EA001104B1 - Способ ингибирования опухоли толстой кишки - Google Patents

Способ ингибирования опухоли толстой кишки Download PDF

Info

Publication number
EA001104B1
EA001104B1 EA199800677A EA199800677A EA001104B1 EA 001104 B1 EA001104 B1 EA 001104B1 EA 199800677 A EA199800677 A EA 199800677A EA 199800677 A EA199800677 A EA 199800677A EA 001104 B1 EA001104 B1 EA 001104B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
cells
colon cancer
raloxifene
estrogen
Prior art date
Application number
EA199800677A
Other languages
English (en)
Other versions
EA199800677A1 (ru
Inventor
Мария Л. Брэнди
Франческо Тонелли
Original Assignee
Эли Лилли Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9603150.5A external-priority patent/GB9603150D0/en
Application filed by Эли Лилли Энд Компани filed Critical Эли Лилли Энд Компани
Publication of EA199800677A1 publication Critical patent/EA199800677A1/ru
Publication of EA001104B1 publication Critical patent/EA001104B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4535—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom, e.g. pizotifen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Description

Рак толстой кишки, который включает аденокарциному прямой кишки и колоректальную аденокарциному (т.е. аденокарциному ободочной и прямой кишки), первичную или метастатическую аденокарциному и тому подобное, представляет собой в настоящее время крупную проблему здравоохранения с точки зрения распространенности заболевания. Подсчитано, что у одного из каждых двадцати пяти американцев в продолжение его жизни разовьется какая-либо форма рака толстой кишки (§идагЬакег, Р.Н., е! а1., ίη Сапсег, БеУйа, У.Т., е! а1. (Ей8.), Ырршсо!! РиЬ1. РЫ1айе1рЫа, рр. 795-884 (1985)).
В аспекте лечения широко применяется хирургия с хорошими, смешанными или менее чем благоприятными результатами. В частности, для пациентов с раком толстой кишки с локально прогрессирующим или метастатическим заболеванием имеет место крайне неблагоприятный прогноз с высоким уровнем заболеваемости и смертности.
Попытки лекарственной терапии были предприняты с менее чем благоприятными результатами. Главным лекарственным препаратом, выбранным для лечения рака толстой кишки, стало антибластомное соединение 5фторурацил (5-ФУ), и было установлено, что его использование было эффективным лишь в самой малой степени. Препарат 5-ФУ может временно снизить размер опухоли толстой кишки, однако имеется мало оснований для того, чтобы продемонстрировать, что время жизни пациентов существенно увеличилось или что достигнуты случаи излечения (исходя из пятилетних периодов ремиссии). Химиотерапия при помощи 5-ФУ была применена для пациентов с метастазами в печень, но временное улучшение наблюдалось только в 25 процентах или менее таких случаев, и, в целом, не оказывалось значительного влияния на продолжительность жизни (ЬаМоп!, ЕТ. апй 188е1Ьаскег, К., ίη Натвоп'в Ргшс1р1е8 о! 1п1егпа1 Мейюше (10!Ь ей.) МсОга^-НШ, Хем-Уогк. р.1764, (1983)). Несмотря на минимальную эффективность препарата 5-ФУ не было убедительно показано, что другие лекарственные препараты или комбинированная терапия являются более эффективными (§идагЬакег Р.Н., е! а1., выше; ^оо11еу, Р.У., е! а1., \ем Епд. 1. Мей., 312:1465 (1985)).
Методы лекарственной терапии были также оценены с точки зрения лечения рака человека, например, ксенотрансплантатных линий рака толстой кишки человека, при котором опухоли человека последовательно ксенотрансплантировали иммунодефицитным, так называемым голым мышам, а затем мышей испытывали на восприимчивость к конкретному лекарственному препарату (Оюуапе11а, В.С., е! а1., Сапсег, 5(7):1146 (1983)). Данные, полученные в этих исследованиях, убедительно подтверждают действенность ксентрансплантированных иммунодефицитным млекопитающим опухолей человека, включая опухоли толстой кишки, в качестве модели для прогнозирования и для тестирования эффективности противораковых средств.
Натриевая соль встречающегося в природе алкалоида камптотецина (сатр!о!Ьесш) применялась в коротких клинических испытаниях, чтобы оценить токсическое воздействие в случае пациентов с прогрессирующими неизлечимыми формами рака (ОойНеЬ, С.Л., е! а1., Сапсег СЬето!Ьегару Кер. 54:461 (1970)). Из этих исследований могут быть сделаны лишь немногие заключения, хотя средняя продолжительность жизни для тех пациентов, которые поддавались лечению, увеличивалась на срок от двух месяцев до около 3,5 месяцев.
