TW202325726A - 抗醣-muc4抗體及其用途 - Google Patents

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艾德溫 唐
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Abstract

本文涉及特異性結合癌症特異性醣基化MUC4變體的抗醣-MUC4抗體及其抗原結合片段、相關的融合蛋白和抗體藥物複合體，以及編碼此類生物分子的核酸。本文進一步涉及抗體、抗原結合片段、融合蛋白、抗體藥物複合體和核酸在癌症治療上的用途。

Description

抗醣-MUC4抗體及其用途
相關申請的交叉引用
本申請案主張2021年8月5日提交的美國臨時專利申請號63/229,839、2021年9月8日提交的美國臨時專利申請號63/241,837、2021年10月22日提交的美國臨時專利申請號63/270,642以及2022年8月4日提交的PCT申請號PCT/US22/39390的優先權，其全部內容透過引用併入本文。本文本文
MUC4是一種高度O-醣基化的異二聚體膜黏蛋白，其含有三個125個胺基酸長的重複序列和大量的16個胺基酸長的多態黏蛋白重複序列 (Carraway等人於2010年發表在「Future Oncol」期刊，第5卷，第10期，第1631-1640頁)，可形成多個O-連接醣基化的潛在位點。發生黏蛋白型O-連接醣基化的起始步驟包括將N-乙醯半乳醣胺 (GalNAc) 添加到存在於黏蛋白骨架中的絲胺酸或蘇胺酸殘基，以形成Tn表位，這一步驟是由多肽GalNAc-轉移酶 (GalNAc-Ts) 大家族所催化。在健康細胞中，Tn結構隨後擴展形成更複雜的結構，稱作為Core 1、2、3或4。綜述於Hanson and Hollingsworth, 2016, Biomolecules 6(3):34。
在許多種的腫瘤細胞中，MUC4的表現及其醣基化均失調。MUC4蛋白表現升高在結腸腺癌樣本中十分常見，且MUC4是侵襲性胰臟癌的推定標誌物。因此，MUC4有望作為治療人類癌症的標的，例如用於免疫療法，像是嵌合抗原受體 (CAR)，但由於MUC4在健康組織中會顯著表現，故這種策略受到了阻礙。
腫瘤中的醣基化途徑處於失調狀態，且許多腫瘤表現出異常醣基化的MUC4。在大多數的人類癌症中可觀察到截短的基於Core 1結構的表現，例如T、Tn或唾液酸-Tn (STn)，但其通常不存在於健康組織中。因此，與健康組織相比，透過鑑定腫瘤細胞中過度表現的MUC4表位，為標靶癌症治療提供了一種具吸引力的方法。因此，仍有必要去鑑定與健康組織相比在癌細胞中獨特或過度表現的醣-MUC4表位，以及可高親和力靶向此類醣-MUC4表位的新治療方式，例如抗體和CAR。
透過提供基於對醣基化MUC4具有選擇性的抗體和抗原結合片段的治療劑和診斷劑，本文對於醣肽變體具有腫瘤特異性。該抗體和抗原結合片段可有利地與MUC4骨架及其癌症特異性O-連接聚醣相結合，但不會與健康組織上的MUC4相結合。
因此，本文提供了可與癌症特異性MUC4醣基化變體相結合的抗醣-MUC4抗體及其抗原結合片段。本文進一步提供了含有抗醣-MUC4抗體與抗原結合片段的融合蛋白和抗體藥物複合體，以及編碼抗醣-MUC4抗體、抗原結合片段和融合蛋白的核酸。
本文進一步提供了使用抗醣-MUC4抗體、抗原結合片段、融合蛋白、抗體藥物複合體和核酸來治療癌症的方法。
在某些方面，本文提供了可與癌症特異性MUC4醣基化變體和第二表位相結合的雙特異性與其他多特異性抗醣-MUC4抗體以及抗原結合片段。該第二表位可以是位在MUC4本身上，或位在與MUC4共同表現在癌細胞上的另一蛋白質上，或位在呈遞於不同細胞 (例如活化的T細胞) 上的另一蛋白質上。此外，還公開了編碼此類抗體的核酸，包括: 含有經密碼子優化的編碼區的核酸以及含有未經密碼子優化以便在特定宿主細胞中表現的編碼區的核酸。
抗醣-MUC4抗體和結合片段可以是含有融合伴侶 (fusion partner) 的融合蛋白形式。融合伴侶可用於提供第二功能，例如T細胞訊號蛋白之訊號結構域的訊號功能、活化T細胞的肽調節劑或標記系統的酶組成分子。例示性的T細胞訊號蛋白包括4-1BB、CD28、CD2和融合肽，例如: CD28-CD3-zeta、4-1BB-CD3-zeta、CD2-CD3-zeta、CD28-CD2-CD3-zeta和4-1BB-CD2-CD3-zeta。4-1BB，又稱為CD137，其是T細胞的共同刺激受體；CD2是T細胞和NK細胞的共同刺激受體；CD3-zeta是T細胞抗原受體的訊息傳導組成分子。能夠提供第二功能的部分可以是T細胞活化的調節劑，例如 IL-15、IL-15Rα或IL-15/IL-15Rα融合體，或可以是第一型MHC鏈相關 (MIC) 蛋白結構域，其可用於製備MicAbody，或可以編碼用於監測體內或體外結合程度和/或位置之標記系統的標記或酶組分子。在本文的一些實施方案中，編碼這些置於T細胞，例如自體T細胞，環境中之預防性和治療性活性生物分子的構建體，其提供了一可用於募集經過繼性輸入的T細胞，進而預防或治療多種癌症的強大平台。
在某些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含抗醣-MUC4抗體2D5.2F6.2C11(本文有時稱之為「2D5」)、5B8.2A11.2C7 (本文有時稱之為「5B8」)、15F3.2D11.1E6 (本文有時稱之為「15F3」)、或其經人源化對應物的重鏈和/或輕鏈CDR序列 (由Kabat、Chothia、IMGT或其組合重疊區所定義)。在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含抗醣-MUC4抗體2D5、5B8、15F3或其經人源化對應物的重鏈和/或輕鏈可變序列 (或由核苷酸序列所編碼)。抗醣-MUC4抗體2D5、5B8以及13F3的CDR和可變序列 (以及它們的編碼序列) 分別列於表1A至1C中。為清楚起見，當本文中使用術語「抗醣-MUC4抗體」時，除非上下文另有說明，否則旨在包括單特異性和多特異性 (包括雙特異性) 抗醣-MUC4抗體、單特異性和多特異性抗體的抗原結合片段，以及含有該抗體與其抗原結合片段的融合蛋白和複合體。同樣地，當使用術語「抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段」時，除非上下文另有說明，否則亦旨在包括單特異性和多特異性 (包括雙特異性) 抗醣-MUC4抗體和其抗原結合片段，以及含有該抗體與抗原結合片段的融合蛋白和複合體。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含表1至3中所列的重鏈和/或輕鏈CDR序列 (或由核苷酸序列所編碼)。表1A和1B中列出的CDR序列包括根據IMGT (Lefranc et al., 2003, Dev Comparat Immunol 27:55-77)、Kabat (Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) 和Chothia (Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol 273:927-948) 用以定義CDR邊界方案所界定的CDR序列。表1D至1F中列出的CDR序列是分別根據IMGT、Kabat和Chothia定義，從表1A至1C中列出的CDR序列所衍生出的共通序列。表2A至2C中列出的CDR序列分別是表1A至1C所列之CDR序列的組合重疊區域，其中IMGT、Kabat和Chothia序列是以底線粗體字表示。表2D中列出的CDR序列是表1E至1F所列之共通CDR序列的組合重疊區域。表3A至3C中列出的CDR序列分別是表1A至1C所示之CDR序列的共同重疊區域。表3D中列出的CDR序列是表1E至1F所列之CDR序列的共同重疊區域。此種抗醣-MUC4抗體和抗原結合片段的框架序列可以是表1A至1C所列之VH和VL序列的天然鼠類框架序列，或者可以是非天然的 (例如: 經人源化的或人類的) 框架序列。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含表4A至4G中所列之人源化2D5的重鏈和/或輕鏈可變序列。
表1A 2D5.2F6.2C11序列
描述 序列 SEQ ID NO:
VH胺基酸序列 (預測成熟) QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS 1
VL胺基酸序列 (預測成熟) NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK 2
CDR-H1胺基酸序列 (IMGT定義) GYTFTDHA 3
CDR-H2胺基酸序列 (IMGT定義) ISPGNDDI 4
CDR-H3胺基酸序列 (IMGT定義) KRSMANSFDY 5
CDR-L1胺基酸序列 (IMGT定義) QSVLYSSDQKNY 6
CDR-L2胺基酸序列 (IMGT定義) WAS 7
CDR-L3胺基酸序列 (IMGT定義) HQYLSSYT 8
CDR-H1胺基酸序列 (Kabat定義) DHAIH 9
CDR-H2胺基酸序列 (Kabat定義) YISPGNDDIQYNAKFKG 10
CDR-H3胺基酸序列 (Kabat定義) SMANSFDY 11
CDR-L1胺基酸序列 (Kabat定義) KSSQSVLYSSDQKNYLA 12
CDR-L2胺基酸序列 (Kabat定義) WASTRES 13
CDR-L3胺基酸序列 (Kabat定義) HQYLSSYT 14
CDR-H1胺基酸序列 (Chothia定義) GYTFTDH 15
CDR-H2胺基酸序列 (Chothia定義) SPGNDD 16
CDR-H3胺基酸序列 (Chothia定義) SMANSFDY 17
CDR-L1胺基酸序列 (Chothia定義) KSSQSVLYSSDQKNYLA 18
CDR-L2胺基酸序列 (Chothia定義) WASTRES 19
CDR-L3胺基酸序列 (Chothia定義) HQYLSSYT 20
VH核苷酸序列 (不包括訊號序列) CAGGTTCAGTTGCAGCAGTCTGACGCTGAGTTGGTGAAACCTGGGGCTTCAGTGAGGATATCCTGCAAGGCTTATGGCTACACCTTCACTGACCATGCTATTCACTGGGTGAAACAGAAGCCTGAACAGGGCCTGGAATGGCTTGGATATATTTCTCCCGGAAATGATGATATTCAGTACAATGCGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAACAGCCTGACATCTGACGATTCTGCAGTGTATTTCTGTAAAAGATCTATGGCCAACTCCTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 21
VL核苷酸序列 (不包括訊號序列) AACATTATGCTGACACAGTCGCCATCATCTCTGGCTGTGTCTGCAGGAGAAAAGGTCACTATGAGCTGTAAGTCCAGTCAAAGTGTTTTATACAGTTCAGATCAGAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTACTGATCTATTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGTGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAGCAATGTACAAGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCATCAATACCTCTCCTCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGTTGGAAATAAAA 22
表1B 5B8.2A11.2C7序列
描述 序列 SEQ ID NO:
VH胺基酸序列 (預測成熟) QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS 23
VL胺基酸序列 (預測成熟) NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK 24
CDR-H1胺基酸序列 (IMGT定義) GYTFTDHA 25
CDR-H2胺基酸序列 (IMGT定義) FSPGNGDI 26
CDR-H3胺基酸序列 (IMGT定義) KRSMANYFDY 27
CDR-L1胺基酸序列 (IMGT定義) HSVLYSSNQKNY 28
CDR-L2胺基酸序列 (IMGT定義) WAS 29
CDR-L3胺基酸序列 (IMGT定義) HQYLSSYT 30
CDR-H1胺基酸序列 (Kabat定義) DHAIH 31
CDR-H2胺基酸序列 (Kabat定義) YFSPGNGDIKYNEKFKG 32
CDR-H3胺基酸序列 (Kabat定義) SMANYFDY 33
CDR-L1胺基酸序列 (Kabat定義) KSSHSVLYSSNQKNYLA 34
CDR-L2胺基酸序列 (Kabat定義) WASTKNS 35
CDR-L3胺基酸序列 (Kabat定義) HQYLSSYT 36
CDR-H1胺基酸序列 (Chothia定義) GYTFTDH 37
CDR-H2胺基酸序列 (Chothia定義) SPGNGD 38
CDR-H3胺基酸序列 (Chothia定義) SMANYFDY 39
CDR-L1胺基酸序列 (Chothia定義) KSSHSVLYSSNQKNYLA 40
CDR-L2胺基酸序列 (Chothia定義) WASTKNS 41
CDR-L3胺基酸序列 (Chothia定義) HQYLSSYT 42
VH核苷酸序列 (不包括訊號序列) CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGACGCTGAGTTGGTGAAACCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTGACCATGCTATTCACTGGGTGAAGCAGAAGCCTGAACAGGGCCTGGAATGGATTGGATATTTTTCTCCCGGAAATGGTGATATTAAATACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAGATCCTCCAGCACTGCCAACATGCACCTCAACAGCCTGACATCTGAGGATTCTGCAGTATATTTCTGTAAAAGATCTATGGCCAACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 43
VL核苷酸序列 (不包括訊號序列) AACATTATGATGACACAGTCGCCATCATCTCTGGTTGTGTCTGCAGGAGAAAAGGTCACTATGAGCTGTAAGTCCAGTCACAGTGTTTTATACAGTTCAAATCAGAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGTCTCCTAAACTACTGATCTACTGGGCATCCACTAAGAACTCTGGTGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAGCAGTGTACAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCATCAATACCTCTCCTCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 44
表1C 15F3.2D11.1E6序列
描述 序列 SEQ ID NO:
VH胺基酸序列 (預測成熟) QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS 45
VL胺基酸序列 (預測成熟) NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK 46
CDR-H1胺基酸序列 (IMGT定義) GYTFTDHA 47
CDR-H2胺基酸序列 (IMGT定義) ISPGNDDI 48
CDR-H3胺基酸序列 (IMGT定義) KRSMANSFDF 49
CDR-L1胺基酸序列 (IMGT定義) QSVLYSSDQKNY 50
CDR-L2胺基酸序列 (IMGT定義) WAS 51
CDR-L3胺基酸序列 (IMGT定義) HQYLSSYT 52
CDR-H1胺基酸序列 (Kabat定義) DHAIH 53
CDR-H2胺基酸序列 (Kabat定義) YISPGNDDIQYNAKFKG 54
CDR-H3胺基酸序列 (Kabat定義) SMANSFDF 55
CDR-L1胺基酸序列 (Kabat定義) KSSQSVLYSSDQKNYLA 56
CDR-L2胺基酸序列 (Kabat定義) WASTRES 57
CDR-L3胺基酸序列 (Kabat定義) HQYLSSYT 58
CDR-H1胺基酸序列 (Chothia定義) GYTFTDH 59
CDR-H2胺基酸序列 (Chothia定義) SPGNDD 60
CDR-H3胺基酸序列 (Chothia定義) SMANSFDF 61
CDR-L1胺基酸序列 (Chothia定義) KSSQSVLYSSDQKNYLA 62
CDR-L2胺基酸序列 (Chothia定義) WASTRES 63
CDR-L3胺基酸序列 (Chothia定義) HQYLSSYT 64
VH核苷酸序列 (不包括訊號序列) CAGGTTCAGTTGCAGCAATCTGACGCTGAGTTGGTGGAACCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTATGGCTACACCTTCACTGACCATGCTATTCACTGGGTGAAGCAGAAGCCTGAACAGGGCCTGGAATGGCTTGGATATATTTCTCCCGGAAATGATGATATTCAGTACAATGCGAAGTTCAAGGGCAGGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAACAGCCTGACATCTGACGATTCTGCAGTGTATTTCTGTAAAAGATCTATGGCCAACTCCTTTGACTTCTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 65
VL核苷酸序列 (不包括訊號序列) AACATTATGTTGACACAGTCGCCATCATCTCTGGCTGTGTCTGCAGGAGAAAAGGTCACTATGAGCTGTAAGTCCAGTCAAAGTGTTTTATACAGTTCAGATCAGAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTACTGATCTATTGGGCATCCACTAGGGAATCTGGTGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAGCAATGTACGAGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCATCAATACCTCTCCTCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 66
表1D CDR共通序列 – IMGT定義
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (IMGT定義) GYTFTDHA 67
CDR-H2胺基酸序列 (IMGT定義) X 1SPGNX 2DI 68
CDR-H3胺基酸序列 (IMGT定義) KRSMANX 5FDX 6 69
CDR-L1胺基酸序列 (IMGT定義) X 7SVLYSSX 8QKNY 70
CDR-L2胺基酸序列 (IMGT定義) WAS 71
CDR-L3胺基酸序列 (IMGT定義) HQYLSSYT 72
X 1= I或F；X 2= D或G；X 5= S或Y；X 6= Y或F；X 7= Q或H；X 8= D或N
表1E CDR共通序列 – Kabat定義
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (Kabat定義) DHAIH 73
CDR-H2胺基酸序列 (Kabat定義) YX 1SPGNX 2DIX 3YNX 4KFKG 74
CDR-H3胺基酸序列 (Kabat定義) SMANX 5FDX 6 75
CDR-L1胺基酸序列 (Kabat定義) KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA 76
CDR-L2胺基酸序列 (Kabat定義) WASTX 9X 10S 77
CDR-L3胺基酸序列 (Kabat定義) HQYLSSYT 78
X 1= I或F；X 2= D或G；X 3= Q或K；X 4= A或E；X 5= S或Y；X 6= Y或F；X 7= Q或H；X 8= D或N；X 9= R或K；X 10= E或N
表1F CDR共通序列 – Chothia定義
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (Chothia定義) GYTFTDH 79
CDR-H2胺基酸序列 (Chothia定義) SPGNX 2D 80
CDR-H3胺基酸序列 (Chothia定義) SMANX 5FDX 6 81
CDR-L1胺基酸序列 (Chothia定義) KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA 82
CDR-L2胺基酸序列 (Chothia定義) WASTX 9X 10S 83
CDR-L3胺基酸序列 (Chothia定義) HQYLSSYT 84
X 2= D或G；X 5= S或Y；X 6= Y或F；X 7= Q或H；X 8= D或N；X 9= R或K；X 10= E或N
表2A 2D5.2F6.2C11 IMGT、Kabat和Chothia CDR組合重疊序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (組合重疊) GYTFTDHA IH (IMGT) GYTFT DHAIH (Kabat) GYTFTDH AIH (Chothia) 85
CDR-H2胺基酸序列 (組合重疊) Y ISPGNDDI QYNAKFKG (IMGT) YISPGNDDIQYNAKFKG (Kabat) YI SPGNDD IQYNAKFKG (Chothia) 86
CDR-H3胺基酸序列 (組合重疊) KRSMANSFDY (IMGT) KR SMANSFDY (Kabat) KR SMANSFDY (Chothia) 87
CDR-L1胺基酸序列 (組合重疊) KSS QSVLYSSDQKNY LA (IMGT) KSSQSVLYSSDQKNYLA (Kabat) KSSQSVLYSSDQKNYLA (Chothia) 88
CDR-L2胺基酸序列 (組合重疊) WAS TRES (IMGT) WASTRES (Kabat) WASTRES (Chothia) 89
CDR-L3胺基酸序列 (組合重疊) HQYLSSYT (IMGT) HQYLSSYT (Kabat) HQYLSSYT (Chothia) 90
表2B 5B8.2A11.2C7 IMGT、Kabat和Chothia CDR組合重疊序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (組合重疊) GYTFTDHA IH (IMGT) GYTFT DHAIH (Kabat) GYTFTDH AIH (Chothia) 91
CDR-H2胺基酸序列 (組合重疊) Y FSPGNGDI KYNEKFKG (IMGT) YFSPGNGDIKYNEKFKG (Kabat) YF SPGNGD IKYNEKFKG (Chothia) 92
CDR-H3胺基酸序列 (組合重疊) KRSMANYFDY (IMGT) KR SMANYFDY (Kabat) KR SMANYFDY (Chothia) 93
CDR-L1胺基酸序列 (組合重疊) KSS HSVLYSSNQKNY LA (IMGT) KSSHSVLYSSNQKNYLA (Kabat) KSSHSVLYSSNQKNYLA (Chothia) 94
CDR-L2胺基酸序列 (組合重疊) WAS TKNS (IMGT) WASTKNS (Kabat) WASTKNS (Chothia) 95
CDR-L3胺基酸序列 (組合重疊) HQYLSSYT (IMGT) HQYLSSYT (Kabat) HQYLSSYT (Chothia) 96
表2C 15F3.2D11.1E6 IMGT、Kabat和Chothia CDR組合重疊序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (組合重疊) GYTFTDHA IH (IMGT) GYTFT DHAIH (Kabat) GYTFTDH AIH (Chothia) 97
CDR-H2胺基酸序列 (組合重疊) Y ISPGNDDI QYNAKFKG (IMGT) YISPGNDDIQYNAKFKG (Kabat) YI SPGNDD IQYNAKFKG (Chothia) 98
CDR-H3胺基酸序列 (組合重疊) KRSMANSFDF (IMGT) KR SMANSFDF (Kabat) KR SMANSFDF (Chothia) 99
CDR-L1胺基酸序列 (組合重疊) KSS QSVLYSSDQKNY LA (IMGT) KSSQSVLYSSDQKNYLA (Kabat) KSSQSVLYSSDQKNYLA (Chothia) 100
CDR-L2胺基酸序列 (組合重疊) WAS TRES (IMGT) WASTRES (Kabat) WASTRES (Chothia) 101
CDR-L3胺基酸序列 (組合重疊) HQYLSSYT (IMGT) HQYLSSYT (Kabat) HQYLSSYT (Chothia) 102
表2D 共通IMGT、Kabat和Chothia CDR組合重疊序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (組合重疊) GYTFTDHAIH 103
CDR-H2胺基酸序列 (組合重疊) YX 1SPGNX 2DIX 3YNX 4KFKG 104
CDR-H3胺基酸序列 (組合重疊) KRSMANX 5FDX 6 105
CDR-L1胺基酸序列 (組合重疊) KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA 106
CDR-L2胺基酸序列 (組合重疊) WASTX 9X 10S 107
CDR-L3胺基酸序列 (組合重疊) HQYLSSYT 108
X 1= I或F；X 2= D或G；X 3= Q或K；X 4= A或E；X 5= S或Y；X 6= Y或F；X 7= Q或H；X 8= D或N；X 9= R或K；X 10= E或N
表3A 2D5.2F6.2C11 IMGT、Kabat和Chothia CDR共同序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (共同序列) DH 109
CDR-H2胺基酸序列 (共同序列) SPGNDD 110
CDR-H3胺基酸序列 (共同序列) SMANSFDY 111
CDR-L1胺基酸序列 (共同序列) QSVLYSSDQKNY 112
CDR-L2胺基酸序列 (共同序列) WAS 113
CDR-L3胺基酸序列 (共同序列) HQYLSSYT 114
表3B 5B8.2A11.2C7 IMGT、Kabat和Chothia CDR共同序列
描述 序列 SEQ ID NO
CDR-H1胺基酸序列 (共同序列) DH 115
CDR-H2胺基酸序列 (共同序列) SPGNGD 116
CDR-H3胺基酸序列 (共同序列) SMANYFDY 117
CDR-L1胺基酸序列 (共同序列) HSVLYSSNQKNY 118
CDR-L2胺基酸序列 (共同序列) WAS 119
CDR-L3胺基酸序列 (共同序列) HQYLSSYT 120
表3C 15F3.2D11.1E6 IMGT、Kabat和Chothia CDR共同序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (共同序列) DH 121
CDR-H2胺基酸序列 (共同序列) SPGNDD 122
CDR-H3胺基酸序列 (共同序列) SMANSFDF 123
CDR-L1胺基酸序列 (共同序列) QSVLYSSDQKNY 124
CDR-L2胺基酸序列 (共同序列) WAS 125
CDR-L3胺基酸序列 (共同序列) HQYLSSYT 126
表3D 共通CDR共同序列
描述 序列 SEQ ID NO:
CDR-H1胺基酸序列 (共同序列) DH 127
CDR-H2胺基酸序列 (共同序列) SPGNX 2 128
CDR-H3胺基酸序列 (共同序列) SMANX 5FDX 6 129
CDR-L1胺基酸序列 (共同序列) X 7SVLYSSX 8QKNY 130
CDR-L2胺基酸序列 (共同序列) WAS 131
CDR-L3胺基酸序列 (共同序列) HQYLSSYT 132
X 2= D或G；X 5= S或Y；X 6= Y或F；X 7= Q或H；X 8= D或N
表4A 人源化2D5重鏈序列 – 生殖系4-1
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-HV7-4-1-A QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 133
2D5-HV7-4-1-B QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 134
2D5-HV7-4-1-C QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 135
表4B 人源化2D5重鏈序列 – 生殖系78
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-HV5-78-A EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 136
2D5-HV5-78-B EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 137
2D5-HV5-78-C EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 138
表4C 人源化2D5重鏈序列 – 生殖系69
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-HV1-69-A QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 139
2D5-HV1-69-B QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 140
2D5-HV1-69-C QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 141
表4D 人源化2D5重鏈序列 – 生殖系3
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-HV1-3-A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 142
2D5-HV1-3-B QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 143
2D5-HV1-3-C QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS 144
表4E 人源化2D5輕鏈序列 – 生殖系1
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-KV4-1-A DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 145
2D5-KV4-1-B DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 146
2D5-KV4-1-C DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 147
表4F 人源化2D5輕鏈序列 – 生殖系20
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-KV3-20-A EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 148
2D5-KV3-20-B EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 149
2D5-KV3-20-C EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 150
表4G 人源化2D5輕鏈序列 – 生殖系40
描述 序列 SEQ ID NO:
2D5-KV2-40-A DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 151
2D5-KV2-40-B DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 152
2D5-KV2-40-C DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK 153
在某些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含CDR，該CDR包含表1至3所列之任何CDR組合的胺基酸序列。在某些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包括: 含有胺基酸序列SEQ ID NO:127的CDR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:128的CDR-H2、含有胺基酸序列SEQ ID NO:129的CDR-H3、含有胺基酸序列SEQ ID NO:130的CDR-L1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:131的CDR-L2，以及含有胺基酸序列SEQ ID NO:132的CDR-L3。在一些實施方案中，CDR-H1包含SEQ ID NO:127的胺基酸序列。在一些實施方案中，CDR-H2包含SEQ ID NO:128的胺基酸序列。在一些實施方案中，CDR-H3包含SEQ ID NO:129的胺基酸序列。在一些實施方案中，CDR-L1包含SEQ ID NO:130的胺基酸序列。在一些實施方案中，CDR-L2包含SEQ ID NO:131的胺基酸序列。在一些實施方案中，CDR-L3包含SEQ ID NO:132的胺基酸序列。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:3至5的重鏈CDR以及SEQ ID NO:6至8的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:9至11的重鏈CDR以及SEQ ID NO:12至14的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:15至17的重鏈CDR以及SEQ ID NO:18至20的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:85至87的重鏈CDR以及SEQ ID NO:88至90的輕鏈CDR。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:25至27的重鏈CDR以及SEQ ID NO:28至30的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:31至33的重鏈CDR以及SEQ ID NO:32至34的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:35至37的重鏈CDR以及SEQ ID NO:38至40的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:91至93的重鏈CDR以及SEQ ID NO:94至96的輕鏈CDR。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:47至49的重鏈CDR以及SEQ ID NO:50至52的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:53至55的重鏈CDR以及SEQ ID NO:56至58的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:59至61的重鏈CDR以及SEQ ID NO:62至64的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:97至99的重鏈CDR以及SEQ ID NO:100至102的輕鏈CDR。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:67至69的重鏈CDR以及SEQ ID NO:70至72的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:73至75的重鏈CDR以及SEQ ID NO:76至78的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:79至81的重鏈CDR以及SEQ ID NO:82至84的輕鏈CDR。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含SEQ ID NO:103至105的重鏈CDR以及SEQ ID NO:106至108的輕鏈CDR。
在某些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包括: 含有SEQ ID NO:67、73、79、85、91、97、103、109、115、121或127胺基酸序列的CDR-H1；含有SEQ ID NO:68、74、80、86、92、98、104、110、116、122或128胺基酸序列的CDR-H2；含有SEQ ID NO:69、75、81、87、93、99、105、111、117、123或129胺基酸序列的CDR-H3；含有SEQ ID NO:70、76、82、88、94、100、106、112、118、124或130胺基酸序列的CDR-L1；含有SEQ ID NO:71、77、83、89、95、101、107、113、119、125或131胺基酸序列的CDR-L2；以及含有SEQ ID NO:72、78、84、90、96、102、108、114、120、126或132胺基酸序列的CDR-L3。
本文的抗體和抗原結合片段可以是鼠類的、嵌合的、人源化的或人類的。
在進一步方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與分別包含SEQ ID NO:1和2的重鏈和輕鏈可變區的抗體或抗原結合片段相競爭。在另一些方面，本文提供了具有重鏈和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈和輕鏈可變區分別與SEQ ID NO:1和2具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。
在另一些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與分別包含SEQ ID NO:23和24的重鏈和輕鏈可變區的抗體或抗原結合片段相競爭。在另一些方面，本文提供了具有重鏈和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈和輕鏈可變區分別與SEQ ID NO:23和24具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。
在另一些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與分別包含SEQ ID NO:45和46的重鏈和輕鏈可變區的抗體或抗原結合片段相競爭。在另一些方面，本文提供了具有重鏈和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈和輕鏈可變區分別與SEQ ID NO:45和46具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含SEQ ID NO:133至144中任一序列之重鏈可變區和SEQ ID NO:145至153中任一序列之輕鏈可變區的抗體或抗原結合片段相競爭。在其他方面，本文提供了具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，該重鏈可變區與SEQ ID NO:133至134中任一序列具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性，該輕鏈可變區與SEQ ID NO:145至153中任一序列具有至少95%、98%、99%或99.5%序列同一性。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段是單鏈可變片段 (scFv)。例示性的scFv包含重鏈可變片段的N端連接於輕鏈可變片段。在一些實施方案中，scFv重鏈可變片段和輕鏈可變片段是與4至15個胺基酸的連接子序列共價結合。scFv可以是雙特異性T細胞銜接抗體的形式或位在嵌合抗原受體 (CAR) 之內。
抗醣-MUC4抗體和抗原結合片段可以是單鏈可變片段多聚體、雙特異性單鏈可變片段以及雙特異性單鏈可變片段多聚體的形式。在一些實施方案中，該單鏈可變片段多聚體是選自二價單鏈可變片段、三抗體 (tribody) 或四抗體 (tetrabody)。在這些實施方案中的一些方案，雙特異性單鏈可變片段多聚體是雙特異性T細胞銜接抗體。
本文的其他方面涉及編碼本文的抗醣-MUC4抗體和抗體結合片段的核酸。在一些實施方案中，編碼抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的核酸部分是密碼子優化的，可用在人類細胞中表現。在某些方面，本文提供了具有由重鏈核苷酸序列和輕鏈核苷酸序列所編碼之重鏈和輕鏈可變區的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈核苷酸序列與SEQ ID NO:21、43或65具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性，所述輕鏈核苷酸序列與SEQ ID NO:22、44 或66具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。載體 (例如病毒載體，如慢病毒載體) 以及含有核酸的宿主細胞也在本文的範圍內。重鏈和輕鏈編碼序列可以存在於單一載體或分別的載體上。
本文的另一方面是一種醫藥組成物，包含根據本文的抗醣-MUC4抗體、抗原結合片段、核酸 (或核酸對)、載體 (或載體對) 或宿主細胞，以及生理上合適的緩衝液、佐劑或稀釋劑。
本文的又一方面是一種製備嵌合抗原受體的方法，包括在適合編碼區表現的條件下，培養含有根據本文的核酸或載體的細胞，並收集嵌合抗原受體。
本文的另一方面是一種檢測癌症的方法，包括使生物樣本 (例如細胞、組織樣本或細胞外囊泡) 與本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段互相接觸，並檢測抗體是否與生物樣本 (例如細胞、組織樣本或細胞外囊泡) 相結合。
本文的又一方面是一種根據本文用於檢測癌症的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段。
本文的又一方面是一種治療癌症的方法，包括將預防性或治療性有效量的根據本文之抗醣-MUC4抗體、抗原結合片段、核酸、載體、宿主細胞或醫藥組成物施用於有需要的個體。
本文的又一方面是一種根據本文用於治療癌症的抗醣-MUC4抗體、抗原結合片段、核酸、載體、宿主細胞或醫藥組成物。
本文的又一方面是一種根據本文利用抗醣-MUC4抗體、抗原結合片段、核酸、載體、宿主細胞或醫藥組成物於製備治療癌症藥物的用途。
本文還提供了醣-MUC4肽。該肽的長度可以是13至30個胺基酸，並且包含SEQ ID NO:154 (CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP) 的胺基酸4至16，在絲胺酸和蘇胺酸殘基上被GalNAc醣基化，以粗體底線表示。該醣-MUC4肽描述於第5.10節以及編號為653至665的實施方案中。如第5.10.1節以及編號為666和667的實施方案中所述，該肽可包含在組成物中。醣-MUC4肽可用於在動物中產生抗體和/或在動物中引發免疫反應的方法中。使用醣-MUC4肽的方法描述在第5.10.2節以及編號為668至671的實施方案中。
5.1 抗體
本文提供了可針對存在於腫瘤細胞上之醣型MUC4的新型抗體。這些以抗體2D5.2F6.2C11 (以下稱為「2D5」)、5B8.2A11.2C7 (以下稱為「5B8」) 和15F3.2D11.1E6 (以下稱為「15F3」) 為例。2D5、5B8和15F3是在篩選可與存在於MUC4 CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 中的醣基化肽相結合的抗體中所鑑定出來的，其中用粗體底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基被GalNAc醣基化，以便模擬存在於腫瘤細胞上的MUC4醣基化模式。
本文的抗醣-MUC4抗體，例如抗體2D5、5B8和15F3，可用作癌症診斷和治療的工具。
因此，在某些方面，本文提供了可與存在於腫瘤細胞上的醣型MUC4 (本文稱為「醣-MUC4」) 相結合，較佳地可與肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 相結合的抗體和抗原結合片段，以粗體底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基被GalNAc醣基化。
本文的抗醣-MUC4抗體可以是多株的、單株的、經基因工程的和/或以自然界其他方式修飾的，包括但不限於嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體、靈長類抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體、雙可變結構域抗體等。在各種實施方案中，抗體包含抗體穩定區的全部或部分。在一些實施方案中，穩定區是選自於以下的同種型: IgA (例如IgA 1或IgA 2)、IgD、IgE、IgG (例如IgG 1、IgG 2、IgG 3或IgG 4) 和IgM。在具體實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體包含IgG 1穩定區同種型。
如本文所用，術語「單株抗體」不限於透過融合瘤技術所產生的抗體。單株抗體是透過本領域可用或已知的任何方式，衍生自單個選殖株，包括任何真核、原核或噬菌體選殖株。可使用本領域已知的多種技術來製備可用於本文的單株抗體，包括使用融合瘤、重組和噬菌體展示技術或其組合。在本文的許多用途中，包括在人類體內使用抗醣-MUC4抗體，可以適當地使用嵌合的、靈長類化的、人源化的或人類抗體。
如本文所用，術語「嵌合」抗體是指具有衍生自於非人類免疫球蛋白例如大鼠或小鼠抗體的可變序列以及通常選自於人類免疫球蛋白模板的人類免疫球蛋白穩定區的抗體。產生嵌合抗體的方法是本領域已知的。可參見例如Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7；Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221；Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202；美國專利號5,807,715；4,816,567；4,816397和4,816397，透過引用將其全部併入本文。
「人源化」形式的非人類 (例如鼠類) 抗體是嵌合免疫球蛋白，其包含源自於非人類免疫球蛋白的最少序列。一般而言，人源化抗體將包含基本上全部的至少一個，通常是兩個可變結構域，其中全部或基本上全部的CDR區是對應於非人類免疫球蛋白的CDR區，以及全部或基本上全部的FR區是人類免疫球蛋白序列的FR區。人源化抗體還可以包含免疫球蛋白穩定區 (Fc) 的至少一部分，通常是人類免疫球蛋白共通序列的一部分。抗體人源化的方法是本領域已知的。可參見例如Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7；美國專利號5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；和6,180,370 Queen et al.；EP239400；PCT公開號WO 91/09967；美國專利號5,225,539；EP592106；EP519596；Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498；Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814；Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973；和美國專利號5,565,332；所有這些文件在此都透過引用而全部併入本文。
例示性的人源化序列描述於編號為5至112的實施方案中。用於人源化抗體及其抗原結合片段的可變區序列是列於表4A至4G中。
「人類抗體」包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列的抗體，以及包括從人類免疫球蛋白庫中或從經轉殖有一種或多種人類免疫球蛋白且不表現內源性免疫球蛋白的動物中所分離的抗體。人類抗體可以透過本領域已知的多種方法製備，包括使用源自於人類免疫球蛋白序列之抗體庫的噬菌體展示方法。可參見美國專利號4,444,887和4,716,111；PCT公開號WO 98/46645；WO 98/50433；WO 98/24893；WO 98/16654；WO 96/34096；WO 96/33735和WO 91/10741，每件專利都以全文引用的方式併入本文。也可以使用不能表現功能性內源性免疫球蛋白但可以表現人類免疫球蛋白基因的轉殖基因小鼠來生產人類抗體。可參見例如PCT公開號WO 98/24893；WO 92/01047；WO 96/34096；WO 96/33735；美國專利號5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；5,939,598和5,939,598，透過引用將其全部併入本文。可以使用被稱為「引導選擇 (guided selection)」的技術來生成可識別選定表位的完全人類抗體。在這種方法中，經選擇的非人類單株抗體，例如小鼠抗體，是用來引導選擇可識別相同表位的完全人類抗體 (參見Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903)。
「靈長類化抗體」包括猴子可變區和人類穩定區。產生靈長類化抗體的方法是本領域已知的。可參見例如美國專利號5,658,570；5,681,722和5,693,780；在此透過引用全部併入本文。
本文的抗醣-MUC4抗體包括全長 (完整的) 抗體分子以及能夠結合醣-MUC4的抗原結合片段。抗原結合片段的實例包括例如但不限於Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv片段、單鏈Fv片段以及單結構域片段。
Fab片段包含輕鏈的穩定結構域 (CL) 和重鏈的第一個穩定結構域 (CH1)。Fab'片段與Fab片段的不同之處在於: 在重鏈CH1結構域的羧基端添加了幾個殘基，包括來自於抗體鉸鏈區的一個或多個半胱胺酸。F(ab')片段是透過裂解位在F(ab') 2胃蛋白酶酶切產物之鉸鏈半胱胺酸處的雙硫鍵而產生的。抗體片段的其他化學偶聯是本領域普通技術人員已知的。Fab和F(ab') 1片段缺乏完整抗體的Fc片段，可以從動物循環中更快速地被清除，並且可能比完整抗體具有更少的非特異性組織結合 (參見例如Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316)。
「Fv」片段是包含完整標靶識別和結合位點的抗體最小片段。此區域是由一個重鏈和一個輕鏈可變結構域以緊密的非共價結合形成之二聚體 (V H-V L二聚體) 所組成。正是在這種組態中，每個可變結構域的三個CDR可相互作用以在V H-V L二聚體的表面上定義出一標靶結合位點。通常，六個CDR可賦予抗體標靶結合特異性。然而，在某些情況下，即使單個可變結構域 (或僅包含三個標靶特異性CDR的半個Fv) 也可以具有識別和結合標靶的能力，雖然其親和力低於整個結合位點。
「單鏈Fv」或「scFv」抗原結合片段包含抗體的V H和V L結構域，其中這些結構域存在於單個多肽鏈中。一般而言，Fv多肽進一步包括一位在V H和V L結構域之間的多肽連接子，其使scFv能夠形成標靶結合所需的結構。
「單結構域抗體」含有單個V H或V L結構域，其對醣-MUC4表現出足夠的親和力。在具體實施方案中，單結構域抗體是駱駝化抗體 (參見例如Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38)。
本文的抗醣-MUC4抗體也可以是雙特異性和其他多特異性抗體。雙特異性抗體是單株抗體，通常是人類或人源化抗體，其對相同或不同抗原上的兩個不同表位具有結合特異性。在本文中，其中一個結合特異性可以是針對醣-MUC4，而另一個結合特異性可以是針對任何其他抗原，例如針對細胞表面蛋白、受體、受體次單元、組織特異性抗原、病毒衍生蛋白、病毒編碼的包膜蛋白、細菌衍生蛋白或細菌表面蛋白等。在某些實施方案中，雙特異性和其他多特異性抗醣-MUC4抗體和抗原結合片段可特異性地與第二個MUC4表位、另一在癌細胞上與MUC4共同表現之蛋白質的表位、或另一呈遞於不同細胞例如活化T細胞上之蛋白質的表位相結合。本文的雙特異性抗體包括IgG形式的雙特異性抗體和基於單鏈的雙特異性抗體。
本文的IgG形式雙特異性抗體可以是本領域已知的各種類型IgG形式雙特異性抗體中的任何一種，例如quadroma雙特異性抗體、「knobs-in-holes」雙特異性抗體、CrossMab雙特異性抗體 (即雙特異性結構域交換抗體)、電荷配對雙特異性抗體、共同輕鏈雙特異性抗體、單臂單鏈Fab-免疫球蛋白γ雙特異性抗體、雙硫鍵穩定化Fv雙特異性抗體、DuetMabs、受控的Fab臂交換雙特異性抗體、股交換工程化結構域體雙特異性抗體、雙臂白胺酸拉鍊異二聚體單株雙特異性抗體、κλ-體雙特異性抗體、雙可變結構域雙特異性抗體以及交叉雙可變結構域雙特異性抗體。參見例如Köhler and Milstein, 1975, Nature 256:495-497；Milstein and Cuello, 1983, Nature 305:537-40；Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9:617-621；Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92；Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285:19637-46；Fischer et al., 2015 Nature Commun 6:6113；Schanzer et al., 2014, J Biol Chem 289:18693-706；Metz et al., 2012 Protein Eng Des Sel 25:571-80；Mazor et al., 2015 MAbs 7:377-89；Labrijn et al., 2013 Proc Natl Acad Sci USA 110:5145-0；Davis et al., 2010 Protein Eng Des Sel 23:195-202；Wranik et al., 2012, J Biol Chem 287:43331-9；Gu et al., 2015, PLoS One 10(5):e0124135；Steinmetz et al., 2016, MAbs 8(5):867-78；Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):1010-1020；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；Yang et al., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48，以上均透過引用將其全部併入本文。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體是在科學和專利文獻中稱為CrossMabs的結構域交換抗體。參見例如Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92。CrossMab技術詳細描述於WO 2009/080251、WO 2009/080252、WO 2009/080253、WO 2009/080254、WO 2013/026833、WO 2016/020309和Schaefer et al., 2011, Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92，其全部內容透過引用併入本文。簡而言之，CrossMab技術是基於位在雙特異性IgG之一個Fab臂內的重鏈和輕鏈之間的結構域交叉，進而促使正確的鏈結合。本文的CrossMab雙特異性抗體可以是「CrossMab FAB」抗體，其中雙特異性IgG抗體之一個臂的Fab部分的重鏈和輕鏈進行交換。在其他實施方案中，本文的CrossMab雙特異性抗體可以是「CrossMab VH-VL」抗體，其中僅交換雙特異性IgG抗體之一個臂的Fab部分的重鏈和輕鏈的可變結構域。在又一些實施方案中，本文的CrossMab雙特異性抗體可以是「CrossMab CH1-CL」抗體，其中僅交換雙特異性IgG抗體之一個臂的Fab部分的重鏈和輕鏈的穩定結構域。與CrossMab FAB和CrossMab VH-VL相比，CrossMab CH1-CL抗體不具有預測的副產物，因此，在一些實施方案中，CrossMab CH1-CL雙特異性抗體是較佳的。參見Klein et al., 2016, mAbs, 8(6):1010-1020。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體是受控的Fab臂交換雙特異性抗體。製備Fab臂交換雙特異性抗體的方法描述於PCT公開號WO 2011/131746和Labrijn et al., 2014 Nat Protoc. 9(10):2450-63，其透過引用全部併入本文。簡而言之，受控的Fab臂交換雙特異性抗體可以透過以下步驟製備: 分別表現兩個在CH3結構域中含有單匹配點突變的親本IgG1，在體外氧化還原條件下混合親本IgG1以進行半分子的重組，並去除還原劑以使鏈間雙硫鍵再氧化，從而形成雙特異性抗體。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體是「開罐器（bottle opener）」、「mAb-Fv」、「mAb-scFv」、「中心-scFv（central-scFv）」、「中心-Fv（central-Fv）」、「單臂中心-scFv（one-armed central-scFv）」或「雙scFv（dual scFv）」形式的雙特異性抗體。這些形式的雙特異性抗體描述於PCT公開號WO 2016/182751中，其內容透過引用全部併入本文。這些形式中的每一種都依賴於抗體重鏈Fc結構域的自我組裝性質，藉此兩個含有「單體」的Fc次單元可以組裝成一個含有「二聚體」的Fc結構域。
在bottle opener形式中，第一單體包含與Fc次單元的N端共價連接的scFv，視情況地是透過連接子，第二單體包含重鏈 (包含VH、CH1和第二Fc次單元)。bottle opener形式的雙特異性抗體進一步包含能夠與第二單體配對以形成Fab的輕鏈。
mAb-Fv雙特異性抗體形式是依賴於一連接到重鏈單體C端的「額外」VH結構域以及一連接到另一重鏈單體的「額外」VL結構域，以形成第三個抗原結合結構域。在一些實施方案中，mAb-Fv雙特異性抗體包含第一單體，該第一單體包含第一VH結構域、CH1結構域和第一Fc次單元，其中VL結構域共價連接至C端。第二單體包含VH結構域、CH1結構域、第二Fc次單元以及共價連接至第二單體C端的VH。兩個C端連接的可變結構域構成一個Fv。mAb-Fv還包含兩個輕鏈，當其與第一和第二單體結合時形成Fab。
mAb-scFv雙特異性形式是依賴於利用scFv與mAb之其中一個單體的C端連接，從而形成第三個抗原結合結構域。因此，第一單體包含第一重鏈 (包含VH、CH1和第一Fc次單元)，其C端具有共價連接的scFv。mAb-scFv雙特異性抗體進一步包含第二單體 (包含VH、CH1和第一Fc次單元) 以及兩個輕鏈，當其與第一和第二單體結合時形成Fab。
Central-scFv雙特異性形式是依賴於在mAb中插入scFv結構域，從而形成第三個抗原結合結構域。scFv結構域是插入到Fc次單元與其中一個單體的CH1結構域之間，從而提供了第三個抗原結合結構域。因此，第一單體可以包含VH結構域、CH1結構域 (和視情況存在的鉸鏈) 以及第一Fc次單元，其中利用視情況存在的結構域連接子將scFv共價連接在CH1結構域的C端與第一Fc次單元的N端之間。其他單體可以是標準的Fab側單體。Central-scFv雙特異性抗體還包含兩個輕鏈，當其與第一和第二單體結合時形成Fab。
Central-Fv雙特異性形式是依賴於插入一Fv結構域，從而形成第三個抗原結合結構域。每個單體可以包含Fv的組分子 (例如一個單體包含可變重結構域，而另一個單體包含可變輕結構域)。因此，一個單體可以包含VH結構域、CH1結構域、第一Fc次單元以及視情況地使用結構域連接子共價連接在CH1結構域C端與第一Fc次單元N端之間的VL結構域。其他單體可以包含VH結構域、CH1結構域、第二Fc次單元以及視情況地使用結構域連接子共價連接在CH1結構域C端與第二Fc結構域N端之間的額外VH結構域。Central-Fv雙特異性抗體還包含兩個輕鏈，當其與第一和第二單體結合時形成Fab。
One-armed central-scFv雙特異性形式包含一個僅含有Fc次單元的單體，而另一個單體包含經插入的scFv結構域，從而形成第二個抗原結合結構域。因此，一個單體可以包含VH結構域、CH1結構域以及第一Fc次單元，其中視情況地使用結構域連接子將scFv共價連接在CH1結構域C端與第一Fc次單元N端之間。第二單體可以包含Fc結構域。此實施方案進一步利用包含可變輕結構域和穩定輕結構域的輕鏈，其與第一單體結合以形成Fab。
Dual scFv雙特異性形式包含一含有視情況地透過連接子共價連接至第一Fc次單元N端的scFv的第一單體以及一含有視情況地透過連接子共價連接至第二Fc次單元N端的scFv的第二單體。
本文的雙特異性抗體可以包括含有第一和第二次單元的Fc結構域。在一實施方案中，Fc結構域是IgG Fc結構域。在一特定實施方案中，Fc結構域是IgG 1Fc結構域。在另一實施方案中，Fc結構域是IgG 4Fc結構域。在一更具體的實施方案中，Fc結構域是在位置S228處 (Kabat EU索引編號) 含有胺基酸取代，特別是S228P胺基酸取代的IgG 4Fc結構域。除非本文另有說明，否則Fc結構域或穩定區中的胺基酸殘基編號是根據EU編號系統，也稱為EU索引，其描述於Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD。這種胺基酸取代減少了體內IgG 4抗體的Fab臂交換 (參見Stubenrauch et al., 2010, Drug Metabolism and Disposition 38:84-91)。在另一特定實施方案中，Fc結構域是人類Fc結構域。在一更加具體的實施方案中，Fc結構域是人類IgG 1Fc結構域。人類IgG 1Fc區的例示性序列是: DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQ (SEQ ID NO:156)。
在特定實施方案中，Fc結構域包含促進Fc結構域之第一和第二次單元結合的修飾。人類IgG Fc結構域之兩個次單元之間最廣泛的蛋白質-蛋白質相互作用的位點是位於CH3結構域。因此，在一實施方案中，所述修飾是位在Fc結構域的CH3結構域中。
在一具體實施方案中，該促進Fc結構域之第一和第二次單元結合的修飾是所謂的「knob-into-hole」修飾，其包括位在Fc結構域之兩個次單元中之一次單元的「knob」修飾以及位在Fc結構域之兩個次單元中另一個次單元的「hole」修飾。Knob-into-hole技術被描述在例如美國專利號5,731,168和7,695,936；Ridgway et al., 1996, Prot Eng 9:617-621和Carter, J, 2001, Immunol Meth 248:7-15。一般而言，該方法包括在第一多肽的界面處引入一突起 (knob) 以及在第二多肽的界面處引入一相應的空腔 (hole)，使得突起可以被定位在空腔中，以便促進異二聚體的形成，並阻礙同二聚體的形成。可以透過用較大的側鏈 (例如酪胺酸或色胺酸)替換來自於第一多肽界面的小胺基酸側鏈來構建突起。可以透過用較小的胺基酸側鏈 (例如丙胺酸或蘇胺酸) 替換大的胺基酸側鏈，藉此在第二多肽界面產生與所述突起相同或相似大小的互補空腔。
因此，在一些實施方案中，Fc結構域的第一次單元的CH3結構域中的胺基酸殘基被具有更大側鏈體積的胺基酸殘基所取代，從而在第一次單元的CH3結構域內產生突起，其是可定位在第二次單元的CH3結構域內的空腔中，此外，Fc結構域的第二次單元的CH3結構域中的胺基酸殘基被具有較小側鏈體積的胺基酸殘基所取代，從而在第二個次單元的CH3結構域內產生空腔，其中第一個次單元的CH3結構域內的突起可定位於所述空腔內。較佳地，所述具有較大側鏈體積的胺基酸殘基是選自於由精胺酸 (R)、苯丙胺酸 (F)、酪胺酸 (Y) 和色胺酸 (W) 所組成的群組。較佳地，所述具有較小側鏈體積的胺基酸殘基是選自於由丙胺酸 (A)、絲胺酸 (S)、蘇胺酸 (T) 和纈胺酸 (V) 所組成的群組。可以透過改變編碼多肽的核酸，例如透過位點特異性誘變或透過肽合成來形成突起和空腔。
