KR20180077300A - 펩타이드 그룹을 포함하는 접합체 및 이와 관련된 제조방법 - Google Patents

펩타이드 그룹을 포함하는 접합체 및 이와 관련된 제조방법 Download PDF

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KR20180077300A
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오영수
채제욱
송호영
정철웅
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박경은
김형래
김진영
민지영
김성민
이병수
우동현
정지은
이수인
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Abstract

몇몇 측면에서, 본 발명은 항체; 링커; 및 적어도 두 개의 활성제를 포함하는 항체-약물 접합체와 관련된다. 바람직한 구체예로서, 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고, 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결된다. 항체-약물 접합체는 자기 희생(self-immolative) 그룹, 바람직하게는 두 개의 자기 희생 그룹을 포함할 수 있다. 링커는 예를 들면 O-치환된 옥심을 포함할 수 있으며, 여기서 옥심의 산소 원자는 옥심과 활성제를 공유 결합으로 연결하는 그룹으로 치환되고; 옥심의 탄소 원자는 옥심과 항체를 공유 결합으로 연결하는 그룹으로 치환된다.

Description

펩타이드 그룹을 포함하는 접합체 및 이와 관련된 제조방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2015년 11월 25일자로 출원된 미국 가출원 제62/259,997호, 및 2015년 11월 25일자로 출원된 미국 가출원 제62/260,006호에 대해 우선권을 주장하며, 이는 전체적으로 본 출원에 참조로서 통합된다.
항체-약물 접합체(Antibody-drug conjugate, ADC) 기술은 암세포의 선택적 사멸을 가능하게 하는 표적-지향 기술이다. 전형적으로, ADC는 항체를 사용하여 암세포를 표적화한 다음 세포에서 독성 물질(즉, 약물)을 방출함으로써 세포 사멸을 촉발하는 기능을 한다. ADC 기술은 약물이 목표 암세포에 정확하게 전달되고 특정 조건 하에서 방출되도록 하여 건강한 세포에 대한 부수적인 손상을 최소화할 수 있기 때문에 치료 항체의 효능을 증가시키고 부작용의 위험을 감소시킨다. 최근 C-말단 아미노산 서열의 단백질 프레닐레이션을 사용하여 약물 또는 다른 활성제(active agent)를 항체에 가볍게 부위-특이적으로 부착시키는 것을 가능케 하는 변형된 이소프레노이드 유닛을 장착시킨, 항체-약물 접합체 제조를 위한 새로운 접근법이 기술되어 왔으며 추가적인 개선이 가능하다. ADC 구성을 위한 향상된 전략은 여전히 필요하다.
개요
몇몇 측면에서, 본 발명은 항체; 링커; 및 적어도 두 개의 활성제를 포함하는 항체-약물 접합체와 관련된다. 바람직한 구체예로서, 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고, 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결된다. 항체-약물 접합체는 자기 희생(self-immolative) 그룹, 바람직하게는 두 개의 자기 희생 그룹을 포함할 수 있다. 링커는 예를 들면 O-치환된 옥심을 포함할 수 있으며, 여기서 옥심의 산소 원자는 옥심과 활성제를 공유 결합으로 연결하는 그룹으로 치환되고; 옥심의 탄소 원자는 옥심과 항체를 공유 결합으로 연결하는 그룹으로 치환된다.
몇몇 측면에서, 본 발명은 항체; 항체와 공유 결합으로 연결되는 링커; 링커와 공유 결합으로 연결되는 적어도 두 개의 활성제를 포함하는 항체-약물 접합체와 관련된다. 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함할 수 있다. 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄에 공유 결합으로 연결될 수 있다.
적어도 두 개의 활성제는 리신, 5-하이드록시리신, 4-옥살리신, 4-티알리신, 4-셀레나리신, 4-티아호모리신, 5,5-디메틸리신, 5,5-디플루오로리신, 트랜스-4-디히드로리신, 2,6-디아미노-4-헥시노산, 시스-4-디히드로리신, 6-N-메틸리신, 디아미노피멜산, 오르니틴, 3-메틸오르니틴, α-메틸오르니틴, 시트룰린, 및/또는 호모시트룰린의 측쇄와 공유 결합으로 연결될 수 있다. 예를 들어 적어도 두 개의 활성제는 리신 또는 오르니틴의 측쇄와 공유 결합으로 연결될 수 있다.
다수의 아미노산은 L-아미노산 또는 D-아미노산일 수 있다. 다수의 아미노산은 α-아미노산 또는 β-아미노산일 수 있다. 다수의 아미노산은 알라닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린, 및/또는 트레오닌을 포함할 수 있다. 특정 바람직한 구체예에서, 펩타이드는 이소루신, 메티오닌, 루신, 페닐알라닌, 트립토판, 티로신, 또는 발린 아미노산을 포함하지 않을 수 있다. 펩타이드는 2 내지 20개의 아미노산을 포함할 수 있다.
바람직한 구체예에서, 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단은 적어도 하나의 활성제를 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된다. 바람직한 구체예에서, 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단은 항체를 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된다.
몇몇 구체예에서, 링커는 O-치환된 옥심을 포함하고; 옥심의 산소 원자는 옥심을 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환되며; 옥심의 탄소 원자는 옥심을 항체에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된다. 몇몇 구체예에서 링커는 O-치환된 옥심을 포함하고; 옥심의 탄소 원자는 옥심을 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환되며; 옥심의 산소 원자는 옥심을 항체에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된다.
몇몇 구체예에서, 링커는 1 내지 100개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌을 포함한다. 알킬렌은 적어도 한 개 이상의 불포화된 결합을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 알킬렌의 적어도 한 개 이상의 탄소 원자는 질소(N), 산소(O) 및 황(S)으로부터 선택된 하나 혹은 그 이상의 헤테로원자로 치환될 수 있다. 특정 구체에에서, 알킬렌은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 적어도 한 개 이상의 알킬로 추가적으로 치환된다.
바람직한 구체예에서, 링커는 티오에테르 결합에 의해 공유 결합으로 항체에 결합하고, 티오에테르 결합은 그 항체의 시스테인의 황 원자를 포함한다.
특정 구체예에서, 항체는 이소프레노이드 트랜스퍼라제(isoprenoid transferase)에 의해 인식되는 C-말단 아미노산 모티프(motif)를 포함하고, 티오에테르 결합은 그 아미노산 모티프의 시스테인의 황 원자를 포함한다.
특정 구체예에서, 항체는 아미노산 모티프를 포함하고, 아미노산 모티프는 CXX, CXC, XCXC, XXCC 및 CYYX로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열이며, 여기서 C는 시스테인을 나타내고; Y는 각각의 경우에 독립적으로 지방족 아미노산을 나타내며, X는 각각의 경우에 독립적으로 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌 또는 류신을 나타낸다. 특정 바람직한 구체예에서, 링커는 아미노산 모티프의 시스테인의 황 원자를 포함하는 티오에테르 결합에 의해 항체와 공유 결합으로 결합된다. 아미노산 모티프는 CYYX 서열일 수 있고, 여기서 Y는 각각의 경우에 독립적으로 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌 또는 발린을 나타낸다. 예를 들어, 아미노산 모티프는 CVIM 또는 CVLL일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 한 개는 글리신이다.
몇몇의 구체예에서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 세 개는 각각 독립적으로 글리신 및 프롤린으로 구성된 그룹으로부터 선택된다. 특정 바람직한 구체예에서, 아미노산 모티프에 선행하는 1 내지 10개의 아미노산은 글리신일 수 있고, 바람직하게는 아미노산 모티프에 선행하는 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산의 각각과 같이 적어도 5개(예를 들어, GGGGG)는 글리신이다. 특정 바람직한 구체예에서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 세 개는 각각 독립적으로 글리신, 아스파르트산, 아르기닌 및 세린으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
특정 바람직한 구체예에서, 항체의 C-말단은 GGGGGGGCVIM 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇의 구체예에서, 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 공유 결합하고, 티오에테르 결합은
Figure pct00001
으로 나타내는(여기서 n은 적어도 2임) 적어도 한 개 이상의 이소프레닐 유닛의 탄소 원자를 포함한다. 링커는 옥심을 포함할 수 있고, 적어도 한 개 이상의 이소프레닐 유닛은 옥심을 항체에 공유 결합으로 연결시킨다.
몇몇 구체예에서, 링커는
Figure pct00002
또는
Figure pct00003
를 포함할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 링커는
Figure pct00004
또는
Figure pct00005
를 포함할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 링커는
Figure pct00006
또는
Figure pct00007
로 나타내는 적어도 한 개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 포함한다.
몇몇 구체예에서, 링커는 1 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함한다. 예를 들어, 링커는 4 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함할 수 있다. 특정 바람직한 구체예에서, 링커는 1 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함할 수 있다. 다른 바람직한 구체예에서, 링커는 3 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함할 수 있다. 몇몇의 구체예에서, 링커는 옥심을 포함하고, 적어도 한 개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 옥심과 펩타이드를 공유 결합으로 연결시킨다.
몇몇의 구체예에서, 링커는 -(CH2)r(V(CH2)p)q-로 나타내는 연결 유닛(connection unit)을 포함하고, 여기서,
r은 0 내지 10로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2이고;
p는 0 내지 12로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2이며;
q는 1 내지 20로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 4 내지 20이고;
V는 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-,-C(O)NR22-,-NR23C(O)-,-NR24SO2- 또는 -SO2NR25-, 바람직하게는 -O-이며;
R21 내지 R25은 각각 독립적으로 수소,(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴이다.
몇몇의 구체예에서, 링커는 -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y((CH2)pV)q- 또는 -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-로 나타내는 연결 유닛을 포함하고 여기서,
r은 0 내지 10으로부터 선택되는 정수이고;
p는 1 내지 10으로부터 선택되는 정수이며;
q는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수이고;
V 및 Y는 각각 독립적으로 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이며;
R21 내지 R25은 각각 독립적으로 수소,(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴이다.
이들 링커의 특정 바람직한 구체예에서, q는 4 내지 20으로부터 선택되는 정수이다. 특정 구체예에서, q는 6 내지 20으로부터 선택되는 정수이고, 다른 바람직한 구체예에서, q는 2 내지 12로부터 선택되는 정수이다. 몇몇 구체예에서, q는 2, 5 또는 11이다.
이들 링커의 특정 바람직한 구체예에서, r은 2이다. 이들 링커의 특정 구체예에서, p는 2이다. 특정 구체예에서, V 및 Y는 각각 독립적으로 -O-이다. 특정 구체예에서, r은 2, p는 2, q는 2, 5 또는 11이고, V는 -O-이다.
특정 구체예에서, 링커는 -(CH2CH2X)w-로 나타내는 연결 유닛을 포함하고 여기서,
X는 -O-, (C1-C8)알킬렌 또는 -NR21, 바람직하게는 -O-이며;
R21은 수소,(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20) 헤테로아릴, 바람직하게는 수소이며;
w는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 4 내지 12로부터 선택되는 정수이다.
특정 구체예에서, 링커는 1, 3-쌍극 부가환화 반응(dipolar cycloaddition reaction), 헤테로-디엘스-엘더 반응(hetero-Diels-Alder reaction), 친핵성 치환 반응(nucleophilic substitution reaction), 비-알돌형 카보닐 반응(non-aldol type carbonyl reaction), 탄소-탄소 다중 결합에의 첨가(addition to carbon-carbon multiple bond), 산화 반응(oxidation reaction) 또는 클릭 반응(click reaction)에 의해 형성된 결합 유닛(binding unit)을 포함한다. 예를 들면, 결합 유닛은 아세틸렌 및 아자이드 사이의 반응에 의해 형성되거나, 알데하이드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 알콕시아민 사이의 반응에 의해 형성된다.
결합 유닛은 식 A, B, C 또는 D, 바람직하게는 C 또는 D 중 어느 하나로 나타날 수 있으며,
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
(A) (B) (C) (D)
여기서,
L1은 단일 결합 또는 1 내지 30개, 바람직하게는 12개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌이고;
R11은 수소 또는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 알킬, 바람직하게는 메틸이며; L2는 1 내지 30개, 예를 들면 10 또는 11, 바람직하게는 11개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌이다.
몇몇의 구체예에서, 링커는
Figure pct00012
또는
Figure pct00013
를 포함하고, 여기서
V는 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-, 바람직하게는 -O-이며;
R21 to R25은 각각 독립적으로 수소,(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
p는 0 내지 10으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2이고;
q는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2 내지 20이며;
L1은 단일 결합이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식
Figure pct00014
(V)의 구조를 포함하는데 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식
Figure pct00015
(VI)의 구조를 포함하고, 여기서
A는 리간드를 나타내며;
P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 식
Figure pct00016
구조를 포함하고 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 식
Figure pct00017
의 구조를 포함하고 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
B3는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L3는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 식
Figure pct00018
구조를 포함하고 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B11는 제2 활성제를 나타내고;
B12는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 링커를 나타내고;
L2는 링커를 나타내며;
L11은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내고;
L12는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내며;
BU는 분지 유닛을 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00019
의 구조를 포함하고 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00020
의 구조를 포함하고 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
B3는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L3는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00021
구조를 포함하고 여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B11는 제2 활성제를 나타내고;
B12는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 링커를 나타내고;
L2는 링커를 나타내며;
L11은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내고;
L12는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내며;
BU는 분지 유닛을 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
특정 바람직한 구체예에서, 리간드는 항체이다. 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날항체, 항체 단편(fragment), Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab′)2, Fv, 단쇄(single chain) Fv ("scFv"), 디아바디(diabody), 선형 항체(linear antibody), 이중특이성 항체(bispecific antibody), 다중특이성 항체(multispecific antibody), 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체, 인간 항체 또는 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 융합단백질일 수 있다.
항체는 뮤로모납-CD3 아브식시맙(muromonab-CD3 abciximab), 리툭시맙(rituximab), 다클리주맙(daclizumab), 팔리비주맙(palivizumab), 인플릭시맙(infliximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 에타너셉트(etanercept), 바실릭시맙(basiliximab), 젬투주맙(gemtuzumab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 이브리투모맙(ibritumomab), 아달리무맙(adalimumab), 알레파셉트(alefacept), 오말리주맙(omalizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 토시투모맙(tositumomab), 세툭시맙(cetuximab), ABT-806, 베바시주맙(bevacizumab), 나탈리주맙(natalizumab), 라니비주맙(ranibizumab), 파니투무맙(panitumumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 릴로나셉트(rilonacept), 세르톨리주맙(certolizumab), 로미플로스팀(romiplostim), AMG-531, 골리무맙(golimumab), 우스테키누맙(ustekinumab), ABT-874, 베라타셉트(belatacept), 벨리무맙(belimumab), 아타시셉트(atacicept), 항-CD20 항체, 카나키누맙(canakinumab), 토실리주맙(tocilizumab), 아틀리주맙(atlizumab), 메폴리주맙(mepolizumab), 페르투주맙(pertuzumab), 휴맥스 CD20(HuMax CD20), 트레멜리무맙(tremelimumab), 티실리무맙(ticilimumab), 이필리무맙(ipilimumab), IDEC-114, 이노투주맙(inotuzumab), 휴맥스 EGFR(HuMax EGFR), 아플리베르셉트(aflibercept), 휴맥스-CD4(HuMax-CD4), 테플리주맙(teplizumab), 오텔릭시주맙(otelixizumab), 카투막소맙(catumaxomab), 항-EpCAM 항체 IGN101(anti-EpCAM antibody IGN101), 아데카투모맙(adecatumomab), 오레고보맙(oregovomab), 디누툭시맙(dinutuximab), 지렌툭시맙(girentuximab), 데노수맙(denosumab), 바피네우주맙(bapineuzumab), 모타비주맙(motavizumab), 에품구맙(efumgumab), 락시바쿠맙(raxibacumab), LY2469298 및 벨투주맙(veltuzumab)으로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 각각의 활성제는 독립적으로 화학치료제(chemotherapeutic agents) 및 톡신으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
각각의 활성제는 독립적으로,
(a) 얼로티닙(erlotinib), 보르테조밉(bortezomib), 풀베스트란트(fulvestrant), 수텐트(sutent), 레트로졸(letrozole), 이마티닙 메실레이트(imatinib mesylate), PTK787/ZK 222584, 옥살리플라틴(oxaliplatin), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 류코보린(leucovorin), 라파마이신(rapamycin), 라파티닙(lapatinib), 로나파르닙(lonafarnib), 소라페닙(sorafenib), 제피티닙(gefitinib), AG1478, AG1571, 티오테파(thiotepa), 사이클로포스파마이드(cyclophosphamide), 부설판(busulfan), 임프로설판(improsulfan), 피포설판(piposulfan), 벤조도파(benzodopa), 카르보쿠온(carboquone), 메투레도파(meturedopa), 우레도파(uredopa), 에틸렌이민(ethylenimine), 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민(triethylenemelamine), 트리에틸렌포스포라마이드(trietylenephosphoramide), 트리에틸렌티오포스포라마이드(triethiylenethiophosphoramide), 트리메틸올로멜라민(trimethylolomelamine), 불라타신(bullatacin), 불라타시논( bullatacinone), 캄토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 브리오스타틴(bryostatin), 칼리스타틴(callystatin), CC-1065, 아도제레신(adozelesin), 카르제레신(carzelesin), 비제레신(bizelesin), 크립토피신 1(cryptophycin 1), 크립토피신 8(cryptophycin 8), 돌라스타틴(dolastatin), 두오카마이신(duocarmycin), KW-2189, CB1-TM1, 엘로테로빈(eleutherobin), 판크라티스타틴(pancratistatin), 사르코딕티인(sarcodictyin), 스폰지스타틴(spongistatin), 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 콜로포스파마이드(cholophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스파마이드(ifosfamide), 메클로레타민(mechlorethamine), 멜팔란(melphalan), 노벰비킨(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파마이드(trofosfamide), 우라실 머스타드(uracil mustard), 카르무스틴(carmustine), 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine), 라님누스틴(ranimnustine), 칼리케마이신(calicheamicin), 칼리케마이신 감마 1(calicheamicin gamma 1), 칼리케마이신 오메가 1(calicheamicin omega 1), 다이네마이신(dynemicin), 다이네마이신 A(dynemicin A), 클로드로네이트(clodronate), 에스페라마이신(esperamicin), 네오카르지노스타틴 크로모포어(neocarzinostatin chromophore), 아클라시노마이신스(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 안트르마이신(antrmycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신스(bleomycins), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카르니노마이신(carninomycin), 카르지노필린(carzinophilin), 크로모마이신스(chromomycins), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데토루부신(detorubucin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신(6-diazo-5-oxo-L-norleucine), 독소루비신(doxorubicin), 모르폴리노-독소루비신(morpholino-doxorubicin), 시아노몰포리노-독소루비신(cyanomorpholino-doxorubicin), 2-피롤리노-독소루비신(2-pyrrolino-doxorubucin), 리포소말 독소루비신(liposomal doxorubicin), 데옥시독소루비신(deoxydoxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 마르셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신 C(mitomycin C), 미코페놀릭산( mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신스(olivomycins), 페플로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 푸로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로보루비신(rodorubicin), 스트렙토미그린(streptomigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin), 5-플로오로우라실(5-fluorouracil), 데놉테린(denopterin), 메토트렉세이트(methotrexate), 프테로프테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 플루다라빈(fludarabine), 6-머캅토퓨린(6-mercaptopurine), 티아미프린(thiamiprine), 티구아닌(thiguanine), 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(6-azauridine), 카르모푸르(carmofur), 시타라빈(cytarabine), 디데옥시우리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플록수리딘(floxuridine), 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate), 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 테스토락톤(testolactone), 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 미토탄(mitotane), 트릴로스탄(trilostane), 폴린산(folinic acid), 아세글라톤(aceglatone), 알도포스파미드 글리코시드(aldophosphamide glycoside), 아미노레불린산(aminolevulinic acid), 에닐우라실(eniluracil), 암사크린(amsacrine), 베스트라부실(bestrabucil), 비산트렌(bisantrene), 에다트락세이트(edatraxate), 데포파민(defofamine), 데메콜신(demecolcine), 디아지쿠온(diaziquone), 엘포르니틴(elfornithine), 엘립티늄 아세테이트(elliptinium acetate), 에토글루시드(etoglucid), 갈륨 니트레이트(gallium nitrate), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 렌티난(lentinan), 로니다이닌(lonidainine), 메이탄신(maytansine), 안사미토신스(ansamitocins), 미토구아존(mitoguazone), 미토잔트론(mitoxantrone), 모피단몰(mopidanmol), 니트라에린(nitraerine), 펜토스타틴(pentostatin), 페나메트(phenamet), 피라루비신(pirarubicin), 로속산트론(losoxantrone), 2-에틸하이드라자이드(2-ethylhydrazide), 프로카르바진(procarbazine), 폴리사카라이드-k(polysaccharide-k), 라족산(razoxane), 리족신(rhizoxin), 시조피란(sizofiran), 스피로게르마늄(spirogermanium), 테누아존산(tenuazonic acid), 트리아지쿠온(triaziquone), 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민(2,2',2''-trichlorotriethylamine), T-2 톡신(T-2 toxin), 베라쿠린 A(verracurin A), 로리딘 A(roridin A), 안구이딘(anguidine), 우레탄(urethane), 빈데신(vindesine), 다카르바진(dacarbazine), 만노무스틴(mannomustine), 미토브로니톨(mitobronitol), 미토락톨(mitolactol), 피포브로만(pipobroman), 가시토신(gacytosine), 아라비노사이드(arabinoside), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 티오테파(thiotepa), 파크리탁셀(paclitaxel), 파크리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(albumin-engineered nanoparticle formulation of paclitaxel), 도세타셀(doxetaxel), 클로람부실(chlorambucil), 젬시타빈(gemcitabine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 빈블라스틴(vinblastine), 백금(platinum), 에토포시드(etoposide), 이포스파미드(ifosfamide), 미토잔트론(mitoxantrone), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine), 노반트론(novantrone), 테니포시드(teniposide), 에다트렉세이트(edatrexate), 다우노마이신(daunomycin), 아미놉테린(aminopterin), 젤로다(xeloda), 이반드로네이트(ibandronate), CPT-11, 토포이소머라제 저해제 RFS 2000(topoisomerase inhibitor RFS 2000), 디플로오로메틸로니틴(difluoromethylornithine), 레틴산(retinoic acid), 카페시타빈(capecitabine), 또는 전술한 것들의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 산;
(b) 모노카인(monokine), 림포카인(lymphokine), 전통적인 폴리펩타이드 호르몬, 부갑상선 호르몬, 티록신(thyroxine), 릴랙신(relaxin), 프로릴랙신(prorelaxin), 당단백질 호르몬(glycoprotein hormone), 여포자극 호르몬(follicle stimulating hormone), 갑상선 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone), 황체형성 호르몬(luteinizing hormone), 간성장인자(hepatic growth factor), 섬유모세포 성장인자(fibroblast growth factor), 프로락틴(prolactin), 태반성 락토겐(placental lactogen), 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor-α), 종양괴사인자-β(tumor necrosis factor-β), 뮐러관 억제 물질(mullerian-inhibiting substance), 마우스 고나도트로핀-관련 펩타이드(mouse gonadotropin-associated peptide), 인히빈(inhibin), 액티빈(activin), 혈관표피성장인자(vascular endothelial growth factor), 트롬보포이에틴(thrombopoietin), 에리트로포이에틴(erythropoietin), 골유도 인자(osteoinductive factor), 인터페론(interferon), 인터페론-α(interferon-α), 인터페론-β(interferon-β), 인터페론-γ(interferon-γ), 콜로니 자극 인자(colony stimulating factor ("CSF")), 매크로파지-CSF(macrophage-CSF), 과립구-매크로파지-CSF(granulocyte-macrophage-CSF), 과립구-CSF(granulocyte-CSF), 인터루킨(interleukin ("IL")), IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 종양괴사인자(tumor necrosis factor), TNF-a, TNF-b, 폴리펩타이드 인자(polypeptide factor), LIF, 키트 리간드(kit ligand) 또는 전술한 것들의 조합;
(c) 디프테리아 톡신(diphtheria toxin), 보튤리늄 톡신(botulium toxin), 파상풍 톡신(tetanus toxin), 이질 톡신(dysentery toxin), 콜레라 톡신(cholera toxin), 아마니틴(amanitin), α-아마니틴(α-amanitin), 아마니틴 유도체(amanitin derivatives), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine), 피롤로벤조디아제핀 유도체(pyrrolobenzodiazepine derivatives), 테트로도톡신(tetrodotoxin), 브레베톡신(brevetoxin), 시구아톡신(ciguatoxin), 리신(ricin), AM 톡신(AM toxin), 튜불리신(tubulysin), 젤다나마이신(geldanamycin), 메이탄시노이드(maytansinoid), 칼리케마이신(calicheamicin), 다우노마이신(daunomycin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 빈데신(vindesine), SG2285, 돌라스타틴(dolastatin), 돌라스타틴 유사체(dolastatin analog), 크립토피신(cryptophycin), 캄토테신(camptothecin), 캄토테신 유도체 및 대사체(camptothecin derivatives and metabolites (예를 들어, SN-38)), 리조신(rhizoxin), 리조신 유도체(rhizoxin derivative), CC-1065, CC-1065 유사체 혹은 유도체, 두오카마이신(duocarmycin), 에네디인 항생제(enediyne antibiotic), 에스페라마이신(esperamicin), 에포틸론(epothilone), 아조나파이드(azonafide), 아프리딘(aplidine), 톡소이드(toxoid) 또는 전술한 것들의 조합;
(d) 친화 리간드(affinity ligand), 여기서 친화 리간드는 기질, 저해제, 자극 인자, 신경전달물질, 방사성동위원소 또는 전술한 것들의 조합;
(e) 방사능 표지, 32P, 35S, 형광 염료, 전자 고밀도 시약, (electron dense reagent),효소, 바이오틴(biotin), 스트렙타비딘(streptavidin), 디옥시게닌(dioxigenin), 햅텐(hapten), 면역 단백질, 표적 대상에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자 또는 전술한 것들의 조합;
(f) 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항세균제, 항진균제, 항기생충제 또는 전술한 것들의 조합;
(g) 타목시펜(tamoxifen), 랄록시펜(raloxifene), 드롤록시펜(droloxifene), 4-하이드록시타목시펜(4-hydroxytamoxifen), 트리옥시펜(trioxifene), 케옥시펜(keoxifene), LY117018, 오나프리스톤(onapristone) 또는 토레미펜(toremifene);
(h) 4(5)-이미다졸(4(5)-imidazoles), 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 메게스트롤 아세테이트(megestrol acetate), 엑세메스탄(exemestane), 레트로졸(letrozole) 또는 아나스트로졸(anastrozole);
(i) 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide), 비카루타미드(bicalutamide), 류프로라이드(leuprolide), 고세렐린(goserelin) 또는 트록사시타빈(troxacitabine);
(j) 아로마타제 저해제;
(k) 단백질 키나아제 저해제;
(l) 리피드 키나아제 저해제;
(m) 안티센스 올리고뉴클레오티드;
(n) 리보자임(ribozyme);
(o) 백신; 및
(p) 항신생혈관제(anti-angiogenic agent)로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 적어도 한 개의 활성제는 탈토불린 또는 아조나파이드이다.
특정 구체예에서, 각각의 활성제는 독립적으로 아마니틴(amanitin), 아우리스타틴(auristatin), 칼리케마이신(calicheamicin), 캄토테신(camptothecin), 크립토피신(cryptophycin), 다우노마이신(daunomycin), 돌라스타틴(dolastatin), 독소루비신(doxorubicin), 두오카마이신(duocarmycin), 에포틸론(epothilone), 에스페라마이신(esperamicin), 젤다나마이신(geldanamycin), 메이탄시노이드(maytansinoid), 메토트렉세이트(methotrexate), 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E ("MMAE")), 모노메틸 아우리스타틴 F(monomethyl auristatin F ("MMAF")), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine), 리조신(rhizoxin), SG2285, 투불리신(tubulysin), 빈데신(vindesine) 및 톡소이드(toxoid)로 구성된 그룹으로부터 선택되거나, 앞서 언급된 것들 중 어느 것의 유도체이다. 예를 들면, 각각의 활성제는 독립적으로 아마니틴, MMAE 및 MMAF로 구성된 그룹으로부터 선택되거나, 앞서 언급된 것들 중 어느 것의 유도체이다.
바람직한 구체예에서, 적어도 한 개의 활성제는 절단 그룹, 예를 들어 식
Figure pct00022
(I) 구조를 갖는 절단 그룹을 통하여 링커와 연결되며, 여기서,
B는 활성제를 나타내며;
G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며(여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합됨);
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하고;
L은 항체에의 연결을 나타낸다.
몇몇의 구체예에서, 적어도 한 개의 활성제는 식
Figure pct00023
을 갖는 절단 그룹을 통하여 링커에 연결되며, 여기서
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
몇몇의 구체예에서, 적어도 한 개의 활성제는 식
Figure pct00024
을 갖는 절단 그룹 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 통하여 링커에 연결되며, 여기서
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
B는 활성제와 공유 결합으로 연결되는 유닛이며;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
L은 펩타이드 서열을 포함하는 링커를 나타내며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
당 또는 당산은 모노사카라이드(monosaccharide)인, 접합체.
당 또는 당산은 예를 들어 모노사카라이드(monocsccharide)이다. 몇몇의 구체예에서, G는
Figure pct00025
이고;
R3는 수소 또는 카복실 보호 그룹이며;
각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호 그룹이다.
예를 들어, R3는 수소일 수 있고 각각의 R4는 수소일 수 있다.
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-일 수 있고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이다. 바람직한 구체예에서, W는 -C(O)NR'-이고, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합하며, NR'은 L에 결합한다.
대안적으로, 절단 그룹은 발린-시트룰린-p-아미노벤질메이트(VC-PABC)를 포함한다.
바람직한 구체예에서 Z는 수소이고, n은 3이다.
바람직한 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소를 나타낸다.
바람직한 구체예에서, G는 글루쿠론 산을 나타낸다. W는 -C(O)NR'-이고, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합하며, NR'은 L에 결합하고; 각각의 Z는 수소이며; R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소이다.
B, B1 및/또는 B2는 각각 독립적으로
Figure pct00026
,
Figure pct00027
,
Figure pct00028
,
Figure pct00029
,
Figure pct00030
,
Figure pct00031
,
Figure pct00032
,
Figure pct00033
,
Figure pct00034
,
Figure pct00035
,
Figure pct00036
,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
,
Figure pct00039
,
Figure pct00040
또는
Figure pct00041
에서 선택되며, 여기서 y는 1 내지 10으로부터 선택되는 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 기술된 것과 같은 항체에 공유결합으로 연결된 2 내지 4개의 링커를 포함하며, 여기서 각각의 링커는 바람직하게는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하며, 적어도 두 개의 활성제는 바람직하게는 각각의 링커의 아미노산의 측쇄에 공유결합으로 연결된다. 각각의 링커는 항체의 C-말단(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄)에 연결될 수 있다.
다양한 구체예에서, 각각의 활성제는 동일한 활성제일 수 있다.
대안적으로, 항체-약물 접합체는 각각의 링커가 다른 링커에 다른 활성제를 감당하는 것과 같이 적어도 두 개의 다른 활성제를 포함할 수 있다.
관련된 항체-약물 접합체의 구조와 요소는 그 안에 개시된 항체-약물 접합체, 이의 구성요소 일부(예를 들어, 링커, 절단 그룹 등) 및 이의 제형과 용도 에 대하여 전부 혹은 일부로써 여기에 참조로 인용되는 PCT/KR2015/005299에 개시되어 있다. 특정 바람직한 구체에에서, 본 발명의 다양한 접합체와 다른 측면들은 PCT/KR2015/005299에 개시된 다양한 구조와 방법을 제외한다.
몇몇 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체와 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물과 관련된다. 약학적 조성물은 치료적 유효량의 화학치료제를 추가적으로 포함할 수 있다.
몇몇 측면에서, 본 발명은 개체에 본 명세서에 기재된 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체 내 암을 치료하는 방법과 관련된다.
개체는 포유동물일 수 있다. 예를 들어, 개체는 설치류(rodents), 토끼(lagomorphs), 고양이(felines), 개(canines), 돼지(porcines), 양(ovines), 소(bovines), 말(equines) 및 영장류(primates)로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 개체는 사람이다.
몇몇 구체예에서, 본 발명은 생체 분자와 프로드럭간의 반응을 포함하는, 본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체를 제조하는 방법과 관련된다. 생체 분자는 바람직하게는 항체 및 케톤 또는 알데하이드를 포함한다. 프로드럭은 바람직하게는 알콕시아민을 포함한다. 반응은 옥심을 생성할 수 있고, 그렇게 됨으로써 항체와 프로드럭을 공유 결합으로 연결할 수 있다.
본 방법은 항체를 이소프레닐화하고 그렇게 함으로써, 생체 분자를 생성하는 것을 추가로 포함할 있다. 예를 들어, 항체는 이소프레닐화 서열을 포함할 수 있고, 항체를 이소프레닐화하는 것은 항체를 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소프레노이드 트렌스퍼라제 기질과 함께 배양(incubating)하는 것을 포함할 수 있다. 기질은 바람직하게는 케톤 또는 알데하이드를 포함한다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제는, 예를 들면 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 파네실트랜스퍼라제(farnesyltransferase) 또는 게라닐게라닐트랜스퍼라제(geranylgeranyltransferase)일 수 있다.
몇몇 구체예에서, 본 발명은 항체를 이소프레닐화하는 것을 포함하는, 본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체를 제조하는 방법과 관련된다. 예를 들면, 항체는 이소프레닐화 서열을 포함할 수 있고, 항체를 이소프레닐화하는 것은 항체를 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소프레노이드 트렌스퍼라제 기질과 함께 배양(incubating)하는 것을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 기질은 본 명세서에 기재된 적어도 한 개 이상 활성제를 포함한다.
몇몇 구체예에서, 본 발명은 리간드(바람직하게는 항체)가 접합되어 본 명세서의 접합체 중 하나로 귀결될 수 있는 링커-활성제 화합물과 관련된다. 그리하여, 그러한 링커-활성제 화합물에 있어서, i) 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고; ii) 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결된다. 몇몇 그러한 구체예에서, 각각의 활성제는 리간드-활성제 화합물로부터 활성제를 방출하도록 가수분해할 수 있는 절단 그룹에 의해 펩타이드 서열과 연결된다. 절단 그룹은 식
Figure pct00042
(I)을 갖는 구조로 나타낼 수 있고;
B는 활성제를 나타내며;
G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며(여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합됨);
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하고;
L은 리간드에의 연결을 나타낸다.
다른 구체예에서, 절단 그룹은 식
Figure pct00043
을 갖는 구조로 나타낼 수 있고;
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
또 다른 구체예에서, 절단 그룹은 식
Figure pct00044
을 갖는 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 나타낼 수 있고;
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
B는 활성제와 공유 결합으로 연결되는 유닛이며;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
L은 펩타이드 서열에의 연결을 나타내며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 활성제와 리간드(바람직하게는 항체)를 연결하여 본 명세서의 접합체로 귀결시킬 수 있는 링커 화합물과 관련된다. 그리하여, 그러한 링커 화합물로서, i) 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고; ii) 적어도 두 개의 절단 그룹은 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결되고, 여기서 각각의 절단 그룹은 활성제와 반응할 수 있는 반응성 모이어티(moiety)를 갖는다. 절단 그룹은 식
Figure pct00045
(I)을 갖는 구조로 나타낼 수 있고;
B는 할로겐(예를 들어, Cl 또는 Br) 또는 활성제와 연결시킬 수 있는 반응성 모이어티(moiety)를 포함하는 유닛(예를 들어 이소시아네이트, 산 염화물, 클로로포르메이트 등)과 같이, 활성제가 대체될 수 있는 방출 그룹을 나타내며;
G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며(여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합됨);
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하고;
L은 리간드에의 연결을 나타낸다.
대안적으로, 절단 그룹은 식
Figure pct00046
을 갖는 구조로 나타낼 수 있고;
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
대안적으로, 절단 그룹은 식
Figure pct00047
을 갖는 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 나타낼 수 있고;
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
B는 활성제와 공유 결합으로 연결될 수 있는 반응성 모이어티를 포함하는 유닛이며;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
L은 펩타이드 서열에의 연결을 나타내며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다. 몇몇의 그러한 구체예에서, G는
Figure pct00048
이고; R3는 수소 또는 카복실 보호 그룹이며; 각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호 그룹이다.
몇몇의 구체예에서, 링커는 -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y((CH2)pV)q- 또는 -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-로 나타나는 연결 유닛을 포함하고, 여기서
r은 0 내지 10으로부터 선택되는 정수이고
p는 1 내지 10으로부터 선택되는 정수이며;
q는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수이고;
V 및 Y는 각각 독립적으로 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴이다.
도면의 간단한 설명
도 1은 β-글루쿠로나이드 기반 링커로부터의 활성제 방출 메카니즘을 도해한 것이다.
도 2는 실험예 1로부터 β-글루쿠로니다제에 의한 링커의 가수분해를 묘사한 그래프이다.
도 3은 실험예 2로부터 두 개의 약물-링커 접합체의 혈장 내 안정성을 묘사한 그래프이다.
도 4는 실시예 68에 기재된 화합물 47a의 혈장 내 안정성을 묘사한 그래프이다.
도 5는 실시예 70에 기재된 화합물 49a의 혈장 내 안정성을 묘사한 그래프이다.
도 6은 실시예 69에 기재된 화합물 48a의 혈장 내 안정성을 묘사한 그래프이다.
도 7은 도 7A 및 도 7B의 두 개 패널로 구성되며, 도 7A는 항체(DAR2)에 약물을 접합시키기 위한 전략을 보여주며, 도 7B는 항체(DAR4)에 약물을 접합시키기 위한 전략을 보여준다.
도 8은 JIMT-1(HER2 양성) 및 MCF7 세포(HER2 음성)를 대비하여, 링커 내 PEG 길이를 다양하게 하였을 경우의 DAR2 MMAE 접합체의 상대적인 생체 외 활성을 보여준다.
도 9는 JIMT-1(HER2 양성) 및 MCF7 세포(HER2 음성)를 대비하여, 링커 부분 내 다양한 PEG를 갖는 DAR4 MMAE 접합체의 상대적인 생체 외 활성을 보여준다.
도 10은 다양한 링커 형태를 갖는 DAR4 ADC 내 인간 베타-글루쿠로니다제 반응성을 보여준다. ADC의 12μM은 37℃에서 3시간 동안 0.01μg의 인간 베타-글루쿠로니다제와 함께 배양되었다.
도 11은 마우스 혹은 인간 혈장 내 ADC2와 캐싸일라(Kadcyla)의 혈장 안정성을 보여준다.
도 12는 7일간의 ADC33과 ADC34의 인간 혈장 안정성을 보여준다.
도 13은 허셉틴(Herceptin)과 ADC2의 랫트(rat) PK 프로파일을 보여준다.
도 14는 ADC23과 ADC34의 랫트 PK 프로파일을 보여준다.
도 15는 2g에서 11j까지 링커-톡신을 대체함으로써 MMAE-기반 ADC의 랫트 PK 프로파일의 향상을 보여준다.
도 16은 분지된 링커 유닛에 의한 랫트 PK 프로파일을 향상을 보여준다.
도 17은 MMAE ADC 내 랫트 PK 프로파일에서의 극성 아미노산의 영향력을 보여준다.
도 18은 DAR2를 갖는, 극성 아미노산이 있거나 없는 분지된 링커-톡신에 의한 랫트 PK 프로파일의 향상을 보여준다.
도 19는 DAR4를 갖는 ADC의 랫트 PK 프로파일에 있어서, 링커-톡신 유닛 내 Asp의 영향을 보여준다.
도 20는 DAR4를 갖는 ADC의 랫트 PK 프로파일에 있어서, 링커-톡신 유닛 내 Glu의 영향을 보여준다.
도 21은 MMAF(ADC23) 또는 MMAE(ADC24)를 사용하는 대표적인 아민 형태 DAR4 ADC의 생체 내 효능을 보여준다.
도 22는 MMAF(ADC34) 또는 MMAE(ADC33)를 사용하는 대표적인 아미드 형태 DAR4 ADC의 생체 내 효능을 보여준다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 다수의 약물이 링커를 통하여 항체에 접합되는 항체-약물 접합체(ADCs)와 관련된다. 링커는 바람직하게는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고, 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결된다. 그러나 당업자들 중 한 명이라도 인식할 수 있는 것으로서, 그러한 접합체의 항체 부분은 어떠한 적절한 리간드로 대체될 수 있고, 따라서 본 발명은 리간드-약물 접합체와 동등한 것으로서 관계가 있다. 그러한 이유로 항체-약물 접합체에 대한 참조 및 논의는, 본질이 모순되지 않는 경우, 리간드-약물 접합체 및 이의 상응하는 중간체(예컨대 리간드-링커 접합체)에 동등하게 적용가능한 것으로 이해되어야 한다. 그러나 본 명세서에 개시된 다양한 리간드-약물 접합체와 관련된 모든 양태에서, 리간드는 바람직하게는 항체이다.
그러한 특정 구체예에서, 둘 이상의 그러한 링커가 항체에 접합되며, 예를 들어, 2-4 링커는 각각 항체의 중쇄 혹은 경쇄의 다른 C-말단 시스테인에 연결될 수 있다.
활성제는 본 명세서에서 "연결 아미노산(linking amino acid)"으로 명명되는 미노산의 측쇄에 공유적으로 연결될 수 있다. 특정 바람직한 구체예에서, 링커 내 각각의 연결 아미노산과 같은 연결 아미노산은 리신 혹은 오르니틴이다. 그럼에도 불구하고 많은 다른 아미노산이 본 발명의 다양한 구체에에서 연결 아미노산일 수 있다. 예를 들어 연결 아미노산은 리신, 5-하이드록시리신, 4-옥살리신, 4-티아리신, 4-셀레나리신, 4-티아호모리신, 5,5-디메틸리신, 5,5-디플루오로리신, 트랜스-4-디하이드로리신(trans-4-dehydrolysine), 2,6-디아미노-4-헥시노산, 시스-4-디하이드로리신(cis-4-dehydrolysine), 6-N-메틸리신, 다이미노피멜산, 오르니틴, 3-메틸오르니틴, α-메틸오르니틴, 시트룰린, 및 호모시트룰린에서 선택될 수 있다. 연결 아미노산은 L-아미노산 또는 D-아미노산일 수 있다. 연결 아미노산은 α-아미노산 또는 β-아미노산일 수 있다. 연결 아미노산은 자연적으로 발생하는 아미노산 또는 비자연적으로 발생하는 아미노산일 수 있다.
펩타이드는 2 내지 20개의 아미노산을 포함할 수 있다. 펩타이드의 아미노산 중 다수는 독립적으로 알라닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린, 및 트레오닌으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 펩타이드의 각각의 아미노산은 독립적으로 알라닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린 및 트레오닌으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
바람직한 구체에에서, 펩타이드는 적어도 하나의 친수성 아미노산, 예컨대 연결 아미노산들에 더하여 포함될 수 있다. 친수성 아미노산은 항체-약물 접합체, 링커 및/또는 항체-약물 접합체의 프로드럭에 있어 수용해성을 증가시킬 수 있다. 각각의 친수성 아미노산은 자연적으로 발생되는 아미노산이거나 비자연적으로 발생된 아미노산일 수 있다. 친수성 아미노산은 α-아미노산 또는 β-아미노산일 수 있다. 친수성 아미노산은 알라닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린 또는 트레오닌일 수 있고, D-아미노산 또는 L-아미노산일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 펩타이드는 L-아스파테이트나 L-글루타메이트와 같은 아스파테이트 또는 글루타메이트로부터 선택되는 친수성 아미노산을 포함한다. 다른 바람직한 구체에에서, 펩타이드는 L-리신 혹은 L-아르기닌과 같은 리신 혹은 아르기닌으로부터 선택되는 친수성 아미노산을 포함한다. 특정 구체에에서, 펩타이드는 수성 용액 내 중성 pH에서 전하를 띄는 모이어티(예를 들어 아민, 구아니딘 혹은 카복실 모이어티)를 갖는 측쇄를 함유한 친수성 아미노산을 포함한다.
