TW202328164A

TW202328164A - 加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造法

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Publication number: TW202328164A
Application number: TW111132896A
Authority: TW
Inventors: 矢野真也; 松本卓
Original assignee: 日商積水醫療股份有限公司
Priority date: 2021-09-01
Filing date: 2022-08-31
Publication date: 2023-07-16
Also published as: WO2023033017A1

Abstract

本發明提供一種利用液相肽合成法之新穎之加尼瑞克(ganirelix)之製造法。本發明係關於一種加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，其係利用液相肽合成法之加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，且作為自C末端起第3個及第5個二乙基高精胺酸殘基之縮合反應原料，使用下述式(1)～(3)所表示之化合物與液相肽合成用載體之結合體， (式中，R ¹及R ²表示Boc、Cbz、Troc、Alloc、Trt、Mmt、Teoc、Phth、SES、或ivDde，R ³表示胺基保護基)。

Description

加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造法

本發明係關於一種作為激性腺素拮抗劑(gonadotropin antagonist)之加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造法。

加尼瑞克(ganirelix)係激性腺素拮抗劑，作為調節卵巢刺激下之過早排卵抑制劑而上市。加尼瑞克(ganirelix)係於自C末端起第3位及第5位具有二乙基高精胺酸殘基之十肽醫藥品，藉由固相肽合成法來製造(專利文獻1、2、非專利文獻1)。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]CN102584945A [專利文獻2]國際公開第2015/188774號 [專利文獻3]日本專利第5113118號公報 [專利文獻4]日本專利第4500854號 [專利文獻5]日本專利第5929756號公報 [專利文獻6]日本專利第6092513號公報 [專利文獻7]日本專利第5768712號公報 [專利文獻8]日本專利第5803674號公報 [專利文獻9]日本專利第6116782號公報 [專利文獻10]日本專利第6201076號公報 [專利文獻11]日本專利第6283774號公報 [專利文獻12]日本專利第6283775號公報 [專利文獻13]日本專利第6322350號公報 [專利文獻14]日本專利第6393857號公報 [專利文獻15]日本專利第6531235號公報 [專利文獻16]國際公開第2019/009317號 [專利文獻17]國際公開第2020/175472號 [專利文獻18]國際公開第2020/175473號 [專利文獻19]日本專利特表2003-500416號公報 [專利文獻20]日本專利特表2004-516330號公報 [專利文獻21]日本專利特開平4-211096號公報 [專利文獻22]日本專利特開平5-170795號公報 [非專利文獻]

[非專利文獻1]日本厚生勞動省醫藥食品局審查管理科「GANIREST皮下注射0.25 mg注射器」審議結果報告書 https://www.pmda.go.jp/drugs/2008/P200800034/170050000_22000AMX01714000_A100_2.pdf

[發明所欲解決之問題]

作為如加尼瑞克(ganirelix)之十肽之製造法，若為試劑水準之少量，則較佳為固相肽合成法，但不適於作為醫藥品之供給之大量生產。其原因在於，固相合成為不均勻之反應系，混合效率較低，反應速度較慢。進而，由於無法於反應中途將肽進行純化，故而以定量反應為目的，必須使用3～4當量之嚴重過量之要延長之胺基酸或試劑。另一方面，根據液相肽合成法，為均勻之反應系，亦能夠抑制試劑之使用量。然而，隨著肽鏈之延長而於有機溶劑中之溶解度降低，由此引起反應速度降低，或必須針對每個肽延長反應研究適於各肽性質之分離步驟而較繁雜，因此近年來並未進行所謂之液相肽合成，亦未進行利用液相肽合成法之加尼瑞克(ganirelix)之合成。

相對於此，近年來，於液相肽合成中報告有液相肽合成用載體(Tag)(專利文獻3～18)。本載體係疏水性較高之化合物，因此藉由使親水性較高之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺(以下，有時稱為胺基酸等)結合於本載體，能夠大幅提昇於有機溶劑中之溶解性。因此，於在本載體上結合有胺基酸等之狀態下實施肽延長反應之情形時，具有如下優點：藉由使結合於載體之胺基酸等溶解於有機層中，使無用成分、例如肽延長反應中所使用之剩餘之原料胺基酸或其分解物、將原料胺基酸之保護基進行脫保護時所副產之化合物等溶解於水層中，可利用液液分離將結合於載體之胺基酸等簡便地純化。進而，亦具有即便於結合有載體之狀態下亦能夠進行肽之部分純化之優點。如此，若使用液相肽合成用載體，則無需繁雜之分離操作便可進行肽之大量製造。再者，於本說明書中，所謂「胺基酸醯胺」，係指胺基酸之C末端之羧基(-COOH)變成醯胺基(-CONH ₂)之結構。又，所謂「肽醯胺」，係指肽之C末端之羧基變成醯胺基之結構。進而，於本說明書中，記載為「液液分離」之情形時，係指上述步驟，即係指使結合於載體之胺基酸等溶解於有機層中，使無用成分、例如肽延長反應中所使用之剩餘之原料胺基酸或其分解物、將原料胺基酸之保護基進行脫保護時所副產之化合物等溶解於水層中之步驟。

但是，判斷出於加尼瑞克(ganirelix)之情形時，即便使用該液相肽合成用載體，加尼瑞克(ganirelix)之結構中所存在之含胍基之胺基酸(二乙基高精胺酸)之縮合反應時的液液分離亦困難。

因此，本發明之課題在於提供一種利用液相肽合成法之新穎之加尼瑞克(ganirelix)之製造法。 [解決問題之技術手段]

因此，本發明者對使用液相肽合成用載體之加尼瑞克(ganirelix)之液相肽合成中所使用的二乙基高精胺酸之胍基之保護方法進行了各種研究。首先，研究了作為精胺酸類之胍基之保護方法通用之質子保護(專利文獻19～22)，結果二乙基高精胺酸之縮合反應後之液液分離困難。相對於此，發現若使用精胺酸類之胍基經Boc基等保護基保護之二乙基高精胺酸作為原料，則縮合反應後之液液分離變得良好，可藉由液相肽合成法以工業上有利之方法製造加尼瑞克(ganirelix)或其鹽，從而完成了本發明。

即，本發明提供以下發明[1]～[11]。 [1]一種加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，其係利用液相肽合成法之加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，且作為自C末端起第3個及第5個二乙基高精胺酸殘基之縮合反應原料，使用下述式(1)～(3)所表示之群中之1種以上之化合物、及液相肽合成用載體，

[化1]

(式中，R ¹及R ²表示Boc、Cbz、Troc、Alloc、Trt、Mmt、Teoc、Phth、SES、或ivDde，R ³表示胺基保護基)。 [2]如[1]所記載之製造方法，其特徵在於：包括以下步驟a～c。 a.於包含有機溶劑之溶劑中，使與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與胺基經保護之胺基酸或肽縮合之步驟； b.將反應液中之上述胺基經保護之化合物之胺基保護基去除之步驟； c.向反應液中添加水溶液後，進行分液，獲得含有與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與上述胺基保護基脫離之胺基酸或肽之縮合體之有機溶劑層之步驟。 [3]如[1]或[2]所記載之製造方法，其中上述加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之胺基酸序列自C末端側起依序為D-AlaNH ₂、Pro、hArg(Et) ₂、Leu、D-hArg(Et) ₂、Tyr、Ser、D-3-吡啶基Ala、D-p-氯Phe、D-萘基Ala。 [4]如[1]至[3]中任一項所記載之製造方法，其中上述R ¹及R ²為Boc，上述R ³為Fmoc或Cbz。 [5]如[1]至[4]中任一項所記載之製造方法，其中上述R ¹及R ²為Boc，上述R ³為Fmoc。 [6]如[2]至[5]中任一項所記載之製造方法，其中繼步驟a之後，包括向縮合反應後之反應液中添加胺基酸活性酯之淬滅劑之步驟。 [7]如[6]所記載之製造方法，其中上述胺基酸活性酯之淬滅劑為水溶性胺。 [8]如[7]所記載之製造方法，其中上述水溶性胺為羥胺、醯胺硫酸、羥胺-O-磺酸、羥胺-O-膦酸、或具有選自烷基、烯基、環烷基、環烯基、芳基、芳烷基及雜環式基中之1種或2種以上之一級、二級或三級胺類，且該胺類亦可具有選自羥基、醚鍵、烷氧基、磺醯基、磺酸基、硫酸基、及磷酸基中之1種或2種以上之取代基。 [9]如[2]至[8]中任一項所記載之製造方法，其中於R ³為Fmoc之情形時，繼步驟b之後，包括添加二苯并富烯之捕捉劑之步驟。 [10]如[9]所記載之製造方法，其中上述二苯并富烯之捕捉劑為具有碳數1～10之烷基之巰基化合物，且該巰基化合物具有選自羧酸、羧酸之鹼金屬鹽、磺酸、或磺酸之鹼金屬鹽中之1種以上之取代基。 [11]如[1]至[10]中任一項所記載之製造方法，其中上述液相肽合成用載體為下述式(I)所表示之化合物。

