TW442570B - Improved colour test for the detection of activity of lipase - Google Patents
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Description
ψ 在我 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員Η消f合作社印製 五、發明說明(1 ) 本發明關於測定生物液內脂肪酶測定的方法和試劑, 以及使用一低分子量的N -取代羧酸醯胺衍生物以消除酵 素測定時的非專一性反應。特別是當N - ( 1 ,2 ~二羧 乙基)一 N —烷基—磺基琥珀酸醯胺或N — ( 1 ,2 -二 羧乙基)-N -烷基芳香基-磺基琥珀酸醯胺衍生物濃度 約0 . 0 0 1 — 2 . 0 % (〜v / v )時,特別有效= 脂肪酶的測定,特別是人類胰脂肪酶(E . C . 3 . 1.1.3)1對於胰臟疾病的診斷和病程的評估無庸置 疑的是非常重要。(W.Steinberg et al·,Annals of Internal Medicine 102(1985),576; M. Panteghini et al., Clin. Bioch em 24( 1 991),497; N.W. Tietz and D.F. Shuey, Clin. Chem. 39/5 ( 1 993 ),746) » 例如急性 胰臟炎病人,在幾小時之內,其血淸內脂肪酶大量增加。 脂肪酶在體內的功用是將含有長鏈脂肪酸酯的三酸甘 油脂的α酯鍵切斷,以形成甘油二酸酯和游離脂肪酸,接 著轉化成甘油-酸酯,但一般認爲其速率較慢。 一般酵素催化的反應是在水相進行;然而,由於生理 重要性,脂肪酶只在油/水界面反應。基於此槪念,此酵 素不同於酯酶。而且脂肪酶只可接觸到經膽酸乳化的界面 而不會變性,然後藉由輔脂肪酶的幫助將三酸甘油酯切斷 。因此除了化學反應條件,反應動力學大致上是被存在於 酵素的界面品質所影響。 現今已知各種測定脂肪酶的方法。本質上是滴定,濁 度和免疫試驗原理》在滴定測定法,首先加入過量的脂肪 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·--I — I !tr'·丨 I ------線 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) -4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印黎 i,義義2嘌7 0 A7 —一__B7_五、發明說明(2 ) 酶受質,如橄欖油,然後利用鹼滴定或萃取相對應的銅鹽 以測定經脂肪酶作用而釋出的脂肪酸含量。由於滴定法在 某些檢體中難以操控,需要較長反應時間和大量檢體量, 因此目前只偶爾在臨床化學實驗室使甩。(W.Junge in Methods of Enzymatic Analysis, Weinheim VCH, U. Bergmeyer ed., v o 1.4 ( 1 9 8 4), 1 5) ^ 脂肪酶濁度測定法係偵測三酸甘油酯/水乳化濁度的 淸除度,此法目前廣泛使用在臨床化學實驗室(W. Rick and M.Hockeborn, J. Chm, Chera. Biochem. 20(1982), 735; J.Ziegenhorn et al., Media Sonderheft 11 (19 8 0 )。濁度測定法的一個問題是,在光度測定儀的測量視窗 ,個別血淸樣品的測量訊息並不是直線減少,甚至呈現濁 度增加現象。而且此方法的另一個困難處是乳化現象的再 現,此必需要使小滴尺寸具一致性。 免疫法的不利之處是在此測定過程,我們測定的是酵 素的質量而非其活性(w_ Uhl et al.,Irnernat. Γ Pancreatology 12/3(1992),253 ;G.E. Hoffmann et al., Arztl.. Lab. 30( 1 984), 1 93 ;H, Herden and K. Welter, Klin. Lab 38( 1992),89) » 於是呈色法開始建立,目前是主要的脂肪酶測定法。 例如使用1 ,2 -甘油二酸酯做爲受質’經脂肪酶降解爲 2 —甘油一酸酯,然後被加入於試管內的2 -甘油-酸酯 脂肪酶切斷成甘油。形成的游離甘油再經甘油磷酸酯氧化 酶的降解而形成二羥丙酮和過氧化氫(H 2 0 2 )。