펩타이드는 자연적으로 생성된 아미노산 및/또는 비자연적으로 생성된 아미노산을 포함할 수 있다. 펩타이드는 α-아미노산 및/또는 β-아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 구체에에서, 펩타이드는 필수적으로 α-아미노산으로 구성된다. 특정 구체예에서, 펩타이드는 필수적으로 리신 또는 오르니틴과 같은 자연적으로 생성된 아미노산(즉, 연결 아미노산은 리신 또는 오르니틴과 같은 자연적으로 생성된 아미노산이고, 이들은 활성제를 포함하는 그룹과 치환됨)으로 구성된다. 펩타이드는 L-아미노산 및/또는 D-아미노산 중 어느 것일 수 있는, 알라닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린 및 트레오닌으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 아미노산을 포함하거나, 그러한 아미노산으로 필수적으로 구성되거나, 그러한 아미노산으로도 구성될 수 있다. 특정 구체예에서, 펩타이드는 필수적으로 L-아미노산으로 구성된다. 특정 구체예에서, 펩타이드는 이소류신, 메티오닌, 류신, 페닐알라닌, 트립토판, 티로신 또는 발린으로부터 선택되는 아미노산과 같은 소수성 아미노산을 포함하지 않는다; 달리 말해 그러한 구체예에서, 펩타이드는 이러한 아미노산으로부터 구속되지 않거나 필수적으로 자유롭다. 바람직한 구체예에서, 펩타이드는 이소류신, 메티오닌, 류신, 페닐알라닌, 트립토판, 티로신 및 발린 중 어느 하나도 포함하지 않는다.
펩타이드에 더하여, 링커는 O-치환된 옥심을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 옥심의 산소 원자는 옥심과 펩타이드를 공유결합으로 연결하는 그룹으로 치환되고, 옥심의 탄소 원자는 옥심과 항체를 공유결합으로 연결하는 그룹으로 치환된다. 다른 구체에에서, 옥심의 탄소 원자는 옥심과 펩타이드를 공유결합으로 연결하는 그룹으로 치환되고, 옥심의 산소 원자는 옥심과 항체를 공유결합으로 연결하는 그룹으로 치환된다. 옥심은 항체와 펩타이드의 N-말단 또는 펩타이드의 C-말단을 공유결합으로 연결할 수 있고, 옥심은 항체와 펩타이드의 측쇄를 공유결합으로 연결할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 링커는 옥심을 포함하지 않는다. 에를 들어, 링커는 옥심 대신에 치환된 트리아졸과 같은 고리 첨가 반응의 생성물을 포함할 수 있다.
활성제는 절단(cleavable) 혹은 비절단(non-cleavable) 결합, 가수분해 혹은 비가수분해 결합에 의해 링커에 연결될 수 있다. 특정 바람직한 구체에에서, 활성제는 절단 결합에 의해 링커에 연결된다. 예를 들어, 항체-약물 접합체는 자기희생기, 바람직하게는 예를 들어, 활성제를 ADC로부터 방출시키기 위한 각각의 활성제에 있어 자기희생기를 포함할 수 있다.
예를 들어, 하나 이상의 활성제 또는 각각의 활성제도 식(I)의 절단 그룹을 통하여 링커에 결합될 수 있다.
Figure pct00049
(I)
여기서,
B는 활성제를 나타내며;
G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며(여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합됨);
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
L은 항체를 W에 공유결합시키는 20 내지 100개의 원자사슬을 포함하고;
R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
절단 그룹은 다음 식의 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00050
여기서,
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
다르게는, 절단 그룹은 다음 식의 구조 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 가질 수 있다: 여기서,
Figure pct00051
G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
B는 활성제와 공유 결합으로 연결될 수 있는 반응성 모이어티를 포함하는 유닛이며;
W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로와 같은 전자 끄는 기, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
L은 펩타이드 서열을 포함하는 링커를 나타내며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성한다.
전자 끄는 기(electron withdrawing group) W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -SO2NR'-, -P(O)R"NR'-, -SONR'-, 또는 -PO2NR'-일 수 있고, 바람직하게는 -C(O)NR'-일 수 있으며, R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴, 또는 (C6-C20)아릴일 수 있고, 바람직하게는 수소이다. 특정 구체예에서, W는 카보닐, 포스포릴, 설포닐 또는 술피닐기가 페닐 고리에 직접 결합되도록 배향되는 것이 바람직하다. Z가 전자 끄는 기를 나타내는 경우, Z는 W에 대해 상기 단락에서 기술된 임의의 모이어티를 나타낼 수 있다.
W는 -C(O)NR'-를 나타낼 수 있고, W의 질소는 리신 혹은 오르니틴과 같은 연결 아미노산의 측쇄의 질소 원자일 수 있다. 유사하게, W는 -C(O)NR'-를 나타낼 수 있고, W의 질소는 펩타이드 내 N-말단 아미노산의 질소 원자, 예를 들어 N-말단 아미노산의 아민 질소(백본 질소)일 수 있다.
절단 그룹의 당 또는 당산(즉, G)은 예를 들어 페닐 고리 상의 산소 치환체에 대한 글리코시드 결합(glycosidic bond)과 같은 효소적 절단에 영향을 받기 쉬운 결합에 의해 페닐 고리와 연결된다. 당 또는 당산은 β-글루쿠로니다제와 같은 효소, 예컨대 접합체에 의해 표적화되는 세포에 존재하는 효소에 의해 ADC로부터 절단될 수 있는 글루쿠론산 또는 이의 유도체와 같은 모노사카라이드인 것이 바람직하다. 글루쿠론산 및 이의 유도체는 다음 화학식 (II)로 나타낼 수 있다:
Figure pct00052
(II)
여기에서 R3는 수소 또는 카복실 보호기이고, 바람직하게는 수소이며, 각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호기이고, 바람직하게는 수소이다.
카복실 보호기는 예컨대 유기 합성과정에서 카복실산을 마스킹하기 위한 임의의 적합한 보호기일 수 있고, 예를 들어 메틸, 메톡시메틸, 메틸티오메틸, 테트라하이드로피라닐, 벤질옥시메틸, 페나실, N-프탈이미도메틸, 2,2,2-트리클로로에틸, 2-할로에틸, 2-(p-톨루엔설포닐)에틸, t-부틸, 신나밀, 벤질, 트리페닐메틸, 비스(o-니트로페닐)메틸, 9-안트릴메틸, 2-(9,10-디옥소)안트릴메틸, 피페로닐, 2-트리메틸실릴에틸, 트리메틸실릴, 또는 t-부틸디메틸실릴일 수 있다. 몇몇의 구체예에서, 전체 모이어티 R3-OC(=O)-는 2-알킬-1,3-옥사졸리닐과 같은 카복실-마스킹 모이어티에 의해 대체된다.
하이드록실 보호기는 예컨대 유기 합성과정에서 하이드록실기를 마스킹하기 위한 임의의 적합한 보호기일 수 있고, 예를 들어 아세틸, 메틸, 에톡시에틸, 벤조일, 벤질, 4-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, 테트라하이드로피라닐(THP), 테트라하이드로푸라닐(THF), tert-부틸디메틸실릴(TBDMS), 트리메틸실릴(TMS), 트리에틸실릴(TES), 트리이소프로필실릴(TIPS), tert-부틸디페닐실릴(TBDPS), 트리-이소프로필실릴옥시메틸(TOM), β-메톡시에톡시메틸(MEM), 메톡시메틸(MOM), 알릴 또는 트리틸일 수 있다.
L 및/또는 링커는 1 내지 100개의 탄소원자, 바람직하게는 20 내지 80개의 탄소 원자를 갖는 치환되거나 비치환된 알킬렌을 포함할 수 있고, 다음 (i) 내지 (iv)의 조건 중 적어도 하나, 바람직하게는 적어도 2개 이상을 만족한다:
(i) 알킬렌은 적어도 하나의 불포화 결합, 바람직하게는 3 또는 4개의 이중결합을 포함하고 삼중결합은 포함하지 않는다,
(ii) 알킬렌은 적어도 하나의 헤테로아릴렌을 포함한다,
(iii) 알킬렌의 적어도 하나의 탄소 원자는 질소(N), 산소(O) 및 황(S)에서 선택되는 하나 이상의 헤테로원자, 바람직하게는 적어도 하나의 질소 및 적어도 하나의 산소(예를 들어 옥심에 있는 것으로서)에 의해 치환된다, 그리고
(iv) 알킬렌은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 알킬, 바람직하게는 2 또는 3의 메틸로 치환된다.
바람직한 구체예에서, 항체의 시스테인, 바람직하게는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 C-말단에 있는 시스테인은 이소프레닐 유닛의 탄소 원자와 함께 티오에테르 결합을 형성하고, 그럼으로써 항체를 링커에 공유결합으로 연결시킨다. 따라서 몇몇 구체예에서, L 및/또는 링커는 다음 화학식 (III)에 의해 각각 나타내지는, 최소 하나의 이소프레닐 유닛, 바람직하게는 2개의 이소프레닐 유닛을 포함하고, 이는 바람직하게는, 예를 들어 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 생성물 또는 기질의 일부로, 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식될 수 있다.
Figure pct00053
(III)
특정의 상기 바람직한 구체예에서, 항체는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 포함한다. 예를 들어, 최소 하나의 항체의 C-말단은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 포함할 수 있다 (예를 들어, 항체-약물 접합체를 형성하기 전에 기질로서 또는 예를 들어 항체-약물 접합체를 형성한 후에 생성물로서). 항체는 항체의 펩타이드 사슬을 아미노산 모티프에 연결시키는 아미노산 또는 아미노산의 스트레치와 같은, 스페이서를 추가로 포함할 수 있다. 스페이서는 1 내지 20개의 연속적인 아미노산, 바람직하게는 7 또는 그 이상의 아미노산으로 구성될 수 있다. 글리신 및 프롤린은 스페이서를 위한 바람직한 아미노산이고, 약 7개의 글리신의 일련의 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 몇몇의 구체예에서, 항체의 C-말단은 아미노산 서열 GGGGGGGCVIM을 포함한다. 항체는 예를 들어 ADC에 포함되지 않은 항체의 형태와 관련하여, 카복시 말단에 부가 또는 결실을 포함할 수 있다.
이소프레노이드 트랜스퍼라제의 예로는 파네실 단백질 트랜스퍼라제(FTase) 및 게라닐게라닐 트랜스퍼라제(GGTase)를 포함하고, 이는 표적 단백질의 적어도 하나의 C-말단 시스테인으로 파네실 또는 게라닐-게라닐 그룹이 전달되는 것을 촉매할 수 있다. GGTase는 GGTase I 또는 GGTase II로 분류될 수 있다. FTase 및 GGTase I은 CAAX 모티프를 인식할 수 있고, GGTase II는 XXCC, XCXC, 또는 CXX 모티프를 인식할 수 있으며, 여기에서 C는 시스테인을, A는 지방족 아미노산 (예를 들어 이소류신, 발린, 메티오닌, 류신)을 나타내고, 각각의 X는 독립적으로, 예를 들어 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌, 또는 류신을 나타낸다 (Nature Rev. Cancer, 5(5):405-12 (2005); Nature Chemical Biology 17:498-506 (2010); Lane KT, Bees LS, J. Lipid Research, 47:681-699 (2006); Kasey PJ, Seabra MC, J. Biological Chemistry, 271(10):5289-5292 (1996) 참고, 각각은 전체적으로, 본 명세서에 참고문헌으로 포함되어 있다).
본 발명에 따른 항체-약물 접합체는 아미노산 모티프, 예를 들어 CYYX, XXCC, XCXC, 또는 CXX, 바람직하게는 CYYX를 포함할 수 있다 (여기에서, C는 시스테인을, Y는 지방족 아미노산, 예컨대 류신, 이소류신, 발린, 및/또는 메티오닌을, X는 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산, 예를 들어 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌, 및/또는 류신을 나타낸다).
다양한 공급원으로부터의 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 인간, 동물, 식물, 박테리아, 바이러스, 또는 다른 공급원으로부터 수득될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 천연 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 사용된다. 몇몇 구체예에서, 천연-변형된, 또는 인공적으로-변형된 이소프레노이드 트랜스퍼라제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 하나 이상의 아미노산 치환, 첨가 및/또는 결실을 포함할 수 있고/거나, 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 히스티딘-태그, GST, GFP, MBP, CBP, Isopeptag, BCCP, Myc-tag, 칼모둘린-tag, FLAG-tag, HA-tag, 말토우즈 결합 단백질-tag, Nus-tag, 글루타티온-S-트랜스퍼라제-tag, 녹색형광단백질-tag, 티오레독신-tag, S-tag, Softag 1, Softag 3, Strep-tag, SBP-tag, Ty-tag 등의 최소 하나의 첨가에 의해 변형될 수 있다.
이소프레노이드 트랜스퍼라제는 이소기질(isosubstrate) 및/또는 기질을 인식한다. 용어 이소기질은 화학적 변형을 포함하는 기질 아날로그를 말한다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 항체의 C-말단에서 특정 아미노산 모티프(예를 들어 CAAX 모티프)를 알킬화시킬 수 있다 (예컨대 Duckworth, BP et al., ChemBioChem, 8:98 (2007); Uyen TT et al., ChemBioChem, 8:408 (2007); Labadie, GR et al., J. Org. Chem., 72(24):9291 (2007); Wollack, JW et al., ChemBioChem, 10:2934 (2009) 참고, 각각은 전체적으로, 본 명세서에 참고문헌으로 포함되어 있다). 기능화된 항체는 C-말단 시스테인을 알킬화시킬 수 있는, 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소기질을 사용하여 생성될 수 있다.
이소기질은, 예를 들어 다음 화학식 IV를 갖는 화합물일 수 있다:
Figure pct00054
(IV)
C-말단 CAAX 모티프의 시스테인은 이소프레노이드 트랜스퍼라제를 사용하여 이소기질과 결합될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 모티프의 일부, 예를 들어 AAX는, 프로테아제에 의해, 예를 들어 이소프레노이드가 결합된 시스테인만을 남기고 순차적으로 제거될 수 있다. 시스테인은 예를 들어 효소에 의해 카복실 말단에서 임의로 메틸화될 수 있다 (예를 들어 Bell, IM, J. Med. Chem., 47(8):1869 (2004) 참조, 전체적으로, 본 명세서에 참고문헌으로 포함되어 있다).
L 및/또는 링커는 1, 3-쌍극 부가환화 반응(dipolar cycloaddition reaction), 헤테로-디엘스-엘더 반응(hetero-Diels-Alder reaction), 친핵성 치환 반응(nucleophilic substitution reaction), 비-알돌형 카보닐 반응(non-aldol type carbonyl reaction), 탄소-탄소 다중 결합에의 첨가(addition to carbon-carbon multiple bond), 산화 반응(oxidation reaction) 또는 클릭 반응(click reaction)에 의하여 형성된 결합 유닛을 포함할 수 있다. 결합 유닛은 아세틸렌과 아자이드와의 반응, 또는 비-알돌 형 카보닐 반응, 예컨대 알데하이드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 알콕시아민과의 반응으로 형성될 수 있으며; 이러한 결합 유닛은 하기 화학식 (A), (B), (C) 또는 (D)로 표시될 수 있다.
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
(A) (B) (C) (D)
L1은 단일결합 또는 1 내지 30개, 바람직하게는 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 탄소원자를 갖는 알킬렌이고;
R11은 수소 또는 1 내지 10개의 탄소원자를 갖는 알킬이고, 바람직하게는 메틸이며; 그리고
L2는 1 내지 30개, 예를 들어 10 , 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 탄소원자를 갖는 알킬렌이다.
몇몇의 구체예에서, L1 및/또는 L2는 식 (III)으로 나타낼 수 있는 적어도 하나 이상의 이소프레닐 유닛, 바람직하게는 2개의 이소프레닐 유닛을 포함할 수 있다. L2는 식 (III)으로 나타낼 수 있는 적어도 하나 이상의 이소프레닐 유닛, 바람직하게는 2개의 이소프레닐 유닛으로 구성된다. 바람직한 구체예에서, 이소프레닐 유닛의 탄소 원자는 항체의 시스테인의 황 원자와 함께 티오에테르 결합을 형성하며, 바람직하게는 중쇄 또는 경쇄의 C-말단에서, 항체 및 링커를 공유결합으로 연결시킨다.
Figure pct00059
(III)
항체-약물 접합체는 상기 화학식 (D)에 의해 나타내지는 결합 유닛(binding unit)을 포함할 수 있고, 여기에서 L2는 적어도 하나 이상의 이소프레닐 유닛, 바람직하게는 2개의 이소프레닐 유닛으로 구성된다. 결합 유닛은 O-치환된 옥심일 수 있으며, 즉 결합 유닛의 질소는 치환된 산소에 공유결합될 수 있다. 이소프레닐 유닛의 탄소 원자는 항체의 시스테인의 황 원자와, 가장 바람직하게는 중쇄 또는 경쇄의 C-말단에서 티오에테르 결합을 형성할 수 있고, 그 결과로 결합 유닛과 항체를 공유결합으로 연결시킨다.
L 및/또는 링커는 다음에 의해 나타내지는 이소프레닐 그룹을 포함할 수 있다:
Figure pct00060
또는
Figure pct00061
, 예를 들어 여기에서 이소프레닐 그룹의 탄소 원자는 항체의 시스테인의 황 원자와 함께 티오에테르 결합을 형성하고, 그럼으로써 이소프레닐 그룹과 항체를 공유결합으로 연결시킨다. 이소프레닐 유닛의 질소는 이소프레닐 그룹을 L 및/또는 링커의 폴리에틸렌 글리콜 유닛에 공유결합으로 연결시킬 수 있다.
L 및/또는 링커는, 다음에 의해 나타내지는 이소프레닐 그룹을 포함할 수 있다:
Figure pct00062
또는
Figure pct00063
, 예를 들어, 여기에서 이소프레닐 그룹의 탄소 원자는 항체의 시스테인의 황 원자와 함께 티오에테르 결합을 형성하고, 그럼으로써 이소프레닐 그룹과 항체를 공유결합으로 연결시킨다. 이소프레닐 유닛의 질소는 이소프레닐 그룹을 L 및/또는 링커의 폴리에틸렌 글리콜 유닛에 공유결합으로 연결시킬 수 있다.
클릭 화학 반응은 항체를 변형시키지 않고 항체의 존재 하에 수행될 수 있는, 온화한 조건 하에 수행될 수 있다. 클릭 화학 반응은 높은 반응 특이성을 나타낸다. 따라서 항체는 다양한 작용기 (예를 들어, 아민, 카복실, 카복사미드, 및 구아니디니움)을 가지고 있음에도 불구하고, 클릭 화학 반응은, 예를 들어, 항체의 아미노산 측쇄에 영향을 주지 않으면서 수행될 수 있다. 아자이드기 및 아세틸렌기 사이의 클릭 화학 반응은 항체의 아미노산 측쇄 작용기를 변형시키지 않고 항체의 존재 하에 일어날 수 있다. 일부 경우, 반응물은 전체 반응 효율을 향상시키도록 선택된다. 예를 들어, 아자이드-아세틸렌 클릭 화학 반응은 높은 수율로 트리아졸을 생성할 수 있다 (예를 들어 Hia, RK et al., Chem. Rev., 109:5620 (2009); Meldal, M & Tornoe, CW, Chem Rev., 108:2952 (2008); Kolb, HC et al., Angew. Chemie Int. Ed. Engl., 40:2004 (2001) 참조, 각각은 참고문헌으로서 본 명세서에 삽입됨).
아자이드 및 아세틸렌 관능기는 천연 단백질에는 존재하지 않는다. 따라서 아미노산 측쇄, N-말단 아민, 또는 C-말단 카복실 중 어느 것도 이들 작용기를 이용하는 클릭 화학 반응에 의해 영향을 받지 않아야 한다.
식 I의 L 모이어티 및/또는 링커는 추가적으로 -(CH2)r(V(CH2)p)q- 또는 -(CH2CH2X)w-에 의해 나타내지는 연결 유닛을 포함할 수 있으며, 여기에서
V는 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, 또는 -SO2NR25-이고, 바람직하게는 -O-이며;
X는 -O-, (C1-C8)알킬렌, 또는 -NR21-이고, 바람직하게는 -O-이며;
R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴, 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴이고, 바람직하게는 수소이며;
r은 1 내지 10의 정수이고, 바람직하게는 2 또는 3이며;
p는 0 내지 12의 정수이고, 바람직하게는 1 또는 2이며;
q는 1 내지 20의 정수이고,
w는 1 내지 20의 정수이며, 바람직하게는 4 내지 20이다.
L 및/또는 링커는, 식 (A), (B), (C) 또는 (D)에 의해 나타내지는 결합 유닛 및 -(CH2)r(V(CH2)p)q- 또는 -(CH2CH2X)w-에 의해 나타내지는 연결 유닛을 포함할 수 있다.
바람직한 구체예에서, L 및/또는 링커는
Figure pct00064
또는
Figure pct00065
로 나타내지는 적어도 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 포함한다. 항체-약물 접합체는 1 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛, 예를 들어 1 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛, 5 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛, 6 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛, 5 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛 또는 6 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함할 수 있다. 구체예들에서 L 및/또는 링커는 옥심을 포함하고, 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 바람직하게는 옥심을 펩타이드, 예를 들어 펩타이드의 N-말단, 펩타이드의 C-말단 또는 펩타이드의 측쇄에 공유결합으로 연결시킨다.
L 및/또는 링커는, 바람직하게는 -(CH2CH2O)n-로 나타내지는 폴리에틸렌 글리콜 그룹을 포함하며, 여기에서 n은 1 내지 20, 예를 들어 1 내지 12, 5 내지 12, 6 내지 12, 5 내지 20, 또는 6 내지 20개이다. 구체예들에서, L 및/또는 링커는 옥심을 포함하고, 폴리에틸렌 글리콜 그룹은 바람직하게는 옥심을 펩타이드에 공유결합으로 연결시킨다.
몇몇의 구체예에서, L 및/또는 링커는 바람직하게는 다음의 두 구조 중 하나를 포함한다:
Figure pct00066
Figure pct00067
여기에서 n은 1 내지 20, 예를 들어 4 내지 20의 정수이다.
L 및/또는 링커는
Figure pct00068
,
Figure pct00069
, 또는
Figure pct00070
를 포함할 수 있고, 여기에서
V는 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, 또는 -SO2NR25-를 나타내고, 바람직하게는 -O-이며;
R21내지 R25는 각각 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴, 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴을 나타내고;
r은 1 내지 10의 정수, 바람직하게는 2 또는 3이며;
p는 0 내지 10의 정수, 바람직하게는 1 또는 2이며;
q는 1 내지 20의 정수, 바람직하게는 1 내지 6의 정수이며; 그리고
L1은 단일 결합이다.
몇몇 구체예에서, 적어도 두 개의 활성제는 본 명세서에 개시된 선택적으로 절단 그룹, 예를 들어 원하는 위치 내 접합체로부터 활성제를 방출시킬 수 있는 절단 그룹을 선택적으로 포함하는 하나 이상의 링커를 통하여 아미노산의 측쇄에 공유 결합으로 연결된다. 링커의 일부 혹은 전부는 분지된 링커, 예를 들면 링커의 각각의 분지는 활성제(예를 들어 절단 그룹을 통하여 연결된) 내에서 종료되거나 링커의 하나 이상의 분지가 활성제(예를 들어 절단 그룹을 통하여 연결된) 내에서 종료된, 분지된 링커일 수 있고, 하나 이상의 나머지들은 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하며 활성제는 포함하지 않는다. 몇몇의 그러한 구체예에서, 각각의 분지된 링커는 적어도 두 개의 활성제에 연결되는데, 활성제들은 같거나 다를 수 있다. 몇몇의 구체예에서, 적어도 둘, 셋 또는 네 개의 분지된 링커는 펩타이드에 공유 결합으로 연결된다. 다른 구체에에서, 정확히 하나의 분지된 링커는 펩타이드에 연결된다.
분지된 링커는 분지된 링커는 분지 유닛(branching unit)을 포함하고, 각각의 활성제는 제2 (secondary) 링커를 통해 분지 유닛에 연결되며, 분지 유닛은 제1 링커에 의해 펩타이드와 연결된다.
분지 유닛은 어떤 적절한 구조, 예를 들면
Figure pct00071
,
Figure pct00072
,
Figure pct00073
또는
Figure pct00074
구조를 가질 수 있고, 여기서 L1,L2,L3 는 각각 독립적으로 직접 결합 또는 -CnH2n- 이고, n은 1 내지 30의 정수이며, G1,G2,G3는 각각 독립적으로 직접 결합 또는
Figure pct00075
,
Figure pct00076
,
Figure pct00077
또는
Figure pct00078
이고, R3는 수소 또는 C1-C30알킬이며; R4는 수소 또는 -L4-COOR5이고, 여기서 L4는 직접 결합 또는 -CnH2n-이고, n은 1 내지 10의 정수이며, R5는 수소 또는 C1-C30알킬이다.
제2 링커(예를 들면, 활성제를 펩타이드와 연결시키는 것)는 1,3-쌍극 부가환화 반응(dipolar cycloaddition reaction), 헤테로-디엘스-엘더 반응(hetero-Diels-Alder reaction), 친핵성 치환 반응(nucleophilic substitution reaction), 비-알돌형 카보닐 반응(non-aldol type carbonyl reaction), 탄소-탄소 다중 결합에의 첨가(addition to carbon-carbon multiple bond), 산화 반응(oxidation reaction) 또는 클릭 반응(click reaction)에 의해 형성된 결합 유닛(binding unit)을 포함할 수 있다. 결합 유닛은 아세틸렌 및 아자이드 사이의 반응에 의해 형성되거나, 알데하이드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 알콕시아민 사이의 반응과 같은 비-알돌형 카보닐 반응, 펩타이드에 활성제 및/또는 절단 그룹의 온화한 커플링을 허용하는 반응에 의해 형성된다. 그러한 결합 유닛은 식 (A), (B), (C) 또는 (D)로 나타낼 수 있고,
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
(A) (B) (C) (D)
여기서 L1은 단일 결합 또는 1 내지 30개, 바람직하게는 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌이고; R11은 수소 또는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 알킬, 바람직하게는 메틸이며; L2는 1 내지 30개, 바람직하게는 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식
Figure pct00083
(V)의 구조를 포함하고;
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식
Figure pct00084
(VI)의 구조를 포함하고;
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식
Figure pct00085
의 구조를 포함하고,
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00086
구조를 포함하고
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
B3는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L3는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00087
구조를 포함하고,
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B11는 제2 활성제를 나타내고;
B12는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 링커를 나타내고;
L2는 링커를 나타내며;
L11은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내고;
L12는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내며;
BU는 분지 유닛을 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00088
의 구조를 포함하고,
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00089
의 구조를 포함하고,
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B2는 제2 활성제를 나타내고;
B3는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
L3는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 접합체는 식
Figure pct00090
구조를 포함하고,
여기서,
A는 리간드를 나타내며;
P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
B1은 제1 활성제를 나타내며;
B11는 제2 활성제를 나타내고;
B12는 제3 활성제를 나타내며;
L1은 링커를 나타내고;
L2는 링커를 나타내며;
L11은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내고;
L12는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내며;
BU는 분지 유닛을 나타내고;
n은 1 내지 20의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식(VII) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 구조를 가지며,
Figure pct00091
(VII)
여기서, B는 활성제이고, mAB는 항체이며; R은 아미노산의 측쇄를 나타내며; J는 양성자(proton), 아실 그룹 또는 활성제를 포함하는 그룹을 나타내고; m은 0 내지 10의 정수이며; n은 0 내지 10의 정수이고; p는 0 내지 10의 정수이며; q는 1 내지 20의 정수, 바람직하게는 4 내지 20이고; r은 0 내지 10, 바람직하게는 1인 정수이다. 각각의 B는 같은 활성제일 수 있고, 각각의 B는 서로 다른 활성제일 수 있다. 유사하게, 각각의 R은 같은 아미노산 측쇄이거나 각각의 R은 서로 다른 아미노산 측쇄일 수 있다. 하나 이상의 R'는 하나 이상의 활성제와 펩타이드를 공유 결합으로 연결할 수 있다. 각각의 R은 L-아미노산 또는 D-아미노산의 R 그룹일 수 있다.
식 (VII)은 펩타이드의 각각의 아미노산이 α-아미노산인 것을 묘사한다. 그럼에도 불구하고, 펩타이드는 하나 이상의 β-아미노산을 포함할 수 있다. 구조는 각각의 연결 아미노산(linking amino acid)가 N-치환된 리신인 것을 보여준다. 그럼에도 불구하고, 항체-약물 접합체는 리신을 대신하거나 혹은 더하여 다른 연결 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서 J는 식 (VIII) 구조를 갖는 모이어티,
Figure pct00092
(VIII)를 포함하는데, 여기서 K는 식 (VIII)의 구조와 펩타이드의 N-치환된 아미드를 연결하는 단일 결합일 수 있고, 혹은 K는 -N(H)(CH2CH2O)k-이며 여기서 k는 1 내지 20, 바람직하게는 1 내지 10의 정수이다.
몇몇의 구체예에서, 항체-약물 접합체는 식 (IX)의 구조,
Figure pct00093
(IX)
를 가지며, 여기서 B는 활성제이고, mAB는 항체이며; R은 아미노산의 측쇄를 나타내며; J는 하이드록실, 아미드 그룹, 아민 또는 활성제를 포함하는 그룹을 나타내고; q는 0 내지 10의 정수, 바람직하게는 1이며; r은 0 내지 20, 바람직하게는 3 내지 20인 정수이고; s는 0 내지 10의 정수이며; t는 0 내지 10의 정수이고; v는 0 내지 10인 정수이다. 각각의 B는 같은 활성제일 수 있고, 각각의 B는 서로 다른 활성제일 수 있다. 유사하게, 각각의 R은 같은 아미노산 측쇄이거나 각각의 R은 서로 다른 아미노산 측쇄일 수 있다. 하나 이상의 R'는 하나 이상의 추가적인 활성제와 펩타이드를 공유 결합으로 연결할 수 있다. 각각의 R은 L-아미노산 또는 D-아미노산의 R 그룹일 수 있다.
식 (IX)은 펩타이드의 각각의 아미노산이 α-아미노산인 것을 묘사한다. 그럼에도 불구하고, 펩타이드는 하나 이상의 β-아미노산을 포함할 수 있다. 구조는 각각의 연결 아미노산(linking amino acid)가 N-치환된 리신인 것을 보여준다. 그럼에도 불구하고, 항체-약물 접합체는 리신을 대신하거나 혹은 더하여 다른 연결 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서 J는 식 (VIII) 구조를 갖는 모이어티,
Figure pct00094
(VIII)를 포함하는데, 여기서 K는 -N(H)(CH2CH2O)k(CH2)mN(H)-이며 여기서 k는 1 내지 20의 정수이고, m은 0 내지 5의 정수이다.
본 발명의 항체-약물 접합체는 분자생물학 및 세포생물학 방법을 포함하는, 당 기술분야에 알려진 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어 일시적 또는 영구적 주입법(transient or stable transfection)이 사용될 수 있다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식될 수 있는 특정 아미노산 모티프를 코딩하는 유전자 서열을 표준 PCR 및/또는 라이게이션 기술을 사용하여 공지된 플라스미드 벡터에 삽입하여 C-말단에 특정 아미노산 모티프를 갖는 항체를 발현할 수 있다. 따라서 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식될 수 있는 최소 하나 이상의 아미노산 모티프를 갖는 항체는 적절한 호스트, 예를 들어 CHO 세포 또는 대장균(E. coli)에서 발현될 수 있다.
용어 "항체"는 면역 글로불린 분자의 가변영역 내에서 적어도 하나의 항원인식부위를 통해 다른 분자를 인식하여 특이적으로 결합하는 면역글로쿨린 분자를 말한다. 본 명세서에서 사용된, 용어 "항체"는 온전한(intact) 폴리클로날 항체, 온전한 모노클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 및 Fv 단편), 단쇄 Fv (scFv) 뮤턴트, 다중특이적 항체, 예컨대 2개 이상의 온전한 항체로부터 생성된 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원결정부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원인식부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로 지칭되는 이의 중쇄 불변 도메인의 종류(identity)에 기초하여 5종의 메인 면역글로불린 클래스 중 임의의 것: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 또는 이의 서브클래스(이소타입)일 수 있다(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2). 다른 종류의 면역글로불린은 서로 다른 잘 알려진 서브유닛 구조 및 3차원 구조를 가지고 있다. 용어 "항체"는 면역글로불린 서열과 호몰로지(homology)를 공유하지 않는 분자를 나타내지 않는다. 예를 들어 본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 "리피바디(repebodies)"를 포함하지 않는다.
용어 "항체 단편"은 온전한 항체의 부분을 말하며, 온전한 항체의 항원결정 가변영역을 나타낸다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab′, F(ab′)2, Fd, 및 Fv 단편, 선형 항체, 단쇄 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
용어 "모노클로날 항체"는 단일 항원 결정기 또는 에피토프에 고도로 특이적으로 인식하여 결합하는, 균질한 항체 집단을 말한다. 이는 전형적으로 다양한 상이한 항원 결정기에 대한 다른 항체를 포함하는 폴리클로날 항체와는 대조적이다. 용어 "모노클로날 항체"는 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab′, F(ab′)2, Fd, 및 Fv), 단쇄 (scFv) 뮤턴트, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원인식부위뿐만 아니라 온전한 전장 모노클로날 항체 모두를 포함하는 임의의 기타 변형된 면역글로불린 분자를 포함하나 이로 한정되는 것은 아니다. 또한, "모노클로날 항체"는 하이브리도마, 파지 셀렉션, 재조합 발현 및 형질전환 동물을 포함하나 이로 제한되지는 않는, 임의의 수의 방법으로 제조된 항체를 말한다.
용어 "인간화 항체"는 최소의 비-인간 (예컨대 쥐) 서열을 포함하는 특정 면역글로불린 쇄, 키메라 면역글로불린, 또는 이들의 단편인 비-인간 (예컨대 쥐) 항체의 형태를 말한다. 일반적으로, 인간화 항체는 상보적 결정 영역(CDR)이 원하는 특이성, 친화도 및 결합능(capability)을 갖는 비-인간 종(예컨대 쥐, 랫트, 토끼 및 햄스터)의 CDR로부터의 잔기로 치환된 인간 면역글로불린이다 (예컨대 Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988) 참고). 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FR) 잔기는 원하는 특이성, 친화도 및 결합능을 갖는 비-인간 종으로부터의 항체의 상응하는 잔기로 대체된다. 인간화 항체는 항체 특이성, 친화도 및/또는 결합능을 개선 및 최적화하기 위하여 Fv 프레임워크 영역 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내에 추가 잔기를 치환함으로써 더욱 변형될 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 면역글로불린에 상응하는 CDR의 전부 또는 실질적으로 전부를 함유하는 적어도 하나의, 전형적으로는 2 또는 3개의 가변 도메인을 실질적으로 포함하는 반면, 전체 또는실질적으로 모든 프레임워크 영역(FR) 인간 면역글로불린 컨센서스 서열을 가지고 있다. 인간화 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 일부를 포함할 수 있다. 인간화 항체를 생성시키는데 사용되는 방법 예시는 미국특허 제5,225,539에 기재되어 있으며, 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "인간 항체"는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 인간에 의해 제조된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 인간 뉴클레오타이드 서열 또는 항체에 의해 코딩되는 항체를 말한다. 인간 항체의 이러한 정의는 전장 항체(full-length antibodies) 및/또는 그의 단편을 포함한다.
용어 "키메라 항체"는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 2 이상의 종으로부터 유래된 항체를 말하며, 그 중 하나는 인간인 것이 바람직하다. 일반적으로 경쇄 및 중쇄의 가변영역은 원하는 특이성, 친화도 및 결합능을 갖는 한 종의 포유류 (예를 들어, 마우스, 랫트, 토끼 등)로부터 유래된 항체의 가변영역에 상응하며, 불변영역은 예를 들어 상기 종에서 면역반응이 유도되는 것을 피하기 위해 다른 종 (보통 인간)으로부터 유래된 항체의 서열과 상동성이 있다.
용어 "에피토프" 및 "항원 결정기"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 특정 항체에 의해 인식되고 특이적으로 결합될 수 있는 항원 부분을 지칭한다. 항원이 폴리펩타이드 또는 단백질이거나 이를 포함할 때, 에피토프는 예를 들어 단백질의 2차, 3차 및/또는 4차 폴딩에 의해 병치된(juxtaposed), 인접(contiguous) 및/또는 비-인접한 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 단백질 변성 시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 단백질 변성시 소실될 수 있다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간 형태(unique spatial conformation)의 3개 이상, 5개 이상, 또는 8 내지 10개 이상의 아미노산을 포함한다.
항체가 에피토프 또는 항원 분자에 "특이적으로 결합한다"는 것은 항체가 관련 없는 단백질을 포함하는 대체 물질보다 에피토프 또는 항원 분자에 보다 빈번하게, 더욱 신속하게, 보다 긴 시간동안, 더 큰 친화도를 갖고, 또는 전술한 것들의 일부 조합한 특성을 가지고 상호반응 또는 결합하는 것(interact or associate)을 의미한다. 몇몇 구체예에서, "특이적으로 결합한다"는 것은 예를 들어 항체가 약 0.1 mM 이하, 보다 일반적으로 약 1 μM 미만의 KD로 단백질에 결합하는 것을 의미한다. 특정 구체예에서, "특이적으로 결합한다"는 것은 항체가 약 0.1 μM 이하의 KD로, 다른 때에는 약 0.01 μM 이하의 KD로 단백질에 결합하는 것을 의미한다. 서로 다른 종에서 동종 단백질(homologous proteins) 간의 서열 상동성 때문에, 특이적 결합은 하나 이상의 종에서 특정 단백질을 인식하는 항체를 포함할 수 있다. 제1 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 잔기는 제2 표적에 특이적으로 결합할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있음이 이해된다. 전술한 바와 같이 "특이적 결합"은 배타적 결합, 즉 단일 표적에 대한 결합을 (포함할 수는 있지만) 반드시 필요로 하지는 않는다. 일반적으로, 반드시 그런 것은 아니지만, 본 명세서에서 사용된 용어 결합은 특이적 결합을 의미한다.
상기 단편/유도체 및 모노클로날 항체를 포함하는 항체는 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 수득할 수 있다 (McCafferty et al., Nature 348 : 552-554 (1990); Clackson et al., Nature 352 : 624 Marks et al., J. Mol. Biol., 222 : 581-597 (1991), Marks et al., Bio / Technology 10 : 779-783 (1992), Waterhouse et al., Nucleic Acids Res. 21 : 2265-2266 (1993); Morimoto 등, J Biochemical & Biophysical Methods 24 : 107-117 (1992), Brennan 등, Science 229 : 81 (1985), Carter et al., Bio / Technology 10 : Kilpatrick et al., Hybridoma 16 (4) : 381-389 (1997), Wring et al., J. Pharm. Biomed. Anal., 163-167 (1992), Kohler et al., Nature 256 : 495 (1975) Bynum et al., Hybridoma 18 (5) : 407-411 (1999), Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 : 2551 (1999)], 19 (5) : 695-707 Barbus et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91 : 517-536), Jakobovits et al., Nature, 362 : 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year Immuno. 7:33 (1993) 3809-3813 (1994); Schier et al., Gene 169 : 147-155 (1995), Yelton et al., J. Immunol. 155 : 1994-2004 (1995); Jackson. et al., J. Immunol. 154 (7) : 3310-9 (1995); Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226 : 889-896 (1992), 미국특허 제4,816,567호, 제5,514,548호, 제5,545,806호, 제5,569,825호, 제5,591,669호, 제5,545,807호; PCT 특허출원공보 WO97/17852 참조, 이들 모두는 본 명세서에서 전체적으로 참조로 인용된다.)]
항체는 뮤로모납-CD3 아브식시맙(muromonab-CD3 abciximab), 리툭시맙(rituximab), 다클리주맙(daclizumab), 팔리비주맙(palivizumab), 인플릭시맙(infliximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 에타너셉트(etanercept), 바실릭시맙(basiliximab), 젬투주맙(gemtuzumab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 이브리투모맙(ibritumomab), 아달리무맙(adalimumab), 알레파셉트(alefacept), 오말리주맙(omalizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 토시투모맙(tositumomab), 세툭시맙(cetuximab), ABT-806, 베바시주맙(bevacizumab), 나탈리주맙(natalizumab), 라니비주맙(ranibizumab), 파니투무맙(panitumumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 릴로나셉트(rilonacept), 세르톨리주맙(certolizumab), 로미플로스팀(romiplostim), AMG-531, 골리무맙(golimumab), 우스테키누맙(ustekinumab), ABT-874, 베라타셉트(belatacept), 벨리무맙(belimumab), 아타시셉트(atacicept), 항-CD20 항체, 카나키누맙(canakinumab), 토실리주맙(tocilizumab), 아틀리주맙(atlizumab), 메폴리주맙(mepolizumab), 페르투주맙(pertuzumab), 휴맥스 CD20(HuMax CD20), 트레멜리무맙(tremelimumab), 티실리무맙(ticilimumab), 이필리무맙(ipilimumab), IDEC-114, 이노투주맙(inotuzumab), 휴맥스 EGFR(HuMax EGFR), 아플리베르셉트(aflibercept), 휴맥스-CD4(HuMax-CD4), 테플리주맙(teplizumab), 오텔릭시주맙(otelixizumab), 카투막소맙(catumaxomab), 항-EpCAM 항체 IGN101(anti-EpCAM antibody IGN101), 아데카투모맙(adecatumomab), 오레고보맙(oregovomab), 디누툭시맙(dinutuximab), 지렌툭시맙(girentuximab), 데노수맙(denosumab), 바피네우주맙(bapineuzumab), 모타비주맙(motavizumab), 에품구맙(efumgumab), 락시바쿠맙(raxibacumab), 항-CD20 항체, 항-CD20 항체, LY2469298 및 벨투주맙(veltuzumab)일 수 있다.
항체가 적어도 하나의 경쇄 및 적어도 하나의 중쇄를 포함하는 경우, 항체의 적어도 하나의 경쇄, 또는 항체의 적어도 하나의 중쇄, 또는 이들 둘 다는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의해 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖는 아미노산 영역을 포함할 수 있다. 항체는 4개의 폴리펩타이드 쇄(예컨대 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄)를 포함할 수 있으므로, 항체는 4개의 아미노산 모티프(이들 각각은 링커를 거쳐 항체에 활성제를 접합시키는데 사용)를 포함할 수 있다. 따라서, 항체-약물 접합체는 4개의 링커를 포함하며, 각각은 적어도 하나의 활성제에 접합된다. 따라서, 항체-약물 접합체는 적어도 하나의 링커 및 적어도 두 개의 활성제를 포함할 수 있다. 항체-약물 접합체는 적어도 두 개의 링커를 포함할 수 있고, 항체-약물 접합체는 적어도 세 개의 활성제를 포함할 수 있다. 항체-약물 접합체는 1, 2, 3 또는 4개의 링커를 포함할 수 있다. 항체-약물 접합체는 1, 2, 3 또는 4개의 펩타이드를 포함할 수 있다. 항체-약물 접합체는 2 내지 100개의 접합체, 예를 들면 2 내지 50개의 접합체, 2 내지 20개의 접합체, 2 내지 16개의 접합체, 4 내지 16개의 접합체 또는 4 내지 8개의 접합체를 포함할 수 있다.
활성제는 약물, 톡신, 친화성 리간드(affinity ligand), 검출 프로브(detection probe) 또는 이들 중 임의의 것의 조합일 수 있다.