[化2]

[式中，環A表示可包含雜原子且可為多環性之C4～20之芳香環； R ¹¹為氫原子，或於環A為苯環且Rb為下述式(b)所表示之基之情形時，與R ¹³一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環； p個X ¹分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁵-(R ¹⁵表示氫原子、烷基或芳烷基)； p個R ¹²分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基；

[化3]

其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； p表示1～4之整數；環A除p個X ¹R ¹²以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基； Ra表示氫原子、或可經鹵素原子取代之芳香族環； Rb表示氫原子、可經鹵素原子取代之芳香環、或式(b)

[化4]

(式中，＊表示鍵結位置； q表示0～4之整數； q個X ²分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁸-(R ¹⁸表示氫原子、烷基或芳烷基)； q個R ¹⁴分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基；

[化5]

其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； R ¹³表示氫原子，或與R ¹¹一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環；環B除q個X ²R ¹⁴以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基)所表示之基； Y表示羥基、硫醇基、NHR ²⁰(R ²⁰表示氫原子、烷基或芳烷基)或鹵素原子] [發明之效果]

若利用使用本發明之二乙基高精胺酸之保護體之方法製造加尼瑞克(ganirelix)或其鹽，則縮合反應後之液液分離變得容易，可於工業上有利地製造加尼瑞克(ganirelix)或其鹽。

作為本發明之目標化合物之加尼瑞克(ganirelix)係具有下述結構之十肽[N-乙醯基-3-(2-萘基)-D-丙胺醯基-4-氯-D-苯基丙胺醯基-3-(3-吡啶基)-D-丙胺醯基-L-蠟基-L-酪胺醯基-N6-(N,N'-二乙基甲脒基)-D-離胺醯基-L-白胺醯基-N6-(N,N'-二乙基甲脒基)-L-離胺醯基-L-脯胺醯基-D-丙胺酸醯胺)]，其為激性腺素拮抗劑，作為調節卵巢刺激下之過早排卵抑制劑而上市。

[化6]

於上述結構中，構成十肽結構之胺基酸殘基有時自C末端側起簡稱為D-AlaNH ₂、Pro、hArg(Et) ₂、Leu、D-hArg(Et) ₂、Tyr、Ser、D-3-吡啶基Ala、D-p-氯Phe、D-萘基Ala。

本發明之加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法係利用液相肽合成法之加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，且作為自C末端起第3個及第5個二乙基高精胺酸殘基之縮合反應原料，使用下述式(1)～(3)所表示之化合物中之1種以上及液相肽合成用載體，

[化7]

(式中，R ¹及R ²表示Boc、Cbz、Troc、Alloc、Trt、Mmt、Teoc、Phth、SES、或ivDde，R ³表示胺基保護基)。

首先，對用作二乙基高精胺酸殘基之縮合反應原料之上述式(1)～(3)所表示之化合物進行說明。 R ¹及R ²為保護基，表示Boc(第三丁氧基羰基)、Cbz(苄氧基羰基)、Troc(2,2,2-三氯乙氧基羰基)或Alloc(烯丙氧基羰基)、Trt(三苯甲基)、Mmt(4-單甲氧基三苯甲基)、Teoc(2-(三甲基矽烷基)乙氧基羰基)、Phth(鄰苯二甲醯基)、SES((2-三甲基矽烷基)-乙磺醯基)、ivDde(1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧環己-1-亞基)-3-甲基丁基)。其中，就使縮合反應物之液液分離良好之觀點而言，較佳為Boc。 R ³表示胺基保護基。作為該胺基保護基，可例舉Fmoc(9-茀基甲氧基羰基)、Boc、Cbz等，其中較佳為Fmoc、Cbz，更佳為於鹼性條件下可脫保護之Fmoc。 R ¹及R ²與R ³較佳為具有正交性質之保護基。即，較佳為R ¹及R ²之脫保護條件不會對R ³造成影響，R ³之脫保護條件不會對R ¹及R ²造成影響。尤其更佳為R ¹及R ²為Boc且R ³為Fmoc之化合物。

上述式(1)～(3)所表示之結構為E/Z異構物或亞胺基/胺基異構物，該化合物亦可為該等異構物之混合物。

上述式(1)～(3)所表示之化合物例如可藉由使α胺基保護二乙基高精胺酸、或其與液相肽合成用載體之結合體，與二碳酸二第三丁酯、N-第三丁氧基羰基咪唑等Boc化劑等胺基保護劑反應而製造。例如，該Boc化反應較佳為於鹼之存在下於溶劑中進行。作為鹼，可為吡啶、三乙胺、DMAP(4-二甲胺基吡啶)、N-甲基咪唑等有機鹼或該等之混合有機鹼，亦可為碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、氫氧化鈉等無機鹼。鹼之添加量相對於精胺酸衍生物為0.1～30當量，較佳為1～20當量，但並不限定於此。反應溶劑可使用水、THF(四氫呋喃)、2-甲基THF、1,4-二㗁烷、甲苯、DMF(N,N-二甲基甲醯胺)、乙腈、二氯甲烷、氯仿、甲醇、乙醇、或該等之混合溶劑等。反應較佳為於0℃～40℃下進行1～24小時。

其次，對上述液相肽合成用載體進行說明。此種液相肽合成用載體只要為保護胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺(胺基酸等)之官能基，並使該經保護之胺基酸等可溶於有機溶劑中之載體即可，例如可使用專利文獻3～18等中所記載之化合物。作為此種液相肽合成用載體，具體而言，可例舉下述式(I)所表示之化合物。

[化8]

[式中，環A表示可包含雜原子且可為多環性之C4～20之芳香環； R ¹¹為氫原子，或於環A為苯環且Rb為下述式(b)所表示之基之情形時，R ¹¹與R ¹³一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環； p個X ¹分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁵-(R ¹⁵表示氫原子、烷基或芳烷基)； p個R ¹²分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基；

[化9]

其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； p表示1～4之整數；環A除p個X ¹R ¹²以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基； Ra表示氫原子、或可經鹵素原子取代之芳香族環； Rb表示氫原子、可經鹵素原子取代之芳香環、或式(b)所表示之基；

[化10]

[化11]

其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； R ¹³表示氫原子，或與R ¹¹一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環；環B除q個X ²R ¹⁴以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基； Y表示羥基、硫醇基、NHR ²⁰(R ²⁰表示氫原子、烷基或芳烷基)或鹵素原子]

式(I)中之環A表示可包含雜原子且可為單環性亦可為多環性之C4～20之芳香環。作為該芳香環，可例舉C6～20之芳香族烴環、及C4～10之芳香族雜環。作為具體之C6～20之芳香族烴環，可例舉：苯環、萘環、蒽環、菲環、聯三伸苯環、稠四苯環、茚滿環、茚環、茀環、聯苯環、1,1'-聯萘環等。其中，更佳為苯環、萘環、菲環、茀環。作為C4～10之芳香族雜環，較佳為包含選自氮原子、氧原子及硫原子中之1～3個作為雜原子之5員環～10員環之芳香族雜環，具體而言，可例舉：吡咯環、呋喃環、噻吩環、吲哚環、苯并呋喃環、苯并噻吩環、咔唑環、吡唑環、吲唑環、咪唑環、吡啶環、喹啉環、異喹啉環等。其中，較佳為包含選自氮原子、氧原子及硫原子中之1～3個作為雜原子之5員環～8員環之芳香族雜環，更佳為吡咯環、呋喃環、噻吩環、吲哚環、苯并呋喃環、苯并噻吩環、咔唑環、吡唑環、吲唑環。

