TW202140787A - 用於調節ｓｍｎ２之化合物及方法 - Google Patents

用於調節ｓｍｎ２之化合物及方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202140787A
TW202140787A TW110106883A TW110106883A TW202140787A TW 202140787 A TW202140787 A TW 202140787A TW 110106883 A TW110106883 A TW 110106883A TW 110106883 A TW110106883 A TW 110106883A TW 202140787 A TW202140787 A TW 202140787A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
modified
modified oligonucleotide
oligomeric compound
sugar
certain embodiments
Prior art date
Application number
TW110106883A
Other languages
English (en)
Inventor
法蘭克 里格
Ｔ Ｐ 普拉卡許
嘉茵 凌
Ｗ 布萊德 萬
威廉 約翰 三世 杜魯睿
Original Assignee
美商Ionis製藥公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商Ionis製藥公司 filed Critical 美商Ionis製藥公司
Publication of TW202140787A publication Critical patent/TW202140787A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/345—Spatial arrangement of the modifications having at least two different backbone modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Liquid Crystal Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

提供了用於調節細胞或個體之SMN2 RNA及/或蛋白的化合物、方法及醫藥組成物。此類化合物、方法及醫藥組成物可用於改善神經退化性病症之至少一個症狀。此類症狀包括：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。

Description

用於調節SMN2之化合物及方法
提供了用於調節細胞或個體之SMN2 RNA的化合物、方法及醫藥組成物。此類化合物、方法及醫藥組成物可用於改善神經退化性病症之至少一個症狀。此類症狀包括：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。
近脊髓性肌肉萎縮症(SMA)為一種特徵在於脊髓運動神經元損失的遺傳性神經退化性病症。SMA為早發體染色體隱性疾病且為嬰兒死亡的主要遺傳原因。SMA之嚴重程度因患者而異且因此分為四種類型。I型SMA為最嚴重的形式，在出生時或6個月內發作，且通常導致2年內死亡。I型SMA兒童不能就坐或行走。II型SMA為中間形式，且患者能夠就坐，但不能站立或行走。III型SMA (疾病之慢性形式)患者通常在18個月之後發展SMA (Lefebvre等人,Hum. Mol. Genet ., 1998,7 , 1531-1536)。IV型SMA為較溫和的形式且通常在18歲之後發作，有時在10歲之後發作；IV型SMA患者經歷有限的輕度運動障礙，在成年期能夠行走且通常沒有呼吸或營養問題(Farrar等人,Ann. Neurol. , 2017,81 , 355-368；D’Amico等人,Orphanet J. of Rare Diseases , 2011,6 : 71)。
SMA之分子基礎為損失存活運動神經元基因1 (survival motor neuron gene 1；SMN1)(亦可稱為SMN端粒)之兩個拷貝且編碼被認為參與snRNP生物發生及回收的多蛋白複合物之一部分的蛋白。幾乎相同的基因SMN2 (亦稱為SMN著絲粒)存在於染色體5q13上的重複區中且調節疾病嚴重程度。儘管SMN1及SMN2具有編碼同一蛋白的潛力，但正常SMN1基因之表現僅導致全長存活運動神經元(SMN)蛋白之表現，而SMN2基因之表現導致兩種不同的蛋白形式，全長SMN2蛋白及截短SMN2蛋白(SMNΔ7蛋白)。SMN2在外顯子7之位置+6處含有轉譯緘默突變，導致SMN2轉錄本中外顯子7之無效納入。因此，SMN2之優勢形式為缺少外顯子7的截短形式，其為不穩定且非活性的(Cartegni及Krainer, Nat. Genet., 2002, 30, 377-384)。SMN2基因之表現得到約10-20%全長SMN蛋白及80-90%不穩定/非功能SMNΔ7蛋白。SMN蛋白在剪接體之組裝中起公認的作用且亦可介導神經元之軸突及神經末端中的mRNA運輸。
本文之目標為提供用於治療SMA之化合物、方法及醫藥組成物。
本文提供用於調節細胞或個體之SMN2 RNA之剪接的化合物、方法及醫藥組成物。在某些實施例中，可用於調節SMN2 RNA之剪接的化合物為寡聚化合物。在某些實施例中，寡聚化合物增加包括外顯子7之SMN2 RNA之量。在某些實施例中，寡聚化合物增加全長SMN2蛋白表現。在某些實施例中，寡聚化合物包含經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，個體患有神經退化性疾病。在某些實施例中，個體患有脊髓性肌肉萎縮症(SMA)。
亦提供可用於改善神經退化性疾病之至少一個症狀的方法。在某些實施例中，神經退化性疾病為SMA。在某些實施例中，症狀包括：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。在某些實施例中，本文提供用於治療SMA的經修飾之寡核苷酸。
序列表
本申請案正連同電子格式的序列表一起申請。序列表以創建於2020年2月28日之標題為BIOL0367USLSEQ_ST25.txt之檔案的形式提供，其大小為44 KB。電子格式的序列表中之資訊以全文引用之方式併入本文。
應當理解，前述一般描述及以下詳細描述僅為示範性及說明性的而不具有限制性。在本文，除非另外特別說明，否則單數之使用包括複數。如本文所用，除非另外說明，否則「或」之使用意謂「及/或」。此外，術語「包括(including)」以及其他形式(諸如「包括(includes)」及「包括(included)」)之使用不為限制性的。同樣，除非另外特別說明，否則諸如「元件」或「組件」之術語涵蓋包含一個單元的元件及組件以及包含多於一個子單元的元件及組件。
本文所用之章節標題僅用於組織目的，而不應被視為限制所描述之標的物。本申請案中引用之所有文件或文件之部分，包括但不限於專利、專利申請案、文章、書籍及論文以及GenBank及NCBI參考序列記錄在此關於本文所討論之文件之部分以及全文以引用之方式明確併入。定義
除非提供特定的定義，否則結合本文所述之分析化學、合成有機化學及藥物及藥劑化學使用之命名法以及其過程及技術為此項技術中熟知且常用的。在允許的情況下，在本揭露通篇引用之所有專利、申請案、公開之申請案以及其他出版物及其他資料以全文引用之方式併入本文。
除非另外指示，否則以下術語具有以下含義： 如本文所用，「2’-去氧核糖核苷」意謂包含2’-H (H)去氧核糖基糖部分的核苷。在某些實施例中，2’-去氧核糖核苷為2’-β-D-去氧核糖核苷且包含2’-β- D-去氧核糖基糖部分，其具有如在天然存在之去氧核糖核酸(DNA)中所發現之β-D組態。在某些實施例中，2’-去氧核糖核苷可包含經修飾之核鹼基或可包含RNA核鹼基(尿嘧啶)。
如本文所用，「2’-MOE」意謂2’-OCH2 CH2 OCH3 基團替代核糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-MOE糖部分」為2’-OCH2 CH2 OCH3 基團替代核糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另外指示，否則2’-MOE糖部分呈β-D組態。「MOE」意謂O-甲氧基乙基。
如本文所用，「2’-MOE核苷」意謂包含2’-MOE糖部分的核苷。
如本文所用，「2’-NMA」意謂-O-CH2 -C(=O)-NH-CH3 基團替代核糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-NMA糖部分」為2’–O-CH2 -C(=O)-NH-CH3 基團替代核糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另外指示，否則2’-NMA糖部分呈β-D組態。「 NMA」意謂O-N-甲基乙醯胺。
如本文所用，「2’-NMA核苷」意謂包含2’-NMA糖部分的核苷。
如本文所用，「2’-OMe」意謂2’-OCH3 基團替代核糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-OMe糖部分」為2’-OCH3 基團替代核糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另外指示，否則2’-OMe糖部分呈β-D組態。「OMe」意謂O-甲基。
如本文所用，「2’-OMe核苷」意謂包含2’-OMe糖部分的核苷。
如本文所用，「2’-取代之核苷」意謂包含2’-取代之糖部分的核苷。如本文所用，關於糖部分的「 2’-取代之」意謂包含至少一個除H或OH以外的2’-取代基的糖部分。
如本文所用，「 5-甲基胞嘧啶」意謂經連接至5位的甲基修飾之胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶為經修飾之核鹼基。
如本文所用，「投與」意謂向個體提供藥劑。
如本文所用，關於治療的「改善」意謂至少一個症狀相對於不存在該治療之情況下的相同症狀的改良。在某些實施例中，改善為症狀之嚴重程度或頻率降低或症狀之延遲發作或嚴重程度或頻率之進展減慢。在某些實施例中，症狀為：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。
如本文所用，「反義活性」意謂可歸因於反義化合物與其靶核酸之雜交的任何可偵測及/或可量測的變化。
如本文所用，「反義化合物」意謂能夠達成至少一種反義活性的寡聚化合物或寡聚雙螺旋。
如本文所用，「雙環核苷」或「BNA」意謂包含雙環糖部分的核苷。
如本文所用，「雙環糖」或「雙環糖部分」意謂包含兩個環的經修飾之糖部分，其中第二環經由連接第一環中兩個原子的橋形成，從而形成雙環結構。在某些實施例中，雙環糖部分之第一環為呋喃糖基部分。在某些實施例中，呋喃糖基部分為核糖基部分。在某些實施例中，雙環糖部分不包含呋喃糖基部分。
如本文所用，「腦脊髓液」或「CSF」意謂填充腦及脊髓周圍之空間的流體。「人工腦脊髓液」或「aCSF」意謂經製備或製造具有腦脊髓液之某些特性的流體。
如本文所用，「cEt」意謂4’至2’橋替代核糖基糖部分之2’OH-基團，其中橋具有式4’-CH(CH3 )-O-2’，且其中橋之甲基呈S 組態。「cEt糖部分」為4’至2’橋替代核糖基糖部分之2’OH-基團的雙環糖部分，其中橋具有式4’-CH(CH3 )-O-2’，且其中橋之甲基呈S 組態。「cEt」意謂受約束乙基。
如本文所用，「cEt核苷」意謂包含cEt糖部分的核苷。