활성제는 얼로티닙(erlotinib); 보르테조밉(bortezomib); 풀베스트란트(fulvestrant); 수텐트(sutent); 레트로졸(letrozole); 이마티닙 메실레이트(imatinib mesylate); PTK787/ZK 222584; 옥살리플라틴(oxaliplatin); 5-플루오로우라실(5-fluorouracil); 루코보린(leucovorin); 라파마이신(rapamycin); 라파티닙(lapatinib); 로나파르닙(lonafarnib); 소라페닙(sorafenib); 제피티닙(gefitinib); AG1478; AG1571; 알킬화제 (예를 들어 티오테파(thiotepa), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)); 알킬 설포네이트 (예를 들어, 부술판(busulfan), 임프로술판(improsulfan), 피포술판(piposulfan)); 아지리딘 (예를 들어, 벤조도파(benzodopa), 카보콘(carboquone), 메투레도마(meturedopa), 우레도파(uredopa)); 에틸렌이민(ethylenimine), 메틸멜라민(methylmelamine), 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민(triethylenemelamine), 트리에틸렌포스포라미드(triethylenephosphoramide), 트리에틸렌티오포스포라미드(triethylenethiophosphoramide), 트리메틸올멜라민(trimethylolomelamine); 아세토제닌(acetogenins) (예를 들어, 불라타신(bullatacin) 또는 불라타시논(bullatacinone)); 캄토테신(camptothecin) 및 캄토테신 유도체 및 대사체 (SN-38); 토포테칸(topotecan); 브리오스타틴(bryostatin); 칼리스타틴(callystatin); CC-1065 (이의 아도제레신(adozelesin), 카르제레신(carzelesin), 또는 비제레신 합성 아날로그(bizelesin synthetic analogs)를 포함); 크립토피신(cryptophycins) (예를 들어, 크립토피신 1(cryptophycin 1) 또는 크립토피신 8(cryptophycin 8)); 돌라스타틴(dolastatin); 두오카마이신(duocarmycin) (예컨대 KW-2189 및 CB1-TM1와 같은 합성 아날로그 포함); 엘로테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴(pancratistatin); 사르코딕티인(sarcodictyin); 스폰지스타틴(spongistatin); 질소 머스타드(nitrogen mustard) (예를 들어, 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 클로로포스파미드(chlorophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스파미드(ifosfamide), 메클로레타민(mechlorethamine), 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드(mechlorethamine oxide hydrochloride), 멜팔란(melphalan), 노벰비킨(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide), 또는 우라실 머스타드(uracil mustard)); 니트로스우레아(nitrousurea) (예를 들어, 카르무스틴(carmustine), 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine), 또는 라님누스틴(ranimnustine)); 항생제(antibiotics) (예를 들어, 칼리케마이신 감마 II(calicheamicin gamma 1I) 및 칼리케마이신 오메가 II(calicheamicin omega 1I)에서 선택되는 칼리케마이신(calicheamicin) 또는 다이네마이신 A(dynemicin A)를 포함하는 다이네마이신과 같은 에네디인 항생제(enediyne antibiotics)); 비스포스포네이트(bisphosphonate) (예를 들어, 클로드로네이트(clodronate); 에스페라마이신(esperamicin), 네오카르지노스타틴 크로모포어(neocarzinostatin chromophore), 또는 관련 크로모단백질 에네디인 항생제 크로모포어(related chromoprotein enediyne antibiotic chromophores), 아클라시노마이신(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 안트라마이신(anthramycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신(bleomycins), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카르니노마이신(carninomycin), 카르지노필린(carzinophilin), 크로모마이신(chromomycins), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데토루부신(detorubucin), 6-디아조-5-옥소-L-노르루신(6-diazo-5-oxo-L-norleucine), 독소루비신(doxorubicin) (예를 들어, 모르폴리노-독소루비신(morpholino-doxorubicin), 시아노모르폴리노-독소루비신(cyanomorpholino-doxorubicin), 2-피롤리노-독소루비신(2-pyrrolino-doxorubucin), 리포소말 독소루비신(liposomal doxorubicin), 또는 데옥시독소루비신(deoxydoxorubicin)), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 마르셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신(mitomycins) (예를 들어, 미토마이신 C(mitomycin C), 미코페놀릭 산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycins), 페플로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 푸로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토미그린(streptomigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 또는 조루비신(zorubicin)); 항-대사제(anti-metabolites) (예를 들어, 5-플루오로우라실(5-fluorouracil)); 폴산 아날로그(folic acid analogs) (예를 들어, 데놉테린(denopterin), 메토트렉세이트(methotrexate), 프테로프테린(pteropterin), 또한 트리메트렉세이트(trimetrexate)); 푸린 아날로그(purine analogs) (예를 들어, 플루다라빈(fludarabine), 6-머캅토퓨린(6-mercaptopurine), 티아미프린(thiamiprine), 또는 티구아닌(thiguanine)); 피리미딘 아날로그(pyrimidine analogs) (예를 들어, 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(6-azauridine), 카르모푸르(carmofur), 시타라빈(cytarabine), 디데옥시우리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 또는 플록수리딘(floxuridine)); 안드로젠(androgens) (예를 들어, 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate), 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 또는 테스토락톤(testolactone)); 항-아드레날(anti-adrenals) (예를 들어, 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 미토탄(mitotane), 또 트릴로스탄(trilostane)); 폴산 레플레니서(folic acid replenisher) (예를 들어, 폴린산(folinic acid)); 아세글라톤(aceglatone); 알도포스파미드 글리코시드(aldophosphamide glycoside); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 에닐우라닐(eniluracil); 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 비산트렌(bisantrene); 에다트락세이트(edatraxate); 데포파민(defofamine); 데메콜신(demecolcine); 디아지쿠온(diaziquone); 엘포르니틴(elfornithine); 엘립티늄 아세테이트(elliptinium acetate); 에포틸론(epothilone); 에토글루시드(etoglucid); 갈륨 니트레이트(gallium nitrate); 하이드록시우레아(hydroxyurea); 렌티난(lentinan); 로니다이닌(lonidainine); 메이탄시노이드(maytansinoids) (예를 들어, 메이탄신(maytansine) 또는 안사미토신(ansamitocins)); 트리코테신(trichothecenes) (특히 T-2 톡신, 베라쿠린 A(verracurin A), 로리딘 A(roridin A), 또는 안구이딘(anguidine)); 미토구아존(mitoguazone); 미토산트론(mitoxantrone); 모피단몰(mopidanmol); 니트라에린(nitraerine); 펜토스타틴(pentostatin); 페나메트(phenamet); 피라루비신(pirarubicin); 로속산트론(losoxantrone); 2-에틸하이드라자이드(2-ethylhydrazide); 프로카르바진(procarbazine); 폴리사카라이드 K 복합체(polysaccharide K complex); 라족산(razoxane); 리족신(rhizoxin); 시조피란(sizofiran); 스피로게르마늄(spirogermanium); 테누아존산(tenuazonic acid); 트리아지쿠온(triaziquone); 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민(2,2',2"-trichlorotriethylamine); 트리코테신(trichothecenes) (특히, T-2 톡신, 베라쿠린 A(verracurin A), 로리딘 A(roridin A), 및 안구이딘(anguidine)); 우레탄(urethane); 빈데신(vindesine); 다카르바진(dacarbazine); 만노무스틴(mannomustine); 미토브로니톨(mitobronitol); 미토락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가시토신(gacytosine); 아라비노사이드(arabinoside); 사이클로포스파미드(cyclophosphamide); 티오테파(thiotepa); 탁소이드(taxoids) (예를 들어, 파클리탁셀(paclitaxel)), 파클리탁셀의 아브락산TM 크레모포르-프리 알부민 엔지니어드 나노파티클 제형(ABRAXANETM cremophor-free, albumin-engineered nanoparticle formulation of paclitaxel), 도세탁셀(doxetaxel); 클로람부실(chlorambucil); 젬시타빈(gemcitabine); 6-티오구아닌(6-thioguanine); 머캅토퓨린(mercaptopurine); 플라티늄 아날로그(예를 들어, 시스플라틴(cisplatin), 또는 카르보플라틴(carboplatin)); 빈블라스틴(vinblastine); 백금(platinum); 에토포시드(etoposide); 이포스파미드(ifosfamide); 미토잔트론(mitoxantrone); 빈크리스틴(vincristine); 비노렐빈(vinorelbine); 노반트론(novantrone); 테니포시드(teniposide); 에다트렉세이트(edatrexate); 다우노마이신(daunomycin); 아미놉테린(aminopterin); 젤로다(xeloda); 이반드로네이트(ibandronate); CPT-11; 토포이소머라아제 저해제 (topoisomerase inhibitor) (RFS 2000); 디플루오로메틸로니틴(difluoromethylornithine); 레티노이드(retinoid) (예를 들어, 레틴산(retinoic acid)); 카페시타빈(capecitabine) 및 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 산 또는 유도체, 그러나 반드시 이로 한정되는 것은 아니다.
활성제는 (i) 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜을 포함하는 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제와 같은, 종양에서 호르몬 액션을 조절하거나 저해하는, 항-호르몬제; (ii) 예를 들어, 4(5)-이미다졸(4(5)-imidazoles), 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 메게스트롤 아세테이트(megestrol acetate), 엑세메스탄(exemestane), 레트로졸(letrozole) 및 아나스트로졸(anastrozole)과 같은, 부신(adrenal gland)에서 에스트로겐 생성을 조절하는, 아로마타아제 효소를 저해하는, 아로마타아제 저해제; (iii) 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide), 비칼루타미드(bicalutamide), 루프롤리드(leuprolide), 및 고세렐린(goserelin)과 같은 항-안드로젠; 뿐만 아니라 트록사시타빈(troxacitabine) (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 아날로그(1,3-dioxolane nucleoside cytosine analog)); (iv) 아로마타아제 저해제; (v) 단백질 키나아제 저해제; (vi) 리피드 키나아제 저해제; (vii) 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 부착세포(adherent cells)에 관련된 신호전달경로에서 유전자의 발현을 저해하는 것들, 예를 들어 PKC-알파, Raf, H-Ras; (viii) 리보자임, 예를 들어 리보자임 및 HER2 발현 저해제와 같은 VEGF 저해제; (ix) 백신, 예컨대 유전자 치료 백신; 알로벡틴(ALLOVECTINㄾ) 백신, 류벡틴(LEUVECTIN) 백신, 백시드(VAXID) 백신; 프로류킨(PROLEUKINㄾ)rlL-2; 룰르토테칸(LURTOTECAN)ㄾ 토포아이소머라아제 1 저해제(topoisomerase 1 inhibitor); 아브레릭스(ABARELIX)ㄾ rmRH; (x) 베바시주맙(Bevacizumab)과 같은 항-신생혈관제; 및 (xi) 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화제, 산 또는 유도체에서 선택될 수 있다.
또한, 사이토카인이 활성제로서 사용될 수 있다. 사이토카인은 수많은 세포에서 분비되는 작은 세포신호 단백질 분자로, 세포간 커뮤니케이션(intercellular communication)에 광범위하게 사용되는 신호분자의 한 카테고리이다. 사이토카인에는 모노카인, 림포카인, 전형적인 폴리펩타이드 호르몬 등이 포함된다. 사이토카인의 예로는 성장호르몬(예를 들어, 인간 성장호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 또는 소 성장호르몬); 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린, 프로인슐린, 릴랙신(relaxin); 프로릴랙신; 당단백 호르몬(glycoprotein hormone)(예를 들어, 여포자극호르몬(follicle stimulating hormone, FSH), 갑상선자극호르몬(thyroid stimulating hormone, TSH), 황체형성호르몬(luteinizing hormone, LH)); 간성장인자(hepatic growth factor); 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor); 프롤락틴; 태반 락토젠(lacental lactogen); 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor-α), 종양괴사인자-β(tumor necrosis factor-β); 뮐러-억제 물질(mullerian-inhibiting substance); 쥐 고나도트로핀-연관 펩타이드(mouse gonadotropin-associated peptide); 인히빈(inhibin); 액티빈(activin); 혈관내피성장인자(vascular endothelial growth factor); 인테그린(integrin), 트롬보포이에틴(thrombopoietin, TPO); 신경성장인자(nerve growth factor, (예를 들어 NGF-β)); 혈소판-성장인자(platelet-growth factor); 형질전환생장인자(transforming growth factor, TGF) (예를 들어, TGF-α 또는 TGF-β)); 인슐린-유사 성장인자-I(insulin-like growth factor-I), 인슐린-유사 성장인자-II(insulin-like growth factor-II); 에리스로포이에틴(erythropoietin, EPO); 골유도인자(osteoinductive factor); 인터페론(interferon) (예를 들어, 인터페론-α, 인터페론-β, 또는 인터페론-γ); 콜로니촉진인자(colony stimulating factor, CSF) (예를 들어, 마크로파지-CSF (M-CSF), 과립구-마크로파지-CSF(granulocyte-macrophage-CSF, GM-CSF), 또는 과립구-CSF(granulocyte-CSF, G-CSF)); 인터루킨(interleukin) (IL) (예를 들어, IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, 또는IL-12); 종양괴사인자(tumor necrosis factor, TNF) (예를 들어, TNF-α 또는 TNF-β); 및 폴리펩타이드 인자(polypeptide factor) (예를 들어, LIF 또는 키트 리간드)를 포함한, 이로 한정되는 것은 아니다. 또한 용어 "사이토카인"은 천연 소스 또는 재조합 세포 배양물로부터의 사이토카인 및 네이티브 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.
용어 "톡신"은 살아있는 세포 또는 기관(organism)에 독성이 있는 물질을 말한다. 톡신은 예를 들어 효소 또는 세포 수용체와 같은 하나 이상의 생물학적 거대분자와의 상호작용을 통해 신체 조직과 접촉하거나 신체조직에 흡수된 후 세포 기능장애 또는 세포 사멸을 일으킬 수 있는 화합물(small molecules), 펩타이드 또는 단백질일 수 있다. 톡신은 식물 톡신 및 동물 톡신을 포함한다. 동물 톡신의 예로는 디프테리아 톡신, 보툴리눔 톡신, 테타누스 톡신, 이질 톡신, 콜레라 톡신, 테트로도톡신, 브레베톡신 및 시구아톡신을 포함하나, 이로 한정되지 않는다. 식물 톡신의 예로는 리신(ricin) 및 AM-톡신을 포함하나, 이로 한정되지 않는다.
화합물 톡신의 예로는 아우리스타틴 (auristatin), 튜불리신(tubulysin), 젤다나마이신(geldanamycin) (Kerr et al., 1997, Bioconjugate Chem. 8(6):781-784), 메이탄시노이드(maytansinoid) (EP 1391213, ACR 2008, 41, 98-107), 칼리케마이신(calicheamicin) (U.S. Patent Publication No. 2009/0105461, Cancer Res. 1993, 53, 3336-3342), 다우노마이신(daunomycin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 빈데신(vindesine), SG2285 (Cancer Res. 2010, 70(17), 6849-6858), 돌라스타틴(dolastatin), 돌라스타틴 아날로그 아우리스타틴(dolastatin analogs auristatin) (U.S. Patent No. 5,635,483), 크립토피신(cryptophycin), 캄토테신(camptothecin), 리족신 유도체(rhizoxin derivative), CC 1065 아날로그 또는 유도체, 듀오카마이신(duocarmycin), 에네디인 항생제(enediyne antibiotic), 에스페라마이신(esperamicin), 에포틸론(epothilone), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine, PBD) 유도체, α-아마니틴(α-amanitin), 및 톡소이드를 포함하나, 이로 한정되지 않는다. 톡신은 튜불린 결합, DNA 결합, 토포아이소머라아제 억제 등에 의해 세포독성 및 세포 성장-저해 활성을 나타낼 수 있다.
용어 "리간드"는 표적 생체분자와 복합체를 형성할 수 있는 분자를 말한다. 리간드의 예로는 표적 단백질의 소정 위치(predetermined position)에 결합하여 신호를 전달하는 분자를 들 수 있다. 리간드는 기질, 저해제, 촉진제, 신경전달물질 또는 방사성동위원소일 수 있다.
"검출가능한 모이어티" 또는 "표지"는 분광, 광화학, 생화학, 면역화학, 방사성 또는 화학적 수단에 의해 검출 가능한 조성물을 말한다. 예를 들어 유용한 표지는 32P, 35S, 형광 염료, 전자-밀집 시약, 효소(예: ELISA에 통상적으로 사용되는 것), 비오틴-스트렙타비딘, 디옥시게닌, 햅텐, 및 항혈청 또는 모노클로날 항체가 사용 가능한 단백질, 또는 표적에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자를 포함한다. 검출 가능한 잔기는 종종 샘플 내 결합된 검출 가능한 모이어티의 양을 정량하는데 사용될 수 있는, 측정 가능한 신호, 예를 들어 방사성, 발색성 또는 형광 신호를 발생시킨다. 신호의 정량은 예를 들어, 신틸레이션 카운팅(scintillation counting), 밀도계, 유동 세포분석, ELISA 또는 원형 또는 후속적으로 다이제스트된 펩타이드의 질량분석법에 의한 직접 분석(하나 이상의 펩타이드가 검정될 수 있음)에 의하여 달성된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "프로브"는 (i) 검출 가능한 신호를 제공하거나, (ii) 제1 탐침 또는 제2 탐침을 상호 반응시켜 형광 공명 에너지 전달(FRET)과 같은, 제1 또는 제2 탐침에 의하여 제공된 검출 가능한 신호를 변경시키거나, (iii) 항원 또는 리간드와의 상호작용을 안정화시키거나 결합 친화도를 증가시키거나, (iv) 전하, 소수성 등과 같은 물리적 파라미터에 의하여 전기 이동도 또는 세포-침입 작용에 영향을 미치거나, (v) 리간드 친화도, 항원-항체 결합 또는 이온 착체 형성을 조절할 수 있는 물질을 말한다.
활성제는 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항박테리아제, 항진균제, 구충제 또는 이들의 조합을 포함한다.
면역조절 화합물은 아미노카프론산(aminocaproic acid), 아자티오프린(azathioprine), 브로모크립틴(bromocriptine), 클로람부실(chlorambucil), 클로로퀸(chloroquine), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 사이클로스포린(cyclosporine), 사이클로스포린 A(cyclosporine A), 다나졸(danazol), 디하이드로데피안드로스테론(dehydroepiandrosterone), 덱사메타손(dexamethasone), 에타너셉트(etanercept), 하이드로코르티손(hydrocortisone), 하이드록사이클로로퀸(hydroxychloroquine), 인플릭시맙(infliximab), 멜록시캄(meloxicam), 메토트렉세이트(methotrexate), 마이코페닐레이트 모페틸(mycophenylate mofetil), 프레드니손(prednisone), 시롤리무스(sirolimus), 및 타크롤리무스(tacrolimus)에서 선택될 수 있다. 항암제는 1-메틸-4-페닐피리디니움 이온(1-methyl-4-phenylpyridinium ion), 5-에티닐-1-베타-D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드(5-ethynyl-1-beta-D-ribofuranosylimidazole-4-carboxamide, EICAR), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 9-아미노캄토테신(9-aminocamptothecin), 악티노마이신 D(actinomycin D), 아스파라기나아제(asparaginase), 비칼루타미드(bicalutamide), 비스-클로로에틸니트로소우레아(bis-chloroethylnitrosourea, BCNU), 블레오마이신(bleomycin), 블레오마이신 A2(bleomycin A2), 블레오마이신 B2(bleomycin B2), 부술판(busulfan), 캄토테신(camptothecin), 카르보플라틴(carboplatin), 카르무스틴(carmustine), CB1093, 클로람부실(chlorambucil), 시스플라틴(cisplatin), 크리스나톨(crisnatol), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 시타라빈(cytarabine), 시토신 아라비노사이드(cytosine arabinoside), 시톡산(cytoxan), 다카르바진(dacarbazine), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데카르바진(decarbazine), 데페록사민(deferoxamine), 메테톡시-하이포크렐린 A(demethoxy-hypocrellin A), 도세탁셀(docetaxel), 독시플루리딘(doxifluridine), 독소루비신(doxorubicin), EB1089, 에피루비신(epirubicin), 에토포사이드(etoposide), 플록수리딘(floxuridine), 플루다라빈(fludarabine), 플루타미드(flutamide), 젬시타빈(gemcitabine), 고세렐린(goserelin), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 이다루비신(idarubicin), 이소프파미드(ifosfamide), 인터페론-α, 인터페론-γ, 이리노테칸(irinotecan), KH1060, 루프롤라이드 아세테이트(leuprolide acetate), 로무스틴(lomustine), 로바스타틴(lovastatin), 메제스트롤(megestrol), 멜팔란(melphalan), 머캅토푸린(mercaptopurine), 메토트렉세이트(methotrexate), 미토마이신(mitomycin), 미토마이신 C, 미토잔트론(mitoxantrone), 마이코페놀산(mycophenolic acid), 질소 머스타드(nitrogen mustard), 니트로소우레아(nitrosourea), 파클리탁셀(paclitaxel), 페플로마이신(peplomycin), 포토센시타이저 Pe4(photosensitizer Pe4), 프탈로시아닌(phthalocyanine), 피라루비신(pirarubicin), 플리카마이신(plicamycin), 프로카르바진(procarbazine), 랄록시펜(raloxifene), 랄티트렉세드(raltitrexed), 레블리미드(revlimid), 리바비린(ribavirin), 스타우로스포린(staurosporine), 타목시펜(tamoxifen), 테니포사이드(teniposide), 탈로미드(thalomid), 타프시가르긴(thapsigargin), 티오구아닌(thioguanine), 티아조푸린(tiazofurin), 토포테칸(topotecan), 트레오술판(treosulfan), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 종양괴사인자(tumor necrosis factor), 벨케이드(velcade), 베라파밀(verapamil), 베르테포르핀(verteporfin), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine), 및 조루비신(zorubicin)에서 선택될 수 있다. 항바이러스제는 펜시사이클로버(pencicyclovir), 벨라사이클로버(valacyclovir), 간시사이클로버(gancicyclovir), 포스카르넷(foscarnet), 리바비린(ribavirin), 이독수리딘(idoxuridine), 비다라빈(vidarabine), 트리플루리딘(trifluridine), 아사이클로버(acyclovir), 팜시사이클로버(famcicyclovir), 아만타딘(amantadine), 리만타딘(rimantadine), 시도포버(cidofovir), 안티센스 올리고뉴클레오타이드(antisense oligonucleotide), 면역글로불린(immunoglobulin), 및 인터페론(interferon)에서 선택될 수 있다. 항박테리아제는 클로람페니콜(chloramphenicol), 반코마이신(vancomycin), 메트로니다졸(metronidazole), 트리메토프린(trimethoprin), 설파메타졸(sulfamethazole), 퀴누프리스틴(quinupristin), 달포프리스틴(dalfopristin), 리팜핀(rifampin), 스펙티노마이신(spectinomycin), 및 니트로푸란토인(nitrofurantoin)에서 선택될 수 있다. 항진균제는 암포테리신 B(amphotericin B), 칸디시딘(candicidin), 필리핀(filipin), 하마이신(hamycin), 나타마이신(natamycin), 니스타틴(nystatin), 리모시딘(rimocidin), 비포나졸(bifonazole), 부토코나졸(butoconazole), 클로트리마졸(clotrimazole), 에코나졸(econazole), 펜티코나졸(fenticonazole), 이소코나졸(isoconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 룰리코나졸(luliconazole), 미코나졸(miconazole), 오모코나졸(omoconazole), 옥시코나졸(oxiconazole), 세르타코나졸(sertaconazole), 술코나졸(sulconazole), 티오코나졸(tioconazole), 알바코나졸(albaconazole), 플루코나졸(fluconazole), 이사부코나졸(isavuconazole), 이트라코나졸(itraconazole), 포사코나졸(posaconazole), 라부코나졸(ravuconazole), 테르코나졸(terconazole), 보리코나졸(voriconazole), 아바펀진(abafungin), 아모롤핀(amorolfin), 부테나핀(butenafine), 나프티핀(naftifine), 테르비나핀(terbinafine), 아니둘라펀진(anidulafungin), 카스포펀진(caspofungin), 미카펀진(micafungin), 벤조산(benzoic acid), 사이클로피록스(ciclopirox), 플루시토신(flucytosine), 그리세오풀빈(griseofulvin), 할로프로긴(haloprogin), 톨나프테이트(tolnaftate), 운데실렌산(undecylenic acid), 크리스탈 바이올렛(crystal violet), 페루 발삼(balsam of peru), 사이클로피록스 올라민(ciclopirox olamine), 피록톤 올라민(piroctone olamine), 징크 피리티온(zinc pyrithione), 및 셀레늄 설파이드(selenium sulfide)에서 선택될 수 있다. 항기생충제는 메벤다졸(mebendazole), 피란텔 파모에이트(pyrantel pamoate), 티아벤다졸(thiabendazole), 디에틸카르바마진(diethylcarbamazine), 이베르멕틴(ivermectin), 니클로사미드(niclosamide), 프라지콴텔(praziquantel), 알벤다졸(albendazole), 리팜핀(rifampin), 암포테리신 B(amphotericin B), 멜라르소프롤(melarsoprol), 에플로르니틴(eflornithine), 메트로니다졸(metronidazole), 티니다졸(tinidazole), 및 밀테포신(miltefosine)에서 선택될 수 있다.
항체는 Ab-HC-(G)zCVIM, Ab-HC-(G)zCVLL, Ab-LC-(G)zCVIM, 및 Ab-LC-(G)zCVLL에서 선택되는 아미노산 모티프를 포함할 수 있고, 여기에서 Ab는 항체를 나타내고, -HC-는 중쇄를 나타내며, -LC-는 경쇄를 나타내고, G는 글리신을, C는 시스테인을, V는 발린을, I는 이소루신을, M은 메티오닌을, L은 류신을, z는 0 내지 20의 정수를 나타낸다.
B, B1 및/또는 B2(식 (I) 및 (V)-(IX)의 예)는 다음 구조 중 임의의 하나가 선택될 수 있다:
Figure pct00095
,
Figure pct00096
,
Figure pct00097
,
Figure pct00098
,
Figure pct00099
,
Figure pct00100
,
Figure pct00101
Figure pct00102
,
Figure pct00103
,
Figure pct00104
,
Figure pct00105
,
Figure pct00106
,
Figure pct00107
,
Figure pct00108
,
Figure pct00109
또는
Figure pct00110
이고,
여기에서, y는 1 내지 10의 정수이다.
항체-약물 접합체는 당업자에게 공지된 조성물 제조방법을 사용하여 개체를 치료하기 위해 활성제를 개체의 표적 세포로 전달하는 데 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체를 포함하는 조성물 (예를 들어 약학적 조성물)에 관한 것이다.
조성물을 액상 용액, 또는 현탁액으로서 주사가능한 형태로 제조될 수 있다. 주사에 적합한 고체 형태로 제조될 수도 있는데, 예를 들어 에멀젼으로서 또는 리포좀에 캡슐레이션된 항체-약물 접합체와 함께 제조될 수 있다. 항체-약물 접합체는 담체를 투여받은 개체에서 항체의 생산을 유도하지 않는 임의의 담체를 포함하는, 약학적으로 허용되는 담체와 배합될 수 있다. 적합한 담체는 전형적으로 예를 들어 단백질, 폴리사카라이드, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산, 아미노산 코폴리머, 지질 응집체 등과 같이 느리게 대사되는 거대분자를 포함한다.
조성물은 희석제, 예를 들어 물, 생리식염수, 글리세롤 및 에탄올을 함유할 수도 있다. 보조물질(auxiliary substances)로는, 예를 들어, 습윤제 또는 유화제, pH 완충물질 등이 또한 존재할 수 있다. 상기 조성물은 주사에 의하여 비경구 투여할 수 있으며, 이러한 주사는 피하 또는 근육 내일 수 있다. 일부 실시예에서, 조성물은 종양 내 투여될 수 있다. 상기 조성물은 종양 내로 삽입(예를 들어, 주사)될 수 있다. 추가의 제형은 예를 들어, 좌제에 의하여 또는 경구와 같은, 기타 투여 형태에 적합하다. 경구용 조성물은 용제, 현탁제, 정제, 환제, 캡슐 또는 서방성 제형으로서 투여될 수 있다.
조성물은 투여량 및 제형과 혼화성인 방식으로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 바람직하게는 치료적 유효량의 항체-약물 접합체를 포함한다. 용어 "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 유효한, 단일 용량, 또는 다중 용량 스케쥴로 투여되는 조성물을 의미한다. 투여량은 치료할 개체, 개체의 건강 및 신체 조건, 목적하는 보호도 및 기타 관련 인자에 따라 달라질 수 있다. 활성 성분(예를 들어 항체-약물 접합체)의 정확한 양은 의사의 판단에 따른다. 예를 들면, 치료적 유효량의 항체-약물 접합체 또는 이를 함유하는 조성물을 암 또는 종양으로 고통받는 환자에게 투여하여 암 또는 종양을 치료할 수 있다.
본 발명에 따른 항체-약물 접합체 또는 이들을 함유하는 조성물은 약학적으로 허용되는 이의 염 또는 용매화물의 형태로 투여될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체 또는 이들을 함유하는 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 약학적으로 허용되는 첨가제와 투여될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 부형제 및 첨가제의 유효량 및 유형은 표준 방법(예를 들어 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th Edition, 1990 참조)을 사용하여 측정할 수 있다.
용어 "치료적 유효량"은 암 세포 수를 감소시키거나; 암 세포 크기를 감소시키거나; 암 세포가 주변 계통으로 침입하는 것을 억제하거나 침입을 감소시키거나; 암 세포가 다른 계통으로 확산되는 것을 억제하거나 확산을 감소시키거나; 암 세포가 성장하는 것을 억제하거나; 암과 관련된 하나 이상의 증상을 개선시킬 수 있는 양을 의미한다. 암의 치료에서, 약물의 유효성은 종양 대 종양 진행(TTP) 및/또는 응답(반응)속도(RR)에 의하여 검정할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "약학적으로 허용되는 염"은 유기 염 및 무기 염을 포함한다. 이의 예는, 이들로 한정되지는 않으나, 하이드로클로라이드(hydrochloride), 하이드로브로마이드(hydrobromide), 하이드로아이오다이드(hydroiodide), 설페이트(sulfate), 시트레이트(citrate), 아세테이트(acetate), 옥살레이트(oxalate), 클로라이드(chloride), 브로마이드(bromide), 아이오다이드(iodide), 나이트레이트(nitrate), 비설페이트(bisulfate), 포스페이트(phosphate), 산 포스페이트(acidic phosphate), 이소니코티네이트(isonicotinate), 락테이트(lactate), 살리실레이트(salicylate), 산 시트레이트(acidic citrate), 타르트레이트(tartrate), 올레이트(oleate), 탄네이트(tannate), 판토네이트(pantonate), 비타르트레이트(bitartrate), 아스코르베이트(ascorbate), 석시네이트(succinate), 말레이트(maleate), 겐티시네이트(gentisinate), 푸마레이트(fumarate), 글루코네이트(gluconate), 글루코로네이트(glucoronate), 사카레이트(saccharate), 포르메이트(formate), 벤조에이트(benzoate), 글루타메이트(glutamate), 메탄 설포네이트(methane sulfonate), 에탄 설포네이트(ethane sulfonate), 벤젠 설포네이트(benzene sulfonate), p-톨루엔 설포네이트(p-toluene sulfonate), 및 파모에이트(pamoate) (즉, 1,1'-메틸렌비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트(1,1′-methylenebis-(2-hydroxy-3-naphthoate)))를 포함한다. 약학적으로 허용되는 염은 또 다른 분자(예: 아세테이트 이온, 석시네이트 이온 및 기타 대이온 등)를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 항체-약물 접합체의 약학적으로 허용되는 용매화물로 사용될 수 있는 예시적 용매화물은, 이들로 한정되지는 않으나, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올 아민을 포함한다.
용어 "아실"은 당업계에 공지되어 있고 일반식 하이드로카빌C(O)-, 바람직하게는 알킬C(O)-로 나타내지는 기를 나타낸다.
용어 "아실아미노"는 당업계에 공지되어 있고 아실기로 치환된 아미노기를 나타내며, 예를 들어 일반식 하이드로카빌C(O)NH-로 나타내질 수 있다.
용어 "아실옥시"는 당업계에 공지되어 있고 일반식 하이드로카빌C(O)O-로 나타내지는 기를 말하고, 바람직하게는 알킬C(O)O-이다.
용어 "알콕시"는 산소가 부착된 알킬기, 바람직하게는 저급 알킬기를 말한다. 대표적인 알콕시기로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-부톡시 등이 포함된다.
용어 "알콕시알킬"은 알콕시기로 치환된 알킬기를 말하고, 일반식 알킬-O-알킬로 나타내질 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알케닐"은 하나 이상의 지방족기를 말하며, "비치환된 알케닐" 및 "치환된 알케닐" 모두를 포함하는 것을 의도하며, 후자는 알케닐기의 하나 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환체를 갖는 알케닐 모이어티를 말한다. 이러한 치환체는 하나 이상의 이중 결합에 포함되거나 포함되지 않는 하나 이상의 탄소 상에 존재할 수 있다. 더욱이 상기 치환체는 안정성이 금지되는 경우를 제외하고, 하기에서 논의되는 바와 같이 알킬기에 대해 고려되는 모든 것을 포함한다. 예를 들어, 하나 이상의 알킬, 카르보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴기로 치환된 알케닐 기가 고려된다.
"알킬"기 또는 "알칸"은 완전히 포화된 직쇄 또는 분지된 비-방향족 탄화수소이다. 전형적으로, 직쇄 또는 분지된 알킬기는 달리 정의되지 않는 한 1 내지 20개의 탄소원자, 바람직하게는 1 내지 10개의 탄소원자를 갖는다. 직쇄 및 분지된 알킬기의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 펜틸 및 옥틸이 포함된다. C1-C6 직쇄 또는 분지된 알킬기는 또한 "저급 알킬"기로 지칭된다.
또한 명세서, 실시예 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "알킬" (또는 "저급 알킬")은 "비치환된 알킬" 및 "치환된 알킬" 모두를 포함하는 것으로 의도되며, 후자는 탄화수소 백본의 하나 이상의 탄소 상의 수소가 대체되는 치환체를 갖는 알킬 모이어티를 말한다. 이러한 치환체는, 달리 명시되지 않으면, 할로겐, 하이드록실, 카보닐 (예를 들어 카복실, 알콕시카보닐, 포밀, 또는 아실), 티오카보닐 (예를 들어 티오에스테르, 티오아세테이트, 또는 티오포메이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 니트로, 아지도, 설프하이드릴, 알킬티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설포닐, 헤테로사이클릴, 아르알킬, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티이다. 적절한 경우, 탄화수소 사슬상 치환된 모이어티는 그 자체가 치환될 수 있다는 점은 당업자에게 이해될 것이다. 예를 들어 치환된 알킬의 치환체는 에테르, 알킬티오, 카보닐 (케톤, 알데하이드, 카복실레이트, 및 에스테르를 포함), -CF3, -CN 등뿐만 아니라 아미노, 아지도, 이미노, 아미도, 포스포릴 (포스포네이트 및 포스피네이트를 포함), 설포닐 (설페이트, 설폰아미도, 설파모일, 및 설포네이트를 포함), 및 실릴기의 치환된 및 비치환된 형태를 포함할 수 있다. 예시적 치환된 알킬을 하기에 기재하였다. 사이클로알킬은 알킬, 알케닐, 알콕시, 알킬티오, 아미노알킬, 카보닐-치환된 알킬, -CF3, -CN 등으로 더욱 치환될 수 있다.
예를 들어 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 알콕시와 같은 화학 모이어티와 함께 사용될 때 용어 "Cx-y"는 사슬에서 x 내지 y 탄소를 함유하는 기를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어 용어 "Cx-y알킬"은 트리플루오로메틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸 등과 같은 할로알킬기를 포함하는, 사슬에서 x 내지 y 탄소를 함유하는 직쇄 알킬 및 분지쇄 알킬기를 포함하는 치환되거나 비치환된 포화 탄화수소기를 말한다. C0 알킬은 기가 말단 위치에 있는 수소를 나타내고, 내부이면 결합을 나타낸다. 용어 "C2-알케닐" 및 "C2-알키닐"은 길이가 유사하고 상기 기재된 알킬에 치환이 가능하나, 최소 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 각각 함유하는 치환되거나 비치환된 불포화 지방족기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬아미노"는, 최소 하나 이상의 알킬기로 치환된 아미노기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬티오"는 알킬기로 치환된 티올기를 나타내며, 일반식 알킬S-로 나타낼 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알키닐"은 하나 이상의 삼중 결합을 함유하는 지방족기를 말하고, "비치환된 알키닐" 및 "치환된 알키닐"을 모두 포함하는 것으로 의도되며, 후자는 알키닐기의 하나 이상의 탄소상의 수소가 대체되는 치환체를 갖는 알키닐 모이어티를 말한다. 이러한 치환체는 하나 이상의 삼중 결합에 포함되거나 포함되지 않는 하나 이상의 탄소 상에 존재할 수 있다. 또한 그러한 치환체는 안정성이 금지되는 경우를 제외하고, 상기 언급된 바와 같이, 알킬기에 대해 고려되는 모든 것을 포함한다. 예를 들어, 하나 이상의 알킬, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로아릴기에 의한 알키닐기의 치환이 고려된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "아미드"는
Figure pct00111
기를 말하고, 여기에서 각각의 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타내거나, 또는 두 개의 R10은 그들이 부착된 N 원자와 함께 환 구조 내에 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
용어 "아민" 및 "아미노"는 당업계에 공지되어 있고, 비치환된 및 치환된 마임 및 이의 염을 모두 말하며, 예를 들어
Figure pct00112
또는
Figure pct00113
에 의해 나타내질 수 있고,
여기에서 각각의 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타내거나, 또는 두 개의 R10은 그들이 부착된 N 원자와 함께 환 구조 내에 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "아미노알킬"은 아미노기로 치환된 알킬기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "카복시"는 화학식 -CO2H로 나타내지는 기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "헤타르알킬(hetaralkyl)" 및 "헤테로아르알킬(heteroaralkyl)"은 헤트아릴(hetaryl)기로 치환된 알킬기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "헤테로알킬"은 탄소원자 및 최소 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 포화되거나 불포화된 사슬을 말하고, 여기에서 2개의 헤테로원자는 인접하지 않는다.
용어 "헤테로아릴" 및 "헤트아릴(hetaryl)"은 치환 또는 비치환된 방향족 단일환 구조, 바람직하게는 5- 내지 7-원환, 더욱 바람직하게는 5- 내지 6-원환을 포함하며, 이의 환 구조는 최소 하나의 헤테로 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 더욱 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어 "헤테로아릴" 및 "헤트아릴(hetaryl)"은 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 환에 공통인, 2개 이상의 사이클릭 환을 갖는 폴리사이클릭 환 시스템을 또한 포함하고, 여기에서 환의 최소 하나 이상은 헤테로방향족이며, 예를 들어 다른 사이클릭환은 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴이다. 헤테로아릴기는, 예를 들어 피롤, 푸란(furan), 티오펜(thiophene), 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 및 피리미딘 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "헤테로원자"는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 질소, 산소 및 황이다.
용어 "헤테로사이클릴", "헤테로사이클" 및 "헤테로사이클릭"은 치환되거나 비치환된 비-방향족 환 구조를 말하고, 바람직하게는 3- 내지 10-원환, 더욱 바람직하게는 3- 내지 7-원환을 말하며, 이의 환 구조는 최소 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 더욱 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어 "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 환에 공통인, 2개 이상의 사이클릭 환을 갖는 폴리사이클릭 환 시스템을 또한 포함하고, 여기에서 환의 최소 하나 이상은 헤테로사이클릭이며, 예를 들어 다른 사이클릭환은 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴이다. 헤테로사이클릴기는 예를 들어 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 모르폴린, 락톤, 락탐 등을 포함한다. 헤테로사이클릴기는 또한 옥소기로 치환될 수 있다. 예를 들어, "헤테로사이클릴"은 피롤리딘 및 피롤리디논(pyrrolidinone)을 모두 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "하이드록시알킬"은 하이드록시기로 치환된 알킬기를 말한다.
용어 "치환된"은 주쇄의 하나 이상의 탄소상의 수소를 치환하는 치환체를 갖는 모이어티를 말한다."치환" 또는 "(으)로 치환된"은 이러한 치환이 치환된 원자 및 치환체의 허용된 원자가에 따르고, 치환이 예를 들어 재배열, 환화, 제거 등과 같은 변화를 자발적으로 겪지 않는, 안정한 화합물을 발생시킨다는, 내포된 조건을 포함함을 이해할 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용되는 치환체를 포함하는 것으로 생각된다. 넓은 측면에서, 허용되는 치환체는 유기 화합물의 비-사이클릭 및 사이클릭, 분지 및 비분지형, 카르보사이클릭 및 헤테로사이클릭, 방향족 및 비방향족 치환체를 포함한다. 허용되는 치환체는 적합한 유기 화합물에 대하여 하나 이상, 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명에 대하여, 질소 등의 헤테로원자는 헤테로원자의 원자가를 만족시키는 본 명세서에 기재된 유기 화합물의 수소 치환체 및/또는 어떠한 허용되는 치환체라도 가질 수 있다. 치환체는 본 명세서에 기재된 어떠한 치환체라도, 예를 들면, 할로겐, 하이드록실, 카보닐(예: 카복실, 알콕시카보닐, 포밀, 또는 아실), 티오카보닐(예: 티오에스테르, 티오아세테이트, 또는 티오포메이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 니트로, 아지도, 설프하이드릴, 알킬티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설포닐, 헤테로사이클릴, 아르알킬, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다. 당업자는 치환체가 필요한 경우, 그 자체로 치환될 수 있음을 이해할 것이다. "치환되지 않은"이라고 구체적으로 명시되지 않는 경우, 본 명세서에서 화학 모이어티에 대한 언급은 치환된 변형을 포함하는 것으로 이해한다. 예를 들면, "아릴" 그룹 또는 모이어티에 대한 언급은 치환된 변형 및 치환되지 않은 변형을 둘 다 함축적으로 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "티오알킬"은 티올기로 치환된 알킬기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "티오에스테르"는 -C(O)SR10 또는 -SC(O)R10를 말하고, 여기에서 R10은 하이드로카빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 용어 "티오에테르"는, 에테르와 동등한 것으로서 여기에서 산소는 황으로 대체된다.
"보호 기/그룹(Protecting group)"은 분자내 반응성 관능 그룹에 결합시, 관능 그룹의 반응성을 마스킹하거나 감소시키거나 방지하는 원자 그룹을 말한다. 통상적으로, 보호 그룹은 합성 동안 필요에 따라 선택적으로 제거될 수 있다. 보호 그룹의 예는 문헌[참조: Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY]에서 찾을 수 있다. 대표적인 질소 보호 그룹은 포밀, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤질, 벤질옥시카보닐 ("CBZ"), tert-부톡시카보닐("Boc"), 트리메틸실릴("TMS"), 2-트리메틸실릴-에탄설포닐("TES"), 트리틸 및 치환된 트리틸 그룹, 알릴옥시카보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 ("FMOC"), 니트로-베라트릴옥시카보닐("NVOC") 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 대표적인 하이드록실 보호 그룹은, 벤질 및 트리틸 에테르와 같은 하이드록실 그룹이 아실화(에스테르화) 또는 알킬화된 것뿐만 아니라, 알킬에테르, 테트라하이드로피라닐 에테르, 트리알킬실릴 에테르(예: TMS 또는 TIPS 그룹), 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜 유도체와 같은 글리콜 에테르, 및 알릴 에테르를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다.
"공유결합으로 연결된/공유결합된"은 2개의 화학종(예를 들어, 개재된(intervening) 일련의 원자들을 통한)의 직접 결합 및 간접 결합을 모두 포함한다. 예를 들면 아미노산은 폴리에틸렌 글리콜에 직접 공유결합될 수 있는데, 예를 들어 아미노산의 카복실 및 폴리에틸렌 글리콜의 하이드록실 사이에 에스테르를 형성하거나, 또는 간접적으로 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜과 에피클로로하이드린을 반응시켜 에폭시프로필 에테르를 형성시키고, 생성된 에폭사이드를 아미노산의 아미노기와 반응시켜 2-하이드록시프로필 링커를 통해 아미노산 및 폴리에틸렌 글리콜을 공유결합시킬 수 있다. 다양한 모이어티를 직접적으로 또는 간접적으로 연결시키는 다양한 모이어티 및 반응은 이 기술분야에 잘 알려져 있다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 문맥에 의해 달리 지시되지 않는 한, 간접 결합은 단지 1-10개의 개재 원자(intervening atoms) (예를 들어 메틸렌, 디부틸 에테르, 트리펩타이드 등), 가장 바람직하게는 1-6개의 개재 원자를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 장애 또는 상태를 "예방"하는 치료제는 통계 샘플에서 미처치 대조군 샘플에 비해 처치된 샘플에서 장애 또는 상태의 발생이 감소되거나, 미처치 대조군 샘플에 비하여 장애 또는 상태의 하나 이상의 증후의 심각도를 감소시키거나 발현을 지연시키는 것을 말한다.
용어 "치료하는"은 예방적 및/또는 치료적 처치(prophylactic and/or therapeutic treatments)를 포함한다. 용어 "예방적 또는 치료적" 처치는 당업계에 공지되어 있으며 본 발명의 조성물 중 하나 이상을 호스트에 투여하는 것을 포함한다. 원치 않는 상태(예: 호스트 동물의 질병 또는 기타 원치 않는 상태)의 임상적 증상이 나타나기 전에 투여되는 경우 치료는 예방적 (즉, 원치 않는 상태로 발전하기 않도록 호스트를 보호한다)인 반면, 원치 않는 상태의 증상이 나타난 후 투여되는 경우 치료는 치료적이다 (즉, 기존의 원치 않는 상태 또는 이의 부작용을 줄이거나, 완화시키거나 또는 안정화시키는 것을 의도한다).
용어 "프로드럭"은 생리학적 조건 하에서 본 발명의 치료적 활성제로 전환되는 화합물을 포함하는 것으로 의도된다. 프로드럭을 제조하는 통상적 방법은 생리학적 조건 하에서 가수분해되어 표적 분자를 드러내는 하나 이상의 선택된 모이어티를 포함하는 것이다. 다른 실시양태에서, 프로드럭은 호스트 동물의 효소활성에 의해 전환된다. 예를 들어, 에스테르 또는 카르보네이트 (예를 들어 알콜 또는 카복실산의 에스테르 또는 카르보네이트)가 바람직한 프로드럭이다.
몇몇 구체예에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체-약물 접합체를 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 약학적 조성물은 치료적 유효량의 화학 치료제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 개체는 포유류이다. 예를 들어, 개체는 설치류(rodents), 토끼(lagomorphs), 고양이(felines), 개(canines), 돼지(porcines), 양(ovines), 소(bovines), 말(equines) 및 영장류(primates)에서 선택될 수 있다. 특정의 바람직한 구체예에서, 개체는 인간이다.