再利用 I----------- 48^·------—11'---------線 (諝先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準<CNS)A4規格(210 X 297公藿) .5 - * 442570 A7 _ B7 五、發明說明(?) 適當的顏色指示劑系統偵測形成的Η 2 0 2 ( P.Fossati et al .,CUn Chetn. 38/2( 1992),2 1 1 ) » 現今也可以藉由直接轉化一顏色受質以測定脂肪酶( E P 0 2 0 7 2 5 2 )。在此方法,人類胰臟脂肪 酶直接從受質釋放一可利用光度測定的染料。因此可避免 複雜的酵素串級反應而產生此染料。 而且我們已知,所使用的有色受質的酯鍵會由於非專 一性水解而產生過高訊息。例如有顔色的對硝基苯基醋酸 鹽受質會被白蛋白和r球蛋白水解C W. Downey and P_ Andrews, Biochem. J 96(1965)21)。此種反應造成僞有意義 的測量値,導致臨床上錯誤診斷。 本發明的目標是消除脂肪酶測定法中的非專一性反應 ,因此增加分析結果的準確性。 本目標的達成係利用添加一脂肪酶顏色受質和一低分 子量N -取代羧酸醯胺衍生物,然後藉光度測定從受質釋 放的染料,以測定脂肪酶。根據本發明’具有如化學式( I )或(I a )的化合物如羧酸醯胺衍生物已被證實特別 ------------ - ----— I —訂----—---- 線 (請先聞讀背面之>i意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 合 適 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4规格(21〇 X 297公* ) 4 4 2 57 A7 B7 五、發明說明鲁)
次 R2 \ / N
C 0 Z-— coo°x® 0)
R1 R2\ / N
C 0 Z—coo°
X 〇0 (la) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局負工消費合作社印製 其中R1和R2分別代表氫或含有2 — 2 4個碳原子的飽 和或不飽和,取代或非取代,可選擇的羧化烴殘基,Z代 表含有1 - 1 0個碳原子的飽和或不飽和,取代或非取代 ,環狀或直鏈烴殘基,X代表帶正電荷的原子或原子團和 η是數字1 -3 »根據本發明,根據化學式(I )或( I a )的這些羧酸醯胺化合物較適合,其中Ζ是含1 -. 1 0個碳原子的甲烯和/或乙烯團,並且它可被吸電子基 團如羧基、硫醯基、磷酸鹽、膦酸鹽、硝基、亞硝酸鹽或 硝酸鹽,鹵素或烷氧基團選擇性取代,R 1和R 2分別代表 氫或含3 - 2 4個碳原子組成的選擇性取代直鏈或支鏈, 飽和或不飽和焼基、芳香基 '院基芳香基或伸j:完基,其中 含2 — 2 4個碳原子組成的竣酸院基或二竣酸—院基殘基 是特別適合,並且X代表帶正電荷的原子或原子基團和η 代表數字1 _ 2已被證實最適合° 本紙張尺度適用中國國家標準規格(210 X 297公釐) 11--------------後 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 f 44 2 57 π A7 ___B7 五、發明說明存) 根據本發明化合物,Z代表羧酸和/或醯殘基.以及 R1或R2代表低分子烷基團如甲基、乙基、丙基、丁基, 戊基、乙烯基或丙烯基或C 1 〇 — C 1 8烷基殘基的這些 化合物特別値得考慮。根據已知方法,可選擇性攜帶適當 的烷基或伸烷基團。而且已證實假如R1代表二羧酸殘基如 丙二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、壬二酸和癸二酸一〔 1 1 1 0〕和特別是號ίθ酸特別有效3根據本發明,所使 用的的化合物分子量約2 0 0 - 1 0 0 0道耳呑較適合, 然而已證實化合物分子量高達3 0 0 0道耳呑也適合。化 合物或鹽類若含有至少二個酸性基團已被證實特別有效, 例如含有低烷基團(1 — 6個碳原子)的Ν - ( 1 ,2 ~ 二羧基乙基)—Ν -烷基-磺基琥珀酸醯胺和/或含高院 基團(12 — 18個碳原子)或Ν— (1 ,2 —二羧乙基 )-Ν -烷基芳香基-磺基琥珀酸醯胺四鈉鹽或該衍生物 和對應的混合物。 理論上’所有化合物只要可被脂肪酶辨認和轉化都-可 做爲脂肪酶測定之用。