如本文所用，「掌性富集群體」意謂具有相同分子式之複數個分子，其中群體內在特定掌性中心含有特定立體化學組態之分子的數目或百分比比若特定掌性中心為隨機立構的，則群體內預期在相同特定掌性中心含有相同特定立體化學組態之分子的數目或百分比大。在各分子內具有多個掌性中心的分子之掌性富集群體可含有一或多個隨機立構掌性中心。在某些實施例中，分子為經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，分子為包含經修飾之寡核苷酸的化合物。
如本文所用，關於寡核苷酸的「互補」意謂當寡核苷酸與另一核酸之核鹼基序列以相對方向對齊時，寡核苷酸或其一或多個部分之至少70%核鹼基與另一核酸或其一或多個部分之核鹼基能夠彼此氫鍵鍵合。互補核鹼基意謂能夠彼此形成氫鍵的核鹼基。互補核鹼基對包括腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)以及5-甲基胞嘧啶(mC)與鳥嘌呤(G)。互補寡核苷酸及/或靶核酸不必在各個核苷處均具有核鹼基互補性。相反地，一些錯配為容許的。如本文所用，關於寡核苷酸或其部分的「完全互補」或「100%互補」意謂寡核苷酸或其部分與另一寡核苷酸或靶核酸在兩個寡核苷酸中之較短者之各核鹼基處互補，或若寡核苷酸為相同長度，則在各個核苷處互補。
如本文所用，在寡核苷酸之背景中「連續」係指核苷、核鹼基、糖部分或核苷間鍵彼此緊鄰。例如，「連續核鹼基」意謂在序列中彼此緊鄰的核鹼基。
如本文所用，「雜交」意謂互補寡核苷酸及/或核酸之配對或退火。儘管不限於具體機制，但最常見的雜交機制涉及互補核鹼基之間的氫鍵鍵合，其可為瓦生克立克(Watson-Crick)、胡斯坦(Hoogsteen)或反向胡斯坦氫鍵鍵合。
如本文所用，「核苷間鍵聯」意謂寡核苷酸中連續核苷之間的共價鍵聯。如本文所用，「經修飾之核苷間鍵聯」意謂除磷酸二酯核苷間鍵聯以外的任何核苷間鍵聯。「硫代磷酸酯核苷間鍵聯」為經修飾之核苷間鍵聯，在其中磷酸二酯核苷間鍵聯之非橋聯氧原子之一經硫原子置換。
如本文所用，「錯配」或「非互補的」意謂當將第一寡核苷酸及第二寡核苷酸對齊時，第一寡核苷酸之核鹼基與第二寡核苷酸或靶核酸之對應核鹼基不互補。
如本文所用，「模體」意謂寡核苷酸中未經修飾及/或經修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯之模式。
如本文所用，「非雙環經修飾之糖部分」意謂包含修飾(諸如取代基)之經修飾之糖部分，該修飾在糖之兩個原子之間不形成橋以形成第二環。
如本文所用，「核鹼基」意謂未經修飾之核鹼基或經修飾之核鹼基。如本文所用，「未經修飾之核鹼基」為腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)或鳥嘌呤(G)。如本文所用，「經修飾之核鹼基」為除未經修飾之A、T、C、U或G以外的能夠與至少一個未經修飾之核鹼基配對的一組原子。「5-甲基胞嘧啶」為未經修飾之核鹼基。通用鹼基為可與五種未經修飾之核鹼基中任一者配對的經修飾之核鹼基。如本文所用，「核鹼基序列」意謂靶核酸或寡核苷酸中連續核鹼基之順序，其與任何糖或核苷間鍵聯修飾無關。
如本文所用，「核苷」意謂包含核鹼基及糖部分的化合物。核鹼基及糖部分各自獨立地未經修飾或經修飾。如本文所用，「經修飾之核苷」意謂包含經修飾之核鹼基及/或經修飾之糖部分的核苷。「連接之核苷」為在連續序列中連接的核苷(亦即，在連接的核苷之間不存在額外的核苷)。
如本文所用，「寡聚化合物」意謂寡核苷酸及視情況一或多個其他特徵，諸如綴合基團或末端基團。寡聚化合物可以和與第一寡聚化合物互補的第二寡聚化合物配對或可為未配對。「單股寡聚化合物」為未配對之寡聚化合物。術語「寡聚雙螺旋」意謂由兩種具有互補核鹼基序列的寡聚化合物形成之雙螺旋。寡聚雙螺旋之各寡聚化合物可稱為「雙螺旋寡聚化合物」。
如本文所用，「寡核苷酸」意謂經由核苷間鍵連接的連接之核苷之股，其中各核苷及核苷間鍵可經修飾或未經修飾。除非另外指示，否則寡核苷酸由8-50個連接之核苷組成。如本文所用，「經修飾之寡核苷酸」意謂以下寡核苷酸，其中至少一個核苷或核苷間鍵聯經修飾。如本文所用，「未經修飾之寡核苷酸」意謂不包含任何核苷修飾或核苷間修飾的寡核苷酸。
如本文所用，「醫藥組成物」意謂合適於向個體投與的物質之混合物。例如，醫藥組成物可包含寡聚化合物及無菌水溶液。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑」意謂適用於向個體投與的任何物質。某些此類載劑使醫藥組成物能夠調配成例如錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸液劑及口含錠，以供個體經口攝取。在某些實施例中，醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑為無菌水、無菌鹽水、無菌緩衝溶液或無菌人工腦脊髓液。
如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」意謂化合物之生理學及醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽保留母體化合物之所需的生物活性且不賦予其非所需的毒理學作用。
除非另外指定，否則如本文所用，「RNA」意謂RNA轉錄本且包括前驅mRNA及成熟mRNA。
如本文所用，「隨機立構掌性中心」在具有相同分子式之分子群體背景下意謂具有隨機立體化學組態的掌性中心。例如，在包含隨機立構掌性中心的分子群體中，具有(S )組態之隨機立構掌性中心的分子數目可能但不必與具有(R )組態之隨機立構掌性中心的分子數目相同。當由於未對合成方法進行設計以控制立體化學組態時，掌性中心之立體化學組態被視為隨機的。在某些實施例中，隨機立構掌性中心為隨機立構硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如本文所用，「個體」意謂人類或非人類動物。
如本文所用，「糖部分」意謂未經修飾之糖部分或經修飾之糖部分。如本文所用，「未經修飾之糖部分」意謂如於RNA中發現之2’-OH(H) β-D核糖基部分(「未經修飾之RNA糖部分」)或如於DNA中發現之2’-H(H) β-D去氧核糖基部分(「未經修飾之DNA糖部分」)。未經修飾之糖部分在1’、3’及4’位中之各者處均具有一個氫，在3’位具有氧且在5’位具有兩個氫。如本文所用，「經修飾之糖部分」或「經修飾之糖」意謂經修飾之呋喃糖基糖部分或糖替代物。
如本文所用，「糖替代物」意謂除呋喃糖基部分外，可將核鹼基連接至寡核苷酸中之另一基團(諸如核苷間鍵聯、綴合基團或末端基團)的經修飾之糖部分。包含糖替代物之經修飾之核苷可併入寡核苷酸內之一或多個位置且此類寡核苷酸能夠與互補寡聚化合物或靶核酸雜交。
如本文所用，「標準活體內檢定」意謂實例2中所述之檢定及其合理的變型。
如本文所用，「症狀」意謂指示疾病或病症之存在或程度的任何身體特徵或測試結果。在某些實施例中，症狀對於個體或檢查或測試個體的醫學專業人員為顯而易見的。
如本文所用，「靶核酸」意謂反義化合物經設計以影響的核酸。
如本文所用，「靶區域」意謂靶核酸中寡聚化合物經設計以雜交的一部分。
如本文所用，「末端基團」意謂與寡核苷酸之末端共價連接的化學基團或原子團。
如本文所用，「治療有效量」意謂為個體提供治療益處的藥劑之量。例如，治療有效量改良疾病之症狀。某些實施例 本揭露提供以下非限制性編號實施例：
實施例1.     一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16、17、18、19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20-50中任一者之至少15或至少16個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例2.     一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由17、18、19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20-27、29-30或32-50中任一者之至少15、至少16或至少17個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例3.     一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由18、19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20-27、30或33-50中任一者之至少15、至少16、或至少17或至少18個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例4.     一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20、22、24-27、30、33-50中任一者之至少15、至少16、或至少17、至少18或至少19個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例5.     一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20、22、25、27、35、39-46或49中任一者之至少15、至少16、或至少17、至少18、至少19或至少20個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例6.     如實施例1-5中任一項之寡聚化合物，其中當在該經修飾之寡核苷酸之整個核鹼基序列上量測時，該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與核鹼基序列SEQ ID NO: 1至少80%、85%、87.5%、88.2%、89%、89.4%、90%、93.7%、94%、94.7%、95%或100%互補。