이하, 본 발명의 구성이 실시예를 통해 구체적으로 묘사될 것이나 이하의 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 이로써 제한하지 않는다.
실시예
아래 표는 다음 실시예에서 사용된 약어를 나타낸 것이다:
약어 용어(reference)
Ac 아세틸(Acetyl)
AcOH 아세트산(acetic acid)
aq. 액상(Aqueous)
Bn 벤질(Benzyl)
brine 포화 액상 염화나트륨 용액
(saturated aqueous sodium chloride solution)
Boc t-부톡시카보닐(t-butoxycarbonyl)
Cbz 벤질옥시카보닐(Benzyloxycarbonyl)
DBU 1, 8-디아자비시클로[5.4.0]운덱-7-엔
(1, 8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene)
DCM 디클로로메탄(Dichloromethane)
DIC N,N'-디이소프로필카르보디이미드
(N,N'-diisopropylcarbodiimide)
DIPEA N,N'-디이소프로필에틸아민
(N,N-diisopropylethylamine)
DMAP 4-(디메틸아미노)피리딘(4-(dimethylamino)pyridine)
DMF N,N'-디메틸포름아미드(N,N-dimethylformamide)
DMSO 디메틸 술폭사이드(dimethyl sulfoxide)
EDC N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드
(N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide)
Et 에틸(Ethyl)
Et2O 디에틸 에테르(diethyl ether)
EtOAc 에틸 아세테이트(ethyl acetate)
EtOH 에탄올(Ethanol)
HBTU O-(벤조트리아졸-1-일)- N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
(O-(benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate)
Hex n-헥산(n-hexane)
HOBt 1-하이드록시벤조트리아졸(1-hydroxybenzotriazole)
HPLC 고속액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography)
Me 메틸(Methyl)
MeCN 아세토니트릴(Acetonitrile)
MeOH 메탄올(Methanol)
MMAE 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E)
MMAF 모노메틸 아우리스타틴 F(monomethyl auristatin F)
MMAF-OMe 모노케닐 아우리스타틴 F 메틸 에스테르(monomethyl auristatin F methyl ester)
i-PrOH 이소프로판올(Isopropanol)
PyBOP (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트
(benzotriazol-1-yloxy)tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate
TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드(tetrabutylammonium fluoride)
TBS t-부틸디메틸실릴(t-butyldimethylsilyl)
THF 테트라하이드로퓨란(Tetrahydrofuran)
TFA 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid)
Ts p-톨루엔술포닐(p-toluenesulfonyl)
wt 중량(Weight)
실시예 1. 화합물 1i의 제조
Figure pct00114
화합물 1b의 제조
THF (30 mL) 중 5-포르밀살리실산 1a (10.0 g, 60.1 mmol)의 현탁액에 DIPEA (29.8 mL, 180 mmol) 및 벤질 브로마이드(7.15 mL, 60.1 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 환류하에 가열하였다. 환류하에 18시간 후 2 N aq. HCl (100 mL) 중에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1b를 얻었다(12.9 g, 83 %). 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ11.38(s, 1H), 9.86(s, 1H), 8.40(s, 1H), 8.01(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 (m, 5H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H).
화합물 1c의 제조
MeCN (100 mL) 중의 화합물 1b (5.0 g, 19.5 mmol) 및 화합물 M (8.5 g, 21.4 mmol, 실시예 66 참조)의 용액에 4Å 분자체 (10 g) 및 Ag2O (18.0g, 78.0 mmol)를 첨가하였다. N2 하에 실온에서 12시간 동안 교반한 후, 반응혼합물을 농축시켰다. 이어서, 농축된 반응혼합물을 H2O (100 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 1c를 제조하였다 (8.63 g, 77 %). 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ9.94(s, 1H), 8.28(s, 1H), 8.02(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46-7.28 (m, 6H), 5.41-5.32 (m, 6H), 4.27 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.05 (m, 9H).
화합물 1d의 제조
i-PrOH / CHCl3 (9 mL / 45 mL) 중 화합물 1c (3.10 g, 5.41 mmol)의 용액에 0 ℃에서 실리카겔 (3 g) 및 NaBH4 (0.41 g, 10.82 mmol)를 첨가하였다. N2 하에서 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 퀀칭시키고 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 화합물 1d (2.73 g, 87 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (s, 1H), 7.48-7.34 (m, 6H), 7.16 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.35-5.26 (m, 5H), 5.15 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.04 (s, 9H), 1.73 (t, 1H).
화합물 1e의 제조
EtOH (150 mL) 중 화합물 1d (2.40 g, 4.17 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 240 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소하에 실온에서 10 분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 EtOH (100 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 백색 고체 (2.10 g)로서 조 생성물 1e를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H) 7.61 (dd, J = 8.8 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz 1H), 5.43-5.29 (m, 5H), 4.17 (s, 2H), 4.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H) 3.69 (s, 3H), 2.11-2.08 (t, 9H), 1.24 (t, 1H).
화합물 1f의 제조
DMF (50 mL) 중 조 화합물 1e (2.10 g, 4.33 mmol)의 용액에 실온에서 K2CO3 (1.79 g, 13.01 mmol) 및 알릴 브로마이드 (0.41 mL, 4.76 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 2N aq. HCl (100 mL) 중에 용해시켰다. 생성 된 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1f (1.55 g, 2 단계에 대해 70 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.74(s, 1H), 7.45(dd,J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.02 (m, 1H), 5.40-5.26 (m, 5H), 5.16 (m, 1H), 4.76 (m, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.07-2.05 (m, 9H), 1.68 (t, 1H).
화합물 1g의 제조
DMF (20 mL) 중의 화합물 1f (2.50 g, 4.77 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 비스(4-니트로 페닐)카르보네이트 (1.30 g, 4.29 mmol) 및 DIPEA (0.80 mL 4.77 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고 1 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석시키고 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1g (2.80 g, 85 %)을 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ8.28(d,J = 15.2 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 2.4 Hz ,1H), 7.55 (dd, J = 3.2 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 15.2 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.8 Hz, 1H) 6.03 (m, 1H), 5.42-5.19 (m, 8H), 4.78 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.12 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H).
Figure pct00115
화합물 1h의 제조
화합물 1g (528 mg, 0.77 mmol), MMAE (500 mg, 0.7 mmol) 및 무수 HOBt (19 mg, 0.14 mmol)를 0 ℃에서 DMF (3 mL)에 용해시켰다. 그 다음, 피리딘 (0.7 mL) 및 DIPEA (0.24 mL, 1.39 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 24 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / 포화 NH4Cl 수용액 (100 mL / 50 mL)으로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1h (600 mg, 67 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1269.5, [M+Na]+ 1291.5.
화합물 1i의 제조
DCM (10 mL) 중의 화합물 1h (600 mg, 0.47 mmol) 및 트리페닐포스 핀 (31 mg, 0.12 mmol)의 용액에 피롤리딘 (0.047 mL, 0.57 mmol) 및 Pd (PPh3)4 (27 mg, 0.02 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / 1N aq. HCl (50 mL / 50 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (Hex / EtOAc 1/1에서 EtOAc)로 정제하여 화합물 1i (480 mg, 82 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1228.4, [M+Na]+ 1250.4.
실시예 2. 화합물 1j의 제조
Figure pct00116
실시예 1에서 화합물 1i를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j를 MMAF-OMe로부터 제조하였다.
실시예 3. 화합물 2g의 제조
Figure pct00117
화합물 2a의 제조
질소하에 실온에서 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄올 (10 g, 59.3 mmol)을 DMF (90 mL)에 녹인 후 NaN3 (5.78 g, 88.9 mmol)을 첨가하였다. 100 ℃에서 13 시간 동안 교반 한 후 클로로포름 (200 mL)과 증류수 (300 mL)를 가하여 유기층을 추출하고 추출 된 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2a (10.3 g, 99 %)를 제조하였다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3.75-3.73 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 6H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.40 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.20 (t, J = 6.0 Hz, 1H).
화합물 2b의 제조
질소하에 0 ℃에서 CBr4 (21.4 g, 64.6 mmol)를 DCM (100 mL)에 용해시킨 후, DCM (100 mL) 및 트리페닐포스파인 (16.9 g, 64.6 mmol) 및 화합물 2a (10.3 g, 58.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 13 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 DCM (300 mL)과 증류수 (300 mL)를 가하여 유기층을 추출하고 추출 된 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 다음 감압 농축 하였다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피하여 화합물 2b (12 g, 85 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.83 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.72-3.67 (m, 6H), 3.48 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 4.8 Hz, 2H).
화합물 2c의 제조
화합물 2b (1 g, 4.20 mmol)를 질소하에 실온에서 MeCN에 용해시킨 후, N-Boc-하이드록실아민 (643 mg, 4.82 mmol) 및 DBU (0.66 mL, 4.41 mmol)를 가하였다. 60 ℃에서 13 시간 동안 교반 한 후, DCM (300 mL)과 증류수 (300 mL)를 가하여 유기층을 추출하고, 추출 된 유기층을 무수 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피시켜 화합물 2c (748 mg, 70 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (s, 1H), 4.05-4.03 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 2H), 3.74-3.69 (m, 6H), 3.42 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H).
화합물 2d의 제조
화합물 2c (200 mg, 0.688 mmol)를 MeOH (5 mL)에 녹인 후 Pd / C (10 wt. %, 70 mg)를 가하고 수소하에 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 종결 된 후, 반응 혼합물을 셀라이트 여과하고 감압 농축하여 화합물 2d (180 mg, 98 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.04-4.01 (m, 2H), 3.74-3.62 (m, 7H), 3.55 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 2.88 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 2.81 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 1.64 (s, 2H), 1.48 (s, 9H).
Figure pct00118
화합물 2e의 제조
DMF (4 mL) 중의 화합물 1i (200 mg, 0.16 mmol) 및 화합물 2d (51 mg, 0.19 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.042 mL, 0.32 mmol) 및 PyBOP (126 mg, 0.24 mmol)를 가했다. N2하에 실온에서 4 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성된 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 2e (142 mg, 60 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1474.7.
화합물 2f의 제조
MeOH (2 mL) 중 화합물 2e (142 mg, 0.096 mmol)의 용액에 H2O (2 mL) 중의 LiOH 1수화물 (36 mg, 0.86 mmol)을 -20 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / 2N aq. HCl 용액 (50 mL / 2 mL)으로 희석시키고 CHCl3 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 화합물 2f (128 mg)를 수득하였으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1334.5.
화합물 2g의 제조
DCM (3 mL) 중 조 화합물 2f (105 mg, 0.08 mmol)의 용액에 HCl (1,4- 디옥산 중 4 M, 1 mL)을 0 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 HCl을 제거한 후, 잔사를 HPLC로 정제하여 백색 고체의 화합물 2g (47 mg, 46 %)을 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1234.4.
실시예 4. 화합물 2h의 제조
Figure pct00119
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 2d로부터 화합물 2h를 제조하였다.
실시예 5. 화합물 3f의 제조
Figure pct00120
화합물 3a의 제조
DCM (10 mL) 중 헥사에틸렌 글리콜 (1.0 g, 3.54 mmol), Ag2O (1.23 g, 5.31 mmol) 및 KI (117 mg, 0.71 mmol)의 혼합물을 15 분간 초음파 처리하였다. 현탁액을 -30 ℃로 냉각시키고, DCM (13 mL) 중의 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (688 mg, 3.61 mmol)의 용액을 적가하였다. 그 후 혼합물을 서서히 0 ℃로 가온하고 이 온도에서 15 분간 유지하였다. 이어서, 반응 혼합물을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 시럽 잔사를 생성시켰다. 이어서, 시럽 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하였다. 순수한 분획을 진공 증발시켜 화합물 3a (1.18 g, 77 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (m, 2H), 3.72-3.58 (m, 22H), 2.97 (br, 1H), 2.45 (s, 3H).
화합물 3b의 제조
화합물 3a (1.18 g, 2.71 mmol) 및 NaN3 (264 mg, 4.07 mmol)을 DMF (3 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 100 ℃에서 가열하였다. 100 ℃에서 15 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 3b (728 mg, 87 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.75-3.70 (m, 2H), 3.69-3.63 (m, 18H), 3.62-3.60 (m, 2H), 3.39 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.07 (br, 1H).
화합물 3c의 제조
0 ℃에서 THF (10 mL) 중 화합물 3b (728 mg, 2.36 mmol)의 교반 된 용액에 트리에틸아민 (0.73 mL, 5.21 mmol) 및 메탄술폰산 무수물 (619 mg, 3.55 mmol)을 첨가하였다. 2시간 후, 교반 된 용액에 LiBr (1.03 g, 11.8 mmol)을 첨가하고, 생성 된 반응 혼합물을 5 시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 3c (810 mg, 92 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.81 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.69-3.65 (m, 18H), 3.47 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 5.2 Hz, 2H).
화합물 3d의 제조
DMF (20 mL) 중의 화합물 3c (3.42 g, 9.24 mmol) 및 N,N-diBoc-하이드록실아민 (2.80 g, 12.0 mmol, PCT공개번호 WO2004 / 018466A2의 과정에 의해 합성된 것임, 참조로 본원에 통합됨)의 교반 된 혼합물에 NaH (오일중 60 %, 564 mg, 12.9 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 이 온도에서 2 시간 동안 유지시켰다. 용매를 감압하에 증발시키고, 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc / Hex 1/20 내지 1/5)로 정제하여 화합물 3d (3.51 g, 73 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.08 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.73 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.69-3.62 (m, 18H), 3.39 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.53 (s, 18H).
화합물 3e의 제조
0 ℃에서 MeOH (5 mL) 중 화합물 3d (123 mg, 0.23 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 25 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.05 mL, 0.21 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 5 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 3e (118 mg, 95 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.98 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.61-3.51 (m, 22H), 2.95 (br, 3H), 1.46 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]+497.6.
화합물 3f의 제조
Figure pct00121
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 3e로부터 화합물 3f를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1366.6, [M+Na]+ 1389.6.
실시예　6. 화합물 3g의 제조
Figure pct00122
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 3e로부터 화합물 3g를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1380.6, [M+Na]+ 1403.6.
실시예 7. 화합물 4f의 제조
Figure pct00123
화합물 4a의 제조
DCM (18 mL) 중 도데카에틸렌 글리콜 (1.8 g, 3.2 mmol)의 교반 된 용액에 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (656 mg, 3.4 mmol), Ag2O (1.13 g, 4.9 mmol) 및 KI (108 mg, 0.65 mmol )를 첨가하였다. 실온에서 30 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 DCM (50 mL)으로 세척하였다. 여액을 농축시켰다. 얻어진 잔사를 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 4a (490 mg, 21 %)를 담황색 유상물로서 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 4.16 (t, 2H), 3.72-3.58 (m, 46H), 2.82 (br s, 1H), 2.45 (s, 3H).
화합물 4b의 제조
화합물 4a (490 mg, 0.69 mmol) 및 NaN3 (68 mg, 1.04 mmol)을 DMF (16 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물을 100 ℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 4b (267 mg, 67 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72-3.60 (m, 46H), 3.39 (t, 2H), 2.84 (t, 1H), 3.40 (m, 2H).
화합물 4c의 제조
THF (10 mL) 중 화합물 4b (265 mg, 0.46 mmol)의 교반 된 용액에 4-메틸모르폴린 (0.066 mL, 0.60 mmol) 및 메탄술폰산 무수물 (121 mg, 0.69 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 2 시간 후, LiBr (120 mg, 1.38 mmol)을 교반 된 용액에 첨가하고, 생성 된 반응 혼합물을 6 시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 4c (178 mg, 60 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 3.81 (t, 2H), 3.65 (m, 42H), 3.47 (t, 2H), 3.39 (t, 2H).
화합물 4d의 제조
화합물 4c (175 mg, 0.27 mmol) 및 DMF (5 mL) 중의 N-Boc-히드록실아민 (47 mg, 0.35 mmol)의 교반 된 혼합물에 NaH (오일 중 60 %, 14 mg, 0.33 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 이 온도에서 12 시간 동안 유지시켰다. 용매를 감압하에 증발시키고, 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (MeOH / CHCl3 1 / 20 내지 1.5 / 20)로 정제하여 화합물 4d (148 mg, 78 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.00 (t, 2H), 3.66 (m, 44H), 3.39 (t, 2H), 1.47 (d, 9H).
화합물 4e의 제조
화합물 4d (148 mg, 0.21 mmol), 및 MeOH (5 mL) 중 Pd / C (10 wt. %, 28 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4- 디옥산 중 4 N, 0.053 mL, 0.21 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 30 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 4e (142 mg, 96 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.00 (t, 2H), 3.92 (t, 2H), 3.76-3.64 (m, 42H), 3.18 (t, 2H), 1.47 (s, 9H).
화합물 4f의 제조
Figure pct00124
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 4e로부터 화합물 4f를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1631.9.
실시예 8. 화합물 4g의 제조
Figure pct00125
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 4e로부터 화합물 4g를 제조하였다.
실시예 9. 화합물 5e의 제조
Figure pct00126
화합물 5a의 제조
DCM (70 mL) 중 2-아미노에탄올 (10 g, 164 mmol)의 용액에 DCM (30 mL) 중 트리에틸아민 (3.9 mL, 28.1 mmol) 및 벤질 클로로포르메이트를 N2 하 0 ℃에서 첨가하였다. 24 시간 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성 된 잔사를 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 5a (17 g, 53 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.56 (s, 2H), 2.13 (br s, 1H).
화합물 5b의 제조
DCM (70 mL) 중 화합물 5a (5.0 g, 25.6 mmol)의 용액에 DCM (30 mL) 중 DMAP (100 mg, 5.12 mmol) 및 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (5.4 g, 28.1 mmol)를 트리에틸아민 (3.9 mL, 28.1 mmol)에 0 ℃에서 N2하에 처리하였다. 0 ℃에서 15 시간 후, 반응 혼합물을 포화 aq. NH4Cl(100 mL)로 희석하고, DCM (2 X 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 5b (8.29 g, 92 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.77 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.40-7.28 (m, 7H), 5.07 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 3.45 (s, 2H), 2.43 (s, 3H).
화합물 5c의 제조
THF (20 mL) 중 화합물 5b (2.0 g, 7.23 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 N,N-diBoc-히드록실아민 (1.7 g, 7.44 mmol) 및 NaH (300 mg, 6.86 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 17 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 5c (375 mg, 16 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.01 (br s, 2H), 3.44 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.52 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]+ 410.7.
화합물 5d의 제조
MeOH (20 mL) 중 화합물 5c (187 mg, 0.45 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 20 mg)를 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 수소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 5d (120 mg)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
화합물 5e의 제조
Figure pct00127
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 5d로부터 화합물 5e를 제조하였다.
실시예 10. 화합물 5f의 제조
Figure pct00128
실시예 3에서 화합물 2g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 5d로부터 화합물 5f를 제조하였다.
실시예 11. 화합물 6e의 제조
Figure pct00129
화합물 6a의 제조
DIPEA (1.2 mL, 9.96 mmol) 및 HBTU (1.69 g, 6.22 mmol)를 DMF (5 mL) 중 Z-Asp (OMe)-OH (500 mg, 1.78 mmol) 및 화합물 2d의 교반 된 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2하에 실온에서 22 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 6a (368 mg, 40 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85-7.70 (m, 1H), 7.45-7.28 (m, 5H), 7.04 (s, 1H), 6.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.65-4.50 (m, 1H), 4.00 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.72-3.30 (m, 10H), 2.80 (dd, J = 5.6 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
화합물 6b의 제조
MeOH (5 mL) 중의 화합물 6a (150 mg, 0.28 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 20 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.07 mL, 0.28 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 6b (169 mg)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+1]+ 393.7.
Figure pct00130
화합물 6c의 제조
DMF (1 mL) 중 화합물 1i (50 mg, 0.04 mmol) 및 화합물 6b (22 mg, 0.05 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.022 mL, 0.12 mmol) 및 HBTU (20 mg, 0.05 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14 시간 동안 N2하에 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 6c (38 mg, 60 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1604.5.
화합물 6d의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 6c (38 mg, 0.023 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (5 mg, 0.118 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2시간 후, 용액의 pH를 AcOH로 4 ~ 5로 조정하고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 DMSO (1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 6d (26 mg, 78 %)를 생성시켰다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1450.5.
화합물 6e의 제조
DCM (1.5 mL) 중 화합물 6d (26 mg, 0.018 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.3 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 백색 고체로서 화합물 6e (19.5 mg, 80 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1350.6.
실시예　12. 화합물 7e의 제조
Figure pct00131
화합물 7a의 제조
DMF (90 mL) 중의 화합물 4c (6.10 g, 9.61 mmol) 및 N,N-diBoc-히드록실아민 (2.69 g, 11.53 mmol)의 교반 된 혼합물에 NaH (60 wt. %, 500 mg, 12.49 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가열하고 이 온도에서 12시간 동안 유지시켰다. 반응 혼합물을 감압하에 증발시키고, 생성 된 잔사를 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공 증발시켜 화합물 7a (5.70 g, 75 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.05 (t, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.64 (m, 42H), 3.37 (t, 2H), 1.51 (d, 18H).
화합물 7b의 제조
화합물 7a (5.70 g, 7.21 mmol), 및 MeOH (100 mL) 중 Pd / C (10 wt. %, 570 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 1.9 mL, 7.2 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 30 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 7b (5.10g, 87 %)를 무색의 오일로서 제조하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.21 (t, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.95-3.78 (m, 42H), 3.32 (s, 2H), 1.63 (s, 18H).
Figure pct00132
화합물 7c의 제조
DMF (10 mL) 중 Z-Asp(OMe)-OH (100 mg, 0.36 mmol) 및 화합물 7b (340 mg, 0.43 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.25 mL, 1.42 mmol) 및 HBTU (337 g, 0.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2하에 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 7c (123 mg, 58 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1024.2.
화합물 7d의 제조
MeOH (5 mL) 중 화합물 7c (120 mg, 0.12 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 20 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.03 mL, 0.12 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 7d (120 mg)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
화합물 7e의 제조
Figure pct00133
실시예 11의 화합물 6e와 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 7d로부터 화합물 7e를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1747.1.
실시예 13. 화합물 8f의 제조
Figure pct00134
화합물 8a의 제조
아세톤 (30 mL) 중 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄올 (5.0 g, 29.6 mmol)의 용액에 NaI (13.3 g, 88.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 8a (7.0g, 91 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.80-3.73 (m, 4H), 3.72-3.65 (m, 4H), 3.63-3.61 (m, 2H), 3.27 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
화합물 8b의 제조
DMF (20 mL) 중의 화합물 8a (2.0 g, 7.69 mmol) 및 N,N-diBoc-히드 록실아민 (2.33 g, 10.00 mmol)의 교반 된 혼합물에 NaH (500 mg, 12.49 mmol)를 N2 하에 0 ℃에서 첨가하였다. 실온에서 17 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 포화 aq. NH4Cl(50 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 8b (1.54 g, 54 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.01 (br s, 2H), 3.44 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.52 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]+ 410.7.
화합물 8c의 제조
DMSO (2 mL) 및 DCM (2 mL) 중 화합물 8b (123 mg, 0.242 mmol)의 교반 된 용액에 SO3·피리딘 착물 (116 mg, 0.726 mmol) 및 트리에틸아민 (0.17 mL, 1.21 mmol)을 N2 하에 0 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 후, 반응 혼합물을 포화 aq. NH4Cl(50 mL)로 희석시키고 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고 무수 MgSO4로 건조하고 여과하였다. 감압 농축하여 화합물 8c (88 mg)를 얻었으며, 이것을 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.74 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.77-3.69 (m, 6H), 3.42 (m, 2H).
Figure pct00135
화합물 8d의 제조
MeOH (10 mL) 중 베타-글루탐산 (500 mg, 0.339 mmol)의 용액에 티오닐 클로라이드 (0.148 mL, 2.04 mmol)를 N2하 0 ℃에서 첨가하였다. 24 시간 후, 반응 혼합물을 농축하여 화합물 8d (697 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40-7.27 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.56 (s, 2H), 2.13 (br s,1H).
화합물 8e의 제조
MeOH (5 mL) 중 화합물 8d (34 mg, 0.16 mmol) 및 화합물 8c (88 mg, 0.24 mmol)의 용액에 실온에서 N2하에 NaCNBH3 (10 mg, 0.16 mmol)을 첨가하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 8e (53 mg, 63 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25 (m, 10H), 5.60 (br s, 2H), 5.03 (s, 4H), 3.80-3.25 (m, 20H), 2.81 (s, 4H).
화합물 8f의 제조
Figure pct00136
실시예　11에서 화합물 6e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 8e로부터 화합물 8f를 제조하였다.
실시예 14. 화합물 9j의 제조
Figure pct00137
화합물 9a의 제조
DCM (400 mL) 중 헥사에틸렌 글리콜 (10.48 g, 37.12 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 이미다졸 (3.20 g, 44.54 mmol)을 첨가하였다. 5분 후, 반응 혼합물을 TBSCl (5.60 g, 37.12 mmol)의 DCM (50 mL) 용액에 N2 대기하에 동일한 온도에서 적가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 교반하고, N2하에 21시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고 DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공에서 증발시켜 화합물 9a (6.70 g, 46 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.77-3.71 (m, 4H), 3.66-3.60 (m, 18H), 3.56-3.54 (t, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.06 (s, 6H).
화합물 9b의 제조
무수(dry) THF (40 mL) 중 화합물 9a (3.32 g, 8.37 mmol)의 용액에 N2하에 0℃에서 NaH (오일 중 55 %, 438 mg, 10.05 mmol)를 첨가하였다. 30 분 후, 동일한 온도에서 N2하에 MeI (0.78 mL, 12.56 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 교반하고 N2하에 18시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응이 완료된 후, H2O (10 mL)로 퀀칭시키고 EA (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 포화 aq. NH4Cl (5 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 감압하에 증발시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공 하에서 증발시켜 화합물 9b (3.16 g, 92 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.78-3.75 (t, 2H), 3.65 (s, 20H), 3.57-3.54 (t, 4H), 3.38 (s, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.06 (s, 6H).
화합물 9c의 제조
아세톤 (100 mL) 중 화합물 9b (3.16 g, 7.69 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 존스 시약 (10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 교반하고 N2하에 17시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 증발시켰다. 잔사를 H2O (100 mL)로 희석시키고 CHCl3 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 감압하에 증발시켰다. 생성 된 조 화합물 9c (2.28g, 95 %)를 더 이상의 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.16 (s, 2H), 3.76-3.75 (t, 2H), 3.69-3.67 (m, 16H), 3.57-3.55 (t, 2H), 3.38 (s, 3H).
화합물 9d의 제조
DMF (30 mL) 중 화합물 9c (2.28 g, 7.34 mmol) 및 H-Lys(Z)-OMe 하이드로클로라이드 (2.91 g, 8.81 mmol)의 교반 된 혼합물을 DIPEA (3.8 mL, 22.03 mmol), HOBt (1.29 g, 9.55 mmol) 및 EDC · HCl (1.83 g, 9.55 mmol)의 용액에 첨가하였다. N2하에 실온에서 14시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9d (1.23g, 72 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.31 (m, 5H), 5.10 (s, 2H), 5.00 (s, 1H), 4.68-4.62 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.68-3.64 (m, 16H), 3.56 (t, 2H), 3.39( s, 3H), 3.20 (m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.55 (m, 1H), 1.40 (m, 1H). EI-MS m/z:[M+H]+ 586.8, [M+Na]+ 608.9.
화합물 9e의 제조
THF / MeOH / H2O (18 mL / 6 mL / 6 mL) 중 화합물 9d (2.16 g, 3.68 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 LiOH 일수화물 (307 mg, 7.31 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그런 다음 용액의 pH를 1N aq. HCl로 2 ~ 3으로 조정하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고 DCM (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 9e (2.28 g, 99 %)를 생성시켰으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34-7.30 (m, 5H), 5.08 (s, 2H), 4.66-4.60 (q, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.67-3.55 (m, 18H), 3.37 (s, 3H), 3.20 (m, 2H), 1.87 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.53 (m, 1H), 1.38 (m, 1H).
화합물 9f의 제조
DMF (8 mL) 중의 화합물 9e (502 mg, 0.88 mmol) 및 화합물 7b (700 mg)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.45 mL, 2.63 mmol), HOBt (154 mg, 0.11 mmol) 및 EDC · HCl (218 mg, 0.88 mmol)에 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 aq. NaHCO3 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 얻어진 잔사를 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9f (499 mg, 43 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.30 (m, 5H), 6.83 (s, 1H), 5.15 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.43 (q, 1H), 4.07 (t, 1H), 3.65-3.60 (m, 54H), 3.55-3.53 (m, 4H), 3.37 (s, 3H), 3.16 (m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.53-1.52 (d, 19H), 1.38 (m, 2H). EI-MS m/z: [M+H]+ 1337.5.
화합물 9g의 제조
MeOH (20 mL) 중의 화합물 9f (499 mg, 0.37 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 50 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.1 0.37 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 90분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (10 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 9g (458 mg, 98 %)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1218.6.
Figure pct00138
화합물 9h의 제조
DMF (0.5 mL) 중의 화합물 1i (45 mg, 0.04 mmol) 및 화합물 9g (57 mg, 0.05 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.019 mL, 0.11 mmol) 및 HBTU (18 mg, 0.05 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 N2하에 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)로 희석하고 HPLC로 정제하여 화합물 9h (65 mg, 57 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1181.7.
화합물 9i의 제조
MeOH (1.5 mL) 중 화합물 9h (65 mg, 0.03 mmol)의 용액에 H2O (1.5 mL) 중의 LiOH 일수화물 (10 mg, 0.24 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 1시간 후, 용액의 pH를 AcOH로 4 ~ 5로 조정하고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 9i (45 mg, 55 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+Na]+ 1098.7.
화합물 9j의 제조
DCM (1 mL) 중 화합물 9i (45 mg, 0.02 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 30 분 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / DMSO (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획물을 합하고 동결 건조하여 백색 고체로서 화합물 9j (14 mg, 32 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1026.3.
실시예 15. 화합물 10c의 제조
Figure pct00139
화합물 10a의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 9e (33 mg, 0.058 mmol) 및 화합물 7d (54 mg, 0.057 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.03 mL, 0.17 mmol), HOBt (10 mg, 0.075 mmol) 및 EDC · HCl (14 mg, 0.075 mmol)에 첨가하였다. N2하에 실온에서 14시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (8 mL), 포화 aq. NaHCO3 (8 mL) 및 염수 (8 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 10a (61 mg, 73 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1445.0, [M+H-Boc]+ 1344.9.
화합물 10b의 제조
MeOH (10 mL) 중 화합물 10a (60 mg, 0.04 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 30 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.01 mL, 0.01 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 10b (56 mg, 100 %)를 무색의 오일로서 제조하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1311.0, [M+Na+]+ 1332.9.
화합물 10c의 제조
Figure pct00140
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 10b로부터 화합물 10c를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1083.8.
실시예 16. 화합물 10d의 제조
Figure pct00141
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 10b로부터 화합물 10d를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 2181.3, 1/2[M+H]+ 1091.3.
실시예 17. 화합물 11j의 제조
Figure pct00142
화합물 11a의 제조
THF (50 mL) 중 화합물 3a (8.0 g, 18.3 mmol)의 용액에 LiBr (7.9 g, 91.6 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 환류하에 17 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11a (3.2g, 50 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.95-3.50 (m, 24H).
화합물 11b의 제조
아세톤 (20 mL) 중 화합물 11a (3.2 g, 12.3 mmol)의 용액에 존스 시약 (20 mL)을 0 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 15시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11b (3.2 g, 72 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.16 (s, 2H), 3.95-3.30 (m, 20H).
화합물 11c의 제조
MeOH (30 mL) 중 화합물 11b (3.2 g, 8.90 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (1.15 mL, 13.3 mmol)를 N2하에 0 ℃에서 첨가하였다. 16시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11c (2.7 g, 81 %)를 제조하였다. 1H-NMR(400MHz, CDCl3) δ 4.17 (s, 2H), 3.80-3.60 (m, 21H), 3.47 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
화합물 11d의 제조
화합물 11c (1.0 g, 2.67 mmol) 및 NaN3 (261 mg, 4.01 mmol)을 DMF (3 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 100 ℃에서 5시간 동안 가열하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 11d (854 mg, 95 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17 (s, 2H), 3.76-3.64 (m, 21H), 3.39 (t, J = 5.2 Hz, 2H).
화합물 11e의 제조
MeOH (25 mL) 중의 화합물 11d (854 mg, 2.54 mmol)의 교반 된 용액에 2 M aq. NaOH (6.3 mL, 12.64 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 감압하에 농축시켰다. 생성 된 현탁액을 0 ℃에서 냉각시키면서 수성 2N HCl로 산성화시켰다. 잔사를 CHCl3 (8 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 농축시켜 화합물 11e (783 mg, 96 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.16 (s, 2H), 3.76-3.65 (m, 18H), 3.40 (t, J = 5.2 Hz, 2H).
Figure pct00143
화합물 11f의 제조
DMF (5 mL) 중 화합물 9e (520 mg, 0.91 mmol) 및 화합물 2d (270 mg, 0.91 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.47 mL, 2.72 mmol), HOBt (160 mg, 1.18 mmol) 및 EDC · HCl (226 mg, 1.18 mmol)의 용액에 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (15 mL), 포화 aq. NaHCO3 (15 mL) 및 염수 (15 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11f (631 mg, 85 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 819.1, [M+H-Boc]+ 719.1 [M+Na+]+ 841.1.
화합물 11g의 제조
MeOH (20 mL) 중의 화합물 11f (300 mg, 0.36 mmol) 및 Pd / C (10 중량%, 70 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.08 mL, 0.08 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 3시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 11g (200 mg, 99 %)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 685.1, [M+Na]+ 707.1.
화합물 11h의 제조
DMF (5 mL) 중 화합물 11g (100 mg, 0.14 mmol) 및 화합물 11e (44 mg, 0.14 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.024 mL, 0.41 mmol), HOBt (24 mg, 0.18 mmol) 및 EDC · HCl (34 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11h (73 mg, 53 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 988.4, [M+Na-Boc]+ 888.2, [M+Na]+ 1010.4.
화합물 11i의 제조
MeOH (7 mL) 중의 화합물 11h (73 mg, 0.07 mmol) 및 Pd / C (10 wt %, 10 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4- 디옥산 중 4 N, 0.018 mL, 0.018 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 11i (72 mg, 99 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 962.4, [M+Na]+ 984.4.
화합물 11j의 제조
Figure pct00144
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 11i 및 화합물 11i로부터 화합물 11j를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1932.5.
실시예 18. 화합물 11k의 제조
Figure pct00145
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 11i로부터 화합물 11k를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1947.1.
실시예 19. 화합물 12c의 제조
Figure pct00146
화합물 12a의 제조
DMF (5 mL) 중 화합물 9g (235 mg, 0.1929 mmol) 및 Z-Asp(OMe)-OH (54 mg, 0.212 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.13 mL, 0.77 mmol) 및 HBTU (110 mg, 0.35 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (7 mL), 포화 aq. NaHCO3 (7 mL) 및 염수 (7 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 12a (260 mg, 93 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (t, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.54-7.52 (m, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.27-4.25 (q, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.58-3.48 (m, 52H), 3.19-3.18 (m, 3H), 3.04-3.03 (m, 3H), 1.44 (s, 18H), 1.39-1.37 (m, 3H), 1.21-1.19 (m, 3H). EI-MS m/z: [M+H-2Boc]+ 1031.6.
화합물 12b의 제조
MeOH (20 mL) 중의 화합물 12a (260 mg, 0.179 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 72 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.040 mL, 0.179 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 3시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 12b (242 mg, 100 %)를 무색의 오일로서 제조하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 625.0, [M+H-Boc]+ 525.0, [M+H-2Boc]+ 424.9.
화합물 12c의 제조
Figure pct00147
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 12b로부터 화합물 12c를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1083.5.
실시예 20. 화합물 12d의 제조
Figure pct00148
화합물 12d는 실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 12b로부터 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1090.5.
실시예 21. 화합물 13e의 제조
Figure pct00149
화합물 13a의 제조
DMF (5.0 mL) 중의 Z-Glu(OMe)-OH (222 mg, 0.75 mmol) 및 화합물 7b (500 mg, 0.62 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.22 mL, 1.25 mmol) 및 HBTU (356 mg, 0.94 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14 시간 동안 N2하에 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고 EA (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 13a (370 mg, 57 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.34(br, 5H), 6.73(br, 1H), 5.72(d, J=7.6Hz, 1H), 5.06(br, 2H), 4.28-4.18(m, 1H), 4.07(t,J=4.4Hz, 2H), 3.76-3.71(m, 2H), 3.70-3.50(m, 45H), 3.48-3.42(m, 2H), 2.53-2.36(m, 2H), 2.20-2.08(m, 1H), 2.00-1.88(m, 1H), 1.53(s, 18H). EI-MS m/z: [M+Na]+ 1061.2.
화합물 13b의 제조
1,4-디옥산 중 4N HCl (0.08 mL, 0.32 mmol)에 MeOH (8 mL) 중 화합물 13a (370 mg, 0.35 mmol) 및 Pd / C (38 mg)의 교반 된 혼합물을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 20 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (400 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 황색 액체로서 화합물 13b (301 mg, 90 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.41(br, 1H), 8.09(br, 3H), 4.13(br, 1H), 3.85-3.56(m, 51H), 2.55(br, 2H), 2.38-2.18(m, 2H), 1.53(s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]+ 905.0.
화합물 13c의 제조
DIPEA (0.165 mL, 0.96 mmol) 및 HBTU (279 mg, 0.74 mmol)에 DMF (5.0 mL) 중 화합물 13b (300 mg, 0.32 mmol) 및 화합물 9e (366 mg, 0.64 mmol)의 교반 된 혼합물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14 시간 동안 N2하에 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 13c (290 mg, 62 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40-7.32(m, 7H), 7.00(br, 1H), 6.73(br, 1H), 5.07(br, 2H), 4.44-4.36(m, 2H), 4.07(t,J=4.8Hz, 2H), 4.02(br, 2H), 3.73(t,J = 5.2Hz, 2H), 3.71-3.52 (m, 68H), 3.24-3.14 (m, 2H), 2.52-2.34 (m, 3H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.98-1.82 (m, 4H), 1.76-1.64 (m, 3H), 1.53 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]+ 1459.7.
화합물 13d의 제조
0 ℃에서 MeOH (5 mL) 중 화합물 13c (290 mg, 0.19 mmol)의 교반 된 혼합물에 Pd / C (21 mg)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 20 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (400 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 황색 액체의 화합물 13c (247 mg, 94 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.20(d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (br, 1H), 7.30 (br, 1H), 4.66-4.48 (m, 2H), 4.07 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.01 (br, 2H), 3.74-3.62 (m, 70H), 3.57-3.53 (m, 2H), 3.04-2.98 (m, 2H), 2.24-2.15 (m, 2H), 2.14-2.06 (m, 2H), 1.99-1.86 (m, 4H), 1.84-1.74 (m, 2H), 1.53 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]+ 1325.5.
화합물 13e의 제조
Figure pct00150
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 13d로부터 화합물 13e를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 2181.5.
실시예 13f의 제조
Figure pct00151
실시예 14에서 화합물 9j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 13d로부터 화합물 13f를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 2195.5.
실시예 23. 화합물 14m의 제조
Figure pct00152
화합물 14a의 제조
DCM (30 mL) 중 6-아미노-1-헥산올 (5.0 g, 42.6 mmol)의 용액에 실온에서 di-tert-부틸 디카보네이트 (9.3 g, 42.6 mmol)를 첨가하였다. 18 시간 동안 교반 한 후, 0 ℃에서 트리에틸아민 (8.7 mL, 63.9 mmol) 및 t- 부틸디메틸실릴 클로라이드 (7.7 g, 51.2 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 실온에서 24 시간 후, 반응 혼합물을 포화 aq. NH4Cl (200 mL)로 희석하였다. 생성 된 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수 (100 mL)로 세척하고 무수 MgSO4로 건조시키고 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14a (12 g, 84 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.50(br s, 1H), 3.58(t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.10 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.72-1.20 (m, 17H), 0.88 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).
화합물 14b의 제조
THF (30 mL) 중 화합물 14a (6.0 g, 18.1 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 NaH (오일 중 60 %, 2.4 g, 54.2 mmol) 및 요오드화 메틸 (3.4 mL, 54.2 mmol)을 첨가하였다. 14 시간 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14b (4.3g, 69 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.59(t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.17 (br s, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.62-1.21 (m, 17H), 0.88 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).
화합물 14c의 제조
THF (15 mL) 중 화합물 14b (4.3 g, 12.4 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 TBAF (THF 중 1M, 15 mL, 14.9 mmol)를 첨가하였다. 5 시간 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고, 디에틸 에테르 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14c (3.0g, 98 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63(br s, 2H), 3.20(br s,2H), 2.82(s, 3H), 1.65-1.23(m, 17H).
화합물 14d의 제조
THF (30 mL) 중 화합물 14c (3.0 g, 12.9 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 사브롬화탄소 (6.4 g, 19.4 mmol) 및 트리페닐포스핀 (5.1 g, 19.4 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후, 반응 혼합물을 실리카겔을 통해 여과하고 디에틸 에테르 (100 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14d (3.3g, 86 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.40(t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.19 (br s, 2H), 2.83 (s, 3H), 1.90-1.70 (m, 2H), 1.65-1.40 (m, 13H), 1.38-1.25 (m, 2H).
Figure pct00153
화합물 14e의 제조
DCM 중 화합물 2d (35.0 g, 116.4 mmol) 및 5-포르밀살리실산 (21.3 g, 128.0 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (53.0 mL, 302.5 mmol) 및 EDC · HCl (35.7 g, 186.2 mmol) 1.6 L)을 0 ℃에서 가했다. 반응 혼합물을 N2하에 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 aq. NH4Cl 용액 (1.5 L)로 희석하고 DCM (2 x 1.5 L)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (1.5 L)로 세척하고 무수 MgSO4로 건조시키고 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14e (28.2 g, 59 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.37(br s, 1H), 9.86(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.07(br s, 2H), 7.90(d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.06-4.01 (m, 2H), 3.79-3.66 (m, 10H), 1.47 (s, 9H).
화합물 14f의 제조
MeCN (500 mL) 중 화합물 14e (28.0 g, 67.9 mmol)의 용액에 화합물 M (29.7 g, 74.7 mmol), 4Å 분자체 (30 g) 및 Ag2O (62.9 g, 272 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 12 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, H2O (800 mL)로 희석시키고, EtOAc (1 L)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14f (30.1 g, 61 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.99(s, 1H), 8.54(s, 1H), 7.99(d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.44 (br s, 1H), 7.18 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.45-5.30 (m, 4H), 4.26 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.02-3.97 (m, 2H), 3.80-3.55 (m, 13H), 2.06 (s, 9H), 1.46 (s, 9H).
화합물 14g의 제조
i-PrOH / CHCl3 (90 mL / 450 mL) 중의 화합물 14f (29.0 g, 39.8 mmol)의 용액에 0 ℃에서 실리카 겔 (16.7 g) 및 NaBH4 (3.70 g, 99.5 mmol)을 첨가하였다. N2 하에서 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (500 mL)로 켄칭시키고 EtOAc (1 L)로 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14g (24.1 g, 83 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98(s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.46(d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.41 (br, 1H), 7.04 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.41-5.24 (m, 4H), 4.67 (d,J = 6.6 Hz, 2H), 4.19 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.99-3.93 (m, 2H), 3.79-3.65 (m, 12H), 3.59-3.50 (m, 1H), 2.08-2.00 (m, 10H), 1.46 (s, 9H).
화합물 14h의 제조
DMF (50 mL) 중 화합물 14g (23.7 g, 31.5 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 비스(4-니트로페닐)카보네이트 (8.9 g, 29.3 mmol) 및 DIPEA (5.65 mL, 31.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고 1 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 H2O (500 mL)로 희석시키고 EtOAc (500 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수 (2 x 200 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 14h (22.4 g, 77 %)를 백색 발포체로 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28(d,J = 7.2 Hz, 2H), 8.13 (s, 1H), 7.68 (br s, 1H), 7.52 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (br, 1H), 7.38 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.44-5.24 (m, 6H), 4.21 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 4.00 (br s, 2H), 3.80-3.64 (m, 12 H), 3.64-3.54 (m, 1H), 2.06 (s, 9H), 1.47 (s, 9H).
Figure pct00154
화합물 14i의 제조
α-Amanitin (60.0 mg, 0.065 mmol)을 DMSO (2 mL)에 용해시키고 0 ℃에서 N2하에 화합물 14d (114 mg, 0.39 mmol)와 포사티움 tert-부톡시드 (0.065 mL, 0.065 mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 4 시간 후, 용액의 pH를 아세트산으로 4 ~ 5로 조정하였다. 잔사를 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 14i (29 mg, 39 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: [M-Boc]+ 1032.4.