Производные камптотецина или их аналоги были синтезированы и применены в качестве противолейкозных средств у мышей (см., например, \Уапк М.С., е! а1., 1. Мей. СЬет. 23:544, 1980; №аш, М.С., е! а1., 1. Мей. СЬет. 30:1774 (1987): №аш, М.С., е! а1., 1. Мей. СЬет. 30:2317, (1987)).
В патентах США №№ 4,473,692 и 4,545,880, М1уа8ака е! а1., описываются 10замещенные производные камптотецина и способ их получения. Утверждается, что 1 0замещенные производные камптотецина обладают противоопухолевой активностью при пониженной или слабой токсичности в сравнении с исходным соединением камптотецина, М1уа8ака е! а1. не описывают конкретные опухолимишени и не указывают, какой уровень пониженной или слабой токсичности достигается путем применения их 1 0-замещенных соединений камптотецина.
В последнее время при различных видах рака человека, например, лейкозах, лимфомах, был исследован фермент топоизомераза I человека. (Ро!те8Й М. е! а1., Сапсег Ке8. 48:3537 (1988)). Известно, что топоизомераза I человека представляет собой мономерный белок с кажущейся молекулярной массой в 100000 дальтонов. Функция фермента как шарнироподобного устройства вовлечена в различные виды взаимодействия ДНК (репликацию, транскрипцию и рекомбинацию). Очищенная топоизомераза I млекопитающих возвращает в исходное состояние положительно-сверхспиральную ДНК, равно как и отрицательно-сверхспиральную ДНК, в механизме, который включает временный разрыв одной или двух нитей ДНК и образование ковалентного комплекса топоизомераза 1-ДНК. В этом комплексе фермент ковалентно связан с 3'-фосфорильным концом разорванной основной цепи ДНК.
В последнее время было открыто, что уровень содержания фермента топоизомераза I в среднем более высок в раковой ткани, например, в хирургических образцах колоректальной карциномы, по сравнению с уровнем содержа3 ния фермента в нормальной слизистой оболочке (Нз1апд Υ.-Η., е! а1., Ргос Апп Мее! оГ Ше Атег. Аззос. Сапсег Кез. 29:172 (1988) АЬз1гас1). Хотя утверждалось, что топоизомераза I может рассматриваться как альтернативный объект воздействия при химиотерапии этого заболевания (колоректальная карцинома), не было сделано вообще никаких описаний или предложений относительно конкретных взаимодействующих с топоизомеразой лекарственных препаратов.
Ввиду очень низкого уровня выживаемости в течение 5 лет (приблизительно 50% или менее) пациентов, подвергавшихся стандартному лечению от рака толстой кишки, например, хирургической резекции или химиотерапии при помощи препарата 5-ФУ, было бы крайне полезно открыть новый путь эффективного лечения злокачественных опухолей толстой кишки человека с использованием лекарственных препаратов или соединений, например, после хирургического вмешательства, которое помогает установить диагноз и удаляет основную массу раковой ткани. Лечение лекарственными препаратами могло бы также быть полезным для пациентов с прогрессирующим заболеванием, которое дало метастазы или распространилось в различные органы, так что хирургическое вмешательство непригодно для удаления всех раковых тканей.
Краткое описание изобретения
В настоящем изобретении предлагаются способы ингибирования рака толстой кишки у млекопитающих путем введения млекопитающему, которое в этом нуждается, эффективного количества соединения формулы I:
где К1 и К3 независимо представляют собой водород, -СНз, о О
II II
-С-(Οι-Сб-алкил) или -С~Аг, где Аг представляет собой необязательно замещенный фенил;
К2 выбирают из группы, состоящей из пирролидино, гексаметиленимино и пиперидино; и его фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение связано с тем открытием, что выбранная группа 2-фенил-3ароилбензотиофенов (бензотиофенов), а именно, имеющих формулу I, являются пригодными для ингибирования рака толстой кишки.
Способы использования, предлагаемые в настоящем изобретении, практически применяются путем введения человеку, который в этом нуждается, дозы соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли либо сольвата, которая является эффективной для ингибирования рака толстой кишки. Термин ингибировать включает его общепринятое значение, которое включает препятствование, предотвращение, сдерживание и замедление, остановку или обращение прогрессирования заболевания, его тяжести или являющегося результатом заболевания симптома либо действия.