根據Ε Ρ 〇 2 0 7 2 5 2, 化合物如1 ,2 -鄰—二辛基—外消旋—甘油一 3 ~壬二 酸、1 ,2 -鄰一二癸基—外消旋—甘油一 3 —庚二酸或 1 ,2 —鄰—十一院基—外消旋一甘油一 3 —戊二酸試歯 靈(i-esoirufin )酯或1 ,1 一鄰-二月桂基—外消旋—甘 油一 3 —戊二酸—(4 “―或6 > -甲基試鹵靈)酯,特 別適合做爲測定脂肪酶之用。我們很驚訝發現’根據本發 明的物質具有抵抗含有有顏色物質乳化狀態時的非專一性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - - 裝------•丨訂--------竣 本紙張尺度適用中國困家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) .8 - Λ7 t 442570 五、發明說明@ ) 水解作用。 添加至測定脂肪酶反應溶液中的如上述有意義的R1 、R2、Z、X和η的化學式(I)或(la)化合物’或 含如本發明化合物的混合物’其最終濃度約爲〇 · 〇 〇 1 -2 · 〇 % ( w / v ),最理想爲 〇 . 〇 1 — 1 · 0% ( w / v ) ° 其他條件和添加物如淸潔劑(例如:牛磺去氧膽酸鹽 ,去氧膽酸鈉 '聚癸醇(P〇lyd〇canol )、貝殺細菌或殺真 菌效果的物質(疊氮化鈉、甲基異噻唑酮等)、安定劑( 如D M S ◦),輔因子’乳化劑如丙醇)、活化劑、或避 免脂肪酶測定副反應的測量物都是爲熟於本技藝的人所知 。特別是描述於 DE 29 04 305 或 ΕΡ 0 2 0 7 252 的 添加物和詳細說明已證實適合於本例子。測定的脂肪酶樣 品可以是來自於人類以及動物(如:豬胰臟脂肪酶)的血 液血淸或組織= 如本發明化學式(丨)或(I a )的Ν ~取代翔酸醯 胺化合物或鹽類1可藉由熟於本技藝的人士利用已知方法 製造。此外,如本發明的化合物如N - ( 1 ’ 2 -二竣乙 基)-N-烷基磺基琥珀酸醯胺四鈉(REWOPOL· B 2 003 )可從市面上已知的公司如:WUco Surfactants GmbH Gompany,Steinau 購得。 本發明的另一主題是測定脂肪酶的試劑或試劑套組’ 其必需含有下列成份:(a )脂肪酶有顏色的受質’ (b I -------I ^---------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局貝工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公爱) -9- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1' 4426 ^0 A7 ____B7五、發明說明(7 ) )適宜的緩衝液以及(C )包含在任何所想要的部分試劑 一低分子量的N -取代羧酸醯胺衍生物I即例如化學式( I )或(I a )的化合物a所有已知的緩衝液都適合做爲 本發明的緩衝液,其P Η値需設定於6 . 0 — 1 0 . 5。 較佳的pH値是7 . 0- 9 . 5。適合的緩衝液如二乙醇 胺衝緩液,三乙醇胺緩衝液,T r 1 s或酒石酸鹽緩衝液 或所謂Go 〇 d ' s緩衝液如He p e s緩衝液’ N -二 (羥乙基)甘胺酸緩衝液,Ta p s緩衝液和CHES緩 衝液(2-(環己基胺基)—乙烷磺酸)。N —二(羥乙 基)甘胺酸緩衝液特別適合。在此例子,緩衝液濃度通常 界於5 - 2 0 OmM,宜爲3 0— 1 0 〇mM ’最好是大 約 5 0 m Μ。 當試劑是由二個試劑成分所組成時’具有較好的效果 ,即本發明的羧酸醯胺衍生物是存在於第一部分試劑,第 二部分試劑則含有脂肪酶有顏色的受質。在此例子’在進 行實驗前,羧酸醯胺化合物必需保存在弱鹼性的緩衝液媒 介,並且脂肪酶有顏色的受質必需保存在酸性Ρ Η値下。 較適宜的試劑具體實例是由二個部分試劑所構成’第一個 部分試劑具有弱鹼性緩衝性Ρ Η値(ρ Η 7 · 5 — 9 . 〇 ,宜約ρ Η 8 · 0 )和如本發明的化學式(1 )或(1 a )的一或幾種羧酸醯胺化合物和其他鹽類’保存劑和淸潔 劑》第二個部分試劑含有P Η 2,0 — 5 0 ’宜爲p Η 4 · 0的緩衝性物質,適當的脂肪酶受質以及選擇性的其 他輔助物質。