R ¹¹表示氫原子，或於環A為苯環且Rb為上述式(b)所表示之基之情形時，與R ¹³一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環。作為R ¹¹與R ¹³可一起形成之環，較佳為茀環或𠮿　環。

p個X ¹分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁵-(R ¹⁵表示氫原子、烷基或芳烷基)。此處，作為R ¹⁵，較佳為氫原子、C1～10之烷基或C7～20之芳烷基。作為烷基，可例舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基等直鏈或支鏈之C1～10之烷基。作為芳烷基，可例舉：C7～16芳烷基、例如苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、萘基甲基、1-萘基乙基等。

p個R ¹²分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基；

[化12]

其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； p表示1～4之整數。

於本說明書中，所謂具有脂肪族烴基之有機基，係指於其分子結構中具有脂肪族烴基之一價有機基。該具有脂肪族烴基之有機基中之脂肪族烴基之部位並無特別限定，可存在於末端，亦可存在於其以外之部位。存在於該有機基中之脂肪族烴基係直鏈、支鏈狀或環狀之飽和或不飽和之脂肪族烴基，就有機溶劑溶解性之方面而言，較佳為C5以上之脂肪族烴基，更佳為C5～50之脂肪族烴基，進而較佳為C8～30之脂肪族烴基。作為該脂肪族烴基之具體例，可例舉烷基、環烷基、烯基、炔基等，尤其較佳為烷基、環烷基、烯基，更佳為烷基。進而，較佳為C5～30之直鏈或支鏈之烷基、C3～8之環烷基、C5～30之直鏈或支鏈之烯基，更佳為C5～30之直鏈或支鏈之烷基、C3～8之環烷基，進而較佳為C5～30之直鏈或支鏈之烷基，進而更佳為C8～30之直鏈或支鏈之烷基。

作為烷基之具體例，可例舉碳數1～30之烷基，可例舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、辛基、癸基、月桂基、十三烷基、肉豆蔻基、鯨蠟基、硬脂基、花生基、山萮基、二十四烷基、二十六烷基、異硬脂基等一價基、由該等一價基衍生之二價基、自各種類固醇基去除羥基等所得之基。作為具有支鏈之烷基，可例舉：2,3-二氫植基、3,7,11-三甲基十二烷基。又，於X ¹為-NHC(=O)-之情形時，作為X ¹R ¹²，可例舉2,2,4,8,10,10-六甲基-5-十二醯胺。作為烯基，可例舉：乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、油烯基等一價基、由該等一價基衍生之二價基。作為炔基，可例舉乙炔基、炔丙基、1-丙炔基等。

於上述脂肪族烴基上亦可經由氧原子取代有脂肪族烴基。作為可經由氧原子取代在脂肪族烴基上之脂肪族烴基，可例舉：碳數1～20之直鏈或支鏈之烷氧基、碳數2～20之烯氧基、碳數3～6之環烷氧基等一價基、由該等一價基衍生之二價基等。又，亦可具有如下重複結構，即於被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基上進而經由氧原子取代有脂肪族烴基。具體而言，作為R ¹²，可例舉：12-二十二烷氧基-1-十二烷基、3,4,5-三(十八烷氧基)苄基、2,2,2-三(十八烷氧基甲基)乙基、3,4,5-三(十八烷氧基)環己基甲基等。

於上述之脂肪族烴基上亦可取代有式(a)所表示之有機基。

[化13]

(R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基) 作為矽烷基，較佳為經選自碳數1～6之直鏈或支鏈之烷基及可具有取代基之芳基中之3個取代之矽烷基。此處，作為可具有取代基之芳基，可例舉苯基、萘基等。作為較佳之矽烷基，為經碳數1～6之直鏈或支鏈之烷基3個取代之矽烷基，更佳為經碳數1～4之直鏈或支鏈之烷基3個取代之矽烷基。取代在矽烷基上之3個烷基或芳基可相同亦可不同。又，作為鍵結有矽烷氧基之烷基，較佳為鍵結有經選自碳數1～6之直鏈或支鏈之烷基及可具有取代基之芳基中之3個取代之矽烷氧基1～3個的碳數1～13之直鏈或支鏈之烷基。作為較佳之矽烷氧基，為經碳數1～6之直鏈或支鏈之烷基3個取代之矽烷氧基，更佳為經碳數1～4之直鏈或支鏈之烷基3個取代之矽烷氧基。取代在矽烷氧基上之3個烷基或芳基可相同亦可不同。碳數1～13之直鏈或支鏈之烷基較佳為支鏈，進而較佳為具有四級碳原子。

p表示1～4之整數。此處，p較佳為1～3，更佳為1～2。

環A除p個X ¹R ¹²以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基。作為鹵素原子，可例舉氯原子、氟原子、溴原子、碘原子。作為可經鹵素原子取代之C1-6烷基，可例舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、二氯甲基、三氯甲基、三氟甲基等。作為可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基，可例舉：甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、三氯甲氧基、三氟甲氧基等。

Ra表示氫原子、或可經鹵素原子取代之芳香族環。此處，作為芳香族環，可例舉C6～18之芳香族烴環、及C4～10之芳香族雜環。作為具體之C6～18之芳香族烴環，可例舉：苯環、萘環、蒽環、菲環、聯三伸苯環、稠四苯環、茚滿環、茚環、茀環、聯苯環等。其中，更佳為苯環、萘環、菲環、茀環。作為C4～10之芳香族雜環，較佳為包含選自氮原子、氧原子及硫原子中之1～3個作為雜原子之5員環～10員環之雜環，具體而言，可例舉：吡咯環、呋喃環、噻吩環、吲哚環、苯并呋喃環、苯并噻吩環、咔唑環、吡唑環、吲唑環、咪唑環、吡啶環、喹啉環、異喹啉環等。其中，較佳為包含選自氮原子、氧原子及硫原子中之1～3個作為雜原子之5員環～8員環之雜環，更佳為吡咯環、呋喃環、噻吩環、吲哚環、苯并呋喃環、苯并噻吩環、咔唑環、吡唑環、吲唑環。於Ra之芳香族環上亦可取代有1～3個鹵素原子。

Rb表示氫原子、可經鹵素原子取代之芳香族環、或上述式(b)所表示之基。式(b)中之q表示0～4之整數。 q較佳為0～3，更佳為1～3，進而較佳為1～2。

q個X ²分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁸-(R ¹⁸表示氫原子、烷基或芳烷基)。此處，作為R ¹⁸，較佳為氫原子、C1～10之烷基或C7～20之芳烷基。作為烷基，可例舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基等。作為芳烷基，可例舉C7～16芳烷基、例如苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、萘基甲基、1-萘基乙基等。

q個R ¹⁴分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基。

[化14]

其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者。 R ¹⁴所表示之有機基可例舉與上述之R ¹²相同者，較佳為與上述之R ¹²相同者。

R ¹³表示氫原子，或與R ¹¹一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環。

環B除q個X ²R ¹⁴以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基。作為鹵素原子，可例舉氯原子、氟原子、溴原子、碘原子。作為可經鹵素原子取代之C1-6烷基，可例舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、二氯甲基、三氯甲基、三氟甲基等。作為可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基，可例舉：甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、三氯甲氧基、三氟甲氧基等。

Y表示羥基、硫醇基、NHR ²⁰(R ²⁰表示氫原子、烷基或芳烷基)或鹵素原子。此處，作為R ²⁰，較佳為氫原子、C1～10之烷基或C7～20之芳烷基。作為烷基，可例舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基等。作為芳烷基，可例舉C7～16芳烷基、例如苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、萘基甲基、1-萘基乙基等。

上述式(I)之化合物中，作為較佳之液相肽合成用載體之具體例，可例舉下述式(7)、(20)或(21)所表示之化合物。作為其中之一，可使用式(7)所表示之化合物(專利文獻9、10)。

[化15]

(式中，Yb表示-CH ₂OR ³⁴(此處，R ³⁴表示氫原子、鹵代羰基、活性酯型羰基或活性酯型磺醯基)、-CH ₂NHR ³⁵(此處，R ³⁵表示氫原子、碳數1～6之直鏈或支鏈之烷基、或芳烷基)、鹵代甲基、甲醯基、或肟，R ²¹、R ²²、R ²³、R ²⁴及R ²⁵中之至少1個表示式(8)所表示之基，

[化16]