實施例7.     如實施例1-6中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sososssssssssssss、ssosssssssssssoss、ssosssssosssssoss、ssosssosssosssoss、soossssssssssooss、sooosssssssssooss、sooossssssssoooss、sssssssooosssssss、ssossssssssssssss、ssssossssssssssss、ssssssossssssssss、ssssssssossssssss、ssssssssssossssss、ssssssssssssossss、ssssssssssssssoss、sossssssssssssoss、sosssssssssosssss、sosssssssosssssss、sosssssosssssssss、sosssosssssssssss、ssssosssssssssoss、ssssssosssssssoss、ssssssssosssssoss、ssssssssssosssoss、ssssssssssssososs、soossssssssssssss、sssoossssssssssss、sssssoossssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss、sssssssssssoossss、sssssssssssssooss、sssssssoooossssss、ssoooosssssssssss、ssssoooosssssssss、ssssssssoooosssss、ssssssssssoooosss、sssssssssssooooss、ssssssooooossssss、 ssssssoooooosssss、soooosssssssoooss、sssssooooooosssss、ssssssssssssssoss、 ssssssssssssosss、sssssssssssssooss、ssssssssssssososs、sssssssssssosssss、sssssssssssososss、ssssssssssossosss、sssssssssosssssss、sssssssssosssosss、ssssssssosssssoss、ssssssssossssosss、sssssssosssssssss、sssssssoossssssss、sssssosssssssssss、sssosssssssssssss、sosssssssssssssss、sossssssossssssss、soossssssssssssss、ossssssssssssssssso、sssssssssssssssssoo、ssssssssssssssssoss、sssssssssssssssooss、ssssssssssssssososs、sssssssssosssssssss、sssssssssossssssoss、ssssssssoosssssssss、sosssssssssssssssss、sossssssssssssssoss、sosssssssosssssssss、sososssssssssssssss、soossssssssssssssss、sssssssssssssssssss、ssssssssssssssssso、ossssssssssssssssss、ssssssssssssososso、sssssssssssssssoss、sssssssssssssososs、ssssssssosssssssss、ssssssssossssssoss、sossssssssssssssss、sosssssssssssssoss、sossssssosssssssss、sosossssssssssssss、ssssssssssooooss、ssssssssoooossss、sssssssooossssss、ssssssoooossssss、ssssssooooosssss、sssssoooooosssss、sssssooooooossss、ssssoooossssssss、ssossssssssssoss、ssosssssossssoss、ssosssosssossoss、ssossossossososs、ssososososososss、ssoooossssssssss、soosssssssssooss、sooossssssssooss、sooosssssssoooss、soooossssssoooss、sssssssssooooss、ssssssssoooosss、ssssssooossssss、ssssssoooosssss、sssssooooosssss 、sssssoooooossss、ssssoooosssssss、ssssooooooossss、sssosssosssosss、ssosssssssssoss、ssossossossosss、ssossossosososs、ssososososososs、ssoooosssssssss、soossssssssooss、sooosssssssooss、sooossssssoooss及soooosssssoooss；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例8.     如實施例1-6中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯：sssssssssssssssxs及ssssssssssssssssx；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯且「x」表示甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯。
實施例9.     如實施例1-6中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯：zzzzzzzzzzzzzzzzz、ssssssssssszzzzzz、ssssszzzzzzssssss、zzooooooooooooozz、zzzzooooooooooozz、zzzzzzooooooooozz、zzzzzzzzooooooozz及ssoooooooooooooss；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯且「z」表示甲磺醯基胺基磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例10.   如實施例1-9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：eeeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeee、nnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn、nennnnneneennnnnnn、nnnnnnnnnnnnenneen、nennnnneneenenneen、nnnnnnnnnnnnnnnnnne、 nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、nnnnnnnnnnnnnnnnnny、nnnnnnnnnnnnnnnnnndd、nnnnnnnnnnnnnnnnnned、nnnnnnnnnnnnnnnnnnde、nnnnnnnnnnnnnnnnnnee、eeeeeeeeeeeeeeeeeedd、eeeeeeeeeeeeeeeeeeed、eeeeeeeeeeeeeeeeeede、nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、nnnnnnnnnnnnnnnnnne、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、keekeekeekeekeeeek、keeekeeekeeekeeeek、keeeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeeeek、eeekeekeekeekeekek、eeekeekeekeekeekee、eeeeeekeekeekeekee、eeeeeekeekeekeeeee、eeeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeeee、eeeeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeekeek、keekeekeekeekeeek、keeekeeekeeekeeek、keeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeeek、eekeekeekeekeekek、eekeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeeeee、eeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeee、eeeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeeee、eeeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeekeek、keekeekeekeekeek、keeekeeekeeekeek、keeeekeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeek、kekeekeekeekeeke、eekeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeee、eeeeekeeeeekeeee、keekeekeekeeeeee,eeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeee、eeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeekeek、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、eeeeeeeeeeeeeeeeeey、ennnnnnnnnnnnnnnnnn及ennnnnnnnnnnnnnnnnne；其中『e』表示2’-MOE糖部分，『n』表示2’-NMA糖部分，『k』表示cEt糖部分，『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分且『y』表示2’-OMe糖部分。
實施例11.   如實施例1-9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：nnnnnnnnnnnnnnnenn及nnnnnnnnnnnnnnnnen，其中『e』表示2’-MOE糖部分且『n』表示2’-NMA糖部分。
實施例12.   如實施例1-9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有糖模體(5’至3’) qqnqqqqqnqnnqnqqnn，其中各『n』表示2’-NMA糖部分，且各『q』獨立地選自2’-O-(N,N-二甲基)乙醯胺糖部分、2’-O-(N-乙基)乙醯胺糖部分、2’-O-(N-丙基)乙醯胺糖部分、2’O-(N-環丙基)乙醯胺糖部分及2’-O-(N-環丙基甲基)乙醯胺糖部分。
實施例13.   如實施例1-9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖部分。
實施例14.   如實施例13之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個雙環糖部分。
實施例15.   如實施例14之寡聚化合物，其中該雙環糖部分具有4’-2’橋，其中該4’-2’橋選自-CH2 -O-及-CH(CH3 )-O。
實施例16.   如實施例13之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個非雙環經修飾之糖部分。
實施例17.   如實施例16之寡聚化合物，其中該非雙環經修飾之糖部分為2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分或2’-F糖部分中任一者。
實施例18.   如實施例13之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個糖替代物。
實施例19.   如實施例18之寡聚化合物，其中該糖替代物為N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、PNA、THP及F-HNA中任一者。
實施例20.   如實施例1-6及10-19中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
實施例21.   如實施例20之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