화합물 14j의 제조
DCM (3 mL) 중 화합물 14i (29 mg, 0.026 mmol)의 용액에 0 ℃에서 TFA (0.5 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하고, 생성 된 잔사를 HPLC로 정제하여 화합물 14j (26 mg, 99 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1032.3, [M+Na]+ 1054.3.
화합물 14k의 제조
0 ℃에서 화합물 14j (13 mg, 0.011 mmol), 화합물 14h (10 mg, 0.011 mmol) 및 무수 HOBt (0.3 mg, 0.002 mmol)를 DMF (0.5 mL)에 용해시켰다. 이어서, 피리딘 (0.2 mL) 및 DIPEA (0.004 mL, 0.023 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 N2하에 24 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 14k (11 mg, 54 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1788.1.
화합물 14m의 제조
DCM (3 mL) 중 화합물 14l (7.5 mg, 0.0045 mmol)의 용액에 0 ℃에서 TFA (0.5 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 HPLC로 정제하여 화합물 14m (6.2 mg, 85 %)을 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+: 1548.5.
실시예 24. 화합물 15b의 제조
Figure pct00155
화합물 15a의 제조
실시예 23의 화합물 14h의 제조 방법과 유사한 방법으로 화합물 3e로부터 화합물 15a를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1128.3, [M+H-Boc]+ 1028.3, [M+H-2Boc]+ 928.2.
Figure pct00156
화합물 15b의 제조
실시예 23의 화합물 14m의 제조 방법과 유사한 방법으로 화합물 14j 및 화합물 15a로부터 화합물 15b를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1681.6.
실시예 25. 화합물 16f의 제조
Figure pct00157
화합물 16a의 제조
DCM (5 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (2.8 mL, 32.5 mmol)의 교반 된 용액에 DCM (15 mL) 중 DMSO (3.08 mL, 43.4 mmol)를 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 -78 ℃에서 30 분 동안 교반하였다 . 이 용액에 화합물 2a (3.8g, 21.7 mmol)를 -78 ℃에서 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. DCM (20 mL) 중의 트리에틸아민 (15.1 mL, 108 mmol)을 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, H2O (100 mL)로 희석하고 DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 16a (1.8 g, 48 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.74(s, 1H), 4.19(s, 2H), 3.77-3.69(m, 6H), 3.42(m, 2H).
화합물 16b의 제조
MeOH (15 mL) 중 화합물 16a (1.0 g, 3.32 mmol) 및 화합물 2d (1.72 g, 9.96 mmol)의 용액에 0 ℃에서 AcOH (0.19 mL, 3.32 mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 30 분 동안 교반 한 후, NaCNBH3 (658 mg, 9.96 mmol)을 첨가하고 2 시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석시킨 다음 DCM (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 16b (800 mg, 41 %)를 담황색 유상물로서 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.78(br s, 1H), 4.01(m, 2H), 3.69-3.65(m, 24H), 3.39(m, 4H), 3.04(m, 6H), 1.47(s, 9H).
화합물 16c의 제조
MeOH (10 mL) 중 화합물 16b (350 mg, 0.60 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 300 mg)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 8 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 16c를 무색 오일 (300 mg, 94 %)로 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.02(m, 2H), 3.71(m, 2H), 3.65-3.55(m, 22H), 2.92(m, 4H), 2.76(t,J = 5.2 Hz, 6H), 1.47 (s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]+ 527.6.
Figure pct00158
화합물 16d의 제조
DMF (15 mL) 중의 화합물 1j (1.57 g, 1.23 mmol) 및 화합물 16c (300 mg, 0.56 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.40 mL, 2.24 mmol) 및 PyBOP (711 mg, 1.34 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 4 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 H2O / DMSO (5 mL / 5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 16d (1.57 g, 91.8 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1502.7.
화합물 16f의 제조
MeOH / THF (5 mL / 10 mL) 중 화합물 16d (1.10 g, 0.36 mmol)의 용액에 NaOH (175 mg, 4.32 mmol)를 0 ℃에서 H2O (3 mL)에 적가하였다. 0 ℃에서 3 시간 후, 용액의 pH를 2N aq. HCl로 조정하였다. 잔사를 0 ℃에서 DCM (12 mL) 및 TFA (3 mL)로 희석시켰다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 잔사를 H2O / MeCN (7.5 mL / 7.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 16f (432 mg, 46 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1298.5.
실시예 26. 화합물 16g의 제조
Figure pct00159
실시예 25에서 화합물 16f를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 16c로부터 화합물 16g를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1284.5.
실시예 27. 화합물 17d의 제조
Figure pct00160
화합물 17a의 제조
DCM (4 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (0.62 mL, 7.3 mmol)의 교반 된 용액에 DMSO (1.04 mL, 14.6 mmol)를 DCM (10 mL)에 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 -78 ℃에서 30 분 동안 교반하였다. 이 용액에 화합물 3b (1.5 g, 4.88 mmol)를 -78 ℃에서 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. DCM (7 mL) 중의 트리에틸아민 (2.72 mL, 19.50 mmol)을 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 감압 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 17a (1.23 g, 82 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.73(s, 1H), 4.16(s, 2H), 3.75-3.61(m, 18H), 3.39(t,J = 5.2 Hz, 2H).
화합물 17b의 제조
MeOH (5 mL) 중의 화합물 17a (1.30 g, 4.25 mmol) 및 화합물 2d (492 mg, 1.63 mmol)의 교반 된 혼합물에 NaCNBH3 (257 mg, 4.09 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2 시간에 걸쳐 실온으로 서서히 가열하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 17b (620 mg, 45 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.96(br,1H), 3.79(t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.59 (t,J = 4.8 Hz, 4H), 3.56-3.46 (m, 38H), 3.44-3.37 (m, 10H), 2.66-2.56 (m, 6H), 1.39 (s, 9H).
화합물 17c의 제조
MeOH (7 mL) 중 화합물 17b (300 mg, 0.35 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 38 mg)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 4 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (400 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 17c를 무색 오일 (253 mg, 90 %)로 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.79(t,J=4.4Hz, 2H), 3.55-3.45(m, 38H), 3.42(t,J = 6.0 Hz, 10H), 2.66-2.56 (m, 10H), 1.39 (s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]+ 791.0.
화합물 17d의 제조
Figure pct00161
실시예 25에서 화합물 16f를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 17c로부터 화합물 17d를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1415.6.
실시예 28. 화합물 18c의 제조
Figure pct00162
화합물 18a의 제조
MeOH (4 mL) 중의 화합물 17a (998 mg, 3.26 mmol) 및 화합물 3e (670 mg, 1.25 mmol)의 교반 된 혼합물에 NaCNBH3 (197 mg, 3.14 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2 시간에 걸쳐 실온으로 서서히 가열하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 18a (668 mg, 49 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.97(m, 2H), 3.63-3.57(m, 6H), 3.56-3.44(m, 46H), 3.44-3.36(m, 12H), 2.66-2.61(m, 6H), 1.45(s, 18H).
화합물 18b의 제조
MeOH (1.2 mL) 중의 화합물 18a (60 mg, 0.055 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 6 mg)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 4 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (400 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 18b (55 mg, 96 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.97(m, 2H), 3.62-3.57(m, 4H), 3.54-3.45(m, 50H), 3.45-3.39(m, 10H), 2.66-2.61(m, 10H), 1.46(s, 18H). EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1023.3.
Figure pct00163
실시예 25의 화합물 16f와 유사한 제조 방법에 의해 화합물 1i 및 화합물 18b로부터 화합물 18c를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+1481.7.
실시예 29. 화합물 19c의 제조
Figure pct00164
화합물 19a의 제조
MeOH (1 mL) 중의 화합물 17a (118 mg, 0.16 mmol) 및 화합물 4e (232 mg, 0.76 mmol)의 교반 된 혼합물에 NaCNBH3 (197 mg, 3.14 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2 시간에 걸쳐 실온으로 서서히 가열하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압하에 증발시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 19a (135 mg, 68 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.72(br s, 1H), 4.02(t, 2H), 3.72-3.53(m, 86H), 3.39(t, 4H), 2.77(bs, 4H), 1.47(s, 9H). EI-MS m/z:[M+H]+ 1239.6.
화합물 19b의 제조
MeOH (2 mL) 중 화합물 19a (133 mg, 0.107 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 26 mg)를 첨가하고 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.054 mL, 0.21 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 실온에서 40 분 동안 수소하에 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 19b (132 mg, 97 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79(s, 1H), 4.06-4.02(m, 8H), 3.88(m, 2H), 3.73-3.64(m, 80H), 3.22(s, 4H), 1.47(s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]+: 1187.5.
화합물 19c의 제조
Figure pct00165
실시예 25에서 화합물 16f를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 19b로부터 화합물 19c를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1614.5.
실시예 30. 화합물 20q의 제조
Figure pct00166
화합물 20a의 제조
아세톤 (30 mL) 중 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄올 (5.0 g, 29.6 mmol)의 용액에 NaI (13.3 g, 88.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 12 시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20a (7.0 g, 91 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.80-3.73(m, 4H), 3.72-3.65(m, 4H), 3.63-3.61(m, 2H), 3.27(t,J = 6.4 Hz, 2H).
화합물 20b의 제조
아세톤 (200 mL) 중의 화합물 20a (7.0 g, 26.9 mmol) 용액에 존스 시약 (20 mL)을 0 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 15 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (150 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20b (7.0 g, 94 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.22 (s, 2H), 3.85-3.70 (m, 6H), 3.35-3.25 (m, 2H).
화합물 20c의 제조
MeOH (70 mL) 중 화합물 20b (7.0 g, 25.5 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (3.2 mL, 38.3 mmol)를 0 ℃에서 N2하에 첨가하였다. 16 시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20c (5.7 g, 77 %)를 제조하였다. %). 1H-NMR(400MHz, CDCl3) δ4.19 (s, 2H), 3.80-3.67 (m, 9H), 3.27 (t,J = 6.8Hz, 2H).
화합물 20d의 제조
DMF (30 mL) 중 화합물 20c (2.5 g, 8.67 mmol) 및 N,N-diBoc-하이드 록실아민 (2.6 g, 11.2 mmol)의 용액에 0 ℃, N2하에서 NaH (오일 중 60 %, 454 mg, 10.4 mmol)를 첨가하였다. 15 시간 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20d (1.87 g, 73 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17(s, 2H), 4.08(m, 2H), 3.78-3.65(m, 9H), 1.53(s, 18H).
화합물 20e의 제조
THF / MeOH / H2O (45 mL / 15 mL / 15 mL) 중 화합물 20d (1.87 g, 6.38 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 NaOH (600 mg, 15.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 그런 다음 용액의 pH를 1N aq. HCl로 4 ~ 5로 조정하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 화합물 20e (1.6 g, 90 %)를 무색의 오일로서 제조하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17(s, 2H), 4.08-4.02(m, 2H), 3.80-3.67(m, 6H), 1.48(s, 9H).
Figure pct00167
화합물 20f의 제조
MeOH (38 mL) 중의 화합물 2a (6.7 g, 38.2 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 1.0 g)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 8 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 20f (5.6 g, 99 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.95-3.25(m, 12H), 2.90(s, 2H).
화합물 20g의 제조
THF (200 mL) 중 화합물 20f (5.6 g, 38.2 mmol) 및 트리에틸아민 (8 mL, 57.6 mmol)의 용액에 벤질 클로로포르메이트 (6 mL, 42.2 mmol)를 0 ℃에서 30 분 동안 서서히 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 농축시키고 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20g (5.7 g, 53 %)을 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.20(m, 5H), 5.61(br s, 1H), 5.07(s, 2H), 3.85-3.20(m, 12H).
화합물 20h의 제조
DCM (30 mL) 중 화합물 20g (2.7 g, 9.53 mM)의 용액에 N2하에 실온에서 트리에틸아민 (1.9 mL, 12.3 mmol) 및 p-톨루엔설포닐 클로라이드 (2.3 g, 10.4 mmol)를 첨가하였다. 8 시간 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석시키고 DCM (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20h (3.51 g, 84 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.78(d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.45-7.25 (m, 7H), 5.20 (br s, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.75-3.25 (m, 10H), 2.43 (s, 3H).
화합물 20i의 제조
DMF (27 mL) 중의 화합물 20h (3.51 g, 8.02 mmol) 및 NaN3 (3.8 g, 57.6 mmol)의 용액을 100 ℃에서 15 시간 동안 가열하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20i (2.05 g, 83 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 5H), 5.20(br s, 1H), 5.10(s, 2H), 3.80-3.25(m, 12H).
화합물 20j의 제조
트리페닐포스핀(triphenylphosphine) (2.09 g, 7.97 mmol)을 THF (27 mL) 중 화합물 20i (2.05 g, 6.64 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. N2하에 2 시간 동안 교반 한 후, H2O (0.6 mL, 33.2 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 3 시간 동안 환류시켰다. 그 후 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20j (1.78 g, 95 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 5H), 5.63(br s, 1H), 5.10(s, 2H), 3.80-3.25(m, 10H), 2.88(s, 2H).
Figure pct00168
화합물 20k의 제조
DCM (28 mL) 중 DMSO (2.3 mL, 31.9 mmol)를 DCM (14 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (1.4 mL, 15.9 mmol)의 교반 된 용액에 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 -78 ℃에서 30 분 동안 교반하였다 . 이 용액에 -78 ℃에서 화합물 20g (3.01 g, 10.6 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 -78 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 트리에틸아민 (7.4 mL, 53.1 mmol)을 첨가하고 반응물을 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 20k (2.6 g)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.70(s, 1H), 7.45-7.25(m, 5H), 5.25(br s, 1H), 5.10(s, 2H), 3.80-3.25(m, 10H).
화합물 20l의 제조
MeOH (63 mL) 중의 화합물 20j (1.78 g, 6.30 mmol) 및 화합물 20k (2.13 g, 7.56 mmol)의 용액에 실온에서 N2하에 NaCNBH3 (674 mg, 10.7 mmol)을 첨가하였다. 3 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20l (2.01 g, 58 %)을 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 10H), 5.60(br s, 2H), 5.03(s, 4H), 3.80-3.25(m, 20H), 2.81(s, 4H).
화합물 20m의 제조
DMF (10 mL) 중 화합물 20I (500 mg, 0.91 mmol) 및 화합물 20e (306 mg, 1.09 mmol)의 교반 된 용액에 DIPEA (0.4 mL, 2.28 mmol) 및 PyBOP (713 mg, 1.36 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 6 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 20m (318 mg, 43 %)을 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 10H), 5.47(br s, 1H), 5.37(br s, 1H), 5.09(s, 4H), 3.80-3.25(m, 34H), 1.46(s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]+ 808.9.
화합물 20n의 제조
MeOH (30 mL) 중 화합물 20m (318 mg, 0.39 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 1.0 g)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 20n (180 mg)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 541.2.
Figure pct00169
화합물 20o의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 1i (130 mg, 0.10 mmol) 및 화합물 20n (26 mg, 0.04 mmol)의 교반 된 용액에 DIPEA (0.034 mL, 0.19 mmol) 및 PyBOP (63 mg, 0.12 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 30 분 동안 교반 한 후, 반응물을 N2하에 20 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 백색 고체로서 화합물 20o (28 mg, 10 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1481.5, 1/2 [M+Na]+ 1503.8.
화합물 20p의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 20o (28 mg, 0.009 mmol)의 용액에 -5 ℃에서 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (2 mg, 0.047 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -5 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 용액의 pH를 아세트산으로 4 ~ 5로 조절하였다. 잔사를 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고 HPLC로 정제하여 백색 고체로서 화합물 20p (16 mg, 67 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+: 1341.4.
화합물 20q의 제조
DCM (2 mL) 중 화합물 20p (16 mg, 0.0059 mmol)의 용액에 0 ℃에서 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 20q (8.5 mg, 56 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+: 1291.3.
실시예 31. 화합물 21i의 제조
Figure pct00170
화합물 21a의 제조
MeOH (146 mL) 중 화합물 3b (9.0 g, 29.2 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 3.0 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 수소하에 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, MeOH (100 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 21a (8.2 g, 100 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 3.80-3.60(m, 24H), 3.01(t,J = 4.8 Hz, 2H).
화합물 21b의 제조
THF (190 mL) 중 화합물 21a (8.24 g, 29.2 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 트리에틸아민 (6.1 mL, 43.9 mmol) 및 벤질 클로로포르메이트 (4.6 mL, 32.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 21b (5.59 g, 46 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.20(m, 5H), 5.61(br s, 1H), 5.09(s, 2H), 3.85-3.50(m, 22H), 3.39(m, 2H).
화합물 21c의 제조
THF (75 mL) 중 화합물 21b (3.09 g, 7.43 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 4-메틸모르폴린 (1.1 mL, 9.66 mmol) 및 메탄술폰산 무수물 (1.43 g, 8.18 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 5 시간 후, NaN3 (969 mg, 14.9 mmol) 및 DMF (20 mL)를 첨가하였다. 환류하에 16 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 21c (2.62 g, 80 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.20(m, 5H), 5.45(br s, 1H), 5.09(s, 2H), 3.85-3.25(m, 24H).
화합물 21d의 제조
THF (30 mL) 중 화합물 21c (2.62 g, 5.94 mmol)의 용액에 트리페닐 포스핀 (1.87 g, 7.13 mmol)을 실온에서 첨가하였다. N2하에 2 시간 동안 교반 한 후, H2O (0.54 mL, 29.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 3 시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 21d (2.47 g, 95 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 5H), 5.63(br s, 1H), 5.09(s, 2H), 3.80-3.25(m, 22H), 3.00-2.80(m, 2H).
Figure pct00171
화합물 21e의 제조
DCM (14 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (0.78 mL, 9.02 mmol)의 교반 된 용액에 DCM (6 mL) 중 DMSO (1.3 mL, 18.1 mmol)를 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 -78 ℃에서 30 분 동안 교반하였다 . 이 용액에 -78 ℃에서 화합물 21b (2.5 g, 6.01 mmol)를 첨가하였다. -78 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 트리에틸아민 (4.2 mL, 30.1 mmol)을 첨가하고 반응물을 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 21e (2.29 g)를 생성 시켰으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.70(s, 1H), 7.45-7.25(m, 5H), 5.25(br s, 1H), 5.10(s, 2H), 3.80-3.25(m, 24H).
화합물 21f의 제조
MeOH (50 mL) 중의 화합물 21d (2.47 g, 5.95 mmol) 및 화합물 21e (2.29 g, 5.52 mmol)의 용액에 N2하에 실온에서 NaCNBH3 (530 mg, 8.44 mmol)을 첨가하였다. 3 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 21f (2.05 g, 51 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 10H), 5.47(br s, 1H), 5.37(br s, 1H), 5.09(s, 4H), 3.80-3.25(m, 48H).
화합물 21g의 제조
DMF (6 mL) 중의 화합물 21f (380 mg, 0.61 mmol) 및 화합물 20e (206 mg, 0.73 mmol)의 교반 된 용액에 DIPEA (0.27 mL, 1.53 mmol) 및 HBTU (350 mg, 0.92 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 6 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (100 mL)으로 희석시키고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 21g (210 mg, 42 %)을 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.25(m, 10H), 5.47(br s, 1H), 5.37(br s, 1H), 5.09(s, 4H), 3.80-3.25(m, 34H), 1.46(s, 9H).
화합물 21h의 제조
MeOH (30 mL) 중 화합물 21g (210 mg, 0.19 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 1.0 g)를 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 수소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 21h (30 mg)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 805.2, [M+Na]+ 827.2.
화합물 21i의 제조
Figure pct00172
실시예 30에서 화합물 20q를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 21h로부터 화합물 21i를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1423.7, 1/2[M+Na]+ 1445.2.
실시예 32. 화합물 22h의 제조
Figure pct00173
화합물 22a의 제조
THF (50 mL) 중 화합물 3a (8.0 g, 18.3 mmol)의 용액에 실온에서 LiBr (7.9 g, 91.6 mmol)을 첨가하였다. 환류하에 17 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 22a (3.2 g, 50 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.95-3.50(m, 24H).
화합물 22b의 제조
0 ℃에서 아세톤 (20 mL) 중의 화합물 22a (3.2 g, 12.3 mmol)의 용액에 존스 시약 (20 mL)을 첨가하였다. 0 ℃에서 15 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 22b (3.2 g, 72 %)를 생성시켰다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.16(s, 2H), 3.95-3.30(m, 20H).
화합물 22c의 제조
MeOH (30 mL) 중 화합물 22b (3.2 g, 8.90 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 옥살릴 클로라이드 (1.15 mL, 13.3 mmol)를 첨가하였다. 16 시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 22c (2.7 g, 81 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17(s, 2H), 3.80-3.60(m, 21H), 3.47(t,J = 6.4 Hz, 2H).
화합물 22d의 제조
DMF (30 mL) 중의 화합물 22c (2.7 g, 7.23 mmol) 및 N,N-diBoc-하이드록실아민 (2.2 g, 9.4 mmol)의 용액에 NaH (오일중 60 %, 378 mg, 8.63 mmol)를 0 ℃에서 N2하에 첨가하였다. 17 시간 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 22d (2.1 g, 55 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17(s, 2H), 4.08(t,J = 5.2 Hz, 2H), 3.78-3.60 (m, 21H), 1.53 (s, 18H).
화합물 22e의 제조
THF / MeOH / H2O (30 mL / 10 mL / 10 mL) 중 화합물 22d (2.1 g, 3.99 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 NaOH (400 mg, 9.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 그런 다음 용액의 pH를 1N aq. HCl로 4 ~ 5로 조정하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 붓고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 22e (1.6 g)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.90(s, 1H), 4.15(s, 2H), 4.03(br s, 2H), 3.80-3.60(m, 18H), 1.47(s, 9H).
Figure pct00174
화합물 22f의 제조
DMF (5 mL) 중의 화합물 21f (200 mg, 0.24 mmol) 및 화합물 22e (152 mg, 0.36 mmol)의 교반 된 용액에 DIPEA (0.13 mL, 0.73 mmol) 및 HBTU (187 mg, 0.49 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6 시간 동안 N2하에 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 22f (100 mg, 34 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1205.6.
화합물 22g의 제조
MeOH (20 mL) 중 화합물 22f (100 mg, 0.08 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 20 mg)를 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 수소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 22g을 무색 오일 (70 mg)로 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+937.4, [M+Na]+959.3.
화합물 22h의 제조
Figure pct00175
실시예 30에서 화합물 20q를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 22g로부터 화합물 22h를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1489.4.
실시예 33. 화합물 23h의 제조
Figure pct00176
화합물 23a의 제조
THF (10 mL) 중 화합물 4a (483 mg, 0.69 mmol)의 용액에 LiBr (180 mg, 2.06 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2하에 12 시간 동안 환류시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 23a (330 mg, 78 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.81(t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.72-3.59 (m, 44H), 3.47 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
화합물 23b의 제조
0 ℃에서 아세톤 (2 mL) 중 화합물 23a (330 mg, 0.54 mmol)의 용액에 존스 시약 (2 mL)을 첨가하였다. 0 ℃에서 15 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (15 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 조 화합물 23b를 더 이상의 정제없이 사용하였다.
화합물 23c의 제조
MeOH (5 mL) 중의 조 화합물 23b (266 mg, 0.43 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.054 mL, 0.64 mmol)를 0 ℃에서 N2하에 첨가하였다. 16 시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 23c (200 mg, 2 단계에 대해 58 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ4.17(s, 2H), 3.81(t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.79-3.64 (m, 43H), 3.48 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
화합물 23d의 제조
DMF (3 mL) 중 화합물 23c (200 mg, 0.31 mmol)의 용액에 N,N-diBoc-하이드록실아민 (95 mg, 0.40 mmol) 및 NaH (오일 중 60 %, 16 mg, 0.37 mmol)를 0 ℃에서 N2하에 첨가하였다. 17 시간 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 H2O (5 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 23d (120 mg, 49 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17(s, 2H), 4.13(t,J = 8.0 Hz, 2H), 3.75-3.64 (m, 45H), 1.53 (s, 18H).
화합물 23e의 제조
THF / MeOH / H2O (3 mL / 1 mL / 1 mL) 중 화합물 23d (120 mg, 0.15 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 NaOH (15 mg, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 그런 다음 용액의 pH를 1N aq. HCl로 4 ~ 5로 조정하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 CHCl3 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 23e (100 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.23(t,J = 8.0 Hz, 2H), 4.15 (s, 2H), 4.08 (t,J = 4.0 Hz, 1H), 4.01 (t,J = 4.0 Hz, 1H), 3.74-3.64 (m, 40H), 1.53 (s, 9H).
Figure pct00177
화합물 23f의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 21f (80 mg, 0.09 mmol) 및 화합물 23e (100 mg, 0.15 mmol)의 교반 된 용액에 DIPEA (0.052 mL, 0.29 mmol) 및 HBTU (75 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 6 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석시키고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 23f (140 mg, 97 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.31(m, 10H), 5.44(br, 2H), 5.09(s, 4H), 4.34(s, 2H), 4.26-4.17(m, 4H), 4.09-4.08(m, 1H), 4.07(br, 1H), 3.73-3.47(m, 76H), 3.39-3.38(m, 4H), 1.53(s, 9H). EI-MS m/z:[M+Na]+ 1491.6, [M+H-Boc]+: 1369.6.
화합물 23g의 제조
MeOH (20 mL) 중 화합물 23f (140 mg, 0.09 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 20 mg)를 첨가 한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 수소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세척하였다. 농축시켜 화합물 23g을 무색 오일 (120 mg)로 제공하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1201.7, [M+Na]+ 1223.7.
화합물 23h의 제조
Figure pct00178
실시예 30에서 화합물 20q를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 23g로부터 화합물 23h를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1620.3, 1/2[M+Na]+ 1632.1.
실시예 34. 화합물 24l의 제조
Figure pct00179
화합물 24a의 제조
0 ℃에서 아세톤 (600 mL) 중 화합물 2-[2-(2-클로로에톡시)에톡시] 에탄올 (15.0 g, 88.9 mmol)의 용액에 존스 시약 (90 mL)을 천천히 첨가하였다. 0 ℃에서 15 시간 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 H2O (200 mL)로 희석시키고 CHCl3 (5 x 300 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4로 건조시켰다. 농축시켜 화합물 24a (20.0 g)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18(s, 2H), 3.81-3.64(m, 8H).
화합물 24b의 제조
MeOH (500 mL) 중 화합물 24a (20.0 g, 88.9 mmol)의 용액에 N2 하에서 옥살릴 클로라이드 (11.5 mL, 133.4 mmol)를 0 ℃에서 30 분 동안 첨가하였다. 16 시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 24b (13.0 g, 75 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18(s, 2H), 3.78-3.67(m, 9H), 3.65(t,J = 5.6 Hz, 2H).
화합물 24c의 제조
화합물 24b (13.0 g, 66.1 mmol) 및 NaN3 (6.4 g, 99.2 mmol)을 DMF (130 mL)에 용해시켰다. 100 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 염수 (200 mL)로 희석시키고 CHCl3 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 MgSO4로 건조시켰다. 농축시켜 화합물 24c (11.7 g, 87 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18(s, 2H), 3.76-3.67(m, 9H), 3.41(t,J = 5.6 Hz, 2H).
화합물 24d의 제조
THF / MeOH / H2O (300 mL / 100 mL / 100 mL) 중 화합물 24c (11.5 g, 56.6 mmol)의 용액에 0 ℃에서 NaOH (4.53 g, 113.2 mmol)를 첨가하였다. N2하에 0 ℃에서 2 시간 후, 용액의 pH를 4M aq. HCl로 2로 조정하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고 CHCl3 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 24d (10.7 g, 99 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.19(s, 2H), 3.79-3.77(m, 2H), 3.72-3.70(m, 4H), 3.44(t,J = 5.2 Hz, 2H).
Figure pct00180
화합물 24e의 제조
3구 플라스크에 H2O (40 mL), 1,4-디옥산 (70 mL) 및 H-Lys(Z)-OH (10 g, 35.7 mmol)를 연속적으로 로딩하였다. 상기 혼합물을 완전히 용해 될 때까지 교반하였다. 2M aq. Na2CO3를 첨가하여 pH를 약 10.5로 조정하였다. 동시에 2M aq. Na2CO3를 첨가하여 벤질 클로로포르메이트 (6.69 g, 39.2mmol)를 pH를 약 10-11로 유지하면서 첨가하였다. 적하 종료 후, 반응 액을 20 ℃에서 1 시간 교반하였다. 이어서, EtOAc (50 mL)를 첨가하고, 생성 된 혼합물의 pH를 c-HCl로 2 내지 3으로 조정하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켜 화합물 24e를 황색 오일 (14.7 g, 99 %)로 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.33-7.27(m, 10H), 5.07-5.04(d, 4H), 4.08(m, 1H), 3.09(t, 2H), 1.51(br s, 1H), 1.49(bs, 1H), 1.47-1.40(m, 4H).
화합물 24f의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 24e (400 mg, 0.96 mmol) 및 화합물 2d (261 mg, 0.86 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.40 mL, 2.37 mmol), HOBt (143 mg, 1.06 mmol) 및 EDC · HCl (240 mg, 1.25 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 붓고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하고 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 24f (380 mg, 59 %)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16(s, 1H), 7.34-7.28(m, 10H), 7.49(s, 1H), 5.08-5.07(m, 5H), 4.17(m, 1H), 3.99(t, 2H), 3.68-3.16(m, 10H), 3.17(d, 2H), 1.66(m, 1H), 1.51-1.27(m, 14H). EI-MS m/z: [M+H]+ 661.0.
화합물 24g의 제조
0 ℃에서 MeOH (10 mL) 중의 화합물 24f (370 mg, 0.55 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 74 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.27 mL, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 24g (223 mg, 87 %)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.02(s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.22(br, 2H), 7.90(br, 2H), 3.81(t, 2H), 3.56(m, 4H), 3.46(t, 2H), 3.39-3.27(m, 26H), 2.75(m, 2H), 1.73(q, 2H), 1.55(p, 2H), 1.40-1.33(m, 14H).
화합물 24h의 제조
DMF(15 mL) 중의 화합물 24g (1.0g, 5.29 mmol) 및 화합물 24d (1.1 g, 2.35 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.6 mL, 9.45 mmol), HOBt (746 mg, 5.52 mmol) 및 EDC · HCl (1.19 g, 6.42 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, DCM (3 x 50 mL)으로 추출하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 24h (1.25 g, 70 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36(s, 1H), 7.30(d, 1H), 7.08(s, 1H), 7.68(t, 1H), 4.46(q, 1H), 4.07-3.98-4.01(m, 4H), 3.98(s, 2H), 3.75-3.663(m, H), 3.57(t, 2H), 3.44(m, 6H), 3.28(m, 2H), 1.87(m, 1H), 1.66(m, 1H), 1.59-1.52(p, 2H), 1.48(s, 9H), 1.41-1.33(m, 2H). EI-MS m/z:[M+H]+ 735.0.
화합물 24i의 제조
0 ℃에서 MeOH (30 mL) 중의 화합물 24h (1.2 g, 0.163 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 250 mg)의 교반 된 혼합물에 4 N HCl (1,4- 다이옥산, 0.81 mL, 3.26 mmol)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 1.5 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 24i (1.39 g, 99 %)를 무색의 오일로서 제조하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.99(s, 1H), 8.22(t, 1H), 7.74(t, 1H), 7.61(d, 1H), 4.31(q, 1H), 3.93(s, 2H), 3.86(s, 2H), 3.79(t, 2H), 3.60-3.50(m, 18H), 3.06(q, 2H), 2.97(p, 4H), 1.60-1.49(m, 2H), 1.39(m, 11H), 1.20(m, 2H). EI-MS m/z:[M+H]+ 683.
Figure pct00181
화합물 24j의 제조
DMF (0.7 mL) 중의 화합물 1i (85 mg, 0.069 mmol) 및 화합물 24i (23 mg, 0.031 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.021 mL, 0.125 mmol) 및 HBTU (29 mg, 0.078 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 24j (67 mg, 68 %)를 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1552.5.
화합물 24k의 제조
MeOH (1.7 mL) 중 화합물 24j (67 mg, 0.021 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (1.7 mL) 중의 LiOH 일수화물 (16 mg, 0.388 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 아세트산 (0.018 mL)을 사용하여 중화시키고, 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 24k (37mg, 62 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1412.3.
화합물 24l의 제조
DCM (2.0 mL) 중 화합물 24k (37 mg, 0.013 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.4 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2로 날려 버렸다. 잔사를 H2O / 아세토니트릴 (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 24l (19.8 mg, 53 %)을 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1362.3.
실시예 35. 화합물 25e의 제조
Figure pct00182
화합물 25a의 제조
화합물 22c (1.0 g, 2.67 mmol) 및 NaN3 (261 mg, 4.01 mmol)을 DMF (3 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 100 ℃에서 5 시간 동안 가열하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 25a (854 mg, 95 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17(s, 2H), 3.76-3.64(m, 21H), 3.39(t,J = 5.2 Hz, 2H).
화합물 25b의 제조
0 ℃에서 MeOH (25 mL) 중 화합물 25a (854 mg, 2.54 mmol)의 교반 된 용액에, NaOH (6.3 mL, 12.64 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 감압하에 농축시켰다. 생성 된 현탁액을 0 ℃에서 냉각시키면서 aq. 2N HCl로 산성화시켰다. 잔사를 CHCl3 (8 x 500 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 농축시켜 화합물 25b (783 mg, 96 %)를 생성시켰다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.16(s, 2H), 3.76-3.65(m, 18H), 3.40(t,J = 5.2 Hz, 2H).
화합물 25c의 제조
DMF (3 mL) 중 화합물 25b (337 mg, 1.05 mmol) 및 화합물 24g (198 mg, 0.42 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.30 mL, 1.70 mmol) 및 HBTU (483 mg, 1.27 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 N2하에 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피 (EtOAc 내지 EtOAc / MeOH 10/1)로 정제하여 화합물 25c (358 mg, 84 %)를 생성시켰다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.98(s, 1H), 8.09(t,J = 5.2 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.31-4.25 (m, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.80 (m, 2H), 3.62-3.46 (m, 34H), 3.42-3.36 (m, 6H), 3.25-3.17 (m, 2H), 3.08-3.03 (m, 2H), 1.61-1.51 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.26-1.10 (m, 7H). EI-MS m/z: [M+H]+ 999.1.
화합물 25d의 제조
MeOH (7 mL) 중 화합물 25c (358 mg, 0.35 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 38 mg) 및 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.18 mL, 0.72 mmol ). 수소하에 실온에서 5 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (400 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 25d (314 mg, 93 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.98(s, 1H), 8.10(m, 1H), 7.68(m, 1H), 7.57(m, 1H), 4.31-4.25(m, 1H), 3.90(s, 2H), 3.84(s, 2H), 3.80(m, 2H), 3.62-3.46(m, 30H), 3.42-3.36(m, 10H), 3.45-3.16(m, 4H), 3.08-3.03(m, 3H), 2.72-2.66(m, 3H), 1.61-1.51(m, 2H), 1.39(s, 9H), 1.26-1.10(m, 6H). EI-MS m/z:[M+H]+ 947.1.
화합물 25e의 제조
Figure pct00183
실시예 34에서 화합물 24l을 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 25d로부터 화합물 25i를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1493.7.
실시예 36. 화합물 25f의 제조
Figure pct00184
실시예 34에서 화합물 24l을 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 25d로부터 화합물 25f를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+1508.2.
실시예 37. 화합물 26e의 제조
Figure pct00185
화합물 26a의 제조
DMF (10 mL) 중의 화합물 24e (1.0 g, 2.43 mmol) 및 화합물 3e (810 mg, 1.52 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.65 mL, 0.004 mmol), HOBt (218 mg, 1.61 mmol) 및 EDC · HCl (364 mg, 1.9 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (30 mL), 포화 aq. NaHCO3 (30 mL) 및 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 26a (988 mg, 73 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.33-7.26(m, 8H), 6.85(s, 1H), 5.63(s, 1H), 5.08-5.02(s, 4H), 4.16-4.11(m, 1H), 4.09-4.05(m, 2H), 3.72-3.70(m, 2H), 3.62-3.59(m, 14H), 3.53(s, 2H), 3.44-3.43(m, 2H), 3.18-3.16(m, 2H), 1.82(m, 1H), 1.72(s,7H), 1.66(m, 1H), 1.52(s, 18H), 1.38-1.36(m, 2H), 1.24-1.27(s, 1H). EI-MS m/z:[M+H-2Boc]+ 693.1.
화합물 26b의 제조
0 ℃에서 MeOH (6 mL) 중 화합물 26a (988 mg, 1.1 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 196 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.55 mL, 2.2 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 1.5 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 26b (767 mg, 99 %)를 황색 형태로 생성시키고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 625.0, [M+H-Boc]+ 525.0, [M+H-2Boc]+ 424.9.
화합물 26c의 제조
DMF (5 mL) 중의 화합물 26b (200 mg, 0.29 mmol) 및 화합물 25b (202 mg, 0.63 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.2 mL, 1.14 mmol), HOBt (89 mg, 0.66 mmol) 및 EDC · HCl (142 mg, 0.74 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 26c (270 mg, 77 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (t, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.54-7.52 (m, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.27-4.25 (q, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.58-3.48 (m, 52H), 3.19-3.18 (m, 3H), 3.04-3.03 (m, 3H), 1.44 (s, 18H), 1.39-1.37 (m, 3H), 1.21-1.19 (m, 3H). EI-MS m/z: [M+H-2Boc]+ 1031.6.
화합물 26d의 제조
0 ℃에서 MeOH (20 mL) 중의 화합물 26c (160 mg, 0.13 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 28 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.07 mL, 0.28 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 30 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 26d (140 mg, 91 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1179.7.
화합물 26e의 제조
Figure pct00186
실시예 34에서 화합물 24l을 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 26d로부터 화합물 26e를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1560.6, 1/3[M+H]+ 1040.7.
실시예 38. 화합물 27e의 제조
Figure pct00187
화합물 27a의 제조
DMF (4 mL) 중의 화합물 24e (228 mg, 0.55 mmol) 및 화합물 4e (256 mg, 0.36 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.19 ml, 1.1 mmol), HOBt (64 mg, 0.47 mmol) 및 EDC · HCl (91 mg, 0.47 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 4 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (20 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 27a (327 mg, 85 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.73(s, 1H), 7.33-7.26(m, 11H), 6.91(s, 1H), 5.67(br, 1H), 5.08-5.07(m, 5H), 4.15(m, 1H), 4.02(t, 2H), 3.72-3.44(m, 46H), 3.16(d, 2H), 1.82(m, 1H), 1.63(m, 1H), 1.55-1.36(m, 13H).
화합물 27b의 제조
0 ℃에서 MeOH (6 mL) 중 화합물 27a (327 mg, 0.309 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 65 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.15 mL, 0.618 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 1.5 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 27b (244 mg, 91 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 789.2.
화합물 27c의 제조
DIPEA (0.19 mL, 1.13 mmol), HOBt (95 mg, 0.707 mmol) 및 EDC · HCl (135 mg, 0.707 mmol)을 DMF (6 mL) 중의 화합물 25b (227 mg, 0.707 mmol) 및 화합물 27b (244 mg, 0.283 mmol)에 첨가하였다. N2하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (5 mL)에 붓고 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 27c (339 mg, 85 %)를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69(s, 1H), 7.29(d, 1H), 6.99(s, 1H), 6.82(s, 1H), 4.39(q, 1H), 3.99-3.94(m, 6H), 3.69-3.58(m, 80H), 3.51(t, 2H), 3.44-3.34(m, 8H), 3.25(m, 2H), 1.68-1.64(m, 1H), 1.53-1.48(m, 2H), 1.44(s, 9H), 1.33(m, 2H). EI-MS m/z:[M+H]+ 1395.6.
화합물 27d의 제조
0 ℃에서 MeOH (6 mL) 중 화합물 27c (339 mg, 0.242 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 67 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.12 mL, 0.484 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 30 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 27d (300 mg, 87 %)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1343.5.
화합물 27e의 제조
Figure pct00188
실시예 34에서 화합물 24l을 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 27d로부터 화합물 27e를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1692.5.
실시예 39. 화합물 28d의 제조
화합물 28c의 제조
Figure pct00189
실시예 35에서 화합물 25d를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 H-D-Lys(Z)-OH로부터 화합물 28c를 제조하였다.
화합물 28d의 제조
Figure pct00190
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 28c로부터 화합물 28d를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1494.9.
실시예 40. 화합물 28e의 제조
Figure pct00191
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 28c로부터 화합물 28e를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1509.2.
실시예 41. 화합물 29j의 제조
Figure pct00192
화합물 29a의 제조
DCM (100 mL) 중 헥사에틸렌글리콜 (25.0 g, 88.5 mmol)의 용액에 N2하에 0 ℃에서 트리에틸아민 (61.7 mL, 443 mmol) 및 p-톨루엔설포닐 클로라이드 (50.6 g, 266 mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 5 시간 후, 반응 혼합물을 1N aq. HCl (200 mL)로 세척하고 DCM (2 x 200 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 포화 aq. NaHCO3 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 29a (45.0 g, 87 %)를 갈색 오일로서 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79(d,J = 7.6 Hz, 4H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 4H), 4.16-4.14 (m, 4H), 3.69-3.67 (m, 4H), 3.64-3.56 (m, 16H), 2.44 (s, 6H).
화합물 29b의 제조
DMF (100 mL) 중 화합물 29a (17.6 g, 29.7 mmol)의 용액에 NaN3 (9.65 g, 148 mmol) 및 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (550 mg, 1.49 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80 ℃로 가열하였다. 80 ℃에서 16 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 DCM (100 mL)으로 세척하였다. 농축시킨 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 29b (9.4 g, 94 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68(m, 20H), 3.39(t, 4H).
화합물 29c의 제조
DCM (24 mL) 및 톨루엔 (24 mL) 중 화합물 29b (8.4 g, 24.9 mmol)의 용액에 1 N aq. HCl (40.3 mL) 및 트리페닐포스핀 (6.9 g, 23.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 N2하에 16 시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 용매를 제거한 후, H2O (20 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 수상을 EtOAc (20 mL)로 추출하였다. 이어서, 수상(aqueous phase)의 pH를 13으로 조정하였다. 생성된 수상(aqueous phase)을 DCM (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 29c (6.6 g, 84 %)를 무색 오일로서 생성시켰다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.67(m, 20H), 3.52(t, 2H), 3.39(t, 2H), 2.86(t, 2H). EI-MS m/z:[M+H]+ 306.9.
Figure pct00193
화합물 29d의 제조
DMF(15 mL) 중의 L-글루탐산 디메틸 에스테르 염산염 (1.3 g, 6.14 mmol) 및 화합물 20e (1.72 g, 6.14 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (2.67 mL, 15.4 mmol) 및 HBTU (3.49 g, 9.21 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고, N2 하에서 16 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 DCM (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 얻어진 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 29d (2.18 g, 81 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ10.00(s, 1H), 8.04(d, 1H), 4.34(m, 1H), 3.93(s, 1H), 3.77(s, 1H), 3.63(s, 3H), 3.58(s, 9H), 3.38-3.34(t, 2H), 2.14(m,H), 1.90(m, 1H), 1.39(s, 9H). EI-MS m/z:[M+H]+ 437.35.
화합물 29e의 제조
THF : MeOH : H2O (12 mL : 4 mL : 4 mL) 중 화합물 29d (2.18 g, 4.99 mmol)의 용액에 실온에서 N2하에 NaOH (499 mg, 12.5 mmol)를 첨가하였다. 3 시간 후, 반응 혼합물의 pH를 4로 조정하고 농축시켰다. 이어서, 잔사를 DCM / MeOH (80 mL / 20 mL)로 추출하였다. 농축시켜 화합물 29e (1.0 g, 49 %)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H-Boc]+ 309.20.
화합물 29f의 제조
DMF (10 mL) 중의 화합물 29e (1.0 g, 2.45 mmol) 및 화합물 29c (2.25 g, 7.35 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.7 mL, 9.79 mmol) 및 HBTU (2.79 g, 7.35 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고, 질소 하에서 16 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 DCM (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N aq. HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 얻어진 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 29f (611 mg, 25 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ9.97(s, 1H), 8.08(t, 1H), 7.85(t, 1H), 7.64(d, 1H), 4.27(m, 1H), 3.83(s, 2H), 3.82-3.61(m, 2H), 3.61-3.50(m, 42H), 3.42-3.37(m, 8H), 3.28-3.15(m, 4H), 2.90(s, H), 2.08-2.04(m, 2H), 1.88(m, 1H), 1.75(m, 1H), 1.39(s, 9H). EI-MS m/z:[M+H]+ 986.73.
화합물 29g의 제조
MeOH (50 mL) 중의 화합물 29f (611 mg, 0.62 mmol)의 교반 된 혼합물에 Pd / C (10 wt. %, 132 mg, 0.62 mmol)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 29g을 무색 오일 (518 mg, 미정제)로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 933.85.