Ралоксифен, соединение согласно настоящему изобретению, которое представляет собой хлористоводородную соль соединения формулы I, в котором К1 и К3 представляют собой водород, а К2 представляет собой группу 1 пиперидинил, является ядерной регуляторной молекулой. Было показано, что ралоксифен связывается с рецептором эстрогена, и первоначально считали, что он представляет собой молекулу, функция и фармакология которой соответствуют антиэстрогену в том отношении, что он блокирует способность эстрогена активировать развитие рака ткани матки и эстрогензависимого рака молочной железы. Действительно, ралоксифен блокирует воздействие эстрогена в некоторых клетках;однако, в других типах клеток ралоксифен активизирует те же самые гены, что и эстроген, и демонстрирует ту же фармакологию, т.е. остеопороз, гиперлипидемия. В результате этого ралоксифен принято считать антиэстрогеном со смешанными свойствами агониста-антагониста. Уникальная характеристика, которая проявляется у ралоксифена и которая отличается от таковой у эстрогена, как полагают в настоящее время, имеет место вследствие уникальной активации и/или подавления различных функций гена комплексом ралоксифенрецептор эстрогена в противоположность активации и/или подавлению генов комплексом эстроген-рецептор эстрогена. Поэтому, хотя ралоксифен и эстроген используют и конкурируют за один и тот же рецептор, фармакологические последствия генной регуляции этой парой веществ нелегко предсказать, и они в каждом случае исключительны.
В общем случае, соединение готовят в виде состава с общепринятыми эксципиентами, разбавителями или носителями и спрессовывают в таблетки или готовят составы в виде эликсиров или растворов для удобного перорального введения, или вводят внутримышечным или внутривенным путем. Соединения могут вводиться чрескожно и могут готовиться в виде лекарственных форм с длительным выделением и тому подобное.
Соединения, используемые в способах согласно настоящему изобретению, могут быть получены согласно установленным методикам, подробно описанным в патентах США № 4,133,814, 4,418,068 и 4,380,635, которые все упомянуты в описании для сведения. В общем случае процесс начинается с бензо[Ь]тиофена, имеющего 6-гидроксильную группу и группу 25 (4-гидроксифенил). Исходное вещество защищают, ацилируют и снимают защиту с образованием соединений формулы I. Примеры получения таких соединений даны в патентах США, обсуждавшихся выше. Необязательно замещенный фенил включает фенил и фенил, замещенный одной или двумя группами С1-С6алкил, С1-С4алкокси, гидрокси, нитро, хлор, фтор или три(хлор или фтор)метил.
Соединения, используемые в способах согласно настоящему изобретению, образуют фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и оснований с широким спектром органических и неорганических кислот и оснований и включают физиологически приемлемые соли, которые часто используются в фармацевтической химии. Такие соли также являются частью настоящего изобретения. Типичные неорганические кислоты, используемые для образования таких солей, включают хлористоводородную, бромистоводородную, иодистоводородную, азотную, серную, фосфорную, гипофосфорную кислоту, и тому подобное. Могут также использоваться соли, являющиеся производными органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидроксиалкановые кислоты и гидроксиалкандикислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты. Указанные фармацевтически приемлемые соли включают, таким образом, ацетат, фенилацетат, трифторацетат, акрилат, аскорбат, бензоат, хлорбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, о-ацетоксибензоат, нафталин2-бензоат, бромид, изобутират, фенилбутират, β-гидроксибутират, бутин-1,4-диоат, гексин-1,4диоат, капрат, каприлат, хлорид, циннамат, цитрат, формиат, фумарат, гликолят, гептанат, гиппурат, лактат, малат, малеат, гидроксималеат, малонат, манделат, мезилат, никотинат, изоникотинат, нитрат, оксалат, фталат, терефталат, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, пропиолат, пропионат, фенилпропионат, салицилат, себацат, сукцинат, суберат, сульфат, бисульфат, пиросульфат, сульфит, бисульфит, сульфонат, бензолсульфонат, п-бромфенилсульфонат, хлорбензолсульфонат, этансульфонат, 2-гидроксиэтансульфонат, метансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, п-толуолсульфонат, ксилолсульфонат, тартрат и тому подобное. Предпочтительной солью является гидрохлорид.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот обычно образуются путем взаимодействия соединения формулы I с эквимолярным или избыточным количеством кислоты. Обычно реагенты соединяют в общем растворителе, таком как диэтиловый эфир или бензол. Обычно соль выпадает из раствора в осадок в течение от около 1 ч до 10 дней и может быть выделена фильтрованием, или растворитель может быть отогнан стандартными способами.