其餘表示氫原子、鹵素原子、碳數1～4之烷基或碳數1～4之烷氧基； R ²⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基； X ³表示O或CONR ³⁶(此處，R ³⁶表示氫原子或碳數1～4之烷基)； A表示式(9)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)或(19)所表示之基。

[化17]

(此處，R ²⁷、R ²⁸、R ²⁹相同或不同地表示碳數1～6之直鏈或支鏈之烷基、或可具有取代基之芳基；R ³⁰表示單鍵或碳數1～3之直鏈或支鏈之伸烷基，R ³¹、R ³²及R ³³分別表示碳數1～3之直鏈或支鏈之伸烷基)

又，作為液相肽合成用載體，可使用式(20)所表示之化合物(專利文獻11、12、15)。

[化18]

(式中，X ⁴表示-OR ⁵¹(此處，R ⁵¹表示氫原子、活性酯型羰基或活性酯型磺醯基)、-NHR ³⁵、疊氮基、鹵素、異氰酸基、與X ⁵一起表示=N-OH或=O，於X ⁴為-OR ⁵¹、-NHR ³⁵、疊氮基或鹵素之情形時，X ⁵表示氫原子或碳數1～4之直鏈或支鏈之烷基或烯基、或環烷基，於X ⁴為異氰酸基之情形時，X ⁵表示碳數1～4之直鏈或支鏈之烷基或烯基、或環烷基； R ⁴¹～R ⁵⁰中之至少1個表示式(2)所表示之基，其餘表示氫原子、鹵素原子、碳數1～4之烷基或碳數1～4之烷氧基； X ⁴為-OR ⁵¹、-NHR ³⁵、疊氮基或鹵素且X ⁵為氫原子時，或X ⁴與X ⁵一起為=O時，R ⁴⁵與R ⁴⁶亦可經由氧原子鍵結而形成𠮿　環)

又，作為液相肽合成用載體，可使用式(21)所表示之化合物(專利文獻13、14)。

[化19]

(式中，X ⁶表示羥基或鹵素原子，R ⁶¹～R ⁷⁵中之至少1個表示式(2)所表示之基，其餘表示氫原子、鹵素原子、碳數1～4之烷基或碳數1～4之烷氧基，R ⁷⁰與R ⁷¹可以單鍵鍵結而形成茀環，亦可經由氧原子鍵結而形成𠮿　環)

再者，液相肽合成用載體亦可經由連接子而結合於作為原料之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺(胺基酸等)之羧基。此處所謂之連接子，係指具有連接子之一者與上述胺基酸等之羧基結合，另一者與液相肽合成用載體結合之2個反應基之有機基。較佳之連接子係分子量為約2000以下(較佳為約1500以下、更佳為約1000以下)之有機基，且係分子內具有可相同亦可不同之選自由胺基、羧基、及鹵甲基所組成之群中之至少2個基作為反應基之化合物。例如，可例舉以下之化合物。

[化20]

[化21]

(式中，Y為1～6、較佳為1～4之整數)

[化22]

(式中，X為鹵素原子、較佳為氯或溴)

[化23]

(式中，Z為2～40、較佳為2～35、更佳為2～28之整數) (上述連接子之結構式表示結合於側鏈官能基等之前之狀態且與液相肽合成用載體結合之前之狀態)

其次，對肽延長反應進行說明。肽延長反應較佳為具有以下步驟a、步驟b及步驟c。再者，步驟b、c之順序不限，可為先步驟b再步驟c之順序，即去除胺基之保護基後獲得含有縮合體之有機溶劑層，亦可為先步驟c再步驟b之順序，即獲得含有縮合體之有機溶劑層後去除胺基之保護基。 a.於包含有機溶劑之溶劑中，使與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與胺基經保護之胺基酸或肽縮合之步驟； b.將反應液中之上述胺基經保護之化合物之胺基保護基去除之步驟； c.向反應液中添加水溶液後，進行分液，獲得含有與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與上述胺基保護基脫離之胺基酸或肽之縮合體之有機溶劑層之步驟。再者，繼步驟a之後，亦可實施向縮合反應後之反應液中添加胺基酸活性酯之淬滅劑之步驟。又，於胺基保護基為Fmoc基之情形時，繼步驟b之後，亦可實施添加二苯并富烯之捕捉劑之步驟。

步驟a記載之與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺、或肽醯胺(以下，簡稱為液相肽合成用載體結合肽)可以如下方式製造。首先，將液相肽合成用載體溶解於THF等有機溶劑中，添加例如經Fmoc保護之胺基酸或肽及縮合劑、例如N,N'-二異丙基碳二醯亞胺(DIPCI)、鹼、例如DMAP而進行縮合。如此，可製造作為於胺基酸或肽之羧基上結合有液相肽合成用載體之中間物之N-Fmoc-液相合成用載體結合肽。或者，將液相肽合成用載體溶解於甲苯等有機溶劑中，添加例如經Fmoc保護之胺基酸醯胺或肽醯胺及酸觸媒、例如甲磺酸而進行縮合。如此，可製造作為於胺基酸醯胺或肽醯胺之醯胺基上結合有液相肽合成用載體之中間物之N-Fmoc-液相合成用載體結合肽。

作為另一原料之胺基經胺基保護基保護之胺基酸或肽(以下，簡稱為胺基保護胺基酸)意指胺基酸或肽之胺基由胺基保護基所保護，另一方面，羧基未被保護而為反應性之胺基酸或肽。於胺基酸或肽具有1個以上胺基之情形時，至少一個胺基由胺基保護基所保護即可。作為胺基保護基，可例舉Fmoc基、Boc基、Cbz基等，其中更佳為於鹼性條件下可脫保護之Fmoc基。再者，於胺基保護胺基酸具有羥基、胺基、胍基、羧基、硫醇基、吲哚基、咪唑基等富有反應性之官能基之情形時，亦可對該等官能基導入肽合成中所使用之一般之保護基，於反應結束後之任意時點，視需要去除保護基，藉此可獲得目標化合物。作為羥基之保護基，可例舉tBu基、Trt基、Bz(苯甲醯基)基、乙醯基、矽烷基等，作為胍基之保護基，可例舉Pbf基、Boc基、Pmc基、硝基等，作為羧基之保護基，可例舉tBu基、甲基、乙基、Bz基等，作為硫醇基之保護基，可例舉Trt基、Acm(乙醯胺甲基)基、tBu基、S-tBu(二硫代第三丁基)基、Dpm(二苯基甲基)基、MBom(4-甲氧基苄氧基甲基)基等，作為吲哚基之保護基，可例舉Boc基等，作為咪唑基之保護基，可例舉Boc基、Bom(苄氧基甲基)基、Bum(第三丁氧基甲基)基、Trt基、Ddm(4,4'-二甲氧基二苯基)基、MBom基等。

胺基保護胺基酸例如可藉由下述方式來製造，即，使欲利用胺基保護基來保護胺基之胺基酸或肽於例如THF/水等混合溶劑中與Fmoc-OSu等於鹼之存在下反應。

本發明之步驟a係使上述原料縮合之步驟，步驟a中所使用之反應溶劑係包含有機溶劑之溶劑。若利用本發明中所使用之上述液相肽合成用載體來保護胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺，則所獲得之液相肽合成用載體結合肽會溶解於有機溶劑中，因此可進行液相肽合成。作為此種有機溶劑，例如可例舉THF、DMF、環己烷、CPME、2-甲基THF、4-甲基四氫哌喃(4-甲基THP)、乙酸異丙酯、氯仿、二氯甲烷、N-甲基吡咯啶酮、二甲基乙醯胺(DMAc)、NFM(N-甲醯𠰌啉)，較佳為THF、DMF、CPME，2-甲基THF、4-甲基THP、N-甲基吡咯啶酮。進而，亦可為上述溶劑之2種以上之混合溶劑。

縮合反應可藉由於包含上述有機溶劑之溶劑中，將上述液相肽合成用載體、或液相肽合成用載體結合肽、上述胺基保護胺基酸、縮合劑及鹼進行混合而進行。

關於胺基保護胺基酸相對於液相肽合成用載體結合肽之使用量，相對於液相肽合成用載體結合肽，通常為1.01～4當量，較佳為1.03～3當量，更佳為1.05～2當量，進而較佳為1.1～1.5當量。於本發明之肽製造法中，繼步驟a之後，亦可利用其後要添加之淬滅劑捕獲未反應之胺基酸之活性酯而使其失活。因此，即便使用過量之胺基保護胺基酸，亦不會產生殘存之問題。