當利用注射技術在壓力下添加乳化劑如膽酸 (請先閲讀背面之泫意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中0國家標準(CNS)A4規格<210 X 297公« ) - 10 - 經濟部智慧財產局負工消費合作社印製 r ^__五、發明說明@ ) 鹽化合物和/或經聚乙氧基十二院於第一個部分試劑時, 已被證實具有良好的效果。油相(即含有所有成分的試劑 R 2 )宜利用一非常細的管子注入事先先加入的水相。因此 我們可得到一淸澈無混濁’安定性佳的乳液/懸浮液。而 且由於存在非專一性酵素(非脂肪酶酯酶) > 使得試劑無 法發生非我們所願的副反應°此一脂肪酶受質試劑具有同 一尺寸粒子’因此可貯存於2 -8°C 1 2至1 8個月而 不會品質降低。並且可保證完全試劑的安定性。粒子分布 的最大尺寸宜爲1 〇 〇 nm ’其相當於濁度低於3 0 ◦ NT U ( nephelometric turbidimetnc unit ’ 濁度單位)。 本發明將利用下列實施例進一步說明: 實施例1 : 以各種濃度I g G做爲樣品 脂肪酶顏色試驗的試劑成份: 試劑丨(Ri ):4.55mm 〇1/1牛磺去氧膽酸鹽 1.77mmol/丨去氧膽酸鈉 50.00mmol/l N-二(羥乙基)甘氨酸緩衝液 0.98mg/l輔脂肪酶 5.00mmol/l氯化鈣保存劑 試劑2(R2):8.1mmoi/l牛磺去氧膽酸鹽 0,24111111〇1/丨有顏色受質(1,2-鄰-二月桂基-外 消旋-甘油-3-戊二酸-(6 *-甲基試鹵靈)脂) l,60mmoin酒石酸鹽緩衝液 ------------ ^--------訂 ί 1· I— n It ϋ n I <諳先閲讀背面之注意事砝再填寫本頁) 本紙張尺度適用中困國家標準(CNS)A4規格<210 X 297公釐).11 . 44257 0 A7 _B7_ 五、發明說明$ ) O.lOmmQl/丨氯化鈣保存劑/界面活性劑 樣品:含各種I g G濃度(0 — 3 g / 1 )的 N a C 1 利用BH / Hhachi 7 1 7自動分析儀,根據下列說 明進行顏色試驗: ' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁> 裝i I 1 訂---------線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210x 297公釐) -12 - A7 r 442570 B7 五、發明說明(1〇 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 溫度3 7 't 程式2化學設定條件 試驗 , 脂肪酶 分析訊號(速度Α) 5-32-39 樣品體積(Θ I) 7-3 R 1體積U I) 250-100-0 R 2體積U 1) 50-50-0 波長(nm) 800 570 校正方法- 2-0-0 標準丨濃度 0-1 標準2濃度 指定値-2 標準3濃度 0-0 標準4濃度 0-0 標準5濃度 0-0 標準6濃度 0-0 標準誤差限制 0.1 重複限制 100 靈敏度限制 0 吸收値限制(INC/DEC) 32000-0 0-0 預期數値(mg/dl) 0-190 過度數値(mg/dl) ........—........ 儀器因子 1.0 (請先閱讀背面之注意事項再填冩本頁) 裝·-------11*--------線 本紙張尺度適用中國®家標準(CNS) A4規格(210 X 297公変) -13 - 44257 Ο Α7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 五、發明說明(11 ) 求値:利用上述儀器條件和來自於B 〇 e h r i n g e r Mannhe丨m Co.的零標準和脂肪酶標準(Cfas )的幫助,判 讀校準曲線: 結果:我們發現有顏色受質發生水解現象是明顯決定 於在乳化狀態中所添加的I g G濃度,而此一實驗是不含 如本發明的物質(參照第1圖)。 實施例2 添加各種濃度的本發明物(干擾消除劑) 脂肪酶顏色試驗所使用的試劑R i和R 2的組成份如實 施例1所述,除了 R 1額外添加含C 1 2至C 1 8烷基殘基 的N -( 1 ’ 2 -二殘乙基)—N—垸基―靖基號拍酸醒 胺四鈉混合物。 樣品:含各種Ϊ gG濃度(〇 — 3g/l )的 N a C 1 顏色試驗的實行和評估是利用Β Μ / Η11 a c h i 了 1 自 動分析儀,其細節如實施例1所述。 如果.