實施例22.   如實施例20或實施例21之寡聚化合物，其中該經修飾之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例23.   如實施例1-20或22中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例24.   如實施例20、22或23之寡聚化合物，其中各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例25.   如實施例13-19中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sososssssssssssss、soossssssssssssss、sosssosssssssssss、sosssssosssssssss、sosssssssosssssss、sssoossssssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss及sssssssssssoossss；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例26.   如實施例1-25中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含經修飾之核鹼基。
實施例27.   如實施例26之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
實施例28.   如實施例1-27中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由16、17、18、19或20個連接之核苷組成。
實施例29.   如實施例1-28中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含1或2個非互補核鹼基。
實施例30.   如實施例1-29中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含1或2個可裂解部分。
實施例31.   如實施例30之寡聚化合物，其中該可裂解部分為磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例32.   如實施例1-31中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
實施例33.   如實施例1-32中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物為單股寡聚化合物。
實施例34.   一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：m Ces Aeo m Ces Teo Tes Tes m Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges m Ces Tes Ges Ges m Ce (SEQ ID NO: 21)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例35.   一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：Teo Tes m Ces Aes m Ces Tes Tes Tes m Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges m Ces Tes Ges Geo m Ce (SEQ ID NO: 22)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例36.   一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：Teo Tns m Cns Ans m Cns Tns Tns Tns m Cns Ans Tns Ans Ans Tns Gns m Cns Tns Gns Gno m Ce (SEQ ID NO: 22)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， n = 2’-NMA糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例37.   一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：m Cns Ano m Cns Tno Tns Tns m Cns Ans Tns Ans Ans Tns Gns m Cns Tns Gns Gns m Cn (SEQ ID NO: 21)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， n = 2’-NMA糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例38.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image001
(SEQ ID NO: 21)，或其鹽。
實施例39.   如實施例38之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
實施例40.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image003
(SEQ ID NO: 21)。
實施例41.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image005
(SEQ ID NO: 22)，或其鹽。
實施例42.   如實施例41之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
實施例43.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image007
(SEQ ID NO: 22)。
實施例44.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image009
(SEQ ID NO: 22)，或其鹽。
實施例45.   如實施例44之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
實施例46.   一種對應於以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image011
(SEQ ID NO: 22)。
實施例47.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image013
(SEQ ID NO: 21)，或其鹽。
實施例48.   如實施例47之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
實施例49.   一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image015
(SEQ ID NO: 21)。
實施例50.   一種醫藥組成物，其包含如實施例1-36中任一項之寡聚化合物或如實施例38-49中任一項之經修飾之寡核苷酸及醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。
實施例51.   如實施例50之醫藥組成物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑，且其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為人工CSF (aCSF)或PBS。
實施例52.   如實施例51之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由該經修飾之寡核苷酸及人工CSF (aCSF)組成。
實施例53.   如實施例51之醫藥組成合物，其中該醫藥組成物基本上由該經修飾之寡核苷酸及PBS組成。
實施例54.   一種如實施例38-49中任一項之經修飾之寡核苷酸之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例55.   如實施例54之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(S p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例56.   如實施例54之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(R p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例57.   如實施例54之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定經獨立選擇之立體化學組態的經修飾之寡核苷酸。
實施例58.   如實施例57之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸或在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態的經修飾之寡核苷酸。
實施例59.   如實施例57之掌性富集群體，其中該群體富集在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態且在各其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸。
實施例60.   如實施例57之掌性富集群體，其中該群體富集在5’至3’方向上具有呈S p、S p及R p組態的至少3個連續硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例61.   一種如實施例38-49中任一項之經修飾之寡核苷酸之群體，其中該經修飾之寡核苷酸之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為隨機立構的。
實施例62.   一種治療與SMN1或SMN2相關之疾病之方法，其包含向患有與SMN1或SMN2相關之疾病或處於發展該疾病之風險中的個體投與治療有效量如實施例50-53中任一項之醫藥組成物；及由此治療該與SMN1或SMN2相關之疾病。
實施例63.   如實施例62之方法，其中該與SMN1或SMN2相關之疾病為神經退化性疾病。
實施例64.   如實施例63之方法，其中該神經退化性疾病為脊髓性肌肉萎縮症(SMA)。
實施例65.   如實施例64之方法，其中該SMA為I型SMA、II型SMA、III型SMA或IV型SMA中任一者。
實施例66.   如實施例64或實施例65之方法，其中SMA之至少一個症狀經改善。
實施例67.   如實施例66之方法，其中該症狀為以下中任一者：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。
實施例68.   如實施例62-67中任一項之方法，其中向中樞神經系統或全身投與該醫藥組成物。
實施例69.   如實施例68之方法，其中向中樞神經系統且全身投與該醫藥組成物。
