TW399060B - Process for large scale preparation of 2', 3' -didehydro-2', 3' -dideoxynucleosides - Google Patents

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附件1(a):第83109894號專利申請案 中文補充實驗及數據 民國88年9月呈 使用述於US 5，130,421及其中所述及參考資料中之程序自 胸腺核苷製備d4T。 溶合物之製備 以如下方式製備溶合物。在約80 °C至約120 °C下將初級 d4T溶解於1-甲基-2-吡咯烷酮，接著冷卻至室溫以製備溶合 物。加入丙酮至完全沉澱。之後冷卻至-10 °c約1小時，將 懸浮液過濾及乾燥，製得本案化合物（I)。 “初級d4T”係指包含超過0.1 %雜質之d4T樣品。 起始的加熱步驟係爲了將d4T溶解於吡咯烷酮溶劑中，其 中溫度爲約80 T至約120 °C，較佳爲90飞。 溶液冷卻步驟包括攪拌及緩慢冷卻至約25 °C至約32 °C。 亦可使用冰浴或其他快速冷卻溶液的方式。 溶液冷卻後，靜置於室溫約16小時。 於靜置時，會分離出固體。至此固體加入至少一種有機 溶劑，則形成懸浮液。可用的溶劑爲異丙醇、乙酸正丁酯及 丙酮，較佳爲丙酮。 所製得懸浮.液冷卻至約T至約-15 °C歷時約1/2小時 至約3小時，較佳約1至約3小時。然後將經冷卻懸浮液過 濾。濾液以另外的溶劑（如丙酮）淸洗，在適中的溫度（約 50。(：至約70 °C，較佳55 °C至約60 °C )乾燥。 經乾燥產物（1:1 d4T · NMPO溶合物）係mp 125-140 °C 之灰白色至白色結晶固體，其NMR光譜示於下圖。 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（1 ) 相關申請案之對陌 本發明是1 9 9 3年1 1月1 5日申請之美國序號爲 08/152，155，以及 1993 年 11 月 15 曰申 請之美國序號爲0 8/1 5 2，7 7 8案的部分連續申請 案。 本發明背畺 本發明係關於製備諸如2 /，3 / —二脫氫一2 /， 3 > -二脫氧胸腺核苷（d 4T)之二脫氫一二脫氧核苷 的改良方法，其適用修改成大規模製造。 已有數個方法被報導出來，是用來合成2 /，3 < — 二脫氫—2 *，3 > —二脫氧核苷，如d4T，而大部分 是經由脫水核苷中間體。 核苷衍生物，2 >，3 — —二脫氫_2 >，3 / —二 脫氧胸腺核苷（d4T)，先前是以不同合成方法製備的 。Η 〇 r w i t z, e t al,在 Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry (Vo 1. 1), Zorbach et a 1 (eds); Interscience，New York, p.344描述於路徑 1 (下面） 之方法，其使用3 >，5 / —脫水胸腺核苷爲開始物料， 並在二甲基亞碉（DMS0)中用可燃且濕敏感的第三丁 醇鉀（KOt-Bu)，除了物料處理困難外，此方法並 不適用於大規模化，其產物從DMS0分離出來會分解， 因爲此步驟需被置於高溫及強鹼下作用一些時間° (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 五、發明説明（ owso. Δ KO.Bu A7 B7

d4T 〇 純化

在 T Med. Chem. . 1989, 461 (路徑 2 )中，Mansu-ri et al發現分離過程的改良方式’亦即在進一步處理前 以甲苯稀釋DMS 0反應混合物，得到油性固體之d 4 T 鉀鹽，但是，用於大規模製備上，使用的體積無法想像， 並會產生很難回收之大量廢溶劑’再者，分離的鹽類對水 分及過分乾燥均很敏感’再溶解及中和後’粗d 4 T被分 離出來及乾燥，且必須在溶劑中進一步形成漿液以製得最 後產物。 〇 HN Λ

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(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 3七31^61:1:，：^.61：31在11.3.4’9 0 4’770揭 示改良的Mansuri方法，其包含室溫下3 > ’ 5 ’ 一脫水 中間體與強鹸在極性有機溶劑（例如：κ 0上_一 B u / DMSO)中反應，之後將在有機溶劑（例如低溫的甲苯 )中產生的2 - , 3 二脫氫—2 - ，3 - —二脫氧核 替砸磨，再溶解及中和後，所製得之粗d 4 T即是自中和 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _____B7_五、發明説明（3 ) 步驟中以丙酮萃取所分離出之固體》 一種不同的方法包含更換K 0丄_— Bu/DMSO物 系以減低產物分解的問題。 此種變革（路徑3)，使用六甲基磷三醯胺（ HMP A)及氫氧化鈉，以消除上述路徑1和2之分解問 題，因爲HMP A溶劑可以以氯仿錯合物的形式自水溶液 中除去，然而，使用被認爲髙度毒性試劑（諸如HMP A 和氯仿），在用於大規模上是危險且需避免，此方法揭示 於 A.dachi, et al，Carbohydrate Research. 1 9 79，113 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本買) 0

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Cosford'et al，在 J. Or g. Chem. . 1991，2161 中揭 示一種較密切相關的路徑（路徑4)，係使用三苯甲基化 的苯基氫硒基胸腺核替（t r i t y 1 a t e d p h e n y 1 s e 1 e n y 1 thymidine)衍生物，由於會產生高毒性硒廢料且需層析 ，因此不好，特別是大規模上的製備。 〇

SePh Λxj Γ ) \ ------、哥------ --- 本紙張尺度適用中國國家橾準（CN$ ) A4規格（210X297公釐）

A7 B7 五、發明説明（4 ) 本發明摘里 本發明是一種高產率及純度之大規模製備2 <，3 / 一二脫氫一 ，3< —二脫氧核苷（特別是d4T)的 改良方法，由於本方法併入不同選擇、處理、加工及純化 反應物、中間體和產物的改進，使得本方法對於大規模製 備如d4T之產物特別有用。 本發明詳細說明 在其最廣的方面，本發明是一種改良方法，係用於大 規模製備2 /，3 > —二脫氫一2 /，3 > —二脫氧核替 ，由下式表示 H0 其中鹼部分是選自含有嘧啶、吖嘧啶和脫吖嘧啶之未經取 代或經取代之鹼，明確地說，X選自N和C 一 Η ; Y選自 C — R2和Ν ; Ζ選自C — Η和Ν ; R1選自0Η和 Ν Η 2 :而R2選自Η、未經取代或經鹵素取代之式 CnH2nA 的烷基，以及式—（CHd^—CHsCHA 之烯基，其中m是選自0、1、2和3之整數，η是選自 1、2和3之整數，而Α是選自Η、F、Cj?、B r和I ，本發明方法包括步驟： (a)將下式之2/ —脫氧核轉變 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ (2 成下式之具強反應性3 中間體 A7 B7

HO

H0 脫氧核苷） 5 — —脫水—2 脫氧核苷 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) R1 Χ^Υ〇V © (奧克登（oxetane)中間體 b )將上述步驟（a )所得具強反應性（奧克登 oxetane)中間體）3 —脫水—2 脫氧核苷 Γ 經濟部中央標準扃員工消費合作社印製 在強鹼存在下，轉變成2 /，3 > —二脫氧一 2 一一二脫氫核苜，本方法的改進包括： 在2/-脫氧核苷之甲磺醯化反應以製備步驟 之3 二一 0 —甲磺醯胸腺核苷中，係使用 如丙酮之極性溶劑； 步驟（a)之甲磺醯化反應中，係使用pKa在 5 . 5和8 . 0間之有機鹼； 在步驟（b)中使用酒精的氫氧化物： 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -8 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ____B7五、發明説明（6 ) • 使用N—甲基吡咯烷酮以形成二脫氧二脫氫核苷之溶 合物，來減輕分離及純化的負荷》 較狹隘面上，本發明係關於經由一種可調整成大規模 製備d4T之方法，以高產率地製備d4T。 該d4T方法包含： (a) 自胸腺核苷和甲磺醯基氯，以製取3 > ，5 > —二 一 〇 -甲磺醯基胸腺核苷，此步驟的改進處包括使用極性 溶劑（宜爲丙酮）及約2至4當量有機鹼，此有機鹼比吡 啶強但比三乙基胺弱，宜爲N-甲基嗎咐； (b) 製取3 >，5 > -脫水胸腺核苷，係以氫氧化物水 溶液處理3，，5 > —二—0 —甲磺醯基胸腺核苷 (c) 自3 / ，5 脫水胸腺核苷製取d4T，其大規 模製備之改良處包括在醇（宜爲異丙醇）中加熱3 —， 5 > —脫水胸腺核苷和氫氧化物（宜爲氫氧化鉀）之混合 物：及 (d ) —種改進的分離/純化方法，包括將產物以其N — 甲基吡咯烷酮（NMPO)溶合物分離出來，之後在異丙 醇中加熱以分解溶合物，並產生高產量及純度之d 4 T。 此改進的d 4 T合成方法可有效地大規模化，並表示 在示意圖A中，本發明亦包括自3 /，5 脫水胸腺核 苷（ΠΙ)製取d4T，及經由可分離之d4T · NMPO 溶合物（Π )以分離及純化產品，以及方法本身各個獨特 之步驟。 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) -β' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 五、發明説明（7 ) ε

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1S 餵糊饉撵Ea-丨颚 ΛΙ V(ρ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製

(琛如葳锭2¾)is 訂 m筚砦晷> H〇 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） οχ 〇d5N_. ΙΘΜ- ^ΙΗΟΊ / C (3 -10 經濟部中央標#局員工消費合作社印製 A7 ______— B7五、發明説明（8 ) 示意圖A的起始反應，即3)，包括胸腺核苷（V) 的3 >和5 /氫氧基的甲磺醯化，此步驟的改良處包含溶 劑和有機鹼的選取’用於步驟a )的溶劑爲乙腈，DMF 及宜爲甲酮’作爲有機鹼的有皮考琳、二甲基吡啶及宜爲 N —甲基嗎啉（NMM) ~其全部之pKa值均在5 · 5 和8.0間’即比嘧啶強但比三乙基胺弱之鹼，反應進行 溫度在約2 0°至50° ，宜爲約30。至40。〇，反應 時間約0.5時至2時，宜爲約1時，雙一甲磺醯基酯之 事先合成是使用吡啶爲鹸溶劑，這些合成產生大量廢吡啶 流，且須較長反應時間及使用前須（IV)之再結晶。 雙一甲磺醯基酯與氫氧化物水溶液在約5 0。至 10 0°(：被加熱約2至8時（在步驟1>)，但宜使用氫氧 化鈉，較佳之條件是加熱至約7 5°至8 0°C約3至5時 ’再以如HCj?之無機酸中和以產生3 — ，5 — —脫水胸 腺核苷（奧克登，m)。 改良的d4T方法中，步驟（C)和（d)是主要提 供步驟，在（c)中用KOH之醇液並形成溶合物（Π) ，因而帶來大改進，如示意圖A所示，步驟（c )中， —脫水胸腺核苷（Π)在氫氧化鉀之醇（宜爲 異丙醇）液中加熱，以產生粗d 4 T，令人驚奇的是 d 4 T在本方法步驟之熱、鹼性醇環境中的穩定度，以無 機酸，諸如鹽酸，中和後，以蒸餾除去醇，並過濾產生的 混合物以除去不溶性物質，在約30°至6 0°C (宜爲 5 0 °C )下以N -甲基嗎啉和非質子性酯、醯胺或酮溶劑 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS >A4規格（210X297公釐） -11 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ____B7_;_五、發明説明（9 ) (而以丙酮和醋酸丁酯較佳）處理濾液。冷卻混合物至一 1 0°C至1 0°C間，並以過濾將固態d 4 τ · NMP 0溶 合物分離出來，留下難除去之污染物於濾液中。在醇中溫 和回流溶合物0.5至2時，以產生高產率及純度之 d 4 T。 本改進方法的優點，不僅是產物的產率和純度而已， 還有基於本方法所採用的步驟及所使用的試劑及反應條件 ，熟悉大規模有機化學製造的人士非常重視本方法，因爲 很多方法、程序及/或反應在中間工廠及生產製造的設備 中做過後均不適用於大規模化》典型大規模化的問題包括 使用的有害或有毒試劑和溶劑；高放熱或吸熱反應，高壓 或高容積方法（如需要高壓或高真空蒸餾），純化程序需 要大量溶劑以及分段結晶或層析分離均是大規模操作的問 題。進一步，很多方法用於大規模化時，基於很多原因， 產物產率減少及/或副產物增加◊近來強調避免有毒廢棄 物和安全處置用過的化學物，以及法規限制廢氣和廢水排 放，指出大規模製造的方法中，產生要安全處理和處置的 廢氣和廢棄物時需要額外費用。 先前製備d 4 T之方法，基於上述原因以及其他由試 劑和所使用反應條件所導致的問題，並不特別適用於大規 模化，相對地，本方法在不使用或產生有毒物質下，可提 供高產率及純度之期望產物，反應時間減少且中間產物在 合成中繼續進行不需進一步處理，明確地說，我們發現與 先前方法之結果不同，本方法中d 4 T產物在氫氧化鉀醇 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) ~ ~~一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __^^_ B7_五、發明説明（10 ) 液中加熱非常穩定，創新使用d 4T · NMPO溶合物進 行純化，不需要有毒物質或產生有害廢棄物，使本方法適 用於大規模化，先前製備d 4 T方法的缺點的改良方法併 入本發明的改進方法中》 總而言之，本製備d 4 T及相關同系物之新穎及改進 之方法適用於大規模化，此係由於本方法對於試劑、反應 條件的選取以及分離/純化的特色而產生一種有效之方法 ，可減少難處理之雜質和產物的分解，並提供高產率及純 度之產物，且不會產生有毒或髙容積之廢棄物。 明確體系之說明 本發明方法將以關於描述於前文之本方法步驟較佳體 系之下列實例詳細說明，無論如何這些實例不是用來限制 本發明範圍的。 A .化合物IV 實例1 : 3 >，5 二—0 —烷碏醯基胸腺核益 —個5升、3~頸口、圓底燒瓶裝配上架設的攪拌器 和攪棒、500毫升滴液漏斗、有熱電偶探針之接頭及回 流冷凝器，將胸腺核苷（363.3克，1.5莫耳）和 N —甲基嗎啉（508 . 3克，5 · 02莫耳）加入裝有 丙酮（2 . 00升）之燒瓶中，一邊加入烷磺醯基氯（ 49 8 · 3克，4 , 35莫耳），一邊攪拌該混合物約1 小時，並在加入期間冷卻並維持在3 0 — 3 5 °C，另外加 本紙張妓適用中國國家標準（CNS )八4祕（210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本買) 訂 -13 - 五、發明説明（11 ) 入1 . 5 0升丙酮至混合中以維持足夠攪拌’加入完成後 ，在3 0 — 3 5 °C下攪拌混合物1小時。然後將該反應物 分批加至裝於2 0升聚乙烯桶內之正在攪拌之9 · 6 6升 水中，以1 2NHCJ2調整水性漿液之pH值至pH 2 . 5，並在室溫下再攪拌2時’過濾漿液並以水（ 2 . 9升）和異丙醇（1 . 45升）清洗該固體，該固體 以空氣乾燥一夜，而製得564.6克（94·5%)的 檩題化合物，分析其純度爲97.1%(重）。 實例2 : 3 /，F； > —二一 0_烷碏醯基胸腺核益 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 將胸腺核苷（10 . 0克，0 . 0412莫耳）及丙 酮（3 0毫升）加入以氮充滿之乾、圓底燒瓶，攪拌漿液 並加入3，5-二甲基吡啶（17 . 7克、0 . 165莫 耳），之後，加入烷磺醯基氯（13 _ 8克，0 . 124 莫耳）歷時超過1 0分，且溫度上升至4 0°C，4 5分後 ’反應完全並以1 5 0毫升水稀釋該稠漿液，在2 5 τ下 攪拌漿液3 0分，之後冷卻至0- 5 °C 3 0分，收集固體 ’並以水（80毫升）和異丙醇（40毫升）清洗，之後 乾燥以製得1 6 . 1克（9 8 . 2%)的標題化合物。 J .化今_ πτ 實: 3，，Fi / -脫水胸腺核g 一個2升、4頸口裝配上架設的攪拌器和攪棒，連接 至自動滴定器的p Η探針，及連接至溫度控制器及加熱罩 尽紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） —14 - A7 _____ B7 _ 五、發明説明（l2 ) 的熱電偶探針，將水（350毫升）加入燒瓶中，並將 2 5%部分的3 >，5 — —二—◦一烷磺醯基胸腺核苷（ 共500克，1 . 255莫耳）一邊攪拌一邊加入燒瓶中 ，以30%氫氧化鈉水溶液調整pH值至10 · 5，並使 溫度上升至50°C，將剩下之，5> —二一 0 -烷磺 醯基胸腺核苷緩慢加入，且物質已溶解，並繼續攪拌漿液 ，此時溫度維持在50—551而pH值在10.5— 1 1 . 0。30%NaOH水溶液共加入502克（ 3. 76 5莫耳），之後加熱反應混合物1時至70 °C， 然後冷卻至10 — 15°C，以12N HCj?調整pH值 至9 . 7 — 9 . 8，而當結晶發生時，冷卻並維持溫度在 10 — 15°C»最後，以12N HC5調整漿液pH值 至6 . 0 — 6 . 5，冷卻至0 — 5°C並過濾，用冷（0 — 5 °C)水（2 0 0毫升）清洗收集到的固體，並以空氣將 其乾燥，而製得21 1 . 6克（75 _ 2%)的標題化合 物，分析其純度爲99·8%(重）。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本I) C .化合物Π 眚M4 : ，3 < —二脫氫一2，，3 > —二脫氧胸腺 脫核gN —甲某吡咯烷酮溶合物（d4T · NMPO) —個5升、3頸口燒瓶裝配上架設的攪拌器和攪棒、 回流冷凝器、溫度探針及加熱罩。將異丙醇（1.25升 )和氫氧化鉀（198克’ 3莫耳）加入燒瓶中，加熱至 5 0 °C並攪拌，之後’ 一部分—部分地加入3 >，5 - — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ~~ ~； A7 __B7 _ 五、發明説明（13 ) 脫水胸腺核苷（168. 2克，0.75莫耳），所得的 溶液加熱3 . 5時至78 - 8 0°C，冷卻溶液至2 0 — 25 °C，並以異丙醇（1 . 75升）稀釋，之後以濃 HCj2使pH爲4 — 6並冷卻至〇°c，沈澱的KCJ2過濾 掉並以異丙醇（2 0 0毫升）清洗，將濾液和清洗液綜合 並分成三等份，每一份均與N —甲基吡咯烷酮（5 4毫升 )混合並在5 0°C/1 5 — 2 OmmHg下濃縮成稠油， 之後以丙酮（1 2 0毫升）稀釋，並加熱至5 0°C歷時 1 5分，然後混合物冷卻至1 5 °C，並形成稠漿液，以過 濾法所收集到的固體共65.96克（81.6%)的標 題化合物，其有68.5%(重）d4T。 實例5 : 2 — ，3 > —二脫氣一2 — ，3 —二脫氣胸腺 核符]^ —甲某吡咯烷酮溶合物（d 4. Τ · ΝΜΡ 0 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 使用與實例4相同的設備，加入異丙醇（1 . 2 3 5 升）及氫氧化鉀（211. 97克，3. 211莫耳）， 加熱至5 0°C，並邊攪拌，之後，一部份一部份地加入 3 一，5 一一脫水胸腺核苷（180 . 0克，0 . 803 莫耳），所得之溶液加熱至78_ 80 °C歷時4時，將溶 液冷卻至20 — 25 °C並以異丙醇（1 . 976升）稀釋 ，之後以濃HC文將pH調整爲5 . 6並冷卻至1 0 °C， 將沈澱之KC 5過濾掉，並以異丙醇（20毫升）清洗， 濾液與清洗液綜合並分成二等份，第一·份與N -甲基吡咯 烷酮（9.0毫升）混合在50°C/15_20mmHg ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7五、發明说明（Η ) 下濃縮成稠油’然後以丙酮（1 0 〇毫升）稀釋’並加熱 至5 0°c歷時1 5分，之後將混合物冷卻至低於0°C，以 形成稠漿液，以過濾法收集到之固體爲1 〇 4 . 4 7克（ 80 . 5%)的標題化合物，其有69 . 1% (重） d 4 T。 第二份濾液與清洗液之綜合液，以第一份母液加上新 鮮NMPO ( 3 1毫升）處理之，接下來之程序與上面所 描述一樣，而所收集到之固體爲107 . 93克（83% )的標題化合物，分析其爲70 . 0%。 D ·仆合物I ( d 4 T ) 眚例fi‘： 2 >，3 二脫氤一 2 >，3 / —二脫氧胸腺 梭益（d 4 T ) 有攪拌器之1升圓底燒瓶，裝配上回流冷凝器和加熱 罩，將 d4T.NMPO (55 . 25，0 . 27 莫耳） 與異丙醇（500毫升）、Dicalite (過濾助劑，5 . 5 克）和Dorco KB (活性碳，5 · 5克）一起加入，攪#並 加熱該混合物，回流及過濾後，以熱異丙醇（1 6 5毫升 )清洗碳餅，以蒸餾濃縮綜合的濾液和清洗液至2 0 0毫 升，並緩慢冷卻至室溫以使產物結晶，冷卻至0°C後，收 集固體，以0°C異丙醇（5 0毫升）清洗，並以空氣乾燥 而製得346克（90.4%)的標題化合物，其純度 爲9 8 % (重）。 合理的變革，諸如熟悉此技藝之人士所會使用的，均 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（15 ) 可在此處採用，且不會偏離本發明範疇。 E .大規樽化 將本方法大規模化，在約3 5 0公斤之化合物V之規 模上，步驟（a)中約88 . 5%產率（根據活性），同 樣地步驟（b )產生約7 5%產率之奧克登中間體。分離 NMPO溶合物（H)之產率約76 — 8 9%，轉變成 d4T產物之產率爲90%。 -m· fuel · (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -,訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18 -

附件1(a):第83109894號專利申請案 中文補充實驗及數據 民國88年9月呈 使用述於US 5，130,421及其中所述及參考資料中之程序自 胸腺核苷製備d4T。 溶合物之製備 以如下方式製備溶合物。在約80 °C至約120 °C下將初級 d4T溶解於1-甲基-2-吡咯烷酮，接著冷卻至室溫以製備溶合 物。加入丙酮至完全沉澱。之後冷卻至-10 °c約1小時，將 懸浮液過濾及乾燥，製得本案化合物（I)。 “初級d4T”係指包含超過0.1 %雜質之d4T樣品。 起始的加熱步驟係爲了將d4T溶解於吡咯烷酮溶劑中，其 中溫度爲約80 T至約120 °C，較佳爲90飞。 溶液冷卻步驟包括攪拌及緩慢冷卻至約25 °C至約32 °C。 亦可使用冰浴或其他快速冷卻溶液的方式。 溶液冷卻後，靜置於室溫約16小時。 於靜置時，會分離出固體。至此固體加入至少一種有機 溶劑，則形成懸浮液。可用的溶劑爲異丙醇、乙酸正丁酯及 丙酮，較佳爲丙酮。 所製得懸浮.液冷卻至約T至約-15 °C歷時約1/2小時 至約3小時，較佳約1至約3小時。然後將經冷卻懸浮液過 濾。濾液以另外的溶劑（如丙酮）淸洗，在適中的溫度（約 50。(：至約70 °C，較佳55 °C至約60 °C )乾燥。 經乾燥產物（1:1 d4T · NMPO溶合物）係mp 125-140 °C 之灰白色至白色結晶固體，其NMR光譜示於下圖。 1

自溶合物製備d4T 然後將乾燥溶合物懸浮於醇介質中，冷卻製得一溶液及 冷卻至約室溫，以製備d4T。 2

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Claims (1)

1. 399060

   A8 B8 C8 D8

   、申請專利範圍 附件1(a):第8310 9 8 9 4號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國87年7月修正 1 種製備 2 一，3>— 二脫氫-2，，3 一—二 脫氧胸腺核苷（d 4 T)的改良方法，其包含步驟： a )在選自乙腈、N，N —二甲基甲醯胺及丙酮之極性溶 劑存在下及選自N -甲基嗎啉，皮考啉和二甲基吡啶之有 機鹼存在下，使胸腺核苷（V)與甲磺醯基氯在2 0至 50°C之溫度下反應，以產生3 — ，5，一二一0 —甲磺 醯基胸腺核苷（IV )： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 袈- 訂 〇

   CHn V 〇

   CH3 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 b )在5 0至1 0 0°C之溫度下，以氫氧化物水溶液處理 雙一甲礦酶化物（IV)，以形成3 /，5 ' —脫水胸腺核 苷（m ): 0

   CHn IV 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公瘦）

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   、申請專利範圍 附件1(a):第8310 9 8 9 4號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國87年7月修正 1 種製備 2 一，3>— 二脫氫-2，，3 一—二 脫氧胸腺核苷（d 4 T)的改良方法，其包含步驟： a )在選自乙腈、N，N —二甲基甲醯胺及丙酮之極性溶 劑存在下及選自N -甲基嗎啉，皮考啉和二甲基吡啶之有 機鹼存在下，使胸腺核苷（V)與甲磺醯基氯在2 0至 50°C之溫度下反應，以產生3 — ，5，一二一0 —甲磺 醯基胸腺核苷（IV )： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 袈- 訂 〇

   CHn V 〇

   CH3 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 b )在5 0至1 0 0°C之溫度下，以氫氧化物水溶液處理 雙一甲礦酶化物（IV)，以形成3 /，5 ' —脫水胸腺核 苷（m ): 0

   CHn IV 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公瘦）

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   399060 A8 B8 C8 D8 六 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 、申請專利範圍 C)於氫氧化物醇液中加熱（H)，並於酸中和後，用N —甲基卩比咯烷酮（Ν Μ P 0 )及非質子性酯類、醯胺類或 酮類溶劑在3 0至6 0°C之溫度下處理反應混合物，然後 將反應混合物冷卻至一 1 〇至1 〇 〇c，則得到d 4 τ · N 一甲基吡咯烷酮（d4T.NMp〇)沈澱物（n);及 〇 H、·

   CH, m 0

   ch3 NMPO d)在醇溶液中加熱被分離之d4T·NMPO溶合物 (Π)，以製得高產率d4T(I) 〇

   ch3 HO ό人〆 * NMPO (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 厶 \ 0==^- 0

   CH, 2 .如申請專利範圍第1項之方法，其中步驟（a ) 的有機鹼是N —甲基嗎啉。 3 .如申請專利範圍第1項之方法，其中步驟（c ) 中的d 4 Τ · NMP 0溶合物（Π )是自丙酮漿液中以遲 濾法分離出來的。 4 .如申請專利範圍第1項之方法，其中步驟（d) 中d4T . NMPO溶合物（Π)係在異丙醇中轉變成 d 4 T。 5 . —種分離和純化粗d 4 T的方法，其包括自反應 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐）-2 - 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B8 D8 々、申請專利範圍 混合物中形成和除去d4T · NMP〇溶合物（π)，接 著在醇介質中加熱被分離出來之d4T·NMPO溶合物 (E)以產生純化的d4T(I)。 6 .如申請專利範圍第5項之方法，其中醇介質是異 丙醇。 7 . —種自3 <，5 < —脫水胸腺核替製備2 一， 3>-二脫氫—2 一 ’ 3，一二脫氧胸腺核苷（d4T) 的改良方法，其包含步驟： (a)在氫氧化物之醇液中，加熱，5 > —脫水胸腺 核苷（m )； (b )用酸中和，並除去不溶性鹽類和醇； (c )用N —甲基吡咯烷酮和丙+在3 0至6 0°C之溫度 下處理反應混合物，然後將反應混合物冷卻至- 1 〇至 1 0°C之溫度，則沈澱出d4T · NMPO溶合物（Π) :及 (d)加熱在醇中之d4T· NMPO溶合物（Π)，以 製得 d 4 T ( I )。 8 .如申請專利範圍第7項之方法’其中步驟（a ) 的醇是異丙醇》 9 .如申請專利範圍第7項之方法，其中d4T· NMPO溶合物（H)在步驟（c )中，係經由過濾自丙 酮漿液而分離出來。 1 0 .如申請專利範.圍第7項之方法’其中步驟（d )的醇是異丙醇。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-3 _ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A8 B8 C8 D8 399060 六、申請專利範圍 11 種如下式之d4T.NMP0溶合物（Π)

   1 2 .—種分離和純化d 4 T的方法，其係使如申請 專利範圍第11項之d4T·NMPO溶合物（Π)自反 應混合物中分離出來，接著藉由在醇介質中加熱該d 4 T • NMPO溶合物（n)而將其轉變成d4T。 1 3 種製備如下式之d4T ( I )之方法， m m·— ϋ^ϋ ·ϋι An man ^^^^1 ^^^^9 i^i— knn m^— nn (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 之 項 一—I IX 第 圍 範 利 專 請。 串 Ny 如 Π 之 ^ 離物 分合 經溶 中 ο 醇 P 在M 熱N 加· 含 T 包 4 其 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-4 -