作為縮合劑，於本發明中亦可使用肽合成中一般所使用之縮合劑，例如可例舉：氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三𠯤-2-基)-4-甲基𠰌啉鎓(DMT-MM)、O-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU(6-Cl))、O-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TCTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙胺氧基)二甲胺基-𠰌啉基-碳鎓六氟磷酸鹽(COMU)、二異丙基碳二醯亞胺(DIPCI)、二環己基碳二醯亞胺(DCC)、及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽(EDCI・HCl)。較佳為DMT-MM、HBTU、HATU、或COMU。縮合劑之使用量相對於液相肽合成用載體結合肽，較佳為1～4當量，更佳為1～2當量，進而較佳為1.05～1.45當量。作為鹼，於本發明中亦可使用肽合成中一般所使用之鹼。例如可例舉：DIPEA(N,N-二異丙基乙胺)、DMAP、NMM(N-甲基𠰌啉)、TMP(2,4,6-三甲基吡啶)。較佳為DIPEA。

於縮合步驟中，為了促進反應並抑制外消旋化等副反應，較佳為添加活化劑。此處，所謂活化劑，係指於與縮合劑之共存下，將胺基酸導入至對應之活性酯、對稱酸無水物等，而使其容易形成肽鍵(醯胺鍵)之試劑。作為活化劑，可使用肽合成中一般所使用之活化劑。例如可例舉：1-羥基苯并三唑(HOBt)、1-羥基-1H-1,2,3-三唑羧酸乙酯(HOCt)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)、3-羥基-4-酮基苯并三𠯤(HOOBt)、N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu)、N-羥基鄰苯二甲醯亞胺(HOPht)、N-羥基-5-降𦯉烯-2,3-二羧醯亞胺(HONb)、五氟苯酚、氰基(羥基亞胺基)乙酸乙酯(Oxyma)等。較佳為HOBt、HOOBt、HOCt、HOAt、Oxyma。活化劑之使用量相對於液相肽合成用載體結合肽，較佳為1～4當量，更佳為1～2當量，進而較佳為1.05～1.45當量。

上述溶劑之使用量係溶解有液相肽合成用載體結合肽等之濃度較佳為成為0.1 mM～1 M之量，更佳為成為1 mM～0.5 M之量。反應溫度係於肽合成中一般所使用之溫度例如較佳為-20～40℃，更佳為0～30℃。縮合反應時間通常為1分鐘～30小時。

繼步驟a之後，亦可進行向縮合反應後之反應液中添加胺基酸活性酯淬滅劑(以下，有時稱為「淬滅劑」)之步驟。於步驟a中，作為原料之胺基保護胺基酸相對於液相肽合成用載體或液相肽合成用載體結合肽添加過量。因此，胺基保護胺基酸於縮合反應時被活化而產生之胺基酸活性酯於縮合反應後殘存剩餘部分。添加淬滅劑之步驟係將該剩餘之胺基酸活性酯進行淬滅之步驟。本步驟中之上述淬滅劑之添加量相對於理論上所殘存之活性胺基酸酯1當量，較佳為1～10當量，更佳為1～6當量，進而較佳為1～3當量。

上述之胺基酸活性酯之淬滅劑係分子內具有胺基之化合物，可使用日本專利第6703668號公報、日本專利第6713983號公報、國際公開第2021/132545號公報、Molecules 2021, 26, 3497-3505.等中所記載之化合物。作為該淬滅劑，可使用羥胺、醯胺硫酸、羥胺-O-磺酸、羥胺-O-膦酸、具有一級胺或二級胺之烷基胺、具有一級胺或二級胺之芳香族胺，亦可使用三級胺。進而，可利用液液分離將剩餘之淬滅劑去除至水層，因此較佳為水溶性，較佳為具有羥基、磺基、硫酸基、磷酸基等親水性取代基之胺。又，化合物中之胺基之數量可為1個(一元)，亦可為二元以上。作為可使用之烷基胺，例如可例舉碳數1～14之烷基胺，較佳為碳數2～10之烷基胺，更佳為碳數2～8之烷基胺，進而較佳為碳數3～4之烷基胺。又，作為本發明中可使用之芳香族胺，例如可列舉碳數1～14之芳香族胺，較佳為碳數6～10之芳香族胺。作為具體之胺，並不限定於此，例如可例舉：丙胺、甲基胺、己基胺、苄胺、苯胺、甲苯胺、2,4,6-三甲基苯胺、甲氧苯胺、乙氧苯胺、羥胺、1-甲基哌𠯤、4-胺基哌啶、二伸乙基三胺、三胺基乙胺、1-乙基哌𠯤、N,N-二甲基乙二胺、乙二胺、哌𠯤、2-(2-胺基乙氧基)乙醇(AEE)、牛磺酸、硫酸氫2-胺基乙酯(2-胺基乙基硫酸、AEHS)等。又，可例舉NMI(N-甲基咪唑)、DMAP、三甲基胺。其中，較佳為2-(2-胺基乙氧基)乙醇(AEE)、牛磺酸、硫酸氫2-胺基乙酯(2-胺基乙基硫酸、AEHS)。

步驟b係使反應液中之上述胺基保護胺基酸之胺基保護基脫離之步驟。該胺基保護基之脫離步驟根據胺基保護基之種類而不同。例如，於胺基保護基為Fmoc基之情形時，將反應液設為鹼性條件即可。於胺基保護基為Boc基之情形時，將反應液設為酸性條件即可。於胺基保護基為Cbz基之情形時，進行接觸還原即可。其中，進行單槽液相合成時，更佳為將胺基保護基設為Fmoc基。

對胺基保護基為Fmoc基之情形時之胺基保護基之脫離步驟進行說明。 Fmoc脫離步驟只要可使反應液為鹼性即可，可使用胺化合物，例如可使用1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一烯(DBU)、1,5-二氮雜雙環[4.3.0]-5-壬烯(DBN)、1,4-二氮雜雙環[2.2.2]-辛烷(DABCO)、三乙胺、三丁胺等三級胺類；1-甲基哌𠯤、4-胺基哌啶、二伸乙基三胺、三胺基乙胺、1-乙基哌𠯤、N,N-二甲基乙二胺、乙二胺、哌啶、哌𠯤等具有至少1個一級或二級之胺基之二元以上之水溶性胺類。較佳為DBU、DBN、哌啶、哌𠯤、1-甲基哌𠯤、4-胺基哌啶、二伸乙基三胺，更佳為DBU、哌啶、哌𠯤、1-甲基哌𠯤。步驟b中所添加之胺化合物之當量相對於體系中所存在之Fmoc基之量為1～30當量，較佳為4～20當量，更佳為4～10當量。

又，於步驟b中，較佳為除上述胺化合物以外，進行添加藉由脫Fmoc反應所產生之DBF(二苯并富烯)及DBF與胺之加成體(DBF-胺加成體)之捕捉劑(以下，有時稱為「捕捉劑」)之步驟。作為此處所使用之DBF及DBF-胺加成體之捕捉劑，可例舉巰基化合物。作為可使用之巰基化合物，只要為具有巰基且與DBF反應而成之化合物顯示水溶性者，則並無特別限定，例如可例舉具有碳數1～10之烷基之巰基化合物，且該巰基化合物具有選自羧酸、羧酸之鹼金屬鹽、磺酸、或磺酸之鹼金屬鹽中之1種以上之取代基，可例舉下述通式(4)或(5)所表示之化合物。

[化24]

(式中，L1及L2分別表示2價之有機基，M表示氫原子或鹼金屬)

通式(4)或(5)中之L1及L2分別表示2價之有機基。作為該2價之有機基，較佳為碳數1～10之2價之有機基，更佳為可具有巰基之碳數1～10之直鏈或支鏈之伸烷基、可具有巰基之碳數6～10之伸芳基、可具有巰基之碳數4～9之伸雜芳基。具體而言，可例舉：亞甲基、伸乙基、三亞甲基、伸丙基、巰基三亞甲基、巰基伸丙基、四亞甲基、伸丁基、五亞甲基、伸苯基、伸萘基、吲哚基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基等。 M表示氫原子或鹼金屬。具體而言，可例舉氫原子、鈉、鉀。具體而言，可例舉：3-巰基丙酸、硫代蘋果酸、半胱胺酸、巰基甲烷磺酸鈉、2-巰基乙磺酸鈉、2-巰基乙磺酸、3-巰基丙磺酸、3-巰基丙磺酸鈉、1,3-二巰基丙磺酸、2-巰基苯并咪唑-5-磺酸鈉等，較佳為3-巰基丙磺酸。

巰基化合物之添加量相對於Fmoc基之量，較佳為1～30當量，更佳為1～10當量，進而較佳為1～5當量。上述胺化合物與巰基化合物可同時添加，亦可按照先巰基化合物再胺化合物之順序添加。 Fmoc脫離步驟於-20～40℃之溫度下進行1分鐘～5小時即可。

步驟c係於反應液中添加水溶液後，進行分液，獲得含有結合於液相肽合成用載體之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與上述胺基保護基脫離之胺基酸或肽之縮合體之有機溶劑層之步驟。於向步驟b之反應液中添加水溶液後，將水層與有機溶劑層進行分液。於進行添加淬滅劑及捕捉劑之步驟之情形時，胺基保護基脫離之胺基酸或肽與活性酯淬滅劑之縮合體、及DBF-捕捉劑加成體包含於水層中。即，胺基保護基脫離之胺基酸或肽與活性酯淬滅劑之縮合體僅藉由進行步驟c之水溶液之添加，便可容易地被萃取至水層中。另一方面，有機溶劑層中包含結合於液相肽合成用載體之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與上述胺基保護基脫離之胺基酸或肽之縮合體。作為此處所使用之水溶液，可例舉水、或具有中性～鹼性附近之pH值之水溶液。具體而言，可例舉：水、氯化鈉水溶液、氯化鈣水溶液、氯化銫水溶液、氯化鉀水溶液、氯化鋰水溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸鉀水溶液、碳酸銫水溶液、磷酸氫二鈉水溶液、磷酸三鈉水溶液、碳酸氫鈉水溶液、碳酸氫鉀水溶液、磷酸氫二鉀水溶液、磷酸三鉀水溶液或該等水溶液與DMF、DMSO、NFM、NMP之混合溶劑等。

所獲得之加尼瑞克(ganirelix)可視需要轉化為乙酸鹽、甲酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、三氟乙酸鹽等有機酸鹽、鹽酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等無機酸鹽。

如此，根據本發明方法，僅單單添加水溶液進行分液，而不會引起胺基酸活性酯與作為產物之肽之分液不良。又，由於無需固液分離，故而可進行無需繁雜之分離操作之單槽合成。上述一系列步驟亦可使用微流(Micro-Flow)技術來實施。關於使用微流技術之肽合成技術，例如於Nature Communications 7, Article number: 13491 (2016)中有記載。 [實施例]

其次，舉出實施例更詳細地說明本發明，但本發明並不限定於該等實施例。

參考例 Fmoc-NH(D2-STag)之合成

[化25]

(O=(D2-STag)、OH(D2-STag)、Fmoc-NH(D2-STag)表示式中之結構)

參考例(a) 將O=(D2-STag)(Sekisui Medical股份有限公司製造)41.4 g(47.7 mmol)溶解於甲苯 228 mL、甲醇 36.0 mL之混合溶液中，加入硼氫化鈉2.16 g(57.2 mmol)，於室溫下攪拌3小時。利用水83.0 mL將反應溶液進行3次分液洗淨。向所獲得之有機層中添加無水硫酸鈉20.0 g，充分攪拌後進行過濾，獲得包含OH(D2-STag)之甲苯溶液。

參考例(b) 向前步驟中所獲得之甲苯溶液中添加胺基甲酸9-茀基甲酯13.7 g(57.2 mmol)、草酸・二水合物1.80 g(14.3 mmol)，於80℃下攪拌3小時。將反應溶液冷卻至室溫，添加甲醇：水＝9：1 414 mL、庚烷414 mL，進行分液。將所獲得之有機層利用5%碳酸氫鈉水溶液(5%Na ₂CO ₃aq.)207 mL進行1次分液洗淨，利用甲醇：水＝9：1 414 mL進行3次分液洗淨。將所獲得之有機層於減壓下進行濃縮，向殘渣中加入四氫呋喃83.0 mL，於減壓下濃縮。將殘渣溶解於四氫呋喃62 mL中，並滴加至甲醇830 mL中。濾取所析出之固體，於減壓下進行乾燥，獲得Fmoc-NH(D2-STag)45.5 g。 ESIMS(Electrospray Ionization Mass Spectrometry，電灑游離質譜) (m/z) 1107.9 (M+NH ₄) ^＋

實施例1 使用Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH及Fmoc-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH之加尼瑞克(ganirelix)之合成(使用2-(2-胺基乙氧基)乙醇(AEE)作為Fmoc-胺基-活性酯體之淬滅劑) 再者，以下未表述為D體之胺基酸表示L體。

[化26]

反應式中，(NH ₂(D2-STag)、H-D-Ala-NH(D2-STag)、H-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)、Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH、H-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)、H-D-Nal(2)-D-pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)、Ac-D-Nal(2)-D-pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)、Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-hArg(Et) ₂-Leu-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH ₂・nTFA)表示反應式中之結構。再者，Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH表示反應式中之3種異構物之混合物。因此，推測H-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)亦為3種異構物之混合物。進而，關於H-D-Nal(2)-D-pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)、Ac-D-Nal(2)-D-pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)，推測hArg(Et) ₂(Boc) ₂及D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂分別為反應式中之3種異構物，且存在成為合計9種異構物之混合物之可能性)。又，R'之結構中之＊表示鍵結點。

實施例(1-a) 將Fmoc-NH(D2-STag) 2.00 g(1.83 mmol)溶解於環戊基甲基醚(CPME)29.3 mL中，追加溶解於DMF 7.33 mL、二甲基亞碸(DMSO)2.55 mL中之3-巰基-1-丙磺酸鈉(MPS)0.542 g(3.04 mmol)，進而以固體狀態追加MPS 0.111 g(0.62 mmol)，加入2,3,4,6,7,8,9,10-八氫嘧啶并[1,2-a]氮呯(DBU)0.548 mL(3.67 mmol)，於室溫下攪拌1小時35分鐘。冷卻至8℃，添加N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)0.319 mL(1.83 mmol)、1 N硫酸3.67 mL(3.67 mmol)、水24.2 mL、CPME 1.00 mL，進行分液。向所獲得之有機層中加入DMF 4.55 mL、50%磷酸氫二鉀水溶液(50%K ₂HPO ₄aq.) 6.07 mL，進行分液洗淨，獲得包含NH ₂(D2-STag)之混合液。

實施例(1-b) 向所獲得之混合液中加入CPME 1.00 mL、DMF 8.30 mL、Fmoc-D-Ala-OH・H ₂O 0.725 g(2.20 mmol)、DIPEA 1.28 mL(7.33 mmol)、COMU 0.942 g(2.20 mmol)，於室溫下攪拌45分鐘。加入2-(2-胺基乙氧基)乙醇(AEE)44.0 μL(0.444 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 2.35 mL中之MPS 0.501 g(2.81 mmol)、固體之MPS 0.284 g(1.59 mmol)，冷卻至10℃，加入DBU 1.43 mL(9.54 mmol)，攪拌1小時20分鐘。添加1 N硫酸11.5 mL(11.5 mmol)、水20.2 mL、CPME 0.796 mL，進行分液。向所獲得之有機層中加入DMF 5.10 mL、50%K ₂HPO ₄aq. 6.80 mL，進行分液洗淨，獲得包含H-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。

實施例(1-c) 向所獲得之混合液中加入CPME 2.20 mL、DMF 8.30 mL、Fmoc-Pro-OH・H ₂O 0.782 g(2.20 mmol)、DIPEA 1.28 mL(7.33 mmol)、COMU 0.942 g(2.20 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。加入AEE 44.0 μL(0.444 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 2.35 mL中之MPS 0.501 g(2.81 mmol)、固體之MPS 0.284 g(1.59 mmol)，冷卻至8℃，加入DBU 1.43 mL(9.54 mmol)，攪拌1小時20分鐘。添加1 N硫酸11.5 mL(11.5 mmol)、水20.2 mL、CPME 0.861 mL，進行分液。向所獲得之有機層中加入DMF 5.11 mL、50%K ₂HPO ₄aq. 6.81 mL，進行分液洗淨，獲得包含H-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。

實施例(1-d) 向所獲得之混合液中加入CPME 2.70 mL、DMF 8.30 mL、Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH(反應式中所示之3種異構物之混合物) 1.47 g(2.20 mmol)、DIPEA 1.28 mL(7.33 mmol)、COMU 0.942 g(2.20 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。加入AEE 44.0 μL(0.444 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 2.35 mL中之MPS 0.501 g(2.81 mmol)、固體之MPS 0.284 g(1.59 mmol)，冷卻至8℃，加入DBU 1.43 mL(9.54 mmol)，攪拌1小時50分鐘。添加1 N硫酸11.5 mL(11.5 mmol)、水20.3 mL、CPME 0.950 mL，進行分液※1。向所獲得之有機層中加入DMF 5.12 mL、50%K ₂HPO ₄aq. 6.83 mL，進行分液洗淨，獲得包含H-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。 ESIMS (m/z) 1463.7 (M+H) ^＋(3種異構物之混合物) ※1 有機層中之目標物之HPLC(high performance liquid chromatography，高效液相層析法)純度：76.2% HPLC分析條件(1) 管柱：YMC-Pack Pro C18，S-5 μm，12 nm， 250 mm×4.6 mmI.D. 流動相A：500 mM過氯酸鈉aq. 流動相B：THF 流速：1.0 mL/min 管柱溫度：45℃ 檢測波長：280 nm 梯度條件：75%B(0min)→90%B(10min)→90%B(20min)→75%B(21min)→75%B(33min)

實施例(1-e) 與實施例(1-d)同樣地，使用Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH _、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal(3)-OH、Fmoc-D-pClPhe-OH、Fmoc-D-Nal(2)-OH將肽延長，獲得包含H-D-Nal(2)-D-pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。再者，Fmoc-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH(3種異構物之混合物)表示下述結構，＊表示鍵結點。

[化27]

實施例(1-f) 向所獲得之混合液中加入CPME 0.800 mL、DMF 8.95 mL、DIPEA 1.28 mL(7.33 mmol)、乙酸0.126 mL(2.20 mmol)、COMU 0.942 g(2.20 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。將反應液於減壓下進行濃縮，將所獲得之殘渣滴加至乙腈(MeCN)106 mL中。濾取固體，利用MeCN 50.0 mL將濾物進行洗淨。向濾物中加入MeCN 106 mL，攪拌後，濾取固體，利用MeCN 50.0 mL將濾物進行洗淨。將所獲得之固體於減壓下進行乾燥，獲得Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag) 3.98 g。 ESIMS (m/z) 1467.3 (M+2H) ² ^＋

實施例(1-g) 將三氟乙酸13.9 mL(181 mmol)、三異丙基矽烷0.365 mL(1.78 mmol)、水0.365 mL(20.3 mmol)之混合溶液冷卻至5℃，添加Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)1.50 g。5分鐘後，升溫至室溫，攪拌6小時55分鐘。將反應液滴加至冷卻至10℃之甲基第三丁基醚(MTBE)中，於5℃、4400 rpm之條件下進行1分鐘離心分離，藉由傾析去除上清液，獲得沈澱物。進而進行3次利用該MTBE之洗淨、離心分離、傾析，獲得沈澱物。將沈澱物於減壓下進行乾燥，獲得Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-hArg(Et) ₂-Leu-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH ₂・nTFA 0.929 g。 ESIMS (m/z) 785.5 (M+2H) ² ^＋HPLC純度：94.3% HPLC分析條件(2) 管柱：Inertsustain，S-3 μm，250 mm×2.1 mmI.D. 流動相A：0.1%TFA aq. 流動相B：含有0.1%TFA之MeCN 流速：0.22 mL/min 管柱溫度：33℃ 檢測波長：225 nm 梯度條件：33%B(0 min)→47%B(40 min)→95%B(60 min)→95%B(65 min)→33%B(68 min)→33%B(85 min)

比較例使用Fmoc-hArg(Et) ₂-OH・HCl之H-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之合成(Fmoc-胺基-活性酯體之淬滅劑：AEE)

[化28]

(Fmoc-hArg(Et) ₂-OH・HCl、H-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)表示反應式中之結構)

比較例(a)、(b)、(c) 以與實施例1-a、1-b、1-c相同之方式，由Fmoc-NH(D2-STag) 2.00 g(1.83 mmol)獲得包含H-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。

比較例(d) 向所獲得之混合液中加入CPME 2.60 mL、DMF 8.30 mL、Fmoc-hArg(Et) ₂-OH・HCl 1.11 g(2.20 mmol)、DIPEA 1.28 mL(7.33 mmol)、COMU 0.942 g(2.20 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。加入AEE 44.0 μL(0.444 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 2.35 mL中之MPS 0.501 g(2.81 mmol)、固體之MPS 0.284 g(1.59 mmol)，冷卻至8℃，加入DBU 1.43 mL(9.54 mmol)，攪拌1小時50分鐘。添加1 N硫酸11.5 mL(11.5 mmol)、水20.3 mL、CPME 0.950 mL，嘗試分液，但成為乳液※2，無法進行分液操作。 ESIMS (m/z) 1263.5 (M+H) ^＋※2 乳液中之目標物之HPLC純度：10.4% HPLC分析條件：與實施例(1-d)之(1)相同。

實施例2 使用Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH及Fmoc-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH之Ganirelix之合成(Fmoc-胺基-活性酯體之淬滅劑：硫酸氫2-胺基乙酯(AEHS))

[化29]

實施例(2-a) 利用與實施例(1-a)相同之方法，由Fmoc-NH(D2-STag) 0.800 g(0.733 mmol)獲得包含NH ₂(D2-STag)之混合液。

實施例(2-b) 向所獲得之混合液中加入CPME 0.600 mL、DMF 3.30 mL、Fmoc-D-Ala-OH・H ₂O 0.290 g(0.880 mmol)、DIPEA 0.511 mL(2.93 mmol)、COMU 0.377 g(0.880 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。加入溶解於DMSO 0.704 mL中之2-AEHS 24.8 mg(0.176 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 0.237 mL中之MPS 50.4 mg(0.283 mmol)、固體之MPS 0.263 g(1.48 mmol)，冷卻至8℃，加入DBU 0.597 mL(3.99 mmol)，攪拌1小時50分鐘。添加1 N硫酸4.60 mL(4.60 mmol)、10%碳酸鈉水溶液(10%Na ₂CO ₃aq.)8.30 mL、CPME 0.319 mL，進行分液。向所獲得之有機層中加入DMF 2.04 mL、50%K ₂HPO ₄aq. 2.72 mL，進行分液洗淨，獲得包含H-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。

實施例(2-c) 向所獲得之混合液中加入CPME 0.800 mL、DMF 3.30 mL、Fmoc-Pro-OH・H ₂O 0.313 g(0.880 mmol)、DIPEA 0.511 mL(2.93 mmol)、COMU 0.377 g(0.880 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。加入溶解於DMSO 0.704 mL中之2-AEHS 24.8 mg(0.176 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 0.237 mL中之MPS 50.4 mg(0.283 mmol)、固體之MPS 0.263 g(1.48 mmol)，冷卻至6℃，加入DBU 0.597 mL(3.99 mmol)，攪拌1小時20分鐘。添加1 N硫酸4.60 mL(4.60 mmol)、10%Na ₂CO ₃aq. 8.30 mL、CPME 0.345 mL，進行分液。向所獲得之有機層中加入DMF 2.04 mL、50%K ₂HPO ₄aq. 2.72 mL，進行分液洗淨，獲得包含H-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。

實施例(2-d) 向所獲得之混合液中加入CPME 0.600 mL、DMF 3.30 mL、Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH(圖中所示之3種異構物之混合物)0.587 g(0.880 mmol)、DIPEA 0.511 mL(2.93 mmol)、COMU 0.377 g(0.880 mmol)，於室溫下攪拌50分鐘。加入溶解於DMSO 0.704 mL中之2-AEHS 24.8 mg(0.176 mmol)，於室溫下攪拌15分鐘。加入溶解於DMSO 0.237 mL中之MPS 50.4 mg(0.283 mmol)、固體之MPS 0.263 g(1.48 mmol)，冷卻至7℃，加入DBU 0.597 mL(3.99 mmol)，攪拌1小時50分鐘。添加1 N硫酸4.60 mL(4.60 mmol)、10%Na ₂CO ₃aq. 8.40 mL、CPME 0.380 mL，進行分液※3。向所獲得之有機層中加入DMF 2.05 mL、50%K ₂HPO ₄aq. 2.73 mL，進行分液洗淨，獲得包含H-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。 ESIMS (m/z) 1463.6 (M+H) ^＋(3種異構物之混合物) ※3 HPLC純度：78.0% HPLC分析條件：與實施例(1-d)之(1)相同。

實施例(2-e) 與實施例(2-d)同樣地，使用Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal(3)-OH、Fmoc-D- pClPhe-OH、Fmoc-D-Nal(2)-OH將肽延長，獲得包含H-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之混合液。

實施例(2-f) 利用與實施例(1-f)相同之方法，獲得Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag) 1.36 g。 ESIMS (m/z) 1467.3 (M+2H) ² ^＋

實施例(2-g) 利用與實施例(1-g)相同之方法，由Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Leu-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag) 0.700 g獲得Ac-D-Nal(2)-D- pClPhe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-hArg(Et) ₂-Leu-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH ₂・nTFA 0.455 g。 ESIMS (m/z) 785.5 (M+2H) ² ^＋HPLC純度：94.4% HPLC分析條件：與實施例(1-g)之(2)相同。

將實施例(1-d)之※1及比較例(d)之※2之分液之情況示於圖1及圖2。於圖1所示之比較例(d)中，有機層與水層之界面清晰，液液分離良好。另一方面，於圖2所示之比較例(d)中，分液漏斗內整體成為乳液，即便於室溫下靜置25分鐘，亦無法清除乳液，無法分離為有機層與水層。其次，將實施例1之※1、實施例2之※3、及參考例1之※2之HPLC分析結果示於表1。使用經本發明之Boc基保護之Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH之實施例1、2中，分液性良好，能夠以76.2%、78.0%之高純度合成H-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)。實施例1、2中，繼續實施肽延長反應，能夠以94.3%、94.4%之高純度獲得作為目標物之加尼瑞克(ganirelix)之粗產物。另一方面，使用進行了質子保護而未經Boc基保護之Fmoc-hArg(Et) ₂-OH・HCl之參考例1中，合成H-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)時無法進行分液。為了繼續合成加尼瑞克(ganirelix)，必須利用其他方法而非液液分離將H-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)進行純化，於工業上不利。再者，乳液中之H-hArg(Et) ₂-Pro-D-Ala-NH(D2-STag)之純度為顯著較低之10.4%。

[表1] 實施例1(步驟※1)、實施例2(步驟※3)、及參考例1(步驟※2)之分液性之比較結果

	第3殘基延長時之分液洗淨第1次之目標物之HPLC純度	分液性	加尼瑞克(ganirelix)之粗產物之HPLC純度
實施例1 ※1	76.2% (有機層中)	良好	94.3%
實施例2 ※3	78.0% (有機層中)	良好	94.4%
比較例 ※2	10.4% (乳液中)	無法分液	無法合成

根據以上結果，可知藉由使用進行了本發明之Boc保護之Fmoc-hArg(Et) ₂(Boc) ₂-OH代替進行了作為先前技術之質子保護之Fmoc-hArg(Et) ₂-OH・HCl，分液性得到改善，可利用工業上有利之方法獲得加尼瑞克(ganirelix)。

圖1係於實施例(1-d)※1之步驟中之液液分離時，振盪分液漏斗後，於室溫下靜置25分鐘後之液面之照片。圖2係於比較例(d)※2之步驟中之液液分離時，振盪分液漏斗後，於室溫下靜置25分鐘後之液面之照片。

Claims

一種加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，其係利用液相肽合成法之加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之製造方法，且作為自C末端起第3個及第5個二乙基高精胺酸殘基之縮合反應原料，使用下述式(1)～(3)所表示之群中之1種以上之化合物、及液相肽合成用載體， [化1] (式中，R ¹及R ²表示Boc、Cbz、Troc、Alloc、Trt、Mmt、Teoc、Phth、SES、或ivDde，R ³表示胺基保護基)。
如請求項1之製造方法，其包括以下步驟a～c： a.於包含有機溶劑之溶劑中，使與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與胺基經保護之胺基酸或肽縮合之步驟； b.將反應液中之上述胺基經保護之化合物之胺基保護基去除之步驟； c.向反應液中添加水溶液後，進行分液，獲得含有與液相肽合成用載體結合之胺基酸、肽、胺基酸醯胺或肽醯胺、與上述胺基保護基脫離之胺基酸或肽之縮合體之有機溶劑層之步驟。
如請求項1之製造方法，其中上述加尼瑞克(ganirelix)或其鹽之胺基酸序列自C末端側起依序為D-AlaNH ₂、Pro、hArg(Et) ₂、Leu、D-hArg(Et) ₂、Tyr、Ser、D-3-吡啶基Ala、D-p-氯Phe、D-萘基Ala。
如請求項1之製造方法，其中上述R ¹及R ²為Boc，上述R ³為Fmoc或Cbz。
如請求項1之製造方法，其中上述R ¹及R ²為Boc，上述R ³為Fmoc。
如請求項1之製造方法，其中繼步驟a之後，包括向縮合反應後之反應液中添加胺基酸活性酯之淬滅劑之步驟。
如請求項6之製造方法，其中上述胺基酸活性酯之淬滅劑為水溶性胺。
如請求項7之製造方法，其中上述水溶性胺為羥胺、醯胺硫酸、羥胺-O-磺酸、羥胺-O-膦酸、或具有選自烷基、烯基、環烷基、環烯基、芳基、芳烷基及雜環式基中之1種或2種以上之一級、二級或三級胺類，且該胺類亦可具有選自羥基、醚鍵、烷氧基、磺醯基、磺酸基、硫酸基、及磷酸基中之1種或2種以上之取代基。
如請求項2之製造方法，其中於R ³為Fmoc之情形時，繼步驟b之後，包括添加二苯并富烯之捕捉劑之步驟。
如請求項9之製造方法，其中上述二苯并富烯之捕捉劑為具有碳數1～10之烷基之巰基化合物，且該巰基化合物具有選自羧酸、羧酸之鹼金屬鹽、磺酸、或磺酸之鹼金屬鹽中之1種以上之取代基。
如請求項1至10中任一項之製造方法，其中上述液相肽合成用載體為下述式(I)所表示之化合物， [化2] [式中，環A表示可包含雜原子且可為多環性之C4～20之芳香環； R ¹¹為氫原子，或於環A為苯環且Rb為下述式(b)所表示之基之情形時，與R ¹³一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環； p個X ¹分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁵-(R ¹⁵表示氫原子、烷基或芳烷基)； p個R ¹²分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基； [化3] 其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； p表示1～4之整數；環A除p個X ¹R ¹²以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基； Ra表示氫原子、或可經鹵素原子取代之芳香族環； Rb表示氫原子、可經鹵素原子取代之芳香環、或式(b)所表示之基； [化4] (式中，＊表示鍵結位置； q表示0～4之整數； q個X ²分別獨立地表示單鍵、-O-、-S-、-C(=O)O-、-C(=O)NH-、-NHC(=O)-、或-NR ¹⁸-(R ¹⁸表示氫原子、烷基或芳烷基)； q個R ¹⁴分別獨立地表示脂肪族烴基、被脂肪族烴基經由氧原子取代之脂肪族烴基、或作為式(a)之任一者之有機基； [化5] 其中，R ¹⁶表示碳數6～16之直鏈或支鏈之伸烷基，X ³表示氧原子或-C(=O)NR ¹⁷-(R ¹⁷表示氫原子或碳數1～4之烷基)，A表示矽烷基、或鍵結有矽烷氧基之烷基之任一者； R ¹³表示氫原子，或與R ¹¹一起表示單鍵而與環A及環B一同形成茀環，或者亦可經由氧原子與環A及環B一同形成𠮿　環；環B除q個X ²R ¹⁴以外，亦可進而具有選自由鹵素原子、可經鹵素原子取代之C1-6烷基、及可經鹵素原子取代之C1-6烷氧基所組成之群中之取代基) Y表示羥基、硫醇基、NHR ²⁰(R ²⁰表示氫原子、烷基或芳烷基)或鹵素原子]。