實施例70.   如實施例62-67中任一項之方法，其中以鞘內、全身、皮下或肌內中任一方式投與該醫藥組成物。
實施例71.   一種增加包括外顯子7之SMN2 RNA的方法，其包含將細胞、組織或器官與如實施例1-37中任一項之寡聚化合物、如實施例38-49中任一項之經修飾之寡核苷酸或如實施例50-53中任一項之醫藥組成物接觸。某些寡核苷酸
在某些實施例中，本文提供包含由連接之核苷組成的寡核苷酸的寡聚化合物。寡核苷酸可為未經修飾之寡核苷酸(RNA或DNA)或可為經修飾之寡核苷酸。相對於未經修飾之RNA或DNA，經修飾之寡核苷酸包含至少一種修飾。亦即，經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷(包含經修飾之糖部分及/或經修飾之核鹼基)及/或至少一個經修飾之核苷間鍵聯。某些經修飾之核苷
經修飾之核苷包含經修飾之糖部分、或經修飾之核鹼基、或經修飾之糖部分及經修飾之核鹼基兩者。某些糖部分
在某些實施例中，經修飾之糖部分為非雙環經修飾之糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分為雙環或三環糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分為糖替代物。此類糖替代物可包含一或多個對應於其他類型經修飾之糖部分的取代。
在某些實施例中，經修飾之糖部分為非雙環經修飾之糖部分，其包含具有一或多個取代基之呋喃糖基環，該一或多個取代基均不橋聯呋喃糖基環之兩個原子以形成雙環結構。此類非橋聯取代基可位於呋喃糖基之任何位置，包括但不限於在2’、4’及/或5’位的取代基。在某些實施例中，非雙環經修飾之糖部分之一或多個非橋聯取代基為支化的。合適於非雙環經修飾之糖部分的2’-取代基之實例包括但不限於：2’-F、2’-OCH3 (「OMe」或「O-甲基」)及2’-O(CH2 )2 OCH3 (「MOE」或「O-甲氧基乙基」)以及2’-O-N-烷基乙醯胺，例如，2’-O-N-甲基乙醯胺(「NMA」)、2’-O-N-二甲基乙醯胺、2’-O-N-乙基乙醯胺或2’-O-N-丙基乙醯胺。例如，參見U.S. 6,147,200, Prakash等人, 2003,Org. Lett .,5 , 403-6。下文展示「 2’-O-N-甲基乙醯胺核苷」或「 2’-NMA核苷」：
Figure 02_image017
在某些實施例中，2’-取代基選自：鹵基、烯丙基、胺基、疊氮基、SH、CN、OCN、CF3 、OCF3 、O-C1 -C10 烷氧基、O-C1 -C10 取代之烷氧基、O-C1 -C10 烷基、O-C1 -C10 取代之烷基、S-烷基、N(Rm )-烷基、O-烯基、S-烯基、N(Rm )-烯基、O-炔基、S-炔基、N(Rm )-炔基、O-烷烯基-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH2 )2 SCH3 、O(CH2 )2 ON(Rm )(Rn )或OCH2 C(=O)-N(Rm )(Rn )，其中各Rm 及Rn 獨立地為H、胺基保護基或者經取代或未經取代之C1 -C10 烷基，以及Cook等人, U.S. 6,531,584；Cook等人, U.S. 5,859,221；及Cook等人, U.S. 6,005,087中所述之2’-取代基。這些2’-取代基之某些實施例可以進一步經一或多個獨立地選自以下的取代基取代：羥基、胺基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2 )、硫醇、硫代烷氧基、硫代烷基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。合適於非雙環經修飾之糖部分的4’-取代基之實例包括但不限於烷氧基(例如，甲氧基)、烷基及Manoharan等人, WO 2015/106128中所述者。合適於非雙環經修飾之糖部分的5’-取代基之實例包括但不限於：5’-甲基(R 或S )、5’-乙烯基及5’-甲氧基。在某些實施例中，非雙環經修飾之糖部分包含多於一個非橋聯糖取代基，例如2’-F-5’-甲基糖部分以及Migawa等人, WO 2008/101157及Rajeev等人, US2013/0203836中所述之經修飾之糖部分及經修飾之核苷。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含有包含選自以下之非橋聯2’-取代基的糖部分：F、NH2 、N3 、OCF3 、OCH3 、O(CH2 )3 NH2 、CH2 CH=CH2 、OCH2 CH=CH2 、OCH2 CH2 OCH3 、O(CH2 )2 SCH3 、O(CH2 )2 ON(Rm )(Rn )、O(CH2 )、ON(CH3 )2 、O(CH2 )2 O(CH2 )2 N(CH3 )2 及N-取代之乙醯胺(OCH2 C(=O)-N(Rm )(Rn ))，其中各Rm 及Rn 獨立地為H、胺基保護基或者經取代或未經取代之C1 -C10 烷基，例如OCH2 C(=O)-N(H)CH3 (「NMA」)。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含有包含選自以下之非橋聯2’-取代基的糖部分：F、OCF3 、 OCH3 、OCH2 CH2 OCH3 、O(CH2 )2 SCH3 、O(CH2 )2 ON(CH3 )2 、O(CH2 )2 O(CH2 )2 N(CH3 )2 及OCH2 C(=O)-N(H)CH3 (「NMA」)。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含由包含選自以下之非橋聯2’-取代基的糖部分：F、OCH3 、OCH2 CH2 OCH3 及OCH2C(=O)-N(H)CH3。
某些經修飾之糖部分包含取代基，其橋聯呋喃糖基環之兩個原子以形成第二環，從而產生雙環糖部分。在某些此類實施例中，雙環糖部分在4’與2’呋喃糖環原子之間包含橋。此類4’至2’橋聯糖取代基之實例包括但不限於：4’-CH2 -2’、4’-(CH2 )2 -2’、4’-(CH2 )3 -2’、4’-CH2 -O-2’ (「 LNA 」)、4’-CH2 -S-2’、4’-(CH2 )2 -O-2’ (「 ENA 」)、4’-CH(CH3 )-O-2’ (稱為「受約束乙基」或「cEt」)、4’-CH2 -O-CH2 -2’、4’-CH2 -N(R)-2’、4’-CH(CH2 OCH3 )-O-2’ (「受約束MOE」或「cMOE」)及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 7,399,845；Bhat等人, U.S. 7,569,686；Swayze等人, U.S. 7,741,457及Swayze等人, U.S. 8,022,193)、4’-C(CH3 )(CH3 )-O-2’及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 8,278,283)、4’-CH2 -N(OCH3 )-2’及其類似物(參見例如Prakash等人, U.S. 8,278,425)、4’-CH2 -O-N(CH3 )-2’ (參見例如Allerson等人, U.S. 7,696,345及Allerson等人, U.S. 8,124,745)、4’-CH2 -C(H)(CH3 )-2’ (參見例如Zhou等人, J. Org. Chem., 2009,74 , 118-134)、4’-CH2 -C(=CH2 )-2’及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 8,278,426)、4’-C(Ra Rb )-N(R)-O-2’、4’-C(Ra Rb )-O-N(R)-2’、4’-CH2 -O-N(R)-2’及4’-CH2 -N(R)-O-2’，其中各R、Ra 及Rb 獨立地為H、保護基或C1 -C12 烷基(參見例如Imanishi等人, U.S. 7,427,672)。
在某些實施例中，此類4’至2’橋獨立地包含1至4個獨立地選自以下之連接之基團：-[C(Ra )(Rb )]n -、-[C(Ra )(Rb )]n -O-、-C(Ra )=C(Rb )-、-C(Ra )=N-、-C(=NRa )-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(Ra )2 -、-S(=O)x -及-N(Ra )-； 其中： x為0、1或 2； n為1、2、3或 4； 各Ra 及Rb 獨立地為H、保護基、羥基、C1 -C12 烷基、經取代之C1 -C12 烷基、C2 -C12 烯基、經取代之C2 -C12 烯基、C2 -C12 炔基、經取代之C2 -C12 炔基、C5 -C20 芳基、經取代之C5 -C20 芳基、雜環基團、經取代之雜環基團、雜芳基、經取代之雜芳基、C5 -C7 脂環族基團、經取代之C5 -C7 脂環族基團、鹵素、OJ1 、NJ1 J2 、SJ1 、N3 、COOJ1 、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、CN、磺醯基(S(=O)2 -J1 )或亞碸基(sulfoxyl)(S(=O)-J1 )；且 各J1 及J2 獨立地為H、C1 -C12 烷基、經取代之C1 -C12 烷基、C2 -C12 烯基、經取代之C2 -C12 烯基、C2 -C12 炔基、經取代之C2 -C12 炔基、C5 -C20 芳基、經取代之C5 -C20 芳基、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、雜環基團、經取代之雜環基團、C1 -C12 胺基烷基、經取代之C1 -C12 胺基烷基或保護基。
其他雙環糖部分為此項技術中已知的，參見例如：Freier等人 , Nucleic Acids Research , 1997,25 (22 ), 4429-4443；Albaek等人 , J. Org. Chem ., 2006,71 , 7731-7740；Singh等人,Chem. Commun. , 1998,4 , 455-456；Koshkin等人,Tetrahedron , 1998,54 , 3607-3630；Kumar等人,Bioorg. Med. Chem. Lett ., 1998,8 , 2219-2222；Singh等人,J. Org. Chem ., 1998,63 , 10035-10039；Srivastava等人,J. Am. Chem. Soc ., 2007,129, 8362-8379；Wengel等人, U.S. 7,053,207；Imanishi等人, U.S. 6,268,490；Imanishi等人. U.S. 6,770,748；Imanishi等人, U.S. RE44,779；Wengel等人, U.S. 6,794,499；Wengel等人, U.S. 6,670,461；Wengel等人, U.S. 7,034,133；Wengel等人, U.S. 8,080,644；Wengel等人, U.S. 8,034,909；Wengel等人, U.S. 8,153,365；Wengel等人, U.S. 7,572,582；及Ramasamy等人, U.S. 6,525,191；Torsten等人, WO 2004/106356；Wengel等人, WO 1999/014226；Seth等人, WO 2007/134181；Seth等人, U.S. 7,547,684；Seth等人, U.S. 7,666,854；Seth等人, U.S. 8,088,746；Seth等人, U.S. 7,750,131；Seth等人, U.S. 8,030,467；Seth等人, U.S. 8,268,980；Seth等人, U.S. 8,546,556；Seth等人, U.S. 8,530,640；Migawa等人, U.S. 9,012,421；Seth等人, U.S. 8,501,805；及Allerson等人, 美國專利公開案第US2008/0039618號及Migawa等人, 美國專利公開案第US2015/0191727號。