在預疋濃度下’非專一性非酵素水解作用被消 除(參照第2圖)。 實施例3 完全試劑的製備 試劑1 :如實施例1所述 試劑2 : ------------t.—-----tr----------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用令a 0家楳準(CNS)A4規格(210 X 297公爱) 14 n 442570 at __ B7 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 五、發明說明(12 ) 將〇 . 6g脂肪酶有顏色的受質(如1 ’ 2 —鄰—二 月桂基一甘油一 3 -戊二酸一(6 —甲基試齒靈)醒) 溶於9 m i適當的醇類(如:酒精) > 再加入1 g乳化劑 (如Bnj 3 5或TrUon X — 1 1 4 )於溶液中。將此油 相吸收於注射針,然後利用高壓力擠壓通過一細的管子( 內徑0 . 1 5 — 1 · 0 m m )進入一水溶液’並同時攪拌 。水溶液爲100ml水中含0 . 15g酒石酸鹽緩衝液 (p Η 5 · 0 ) ,〇 . 〇〇9g氯化鈣和〇 . 5g牛磺去 氧膽酸鹽。此水溶液也可含有一或更多種的保存劑和其他 輔助乳化成份。 實施例4 不添加本發明物質的濁度方法/顏色試驗的比較 脂肪酶顏色試驗的試劑成份如實施例1所述: ''脂肪酶濁度試驗"的試劑成份如下: Ri:19.〇mmol/1 去氧膽酸鈉 2 6 · 0 m m 〇 1/1 Tns 緩衝液 3 . 0 ra g / m 1 輔脂肪酶 0 . 1 m m ο 1 / 1 氯化鈣 0 . 3 0 m m o L / 1 三油精保存劑 樣品:人類血淸 依照下列說明,利用B M / H i t a c h i 7 1 7自動分析儀 進行各種脂肪酶的測定: (靖先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 — !丨tr--i-----線 本紙張尺度適用中囲國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公轚) -15 - 4425 7 〇 Α7 Β7 五、發明說明(13 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 顏色試驗 溫度:3 7 °C 程式2化學設定條件 試驗 脂肪酶 分析訊號(速度A) 5-32-39 樣品體積1) 7-3 R1體積U U 250-100-0 R2體積U 1) 50-50-0 波長(nm) 800 570 校正方法 2-0-0 標準:1濃度 0-1 標準:2濃度 指定値-2 標準:3濃度 0-0 標準:4濃度 0-0 標準:5濃度 0-0 標準:6濃度 0-0 標準誤差限制 0.1 重複限制 100 靈敏度限制 〇 吸收値:限度(INC/DEC) 32000-0 前區限制〔PROZONE LIMIT) 0-0 預期數値(mg/dl) 0-190 過度數値(mg/dl) 1儀器因子 1.0 (請先閱讀背面之沒意事項再填寫本頁) 裝 tT----------竣 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 x297公釐) -16 - 442570 A7 B7 五、發明說明Μ ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 濁度試驗 溫度:3 了 °C 程式2化學設定條件 試驗 脂肪酶 測量方法(動力A) 5-30-50 樣品體積(μ 1) 10-2 R1體積U 1) 250-20-0 R2體積U 1) 0-20-0 波長(n m) 660-340 校正 1-0-0 標準:丨濃度(U1) 0.1 (β cat/1 )0.00-1 標準:2濃度 指定値-2 標準:3濃度 0-0 標準:4濃度 0-0 標準:5濃度 0-0 標準:6濃度 0-0 標準誤差限制 0.1 重複限制 100 靈敏度限制 0 吸收値限度(INC/DEC) 10000-0 前區限制(PROZONE LIMIT) CU0 正常範圍(Ul) 0-190 (β g/cat/l)0.00-3.17 過度數値(U/l or pg/cat/l) ...... ...... 儀器因子 1.0 ------------ 裝 ----I--訂-------i—竣 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家櫟準(CNS)A4規格(210 x 297公釐) . 