 0-650 0-650 石夕嗣液體，350厘泡 0-15 將成份摻合，通過美國篩目第45號篩，並將其填充 殼明膠膠囊中。 已製備之羅西芬膠囊調配物之實例如下： 調配物2 ：羅西芬膠囊 至硬 <請先閲讀背面之注^'項再4寫本頁) - 丁 經濟部+央棣準局貝工消費合作社印策 1 112 225.3 .7

   成份 羅西芬 澱粉，NF 澱粉可流動粉末 矽酮液體，350厘沲 調配物3 :羅西芬膠囊 本紙張尺度適用中®B家橾率（CNS )八4規《格（210X297公釐）

   4 5 ^C|6100832號專利申請案 中文說明書修正頁(88年4月） 五、發明説明（14) 量° 用[3H] 17 yS E2當配體對原硬纖維腫瘤細胞和硬纖維腫瘤 之冷凍檢體進行結合實驗。 實驗中’ [3H]17召E2結合稍（約10%)被500倍過量未標記 雌激素及化合物U置換。用電腦結合程式LIGAND(Munson P. J.，’Rodbard D. Anal. Biochem, 1980; 107:220-39.)對[3H]17 /3 E2結合數據做Scatchard分析顯示由硬纖維腫瘤之生體檢 體製備之三個不同培養物及二個不同細胞液中有ER出 現。 在生長分析中，於曝露至化合物I a之不同濃度時刺激硬 纖維腫瘤原位細胞。結果係細胞生長抑制隨化合物I a濃度 而增加（表1 )。用HCT8細胞系（表2 )及用結腸癌母纖維細 胞系（表3 )得到相似結果。 以化合物I a之劑量-依附方式抑制硬纖維腫瘤細胞，化 合物u之濃度為i〇-5m，5 X ιο·6μ，ιο·6μ而在1(Γ5Μ濃度時 有最大抑制作用（表4)。 化合物I a可以僅在非常高濃度（超過5 0 0倍）置換結合至 硬纖維腫瘤組織之17办E2。 化合物I a可在微莫耳濃度時顯著抑制硬纖維腫瘤細胞。 此外，在相似濃度，化合物抑制人類結腸癌所衍生表皮及 母纖維細胞之增生。 在原培養基之硬纖維腫瘤細胞中化合物U亦顯著減少第 I型膠原蛋白產生。 在用雌激素反應性元素轉染硬纖維腫瘤細胞受試之所有 '17- 本紙依尺度適用中囷國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公* ) (請先W讀背面之注WM?·#^寫本頁) -4. 訂 經濟部中央標準局員工消费合作社印策 P 4 Μ ^8^?〇〇832號專利申請案中文說明書修正頁（89年12月） 修正 本年月I補充 89.12. 13 Α5 Β5 四、中文發明摘要（發明稱.抑制結細1腫瘤之备藥組合物 一種用於抑制哺乳類結腸癌之醫藥組合物，包括具有下 式化合物

   中Ar係任意經取代苯基； (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁各櫊) 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 R2係選自吡咯啶、六亞甲亞胺基及N -六氫吡啶基；或其 醫藥上可接受鹽及其溶劑合物。 英文發明摘要（發明之名稱：”PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR ) USE IN INHIBITING COLON TUMORS" A pharmaceutical composition for use in inhibiting colon cancer in a mamiaal comprising the compound having the formula

   (I) -2- 本紙張尺度通用中囷國家標率（CNS )八4«1格（210 X 297公釐） “以 b 5 6 0 -_ 修正本年Λ曰 補充 89.12.13 四 明 發 /V 要 摘 明 發 文 中 稱 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁各襴) -裝- 英文發明摘要（發明之^稱： Wherein R1 and R3 are independently hydrogen, 0 0 1T 線 -ch3 C-(Cl-C6 alkyl) -C -Ar 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 , ,or — — , wherein Ar is optionally substituted phenyl; R2 is selected from the group consisting of pyrroli.dine, hexamethyleneimino, and piperidino; or a pharmaceutically acceptable salt and solvate thereof. -2a- 本紙張尺度通用中國國家標芈（CNS ) Α4規格（2丨0Χ297公釐> 446560 第86100832號專利申請案 中文申請專利範圍修正本(卯年4只、莒 Α8 Β8 修正 本年月 補充 90.4*30 Β 六、申請專利範圍 1. 一種用於抑制哺乳類結腸癌之醫藥組合物，包含具有 下式化合物

   其中R丨及R3分別為氫、_CH3、-丨i-(c丨-C6烷基）或-丨ά-ΑΓ 其中Ar係任意經取代苯基； ΐ - 4] ί ^^^1 ml nn I ^^1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 R2係選自吡咯啶、六亞甲亞胺基及Ν-六氫吡啶基；或 其醫藥上可接受鹽及其溶劑合物。 2·根據申請專利範園第1項之醫藥组合物，其中該哺乳類 係人* 3，根據申請專利範困第1項之醫藥組合物，其中該化合物 係其鹽酸鹽。 經濟部中央揉準局員工消費合作社印策 4.根據申請專利範圍第1項之醫藥组合物，其中該化合物 係 本紙張尺度逍用中躏國家樣準（CNS )从嫌雇（210X297公釐）