Основания, обычно используемые для образования солей, включают гидроксид аммония и гидроксиды щелочных и щелочно-земельных металлов, карбонаты, а также алифатические первичные, вторичные и третичные амины, алифатические диамины. Основания, особенно пригодные для получения солей присоединения, включают гидроксид аммония, карбонат калия, метиламин, диэтиламин, этилендиамин и циклогексиламин.
Фармацевтически приемлемые соли в целом имеют улучшенные характеристики растворимости по сравнению с соединением, производными которого они являются, и, таким образом, часто более легко поддаются приготовлению в виде жидкостей или эмульсий.
Фармацевтические составы могут быть получены при помощи известных методик. Например, соединения могут быть приготовлены в виде состава с общепринятыми эксципиентами, разбавителями или носителями, и им может быть придана форма таблеток, капсул, суспензий, порошков и тому подобное. Примеры эксципиентов, разбавителей и носителей, которые являются пригодными для таких составов, включают следующие: наполнители и сухие разбавители, такие как крахмал, сахара, маннит и кремнийсодержащие производные; связующие вещества, такие как карбоксиметилцеллюлоза и другие производные целлюлозы, альгинаты, желатин и поливинилпирролидон; увлажнители, такие как глицерин; расщепляющие агенты, такие как карбонат кальция и бикарбонат натрия; средства, замедляющие растворение, такие как парафин; средства, ускоряющие резорбцию, такие как соединения четвертичного аммония; поверхностно-активные вещества, такие как цетиловый спирт, моностеарат глицерина, адсорбционные носители, такие как каолин и бентонит; и смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат кальция и магния и твердые полиэтиленгликоли.
Соединения могут быть также приготовлены в виде эликсиров или растворов, удобных для перорального введения, или в виде растворов, подходящих для парентерального введения, например, внутримышечным, подкожным или внутривенным путем. Кроме того, соединения хорошо подходят для составления рецептур лекарственных форм с длительным выделением и тому подобное. Рецептуры могут быть составлены таким образом, что активный ингредиент будет выделяться только или предпочтительно в определенной части кишечного тракта, возможно, в течение некоторого периода времени. Покрытия, оболочки и защитные матрицы могут быть изготовлены, например, из полимерных веществ или восков.
Конкретная дозировка соединения формулы I, требуемая для ингибирования рака толстой кишки или для любого другого описанного здесь использования, согласно настоящему изобретению, будет зависеть от тяжести состояния, пути введения и сопутствующих факторов, на основании чего соответствующее решение будет приниматься лечащим врачом. В целом, приемлемые и эффективные дневные дозы могут составлять от около 0,1 до около 1000 мг в день, и, в более типичном случае, от около 50 до около 200 мг в день. Такие дозы могут вводиться нуждающемуся в этом пациенту от одного до примерно трех раз каждый день, или более часто, в той мере, как это необходимо для эффективного ингибирования рака толстой кишки.
Обычно является предпочтительным вводить соединение формулы I в форме соли присоединения кислоты, как обычно принято при введении лекарственных средств, несущих основную группу, такую как пиперидиновое кольцо. Также является благоприятным введение такого соединения пероральным путем. Для этих целей являются подходящими следующие пероральные лекарственные формы.
Рецептуры составов
В рецептурах составов, которые следуют далее, активный ингредиент обозначает соединение формулы I.
Состав 1: желатиновые капсулы.
Твердые желатиновые капсулы приготовлены с использованием нижеследующего:
Ингредиент Количество (мг/капсула)
Активный ингредиент 0,1-1000
Крахмал, ΝΤ 0-650
Текучий порошок крахмала 0-650
Силиконовая жидкость, 350 сантистокс 0-15
Ингредиенты смешивали, просеивали через сито № 45 меш США и заполняли смесью твердые желатиновые капсулы.
Примеры конкретных составов капсул с ралоксифеном, которые были изготовлены, включают следующие составы, показанные ниже:
Состав 2: капсула с ралоксифеном. Ингредиент Количество (мг/капсула)
Ралоксифен 1
Крахмал, ΝΡ 112
Текучий порошок крахмала 225,3
Силиконовая жидкость, 350 сантистокс 1,7
Состав 3: капсула с ралоксифеном. Ингредиент Количество (мг/капсула)
Ралоксифен 5
Крахмал, ΝΡ 108
Текучий порошок крахмала 225,3
Силиконовая жидкость, 350 сантистокс 1,7
Состав 4: капсула с ралоксифеном.