17 , 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 r 442 5 7 0 A7 B7____ 五、發明說明(|5 〉 求値方法類似於實施例1 u 結果.—種方法比較顯示:因爲血淸的成份使有顏色 受質發生非專一性水解現象,使得顔色試驗出現一軸截距 (參照第3圖)。 實施例5 添加本發明物質的濁度方法1顏色試驗的比較 試劑成份和實驗程序如實施例4所述。此外加入如本 發明的N—( 1 ,2 —二羧乙基)一N_十八烷基一磺基 琥珀酸醯胺四鈉或含此物質的適當混合物於試劑1 ( R 1 ),其濃度爲 0 . 2 7 % ( w/ v )。 樣品:人類血淸 根據實施例4的說明,利用BM/Hitachi 7 1 7自動 分析儀進行各種脂肪酶的測定3求値方法與實施例4和1 相同。 結果:與濁度方法相比較,添加本發明的物質可消.除 非專一性反應,因此消除軸截距(第4圖)。 圖表說明 圖1 : I g G濃度〇一3 g / d 1 ; R 1 (試劑1 ) 不添加本發明的化合物,樣品:5 // 1 ’ —空白 NaC 1---I S G 0 1 ......I g G 0 . 5 g / d 1 - — · lgGl-0g/dl, A . I----------I --------訂,-----I--玲 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS〉A4規格(210 x 297公s ) -18 - 442570 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明Ο6 ) - .· — · I g G 1 . 5 g / d 1 ' -IgG2-0g/di -——I g G 2 . 5 g / d 1 -......I gG3 - Og/d 1。 第2圖:濃度〇~3g/d丨,R1含 0 , 27% (w/v) N — (1 ,2 —二羧乙基)一 N- 烷基~磺基琥珀酸醯胺,樣品:1 Om 1 ,其他細節說明 如第1圖》 圖3圖:脂肪酶,濁度和顏色試驗;R 1/R2不添 加如本發明的化合物:標準器:C f a s (爲自動操作系 統的校準器,cal丨brator for automated systems )數値 對數目:2 5 -BaPay = 57. 8108 + 1 . 0 3 1 5 ** (r=0 . 9828) - - 一相同線 y = x x 人類血淸 第4圖:脂肪酶濁度和顏色試驗;R 1不含,R 2含 如第2圖所述本發明的化合物;其他細節說明如第3圖 數値對數目·’ 2 5 BaPay=12 . 6916 + 1 3995** (r = 0 . 9 9 4 4 ) ......小時Hk y = 9 · 4818 + 1.4178** ---相同線 y — x (锖先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 1111111 訂*------ ---竣 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 x 297公釐) -19- 442570 A7 _B7 五、發明說明Μ ) X 人類血淸 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> 裝--------訂ί 1^1 ^^1 t 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準<CNS)A4規格(210 X 297公* ) - 20 -
Claims (1)
- ,442570 A8Q8C8D8 六、申請專利範圍 1 一種測定生物檢體中脂肪酶的方法,:|[:彳罕添力[]—. 脂肪酶有顏色受質’然後利用光度計測量從受質釋放的染 料,其中此測定法係在如下化學式(I )或(_ I a )的化 合物存在下進行: R1 R2 —~R1 R2\ / N I /C、z~~c〇(P_ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合怍社印製 其中R1和R -分別代表氣或具有2〜2 4個碳原子 的飽和或不飽和,取代或非取代烴殘基,z代表具有:_ 1 0個碳原子的飽和或不飽和,取代或非取代,環狀或直 鏈烴殘基,X代表帶正電荷的原子或原子基團且η是數字 1 一 3 0 2 .