在特定的此類實施方案中，在Fc結構域的第一次單元中，位於366處的蘇胺酸殘基被色胺酸殘基所取代 (T366W)，並且在Fc結構域的第二次單元中，位於407處的酪胺酸殘基被纈胺酸殘基所取代 (Y407V)，以及視情況地位於366處的蘇胺酸殘基被絲胺酸殘基所取代 (T366S)，並且位於368處的白胺酸殘基被丙胺酸殘基所取代 (L368A) (根據Kabat EU索引編號)。在另一實施方案中，在Fc結構域的第一次單元中，另外位於354處的絲胺酸殘基被半胱胺酸殘基所取代 (S354C) 或位於356處的麩胺酸殘基被半胱胺酸殘基所取代 (E356C) (特別是位於354處的絲胺酸殘基被半胱胺酸殘基所取代)，並且在Fc結構域的第二次單元中，另外位於349處的酪胺酸殘基被半胱胺酸殘基所取代 (Y349C) (根據Kabat EU索引編號)。在一特定實施方案中，Fc結構域的第一次單元包含胺基酸取代S354C和T366W，此外，Fc結構域的第二次單元包含胺基酸取代Y349C、T366S、L368A和Y407V (根據Kabat EU索引編號)。
在一些實施方案中，靜電轉向 (舉例如Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285(25):19637-46中所述) 可用於促進Fc結構域的第一和第二次單元結合。
在一些實施方案中，Fc結構域包含一個或多個可減少與Fc受體結合和/或效應功能 (effector function) 的胺基酸取代。
在一特定實施方案中，Fc受體是Fcγ受體。在一實施方案中，Fc受體是人類Fc受體。在一實施方案中，Fc受體是活化的Fc受體。在一具體實施方案中，Fc受體是活化的人類Fcγ受體，更具體地是人類FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最具體地是人類FcγRIIIa。在一實施方案中，效應功能是選自於補體依賴性細胞毒性作用 (complement dependent cytotoxicity，CDC)、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性作用 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用 (antibody-dependent cellular phagocytosis，ADCP) 和細胞激素分泌之群組中的一種或多種。在特定實施例中，效應功能是ADCC。
通常，相同的一個或多個胺基酸取代會存在於Fc結構域的兩個次單元中的每一個。在一實施方案中，一個或多個胺基酸取代可降低Fc結構域與Fc受體的結合親和力。在一實施方案中，一個或多個胺基酸取代可使Fc結構域與Fc受體的結合親和力降低至少2倍、至少5倍或至少10倍。
在一實施方案中，Fc結構域在選自於E233、L234、L235、N297、P331和P329群組中的位置處含有胺基酸取代 (編號是根據Kabat EU索引)。在一更具體實施方案中，Fc結構域在選自於L234、L235和P329群組中的位置處含有胺基酸取代 (編號是根據Kabat EU索引)。在一些實施方案中，Fc結構域包含胺基酸取代L234A和L235A (編號是根據Kabat EU索引)。在一此實施方案中，Fc結構域是IgG 1Fc結構域，特別是人類IgG 1Fc結構域。在一實施方案中，Fc結構域包含位在P329處的胺基酸取代。在更具體實施方案中，胺基酸取代是P329A或P329G，特別是P329G (編號是根據Kabat EU索引)。在一實施方案中，Fc結構域包含位在P329處的胺基酸取代以及另一位在選自於E233、L234、L235、N297和P331處的胺基酸取代 (編號是根據Kabat EU索引)。在一更具體實施方案中，所述另一胺基酸取代是E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在特定實施方案中，Fc結構域包含位在P329、L234和L235處的胺基酸取代 (編號是根據Kabat EU索引)。在更具體實施方案中，Fc結構域包含胺基酸突變L234A、L235A和P329G (可以使用簡寫術語「P329G LALA」、「PGLALA」或「LALAPG」來指代)。具體而言，在特定實施方案中，Fc結構域的每個次單元包含胺基酸取代L234A、L235A和P329G (Kabat EU索引編號)，亦即在Fc結構域的第一和第二次單元中的每一個，位在234處的白胺酸殘基被丙胺酸殘基所取代 (L234A)，位在235處的白胺酸殘基被丙胺酸殘基所取代 (L235A)，並且位在329處的脯胺酸殘基被甘胺酸殘基所取代 (P329G) (根據Kabat EU索引編號)。在一此實施方案中，Fc結構域是IgG 1Fc結構域，特別是人類IgG 1Fc結構域。
本文的基於單鏈的雙特異性抗體可以是本領域已知的各種類型基於單鏈的雙特異性抗體中的任何一種，例如雙特異性T細胞銜接抗體 (BiTE)、雙抗體、串聯雙抗體 (tandab)、雙親和性重新標靶分子 (DART) 和雙特異性殺手細胞銜接抗體。參見例如Löffler et al., 2000, Blood 95:2098-103；Holliger et al., 1993, Proc Natl Acad Sci USA, 90:6444-8；Kipriyanov et al., 1999, Mol Biol 293:41-56；Johnson et al., 2010, Mol Biol 399:436-49；Wiernik et al., 2013, Clin Cancer Res 19:3844-55；Liu et al., 2017, Front. Immunol. 8:38；Yang et al., 2017, Int. J. Mol. Sci. 18:48，透過引用將其全部併入本文。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體是雙特異性T細胞銜接抗體 (BiTE)。BiTE是具有兩個抗原結合結構域的單多肽鏈分子，其中一個抗原結合結構域是與T細胞抗原結合，第二個抗原結合結構域是與標靶表面上的抗原結合 (參見PCT公開號WO 05/061547；Baeuerle e t al., 2008, Drugs of the Future 33: 137-147；Bargou, et al., 2008, Science 321:974-977，全文透過引用的方式併入本文)。因此，本文的BiTE具有與T細胞抗原結合的抗原結合結構域以及經導向針對醣-MUC4的第二抗原結合結構域。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體是雙親和性重新標靶分子 (DARTs)。DARTs包含至少兩條多肽鏈，彼此互相結合 (尤其是透過共價交互作用) 以形成至少兩個表位結合位點，這些位點可以識別相同或不同的表位。DART的每條多肽鏈包含免疫球蛋白輕鏈可變區和免疫球蛋白重鏈可變區，但這些區域不會相互作用而形成表位結合位點。相反地，DART多肽鏈中的其中一條 (例如第一條) 的免疫球蛋白重鏈可變區可與不同的 (例如第二條) DART™多肽鏈的免疫球蛋白輕鏈可變區相互作用以形成表位結合位點。類似地，DART多肽鏈中的其中一條 (例如第一條) 的免疫球蛋白輕鏈可變區可與不同的 (例如第二條) DART多肽鏈的免疫球蛋白重鏈可變區相互作用以形成表位結合位點。DARTs可以是單特異性、雙特異性、三特異性等，因此能夠同時結合一個、兩個、三個或更多個不同的表位 (可以是相同或不同抗原的)。DARTs還可以是單價、二價、三價、四價、五價、六價等，因此能夠同時結合一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個分子。DARTs的這兩個屬性 (即特異性和效價程度) 可以加以組合，例如進而產生四價 (即能夠結合四組表位) 的雙特異性抗體 (即能夠結合兩個表位) 等。DART分子揭露於PCT公開號WO 2006/113665、WO 2008/157379和WO 2010/080538中，其透過引用方式全部併入本文。
在本文的雙特異性抗體的一些實施方案中，其中一結合特異性是針對醣-MUC4，而另一結合特異性是針對表現在免疫效應細胞上的抗原。如本文所用，術語「免疫效應細胞」或「效應細胞」是指哺乳動物免疫系統中天然細胞庫中的細胞，其可被活化以影響標靶細胞的存活。免疫效應細胞包括淋巴譜系的細胞，例如自然殺手 (NK) 細胞、T細胞，包括細胞毒殺T細胞或B細胞，而且骨髓譜系的細胞也可被視為免疫效應細胞，例如單核細胞或巨噬細胞、樹突細胞和嗜中性顆粒細胞。因此，所述效應細胞較佳為NK細胞、T細胞、B細胞、單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞或嗜中性顆粒細胞。將效應細胞招募至異常細胞意味著免疫效應細胞被帶到異常標靶細胞附近，使得效應細胞可以直接殺死或間接啟動殺死它們被招募到的異常細胞。為了避免非特異性交互作用，較佳地，本文的雙特異性抗體可特異性地識別免疫效應細胞上的抗原，與體內其他細胞相比，該抗原在這些免疫效應細胞上至少會被過度表現。存在於免疫效應細胞上的標靶抗原可以包括CD3、CD8、CD16、CD25、CD28、CD64、CD89、NKG2D和NKp46。較佳地，免疫效應細胞上的抗原是表現在T細胞上的CD3。
如本文所用，除非另有說明，「CD3」是指來自任何脊椎動物來源的任何天然CD3，包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如人類)、非人類靈長類動物 (例如食蟹猴) 和囓齒動物 (例如小鼠和大鼠)。該術語包括「全長」未經加工的CD3以及在細胞中加工產生的任何形式CD3。該術語還包括天然存在的CD3變體，例如剪接變體或等位基因變體。免疫效應細胞上最優選的抗原是CD3ε鏈。該抗原已被證明可非常有效地將T細胞招募到異常細胞。因此，本發明的雙特異性抗體較佳地可特異性識別CD3ε。人類CD3ε的胺基酸序列顯示在UniProt (uniprot.org) 登錄號P07766 (版本144)，或NCBI (ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000724.1。食蟹猴 ( Macaca fascicularis) CD3ε的胺基酸序列顯示在NCBI GenBank no. BAB71849.1。關於人類治療用途，是利用其CD3結合結構域可特異性地結合人類CD3 (例如人類CD3ε鏈) 的雙特異性抗體。關於非人類動物和細胞株的臨床前測試，可以使用雙特異性抗體，其中CD3結合結構域特異性地與用於臨床前測試物種的CD3相結合 (例如用於靈長類動物測試的食蟹猴CD3)。
如本文所用，「特異性結合」或「特異性識別」來自於特定物種之標靶抗原的結合結構域並不排除可與來自於其他物種之抗原的結合或識別，因此包括其一個或多個結合結構域具有物種間交叉反應性的抗體。舉例而言，「特異性結合」或「特異性識別」人類CD3的CD3結合結構域也可以結合或識別食蟹猴CD3，反之亦然。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體H2C彼此競爭 (描述在PCT公開號WO 2008/119567) 而與CD3的表位結合。在其他實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體V9彼此競爭 (描述於Rodrigues et al., 1992, Int J Cancer Suppl 7:45-50和美國專利號6,054,297) 而與CD3的表位結合。在其他實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體FN18彼此競爭 (描述於Nooij et al., 1986, Eur J Immunol 19:981-984) 而與CD3的表位結合。在又一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體SP34彼此競爭 (描述於Pessano et al., 1985, EMBO J 4:337-340) 而與CD3的表位結合。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體mAb1彼此競爭 (描述於美國專利號10,730,944) 而與CD8的表位結合。在其他實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體YTS169彼此競爭 (描述於美國專利公開號2015/0191543) 而與CD8的表位結合。在其他實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體4C9 5F4彼此競爭 (描述於WO 1987/005912) 而與CD8的表位結合。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體3G8彼此競爭 (描述於WO2006/064136) 而與CD16的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體VEP13彼此競爭 (描述於Ziegler-Heitbrock et al., 1984，Clin.Exp.Immunol.58:470-477) 而與CD16的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體B73.1彼此競爭 (描述於Perussia et al., 1983，J. Immunol.130(5):2142-2148) 而與CD16的表位結合。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體daclizumab及其變體彼此競爭 (描述於WO 2014/145000) 而與CD25的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體AB1、AB7、AB11或AB12彼此競爭 (描述於WO 2004/045512) 而與CD25的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體ALD25H1、ALD25H2或ALD25H4彼此競爭 (描述於WO 2020/234399) 而與CD25的表位結合。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體FR104彼此競爭 (描述於WO 2017/103003) 而與CD28的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體hCD28.3彼此競爭 (描述於WO 2011/101791) 而與CD28的表位結合。
在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體MS或21 F2彼此競爭 (描述於WO 2009/077483) 而與NKG2D的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體5C5、320、230、013、296或395彼此競爭 (描述於WO 2021/009146) 而與NKG2D的表位結合。在一些實施方案中，本文的雙特異性抗體可以與單株抗體KYK-2.0彼此競爭 (描述於WO 2010/017103) 而與NKG2D的表位結合。
本文的抗醣-MUC4抗體包括衍生抗體。舉例而言，但不作為限制，衍生抗體通常是透過糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知的保護/封閉基團、蛋白水解裂解、與細胞配體或其他蛋白質連接的衍生化來加以修飾。許多化學修飾中的任何一種都可以透過已知的技術進行，包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、衣黴素的代謝合成等。此外，衍生物可以包含一個或多個非天然胺基酸，例如使用ambrx技術 (參見例如Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2)。
抗醣-MUC4抗體或結合片段可以是其序列已被修飾以改變至少一種穩定區介導性生物效應功能的抗體或片段。舉例而言，在一些實施方案中，抗醣-MUC4抗體可加以修飾，使其相對於未經修飾的抗體降低至少一種穩定區介導性生物效應功能，例如降低與Fc受體 (FcγR) 的結合。可以透過在抗體之免疫球蛋白穩定區片段中與FcγR相互作用所必需的特定區域進行突變，進而減少與FcγR結合 (參見例如Canfield和Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491以及Lund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662)。降低抗體的FcγR結合能力還可以降低其他依賴於FcγR相互作用的效應功能，例如調理作用、吞噬作用和抗原依賴性細胞毒性作用(ADCC)。
本文所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段包括經修飾而使其相對於未經修飾的抗體可獲得或改善至少一種穩定區介導性生物效應功能的抗體和/或結合片段，例如以增強FcγR相互作用 (參見例如US2006/0134709)。舉例而言，相較於對應的野生型穩定區，本文的抗醣-MUC4抗體可以具有能夠以更高親和力與FcγRIIA、FcγRIIB和/或FcγRIIIA結合的穩定區。
因此，本文的抗體可具有導致調理作用、吞噬作用或ADCC增加或減少的生物活性改變。這種改變在本領域中是已知的。舉例而言，可降低ADCC活性的抗體修飾描述於美國專利號5,834,597。例示性的ADCC降低變體對應為在美國專利號5,834,597中圖4所示的「突變體3」，其中殘基236被刪除，殘基234、235和237 (使用EU編號) 被丙胺酸所取代。另一例示性的ADCC降低變體包括胺基酸突變L234A、L235A和P329G (可以使用簡寫術語「P329G LALA」來指代)。「P329G LALA」胺基酸置換組合幾乎完全消除了人類IgG 1Fc結構域的Fcγ受體 (以及補體) 結合能力，如PCT公開號WO 2012/130831所述，其透過引用方式全部併入本文。WO 2012/130831還描述了製備此突變Fc結構域的方法以及確認其特性如Fc受體結合或效應功能的方法。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體具有低水平的或缺乏岩藻醣。缺乏岩藻醣的抗體與增強的ADCC活性相關，尤其是在低劑量的抗體下。參見Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740；Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73。製備低岩藻醣抗體的方法包括在大鼠骨髓瘤YB2/0細胞 (ATCC CRL 1662) 中生長。YB2/0細胞表現低水平的FUT8 mRNA，其可編碼α-1,6-岩藻醣基轉移酶，此為多肽岩藻醣基化所必需的酶。
在一些實施方案中，抗醣-MUC4抗體或結合片段包括二等分的寡醣，例如其中連接到Fc結構域的雙觸角寡醣被GlcNAc分成兩部分。如上所述，此類變體可能具有減少的岩藻醣基化和/或改善的ADCC功能。此類抗體變體的實例描述於例如Umana et al., 1999, Nat Biotechnol 17:176-180；Ferrara et al., 2006, Biotechn Bioeng 93: 851-861；WO 99/54342；WO 2004/065540和WO 2003/011878。
在另一方面，抗醣-MUC4抗體或結合片段包括可增加或減少它們對胎兒Fc受體 (FcRn) 結合親和力的修飾，例如透過突變免疫球蛋白穩定區片段中參與FcRn相互作用的特定區域 (參見例如WO 2005/123780)。在特定實施方案中，IgG類的抗醣-MUC4抗體是突變的，使得重鏈穩定區的胺基酸殘基250、314和428中的至少一個被單獨取代，或以其任何組合而被取代，例如在位置250和428，或在位置250和314，或在位置314和428，或在位置250、314和428，位置250和428是特定組合。就位置250而言，用來取代之的胺基酸殘基可以是蘇胺酸以外的任何胺基酸殘基，包括但不限於丙胺酸、半胱胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、脯胺酸、麩胺醯胺、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、色胺酸或酪胺酸。就位置314而言，用來取代之的胺基酸殘基可以是白胺酸以外的任何胺基酸殘基，包括但不限於丙胺酸、半胱胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、脯胺酸、麩胺醯胺、精胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、色胺酸或酪胺酸。就位置428而言，用來取代之的胺基酸殘基可以是甲硫胺酸以外的任何胺基酸殘基，包括但不限於丙胺酸、半胱胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、白胺酸、天冬醯胺、脯胺酸、麩胺醯胺、精胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、色胺酸或酪胺酸。合適的胺基酸取代的特定組合已確認於美國專利號7,217,797的表1中，透過引用將其併入本文。此類突變增加了與FcRn的結合，從而保護抗體免於降解並延長其半衰期。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段具有一個或多個被插入到其一個或多個高變異區的胺基酸，例如描述於Jung和Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966；Yazaki et al., 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug. 17；美國專利申請案 2007/0280931。
在其他方面，特別適用於診斷應用，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段是連接至一可檢測部分。可檢測部分包括放射性部分、比色分子、螢光部分、化學發光部分、抗原、酶、可檢測珠 (例如磁性或電極 (例如金) 珠)，或與另一分子結合的分子 (例如生物素或鏈黴親和素)。
放射性同位素或放射性核素可包括 3H、 14C、 15N、 35S、 90Y、 99Tc、 111In、 125I、 131I。
螢光標記可包括玫瑰紅B (rhodamine)、鑭系元素磷光體、螢光素及其衍生物、螢光染料、GFP (GFP表示「綠色螢光蛋白」)、丹磺醯 (dansyl)、繖形酮 (umbelliferone)、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二甲醛 (o-phthaldehyde) 和螢光胺（fluorescamine）。
酶標記物可包括辣根過氧化物酶 (horseradish peroxidase)、β半乳醣苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶、葡萄醣-6-磷酸脫氫酶 (G6PDH)、α-D-半乳醣苷酶、葡萄醣氧化酶、葡萄醣澱粉酶、碳酸酐酶、乙醯膽鹼酯酶、溶菌酶、蘋果酸脫氫酶和過氧化物酶。
化學發光標記物或化學發光物，例如異魯米諾 (isoluminol)、魯米諾 (luminol) 和dioxetanes。
其他可檢測部分包括分子例如生物素、digoxygenin或5-溴脫氧尿苷 (5-bromodeoxyuridine)。
在其它方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可用於檢測系統中以檢測樣本中的生物標記 (biomarker)，例如源自於患者的生物樣本。生物標記可以是蛋白質生物標記 (例如腫瘤相關的醣型MUC4，例如含有被GalNAc在絲胺酸和蘇胺酸殘基上 (以粗體劃底線的文字表示) 醣基化之胺基酸序列CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 的醣型MUC4，其存在於例如癌細胞 (例如來自於組織活檢或循環腫瘤細胞) 或癌症衍生的細胞外囊泡的表面上或內部)。
細胞外囊泡 (EVs) 是從幾乎所有細胞類型中釋放出的脂質膜囊泡。EVs可攜帶複雜的分子貨物，例如蛋白質、RNA (例如mRNA和非編碼RNA (microRNA、轉移RNA、環狀RNA和長鏈非編碼RNA)) 以及DNA片段。EVs的分子內含物很大程度上反映了起源細胞，因此顯示出細胞類型特異性。特別是，癌症衍生的EVs包含由親代癌細胞所表現的癌症特異性分子並將之呈現在其表面上 (參見例如Yáñez-Mó et al., 2015, J Extracell Vesicles. 4:27066；Li et al., 2015, Cell Res. 25:981-984)。
在一實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段是用於檢測含有EVs的樣本 (例如液體活檢) 中生物標記的方法。在此類實施方案中，生物標記可被本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段所辨識。生物標記可存在於EVs的表面上。檢測生物標記的例示性方法包括但不限於免疫測定方法，例如免疫沉澱；西方墨點法；酵素結合免疫吸附分析法；免疫組織化學染色；免疫細胞化學染色；流式細胞儀；以及免疫PCR。在一些實施方案中，免疫測定方法可以是化學發光免疫測定方法。在一些實施方案中，免疫測定方法可以是高通量和/或自動化免疫測定平台。
在一些實施方案中，檢測樣本中生物標記的方法包括將樣本與本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段進行接觸。在一些實施方案中，此類方法還包括將樣本與一種或多種檢測標記進行接觸。在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段標記有一種或多種檢測標記。
在一些實施方案中，透過捕獲試驗 (capture assay) 以從樣本例如液體活檢樣本中選擇性地捕獲EVs。例示性用於EVs的捕獲試驗實例描述於US2021/0214806中，該文獻透過引用全部併入本文。在一些實施方案中，透過捕獲試驗以選擇性地捕獲特定大小範圍和/或特定特徵的EVs，例如與癌症相關的Evs (例如腫瘤相關的醣型MUC4，例如含有被GalNAc在絲胺酸和蘇胺酸殘基上 (以粗體劃底線的文字表示) 醣基化之胺基酸序列CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 的醣型MUC4)。在一些此類實施方案中，在進行捕獲試驗之前，可以預先加工處理樣本以去除非EVs，包括但不限於例如可溶性蛋白質和干擾實體，例如細胞碎片。在一些實施方案中，使用粒徑排阻層析法 (size exclusion chromatography) 將EVs從樣本中純化出來。
在一些實施方案中，用於檢測生物標記的方法包括分析單個EV (例如單一EV試驗)。舉例而言，此類試驗可涉及 (i) 捕獲試驗，例如抗體捕獲試驗和 (ii) 一種或多種可針對至少一種或多種額外生物標記的檢測試驗，其中捕獲試驗是在檢測試驗之前進行。參見例如US2021/0214806。
在一些實施方案中，捕獲試驗包括將樣本與至少一種含有本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的捕獲試劑進行接觸的步驟。捕獲試劑可以被固定在固體基質上。可以用適合捕獲EVs且不會干擾下游處理、加工和/或檢測的形式來提供固體基質。舉例而言，在一些實施方案中，固體基質可以是或包含珠子 (例如磁珠)。在一些實施方案中，固體基材可以是或包括一表面。舉例而言，在一些實施方案中，此表面可以是試驗室 (例如管、孔、微孔、盤、過濾器、膜、基質等) 的捕獲表面。在一些實施方案中，捕獲試劑是或包含磁珠，該磁珠包含與其偶聯的捕獲部分 (例如本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段)。參見例如US2021/0214806。
在某些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與2D5或含有鼠類或人源化2D5的重鏈可變區 (例如SEQ ID NO:1 (鼠類) 和SEQ ID NO:133-144 (例示性人源化序列)) 以及鼠類或人源化2D5的輕鏈可變區 (例如SEQ ID NO:2 (鼠類) 和SEQ ID NO:145-153 (例示性人源化序列)) 的抗體或抗原結合片段相互競爭。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與5B8或含有5B8的重鏈和輕鏈可變區 (分別為SEQ ID NO:23和24) 的抗體或抗原結合片段相互競爭。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與15F3或含有15F3的重鏈和輕鏈可變區 (分別為SEQ ID NO:45和46) 的抗體或抗原結合片段相互競爭。
競爭試驗可以在表現有與2D5、5B8或15F3相結合的醣-MUC4表位的細胞上或在含有與2D5、5B8或15F3相結合的表位的醣基化MUC4肽，例如被GalNAc在絲胺酸和蘇胺酸殘基上 (以粗體劃底線的文字表示) 醣基化的肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 上進行。不表現所述表位的細胞或未經醣基化的肽可以作為對照組。
可以在其上進行競爭試驗 (competition assay) 的細胞包括但不限於乳癌細胞株T47D和經工程改造以表現醣-MUC4表位的重組細胞。在一非限制性實例中，可表現MUC4但與生俱來Tn陰性的T47D細胞，透過剔除COSMC chaperone而被工程化以表現MUC4 Tn-抗原。可表現非醣基化形式MUC4的野生型細胞可以作為陰性對照組。
競爭試驗包括但不限於放射性物質標記免疫試驗 (RIA)、酵素結合免疫吸附試驗 (ELISA)、sandwich ELISA、螢光活化細胞分選試驗 (FACS)、表面電漿共振試驗 (例如Biacore) 和生物層干涉術試驗 (BLI)。在一些實施方案中，可以使用BLI (例如使用Octet-HTX系統 (Molecular Devices)) 進行抗體競爭試驗。可以使用BLI來針對特定抗原以串聯評估單株抗體的抗體競爭或表位組合。在BLI試驗中，可以將抗原固定在生物傳感器上，並且在連續步驟中呈遞給兩個競爭性抗體。如果用第一抗體進行飽和未阻斷第二抗體的結合，則會發生與非重疊表位的結合。在一些實施方案中，可以使用表面電漿共振 (例如使用Biacore系統 (Cytiva)) 進行抗體競爭試驗。在表面電漿共振試驗中，可以將一個或多個抗體固定在生物傳感器上，並與分析物 (例如SEQ ID NO:154的醣-MUC4肽或陰性對照分析物，如SEQ ID NO:155的未醣基化MUC4肽) 一起呈遞。在一些實施方案中，將抗體與飽和濃度的分析物進行接觸，例如至少約0.5 μM的濃度。在一些實施方案中，飽和濃度為約1 μM、約1.5 μM或約2 μM。當比較兩種抗體的結合親和力時，使用相同濃度的兩種抗體來較佳地測量此兩種抗體的親和力，例如使用每種抗體為1 μM的濃度來進行測量。
在進行參考抗體與測試抗體 (不考慮物種或同種型) 之間的抗體競爭試驗時，可以先用可檢測標記例如螢光團、生物素或酶標記 (或甚至放射性標記) 來對參考抗體進行標記，以便後續識別。在這種情況下，將可表現醣-MUC4的細胞與未經標記的測試抗體一起培養，加入經標記的參考抗體，並測量經結合之標記的強度。如果測試抗體透過與重疊表位互相結合，藉此與經標記的參考抗體進行競爭，則相對於在沒有測試抗體條件下所進行的對照反應，強度將會降低。
在此試驗的一具體實施方案中，首先確定經標記參考抗體在試驗條件下 (例如指定的細胞密度) 可產生80%最大結合 (conc 80%) 的濃度，然後可以用10倍conc 80%的未經標記測試抗體和conc 80%的經標記參考抗體來進行競爭試驗。
抑制可以表示為抑制常數或K i，根據以下公式計算: K i= IC 50/ (1 + [參考抗體濃度]/K d)， 其中IC 50是使參考抗體的結合減少50%的測試抗體濃度，K d是參考抗體的解離常數，為其對醣-MUC4親和力的量度。在本文所述的試驗條件下，與本文公開的抗醣-MUC4抗體相互競爭的抗體可具有10 pM至10 nM的K i。
在各種實施方案中，如果在所用特定試驗條件中可產生80%最大結合的參考抗體濃度以及比參考抗體濃度高10倍的測試抗體濃度下，測試抗體可將參考抗體的結合降低至少約20%或更多，例如至少約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或甚至更多，或任何介於上述值之間的百分比，則認為測試抗體能夠與參考抗體競爭。
在競爭試驗的一實施例中，透過將盤與肽溶液進行接觸 (例如在PBS中濃度為1 μg/mL，於4°C下過夜)，使SEQ ID NO:154的醣基化MUC4肽貼附到固體表面上，例如微孔盤。將盤進行洗滌 (例如含0.1% Tween 20的PBS溶液)並進行阻斷 (blocking) (例如在Superblock中，Thermo Scientific，Rockford，IL)。將含有亞飽和量的經生物素化2D5、5B8和15F3 (例如濃度為80 ng/mL) 和在ELISA緩衝液 (例如含有1% BSA和0.1% Tween 20的PBS) 中連續稀釋 (例如濃度為2.8 μg/mL、8.3 μg/mL或25 μg/mL)的未經標記2D5、5B8和15F3 (「參考」抗體) 或競爭性抗醣-MUC4抗體 (「測試」抗體) 的混合物加入至孔中，輕輕搖動盤以進行培養1小時。將盤進行洗滌，並將稀釋在ELISA緩衝液中的1 μg/mL HRP偶聯鏈黴親和素添加到每個孔中，並將盤進行培養1小時。將盤進行洗滌，並透過添加受質 (例如TMB，Biofx Laboratories Inc.，Owings Mills，MD) 以檢測結合的抗體。透過添加終止緩衝液 (例如Bio FX Stop Reagents，Biofx Laboratories Inc.，Owings Mills，MD) 以終止反應，並使用微量盤分析儀 (例如VERSAmax，Molecular Devices，Sunnyvale，CA) 在650 nm下測量吸光度。
這種競爭試驗的變化也可用於測試2D5、5B8和15F3與另一種抗醣-MUC4抗體之間的競爭。舉例而言，在某些方面，抗醣-MUC4抗體是用作為參考抗體，而2D5、5B8或15F3是用作為測試抗體。此外，可以使用在培養物中表現在細胞表面上 (例如在上述細胞類型之一的表面上) 的膜結合醣-MUC4，以代替SEQ ID NO:154的醣基化MUC4肽。一般而言，使用約10 4至10 6個轉染子，例如約10 5個轉染子。競爭試驗的其他形式是本領域已知的並且可以使用。
在多個實施方案中，當使用0.08 μg/mL、0.4 μg/mL、2 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL或任何介於上述值之間濃度 (例如介於2 μg/mL至10 μg/mL之間的濃度) 的抗醣-MUC4抗體，本文的抗醣-MUC4抗體可將經標記2D5、5B8或15F3的結合降低至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或任何介於上述值之間的百分比 (例如本文的抗醣-MUC4抗體可將經標記2D5、5B8或15F3的結合降低50%至70%)。
在其他實施方案中，當使用0.4 μg/mL、2 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、250 μg/mL或任何介於上述值之間濃度 (例如介於2 μg/mL至10 μg/mL之間的濃度) 的2D5、5B8或15F3，2D5、5B8或15F3將本文的經標記抗醣-MUC4抗體的結合降低至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或在任何介於前述值之間的百分比 (例如2D5、5B8或15F3將本文的經標記抗醣-MUC4抗體的結合降低50%至70%)。
在前述試驗中，2D5、5B8或15F3抗體可以被含有2D5、5B8和15F3的CDR或重鏈和輕鏈可變區的任何抗體或抗原結合片段所替換，例如人源化2D5、5B8和15F3或2D5、5B8和15F3的嵌合對應物。例示性2D5的人源化重鏈和輕鏈可變區是由SEQ ID NOs:133至153所提供。
在某些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段具有與2D5、5B8或15F3的表位相同或相似的表位。本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的表位可以透過進行丙胺酸掃描來表徵。醣肽資料庫，透過在SEQ ID NO:154序列中之一處的丙胺酸點突變 (或若MUC4肽具有丙胺酸，則透過甘胺酸點突變) 使每個醣肽都與MUC4肽不同。透過ELISA測量抗體或抗原結合片段與每個肽的結合，可以定位出該抗體或抗原結合片段的表位。
在某些方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含表1A至1C (鼠類) 和表4A至4G (人源化) 中所列的重鏈和/或輕鏈可變序列 (或由核苷酸序列所編碼)。在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包含表1至3中所列的重鏈和/或輕鏈CDR序列 (或由核苷酸序列所編碼)。此種抗醣-MUC4抗體和抗原結合片段的框架序列可以是表1A至1C所列之VH和VL序列的天然鼠類框架序列，或者可以是非天然的 (例如: 經人源化的或人的) 框架序列。2D5的VH和VL序列的人源化框架序列是列在表4A至4G中。
在另一些方面，本文提供了具有重鏈和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈和輕鏈可變區分別與SEQ ID NO:1和2具有至少85%、90%、95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。
在另一些方面，本文提供了具有重鏈和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈和輕鏈可變區分別與SEQ ID NO:23和24具有至少85%、90%、95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。
在另一些方面，本文提供了具有重鏈和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，所述重鏈和輕鏈可變區分別與SEQ ID NO:45和46具有至少85%、90%、95%、98%、99%或99.5%的序列同一性。
在其他方面，本文提供了具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗MUC4抗體或抗原結合片段，該重鏈可變區與SEQ ID NO:133至144中之一序列具有至少95%、98%、99%或99.5%的序列同一性，該輕鏈可變區與SEQ ID NO:145和153中之一序列具有至少95%、98%、99%或99.5%序列同一性。
在其他方面，本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段是單鏈可變片段 (scFv)。例示性的scFv包含重鏈可變片段的N端連接於輕鏈可變片段。另一例示性的scFv包含輕鏈可變片段的N端連接於重鏈可變片段。在一些實施方案中，scFv重鏈可變片段和輕鏈可變片段是與4至15個胺基酸的連接子序列共價結合。scFv可以是雙特異性T細胞銜接抗體的形式或位在嵌合抗原受體 (CAR) 之內。 5.1.1. 抗體特異性
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體可特異性地結合MUC4醣蛋白CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被GalNAc進行醣基化。
在某些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體可特異性地結合上述的MUC4醣蛋白，並且不會特異性地結合以下的一個或多個肽: 未醣基化的MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) (未醣基化的MUC4肽)；MUC1縱排重複序列 (tandem repeat) (VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG) 3(SEQ ID NO:201) (第一MUC1醣肽)，其已被經純化的重組人類醣基轉移酶GalNAc-T1、GalNAc-T2和GalNAc-T4進行體外醣基化；MUC1肽TAPPAHGV TS APD T RPAPG ST APPAHGVT (SEQ ID NO:202) (第二MUC1醣肽)，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被GalNAc進行體外醣基化；CD44v6肽GYRQ T PKEDSH S TTGTAAA (SEQ ID NO:218) (CD44v6醣肽)，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被GalNAc進行體外醣基化；LAMP1肽CEQDRP S P TT APPAPPSPSP (SEQ ID NO:219) (LAMP1醣肽)，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被GalNAc進行體外醣基化；和cMET肽PTKSFISGG ST ITGVGKNLN (SEQ ID NO:220) (cMET醣肽)，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被GalNAc進行體外醣基化。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體對MUC4醣肽的結合親和力是其對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，或至少1000倍。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體對MUC4醣肽的結合親和力是其對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，或至少1000倍。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體對MUC4醣肽的結合親和力是其對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，或至少1000倍。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體對MUC4醣肽的結合親和力是其對CD44v6醣肽的結合親和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，或至少1000倍。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體對MUC4醣肽的結合親和力是其對LAMP1醣肽的結合親和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，或至少1000倍。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體對MUC4醣肽的結合親和力是其對cMET醣肽的結合親和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍，或至少1000倍。
用於確定親和力(包括相對親和力)的試驗包括但不限於放射性物質標記免疫試驗 (RIA)、酵素結合免疫吸附試驗 (ELISA)、三明治（sandwich） ELISA、螢光活化細胞分選試驗 (fluorescence activated cell sorting，FACS)、表面電漿共振試驗 (例如Biacore) 和生物層干涉術試驗 (bio-layer interferometry，BLI)。在一些實施方案中，親和力是透過表面電漿共振 (例如Biacore) 來測量。
例示性抗醣-MUC4抗體及其片段是描述於經編號的實施方案1至414中。 5.2. 抗體藥物複合體
本文的另一方面涉及抗體藥物複合體 (ADC)，包括本文的抗糖-MUC4抗體和抗原結合片段。ADC通常包含如本文所述的抗醣-MUC4抗體和/或結合片段，該抗醣-MUC4抗體和/或結合片段具有透過一個或多個連接子與其連接的一個或多個細胞毒性劑和/或細胞抑制劑。在具體實施方案中，ADC是根據結構式 (I) 的化合物: [D-L-XY] n-Ab 或其鹽類，其中每個「D」是獨立地代表細胞毒性劑和/或細胞抑制劑 (藥物)；每個「L」是獨立地代表連接子；「Ab」是代表抗醣-MUC4抗原結合結構域，例如本文所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段；每個「XY」是代表在連接子上的官能基R x與抗體上的「互補」官能基R y之間所形成的鍵結，以及n是代表與抗體相連的ADC的藥物數量或藥物與抗體的比率 (drug-to-antibody ratio，DAR)。
可組成ADC的各種抗體 (Ab) 的具體實施方案包括上述抗醣-MUC4抗體和/或結合片段的各種實施方案。
在結構式 (I) 的ADC和/或其鹽類的一些具體實施方案中，每個D是相同的和/或每個L是相同的。
在一些實施方案中，ADC包含瓢菌素 (amanitin) 毒素。Amanitin是八個胺基酸的雙環肽，其是在數種鵝膏菌屬蘑菇中發現的天然毒物。Amanitin毒素會抑制RNA聚合酶II，而導致細胞凋亡。在US 2019/0328899和2021/0077571中描述了可偶聯的例示性Amanitin毒素和本文的抗醣-MUC4抗體及其偶聯的方法，其透過引用方式全部併入本文。
在一些實施方案中，本文的抗醣-MUC4抗體和抗原結合片段的聚醣 (例如在IgG Fc的Asn-297處或附近 (Kabat編號)) 可以被修飾，將細胞毒性劑和/或細胞抑制劑附著到聚醣上。Van Geel et al., 2015, Bioconjugate Chem. 26(11):2233-2242。化學酵素程序透過以下兩個步驟使藥物經高度控制連接至位在Asn-297處或附近的N-聚醣: i) 透過修剪 (trimming) 和疊氮化物 (azide) 標記進行酵素重塑；以及ii) 透過無銅點擊化學 (click chemistry) 進行藥物連接。此類方法可適用於任何IgG同種型，而與醣基化狀態無關。例示性組成物以及將藥物偶聯至本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的聚醣的方法描述於例如WO 2015/057063；WO 2015/057064；WO 2015/057065；WO 2015/057066；WO 2015/112013；WO 2016/022027；WO 2016/053107；WO 2016/170186；WO 2017/137423；WO 2017/137456；和WO 2017/137457，其每一文獻都透過引用全部併入本文。
組成本文的抗醣-MUC4 ADC的細胞毒性劑和/或細胞抑制劑 (D) 和連接子 (L) 以及與ADC連接的細胞毒性劑和/或細胞抑制劑數量的具體實施方案於下方進行更詳細地描述。 5.1.2. 細胞毒性劑（Cytotoxic Agent）和/或細胞抑制劑（Cytostatic Agent）
細胞毒性劑和/或細胞抑制劑可以是任何已知可抑制細胞生長和/或複製和/或殺死細胞的試劑，特別是針對癌症和/或腫瘤細胞。許多具有細胞毒性和/或細胞抑制特性的試劑在文獻中是已知的。細胞毒性劑和/或細胞抑制劑類別的非限制性實例包括例如但不限於放射性核素、烷基化劑、拓撲異構酶I抑制劑、拓撲異構酶II抑制劑、DNA嵌入劑 (例如凹槽結合劑，例如小溝結合劑)、RNA/DNA抗代謝物、細胞週期調節劑、激酶抑制劑、蛋白質合成抑制劑、組蛋白去乙醯化酶抑制劑、粒線體抑制劑和抗有絲分裂劑。
以下提供了這些不同類別中某些類別藥劑的具體非限制性實施例。
烷基化劑: asaley (L-白胺酸，N-[N-乙醯基-4-[雙-(2-氯乙基)胺基]-DL-苯丙胺醯]-乙酯；NSC 167780；CAS登記號3577897)；AZQ (1,4-環己二烯-1,4-二胺基甲酸，2,5-雙(1-疊氮丙啶基)-3,6-二氧代二乙酯；NSC 182986；CAS登記號57998682)；BCNU (N,N'-雙(2-氯乙基)-N-亞硝基脲；NSC 409962；CAS登記號154938)；白消安 (1,4-丁二醇二甲磺酸鹽；NSC 750；CAS登記號55981)；(羧基鄰苯二甲酸鉑；NSC 27164；CAS登記號65296813)；CBDCA (順-(1,1-環丁二羧基)二胺鉑(II)；NSC 241240；CAS登記號41575944)；CCNU (N-(2-氯乙基)-N'-環己基-N-亞硝基脲；NSC 79037；CAS登記號13010474)；CHIP (異丙鉑；NSC 256927)；苯丁酸氮芥 (NSC 3088；CAS登記號305033)；氯唑菌素 (2-[[[(2-氯乙基)亞硝基胺基]羰基]胺基]-2-脫氧-D-吡喃葡萄醣；NSC 178248；CAS登記號54749905)；順鉑 (順鉑；NSC 119875；CAS登記號15663271)；氯米松 (NSC 338947；CAS登記號88343720)；氰基嗎啉多柔比星 (NCS 357704；CAS登記號88254073)；環地鬆 (NSC 348948；CAS登記號99591738)；雙脫水半乳醣醇 (5,6-二環氧醣醇；NSC 132313；CAS登記號23261203)；氟多潘 (5-[(2-氯乙基)-(2-氟乙基)胺基]-6-甲基-尿嘧啶；NSC 73754；CAS登記號834913)；安磺隆 (NSC 329680；CAS登記號96892578)；海坎酮 (NSC 142982；CAS登記號23255938)；美法崙 (NSC 8806；CAS登記號3223072)；甲基CCNU (1-(2-氯乙基)-3-(反式-4-甲基環己烷)-1-亞硝基脲；NSC 95441；CAS登記號13909096)；絲裂黴素C (NSC 26980；CAS登記號50077)；米托唑胺 (NSC 353451；CAS登記號85622953)；氮芥 (雙(2-氯乙基)甲胺鹽酸鹽；NSC 762；CAS登記號55867)；PCNU (1-(2-氯乙基)-3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-亞硝基脲；NSC 95466；CAS登記號13909029)；哌嗪烷基化劑 (1-(2-氯乙基)-4-(3-氯丙基)-哌嗪二鹽酸鹽；NSC 344007)；哌嗪二酮 (NSC 135758；CAS登記號41109802)；吡溴溴銨 (N,N-雙(3-溴丙醯基)哌嗪；NSC 25154；CAS登記號54911)；卟啉黴素 (N-甲基絲裂黴素C；NSC 56410；CAS登記號801525)；螺乙內醯脲芥末 (NSC 172112；CAS登記號56605164)；特羅昔隆 (異氰脲酸三縮水甘油酯；NSC 296934；CAS登記號2451629)；四鉑 (NSC 363812；CAS登記號62816982)；硫代四硫代吡啶 (N,N',N''-三-1,2-乙二醯硫代磷醯胺；NSC 6396；CAS登記號52244)；三亞乙基三聚氰胺 (NSC 9706；CAS登記號51183)；尿嘧啶氮芥 (去甲基多潘；NSC 34462；CAS登記號66751)；Yoshi-864 (雙(3-甲磺氧基丙基)胺鹽酸鹽；NSC 102627；CAS登記號3458228)。
拓撲異構酶 I 抑制劑: 喜樹鹼 (NSC 94600；CAS登記號7689-03-4)；各種喜樹鹼衍生物和類似物 (例如NSC 100880、NSC 603071、NSC 107124、NSC 643833、NSC 629971、NSC 295500、NSC 249910、NSC 606985、NSC 74028、NSC 176323、NSC 295501、NSC 606172、NSC 606173、NSC 610458、NSC 618939、NSC 610457、NSC 610459、NSC 606499、NSC 610456、NSC 364830和NSC 606497)；嗎啉異柔比星 (NSC 354646；CAS登記號89196043)；SN-38 (NSC 673596；CAS登記號86639-52-3)。
拓撲異構酶 II 抑制劑: 阿黴素 (NSC 123127；CAS登記號25316409)；amonafide (苯並異喹啉二酮；NSC 308847；CAS登記號69408817)；m-AMSA (4'-(9-吖啶胺基)-3'-甲氧基甲磺醯苯胺；NSC 249992；CAS登記號51264143)；蒽吡唑衍生物 (NSC 355644)；依托泊苷 (VP-16；NSC 141540；CAS登記號33419420)；吡唑吖啶 (吡唑並[3,4,5-kl]吖啶-2(6H)-丙胺,9-甲氧基-N,N-二甲基-5-硝基-單甲磺酸鹽；NSC 366140；CAS登記號99009219)；鹽酸比生群 (NSC 337766；CAS登記號71439684)；柔紅黴素 (NSC 821151；CAS登記號23541506)；脫氧多柔比星 (NSC 267469；CAS登記號63950061)；米托蒽醌 (NSC 301739；CAS登記號70476823)；menogaril (NSC 269148；CAS登記號71628961)；N,N-二芐基道諾黴素 (NSC 268242；CAS登記號7087851)；oxanthrazole (NSC 349174；CAS登記號105118125)；魯比達酮 (NSC 164011；CAS登記號36508711)；替尼泊苷 (VM-26；NSC 122819；CAS登記號29767202)。
DNA 嵌入劑: 蒽黴素 (CAS登記號4803274)；奇卡黴素A (CAS登記號89675376)；托梅黴素 (CAS登記號35050556)；DC-81 (CAS登記號81307246)；西比羅黴素 (CAS登記號12684332)；吡咯並苯二氮卓衍生物 (CAS登記號945490095)；SGD-1882 ((S)-2-(4-胺基苯基)-7-甲氧基-8-(3-4(S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1H-苯並[e]吡咯[1,2-a][1，4]二氮雜卓-8-基)丙氧基)-1H-苯並[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜卓-5(11aH)-酮)；SG2000 (SJG-136；(11aS,11a'S)-8,8'-丙烷-1,3-二烷基雙(氧基)雙(7-甲氧基-2-亞甲基-2,3-二氫-1H-苯並吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜卓-5(11aH)-酮；NSC 694501；CAS登記號232931576)。
RNA/DNA 抗代謝物: L-丙胺酸 (NSC 153353；CAS登記號59163416)；5-氮雜胞苷 (NSC 102816；CAS登記號320672)；5-氟尿嘧啶 (NSC 19893；CAS登記號51218)；acivicin (NSC 163501；CAS登記號42228922)；胺基蝶呤衍生物N-[2-氯-5-[[(2,4-二胺基-5-甲基-6-喹唑啉基)甲基]胺基]苯甲醯基-]L-天門冬胺酸 (NSC 132483)；胺基蝶呤衍生物N-[4-[[(2,4-二胺基-5-乙基-6-喹唑啉基)甲基]胺基]苯甲醯基]L-天門冬胺酸 (NSC 184692)；胺基蝶呤衍生物N-[2-氯-4-[[(2,4-二胺基-6-蝶啶基)甲基]胺基]苯甲醯基]L-天門冬胺酸一水合物 (NSC 134033)；an antifo (N α-(4-胺基-4-去氧庚醯基)-N 7-半鄰苯二甲醯-L-鳥胺酸-E；NSC 623017)；Baker's soluble antifol (NSC 139105；CAS登記號41191042)；二氯烯丙基苯 (2-(3,3-二氯烯丙基)-3-羥基-1,4-萘醌；NSC 126771；CAS登記號36417160)；布喹那 (NSC 368390；CAS登記號96201886)；ftorafur (前驅藥；5-氟-1-四氫-2-呋喃基尿嘧啶；NSC 148958；CAS登記號37076689)；5,6-二氫-5-氮雜胞苷 (NSC 264880；CAS登記號62402317)；甲胺蝶呤 (NSC 740；CAS登記號59052)；甲胺蝶呤衍生物 (N-[[4-[[(2,4-二胺基-6-蝶啶基)甲基]甲基胺基]-1-萘基]羰基]L-麩胺酸；NSC 174121)；PALA (N-(膦醯基乙醯基)-L-天門冬胺酸；NSC 224131；CAS登記號603425565)；吡唑呋喃 (NSC 143095；CAS登記號30868305)；曲甲胺蝶呤 (NSC 352122；CAS登記號82952645)。
DNA 抗代謝物: 3-HP (NSC 95678；CAS登記號3814797)；2'-脫氧-5-氟尿苷 (NSC 27640；CAS登記號50919)；5-HP (NSC 107392；CAS登記號19494894)；α-TGDR (α-2'-去氧-6-硫代鳥苷；NSC 71851；CAS登記號2133815)；甘胺酸阿非迪黴素 (aphidicolin glycinate) (NSC 303812；CAS登記號92802822)；ara C (阿糖胞苷；NSC 63878；CAS登記號69749)；5-氮雜-2'-脫氧胞苷 (NSC 127716；CAS登記號2353335)；β-TGDR (β-2'-去氧-6-硫代鳥苷；NSC 71261；CAS登記號789617)；環胞苷 (NSC 145668；CAS登記號10212256)；胍唑 (NSC 1895；CAS登記號1455772)；羥基脲 (NSC 32065；CAS登記號127071)；肌苷醣二醛 (NSC 118994；CAS登記號23590990)；macbecin II (NSC 330500；CAS登記號73341738)；吡唑並咪唑 (NSC 51143；CAS登記號6714290)；硫鳥嘌呤 (NSC 752；CAS登記號154427)；硫嘌呤 (NSC 755；CAS登記號50442)。
細胞週期調節劑: 水飛薊賓 (CAS登記號22888-70-6)；表沒食子兒茶素沒食子酸酯 (EGCG；CAS登記號989515)；原花青素衍生物 (例如原花青素A1 [CAS登記號103883030]、原花青素B1 [CAS登記號20315257]、原花青素B4 [CAS登記號29106512]、檳榔素B1 [CAS登記號79763283])；異黃酮 (例如染料木黃酮 [4%5,7-三羥基異黃酮；CAS登記號446720]，黃豆苷元 [4',7-二羥基異黃酮，CAS登記號486668]；吲哚-3-甲醇 (CAS登記號700061)；槲皮素 (NSC 9219；CAS登記號117395)；雌莫司汀 (NSC 89201；CAS登記號2998574)；諾考達唑 (CAS登記號31430189)；鬼臼毒素 (CAS登記號518285)；酒石酸長春瑞濱 (NSC 608210；CAS登記號125317397)；隱藻素 (NSC 667642；CAS登記號124689652)。
激酶抑制劑: 阿法替尼 (CAS登記號850140726)；阿西替尼 (CAS登記號319460850)；ARRY-438162 (binimetinib) (CAS登記號606143899)；波舒替尼 (CAS登記號380843754)；卡博替尼 (CAS登記號1140909483)；色瑞替尼 (CAS登記號1032900256)；克唑替尼 (CAS登記號877399525)；達拉非尼 (CAS登記號1195765457)；達沙替尼 (NSC 732517；CAS登記號302962498)；厄洛替尼 (NSC 718781；CAS登記號183319699)；依維莫司 (NSC 733504；CAS登記號159351696)；福坦替尼 (NSC 745942；CAS登記號901119355)；吉非替尼 (NSC 715055；CAS登記號184475352)；依魯替尼 (CAS登記號936563961)；伊馬替尼 (NSC 716051；CAS登記號220127571)；拉帕替尼 (CAS登記號388082788)；樂伐替尼 (CAS登記號857890392)；穆布替尼 (CAS 366017096)；尼羅替尼 (CAS登記號923288953)；尼達尼布 (CAS登記號656247175)；palbociclib (CAS登記號571190302)；帕唑帕尼 (NSC 737754；CAS登記號635702646)；培加他尼 (CAS登記號222716861)；普納替尼 (CAS登記號1114544318)；雷帕黴素 (NSC 226080；CAS登記號53123889)；瑞戈非尼 (CAS登記號755037037)；AP 23573 (ridaforolimus) (CAS登記號572924540)；INCB018424 (魯索替尼) (CAS登記號1092939177)；ARRY-142886 (selumetinib) (NSC 741078；CAS登記號606143-52-6)；西羅莫司 (NSC 226080；CAS登記號53123889)；索拉非尼 (NSC 724772；CAS登記號475207591)；舒尼替尼 (NSC 736511；CAS登記號341031547)；託法替尼 (CAS登記號477600752)；西羅莫司 (NSC 683864；CAS登記號163635043)；曲美替尼 (CAS登記號871700173)；凡德他尼 (CAS登記號443913733)；威羅非尼 (CAS登記號918504651)；SU6656 (CAS登記號330161870)；CEP-701 (來沙替尼) (CAS登記號111358884)；XL019 (CAS登記號945755566)；PD-325901 (CAS登記號391210109)；PD-98059 (CAS登記號167869218)；ATP競爭性TORC1/TORC2抑制劑，包括PI-103 (CAS登記號371935749)、PP242 (CAS登記號1092351671)、PP30 (CAS登記號1092788094)、Torin 1 (CAS登記號1222998368)、LY294002 (CAS登記號154447366)、XL-147 (CAS登記號934526893)、CAL-120 (CAS登記號870281348)、ETP-45658 (CAS登記號1198357797)、PX 866 (CAS登記號502632668)、GDC -0941 (CAS登記號957054307)、BGT226 (CAS登記號1245537681)、BEZ235 (CAS登記號915019657)、XL-765 (CAS登記號934493762)。
蛋白質合成抑制劑: 吖啶黃 (CAS登記號65589700)；阿米卡星 (NSC 177001；CAS登記號39831555)；阿貝卡星 (CAS登記號51025855)；星形黴素 (CAS登記號55779061)；阿奇黴素 (NSC 643732；CAS登記號83905015)；貝卡那黴素 (CAS登記號4696768)；金黴素 (NSC 13252；CAS登記號64722)；克拉黴素 (NSC 643733；CAS登記號81103119)；克林黴素 (CAS登記號18323449)；氯莫環素 (CAS登記號1181540)；放線菌酮 (CAS登記號66819)；放線菌素 (NSC 3053；CAS登記號50760)；達福普汀 (CAS登記號112362502)；地美環素 (CAS登記號127333)；地貝卡星 (CAS登記號34493986)；雙氫鏈黴素 (CAS登記號128461)；地紅黴素 (CAS登記號62013041)；強力黴素 (CAS登記號17086281)；依米汀 (NSC 33669；CAS登記號483181)；紅黴素 (NSC 55929；CAS登記號114078)；氟紅黴素 (CAS登記號83664208)；framycetin (新黴素B；CAS登記號119040)；慶大霉素 (NSC 82261；CAS登記號1403663)；甘胺醯環素，例如替加環素 (CAS登記號220620097)；潮黴素B (CAS登記號31282049)；異帕黴素 (CAS登記號67814760)；交沙黴素 (NSC 122223；CAS登記號16846245)；卡那黴素 (CAS登記號8063078)；酮內酯，例如泰利黴素 (CAS登記號191114484)、紅黴素 (CAS登記號205110481) 和索利黴素(CAS登記號760981837)；林可黴素 (CAS登記號154212)；萊美環素 (CAS登記號992212)；甲環素 (NSC 78502；CAS登記號2013583)；甲環素 (rondomycin；NSC 356463；CAS登記號914001)；麥迪黴素 (CAS登記號35457808)；米諾環素 (NSC 141993；CAS登記號10118908)；米卡黴素 (CAS登記號55881077)；新黴素 (CAS登記號119040)；奈替米星 (CAS登記號56391561)；竹桃黴素 (CAS登記號3922905)；噁唑烷酮類，例如埃培唑胺 (CAS登記號165800044)、利奈唑胺 (CAS登記號165800033)、posizolid (CAS登記號252260029)、拉地唑胺 (CAS登記號869884786)、蘭苯唑胺 (CAS登記號392659380)、索替唑胺 (CAS登記號168828588)、泰地唑胺 (CAS登記號856867555)；土黴素 (NSC 9169；CAS登記號2058460)；巴龍黴素 (CAS登記號7542372)；青黴素 (CAS登記號4599604)；肽基轉移酶抑制劑，例如氯黴素 (NSC 3069；CAS登記號56757) 和衍生物，例如阿齊達芬尼考 (CAS登記號13838089)、氟苯尼考 (CAS登記號73231342) 和甲砜黴素 (CAS登記號15318453) 和截短側耳素，例如瑞他莫林 (CAS登記號224452668)、泰妙菌素 (CAS登記號55297955)、伐奈木林 (CAS登記號101312929)；吡利黴素 (CAS登記號79548735)；嘌呤黴素 (NSC 3055；CAS登記號53792)；奎奴普丁 (CAS登記號120138503)；核醣黴素 (CAS登記號53797356)；羅基黴素 (CAS登記號74014510)；羅利四環素 (CAS登記號751973)；羅紅黴素 (CAS登記號80214831)；西索米星 (CAS登記號32385118)；大觀黴素 (CAS登記號1695778)；螺旋黴素 (CAS登記號8025818)；鏈黴素，例如原始黴素 (CAS登記號270076603)、奎奴普丁/達福普汀 (CAS登記號126602899) 和維吉尼亞黴素 (CAS登記號11006761)；鏈黴素 (CAS登記號57921)；四環素 (NSC 108579；CAS登記號60548)；妥布黴素 (CAS登記號32986564)；木黴黴素 (CAS登記號2751099)；泰樂菌素 (CAS登記號1401690)；維達黴素 (CAS登記號49863481)。