在某些實施例中，雙環糖部分及併有此類雙環糖部分之核苷進一步由異構組態定義。例如，LNA核苷(本文所述)可呈α-L組態或β-D組態。
Figure 02_image019
已將α-L-亞甲氧基(4’-CH2 -O-2’)或α-L-LNA雙環核苷併入寡核苷酸中，展示出反義活性(Frieden等人,Nucleic Acids Research, 2003,21 , 6365-6372)。在本文中，雙環核苷之一般描述包括兩種異構組態。除非另外指明，否則當在本文中所例示之實施例中標識出特定雙環核苷(例如LNA或cEt)之位置時，其呈β-D組態。
在某些實施例中，經修飾之糖部分包含一或多個非橋聯糖取代基及一或多個橋聯糖取代基(例如，5’-取代及4’-2’橋聯之糖)。
在某些實施例中，經修飾之糖部分為糖替代物。在某些此類實施例中，糖部分之氧原子經例如硫、碳或氮原子置換。在某些此類實施例中，此類經修飾之糖部分亦包含如本文所述之橋聯及/或非橋聯取代基。例如，某些糖替代物包含4’-硫原子及在2’位(參見例如， Bhat等人, U.S. 7,875,733以及Bhat等人, U.S. 7,939,677)及/或5’位處的取代。
在某些實施例中，糖替代物包含具有除5個原子以外的環。例如，在某些實施例中，糖替代物包含六員四氫哌喃(「 THP」)。此類四氫哌喃可經進一步修飾或取代。包含此類經修飾之四氫哌喃的核苷包括但不限於已醣醇核酸(「HNA」)、anitol核酸(「ANA」)、甘露醇核酸(「MNA」) (參見例如，Leumann, CJ.Bioorg. & Med. Chem. 2002,10 , 841-854)、氟HNA：
Figure 02_image021
(「F-HNA」，參見例如，Swayze等人, U.S. 8,088,904；Swayze等人, U.S. 8,440,803；Swayze等人, U.S. 8,796,437；及Swayze等人, U.S. 9,005,906；F-HNA亦可稱為F-THP或3’-氟四氫哌喃)及具有下式之包含其他經修飾之THP化合物的核苷：
Figure 02_image022
其中，獨立地，對於該經修飾之THP核苷中之各者： Bx為核鹼基部分； T3 及T4 各自獨立地為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸其餘部分之核苷間連接基團，或T3 及T4 中之一者為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸其餘部分之核苷間連接基團，且T3 及T4 中之另一者為H、羥基保護基、連接之綴合基團或者5’或3’-末端基團； q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 各自獨立地為H、C1 -C6 烷基、經取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、經取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基或經取代之C2 -C6 炔基；且 R1 及R2 各自獨立地選自：氫、鹵素、經取代或未經取代之烷氧基、NJ1 J2 、SJ1 、N3 、OC(=X)J1 、OC(=X)NJ1 J2 、NJ3 C(=X)NJ1 J2 及CN，其中X為O、S或NJ1 ，且J1 、J2 及J3 各自獨立地為H或C1 -C6 烷基。
在某些實施例中，提供經修飾之THP核苷，其中q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 各自為H。在某些實施例中，q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 中之至少一者不為H。在某些實施例中，q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 中之至少一者為甲基。在某些實施例中，提供經修飾之THP核苷，其中R1 及R2 中之一者為F。在某些實施例中，R1 為F且R2 為H，在某些實施例中，R1 為甲氧基且R2 為H，且在某些實施例中，R1 為甲氧基乙氧基且R2 為H。
在某些實施例中，糖替代物包含具有多於5個原子及多於一個雜原子的環。例如，已報導包含N-嗎啉基糖部分之核苷及其在寡核苷酸中之使用(參見例如，Braasch等人,Biochemistry , 2002,41 , 4503-4510及Summerton等人, U.S. 5,698,685；Summerton等人, U.S. 5,166,315；Summerton等人, U.S. 5,185,444；及Summerton等人, U.S. 5,034,506)。如本文所用，術語「N-嗎啉基」意謂具有以下結構的糖替代物：
Figure 02_image024
。
在某些實施例中，N-嗎啉基可例如藉由相較於上文N-嗎啉基結構添加或改變各種取代基來進行修飾。此類糖替代物在本文中稱為「經修飾之N-嗎啉基」。
在某些實施例中，糖替代物包含非環部分。包含此類非環糖替代物的核苷及寡核苷酸之實例包括但不限於：肽核酸(「PNA」)、非環丁基核酸(參見例如，Kumar等人,Org. Biomol. Chem. , 2013,11 , 5853-5865)以及Manoharan等人, WO2011/133876中所述之核苷及寡核苷酸。
許多其他雙環及三環糖及糖替代物環系為可用於經修飾之核苷的技術中已知的。某些經修飾之核鹼基
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含未經修飾之核鹼基的核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基的核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個不包含核鹼基的核苷，稱為無鹼基核苷。
在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：5-取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶、烷基或炔基取代之嘧啶、烷基取代之嘌呤以及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-胺基丙基腺嘌呤、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、6-N-甲基鳥嘌呤、6-N-甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶及2-硫代胞嘧啶、5-丙炔基(-C　C-CH3 )尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-核糖基尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶；8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基、8-氮雜及其他8-取代之嘌呤；5-鹵基、尤其5-溴、5-三氟甲基、5-鹵尿嘧啶及5-鹵胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-胺基腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮腺嘌呤、3-去氮鳥嘌呤、3-去氮腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、2-N-異丁醯基鳥嘌呤、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基尿嘧啶、5-甲基4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基4-N-苯甲醯基尿嘧啶、通用鹼基、疏水鹼基、混雜鹼基、尺寸擴大之鹼基及氟化鹼基。其他經修飾之核鹼基包括三環嘧啶，諸如1,3-二氮雜啡噁嗪-2-酮、1,3-二氮雜啡噻嗪-2-酮及9-(2-胺基乙氧基)-1,3-二氮雜啡噁嗪-2-酮(G-鉗)。經修飾之核鹼基亦可包括其中嘌呤或嘧啶鹼基經其他雜環置換的核鹼基，例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、2-胺基吡啶及2-吡啶酮。其他核鹼基包括以下所揭示者：Merigan等人, U.S. 3,687,808；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering , Kroschwitz, J.I.編, John Wiley & Sons, 1990, 858-859；Englisch等人,Angewandte Chemie , International Edition, 1991,30 , 613；Sanghvi, Y.S.,第15章, Antisense Research and Applications , Crooke, S.T.及Lebleu, B.編, CRC Press, 1993, 273-288；以及第6及15章,Antisense Drug Technology , Crooke S.T.編, CRC Press, 2008, 163-166及442-443。
教導某些上文所說明之經修飾之核鹼基以及其他經修飾之核鹼基之製備的公開案包括但不限於：Manoharan等人, US2003/0158403；Manoharan等人, US2003/0175906；Dinh等人, U.S. 4,845,205；Spielvogel等人, U.S. 5,130,302；Rogers等人, U.S. 5,134,066；Bischofberger等人, U.S. 5,175,273；Urdea等人, U.S. 5,367,066；Benner等人, U.S. 5,432,272；Matteucci等人, U.S. 5,434,257；Gmeiner等人, U.S. 5,457,187；Cook等人, U.S. 5,459,255；Froehler等人, U.S. 5,484,908；Matteucci等人, U.S. 5,502,177；Hawkins等人, U.S. 5,525,711；Haralambidis等人, U.S. 5,552,540；Cook等人, U.S. 5,587,469；Froehler等人, U.S. 5,594,121；Switzer等人, U.S. 5,596,091；Cook等人, U.S. 5,614,617；Froehler等人, U.S. 5,645,985；Cook等人, U.S. 5,681,941；Cook等人, U.S. 5,811,534；Cook等人, U.S. 5,750,692；Cook等人, U.S. 5,948,903；Cook等人, U.S. 5,587,470；Cook等人, U.S. 5,457,191；Matteucci等人, U.S. 5,763,588；Froehler等人, U.S. 5,830,653；Cook等人, U.S. 5,808,027；Cook等人, 6,166,199；以及Matteucci 等人, U.S. 6,005,096。某些經修飾之核苷間鍵聯