Ингредиент Количество (мг/капсула)
Ралоксифен 1 0
Крахмал, ΝΡ 103
Текучий порошок крахмала 225,3
Силиконовая жидкость, 350 сантистокс 1,7
Состав 5: капсула с ралоксифеном. Ингредиент Количество (мг/капсула)
Ралоксифен 50
Крахмал, ΝΡ 150
Текучий порошок крахмала 397
Силиконовая жидкость, 350 сантистокс 3,0
Конкретные составы, приведенные выше, могут быть изменены в соответствии с предусмотренными допустимыми изменениями.
Состав в виде таблетки получали с использованием ингредиентов, указанных ниже:
Состав 6: таблетки.
Ингредиент Количество (мг/таблетка)
Активный ингредиент 0,1-1000
Целлюлоза, микрокристаллическая 0-650
Диоксид кремния, микроиз- 0-650 мельченный
Стеариновая кислота 0-1 5
Компоненты смешивали и спрессовывали с образованием таблеток. В альтернативном варианте таблетки, содержащие каждая по 0,1-1000 мг активного ингредиента, готовили следующим образом:
Состав 7: таблетки.
Ингредиент
Активный ингредиент Крахмал
Целлюлоза, микрокристаллическая
Поливинилпирролидон (в виде 10% раствора в воде)
Натрий карбоксиметилцеллюлоза
Стеарат магния
Тальк
Количество (мг/таблетка)
0,1-1000
4,5
0,5
Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу просеивали через сито № 45 меш США и тщательно смешивали. Раствор поливинилпирролидона смешивали с получившимися порошками, которые затем просеивали через сито № 1 4 меш США. Полученные таким образом гранулы сушили при 50-60°С и просеивали через сито № 18 меш США. Затем предварительно просеянные через сито № 60 США на9 трий карбоксиметилцеллюлозу, стеарат магния и тальк добавляли к гранулам, которые, после перемешивания, спрессовывали на таблетировочной машине с получением таблеток.
Суспензии, содержащие каждая по 0,11000 мг лекарственного средства на 5 мл-овую дозу, готовили следующим образом:
Состав 8: Суспензии.
Ингредиент Количество (мг/5 мл)
Активный ингредиент 0,1-1000 мг
Натрий карбоксиметилцеллю-
лоза 50 мг
Сироп 1,25 мг
Раствор бензойной кислоты 0,10 мл
Корригент ё-ν.
Краситель ё-ν.
Очищенная вода, до 5 мл
Лекарственное средство просеивали через сито № 45 меш США и смешивали с натрий карбоксиметилцеллюлозой и сиропом с получением однородного теста. Раствор бензойной кислоты, корригент и краситель разбавляли некоторым количеством воды и добавляли при перемешивании. Затем добавляли достаточное количество воды для получения требуемого объема.
Десмоидные опухоли представляют собой редкие неметастатические опухоли волокнистого происхождения. Клинические корреляции предполагают, что в естественном анамнезе этих опухолей могут играть роль стероидные гормоны: это, прежде всего, видно по пациентам женского пола детородного возраста, и регрессия этих опухолей оказывается связанной с менопаузой или с антиэстрогенной терапией.
Цель настоящей работы состояла в том, чтобы идентифицировать рецепторы эстрогена в первичных клетках десмоидной опухоли и оценить действие соединения формулы I на десмоидные клетки в первичной культуре.
Поскольку десмоидные опухоли иногда развиваются у пациентов с врожденным семейным аденоматозным полипозом (РАР), который может вырождаться в рак ободочной кишки или прямой кишки, мы протестировали ингибиторное влияние соединения 1а на клеточный рост линии клеток аденокарциномы (НСТ8) и фибробластов из образцов биопсии рака толстой кишки.
Соединение 1а представляет собой соединение формулы I, в котором К2 является группой пирролидино, а К1 и К3 представляют собой водород.