Figure pct00194
화합물 29h의 제조
DMF (3 mL) 중 화합물 29g (35 mg, 0.037 mmol) 및 화합물 1i (106 mg, 0.086 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.026 mL, 0.150 mmol) 및 HBTU (40 mg, 0.105 mmol)를 첨가하였다. N2 하에서 실온에서 16 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (20 mL)으로 희석시키고 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 0.5 N HCl (20 mL), 포화 aq. NaHCO3 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 얻어진 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 29h (81.4 mg, 65 %)를 얻었다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1677.94, 1/3[M+H]+ 1119.03.
화합물 29i의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 29h (81 mg, 0.024 mmol)의 용액에 -10 ℃에서 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (8.1 mg, 0.19 mmol)을 첨가하였다. -10 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 29i (53 mg, 72 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1537.86, 1/3[M+H]+ 1025.66.
화합물 29j의 제조
DCM (1.0 mL) 중의 화합물 29i (53 mg, 0.017 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.3 mL)를 0 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 동안 교반 한 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / MeCN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 29j (23.1 mg, 43 %)를 백색 고체로 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1487.99, 1/3[M+H]+ 992.40.
실시예 42. 화합물 29k의 제조
Figure pct00195
실시예 41에서 화합물 29j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 29g로부터 화합물 29j를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1501.93, 1/3[M+H]+ 1001.69.
실시예 43. 화합물 30b의 제조
화합물 30a의 제조
Figure pct00196
실시예 41의 화합물 29g를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 D-글루탐산 디메틸 에스테르 염산염으로부터 화합물 30a를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 933.89.
화합물 30b의 제조
Figure pct00197
실시예 41에서 화합물 29j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 30a로부터 화합물 30b를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1488.07, 1/3[M+H]+ 992.40.
실시예 44. 화합물 30c의 제조
Figure pct00198
실시예 41에서 화합물 29j를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 30a로부터 화합물 30j를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1501.93, 1/3[M+H]+ 1001.69.
실시예 45. 화합물 31f의 제조
Figure pct00199
화합물 31a의 제조
3구 플라스크에 H2O (18 mL), 1,4-디옥산 (30 mL) 및 L-오르니틴 모노하이드로클로라이드 (3.0 g, 17.8 mmol)를 연속적으로 넣었다. 상기 혼합물을 완전히 용해 될 때까지 교반하였다. 2M aq. Na2CO3를 첨가하여 pH를 약 10.5로 조정하였다. 동시에 2 M aq. Na2CO3를 첨가하여 pH를 약 10-11로 유지하면서 벤질 클로로포르메이트(6.37 g, 37.4 mmol)를 첨가하였다. 첨가 종료 후, 반응 혼합물을 20 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이어서, EtOAc (50 mL)를 첨가하고, 생성 된 혼합물의 pH를 c-HCl로 2 내지 3으로 조정하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켜 화합물 31a (7.1 g)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ12.54(s, 1H), 7.54(s, 1H), 7.44-7.29(m, 10H), 7.24-7.22(m, 1H), 5.16-5.00(d, 4H), 3.95-3.89(m, 1H), 3.00-2.96(m, 2H), 1.98-1.57(m, 1H), 1.56-1.46(m, 3H).
화합물 31b의 제조
DMF (10 mL) 중의 화합물 31a (1.30 g, 3.25 mmol) 및 화합물 2d (891 mg, 3.57 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.41 mL, 8.12 mmol) 및 HBTU(1.85 g, 4.87 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고, 질소 하에서 16 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 DCM (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N aq. HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 얻어진 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 31b (1.2 g, 57 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 647.54, [M+H-Boc]+ 547.47
화합물 31c의 제조
MeOH (50 mL) 중 화합물 31b (1.2 g, 1.86 mmol)의 교반 된 혼합물에 Pd / C (10 wt. %, 59 mg, 5.57 mmol)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 31c (717 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.93(s, 1H), 3.81(t, 2H), 3.55(t, 2H), 3.51(s, 5H), 3.42-3.22(m, 13H), 1.37(s, 9H).
화합물 31d의 제조
DMF (5 mL) 중의 화합물 31c (300 mg, 0.79 mmol) 및 화합물 25b (637 mg, 1.98 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.55 mL, 3.17 mmol) 및 HBTU (902 mg, 2.38 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고, 질소 하에서 16 시간 동안 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고 DCM (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N aq. HCl (30 mL), 포화 aq. NaHCO3 (30 mL) 및 염수 (30 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 31d (551 mg, 71 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 985.87.
화합물 31e의 제조
MeOH (30 mL) 중 화합물 31d (491 mg, 0.50 mmol)의 교반 된 혼합물에 Pd / C (10 wt. %, 106 mg, 1.00 mmol)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 31e (452 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+933.94.
화합물 31f의 제조
Figure pct00200
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 31e로부터 화합물 31f를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1488.20, 1/3[M+H]+ 992.54.
실시예 46. 화합물 31g의 제조
Figure pct00201
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 31e로부터 화합물 31j를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1502.23, 1/3[M+H]+ 1001.86.
실시예 47. 화합물 32c의 제조
Figure pct00202
화합물 32a의 제조
DMF (10 mL) 중 화합물 24g (483 mg, 0.855 mmol) 및 Fmoc-NH-PEG5-CH2CH2COOH (1.0 g, 3.89 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.6 mL, 7.07 mmol) 및 HBTU (972 mg, 5.30 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (10 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 32a (1.16 g, 90 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.77(d, 4H), 7.60(d, 4H), 7.39(t, 4H), 7.31(t, 4H), 4.39(d, 4H), 4.33(m, 1H), 4.22(m, 2H), 4.09(m, 2H), 3.71-3.39(m, 52H), 3.19(m, 2H), 2.51(m, 4H), 1.50(m, 1H), 1.46(m, 1H), 1.43(s, 9H), 1.25(m, 2H). EI-MS m/z:[M+H]+ 1520.0.
화합물 32b의 제조
THF (8 mL) 중 화합물 32a (500 mg, 0.328 mmol)의 용액에 실온에서 피페리딘 (2 mL)을 첨가하였다. 20 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 32b (175 mg, 50 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.41 (m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.75-3.56 (m, 43H), 3.54 (m, 2H), 3.24 (m, 2H), 2.89 (m, 3H), 2.52 (m, 4H), 1.83 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.39 (m, 2H). EI-MS m/z: [M+H]+ 975.5.
화합물 32c의 제조
Figure pct00203
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 32b로부터 화합물 32c를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1508.8.
실시예 48. 화합물 32d의 제조
Figure pct00204
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 32b로부터 화합물 32d를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1522.8.
실시예 49. 화합물 33e의 제조
Figure pct00205
화합물 33a의 제조
DMF (37 mL) 중의 화합물 24e (1.57 g, 3.79 mmol) 및 화합물 6b (1.30 g, 3.15 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.98 mL, 11.37 mmol) 및 HBTU (2.15 g, 5.68 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (40 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 40 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (40 mL), 포화 aq. NaHCO3 (40 mL) 및 염수 (40 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 33a (2.2 g, 88 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.99(s, 1H), 8.19(d, 1H), 7.79(t, 1H), 7.47(d, 1H), 7.34-7.31(m, 5H), 7.24(t, 1H), 5.01(d, 4H), 4.55(q, 1H), 3.91(q, 1H), 3.79(t, 2H), 3.55-3.48(m, 9H), 3.24-3.11(m, 2H), 2.75-2.54(m, 2H), 1.57-1.49(m, 2H), 1.38(s, 9H), 1.25(m, 2H). EI-MS m/z:[M+H]+ 790.47, [M+Na]+ 812.4.
화합물 33b의 제조
MeOH (60 mL) 중의 화합물 33a (2.2 g, 2.78 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 400 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 1.39 mL, 5.56 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (40 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 33b (1.67 g, 99 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ9.98(s, 1H), 8.87(d, 1H), 8.28(bs, 3H), 8.12(1H), 7.96(bs,3H), 4.51(q, 1H), 3.77(t, 2H), 3.72(bs, 1H), 3.57(s, 3H), 3.52-3.47(m, 7H), 3.12(s, 3H), 2.76-2.61(m, 4H), 1.71(q, 2H), 1.55(q, 2H), 1.36(s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]+ 522.4, [M+Na]+ 544.3.
화합물 33c의 제조
DMF (20 mL) 중 화합물 25b (1.98 g, 6.17 mmol) 및 화합물 33b (1.67 g, 2.80 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.95 mL, 11.23 mmol) 및 HBTU (3.19 g, 8.42 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 33c (2 g, 63 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.97(s, 1H), 8.28(d, 1H), 7.82(t, 1H), 7.65(s, 1H), 7.64(s, 1H), 4.54(q, 1H), 4.25(q, 1H), 3.91(s, 2H), 3.84(s, 2H), 3.80(t, 2H), 3.60-3.49(m, 48H), 3.26-3.12(m, 3H), 3.07(q, 2H), 2.75-2.54(m, 2H), 1.65-1.55(m, 2H), 1.39(s, 10H), 1.21(m, 3H). EI-MS m/z:[M+H]+ 1128.8, [M+Na]+ 1150.7.
화합물 33d의 제조
MeOH (20 mL) 중의 화합물 33c (1 g, 0.88 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 200 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.44 mL, 0.88 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 33d (936 mg, 92 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.98(s1H), 8.30(d, 1H), 7.70(t, 2H), 4.54(q, 1H), 4.26(q, 1H), 3.93(s, 2H), 3.85(s, 2H), 3.80(t, 2H), 3.61-3.49(m, 46H), 3.22-3.12(m, 4H), 3.06(q, 2H), 2.97(q, 4H), 2.76-2.54(m, 2H), 1.64-1.55(m, 2H), 1.39(s, 10H), 1.26(m, 3H). EI-MS m/z:[M+H]+ 1076.8.
화합물 33e의 제조
Figure pct00206
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 33d로부터 화합물 33e를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1552.2.
실시예 50. 화합물 33f의 제조
Figure pct00207
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 33d로부터 화합물 33f를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1566.4.
실시예 51. 화합물 34e의 제조
Figure pct00208
화합물 34a의 제조
DMF (5 mL) 중 화합물 24g (530 mg, 1.14 mmol) 및 Z-Asp(OMe)-OH (704 mg, 2.5 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.8 mL, 4.56 mmol) 및 HBTU (1.3 g, 3.42 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (40 mL), 포화 aq. NaHCO3 (40 mL) 및 염수 (40 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 34a를 제조하였다. (713 mg, 68 %)을 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.97(s, 1H), 7.88(m, 3H), 7.64(d, 2H), 7.51(d, 2H), 7.35(m, 10H), 5.02(m, 4H), 4.43-4.31(m, 2H), 4.17(m, 1H), 3.80(t, 2H), 3.58-3.50(m, 12H), 3.41-3.16(m, 6H), 2.98(m, 2H), 2.79-2.67(m, 3H), 2.57(m, 2H), 1.60-1.34(m, 13H).
화합물 34b의 제조
MeOH (5 mL) 중 화합물 34a (530 mg, 0.58 mmol)의 용액에 Pd / C (20 wt. %, 106 mg) 및 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.29 mL, 1.16 mmol ). 수소하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 34b (420 mg, 100 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ9.97(s, 1H), 8.62(d, 1H), 8.54(s, 1H), 8.27(m, 4H), 7.02(s, 1H), 4.17(m, 2H), 4.02(m, 1H), 3.76(t, 2H), 3.61(m, 4H), 3.51-3.11(m, 12H), 3.09-2.77(m, 8H), 1.60-1.24(m, 13H). EI-MS m/z:[M+H]+651.5.
화합물 34c의 제조
DMF (5 mL) 중의 화합물 34b (420 mg, 0.58 mmol) 및 화합물 25b (299 mg, 0.93 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.4 mL, 2.32 mmol) 및 HBTU (660 mg, 1.74 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (20 mL), 포화 aq. NaHCO3 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 34c (466 mg, 70.8 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.28(s, 1H), 7.78(q, 1H), 7.31(d, 1H), 7.71(s, 1H), 6.94(s, 1H), 4.85(m, 2H), 4.35(m, 1H), 4.07-4,03(m, 6H), 3.75-3.41(m, 56H), 3.23(q, 2H), 2.92-2.84(m, 4H), 1.91-1.32(m, 15H). EI-MS m/z: [M+2H]+ 1158.1.
화합물 34d의 제조
MeOH (20 mL) 중의 화합물 34c (260 mg, 0.21 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 52 mg)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.10 mL. 0.41 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 34d (249 mg, 100 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+2H]+ 1206.1.
화합물 34e의 제조
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 34d로부터 화합물 34e를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1610.4.
실시예 52. 화합물 34f의 제조
Figure pct00209
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1j 및 화합물 34d로부터 화합물 34f를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1624.3.
실시예 53. 화합물 35g의 제조
Figure pct00210
화합물 35a의 제조
DMF (10 mL) 중 Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH (500 mg, 1.17 mmol) 및 화합물 2d (424 mg, 1.404 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.61 mL, 3.52 mmol) 및 HBTU (665 mg, 1.175 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (20 mL), 포화 aq. NaHCO3 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축시킨 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 35a (708 mg, 89 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 672.7.
화합물 35b의 제조
THF (8 mL) 중 화합물 35a (708 mg, 1.04 mmol)의 용액에 피페리딘 (2 mL)을 실온에서 첨가하였다. 20 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 35b (400 mg, 85 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 450.1.
화합물 35c의 제조
DMF (10 mL) 중의 화합물 28a (203 mg, 0.484 mmol) 및 화합물 35b (200 mg, 0.44 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.19 mL, 1.1 mmol) 및 HBTU (253 mg, 0.66 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (10 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 35c (235 mg, 63 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 847.0.
화합물 35d의 제조
MeOH (15 mL) 중 화합물 35c (235 mg, 0.277 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 30 mg)를 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 35d (160 mg, 100 %)를 생성 시켰으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+578.7.
화합물 35e의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 35d (160 mg, 0.276 mmol) 및 화합물 25b (187 mg, 0.581 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.145 mL, 1.758 mmol) 및 HBTU (262 mg, 1.465 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (10 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 35e (260 mg, 79 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1185.4.
화합물 35f의 제조
MeOH (5 mL) 중 화합물 35e (70 mg, 0.059 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 15 mg)를 첨가하였다. 실온에서 90 분 동안 수소하에 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 35f (67 mg, 100 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+:1133.3.
화합물 35g의 제조
Figure pct00211
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 35f로부터 화합물 35g을 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1559.9.
실시예 54. 화합물 36e의 제조
Figure pct00212
화합물 36a의 제조
DMF (7 mL) 중 Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH (484 mg, 1.138 mmol) 및 화합물 28b (223 mg, 0.569 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.3 mL, 3.10 mmol) 및 HBTU (474 mg, 2.275 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (20 mL), 포화 aq. NaHCO3 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시킨 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 36a (593 mg, 86 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1208.3.
화합물 36b의 제조
THF (8 mL) 중 화합물 36a (593 mg, 0.49 mmol)의 용액에 피페리딘 (1 mL)을 실온에서 첨가하였다. 20 분 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 36b (166 mg, 44 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 763.9.
화합물 36c의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 36b (166 mg, 0.21 mmol) 및 화합물 25b (147 mg, 0.441 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.15 mL, 0.84 mmol) 및 HBTU (247 mg, 0.63 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (10 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 36c (195 mg, 68 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1370.6.
화합물 36d의 제조
MeOH (10 mL) 중 화합물 36c (195 mg, 0.14 mmol)의 용액에 Pd / C (10 wt. %, 30 mg)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 수소하에 실온에서 90 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 36d (187 mg, 100 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1318.6.
화합물 36e의 제조
Figure pct00213
실시예 35에서 화합물 25e를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 36d로부터 화합물 36e를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1624.4.
실시예 55. 화합물 37d의 제조
Figure pct00214
화합물 37a의 제조
DMF (3 mL) 중의 프로파길 아민(propargyl amine) (0.018 mL, 0.285 mmol) 및 화합물 1j (300 mg, 0.238 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.083 mL, 0.71 mmol) 및 HBTU (136 mg, 0.36 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (10 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축시킨 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 37a (300 mg, 97 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1294.0.
화합물 37b의 제조
THF (2 mL) 및 MeOH (2 mL) 중 화합물 37a (300 mg, 0.24 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (2 mL) 중의 LiOH 일수화물 (50 mg, 1.20 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 아세트산을 사용하여 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 잔사를 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 37b (165 mg, 60 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1140.8.
화합물 37c의 제조
THF (2 mL) 및 H2O (2 mL) 중의 화합물 37b (50 mg, 0.042 mmol) 및 화합물 25c (23 mg, 0.02 mmol)의 교반 된 혼합물에 CuSO4 · 5H2O (1 mg) 및 아스코르브산 나트륨 (2 mg)을 첨가하였다. 1 M aq. Na2CO3를 첨가하여 pH를 약 7로 조정하였다. 20 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 37c (32.4 mg, 48 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1638.2.
화합물 37d의 제조
DCM (2 mL) 중 화합물 37c (32.4 mg, 0.01 mmol)의 용액에 TFA (0.4 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / MeCN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 백색 고체로서 화합물 37d (19.6 mg, 62 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1590.2.
실시예 56. 화합물 38b의 제조
Figure pct00215
화합물 38a의 제조
THF (2 mL) 및 H2O (2 mL) 중의 화합물 37b (60 mg, 0.052 mmol) 및 화합물 16b (14 mg, 0.025 mmol)의 교반 된 혼합물에 CuSO4 · 5H2O (1 mg) 및 아스코르브산 나트륨 (2 mg)을 첨가하였다. 1 M aq. Na2CO3를 첨가하여 pH를 약 7로 조정하였다. 20 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 38a (61 mg, 82 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1430.2.
화합물 38b의 제조
DCM (2.0 mL) 중 화합물 38a (59.8 mg, 0.02 mmol)의 용액에 TFA (0.4 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / AN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 동결 건조하여 백색 고체로서 화합물 38b (14.6 mg, 24 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1380.1.
실시예 57. 화합물 38e의 제조
Figure pct00216
화합물 38c의 제조
DMF (3 mL) 중의 프로파길 아민 (0.016 mL, 0.256 mmol) 및 화합물 1i (264 mg, 0.214 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.075 mL, 0.428 mmol) 및 HBTU (122 mg, 0.321 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (10 mL), 포화 aq. NaHCO3 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 38c (270 mg, 100 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1266.2.
화합물 38d의 제조
THF (2 mL) 및 MeOH (2 mL) 중 화합물 38c (270 mg, 0.213 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (2 mL) 중의 LiOH 일수화물 (36 mg, 0.853 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 아세트산을 사용하여 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 잔사를 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 38d (168 mg, 70 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1126.1.
화합물 38e의 제조
Figure pct00217
실시예 56에서 화합물 38b를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 38d 및 화합물 16b로부터 화합물 38e을 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1366.2.
실시예 58. 화합물 39e의 제조
Figure pct00218
화합물 39a의 제조
화합물 1g (27 mg, 0.039 mmol), 화합물 14j (45 mg, 0.039 mmol) 및 무수 HOBt (1 mg, 0.0078 mmol)를 0 ℃에서 DMF (2 mL)에 용해시켰다. 그 다음, 피리딘 (0.2 mL) 및 DIPEA (0.014 mL, 0.078 mmol)를 첨가하였다. N2하에 0 ℃ 내지 실온에서 24 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 39a (36 mg, 58 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1582.9, [M+Na]+ 1604.5.
화합물 39b의 제조
화합물 39a (35 mg, 0.022 mmol) 및 트리페닐포스핀 (1.5 mg, 0.005 mmol)을 DCM (2 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물에 피롤리딘 (0.0025 mL, 0.026 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (1.3 mg, 0.001 mmol)를 실온에서 첨가 한 다음 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 n-부탄올 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 감압하에 증발시켰다. 생성 된 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 39b (34 mg, 조질)를 백색 고체로서 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+: 1542.7.
Figure pct00219
Figure pct00220
Figure pct00221
화합물 39c의 제조
DMF (0.3 mL) 중의 화합물 39b (15 mg, 0.009 mmol) 및 화합물 16c (2.0 mg, 0.0038 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.0026 mL, 0.039 mmol) 및 PyBOP (4.7 mg, 0.023 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 N2하에 13 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 DMSO (1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 39c (12 mg, 35 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1788.5.
화합물 39d의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 39c (12 mg, 0.0033 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (1.4 mg, 0.033 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 용액의 pH를 아세트산으로 4 ~ 5로 조정하고, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 DMSO (1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 39d (11 mg, 98 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1648.6.
화합물 39e의 제조
0 ℃에서 DCM (3.0 mL) 중 화합물 39d (11 mg, 0.003 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.5 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 39e (1.2 mg, 11 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1598.3.
실시예 59. 화합물 40c의 제조
Figure pct00222
Figure pct00223
Figure pct00224
화합물 40a의 제조
DMF (1.5 mL) 중의 화합물 39b (20 mg, 0.012 mmol) 및 화합물 25d (5.0 mg, 0.005 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.004 mL, 0.021 mmol) 및 HBTU (5.0 mg, 0.013 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 DMSO (1.0 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 40a (14.5 mg, 30 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1998.8.
화합물 40b의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 40a (10 mg, 0.0025 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (1.0 mg, 0.025 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 잔사를 DMSO (1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 40b (6.9 mg, 74 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+1858.3.
화합물 40c의 제조
DCM (2.0 mL) 중 화합물 40b (6.9 mg, 0.0018 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 40c (1.5 mg, 23 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1808.6.
실시예 60. 화합물 41c의 제조
Figure pct00225
화합물 41a의 제조
DMF (10 mL) 중의 화합물 16c (280 mg, 0.22 mmol) 및 화합물 1j (587 mg, 1.10 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.116 mL, 0.66 mmol) 및 PyBOP (127 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 41a (250 mg, 64 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 883.2, [M+H]+ 1766.
화합물 41b의 제조
DMF (0.5 mL) 중 화합물 41a (5.7 mg, 0.0032 mmol) 및 화합물 39b (5.0 mg, 0.0032 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.0017 mL, 0.0096 mmol) 및 PyBOP (2.0 mg, 0.0038 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 3 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 MeCN (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 41b (8.0 mg, 75 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1645.
화합물 41c의 제조
MeOH (0.5 mL) 중 화합물 41b (8.0 mg, 0.0024 mmol)의 용액에 H2O (0.1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (1.2 mg, 0.028 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 반응 혼합물을 2N aq. HCl 용액으로 처리하고 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 DCM (2 mL) 및 H2O (3 방울)로 희석시켰다. 그런 다음 TFA (0.1 mL)를 0 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 41c (3.1 mg, 44 %)를 백색 고체로서 수득하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1448, 1/2[M+Na]+ 1459.
실시예 61. 화합물 42d의 제조
Figure pct00226
화합물 42a의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 1j (60 mg, 0.048 mmol) 및 화합물 25d (214 mg, 0.19 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.026 mL, 0.23 mmol) 및 HBTU (22 mg, 0.06 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 DMSO (1.0 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 42a (64 mg, 58 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 2286.8.
화합물 42b의 제조
DMF (3 mL) 중 화합물 42a (68 mg, 0.03 mmol) 및 화합물 39b (46 mg, 0.03 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.011 mL, 0.06 mmol) 및 HBTU (14 mg, 0.036 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 DMSO (1.0 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 42b (60 mg, 52 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1906.3.
화합물 42c의 제조
MeOH (2 mL) 중 화합물 42b (60 mg, 0.016 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (2 mL) 중의 LiOH 일수화물 (5 mg, 0.126 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 그런 다음, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 prep. HPLC로 정제하여 화합물 42c (37 mg, 65 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+1759.3.
화합물 42d의 제조
DCM (3 mL) 중 화합물 42c (37 mg, 0.01 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.3 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 42d (15 mg, 45 %)를 백색 고체로 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 1659.6.
실시예 62. 화합물 43i의 제조
Figure pct00227
화합물 43a의 제조
DMF (50 mL) 중 H-Lys(z)-OMe 하이드로클로라이드 (7.0 g, 23.8 mmol) 및 화합물 24e (9.86 mg, 23.8 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (10.4 mL, 23.8 mmol) 및 HBTU (13.5 g, 35.7 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 8 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (100 mL)으로 희석시키고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N 수성 액체로 세척하였다. HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 43a (9.3 g, 57 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ8.22(d, 1H), 7.37-7.29(m, 15H), 7.22(m, 2H), 5.00(s,6H), 4.18(m, 1H), 4.00(m, 1H), 3.59(s, 3H), 2.96(m, 4H), 1.67-1.50(m, 4H), 1.38-1.29(m, 4H), 1.19-1.18(m, 4H). EI-MS m/z:[M+Na]+ 712.96.
화합물 43b의 제조
THF : MeOH : H2O (60 mL : 30 mL : 30 mL) 중 화합물 43a (9.3 g, 13.5 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 LiOH 일수화물 (1.13 g, 26.9 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후, 반응 혼합물에 1N aq. HCl을 pH 4가 될 때까지 가하고, EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시킴으로써 화합물 43b (9.1 g, 미정제)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 677.48, 2[M+H]+ 1353.82.
화합물 43c의 제조
DMF (20 mL) 중 화합물 43b (2.5 g, 3.71 mmol) 및 화합물 3e (1.8 g, 2.28 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.47 mL, 8.44 mmol), HOBt (484 mg, 3.58 mmol) 및 EDC · HCl (809 mg, 4.22 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N aq. HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 43c (2.3 g, 59 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1155.92, [M+H-Boc]+ 1055.83.
화합물 43d의 제조
MeOH (200 mL) 중의 화합물 43c (2.3 g, 1.99 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 424 mg 3.98 mmol)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.99 mL, 3.98 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 화합물 43d (1.5g, 미정제)를 생성시키고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+753.29.
화합물 43e의 제조
DMF (5 mL) 중 화합물 43d (2.5g, 3.71 mmol) 및 화합물 25b (150 g, 0.46 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.14 mL, 0.80 mmol), HOBt (59 mg, 0.43 mmol) 및 EDC · HCl (102 mg, 0.53 mmol)을 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 1N aq. HCl (30 mL), 포화 aq. NaHCO3 (30 mL) 및 염수 (30 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 얻어진 조 생성물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 43e (100 mg, 45 %)를 무색 오일로서 제조하였다. EI-MS m/z: [M+Na]+ 1685.11,1/2[M+H-Boc]+ 731.82.
화합물 43f의 제조
MeOH (20 mL) 중 화합물 43e (100 mg, 0.06 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 20 mg 0.192 mmol)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.045 mL, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 갈색 발포체의 화합물 43f (95 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1586.30,1/2[M+H]+793.02.
Figure pct00228
Figure pct00229
Figure pct00230
화합물 43g의 제조
DMF (3 mL) 중의 화합물 43f (45 mg, 0.028 mmol) 및 화합물 1j (114 mg, 0.091 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.030 mL, 0.170 mmol) 및 HBTU (36 mg, 0.094 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 16 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축하여 화합물 43g (31 mg, 21 %)을 제조하였다. EI-MS m/z: 1/3[M+H-Boc]+ 1705.74, 1/4[M+H-2Boc]+ 1254.79.
화합물 43h의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 43g (31 mg, 0.006 mmol)의 용액에 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (3.7 mg, 0.088 mmol)을 -20 ℃에서 첨가하였다. -20 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 43h (18 mg, 64 %)를 백색 고체로 제조하였다. EI-MS m/z: 1/3[M+H-Boc]+ 1735.19, 1/4[M+H]+ 1301.95, 1/5[M+H-Boc]+ 1021.71.
화합물 43i의 제조
DCM (1.0 mL) 중 화합물 43h (18 mg, 0.004 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.3 mL)를 0 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 동안 교반 한 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / MeCN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 43i (6 mg, 33 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 1547.75, 1/4[M+H]+ 1161.14.
실시예 63. 화합물 43j의 제조
Figure pct00231
실시예 62에서 화합물 43i를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 43f로부터 화합물 43j를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 1532.37, 1/4[M+H]+ 1149.69.
실시예 64. 화합물 44i의 제조
Figure pct00232
화합물 44a의 제조
DMF (30 mL) 중 화합물 H-Lys(z)-OMe 하이드로클로라이드 (1.3 g, 4.43 mmol) 및 화합물 43b (3.0 g, 4.43 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.9 mL, 11.0 mmol) 및 HBTU (2.5 g, 6.64 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (100 mL)으로 희석시키고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N aq. HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 후, 감압 농축 후, 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 44a (3.9 g, 93 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 953.42.
화합물 44b의 제조
THF : MeOH : H2O (24 mL : 8 mL : 8 mL) 중 화합물 44a (2.1 g, 2.20 mmol)의 용액에 N2하에 실온에서 LiOH 일수화물 (185 mg, 4.40 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후, 반응 혼합물을 1N aq. HCl로 pH 4까지 산성화시키고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켜 화합물 44b (2.0 g)를 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 939.35, [M+Na]+ 961.37.
화합물 44c의 제조
DMF (20 mL) 중의 화합물 44b (2.0 g, 2.13 mmol) 및 화합물 3e (1.14 g, 2.13 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.93 mL, 5.33 mmol) 및 HBTU (1.21 g, 3.20 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N aq. HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 44c (2.60 g, 86 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1418.44, [M+Na]+ 1440.39, [M+H-Boc]+ 1318.47.
화합물 44d의 제조
MeOH (50 mL) 중 화합물 44c (2.60 g, 1.83 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 781 mg 7.34 mmol)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.9 mL, 3.67 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 황색 형태의 화합물 44d (1.73 g)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 881.90.
화합물 44e의 제조
DMF (20 mL) 중의 화합물 44d (1.0 g, 1.13 mmol) 및 화합물 25b (1.82 g, 5.67 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (1.58 mL, 9.08 mmol) 및 HBTU (2.58 g, 6.81 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 물 (100 mL)으로 희석시키고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 0.5 N HCl (50 mL), 포화 aq. NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 차례로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 감압 농축 후, 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 44e (848 mg, 36 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H-2Boc]+ 947.63.
화합물 44f의 제조
MeOH (50 mL) 중 화합물 44e (848 mg, 0.40 mmol) 및 Pd / C (10 wt. %, 172 mg, 1.62 mmol)의 교반 된 혼합물에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 0.4 mL, 1.62 mmol)을 첨가하였다. 수소하에 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 화합물 44f (625 mg, 미정제)를 제조하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: 1/2[M+H]+ 996.40, 1/3[M+H]+ 664.59.
Figure pct00233
Figure pct00234
Figure pct00235
화합물 44g의 제조
DMF (3 mL) 중 화합물 44f (96 mg, 0.048 mmol) 및 화합물 1j (303 mg, 0.24 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.067 mL, 0.386 mmol) 및 HBTU (110 mg, 0.289 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 16 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축시켜 화합물 44g (67 mg, 20 %)을 제조하였다. EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2315.93, 1/4[M+H]+ 1737.60, 1/5[M+H]+ 1390.37.
화합물 44h의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 44g (67 mg, 0.009 mmol)의 용액에 -20 ℃에서 H2O (1mL) 중의 LiOH 일수화물 (8.1 mg, 0.192 mmol)을 첨가하였다. -20 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 44h (27.9 mg, 45 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2110.24, 1/4[M+H]+ 1582.97, 1/4[M+H-Boc]+ 1557.91.
화합물 44i의 제조
DCM (1.0 mL) 중 화합물 44h (27.9 mg, 0.004 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.3 mL)를 0 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 동안 교반 한 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / MeCN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 44i (13.6 mg, 50 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2043.49, 1/4[M+H]+ 1532.96, 1/5[M+H]+ 1226.62.
실시예 65. 화합물 44j의 제조
Figure pct00236
실시예 64에서 화합물 44i를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 1i 및 화합물 44f로부터 화합물 44j를 제조하였다. EI-MS m/z: 1/3[M+H]+ 2025.37, 1/4[M+H]+ 1519.10, 1/5[M+H]+ 1215.60.
실시예 66. 화합물 45k의 제조
Figure pct00237
화합물 L의 제조
D- 글루쿠로노-6,3-락톤 (25.0 g, 141.9 mmol)을 실온에서 질소하에 MeOH (250 mL)에 용해시키고 MeOH (100 mL) 중의 NaOH (141 mg) 용액을 서서히 첨가하였다. 24 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시킨 후, 피리딘 (66 mL) 및 무수 아세트산 (71 mL)을 10 ℃ 이하에서 첨가하였다. 실온에서 4 시간 교반 한 후, 반응 액을 감압 농축하여 컬럼크로마토그래피를 행하여 화합물 L (41.6 g, 77 %)을 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 5.77(d,J = 7.8 Hz, 1H), 5.31 (t,J= 9.6 Hz, 1H), 5.24 (t,J = 9.6 Hz, 1H), 5.14 (m, 1H), 4.17 (d,J = 9 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.04 (m, 9H).
화합물 M의 제조
화합물 L (10.0 g, 26.6 mmol)을 질소하에 0 ℃에서 HBr (AcOH 중 33 %, 20 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 2 시간 동안 교반 한 후, 톨루엔 (50 mL)을 가하고, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 M (10.9 g, 99 %)을 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 6.64(d,J = 3.6Hz, 1H), 5.61 (t,J = 3.6 Hz, 1H), 5.24 (t,J = 3.6 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 4.58 (d, d,J = 10.2 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H).
Figure pct00238
화합물 45a의 제조
3-아미노-1-프로판올 (3.0 g, 66.57 mmol)을 0 ℃에서 질소하에 DCM (150 mL)에 용해시키고 디-tert-부틸 디카보네이트 (16 g, 73.23 mmol)를 첨가하였다. 수득 된 혼합물을 실온에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 용매를 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피시켜 화합물 45a (6.4g, 92 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.78(s, 1H), 3.65(m, 2H), 3.30(m, 2H), 2.90(s, 1H), 1.68(m, 2H), 1.48(s, 9H).
화합물 45b의 제조
화합물 45a (6.04 g, 34.47 mmol) 및 트리에틸아민 (14.4 mL, 103.4 mmol)을 질소하에 0 ℃에서 THF에 용해시킨 후, 메탄설폰산 무수물 (7.21 g, 41.36 mmol)로 천천히 처리하였다. 수득 된 혼합물을 실온에서 질소하에 12 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 용매를 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피시켜 화합물 45b (9.01 g, 98 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.73(s, 1H), 4.30(t,J = 5.9 Hz, 2H), 3.31-3.24 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.94 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).
화합물 45c의 제조
화합물 45b (3.0 g, 11.84 mmol)를 질소하에 실온에서 DMF (40 mL)에 용해시킨 다음, NaN3 (924 mg, 14.21 mmol)로 처리하고, 얻어진 혼합물을 60 ℃에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, EtOAc (50 mL), 증류수 (50 mL) 및 1 N aq. HCl (5 mL)을 가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피시켜 화합물 45c (2.3 g, 99 %)를 제조하였다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.63(s, 1H), 3.36(t,J = 6.6 Hz, 2H), 3.24-3.18 (m, 2H), 1.80-1.75 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
화합물 45d의 제조
화합물 45c (3.8 g, 18.98 mmol)를 0 ℃의 질소하에 DCM (10 mL)에 용해시킨 후, 디옥산 (10 mL) 중의 4M-HCl을 서서히 첨가하였다. 12 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 화합물 45d (2.5 g, 99 %)를 제조하였다. 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.06(s, 3H), 3.47(t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.84-1.79 (m, 2H).
Figure pct00239
화합물 45e의 제조
질소하에 0 ℃에서 화합물 45d (58 mg, 0.42 mmol) 및 5-포르밀살리실산 (100 mg, 0.60 mmol)을 DMF (2 mL)에 용해시킨 후 DIPEA (0.2 mL, 1.20 mmol) 및 PyBop (375 mg, 0.72 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 실온에서 3 시간 교반 한 후, EtOAc (30 mL) 및 증류수 (10 mL)를 가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피시켜 화합물 45e (82 mg, 79 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.39(s, 1H), 9.87(s, 1H), 8.29(s, 1H), 7.89(dd,J = 1.6, 7.2 Hz. 1H), 7.60 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.63-3.57 (m, 2H), 3.48 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.99-1.92 (m, 2H).
화합물 45f의 제조
질소하에 실온에서 화합물 45e (78 mg, 0.31 mmol) 및 화합물 M (125 mg, 0.31 mmol)을 MeCN (3 mL)에 용해시키고, 이어서 산화은 (291 mg, 1.26 mmol) 및 4Å 분자체 (125 mg)을 첨가하였다. 실온에서 3 시간 교반 한 후, 혼합물을 셀라이트 여과하고, 여액을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피시켜 화합물 45f (160 mg, 90 %)를 제조하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.00(s, 1H), 8.66(d,J = 2.4 Hz, 1H), 8.02 (dd,J = 2.0, 6.4 Hz, 1H), 7.46 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.48-5.33 (m, 4H), 4.28 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.73-3.64 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 3H), 2.09-2.07 (m, 9H), 2.00-1.92(m, 2H).
화합물 45g의 제조
질소하에 0 ℃에서 화합물 45f (160 mg, 1.51 mmol)를 2-프로판올 (0.4 mL) 및 클로로포름 (2 mL)에 용해시킨 후, 실리카겔 (2 g) 및 수소화 붕소나트륨 (sodium borohydride) (27 mg, 0.71 mmol)을 거기에 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응물을 셀라이트 여과하고, 여액을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 45g (115 mg, 71 %)를 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.06(d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.50-7.44 (m, 2H), 7.01 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.45-5.31 (m, 4H), 4.38 (s, 2H), 4.22 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.46-3.41 (m, 3H), 2.07-2.04 (m, 9H), 1.97-1.91 (m, 2H).
화합물 45h의 제조
화합물 45g (100 mg, 0.18 mmol)을 질소하에 0 ℃에서 DMF (1 mL)에 용해시킨 후, 비스(4-니트로페닐)카보네이트 (110 mg, 0.35 mmol) 및 DIPEA (0.050 mL, 0.27 mmol)를 거기에 첨가하였다. 실온에서 2 시간 교반 한 후, EtOAc (30 mL) 및 증류수 (10 mL)를 거기에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 45h (75 mg, 58 %)를 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3)δ8.29-8.27(m, 2H), 8.23(d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 2.4, 6.6 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 7.39-7.37 (m, 2H), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.45-5.29 (m, 4H), 5.28 (s, 2H), 4.23 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.68-3.64 (m, 1H), 3.46-3.42 (m, 3H), 2.08-2.05 (m, 9H), 1.98-1.93 (m, 2H).
화합물 45i의 제조
화합물 45h (50 mg, 0.068 mmol)를 질소하에 실온에서 DMF (0.8 mL)에 용해시킨 후, MMAF-OMe (51 mg, 0.068 mmol)을 첨가하였다. 생성 된 혼합물을 HOBT (2 mg, 0.013 mmol), 피리딘 (0.24 mL) 및 DIPEA (0.012 mL, 0.068 mmol)로 처리하였다. 실온에서 18 시간 동안 교반 한 후, EtOAc (20 mL) 및 증류수 (10 mL)를 거기에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 45i (71 mg, 78 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1339.
화합물 45j의 제조
질소하에 실온에서 화합물 45i (30 mg, 0.022 mmol) 및 페닐아세틸렌 (3.7 μL, 0.033 mmol)을 EtOH (0.2 mL) 및 물 (30 mL)에 용해시킨 다음, 0.1 M CuSO4 aq. 용액 (30 μL)과 1.0 M 아스코르브산 나트륨(sodium ascorbate) aq. 용액 (30 μL)을 거기에 첨가하였다. 생성 된 혼합물을 HOBT (2 mg, 0.013 mmol), 피리딘 (0.24 mL) 및 DIPEA (12 μL, 0.068 mmol)로 처리하였다. 실온에서 5 시간 교반 한 후, EtOAc (20 mL) 및 증류수 (5 mL)를 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 45j (26 mg, 81 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1441.
화합물 45k의 제조
화합물 45j (20 mg, 0.013 mmol)를 질소하에 0 ℃에서 MeOH (0.2 mL)에 녹인 후 물 (0.2 mL) 중 LiOH · H2O (6 mg, 0.14 mmol)를 거기에 첨가하였다. 실온에서 1 시간 동안 교반 한 후에, 클로로포름 (10 mL), MeOH (1 mL), 증류수 (10 mL) 및 0.5 N aq. HCl (1 mL)을 거기에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 45k (17 mg, 87 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1286.
실시예 67. 화합물 46b의 제조
Figure pct00240
화합물 46a의 제조
질소하에 0 ℃에서 5-포르밀살리실산 (1.0 g, 6.02 mmol)을 DMF (20 mL)에 녹인 후 N-브로모석신이미드 (1.07 g, 6.11 mmol)를 넣고, 혼합물을 70 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, EtOAc (100 mL), 2N aq. HCl 용액 (2 mL), 증류수 (100 mL)를 넣었다. 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 46a (1.2 g, 84 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.64(s, 1H), 8.19(d,J = 2.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.16 (s, 1H).
화합물 46b의 제조
실시예 4에서 화합물 2h를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 46a로부터 화합물 46b를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1328.
실시예 68 내지 70. 화합물 47a, 화합물 48a, 및 화합물 49a의 제조
Figure pct00241
화합물 N은 한국 공개 특허 공보 제 10-2014-0035393 호에 개시된 방법으로 제조하였다.
실시예 68. 화합물 47a의 제조
질소하에 실온에서 화합물 2h (20 mg, 0.014 mmol)를 EtOH (0.7 mL)에 녹인 후 화합물 N (3.7 mg, 0.017 mmol)을 첨가하여 45 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, HPLC를 사용하여 화합물 47a (10.2 mg, 49 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1441.
실시예 69 및 70. 화합물 48a 및 49a의 제조
실시예 68의 화합물 47a를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 48a (실시예 69) 및 화합물 49a (실시예 70)를 제조하였다. 화합물 48a의 EI-MS m/z: [M+H]+ 1353. 화합물 49a의 EI-MS m/z: [M+H]+ 1520.
비교예 66. 화합물 50k의 제조
Figure pct00242
화합물 50a의 제조
에틸 4-브로모부타노에이트 (5.0 mL, 34.6 mmol)를 질소하에 실온에서 MeOH (7.5 mL)에 용해시키고, 이어서 물 (25 mL) 중의 NaN3 (4.5 g, 69.2 mmol)을 첨가하고 85 ℃에서 8 시간동안 교반하였다. 반응이 종결 된 후 용매를 감압 농축하고 클로로포름 (300 mL)과 증류수 (200 mL)를 넣었다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 50a (5.1 g, 94 %)를 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.15(q,J = 7.2 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.94-1.89 (m, 2H), 1.28 (t, J = 8.4 Hz, 3H).
화합물 50b의 제조
화합물 50a (2.0 g, 12.7 mmol)를 질소하에 0 ℃에서 MeOH (32 mL)에 용해시킨 다음, 물 (26mL) 중의 KOH (3.56 g, 63.6 mmol)를 서서히 첨가하였다. 실온에서 6 시간 동안 교반 한 후, 용매를 감압하에 농축시키고, 클로로포름 (300 mL), 1 N aq. HCl (100 mL) 및 증류수 (100 mL)를 첨가하였다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 50b (1.28 g, 78 %)를 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3.38(t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.48 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.95-1.90 (m, 2H).
화합물 50c의 제조
화합물 50b (850 mg, 6.58 mmol)를 질소하에 0 ℃에서 MeOH (10 mL)에 녹인 후, 옥살릴 클로라이드 (1.1 mL, 13.2 mmol) 및 DMF (1 방울)를 첨가하고 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응이 종결 된 후 용매를 감압 농축하여 화합물 50c (965 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
Figure pct00243
화합물 50d의 제조
4-하이드록시-3-니트로 벤조산 (5.0 g, 27.3 mmol)을 0 ℃에서 질소하에 THF (120 mL)에 녹인 후 1M BH3-THF 착체 (54.6 mL, 54.6 mmol)를 넣고 실온에서 20 시간동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, EtOAc (200 mL), 0.5 N aq. HCl HCl (20 mL) 및 증류수 (100 mL)를 거기에 첨가하였다. 상기한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피에 가하여 화합물 50d (4.2 g, 91 %)를 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 8.06(d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 1.2, 7.8 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H).
화합물 50e의 제조
화합물 50d (937 mg, 5.54 mmol)를 질소하에 실온에서 MeCN (15 mL)에 용해시키고, 화합물 M (2.0 g, 5.04 mmol), 산화은 (4.66 g, 20.1 mmol) 및 4Å 분자체 (2.0 g)을 가하고, 실온에서 14 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 셀라이트 여과하고, 여액을 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피에 걸어 화합물 50e (1.0 g, 40 %)를 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.81(d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 1.8, 6.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.37-5.27 (m, 3H), 5.20 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.21 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.04-2.02 (m, 1H).