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之核苷可使用任何核苷間鍵聯連接在一起。藉由是否存在磷原子來定義核苷間連接基團之兩種主要類別。代表性含磷核苷間鍵聯包括但不限於：磷酸二酯，其含有磷酸二酯鍵(P(O2 )=O) (亦稱為未經修飾或天然存在之鍵聯)；磷酸三酯；甲基膦酸酯；甲氧基丙基膦酸酯(「MOP」)；胺基磷酸酯；甲磺醯胺基磷酸酯；硫代磷酸酯(P(O2 )=S)及二硫代磷酸酯(HS-P=S)。代表性不含磷核苷間連接基團包括但不限於：亞甲基甲基亞胺基(-CH2 -N(CH3 )-O-CH2 -)；硫代二酯；硫羰基胺基甲酸酯(-O-C(=O)(NH)-S-)；矽氧烷(-O-SiH2 -O-)；及N,N'-二甲基肼(-CH2 -N(CH3 )-N(CH3 )-)。與天然存在之磷酸酯鍵聯相比，經修飾之核苷間鍵聯可用於改變(通常增加)寡核苷酸之核酸酶抗性。在某些實施例中，可將具有掌性原子的核苷間鍵聯製備成外消旋混合物或分開的鏡像異構物。含磷及不含磷核苷間鍵聯之製備方法為熟悉此項技術者熟知的。
具有掌性中心的代表性核苷間鍵聯包括但不限於烷基膦酸酯及硫代磷酸酯。可將包含具有掌性中心的核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸製備成包含隨機立構核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸之群體，或包含呈特定立體化學組態之硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸之群體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體包含其中所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為隨機立構的硫代磷酸酯核苷間鍵聯。此類經修飾之寡核苷酸可使用使得隨機選擇各硫代磷酸酯核苷間鍵聯之立體化學組態的合成方法來生成。儘管如此，如熟習此項技術者充分瞭解的，各個別寡核苷酸分子之各個別硫代磷酸酯具有確定之立體組態。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集了包含呈特定獨立選擇之立體化學組態的一或多個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯存在於群體中至少65%的分子中。在某些實施例中，特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯存在於群體中至少70%的分子中。在某些實施例中，特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯存在於群體中至少80%的分子中。在某些實施例中，特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯存在於群體中至少90%的分子中。在某些實施例中，特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯存在於群體中至少99%的分子中。經修飾之寡核苷酸之此類掌性富集群體可使用此項技術中已知之合成方法，例如Oka等人,JACS , 2003,125 , 8307；Wan等人,Nuc. Acid. Res ., 2014,42 , 13456及WO 2017/015555中所述之方法生成。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集了具有至少一個呈(S p)組態之所指示硫代磷酸酯的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集了具有至少一個呈(R p)組態之硫代磷酸酯的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，包含(R p)及/或(S p)硫代磷酸酯的經修飾之寡核苷酸分別包含下式中之一或多者，其中「B」指示核鹼基：
Figure 02_image026
除非另外指出，否則本文所述之經修飾之寡核苷酸之掌性核苷間鍵聯可為隨機立構的或呈特定立體化學組態。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含核苷間模體(5’至3’) sooosssssssssssssss。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之特定立體化學組態為(5’至3’)S p-o-o-o-S p-S p-S p-R p-S p-S p-R p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p或S p-o-o-o-S p-S p-S p-R p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p；其中各『S p』表示呈S 組態之硫代磷酸酯核苷間鍵聯；R p表示呈R 組態之硫代磷酸酯核苷間鍵聯；且『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
中性核苷間鍵聯包括但不限於磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI (3’-CH2 -N(CH3 )-O-5’)、醯胺-3 (3’-CH2 -C(=O)-N(H)-5’)、醯胺-4 (3’-CH2 -N(H)-C(=O)-5’)、甲縮醛(3’-O-CH2 -O-5’)、甲氧基丙基及硫代甲縮醛(3’-S-CH2 -O-5’)。其他中性核苷間鍵聯包括非離子鍵聯，其包含矽氧烷(二烷基矽氧烷)、羧酸酯、羧醯胺、硫化物、磺酸酯及醯胺(參見Carbohydrate Modifications in Antisense Research ; Y.S. Sanghvi及P.D. Cook編, ACS Symposium Series 580; 第3章及第4章, 40-65)。其他中性核苷間鍵聯包括包含混合之N、O、S及CH2 組成部分的非離子鍵聯。某些模體
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之糖部分的經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基的經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯。在此類實施例中，經修飾之寡核苷酸之經修飾、未經修飾及經不同修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯定義模式或模體。在某些實施例中，糖部分、核鹼基及核苷間鍵聯之模式各自彼此獨立。因此，經修飾之寡核苷酸和藉由其糖模體、核鹼基模體及/或核苷間鍵聯模體來描述(如本文所用，核鹼基模體描述與核鹼基之序列無關的對核鹼基之修飾)。某些糖模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義之模式或糖模體沿寡核苷酸或其部分排列之一或多種類型的經修飾之糖及/或未經修飾之糖部分。在某些情況下，此類糖模體包括但不限於本文所討論之任一糖修飾。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有間隔體(gapmer)模體，其由兩個外部區域或「側翼」及中央或內部區域或「間隙」定義。間隔體模體之三個區(5’-側翼、間隙及3’-側翼)形成核苷之連續序列，其中各側翼之核苷之至少一些糖部分不同於間隙之核苷之至少一些糖部分。特定言之，各側翼中最接近間隙的核苷(5’-側翼之最3’端核苷及3’-側翼之最5’端核苷)之至少糖部分與相鄰間隙核苷之糖部分不同，因此定義側翼與間隙之間的邊界(亦即，側翼/間隙接點)。在某些實施例中，間隙內之糖部分彼此相同。在某些實施例中，間隙包括一或多個核苷，其糖部分與間隙之一或多個其他核苷之糖部分不同。在某些實施例中，兩個側翼之糖模體彼此相同(對稱間隔體)。在某些實施例中，5’-側翼之糖模體與3’-側翼之糖模體不同(不對稱間隔體)。
在某些實施例中，間隔體之側翼包含1-6個核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之各核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隔體之各側翼之至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個核苷包含經修飾之糖部分。
在某些實施例中，間隔體之間隙包含7-12個核苷。在某些實施例中，間隔體之間隙之各核苷包含2-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隔體之間隙之至少一個核苷包含經修飾之糖部分且各其餘核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。
在本文中，間隔體之三個區域之長度(核苷數目)可使用記法[5’-側翼中之核苷數目]-[間隙中之核苷數目]-[3’-側翼中之核苷數目]來提供。因此，5-10-5間隔體由各側翼中之5個連接之核苷及間隙中之10個連接之核苷組成。在此類命名法隨後為特定修飾的情況下，該修飾為各側翼之各糖部分中的修飾且間隙核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。因此，5-10-5 MOE間隔體由5’-側翼中之5個連接之2’-MOE核苷、間隙中之10個連接之2’-去氧核糖核苷及3’-側翼中之5個連接之2’-MOE核苷組成。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷或其一部分包含2’-取代之糖部分、雙環糖部分、糖替代物或2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、PNA、THP及F-HNA。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19或至少20個包含經修飾之糖部分之核苷。在某些實施例中，經修飾之糖部分獨立地選自2’-取代之糖部分、雙環糖部分或糖替代物。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、THP及F-HNA。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷均包含經修飾之糖部分(「經完全修飾之寡核苷酸」)。在某些實施例中，經完全修飾之寡核苷酸之各核苷包含2’-取代之糖部分、雙環糖部分或糖替代物。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、THP及F-HNA。在某些實施例中，經完全修飾之寡核苷酸之各核苷均包含相同經修飾之糖部分(「經均勻修飾之糖模體」)。在某些實施例中，經均勻修飾之糖模體之長度為7至20個核苷。在某些實施例中，經均勻修飾之糖模體之各核苷包含2’-取代之糖部分、雙環糖部分或糖替代物。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、THP及F-HNA。在某些實施例中，具有至少一個經完全修飾之糖模體的經修飾之寡核苷酸亦可包含至少1、至少2、至少3或至少4個2’-去氧核糖核苷。某些核鹼基模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義模式或模體沿寡核苷酸或其部分排列之經修飾及/或未經修飾之核鹼基。在某些實施例中，各核鹼基經修飾。在某些實施例中，沒有核鹼基經修飾。在某些實施例中，各嘌呤或各嘧啶經修飾。在某些實施例中，各腺嘌呤經修飾。在某些實施例中，各鳥嘌呤經修飾。在某些實施例中，各胸腺嘧啶經修飾。在某些實施例中，各尿嘧啶經修飾。在某些實施例中，各胞嘧啶經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸中一些或所有嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。在某些實施例中，所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶，且經修飾之寡核苷酸之所有其他核鹼基均為未經修飾之核鹼基。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含經修飾之核鹼基之嵌段。在某些此類實施例中，嵌段在寡核苷酸之3’端處。在某些實施例中，嵌段在寡核苷酸之3’端之3個核苷內。在某些實施例中，嵌段在寡核苷酸之5’端處。在某些實施例中，嵌段在寡核苷酸之5’端之3個核苷內。