Испытания на связывание выполняли с использованием интактных клеток. Десмоидные клетки высевали на 6-луночные планшеты в питательной среде (модифицированная по Куну среда Хема (Соои'8 тоДШеД Нат'к) Р12, дополненная 10% фетальной телячьей сывороткой). Через 24 ч питательную среду замещали стационарной средой, не содержащей фенолового красного, и клетки сохраняли в состоянии выращивания на минимальной среде в течение 24 ч. Затем клетки инкубировали в течение 1 ч в 1 мл не содержащей феноловой красной среды, содержащей 25 мМ НЕРЕЗ (Ν-2-гидроксиэтилпиперазин-№-2-этансульфоновой кислоты) и 0,5% ЕЮН (буфер связывания) и повышенные концентрации (0,05-10 нМ) [3Н] 17βΕ2 с 500кратным избытком немеченого 17βΞ2 или без такого избытка и соединения 1а. После инкубации клетки дважды промывали 800 мкл буфера связывания и лизировали 1н. №ЮН при 70°С в течение 30 мин. Затем в каждую лунку для нейтрализации добавляли 4н. НС1. Радиоактивность измеряли при помощи жидкостной сцинтилляционной спектроскопии. Аффинность связывания и емкость связывания рецептора эстрогена оценивали при помощи анализа по Скатчарду (Зса1сНагД аиа1у818).
Все последующие стадии выполняли при 0-4°С. Измельченную в порошок ткань гомогенизировали в политронном гомогенизаторе при помощи двух 1 0-секундных взрывов, разделенных 30-секундным периодом охлаждения в следующем буфере; 10 мМ ТЙ8-НС1, 5 мМ ЭДТК, 1 0 мМ молибдата натрия, 1 0 мМ дитиотреита, 10% глицерин (об./об), рН 7,4. Гомогенат центрифугировали при 7000 д в течение 20 мин и осадок отбрасывали, надосадочную жидкость повторно центрифугировали при 105000д в течение 60 мин, чтобы получить цитозоль для анализа на рецептор эстрогена. Цитозоль разбавляли до содержания белка 1-2 мг/мл. Белок цитозоля определяли согласно способу Брэдфорда. Для оценки рецептора эстрогена цитозоль инкубировали в течение 1 6 ч при 4°С в интервале концентрацией 0,05-5 нМ [3Н]17вЕ2 с 500-кратным избытком немеченого 17|ЗЕ2 или без такого избытка и соединения 1а. Аффинность связывания и емкость связывания рецептора эстрогена оценивали при помощи анализа по Скатчарду.
Клетки высевали на 6-луночные планшеты с плотностью 8х104 клеток на лунку в питательную среду. Через 24 ч клетки стимулировали в питательной среде, не содержащей фенолового красного, дополненной 0,1% ДМФА, 0,1% ЕЮН и различными конентрациями соединения 1а (2х10-5 М, 10-5 М, 5х10-6 М, 10-6 М).
Клетки инкубировали шесть дней, отделяли при помощи раствора (трипсин/этилендиаминтетрауксусной кислоты), а затем оценивали рост путем подсчета через микроскоп. Тот же метод использовали для линии клеток первичных фибробластов рака ободочной кишки и для линии клеток НСТ8: эту линию выращивали в КРМ1 и инкубировали в течение 4 дней после стимуляции.
Коллаген типа I в культуральных средах и клеточных слоях измеряли с использованием твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЫЗА) . Вкратце, клетки инкубировали в течение 24 ч в свободной от добавок модифицированной по Куну среде Хэма Р12, содержащей 50 мкг/мл аскорбиновой кислоты и 100 мкг/мл βаминопропионитрилфумарата.
Клетки из культуральных сред собирали и соответствующим образом разбавляли в 0,1М карбонатно/бикарбонатном буфере (рН 9,6), а затем использовали для нанесения покрытия на планшеты для твердофазного иммуноферментного анализа в продолжение ночи при 4°С. Планшеты для твердофазного иммуноферментного анализа инкубировали 1,5 ч при 37°С в фосфатно-солевом буферном растворе (ΡΒδ), содержащем 5% порошка молока (ΡΒδ-блотт) (блотт - реагент для проведения анализа методом вестерн-блоттинга), чтобы насытить сайты с неспецифичным связыванием, 2 ч при 37°С с РВС-блоттом, содержащим специфическое поликлональное антитело, и 1,5 ч при 37°С с ΡΒδблоттом, содержащим конъюгированный комплекс козье антитело к кролику - щелочная фосфатаза (δίβΐηα Скет1са1 Со., δΐ. Ьошк, МО).
Затем образцы подвергали воздействию 10% диэтаноламина (рН 9,8), содержащего 50 мкг/мл Мд2' и 1 мкг/мл паранитрофенилфосфата в качестве субстрата щелочной фосфатазы при комнатной температуре. Значение оптической плотности определяли при 405 нм и концентрации рассчитывали на основании стандартной кривой. Клеточные монослои собирали в 0,5н. ΝαΟΗ и обрабатывали ультразвуком, чтобы определить клеточный коллаген типа I. Затем клеточные экстракты разбавляли в 0,1М карбонатно/бикарбонатном буфере (рН 9,6) и использовали для нанесения покрытия на планшеты для твердофазного иммуноферментного анализа. Эталонные и опытные образцы тестировали троекратно. Результаты выражали как отношение мкг белка/мкг клеточной ДНК. Содержание ДНК измеряли спектрофлуориметрическим методом.