화합물 50f의 제조
화합물 50e (900 mg, 6.35 mmol)를 EtOAc (100 mL)에 녹인 후, 백금 (IV) 옥사이드 (84.2 mg, 0.370 mmol)를 넣고 수소하에 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 종결 된 후, 혼합물을 셀라이트 여과하고 여액을 감압 농축하여 화합물 50f (700 mg, 83 %)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
화합물 50g의 제조
화합물 50f (350 mg, 0.77 mmol)를 질소하에 0 ℃에서 DCM (10 mL)에 용해시킨 후, 화합물 50c (136 mg, 0.92 mmol) 및 DIPEA (0.27 mL, 1.54 mmol)를 거기에 첨가하고 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 EtOAc (50 mL)와 증류수 (50 mL)를 거기에 첨가하였다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 50g (280 mg, 65 %)을 얻었다. 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.37(d,J = 1.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.07 (dd, J = 1.8, 6.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.4Hz, 1H), 5.43-5.28 (m, 3H), 5.06 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.19 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.44-3.41 (m, 2H), 2.56 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.17-2.00 (m, 12H).
화합물 50h의 제조
질소하에 0 ℃에서 화합물 50g (250 mg, 0.44 mmol)을 DMF (4 mL)에 용해시킨 후, 비스(4-니트로페닐)카보네이트 (270 mg, 0.88 mmol) 및 DIPEA (0.12 mL, 0.66 mmol)를 첨가하고, 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 거기에 EtOAc (50 mL)와 증류수 (50 mL)를 첨가하였다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피에 걸어 화합물 50h (290 mg, 90 %)를 얻었다. 1H-NMR(600MHz, CDCl3) δ 8.54(d,J = 1.8 Hz, 1H), 8.28-8.25 (m, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.40-7.36 (m, 2H), 7.11 (dd, J = 1.8, 6.6 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.44-5.29 (m, 3H), 5.23 (s, 2H), 5.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.21 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.45-3.42 (m, 2H), 2.58 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.11-2.00 (m, 12H).
화합물 50i의 제조
화합물 50h (250 mg, 0.34 mmol)를 질소하에 실온에서 DMF (4 mL)에 용해시킨 후, MMAF-OMe (255 mg, 0.34 mmol)을 첨가하였다. 생성 된 혼합물을 HOBT (9 mg, 0.068 mmol), 피리딘 (1.2 mL) 및 DIPEA (0.060 mL, 0.34 mmol)로 처리하였다. 실온에서 2 일 동안 교반 한 후, EtOAc (50 mL), 2 N aq. HCl (5 mL) 및 증류수 (50 mL)를 첨가하였다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피하여 화합물 50i (340 mg, 74 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1339.
화합물 50j의 제조
화합물 50i (210 mg, 0.156 mmol)를 질소하에 0 ℃에서 MeOH (2 mL)에 용해시킨 후, 물 (2 mL) 중의 LiOH · H2O (66 mg, 1.56mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1.5 시간 동안 교반 한 후, 클로로포름 (50 mL), MeOH (5 mL), 증류수 (50 mL) 및 0.5 N aq. HCl (5 mL)을 첨가하였다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피에 가하여 화합물 50j (107 mg, 57 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+1184.
화합물 50k의 제조
질소하에 실온에서 화합물 50j (10 mg, 0.008 mmol) 및 페닐아세틸렌 (0.92 μL, 0.008 mmol)을 EtOH (0.15 mL) 및 물 (10 mL)에 용해시킨 후, 0.1M CuSO4 수용액 (10 μL) 및 1.0 M 아스코르브산 나트륨 수용액 (10 μL)을 넣었다. 실온에서 5 시간 교반 한 후, EtOAc (10 mL) 및 증류수 (5 mL)를 첨가하였다. 상기 한 바와 같이 수득 된 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피에 가하여 화합물 50k (5 mg, 46 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+1286.
실시예 71. 화합물 51h의 제조
Figure pct00244
화합물 51a의 제조
실시예 23의 화합물 14h의 제조 방법과 유사한 방법으로 화합물 7b로부터 화합물 51a를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1392.8, [M+H-Boc]+ 1292.7, [M+Na]+ 1414.8.
화합물 51b의 제조
0 ℃에서 화합물 51a (1.8 g, 1.29 mmol), 프로파길아민(propargylamine) (0.1 mL, 1.55 mmol) 및 무수 HOBt (35 mg, 0.25 mmol)를 DMF (5 mL)에 용해시켰다. 그 다음, 피리딘 (0.2 mL) 및 DIPEA (0.45 mL, 2.59 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 24 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (100 mL) 및 포화 aq. NaHCO3로 희석시켰다. NH4Cl 용액 (50 mL)을 첨가하였다. EtOAc (2 x 100 mL)로 추출한 후, 합한 유기층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 51b (1.15 g, 68 %)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ8.01(s, 1H), 7.48-7.31(m, 2H), 7.02(d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.45-5.20 (m, 4H), 5.09 (s, 2H), 4.19 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.10-4.05 (m, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.85-3.45 (m, 49H), 2.24 (s, 1H), 2.05 (s, 9H), 1.53 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+Na]+1330.3.
화합물 51c의 제조
THF / MeOH (20 mL / 20 mL) 중 화합물 51b (1.15 g, 0.879 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (20 mL) 중의 LiOH 일수화물 (151 mg, 3.603 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 DMSO (5 mL)에 용해시키고 prep. HPLC를 수행하여 화합물 51c (600 mg, 60 %)를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1169.2.
Figure pct00245
화합물 51d의 제조
DMF (10 mL) 중 4-아지도부탄산 (228 mg, 1.76 mmol) 및 N-Me-Ala-OMe (298 mg, 1.94 mmol)의 교반 된 혼합물에 DIPEA (0.92 mL, 5.30 mmol) 및 HBTU (1.0 g, 2.64 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 14 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 51d (310 mg, 77 %)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ5.22(q, 1H), 3.71(s, 3H), 3.39(t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.52-2.39 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 2H), 1.41 (d, 3H).
화합물 51e의 제조
MeOH (3 mL) 중 화합물 51d (310 mg, 1.36 mmol)의 용액에 H2O (3 mL) 중의 LiOH 일수화물 (114 mg, 2.72 mmol)을 -20 ℃에서 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / 2N aq. HCl 용액 (50 mL / 2 mL)으로 처리하고 Et2O (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 화합물 51e (246 mg)를 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ5.15(q, 1H), 3.39(t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.49-2.45 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 2H), 1.41 (d, 3H).
Figure pct00246
화합물 51f의 제조
N2하에 DCM (6 mL) 중 메이탄시놀 (50 mg, 0.088 mmol) 및 화합물 51e (113 mg, 0.528 mmol)의 용액에 DCM (1.4 mL) 중 DIC (0.087 mL, 0.557 mmol)의 용액을 첨가하였다. 1 분 후, ZnCl2 (Et2O 중의 1M, 0.11 mL, 0.11 mmol)의 용액을 첨가하였다. 실온에서 2 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석시켰다. 유기층을 포화 aq. NaHCO3 (4 mL) 및 염수 (2 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 감압하에 증발시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 디아스테레오머(diastereomer) 메이탄시노이드 화합물 51f (50 mg, 74 %)의 혼합물을 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 761.7.
화합물 51g의 제조
DMSO (4 mL) 및 H2O (1 mL) 중 화합물 51f (78 mg, 0.102 mmol) 및 화합물 51c (132 mg, 0.112 mmol)의 교반 된 혼합물에 CuSO4 · 5H2O (2 mg) 및 아스코르브산 나트륨 (10 mg)을 첨가하였다. 1 M aq. Na2CO3를 첨가하여 pH를 약 7로 조정하였다. 이다. 20 ℃에서 1 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 농축하여 화합물 51g (72.1 mg, 37 %)을 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1930.9, [M+H-Boc]+ 1830.9.
화합물 51h의 제조
DCM (1 mL) 중 화합물 51g (72.1 mg, 0.037 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / MeCN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 동결 건조하여 화합물 51h (더욱 극성인 이성질체 17 mg 및 덜 극성인 이성질체 6.0 mg, 36 %)을 백색 고체로서 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1730.8.
실시예 72. 화합물 52c의 제조
Figure pct00247
화합물 52a의 제조
탈토불린 에틸 에스테르(taltobulin ethyle ester) (TFA 염, 80 mg, 0.029 mmol), 화합물 14h (128 mg, 0.0142 mmol) 및 무수 HOBt (3.5 mg, 0.026 mmol)를 0 ℃에서 DMF (3 mL)에 용해시켰다. 그 다음, 피리딘 (0.5 mL) 및 DIPEA (0.045 mL, 0.26 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 24 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 52a (70 mg, 43 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1258.6, [M+H-Boc]+ 1158.6.
화합물 52b의 제조
MeOH (1.4 mL) 중 화합물 52a (70 mg, 0.055 mmol)의 용액에 -20 ℃에서 H2O (1.4 mL) 중의 LiOH 일수화물 (11.7 mg, 0.275 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간 후, 용액의 pH를 아세트산으로 4 ~ 5로 조정하였다. 생성 된 용액을 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 52b (4.5 mg, 8 %)를 백색 고체로서 생성시켰다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1090.4.
화합물 52c의 제조
DCM (1 mL) 중 화합물 52b (4.5 mg, 0.0041 mmol)의 용액에 0 ℃에서 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 HPLC로 정제하여 화합물 52c (2.4 mg, 59 %)를 백색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 990.4.
실시예 73. 화합물 53f의 제조
Figure pct00248
화합물 53b의 제조
화합물 53a (300 mg, 0.31 mmol, 화합물 53a는 WO2013 / 055987 A1에 개시된 방법으로 제조 됨), 화합물 15a (355 mg, 0.31 mmol) 및 무수 HOBt (10 mg, 0.06 mmol)를 0℃에서 DMF (0.5 mL)에 용해시켰다. 그 다음, 피리딘 (0.3 mL) 및 DIPEA (0.14 mL, 0.78 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 23 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 H2O / 포화 aq. NH4Cl(100 mL / 50 mL)로 희석시키고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 53b (250 mg, 41 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1943.6, [M+Na]+ 1965.6.
화합물 53c의 제조
THF / H2O (2 mL / 1 mL) 중 화합물 53b (300 mg, 0.31 mmol)의 용액에 0 ℃에서 N2하에 아세트산 (3 mL)을 첨가하였다. 22 시간 후, 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성 된 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 53c (140 mg, 68 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1713.6.
화합물 53d의 제조
DCM (10 mL) 중 화합물 53c (120 mg, 0.07 mmol)의 용액에 N2하에 실온에서 피리디늄 클로로크로메이트 (158 mg, 0.42 mmol) 및 4Å 분자체 (50 mg)를 첨가하였다. 18 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 감압하에 농축시켰다. 생성 된 화합물 53d (95 mg, 75 %)를 무색의 오일로서 수득하고, 이를 더 이상의 정제없이 사용하였다. EI-MS m/z: [M+Na]+ 1732.8.
화합물 53e의 제조
MeOH (1 mL) 중 화합물 53d (95 mg, 0.056 mmol)의 용액에 0 ℃에서 H2O (1 mL) 중의 LiOH 일수화물 (12 mg, 0.278 mmol)을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 생성 된 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 prep. HPLC에 의해 화합물 53e (6 mg, 7 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+1569.7.
화합물 53f의 제조
DCM (2 mL) 중 화합물 53e (6 mg, 0.004 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.2 mL)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 용매 및 과량의 TFA를 N2 흐름에 의해 제거하였다. 이어서, 잔사를 DMSO (1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합하고 동결 건조하여 화합물 53f (2.7 mg, 53 %)를 백색 고체로 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1251.3.
실시예 74. 화합물 54a의 제조
Figure pct00249
실시예 73의 화합물 53f를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 53a 및 화합물 14h로부터 화합물 54a를 제조하였다.
실시예 75. 화합물 55a의 제조
Figure pct00250
실시예 73에서 화합물 53f를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 53a 및 화합물 51a로부터 화합물 55a를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1516.7, 1/2[M+H]+ 758.7.
실시예 76. 화합물 56d의 제조
Figure pct00251
화합물 56b의 제조
화합물 56a (HCl 염, 100 mg, 0.27 mmol, Curr. Med. Chem. 2009, 16, 1192-1213에 개시된 방법에 의해 화합물 56a를 제조 함), 화합물 14h (242 mg, 0.27 mmol) 및 무수 HOBt (7.3 mg, 0.05 mmol)을 0 ℃에서 DMF (3 mL)에 용해시켰다. 이어서, 피리딘 (0.4 mL) 및 DIPEA (0.09 mL, 0.60 mmol)를 첨가하였다. N2하에 실온에서 16 시간 동안 교반 한 후, 반응 혼합물을 포화 aq. NH4Cl 용액 (10 mL)으로 희석하고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 56b (184 mg, 63 %)를 얻었다. EI-MS m/z: [M+H]+ 1091.9, [M+H-Boc]+ 991.7.
화합물 56c의 제조
MeOH (2 mL) 중 화합물 56b (90 mg, 0.08 mmol)의 용액에 -20 ℃에서 H2O (2 mL) 중의 LiOH 일수화물 (17 mg, 0.41 mmol)을 첨가하였다. -20 ℃에서 2 시간 동안 교반 한 후, 아세트산을 사용하여 반응 혼합물을 중화시키고 감압하에 농축시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 H2O / DMSO (1.5 mL / 1.5 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하여 화합물 56c (35 mg, 45 %)를 황색 고체로서 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 951.7, [M+H-Boc]+ 851.5.
화합물 56d의 제조
0 ℃에서 DCM (2.0 mL) 중 화합물 56c (35 mg, 0.04 mmol)의 교반 된 용액에 TFA (0.3 mL)를 첨가하였다. 1 시간 동안 교반 한 후, N2 흐름에 의해 용매 및 과량의 TFA를 제거하였다. 이어서, 잔사를 H2O / MeCN (1 mL / 1 mL)에 용해시키고 HPLC로 정제하였다. 동일한 체류 시간을 갖는 순수한 분획을 합치고 동결 건조하여 황색 고체로서 화합물 56d (24.9 mg, 68 %)를 수득하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 851.6.
실시예 77. 화합물 57a의 제조
Figure pct00252
실시예 76에서 화합물 56d를 제조하는 방법과 유사한 방법으로 화합물 56a 및 화합물 15a로부터 화합물 57a를 제조하였다. EI-MS m/z: [M+H]+ 983.3.
실시예 78. ADC2 합성
Figure pct00253
실시예 79. ADC2 합성
Figure pct00254
실시예 80. ADC86 합성
Figure pct00255
실시예 81. ADC86 합성
Figure pct00256
실시예 82. ADC4 합성
Figure pct00257
실시예 83. ADC4 합성
Figure pct00258
실시예 84. ADC75 합성
Figure pct00259
실시예 85. ADC75 합성
Figure pct00260
실험예 1. β-글루쿠로니다제(β-Glucuronidase)에 대한 반응성 비교 시험.
실시예 66의 화합물 45k와 비교예 66의 화합물 50k의 β-글루로니다제에 대한 반응성을 비교하기 위해, 비교 시험을 다음과 같이 행하였다.
실시예 66의 화합물 45k 및 비교예 66의 화합물 50k는 각각 500 μM 및 50 μM DMSO 스톡 용액으로서 제조하였다. 인산 완충 생리 식염수 (PBS) 용액 880 μL와 화합물 45k 및 화합물 50k의 스톡 용액 100 μL을 각각 혼합한 반응액을 제조하였다 (최종 농도는 각각 50 μM 및 5 μM). 대장균 β-글루쿠로니다제 효소 (1 mg / ml, Sigma : EC3.2.1.31 Type IX-A, PBS에 1 mg / mL, 3.6 μg, 13 μmol)를 반응액에 20 μL 씩 넣은 후, 37 ℃의 항온수 욕조에서 반응을 시작하였다. 혼합 용액 100 μL를 각각 0 분, 25 분, 60 분 및 90 분에 분배하고, 200 μL의 아세토니트릴을 거기에 첨가하였다. 혼합 시료에 대해 원심 분리 (4 ℃, 15 분, 14000 rpm)를 수행하여 얻은 상등액 각각으로부터 방출 된 MMAF를 LC-MS / MS를 이용하여 정량분석 하였다 (미국 특허 제 8,568,728 호에 기재된 방법과 유사한 방법으로 수행되었으며, 본원에 참고로 인용됨).
그 결과를 도 2에 나타내었으며, 도 2를 참조하면 β-글루쿠로니다제에 의한 효소 반응 후 1,6-탈리 반응을 통해 실시예 66의 화합물 45k 및 비교예 66의 화합물 50k로부터 MMAF가 현저히 신속하게 방출된다는 점을 확인할 수 있다 (미국 특허 제 8,568,728 호, 본원에 참고로 인용 됨).
실험예 2. 혈장 안정성 비교 시험 링커 톡신
실시예 66의 화합물 45k 및 비교 예 66의 화합물 50k의 혈장 안정성을 비교 하였다.
화합물 45k 또는 50k를 10 μL씩 5 mM DMSO에 녹여 마우스 혈장 990 μL와 혼합하여 50 μM의 시료를 제조하여 혈장 안정성을 평가 하였다. 혈장 / 화합물 용액을 37 ℃에서 7 일간 배양 하였다. 6 일간의 배양 중에 0, 1, 2, 7 일에 100 μL를 취하여 혈장 단백질 침전을 모니터링하기위한 내부 표준을 포함하는 200 μL의 아세토니트릴과 혼합하였다. 아세토니트릴 / 혈장 시료 (4 ℃, 15 분, 14000rpm)를 원심 분리하여 상등액을 수득하고, 상등액상에서 LC-MS / MS를 수행하여 각 화합물 및 생성물의 양을 정량 하였다. (실험은 J. Chromatography B, 780 : 451-457 (2002)에 개시된 것과 유사한 것을 사용하여 수행되었다).
LS-MS / MS를 이용한 실시예 66의 화합물 45k 및 비교예 66의 화합물 50k의 결과를 도 3 및 표 1에 나타내었다. 비교예 66의 화합물 50k의 안정성 및 실시예 66의 화합물 45k의 안정성은 1 일에 각각 14 % 및 80 %였다. 마우스 혈장에서의 실시예 66의 화합물 45k의 안정성은 비교예 66의 화합물 50k보다 우수하였다.
마우스 혈장에서의 화합물 45k 및 화합물 50k의 안정성
실시예 66의 화합물 45k 비교예 66의 화합물 50k
링커 글루쿠로나이드 글루쿠로나이드
혈장 안정성(마우스 혈장) 80% 안정성
(@7 days)		 14% 안정성
(@1 day)
결과 안정 불안정
화합물 47a, 48a 및 49a의 혈장 안정성은 상기 언급된 방법을 사용하여 수행하였다 (도 4-6).
실험예 3. 항체-약물 접합체의 제조
제 1 단계 : 프레닐화 항체(Prenylated Antibody) 방법 (한국 공개 특허 공보 제 10-2014-0035393 호의 방법에 따라 제조)
항체의 프레닐화 반응액을 제조하고 30 ℃에서 16 시간 반응시켰다. 각 경쇄의 C-말단에 부가된 GGGGGGGCVIM 서열 ( "G7CVIM")을 포함하는 항체를 사용하였다. G7CVIM 서열은 중쇄의 C 말단 (ADC86-91) 또는 중쇄 및 경쇄 (ADC75-77) 모두에 부가되었다. 사용 된 항체 서열의 출처는 표 2와 같다.
ADC 제조에 사용 된 항체 목록
타겟 (항체) 레퍼런스
HER2 (허셉틴®) http://www.drugbank.ca/drugs/DB00002
EGFR (얼비툭스®) http://www.drugbank.ca/drugs/DB00002
CD19 (DI-B4) US8691952 B2
CD20 (리툭산®) http://www.drugbank.ca/drugs/DB00073
EGFR wt & EGFRvIII (ABT806) US 2014/02555410 A9
반응액은 24 μM 항체, 200 nM FTase (Calbiochem # 344145) 및 144 μM의 LCB14-0606(한국 공개 특허 공보 제 10-2014-0035393 호의 방법에 따라 제조 되며, 이는 본원에 참고로서 포함됨)를 함유하는 완충 용액 (50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 10 μM ZnCl2, 0.25 mM DTT로 구성된다. 반응이 완료된 후, 프레닐화 된 항체를 FPLC로 정제하였다.
2 단계. ADC 제조 방법
프레닐화(prenylated) 항체와 링커-톡신 사이의 옥심 결합 형성 반응 혼합물은 100 mM Na-아세테이트 완충액 (pH 4.5, 10 % DMSO), 12 μM 프레닐화 항체 및 120 uM 링커-톡신 (in house)를 혼합하여 준비 하였고, 30 ℃에서 부드럽게 교반하였다.
24 시간 동안 인큐베이션한 후, 항체-약물 접합체를 FPLC 및 소수성 상호작용(hydrophobic interaction) 크로마토그래피-HPLC를 통해 탈염(desalting)시켜 정제하였다.
항-HER2 ADCs(ADR2) 리스트
ADC# 화합물 #
ADC1 2g
ADC2 2h
ADC3 3f
ADC4 3g
ADC5 4f
ADC6 4g
ADC7 5e
ADC8 5f
ADC9 6e
ADC10 7e
ADC11 8f
ADC12 9j
ADC13 10c
ADC14 10d
ADC15 11j
ADC16 11k
ADC17 12c
ADC18 12d
ADC19 13e
ADC20 13f
ADC86 2h
ADC87 2g
항-HER2 ADCs (DAR4) 리스트
ADC# 화합물 #
ADC23 16f
ADC24 16g
ADC25 17d
ADC26 18c
ADC27 19c
ADC28 20q
ADC29 21i
ADC30 22h
ADC31 23h
ADC32 24l
ADC33 25e
ADC34 25f
ADC35 26e
ADC36 27e
ADC37 28d
ADC38 28e
ADC39 29j
ADC40 29k
ADC41 30b
ADC42 30c
ADC43 31f
ADC44 31g
ADC45 32c
ADC46 32d
ADC47 33e
ADC48 33f
ADC49 34e
ADC50 34f
ADC51 35g
ADC52 36e
ADC53 37d
ADC54 38b
ADC55 38e
ADC76 2h
ADC88 16f
ADC89 16g
ADC90 25f
ADC91 25e
항-HER2 ADCs (DAR4<) 리스트
ADC# 화합물 #
<DAR6> ADC60 43i
ADC61 43j
<DAR8> ADC62 44i
ADC63 44j
ADC77 16f
페이로드로 아마니틴을 사용하는 항-HER2 ADCs 리스트
ADC# Comp’d #
<DAR6> ADC60 43i
ADC61 43j
<DAR8> ADC62 44i
ADC63 44j
ADC77 16f
다양한 단백질을 타겟팅하는 항체를 이용한 ADCs 리스트
타겟(항체) ADC# 화합물#
EGFR (얼비툭스®) ADC64 2h
ADC65 25e
ADC66 25f
CD19 (DI-B4) ADC67 2h
ADC68 25e
ADC69 25f
CD20 (리툭산®) ADC70 2h
ADC71 25e
ADC72 25f
EGFR wt & EGFRvIII (ABT806) ADC73 4g
ADC74 25e
ADC75 25f
실험예 4. 항-HER2 ADCs의 세포독성
상업적으로 이용 가능한 인간 유방암 세포주 MCF-7 (정상에 대해 HER2 음성), OE-19 (HER2 양성), NCI-N87 (HER2 양성), SK-OV-3 (HER2 양성), JIMT-1 (HER2 양성), SK-BR-3 (HER2 양성)이 사용되었다. 세포주는 상업적으로 이용 가능한 세포주와 함께 제공된 권장된 사양에 따라 배양되었다.
암 세포주에 대한 항체, 약물 및 접합체의 항 증식 활성을 측정하였다. 세포를 웰당 1 × 104 세포 수로 96-웰 조직 배양 플레이트에 도말하였다. 24 시간 배양 후, 항체, 약물 및 접합체를 다양한 농도로 첨가하였다. 72 시간 후의 생존 세포의 수를 SRB 분석을 사용하여 계수하였다. 흡광도는 SpectraMax 190 (Molecular Devices, USA)을 사용하여 540 nm에서 측정하였다.
상이한 항-HER2 ADCs (DAR2)의 IC50 값
약물 ADC 링커-톡신 SK-BR-3 JIMT-1 OE-19 NCI-N87 SK-OV-3 MCF-7
MMAF ADC8 5f 0.10 0.34 - - - >33.33
ADC2 2h 0.14 0.16 0.42 0.75 1.19 >33.33
ADC4 3g 0.10 0.32 - 0.97 1.21 >33.33
ADC6 4g 0.03 0.38 - - - >33.33
ADC16 11k 0.06 0.26 - - - >33.33
ADC14 10d 0.09 0.31 - - - >33.33
ADC18 12d 0.10 0.34 - - - >33.33
ADC20 13f 0.08 0.29 - - - >33.33
MMAE ADC7 5e 0.10 13.44 - - - >33.33
ADC1 2g 0.47 275 - 0.69 241 >33.33
ADC3 3f 0.29 1.63 - 1.04 1.34 >33.33
ADC5 4f 0.15 0.97 - 0.40 1.04 >33.33
ADC9 6e 0.10 >33.3 - - - >33.33
ADC15 11j 0.17 >33.3 - - - >33.33
ADC10 7e 0.12 0.64 - - - >33.33
ADC12 9j 0.20 2.01 - - - >33.33
ADC13 10c 0.19 1.09 - - - >33.33
ADC17 12c 0.03 0.11 - - - >33.33
ADC19 13e 0.13 0.38 - - - >33.33
상이한 PEG 길이-ADCs (DAR2)의 IC50 값
테스트 샘플 IC50(nM)
톡신 DAR ADC PEG 유닛의 # 링커-톡신 JIMT-1 MCF-7
MMAE 2 ADC7 1 5e >10.0 >10.0
ADC1 3 2g >10.0 >10.0
ADC3 6 3f >10.0 >10.0
ADC5 12 4f 1.01 >10.0
상이한 타입의 링커를 갖는 MMAF ADCs의 IC50 값
ADC 링커-톡신 SK-BR-3 JIMT-1 NCI-N87 SK-OV-3 MCF-7
ADC23 16f 0.05 0.12 0.35 0.44 >33.33
ADC34 25f 0.03 0.10 - - >33.33
ADC38 28e 0.03 0.05 - - >33.33
ADC40 29k 0.02 0.06 - - >33.33
ADC42 30c 0.03 0.04 - - >33.33
ADC44 31g 0.03 0.05 - - >33.33
ADC46 32d 0.04 0.08 - - >33.33
ADC48 33f 0.03 0.08 - - >33.33
ADC50 34f 0.03 0.05 - - >33.33
ADC53 37d 0.03 0.05 - - >33.33
ADC54 38b 0.05 0.12 - - >33.33
상이한 타입의 링커를 갖는 MMAE ADCs의 IC50 값
ADC 링커-톡신 SK-BR-3 JIMT-1 NCI-N87 SK-OV-3 MCF-7
ADC24 16g 0.14 0.26 0.17 0.37 >33.33
ADC25 17d 0.03 0.10 0.36 0.37 >33.33
ADC26 18c 0.08 0.14 - - >33.33
ADC27 19c 0.05 0.43 0.29 0.38 >33.33
ADC28 20q 0.03 0.12 0.36 0.36 >33.33
ADC29 21i 0.03 0.41 0.31 0.49 >33.33
ADC30 22h 0.05 0.41 0.30 0.35 >33.33
ADC31 23h 0.14 0.24 - - >33.33
ADC32 24l 0.03 0.40 0.32 0.35 >33.33
ADC33 25e 0.04 0.23 0.27 0.33 >33.33
ADC35 26e 0.13 0.19 - - >33.33
ADC36 27e 0.13 0.22 - - >33.33
ADC37 28d 0.04 0.07 - - >33.33
ADC39 29j 0.03 0.11 - - >33.33
ADC41 30b 0.03 0.10 - - >33.33
ADC43 31f 0.03 0.04 - - >33.33
ADC45 32c 0.03 0.08 - - >33.33
ADC47 33e 0.04 0.07 - - >33.33
ADC49 34e 0.03 0.05 - - >33.33
ADC51 35g 0.04 0.24 0.34 - >33.33
ADC52 36e 0.07 0.40 0.37 - >33.33
ADC55 38e 0.04 0.07 - - >33.33
하이브리드 ADCs의 IC50 값
테스트 샘플 IC50(nM)
톡신 DAR ADC 링커-톡신 SK-BR-3 JIMT-1 NCI-N87 SK-OV-3 MCF-7
MMAF 2 ADC2 2h 0.08 0.40 0.84 0.84 >33.33
4 ADC23 16f 0.05 0.10 0.25 0.36 >33.33
아마니틴 2 ADC21 14m 0.09 >33.3 0.88 0.25 >33.33
MMAF & 아마니틴 4 ADC58 41c 0.06 0.73 0.95 0.64 >33.33
8 ADC78 41c 0.03 0.03 0.33 0.76 >33.33
MMAF-OMe 0.12 0.07 0.49 0.78 0.60
2 개의 다른 톡신 접합 ADC와 동일한 톡신 접합 ADC의 비교
다양한 DAR-ADCs의 IC50 값
테스트 샘플 IC50(nM)
JIMT-1 MCF-7
DAR# ADC 코드 링커-톡신
DAR2 ADC2 2h 1.37 >33.33
DAR4 ADC23 16f 0.21 >33.33
ADC34 25f 0.09 >33.33
ADC76 2h 0.27 >33.33
DAR8 ADC62 44i 0.08 >33.33
ADC77 16f 0.02 >33.33
실험예 5. 얼비툭스 (LC)-글루쿠로나이드 링커-MMAF의 세포독성
높은 수준의 EGFR을 발현하는 A431 세포와 낮은 수준의 EGFR을 발현하는 MCF-7 세포를 100 μL의 배지에서 96-웰 플레이트에 웰 당 약 1000 세포를 도말하였다. 중간 수준의 EGFR을 발현하는 HCC-827 세포를 100 μL의 배지에서 96-웰 플레이트에 웰당 약 5000 개의 세포를 도말하였다. 세포를 37 ℃, 5 % CO2에서 24 시간 동안 배양 하였다. 이어서, 모노메틸 아우리스타틴 F-OMe (MMAF-OMe), 얼비툭스 (LC)-G7CVIM 및 얼비툭스 (LC)-G7CVIM 및 MMAF를 포함하는 항체 약물 접합체 ADC64의 연속 희석액을 100 내지 0.00128 nM의 농도로 세포에 첨가하였다. 세포를 72 시간 동안 배양 한 후 각 웰에 100 % 얼음처럼 차가운(ice-cold) 10 % 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid)을 가한 후 4 ℃에서 1 시간 동안 고정시켰다. SRB 염료 (Sulforhodamine B, Sigma S1402) 및 Molecular Devices SpectraMax 190 플레이트 판독기(running softmax Pro v5)를 사용하여 생존 세포를 계수하고, 540 nm에서 흡광도를 모니터링하였다 (표 14).
얼비툭스(Erbitux, LC)-G7CVIM은 각 세포주 (A431, MCF-7 및 HCC-827)에 대해 100 nM 이상의 IC50을 나타냈다. MMAF-OMe는 MCF-7 세포에 대하여 1.81 nM, HCC-827 세포에 대하여 1.99 nM, 및 A431 세포에 대하여 1.11 nM의 IC50을 가졌다. 항체-약물 접합체 ADC64, 65 및 66은 각각 MCF-7 세포에 대해 100 nM 초과, HCC-827 세포에 대해 각각 0.47, 0.17 및 0.11 nM의 IC50을 가졌다. ADC64는 A431 세포에 비해 1.3 nM을 나타내어 MMAF-OMe에 비해 탁월한 특이성(specificity)을 보였고 얼비툭스 (LC)-G7CVIM에 비해 우수한 효능(potency)을 보였다.
항-EGFR mAb, 얼비툭스 기반 ADCs의 IC50 값
ADC 코드 세포주
A431 HCC-827 MCF-7
ADC64 1.30 0.47 >33.33
ADC65 - 0.17 >33.33
ADC66 - 0.11 >33.33
실험예 6. ABT-806 (LC)-글루쿠로나이드 링커-MMAF의 세포 독성
ABT-806 기반 ADC의 세포 독성을 삼성 메디컬 센터 (서울, 대한민국)에서 확립된 환자 유래 세포주에 대해 시험하였다. L-글루타민 (200 nM), bFGF (20 ng / mL), EGF (20 ng / mL), N2 보충제, 및 B27 보충제를 보충 한 Neurobasal®-A 배지 (Thermo Fisher Scientific)에서 세포를 유지시켰다. 생존력 시험을 위해 세포를 96-웰 플레이트 (5000 세포 / 웰)에 분주하고 처리 전 1 일 동안 5 % CO2에서 37 ℃에서 배양하였다. ADC 처리 후, 세포를 72 시간 동안 배양 하였다. 100 μL의 CellTiter-Glo® Reagent (Promega)를 각 웰에 첨가하여 세포 생존력을 분석하였다. 10 분 배양 후, 루미노미터를 사용하여 발광 신호를 분석 하였다.
DAR4 ADC (ADC74, ADC75)는 예상대로 DAR2 ADC (ADC73)보다 우수한 효능(potency)을 나타냈다. 일부 환자의 세포는 약물(payload)에 대해 조금씩 다른 민감성을 보였다. 22 & 780 세포는 MMAE보다 MMAF에 더 민감하였고, 464 세포는 그 반대였다.
환자 유래 세포주에 대한 ABT-806 기반 ADC의 세포 독성 활성
테스트 샘플 환자 유래 세포주
vIII352T1 780 437 464 22
ABT806 ADC73 0.572 0.959 0.357 0.472 0.501
ADC75 0.104 0.227 0.241 0.151 0.282
ADC74 0.170 0.425 0.253 0.069 0.489
실험예 7. 항-CD19 ADCs의 세포독성
인간 버킷 림프종(human Burkitt's lymphoma) 세포인 라모스 세포를 96-웰 플레이트에 20,000 세포 / 웰로 성장 배지 100 μL에 접종 하였다. 세포를 37 ℃에서 5 % CO2에서 1 일간 배양 하였다. 항-CD19 항체 DI-B4- (LC)-G7CVIM 및 ADC를 100μL 배지에서 33.33 nM 내지 5.1 pM으로 연속 희석하여 항체 및 ADC와 함께 72 시간 동안 배양 하였다. WST-1 (TaKaRa MK400) 및 Softmax Pro v5를 실행하는 Molecular Devices SpectraMax 190 플레이트 판독기를 사용하여 세포 생존력(cell viability)를 평가하고, 및 450 nm에서 흡광도를 모니터링하였다 (표 16).
Ramos 세포의 실험은 K562 세포, CD19를 발현하지 않는 인간 골수성 백혈병 세포에 대한 실험과 병행하여 실시되었으며, 비특이적 세포 독성을 평가하는 음성 대조군으로 사용되었다.
ADC68 및 ADC69는 Ramos 세포에 대하여 0.09 nM의 IC50을 나타냈는데, 이것은 비 접합 된 DI-B4보다 우수 하였다 (표 16). 어떤 항체도 K562 대조 세포에 대해 33.33nM 미만의 세포 독성을 나타내지 않았다.
항-CD19 항체 기반 ADCs의 세포독성
ADC 코드 세포주
라모스(Ramos) K562
ADC67 >33.33 >33.33
ADC68 0.09 >33.33
ADC69 0.09 >33.33
실험예 8. 리툭산 기반 ADCs의 세포독성
인간 버킷 림프종 세포인 라모스 세포를 96-웰 플레이트에 20,000 세포 / 웰로 성장 배지 100 μL에 접종하였다. 세포를 37 ℃에서 5 % CO2에서 1 일간 배양 하였다. 리툭산(LC)-G7CVIM 및 ADC의 순차 희석액을 웰에 첨가하여 72 시간 동안 항체 및 ADC와 함께 항온 배양하였다. WST-1 (TaKaRa MK400) 및 Softmax Pro v5를 실행하는 Molecular Devices SpectraMax 190 플레이트 판독기를 사용하여 세포 생존력을 평가하였다 (표 17).
라모스 세포에서의 실험은 K562 세포, CD20을 발현하지 않는 인간 골수성 백혈병 세포에 대한 실험과 병행하여 수행되었으며, 비특이적 세포 독성을 평가하는 음성 대조군으로 사용되었다.
ADC70, ADC71 및 ADC72는 Ramos 세포에 대해 각각 4.56 nM, 1.47 nM 및 1.78 nM의 IC50을 나타냈는데 이는 비 접합 항-CD20 항체보다 우수했다 (표 17). 어떤 항체도 K562 대조 세포에 대해 33.33nM 미만의 세포 독성을 나타내지 않았다.
리툭산 기반 ADCs의 세포 독성 활동
ADC 코드 세포주
라모스(Ramos) K562
ADC70 4.56 >33.33
ADC71 1.47 >33.33
ADC72 1.78 >33.33
실험예 9. 베타 글루쿠로니다제 감수성(susceptibility)의 차이
0.06M Na-아세테이트 완충액 (pH 5.2) 중의 ADC를 1.5 mL 마이크로 튜브에 분주하였다. 혼합물 중의 ADC의 최종 농도는 12 μM로 조정되었다. 0.001 μg의 인간 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase) (R & D systems : 6144-GH-020)를 각 튜브에 첨가했다. 그런 다음 혼합물을 3 시간 동안 37℃ 수조에서 배양 하였다. 차가운 PBS 완충액 (pH 7.4)을 15 배 희석액에 첨가하여 반응을 종결시켰다. 베타-글루쿠로니다제에 의한 ADC-패턴의 변화를 HIC-HPLC로 분석 하였다. 효소 활성의 효능은 잔여물의 %(% of remaining)에 의해 시각화되었다 (도 10)
감수성에 대한 기여는 링커-톡신 부분의 분지 유닛 (BR)때문인 것으로 보였다. Lys가 BR에 위치할 때, 톡신 방출이 매우 효율적으로 일어났다. 아미드와 아민은 Lys보다 감수성이 적은 것으로 나타났다.
실험예 10. ADC의 혈장 안정성
ADC2 (Herceptin-LBG-MMAF, DAR2)와 케사일라(Kadcyla) 사이의 혈장 안정성을 비교하기 위해, 이들 ADC를 마우스 및 인간 혈장에서 5 초 (0 h) 또는 96 시간 (96 h) 동안 배양한 다음 SK-BR3 세포를 사용하여 72시간 동안 SRB in vitro 세포독성을 시험하였다.
혈장-배양된 캐사일라는 0h 캐사일라에 비하여 세포독성이 감소한 것으로 나타난 반면(IC50은 증가하였다; MP에 대해 0.26 (0h) 및 1.59 nM (96h), HP에 대해 0.29 (0h) 및 4.21 nM (96h)), 혈장-배양 된 ADC2는 세포강한 독성이 유지되었다(IC50에 변화가 없었다; MP에 대해 0.06 (0h) 및 0.07 nM (96h), HP에 대해 0.08 (0h) 및 0.08 nM (96h)) (도 11).
다양한 항체로 구성된 ADC의 혈장 안정성을 평가하기 위해 ADC를 인간 혈장에서 5 초 (168 시간) 또는 168 시간 (168 시간) 동안 배양 한 후 SK-BR3 세포를 사용하여 72 시간 동안 SRB in vitro 세포 독성 시험을 실시했다. (표 18-20 및 그림 12)
허셉틴 기반 ADCs (nM)의 혈장 안정성
시험 샘플 혈장 배양 시간
0h 168h
MMAF-OMe 0.48 N.D.
허셉틴 MMAF ADC2 0.09 0.15
ADC6 0.07 0.09
ADC8 0.11 0.18
ADC14 0.06 0.08
ADC16 0.05 0.07
ADC23 0.04 0.05
ADC34 0.03 0.04
ADC40 0.03 0.05
ADC46 0.03 0.03
ADC48 0.03 0.04
ADC62 0.02 0.02
MMAE ADC1 0.26 0.41
ADC3 0.20 0.32
ADC5 0.19 0.31
ADC7 0.17 0.26
ADC12 0.51 0.79
ADC13 0.63 0.87
ADC15 0.52 0.70
ADC24 0.08 0.11
ADC25 0.07 0.12
ADC26 0.17 0.22
ADC27 0.10 0.14
ADC28 0.07 0.08
ADC29 0.06 0.08
ADC30 0.15 0.19
ADC31 0.08 0.12
ADC32 0.05 0.09
ADC33 0.04 0.09
ADC35 0.11 0.21
ADC36 0.09 0.12
ADC39 0.12 0.17
ADC45 0.04 0.05
ADC47 0.04 0.05
ADC61 0.32 0.32
항-CD19 항체 기반 ADCs의 혈장 안정성 (nM)
시험 샘플 혈장 배양
0h 168h
MMAF-OMe 0.160 N.D.
CD19 ADC68 0.036 0.048
ADC69 0.047 0.135
항-CD20 항체 기반 ADCs의 혈장 안정성 (nM)
시험 샘플 혈장 배양
0h 168h
MMAF-OMe 0.160 N.D.
CD20 ADC71 4.001 4.134
ADC72 2.026 3.851
실험예 11. 허셉틴® 및 ADC의 약물 동태(pharmacokinetics)
수컷 스프라그 돌리 (Sprague Dawley) 랫트에 3 ㎎ / ㎏의 항체 또는 항체-약물 접합체를 정맥 내 투여 하였다. 투여 후 여러 시점에서 혈액 샘플을 채취하고 얼음물에서 냉각시킨 다음 혈장을 분리하였다. 혈장은 이후의 LC / MS / MS 분석까지 -80 ℃에서 동결하였다.
각 샘플 20 μL를 PBS 340 μL 및 단백질 A 마그네틱 비즈 60 μL와 혼합하고 부드럽게 흔들어 실온에서 2 시간 동안 배양하였다. 비즈를 PBS로 3 회 세척하였다. 그런 다음 25 μL의 내부 표준 (동위원소-표지된 펩타이드 10 μg / mL), 75 μL의 RapiGest SF (Waters) 및 10 μL의 디티오트레이톨(dithiothreitol)을 비즈에 첨가했다. 혼합물을 1 분 동안 진탕시킨 다음 60 ℃에서 1 시간 동안 배양하였다. 25 μL의 요오도 아세트산을 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 1 분 동안 진탕시킨 후, 실온에서 30 분 동안 배양하였다. 10 μL의 시퀀싱 그레이드 트립신 (Promega)을 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 1 분 동안 진탕하고, 혼합물을 37 ℃에서 밤새 배양하였다. 15 μL의 염산을 가하여 1 분간 진탕 한 후, 37 ℃에서 30 분간 배양하였다. 혼합물을 4 ℃에서 10 분간 5000 x g으로 원심분리하고 상층액을 HPLC 바이알로 옮겼다.
액체 크로마토그래피-질량 분석 시스템은 2개의 Shimadzu CB-20A HPLC 펌프, Shimadzu CBM-20A HPLC 펌프 컨트롤러 (Shimadzu Corporation, Columbia, MD, USA), CTC HTS PAL 자동 시료 주입기 (CEAP Technologies, Carbobo, NC, USA) 및 3배 flight 5600 질량 분석기 (Triple TOF MS) (AB Sciex, Foster City, CA, USA)로 구성된다. 분석 칼럼은 Phenomenex Kinetex XB-C18 칼럼 2.1 × 30 (2.6 μm)이었다. HPLC를 물 / 아세토니트릴 농도구배로 수행하고 0.1 % 포름산으로 산성화시켰다. 주입량은 10 μL였다. DuosprayTM 이온 소스가 장착 된 Triple TOF MS를 사용하여 고해상도 실험을 완료하였다. Triple TOF MS는 양이온 모드로 작동되었다. 분무기 / Duospray ™ 및 커튼 가스로는 고순도 질소 가스를 사용하였다. 소스 온도는 30 L / 분의 커튼 가스 유량으로 500 ℃로 설정하였다. 이온 분무 전압은 5500V로 설정되었고, 데클러스터링 전위(declustering potential)는 145V 였고, 충돌 에너지는 38V였다. 생성물 이온 모드는 스캔 모드로 사용되었다. Windows® (Microsoft)로 운영되는 Analyst® TF Version 1.6 (AB Sciex)은 계측기 제어 및 데이터 수집에 사용되었다. 피크 통합은 MultiQuant® 버전 2.1.1 (AB Sciex)으로 수행되었다. 피크 면적 비율(peak area ratios), 표준곡선 회귀분석(standard curve regressions), 샘플 농도 값 및 기술통계(descriptive statistics)를 위해 MultiQuant® 버전 2.1.1을 사용하여 계산을 수행하였다. LC / MS / MS는 0.1, 0.4, 1, 2, 5, 10, 20, 40, 80 및 100 μg / mL의 농도에서 표준 용액을 사용하여 보정되었다. 대표적인 PK 프로파일은 도13에 나와 있다. ADC2 (허셉틴 (LC)-MMAF, DAR2)의 PK 프로파일은 허셉틴의 PK 프로파일과 매우 유사하다.