組蛋白去乙醯化酶抑制劑: abexinostat (CAS登記號783355602)；belinostat (NSC 726630；CAS登記號414864009)；西達本胺 (CAS登記號743420022)；恩替司他 (CAS登記號209783802)；givinostat (CAS登記號732302997)；mocetinostat (CAS登記號726169739)；帕比司他 (CAS登記號404950807)；quisinostat (CAS登記號875320299)；resminostat (CAS登記號864814880)；羅米地辛 (CAS登記號128517077)；蘿蔔硫素 (CAS登記號4478937)；硫脲基丁腈 (Kevetrin™；CAS登記號6659890)；丙戊酸 (NSC 93819；CAS登記號99661)；伏立諾他 (NSC 701852；CAS登記號149647789)；ACY-1215 (rocilinostat；CAS登記號1316214524)；CUDC-101 (CAS登記號1012054599)；CHR-2845 (tefinostat；CAS登記號914382608)；CHR-3996 (CAS登記號1235859138)；4SC-202 (CAS登記號910462430)；CG200745 (CAS登記號936221339)；SB939 (普拉司他；CAS登記號929016966)。
粒線體抑制劑: pancratistatin (NSC 349156；CAS登記號96281311)；羅丹明-123 (CAS登記號63669709)；依地福辛 (NSC 324368；CAS登記號70641519)；d-α-生育酚琥珀酸酯 (NSC 173849；CAS登記號4345033)；化合物11β (CAS登記號865070377)；阿司匹林 (NSC 406186；CAS登記號50782)；玫瑰樹鹼 (CAS登記號519233)；黃連素 (CAS登記號633658)；cerulenin (CAS登記號17397896)；GX015-070 (Obatoclax®；1H-吲哚,2-(2-((3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亞甲基)-3-甲氧基-2H-吡咯-5-基)-；NSC 729280；CAS登記號803712676)；celastrol (雷公藤；CAS登記號34157830)；二甲雙胍 (NSC 91485；CAS登記號1115704)；亮綠色 (NSC 5011；CAS登記號633034)；ME-344 (CAS登記號1374524556)。
抗有絲分裂劑: allocolchicine (NSC 406042)；auristatins，例如MMAE (單甲基auristatin E；CAS登記號474645-27-7) 和MMAF (單甲基auristatin F；CAS登記號745017-94-1；軟軟骨素B (NSC 609395)；秋水仙鹼 (NSC 757；CAS登記號64868)；膽鹼衍生物 (N-苯甲醯基-去乙醯基苯甲醯胺；NSC 33410；CAS登記號63989753)；海兔毒素10 (NSC 376128；CAS登記號110417-88-4)；美登素 (NSC 153858；CAS登記號35846-53-8)；rhozoxin (NSC 332598；CAS登記號90996546)；紫杉醇 (NSC 125973；CAS登記號33069624)；紫杉醇衍生物 (2'-N-[3-(二甲基胺基)丙基]戊二酸紫杉醇；NSC 608832)；硫代秋水仙鹼 (3-去甲基硫代秋水仙鹼；NSC 361792)；三苯甲基半胱胺酸 (NSC 49842；CAS登記號2799077)；硫酸長春鹼 (NSC 49842；CAS登記號143679)；硫酸長春新鹼 (NSC 67574；CAS登記號2068782)。
任何包含或可以經修飾以包含能與抗體連接的位點的這些試劑都可以包括在本文公開的ADC中。
在一具體實施方案中，細胞毒性劑和/或細胞抑制劑是抗有絲分裂劑。
在另一具體實施方案中，細胞毒性劑和/或細胞抑制劑是auristatin，例如單甲基auristatin E (MMAE) 或單甲基auristatin F (MMAF)。 5.2.2. 連接子
在本文的抗醣-MUC4 ADC中，細胞毒性劑和/或細胞抑制劑是透過連接子與抗體連接。將細胞毒性劑和/或細胞抑制劑連接到ADC的抗體的連接子可以是短的、長的、疏水的、親水的、彈性的或剛性的，或者可以含有各自獨立具有一種或多種上述特性的片段，以使連接子可以包括具有不同特性的片段。連接子可以是多價的，使得它們可將多於一個試劑共價連接到抗體上的單個位點，或者是單價的，使得它們可將單個試劑共價連接到抗體上的單一位點。
如本領域技術人員將理解的，連接子是透過在一位置與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑形成共價鍵結並且在另一位置與抗體形成共價鍵結，進而將細胞毒性劑和/或細胞抑制劑連接至抗體。共價鍵結是透過連接子上的官能基與試劑和抗體上的官能基之間的反應而形成的。如本文所用，表述「連接子」旨在包括 (i) 未偶聯形式的連接子，其包括能夠將連接子共價連接至細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的官能基以及能夠將連接子共價連接至抗體的官能基；(ii) 部分偶聯形式的連接子，其包括能夠將連接子共價連接至抗體並且與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑共價連接的官能基，或反之亦然；(iii) 完全偶聯形式的連接子，其是與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑以及抗體共價連接。在本文的連接子和抗醣-MUC4 ADC以及用於將連接子-試劑偶聯至抗體的合成子的一些具體實施方案中，具體說明了包含連接子上的官能基以及在連接子與抗體之間所形成的共價鍵結的部分分別為R x和XY。
連接子對於細胞外的環境較佳為但不必是化學穩定的，並且可以設計成在細胞內被裂解、被破壞和/或以其他方式被特異性降解。可替代地，可以使用未設計成在細胞內被特異性裂解或降解的連接子。穩定與不穩定連接子的選擇可能取決於細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的毒性。就對正常細胞有毒的試劑而言，較佳為穩定的連接子。可以使用選擇性或靶向性且對正常細胞具有較低毒性的試劑，連接子對細胞外環境的化學穩定性不太重要。在ADC的情況下，可用於將藥物連接至抗體的多種連接子是本領域已知的。任何這些連接子以及其他連接子可用於將細胞毒性劑和/或細胞抑制劑連接至本文的抗醣-MUC4 ADC的抗體。
可用於將許多細胞毒性劑和/或細胞抑制劑連接至單個抗體分子的例示性多價連接子描述於例如WO 2009/073445；WO 2010/068795；WO 2010/138719；WO 2011/120053；WO 2011/171020；WO 2013/096901；WO 2014/008375；WO 2014/093379；WO 2014/093394；WO 2014/093640，其內容透過引用全部併入本文。舉例而言，由Mersana等人開發的Fleximer連接子技術有可能實現具有良好物理化學特性的高藥物抗體比 (DAR) ADC。如下所示，Mersana技術是基於透過一系列酯鍵以將藥物分子結合到增溶聚縮醛骨架中。該方法提供了高負載的ADC (DAR高達20)，同時保持良好的物理化學特性。
樹突型連接子的其他實例可見於US2006/116422；2005/271615；de Groot et al.(2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494；Amir et al.(2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499；Shamis et al.(2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731；Sun et al.(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sun et al.(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768；King et al .(2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990，每一篇都透過引用併入本文。
可以使用的例示性單價連接子描述於例如Nolting, 2013, Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology 1045:71-100；Kitson et al., 2013, CROs/CMOs-Chemica Oggi-Chemistry Today 31(4):30-38；Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13；Zhao et al., 2011, J. Med. Chem. 54:3606-3623；美國專利號7,223,837；美國專利號8,568,728；美國專利號8,535,678；以及WO 2004/010957，每一文獻都以引用的方式併入本文。
另外提供了例示性連接子以及相關的方法和化學物質，它們在血液中是穩定的，可提供位點特異性和穩定的偶聯，並透過癌細胞中發現的特定酵素來提供癌症特異性的活化。位點特異性偶聯允許產生同質的ADC，而血漿穩定的連接子能夠釋放癌症特異性毒素。在一些實施方案中，透過異戊二烯基轉移酶 (例如farnesyl transferase) 可以將官能基化的異戊二烯受質共價連接至被引入到輕鏈C端之CaaX胺基酸序列的半胱胺酸 (Cys) 上。接著可以透過點擊化學或類異戊二烯與連接子官能性之間的肟連接 (oxime ligation) 以發生藥物偶聯。可以使用的例示性連接子、相關方法和相關化學物質描述於例如WO 2012/153193、WO 2015/182984；WO 2017/089890；WO 2017/089894；WO 2017/089895；WO 2017/051249；WO 2017/051254；WO 2018/182341；WO 2020/222573；WO 2021/137646；和WO 2020/141923，其每一文獻都透過引用整體併入本文。
作為例示而非限制，一些可包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中的可裂解和不可裂解的連接子描述於下文中。 5.2.3. 可裂解連接子
在某些實施方案中，選擇的連接子在體內是可裂解的。可裂解的連接子可以包括化學性上或酶性上不穩定或可降解的鍵結。可裂解的連接子通常依賴於細胞內的加工處理來釋放藥物，例如細胞質的減少、暴露於溶酶體中的酸性環境或透過細胞內特定蛋白酶或其他酶的裂解。可裂解的連接子通常包含一個或多個化學性上或酶性上可裂解的化學鍵，而連接子的其餘部分是不可裂解的。在某些實施方案中，連接子包含化學不穩定基團，例如腙 (hydrazone) 和/或雙硫基。包含化學不穩定基團的連接子可利用血漿與一些細胞質區室之間的差異特性。可促進含腙連接子藥物釋放的細胞內條件是胞吞體和溶酶體的酸性環境，而含雙硫基連接子則是在含有高硫醇濃度的胞質液中被還原，例如穀胱甘肽。在某些實施方案中，可以透過使用化學不穩定基團附近的取代基來引入空間位阻，以增加含有化學不穩定基團之連接子的血漿穩定性。
酸不穩定（acid-labile）基團，例如腙，在血液中性pH環境 (pH 7.3-7.5) 的全身循環期間可保持完整，一旦ADC進入細胞內的弱酸性胞吞體 (pH 5.0-6.5) 和溶酶體 (pH 4.5-5.0) 區室中，就會發生水解並釋放藥物。這種pH依賴性釋放機制與藥物的非特異性釋放有關。為了增加連接子的腙基團的穩定性，連接子可以透過化學修飾例如取代而改變，以允許調節而達到在溶酶體中更有效率的釋放，且在循環過程中損失最小化。
含腙連接子可以包含額外的裂解位點，例如額外的酸不穩定裂解位點和/或酶不穩定裂解位點。具有例示性含腙連接子的ADC包括以下結構: 其中D和Ab分別是代表細胞毒性劑和/或細胞抑制劑 (藥物) 和Ab，n是代表與抗體連接的藥物-連接子的數量。在某些連接子如連接子 (Ig) 中，連接子包含兩個可裂解基團 — 雙硫和腙部分。就這樣的連接子而言，未經修飾游離藥物的有效釋放需要酸性pH或雙硫化物還原和酸性pH。連接子 (Ih) 和 (Ii) 已證實對單個腙裂解位點是有效的。
在全身循環期間保持完整且在ADC進入到酸性細胞區室中時發生水解並釋放藥物的其他連接子包括碳酸鹽。在細胞毒性劑和/或細胞抑制劑可透過氧共價連接的情況下，此類連接子可以是有用的。
其他可被包含在連接子中的酸不穩定基團包括含cis-aconityl的連接子。cis-aconityl化學是利用與醯胺鍵相鄰的羧酸來加速在酸性條件下的醯胺水解。
可裂解的連接子還可以包括雙硫基團。雙硫化物在生理pH值下是熱力學穩定的，且其目的在於一旦內化進入細胞後便會釋放藥物，其中與細胞外環境相比，胞質液提供了顯著更強的還原環境。雙硫鍵的斷裂通常需要細胞質硫醇輔因子的存在，例如 (經還原的) 穀胱甘肽 (GSH)，如此一來含雙硫鍵的連接子在循環系統中便相當穩定，可選擇性地在胞質液中釋放藥物。胞內酶蛋白雙硫鍵異構酶或類似能夠裂解雙硫鍵的酶也可能有助於優先裂解細胞內的雙硫鍵。據報導，相較於在循環系統中顯著更低濃度的GSH或半胱胺酸 (最豐富的低分子量硫醇)，GSH存在於細胞中的濃度範圍為0.5至10 mM。腫瘤細胞因不規則的血流所引起的缺氧狀態，造成還原酶活性增強而致更高濃度的穀胱甘肽。在某些實施方案中，含雙硫鍵連接子的體內穩定性可以透過連接子的化學修飾來增強，例如利用與雙硫鍵相鄰的空間位阻。
具有例示性含雙硫鍵連接子的ADC包括以下結構: 其中D和Ab分別是代表藥物和抗體，n是代表與抗體連接的藥物-連接子的數量，並且R在每次出現時是獨立地選自例如氫或烷基。在某些實施方案中，增加與雙硫鍵相鄰的空間位阻會增加連接子的穩定性。當一個或多個R基團是選自於低級烷基例如甲基時，諸如 (Ij) 和 (Il) 的結構將顯示出增加的體內穩定性。
可使用的另一類型的可裂解連接子是可被酶特異性裂解的連接子。此類連接子通常是基於肽的或包括可作為酶受質的肽區域。基於肽的連接子在血漿和細胞外環境中往往比化學不穩定連接子更加穩定。肽鍵通常具有良好的血清穩定性，因為溶酶體蛋白水解酶在血液中的活性非常低，這是由於內源性抑制劑和與溶酶體相較下血液中不利的高pH值。由於溶酶體蛋白酶 (例如組織蛋白酶和纖溶酶) 的特異性作用，藥物可從抗體中釋放出來。這些蛋白酶可能是以升高的水平存在於某些腫瘤細胞中。
在例示性實施方案中，可裂解肽是選自於四肽，例如Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO: 157)、Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 158) 或二肽，例如Val-Cit、Val-Ala、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、Phe-Lys、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp 5、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Me3Lys-Pro、PhenylGly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、AM Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、AW Met-(D)Lys和Asn-(D)Lys。在某些實施方案中，由於較長肽的疏水性，故二肽是優於較長多肽。
目前已經描述了多種可用於將藥物例如多柔比星 (doxorubicin)、絲裂黴素 (mitomycin)、喜樹鹼 (camptothecin)、吡咯並苯二氮卓 (pyrrolobenzodiazepine)、塔利菌素 (tallysomycin) 和auristatin/auristatin家族成員連接至抗體的基於二肽可裂解連接子。(參見Dubowchik et al., 1998, J. Org. Chem. 67:1866-1872；Dubowchik et al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8(21):3341-3346；Walker et al., 2002, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:217-219；Walker et al., 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:4323-4327；Sutherland et al., 2013, Blood 122: 1455-1463；和Francisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465，每一篇都通過引用併入本文)。所有這些二肽連接子或這些二肽連接子的經修飾形式均可用於本文的抗醣-MUC4 ADC。其他可用的二肽連接子包括那些在ADC中可找到的連接子，例如Seattle Genetics’ Brentuximab Vendotin SGN-35 (Adcetris™)、Seattle Genetics SGN-75 (抗CD-70、Val-Cit-monomethyl auristatin F (MMAF))、Seattle Genetics SGN-CD33A (抗CD-33、Val-Ala-(SGD-1882))、Celldex Therapeutics glembatumumab (CDX-011) (抗NMB、Val-Cit-monomethyl auristatin E (MMAE)) 和Cytogen PSMA-ADC (PSMA-ADC-1301) (抗PSMA，Val-Cit-MMAE)。
酶可裂解連接子可包括自我破壞（self-immolative）間隔物 (spacer) 以在空間上將藥物與酶裂解位點分開。藥物與肽連接子的直接連接可導致藥物胺基酸加合物的蛋白水解釋放，從而削弱其活性。使用自我破壞間隔物可以在醯胺鍵水解時清除完全活性且化學上未經修飾的藥物。
一種自我破壞間隔物是雙功能性對胺基苯甲醇基 (para-aminobenzyl alcohol group)，其是透過胺基連接到肽上，以形成醯胺鍵，而含胺藥物可以透過胺甲酸酯官能基連接到連接子的芐基羥基 (PABC)。產生的前驅藥在蛋白酶介導的裂解後被活化，導致1,6-消除反應 (1,6-elimination reaction) 而釋放未經修飾的藥物、二氧化碳和連接子基團的殘餘物。以下方案描述了p-aminobenzyl ether的片段化和藥物的釋放: 其中X–D是代表未經修飾的藥物。
此自我破壞基團的雜環變體也已被描述。參見例如美國專利號7,989,434，其透過引用併入本文。
在一些實施方案中，酶可裂解連接子是基於β-葡萄醣醛酸的連接子。透過溶酶體酶β-葡萄醣醛酸酶 (β-glucuronidase) 來裂解β-葡萄醣醛酸苷醣苷鍵可實現藥物的快速釋放。這種酶大量存在於溶酶體內，並在某些腫瘤類型中會過度表現，而其在細胞外的酶活性較低。基於β-葡萄醣醛酸的連接子可用於避免ADC由於β-葡萄醣醛酸苷的親水性而發生聚集的趨勢。在一些實施方案中，基於β-葡萄醣醛酸的連接子較佳地可作為與疏水性藥物連接的ADC的連接子。以下方案描述了藥物從含有基於β-葡萄醣醛酸的連接子的ADC中釋放:
目前已經描述了多種可用於將藥物例如auristatins、喜樹鹼 (camptothecin) 和阿黴素 (doxorubicin) 類似物、CBI小溝結合劑和木莓素 (psymberin) 連接至抗體之可裂解基於β-葡萄醣醛酸的連接子 (參見Nolting, 第五章「Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates」In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013；Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17:831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；和Jiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255，其透過引用併入本文)。所有這些基於β-葡萄醣醛酸的連接子都可以用於本文的抗醣-MUC4 ADC。
此外，含有酚基的細胞毒性劑和/或細胞抑制劑可以透過酚氧共價鍵合至連接子。WO 2007/089149中描述了一種這樣的連接子，其是依賴於以下方法: 將二胺基乙烷「SpaceLink」與傳統基於「PABO」的自我破壞基團一併使用以遞送酚類。以下示意性地描述了連接子的裂解，其中D是代表具有酚羥基的細胞毒性劑和/或細胞抑制劑。
可裂解的連接子可以包括不可裂解的部分或片段，和/或可裂解的片段或部分可以被包含在其他不可裂解的連接子中而使其成為可裂解的。僅舉例來說，聚乙二醇 (PEG) 和相關的聚合物可以在聚合物主鏈中包括可裂解基團。舉例而言，聚乙二醇或聚合物連接子可以包括一個或多個可裂解基團，例如二硫化物、腙或二肽。
其他可包含在連接子中的可降解鍵結包括由PEG羧酸或經活化的PEG羧酸與生物活性劑上的醇基反應而形成的酯鍵結，其中此類酯基在生理條件下通常會水解以釋放生物活性劑。可水解降解的鍵結包括但不限於碳酸酯鍵結 (carbonate linkages)；由胺和醛反應而產生的亞胺鍵結 (imine linkages)；透過醇與磷酸基反應而形成的磷酸酯鍵結 (phosphate ester linkages)；作為醛和醇之反應產物的縮醛鍵結 (acetal linkages)；作為甲酸酯和醇之反應產物的原酸酯鍵結 (orthoester linkages)；以及由亞磷醯胺基包括但不限於在聚合物末端與寡核苷酸的5'羥基所形成的寡核苷酸鍵結 (oligonucleotide linkages)。
在某些實施方案中，連接子包含酶可裂解肽部分，例如含有結構式 (IVa) 或 (IVb) 的連接子: 或其鹽類，其中: 胜肽是代表可被溶酶體酶裂解的肽 (圖示為C→N且未顯示羧基和胺基「末端」)；T是代表包含一個或多個乙二醇單元或亞烷基鏈或其組合的聚合物；R a是選自於氫、烷基、磺酸鹽和甲基磺酸鹽；p為0至5之間的整數；q為0或1；x為0或1；y為0或1； 是代表連接子與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的連接點；*是代表連接子其餘部分的連接點。
在某些實施方案中，肽選自於三肽或二肽。在特定實施方案中，二肽是選自於: 纈胺酸-瓜胺酸；瓜胺酸-纈胺酸；丙胺酸-丙胺酸；丙胺酸-瓜胺酸；瓜胺酸-丙胺酸；天冬醯胺-瓜胺酸；瓜胺酸-天冬醯胺；瓜胺酸-瓜胺酸；纈胺酸-麩胺酸；麩胺酸-纈胺酸；絲胺酸-瓜胺酸；瓜胺酸-絲胺酸；離胺酸-瓜胺酸；瓜胺酸-離胺酸；天門冬胺酸-瓜胺酸；瓜胺酸-天門冬胺酸；丙胺酸-纈胺酸；纈胺酸-丙胺酸；苯丙胺酸-離胺酸；纈胺酸-離胺酸；丙胺酸-離胺酸；苯丙胺酸-瓜胺酸；白胺酸-瓜胺酸；異白胺酸-瓜胺酸；苯丙胺酸-精胺酸；和色胺酸-瓜胺酸。在某些實施方案中，二肽是選自於: 瓜胺酸-纈胺酸；和丙胺酸-纈胺酸。
可以被包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中的根據結構式 (IVa) 的連接子的具體例示性實施方案包括以下所示的連接子 (如所示，連接子包括適合用於將連接子與抗體共價連接的基團):
可以被包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中的根據結構式 (IVb) 的連接子的具體例示性實施方案包括以下所示的連接子 (如所示，連接子包括適合用於將連接子與抗體共價連接的基團):
在某些實施方案中，連接子包含酶可裂解肽部分，例如含有結構式 (IVc) 或 (IVd) 的連接子: 或其鹽類，其中: 胜肽是代表可被溶酶體酶裂解的肽 (圖示為C→N且未顯示羧基和胺基「末端」)；T是代表包含一個或多個乙二醇單元或亞烷基鏈或其組合的聚合物；R a是選自於氫、烷基、磺酸鹽和甲基磺酸鹽；p為0至5之間的整數；q為0或1；x為0或1；y為0或1； 是代表連接子與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的連接點；*是代表連接子其餘部分的連接點。
可以被包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中的根據結構式 (IVc) 的連接子的具體例示性實施方案包括以下所示的連接子 (如所示，連接子包括適合用於將連接子與抗體共價連接的基團):
可以被包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中的根據結構式 (IVd) 的連接子的具體例示性實施方案包括以下所示的連接子 (如所示，連接子包括適合用於將連接子與抗體共價連接的基團):
在某些實施方案中，含有結構式 (IVa)、(IVb)、(IVc) 或 (IVd) 的連接子還包括可透過暴露於酸性介質而裂解的碳酸酯部分。在特定實施方案中，連接子是透過氧而連接至細胞毒性劑和/或細胞抑制劑。 5.2.4. 不可裂解的連接子
儘管可裂解連接子可以提供某些優點，但含有本文的抗醣-MUC4 ADC的連接子不需要是可裂解的。就不可裂解的連接子而言，藥物的釋放不取決於血漿和一些細胞質區室之間的差異特性。假設藥物的釋放是發生在ADC透過抗原介導的胞吞作用內噬並遞送至溶酶體區室之後，其中抗體透過細胞內蛋白水解降解而分解至胺基酸水平。此過程會釋放藥物衍生物，該衍生物是由藥物、連接子以及與連接子共價連接的胺基酸殘基所形成。與具有可裂解連接子的複合體相比，來自於具有不可裂解連接子之複合體的胺基酸藥物代謝物更親水性且通常膜滲透性更低，這造成更少的旁觀者效應和更少的非特異性毒性。一般而言，具有不可裂解連接子的ADC在循環中比具有可裂解連接子的ADC具有更高的穩定性。不可裂解的連接子可以是亞烷基鏈，或者本質上可以是聚合的，例如基於聚亞烷基二醇聚合物、醯胺聚合物，或者可以包括亞烷基鏈、聚亞烷基二醇和/或醯胺聚合物的片段。
目前已經描述了多種可用於將藥物與抗體連接的不可裂解連接子。參見Jeffrey et al., 2006, Bioconjug. Chem. 17; 831-840；Jeffrey et al., 2007, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17:2278-2280；和Jiang et al., 2005, J. Am. Chem. Soc. 127:11254-11255，其透過引用併入本文。所有這些連接子均可被包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中。
在某些實施方案中，連接子在體內是不可裂解的，例如根據結構式 (VIa)、(VIb)、(VIc) 或 (VId) 的連接子 (如所示，連接子包括適合用於將連接子與抗體共價連接的基團): 或其鹽類，其中: R a是選自於氫、烷基、磺酸鹽和甲基磺酸鹽；R x是包含能夠將連接子與抗體共價連接的官能基的部分；和 是代表連接子與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的連接點。
可以被包含在本文的抗醣-MUC4 ADC中的根據結構式 (VIa) 至 (VId) 的連接子的具體例示性實施方案包括以下所示的連接子 (如所示，連接子包括適合用於將連接子與抗體共價連接的基團和 是代表連接子與細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的連接點): 5.2.5. 用於將連接子連接到抗體的基團
多種基團可用於將連接子-藥物合成子連接至抗體以產生ADC。連接基團本質上可以是親電子的並且包括: 順丁烯二醯亞胺基團 (maleimide group)、活化的二硫化物、活性酯例如NHS酯和HOBt酯、鹵代甲酸酯 (haloformates)、醯基鹵 (acid halides)、烷基和芐基鹵例如鹵代乙醯胺 (haloacetamides)。如下文所討論的，還有一些與「自我穩定 (self-stabilizing)」順丁烯二醯亞胺和「橋接二硫化物 (bridging disulfides)」相關的新興技術可以根據本文加以使用。所使用的特定基團將部分取決於抗體的連接位點。
一個「自我穩定」順丁烯二醯亞胺基團在抗體偶聯條件下自發水解以產生具有改進穩定性的ADC物質的實例如下圖所示。參見US20130309256 A1；以及Lyon et al., Nature Biotech published online, doi:10.1038/nbt.2968。
Polytherics公開了一種橋接一對源自於天然鉸鏈雙硫鍵還原的巰基 (sulfhydryl group) 的方法。參見Badescu et al., 2014, Bioconjugate Chem. 25:1124-1136。反應如下圖所示。這種方法的優點是能夠透過完全還原IgG (以產生4對巰基)，然後與4當量的烷化劑反應來合成豐富的DAR4 ADC。含有「橋接二硫化物」的ADC亦被聲稱具有更高的穩定性。
類似地，如下所述，已經開發出能夠橋接一對巰基的順丁烯二醯亞胺衍生物 (1，如下)。參見WO 2013/085925。 5.2.6. 連接子選擇注意事項
如本領域技術人員所知，針對特定ADC所選用的連接子可能受多種因素影響，包括但不限於與抗體的連接位點 (例如離胺酸、半胱胺酸或其他胺基酸殘基)、藥物藥效團的結構限制和藥物親脂性。針對ADC所選用的特定連接子應設法平衡特定抗體/藥物組合的這些不同因素。有關ADC中連接子選擇影響因素的綜述，請參見Nolting, 第五章「Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates」 In: Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp.71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013。
舉例而言，已觀察到ADC可以殺死存在於抗原陽性腫瘤細胞附近的旁觀者抗原陰性細胞。ADC殺死旁觀者細胞的機制表明了ADC在細胞內加工過程中所形成的代謝產物可能起了作用。ADC在抗原陽性細胞中代謝所產生的中性細胞毒性代謝物似乎在殺死旁觀者細胞中發揮作用，而帶電代謝物可能會被阻止穿過膜擴散到培養基中，因此不會影響對旁觀者的毒殺。在某些實施方案中，連接子是選擇用來減弱由ADC的細胞代謝物所引起的旁觀者毒殺作用。在某些實施方案中，連接子是選擇用來增加旁觀者毒殺效果。
連接子的特性也可能會影響ADC在使用和/或儲存條件下的聚集。通常，文獻中所報導的ADC，其每個抗體分子包含不超過3至4個藥物分子 (參見例如Chari, 2008, Acc Chem Res 41:98-107)。由於ADC的聚集，為了獲得更高藥物抗體比 (drug-to-antibody ratio, DAR) 的嘗試經常失敗，特別是如果藥物和連接子都是疏水性的 (King et al., 2002, J Med Chem 45:4336-4343；Hollander et al., 2008, Bioconjugate Chem 19:358-361；Burke et al., 2009 Bioconjugate Chem 20:1242-1250)。在許多情況下，高於3至4的DAR可能有助於提高效力。在細胞毒性劑和/或細胞抑制劑本質上是疏水性的情況下，可能需要選擇相對親水性的連接子來作為減少ADC聚集的手段，尤其是在需要高於3至4的DAR的情況下。因此，在某些實施方案中，連接子包含可減少ADC在儲存和/或使用期間聚集的化學部分。連接子可以包含極性或親水性基團，例如帶電基團或在生理pH下變為帶電的基團，以減少ADC的聚集。舉例而言，連接子可以包含帶電基團，例如鹽類，或在生理pH下去質子化例如羧酸鹽或質子化例如胺的基團。
經報導可產生DAR高達20且可用於將許多細胞毒性劑和/或細胞抑制劑連接至抗體的例示性多價連接子描述於WO 2009/073445；WO 2010/068795；WO 2010/138719；WO 2011/120053；WO 2011/171020；WO 2013/096901；WO 2014/008375；WO 2014/093379；WO 2014/093394；WO 2014/093640，其內容透過引用全部併入本文。
在特定實施方案中，ADC在儲存或使用期間的聚集是小於約10%，如透過粒徑排阻層析法 (SEC) 所測定的。在特定實施方案中，ADC在儲存或使用期間的聚集是小於10%，例如小於約5%、小於約4%、小於約3%、小於約2%、小於約1% 、小於約0.5%、小於約0.1%或甚至更低，如透過粒徑排阻層析法 (SEC) 所測定的。 5.2.7. 製備抗醣-MUC4 ADCs的方法
本文的抗醣-MUC4 ADC可以使用眾所周知的化學來合成。所選擇的化學尤其取決於細胞毒性劑和/或細胞抑制劑、連接子以及用於將連接子連接到抗體的基團的特性。一般而言，根據式 (I) 的ADC可以根據以下方案來製備: D-L-R x+ Ab-R y→ [D-L-XY] n-Ab (I) 其中D、L、Ab、XY和n均如前所定義，並且R x和R y是代表能夠彼此形成共價鍵結的互補基團，如上所述。
基團R x和R y的特性將取決於用於將合成子D-L-R x連接到抗體的化學。一般而言，所使用的化學不應改變抗體的完整性，例如其結合其靶標的能力。較佳地，偶聯抗體的結合特性將與未偶聯抗體的結合特性非常相似。用於將分子與諸如抗體的生物分子偶聯的多種化學和技術在本領域中是已知的，特別是與抗體偶聯是眾所周知的。參見例如Amon et al., “用於癌症治療中藥物免疫標靶的單株抗體”見：單株抗體和癌症治療，Reisfeld et al.Eds., Alan R. Liss, Inc., 1985；Hellstrom et al., “用於藥物遞送的抗體”見：受控的藥物遞送，Robinson et al.Eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd Ed. 1987；Thorpe, “癌症治療中細胞毒性劑的抗體載體：文獻回顧”見：單株抗體'84: 生物學和臨床應用，Pinchera et al., Eds., 1985；“放射性標記抗體在癌症治療中的治療用途的分析、結果和未來前景”，見：用於癌症檢測和治療的單株抗體，Baldwin et al., Eds., Academic Press, 1985；Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；PCT公開號WO 89/12624。這些化學中的任何一種都可用於將合成子與抗體連接起來。
許多可用於將合成子連接到可接近的離胺酸殘基的官能基R x和化學是已知的，並且包括例如但不限於NHS-酯和異硫氰酸酯 (isothiocyanates)。
許多可用於將合成子連接到半胱胺酸殘基之可接近游離巰基的官能基R x和化學是已知的，並且包括例如但不限於鹵代乙醯基 (haloacetyls) 和順丁烯二醯亞胺 (maleimides)。
然而，偶聯化學並不限於可用的側鏈基團。透過將適當的小分子連接到胺上，可以將諸如胺的側鏈轉化為其他有用的基團，例如羥基。此策略可用於透過將多功能小分子與抗體之可接近胺基酸殘基的側鏈偶聯，以增加抗體上可用連接位點的數量。適合將合成子共價連接到這些「經轉化」官能基的官能基R x後續便可被包含在合成子中。
還可以對抗體進行工程改造使其包括可用於偶聯的胺基酸殘基。Axup等人於2012年刊載在「Proc Natl Acad Sci USA」期刊第109卷第40期第16101至16106頁中描述了，一種工程化抗體的方法，以包括可用於在ADC的情況下偶聯藥物的非遺傳編碼胺基酸殘基，以及可用於將合成子連接到非編碼胺基酸的化學和官能基。
通常，合成子是連接至抗體胺基酸殘基的側鏈，包括例如可接近的離胺酸殘基的一級胺基或可接近的半胱胺酸殘基的巰基。可以透過還原鏈間雙硫鍵而獲得游離巰基。
就R y是巰基（sulfhydryl group）的連接而言 (例如當R x是順丁烯二醯亞胺時)，抗體通常是先被完全或部分還原以破壞半胱胺酸殘基之間的鏈間雙硫鍵。
未參與雙硫鍵的半胱胺酸殘基可以透過一個或多個密碼子的突變而經工程化成抗體。還原這些未配對的半胱胺酸會產生適合於偶聯的巰基。用於摻入經工程化半胱胺酸的較佳位置包括但不限於人類IgG 1重鏈上的位置S112C、S113C、A114C、S115C、A176C、5180C、S252C、V286C、V292C、S357C、A359C、S398C、S428C (Kabat編號) 和人類Igκ輕鏈上的位置V110C、S114C、S121C、S127C、S168C、V205C (Kabat編號) (參見例如美國專利號7,521,541、7,855,275和8,455,622)。
如本領域技術人員將理解的，與抗體分子相連接的細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的數量可以變化，使得ADC的集合在本質上可能是異質的，其中一些抗體可包含一個連接劑，一些可包含兩個，一些可包含三個，諸如此類 (以及有些不包含)。異質性的程度尤其取決於用於連接細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的化學反應。舉例而言，當抗體被還原以產生用於連接的巰基時，通常會產生每分子具有0、2、4、6或8個連接劑的抗體的異質混合物。此外，透過限制連接化合物的莫耳比，通常會產生每分子具有0、1、2、3、4、5、6、7或8個連接劑的抗體。因此，應當理解，根據上下文，所述的DAR可以是抗體集合的平均值。舉例來說，「DAR4」可以指一ADC製劑，該ADC製劑沒有經過純化以分離出特定DAR峰 (peaks)，並且可以包含ADC分子的異質混合物，其中每個抗體連接有不同數量的細胞抑制劑和/或細胞毒性劑 (例如每個抗體連接有0、2、4、6、8個試劑)，但其平均藥物抗體比為4。類似地，在一些實施方案中，「DAR2」是指平均藥物抗體比為2的異質ADC製劑。
當需要濃縮的製劑時，可以透過純化異質混合物而獲得具有確定數量的經連接細胞毒性劑和/或細胞抑制劑的抗體，例如透過管柱層析法，如疏水作用層析法。
如本領域已知的，可以透過多種方法來評估純度。作為一個具體的例子，可以透過HPLC或其他層析法來分析ADC製劑，並透過分析所得峰曲線下的面積來評估純度。 5.3 嵌合抗原受體
本文提供了含有本文所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的嵌合抗原受體 (CAR)。在一些實施方案中，CAR包含一個或多個如本文所述的scFv (例如一個或兩個)。舉例而言，CAR可以包含兩個透過連接子序列 (例如4至15個胺基酸) 共價連接的scFv。例示性連接子包括 GGGGS (SEQ ID NO:159) 和 (GGGGS) 3(SEQ ID NO:160)。
本文的CAR通常包含與跨膜結構域可操作連接的胞外結構域，該跨膜結構域繼而與用於訊息傳導的胞內結構域可操作連接在一起。CAR還可以包含位在胞外結構域N端的訊息肽 (例如人類CD8訊息肽)。在一些實施方案中，本文的CAR包括含有胺基酸序列MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID NO:161) 的人類CD8訊息肽。
本文的CAR的胞外結構域包含抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的序列 (例如如第5.1節或編號為1至414的實施方案中所述)。
例示性跨膜結構域序列和胞內結構域序列分別描述於第5.3.1和5.3.2節中。
本文所述的幾種融合蛋白 (例如編號為421至445的實施方案) 是CAR (例如編號為446至479的實施方案)，並且CAR相關的公開內容可適用於此類融合蛋白。本文所述的其他融合蛋白是嵌合T細胞受體 (TCR) (例如編號為490至584的實施方案)，並且嵌合TCR相關的公開內容可適用於此類融合蛋白。 5.3.1. 跨膜結構域
關於跨膜結構域，CAR可以被設計成包含與CAR的胞外結構域可操作連接 (例如融合) 在一起的跨膜結構域。
跨膜結構域可以來自於天然來源或合成來源。在來源是天然的情況下，該結構域可以是衍生自任何膜結合或跨膜蛋白。在本文中特別使用的跨膜區可以是源自於 (即可以包含至少下列的跨膜區) T細胞受體的α、β或ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5 、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154。在某些情況下，也可以使用各種的人類鉸鏈，包括人類Ig (免疫球蛋白) 鉸鏈。
在一實施方案中，跨膜結構域是合成的 (即非天然存在的)。合成的跨膜結構域的實例是主要含有疏水性殘基如白胺酸和纈胺酸的肽。較佳地，苯丙胺酸、色胺酸和纈胺酸的三聯體將出現在合成跨膜結構域的每一端。視情況地，長度較佳為2至10個胺基酸的短寡或多肽連接子可形成跨膜結構域與CAR的細胞質訊息傳遞結構域之間的連接。甘胺酸-絲胺酸二聯體提供了特別合適的連接子。
在一實施方案中，本文的CAR中的跨膜結構域是CD8跨膜結構域。在一實施方案中，CD8跨膜結構域包含胺基酸序列YLHLGALGRDLWGPSPVTGYHPLL (SEQ ID NO:162)。
在一實施方案中，本文的CAR中的跨膜結構域是CD28跨膜結構域。在一實施方案中，CD28跨膜結構域包含胺基酸序列FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQ ID NO:163)。
在一些情況下，本文的CAR的跨膜結構域是透過CD8a鉸鏈結構域與胞外結構域相連接。在一實施方案中，CD8a鉸鏈結構域包含胺基酸序列TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFAC (SEQ ID NO:221)。在另一實施方案中，CD8a鉸鏈結構域包含胺基酸序列TTTPAPRPPTPAPTIASPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO:165)。在另一實施方案中，CD8a鉸鏈結構域包含胺基酸序列TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO:223)。
在一些情況下，本文的CAR的跨膜結構域是透過人類IgG4-短鉸鏈與胞外結構域相連接。在一實施方案中，人類IgG4-短鉸鏈包含胺基酸序列ESKYGPPCPSCP (SEQ ID NO:166)。
在一些情況下，本文的CAR的跨膜結構域是透過人類IgG4-長鉸鏈與胞外結構域相連接。在一實施方案中，人類IgG4-長鉸鏈包含胺基酸序列ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM (SEQ ID NO:167)。 5.3.2. 胞內結構域
本文的CAR的細胞內訊息傳遞結構域是負責活化表現CAR的免疫細胞之正常效應功能中的至少一種。術語「效應功能」是指細胞的特殊功能。舉例而言，T細胞的效應功能可以是細胞溶解活性或輔助活性，包括細胞激素的分泌。因此，術語「細胞內訊息傳遞結構域」是指可傳遞效應功能訊息並指導細胞執行特殊功能的蛋白質部分。雖然通常可以使用整個細胞內訊息傳遞結構域，但在許多情況下不需要使用整個鏈。就使用細胞內訊息傳遞結構域的截短部分而言，該截短部分可用於代替完整鏈，只要它會傳遞效應功能訊息即可。因此，術語細胞內訊息傳遞結構域意味著包括任何足以傳遞效應功能訊息的細胞內訊息傳遞結構域的截短部分。
用於本文CAR的細胞內訊息傳遞結構域的較佳實例包括T細胞受體 (TCR) 和可在抗原受體接合後以協同作用啟動訊息傳遞的輔受體 (co-receptor) 的細胞質序列，以及任何這些序列的衍生物或變體和任何具有相同功能的合成序列。
僅透過TCR所產生的訊號可能不足以完全活化T細胞，還需要輔助或協同刺激訊號。因此，T細胞活化可以說是由兩類不同的細胞質訊息傳遞序列所介導: 那些透過TCR以啟動抗原依賴性主要活化的序列 (主要的細胞質訊息傳遞序列)，以及那些以抗原非依賴性方式發揮作用來提供輔助或協同刺激訊號的序列 (輔助的細胞質訊息傳遞序列)。
主要的細胞質訊息傳遞序列是以刺激方式或抑制方式來調節TCR複合體的主要活化。以刺激方式起作用的主要細胞質訊息傳遞序列可能包含訊息傳遞基序，稱為基於免疫受體酪胺酸活化基序或ITAM。
在本文CAR中特別使用的含有ITAM的主要細胞質訊息傳遞序列的實例包括那些衍生自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的主要細胞質訊息傳遞序列。特別較佳地，在本文CAR中的細胞質訊息傳遞分子包括來自於CD3ζ的細胞質訊息傳遞序列。
在一較佳實施方案中，CAR的細胞質結構域是被設計成包括一含有ITAM的主要細胞質訊息傳遞序列結構域 (例如CD3ζ的結構域) 本身或其與任何其他可用於本文CAR之所需的細胞質結構域的組合。舉例而言，CAR的細胞質結構域可以包括CD3ζ鏈部分以及共刺激訊息傳遞區。
共刺激訊息傳遞區是指含有共刺激分子之胞內結構域的CAR的一部分。共刺激分子是淋巴細胞對抗原產生有效反應所需的抗原受體或其配體以外的細胞表面分子。此類分子的實例包括CD27、CD28、4-1BB (CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3，以及可與CD83、DAP10、GITR等特異性結合的配體。
在本文CAR的細胞質訊息傳遞部分內的細胞質訊息傳遞序列能夠以隨機或指定的順序彼此連接。視情況地，長度較佳為2至10個胺基酸之間的短寡或多肽連接子可以形成連接。甘胺酸-絲胺酸二聯體提供了特別合適的連接子。
在一實施方案中，細胞質結構域包含CD3ζ的訊息傳遞結構域以及CD28的訊息傳遞結構域。在一些實施方案中，CD3ζ的訊息傳遞結構域包括胺基酸序列RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO:168)。在一些實施方案中，CD28的訊息傳遞結構域包括胺基酸序列RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEQ ID NO:169)。
在另一實施方案中，細胞質結構域包含CD3ζ的訊息傳遞結構域以及4-1BB的訊息傳遞結構域。
在另一實施方案中，細胞質結構域包含CD3ζ的訊息傳遞結構域以及CD2的訊息傳遞結構域。在一些實施方案中，CD2的訊息傳遞結構域包括胺基酸序列TKRKKQRSRRNDEELETRAHRVATEERGRKPHQIPASTPQNPATSQHPPPPPGHRSQAPSHRPPPPGHRVQHQPQKRPPAPSGTQVHQQKGPPLPRPRVQPKPPHGAAENSLSPSSN (SEQ ID NO:217)。
在另一實施方案中，細胞質結構域包含CD3ζ的訊息傳遞結構域、CD28的訊息傳遞結構域以及CD2的訊息傳遞結構域。
在另一實施方案中，細胞質結構域包含CD3ζ的訊息傳遞結構域、4-1BB的訊息傳遞結構域以及CD2的訊息傳遞結構域。
在細胞質結構域中包含CD2訊息傳遞結構域可允許調節CAR T細胞的細胞激素產生 (參見美國專利號9,783,591，其全部內容透過引用併入本文)。如美國專利號9,783,591所公開，在CAR細胞質結構域中包含CD2訊息傳遞結構域顯著改變了CAR T細胞的細胞激素在正向和負向的產生，其效果取決於在細胞質結構域的共刺激訊息傳遞區中其他共刺激分子的存在和特性。舉例而言，在一些實施方案中，在細胞質結構域的共刺激訊息傳遞區中包含CD2訊息傳遞結構域和CD28訊息傳遞結構域可導致相對於表現具有CD28而非CD2的CAR T細胞釋放顯著更少的IL2。釋放較少IL2的CAR T細胞可導致免疫抑制性Treg細胞的增殖減少。在一些實施方案中，在細胞質結構域的共刺激訊息傳遞區中包含CD2訊息傳遞結構域顯著降低了CAR T細胞中的鈣內流。這已被證明可以減少活化誘導的CAR T細胞死亡。 5.4 嵌合T細胞受體
本文提供了含有本文所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的嵌合T細胞受體 (TCR)。嵌合TCR提供了抗醣-MUC4特異性抗體以及特異性結合抗醣-MUC4的TCR嵌合體，並且能夠募集至少一個TCR相關訊息傳遞分子 (例如CD3γε、CD3δε和ζ ζ)。在一些實施方案中，嵌合TCR包含一個或多個能夠結合醣-MUC4的抗原結合片段。抗原結合片段的實例包括例如但不限於Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、單鏈Fv片段 (scFv) 以及單結構域片段。在一些實施方案中，嵌合T細胞受體的抗原結合片段包含本文所述的至少一個抗醣-MUC4可變重鏈以及至少一個抗醣-MUC4可變輕鏈。
TCR是以αβ異二聚體或γδ異二聚體的形式出現，故T細胞在細胞表面上表現αβ形式或γδ形式的TCR。這四條鏈 (α、β、γ、δ) 各自具有特徵性的細胞外結構，該結構是由高度多型性的類「免疫球蛋白可變區」N端結構域和類「免疫球蛋白穩定區」第二結構域所組成。這些結構域中的每一個都具有特徵性的結構域內雙硫鍵。穩定區是靠近細胞膜，其後是連接肽、跨膜區和短細胞質尾。在異二聚體TCR的二條鏈之間所形成的共價鍵結，其是透過位在用於連接胞外穩定結構域與跨膜區的短連接肽序列內的半胱胺酸殘基與成對的TCR鏈相應位置上的半胱胺酸殘基彼此形成雙硫鍵 (Lefranc和Lefranc，「T細胞受體概況」，Academic Press，2001年)。
嵌合TCR的幾個例子是本領域已知的。參見例如Kuwana et al., Biochem Biophys Res Commun. 149(3):960-968；Gross et al., 1989, Proc Natl Acad Sci USA. 86:10024-10028；Gross & Eshhar, 1992, FASEB J. 6(15):3370-3378；Liu et al., 2021, Sci Transl Med, 13:eabb5191；WO 2016/187349；WO 2017/070608；WO 2020/029774以及美國專利號7,741,465，每個文件的內容均透過引用全部併入本文。
嵌合TCR通常包括含有第一TCR結構域的第一多肽鏈、含有第二TCR結構域的第二多肽鏈以及本文所述的抗醣-MUC4抗原結合片段。在一些實施方案中，嵌合TCR包括單個抗醣-MUC4抗原結合片段。在其他實施方案中，嵌合TCR包括二個或更多個抗醣-MUC4抗原結合片段。在某些實施方案中，嵌合TCR包括二個抗醣-MUC4抗原結合片段。
在一些實施方案中，抗醣-MUC4抗原結合片段是本文所述的scFv。在嵌合TCR包括單個抗醣-MUC4抗原結合片段的實施方案中，單個抗醣-MUC4 scFv可以被包括在嵌合TCR的第一多肽鏈或第二多肽鏈中。在嵌合TCR包括例如二個抗醣-MUC4抗原結合片段的實施方案中，二個抗醣-MUC4 scFv可以被包括在嵌合TCR的第一多肽鏈或第二多肽鏈中，或者第一scFv可以被包含在第一多肽鏈中，第二scFv可以被包含在第二多肽鏈中。在二個scFv是被包含在嵌合TCR的第一多肽鏈或第二多肽鏈之一的實施方案中，二個scFv可以是透過肽連接子來連接。在一些實施方案中，嵌合TCR包含二個或更多個具有相同胺基酸序列的抗醣-MUC4 scFv。在其他實施方案中，嵌合TCR包含二個或更多個具有不同胺基酸序列的抗醣-MUC4 scFv。
在其他實施方案中，抗醣-MUC4抗原結合片段是Fv片段。在一些實施方案中，本文所述的抗醣-MUC4可變重鏈 (VH) 是被包含在相互連結以形成嵌合TCR的二條多肽鏈之其中一條中。本文所述的抗醣-MUC4可變輕鏈 (VL) 可以被包含在不含有抗醣-MUC4 VH的多肽鏈中。當第一多肽鏈和第二多肽鏈二聚化時，抗醣-MUC4 VH和VL會聚集在一起以形成抗醣-MUC4 Fv片段。在一些實施方案中，VH是被包含在第一多肽鏈中，且VL是被包含在第二多肽鏈中。在其他實施方案中，VH是被包含在第二多肽鏈中，且VL是被包含在第一多肽鏈中。
在其他實施方案中，抗醣-MUC4抗原片段是Fab-結構域，包括VH、VL、CH1和CL結構域。在一些實施方案中，本文所述的抗醣-MUC4可變重鏈 (VH) 和CH1結構域是被包括在第一或第二多肽鏈中。在一些實施方案中，本文所述的抗醣-MUC4可變輕鏈 (VL) 和CL結構域是被包括在不含有抗醣-MUC4 VH與CH1的第一或第二多肽鏈中。在其他實施方案中，抗醣-MUC4可變重鏈 (VH) 和CL結構域是被包括在第一或第二多肽鏈中。在一些實施方案中，抗醣-MUC4可變輕鏈 (VL) 和CH1結構域是被包括在不含有抗醣-MUC4 VH與CL的多肽鏈中。當第一多肽鏈和第二多肽鏈二聚化時，抗醣-MUC4 VH與VL，以及CH1與CL會結合在一起以形成抗醣-MUC4 Fab結構域。在一些實施方案中，VH和CH1或CL是被包含在第一多肽鏈中，VL和CL或CH1是被包含在第二多肽鏈中。在其他實施方案中，VH和CH1或CL是被包含在第二多肽鏈中，VL和CH1或CL是被包含在第一多肽鏈中。
在其他實施方案中，抗醣-MUC4 VH和CH1或CL是被包含在第二多肽鏈的第一多肽鏈中，並且嵌合TCR進一步包括含有VL和CL結構域或CHl結構域的第三多肽。第三多肽能夠與第一或第二多肽鏈的VH和CH1或CL結合，從而形成Fab結構域。在一些實施方案中，第一和第二多肽鏈都包括VH和CH1結構域或CL結構域。在第一和第二多肽鏈均包括VH和CH1或CL的情況下，包含VL和CL或CH1的第三多肽可與第一多肽鏈結合以形成第一Fab結構域，並且包含VL和CL或CH1的第四多肽可與第二多肽鏈結合以形成第二Fab結構域。
第一和第二TCR結構域分別是被包含在第一和第二多肽鏈中，第一TCR結構域包括來自於第一TCR次單元的第一TCR跨膜結構域，第二TCR結構域包括來自於第二TCR次單元的第二TCR跨膜結構域。在一些實施方案中，第一TCR次單元是TCRα鏈，且第二TCR次單元是TCRβ鏈。在其他實施方案中，第一TCR次單元是TCRβ鏈，且第二TCR次單元是TCRα鏈。在一些實施方案中，第一TCR次單元是TCRγ鏈，且第二TCR次單元是TCRδ鏈。在其他實施方案中，第一TCR次單元是TCRδ鏈，且第二TCR次單元是TCRγ鏈。來自於TCR次單元的TCR跨膜結構域可以是天然TCR跨膜結構域、其天然或經工程化變體、或天然或變體TCR跨膜結構域的片段。在一些實施方案中，第一和/或第二TCR跨膜結構域分別包括在WO 2017/070608的SEQ ID NO:77至80之一中所包含的TCR跨膜結構域的胺基酸序列，其以引用方式全部併入本文。在其他實施方案中，第一和/或第二TCR跨膜結構域分別包括在WO 2017/070608的SEQ ID NO:1至4之一中的胺基酸序列。
在一些實施方案中，除了第一和第二TCR跨膜結構域之外，第一和第二TCR結構域還分別包括第一和第二連接肽。第一和第二連接肽是分別位於第一和第二TCR跨膜結構域的N端。在一些實施方案中，第一連接肽包含第一TCR次單元的連接肽的全部或部分，和/或第二連接肽包含第二TCR次單元的連接肽的全部或部分。在一些實施方案中，第一跨膜結構域和第一連接肽是衍生自不同的TCR次單元，和/或第二跨膜結構域和第二連接肽是衍生自不同的TCR次單元。來自於TCR次單元的連接肽可以是天然TCR連接肽、其天然或經工程化變體、或天然或變體TCR連接肽的片段。在一些實施方案中，第一和/或第二連接肽分別包括在WO 2017/070608的SEQ ID NO:77至80之一中所包含的連接肽的胺基酸序列。在其他實施方案中，第一和/或第二連接肽分別包括在WO 2017/070608的SEQ ID NO:5至12之一中的胺基酸序列。
在一些實施方案中，第一和第二TCR結構域分別包含第一和第二TCR穩定結構域。第一和第二TCR穩定結構域是分別位於第一和第二TCR跨膜結構域的C端。如果第一和/或第二TCR結構域包括TCR連接肽，則TCR穩定結構域可以位於TCR連接肽的C端。在一些實施方案中，第一TCR穩定結構域包含第一TCR次單元的穩定結構域的全部或一部分，和/或第二TCR穩定結構域包含第二TCR次單元的穩定結構域的全部或一部分。舉例而言，在一些實施方案中，第一和/或第二TCR穩定結構域是衍生自TCRα和β次單元穩定結構域，或TCRγ和δ次單元穩定結構域。來自於TCR次單元的TCR穩定結構域可以是天然TCR細胞內穩定結構域、其天然或經工程化變體、或天然或變體TCR穩定結構域的片段。在一些實施方案中，第一和/或第二TCR穩定結構域分別包含SEQ ID NO:172、174、176、178、180或182的胺基酸序列，或其野生型等價物。
在一些實施方案中，第一和第二TCR結構域分別包含第一和第二TCR胞內結構域。第一和第二TCR胞內結構域是分別位於第一和第二TCR跨膜結構域的C端。在一些實施方案中，第一TCR胞內結構域包含第一TCR次單元的胞內結構域的全部或一部分，和/或第二TCR胞內結構域包含第二TCR次單元的胞內結構域的全部或一部分。來自於TCR次單元的TCR胞內結構域可以是天然TCR胞內結構域、其天然或經工程化變體、或天然或變體TCR胞內結構域的片段。在一些實施方案中，第一和/或第二TCR胞內結構域分別包括在WO 2017/070608的SEQ ID NO:77至80之一中所包含的TCR胞內結構域的胺基酸序列。在其他實施方案中，第一和/或第二TCR胞內結構域分別包括在WO 2017/070608的SEQ ID NO:13至14之一中的胺基酸序列。
在一些實施方案中，嵌合TCR的第一多肽鏈還包含第一TCR跨膜結構域C端的第一輔助胞內結構域，和/或嵌合TCR的第二多肽鏈還包含第二跨膜結構域C端的第二輔助胞內結構域。在一些實施方案中，第一和/或第二輔助胞內結構域包含TCR共刺激結構域。在一些實施方案中，TCR共刺激結構域包含WO 2017/070608中SEQ ID NO:70或71的胺基酸序列的全部或一部分。
在一些實施方案中，第一TCR結構域是第一TCR次單元的片段，和/或第二TCR次單元是第二TCR次單元的片段。
形成嵌合TCR的第一和第二多肽鏈是相連接的。在一些實施方案中，形成嵌合TCR的第一和第二多肽鏈是透過雙硫鍵連接。在一些實施方案中，形成嵌合TCR的第一和第二多肽鏈是透過第一連接肽中的殘基與第二連接肽中的殘基之間的雙硫鍵連接。
在一些實施方案中，第一和第二多肽鏈是相連接的或以其他方式結合的。在一些實施方案中，相關的第一和第二多肽鏈能夠募集至少一個TCR相關的訊息傳遞結構，例如CD3δε、CD3γε和ζζ。在某些實施方案中，相關的第一和第二多肽鏈能夠募集CD3δε、CD3γε和ζζ中的每一個，以形成TCR-CD3複合體。
在一些實施方案中，第一多肽鏈包括在第一TCR結構域與被包含在第一多肽鏈中的scFv、Fv或Fab片段的抗醣-MUC4 VH或VL之間的第一連接子。在一些實施方案中，第二多肽鏈包括在第二TCR結構域與被包含在第二多肽鏈中的scFv、Fv或Fab片段的抗醣-MUC4 VH或VL之間的第二連接子。在一些實施方案中，第一肽連接子和/或第二肽連接子包含約5至約70個胺基酸。在一些實施方案中，第一和/或第二連接子包括來自於免疫球蛋白或T細胞受體次單元的穩定結構域或其片段。在一些實施方案中，第一和/或第二連接子包括免疫球蛋白穩定結構域或其片段。舉例而言，在上述那些包含CH1或CL結構域的實施方案中，CH1或CL結構域可作為在TCR結構域與抗醣-MUC4結合片段或其子部分 (例如VH或VL) 之間的連接子。除了CH1或CL之外，免疫球蛋白穩定結構域還可以是CH2、CH3或CH4結構域或其片段。免疫球蛋白穩定結構域可以衍生自IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA (例如IgA1或IgA2)、IgD、IgM或IgE重鏈。在一些實施方案中，穩定結構域可以衍生自人類IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA (例如IgA1或IgA2)、IgD、IgM或IgE重鏈。在其他實施方案中，上述TCR穩定結構域或其片段可作為在TCR結構域與抗醣-MUC4結合片段或其子部分 (例如VH或VL) 之間的連接子。在一些實施方案中，第一和第二連接子能夠相互結合。
在一些實施方案中，第一和第二多肽鏈至少暫時地透過可裂解肽連接子連接。在一些實施方案中，可裂解肽連接子是弗林蛋白酶-p2A (furin-p2A) 可裂解肽。可裂解肽連接子可以促進二條多肽鏈的表現。可裂解肽連接子可以被配置為在蛋白質轉譯期間和/或之後不久暫時將第一多肽鏈與第二多肽鏈連接。
在一些實施方案中，嵌合TCR是合成的T細胞受體和抗原受體 (synthetic T cell receptor and antigen receptor，STAR)，如Liu et al., 2021, Sci Transl Med和WO 2020/029774中所述，每篇的內容在此透過引用全部併入本文。
在一些方面，STAR包括從N端到C端的含有抗醣-MUC4可變重鏈和TCRα鏈穩定區結構域的第一多肽鏈；可裂解肽連接子；以及含有抗醣-MUC4可變輕鏈和TCRβ穩定區結構域的第二多肽鏈 (配置STAR 1)。
在其他方面，STAR包括從N端到C端的含有抗醣-MUC4可變重鏈和TCRβ鏈穩定區結構域的第一多肽鏈；可裂解肽連接子；以及含有抗醣-MUC4可變輕鏈和TCRα穩定區結構域的第二多肽鏈 (配置STAR 2)。
在其他方面，STAR包括從N端到C端的含有抗醣-MUC4可變輕鏈和TCRα鏈穩定區結構域的第一多肽鏈；可裂解肽連接子；以及含有抗醣-MUC4可變重鏈和TCRβ穩定區結構域的第二多肽鏈 (配置STAR 3)。
在其他方面，STAR包括從N端到C端的含有抗醣-MUC4可變輕鏈和TCRβ鏈穩定區結構域的第一多肽鏈；可裂解肽連接子；以及含有抗醣-MUC4可變重鏈和TCRα穩定區結構域的第二多肽鏈 (配置STAR 4)。
在某些實施方案中，配置STAR 1至STAR 4中任一種配置的TCRα鏈穩定區結構域和TCRβ鏈穩定區結構域可以分別被TCRγ和TCRδ穩定區結構域所替代。
本文的嵌合TCR可以與T細胞內源性表現的TCR相關訊息傳遞分子 (例如CD3γε、CD3δε和ζζ) 形成複合體。這些複合體可提供由其標靶結合抗醣MUC4重鏈和輕鏈可變鏈所控制的TCR訊息傳遞。
本文的嵌合TCR進一步描述於編號為490至584的實施方案中。 5.4.1. TCR穩定結構域
關於TCR穩定結構域，嵌合TCR可以被設計成包括源自於例如人類周邊血液T細胞的穩定區。表5提供了用於根據本文的嵌合TCR中的TCR穩定區的核苷酸以及相應胺基酸序列。
表5 TCR穩定區的核苷酸和胺基酸序列
描述 序列 SEQ ID NO:
TCRα穩定區 – 核酸 (人類) gatatccagaaccctgaccctgctgtctatcaactccgggactctaaatccagtgacaagtctgtctgcctattcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggattctgatgtgtatatcacagacaaatgtgtgctagacatgaggtctatggacttcaagagcaacagtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgcaaacgccttcaacaacagcattattccagaagacaccttcttccccagcccagaaagttcctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacgaacctaaactttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaaagtggccgggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc 170
TCRα穩定區 – 胺基酸 (人類) XIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKCVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS X = Asp、Asn、His、Tyr 171
TCRα穩定區 – 核酸(鼠類)；半胱胺酸突變體 aatatccagaacccagaacctgctgtgtaccagttaaaagatcctcggtctcaggacagcaccctctgcctgttcaccgactttgactcccaaatcaatgtgccgaaaaccatggaatctggaacgttcatcactgacaaaactgtgctggacatgaaagctatggattccaagagcaatggggccattgcctggagcaaccagacaagcttcacctgccaagatatcttcaaagagaccaacgccacctaccccagttcagacgttccctgtgatgccacgttgactgagaaaagctttgaaacagatatgaacctaaactttcaaaacctgtcagttatgggactccgaatcctcctgctgaaagtagccggatttaacctgctcatgacgctgaggctgtggtccagttga 172
TCRα穩定區 – 胺基酸 (鼠類)；半胱胺酸突變體 XIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKTVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS X在1，X =Asp、Asn、His、Tyr 173
TCRβ穩定區 – 核酸 (人類) gaggacctgaaaaacgtgttcccacccgaagtggccgtcttcgaaccatcagaagcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttcttccccgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtggggtctgcacagacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacccgtcacccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggctttacctcggtgtcctaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcctgctagggaaggccaccctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgatggccatggtcaagagaaaggatttc 174
TCRβ穩定區 – 胺基酸 (人類) EDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKD 175
TCRβ穩定區 – 核酸 (鼠類)；半胱胺酸突變體 gaggatctgagaaatgtgactccacccaaggtctccttgtttgagccatcaaaagcagagattgcaaacaaacaaaaggctaccctcgtgtgcttggccaggggcttcttccctgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatggcaaggaggtccacagtggggtcagcacggaccctcaggcctacaaggagagcaattatagctactgcctgagcagccgcctgagggtctctgctaccttctggcacaatcctcgcaaccacttccgctgccaagtgcagttccatgggctttcagaggaggacaagtggccagagggctcacccaaacctgtcacacagaacatcagtgcagaggcctggggccgagcagactgtgggattacctcagcatcctatcaacaaggggtcttgtctgccaccatcctctatgagatcctgctagggaaagccaccctgtatgctgtgcttgtcagtacactggtggtgatggctatggtcaaaagaaagaattca 176