Эксперименты по связыванию выполняли с использованием [3Η]17βΞ2 в качестве лиганда в первичных клетках десмоидных опухолей и в замороженных образцах десмоидной опухоли.
В обоих экспериментах связывающийся [3Η]17βΞ2 незначительно (приблизительно 10%) вытеснялся 500-кратным избытком как немеченого эстрогена, так и соединения 1а. Анализ по Скатчарду данных по связыванию [3Η]17βΞ2 с использованием предназначенной для этого компьютерной программы ΟΟΑΝΏ (Мишоп РД., КойЪагй Ώ. Апа1.ВюсЬет. 1980; 107:220-39) показывает присутствие рецептора эстрогена в трех различных культурах и в двух различных цитозольных препаратах из образцов биопсии десмоидных опухолей.
В испытаниях на рост первичные клетки десмоидных опухолей стимулировались под воздействием соединения 1а в различных концентрациях. Результатом является ингибирование клеточного роста повышенными концентрациями соединения 1а (таблица 1). Аналогичные результаты получены для линии клеток НСТ8 (таблица 2) и для линии фибробластовых клеток рака толстой кишки (таблица 3).
Десмоидные клетки ингибируются соединением 1а в зависимости от его дозы при концентрациях 10-5М, 5х10-6М, 10-6М с максимальным ингибиторным эффектом при концентрации 10-5М (таблица 4).
Соединение 1а способно замещать 17βΞ2, связывающийся с десмоидной тканью, только при очень высоких концентрациях (500-кратный избыток).
Соединение 1а способно заметно ингибировать пролиферацию десмоидных клеток в микромолярных концентрациях. Кроме того, при аналогичных концентрациях соединение ингибирует пролиферацию эпителиальных и фибробластовых клеток, полученных из тканей рака толстой кишки человека.
Выработка коллагена типа I в десмоидной клетке в первичной культуре также заметно снижается соединением 1а.
При всех условиях (электропорация, осаждение Са/Р, липосомы) испытывавшихся для трансфекции десмоидных клеток при помощи чувствительных к эстрогену элементов, клетки оказываются поврежденными, так что эти условия не подходят для анализа ίη νίίΓο.
Таблица 1
Соединение 1а (моль/л) Число клеток х 10-4
Контрольный 12,3
2-10-5 0,1
10-5 2,8
5-10-6 7,0
10-6 10,0
Таблица 2
Соединение 1а (моль/л) Число клеток х 10-4
Контрольный 150
2-10-5 3
10-5 71
5-10-6 115
Таблица 3
Соединение 1а (моль/л) Число клеток х 10-4
Контрольный 7,6
2-10-5 0,1
10-5 5,4
5-10-6 6,3
10-6 7,6
Таблица 4
ДНК (оптич. плотность) ДНК (мкг) Коллаген типа I (пг/лунка) Коллаген типа I (мкг/мкг ДНК) Значения Р
Контроль 4,85±0,32 1,36±0,06 47,82±4,15 35,00±1,41
Соединение 1а, 1 мкМ 8,20±0,23 1,97±0,05 43,78 ±5,23 22,00±1,46 Р< 0,005
Соединение 1а, 5 мкМ 6,90±0,50 1,85±0,24 38,01±6,24 20,50±0,61 Р< 0,005
Соединение 1а, 10 мкМ 7,90±1,46 1,96±0,29 35,16±2,44 18,99±1,41 Р< 0,005
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (4)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ ингибирования рака толстой кишки, заключающийся во введении млекопитающему, которое в этом нуждается, эффективного количества соединения, имеющего формулу где К1 и К3 независимо представляют водород,
    N И
    -СН3, -С-(С]-Сб - алкил) или -С-Аг, где Аг представляет необязательно замещенный фенил;
    К2 выбирают из группы, состоящей из пирролидино, гексаметиленимино и пиперидино; или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
  2. 2. Способ по п.1, в котором указанное млекопитающее является человеком.
  3. 3. Способ по п.2, в котором указанное соединение является его гидрохлоридной солью.
  4. 4. Способ по п.3, в котором указанное соединение представляет собой или его гидрохлоридную соль.