실험예 12. 분지된 링커-톡신에서의 PEG (연결 유닛) 조합 효과
ADC의 PK 프로파일에 영향을 미치는 중요한 요인을 확인하기 위해 연결 유닛 (PEG 수 및 배열)의 길이와 구조를 상이하게 하여 테스트하였다. PK 분석 실험은 실험예 9에 기재된 바에 따라 수행하였다.
DAR2 ADC보다 ADC23 (DAR4 ADC)의 in vitro 및 in vivo 효능이 더 우수하였지만, PK 프로파일은 반감기 및 AUC가 감소하였다 (도 14). 링커-톡신을 16f에서 25f로 교체함으로써 (분지 유닛(BR) 뒤에 추가 연결 유닛(3 PEGs)가 부착됨), PK 프로파일은 허셉틴만큼 회복되었다 (도 14). 이러한 결과는 MMAE 기반 ADC, ADC24 및 ADC33에서도 나타났다 (도 15). MMAE가 MMAF보다 더욱 소수성이기 때문에 MMAE를 기반으로 하는 ADC는 ADC1과 ADC24에서와 같이 PK 프로파일이 악화되었다. 더 긴 PEG 단위를 추가하는 것은 반감기와 AUC를 연장하는 전통적인 방법이었다. 그러나 ADC1과 ADC5를 비교할 때 3 ~ 12의 PEG 단위 수의 단순한 연장에서는 큰 차이를 보이지 않았다. 반면에, 선형 링커 유닛 (화합물 2g 또는 4f)을 분지된 하나 (화합물 11j, ADC15)로 대체함으로써, PK 프로파일은 상당히 향상되었으며 (그림 16), 이는 PK에 영향을 미치는 중요한 요인이 단순히 길이(length)가 아니라 연결 유닛의 구조(structure)일 수 있음을 나타낸다.
실험예 13. ADC의 PK에 친수성 연결 유닛이 미치는 영향
ADC에 사용되는 많은 페이로드(payload)는 소수성이어서, 좋지 않은 PK 특성을 나타낸다. 소수성을 보완하기 위해, 친수성 화합물을 연결 유닛의 일부로서 하여 테스트하였다. Asp와 같은 친수성 화합물을 삽입하는 경우 ADC의 AUC 및 반감기가 증가하였다 (도 17, 18, 19). DAR2의 경우, Asp를 포함하는 연결 유닛을 갖는 ADC는 허셉틴에 비하여 더 높은 AUC를 나타냈다 (도 17, 18). Asp 또는 Glu와 같은 극성 아미노산에 의한 보완 효과는 DAR4인 ADC에서도 관찰될 수 있다 (도 19, 20). ADC49 (2 Asp) 및 ADC52 (2 D-Glu)는 AUC 및 반감기에서 각각 ADC47 (1 Asp) 및 ADC51 (1D-Glu)보다 우수했다.
실험예 14. in vivo 효능
냉동된 JIMT-1 세포주를 해동시키고 37 ℃, 5 % CO2 조건하에 배양하였다. 생존율이 95 % 이상인 최상의 조건의 JIMT-1 세포가 이식에 사용되었다. 50 μL의 냉 식염수에 현탁된 5 × 106 세포를 balb / c-nude 마우스의 오른쪽 뒷다리에 이식하였다. 그룹당 5 마리의 마우스를 실험에 사용하였다. 종양의 형성과 성장을 주기적으로 관찰하였다. 종양 체적은 다음 식에 의해 계산되었다; 체적 = (a2b) / 2, "a"는 짧은 직경을, "b"는 긴 직경을 나타낸다.
종양 체적이 약 200 mm3에 이르면 평균값을 가진 마우스를 선택하고 종양 체적에 따라 그룹화하였다. 그 후 마우스에 PBS (vehicle control), 또는 ADC (도 21 및 22) 처리하였다. 실험 기간 중 3 내지 4 일 간격으로 일주일에 2 번 종양 크기를 측정하였다. 투여 첫날부터 종료일까지 측정한 종양 체적을 종양 성장 곡선으로 나타내었다.
대표적인 ADC는 단일 주사로 테스트하였다. 일반적으로, Lys를 함유하는 분지 유닛 (BR)을 갖는 ADC는 아미드를 함유하는 BR을 갖는 ADC보다 더 우수한 효능을 나타냈다.
참조에 의한 통합
특허, 공개특허, 비-특허문헌 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
등가물
당업자는 본 명세서에 기재된 본 발명의 특정 구체예에 대한 다수의 균등물에 대해, 단지 일상적 실험을 사용하여 이를 인식하거나, 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 다음의 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims (127)

  1. 리간드;
    리간드에 공유 결합으로 연결된 링커; 및
    링커에 공유 결합으로 연결된 적어도 두 개의 활성제를 포함하고,
    여기에서 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하며, 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄(side chain)와 공유 결합으로 연결된,
    리간드-약물 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 리간드는 항체인, 접합체.
  3. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 적어도 두 개의 활성제는 리신, 5-하이드록시리신, 4-옥살리신, 4-티알리신, 4-셀레나리신, 4-티아호모리신, 5,5-디메틸리신, 5,5-디플루오로리신, 트랜스-4-디히드로리신, 2,6-디아미노-4-헥시노산, 시스-4-디히드로리신, 6-N-메틸리신, 디아미노피멜산, 오르니틴, 3-메틸오르니틴, α-메틸오르니틴, 시트룰린, 및/또는 호모시트룰린의 측쇄와 공유 결합으로 연결된, 접합체.
  4. 제3항에 있어서, 적어도 두 개의 활성제는 리신 또는 오르니틴의 측쇄와 공유 결합으로 연결된, 접합체.
  5. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 다수의 아미노산은 L-아미노산을 포함하는, 접합체.
  6. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 다수의 아미노산은 D-아미노산을 포함하는, 접합체.
  7. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 다수의 아미노산은 α-아미노산을 포함하는, 접합체.
  8. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 다수의 아미노산은 β-아미노산을 포함하는, 접합체.
  9. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 다수의 아미노산은 알라닌, 아스파테이트, 아스파라긴, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 리신, 오르니틴, 프롤린, 세린, 및/또는 트레오닌을 포함하는, 접합체.
  10. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 펩타이드는 이소루신, 메티오닌, 루신, 페닐알라닌, 트립토판, 티로신, 또는 발린 아미노산을 포함하지 않는, 접합체.
  11. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 펩타이드는 2 내지 20 아미노산을 포함하는, 접합체.
  12. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단이 적어도 하나의 활성제를 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된, 접합체.
  13. 선행하는 청구항들 중 어느 하나에 있어서, 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단이 리간드를 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된, 접합체.
  14. 선행하는 청구항들의 접합체에 있어서,
    링커는 O-치환된 옥심을 포함하고;
    옥심의 산소 원자는 옥심을 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환되며;
    옥심의 탄소 원자는 옥심을 리간드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된, 접합체.
  15. 선행하는 청구항들의 접합체에 있어서,
    링커는 O-치환된 옥심을 포함하고;
    옥심의 탄소 원자는 옥심을 펩타이드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환되며;
    옥심의 산소 원자는 옥심을 리간드에 공유 결합으로 연결시키는 그룹으로 치환된, 접합체.
  16. 선행하는 청구항들의 접합체에 있어서,
    링커는 1 내지 100개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌을 포함하고;
    알킬렌은 적어도 한 개 이상의 불포화된 결합을 포함하며;
    알킬렌의 적어도 한 개 이상의 탄소 원자는 질소(N), 산소(O) 및 황(S)으로부터 선택된 하나 혹은 그 이상의 헤테로원자로 치환되고;
    알킬렌은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 적어도 한 개 이상의 알킬로 추가적으로 치환된, 접합체.
  17. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 티오에테르 결합에 의해 공유 결합으로 리간드에 결합하고, 티오에테르 결합은 그 리간드의 시스테인의 황 원자를 포함하는, 접합체.
  18. 제17항에 있어서,
    리간드는 이소프레노이드 트랜스퍼라제(isoprenoid transferase)에 의해 인식되는 C-말단 아미노산 모티프(motif)를 포함하고;
    티오에테르 결합은 그 아미노산 모티프의 시스테인의 황 원자를 포함하는, 접합체.
  19. 제18항에 있어서,
    아미노산 모티프는 CYYX 서열이고;
    C는 시스테인을 나타내며;
    Y는 각 경우에 독립적으로 지방족 아미노산을 나타내고;
    X는 각 경우에 독립적으로 글루타민, 글루타메이트, 세린, 시스테인, 메티오닌, 알라닌 또는 류신을 나타내며;
    티오에테르 결합은 아미노산 모티프의 시스테인의 황 원자를 포함하는, 접합체.
  20. 제19항에 있어서,
    아미노산 모티프는 CYYX 서열이고;
    Y는 각 경우에 독립적으로 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌 또는 발린을 나타내는, 접합체.
  21. 제20항에 있어서, 아미노산 모티프는 CVIM 또는 CVLL 서열인, 접합체.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 한 개는 글리신인, 접합체.
  23. 제22항에 있어서, 아미노산 모티프에 선행하는 7개의 아미노산 중 적어도 세 개는 각각 독립적으로 글리신 및 프롤린으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 접합체.
  24. 제23항에 있어서, 아미노산 모티프에 선행하는 한 개, 두 개, 세 개, 네 개, 다섯 개, 여섯 개, 일곱 개, 여덟 개, 아홉 개 또는 열 개의 아미노산의 각각은 글리신인, 접합체.
  25. 제24항에 있어서, 리간드의 C-말단은 GGGGGGGCVIM 아미노산 서열을 포함하는, 접합체.
  26. 제17항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 티오에테르 결합은
    Figure pct00261
    으로 나타내는 적어도 한 개 이상의 이소프레닐 유닛의 탄소 원자를 포함하는, 접합체.
  27. 제26항에 있어서, n은 2인 접합체.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 링커는 옥심을 포함하고, 적어도 한 개 이상의 이소프레닐 유닛은 옥심과 리간드를 공유결합으로 연결시키는, 접합체.
  29. 제28항에 있어서, 링커는
    Figure pct00262
    또는
    Figure pct00263
    를 포함하는, 접합체.
  30. 제28항에 있어서, 링커는
    Figure pct00264
    를 포함하는 접합체.
  31. 제28항에 있어서, 링커는
    Figure pct00265
    를 포함하는 접합체.
  32. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는
    Figure pct00266
    또는
    Figure pct00267
    로 나타내는 적어도 한 개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 포함하는, 접합체.
  33. 제32항에 있어서, 링커는 1 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함하는, 접합체.
  34. 제32항에 있어서, 링커는 4 내지 20개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함하는, 접합체.
  35. 제32항에 있어서, 링커는 3 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함하는, 접합체.
  36. 제32항에 있어서, 링커는 1 내지 12개의 -OCH2CH2- 유닛을 포함하는, 접합체.
  37. 제32항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어, 링커는 옥심을 포함하고, 적어도 한 개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 옥심을 펩타이드와 공유 결합으로 연결시키는, 접합체.
  38. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 -(CH2)r(V(CH2)p)q-로 나타내는 연결 유닛(connection unit)을 포함하고, 여기서,
    r은 0 내지 10로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2이고;
    p는 0 내지 12로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2이며;
    q는 1 내지 20로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 4 내지 20이고;
    V는 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-, 바람직하게는 -O-이며;
    R21 내지 R25은 각각 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴인, 접합체.
  39. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y((CH2)pV)q- 또는 -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-로 나타내는 연결 유닛을 포함하고 여기서,
    r은 0 내지 10으로부터 선택되는 정수이고;
    p는 1 내지 10으로부터 선택되는 정수이며;
    q는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수이고;
    V 및 Y는 각각 독립적으로 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이며;
    R21 내지 R25은 각각 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴인, 접합체.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, q는 4 내지 20으로부터 선택되는 정수인, 접합체.
  41. 제38항 또는 제39항에 있어서, q는 6 내지 20으로부터 선택되는 정수인, 접합체.
  42. 제38항 또는 제39항에 있어서, q는 2 내지 12로부터 선택되는 정수인 접합체.
  43. 제38항 또는 제39항에 있어서, q는 2, 5 또는 11인 접합체.
  44. 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, r은 2인 접합체.
  45. 제38항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, p는 2인 접합체.
  46. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, V 및 Y는 각각 독립적으로 -O-인, 접합체.
  47. 제38항 또는 제39항에 있어서,
    r은 2이고;
    p는 2이며;
    q는 2, 5 또는 11이고;
    V는 -O-인, 접합체.
  48. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 -(CH2CH2X)w-로 나타내는 연결 유닛을 포함하고 여기서,
    X는 -O-, (C1-C8)알킬렌 또는 -NR21, 바람직하게는 -O-이며;
    R21은 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20) 헤테로아릴, 바람직하게는 수소이며;
    w는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 4 내지 12로부터 선택되는 정수인, 접합체.
  49. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 1, 3-쌍극 부가환화 반응(dipolar cycloaddition reaction), 헤테로-디엘스-엘더 반응(hetero-Diels-Alder reaction), 친핵성 치환 반응(nucleophilic substitution reaction), 비-알돌형 카보닐 반응(non-aldol type carbonyl reaction), 탄소-탄소 다중 결합에의 첨가(addition to carbon-carbon multiple bond), 산화 반응(oxidation reaction) 또는 클릭 반응(click reaction)에 의해 형성된 결합 유닛(binding unit)을 포함하는, 접합체.
  50. 제49항에 있어서, 결합 유닛은 아세틸렌 및 아자이드 사이의 반응에 의해 형성되거나, 알데하이드 또는 케톤 그룹과 하이드라진 또는 알콕시아민 사이의 반응에 의해 형성되는, 접합체.
  51. 제50항에 있어서, 결합 유닛은 식 A, B, C 또는 D, 바람직하게는 C 또는 D 중 어느 하나로 나타나며,
    Figure pct00268
    Figure pct00269
    Figure pct00270
    Figure pct00271

    (A) (B) (C) (D)
    여기서,
    L1은 단일 결합 또는 1 내지 30개, 바람직하게는 12개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌이고;
    R11은 수소 또는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 알킬, 바람직하게는 메틸이며; L2는 1 내지 30개, 바람직하게는 11개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌인, 접합체.
  52. 제51항에 있어서, 링커는
    Figure pct00272
    또는
    Figure pct00273
    를 포함하고, 여기서
    V는 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-, 바람직하게는 -O-이며;
    R21 내지 R25은 각각 독립적으로 수소,(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴이고;
    r은 1 내지 10으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
    p는 0 내지 10으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2이고;
    q는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 2 내지 20이며;
    L1은 단일 결합인, 접합체.
  53. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 두 개 이상의 활성제의 각각은 한 개 이상의 링커를 통해 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결되는, 접합체.
  54. 제53항에 있어서, 활성제와 아미노산의 측쇄를 연결하는 링커들 중 적어도 하나는 제49항 내지 제52항 중 어느 하나에서 정의된 결합 유닛을 포함하는, 접합체.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 링커들 중 적어도 하나는 분지된(branched) 링커인, 접합체.
  56. 제55항에 있어서, 적어도 두 개의 분지된 링커는 펩타이드와 공유 결합으로 연결된, 접합체.
  57. 제56항에 있어서, 세 개의 분지된 링커가 펩타이드와 연결된 접합체.
  58. 제56항에 있어서, 네 개의 분지된 링커가 펩타이드와 연결된 접합체.
  59. 제53항 또는 제54항에 있어서, 정확히 하나의 분지된 링커가 펩타이드와 연결된, 접합체.
  60. 제55항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 분지된 링커는 적어도 두 개의 활성제와 연결된, 접합체.
  61. 제60항에 있어서, 적어도 하나의 분지된 링커는 두 개의 다른 활성제와 연결된, 접합체.
  62. 제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 분지된 링커는 분지 유닛(branching unit)을 포함하고, 각각의 활성제는 제2 (secondary) 링커를 통해 분지 유닛에 연결되며, 분지 유닛은 제1 링커에 의해 펩타이드와 연결되는, 접합체.
  63. 제62항에 있어서, 적어도 하나의 분지 유닛은
    Figure pct00274
    ,
    Figure pct00275
    ,
    Figure pct00276
    또는
    Figure pct00277
    구조를 갖고, 여기서
    L1, L2, L3 는 각각 독립적으로 직접 결합 또는 -CnH2n- 이고, n은 1 내지 30의 정수이며;
    G1, G2, G3는 각각 독립적으로 직접 결합 또는
    Figure pct00278
    ,
    Figure pct00279
    ,
    Figure pct00280
    또는
    Figure pct00281
    이고;

    R3는 수소 또는 C1-C30알킬이며;
    R4는 수소 또는 -L4-COOR5이고, 여기서 L4는 직접 결합 또는 -CnH2n-이고, n은 1 내지 10의 정수이며, R5는 수소 또는 C1-C30알킬인, 접합체.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 식
    Figure pct00282
    (V)의 구조를 포함하고;
    여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B2는 제2 활성제를 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  65. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 식
    Figure pct00283
    (VI)의 구조를 포함하고;
    여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B2는 제2 활성제를 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  66. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00284
    의 구조를 포함하고 여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B2는 제2 활성제를 나타내고;
    L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
    L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  67. 제66항에 있어서,
    Figure pct00285
    구조를 포함하고 여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B2는 제2 활성제를 나타내고;
    B3는 제3 활성제를 나타내며;
    L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
    L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
    L3는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  68. 제66항에 있어서,
    Figure pct00286
    구조를 포함하고 여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B11는 제2 활성제를 나타내고;
    B12는 제3 활성제를 나타내며;
    L1은 링커를 나타내고;
    L2는 링커를 나타내며;
    L11은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내고;
    L12는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내며;
    BU는 분지 유닛을 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  69. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00287
    의 구조를 포함하고 여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B2는 제2 활성제를 나타내고;
    L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
    L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  70. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00288
    의 구조를 포함하고 여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B2는 제2 활성제를 나타내고;
    B3는 제3 활성제를 나타내며;
    L1은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
    L2는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내며;
    L3는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 링커를 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  71. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00289
    구조를 포함하고 여기서,
    A는 리간드를 나타내며;
    P~~~P는 펩타이드를 나타내고;
    B1은 제1 활성제를 나타내며;
    B11는 제2 활성제를 나타내고;
    B12는 제3 활성제를 나타내며;
    L1은 링커를 나타내고;
    L2는 링커를 나타내며;
    L11은 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내고;
    L12는 선택적으로 절단(cleavage) 그룹을 포함하는 제2 링커를 나타내며;
    BU는 분지 유닛을 나타내고;
    n은 1 내지 20의 정수인, 접합체.
  72. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 리간드는 모노클로날 항체, 폴리클로날항체, 항체 단편(fragment), Fab, Fab', Fab'-SH, , F(ab′)2, Fv, 단쇄(single chain) Fv ("scFv"), 디아바디(diabody), 선형 항체(linear antibody), 이중특이성 항체(bispecific antibody), 다중특이성 항체(multispecific antibody), 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체, 인간 항체 또는 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 융합단백질인, 접합체.
  73. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어, 리간드는 뮤로모납-CD3 아브식시맙(muromonab-CD3 abciximab), 리툭시맙(rituximab), 다클리주맙(daclizumab), 팔리비주맙(palivizumab), 인플릭시맙(infliximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 에타너셉트(etanercept), 바실릭시맙(basiliximab), 젬투주맙(gemtuzumab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 이브리투모맙(ibritumomab), 아달리무맙(adalimumab), 알레파셉트(alefacept), 오말리주맙(omalizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 토시투모맙(tositumomab), 세툭시맙(cetuximab), ABT-806, 베바시주맙(bevacizumab), 나탈리주맙(natalizumab), 라니비주맙(ranibizumab), 파니투무맙(panitumumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 릴로나셉트(rilonacept), 세르톨리주맙(certolizumab), 로미플로스팀(romiplostim), AMG-531, 골리무맙(golimumab), 우스테키누맙(ustekinumab), ABT-874, 베라타셉트(belatacept), 벨리무맙(belimumab), 아타시셉트(atacicept), 항-CD20 항체, 카나키누맙(canakinumab), 토실리주맙(tocilizumab), 아틀리주맙(atlizumab), 메폴리주맙(mepolizumab), 페르투주맙(pertuzumab), 휴맥스 CD20(HuMax CD20), 트레멜리무맙(tremelimumab), 티실리무맙(ticilimumab), 이필리무맙(ipilimumab), IDEC-114, 이노투주맙(inotuzumab), 휴맥스 EGFR(HuMax EGFR), 아플리베르셉트(aflibercept), 휴맥스-CD4(HuMax-CD4), 테플리주맙(teplizumab), 오텔릭시주맙(otelixizumab), 카투막소맙(catumaxomab), 항-EpCAM 항체 IGN101(anti-EpCAM antibody IGN101), 아데카투모맙(adecatumomab), 오레고보맙(oregovomab), 디누툭시맙(dinutuximab), 지렌툭시맙(girentuximab), 데노수맙(denosumab), 바피네우주맙(bapineuzumab), 모타비주맙(motavizumab), 에품구맙(efumgumab), 락시바쿠맙(raxibacumab), LY2469298 및 벨투주맙(veltuzumab)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 접합체.
  74. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 활성제는 독립적으로 화학치료제(chemotherapeutic agents) 및 톡신으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 접합체.
  75. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 활성제는 독립적으로
    (a) 얼로티닙(erlotinib), 보르테조밉(bortezomib), 풀베스트란트(fulvestrant), 수텐트(sutent), 레트로졸(letrozole), 이마티닙 메실레이트(imatinib mesylate), PTK787/ZK 222584, 옥살리플라틴(oxaliplatin), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 류코보린(leucovorin), 라파마이신(rapamycin), 라파티닙(lapatinib), 로나파르닙(lonafarnib), 소라페닙(sorafenib), 제피티닙(gefitinib), AG1478, AG1571, 티오테파(thiotepa), 사이클로포스파마이드(cyclophosphamide), 부설판(busulfan), 임프로설판(improsulfan), 피포설판(piposulfan), 벤조도파(benzodopa), 카르보쿠온(carboquone), 메투레도파(meturedopa), 우레도파(uredopa), 에틸렌이민(ethylenimine), 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민(triethylenemelamine), 트리에틸렌포스포라마이드(trietylenephosphoramide), 트리에틸렌티오포스포라마이드(triethiylenethiophosphoramide), 트리메틸올로멜라민(trimethylolomelamine), 불라타신(bullatacin), 불라타시논( bullatacinone), 캄토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 브리오스타틴(bryostatin), 칼리스타틴(callystatin), CC-1065, 아도제레신(adozelesin), 카르제레신(carzelesin), 비제레신(bizelesin), 크립토피신 1(cryptophycin 1), 크립토피신 8(cryptophycin 8), 돌라스타틴(dolastatin), 두오카마이신(duocarmycin), KW-2189, CB1-TM1, 엘로테로빈(eleutherobin), 판크라티스타틴(pancratistatin), 사르코딕티인(sarcodictyin), 스폰지스타틴(spongistatin), 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 콜로포스파마이드(cholophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스파마이드(ifosfamide), 메클로레타민(mechlorethamine), 멜팔란(melphalan), 노벰비킨(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파마이드(trofosfamide), 우라실 머스타드(uracil mustard), 카르무스틴(carmustine), 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine), 라님누스틴(ranimnustine), 칼리케마이신(calicheamicin), 칼리케마이신 감마 1(calicheamicin gamma 1), 칼리케마이신 오메가 1(calicheamicin omega 1), 다이네마이신(dynemicin), 다이네마이신 A(dynemicin A), 클로드로네이트(clodronate), 에스페라마이신(esperamicin), 네오카르지노스타틴 크로모포어(neocarzinostatin chromophore), 아클라시노마이신스(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 안트르마이신(antrmycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신스(bleomycins), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카르니노마이신(carninomycin), 카르지노필린(carzinophilin), 크로모마이신스(chromomycins), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데토루부신(detorubucin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신(6-diazo-5-oxo-L-norleucine), 독소루비신(doxorubicin), 모르폴리노-독소루비신(morpholino-doxorubicin), 시아노모르폴리노-독소루비신(cyanomorpholino-doxorubicin), 2-피롤리노-독소루비신(2-pyrrolino-doxorubucin), 리포소말 독소루비신(liposomal doxorubicin), 데옥시독소루비신(deoxydoxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 마르셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신 C(mitomycin C), 미코페놀릭산( mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신스(olivomycins), 페플로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 푸로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토미그린(streptomigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin), 5-플로오로우라실(5-fluorouracil), 데놉테린(denopterin), 메토트렉세이트(methotrexate), 프테로프테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 플루다라빈(fludarabine), 6-머캅토퓨린(6-mercaptopurine), 티아미프린(thiamiprine), 티구아닌(thiguanine), 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(6-azauridine), 카르모푸르(carmofur), 시타라빈(cytarabine), 디데옥시우리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플록수리딘(floxuridine), 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate), 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 테스토락톤(testolactone), 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 미토탄(mitotane), 트릴로스탄(trilostane), 폴린산(folinic acid), 아세글라톤(aceglatone), 알도포스파미드 글리코시드(aldophosphamide glycoside), 아미노레불린산(aminolevulinic acid), 에닐우라실(eniluracil), 암사크린(amsacrine), 베스트라부실(bestrabucil), 비산트렌(bisantrene), 에다트락세이트(edatraxate), 데포파민(defofamine), 데메콜신(demecolcine), 디아지쿠온(diaziquone), 엘포르니틴(elfornithine), 엘립티늄 아세테이트(elliptinium acetate), 에토글루시드(etoglucid), 갈륨 니트레이트(gallium nitrate), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 렌티난(lentinan), 로니다이닌(lonidainine), 메이탄신(maytansine), 안사미토신스(ansamitocins), 미토구아존(mitoguazone), 미토잔트론(mitoxantrone), 모피단몰(mopidanmol), 니트라에린(nitraerine), 펜토스타틴(pentostatin), 페나메트(phenamet), 피라루비신(pirarubicin), 로속산트론(losoxantrone), 2-에틸하이드라자이드(2-ethylhydrazide), 프로카르바진(procarbazine), 폴리사카라이드-k(polysaccharide-k), 라족산(razoxane), 리족신(rhizoxin), 시조피란(sizofiran), 스피로게르마늄(spirogermanium), 테누아존산(tenuazonic acid), 트리아지쿠온(triaziquone), 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민(2,2',2''-trichlorotriethylamine), T-2 톡신(T-2 toxin), 베라쿠린 A(verracurin A), 로리딘 A(roridin A), 안구이딘(anguidine), 우레탄(urethane), 빈데신(vindesine), 다카르바진(dacarbazine), 만노무스틴(mannomustine), 미토브로니톨(mitobronitol), 미토락톨(mitolactol), 피포브로만(pipobroman), 가시토신(gacytosine), 아라비노사이드(arabinoside), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 티오테파(thiotepa), 파크리탁셀(paclitaxel), 파크리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(albumin-engineered nanoparticle formulation of paclitaxel), 도세타셀(doxetaxel), 클로람부실(chlorambucil), 젬시타빈(gemcitabine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 빈블라스틴(vinblastine), 백금(platinum), 에토포시드(etoposide), 이포스파미드(ifosfamide), 미토잔트론(mitoxantrone), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine), 노반트론(novantrone), 테니포시드(teniposide), 에다트렉세이트(edatrexate), 다우노마이신(daunomycin), 아미놉테린(aminopterin), 젤로다(xeloda), 이반드로네이트(ibandronate), CPT-11, 토포이소머라제 저해제 RFS 2000(topoisomerase inhibitor RFS 2000), 디플로오로메틸로니틴(difluoromethylornithine), 레틴산(retinoic acid), 카페시타빈(capecitabine), 또는 전술한 것들의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 산;
    (b) 모노카인(monokine), 림포카인(lymphokine), 전통적인 폴리펩타이드 호르몬, 부갑상선 호르몬, 티록신(thyroxine), 릴랙신(relaxin), 프로릴랙신(prorelaxin), 당단백질 호르몬(glycoprotein hormone), 여포자극 호르몬(follicle stimulating hormone), 갑상선 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone), 황체형성 호르몬(luteinizing hormone), 간성장인자(hepatic growth factor), 섬유모세포 성장인자(fibroblast growth factor), 프로락틴(prolactin), 태반성 락토겐(placental lactogen), 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor-α), 종양괴사인자-β(tumor necrosis factor-β), 뮐러관 억제 물질(mullerian-inhibiting substance), 마우스 고나도트로핀-관련 펩타이드(mouse gonadotropin-associated peptide), 인히빈(inhibin), 액티빈(activin), 혈관표피성장인자(vascular endothelial growth factor), 트롬보포이에틴(thrombopoietin), 에리트로포이에틴(erythropoietin), 골유도 인자(osteoinductive factor), 인터페론(interferon), 인터페론-α(interferon-α), 인터페론-β(interferon-β), 인터페론-γ(interferon-γ), 콜로니 자극 인자(colony stimulating factor ("CSF")), 매크로파지-CSF(macrophage-CSF), 과립구-매크로파지-CSF(granulocyte-macrophage-CSF), 과립구-CSF(granulocyte-CSF), 인터루킨(interleukin ("IL")), IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 종양괴사인자(tumor necrosis factor), TNF-a, TNF-b, 폴리펩타이드 인자(polypeptide factor), LIF, 키트 리간드(kit ligand) 또는 전술한 것들의 조합;
    (c) 디프테리아 톡신(diphtheria toxin), 보튤리늄 톡신(botulium toxin), 파상풍 톡신(tetanus toxin), 이질 톡신(dysentery toxin), 콜레라 톡신(cholera toxin), 아마니틴(amanitin), α-아마니틴(α-amanitin), 아마니틴 유도체(amanitin derivatives), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine), 피롤로벤조디아제핀 유도체(pyrrolobenzodiazepine derivatives), 테트로도톡신(tetrodotoxin), 브레베톡신(brevetoxin), 시구아톡신(ciguatoxin), 리신(ricin), AM 톡신(AM toxin), 튜불리신(tubulysin), 젤다나마이신(geldanamycin), 메이탄시노이드(maytansinoid), 칼리케마이신(calicheamicin), 다우노마이신(daunomycin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 빈데신(vindesine), SG2285, 돌라스타틴(dolastatin), 돌라스타틴 유사체(dolastatin analog), 크립토피신(cryptophycin), 캄토테신(camptothecin), 캄토테신 유도체 및 대사체(camptothecin derivatives and metabolites (예를 들어, SN-38)), 리조신(rhizoxin), 리조신 유도체(rhizoxin derivative), CC-1065, CC-1065 유사체 혹은 유도체, 두오카마이신(duocarmycin), 에네디인 항생제(enediyne antibiotic), 에스페라마이신(esperamicin), 에포틸론(epothilone), 아조나파이드(azonafide), 아프리딘(aplidine), 톡소이드(toxoid) 또는 전술한 것들의 조합;
    (d) 친화 리간드(affinity ligand), 여기서 친화 리간드는 기질, 저해제, 자극 인자, 신경전달물질, 방사성동위원소 또는 전술한 것들의 조합;
    (e) 방사능 표지, 32P, 35S, 형광 염료, 전자 고밀도 시약, (electron dense reagent),효소, 바이오틴(biotin), 스트렙타비딘(streptavidin), 디옥시게닌(dioxigenin), 햅텐(hapten), 면역 단백질, 표적 대상에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자 또는 전술한 것들의 조합;
    (f) 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항세균제, 항진균제, 항기생충제 또는 전술한 것들의 조합;
    (g) 타목시펜(tamoxifen), 랄록시펜(raloxifene), 드롤록시펜(droloxifene), 4-하이드록시타목시펜(4-hydroxytamoxifen), 트리옥시펜(trioxifene), 케옥시펜(keoxifene), LY117018, 오나프리스톤(onapristone) 또는 토레미펜(toremifene);
    (h) 4(5)-이미다졸(4(5)-imidazoles), 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 메게스트롤 아세테이트(megestrol acetate), 엑세메스탄(exemestane), 레트로졸(letrozole) 또는 아나스트로졸(anastrozole);
    (i) 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide), 비카루타미드(bicalutamide), 류프로라이드(leuprolide), 고세렐린(goserelin) 또는 트록사시타빈(troxacitabine);
    (j) 아로마타제 저해제;
    (k) 단백질 키나아제 저해제;
    (l) 리피드 키나아제 저해제;
    (m) 안티센스 올리고뉴클레오티드;
    (n) 리보자임(ribozyme);
    (o) 백신; 및
    (p) 항신생혈관제(anti-angiogenic agent)로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 접합체.
  76. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 한 개의 활성제는 탈토불린(taltobulin)인, 접합체.
  77. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 한 개의 활성제는 아조나파이드(azonafide)인, 접합체.
  78. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 활성제는 독립적으로 아마니틴(amanitin), 아우리스타틴(auristatin), 칼리케마이신(calicheamicin), 캄토테신(camptothecin), 크립토피신(cryptophycin), 다우노마이신(daunomycin), 돌라스타틴(dolastatin), 독소루비신(doxorubicin), 두오카마이신(duocarmycin), 에포틸론(epothilone), 에스페라마이신(esperamicin), 젤다나마이신(geldanamycin), 메이탄시노이드(maytansinoid), 메토트렉세이트(methotrexate), 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E ("MMAE")), 모노메틸 아우리스타틴 F(monomethyl auristatin F ("MMAF")), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine), 리조신(rhizoxin), SG2285, 투불리신(tubulysin), 빈데신(vindesine) 및 톡소이드(toxoid)로 구성된 그룹으로부터 선택되거나, 앞서 언급된 것들 중 어느 것의 유도체인, 접합체.
  79. 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 활성제는 독립적으로 아마니틴, MMAE 및 MMAF로 구성된 그룹으로부터 선택되거나, 앞서 언급된 것들 중 어느 것의 유도체인, 접합체.
  80. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 접합체는
    Figure pct00290
    ,
    Figure pct00291
    ,
    Figure pct00292
    및
    Figure pct00293
    으로부터 구성된 그룹으로부터 선택된 모이어티(moiety)를 포함하는 하나 이상의 분지 링커를 포함하는, 접합체.
  81. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 한 개의 활성제는 식 (I)의 구조를 갖는 절단 그룹을 통하여 링커와 연결되는 접합체:
    Figure pct00294

    (I)
    여기서,
    B는 활성제를 나타내며;
    G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합되며;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로), 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
    R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하고;
    L은 리간드에의 연결을 나타낸다.
  82. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 한 개의 활성제는 식
    Figure pct00295
    을 갖는 절단 그룹을 통하여 링커에 연결되며,
    여기서,
    G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
    m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하는, 접합체.
  83. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 한 개의 활성제는 식
    Figure pct00296
    을 갖는 절단 그룹 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 통하여 링커에 연결되며,
    여기서,
    G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    B는 활성제와 공유 결합으로 연결되는 유닛이며;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노,(C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
    L은 펩타이드 서열을 포함하는 링커를 나타내며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하는, 접합체.
  84. 제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 Z는 수소, (C1-C8)알킬, 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로인, 접합체.
  85. 제84항에 있어서, 각각의 Z는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로인, 접합체.
  86. 제81항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 당 또는 당산은 모노사카라이드(monosaccharide)인, 접합체.
  87. 제86항에 있어서,
    G는
    Figure pct00297
    이고;
    R3는 수소 또는 카복실 보호 그룹이며;
    각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호 그룹인, 접합체.
  88. 제87항에 있어서, R3는 수소이고 각각의 R4는 수소인, 접합체.
  89. 제81항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴인, 접합체.
  90. 제89항에 있어서, W는 -C(O)NR'-이고, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합하고, NR'은 L에 결합하는, 접합체.
  91. 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 Z는 수소이고, n은 3인 접합체.
  92. 제81항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소인, 접합체.
  93. 제81항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서,
    G는 글루쿠론산이고;
    W는 -C(O)NR'-이고, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합하고, NR'은 L에 결합하며;
    각각의 Z는 독립적으로 수소이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소인, 접합체.
  94. 제64항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, B, B1 및/또는 B2는 각각 독립적으로
    Figure pct00298
    ,
    Figure pct00299
    ,
    Figure pct00300
    ,
    Figure pct00301
    ,
    Figure pct00302
    ,
    Figure pct00303
    ,
    Figure pct00304
    ,

    Figure pct00305
    ,
    Figure pct00306
    ,
    Figure pct00307
    ,

    Figure pct00308
    ,
    Figure pct00309
    ,
    Figure pct00310
    ,
    Figure pct00311
    ,
    Figure pct00312
    또는
    Figure pct00313
    이고,
    여기서 y는 1 내지 10으로부터 선택되는 정수인, 접합체.
  95. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 선행하는 청구항 중 어느 한 항에서 제시된 것으로서 리간드에 공유적으로 결합하는 2 내지 4의 링커들을 포함하며, 여기서,
    각각의 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고;
    적어도 두 개의 활성제는 각각의 링커의 아미노산의 측쇄에 공유적으로 결합하는, 접합체.
  96. 제95항에 있어서, 각각의 링커는 리간드의 C-말단에 결합하는, 접합체.
  97. 제96항에 있어서, 리간드는 항체이고 각각의 링커는 항체의 C-말단(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄)에 결합하는, 접합체.
  98. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 활성제는 동일한 활성제인, 접합체.
  99. 제1항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 활성제는 적어도 두 개의 다른 활성제를 포함하는 접합체.
  100. 선행하는 청구항 중 어느 한 항의 접합체 및 약학적으로 허용되는 부형제(excipient)를 포함하는 약학적 조성물.
  101. 제100항에 있어서, 치료적 유효량의 화학치료제를 추가적으로 포함하는 약학적 조성물.
  102. 제100항 또는 제101항의 약학적 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체 내 암을 치료하는 방법.
  103. 제102항에 있어서, 개체는 포유동물인 방법.
  104. 제103항에 있어서, 개체는 설치류(rodents), 토끼(lagomorphs), 고양이(felines), 개(canines), 돼지(porcines), 양(ovines), 소(bovines), 말(equines) 및 영장류(primates)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  105. 제103항에 있어서, 개체는 인간인, 방법.
  106. 생체 분자와 프로드럭간의 반응을 포함하는, 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항의 리간드-약물 접합체를 제조하는 방법으로, 여기서
    생체 분자는 리간드 및 케톤 또는 알데하이드를 포함하고;
    프로드럭은 알콕시아민을 포함하며;
    반응은 옥심을 생성하고, 그렇게 됨으로써 리간드와 프로드럭간 공유적으로 결합하는, 방법.
  107. 제106항에 있어서, 리간드는 항체인 방법.
  108. 제106항 또는 제107항에 있어서, 리간드를 이소프레닐화하고 그렇게 함으로써, 생체 분자를 생성하는 단계를 더 포함하고, 여기서
    리간드는 이소프레닐화 서열을 포함하고;
    리간드를 이소프레닐화하는 것은 리간드를 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소프레노이드 트렌스퍼라제 기질과 함께 배양(incubating)하는 것을 포함하며;
    기질은 케톤 또는 알데하이드를 포함하는, 방법.
  109. 제108항에 있어서, 리간드는 항체인 방법.
  110. 제108항 또는 제109항에 있어서, 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 파네실트랜스퍼라제(farnesyltransferase) 또는 게라닐게라닐트랜스퍼라제(geranylgeranyltransferase)인 방법.
  111. 리간드를 이소프레닐화하는 것을 포함하는, 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항의 리간드-약물 접합체를 제조하는 방법으로, 여기서
    리간드는 이소프레닐화 서열을 포함하고;
    리간드를 이소프레닐화하는 것은 리간드를 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소프레노이드 트렌스퍼라제 기질과 함께 배양(incubating)하는 것을 포함하며;
    기질은 활성제를 포함하는, 방법.
  112. 제111항에 있어서, 리간드는 항체인 방법.
  113. 링커-활성제 화합물로서, 여기서
    i) 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고;
    ii) 적어도 두 개의 활성제는 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결되는, 링커-활성제 화합물.
  114. 제113항의 링커-활성제 화합물로서, 각각의 활성제는 리간드-활성제 화합물로부터 활성제를 방출하도록 가수분해할 수 있는 절단 그룹에 의해 펩타이드 서열과 연결되는, 링커-활성제 화합물.
  115. 제114항의 링커-활성제 화합물에 있어서,
    절단 그룹은 식
    Figure pct00314
    (I)을 갖는 구조로 나타내지고;
    B는 활성제를 나타내며;
    G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합되고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
    R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하고;
    L은 리간드에의 연결을 나타내는, 링커-활성제 화합물.
  116. 제114항의 링커-활성제 화합물에 있어서,
    절단 그룹은 식
    Figure pct00315
    을 갖는 구조로 나타내지고;
    G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
    m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하는, 링커-활성제 화합물.
  117. 제114항의 링커-활성제 화합물에 있어서,
    절단 그룹은 식
    Figure pct00316
    을 갖는 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 나타내지고;
    G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    B는 활성제와 공유 결합으로 연결되는 유닛이며;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
    L은 펩타이드 서열에의 연결을 나타내며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하는, 링커-활성제 화합물.
  118. 제115항 내지 117항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로인, 링커-활성제 화합물.
  119. 제118항에 있어서, 각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로인, 링커-활성제 화합물.
  120. 링커 화합물로서,
    i) 링커는 다수의 아미노산의 펩타이드 서열을 포함하고;
    ii) 적어도 두 개의 절단 그룹은 아미노산의 측쇄와 공유 결합으로 연결되고, 여기서 각각의 절단 그룹은 활성제와 반응할 수 있는 반응성 모이어티(moiety)를 갖는, 링커 화합물.
  121. 제120항의 링커 화합물에 있어서,
    절단 그룹은 식
    Figure pct00317
    (I)을 갖는 구조로 나타내지고;
    B는 할로겐(예를 들어, Cl 또는 Br) 또는 활성제와 연결시킬 수 있는 반응성 모이어티(moiety)를 포함하는 유닛, 예를 들어 이소시아네이트, 산 염화물, 클로로포르메이트 등과 같이, 활성제가 대체될 수 있는 방출 그룹을 나타내며;
    G는 당(sugar) 또는 당산(sugar acid), 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    W는 전자 끄는 기(electron withdrawing group), 바람직하게는 -C(O)NR'-이며, 여기서 C(O)는 페닐 고리에 결합되고, NR'은 L에 결합되고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이고;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이며;
    R1과 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하고;
    L은 펩타이드 서열에의 연결을 나타내는, 링커 화합물.
  122. 제120항의 링커 화합물에 있어서,
    절단 그룹은 식
    Figure pct00318
    을 갖는 구조로 나타내지고;
    G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R''NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 바람직하게는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 모노- 또는 디-카복실(C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로)이며, 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수이고;
    m은 0 또는 1, 바람직하게는 1이고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하는, 링커 화합물.
  123. 제120항의 링커 화합물에 있어서,
    절단 그룹은 식
    Figure pct00319
    을 갖는 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 나타내지고;
    G는 당(sugar), 당산(sugar acid) 또는 변형된 당, 바람직하게는 당 또는 당산, 가장 바람직하게는 글루쿠론 산(glucuronic acid)이고;
    B는 활성제와 공유 결합으로 연결될 수 있는 반응성 모이어티를 포함하는 유닛이며;
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'-, -C(O)O-, -S(O)2NR'-, -P(O)R"NR'-, -S(O)NR'- 또는 -PO2NR'-이고, 각각의 경우에 있어서, C(O), S 또는 P는 페닐 고리에 직접적으로 결합하며, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알킬티오, 모노- 또는 디-(C1-C8)알킬아미노, (C3-C20)헤테로아릴 또는 (C6-C20)아릴이고;
    각각의 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, 또는 전자 끄는 기(예컨대 아미드, 카복시산, 카복시산 에스테르, 할로겐, 시아노 또는 니트로), 바람직하게는 수소, (C1-C8)알킬, 할로겐, 시아노 또는 니트로, 가장 바람직하게는 수소이며;
    n은 1 내지 3으로부터 선택되는 정수, 바람직하게는 3이고;
    L은 펩타이드 서열에의 연결을 나타내며;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬, 바람직하게는 수소이거나 R1과 R2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 (C3-C8)사이클로알킬 고리를 형성하는 링커 화합물.
  124. 제121항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서,
    G는
    Figure pct00320
    이고;
    R3는 수소 또는 카복실 보호 그룹이며;
    각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 하이드록실 보호 그룹인, 링커 화합물.
  125. 제121항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y((CH2)pV)q- 또는 -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-로 나타나는 연결 유닛을 포함하고, 여기서
    r은 0 내지 10으로부터 선택되는 정수이고;
    p는 1 내지 10으로부터 선택되는 정수이며;
    q는 1 내지 20으로부터 선택되는 정수이고;
    V 및 Y는 각각 독립적으로 단일 결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- 또는 -SO2NR25-이고;
    R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬(C6-C20)아릴 또는 (C1-C6)알킬(C3-C20)헤테로아릴인, 링커 화합물.
  126. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 그룹은 표적 세포 내 절단을 가능하게 하는, 접합체.
  127. 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 그룹은 하나 이상의 활성제를 방출하는 것을 가능하게 하는, 접합체.

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