TCRβ穩定區 – 胺基酸 (鼠類)；半胱胺酸突變體 EDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNS 177
TCRγ穩定區 – 胺基酸 (人類) DKQLDADVSPKPTIFLPSIAETKLQKAGTYLCLLEKFFPDVIKIHWQEKKSNTILGSQEGNTMKTNDTYMKFSWLTVPEKSLDKEHRCIVRHENNKNGVDQEIFPPIKTDVITMDPKDNCSKDANDTLLLQLTNTSAYYMYLLLLLKSVVYFAIITCCLLRRTAFCCNGEKS 178
TCRγ穩定區 – 胺基酸 (鼠類) XKRLDADISPKPTIFLPSVAETNLHKTGTYLCLLEKFFPDVIRVYWKEKDGNTILDSQEGDTLKTNDTYMKFSWLTVPERAMGKEHRCIVKHENNKGGADQEIFFPSIKKVAVSTKPTTCWQDKNDVLQLQFTITSAYYTYLLLLKSVIYLAIISFSLLRRTSVCGNEKKS X = 任何天然存在的胺基酸 179
TCRδ穩定區 – 胺基酸 (人類) SQPHTKPSVFVMKNGTNVACLVKEFYPKDIRINLVSSKKITEFDPAIVISPSGKYNAVKLGKYEDSNSVTCSVQHDNKTVHSTDFEVKTDSTDHVKPKETENTKQPSKSCHKPKAIVHTEKVNMMSLTVLGLRMLFAKTVAVNFLLTAKLFFL 180
TCRδ穩定區 – 胺基酸 (鼠類) XSQPPAKPSVFIMKNGTNVACLVKDFYPKEVTISLRSSKKIVEFDPAIVISPSGKYSAVKLGQYGDSNSVTCSVQHNSETVHSTDFEPYANSFNNEKLPEPENDTQISEPCYGPRVTVHTEKVNMMSLTVLGLRLLFAKTIAINFLLTVKLFF X = 任何天然存在的胺基酸 181
在某些實施方案中，可以修飾嵌合TCR的TCR穩定區以在嵌合TCR的二個TCR穩定結構域之間提供額外的鍵。在一些實施方案中，對應於野生型人類TCRα穩定結構域之位置48的殘基是被突變成半胱胺酸，並且對應於野生型人類TCRβ穩定結構域之位置57的殘基是被突變成半胱胺酸。這導致在TCRα與TCRβ穩定結構域之間形成雙硫鍵結，從而在嵌合TCR的第一與第二多肽鏈之間形成雙硫鍵。在一些實施方案中，對應於野生型人類TCRα穩定結構域之位置85的殘基是被突變成丙胺酸，並且對應於野生型人類TCRβ穩定結構域之位置88的殘基是被突變成甘胺酸。同樣地，這導致在TCRα與TCRβ穩定結構域之間形成雙硫鍵結。 5.4.2. 可裂解連接子
本文的嵌合TCR的二條多肽鏈可以是透過肽連接子連接。在一些實施方案中，嵌合TCR的二條多肽鏈是透過弗林蛋白酶-P2A (furin-P2A) 肽連接子連接，其在二條多肽鏈之間提供了蛋白酶裂解位點。因此二條多肽鏈可以被轉錄和轉譯成融合蛋白，隨後被蛋白酶裂解成二個不同的蛋白質次單元。在一些實施方案中，所得到的二個蛋白質次單元是透過雙硫鍵共價結合，隨後與T細胞的內源性CD3次單元 (ε、δ、λ和ζ) 形成複合體。
在一些實施方案中，弗林蛋白酶-P2A肽連接子包含序列RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO:199)。
在一些實施方案中，弗林蛋白酶-P2A肽連接子包含序列ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO:200)。 5.5 MicAbodies
本文提供了包含本文的抗醣-MUC4抗體和抗原結合片段的MicAbodies。MicAbodies是包含抗體或抗原結合片段以及經工程化第一型MHC鏈相關 (MIC) 蛋白結構域的融合蛋白。MIC蛋白是表現在NK細胞表面的人類NKG2D受體的天然配體，並且MIC蛋白的α1-α2結構域為NKG2D受體提供了結合位點。透過將經工程化MIC蛋白結構域 (例如經工程化α1-α2結構域) 與癌症標靶抗體或抗原結合片段融合，使得表現能夠與經工程化MIC蛋白結構域相結合的經工程化NKG2D受體的T細胞可以靶向癌細胞。可以被包含在本文的MicAbodies中的經工程化MIC蛋白結構域，以及能夠結合經工程化MIC蛋白結構域的NKG2D受體、包含NKG2D受體的CAR和CAR T細胞已描述於美國專利公開號US 2011/0183893、US 2011/0311561、US 2015/0165065 US 2016/0304578以及PCT公開號WO 2016/090278、WO 2017/024131、WO 2017/222556和WO 2019/191243，其內容透過引用全部併入本文。
在一些實施方案中，本文的MicAbodies包括與NKG2D配體 (例如MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5、ULBP6或OMCP) 的α1-α2結構域至少80％相同或同源的α1-α2結構域。MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5、ULBP6和OMCP的例示性胺基酸序列分別如WO 2019/191243中的SEQ ID NO:1至9所示，其序列透過引用併入本文。在其他實施方案中，α1-α2結構域與NKG2D配體的天然或自然α1-α2結構域是85%相同。在又一些實施方案中，α1-α2結構域與自然NKG2D配體蛋白的天然或自然α1-α2結構域是90%相同，並可結合非自然NKG2D。
在一些實施方案中，本文的MicAbody包括與人類MICA或MICB蛋白的天然或自然α1-α2結構域至少80%相同或同源且可結合NKG2D的α1-α2結構域。在一些實施方案中，α1-α2結構域與人類MICA或MICB蛋白的天然或自然α1-α2結構域是85％相同，並可結合NKG2D。在其他實施方案中，α1-α2結構域與人類MICA或MICB蛋白的天然或自然α1-α2平台結構域是90%、95%、96%、97%、98%或99%相同，並可結合NKG2D。
在一些實施方案中，NKG2D配體的α1-α2結構域中的特定突變能產生可結合非天然NKG2D受體的非天然α1-α2結構域，其本身經工程化而對天然NKG2D配體具有降低的親和力。舉例而言，這可以透過基因工程來完成。經如此修飾的非天然NKG2D受體可用於在免疫系統的NK或T細胞表面產生基於NKG2D的CAR，該CAR可優先結合由非天然α1-α2結構域組成的分子並被其活化。與傳統的CAR-T細胞和CAR-NK細胞相比，這些成對的非天然NKG2D受體與其同源非天然NKG2D配體可以為治療癌症和病毒感染提供重要的安全性、有效性和製造優勢。具有基於NKG2D的CAR的CAR-T細胞和CAR-NK細胞的活化可以透過施用MicAbody來控制。如果發生不良事件，可以調整MicAbody的給藥方案，而不必部署誘導性自殺機制來破壞經輸入的CAR細胞。
可以透過由連接子例如APTSSSGGGGS (SEQ ID NO:182) 或GGGS (SEQ ID NO:183) 將抗體或抗原結合片段連接至經工程化的α1-α2結構域來產生MicAbodies。舉例而言，α1-α2結構域可以被融合到IgG重鏈或輕鏈的C端，舉例像是WO 2019/191243中所述。
在一些實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGWGTTLLMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETLEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMETDIGYRLMRADCLSELRRYLKSGVVLRRTV (SEQ ID NO:184) (MICA25.17)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGWGTFLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETLEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMETDRSGLLMRADCLSELRRYLKSGVVLRRTV (SEQ ID NO:185) (MICA25.18)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列AAEPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATTLYTWSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPSAGAP (SEQ ID NO:186) (ULBP2.S1)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列AAEPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATLMRIWSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPSAGAP (SEQ ID NO:187) (ULBP2.S2)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列AAEPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATKLYLWSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPSAGAP (SEQ ID NO:188) (ULBP2.S3)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列AAEPHSLWYNFTIIHLPRHGQQWCEVQSQVDQKNFLSYDCGSDKVLSMGHLEEQLYATDAWGKQLEMLREVGQRLRLELADTELEDFTPSGPLTLQVRMSCESEADGYIRGSWQFSFDGRKFLLFDSNNRKWTVVHAGARRMKEKWEKDSGLTTDLIRRSMGDCKSWLRDFLMHRKKRLEPTAP (SEQ ID NO:189) (ULBP3.S1)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列AAEPHSLWYNFTIIHLPRHGQQWCEVQSQVDQKNFLSYDCGSDKVLSMGHLEEQLYATDAWGKQLEMLREVGQRLRLELADTELEDFTPSGPLTLQVRMSCESEADGYIRGSWQFSFDGRKFLLFDSNNRKWTVVHAGARRMKEKWEKDSGLTTYFYLRSMGDCKSWLRDFLMHRKKRLEPTAP(SEQ ID NO:190) (ULBP3.S2)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列EPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATILWQTSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPS (SEQ ID NO:191) (ULBP2.C)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列EPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATLLWGWSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPS (SEQ ID NO:192) (ULBP2.R)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列EPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATMFWSWSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPS (SEQ ID NO:193) (ULBP2.AA)。
在其他實施方案中，本文的MicAbodies包括經工程化的α1-α2結構域，該α1-α2結構域包含胺基酸序列EPHSLSYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTTAWKAQNPVLREVVDILTEQLWDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSFDGQIFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKVVATLMWQWSMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPS (SEQ ID NO:194) (ULBP2.AB)。
例示性經工程化NKG2D受體包括胺基酸序列NSLFNQEVQIPLTESYCGPCPKNWICYKNNCYQFFDESKNWYESQASCMSQNASLLKVYSKEDQDLLKLVKSYHWMGLVHIPTNGSWQWEDGSILSPNLLTIIEMQKGDCALYASSFKGYIENCSTPNTYICMQRTV (SEQ ID NO:195)，其中位置73處的酪胺酸已被另一胺基酸例如丙胺酸所取代。
另一例示性經工程化NKG2D受體包括胺基酸序列FLNSLFNQEVQIPLTESYCGPCPKNWICYKNNCYQFFDESKNWYESQASCMSQNASLLKVYSKEDQDLLKLVKSYHWMGLVHIPTNGSWQWEDGSILSPNLLTIIEMQKGDCALYASSFKGYIENCSTPNTYICMQRTV (SEQ ID NO:196)，其中位置75和122處的酪胺酸已被另一胺基酸所取代，例如丙胺酸 (位置75處) 和苯丙胺酸 (位置122處)。 5.6 核酸、重組載體和宿主細胞
本文內容包括編碼用於抗醣-MUC4抗體的免疫球蛋白輕鏈和重鏈基因的核酸分子、包含此核酸的載體以及能夠產生本文的抗醣-MUC4抗體的宿主細胞。在某些方面，核酸分子可編碼並且宿主細胞能夠表現本文的抗醣-MUC4抗體和抗體結合片段 (例如，如第5.1節和編號為1至414的實施方案中所述) 和融合蛋白 (例如，如編號為421至445的實施方案中所述)、嵌合抗原受體 (例如，如第5.3節和編號為446至479的實施方案中所述) 以及包含上述這些的嵌合T細胞受體 (例如，如第5.4節和編號為490至584的實施方案中所述)。本文的例示性核酸是描述在實施方案585和586中，本文的例示性載體是描述在實施方案587至589中，並且本文的例示性宿主細胞是描述在實施方案590至596中。
本文的抗醣-MUC4抗體可以透過在宿主細胞中重組表現免疫球蛋白輕鏈和重鏈基因來製備。為了重組表現抗體，利用一個或多個重組表現載體來轉染宿主細胞，該載體攜帶可編碼抗體的免疫球蛋白輕鏈和重鏈的DNA片段，使得輕鏈和重鏈在宿主細胞中表現，並且視情況地分泌到培養宿主細胞的培養基中，可以從此培養基中回收抗體。使用標準重組DNA方法來獲得抗體重鏈和輕鏈基因，將這些基因整合到重組表現載體中，並將載體引入到宿主細胞中，例如這些方法描述在分子選殖: 實驗室手冊，第二版 (Sambrook、Fritsch和Maniatis (eds)，Cold Spring Harbor，紐約，1989)、分子生物學的當今方案 (Ausubel, FM等人，eds.，Greene Publishing Associates，1989) 和美國專利號4,816,397中。
為了產生編碼此抗醣-MUC4抗體的核酸，首先要取得編碼輕鏈和重鏈可變區的DNA片段。這些DNA可以透過例如使用聚合酶連鎖反應 (PCR) 來擴增和修飾編碼輕鏈和重鏈可變序列的生殖系DNA或cDNA來獲得。人類重鏈和輕鏈可變區基因的生殖系DNA序列是本領域已知的 (參見例如The “VBASE” human germline sequence database；亦參見Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242；Tomlinson et al., 1992, J. Mol. Biol. 22T:116-198；以及Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836；其中每一文件的內容都透過引用併入本文)。
一旦獲得編碼抗醣-MUC4抗體相關V H和V L區段的DNA片段，這些DNA片段可以透過標準重組DNA技術進一步人工操作，例如將可變區基因轉化為全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。在這些人工操作中，編碼V H或V L的DNA片段是可操作地連接到另一可編碼另一蛋白質的DNA片段，例如抗體穩定區或彈性連接子。如本文所用，術語「可操作地連接」旨在表示二個DNA片段是相連的，使得由此二個DNA片段所編碼的胺基酸序列可保持為同框的 (in-frame)。
透過將編碼V H的DNA與另一編碼重鏈穩定區 (CH 1、CH 2、CH 3和視情況地CH 4) 的DNA分子可操作地連接在一起，使得編碼V H區的經分離DNA可以轉化成全長重鏈基因。人類重鏈穩定區基因的序列是本領域已知的 (參見例如Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) 以及包含這些區域的DNA片段可以透過標準PCR擴增而獲得。重鏈穩定區可以是IgG 1、IgG 2、IgG 3、IgG 4、IgA、IgE、IgM或IgD穩定區，但在某些實施方案中是IgG 1或IgG 4穩定區。就Fab片段重鏈基因而言，編碼V H的DNA可以與僅編碼重鏈CH1穩定區的另一DNA分子可操作地連接在一起。
透過將編碼V L的DNA與另一編碼輕鏈穩定區CL的DNA分子可操作地連接在一起，使得編碼V L區的經分離DNA可以轉化成全長輕鏈基因 (以及Fab輕鏈基因)。人類輕鏈穩定區基因的序列是本領域已知的 (參見例如Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) 以及包含這些區域的DNA片段可以透過標準PCR擴增而獲得。輕鏈穩定區可以是κ或λ穩定區，但在某些實施方案中是κ穩定區。
為了產生scFv基因，可以將編碼V H和V L的DNA片段可操作地連接到另一編碼彈性連接子的片段，例如編碼胺基酸序列 (Gly4~Ser) 3，使得V H和V L序列可以被表現成連續的單鏈蛋白，其中V H和V L區是由彈性連接子所連接 (參見例如Bird et al., 1988, Science 242:423-426；Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554)。
為了表現本文的抗醣-MUC4抗體，可將如上所述獲得的編碼部分或全長輕鏈和重鏈的DNA插入到表現載體中，使得基因與轉錄和轉譯控制序列可操作地連接在一起。在本文中，術語「可操作地連接」旨在表示抗體基因是被連接到載體中，使得載體內的轉錄和轉譯控制序列可發揮其調節抗體基因轉錄和轉譯的預期功能。選擇表現載體和表現控制序列以與所使用的表現宿主細胞相容。可以將抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因插入到分別的載體中，或者更典型地，將二個基因都插入到相同的表現載體中。
可以透過標準方法將抗體基因插入到表現載體中 (例如連接抗體基因片段與載體上的互補限制位點，或者如果不存在限制位點，則進行平端連接)。在插入抗醣-MUC4抗體相關輕鏈或重鏈序列之前，表現載體可以已經攜帶了抗體穩定區序列。舉例而言，將抗醣-MUC4單株抗體相關的V H和V L序列轉化成全長抗體基因的一種方法是將它們分別插入到已經編碼重鏈穩定區和輕鏈穩定區的表現載體中，使得V H區段與載體內的CH區段可操作地連接在一起，而V L區段與載體內的CL區段可操作地連接在一起。另外或可替代地，重組表現載體可以編碼能促進抗體鏈從宿主細胞分泌的訊息肽。可以將抗體鏈基因選殖到載體中，以使訊息肽與抗體鏈基因的胺基端同框 (in-frame) 連接。訊息肽可以是免疫球蛋白訊息肽或異源訊息肽 (即來自於非免疫球蛋白的訊息肽)。
除了抗體鏈基因之外，本文的重組表現載體可攜帶調節序列，其能控制抗體鏈基因在宿主細胞中的表現。術語「調節序列」旨在包括可控制抗體鏈基因轉錄或轉譯的啟動子、增強子和其他表現控制元件 (例如多腺苷酸化訊號)。此種調節序列是描述例如在Goeddel的基因表達技術: 酵素學方法185，Academic Press, San Diego, Calif., 1990。本領域技術人員將理解到，表現載體的設計，包括調節序列的選擇，可能取決於諸如待轉殖宿主細胞的選擇、所需蛋白質的表現水平等因素。適合用於哺乳動物宿主細胞表現的調節序列包括可引導在哺乳動物細胞中高蛋白質表現水平的病毒元件，例如源自於巨細胞病毒 (CMV) (例如CMV啟動子/增強子)、猿猴病毒40 (SV40) (例如SV40啟動子/增強子)、腺病毒 (例如腺病毒主要晚期啟動子 (AdMLP)) 和多瘤病毒的啟動子和/或增強子。對於病毒調節元件及其序列的進一步描述，可參見例如Stinski的美國專利號5,168,062、Bell等人的美國專利號4,510,245以及Schaffner等人的美國專利號4,968,615。
除了抗體鏈基因和調節序列之外，本文的重組表現載體可以攜帶額外的序列，例如可調節載體在宿主細胞中複製的序列 (例如複製起點) 和可選擇標記基因。可選擇標記基因有助於選擇已引入載體的宿主細胞 (參見例如Axel等人的美國專利號4,399,216、4,634,665和5,179,017)。舉例而言，通常可選擇標記基可賦予已引入載體的宿主細胞對藥物如G418、潮黴素 (hygromycin) 或甲胺蝶呤 (methotrexate) 的抗性。合適的可選擇標記基因包括二氫葉酸還原酶 (DHFR) 基因 (用於DHFR陰性宿主細胞的methotrexate選擇/擴增) 和neo基因 (用於G418選擇)。關於輕鏈和重鏈的表現，可以透過標準技術將編碼重鏈和輕鏈的表現載體轉染到宿主細胞中。術語「轉染」的各種形式旨在涵蓋多種通常用於將外源性DNA引入到原核或真核宿主細胞內的技術，例如電穿孔、脂轉染、磷酸鈣沉澱、DEAE-葡聚醣轉染和相類似的。
可以在原核或真核宿主細胞中表現本文的抗體。在某些實施方案中，抗體的表現是在可最佳地分泌經適當折疊和免疫活性抗體的真核細胞中進行，例如哺乳動物宿主細胞。可用於表現本文的重組抗體的例示性哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢細胞 (CHO細胞) (包括DHFR陰性CHO細胞，描述於Urlaub和Chasin, 1980, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220，與DHFR可選擇標記一起使用，例如描述於Kaufman和Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞和SP2細胞。當將編碼抗體基因的重組表現載體引入到哺乳動物宿主細胞時，可透過將宿主細胞培養一段足夠長的時間，以允許抗體在宿主細胞中表現或抗體分泌到宿主細胞所生長的培養基中，進而產出抗體。可以使用標準蛋白質純化方法來從培養基中回收抗體。宿主細胞也可用於生產完整抗體的一部分，例如Fab片段或scFv分子。可以理解上述流程的變化也在本文的範圍內。舉例而言，可能需要用編碼本文的抗醣-MUC4抗體的輕鏈或重鏈 (但不是兩者) 的DNA來轉染宿主細胞。
對於本文的CAR的表現，例如如第5.3節和編號為446至479的實施方案中所述，優選的宿主細胞是T細胞，較佳為人類T細胞。在一些實施方案中，當宿主細胞與腫瘤細胞上的醣-MUC4交聯時，宿主細胞會表現出抗腫瘤免疫力。用於產生本文的T細胞的詳細方法描述在第5.6.1節中。
對於本文的嵌合TCR的表現，例如如第5.4節和編號為490至584的實施方案中所述，優選的宿主細胞是T細胞，較佳為人類T細胞。在一些實施方案中，當宿主細胞與腫瘤細胞上的醣-MUC4交聯時，宿主細胞會表現出抗腫瘤免疫力。用於產生本文的T細胞的詳細方法描述在第5.6.1節中。
重組DNA技術也可用於去除部分或全部可編碼輕鏈和重鏈中之一或二者的DNA，這對於與醣-MUC4結合不是必需的。此種截短的DNA分子所表現的分子也可被包括在本文的抗體中。
對於本文的抗醣-MUC4抗體的重組表現，宿主細胞可以用二個本文的表現載體進行共同轉染，第一載體可編碼重鏈衍生的多肽，第二載體可編碼輕鏈衍生的多肽。這二個載體可以包含相同的可選擇標記，或者它們可以各自包含一個單獨的可選擇標記。可替代地，可以使用可編碼重鏈和輕鏈多肽的單一載體。
一旦核酸編碼抗醣-MUC4抗體的一個或多個部分，可以將進一步的改變或突變引入到編碼序列中，例如進而產生可編碼具有不同CDR序列的抗體、對Fc受體親和力降低的抗體或不同亞類抗體的核酸。
本文的抗醣-MUC4抗體也可以透過化學合成 (例如透過Solid Phase Peptide Synthesis，第2版，1984，The Pierce Chemical Co.，Rockford, III中所描述的方法) 來產生。變體抗體也可以使用無細胞平台來產生 (參見例如Chu et al., Biochemia No. 2, 2001 (Roche Molecular Biologicals) 和 Murray et al., 2013, Current Opinion in Chemical Biology, 17:420 -426)。
一旦透過重組表現生成了本文的抗醣-MUC4抗體，其可以透過本領域已知用於純化免疫球蛋白分子的任何方法來進行純化，例如透過層析法 (例如離子交換、親和和尺寸柱層析法)、離心、差異溶解度或任何其他用於純化蛋白質的標準技術。此外，本文的抗醣-MUC4抗體和/或結合片段可以被融合至本文所述或本領域已知的異源多肽序列以促進純化。
一旦分離出來，如果有需要的話，可以將抗醣-MUC4抗體做進一步的純化，例如透過高效液相層析法 (參見例如Fisher，生物化學和分子生物學實驗室技術，Work and Burdon，eds.，Elsevier，1980)，或透過Superdex™ 75柱 (Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 進行凝膠過濾層析法。 5.6.1. T細胞中CAR和嵌合TCR的重組生產
在一些實施方案中，可以使用反轉錄病毒或慢病毒載體將編碼本文的抗醣-MUC4 CAR或嵌合TCR的核酸遞送到細胞中。可表現CAR或嵌合TCR的反轉錄病毒和慢病毒載體可以被遞送到不同類型的真核細胞以及組織和整個生物體中，利用經轉導細胞作為媒介或無細胞局部或全身性遞送經封裝的、結合的或裸露的載體。所使用的方法可以是為了達到任何所需或足夠穩定表現的目的。
在其他實施方案中，可使用體外經轉錄的mRNA將CAR或嵌合TCR序列遞送到細胞中。體外經轉錄的mRNA CAR或嵌合TCR可以被遞送到不同類型的真核細胞以及組織和整個生物體中，利用經轉染細胞作為媒介或無細胞局部或全身性遞送經封裝的、結合的或裸露的mRNA。所使用的方法可以是為了達到任何所需或足夠暫時表現的目的。
在另一實施方案中，所需的CAR或嵌合TCR可以透過轉位子 (transponson) 在細胞中表現。
本文的RNA轉染方法的一個優點是RNA轉染基本上是暫時的並且是無載體的: 可以將RNA轉基因遞送至淋巴細胞中，並在短暫的體外細胞活化後使其在淋巴細胞中表現，作為最小表現組件而不需要任何其他病毒序列。在這些條件下，不太可能將轉基因整合到宿主細胞基因體中。由於RNA的轉染效率及其可均勻修飾整個淋巴細胞群的能力，因此不需要進行細胞選殖。
用體外經轉錄的RNA (IVT-RNA) 對T細胞進行基因修飾是利用二種不同的策略，這二種策略都已在各種動物模型中相繼進行了測試。用體外經轉錄的RNA透過脂轉染或電穿孔來轉染細胞。較佳地，希望使用各種修飾來穩定IVT-RNA，以實現經轉移的IVT-RNA的延長表現。
一些IVT載體在文獻中是已知的，它們以標準化的方式被使用作為體外轉錄的模板，並且已經以產生穩定RNA轉錄本的方式進行了遺傳修飾。目前本領域所使用的方案是基於具有以下結構的質體載體: 使RNA轉錄能夠進行的5' RNA聚合酶啟動子，然後是感興趣的基因，其3'和/或5'側翼為非轉譯區 (UTR)，以及含有50至70個腺核苷酸的3'聚腺苷酸組件。在體外轉錄之前，透過第II型限制酶在聚腺苷酸組件的下游將環狀質體線性化 (識別序列對應於裂解位點)。因此，聚腺苷酸組件是對應於轉錄本中較晚的poly(A)序列。由於這個過程，故一些核苷酸在線性化後仍保留為酶裂解位點的一部分，並在3'端延長或掩蔽poly(A)序列。目前尚不清楚這種非生理性突出是否會影響這種構建體在細胞內所製造的蛋白質產量。
與較傳統的質體或病毒方法相比，RNA有幾個優點。RNA來源的基因表現不需要轉錄，並且在轉染後會迅速產生蛋白質產物。此外，由於RNA只須進入細胞質而非細胞核，因此典型的轉染方法可導致極高的轉染率。再者，基於質體的方法需要可驅動感興趣基因表現的啟動子在所研究的細胞中具有活性。
在另一方面，可以透過電穿孔將RNA構建體遞送到細胞中。參見例如US 2004/0014645、US 2005/0052630A1、US 2005/0070841A1、US 2004/0059285A1、US 2004/0092907A1中所教導的將核酸構建體透過電穿孔進入哺乳動物細胞的配方和方法。包括對任何已知細胞類型進行電穿孔所需的電場強度在內的各種參數，在相關研究文獻以及該領域的眾多專利和申請案中通常是已知的。參見例如美國專利號6,678,556、美國專利號7,171,264以及美國專利號7,173,116。用於電穿孔治療應用的設備可商購獲得，例如MedPulser TM DNA電穿孔治療系統 (Inovio/Genetronics, San Diego, CA)，並在專利例如美國專利號6,567,694；美國專利號6,516,223；美國專利號5,993,434；美國專利號6,181,964；美國專利號6,241,701，以及美國專利號6,233,482；例如像是US20070128708A1中所述，電穿孔還可用於體外轉染細胞。電穿孔也可用於在體外將核酸遞送到細胞中。因此，利用本領域技術人員已知的許多可用裝置和電穿孔系統中的任何一種，將含有表現構建體的核酸透過電穿孔介導施用到細胞中提供了一種可用於將感興趣的RNA遞送至標靶細胞的令人興奮的新方法。 5.6.1.1. T細胞來源
在擴增和遺傳修飾之前，從受試者中獲得T細胞來源。術語「受試者」旨在包括可以引發免疫反應的活生物體 (例如哺乳動物)。受試者的實例包括人類、狗、貓、小鼠、大鼠及其轉基因物種。較佳地，受試者是人類。
T細胞可以從多種來源中獲得，包括周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、感染部位的組織、腹水、胸腔積液、脾組織和腫瘤。在本文的某些實施方案中，可以使用本領域可用的任何數量的T細胞株。在本文的某些實施方案中，可以利用本領域技術人員已知的任何數量的技術，例如Ficoll TM分離，從受試者所收集的單位血液中獲得T細胞。在一較佳的實施方案中，來自於個體循環血液的細胞是透過血球分離術 (apheresis) 所獲得。血球分離術產物通常包含淋巴細胞，包括T細胞、單核細胞、顆粒細胞、B細胞、其他有核白血球、紅血球和血小板。在一實施方案中，可洗滌透過血球分離術所收集的細胞，進而去除血漿部分並將細胞置於適當的緩衝液或培養基中以用於後續處理步驟。在本文的一實施方案中，細胞是用磷酸鹽緩衝鹽水 (PBS) 洗滌。在一替代實施方案中，洗滌溶液不含有鈣並且可能不含有鎂或可能不含有許多 (如果不是全部的話) 二價陽離子。同樣，令人驚訝的是，在沒有鈣的情況下，初始活化步驟會導致放大的活化。正如同本領域普通技術人員將容易理解的，洗滌步驟可以透過本領域技術人員已知的方法來完成，例如透過使用半自動「順流 (flow-through)」離心機 (例如Cobe 2991細胞處理器、Baxter CytoMate或Haemonetics Cell Saver 5，根據製造商的說明使用)。洗滌後，可將細胞重新懸浮於多種的生物相容性緩衝液中，例如不含鈣、不含鎂的PBS、PlasmaLyte A或其他有或無緩衝液的鹽水溶液。可替代地，可以去除血球分離術樣本中不需要的成分，並將細胞直接重新懸浮於培養基中。
在另一實施方案中，透過裂解紅血球並消除單核細胞，例如透過PERCOLL TM梯度離心或透過逆流離心淘析，從周邊血淋巴細胞中分離出T細胞。可以透過陽性或陰性篩選技術進一步分離出特定的T細胞亞群，例如CD3 +、CD28 +、CD4 +、CD8 +、CD45RA +和CD45RO +T細胞。舉例而言，在一實施方案中，透過與抗CD3/抗CD28 (即3 x 28) 偶聯的珠子，例如DYNABEADS ®M-450 CD3/CD28 T培養一段足以正向篩選出所需T細胞的時間，進而分離出T細胞。在一實施方案中，該一段時間為約30分鐘。在進一步的實施方案中，該一段時間是從30分鐘到36小時或更長，以及此期間內的所有整數時間值。在進一步的實施方案中，該一段時間是至少1、2、3、4、5或6小時。在又一較佳實施方案中，該一段時間為10至24小時。在一較佳實施方案中，該培養時間為24小時。為了從白血病患者中分離出T細胞，使用較長的培養時間 (例如24小時) 可以提高細胞產量。在任何T細胞與其他細胞類型相比其數量較少的情況下，例如從腫瘤組織或免疫功能低下的個體中所分離出的腫瘤浸潤淋巴細胞 (TIL)，可以使用較長的培養時間來分離T細胞。此外，使用較長的培養時間可以提高捕獲CD8 +T細胞的效率。因此，透過簡單地縮短或延長允許T細胞與CD3/CD28珠子結合的時間和/或透過增加或減少珠子與T細胞的比例 (如本文進一步描述)，可以在培養開始時或過程中的其他時間點優先選擇或淘汰T細胞亞群。此外，透過增加或減少珠子或其他表面上的抗CD3和/或抗CD28抗體的比例，可以在培養開始時或在其他所需時間點優先選擇或淘汰T細胞亞群。本領域技術人員將認識到，在本文的上下文中也可以使用多輪的篩選。在某些實施方案中，可能需要執行篩選程序，並在活化和擴增過程中使用「未經篩選」的細胞。「未經篩選」的細胞也可以進行進一步的篩選。
可以使用針對負向選擇細胞所特有的表面標記的抗體組合，透過負向選擇出豐富的T細胞群。一種方法是透過負磁附著免疫性或流式細胞技術，使用針對存在於經負向選擇細胞上的細胞表面標記的單株抗體混合物，以進行細胞分選和/或選擇。舉例而言，為了透過負向選擇出豐富的CD4 +細胞，單株抗體混合物通常包括可針對CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗體。在某些實施方案中，可能需要富集或正向選擇出通常會表現CD4 +、CD25 +、CD62L hi、GITR +和FoxP3 +的調節型T細胞。可替代地，在某些實施方案中，調節型T細胞是透過抗C25偶聯的珠子或其他類似的選擇方法而消除。
為了透過正向或負向選擇而分離出所需的細胞群，細胞和表面 (例如顆粒如珠子) 的濃度會有所不同。在某些實施方案中，可能需要顯著減少珠子和細胞混合在一起的體積 (即增加細胞濃度)，以確保細胞和珠子的最大接觸。舉例而言，在一實施方案中，是使用每毫升中有20億個細胞的濃度。在一實施方案中，是使用每毫升中有10億個細胞的濃度。在另一實施方案中，是使用每毫升中有大於1億個細胞。在另一實施方案中，是使用每毫升中有1000萬、1500萬、2000萬、2500萬、3000萬、3500萬、4000萬、4500萬或5000萬個細胞的細胞濃度。在又一實施方案中，是使用每毫升中有7500萬、8000萬、8500萬、9000萬、9500萬或1億個細胞的細胞濃度。在進一步的實施方案中，可以使用每毫升中有1.25億或1.5億個細胞的濃度。使用高濃度可提高細胞產量、細胞活化和細胞擴增。此外，使用高細胞濃度可以更有效地捕獲可能微弱表現目標標靶抗原的細胞，例如CD28陰性T細胞，或來自於存在許多腫瘤細胞的樣本 (即白血病血液、腫瘤組織等)。這樣的細胞群可能具有治療價值並且將會是需要獲得的。舉例而言，使用高細胞濃度可以更有效地篩選出通常具有較弱CD28表現的CD8 +T細胞。
在相關實施方案中，可能需要使用較低濃度的細胞。透過顯著稀釋T細胞和表面 (例如顆粒，如珠子) 的混合物，可以最小化顆粒與細胞之間的相互作用。這樣可篩選出會大量表現待結合到顆粒上之所需抗原的細胞。舉例而言，CD4 +T細胞可表現更高水平的CD28，並且在稀釋濃度下比CD8 +T細胞更有效地被捕獲。在一實施方案中，使用的細胞濃度為5×10 6/ml。在其他實施方案中，使用的濃度可以是從大約1×10 5/ml到1×10 6/ml，以及介於兩者之間的任何整數值。
在其他實施方案中，細胞可以在旋轉器上以不同的速度，在2至10°C或在室溫下，以不同的時間長度進行培養。
用於刺激的T細胞也可以在洗滌步驟後進行冷凍。不希望受理論束縛，冷凍和隨後的解凍步驟透過去除細胞群中的顆粒細胞和在一定程度上去除單核細胞，進而提供了更均勻的產物。在去除血漿和血小板的洗滌步驟之後，可以將細胞懸浮在冷凍溶液中。雖然許多冷凍溶液和參數在本領域中是已知的，並且在這種情況下是有用的，但有一種方法是涉及使用含有20% DMSO和8%人類血清白蛋白的PBS，或含有10%葡聚醣40和5%葡萄糖、20%人類血清白蛋白和7.5% DMSO的培養基，或含有31.25% Plasmalyte-A、5%葡萄醣、0.45% NaCl、10%葡聚醣40和5%葡萄醣、20%人類血清白蛋白和7.5% DMSO的培養基，或其他含有例如Hespan和PlasmaLyte A的合適細胞冷凍培養基，然後將細胞以每分鐘降1°C的速率冷凍至-80°C，並儲存在液態氮儲存桶的氣相中。可以使用其他經控制的冷凍方法以及立即在-20°C或在液態氮中的未經控制的冷凍。
在某些實施方案中，如本文所述將經冷凍保存的細胞進行解凍和洗滌，並在使用本文的方法進行活化前，在室溫下靜置一小時。
在本文的上下文中還考慮了在可能需要本文所述的經擴增細胞之前的時段，從受試者收集血液樣本或血球分離術產物。因此，可以在任何必要的時間點收集需要擴增的細胞來源，並分離和冷凍所需的細胞，例如T細胞，以供日後用於T細胞療法，以治療任何數量的疾病或將因T細胞療法而受益的病症，例如本文所述的那些。在一實施方案中，血液樣本或血球分離物是取自於一般健康的受試者。在某些實施方案中，血液樣本或血球分離物是取自於有罹患疾病風險但尚未患病的一般健康受試者，並且將感興趣的細胞加以分離和冷凍以備日後使用。在某些實施方案中，T細胞可以進行擴增、冷凍並在以後使用。在某些實施方案中，在診斷出如本文所述的特定疾病後不久但在接受任何治療之前，便從患者收集樣本。在進一步的實施方案中，在接受任何數量的相關治療方式之前，包括但不限於使用藥劑諸如natalizumab、efalizumab、抗病毒劑、化學療法、放射療法、免疫抑制劑，例如環孢菌素 (cyclosporin)、硫唑嘌呤 (azathioprine)、甲胺蝶呤 (methotrexate)、黴酚酸酯 (mycophenolate) 和FK506、抗體或其他免疫清除劑，例如CAMPATH、抗CD3抗體、cytoxan、fludarabine、環孢菌素 (cyclosporin)、FK506、雷帕黴素 (rapamycin)、黴酚酸 (mycophenolic acid)、類固醇、FR901228和輻射所進行的治療，便將細胞從受試者的血液樣本或血球分離物中分離出來。這些藥物可抑制鈣依賴性磷酸酶鈣調磷酸酶 (cyclosporine和FK506) 或可抑制對生長因子誘導的訊息傳遞很重要的p70S6激酶 (rapamycin) (Liu et al., Cell 66:807-815, 1991；Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991；Bierer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993)。在進一步的實施方案中，替患者將細胞分離出來，並加以冷凍，以供日後與骨髓或幹細胞移植或使用任一化療劑例如fludarabine、外照射放射治療 (XRT)、環磷醯胺 (cyclophosphamide) 的T細胞消除療法一併 (例如之前、同時或之後) 使用。
在本文的另一實施方案中，T細胞是在治療後直接從患者中所獲得。在這方面已經觀察到，在某些癌症治療之後，特別是使用損害免疫系統的藥物治療之後，在治療後不久，於患者正常地從治療中恢復的期間所獲得的T細胞的品質可能是最佳的或具有較好的離體擴增能力。同樣地，在使用本文所述的方法進行離體操作後，這些細胞可能處於可增強植入和體內擴增的較佳狀態。因此，在本文的上下文中，預期會在此恢復階段中收集血液細胞，包括T細胞、樹突細胞或造血譜系的其他細胞。此外，在某些實施方案中，驅動 (mobilization) (例如用GM-CSF來驅動) 和調理療法可用於在受試者中產生有利於特定細胞類型的再增殖、再循環、再生和/或擴增的條件，尤其是在治療後確定的時間區間。例示性細胞類型包括T細胞、B細胞、樹突細胞和免疫系統的其他細胞。 5.6.1.2. T細胞活化和擴增
T細胞通常透過以下所描述的方法來活化和擴增，例如美國專利號6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；以及美國專利公開號20060121005。
一般而言，本文的T細胞是透過與附著有可刺激CD3/TCR複合體相關訊號的試劑與可刺激在T細胞表面上的共刺激分子的配體的表面接觸而擴增。具體而言，T細胞群可以如本文所述的方式加以刺激，例如透過與抗CD3抗體或其抗原結合片段或固定在表面上的抗CD2抗體接觸，或透過與蛋白激酶C活化劑 (例如bryostatin) 併同鈣離子載體接觸。為了產生T細胞表面上輔助分子的共刺激，可使用能結合輔助分子的配體。舉例而言，可以在適合刺激T細胞增殖的條件下，使T細胞群與抗CD3抗體和抗CD28抗體接觸。為了刺激CD4 +T細胞或CD8 +T細胞的增殖，可以使用抗CD3抗體和抗CD28 抗體。抗CD28抗體的實例包括9.3、B-T3、XR-CD28 (Diaclone, Besancon, France)，可以使用本領域公知的其他方法 (Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999；Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999)。
在某些實施方案中，T細胞的主要刺激訊號和共刺激訊號可以由不同的方案所提供。舉例而言，能提供各個訊號的試劑可以是在溶液中或與表面偶聯。當偶聯至表面時，試劑可以是被偶聯至相同的表面 (即以「順式」形式) 或被偶聯至分別的表面 (即以「反式」形式)。可替代地，一個試劑可以是與表面偶聯，而另一個試劑是在溶液中。在一實施方案中，可提供共刺激訊號的試劑是與細胞表面結合，而可提供主要活化訊號的試劑是在溶液中或與表面偶聯。在某些實施方案中，二個試劑都可是在溶液中。在另一實施方案中，試劑可以是可溶形式，然後交聯至一表面，例如可表現Fc受體或抗體或會與試劑結合的其他結合劑的細胞。在這方面，參見例如美國專利公開號20040101519和20060034810，是關於人工抗原呈現細胞 (aAPC)，在本文中考慮將其用於活化和擴增T細胞。
在一實施方案中，二個試劑是被固定在珠子上，可以是被固定在同一珠子上，即「順式」，或者是被固定在分別的珠子上，即「反式」。舉例來說，可提供主要活化訊號的試劑是抗CD3抗體或其抗原結合片段，而可提供共刺激訊號的試劑是抗CD28抗體或其抗原結合片段；並且這二個試劑是以相同的分子數量被共同固定在相同的珠子上。在一實施方案中，使用於CD4 +T細胞擴增和T細胞生長的每一與珠子結合的抗體比例為1:1。在本文的某些方面，所使用的與珠子結合的抗CD3:CD28抗體比例，在與使用1:1的比例下所觀察到的擴增相比，可觀察到T細胞擴增的增加。在一具體實施方案中，與使用1:1的比例下所觀察到的擴增相比，可觀察到約1至約3倍的增加。在一實施方案中，與珠子結合的抗CD3:CD28抗體比例範圍是100:1至1:100以及所有介於此之間的整數值。在本文的一方面，與抗CD3抗體相比，有更多的抗CD28抗體與顆粒結合，即CD3:CD28的比例是小於1。在本文的某些實施方案中，結合到珠子上的抗CD28抗體與抗CD3抗體的比例是大於2:1。在一特定實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是1:100。在另一實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是1:75。在進一步實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是1:50。在另一實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是1:30。在一較佳實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是1:10。在另一實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是1:3。在又一實施方案中，所使用的與珠子結合的CD3:CD28抗體比例是3:1。
從1:500到500:1的顆粒與細胞的比例以及任何介於兩者之間的整數值都可用於刺激T細胞或其他標靶細胞。正如本領域普通技術人員可以容易理解的，顆粒與細胞的比例可以取決於相對於標靶細胞的顆粒尺寸。舉例而言，小珠子只能結合少量的細胞，而較大的珠子可以結合很多細胞。在某些實施方案中，細胞與顆粒的比例範圍為1:100至100:1以及介於兩者之間的任何整數值，並且在進一步的實施方案中，該比例包括1:9至9:1以及介於兩者之間的任何整數值且可用來刺激T細胞。可刺激T細胞的抗CD3和抗CD28偶聯顆粒與T細胞的比例可以如上所述加以變化，但是某些較佳值包括1:100、1:50、1:40、1:30、1:20、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1和 15:1，其中一較佳的比例是每個T細胞的顆粒比例至少1:1。在一實施方案中，所使用的顆粒與細胞的比例是1:1或更小。在一具體實施方案中，較佳的顆粒與細胞比例是1:5。在進一步的實施方案中，顆粒與細胞的比例可以根據刺激的日期而變化。舉例而言，在一實施方案中，第一天的顆粒與細胞的比例為1:1至10:1，之後每天或每隔一天將額外的顆粒添加到細胞中長達10天，以最終比例為從1:1到1:10 (基於添加當天的細胞計數)。在一具體實施方案中，顆粒與細胞的比例在刺激的第一天為1:1，在刺激的第三天和第五天調整為1:5。在另一實施方案中，每天或每隔一天添加顆粒，使得在刺激的第一天最終比例為1:1，在刺激的第三天和第五天最終比例為1:5。在另一實施方案中，顆粒與細胞的比例在刺激的第一天為2:1，並且在刺激的第三天和第五天調整為1:10。在另一實施方案中，每天或每隔一天添加顆粒，使得在刺激的第一天最終比例為1:1，在刺激的第三天和第五天最終比例為1:10。本領域技術人員將理解，多種其他的比例可適用於本文。特別是，比例將根據顆粒大小以及細胞大小與類型而有所變化。
在本文的進一步實施方案中，將細胞 (例如T細胞) 與經試劑包覆的珠子混合，隨後將珠子和細胞分離，然後培養細胞。在另一替代實施方案中，在培養之前，經試劑包覆的珠子和細胞不加以分離，而是一起培養。在另一實施方案中，首先透過施加諸如磁力之類的力來濃縮珠子和細胞，以增加細胞表面標記的接合，從而誘導細胞刺激。
舉例來說，細胞表面蛋白可以透過使附著有抗CD3和抗CD28的順磁珠(3×28珠子) 與T細胞接觸而接合。在一實施方案中，將細胞 (例如10 4至10 9個T細胞) 與珠子 (例如比例為1:1的DYNABEADS ®M-450 CD3/CD28 T順磁珠) 混合在緩衝液中，較佳為PBS (不含二價陽離子，例如鈣和鎂)。同樣地，本領域普通技術人員能容易理解可以使用任何細胞濃度。舉例而言，標靶細胞在樣本中可以是非常的少，並僅佔樣本的0.01%，或者是整個樣本 (即100%) 都可含有感興趣的標靶細胞。因此，任何細胞數量都在本文的範圍內。在某些實施方案中，可能需要顯著減少顆粒和細胞混合在一起的體積 (即增加細胞濃度)，以確保細胞和顆粒的最大接觸。舉例而言，在一實施方案中，是使用每毫升中有約20億個細胞的濃度。在另一實施方案中，是使用每毫升中有大於1億個細胞。在另一實施方案中，是使用每毫升中有1000萬、1500萬、2000萬、2500萬、3000萬、3500萬、4000萬、4500萬或5000萬個細胞的細胞濃度。在又一實施方案中，是使用每毫升中有7500萬、8000萬、8500萬、9000萬、9500萬或1億個細胞的細胞濃度。在進一步的實施方案中，可以使用每毫升中有1.25億或1.5億個細胞的濃度。使用高濃度可提高細胞產量、細胞活化和細胞擴增。此外，使用高細胞濃度可以更有效地捕獲可能微弱表現目標標靶抗原的細胞，例如CD28陰性T細胞。這樣的細胞群可能具有治療價值並且在某些實施方案中將會是需要獲得的。舉例而言，使用高細胞濃度可以更有效地篩選出通常具有較弱CD28表現的CD8 +T細胞。
在本文的一實施方案中，可以將混合物培養數小時 (約3小時) 至約14天或兩者之間的任何整數小時。在另一實施方案中，可以將混合物培養21天。在本文的一實施方案中，將珠子與T細胞一起培養約8天。在另一實施方案中，將珠子與T細胞一起培養2至3天。也可能需要數個刺激週期，使得T細胞的培養時間可以是60天或更長。適合於T細胞培養的條件包括適合的培養基 (例如Minimal Essential Media或RPMI Media 1640或X-vivo 15 (Lonza))，其可能含有增殖和存活所必需的因子，包括血清 (例如胎牛或人類血清)、白細胞介素-2 (IL-2)、胰島素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ和TNF-α或任何其他本領域技術人員已知可用於細胞生長的添加劑。其他用於細胞生長的添加劑包括但不限於表面活性劑、血漿酸鹽和還原劑，例如N-乙醯半胱胺酸和2-巰基乙醇。培養基可以包括RPMI 1640、AIM-V、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo 20、Optimizer，其添加有胺基酸、丙酮酸鈉和維生素，或者無血清或補充有適量的血清 (或血漿) 或一組明確的激素，和/或足以使T細胞生長和擴增的細胞激素。抗生素，例如青黴素和鏈黴素，僅被包含在實驗培養物中，而不被包含在要輸注到受試者體內的細胞培養物中。將標靶細胞維持在支持生長所必需的條件下，例如適當的溫度 (例如37°C) 和大氣 (例如空氣添加5% CO 2)。
已暴露於不同刺激時間的T細胞可能表現出不同的特徵。舉例而言，典型的血液或經血球分離的周邊血液單核細胞產物具有比細胞毒殺型或抑制型T細胞群 (T C，CD8 +) 更多的輔助型T細胞群 (T H，CD4 +)。透過刺激CD3和CD28受體所生的T細胞離體擴增可產生T細胞群，該T細胞群在大約8至9天之前主要是由T H細胞所組成，而在大約8至9天之後，T細胞群便包括越來越多的T C細胞群。因此，取決於治療的目的，替受試者輸注主要包含T H細胞的T細胞群可能是有利的。類似地，如果已分離出T C細胞的抗原特異性亞群，則對於將該亞群進行更大程度的擴增可能是有益的。
此外，除了CD4和CD8標記外，其他表型標記也有顯著差異，但大部分在細胞擴增過程中是可重現的。因此，這種可重現性使得能夠為特定目的而訂製經活化的T細胞產物。 5.7 神經胺糖酸酶
唾液酸 (Sialic acids) 是細胞表面醣蛋白或醣脂上聚醣的末端醣，已顯示其在腫瘤轉化和惡性進展過程中會異常表現。由於唾液酸轉移酶/唾液酸酶的異常表現，高度唾液酸化經常發生在腫瘤組織中。這可能會導致癌症進展加速。唾液酸化可促進免疫逃逸，增強腫瘤增殖和轉移，幫助腫瘤血管生成，並有助於抵抗細胞凋亡和癌症治療。
可表現本文的CAR的宿主細胞 (例如T細胞、NK細胞) 可以被工程改造，進而與CAR共同表現細胞表面或分泌性的神經胺糖酸酶 (唾液酸酶)。透過異源跨膜而被錨定在細胞表面的細胞表面神經胺糖酸酶可賦予宿主細胞醣編輯活性。這增強了CAR-T細胞和免疫細胞 (如先天NK細胞和單核細胞) 的細胞毒殺作用和抗腫瘤功效。共同表現CAR和經工程化神經胺糖酸酶的宿主細胞描述於PCT公開號WO2020/236964中，其透過引用將其整體併入本文。
神經胺糖酸酶可以與本文所述的CAR一起在宿主細胞中共同表現。在具體實施方案中描述了可共同表現神經胺糖酸酶和CAR的例示性宿主細胞。
神經胺糖酸酶可以被包含作為本文所述的融合蛋白的結構域。
在某些實施方案中，神經胺糖酸酶是EC 3.2.1.18或EC 3.2.1.129。
在一些實施方案中，神經胺糖酸酶是源自於 Micromonospora viridifaciens。
在一些方面，神經胺糖酸酶包含的胺基酸序列具有與以下胺基酸序列至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性: GGSPVPPGGEPLYTEQDLAVNGREGFPNYRIPALTVTPDGDLLASYDGRPTGIDAPGPNSILQRRSTDGGRTWGEQQVVSAGQTTAPIKGFSDPSYLVDRETGTIFNFHVYSQRQGFAGSRPGTDPADPNVLHANVATSTDGGLTWSHRTITADITPDPGWRSRFAASGEGIQLRYGPHAGRLIQQYTIINAAGAFQAVSVYSDDHGRTWRAGEAVGVGMDENKTVELSDGRVLLNSRDSARSGYRKVAVSTDGGHSYGPVTIDRDLPDPTNNASIIRAFPDAPAGSARAKVLLFSNAASQTSRSQGTIRMSCDDGQTWPVSKVFQPGSMSYSTLTALPDGTYGLLYEPGTGIRYANFNLAWLGG (SEQ ID NO:222)。
神經胺糖酸酶可以被保留在經工程改造以表現神經胺糖酸酶的宿主細胞的表面，或可以由經工程改造以表現神經胺糖酸酶的宿主細胞所分泌。經工程化以表現神經胺糖酸酶的宿主細胞可以包括例如編碼神經胺糖酸酶的載體。 5.8 組成物
本文的抗醣-MUC4抗體、融合蛋白和/或抗醣-MUC4 ADC可以是含有抗醣-MUC4抗體、融合蛋白和/或ADC以及一個或多個載體、賦形劑和/或稀釋劑的組成物形式。組成物可配製用於特定用途，例如用於獸醫用途或人類的藥物用途。組成物的形式 (例如乾粉、液體製劑等) 和所使用的賦形劑、稀釋劑和/或載體將取決於抗體、融合蛋白和/或ADC的預期用途，以及治療用途的給藥方式。
關於治療用途，組成物可被提供作為含有藥學上可接受載體的無菌醫藥組成物的一部分。該組成物可以是任何合適的形式 (取決於將其施用於患者所需的方法)。醫藥組成物可以透過多種途徑施用於患者，例如口服、經皮、皮下、鼻內、靜脈內、肌肉內、腫瘤內、鞘內、外用或局部。在任何給定情況下，最合適的給藥途徑將取決於特定的抗體和/或ADC、受試者、疾病的性質和嚴重程度以及受試者的身體狀況。通常，醫藥組成物將透過靜脈內或皮下給藥。
醫藥組成物可以方便地以單位劑型存在，每劑含有預定量的本文的抗醣-MUC4抗體和/或抗醣-MUC4 ADC。單位劑量中所含有的抗體和/或ADC的量將取決於所治療的疾病以及本領域眾所周知的其他因素。這種單位劑量可以是含有一定量的適合單次給藥的抗體和/或ADC的凍乾乾粉形式，或者是液體形式。乾粉單位劑型可以與注射器、適量的稀釋劑和/或可用於給藥的其他組成分一起包裝在試劑盒中。液體形式的單位劑量可以方便地以注射器的形式提供，該注射器預填充有一定量的適合單次給藥的抗體和/或ADC。
醫藥組成物也可以散裝形式提供，其含有適合多次給藥的ADC。
透過將具有所需純度的抗體、融合蛋白和/或ADC與本領域通常使用的視情況存在的醫藥上可接受的載體、賦形劑或穩定劑 (所有這些在本文中被稱為「載體」)，即緩衝劑、穩定劑、防腐劑、等滲劑、非離子去污劑、抗氧化劑和其他各式各樣的添加劑混和在一起，便可將醫藥組成物製備成凍乾製劑或水溶液而加以儲存。參見Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版 (Osol, ed. 1980)。這種添加劑在所使用的劑量和濃度下對接受者應該是無毒的。
緩衝劑有助於將pH值維持在接近生理條件的範圍內。它們可以以多種濃度存在，但通常以約2mM至約50mM的濃度存在。適用於本發明的緩衝劑包括有機酸和無機酸及其鹽，例如檸檬酸鹽緩衝劑 (例如檸檬酸一鈉-檸檬酸二鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸三鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸一鈉混合物等)，琥珀酸鹽緩衝劑 (例如琥珀酸-琥珀酸一鈉混合物、琥珀酸-氫氧化鈉混合物、琥珀酸-琥珀酸二鈉混合物等)、酒石酸鹽緩衝劑 (例如酒石酸-酒石酸鈉混合物、酒石酸-酒石酸鉀混合物、酒石酸酸-氫氧化鈉混合物等)、富馬酸鹽緩衝劑 (例如富馬酸-富馬酸一鈉混合物、富馬酸-富馬酸二鈉混合物、富馬酸一鈉-富馬酸二鈉混合物等)、葡萄醣酸鹽緩衝劑 (例如葡萄醣酸-葡萄醣酸鈉混合物、葡萄醣酸-氫氧化鈉混合物、葡萄醣酸-葡萄醣酸鉀混合物等)、草酸鹽緩衝液 (例如草酸-草酸鈉混合物、草酸-氫氧化鈉混合物、草酸-草酸鉀混合物等)、乳酸緩衝劑 (例如乳酸-乳酸鈉混合物、乳酸-氫氧化鈉混合物、乳酸-乳酸鉀混合物等) 以及乙酸鹽緩衝劑 (例如乙酸-醋酸鈉混合物、醋酸-氫氧化鈉混合物等)。此外，可以使用磷酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液和三甲胺鹽如Tris。
可以添加防腐劑以延緩微生物生長，且可添加的量約為0.2%至1% (w/v)。適用於本發明的防腐劑包括苯酚、苯甲醇、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基芐基氯化銨、苯扎氯銨 (例如氯化物、溴化物和碘化物)、六甲銨氯化物以及對羥基苯甲酸烷基酯，如甲基或對羥基苯甲酸丙酯、兒茶酚、間苯二酚、環己醇和3-戊醇。可以添加有時被稱為「穩定劑」的等滲劑以確保本文的液體組成物的等滲性，並且其包括多元醣醇，例如三元或更多元醣醇，諸如甘油、赤蘚醣醇、阿醣醇、木醣醇、山梨醣醇和甘露醣醇。穩定劑是指廣泛類別的賦形劑，其功能範圍從填充劑到可溶解治療劑或有助於防止變性或黏附到容器壁的添加劑。典型的穩定劑可以是多元醣醇 (上面所列舉的)；胺基酸，如精胺酸、離胺酸、甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、丙胺酸、鳥胺酸、L-白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機醣或醣醇，如乳醣、海藻醣、水蘇醣，甘露醇、山梨醣醇、木醣醇、核醣醇、肌醇、半乳醣醇、甘油等，包括環醇如肌醇；聚乙二醇；胺基酸聚合物；含硫還原劑，例如尿素、穀胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油和硫代硫酸鈉；低分子量多肽 (例如10個或更少個殘基的肽)；蛋白質，例如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮單醣，諸如木醣、甘露醣、果醣、葡萄醣；二醣，例如乳醣、麥芽醣、蔗醣和海藻醣；以及三醣，例如棉子醣；和多醣，如葡聚醣。穩定劑可以以每重量的ADC中0.5至10重量百分比的量存在。
可以添加非離子表面活性劑或去污劑 (也稱為「潤濕劑」) 以幫助溶解醣蛋白以及保護醣蛋白免於因攪拌所引起的聚集，這也允許製劑暴露於表面剪應力而不引起蛋白質的變性。合適的非離子表面活性劑包括聚山梨醇酯 (20、80等)、聚氧雜異構體 (184、188等) 以及普朗尼克多元醇。非離子表面活性劑可以以約0.05 mg/mL至約1.0 mg/mL，例如約0.07 mg/mL至約0.2 mg/mL的範圍存在。
其他各式各樣的賦形劑包括填充劑 (例如澱粉)、螯合劑 (例如EDTA)、抗氧化劑 (例如抗壞血酸、甲硫胺酸、維生素E) 以及助溶劑。 5.9 使用方法
本文所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段可用於各種診斷測定和治療方法。在一些實施方案中，可使用本文所述的任何方法 (例如第5.9.1節所述) 來診斷患者罹有癌症，並隨後使用本文所述的任何方法 (例如第5.9.2節所述) 來進行治療。本文所述的診斷方法 (例如第5.9.1節所述) 可用於在癌症治療 (包括但不限於如第5.9.2節所述的癌症治療) 期間或之後監測患者的癌症狀態。 5.9.1. 診斷方法
抗醣-MUC4抗體或結合片段 (包括免疫偶聯物和經標記的抗體和結合片段) 可用於診斷測定。舉例而言，抗體和結合片段可用於免疫測定，例如競爭性結合測定、直接和間接三明治測定，以及免疫沉澱測定，包括免疫組織化學、酵素結合免疫吸附測定 (ELISA)、螢光活化細胞分選 (FACS) 和西方墨點法。
本文所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段可用於檢測測定和/或診斷測定，以檢測樣本例如源自於患者的生物樣本中的生物標記。生物標記可以是蛋白質生物標記 (例如腫瘤相關的醣型MUC4，例如含有被GalNAc在絲胺酸和蘇胺酸殘基上 (以粗體劃底線的文字表示) 醣基化之胺基酸序列CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 的醣型MUC4)，其存在於例如癌細胞或癌症衍生的細胞外囊泡的表面上或內部。
本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可用於檢測含有一個或多個EVs的樣本 (例如液體活檢) 中生物標記的方法。在此類實施方案中，EV表面生物標記可被本文的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段所辨識。檢測生物標記的例示性方法包括但不限於捕獲測定、免疫測定方法，例如免疫沉澱；西方墨點法；酵素結合免疫吸附分析法；免疫組織化學染色；免疫細胞化學染色；流式細胞儀；以及免疫PCR。在一些實施方案中，免疫測定方法可以是化學發光免疫測定方法。在一些實施方案中，免疫測定方法可以是高通量和/或自動化免疫測定平台。
本文所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段也可用於放射照相體內成像，其中將標記有可檢測部分例如不透射線劑或放射性同位素的抗體施用於受試者，較佳地是施用於血流中，並且檢測宿主中經標記抗體的存在和位置。這種成像技術可用於惡性腫瘤的分期和治療。 5.9.2. 治療方法
本文所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段、融合蛋白、ADC、CAR和嵌合TCR可用於治療會表現醣-MUC4的癌症，包括例如胰臟癌、肺癌、乳腺癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤和卵巢癌。
因此，本文提供了本文所述的抗醣-MUC4抗體、結合片段、融合蛋白、ADC、CAR和嵌合TCR，可用作為藥物，例如用於治療癌症，如任何上一段落中所確認的癌症、可用於診斷分析，以及可用於放射照相體內成像。本文進一步提供了本文所述的抗醣-MUC4抗體、結合片段、融合蛋白、ADC、CAR和嵌合TCR在製備例如治療癌症的藥物的用途，例如任何上一段落中所確認的癌症。
當使用本文的CAR或嵌合TCR進行治療時，本文的治療方法包括向患有會表現醣-MUC4的腫瘤的受試者施用有效量的經基因修飾的細胞，該細胞經工程改造可表現本文的CAR或嵌合TCR，例如，如第5.3節或編號為446至479的實施方案中所述的CAR，或如第5.4節或編號為490至584的實施方案中所述的嵌合TCR，或如第5.5節或編號為427至430的實施方案中所述的MicAbody。在第5.6.1節中描述了修飾細胞，特別是T細胞，以表現CAR或嵌合TCR的方法。
當使用本文的MicAbody進行治療時，本文的治療方法包括向患有會表現醣-MUC4的腫瘤的受試者施用治療有效量的本文的MicAbody，例如第5.5節或編號為427至430的實施方案中所述的MicAbody，以及經基因修飾的T細胞，該T細胞經工程改造可表現含有能夠特異性結合MicAbody的NKG2D受體的CAR。 5.10 MUC4肽
還提供了經分離的MUC4醣肽或醣-MUC4肽，其包含胺基酸 CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 或其片段。在一些實施方案中，MUC4醣肽分別在CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 的胺基酸位置12和13處的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被O-連接的GalNAc醣基化。在一些實施方案中，MUC4醣肽包含胺基酸CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 或其片段，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上被O-連接的GalNAc進行醣基化。例示性經分離的MUC4醣肽是描述於編號為653至665的實施方案中。
本文內容包括經分離的MUC4醣蛋白的人工合成以及用於生產經分離的MUC4醣蛋白的重組方法。
在某些實施方案中，經分離的MUC4肽是使用固相肽合成 (solid-phase peptide synthesis，SPPS) 策略來合成的。SPPS方法是本領域已知的。SPPS是透過胺基酸衍生物在固相支撐物上的連續反應以提供多肽的快速組裝。透過交替的N-端去保護和偶聯反應的重複循環，連續的胺基酸衍生物可被添加到多肽中。在其他實施方案中，經分離的MUC4肽是使用溶液相肽合成策略來合成的。溶液相肽合成方法是本領域已知的。
為了確保在SEQ ID NO:154的胺基酸位置12處的絲胺酸和SEQ ID NO:154的胺基酸位置13處的蘇胺酸上用GaINAc進行適當的O-連接醣基化，可以在延伸反應中使用預先合成的經醣基化胺基酸。
提供了編碼經分離的MUC4醣肽的核酸分子、包含此核酸的載體以及能夠產生本文經分離的MUC4醣肽的宿主細胞。在某些方面，核酸分子可編碼並且宿主細胞能夠表現MUC4醣肽以及含有MUC4醣蛋白的融合蛋白。
本文的經分離MUC4醣肽可以透過在宿主細胞中重組表現來製備。為了重組表現MUC4醣肽，用攜帶有可編碼醣肽的DNA的重組表現載體來轉染宿主細胞，使得醣肽可在宿主細胞中表現，並且視情況地可被分泌到培養宿主細胞的培養基中，可以從此培養基中回收醣蛋白 (即經分離的)。使用標準重組DNA方法來獲得MUC4醣蛋白基因，將基因整合到重組表現載體中，並將載體引入到宿主細胞中，例如這些方法描述在分子選殖: 實驗室手冊，第二版 (Sambrook、Fritsch和Maniatis (eds)，Cold Spring Harbor，紐約，1989)、分子生物學的當今方案 (Ausubel, FM等人，eds.，Greene Publishing Associates，1989) 和美國專利號4,816,397中。
可以在原核或真核宿主細胞中表現本文的MUC4醣蛋白。在某些實施方案中，MUC4醣蛋白的表現是在真核細胞例如哺乳動物宿主細胞中進行。為了產生本文的經分離MUC4醣蛋白，根據醣基化SEQ ID NO:154的胺基酸位置12處的絲胺酸和SEQ ID NO:154的胺基酸位置13處的蘇胺酸的能力來篩選宿主細胞。例示性宿主細胞是COSMC HEK293細胞。 5.10.1. MUC4肽組成物
本文的MUC4醣肽可以是含有MUC4醣肽和一個或多個載體、賦形劑、稀釋劑和/或佐劑的組成物的形式。組成物可配製用於特定用途，例如用於獸醫用途或人類的藥物用途。組成物的形式 (例如乾粉、液體製劑等) 和所使用的賦形劑、稀釋劑和/或載體將取決於MUC4醣肽的預期用途，以及治療用途的給藥方式。
關於治療用途，組成物可被提供作為含有醫藥上可接受載體和/或醫藥上可接受佐劑的無菌醫藥組成物的一部分。該組成物可以是任何合適的形式 (取決於將其施用於患者所需的方法)。醫藥組成物可以透過多種途徑施用於患者，例如口服、經皮、皮下、鼻內、靜脈內、肌肉內、腫瘤內、鞘內、外用或局部。在任何給定情況下，最合適的給藥途徑將取決於待施用的特定MUC4醣肽、受試者、疾病的性質和嚴重程度以及受試者的身體狀況。通常，醫藥組成物將透過靜脈內或皮下給藥。
醫藥組成物可以方便地以單位劑型存在，每劑含有預定量的本文的MUC4醣肽。單位劑量中所含有的MUC4醣肽的量將取決於所治療的疾病以及本領域眾所周知的其他因素。這種單位劑量可以是含有一定量的適合單次給藥的MUC4醣肽的凍乾乾粉形式，或者是液體形式。乾粉單位劑型可以與注射器、適量的稀釋劑和/或可用於給藥的其他組成分一起包裝在試劑盒中。液體形式的單位劑量可以方便地以注射器的形式提供，該注射器預填充有一定量的適合單次給藥的MUC4醣肽。
醫藥組成物也可以散裝形式提供，其含有適合多次給藥的MUC4醣肽量。
透過將具有所需純度的MUC4醣肽與本領域通常使用的視情況存在的醫藥上可接受的載體、賦形劑、佐劑或穩定劑 (所有這些在本文中被稱為「載體」)，即緩衝劑、穩定劑、防腐劑、等滲劑、非離子去污劑、抗氧化劑和其他各式各樣的添加劑混和在一起，便可將醫藥組成物製備成凍乾製劑或水溶液而加以儲存。參見Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版 (Osol, ed. 1980)。這種添加劑在所使用的劑量和濃度下對接受者應該是無毒的。
在一些實施方案中，組成物包括一種或多種醫藥上可接受的佐劑。佐劑包括例如鋁鹽 (例如無定形羥基磷酸鋁硫酸鹽 (AAHS)、氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁鉀 (Alum))、dsRNA類似物、脂質A類似物、鞭毛蛋白 (flagellin)、咪唑喹啉、CpG ODN、皂苷 (例如QS21)、C型凝集素配體 (例如TDB)、CD1d配體 (α-半乳醣神經醯胺)、MF59、AS01、AS02、AS03、ASO4、AS15、AF03、GLA-SE、IC31、CAF01以及病毒體。其他本領域已知的佐劑包括化學佐劑、遺傳佐劑、蛋白質佐劑和脂質佐劑，也可以被包含在組成物中。
緩沖劑有助於將pH值維持在接近生理條件的範圍內。它們可以以多種濃度存在，但通常以約2mM至約50mM的濃度存在。適用於本發明的緩衝劑包括有機酸和無機酸及其鹽，例如檸檬酸鹽緩衝劑 (例如檸檬酸一鈉-檸檬酸二鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸三鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸一鈉混合物等)，琥珀酸鹽緩衝劑 (例如琥珀酸-琥珀酸一鈉混合物、琥珀酸-氫氧化鈉混合物、琥珀酸-琥珀酸二鈉混合物等)、酒石酸鹽緩衝劑 (例如酒石酸-酒石酸鈉混合物、酒石酸-酒石酸鉀混合物、酒石酸酸-氫氧化鈉混合物等)、富馬酸鹽緩衝劑 (例如富馬酸-富馬酸一鈉混合物、富馬酸-富馬酸二鈉混合物、富馬酸一鈉-富馬酸二鈉混合物等)、葡萄醣酸鹽緩衝劑 (例如葡萄醣酸-葡萄醣酸鈉混合物、葡萄醣酸-氫氧化鈉混合物、葡萄醣酸-葡萄醣酸鉀混合物等)、草酸鹽緩衝液 (例如草酸-草酸鈉混合物、草酸-氫氧化鈉混合物、草酸-草酸鉀混合物等)、乳酸緩衝劑 (例如乳酸-乳酸鈉混合物、乳酸-氫氧化鈉混合物、乳酸-乳酸鉀混合物等) 以及乙酸鹽緩衝劑 (例如乙酸-醋酸鈉混合物、醋酸-氫氧化鈉混合物等)。此外，可以使用磷酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液和三甲胺鹽如Tris。
可以添加防腐劑以延緩微生物生長，且可添加的量約為0.2%至1% (w/v)。適用於本發明的防腐劑包括苯酚、苯甲醇、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基芐基氯化銨、苯扎氯銨 (例如氯化物、溴化物和碘化物)、六甲銨氯化物以及對羥基苯甲酸烷基酯，如甲基或對羥基苯甲酸丙酯、兒茶酚、間苯二酚、環己醇和3-戊醇。可以添加有時被稱為「穩定劑」的等滲劑以確保本文的液體組成物的等滲性，並且其包括多元醣醇，例如三元或更多元醣醇，諸如甘油、赤蘚醣醇、阿醣醇、木醣醇、山梨醣醇和甘露醣醇。穩定劑是指廣泛類別的賦形劑，其功能範圍從填充劑到可溶解治療劑或有助於防止變性或黏附到容器壁的添加劑。典型的穩定劑可以是多元醣醇 (上面所列舉的)；胺基酸，如精胺酸、離胺酸、甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、丙胺酸、鳥胺酸、L-白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機醣或醣醇，如乳醣、海藻醣、水蘇醣，甘露醇、山梨醣醇、木醣醇、核醣醇、肌醇、半乳醣醇、甘油等，包括環醇如肌醇；聚乙二醇；胺基酸聚合物；含硫還原劑，例如尿素、穀胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油和硫代硫酸鈉；低分子量多肽 (例如10個或更少個殘基的肽)；蛋白質，例如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮單醣，諸如木醣、甘露醣、果醣、葡萄醣；二醣，例如乳醣、麥芽醣、蔗醣和海藻醣；以及三醣，例如棉子醣；和多醣，如葡聚醣。穩定劑可以以每重量的MUC4肽中0.5至10重量百分比的量存在。可以添加非離子表面活性劑或去污劑 (也稱為「潤濕劑」) 以幫助溶解醣蛋白以及保護醣蛋白免於因攪拌所引起的聚集，這也允許製劑暴露於表面剪應力而不引起蛋白質的變性。合適的非離子表面活性劑包括聚山梨醇酯 (20、80等)、聚氧雜異構體 (184、188等) 以及普朗尼克多元醇。非離子表面活性劑可以以約0.05 mg/mL至約1.0 mg/mL，例如約0.07 mg/mL至約0.2 mg/mL的範圍存在。
其他各式各樣的賦形劑包括填充劑 (例如澱粉)、螯合劑 (例如EDTA)、抗氧化劑 (例如抗壞血酸、甲硫胺酸、維生素E) 以及助溶劑。
本文的例示性MUC4肽組成物是描述於編號為666和667的實施方案中。 5.10.2. 使用MUC4肽的方法
本文所述的MUC4肽可用於產生針對腫瘤相關形式的MUC4的抗體。MUC4肽可以施用於動物。施用的肽量可以有效地使動物產生針對該肽的抗體。如本文所用，「動物」是指來自動物界的多細胞真核生物。在一些實施方案中，動物是哺乳動物。在一些實施方案中，動物是小鼠或兔子。然後可以從動物身上收集產生的抗體。MUC4肽能夠以經純化的肽或本文所提供的組成物的一部分來施用。
本文所述的MUC4肽可用於引發針對腫瘤相關形式的MUC4的免疫反應。可以將有效量的MUC4肽施用於動物以引起動物產生針對該肽的免疫反應(例如，產生抗體)。
使用本文的MUC4肽的例示性方法是描述於編號為668至671的實施方案中。 6. 實例 6.1. 實例1: 抗醣-MUC4抗體的鑑定和表徵 6.1.1 概述
聚醣是不可或缺的膜成分，且人類細胞的腫瘤轉化幾乎總是與蛋白質和脂質的異常醣基化有關。蛋白質醣基化有多種類型，包括N-醣基化和許多類型的O-醣基化，但最多樣化的類型之一是黏蛋白型GalNAc型O-醣基化 (以下稱為O-醣基化)。癌症相關的O-聚醣變化特別地有趣，最常觀察到的異常醣表型是最不成熟的截短O-聚醣結構的表現，稱為Tn (GalNAcα1-O-Ser/Thr)、STn (NeuAcα2-6GalNAcα1-O-Ser/Thr) 以及T (Galβ1-3GalNAcα1-O-Ser/Thr) 抗原。在幾乎所有的上皮癌細胞上都可觀察到截短的O-聚醣，並且其與預後不良有密切相關。此外，越來越清楚的是聚醣在癌症發展中也具有關鍵作用，截短的O-聚醣會影響分化、細胞-細胞和細胞-基質相互作用，且會直接誘導易感細胞中的致癌特徵。
發明人已經鑑定出了人類癌細胞中的MUC4醣肽表位，並使用經確定的醣肽來開發癌症特異性抗醣-MUC4單株抗體。 6.1.2. 材料和方法 6.1.2.1. Tn MUC4醣肽的合成
使用標準的FMOC肽合成策略來合成MUC4醣肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，其在以粗體劃底線文字所示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上用O-連接的GalNAc進行醣基化。使用固相或液相肽化學，以逐步的方式，將預合成的醣基化胺基酸在特定位置與延伸肽偶聯。在完成完整的序列並去除所有保護基後，將所得的醣肽透過高效液相層析法 (HPLC) 加以純化，並透過質譜法 (正離子模式電噴霧電離) 進行表徵化。 6.1.2.2. 免疫接種方案
利用以順丁烯二醯亞胺連接子與KLH (鎖孔帽貝血藍蛋白) 偶聯的Tn-醣基化MUC4醣肽，對雌性Balb/c小鼠進行皮下免疫接種。在第0、14和35天分別用50 µg、45 µg和45 µg的KLH-醣肽對小鼠進行免疫接種。第一次免疫接種是使用弗氏完全佐劑 (Freund’s complete adjuvant)。所有後續的免疫接種均使用弗氏不完全佐劑 (Freund’s incomplete adjuvant)。在第45天，尾部採血以評估多株反應。在第56天或之後，於融合瘤融合的前3至5天，使用含有15 µg KLH-醣肽的弗氏不完全佐劑對待融合小鼠進行免疫增強接種。使用BTX哈佛儀器的電細胞操縱器 (ECM2001) 將小鼠的脾細胞與SP2/0-Ag14 (ATCC, cat# CRL-1581) 骨髓瘤細胞進行融合。將融合瘤接種在96孔盤中，進行培養、擴增、評估和篩選對MUC4-Tn的特異性，使用包括ELISA、流式細胞術和免疫螢光在內的選擇標準組合，以獲得對MUC4-Tn具有特異性的單株抗體。 6.1.3. 結果 6.1.3.1. 針對Tn-MUC4的醣肽特異性抗體
使用Tn-醣基化MUC4醣肽來產生醣肽反應性抗體。使用MUC4醣肽所生成的抗體，包括2D5、5B8和15F3，證明在選擇性方面具有優勢。 6.2. 實例2: 透過Octet和Biacore對2D5.2F6.2C11、5B8.2A11.2C7和15F3.2D11.1E6抗體進行功能表徵 6.2.1. 概述
透過Biacore對2D5.2F6.2C11 (以下簡稱「2D5」)、5B8.2A11.2C7 (以下簡稱「5B8」) 和15F3.2D11.1E6 (以下簡稱「15F3」) 進行表徵，以測試抗MUC4 mAb對經滴定MUC4肽的反應性。還透過Octet對2D5、5B8和15F3進行表徵，以測試抗MUC4 mAb對具有不同醣基化位點的肽 (包括非醣基化肽) 的反應性，如表6所示。
表6
肽 序列 (粗體和劃底線 = GalNAc位點)
MUC4-Tn 生物素- CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)
MUC4-Tn (S) 生物素- CTIPSTAMHTR S TAAPIPILP (SEQ ID NO:197)
MUC4-Tn (T) 生物素- CTIPSTAMHTRS T AAPIPILP (SEQ ID NO:198)
MUC4 生物素- CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155)
6.2.2. 材料和方法 6.2.2.1. 表面電漿共振 (Surface Plasmon Resonance)
可以使用表面電漿共振 (例如使用Biacore system (Cytiva)) 進行抗體親和力測定。在表面電漿共振測定中，可以將一個或多個抗體固定在生物傳感器上，並與分析物 (例如醣-MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP-醯胺 (其胺基酸部分是SEQ ID NO:154；粗體和劃底線的殘基表示GalNAc醣基化位點)) 或陰性對照分析物，例如未醣基化的MUC4肽 (CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP-醯胺 (其胺基酸部分是SEQ ID NO:155)) 一起呈遞。將抗體與不同濃度的分析物接觸，例如濃度為2.5 nM、7.4 nM、22 nM、66 nM和200 nM。對於每個分析物濃度，使用多循環動力學，1分鐘結合和5分鐘解離，以三重複測量親和力。當比較二個抗體的結合親和力時，二個抗體所使用的濃度是相同的 (例如使用每種抗體為1 µM濃度進行測量)。透過將結合曲線擬合到特定的模型: 動力學擬合 (1:1模型) 或如果可適用的異源配體結合模型來確定親和力。 6.2.2.2. 生物層干涉儀 (Octet)
可以使用BLI來針對特定抗原以評估單株抗體的抗體親和力和表位組合。在BLI測定中，可以將抗原固定在生物傳感器上 (例如醣-MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP-醯胺 (其胺基酸部分是SEQ ID NO:154)) 或陰性對照分析物，例如未醣基化的MUC4肽 (CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP-醯胺 (其胺基酸部分是SEQ ID NO:155))，並呈遞給一個抗體以進行親和力測量或二個競爭抗體以串聯 (或連續步驟) 進行表位組合。如果用第一抗體進行飽和未阻斷第二抗體的結合，則會發生與非重疊表位的結合。透過將結合曲線擬合到特定的模型: 1:1單價模型或2:1二價模型來確定親和力。誤差 (＞95%信賴度) 是透過所生成的曲線與模型的匹配程度計算得出。 6.2.2.3. 流式細胞技術
用TrypLE select (Gibco) 來解離貼壁的細胞，並用細胞培養基 (RPMI內含L-麩胺醯胺、1% PenStrep和10% FBS) 將其從培養瓶表面清洗下來。透過在4°C下以300 x g離心5分鐘，然後再懸浮於含有1% BSA的PBS中 (PBS/1% BSA)，以洗滌細胞數次。將細胞重新懸浮成每毫升中有5x10 5個細胞至每毫升中有2x10 6個細胞之間，然後分配到96孔U形底盤中。將稀釋的商業抗體 (0.25至2 µg/ml) 或融合瘤上清液或用於多株反應的血清加入至細胞中並在冰上培養1小時。用PBS/1% BSA洗滌幾次後，將細胞在冰上用經1:1600稀釋的AlexaFluor647偶聯F(ab) 2山羊抗小鼠IgG Fcγ培養30分鐘 (JacksonImmunoResearch)。用PBS/1% BSA再次洗滌細胞，然後在含有1%甲醛的PBS/1% BSA中加以固定。在2或4雷射Attune NXT流式細胞儀上分析細胞。透過FlowJo軟體來處理數據。 6.2.2.4. 免疫螢光
將細胞接種到玻璃腔室載玻片 (nunc) 中至50%融合度 (confluency)，並在37°C、5% CO 2下培養12至18小時。過夜生長後，移除載玻片上的培養基，並在室溫下用含有4%甲醛的PBS (pH 7.4) 將細胞進行固定10分鐘。將載玻片在PBS中進行洗滌。將稀釋的商業抗體 (1至4 µg/ml) 或融合瘤上清液或用於多株反應的血清添加到載玻片中，並將載玻片在4°C下培養過夜。將載玻片在PBS中進行洗滌，並用經1:800稀釋的AlexaFluor488偶聯F(ab) 2兔抗小鼠IgG (H+L) (Invitrogen) 在室溫下染色45分鐘。將載玻片在PBS中進行洗滌，並用含有DAPI (Thermofisher) 的Prolong Gold Antifade Mountant進行封片，以及使用Olympus FV3000共軛焦顯微鏡進行檢查。 6.2.3. 結果 6.2.3.1. mAb 2D5、5B8和15F3的結合特異性
為了表徵2D5、5B8和15F3對非醣基化和Tn醣基化MUC4的結合特異性，對T3M4 COSMC-KO和T3M4細胞上的MUC4小鼠抗體以流式細胞技術進行分析。發現2D5、5B8和15F3僅會與Tn-醣基化MUC4 (即T3M4 COSMC-KO細胞) 反應，而不會與非醣基化對應物 (即T3M4細胞) 反應 (圖1A至1E)。2D5、5B8和15F3對MUC4醣肽的親和力是透過Biacore和Octet來確定。表7總結了2D5、5B8和15F3以及作為比較的Mab 6E3 (美國專利號10,139,414) 對於不同醣型MUC4肽、未醣基化MUC4和MUC1-Tn的解離常數 (Kd)，在95%的信賴度下具有正負誤差。表8提供了2D5和作為比較的mAb 6E3 (較早的抗Tn-MUC4抗體) (美國專利號10,139,414) 的解離常數 (Kd)。包括95%信賴度的正負誤差。
表7
親和力 (Biacore) 表觀親和力 (Octet)
抗體 MUC4-Tn MUC4 MUC1-Tn MUC4-Tn MUC4-Tn (S) MUC4-Tn (T) MUC4 MUC1-Tn
2D5 3.96 nM ＞ 400 nM ＞ 400 nM 2 nM +/- 0.251 nM ＞ 10 µM 0.4.3 µM +/- 5.5 µM ＞ 10 µM 2.9 µM +/- 5.9 µM
5B8 3.93 nM ＞ 400 nM ＞ 400 nM 2.32 nM +/- 2.32 nM ＞ 10 µM .56 µM +/- 1 pM ＞ 10 µM 2.8 µM +/- 7.6 µM
15F3 3.56 nM ＞ 400 nM ＞ 400 nM 50.2 nM +/- 10 nM ＞ 10 µM 79 µM +/- 66 µM ＞ 10 µM 2.5 µM +/- 3.7 µM
表8
表觀親和力 (Octet)
抗體 MUC4-Tn MUC4
2D5 2 nM +/- 0.251 nM ＞ 10 µM
mAb 6E3 700 nM +/- 19.7 nM ＞ 10 µM
為了在更自然的構象環境中進一步評估2D5、5B8和15F3的特異性，使用2D5、5B8和15F3對T47D細胞進行染色以用於流式細胞技術和免疫螢光分析。T47D細胞株本身是Tn陰性的，但可以透過COSMC伴護蛋白的剔除以誘導表現Tn抗原。當使用2D5、5B8和15F3進行染色以用於流式細胞技術分析時，發現每個都選擇性地染色COSMC KO T47D細胞，而非它們的野生型對應物，儘管二種細胞都對MUC4染色呈陽性 (參見圖2)。與這些結果一致，免疫螢光顯示只有MUC4 +Tn +T47D COSMC KO細胞可被2D5、5B8和15F3染色，而MUC4 +Tn -T47D WT細胞沒有被染色 (圖2)。 6.3. 實例3: 抗醣-MUC4抗體的序列分析
進行快速擴增cDNA末端 (RACE) 以確定2D5、5B8和15F3的重鏈和輕鏈核苷酸序列。編碼2D5的重鏈和輕鏈可變區的核苷酸序列分別在SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22中列出。由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所編碼的重鏈和輕鏈可變區分別在SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2中列出。預測的重鏈CDR序列 (IMGT定義) 分別列於SEQ ID NO:3至5，以及預測的輕鏈CDR序列 (IMGT定義) 分別列於SEQ ID NO:6至8。預測的重鏈CDR序列 (Kabat定義) 分別列於SEQ ID NO:9至11，以及預測的輕鏈CDR序列 (Kabat定義) 分別列於SEQ ID NO:12至14。預測的重鏈CDR序列 (Chothia定義) 分別列於SEQ ID NO:15至17，以及預測的輕鏈CDR序列 (Chothia定義) 分別列於SEQ ID NO:18至20。
編碼5B8的重鏈和輕鏈可變區的核苷酸序列分別在SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44中列出。由SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44所編碼的重鏈和輕鏈可變區分別在SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24中列出。預測的重鏈CDR序列 (IMGT定義) 分別列於SEQ ID NO:25至27，以及預測的輕鏈CDR序列 (IMGT定義) 分別列於SEQ ID NO:28至30。預測的重鏈CDR序列 (Kabat定義) 分別列於SEQ ID NO:31至33，以及預測的輕鏈CDR序列 (Kabat定義) 分別列於SEQ ID NO:34至36。預測的重鏈CDR序列 (Chothia定義) 分別列於SEQ ID NO:37至39，以及預測的輕鏈CDR序列 (Chothia定義) 分別列於SEQ ID NO:40至42。
編碼15F3的重鏈和輕鏈可變區的核苷酸序列分別在SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中列出。由SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所編碼的重鏈和輕鏈可變區分別在SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46中列出。預測的重鏈CDR序列 (IMGT定義) 分別列於SEQ ID NO:47至49，以及預測的輕鏈CDR序列 (IMGT定義) 分別列於SEQ ID NO:50至52。預測的重鏈CDR序列 (Kabat定義) 分別列於SEQ ID NO:53至55，以及預測的輕鏈CDR序列 (Kabat定義) 分別列於SEQ ID NO:56至58。預測的重鏈CDR序列 (Chothia定義) 分別列於SEQ ID NO:59至61，以及預測的輕鏈CDR序列 (Chothia定義) 分別列於SEQ ID NO:62至64。 6.4. 實例4: 2D5、5B8和15F3所識別的Tn-醣基化MUC4表位的組織表現 6.4.1. 概述
2D5、5B8和15F3是透過對各種正常和癌症組織以免疫組織化學來進行表徵。 6.4.2. 材料和方法
在用檸檬酸鹽緩衝液 (pH 6.0) 進行抗原修復，並在微波爐中加熱18分鐘後，使用二甲苯和乙醇對石蠟包埋的組織微陣列 (TMA) 或組織切片進行脫蠟處理。從USBIOMAX所獲得的TMA用Ultra Vison Quanto檢測系統HRP DAB進行染色。簡而言之，將TMA在TBS中進行洗滌，與mAb上清液一起培養2小時。在TBS中洗滌二次後，將TMA與Primary Antibody Amplifier Quanto一起培養10分鐘。在TBS中洗滌後，將TMA與HRP polymer quanto一起培養10分鐘，接著再與DAB色原一起培養。將載玻片用蘇木精 (hematoxylin) 進行複染，脫水並封片。 6.4.3. 結果
當對經福馬林固定的石蠟包埋組織切片進行免疫組織化學染色時，可觀察到2D5、5B和15F3的陽性染色，在5/6前列腺中具有強染色 (參見圖3A)。這種染色模式與正常MUC4表現的染色相關，證明了這些癌症中的MUC4表現預測了對2D5、5B8和15F3的反應性。重要的是，當使用2D5、5B8和15F3對健康的鄰近組織進行染色時，沒有觀察到反應性 (圖3A)。
經福馬林固定石蠟包埋的多正常人體組織陣列的組織切片，其代表FDA的抗體交叉反應性測試指南，顯示了透過IHC染色，儘管在以下組織上存在MUC4的陽性表面染色，但並沒有2D5的陽性細胞表面染色 (圖3C至3E): 喉、膀胱、子宮頸、子宮、結腸、小腸和胃 (圖3C至3E)。數據顯示雖然MUC4存在於正常組織的細胞表面，但經Tn修飾的MUC4不存在。
經福馬林固定石蠟包埋的多器官腫瘤組織陣列的組織切片在以下組織上顯示出2D5的特異性細胞表面染色: 2/3直腸、2/3卵巢、3/3卵巢 (圖3F至3G)。重要的是，當使用2D5對健康的鄰近組織進行染色時，沒有觀察到特異性的細胞表面染色 (圖3F至3G)。
總而言之，發現2D5、5B8和15F3會在癌症組織切片上顯示出特異性的細胞表面染色，但在它們的健康對應物上並不會顯示。
表9、10、11和12中列出了在TMA中每個組織的身份，每個表均代表一獨特的TMA。
表9
位置 No 年齡 性別 器官/ 解剖部位 病理學診斷 TNM 等級
A1 1 47 M 胰臟 腺癌 T2N0M0 1 惡性
A2 2 47 M 胰臟 腺癌 T2N0M0 1 惡性
A3 3 47 M 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 - - NAT
A4 4 47 M 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 - - NAT
A5 5 54 F 胰臟 腺癌 T3N0M0 2 惡性
A6 6 54 F 胰臟 腺癌 T3N0M0 2 惡性
A7 7 54 F 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - - AT
A8 8 54 F 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - - AT
B1 9 44 M 胰臟 腺癌 T3N0M0 2 惡性
B2 10 44 M 胰臟 腺癌 T3N0M0 2 惡性
B3 11 44 M 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - - AT
B4 12 44 M 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - AT
B5 13 50 M 胰臟 腺癌 - 1 惡性
B6 14 50 M 胰臟 腺癌 - 1 惡性
B7 15 50 M 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 - - NAT
B8 16 50 M 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 - - NAT
C1 17 47 F 胰臟 腺癌 T2N0M0 3 惡性
C2 18 47 F 胰臟 腺癌 T2N0M0 3 惡性
C3 19 47 F 胰臟 鄰近的慢性胰臟炎組織 - - AT
C4 20 47 F 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - - AT
C5 21 44 M 胰臟 腺癌 T3N0M0 3 惡性
C6 22 44 M 胰臟 腺癌 T3N0M0 3 惡性
C7 23 44 M 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - - AT
C8 24 44 M 胰臟 癌症鄰近胰臟組織 - - AT
表10
位置 No 年齡 性別 器官/ 解剖部位 病理學診斷 TNM
A1 1 2 F 肝 正常肝組織 正常
A2 2 50 F 肝 正常肝組織 正常
A3 3 14 F 肝 正常肝組織 正常
A4 4 35 F 肝 正常肝組織 正常
A5 5 24 M 肝 正常肝組織 正常
A6 6 21 F 肝 正常肝組織 正常
A7 7 胎兒 F 肝 正常胎兒肝組織 正常
A8 8 35 M 肝 正常肝組織 正常
B1 9 35 M 肝 正常肝組織 正常
B2 10 40 M 肝 正常肝組織 正常
B3 11 40 M 肝 正常肝組織 正常
B4 12 38 M 肝 正常肝組織 正常
B5 13 34 M 肝 正常肝組織 正常
B6 14 27 M 肝 正常肝組織 正常
B7 15 25 F 肝 正常肝組織 正常
B8 16 42 F 胰臟 正常胰臟組織 正常
C1 17 35 F 胰臟 正常胰臟組織 正常
C2 18 1個月 M 胰臟 正常胰臟組織 正常
C3 19 35 M 胰臟 正常胰臟組織 正常
C4 20 38 F 胰臟 正常胰臟組織 正常
C5 21 56 M 胃 正常胃組織 正常
C6 22 35 F 胃 正常胃組織 正常
C7 23 35 M 胃 正常胃組織 正常
C8 24 22 M 胃 正常胃粘膜組織 正常
D1 25 40 M 胃 正常胃組織 正常
D2 26 38 F 胃 正常胃組織 正常
D3 27 35 M 胃 正常胃組織 正常
D4 28 48 M 胃 正常胃組織 正常
D5 29 52 F 胃 正常胃組織 正常
D6 30 24 M 食道 正常食道組織 正常
D7 31 21 F 食道 正常食道組織 (纖維和結締組織) 正常
D8 32 26 M 食道 正常食道組織 正常
E1 33 22 M 食道 正常食道組織 正常
E2 34 48 M 食道 正常食道組織 正常
E3 35 59 M 食道 正常食道組織 正常
E4 36 50 F 結腸 正常結腸組織 正常
E5 37 49 M 結腸 正常結腸組織 正常
E6 38 21 F 結腸 正常結腸組織 (纖維和平滑肌組織) 正常
E7 39 35 M 結腸 正常結腸組織 正常
E8 40 49 M 腸 正常小腸組織 (稀疏) 正常
F1 41 35 F 腸 正常小腸組織 正常
F2 42 40 M 腸 正常小腸組織 正常
F3 43 38 F 腸 正常小腸組織 正常
F4 44 42 F 腸 正常小腸組織伴隨壞死 正常
F5 45 57 F 腸 正常小腸組織 正常
F6 46 37 M 腸 正常小腸組織 正常
F7 47 61 F 腸 正常小腸組織 正常
F8 48 27 M 腸 正常小腸組織 正常
表11
位置 No 年齡 性別 器官/解剖部位 病理學診斷 TNM
A1 1 2 F 大腦 大腦灰質組織 正常
A2 2 50 F 大腦 大腦灰質組織 正常
A3 3 24 F 大腦 大腦灰質組織 正常
A4 4 21 F 大腦 大腦灰質和白質組織 正常
A5 5 35 M 大腦 大腦白質組織 正常
A6 6 35 F 大腦 大腦灰質和白質組織 正常
A7 7 24 F 小腦 小腦組織 正常
A8 8 35 M 小腦 小腦組織 正常
A9 9 35 F 小腦 小腦組織 正常
B1 10 41 F 腎上腺 腎上腺組織 正常
B2 11 18 F 腎上腺 腎上腺組織 正常
B3 12 43 F 腎上腺 腎上腺組織 正常
B4 13 35 M 卵巢 鄰近的正常卵巢組織 NAT
B5 14 61 M 卵巢 鄰近的正常卵巢組織 NAT
B6 15 52 F 卵巢 鄰近的正常卵巢組織 NAT
B7 16 35 M 胰臟 胰臟組織 正常
B8 17 35 M 胰臟 胰臟組織 正常
B9 18 16 F 胰臟 胰臟組織 正常
C1 19 27 F 淋巴結 淋巴結組織 正常
C2 20 30 M 淋巴結 淋巴結組織 正常
C3 21 35 F 淋巴結 淋巴結組織 正常
C4 22 54 F 腦下垂體 神經垂體組織 正常
C5 23 54 F 腦下垂體 腺垂體組織 正常
C6 24 54 M 腦下垂體 腺垂體組織 正常
C7 25 45 F 睾丸 睾丸組織 正常
C8 26 30 F 睾丸 睾丸組織 正常
C9 27 33 M 睾丸 睾丸組織 正常
D1 28 45 M 甲狀腺 甲狀腺組織 正常
D2 29 18 M 甲狀腺 甲狀腺組織 正常
D3 30 50 F 甲狀腺 甲狀腺組織 正常
D4 31 41 F 乳房 鄰近的正常乳房組織 (纖維組織) NAT
D5 32 42 F 乳房 乳房組織 正常
D6 33 27 M 乳房 乳房組織 正常
D7 34 21 M 脾 脾臟組織 正常
D8 35 22 M 脾 脾臟組織 正常
D9 36 37 M 脾 脾臟組織 正常
E1 37 50 F 扁桃體 癌症鄰近舌扁桃體組織 AT
E2 38 50 M 扁桃體 癌症鄰近舌扁桃體組織 AT
E3 39 50 F 扁桃體 癌症鄰近舌扁桃體組織 AT
E4 40 15 F 胸腺 胸腺組織 正常
E5 41 21 F 胸腺 胸腺組織 正常
E6 42 21天 F 胸腺 胸腺組織 正常
E7 43 30 M 骨髓 骨髓組織 正常
E8 44 40 M 骨髓 骨髓組織 正常
E9 45 33 M 骨髓 骨髓組織 正常
F1 46 48 M 肺 肺組織 正常
F2 47 35 M 肺 肺組織 正常
F3 48 30 F 肺 肺組織 正常
F4 49 40 F 心 心肌組織 正常
F5 50 35 M 心 心肌組織 正常
F6 51 35 M 心 心肌組織 正常
F7 52 45 M 食道 食道組織 正常
F8 53 23 M 食道 食道組織 正常
F9 54 43 M 食道 食道組織 正常
G1 55 42 M 胃 胃組織 正常
G2 56 35 M 胃 胃組織 正常
G3 57 39 M 胃 胃組織 正常
G4 58 45 F 小腸 小腸組織 正常
G5 59 40 M 小腸 小腸組織 正常
G6 60 21 M 小腸 小腸組織 正常
G7 61 35 M 結腸 結腸組織 正常
G8 62 32 M 結腸 結腸組織 正常
G9 63 35 F 結腸 結腸組織 (稀疏) 正常
H1 64 38 M 肝 肝臟組織 正常
H2 65 23 F 肝 肝臟組織 正常
H3 66 50 M 肝 肝臟組織 正常
H4 67 42 M 唾腺 鄰近的正常唾液腺組織 NAT
H5 68 22 F 唾腺 唾液腺組織 正常
H6 69 43 M 唾腺 唾液腺組織 正常
H7 70 16 M 腎 腎組織 正常
H8 71 38 M 腎 腎組織 正常
H9 72 21 M 腎 腎組織 正常
I1 73 30 M 前列腺 前列腺組織 正常
I2 74 31 F 前列腺 前列腺組織 正常
I3 75 30 M 前列腺 前列腺組織 正常
I4 76 18 M 子宮 子宮內膜組織 正常
I5 77 41 M 子宮 子宮內膜組織 (平滑肌) 正常
I6 78 54 M 子宮 相鄰的正常子宮內膜組織 NAT
I7 79 47 M 子宮頸 鄰近的正常子宮頸組織 NAT
I8 80 45 F 子宮頸 鄰近的正常子宮頸組織 AT
I9 81 52 M 子宮頸 鄰近的正常子宮頸組織 NAT
J1 82 30 M 骨骼肌 骨骼肌組織 正常
J2 83 40 M 骨骼肌 骨骼肌組織 正常
J3 84 50 F 骨骼肌 骨骼肌組織 正常
J4 85 50 F 皮膚 皮膚組織 正常
J5 86 21天 F 皮膚 皮膚組織 正常
J6 87 50 F 皮膚 皮膚組織 正常
J7 88 35 F 神經 周圍神經組織 正常
J8 89 25 F 神經 周圍神經組織 正常
J9 90 50 M 神經 周圍神經組織 正常
K1 91 47 M 心包 心包間皮組織 正常
K2 92 49 M 隔膜 隔膜和胸膜間皮組織 正常
K3 93 33 M 心包 心包間皮組織 正常
K4 94 62 M 眼睛 鄰近的正常脈絡膜和鞏膜組織 NAT
K5 95 55 F 眼睛 鄰近的正常鞏膜組織 NAT
K6 96 42 M 眼睛 鄰近的正常脈絡膜和鞏膜組織 NAT
K7 97 49 M 喉 喉組織 (粘膜下腺) 正常
K8 98 39 M 喉 喉組織 正常
K9 99 21 M 喉 喉軟骨組織 正常
表12
位置 No. 年齡 性別 器官/解剖部位 病理學診斷 TNM
A1 1 62 M 食道 鱗狀細胞癌 惡性
A2 2 56 M 食道 鱗狀細胞癌 惡性
A3 3 72 F 食道 鱗狀細胞癌 惡性
A4 4 74 M 胃 腺癌 惡性
A5 5 56 M 胃 腺癌 惡性
A6 6 55 F 胃 腺癌 惡性
A7 7 67 M 結腸 腺癌 惡性
A8 8 58 M 結腸 腺癌 惡性
A9 9 37 M 結腸 腺癌 惡性
B1 10 38 M 食道 鄰近的正常食道組織 NAT
B2 11 64 M 食道 鄰近的正常食道組織 NAT
B3 12 48 M 食道 鄰近的正常食道組織 NAT
B4 13 54 M 胃 鄰近的正常胃組織 NAT
B5 14 54 M 胃 鄰近的正常胃組織 NAT
B6 15 64 F 胃 鄰近的正常胃組織 NAT
B7 16 56 F 結腸 鄰近的正常結腸組織 NAT
B8 17 70 F 結腸 鄰近的正常結腸組織 NAT
B9 18 64 F 結腸 鄰近的正常結腸組織 NAT
C1 19 55 M 直腸 腺癌 惡性
C2 20 67 M 直腸 腺癌 惡性
C3 21 44 F 直腸 腺癌 惡性
C4 22 32 F 肝 肝癌 惡性
C5 23 40 M 肝 肝癌 惡性
C6 24 55 F 肝 肝癌 惡性
C7 25 66 M 肺 鱗狀細胞癌 惡性
C8 26 55 M 肺 鱗狀細胞癌 惡性
C9 27 55 M 肺 鱗狀細胞癌 惡性
D1 28 43 F 直腸 癌症鄰近直腸組織 AT
D2 29 52 M 直腸 鄰近的正常直腸組織 NAT
D3 30 67 M 直腸 鄰近的正常直腸組織 NAT
D4 31 63 M 肝 鄰近的正常肝組織 NAT
D5 32 55 M 肝 鄰近的正常肝組織 NAT
D6 33 56 M 肝 鄰近的正常肝組織 NAT
D7 34 68 F 肺 鄰近的正常肺組織 NAT
D8 35 65 M 肺 鄰近的正常肺組織 NAT
D9 36 68 M 肺 鄰近的正常肺組織 NAT
E1 37 70 M 腎 透明細胞癌 惡性
E2 38 46 M 腎 透明細胞癌 惡性
E3 39 82 M 腎 透明細胞癌 惡性
E4 40 29 F 乳房 無特殊類型的浸潤性癌 惡性
E5 41 51 F 乳房 無特殊類型的浸潤性癌 惡性
E6 42 63 F 乳房 無特殊類型的浸潤性癌 惡性
E7 43 45 F 子宮頸 鱗狀細胞癌 惡性
E8 44 76 F 子宮頸 鱗狀細胞癌 惡性
E9 45 47 F 子宮頸 鱗狀細胞癌 惡性
F1 46 54 M 腎 鄰近的正常腎組織 NAT
F2 47 56 M 腎 鄰近的正常腎組織 NAT
F3 48 61 F 腎 鄰近的正常腎組織 NAT
F4 49 43 F 乳房 鄰近的正常乳房組織 NAT
F5 50 38 F 乳房 鄰近的正常乳房組織 NAT
F6 51 41 F 乳房 鄰近的正常乳房組織 NAT
F7 52 39 F 子宮頸 鄰近的正常子宮頸管組織 NAT
F8 53 25 F 子宮頸 鄰近的正常子宮頸組織 NAT
F9 54 49 F 子宮頸 鄰近的正常子宮頸組織 NAT
G1 55 55 F 卵巢 高惡性度漿細胞癌 惡性
G2 56 49 F 卵巢 高惡性度漿細胞癌 惡性
G3 57 48 F 卵巢 高惡性度漿細胞癌 惡性
G4 58 76 M 前列腺 腺癌 惡性
G5 59 80 M 前列腺 腺癌 惡性
G6 60 82 M 前列腺 腺癌 惡性
G7 61 55 M 胰臟 導管腺癌 惡性
G8 62 65 M 胰臟 導管腺癌 惡性
G9 63 68 F 胰臟 導管腺癌 惡性
H1 64 53 F 卵巢 鄰近的正常卵巢組織 NAT
H2 65 45 F 卵巢 鄰近的正常卵巢組織 NAT
H3 66 40 F 卵巢 鄰近的正常卵巢組織 NAT
H4 67 63 M 前列腺 鄰近的正常前列腺組織 NAT
H5 68 52 M 前列腺 鄰近的正常前列腺組織 NAT
H6 69 35 M 前列腺 鄰近的正常前列腺組織 NAT
H7 70 69 F 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 NAT
H8 71 64 M 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 NAT
H9 72 70 M 胰臟 鄰近的正常胰臟組織 NAT
6.5. 實例5: 基於Tn-MUC4的CAR 6.5.1. 概述
設計了具有2D5、5B8和15F3的VH和VL結構域的嵌合抗原受體 (CAR)。然後在標靶特異性細胞毒殺試驗中評估CAR。 6.5.2. 材料和方法 6.5.2.1. 載體設計
設計了各種具有包含2D5、5B8和15F3的VH和VL結構域的scFv的CAR構建體 (圖4A至4C)。在構建體中，VH和VL是與一個長連接子 (GGGGS) 3(SEQ ID NO:160) 一起連接到CD8a鉸鏈，其後是CD28跨膜結構域和第二代CAR (CD28細胞內訊號結構域和CD3-zeta細胞內鏈)。scFv的N端是連接到CD8a訊號序列。將MUC4 CAR亞選殖到Virapower慢病毒載體pLENTI6.3-V5-DEST (Invitrogen) 中。
編碼CAR的核苷酸序列顯示在表13中。CAR的胺基酸序列顯示在表14中。
表13 編碼CAR的核苷酸序列
構建體 核酸序列 核酸說明 SEQ ID NO:
1 (2D5-CART) ATGGCTCTGCCCGTTACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTAACATCATGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGGCTGTGTCTGCCGGCGAGAAAGTGACCATGAGCTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTACTCCAGCGACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGTCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAAAGCGGCGTGCCCGATAGATTCACAGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAACGTGCAGGCCGAGGATCTGGCCGTGTACTACTGTCACCAGTACCTGAGCAGCTACACCTTCGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAGGCGGAGGCGGATCTGGCGGCGGAGGTAGCGGTGGCGGAGGATCTCAAGTTCAGCTGCAGCAGTCCGATGCCGAGCTGGTTAAGCCTGGCGCCTCTGTGCGGATCAGCTGTAAAGCCTACGGCTACACATTCACCGACCACGCCATCCACTGGGTCAAGCAGAAACCTGAACAGGGCCTCGAGTGGCTGGGCTACATCAGCCCTGGCAACGACGACATCCAGTACAACGCCAAGTTCAAGGGCAAAGCCACACTGACCGCCGACAAGTCTAGCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAACAGCCTGACCAGCGACGACAGCGCCGTGTATTTCTGCAAGCGGAGCATGGCCAACAGCTTCGACTATTGGGGCCAGGGCACAACCCTGACCGTGTCCTCTACAACAACCCCTGCTCCTCGGCCACCTACACCAGCTCCTACAATTGCCTCTCAACCTCTGTCTCTGCGGCCCGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCTGTGCACACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGAGAAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCTGATGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGAAGAAAGAGAGGCTCTGGCGAAGGCAGAGGCTCCCTGCTTACATGTGGCGACGTGGAAGAGAACCCCGGACCAATGGTGTCCAAGGGCGAAGAGGACAACATGGCCATCATCAAAGAATTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAAGGCAGCGTGAACGGCCACGAGTTCGAGATTGAAGGCGAAGGCGAGGGCAGACCTTACGAGGGAACACAGACCGCCAAGCTGAAAGTGACAAAAGGCGGCCCACTGCCTTTCGCCTGGGACATCCTGTCTCCACAGTTTATGTACGGCAGCAAGGCCTACGTGAAGCACCCCGCCGATATTCCCGACTACCTGAAGCTGAGCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGAGAGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGTCGTGACCGTGACTCAAGATAGCTCTCTGCAGGACGGCGAGTTCATCTACAAAGTGAAGCTGCGGGGCACCAACTTTCCCTCTGATGGCCCCGTGATGCAGAAAAAGACCATGGGCTGGGAAGCCAGCAGCGAGAGAATGTACCCTGAAGATGGCGCCCTGAAAGGCGAGATCAAGCAGCGGCTGAAACTGAAGGATGGCGGCCACTACGACGCCGAAGTGAAAACCACCTACAAGGCCAAGAAACCCGTGCAGCTGCCAGGCGCCTACAACGTGAACATCAAGCTGGACATTACCAGCCACAACGAGGACTACACCATCGTGGAACAGTACGAGAGAGCCGAAGGCAGGCACTCTACAGGCGGAATGGACGAGCTGTATAAGTAG 1至63 = CD8A訊號序列 64至399 = 2D5 LC 400至444 = 連接子 445至795 = 2D5 HC 796至930 = CD8a鉸鏈 931至1011 = CD28跨膜結構域 1012至1134 = 細胞內訊號結構域 1135至1470 = CD3-zeta細胞內鏈 1471至2253 = T2A-mCherry 203
2 (15F3-CART) ATGGCTCTGCCCGTTACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTAACATCATGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGGCTGTGTCTGCCGGCGAGAAAGTGACCATGAGCTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTACTCCAGCGACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGTCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAAAGCGGCGTGCCCGATAGATTCACAGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCTCTAACGTGCGCGCCGAGGATCTGGCCGTGTACTACTGTCACCAGTACCTGAGCAGCTACACCTTCGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAGGCGGAGGCGGATCTGGCGGCGGAGGTAGCGGTGGCGGAGGATCTCAAGTTCAGCTGCAGCAGTCTGACGCCGAGCTGGTTGAACCTGGCGCCTCTGTGAAGATCAGCTGCAAGGCCTACGGCTACACATTCACCGACCACGCCATCCACTGGGTCAAGCAGAAACCTGAACAGGGCCTCGAGTGGCTGGGCTACATCAGCCCTGGCAACGACGACATCCAGTACAACGCCAAGTTCAAGGGCAGAGCTACCCTGACCGCCGACAAGTCTAGCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAACAGCCTGACCAGCGACGACAGCGCCGTGTATTTCTGCAAGCGGAGCATGGCCAACAGCTTCGACTTTTGGGGCCAGGGCACCACACTGACCGTGTCCTCTACAACAACCCCTGCTCCTCGGCCACCTACACCAGCTCCTACAATTGCCTCTCAACCTCTGTCTCTGCGGCCCGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCTGTGCACACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGAGAAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCTGATGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGAAGAAAGAGAGGCTCTGGCGAAGGCAGAGGCTCCCTGCTTACATGTGGCGACGTGGAAGAGAACCCCGGACCAATGGTGTCCAAGGGCGAAGAGGACAACATGGCCATCATCAAAGAATTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAAGGCAGCGTGAACGGCCACGAGTTCGAGATTGAAGGCGAAGGCGAGGGCAGACCTTACGAGGGAACACAGACCGCCAAGCTGAAAGTGACAAAAGGCGGCCCACTGCCTTTCGCCTGGGACATCCTGTCTCCACAGTTTATGTACGGCTCCAAGGCCTATGTGAAGCACCCCGCCGACATTCCCGACTACCTGAAGCTGAGCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGAGAGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGTCGTGACCGTGACTCAAGATAGCTCTCTGCAGGACGGCGAGTTCATCTACAAAGTGAAGCTGCGGGGCACCAACTTTCCCTCTGATGGCCCCGTGATGCAGAAAAAGACCATGGGCTGGGAAGCCAGCAGCGAGAGAATGTACCCTGAAGATGGCGCCCTGAAAGGCGAGATCAAGCAGCGGCTGAAACTGAAGGATGGCGGCCACTACGACGCCGAAGTGAAAACCACCTACAAGGCCAAGAAACCCGTGCAGCTGCCAGGCGCCTACAACGTGAACATCAAGCTGGACATTACCAGCCACAACGAGGACTACACCATCGTGGAACAGTACGAGAGAGCCGAAGGCAGGCACTCTACAGGCGGAATGGACGAGCTGTATAAGTAG 1至63 = CD8A訊號序列 64至399 = 15F3 LC 400至444 = 連接子 445至795 = 15F3 HC 796至930 = CD8a鉸鏈 931至1011 = CD28跨膜結構域 1012至1134 = 細胞內訊號結構域 1135至1470 = CD3-zeta細胞內鏈 1471至2253 = T2A-mCherry 204
3 (5B8-CART) ATGGCTCTGCCCGTTACAGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTTCTGCATGCCGCCAGACCTAATATCATGATGACACAGAGCCCCAGCAGCCTGGTGGTGTCTGCTGGCGAGAAAGTGACCATGAGCTGCAAGAGCAGCCACAGCGTGCTGTACTCCAGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGTCTCCTAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAAGAATAGCGGCGTGCCCGATAGATTCACAGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCTCTGTGCAGGCCGAGGATCTGGCCGTGTACTACTGTCACCAGTACCTGAGCAGCTACACCTTCGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAGGCGGAGGCGGATCTGGCGGCGGAGGTAGCGGTGGCGGAGGATCTCAAGTTCAGCTGCAGCAGTCCGATGCCGAGCTGGTTAAGCCTGGCGCCTCTGTGAAGATCAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACATTCACCGATCACGCCATCCACTGGGTCAAGCAGAAACCAGAGCAGGGCCTCGAGTGGATCGGCTACTTTTCTCCCGGCAACGGCGACATCAAGTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAAAGCCACACTGACCGCCGACAGAAGCAGCTCCACAGCCAACATGCACCTGAACAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTATTTCTGCAAGCGGAGCATGGCCAACTACTTCGACTATTGGGGCCAGGGCACAACCCTGACCGTGTCCTCTACAACAACCCCTGCTCCTCGGCCACCTACACCAGCTCCTACAATTGCCTCTCAACCTCTGTCTCTGCGGCCCGAGGCTTGTAGACCTGCTGCTGGCGGAGCTGTGCACACAAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGACTTCTGGGTGCTCGTGGTTGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACTCTCTGCTGGTCACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCCGAAGCAAGAGAAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCTAGACGGCCCGGACCTACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCTCCTCCTAGAGACTTCGCCGCCTACCGGTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCTGATGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAATGAGCTGAACCTGGGGCGCAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGAGAAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCTCAAGAGGGCCTGTATAACGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAACGCAGAAGAGGAAAGGGCCACGACGGACTGTATCAGGGCCTGAGCACAGCCACCAAGGACACCTATGATGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCTCCAAGAAGAAAAAGAGGCTCCGGCGAAGGCAGAGGCTCCCTGCTTACATGCGGAGATGTGGAAGAGAACCCCGGACCAATGGTGTCCAAGGGCGAAGAGGACAACATGGCCATCATCAAAGAATTCATGCGGTTCAAGGTGCACATGGAAGGCAGCGTGAACGGCCACGAGTTCGAGATTGAAGGCGAAGGCGAGGGCAGACCTTACGAGGGAACACAGACCGCCAAGCTGAAAGTGACAAAAGGCGGCCCACTGCCTTTCGCCTGGGACATCCTGTCTCCACAGTTTATGTACGGCAGCAAGGCCTACGTGAAGCACCCCGCCGATATTCCCGACTACCTGAAGCTGAGCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGAGAGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGTCGTGACCGTGACTCAAGATAGCTCTCTGCAGGACGGCGAGTTCATCTACAAAGTGAAGCTGCGGGGCACCAACTTTCCCTCTGATGGCCCCGTGATGCAGAAAAAGACCATGGGCTGGGAAGCCAGCAGCGAGAGAATGTACCCTGAAGATGGCGCCCTGAAAGGCGAGATCAAGCAGCGGCTGAAACTGAAGGATGGCGGCCACTACGACGCCGAAGTGAAAACCACCTACAAGGCCAAGAAACCCGTGCAGCTGCCAGGCGCCTACAACGTGAACATCAAGCTGGACATTACCAGCCACAACGAGGACTACACCATCGTGGAACAGTACGAGAGAGCCGAAGGCAGGCACTCTACAGGCGGAATGGACGAGCTGTATAAGTAG 1至63 = CD8A訊號序列 64至399 = 5B8 LC 400至444 = 連接子 445至795 = 5B8 HC 796至930 = CD8a鉸鏈 931至1011 = CD28跨膜結構域 1012至1134 = 細胞內訊號結構域 1135至1470 = CD3-zeta細胞內鏈 1471至2253 = T2A-mCherry 205
表14 CAR胺基酸序列
構建體 胺基酸序列 胺基酸說明 SEQ ID NO:
1 (2D5-CART) MALPVTALLLPLALLLHAARPNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRKRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKGEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHSTGGMDELYK 1至21 = CD8a訊號序列 22至133 = 2D5 LC 134至148 = 連接子 149至265 = HC 2D5 266至310 = CD8a鉸鏈 311至337 = CD28跨膜 338至378 = CD28細胞內結構域 379至490 = CD3z細胞內結構域 491至750 = T2A mcherry 206
2 (15F3-CART) MALPVTALLLPLALLLHAARPNIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRKRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKGEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHSTGGMDELYK* 1至21 = CD8a訊號序列 22至133 = 15F3 LC 134至148 = 連接子 149至265 = HC 15F3 266至310 = CD8a鉸鏈 311至337 = CD28跨膜 338至378 = CD28細胞內結構域 379至490 = CD3z細胞內結構域 491至750 = T2A mcherry 207
3 (5B8-CART) MALPVTALLLPLALLLHAARPNIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRRKRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKGEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHSTGGMDELYK* 1至21 = CD8a訊號序列 22至133 = 5B8 LC 134至148 = 連接子 149至265 = HC 5B8 266至310 = CD8a鉸鏈 311至337 = CD28跨膜 338至378 = CD28細胞內結構域 379至490 = CD3z細胞內結構域 491至750 = T2A mcherry 208
6.5.2.2. 轉導和擴增
按照標準方案，在經lipofectamine (Thermofisher) 轉染的HEK293T細胞中產生慢病毒。在48至72小時後收集慢病毒上清液。使用Lymphoprep密度離心，接著以培養盤貼附法來去除貼附細胞，藉此分離出健康供體PBMC。將非貼附PBMC在含有10% FBS、50 µM 2-巰基乙醇和20 ng/ml rIL-2的RPMI-1640 Dutch改良型培養基中進行培養，並使用人類T活化劑CD3/CD28 Dynabeads進行活化。活化後，使用病毒上清液來轉導T細胞兩次，持續24小時，病毒感染劑量 (MOI) 至少為5:1。此外，每1.5 x 10 7個細胞添加1 µl的transplus病毒轉導增強劑 (Alstembio)，以提高感染效率。將經轉導的CAR T細胞在培養基中以0.5 x 10 6細胞/毫升與1 x 10 6細胞/毫升之間的密度進行擴增，直到進行研究為止。 6.5.2.3. 細胞毒殺測定
將HaCaT WT和COSMC KO細胞以每孔20,000個細胞的密度接種在96孔E盤中，並過夜使其貼附。一天後，以效應細胞與標靶細胞為5:1或3:1的比例將CAR T細胞加入，並培養2至3天。使用iCelligence讀板器，藉由電導率來評估與CAR T細胞共同培養的標靶細胞的細胞毒殺情形。關於100%細胞死亡對照組，是使用含1%吐溫的PBS或1 uM星形孢菌素 (staurosporine)。為了評估由CAR T細胞所產生的IFN-γ，從共同培養物中收集上清液，並根據製造商的說明 (Abcam) 進行ELISA。 6.5.2.4. 體內腫瘤測定
透過側腹皮下注射T3M4 COSMC-KO細胞來建立基於細胞株的異種移植固態腫瘤模型。當腫瘤體積達到200 mm 3時，將小鼠隨機分組，並在第1天和第5天時用第2代2D5-CART (每次注射10 7個細胞) 進行靜脈內治療。透過體積 (在第7、14、21、32和46天透過卡尺測量) 和體重來測量每種治療對腫瘤生長的影響。在接受治療的小鼠中沒有顯示不良事件的臨床症狀。 6.5.3. 結果
CAR構建體是在人類T細胞中表現。使用Alexa488-ProteinL或生物素-MUC4醣肽抗原，透過流式細胞技術來確認CART構建體的表面表現。在T細胞與T3M4的比例為5:1或10:1的條件下，2D5-CART和5B8-CART可特異性地殺死Tn +COSMC-KO T3M4，但不會殺死Tn -T3M4 (圖5A至5B及表15)。在5:1的比例之下，2D5-CART殺死50%的Tn +COSMC-KO T3M4所需時間為4.25小時，在10:1的比例之下，所需時間為1.5小時。在10:1的比例之下，5B8-CART殺死50%的Tn +COSMC-KO T3M4所需時間為5小時。數據表明了2D5-CART和5B8-CART可選擇性地針對會表現MUC4-Tn的細胞。
表15 KT50 (殺死50%細胞的時間)
標靶細胞 T細胞比例 2D5 (KT50) 5B8 (KT50) T細胞 (KT50)
T3M4 5:1 4.25小時 不適用 不適用
COSMC-KO 10:1 1.5小時 5小時 不適用
T細胞與T3M4細胞一起培養7小時
透過側腹皮下注射T3M4 COSMC-KO細胞來建立基於細胞株的異種移植固態腫瘤模型。當腫瘤體積達到200 mm3時，將小鼠隨機分組，並在第1天和第5天時用第2代2D5-CART (每次注射107個細胞) 進行靜脈內治療。透過體積 (在第7、14、21、32和46天透過卡尺測量) 來測量每種治療對腫瘤生長的影響。我們觀察到了與對照相比，治療條件 (2D5-CART) 的腫瘤生長減少了67%。 6.6. 實例6: 基於Tn-MUC4的CrossMabs 6.6.1. 概述
設計了具有2D5的VH和VL結構域的CrossMab。 6.6.2. 材料和方法 6.6.2.1. 載體設計
編碼CrossMAb的核苷酸序列顯示在表16中。CrossMAb的胺基酸序列顯示在表17中。簡而言之，透過共同表現4個構建體，使用2×1格式 (2個2D5 FAB 和1個CD3 FAB) 來創造CrossMabs。第一個構建體 (長HC-2D5/CD3) 包含2D5的可變重鏈序列，該可變重鏈序列連接到人類CH1結構域，該CH1結構域連接到連接子和帶有人類CL-kappa結構域的CD3 FAB，該CL-kappa結構域後方有連接子、hCH2、hCH3和CHS結構域。第二個構建體 (短HC-2D5) 包含連接到人類CH1結構域的2D5的可變重鏈序列，該CH1結構域連接到鉸鏈，其後方有hCH2、hCH3、CHS結構域。hCH2結構域包含LALA-PG突變 (L234A、L235A、P329G)，而hCH3具有適當的CrossMAb突變 (長HC-2D5/CD3具有「knob」突變S354C、T366W，而短HC-2D5具有「hole」突變Y349C/T366S/L368A/Y407V)。第三個構建體 (Cross VL CD3) 包含商業抗CD3抗體的可變輕鏈序列，其後方有短連接子和人類CH1結構域和鉸鏈。第四個構建體 (VL-2D5) 包含連接到人類CL-kappa結構域的2D5的可變輕鏈序列。
表16 編碼CrossMabs的核苷酸序列
構建體 核酸序列 核酸說明 SEQ ID NO:
1 (長HC-2D5/CD3) CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGACGCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAGGATCAGCTGCAAGGCCTACGGCTACACCTTCACCGACCACGCCATCCACTGGGTGAAGCAGAAGCCCGAGCAGGGCCTGGAGTGGCTGGGCTACATCAGCCCCGGCAACGACGACATCCAGTACAACGCCAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTACATGCAGCTGAACAGCCTGACCAGCGACGACAGCGCCGTGTACTTCTGCAAGAGGAGCATGGCCAACAGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCCTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGAGGTGCAGCTGCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACGCCATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGGATCAGGAGCAAGTACAACAACTACGCCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTGAGGCACGGCAACTTCGGCAACAGCTACGTGAGCTGGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCCAGCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGGCCGCCGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGGGCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCTGCAGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGTGGTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG 1至351 = 2D5 HC 352至645 = hCH1 646至693 = 連接子 694至1068 = CD3 HC 1069至1389 = CL 1390至1419 = 連接子 1420至2070 = CH2、CH3、CHS 209
2 (短HC-2D5) CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGACGCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAGGATCAGCTGCAAGGCCTACGGCTACACCTTCACCGACCACGCCATCCACTGGGTGAAGCAGAAGCCCGAGCAGGGCCTGGAGTGGCTGGGCTACATCAGCCCCGGCAACGACGACATCCAGTACAACGCCAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTACATGCAGCTGAACAGCCTGACCAGCGACGACAGCGCCGTGTACTTCTGCAAGAGGAGCATGGCCAACAGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCCTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGGCCGCCGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGGGCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTGCACCCTGCCCCCCAGCAGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGAGCTGCGCCGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGGTGAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG 1至351= 2D5 HC 352至645 = hCH1 646至690 = 鉸鏈 691至1341 = CH2、CH3、CHS 210
3 (Cross VL CD3) CAGGCCGTGGTGACCCAGGAGCCCAGCCTGACCGTGAGCCCCGGCGGCACCGTGACCCTGACCTGCGGCAGCAGCACCGGCGCCGTGACCACCAGCAACTACGCCAACTGGGTGCAGGAGAAGCCCGGCCAGGCCTTCAGGGGCCTGATCGGCGGCACCAACAAGAGGGCCCCCGGCACCCCCGCCAGGTTCAGCGGCAGCCTGCTGGGCGGCAAGGCCGCCCTGACCCTGAGCGGCGCCCAGCCCGAGGACGAGGCCGAGTACTACTGCGCCCTGTGGTACAGCAACCTGTGGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGCTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGC 1至327 = CD3輕鏈 328至333 = 連接子 334至627 = hCH1 628至642 = 鉸鏈 211
4 (VL-2D5) AACATCATGCTGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGGCCGTGAGCGCCGGCGAGAAGGTGACCATGAGCTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTACAGCAGCGACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCACCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAACGTGCAGGCCGAGGACCTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGTACCTGAGCAGCTACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC 1至336 = 2D5 LC 337至657 = hCL-kappa 212
表 17 CrossMab胺基酸序列
構建體 胺基酸序列 胺基酸說明 SEQ ID NO:
1 (長HC-2D5/CD3) QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 1至117 = 2D5 HC 118至215 = hCH1 216至231 = 連接子 232至356 = CD3 HC 357至463 = CL 464至473 = 連接子 474至690 = CH2、CH3、CHS 213
2 (短 HC-2D5) QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 1至117 = 2D5 HC 118至215 = hCH1 216至230 = 鉸鏈 231至447 = CH2、CH3、CHS 214
3 (Cross VL CD3) QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC 1至109 = CD3輕鏈 110至111 = 連接子 112至209 = hCH1 210至214 = 鉸鏈 215
4 (VL-2D5) NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 1至112 = 2D5 LC 113至219 = hCL-kappa 216
6.6.2.2. CrossMabs的產生
CrossMabs是透過暫時轉染EXPI-CHO細胞而產生。IL2訊號序列被添加到每個構建體中。在表現6天後，從上清液中收取CrossMabs。CrossMabs是透過ProteinA瓊脂醣珠的常規方法加以純化。 6.6.2.3. 細胞毒殺測定
將MCF7 WT與HCT116以及HaCaT WT與COSMC KO細胞以每孔20,000個細胞的密度接種在96孔E盤中，並過夜使其貼附。一天後，以效應細胞與標靶細胞為5:1或10:1的比例將CD4 +T細胞或PBMC加入，並培養2至3天。使用iCelligence讀板器，藉由電導率來評估標靶細胞的細胞毒殺情形。關於100%細胞死亡對照組，是使用含1%吐溫的PBS或1 uM星形孢菌素 (staurosporine)。 6.6.2.4. 體內腫瘤測定
透過皮下側腹注射來建立患者來源的異種移植固態腫瘤模型 (Champions (CTG-2823))。在TCB注射時的腫瘤體積為200 mm 3。TCB是透過IV注射來遞送。在第0天和第17天注射PBMC。在第0、1、2、3、4、20和22天進行TCB給藥。以每週兩次 (第2、5、10、12、18、20、28和30天)，透過卡尺測量腫瘤體積。在接受治療的小鼠中沒有顯示不良事件的臨床症狀。 6.6.3. 結果
在次nM濃度下 (100至300 pM；圖8和9A至9B)，2D5-CrossMAb可以有效地在體外殺死具有高MUC4-Tn表現的細胞 (COSMC-KO HaCaT和HCT-116)。2D5-TCB還可以在體外殺死具有較低MUC4-Tn表現的細胞 (圖9A至9B和表18)。數據表明了2D5-CrossMab可選擇性地針對會表現MUC4-Tn的細胞。
表18 CrossMab TCB-2D5的細胞毒殺EC50
細胞株 EC50 受體計數
HaCaT (COSMC-KO) 100 pM Tn高 (每個細胞約11,000個受體)
MCF7 1 nM Tn低 (每個細胞約1,000個受體)
HCT116 (COSMC-KO) 300 pM Tn高 (每個細胞約12,000個受體)
6.7. 實例7: 人源化抗體和抗原結合片段 6.7.1. 概述
使用標準CDR移植技術，將鼠類抗體2D5進行人源化。關於重鏈，使用四個模板IGHV-1*01、IGHV1-69*06、IGHV5-78*01和IGHV7-4-1*02來生成包含連續大量人源化水平 (即與人類受體生殖系具有同一性) 的CDR移植抗體版本。類似地，關於輕鏈，使用三個模板IGKV4-1*01、IGKV2-40*01和IGKV3-20*01來生成包含連續大量人源化水平的CDR移植抗體版本。
表現構建體是被設計成用在Expi-293細胞中表現。IL2分泌訊號被添加到重鏈和輕鏈構建體中。使用常規方法以ProteinA珠子來純化抗體。使用ELISA來評估人源化候選抗體與非醣基化和Tn-醣基化MUC4肽結合的能力。還透過以下方法將人源化候選抗體與親本抗體進行比較: 以粒徑排阻層析法、流式細胞儀來檢測與標靶陽性細胞的結合親和力；以及以Octet來確定與肽抗原的結合親和力。 6.7.2. 材料和方法 6.7.2.1. 載體設計
關於每個生殖系，創建了三個人源化版本: 保守的「A」序列、較不保守的「B」序列和「積極的」「C」序列 (參見表4A至4G)。還創建了每個生殖系的所有三個A、B和C序列的共通序列，它們反映了每個位置上最常見的胺基酸殘基。
這些人源化模板會在兩個階段進行組裝和分析，以獲得最佳的生物物理和功能特性。在第一階段，將建構多達12對保守的「A」設計，並測定其與MUC4醣肽的結合。在基於「A」設計而選擇出最佳組合之後，保守的「A」設計將被反覆地替換成較不保守的「B」設計，並最終被替換成最不保守的「C」設計。 6.7.2.2. ELISA
在96孔Corning高結合ELISA微孔盤上以在0.2 M碳酸氫鹽緩衝液中經滴定的MUC4肽進行塗覆，在pH 9.4、4 °C下過夜，濃度範圍為0.08 µg/ml至10 µg/ml。使用BSA作為對照/測量背景。然後將盤在室溫下用SuperBlock TM(Thermo Fisher) 阻斷1小時。在盤洗滌過後，將2D5的人源化變體在ELISA盤上培養1小時。使用常規方法來表現和純化所有需測試的變體。簡而言之，利用重鏈和輕鏈構建體來暫時轉染Expi-293細胞，將抗體分泌到上清液中並使用蛋白A瓊脂醣珠進行純化。然後將盤加以洗滌，再與二抗 (1/3000 Goat Anti-mouse IgG (H+L) HRP (Abcam 62-6520)) 培養1小時。然後洗滌盤，並用1-Step TMUltra TMB (Thermo Fisher) 進行顯色2分鐘。然後用2N硫酸停止顯色。接著測量450 nm處的吸光度。 6.7.2.3. 生物層干涉儀 (Octet)
可以使用BLI來針對特定抗原以評估2D5的人源化候選抗體的抗體親和力。在BLI測定中，可以將抗原固定在生物傳感器上 (例如醣-MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)) 或陰性對照分析物，例如未醣基化的MUC4肽 (CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155))，並呈遞給一個候選抗體以進行親和力測量或二個競爭抗體以串聯 (或連續步驟) 進行表位組合。如果用第一抗體進行飽和未阻斷第二抗體的結合，則會發生與非重疊表位的結合。透過將結合曲線擬合到特定的模型: 1:1單價模型或2:1二價模型來確定親和力。誤差 (＞95%信賴) 是透過所生成的曲線與模型的匹配程度計算得出。 6.7.2.4. 流式細胞技術
用TrypLE select (Gibco) 來解離貼壁的細胞，並用細胞培養基 (RPMI內含L-麩胺醯胺、1% PenStrep和10% FBS) 將其從培養瓶表面清洗下來。透過在4°C下以300 x g離心5分鐘，然後再懸浮於含有1% BSA的PBS中 (PBS/1% BSA)，以洗滌細胞數次。將細胞重新懸浮成每毫升中有5x10 5個細胞至每毫升中有2x10 6個細胞之間，然後分配到96孔U形底盤中。將稀釋的商業抗體 (0.25至2 µg/ml) 或經純化的人源化2D5候選抗體添加到T3M4 COSMC-KO細胞中並在冰上培養1小時。用PBS/1% BSA洗滌幾次後，將細胞在冰上用經1:1600稀釋的AlexaFluor647偶聯F(ab)2山羊抗人類IgG Fcγ培養30分鐘 (JacksonImmunoResearch)。用PBS/1% BSA再次洗滌細胞，然後在含有1%甲醛的PBS/1% BSA中加以固定。在2或4雷射Attune NXT流式細胞儀上分析細胞。透過FlowJo軟體來處理數據。 6.7.2.5. 粒徑排阻層析法
使用粒徑排阻層析法 (SEC) 來測試2D5的人源化候選抗體是否存在可溶性蛋白質聚集體。簡而言之，將純化的抗體加載到HPLC二氧化矽TSK-GEL G3000SW管柱 (TOSOH Biosciences，Montgomeryville，PA) 和連接的UV檢測器 (166 Detector) 上。流動相組成是PBS，流速為1.0 mL/min。透過監測管柱洗脫液在280 nm處的吸光度來確定蛋白質種類的濃度。 6.7.3. 結果
為了表徵2D5人源化候選抗體，透過流式細胞技術來測量針對T3M4 COSMC-KO細胞的親和力，以及透過Octet來測量針對Tn-醣基化MUC4的親和力。
進行了針對非醣基化和Tn-醣基化MUC4的ELISA。發現在ELISA的情況下，所有的候選抗體僅會與Tn-醣基化MUC4反應，而不會與非醣基化對應物反應 (數據未顯示)。
人源化候選抗體對MUC4醣肽的親和力是透過Octet來確定。表19總結了在95%信賴度下具有正負誤差的解離常數 (Kd)。透過流式細胞技術來確定每個候選抗體與T3M4-COSMC KO (或T3M4-M) 細胞的結合。表19列出了所有候選抗體的EC50。最後，使用粒徑排阻層析法，透過測量可溶性蛋白質聚集體的存在來量化經純化抗體的品質 (參見表19)。候選抗體2D5-HV1-69-B/KV4B的聚集最少，具有大於99%的可溶性抗體和小於0.5%的可溶性聚集體。基於親和力測量、蛋白質純度和最高可能的人源化百分比，2D5-HV1-69-C/KV4B、2D5-HV1-69-B/KV2B、2D5-HV1-69-C/KV4A、2D5-HV1-69- B/KV4B、2D5-HV1-69-B/KV4A呈現了最有利的抗體資料，儘管所有的候選抗體都是有功能性的。
表19
分子 人源化 (%) OCTET SEC Flow
同一性 (%) Muc4-GP 峰面積 (%) T3M4-M (ng/ml)
HC LC 親和力 主峰 親和力
2D5-HV1-69-C/KV2B 86.7 85.3 5.3 nM 96.79 19.44
2D5-HV1-69-C/KV4B 86.7 95.1 6.8 nM 98.4 11.94
2D5-HV1-69-B/KV2B 82.7 85.3 3.3 nM 98.68 24.84
2D5-HV1-69-C/KV4A 86.7 94.1 2.3 nM 96.96 12.72
2D5-HV1-69-A/KV2A 78.6 82.4 4.1 nM 98.53 17.9
2D5-HV1-69-B/KV4B 82.7 95.1 1.6 nM 99.54 15.89
2D5-HV1-69-B/KV4A 82.7 94.1 3.6 nM 98.54 30.95
2D5-HV1-3B/KV2B 84.7 85.3 7.7 nM 97.97 16.28
2D5-cAb 嵌合抗體 (人類Fc結構域 + 鼠類可變結構域) 3.2 nM 98.94 17.74
7. 具體實施方案及參考文獻的引用
雖然已經說明和描述了各種具體實施方案，但應當理解的是可以在不背離本文的精神和範圍的情況下進行各種改變。本文是透過以下列出的編號實施方案來舉例說明。 1. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其特異性結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，該肽已被GalNAc在絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行醣基化，以粗體和劃底線文字顯示 (「MUC4醣肽」)。 2. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 3. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 4. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 5. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 6. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 7. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 8. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 9. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 10. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 11. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 12. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 13. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 14. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 15. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 16. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 17. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 18. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 19. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 20. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 21. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 22. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 23. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含SEQ ID NO:135的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 24. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 25. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 26. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 27. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 28. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 29. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 30. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 31. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 32. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 33. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 34. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 35. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 36. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 37. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 38. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 39. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 40. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 41. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 42. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 43. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 44. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 45. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 46. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 47. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 48. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 49. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 50. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 51. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 52. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 53. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 54. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 55. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 56. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 57. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 58. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 59. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 60. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 61. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 62. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 63. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 64. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 65. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 66. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 67. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 68. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 69. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 70. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 71. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 72. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 73. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 74. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 75. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 76. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 77. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 78. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 79. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 80. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 81. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 82. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 83. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 84. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 85. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 86. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 87. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 88. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 89. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 90. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 91. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 92. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 93. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 94. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 95. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 96. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 97. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 98. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 99. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 100. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 101. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 102. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 103. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 104. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 105. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 106. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 107. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 108. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 109. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 110. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 111. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 112. 如實施方案1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合MUC4醣肽。 113. 如實施方案1至112中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其特異性結合COSMC剔除的T3M4細胞。 114. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 115. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 116. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 117. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 118. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 119. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 120. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 121. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 122. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 123. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 124. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 125. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 126. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 127. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 128. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 129. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 130. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 131. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 132. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 133. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 134. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 135. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 136. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 137. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 138. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 139. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 140. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 141. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 142. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 143. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 144. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 145. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 146. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 147. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 148. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 149. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 150. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 151. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 152. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 153. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 154. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 155. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 156. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 157. 實如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 158. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 159. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 160. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 161. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 162. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 163. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 164. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 165. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 166. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 167. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 168. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 169. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 170. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 171. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 172. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 173. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 174. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 175. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 176. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 177. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 178. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 179. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 180. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 181. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 182. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 183. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 184. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 185. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 186. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 187. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 188. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 189. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 190. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 191. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 192. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 193. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 194. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 195. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 196. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 197. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 198. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 199. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 200. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 201. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 202. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 203. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 204. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 205. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 206. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 207. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 208. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 209. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 210. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 211. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 212. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 213. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 214. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 215. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 216. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 217. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 218. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 219. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 220. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 221. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 222. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 223. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 224. 如實施方案113所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的重鏈可變 (VH) 序列和DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段互相競爭以結合COSMC剔除的T3M4細胞。 225. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括: (a) 互補決定區 (CDR) H1，其包含表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR-H1胺基酸序列 (例如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:103或SEQ ID NO:127)； (b) CDR-H2，其包含表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR-H2胺基酸序列 (例如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:128)； (c) CDR-H3，其包含表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR-H3胺基酸序列 (例如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:129)； (d) CDR-L1，其包含表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR-L1胺基酸序列 (例如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:106或SEQ ID NO:130)； (e) CDR-L2，其包含表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR-L2胺基酸序列 (例如SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:107或SEQ ID NO:131)；以及 (f) CDR-L3，其包含表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR-L3胺基酸序列 (例如SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:132)。 226. 如實施方案225所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74和/或SEQ ID NO:104) 指定為X 1的胺基酸是I。 227. 如實施方案225所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74和/或SEQ ID NO:104) 指定為X 1的胺基酸是F。 228. 如實施方案225至227中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:104和/或SEQ ID NO:128) 指定為X 2的胺基酸是D。 229. 如實施方案225至227中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:104和/或SEQ ID NO:128) 指定為X 2的胺基酸是G。 230. 如實施方案225至229中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:74和/或SEQ ID NO:104) 指定為X 3的胺基酸是Q。 231. 如實施方案225至229中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:74和/或SEQ ID NO:104) 指定為X 3的胺基酸是K。 232. 如實施方案225至231中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:74和/或SEQ ID NO:104) 指定為X 4的胺基酸是A。 233. 如實施方案225至231中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:74和/或SEQ ID NO:104) 指定為X4的胺基酸是E。 234. 如實施方案225至233中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:105和/或SEQ ID NO:129) 指定為X 5的胺基酸是S。 235. 如實施方案225至233中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:105和/或SEQ ID NO:129) 指定為X 5的胺基酸是Y。 236. 如實施方案225至235中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:105和/或SEQ ID NO:129) 指定為X 6的胺基酸是Y。 237. 如實施方案225至235中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:105和/或SEQ ID NO:129) 指定為X 6的胺基酸是F。 238. 如實施方案225至237中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:106和/或SEQ ID NO:130) 指定為X 7的胺基酸是Q。 239. 如實施方案225至237中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:106和/或SEQ ID NO:130) 指定為X 7的胺基酸是H。 240. 如實施方案225至239中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:106和/或SEQ ID NO:130) 指定為X 8的胺基酸是D。 241. 如實施方案225至239中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:106和/或SEQ ID NO:130) 指定為X 8的胺基酸是N。 242. 如實施方案225至241中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83和/或SEQ ID NO:107) 指定為X 9的胺基酸是R。 243. 如實施方案225至241中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83和/或SEQ ID NO:107) 指定為X 9的胺基酸是K。 244. 如實施方案225至243中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83和/或SEQ ID NO:107) 指定為X 10的胺基酸是E。 245. 如實施方案225至243中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中在表1D、1E、1F、2D和3D中任一表所述的CDR序列中 (例如SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:107) 指定為X 10的胺基酸是N。 246. 如實施方案225至245中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H1包含胺基酸序列GYTFTDHA (SEQ ID NO:67)。 247. 如實施方案225至245中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H1包含胺基酸序列DHAIH (SEQ ID NO:73)。 248. 如實施方案225至245中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H1包含胺基酸序列GYTFTDH (SEQ ID NO:79)。 249. 如實施方案225至245中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H1包含胺基酸序列GYTFTDHAIH (SEQ ID NO:103)。 250. 如實施方案225至245中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H1包含胺基酸序列DH (SEQ ID NO:127)。 251. 如實施方案225至250中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H2包含胺基酸序列X 1SPGNX 2DI (SEQ ID NO:68)。 252. 如實施方案225至250中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H2包含胺基酸序列YX 1SPGNX 2DIX 3YNX 4KFKG (SEQ ID NO:74)。 253. 如實施方案225至250中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H2包含胺基酸序列SPGNX 2D (SEQ ID NO:80)。 254. 如實施方案225至250中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H2包含胺基酸序列YX 1SPGNX 2DIX 3YNX 4KFKG (SEQ ID NO:104)。 255. 如實施方案225至250中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H2包含胺基酸序列SPGNX 2(SEQ ID NO:128)。 256. 如實施方案225至255中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H3包含胺基酸序列KRSMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:69)。 257. 如實施方案225至255中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H3包含胺基酸序列SMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:75)。 258. 如實施方案225至255中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H3包含胺基酸序列SMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:81)。 259. 如實施方案225至255中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H3包含胺基酸序列KRSMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:105)。 260. 如實施方案225至255中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-H3包含胺基酸序列SMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:129)。 261. 如實施方案225至260中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L1包含胺基酸序列X 7SVLYSSX 8QKNY (SEQ ID NO:70)。 262. 如實施方案225至260中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L1包含胺基酸序列KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA (SEQ ID NO:76)。 263. 如實施方案225至260中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L1包含胺基酸序列KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA (SEQ ID NO:82)。 264. 如實施方案225至260中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L1包含胺基酸序列KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA (SEQ ID NO: 106)。 265. 如實施方案225至260中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L1包含胺基酸序列X 7SVLYSSX 8QKNY (SEQ ID NO:130)。 266. 如實施方案225至266中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L2包含胺基酸序列WAS (SEQ ID NO:71)。 267. 如實施方案225至266中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L2包含胺基酸序列WASTX 9X 10S (SEQ ID NO:77)。 268. 如實施方案225至266中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L2包含胺基酸序列WASTX 9X 10S (SEQ ID NO:83)。 269. 如實施方案225至266中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L2包含胺基酸序列WASTX 9X 10S (SEQ ID NO:107)。 270. 如實施方案225至266中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L2包含胺基酸序列WAS (SEQ ID NO:131)。 271. 如實施方案225至270中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L3包含胺基酸序列HQYLSSYT (SEQ ID NO:72)。 272. 如實施方案225至270中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L3包含胺基酸序列HQYLSSYT (SEQ ID NO:78)。 273. 如實施方案225至270中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L3包含胺基酸序列HQYLSSYT (SEQ ID NO:84)。 274. 如實施方案225至270中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L3包含胺基酸序列HQYLSSYT (SEQ ID NO:108)。 275. 如實施方案225至270中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CDR-L3包含胺基酸序列HQYLSSYT (SEQ ID NO:132)。 276. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由IMGT所定義的2D5的CDR的VH (例如SEQ ID NO:3至5) 以及含有由IMGT所定義的2D5的CDR的VL (例如SEQ ID NO:6至8)。 277. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由Kabat所定義的2D5的CDR的VH (例如SEQ ID NO:9至11) 以及含有由Kabat所定義的2D5的CDR的VL (例如SEQ ID NO:12至14)。 278. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由Chothia所定義的2D5的CDR的VH (例如SEQ ID NO:15至17) 以及含有由Chothia所定義的2D5的CDR的VL (例如SEQ ID NO:18至20)。 279. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由IMGT所定義的5B8的CDR的VH (例如SEQ ID NO:25至27) 以及含有由IMGT所定義的5B8的CDR的VL (例如SEQ ID NO:28至30)。 280. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由Kabat所定義的5B8的CDR的VH (例如SEQ ID NO:31至33) 以及含有由Kabat所定義的5B8的CDR的VL (例如SEQ ID NO:34至36)。 281. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由Chothia所定義的5B8的CDR的VH (例如SEQ ID NO:37至39) 以及含有由Chothia所定義的5B8的CDR的VL (例如SEQ ID NO:40至42)。 282. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由IMGT所定義的15F3的CDR的VH (例如SEQ ID NO:47至49) 以及含有由IMGT所定義的15F3的CDR的VL (例如SEQ ID NO:50至52)。 283. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由Kabat所定義的15F3的CDR的VH (例如SEQ ID NO:53至55) 以及含有由Kabat所定義的15F3的CDR的VL (例如SEQ ID NO:56至58)。 284. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有由Chothia所定義的15F3的CDR的VH (例如SEQ ID NO:59至61) 以及含有由Chothia所定義的15F3的CDR的VL (例如SEQ ID NO:62至64)。 285. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有GYTFTDHAIH (SEQ ID NO:85)、YISPGNDDIQYNAKFKG (SEQ ID NO:86) 和KRSMANSFDY (SEQ ID NO:87) 的CDR的VH；以及含有KSQSVLYSSDQKNYLA (SEQ ID NO:88)、WASTRES (SEQ ID NO:89) 和HQYLSSYT (SEQ ID NO:90) 的CDR的VL。 286. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有GYTFTDHAIH (SEQ ID NO:91)、YFSPGNGDIKYNEKFKG (SEQ ID NO:92) 和KRSMANYFDY (SEQ ID NO:93) 的CDR的VH；以及含有KSSHSVLYSSNQKNYLA (SEQ ID NO:94)、WASTKNS (SEQ ID NO:95) 和HQYLSSYT (SEQ ID NO:96) 的CDR的VL。 287. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有GYTFTDHAIH (SEQ ID NO:97)、YISPGNDDIQYNAKFKG (SEQ ID NO:98) 和KRSMANSFDF (SEQ ID NO:99) 的CDR的VH；以及含有KSSQSVLYSSDQKNYLA (SEQ ID NO:100)、WASTRES (SEQ ID NO:101) 和HQYLSSYT (SEQ ID NO:102) 的CDR的VL。 288. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有DH (SEQ ID NO:109)、SPGNDD (SEQ ID NO:110) 和SMANSFDY (SEQ ID NO:111) 的CDR的VH；以及含有QSVLYSSDQKNY (SEQ ID NO:112)、WAS (SEQ ID NO:113) 和HQYLSSYT (SEQ ID NO:114) 的CDR的VL。 289. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有DH (SEQ ID NO:115)、SPGNGD (SEQ ID NO:116) 和SMANYFDY (SEQ ID NO:117) 的CDR的VH；以及含有HSVLYSSNQKNY (SEQ ID NO:118)、WAS (SEQ ID NO:119) 和HQYLSSYT (SEQ ID NO:120) 的CDR的VL。 290. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至224中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有DH (SEQ ID NO:121)、SPGNDD (SEQ ID NO:122) 和SMANSFDF (SEQ ID NO:123) 的CDR的VH；以及含有QSVLYSSDQKNY (SEQ ID NO:124)、WAS (SEQ ID NO:125) 和HQYLSSYT (SEQ ID NO:126) 的CDR的VL。 291. 如實施方案1至290中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其為嵌合或人源化抗體，或嵌合或人源化抗體的抗原結合片段。 292. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 具有至少95%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 具有至少95%序列同一性之胺基酸序列的VL。 293. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 具有至少97%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 具有至少97%序列同一性之胺基酸序列的VL。 294. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 具有至少99%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 具有至少99%序列同一性之胺基酸序列的VL。 295. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有胺基酸序列QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的VH，以及含有胺基酸序列NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的VL。 296. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 具有至少95%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 具有至少95%序列同一性之胺基酸序列的VL。 297. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 具有至少97%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 具有至少97%序列同一性之胺基酸序列的VL。 298. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 具有至少99%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 具有至少99%序列同一性之胺基酸序列的VL。 299. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有胺基酸序列QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的VH，以及含有胺基酸序列NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 的VL。 300. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 具有至少95%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 具有至少95%序列同一性之胺基酸序列的VL。 301. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 具有至少97%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 具有至少97%序列同一性之胺基酸序列的VL。 302. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有與QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 具有至少99%序列同一性之胺基酸序列的VH，以及含有與NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 具有至少99%序列同一性之胺基酸序列的VL。 303. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，視情況地是根據實施方案1至291中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其包括: 含有胺基酸序列QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的VH，以及含有胺基酸序列NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的VL。 304. 一種與參考抗體或抗原結合片段競爭的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，該參考抗體或抗原結合片段包括: (a) QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的輕鏈可變 (VL) 序列； (b) QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 的輕鏈可變 (VL) 序列； (c) QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的輕鏈可變 (VL) 序列；或 (d) 2D5的人源化重鏈可變 (VH) 序列 (例如SEQ ID NO:133至144) 和2D5的人源化輕鏈可變 (VL) 序列 (例如SEQ ID NO:145至153)， 用於結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154)，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被GalNAc醣基化 (「MUC4醣肽」)，該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包括: (a) 具有位在VH序列內之第一、第二和第三CDR結構的VH序列；和 (b) 具有位在VL序列內之第四、第五和第六CDR結構的VL序列， 其中該第一、第二、第三、第四、第五和第六CDR結構彼此協同作用以實現抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段與MUC4醣肽的結合。 305. 一種與參考抗體或抗原結合片段競爭的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，該參考抗體或抗原結合片段包括: (a) QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的輕鏈可變 (VL) 序列； (b) QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 的輕鏈可變 (VL) 序列； (c) QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的重鏈可變 (VH) 序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的輕鏈可變 (VL) 序列；或 (d) 2D5的人源化重鏈可變 (VH) 序列 (例如SEQ ID NO:133至144) 和2D5的人源化輕鏈可變 (VL) 序列 (例如SEQ ID NO:145至153)， 用於結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154)，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被GalNAc醣基化 (「MUC4醣肽」)，該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包括一用於結合MUC4醣肽的結構。 306. 如實施方案305所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該用於結合MUC4醣肽的結構包含重鏈可變 (VH) 結構域和輕鏈可變 (VL) 結構域。 307. 如實施方案304至306中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的VH序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的VL序列的參考抗體或抗原結合片段互相競爭。 308. 如實施方案304至306中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的VH序列和QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的VL序列的參考抗體或抗原結合片段互相競爭。 309. 如實施方案304至306中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的VH序列和NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的VL序列的參考抗體或抗原結合片段互相競爭。 310. 如實施方案304至306中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段係與包含2D5的人源化重鏈可變 (VH) 序列 (例如SEQ ID NO:133至144) 和2D5的人源化輕鏈可變 (VL) 序列 (例如SEQ ID NO:145至153) 的參考抗體或抗原結合片段相互競爭。 311. 如實施方案1至310中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其可優先與相較於正常細胞而在癌細胞上過度表現的醣-MUC4表位結合。 312. 如實施方案1至311中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其特異性結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，該MUC4肽已在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上用STn醣基化。 313. 如實施方案1至311中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，該MUC4肽已在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上用STn醣基化。 314. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為1 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 315. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為1 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 316. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為1 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 317. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為1 nM至50 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 318. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為5 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 319. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為5 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 320. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為5 nM至50 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 321. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為5 nM至25 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 322. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為5 nM至10 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 323. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為10 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 324. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為10 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 325. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為10 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 326. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為10 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 327. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為10 nM至50 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 328. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為10 nM至25 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 329. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為50 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 330. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為50 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 331. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為50 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 332. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為100 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 333. 如實施方案1至313中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其結合MUC4醣肽的結合親和力 (KD) 為100 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀進行測量。 334. 如實施方案314至333中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中對MUC4醣肽的結合親和力是透過表面電漿共振進行測量。 335. 如實施方案314至333中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中對MUC4醣肽的結合親和力是透過生物層干涉儀進行測量。 336. 如實施方案1至335中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合未醣基化MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) (「未醣基化MUC4肽」)。 337. 如實施方案1至336中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少3倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或未醣基化MUC4肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 338. 如實施方案1至337中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少5倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或未醣基化MUC4肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 339. 如實施方案1至338中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少10倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或未醣基化MUC4肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 340. 如實施方案1至339中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少20倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或未醣基化MUC4肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 341. 如實施方案1至340中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少50倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或未醣基化MUC4肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 342. 如實施方案1至341中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對未醣基化MUC4肽的結合親和力的至少100倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或未醣基化MUC4肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 343. 如實施方案1至342中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已使用純化的重組人類醣基轉移酶GalNAc-T1、GalNAc-T2和GalNAc-T4於體外醣基化的MUC1縱排重複序列 (VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG) 3(SEQ ID NO:201) (「第一MUC1醣肽」)。 344. 如實施方案1至343中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少3倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第一MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 345. 如實施方案1至344中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少5倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第一MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 346. 如實施方案1至345中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少10倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第一MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 347. 如實施方案1至346中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少20倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第一MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 348. 如實施方案1至347中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少50倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第一MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 349. 如實施方案1至348中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第一MUC1醣肽的結合親和力的至少100倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第一MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 350. 如實施方案1至349中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行體外醣基化的MUC1肽TAPPAHGV TS APD T RPAPG ST APPAHGVT (SEQ ID NO:202) (「第二MUC1醣肽」)。 351. 如實施方案1至350中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少3倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第二MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 352. 如實施方案1至351中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少5倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第二MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 353. 如實施方案1至352中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少10倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第二MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 354. 如實施方案1至353中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少20倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第二MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 355. 如實施方案1至354中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少50倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第二MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 356. 如實施方案1至355中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對第二MUC1醣肽的結合親和力的至少100倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或第二MUC1肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 357. 如實施方案1至356中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的蘇胺酸和絲胺酸殘基上進行體外醣基化的CD44v6肽GYRQ T PKEDSH S TTGTAAA (SEQ ID NO:218) (「CD44v6醣肽」)。 358. 如實施方案1至357中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對CD44v6醣肽的結合親和力的至少3倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或CD44v6醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 359. 如實施方案1至358中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對CD44v6醣肽的結合親和力的至少5倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或CD44v6醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 360. 如實施方案1至359中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對CD44v6醣肽的結合親和力的至少10倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或CD44v6醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 361. 如實施方案1至360中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對CD44v6醣肽的結合親和力的至少20倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或CD44v6醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 362. 如實施方案1至361中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對CD44v6醣肽的結合親和力的至少50倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或CD44v6醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 363. 如實施方案1至362中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對CD44v6醣肽的結合親和力的至少100倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或CD44v6醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 364. 如實施方案1至363中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行體外醣基化的LAMP1肽CEQDRP S P TT APPAPPSPSP (SEQ ID NO:219) (「LAMP1醣肽」)。 365. 如實施方案1至364中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對LAMP1醣肽的結合親和力的至少3倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或LAMP1醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 366. 如實施方案1至365中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對LAMP1醣肽的結合親和力的至少5倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或LAMP1醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 367. 如實施方案1至366中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對LAMP1醣肽的結合親和力的至少10倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或LAMP1醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 368. 如實施方案1至367中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對LAMP1醣肽的結合親和力的至少20倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或LAMP1醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 369. 如實施方案1至368中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對LAMP1醣肽的結合親和力的至少50倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或LAMP1醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 370. 如實施方案1至369中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對LAMP1醣肽的結合親和力的至少100倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或LAMP1醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 371. 如實施方案1至370中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行體外醣基化的cMET肽PTKSFISGG ST ITGVGKNLN (SEQ ID NO:220) (「cMET醣肽」)。 372. 如實施方案1至371中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對cMET醣肽的結合親和力的至少3倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或cMET醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 373. 如實施方案1至372中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對cMET醣肽的結合親和力的至少5倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或cMET醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 374. 如實施方案1至373中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對cMET醣肽的結合親和力的至少10倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或cMET醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 375. 如實施方案1至374中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對cMET醣肽的結合親和力的至少20倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或cMET醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 376. 如實施方案1至375中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對cMET醣肽的結合親和力的至少50倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或cMET醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 377. 如實施方案1至376中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其對MUC4醣肽的結合親和力是抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段對cMET醣肽的結合親和力的至少100倍，視情況地其中結合親和力是透過表面電漿共振進行測量，並且進一步視情況地，其中表面電漿共振是於存在有飽和量的MUC4醣肽或cMET醣肽之下進行量測 (例如約1 µM、約1.5 µM或約2 µM的任一肽)。 378. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括用於結合相較於正常細胞而在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構。 379. 如實施方案378所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該用於結合MUC4表位的結構包含重鏈可變 (VH) 結構域和輕鏈可變 (VL) 結構域。 380. 如實施方案1至379中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其是多價的。 381. 如實施方案1至380中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其為抗原結合片段。 382. 如實施方案381所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗原結合片段是單鏈可變片段 (scFv) 的形式。 383. 如實施方案382所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該scFv包含輕鏈可變片段N端的重鏈可變片段。 384. 如實施方案382所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該scFv包含輕鏈可變片段C端的重鏈可變片段。 385. 如實施方案382至384中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該scFv重鏈可變片段和輕鏈可變片段是共價結合至連接子序列，該連接子序列視情況地為4至15個胺基酸。 386. 如實施方案1至380中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其為多特異性抗體的形式。 387. 一種抗醣-MUC4抗體，包括用於結合相較於正常細胞而在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構，其為多特異性抗體的形式。 388. 如實施方案387所述的抗醣-MUC4抗體，其中該用於結合MUC4表位的結構包含重鏈可變 (VH) 結構域和輕鏈可變 (VL) 結構域。 389. 如實施方案386至388中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該多特異性抗體是可與不同於第一表位的第二表位相結合的雙特異性抗體。 390. 如實施方案389所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是開罐器（bottle opener）、mAb-Fv、mAb-scFv、中心-scFv（central-scFv）、單臂中心-scFc（one-armed central-scFv）或雙scFv（dual scFv）形式的雙特異性抗體。 391. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是bottle opener形式的雙特異性抗體。 392. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是mAb-Fv形式的雙特異性抗體。 393. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是mAb-scFv形式的雙特異性抗體。 394. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是central-scFv形式的雙特異性抗體。 395. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是one-armed central-scFv形式的雙特異性抗體。 396. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是dual scFv形式的雙特異性抗體。 397. 如實施方案389所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是雙特異性結構域交換抗體 (例如CrossMab)、Fab臂交換抗體、雙特異性T細胞銜接抗體 (BiTE) 或雙親和力重新靶向分子 (DART)。 398. 如實施方案397所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是雙特異性結構域交換抗體 (例如CrossMab)。 399. 如實施方案398所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是包含在重鏈和輕鏈之間具有結構域交叉的Fab-臂的雙特異性IgG (例如CrossMabFAB)。 400. 如實施方案398所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是包含在可變重鏈和可變輕鏈之間具有結構域交叉的Fab-臂的雙特異性IgG (例如CrossMabVH-VL)。 401. 如實施方案398所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是包含在穩定重鏈和穩定輕鏈之間具有結構域交叉的Fab-臂的雙特異性IgG (例如CrossMabCH1-CL)。 402. 如實施方案397所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是Fab臂交換抗體。 403. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是雙親和力重新靶向分子 (DART)。 404. 如實施方案390所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中雙特異性抗體是雙特異性T細胞銜接抗體 (BiTE)。 405. 如實施方案389至404中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該第二表位是MUC4表位。 406. 如實施方案389至404中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該第二表位是與正常細胞相比會在癌細胞上過度表現的MUC4表位。 407. 如實施方案389至404中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該第二表位是T細胞表位。 408. 如實施方案407所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中T細胞表位包含CD3表位、CD8表位、CD16表位、CD25表位、CD28表位或NKG2D表位。 409. 如實施方案408所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中T細胞表位包含CD3表位，視情況地是存在於人類CD3中的表位。 410. 如實施方案409所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中CD3表位包含CD3γ表位、CD3δ表位、CD3ε表位或CD3ζ表位。 411. 如實施方案1至410中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其是偶聯至一可檢測部分。 412. 如實施方案411所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該可檢測部分是酶、放射性同位素或螢光標記。 413. 如實施方案1至412中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段不是由寄存於歐洲認證細胞培養物收藏中心 (ECACC) 登錄號為09120102的細胞株4D9所產生的Tn-MUC4結合多肽。 414. 如實施方案1至412中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段不是由寄存於歐洲認證細胞培養物收藏中心 (ECACC) 登錄號為09120103的細胞株6E3所產生的Tn-MUC4結合多肽。 415. 一種雙特異性抗體，包含 (a) 用於結合相較於正常細胞而在癌細胞上會過度表現的MUC4表位的結構，以及 (b) 用於結合T細胞表位的結構，視情況地其中該雙特異性抗體具有實施方案389至414中任一方案所描述的特徵。 416. 如實施方案415所述的雙特異性抗體，其中該用於結合MUC4表位的結構包含重鏈可變 (VH) 結構域和輕鏈可變 (VL) 結構域。 417. 如實施方案415或416所述的雙特異性抗體，其中該用於結合T細胞表位的結構包含重鏈可變 (VH) 結構域和輕鏈可變 (VL) 結構域。 418. 如實施方案415至417中任一方案所述的雙特異性抗體，其中T細胞表位包含CD3表位、CD8表位、CD16表位、CD25表位、CD28表位或NKG2D表位。 419. 如實施方案418所述的雙特異性抗體，其中T細胞表位包含CD3表位，視情況地是存在於人類CD3中的表位。 420. 如實施方案419所述的雙特異性抗體，其中CD3表位包含CD3γ表位、CD3δ表位、CD3ε表位或CD3ζ表位。 421. 一種融合蛋白，包括實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的胺基酸序列，或實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體，其可操作地連接至至少第二胺基酸序列。 422. 如實施方案421所述的融合蛋白，其中第二胺基酸序列是4-1BB、CD2、CD3ζ或其片段的序列。 423. 如實施方案421所述的融合蛋白，其中第二胺基酸序列是融合肽的序列。 424. 如實施方案423所述的融合蛋白，其中融合肽是CD28-CD3-zeta融合肽、4-1BB (CD137)-CD3-zeta融合肽、CD2-CD3-zeta融合肽、CD28-CD2-CD3-zeta融合肽，或4-1BB (CD137)-CD2-CD3-zeta融合肽。 425. 如實施方案421所述的融合蛋白，其中第二胺基酸序列是T細胞活化調節劑或其片段的序列。 426. 如實施方案425所述的融合蛋白，其中T細胞活化調節劑是IL-15或IL-15Rα。 427. 如實施方案421所述的融合蛋白，其中第二胺基酸序列是MIC蛋白結構域的序列。 428. 如實施方案427所述的融合蛋白，其中MIC蛋白結構域是α1-α2結構域。 429. 如實施方案428所述的融合蛋白，其中α1-α2結構域是MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5、ULBP6或OMCPα1-α2結構域。 430. 如實施方案427至429中任一方案所述的融合蛋白，其中MIC蛋白結構域是經工程化MIC蛋白結構域。 431. 如實施方案421所述的融合蛋白，其中第二胺基酸序列是神經胺糖酸酶 (EC 3.2.1.18或EC 3.2.1.129) 的序列。 432. 如實施方案431所述的融合蛋白，其中神經胺糖酸酶胺基酸序列是來自於 Micromonospora viridifaciens。 433. 如實施方案431或432所述的融合蛋白，其中神經胺糖酸酶包括與GGSPVPPGGEPLYTEQDLAVNGREGFPNYRIPALTVTPDGDLLASYDGRPTGIDAPGPNSILQRRSTDGGRTWGEQQVVSAGQTTAPIKGFSDPSYLVDRETGTIFNFHVYSQRQGFAGSRPGTDPADPNVLHANVATSTDGGLTWSHRTITADITPDPGWRSRFAASGEGIQLRYGPHAGRLIQQYTIINAAGAFQAVSVYSDDHGRTWRAGEAVGVGMDENKTVELSDGRVLLNSRDSARSGYRKVAVSTDGGHSYGPVTIDRDLPDPTNNASIIRAFPDAPAGSARAKVLLFSNAASQTSRSQGTIRMSCDDGQTWPVSKVFQPGSMSYSTLTALPDGTYGLLYEPGTGIRYANFNLAWLGG (SEQ ID NO:222) 具有至少95%序列同一性的胺基酸序列。 434. 如實施方案431至433中任一方案所述的融合蛋白，其中神經胺糖酸酶包括與GGSPVPPGGEPLYTEQDLAVNGREGFPNYRIPALTVTPDGDLLASYDGRPTGIDAPGPNSILQRRSTDGGRTWGEQQVVSAGQTTAPIKGFSDPSYLVDRETGTIFNFHVYSQRQGFAGSRPGTDPADPNVLHANVATSTDGGLTWSHRTITADITPDPGWRSRFAASGEGIQLRYGPHAGRLIQQYTIINAAGAFQAVSVYSDDHGRTWRAGEAVGVGMDENKTVELSDGRVLLNSRDSARSGYRKVAVSTDGGHSYGPVTIDRDLPDPTNNASIIRAFPDAPAGSARAKVLLFSNAASQTSRSQGTIRMSCDDGQTWPVSKVFQPGSMSYSTLTALPDGTYGLLYEPGTGIRYANFNLAWLGG (SEQ ID NO:222) 具有至少97%序列同一性的胺基酸序列。 435. 如實施方案431至434中任一方案所述的融合蛋白，其中神經胺糖酸酶包括與GGSPVPPGGEPLYTEQDLAVNGREGFPNYRIPALTVTPDGDLLASYDGRPTGIDAPGPNSILQRRSTDGGRTWGEQQVVSAGQTTAPIKGFSDPSYLVDRETGTIFNFHVYSQRQGFAGSRPGTDPADPNVLHANVATSTDGGLTWSHRTITADITPDPGWRSRFAASGEGIQLRYGPHAGRLIQQYTIINAAGAFQAVSVYSDDHGRTWRAGEAVGVGMDENKTVELSDGRVLLNSRDSARSGYRKVAVSTDGGHSYGPVTIDRDLPDPTNNASIIRAFPDAPAGSARAKVLLFSNAASQTSRSQGTIRMSCDDGQTWPVSKVFQPGSMSYSTLTALPDGTYGLLYEPGTGIRYANFNLAWLGG (SEQ ID NO:222) 具有至少98%序列同一性的胺基酸序列。 436. 如實施方案431至435中任一方案所述的融合蛋白，其中神經胺糖酸酶包括與GGSPVPPGGEPLYTEQDLAVNGREGFPNYRIPALTVTPDGDLLASYDGRPTGIDAPGPNSILQRRSTDGGRTWGEQQVVSAGQTTAPIKGFSDPSYLVDRETGTIFNFHVYSQRQGFAGSRPGTDPADPNVLHANVATSTDGGLTWSHRTITADITPDPGWRSRFAASGEGIQLRYGPHAGRLIQQYTIINAAGAFQAVSVYSDDHGRTWRAGEAVGVGMDENKTVELSDGRVLLNSRDSARSGYRKVAVSTDGGHSYGPVTIDRDLPDPTNNASIIRAFPDAPAGSARAKVLLFSNAASQTSRSQGTIRMSCDDGQTWPVSKVFQPGSMSYSTLTALPDGTYGLLYEPGTGIRYANFNLAWLGG (SEQ ID NO:222) 具有至少99%序列同一性的胺基酸序列。 437. 如實施方案431至436中任一方案所述的融合蛋白，其中神經胺糖酸酶包括胺基酸序列GGSPVPPGGEPLYTEQDLAVNGREGFPNYRIPALTVTPDGDLLASYDGRPTGIDAPGPNSILQRRSTDGGRTWGEQQVVSAGQTTAPIKGFSDPSYLVDRETGTIFNFHVYSQRQGFAGSRPGTDPADPNVLHANVATSTDGGLTWSHRTITADITPDPGWRSRFAASGEGIQLRYGPHAGRLIQQYTIINAAGAFQAVSVYSDDHGRTWRAGEAVGVGMDENKTVELSDGRVLLNSRDSARSGYRKVAVSTDGGHSYGPVTIDRDLPDPTNNASIIRAFPDAPAGSARAKVLLFSNAASQTSRSQGTIRMSCDDGQTWPVSKVFQPGSMSYSTLTALPDGTYGLLYEPGTGIRYANFNLAWLGG (SEQ ID NO:222)。 438. 如實施方案431至437中任一方案所述的融合蛋白，其包含訊號序列。 439. 如實施方案438所述的融合蛋白，其中訊號序列是顆粒溶素 (granulysin) 訊號序列。 440. 如實施方案438所述的融合蛋白，其中訊號序列是顆粒酶K (granzyme K) 訊號序列。 441. 如實施方案438所述的融合蛋白，其中訊號序列是NPY訊號序列。 442. 如實施方案438所述的融合蛋白，其中訊號序列是IFN訊號序列。 443. 如實施方案431至442中任一方案所述的融合蛋白，其包含自裂解肽序列。 444. 如實施方案443所述的融合蛋白，其中自裂解肽序列是2A肽。 445. 如實施方案444所述的融合蛋白，其中2A肽是T2A。 446. 一種嵌合抗原受體 (CAR)，包括一個或多個根據實施方案381至385中任一方案所述的抗原結合片段。 447. 如實施方案446所述的CAR，其包含一個或多個根據實施方案382至385中任一方案所述的scFv。 448. 如實施方案447所述的CAR，其包含一個根據實施方案382至385中任一方案所述的scFv。 449. 如實施方案448所述的CAR，其包含二個根據實施方案382至385中任一方案所述的scFv。 450. 如實施方案449所述的CAR，其中二個scFv具有相同的胺基酸序列。 451. 如實施方案449或450所述的CAR，其中二個scFv是透過連接子序列共價結合，該連接子序列視情況地為4至15個胺基酸。 452. 如實施方案446至451中任一方案所述的CAR，以胺基端至羧基端的順序包括: (i) 一個或多個抗原結合片段，(ii) 跨膜結構域，以及 (iii) 細胞內訊息傳遞結構域。 453. 一種嵌合抗原受體 (CAR)，以胺基端至羧基端的順序包括: (i) 一個或多個用於結合相較於正常細胞而會在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構，(ii) 跨膜結構域，以及 ( iii) 細胞內訊息傳遞結構域。 454. 如實施方案453所述的CAR，其中該用於結合MUC4表位的結構包含重鏈可變 (VH) 結構域和輕鏈可變 (VL) 結構域。 455. 如實施方案452至454中任一方案所述的CAR，其中跨膜結構域包含CD28跨膜結構域。 456. 如實施方案455所述的CAR，其中CD28跨膜結構域包含胺基酸序列FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQ ID NO:163)。 457. 如實施方案452至456中任一方案所述的CAR，其中細胞內訊息傳遞結構域包含共刺激訊息傳遞區。 458. 如實施方案457所述的CAR，其中共刺激訊息傳遞區包含CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83、DAP10、GITR特異性結合的配體、或其組合的整個細胞質結構域或細胞質結構域的訊息傳遞部分。 459. 如實施方案458所述的CAR，其中CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83、DAP10或GITR特異性結合的配體是人類CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、與CD83、DAP10或GITR特異性結合的配體。 460. 如實施方案458或實施方案459所述的CAR，其中共刺激訊息傳遞結構域的訊息傳遞部分或整個共刺激訊息傳遞結構域包括CD2的細胞質結構域。 461. 如實施方案460所述的CAR，其中CD2的細胞質結構域包含胺基酸序列TKRKKQRSRRNDEELETRAHRVATEERGRKPHQIPASTPQNPATSQHPPPPPGHRSQAPSHRPPPPGHRVQHQPQKRPPAPSGTQVHQQKGPPLPRPRVQPKPPHGAAENSLSPSSN (SEQ ID NO:217)。 462. 如實施方案458至461中任一方案所述的CAR，其中共刺激訊息傳遞結構域包含CD28的細胞質結構域的訊息傳遞部分或整個細胞質結構域。 463. 如實施方案462所述的CAR，其中CD28的細胞質結構域包含胺基酸序列RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEQ ID NO:169)。 464. 如實施方案452至463中任一方案所述的CAR，其中細胞內訊息傳遞結構域包含T細胞訊息傳遞結構域。 465. 如實施方案464所述的CAR，其中T細胞訊息傳遞結構域是在共刺激訊息傳遞區的C端。 466. 如實施方案464或實施方案465所述的CAR，其中T細胞訊息傳遞結構域包含CD3-zeta訊息傳遞結構域。 467. 如實施方案466所述的CAR，其中CD3-zeta訊息傳遞結構域包含胺基酸序列RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO:168)。 468. 如實施方案452至467中任一方案所述的CAR，其進一步包括位在一個或多個抗體片段、一個或多個scFv或一個或多個用於結合MUC4表位的結構的N端的訊息肽。 469. 如實施方案468所述的CAR，其中訊息肽是人類CD8訊息肽。 470. 如實施方案469所述的CAR，其中人類CD8訊息肽包含胺基酸序列MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID NO:161)。 471. 如實施方案452至470中任一方案所述的CAR，其進一步包括位在 (a) 一個或多個抗原結合片段或一個或多個用於結合MUC4表位的結構與 (b) 跨膜結構域之間的鉸鏈。 472. 如實施方案471所述的CAR，其中鉸鏈包括人類CD8a鉸鏈。 473. 如實施方案472所述的CAR，其中人類CD8a鉸鏈包含胺基酸序列TTTPAPPRPPTPAPTIASLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFAC (SEQ ID NO:164)。 474. 如實施方案472所述的CAR，其中人類CD8a鉸鏈包含胺基酸序列TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO:223)。 475. 如實施方案471所述的CAR，其中鉸鏈包含人類IgG4-短鉸鏈，該人類IgG4-短鉸鏈包含胺基酸序列ESKYGPPCPSCP (SEQ ID NO:166)。 476. 如實施方案471所述的CAR，其中鉸鏈包含人類IgG4-長鉸鏈，該人類IgG4-長鉸鏈包含胺基酸序列ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM (SEQ ID NO:167)。 477. 一種嵌合抗原受體 (CAR)，其胺基酸序列包含表14中2D5-CART的胺基酸序列 (SEQ ID NO:206)。 478. 一種嵌合抗原受體 (CAR)，其胺基酸序列包含表14中15F3-CART的胺基酸序列 (SEQ ID NO:207)。 479. 一種嵌合抗原受體 (CAR)，其胺基酸序列包含表14中5B8-CART的胺基酸序列 (SEQ ID NO:208)。 480. 一種抗體藥物複合體，包括與細胞毒性劑結合的實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、或實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白。 481. 如實施方案480所述的抗體藥物複合體，其中細胞毒性劑是奧瑞他汀 (auristatin)、DNA小溝結合劑、烷化劑、烯二炔、來西托品 (lexitropsin)、多卡黴素 (duocarmycin)、紫杉烷 (taxane)、多拉司他丁 (dolastatin)、美登素 (maytansinoid)、長春花生物鹼 (vinca alkaloid)，或瓢菌素毒素 (amanitin toxin)。 482. 如實施方案481所述的抗體藥物複合體，其中抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段或雙特異性抗體是透過連接子偶聯至細胞毒性劑。 483. 如實施方案482所述的抗體藥物複合體，其中連接子在細胞內條件下是可裂解的。 484. 如實施方案483所述的抗體藥物複合體，其中可裂解連接子可被細胞內蛋白酶裂解。 485. 如實施方案484所述的抗體藥物複合體，其中連接子包含二肽。 486. 如實施方案485所述的抗體藥物複合體，其中二肽是纈胺酸-瓜胺酸或苯丙胺酸-離胺酸。 487. 如實施方案483所述的抗體藥物複合體，其中可裂解連接子在小於5.5的pH下是可水解的。 488. 如實施方案487所述的抗體藥物複合體，其中可水解連接子是腙連接子。 489. 如實施方案483所述的抗體藥物複合體，其中可裂解連接子是雙硫鍵連接子。 490. 一種嵌合T細胞受體 (TCR)，包括: (a) 根據實施方案381至385中任一方案所述的抗原結合片段； (b) 含有第一TCR結構域的第一多肽鏈，該第一TCR結構域包含來自於第一TCR次單元的第一TCR跨膜結構域；以及 (c) 含有第二TCR結構域的第二多肽鏈，該第二TCR結構域包含來自於第二TCR次單元的第二TCR跨膜結構域。 491. 如實施方案490所述的嵌合TCR，其包含一個或多個根據實施方案382至385中任一方案所述的scFv。 492. 如實施方案490或491所述的嵌合TCR，其包含一個根據實施方案382至385中任一方案所述的scFv。 493. 一種嵌合T細胞受體 (TCR)，包括: (a) 用於結合相較於正常細胞而會在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構； (b) 含有第一TCR結構域的第一多肽鏈，該第一TCR結構域包含來自於第一TCR次單元的第一TCR跨膜結構域；以及 (c) 含有第二TCR結構域的第二多肽鏈，該第二TCR結構域包含來自於第二TCR次單元的第二TCR跨膜結構域。 494. 如實施方案493所述的嵌合TCR，其中用於結合相較於正常細胞而會在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構包括scFv。 495. 如實施方案492或實施方案494所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈進一步包含scFv，並且視情況地進一步包含在第一TCR結構域與scFv之間的連接子。 496. 如實施方案492或實施方案494所述的嵌合TCR，其中第二多肽鏈進一步包含scFv，並且視情況地進一步包含在第二TCR結構域與scFv之間的連接子。 497. 如實施方案490或491所述的嵌合TCR，其包含二個根據實施方案382至385中任一方案所述的scFv。 498. 如實施方案493所述的嵌合TCR，其中用於結合相較於正常細胞而會在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構包括二個scFv。 499. 如實施方案497或實施方案498所述的嵌合TCR，其中二個scFv具有相同的胺基酸序列。 500. 如實施方案497或實施方案498所述的嵌合TCR，其中二個scFv具有不同的胺基酸序列。 501. 如實施方案497至500中任一方案所述的嵌合TCR，其中二個scFv是透過連接子序列共價結合，該連接子序列視情況地為4至15個胺基酸長度。 502. 如實施方案497至501中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈進一步包含二個scFv，並且視情況地進一步包含在第一TCR結構域與二個scFv中的第一scFv之間的連接子。 503. 如實施方案497至501中任一方案所述的嵌合TCR，其中第二多肽鏈進一步包含二個scFv，並且視情況地進一步包含在第二TCR結構域與二個scFv中的第一scFv之間的連接子。 504. 如實施方案497至501中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含二個scFv中的第一scFv，並且第二多肽鏈包含二個scFv中的第二scFv，並且視情況地其中 (i) 第一多肽鏈包含位在第一TCR結構域與第一scFv之間的第一連接子，並且 (ii) 第二多肽鏈包含位在第二TCR結構域與第二scFv之間的第二連接子。 505. 如實施方案490所述的嵌合TCR，其中抗原結合片段是抗醣-MUC4 Fv片段。 506. 如實施方案493所述的嵌合TCR，其中用於結合相較於正常細胞而會在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構是抗醣-MUC4 Fv片段。 507. 如實施方案505或實施方案506所述的嵌合TCR，其中Fv片段包含抗醣-MUC4可變重鏈 (VH) 和抗-醣-MUC4可變輕鏈 (VL)，視情況地其中VH和VL是根據實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段的VH和VL。 508. 如實施方案507所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈進一步包含抗醣-MUC4 VH，並且第二多肽鏈進一步包含抗醣-MUC4 VL，視情況地其中 (i) 第一多肽鏈進一步包含位在第一TCR結構域與抗醣-MUC4 VH之間的連接子，並且 (ii) 第二多肽鏈進一步包含位在第二TCR結構域與抗醣-MUC4 VL之間的連接子。 509. 如實施方案507所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈進一步包含抗醣-MUC4 VL，並且第二多肽鏈進一步包含抗醣-MUC4 VH，視情況地其中 (i) 第一多肽鏈進一步包含位在第一TCR結構域與抗醣-MUC4 VL之間的連接子，並且 (ii) 第二多肽鏈進一步包含位在第二TCR結構域與抗醣-MUC4 VH之間的連接子。 510. 如實施方案490和505至509中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈進一步包含共同重鏈1 (CH1) 結構域。 511. 如實施方案490和505至510中任一方案所述的嵌合TCR，其中第二多肽鏈進一步包含共同輕鏈 (CL) 結構域。 512. 如實施方案490所述的嵌合TCR，其中抗原結合片段是抗醣-MUC4 Fab結構域。 513. 如實施方案493所述的嵌合TCR，其中用於結合相較於正常細胞而會在癌細胞上過度表現的MUC4表位的結構是抗醣-MUC4 Fab結構域。 514. 如實施方案512或實施方案513所述的嵌合TCR，其包含一個抗醣-MUC4 Fab結構域。 515. 如實施方案512或實施方案513所述的嵌合TCR，其包含二個抗醣-MUC4 Fab結構域。 516. 如實施方案515所述的嵌合TCR，其中二個Fab結構域具有相同的胺基酸序列。 517. 如實施方案515所述的嵌合TCR，其中二個Fab結構域具有不同的胺基酸序列。 518. 如實施方案512至517中任一方案所述的嵌合TCR，其中Fab結構域或每個Fab結構域包含抗醣-MUC4可變重鏈 (VH) 和抗-醣-MUC4可變輕鏈 (VL)，視情況地其中VH和VL是根據實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或結合片段的VH和VL。 519. 如實施方案518所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含抗醣-MUC4 VH和CH1結構域或CL結構域，視情況地其中第一多肽鏈包含位在第一TCR結構域與CH1結構域或CL結構域之間的連接子。 520. 如實施方案519所述的嵌合TCR，其中第二多肽鏈包含抗醣-MUC4 VL和CL結構域或CH1結構域，視情況地其中第二多肽鏈包含位在第二TCR結構域與CL結構域或CH1結構域之間的連接子。 521. 如實施方案519所述的嵌合TCR，包括含有抗醣-MUC4 VL和CL結構域或CH1結構域的第三多肽鏈，該第三多肽鏈能夠與抗醣-MUC4 VH和CH1結構域，或第一多肽鏈的CL結構域結合。 522. 如實施方案518所述的嵌合TCR，其中第二多肽鏈包含抗醣-MUC4 VH和CH1結構域或CL結構域，視情況地其中第二多肽鏈包含位在第二TCR結構域與CH1結構域或CL結構域之間的連接子。 523. 如實施方案522所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含抗醣-MUC4 VL和CL或CH1結構域，視情況地其中第一多肽鏈包含位在第二TCR結構域與CL結構域或CH1之間的連接子。 524. 如實施方案522所述的嵌合TCR，包括含有抗醣-MUC4 VL和CL結構域或CH1結構域的第三多肽鏈，該第三多肽鏈能夠與抗醣-MUC4 VH和CH1結構域，或第二多肽鏈的CL結構域結合。 525. 如實施方案518所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含第一抗醣-MUC4 VH和第一鏈CH1結構域或第一鏈CL結構域，並且第二多肽鏈包含第二抗醣-MUC4 VH和第二鏈CH1結構域或第二鏈CL結構域，視情況地其中第一多肽鏈包含位在第一TCR結構域與第一鏈CH1結構域或第一鏈CL結構域之間的連接子，並且視情況地其中第二多肽鏈包含位在第二TCR結構域與第二鏈CH1結構域或第二鏈CL結構域之間的連接子。 526. 如實施方案525所述的嵌合TCR，包括: (a) 第三多肽鏈，包含第一抗醣-MUC4 VL和第三鏈CL結構域或第三鏈CH1結構域，其能夠與第一抗醣-MUC4 VH和第一鏈CH1結構域或第一多肽的第一鏈CL結構域結合；以及 (b) 第四多肽鏈，包含第二抗醣-MUC4 VL和第四鏈CL結構域或第四鏈CH1結構域，其能夠與第二抗醣-MUC4 VH和第二鏈CH1結構域或第二多肽的第二鏈CL結構域結合。 527. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLQQSDAELVKPGASVRISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:1) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 528. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWIGYFSPGNGDIKYNEKFKGKATLTADRSSSTANMHLNSLTSEDSAVYFCKRSMANYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:23) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 529. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLQQSDAELVEPGASVKISCKAYGYTFTDHAIHWVKQKPEQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSSSTAYMQLNSLTSDDSAVYFCKRSMANSFDFWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:45) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 530. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRAVLSADKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:133) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 531. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNDDIQYNQKFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:134) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 532. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISTGNANITYAQGFTGRAVLSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:135) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 533. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGHATLSADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:136) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 534. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNDDIRYNAKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 535. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKASGYTFTDHAIHWVRQMPGKELEWLGYISPGNADTRYSASFQGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:138) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 536. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:139) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 537. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNDDIQYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:140) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 538. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSDHAIHWVRQAPGQGLEWLGYISPGNADINYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:141) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 539. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYNAKFKGRATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:142) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 540. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNDDIQYSQKFKGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:143) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 541. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQRLEWLGYISPGNADTQYSQKFQGRVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCKRSMANSFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:144) 的抗醣-MUC4可變重鏈。 542. 如實施方案490至526中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗醣-MUC4可變重鏈包含: (a) 互補決定區 (CDR) H1，包含胺基酸序列GYTFTDHA (SEQ ID NO:67)、DHAIH (SEQ ID NO:73)、GYTFTDH (SEQ ID NO:79)、GYTFTDHAIH (SEQ ID NO:103)，或DH (SEQ ID NO:127)； (b) CDR-H2，包含胺基酸序列X 1SPGNX 2DI (SEQ ID NO:68)、YX 1SPGNX 2DIX 3YNX 4KFKG (SEQ ID NO:74)、SPGNX 2D ( SEQ ID NO:80)、YX 1SPGNX 2DIX 3YNX 4KFKG (SEQ ID NO:104) 或SPGNX 2(SEQ ID NO:128)；以及 (c) CDR-H3，包含胺基酸序列KRSMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:69)、SMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:75)、SMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:81)、KRSMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:105) 或 SMANX 5FDX 6(SEQ ID NO:129)。 543. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 544. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列NIMMTQSPSSLVVSAGEKVTMSCKSSHSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTKNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:24) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 545. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列NIMLTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVRAEDLAVYYCHQYLSSYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:46) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 546. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:145) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 547. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNLRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:146) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 548. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNERNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:147) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 549. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:148) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 550. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRSSQSVLYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:149) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 551. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSYSSDQKSYLAWYQQKPGQAPRLLIYWASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:150) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 552. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSVLYSSDQKNYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:151) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 553. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSVLYSSDEKTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:152) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 554. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗原結合片段包括含有胺基酸序列DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSSDERTYLAWYLQKPGQSPQLLIYWASTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCHQYLSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:153) 的抗醣-MUC4可變輕鏈。 555. 如實施方案490至542中任一方案所述的嵌合TCR，當直接或間接依附於實施方案490時，其中抗醣-MUC4可變輕鏈包括: (a) CDR-L1，包含胺基酸序列X 7SVLYSSX 8QKNY (SEQ ID NO:70)、KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA (SEQ ID NO:76)、KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA (SEQ ID NO :82)、KSSX 7SVLYSSX 8QKNYLA (SEQ ID NO:106) 或X 7SVLYSSX 8QKNY (SEQ ID NO:130)； (b) CDR-L2，包含胺基酸序列WAS (SEQ ID NO:71)、WASTX 9X 10S (SEQ ID NO:77)、WASTX 9X 10S (SEQ ID NO:83)、WASTX 9X 10S (SEQ ID NO:107) 或WAS (SEQ ID NO:131)；以及 (c) CDR-L3，包含胺基酸序列HQYLSSYT (SEQ ID NO:72)、HQYLSSYT (SEQ ID NO:78)、HQYLSSYT (SEQ ID NO:84)、HQYLSSYT (SEQ ID NO:108) 或HQYLSSYT (SEQ ID NO:132)。 556. 如實施方案495、496、502至504、508和509中任一方案所述的嵌合TCR，當包含第一和/或第二連接子時，該第一和/或第二連接子各自包含來自於免疫球蛋白或T細胞受體次單元的穩定結構域或其片段。 557. 如實施方案556所述的嵌合TCR，其中第一和/或第二連接子各自包含CH1、CH2、CH3、CH4或CL抗體結構域，或其任何一個的片段。 558. 如實施方案556所述的嵌合TCR，其中第一和/或第二連接子各自包含Cα、Cβ、Cγ或CδTCR結構域，或其任何一個的片段。 559. 如實施方案558所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含CαTCR結構域或其片段，並且第二多肽鏈包含CβTCR結構域或其片段。 560. 如實施方案558所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含CβTCR結構域或其片段，並且第二多肽鏈包含CαTCR結構域或其片段。 561. 如實施方案558所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含CγTCR結構域或其片段，並且第二多肽鏈包含CδTCR結構域或其片段。 562. 如實施方案558所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈包含CδTCR結構域或其片段，並且第二多肽鏈包含CγTCR結構域或其片段。 563. 如實施方案559至562中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR穩定區結構域和第二TCR穩定區結構域各自包含至少一個相對於野生型TCR穩定區結構域的突變。 564. 如實施方案563所述的嵌合TCR，其中TCRα穩定區結構域包含在野生型TCRα穩定區的胺基酸位置48處的取代 (substitution)，並且TCRβ穩定區結構域包含在野生型TCRβ穩定區的胺基酸位置57處的取代。 565. 如實施方案563或564所述的嵌合TCR，其中CαTCR結構域包含在對應於野生型人類CαTCR的胺基酸位置85處的胺基酸取代，並且CβTCR結構域包含在對應於野生型人類CβTCR的胺基酸位置88處的胺基酸取代。 566. 如實施方案490至565中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR穩定區結構域是TCRγ穩定區結構域，並且第二TCR穩定區結構域是TCRδ穩定區結構域。 567. 如實施方案490至566中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR穩定區進一步包含位於第一TCR跨膜結構域N端的TCR次單元或其片段的第一連接肽。 568. 如實施方案490至567中任一方案所述的嵌合TCR，其中第二TCR結構域進一步包含位於第二TCR跨膜結構域N端的TCR次單元或其片段的第二連接肽。 569. 如實施方案568所述的嵌合TCR，包括位在第一連接肽中的殘基與第二連接肽中的殘基之間的雙硫鍵。 570. 如實施方案490至569中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR結構域進一步包含第一TCR細胞內結構域，該第一TCR細胞內結構域包含位於第一跨膜結構域C端的TCR細胞內序列。 571. 如實施方案490至570中任一方案所述的嵌合TCR，其中第二TCR結構域進一步包含第二TCR細胞內結構域，該第二TCR細胞內結構域包含位於第二跨膜結構域C端的TCR細胞內序列。 572. 如實施方案490至571中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一多肽鏈進一步包含第一輔助胞內結構域，該第一輔助胞內結構域包含位於第一跨膜結構域C端的共刺激胞內訊息傳遞序列。 573. 如實施方案490至572中任一方案所述的嵌合TCR，其中第二多肽鏈進一步包含第二輔助胞內結構域，該第二輔助胞內結構域包含位於第二跨膜結構域C端的共刺激胞內訊息傳遞序列。 574. 如實施方案490至573中任一方案所述的嵌合TCR，進一步包含可裂解肽連接子，其被配置為在蛋白質轉譯期間和/或之後不久暫時將第一多肽鏈與第二多肽鏈連接。 575. 如實施方案574所述的嵌合TCR，其中可裂解肽連接子是蛋白酶可裂解肽連接子。 576. 如實施方案574或575所述的嵌合TCR，其中肽連接子包含序列ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO:200)。 577. 如實施方案490至576中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR結構域是TCRα鏈或其片段，並且第二TCR結構域是TCRβ鏈或其片段。 578. 如實施方案490至576中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR結構域是TCRβ鏈或其片段，並且第二TCR結構域是TCRα鏈或其片段。 579. 如實施方案490至576中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR結構域是TCRδ鏈或其片段，並且第二TCR結構域是TCRγ鏈或其片段。 580. 如實施方案490至576中任一方案所述的嵌合TCR，其中第一TCR結構域是TCRγ鏈或其片段，並且第二TCR結構域是TCRδ鏈或其片段。 581. 如實施方案490至580中任一方案所述的嵌合TCR，從N端至C端包括 (i) 抗醣-MUC4可變重鏈 (VH)，(ii) 第一TCR結構域，(iii) 可裂解肽連接子，(iv) 抗醣-MUC4可變輕鏈 (VL)，以及 (v) 第二TCR結構域。 582. 如實施方案490至580中任一方案所述的嵌合TCR，從N端至C端包括 (i) 抗醣-MUC4可變重鏈 (VH)，(ii) 第二TCR結構域，(iii) 可裂解肽連接子，(iv) 抗醣-MUC4穩定輕鏈 (CL)，以及 (v) 第一TCR結構域。 583. 如實施方案490至580中任一方案所述的嵌合TCR，從N端至C端包括 (i) 抗醣-MUC4可變輕鏈 (VL)，(ii) 第一TCR結構域，(iii) 可裂解肽連接子，(iv) 抗醣-MUC4可變重鏈 (VH)，以及 (v) 第二TCR結構域。 584. 如實施方案490至580中任一方案所述的嵌合TCR，從N端至C端包括 (i) 抗醣-MUC4可變輕鏈 (VL)，(ii) 第二TCR結構域，(iii) 可裂解肽連接子，(iv) 抗醣-MUC4可變重鏈 (VH)，以及 (v) 第一TCR結構域。 585. 一種核酸，包括實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、或實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR的編碼區。 586. 如實施方案585所述的核酸，其中編碼區是經密碼子優化以用於在人類細胞中表現。 587. 一種載體，包括實施方案585或實施方案586所述的核酸。 588. 如實施方案587所述的載體，其是病毒載體。 589. 如實施方案588所述的載體，其中病毒載體是慢病毒載體。 590. 一種經工程化以表現實施方案585或實施方案586所述的核酸的宿主細胞。 591. 如實施方案590所述的宿主細胞，其是經工程化以表現實施方案446至479中任一方案所述的CAR的人類T細胞。 592. 如實施方案590所述的宿主細胞，其是經工程化以表現實施方案446至479中任一方案所述的CAR的人類NK細胞。 593. 如實施方案590所述的宿主細胞，其是經工程化以表現實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR的人類T細胞。 594. 一種宿主細胞，包括實施方案587至589中任一方案所述的載體。 595. 如實施方案594所述的宿主細胞，其是T細胞，並且其中該載體可編碼實施方案446至479中任一方案所述的CAR。 596. 如實施方案594所述的宿主細胞，其是T細胞，並且其中該載體可編碼實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR。 597. 一種醫藥組成物，包括 (a) 實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體，或實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞，以及 (b) 生理上合適的緩衝液、佐劑、稀釋劑或其組合。 598. 一種治療癌症的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物。 599. 如實施方案598所述的方法，其中該受試者患有胰臟癌、肺癌、乳癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤和卵巢癌。 600. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有乳癌。 601. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有肺癌。 602. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有攝護腺癌。 603. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有泌尿生殖癌。 604. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有食道癌。 605. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有卵巢癌。 606. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有胰臟癌。 607. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有膽囊癌。 608. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有唾液腺癌。 609. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有膽道癌。 610. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有乳突甲狀腺癌。 611. 如實施方案599所述的方法，其中受試者患有低度惡性纖維粘液樣肉瘤。 612. 一種檢測生物樣本中癌症的方法，包括將樣本 (例如包含或疑似包含癌細胞和/或癌症衍生的細胞外囊泡的樣本) 與根據實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段接觸，並且檢測抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的結合。 613. 如實施方案612所述的方法，進一步包括定量抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的結合。 614. 如實施方案612或實施方案613所述的方法，其中該結合是與作為陰性/基準對照的正常組織對照，和/或與作為陽性對照的癌症組織對照進行比較。 615. 如實施方案612至614中任一方案所述的方法，其中該癌症是胰臟癌、肺癌、乳癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤和卵巢癌。 616. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是胰臟癌。 617. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是肺癌。 618. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是乳癌。 619. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是膽囊癌。 620. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是唾液腺癌。 621. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是攝護腺癌。 622. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是膽道癌。 623. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是食道癌。 624. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是乳突甲狀腺癌。 625. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是低度惡性纖維粘液樣肉瘤。 626. 如實施方案615所述的方法，其中癌症是卵巢癌。 627. 如實施方案598至626中任一方案所述的方法，當依附於實施方案427至430中任一方案時，其進一步包括向受試者施用經工程化以表現CAR的經基因修飾T細胞，該CAR包含能夠特異性結合MIC蛋白結構域的NKG2D受體。 628. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用作為藥物。 629. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療癌症，視情況地其中所述癌症是胰臟癌、肺癌、乳癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤和卵巢癌。 630. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療胰臟癌。 631. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療肺癌。 632. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療乳癌。 633. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療膽囊癌。 634. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療唾液腺癌。 635. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療攝護腺癌。 636. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療膽道癌。 637. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療食道癌。 638. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療乳突甲狀腺癌。 639. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療低度惡性纖維粘液樣肉瘤。 640. 如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物，其是用於治療卵巢癌。 641. 一種如實施方案1至414中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、實施方案415至420中任一方案所述的雙特異性抗體、實施方案421至445中任一方案所述的融合蛋白、實施方案446至479中任一方案所述的CAR、實施方案480至489中任一方案所述的抗體藥物複合體、實施方案490至584中任一方案所述的嵌合TCR、實施方案585或實施方案586所述的核酸、實施方案587至589中任一方案所述的載體、實施方案590至596中任一方案所述的宿主細胞、或實施方案597所述的醫藥組成物用於製備治療癌症之藥物的用途，視情況地其中所述癌症是胰臟癌、肺癌、乳癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤和卵巢癌。 642. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是胰臟癌。 643. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是肺癌。 644. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是乳癌。 645. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是膽囊癌。 646. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是唾液腺癌。 647. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是攝護腺癌。 648. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是膽道癌。 649. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是食道癌。 650. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是乳突甲狀腺癌。 651. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是低度惡性纖維粘液樣肉瘤。 652. 如實施方案641所述的用途，其中癌症是卵巢癌。 653. 一種長度為13至30個胺基酸的肽，包括 (a) MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 中的胺基酸4至16或 (b) 對應於MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO: 155) 中之胺基酸4至16的胺基酸序列，其在除了對應於CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO: 155) 的位置12處的絲胺酸和/或對應於CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO: 155) 的位置13處的蘇氨酸以外的位置處具有一個或二個胺基酸取代。 654. 如實施方案653所述的肽，其長度為15至25個胺基酸。 655. 如實施方案653所述的肽，其長度為18至25個胺基酸。 656. 如實施方案653所述的肽，其包含CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155)。 657. 如實施方案653所述的肽，其是由CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 所組成。 658. 如實施方案653至657中任一方案所述的肽，其在對應於CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 的位置12處的絲胺酸和/或對應於CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 的位置13處的蘇胺酸是被O-醣基化。 659. 如實施方案658所述的肽，其中O-醣基化包含GalNAc或由GalNAc所組成。 660. 一種長度為13至30個胺基酸的肽，包括 (a) MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 中的胺基酸4至16，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被O-醣基化或 (b) 對應於MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 中之胺基酸4至16的胺基酸序列，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被O-醣基化，該胺基酸序列在除了對應於CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154)的位置12處的絲胺酸和/或對應於CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154) 的位置13處的蘇胺酸以外的位置處具有一個或二個胺基酸取代。 661. 如實施方案660所述的肽，其長度為15至25個胺基酸。 662. 如實施方案660所述的肽，其長度為18至25個胺基酸。 663. 如實施方案660所述的肽，其包含CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)。 664. 如實施方案660所述的肽，其是由CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 所組成。 665. 如實施方案660至664中任一方案所述的肽，其中O-醣基化包含GalNAc或由GalNAc所組成。 666. 一種組成物，包括如實施方案653至665中任一方案所述的肽和佐劑。 667. 如實施方案666所述的組成物，其中佐劑包含弗氏佐劑 (Freund’s adjuvant) 和/或鋁鹽 (例如氫氧化鋁)。 668. 一種產生針對腫瘤相關形式MUC4的抗體的方法，包括向動物施用: (a) 如實施方案660至665中任一方案所述的肽；或 (b) 如實施方案666或667所述的組成物，其中該組成物包含如實施方案660至665中任一方案所述的肽。 669. 如實施方案668所述的方法，進一步包括在施用步驟之後，從動物中收集抗體。 670. 一種引發針對腫瘤相關形式MUC4的免疫反應的方法，包括向受試者施用: (a) 如實施方案660至665中任一方案所述的肽；或 (b) 如實施方案666或667所述的組成物，其中該組成物包含如實施方案660至665中任一方案所述的肽。 671. 如實施方案668至670中任一方案所述的方法，其中動物是小鼠或兔子。 672. 如前述實施方案中任一方案所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、雙特異性抗體、融合蛋白、CAR、抗體藥物複合體、嵌合TCR、醫藥組成物的方法或用途，其中競爭是使用抗體競爭測定法所確定，視情況地其中該測定法是第5.1節中所描述的測定法。 673. 如實施方案672所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、雙特異性抗體、融合蛋白、CAR、抗體藥物複合體、嵌合TCR、醫藥組成物的方法或用途，其中當在所用特定試驗條件中可產生80%最大結合的參考抗體濃度以及比參考抗體濃度高10倍的測試抗體濃度下進行測試時，如果抗醣-MUC4抗體或抗醣-MUC4抗體片段可將參考抗體的結合降低至少約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%，則競爭是存在的。
基於所有目的，本申請中所引用的所有出版物、專利、專利申請和其他文件均以引用方式全部併入本文，就如同基於所有目的，每個單獨的出版物、專利、專利申請或其他文件被單獨指出以引用方式併入本文一樣。如果在併入本文的一個或多個參考文獻的教示與本文的內容之間存在不一致的情況，則本說明書的教示是所欲的。
無
圖1A至1E: T3M4 COSMC-KO和T3M4細胞之MUC4小鼠抗體的流式細胞術分析。圖1A顯示2D5.2F6.2C11、5B8.2A11.2C7、15F3.2D11.1E6、抗Golgi和小鼠IgG isotype對照在T3M4 COSMC-KO和T3M4細胞進行染色的代表性直方圖。圖1B至1D顯示了2D5.2F6.2C11 (圖1C)、5B8.2A11.2C7 (圖1D) 和15F3.2D11.1E6 (圖1E) 在T3M4 COSMC-KO和T3M4細胞之細胞表面抗原的抗體效價分析結果。圖1B顯示了圖1C至1E的重疊圖。
圖2: 2D5.2F6.2C11、5B8.2A11.2C7、15F3.2D11.1E6、無論醣基化狀態而無差別地與MUC4結合的抗MUC4單株抗體1G8 (ThermoFisher Scientific)，以及抗Tn抗體在T3M4 COSMC-KO和T3M4細胞的免疫螢光染色。
圖3A至3G: MUC4小鼠抗體的免疫組織化學染色。圖3A顯示2D5.2F6.2C11、5B8.2A11.2C7和15F3.2D11.1E6抗體在胰臟癌和正常組織的染色。圖3B顯示陽性和陰性染色組織的統計數據。圖3C至3E顯示2D5.2F6.2C11抗體在FDA正常組織微陣列上的染色。圖3F至3G顯示2D5.2F6.2C11在多種癌症微陣列上的染色。直腸癌、卵巢癌和胰臟癌組織呈陽性。
圖4A至4C: 例示性MUC4 CART構建體。圖4A: 2D5-CART；圖4B: 15F3-CART；圖4C: 5B8-CART。這些構建體的測試描述於實例5中。
圖5A至5B: MUC4 CARTs對T3M4 COSMC-KO和T3M4細胞的細胞毒殺試驗，顯示了MUC4 CARTs (2D5.2F6.2C11 (圖5A) 和5B8.2A11.2C7 (圖5B)) 以T細胞與標的細胞之比率為1、5和10的抗體效價對T3M4 COSMC-KO和T3M4標的細胞的毒殺情形。
圖6: 2D5-CART在固態腫瘤小鼠模型中的體內活性。T3M4 COSMC-KO固態腫瘤模型是在免疫功能低下的小鼠 (細胞株腫瘤異種移植 (cell line derived tumor xenograft，CDX)) 模型中透過側腹注射所建立。注射時的腫瘤體積為200 mm 3，且小鼠以IV注射 (2劑，10 7個細胞) 第2代2D5-CAR-T進行治療。透過卡尺來測量腫瘤體積。
圖7: 例示性MUC4 TCB (CrossMab) 構建體。構建體的測試描述於實例6中。
圖8: CrossMab (2x1) TCB-2D5.2F6.2C11對HaCaTs (CrossMAb 2x1) 的細胞毒殺。
圖9A至9B: CrossMab (2x1) TCB-2D5.2F6.2C11對MCF7 (圖9A) 和HCT116 (圖9B) 的細胞毒殺。
圖10: 2D5-TCB在固態腫瘤小鼠模型中的體內活性。肺癌固態腫瘤模型 (患者來源腫瘤異種移植小鼠模型 (patient derived tumor xenograft mouse model，PDX)) 是透過側腹注射所建立 (Champions模型CTG-2823)。於TCB注射時的腫瘤體積為200 mm 3，且TCB是透過IV注射來輸送。在第0天時注射PBMC，在第0、1、2、3、4天時給予TCB。此外，在第17天時注射PBMC，在第20天、第22天時給予TCB。透過卡尺來測量腫瘤體積。
無

Claims (51)

  1. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其特異性結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被GalNAc醣基化 (「MUC4醣肽」)。
  2. 如請求項1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段與一包含一重鏈可變 (VH) 序列和一輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段競爭結合MUC4醣肽，該重鏈可變序列和該輕鏈可變序列: (a) 分別為SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2； (b) 分別為SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；或 (c) 分別為SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46。
  3. 如請求項1所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與一包含SEQ ID NO:133至144中任一序列的重鏈可變 (VH) 序列和SEQ ID NO:145至153中任一序列的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段競爭結合MUC4醣肽。
  4. 如請求項1至3中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其特異性結合COSMC剔除(COSMC knock-out)的T3M4細胞。
  5. 如請求項4所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與一包含一重鏈可變 (VH) 序列和一輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段競爭結合COSMC剔除的T3M4細胞，該重鏈可變序列和該輕鏈可變序列: (a) 分別為SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2； (b) 分別為SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；或 (c) 分別為SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46。
  6. 如請求項4所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段可與一包含SEQ ID NO:133至144中任一序列的重鏈可變 (VH) 序列和SEQ ID NO:145至153中任一序列的輕鏈可變 (VL) 序列的抗體或抗原結合片段競爭結合COSMC剔除的T3M4細胞。
  7. 一種抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其視情況地是一根據請求項1至6中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括: (a) 一互補決定區 (complementarity determining region，CDR) H1，其包含SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:103或SEQ ID NO:127的胺基酸序列； (b) 一CDR-H2，其包含SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:128的胺基酸序列； (c) 一CDR-H3，其包含SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:129的胺基酸序列； (d) 一CDR-L1，其包含SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:106或SEQ ID NO:130的胺基酸序列； (e) 一CDR-L2，其包含SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:107或SEQ ID NO:131的胺基酸序列；以及 (f) 一CDR-L3，其包含SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:132的胺基酸序列。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括: (a) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:3至5的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:6至8的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL； (b) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:9至11的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:12至14的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL；或 (c) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:15至17的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:18至20的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL。
  9. 如請求項1至7中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括: (a) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:25至27的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:28至30的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL； (b) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:31至33的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:34至36的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL；或 (c) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:37至39的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:40至42的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL。
  10. 如請求項1至7中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括: (a) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:47至49的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:50至52的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL； (b) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:53至55的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:56至58的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL；或 (c) 一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:59至61的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH，以及一包含分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:62至64的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL。
  11. 如請求項1至10中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其為一嵌合或人源化抗體，或一嵌合或人源化抗體的抗原結合片段。
  12. 如請求項1至11中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，包括: (a) 一包含與SEQ ID NO:1具有至少95%序列同一性的胺基酸序列的VH，以及一包含與SEQ ID NO:2具有至少95%序列同一性的胺基酸序列的VL； (b) 一包含與SEQ ID NO:23具有至少95%序列同一性的胺基酸序列的VH，以及一包含與SEQ ID NO:24具有至少95%序列同一性的胺基酸序列的VL；或 (c) 一包含與SEQ ID NO:45具有至少95%序列同一性的胺基酸序列的VH，以及一包含與SEQ ID NO:46具有至少95%序列同一性的胺基酸序列的VL。
  13. 一種與參考抗體或抗原結合片段競爭的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，該參考抗體或抗原結合片段包括: (a) 一SEQ ID NO:1的重鏈可變 (VH) 序列和一SEQ ID NO:2的輕鏈可變 (VL) 序列； (b) 一SEQ ID NO:23的重鏈可變 (VH) 序列和一SEQ ID NO:24的輕鏈可變 (VL) 序列； (c) 一SEQ ID NO:45的重鏈可變 (VH) 序列和一SEQ ID NO:46的輕鏈可變 (VL) 序列；或 (d) 一SEQ ID NO:133至144中任一序列的重鏈可變 (VH) 序列和一SEQ ID NO:145至153中任一序列的輕鏈可變 (VL) 序列， 以結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154)，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被GalNAc醣基化 (「MUC4醣肽」)，該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段包括: (a) 一具有位在VH序列內之第一、第二和第三CDR結構的VH序列；和 (b) 一具有位在VL序列內之第四、第五和第六CDR結構的VL序列， 其中該第一、第二、第三、第四、第五和第六CDR結構彼此協同作用以實現該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段與該MUC4醣肽的結合。
  14. 如請求項1至13中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其優先與相較於正常細胞而在癌細胞上會過度表現的醣-MUC4表位結合。
  15. 如請求項1至14中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其特異性結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被STn醣基化。
  16. 如請求項1至14中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154)，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被STn醣基化。
  17. 如請求項1至16中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其是以下列結合親和力 (KD) 與該MUC4醣肽結合: (a) 1 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振 (surface plasmon resonance) 或生物層干涉儀 (bio-layer interferometry) 所測量； (b) 1 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (c) 1 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (d) 1 nM至50 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (e) 5 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (f) 5 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (g) 5 nM至50 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (h) 5 nM至25 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (i) 5 nM至10 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (j) 10 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (k) 10 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (l) 10 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (m) 10 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (n) 10 nM至50 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (o) 10 nM至25 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (p) 50 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (q) 50 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (r) 50 nM至100 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量； (s) 100 nM至200 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量；或 (t) 100 nM至150 nM，其是透過表面電漿共振或生物層干涉儀所測量。
  18. 如請求項1至17中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合未醣基化MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) (「未醣基化MUC4肽」)。
  19. 如請求項1至18中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已使用純化的重組人類醣基轉移酶GalNAc-T1、GalNAc-T2和GalNAc-T4於體外醣基化的MUC1縱排重複序列(tandem repeat) (VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG) 3(SEQ ID NO:201) (「第一MUC1醣肽」)。
  20. 如請求項1至19中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行體外醣基化的MUC1肽TAPPAHGV TS APD T RPAPG ST APPAHGVT (SEQ ID NO:202) (「第二MUC1醣肽」)。
  21. 如請求項1至20中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的蘇胺酸和絲胺酸殘基上進行體外醣基化的CD44v6肽GYRQ T PKEDSH S TTGTAAA (SEQ ID NO:218) (「CD44v6醣肽」)。
  22. 如請求項1至21中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行體外醣基化的LAMP1肽CEQDRP S P TT APPAPPSPSP (SEQ ID NO:219) (「LAMP1醣肽」)。
  23. 如請求項1至22中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其不會特異性結合已被GalNAc在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上進行體外醣基化的cMET肽PTKSFISGG ST ITGVGKNLN (SEQ ID NO:220) (「cMET醣肽」)。
  24. 如請求項1至23中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其是多價的。
  25. 如請求項1至24中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其為一抗原結合片段。
  26. 如請求項25所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該抗原結合片段是單鏈可變片段 (scFv) 的形式。
  27. 如請求項1至24中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其為一多特異性抗體的形式。
  28. 如請求項27所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該多特異性抗體是一雙特異性抗體，該雙特異性抗體係與不同於第一表位的第二表位結合。
  29. 如請求項28所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該雙特異性抗體是開瓶器（bottle opener）、mAb-Fv、mAb-scFv、中心-scFv（central-scFv）、單臂中心-scFv（one-armed central-scFv）或雙scFv（dual scFv）形式的雙特異性抗體。
  30. 如請求項28所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該雙特異性抗體是雙特異性結構域交換抗體 (例如CrossMab)、Fab臂交換抗體、雙特異性T細胞銜接抗體 (bispecific T-cell engager，BiTE) 或雙親和力重新靶向分子 (dual-affinity retargeting molecule，DART)。
  31. 如請求項28至30中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該第二表位是一MUC4表位。
  32. 如請求項28至30中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該第二表位是一與正常細胞相比在癌細胞上過度表現的MUC4表位。
  33. 如請求項28至30中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該第二表位是一T細胞表位。
  34. 如請求項33所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段，其中該T細胞表位包含CD3表位、CD8表位、CD16表位、CD25表位、CD28表位或NKG2D表位。
  35. 一種融合蛋白，其包括如請求項1至34中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的胺基酸序列，該胺基酸序列是可操作地連接到至少一第二胺基酸序列。
  36. 一種嵌合抗原受體 (CAR)，包括一個或多個如請求項25或26所述的抗原結合片段。
  37. 一種抗體藥物複合體（antibody-drug conjugate），包括與一細胞毒性劑結合的請求項1至34中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段或請求項35所述的融合蛋白。
  38. 一種嵌合T細胞受體 (TCR)，包括: (a) 一如請求項25或26所述的抗原結合片段； (b) 一含有第一TCR結構域的第一多肽鏈，該第一TCR結構域包含一來自於第一TCR次單元的第一TCR跨膜結構域；以及 (c) 一含有第二TCR結構域的第二多肽鏈，該第二TCR結構域包含一來自於第二TCR次單元的第二TCR跨膜結構域。
  39. 一種核酸，包括如請求項1至34中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、請求項35所述的融合蛋白、請求項36所述的CAR或請求項38所述的嵌合TCR的編碼區。
  40. 一種載體，包括如請求項39所述的核酸。
  41. 一種宿主細胞，其係經工程化以表現如請求項39所述的核酸或包含如請求項40所述的載體的。
  42. 一種醫藥組成物，包括 (a) 如請求項1至34中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、如請求項35所述的融合蛋白、如請求項36所述的CAR、如請求項37所述的抗體藥物複合體、如請求項38所述的嵌合TCR、如請求項39所述的核酸、如請求項40所述的載體或如請求項41所述的宿主細胞，以及 (b) 生理上合適的緩衝液、佐劑、稀釋劑或其組合。
  43. 一種治療癌症的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的如請求項1至34中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段、如請求項35所述的融合蛋白、如請求項36所述的CAR、如請求項37所述的抗體藥物複合體、如請求項38所述的嵌合TCR、如請求項39所述的核酸、如請求項40所述的載體、如請求項41所述的宿主細胞或如請求項42所述的醫藥組成物。
  44. 如請求項43所述的方法，其中該受試者患有胰臟癌、肺癌、乳癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤（low-grade fibromyxoid sarcoma）和卵巢癌。
  45. 一種檢測生物樣本中癌症的方法，包括將樣本 (例如包含或疑似包含癌細胞和/或癌症衍生的細胞外囊泡的樣本) 與如請求項1至34中任一項所述的抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段接觸，並且檢測該抗醣-MUC4抗體或抗原結合片段的結合。
  46. 如請求項45所述的方法，其中該癌症是胰臟癌、肺癌、乳癌、膽囊癌、唾液腺癌、攝護腺癌、膽道癌、食道癌、乳突甲狀腺癌、低度惡性纖維粘液樣肉瘤和卵巢癌。
  47. 一種長度為13至30個胺基酸的肽，其包括 (a) MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO:155) 中的胺基酸4至16或 (b) 對應於MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO: 155) 中之胺基酸4至16的胺基酸序列，其在除了對應於CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO: 155) 的位置12處的絲胺酸和/或對應於CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP (SEQ ID NO: 155) 的位置13處的蘇氨酸以外的位置處具有一個或二個胺基酸取代。
  48. 一種長度為13至30個胺基酸的肽，其包括 (a) MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 中的胺基酸4至16，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被O-醣基化，或 (b) 對應於MUC4肽CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO:154) 中之胺基酸4至16的胺基酸序列，該MUC4肽在以粗體和劃底線文字所顯示的絲胺酸和蘇胺酸殘基上已被O-醣基化，該胺基酸序列在除了對應於CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154) 的位置12處的絲胺酸和/或對應於CTIPSTAMHTR ST AAPIPILP (SEQ ID NO: 154) 的位置13處的蘇胺酸以外的位置處具有一個或二個胺基酸取代。
  49. 一種組成物，包括如請求項47或48所述的肽和佐劑。
  50. 一種產生針對腫瘤相關形式MUC4的抗體的方法，包括向動物施用: (a) 如請求項48所述的肽；或 (b) 如請求項49所述的組成物，其中該組成物包含如請求項48所述的肽。
  51. 一種引發針對腫瘤相關形式MUC4的免疫反應的方法，包括向受試者施用: (a) 如請求項48所述的肽；或 (b) 如請求項49所述的組成物，其中該組成物包含如請求項48所述的肽。
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