如申請專利範圍第1項的方法,其中R [和R 2代 表具有3 - 2 4個碳原子之可被任意取代的丨完基、芳香基 ,烷基芳香基或伸烷基,Z是至多1 〇個碳原子的仲甲基 和/或伸乙基,並且選擇性被一個或多個羧基、硫醯基、 磷酸鹽、膦酸鹽、硝基、亞硝酸鹽或硝酸鹽、鹵素或烷氧 J 裝!----訂--------- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公* ) -21 - 442570 A888C8D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 基團取代。 3 .如申請專利範圍第1或2項的方法,其中加入如 化學式(I )或(i a )的化合物或鹽類,其中z帶有一 羧基或硫醯基團。 4,如申請專利範圍第1或2項的方法,其中R 1或 R2任一者代表甲基、乙基、丙基、丁基'戊基、乙烯基、 丙嫌基、或C12至C18烷基。 5 ·如申請專利範圍第1或2項的方法,其中該化合 物是N — 〔1 ,2~二錢乙基)—n —垸基一擴基號拍酸 醯胺四鈉,N- ( 1 ,2 —二羧乙基)一 N -病基芳香基 磺基琥珀酸醯胺四鈉或其衍生物或含此化合物的對應混合 物。 6 .如申請專利範圍第1或2項的方法,其中該化合 物存在於樣品溶液中的濃度爲〇 . 〇〇 1 — 2 〇% (w / v )。 7 ·如申請專利範圍第1或2項的方法,其中該化合 物的最終濃度是0 . 0 1 — 1 · 0% (w/v)。 8 .如申請專利範圍第1或2項的方法*其係測定人 類胰臟脂肪酶或來自動物的胰臟脂肪酶。 9 . 一種測定脂肪酶的試劑,其含有下列組成份: (a )有顏色的脂肪酶受質; (b )緩衝物質;及 (c )如下化學式(ί )或(I a )的化合物 ---- ------ ί 裝-------- 訂丨丨 I I ί I '5^ I <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁); 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS>A4規格(210 X 297公» ) -22- 442570 灿88808 六、申請專利範圍 R1 R2\ / N C 0 z——cocPx® 0) R1 R2\ / N C Ο 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 Z—C00^JnXa® 1 ^ (la) 2 4個碳原子的 飽和或不飽和’取代或非取代烴殘基,2件$ θ Ί Κ表具有1 一 1 0個碳原子的飽和或不飽和,取代或邦取代環狀或直 鏈烴殘基,X代表帶正電荷的原子或原子團且η是數字丄 -3。 1 0 ·如申請專利範圍第9項的試劑1其中該試劑在 第一部分試劑中含有ρ Η値爲7 ‘ 5至9 · 〇的緩衝物質 (b )、組成份(c )、淸潔劑和/或保存劑;且第二部 分試劑含有pH値爲2 . 0至5 . 0的緩衝物質(b)、 組成份(c )、和乳化劑》 1 1 .如申請專利範圍第9項的試劑,其中組成份( 其中R 1和R 2分別爲氫或具有2 2 羧乙基)- N -烷基磺基琥珀酸 醯胺四鈉,N — ( 1 ,2-二孩乙基〕—N -院基芳香基 磺基琥珀酸醯胺四鈉 > 或對應衍生物或含此化合物的適當 I I I-----^!----矿-— 1 — — 1·線 <請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國a家楳準<CNS>A4規格(210 X 297公釐〉 -23 - 442570 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 ( 含 式所 學中 匕 匿 /ΛΓ ΛΉΠ 中檢 其物 ’ 生 劑定 試測 的除 項消 9 於 第用 圍係。 範物ffi 利合反 專化& 請的y 申}專 如 a .非 ,I 的 。 2 ί 時 物 1 或酶 合 > 肪 混 I 脂 * # * — -----1 訂·--------I (諝先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準<CNS)A4規格(210 X 297公釐) -24 -
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