EA199800677A 1996-01-29 1997-01-27 Способ ингибирования опухоли толстой кишки EA001104B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1077296P 1996-01-29 1996-01-29
GBGB9603150.5A GB9603150D0 (en) 1996-02-15 1996-02-15 Methods of inhibiting colon tumors
PCT/US1997/002286 WO1997026877A1 (en) 1996-01-29 1997-01-27 Methods of inhibiting colon tumors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA199800677A1 EA199800677A1 (ru) 1999-02-25
EA001104B1 true EA001104B1 (ru) 2000-10-30

Family

ID=26308709

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA199800677A EA001104B1 (ru) 1996-01-29 1997-01-27 Способ ингибирования опухоли толстой кишки

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP0921799A4 (ru)
JP (1) JP2000503994A (ru)
KR (1) KR19990082054A (ru)
CN (1) CN1209745A (ru)
AR (1) AR010978A1 (ru)
AU (1) AU707892B2 (ru)
BR (1) BR9700778A (ru)
CO (1) CO4761062A1 (ru)
CZ (1) CZ235498A3 (ru)
EA (1) EA001104B1 (ru)
ID (1) ID15917A (ru)
IL (1) IL125521A (ru)
MX (1) MX9806036A (ru)
NO (1) NO983451D0 (ru)
NZ (1) NZ331105A (ru)
PL (1) PL328147A1 (ru)
TW (1) TW446560B (ru)
WO (1) WO1997026877A1 (ru)
YU (1) YU2397A (ru)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW366342B (en) * 1992-07-28 1999-08-11 Lilly Co Eli The use of 2-phenyl-3-aroylbenzothiophenes in inhibiting bone loss
HUT71237A (en) * 1993-10-15 1995-11-28 Lilly Co Eli Pharmaceutical compositions for treating resistant neoplasms containing 2-phenyl-3-aroil-benzotiophene derivatives and process for their preparation
US5574047A (en) * 1993-12-21 1996-11-12 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting imperfect tissue repair

Also Published As

Publication number Publication date
NO983451L (no) 1998-07-27
CO4761062A1 (es) 1999-04-27
NZ331105A (en) 2000-06-23
IL125521A (en) 2001-11-25
IL125521A0 (en) 1999-03-12
AR010978A1 (es) 2000-08-02
AU707892B2 (en) 1999-07-22
MX9806036A (es) 1998-11-29
JP2000503994A (ja) 2000-04-04
CZ235498A3 (cs) 1999-02-17
EP0921799A4 (en) 2002-03-13
EA199800677A1 (ru) 1999-02-25
PL328147A1 (en) 1999-01-18
YU2397A (en) 1999-11-22
WO1997026877A1 (en) 1997-07-31
EP0921799A1 (en) 1999-06-16
KR19990082054A (ko) 1999-11-15
CN1209745A (zh) 1999-03-03
BR9700778A (pt) 1998-10-06
AU2123997A (en) 1997-08-20
TW446560B (en) 2001-07-21
NO983451D0 (no) 1998-07-27
ID15917A (id) 1997-08-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR19980702079A (ko) 세포-세포 접착의 억제 방법
US5604248A (en) Method for minimizing the uterotrophic effect of tamoxifen and tamoxifen analogs
EP0652004B1 (en) Methods for treating resistant neoplasms
PT664121E (pt) Inibicao da oxidacao de ldl e aterosclerose
PT652000E (pt) Metodos para a inibicao de angiogenese e doencas angiogenicas
US5843974A (en) Methods of inhibiting melanoma using Benzothiophenes as cytotoxic agents per se
CN1169116A (zh) 抑制环境雌激素的方法
EA001104B1 (ru) Способ ингибирования опухоли толстой кишки
US5843964A (en) Methods of inhibiting endometrial mitoses
EA001003B1 (ru) Способ ингибирования ингибитора 1 активатора плазминогена
RU2181047C2 (ru) Способ ингибирования состояний, ассоциированных с брадикинином
AU688112B2 (en) Methods of inhibiting endometrial cancer
CA2214080A1 (en) Methods of inhibiting ovarian cancer
CA2244112A1 (en) Methods of inhibiting colon tumors
JPH08253417A (ja) 脳又はｃｎｓのエストロゲン陽性腫瘍抑制用製剤
KR19990082055A (ko) 근육건막성 섬유종증(유건종)의 억제 방법
MXPA97006520A (en) Methods to inhibit the ova cancer

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU