HU221012B1 - Eljárás 2',3'-didehidro-3'-dezoxi-timidin (d4T) előállítására és tisztítására, valamint a d4T N-metil-pirrolidon szolvátja - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás 2’,3’-didehidro-3’-dezoxitimidin (d4T) előállítására és tisztítására, amely alkalmazható nagy mennyiségben való gyártásra is. A találmány tárgya kiterjed a d4T.N-metil-pirrolidon szolvátjára is.

Több különböző eljárás ismeretes a szakirodalomból 2’,3’-didehidro-2’,3’-didezoxi-nukleozidok, mint a d4T előállítására. Legtöbbjük egy anhidronukleozid közbeeső terméken át vezet a végtermékhez.

A 2’,3’-didehidro-3’-dezoxi-timidin (d4T) nukleozid származékot korábban számos szintetikus eljárással állították elő. Az 1. reakcióút szerint, melyet Horwitz és munkatársai ismertettek [Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry (Vol. 1), Zorbach et al (eds); Interscience, New York, p 344], 3’,5’-anhidrotimidint használnak kiindulási anyagként, és gyúlékony és nedvességre érzékeny kálium-terc-butilátot (KOtBu) és dimetil-szulfoxidot (DMSO) használnak a reakcióhoz. Ez az eljárás nem vált be a nagy mennyiségű gyártásban az anyagok kezelésével járó nehézségek miatt, valamint azért, mert a termék bomlik a DMSO oldatból való elkülönítés közben, amikor az ahhoz szükséges nagy hőmérsékletnek és erősen bázikus körülményeknek teszik ki hosszabb időre.

Az elkülönítésnek a 2. reakcióút szerinti tökéletesítésével, melyet Mansuri és munkatársai ismertettek (J. Med. Chem., 1989, 461), olajos szilárd anyag alakjában kapják a d4T káliumsóját oly módon, hogy a reakcióelegyet a további feldolgozás előtt toluollal hígítják. Nagy mennyiségű termék gyártása esetén azonban nehezen kezelhető térfogatokat kell alkalmazni, és nagy mennyiségű maradék oldószer képződik, melyet nehéz regenerálni. Az elkülönített só ezúttal is igen érzékeny a nedvességre és a huzamos szárításra. Az anyag újraoldása és semlegesítése után nyers d4T-t különítenek el, megszárítják, és a kapott terméket az oldószerben még egyszer fel kell zagyolni, hogy eljussanak a végtermékhez.

Mansuri eljárásának Starrett, Jr. és munkatársai által közölt módosítása (4 904 770 számú amerikai szabadalmi leírás) szerint a 3’-5’-anhidro intermediert egy poláris szerves oldószerben reagáltatják az erős bázissal, például KOt-Bu/DMSO rendszerben végzik a reakciót, majd a 2’,3’-didehidro-2’,3’-didezoxi-nukleozid így kapott káliumsóját egy szerves oldószerrel, például toluollal elpépesítik. Ezután újra oldják és semlegesítik, és a nyers d4T-t a semlegesítéskor elkülönített szilárd anyagok acetonos extrakciójával kapják meg.

A tennék bomlását más módon a KOt-Bu/DMSO rendszer kiküszöbölésével kísérelték meg csökkenteni. Ebben a változatban, amelyet 3. reakcióútnak nevezünk, hexametil-foszforsav-triamidot (HMPA) és nátrium-hidroxidot használnak, megszüntetve ily módon azokat a bomlékonysági problémákat, amelyek az 1. és a 2. reakcióutat jellemzik. A HMPA oldószert ugyanis vizes oldatból kloroformos komplex alakjában el lehet távolítani. Kockázatot jelent viszont nagy toxicitású és egyúttal rákkeltőként is nevezetes anyagok, mint amilyen a HMPA és a kloroform, nagy mennyiségek gyártásában való használata, ezért azt kerülni kell. Ezt az eljárást Adachi és munkatársai írták le (Carbohydrate Research, 1979,113).

Cosford és munkatársai egy, az előbbiektől jobban eltérő utat (4. reakcióút) ismertettek (J. Org. Chem., 1991, 2161), mely szerint tritilezett fenil-szelenil-timidin-származékot használnak. A nagy toxicitású szelénhulladék képződése, valamint az eljáráshoz szükséges kromatografálás azonban nem kívánatos, különösen akkor, ha nagy mennyiségű anyaggal kell dolgozni.

A találmány tökéletesített eljárás 3’-dezoxi-2’,3’-didehidro-nukleozidok, különösen d4T nagy mennyiségben, nagy hozammal és nagy tisztaságban való előállítására. A találmány szerinti eljárás számos tökéletesítést foglal magában a reagensek, intermedierek és termékek kiválasztása, kezelése, előkészítése és tisztítása tekintetében, amelyek eredményeként az eljárás különösen alkalmas valamely említett termék, mint a d4T nagy mennyiségben való gyártására.

A találmány tárgya eljárás d4T nagyhozamú előállítására, amely eljárás adaptálható d4T nagy mennyiségben való gyártására.

A d4T előállítási eljárás magában foglalja:

a) 3’,5’-di-O-mezil-timidin előállítását timidinből és mezil-kloridból; ezt a lépést úgy tökéletesítettük, hogy poláris oldószert, előnyösen acetont, valamint mintegy 2-4 ekvivalens mennyiségű, a piridinnél erősebb, de a trietil-aminnál gyengébb szerves bázist, előnyösen Nmetil-morfolint használunk;

b) 3’,5’-anhidro-timidin előállítását 3’,5’-di-O-mezil-timidinnek egy alkáli- vagy alkáliföldfém-hidroxid vizes oldatával való reagáltatásával;

c) d4T előállítását 3’,5’-anhidro-timidinből, amit a nagy mennyiségben való gyártás érdekében úgy tökéletesítettünk, hogy 3’,5’-anhidro-timidin és egy alkálifémhidroxid, előnyösen kálium-hidroxid keverékét egy alkoholban, előnyösen izopropanolban melegítjük; és

d) a javított elkülönítést/tisztítást, amikor is a terméket N-metil-pirrolidonnal (NMPO) képzett szolvátja alakjában különítjük el, azután a szolvátot izopropanolban való melegítéssel megbontjuk; ekkor d4T-t kapunk nagy hozammal és nagy tisztaságban.

A hatékony méretnövelést lehetővé tevő tökéletesített d4T előállítási eljárás szintézisútját az A reakcióvázlaton mutatjuk be. A találmány tárgyát képezi a d4T előállítása a (III) képletű 3’,5’-anhidro-timidinből, valamint a termék elkülönítése és tisztítása a (II) képletű d4T.NMPO szolváton keresztül, melyeket önmagukban is külön eljárásoknak tekintünk.

Az A reakcióvázlaton bemutatott első reakcióban, melyet a) lépésnek jelölünk, az (V) képletű timidin 3’és 5’-hidroxilcsoportjait mezilezzük. Ezt a lépést az oldószer és a szerves bázis megválasztásával javítottuk. Az a) lépésben oldószerként használhatunk acetonitrilt, DMF-ot vagy előnyösen acetont. Szerves bázisként használhatunk például pikolinokat, lutidineket, előnyösen azonban N-metil-morfolint (NMM) használunk: ezek mindegyikének 5,5 és 8,0 közé esik a pK^ értéke, vagyis ezek a bázisok erősebbek a piridinnél, de gyengébbek a trietil-aminnál. A reakciót 20 °C és 50 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen mintegy 30-40 °C-on

HU 221 012 Bl hajtjuk végre mintegy 0,5-2 óra alatt, előnyösen mintegy 1 óra alatt. A (IV) képletű biszmezilát szintéziséhez korábban piridint használtak bázikus oldószerként. Ezek a szintézisek nagy mennyiségű hulladék piridin képződésével jártak, hosszabb reakcióidőt igényeltek, és az általuk előállított (IV) képletű vegyületet át kellett kristályosítani a további felhasználáshoz.

A b) lépésben a (IV) képletű biszmezilátot egy hidroxid, előnyösen nátrium-hidroxid vizes oldatával melegítjük mintegy 50-100 °C hőmérsékleten mintegy 2-8 órán át. Előnyösen mintegy 75-85 °C hőmérsékleten mintegy 3-5 óra hosszat folytatjuk a melegítést. A reakcióelegyet egy szervetlen savval, mint sósavval semlegesítjük. Ekkor a (III) képletű 3’,5’-anhidrotimidinhez (oxetán) jutunk.

A c) és d) lépés nagyban hozzájárulnak a d4T szintézis javításához. A c) lépésben alkoholos KOH használatával, valamint a (II) képletű szolvát képzésével nagymértékben tökéletesítjük az eljárást. Mint láthatjuk, a (III) képletű 3’,5’-anhidro-timidint alkoholos, előnyösen izopropanolos kálium-hidroxidban melegítjük, hogy a c) lépésben nyers d4T-t állítsunk elő. Meglepő, hogy a d4T nem bomlik az e lépésre jellemző forró, lúgos alkoholos közegben. Semlegesítés után, amihez egy szervetlen savat, mint például sósavat használunk, az alkoholt desztillációval eltávolítjuk, és a kapott maradékot szüljük az oldhatatlan anyagok eltávolítása végett. A szűrletet azután N-metil-pirrolidonnal és egy protonmentes észter, amid vagy keton oldószerrel, előnyösen acetonnal vagy butil-acetáttal kezeljük mintegy 30-60 °C, előnyösen mintegy 50 °C hőmérsékleten. Az elegyet -10 °C és 10 °C közötti hőmérsékletre hűtjük le, és a szilárd (II) képletű d4T.NMPO szolvátot kiszűijük, miközben a szűrletben nehezen eltávolítható szennyezések maradnak. A szolvátot egy alkoholban visszafolyató hűtő alatt enyhén melegítjük mintegy 0,5-2 órán át, amikor is d4T-t kapunk nagy hozammal és nagy tisztaságban.

Ez a javított eljárás nemcsak a hozam és a termék tisztasága tekintetében nyújt előnyöket, hanem a nagy léptékű gyártáshoz való alkalmazhatósága folytán is, ami a szintézis során alkalmazott műveleteknek, a reagenseknek és a reakciókörülményeknek köszönhető. A nagy léptékű szerves kémiai gyártástechnológiában jártas szakemberek tisztában vannak azzal, hogy számos eljárás, műveletsor és/vagy reakció nem alkalmas nagy méretben való megvalósításra, amint azt a kísérleti üzemekben vagy az ipari gyártóberendezésekben teszik. Jellegzetes méretnövelési problémák merülnek fel olyan eljárásokkal kapcsolatban, amelyekben veszélyes vagy toxikus reagenseket és oldószereket használnak; a nagymértékben exoterm vagy endoterm reakciók esetében, vagy akkor, ha nagy nyomást vagy nagy vákuumot kell alkalmazni, amint az bizonyos nagynyomású reakciókhoz vagy nagy vákuumot igénylő desztillációkhoz szükséges. A nagy mennyiségű oldószert igénylő tisztítási műveletek, a frakcionált kristályosítás vagy a kromatográfiás elválasztások szintén gondot okoznak a nagy léptékben való kivitelezéskor. Emellett - különféle okoknál fogva - számos eljárás hozama lecsökken és/vagy megnő a melléktermékeinek mennyisége, ha azt nagyobb anyagmennyiséggel folytatják le. A toxikus hulladékképződés meggátlásának és a vegyi hulladékanyagok biztonságos elhelyezésének újabban tapasztalható hangsúlyozása, valamint az emissziót és kiáramlást korlátozó rendelkezések miatt jelentőssé válnak a pótlólagos költségek, ha a nagy léptékű eljárások szennyező anyagok kibocsátásával és olyan hulladékok képződésével járnak, amelyeket megfelelő biztonsággal kell kezelni és elhelyezni.

A d4T korábbi előállítási eljárásai számos, a fentiekben felsorolt ok miatt nem voltak különösen alkalmasak a méretnövelésre, de más eljárási problémák miatt sem, melyek az adott reagensek jellegzetességeiből vagy az alkalmazott reakciókörülményekből adódtak. Ezzel szemben a találmány szerinti eljárás lehetővé teszi a kívánt termék nagy hozammal, nagy tisztaságban való előállítását toxikus anyagok használata vagy képződése nélkül. A reakcióidők kisebbek, és a közbeeső termékek további feldolgozás nélkül használhatók a szintézis következő lépésében. Figyelemreméltónak tartjuk azt a tapasztalatunkat, hogy - eltéróleg a korábbi eljárások eredményeitől - a d4T termék meglepően stabil marad az alkoholos kálium-hidroxidban való melegítés közben. A d4T.NMPO szolvát újszerű használata, hogy a tisztítást toxikus anyagok alkalmazása nélkül vagy veszélyes anyagok képződésének elkerülésével elvégezhessük, szintén hozzájárul a találmány szerinti eljárás méretnövelésre való alkalmasságához. A d4T korábbi előállítási eljárásaiban tapasztalható hiányosságokat sikerült az eljárásnak a találmány szerinti eljárásba beépített módosításaival leküzdeni.

Az eddigieket összefoglalva elmondhatjuk, hogy a d4T-nek és rokon vegyületeinek a találmány szerinti tökéletesített előállítási eljárása alkalmas a nagy méretben való kivitelezésre, ami a reagensek megválasztásának, a reakciókörülményeknek és az elválasztás/tisztítás jellegzetességeinek tulajdonítható, amelyek következtében hatékony eljárás jött létre, a zavaró szennyezések és a termék bomlása minimálisra csökkent; az eljárás lehetővé teszi a termék nagy hozammal és nagy tisztaságban való előállítását toxikus vagy nagy mennyiségű melléktermékek képződése nélkül.

A találmányt részletesebben a következő példákkal szemléltetjük, melyekben kitérünk a fent ismertetett eljárás előnyös kiviteli módjaira. Az oltalmi kör azonban nem korlátozódik a példákban leírtakra.

A. (IV) képletű vegyület

1. példa ’,5 ’-di-O-Metánszulfonil-timidin

Egy 5 literes háromnyakú gömblombikot felszerelünk felső meghajtású lapátos keverővei, 500 ml-es csepegtetőtölcsérrel, egy termokapcsolós szondával ellátott Claisen adapterrel, valamint visszafolyató hűtővel. A lombikba betöltünk 363,3 g (1,5 mól) timidint, 508,3 g (5,02 mól) N-metil-morfolint és 2,00 liter acetont. A reakcióelegyhez keverés közben lassan, mintegy 1 óra alatt hozzáadunk 498,3 g (4,35 mól) metánszulfonil-kloridot, miközben hőmérsékletét hűtés3

HU 221 012 Bl sel 30-35 °C-on tartjuk. A reakcióelegyhez további 1,50 liter acetont adunk, hogy megfelelő keverést tudjunk fenntartani. A beadagolás végeztével a reakcióelegyet 1 órán át keveijük 30-35 °C hőmérsékleten. Ezután a reakcióelegyet részletekben átvisszük 9,66 liter vízbe, amelyet egy 20 literes polietilén tartályban keverünk. A vizes zagy pH-ját 12 n sósavval 2,5-re állítjuk be, és a keverést a környezet hőmérsékletén folytatjuk még 2 órán át. A zagyot szűrjük, a szilárd anyagot 2,9 liter vízzel és 1,45 liter izopropanollal mossuk. A szilárd terméket egy éjszakán át szárítjuk levegőn, amikor is 564,6 g (94,5%) cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek tisztasága a vizsgálatok szerint 97,1 tömeg%. A termék olvadáspontja 170-171 °C.

2. példa ’ ,5 ’-di-O-Metánszulfonil-timidin

Egy nitrogénnel átöblített száraz gömblombikba betöltünk 10,0 g (0,0412 mól) timidint és 30 ml acetont. A reakcióelegyet keveijük, és 17,7 g (0,165 mól) 3,5lutidint adunk hozzá. Ezután 13,8 g (0,124 mól) metánszulfonil-kloridot adagolunk hozzá 10 perc alatt, miközben a hőmérsékletét 40 °C-ra hagyjuk növekedni. 45 perc múlva a reakció befejeződik. Ekkor a sűrű zagyot 150 ml vízzel felhígítjuk, 25 °C-on 30 percig keverjük, azután lehűtjük, és 30 percig 0-5 °C hőmérsékleten tartjuk. A szilárd anyagot elválasztjuk, 80 ml vízzel és 40 ml izopropanollal mossuk, azután megszárítjuk. 16,1 g (98,2%) cím szerinti vegyületet kapunk.

Β. (III) képletű vegyület

3. példa

3’,5’-Anhidro-timidin

Egy 2 literes, négynyakú lombikot felszerelünk felső meghajtású lapátos keverővei, automata titrálóval összekapcsolt pH-mérő szondával, valamint egy hőmérséklet-szabályozóval összekötött termokapcsolós szondával és futóköpennyel. A lombikba betöltünk 350 ml vizet, és keverés közben hozzáadjuk 500 g (1,255 mól) 3’,5’-di-O-metánszulfonil-timidin mintegy 20-25%-át. A pH-t 30%-os vizes nátrium-hidroxidoldattal 10,5-re állítjuk be, és a hőmérsékletet 50 °C-ra növeljük. A 3’,5’-di-O-metánszulfonil-timidin fennmaradó részét lassan, az oldódás ütemében hozzáadjuk a reakcióelegyhez, ügyelve arra, hogy az közben keverhető maradjon. Az adagolás közben a hőmérsékletet 50-55 °C-on, a pH-t 10,5-11,0 értéken tartjuk. Összesen 502 g (3,765 mól) 30%-os vizes nátrium-hidroxidot adunk a reakcióelegyhez. Ezután a reakcióelegyet felmelegítjük és 1 órán át 70 °C-on tartjuk, majd 10-15 °C-ra hűtjük le. A pH-t 12 n sósavval 9,7-9,8-ra állítjuk be, és a hőmérsékletet hűtéssel 10-15 °C-on tartjuk, míg kristályos anyag válik ki a reakcióelegyből. Végül a zagy pH-ját 12 n sósavval 6,0-6,5-re állítjuk be, és a zagyot 0-5 °C-ra hűtjük le és szüljük. A szilárd anyagot 200 ml hideg (0-5 °C-os) vízzel mossuk és levegőn megszárítjuk. 211,6 g (75,2%) cím szerinti vegyületet kapunk, amely vizsgálataink szerint 99,8 tömeg% tisztaságú. A termék olvadáspontja 189-191 °C.

C. (II) képletű vegyület

4. példa

2’,3 ’-Didehidro-3 ’-dezoxi-timidinN-metil-pirrolidon-szolvát (d4T.NMPO)

Egy háromnyakú 5 literes lombikot felszerelünk felső meghajtású lapátos keverővei, visszafolyató hűtővel, hőmérővel és futőköpennyel. A lombikba 1,25 liter izopropanolt és 198 g (3,0 mól) kálium-hidroxidot töltünk be, és keverés közben 50 °C-ra melegítjük. Ezután 168,2 g (0,75 mól) 3’,5’-anhidro-timidint adunk hozzá részletekben. A kapott oldatot 78-80 °C hőmérsékleten melegítjük 3,5 órán át. Az oldatot 20-25 °C-ra hűtjük le, 1,75 liter izopropanollal felhígítjuk, pH-ját tömény sósavval 4 és 6 közé állítjuk be, és 0 °C-ra hűtjük le. A kivált kálium-kloridot kiszűrjük és 200 ml izopropanollal mossuk. Az egyesített szűrletet és mosófolyadékot három egyenlő részre osztjuk. Minden részt 54 ml N-metil-pirrolidonnal keverünk össze, és 50 °Con 2-2,66 kPa nyomáson sűrű olajjá töményítjük be. Ezt 120 ml acetonnal felhígítjuk, és 15 percig melegítjük 50 °C-on. Ezután 15 °C-ra hűtjük le, mire sűrű zaggyá alakul. A szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük. Összesen 65,96 g (81,6%) cím szerinti vegyületet kapunk, amely vizsgálataink szerint 68,5 tömeg% d4T-t tartalmaz. A tennék olvadáspontja 170-175 °C.

5. példa

2’,3 ’-Didehidro-3 ’-dezoxi-timidinN-metil-pirrolidon-szolvát (d4T.NMPO)

A 4. példa szerinti berendezést használjuk. A lombikba betöltünk 1,235 liter izopropanolt és 211,97 g (3,211 mól) kálium-hidroxidot, és keverés közben 50 °C-ra melegítjük. Ezután részletekben 180,0 g (0,803 mól) 3’,5’-anhidro-timidint adunk hozzá. A kapott oldatot 4 órán át melegítjük 78-80 °C-on, azután 20-25 °C-ra hűtjük le, 1,976 liter izopropanollal felhígítjuk, pH-ját tömény sósavval 5,6-ra állítjuk be, és 10 °C-ra hűtjük le. A kivált kálium-hidroxidot kiszűrjük és 200 ml izopropanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük és két egyenlő részre osztjuk. Az első részt összekeverjük 90 ml N-metilpirrolidonnal, és 50 °C hőmérsékleten és 15-20 mmHg nyomáson sűrű olajjá töményítjük be. Ezt 100 ml acetonnal felhígítjuk, és 15 percig melegítjük 50 °C-on. A keveréket 0 °C alá hűtjük, amikor is sűrű zagy képződik. A szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük. 104,47 g (80,5%) cím szerinti vegyületet kapunk, amely vizsgálataink szerint 69,1 tömeg% d4T-t tartalmaz.

Az egyesített szűrlet és mosófolyadék második részletéhez hozzáadjuk az előbbi műveletben kapott anyalúgot, valamint 31 ml NMPO-t. A fent leírt eljárást követve 107,93 g (83%) szilárd terméket különítünk el, amely vizsgálataink szerint 70,0 tömeg%-os cím szerinti vegyület.

D. (I) képletű vegyület (d4T)

6. példa ’,3 ’-Didehidro-3 ’-dezoxi-timidin (d4T)

Egy 1 literes keverós gömblombikot felszerelünk visszafolyató hűtővel és fűtőköpennyel. A lombikba betöltünk 55,25 g (0,27 mól) d4T.NMPO-t 550 ml

HU 221 012 BI izopropanollal, 5,5 g Dicalite szűrési segédanyaggal és

5,5 g Darco KB aktív szénnel együtt. A reakcióelegyet keveijük és a visszafolyatás hőmérsékletére melegítjük, forrón szüljük, és a szenes szűrőréteget 165 ml forró izopropanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük és desztillációval 200 ml-re töményítjük be. A terméket a környezet hőmérsékletére való lassú lehűtéssel kristályosítjuk ki. Ezután a hőmérsékletet 0 °C-ra csökkentjük, a szilárd anyagot elválasztjuk, 50 ml hideg (0 °C-os) izopropanollal mossuk, és levegőn megszárítjuk. 34,6 g (90,4%) cím szerinti vegyületet kapunk, amely vizsgálataink szerint 98 tömeg% tisztaságú. A termék olvadáspontja 165-166 °C.

A fentiekben bemutatott eljárásnak minden ésszerű változata, így a tárgyban jártas szakember által járható bármely út megvalósítható anélkül, hogy eltérnénk a találmány oltalmi körétől.

E. Léptéknövelés

Az eljárást megvalósítottuk nagyobb léptékben is. Egy méretnövelési lépcsőben, ahol mintegy 350 kg (V) képletű vegyületből indultunk ki, az a) lépés hozama (az aktivitás alapján) 88,5% volt, a b) lépésben hasonlóképpen mintegy 75% hozammal állítottunk elő (III) képletű oxetán intermediert. A (II) képletű NMPO szolvát elkülönítése mintegy 76-89% hozammal ment végbe, és az ekkor kapott anyagot 90% hozammal alakítottuk át d4T termékké.

Claims (8)

1. Eljárás tisztított 2’,3’-didehidro-3’-dezoxitimidin (d4T) előállítására, azzal jellemezve, hogy a d4T (II) képletű N-metil-pirrolidinos szolvátját (d4T.NMPO) egy alkoholos közegben melegítjük.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkoholos közegként izopropanolt használunk.

3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) képletű szolvát előállítására

i) (III) képletű 3’,5’-anhidro-timidint a periódusos rendszer I. csoportjába tartozó alkálifémnek alkoholos oldatával melegítjük, majd ii) savval semlegesítjük, és eltávolítjuk az oldhatatlan sókat és az alkoholt, majd iii) az anyagot N-metil-pirrolidonnal és acetonnal kezelve kicsapjuk a (II) képletű d4T.NMPO szolvátot, és azt elkülönítjük a reakcióelegyből.

4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az i) lépésben alkoholként izopropanolt használunk.

5. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a iii) lépésben a (II) képletű d4T.NMPO szolvátot acetonos zagyból vagy szuszpenzióból való kiszűréssel különítjük el.

6. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (III) képletű vegyület előállítására:

i) (V) képletű timidint mezil-kloriddal reagáltatunk egy szerves bázis, nevezetesen N-metil-morfolin, egy pikolin vagy egy lutidin jelenlétében, és (IV) képletű 3’,5’-di-O-mezil-timidinné alakítjuk, majd ii) a (IV) képletű biszmezilátot a periódusos rendszer I csoportjába tartozó alkálifém-hidroxid vagy a periódusos rendszer II csoportjába tartozó alkáliföldfémhidroxid, előnyösen lítium-hidroxid, nátriumhidroxid vagy kálium-hidroxid, legelőnyösebben nátrium-hidroxid vizes oldatával kezeljük és (III) képletű 3’,5’-anhidro-timidinné alakítjuk.

7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az i) lépésben szerves bázisként N-metilmorfolint használunk.

8. A (II) képletű d4T.NMPO szolvát.