在某些實施例中，具有間隔體模體之寡核苷酸包含有包含經修飾之核鹼基的核苷。在某些此等實施例中，一個包含經修飾之核鹼基的核苷在具有間隔體模體之寡核苷酸之中央間隙中。在某些此等實施例中，核苷之糖部分為2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-硫代嘧啶及5-丙炔嘧啶。某些核苷間鍵聯模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義模式或模體沿寡核苷酸或其部分排列之經修飾及/或未經修飾之核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間連接基團為磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各硫代磷酸酯核苷間鍵聯獨立地選自隨機立構硫代磷酸酯、(S p)硫代磷酸酯及(R p)硫代磷酸酯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隔體且間隙內之核苷間鍵聯全部經修飾。在某些此類實施例中，側翼中一些或所有核苷間鍵為未經修飾之磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，未端核苷間鍵聯經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隔體，且核苷間鍵聯模體在至少一個側翼中包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯，其中該至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯不為未端核苷間鍵聯，且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些此類實施例中，所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為隨機立構的。在某些實施例中，側翼中所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為(S p)硫代磷酸酯，且間隙包含至少一個S p,S p,R p模體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集了包含此類核苷間鍵聯模體的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，一或多個核苷間鍵聯為甲磺醯胺基磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯、硫代磷酸酯核苷間鍵聯及甲磺醯胺基磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間鍵聯獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及甲磺醯胺基磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，一或多個核苷間鍵聯為甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯、硫代磷酸酯核苷間鍵聯及甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間鍵聯獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11 、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少1、至少2、至少3、至少4或至少5個磷酸二酯核苷間鍵聯，且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。某些長度
有可能在不消除活性之情況下增加或減小寡核苷酸之長度。例如，在Woolf等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992,89 , 7305-7309, 1992)中，測試了一系列長度為13-25個核鹼基之寡核苷酸在卵母細胞注入模型中誘導靶核酸裂解之能力。長度為25個核鹼基且在寡核苷酸末端附近具有8或11個錯配鹼基之寡核苷酸能夠引導靶核酸之特異性裂解，不過程度比不含錯配之寡核苷酸低。類似地，使用13個核鹼基之寡核苷酸，包括具有1或3個錯配之彼等寡核苷酸達成靶特異性裂解。
在某些實施例中，寡核苷酸(包括經修飾之寡核苷酸)可具有多種長度範圍中任一者。在某些實施例中，寡核苷酸由X至Y個連接之核苷組成，其中X表示範圍內之最少核苷數目且Y表示範圍內之最大核苷數目。在某些此類實施例中，X及Y各自獨立地選自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26 ，27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49及50；條件為X≤Y。例如，在某些實施例中，寡核苷酸由12至13、12至14、12至15、12至16、12至17、12至18、12至19、12至20、12至21、12至22、12至23、12至24、12至25、12至26、12至27、12至28、12至29、12至30、13至14、13至15、13至16、13至17、13至18、13至19、13至20、13至21、13至22、13至23、13至24、13至25、13至26、13至27、13至28、13至29、13至30、14至15、14至16、14至17、14至18、14至19、14至20、14至21、14至22、14至23、14至24、14至25、14至26、14至27、14至28、14至29、14至30、15至16、15至17、15至18、15至19、15至20、15至21、15至22、15至23、15至24、15至25、15至26、15至27、15至28、15至29、15至30、16至17、16至18、16至19、16至20、16至21、16至22、16至23、16至24、16至25、16至26、16至27、16至28、16至29、16至30、17至18、17至19、17至20、17至21、17至22、17至23、17至24、17至25、17至26、17至27、17至28、17至29、17至30、18至19、18至20、18至21、18至22、18至23、18至24、18至25、18至26、18至27、18至28、18至29、18至30、19至20、19至21、19至22、19至23、19至24、19至25、19至26、19至29、19至28、19至29、19至30、20至21、20至22、20至23、20至24、20至25、20至26、20至27、20至28、20至29、20至30、21至22、21至23、21至24、21至25、21至26、21至27、21至28、21至29、21至30、22至23、22至24、22至25、22至26、22至27、22至28、22至29、22至30、23至24、23至25、23至26、23至27、23至28、23至29、23至30、24至25、24至26、24至27、24至28、24至29、24至30、25至26、25至27、25至28、25至29、25至30、26至27、26至28、26至29、26至30、27至28、27至29、27至30、28至29、28至30或29至30個連接之核苷組成。
在某些實施例中，寡核苷酸由16個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由17個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由18個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由19個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由20個連接之核苷組成。某些經修飾之寡核苷酸
在某些實施例中，將上文修飾(糖、核鹼基、核苷間鍵聯)併入經修飾之寡核苷酸中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之特徵在於其修飾模體及總體長度。在某些實施例中，此類參數彼此獨立。因此，除非另外指示，否則具有間隔體模體之寡核苷酸之各核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾且可遵循或可不遵循糖修飾之間隔體修飾模式。例如，糖間隔體之側翼區域內的核苷間鍵聯可彼此相同或不同，且可與糖模體之間隙區域之核苷間鍵聯相同或不同。同樣，此類糖間隔體寡核苷酸可包含一或多個與糖修飾之間隔體模式無關的經修飾之核鹼基。除非另外指示，否則所有修飾均與核鹼基序列無關。某些經修飾之寡核苷酸之群體
經修飾之寡核苷酸之群體(其中群體之所有經修飾之寡核苷酸具有相同分子式)可為隨機立構群體或掌性富集群體。隨機立構群體中所有經修飾之寡核苷酸之所有掌性中心均為隨機立構的。在掌性富集群體中，群體之經修飾之寡核苷酸中至少一個特定掌性中心不為隨機立構的。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分，且所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為隨機立構的。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分及至少一個呈特定立體化學組態的特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。核鹼基序列
在某些實施例中，藉由核鹼基序列進一步描述寡核苷酸(未經修飾或經修飾之寡核苷酸)。在某些實施例中，寡核苷酸之核鹼基序列與第二寡核苷酸或經鑑定之參考核酸(諸如靶核酸)互補。在某些此類實施例中，寡核苷酸之一部分之核鹼基序列與第二寡核苷酸或經鑑定之參考核酸(諸如靶核酸)互補。在某些實施例中，寡核苷酸之一部分或整個長度的核鹼基序列與第二寡核苷酸或核酸(諸如靶核酸)至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補。某些寡聚化合物
在某些實施例中，本文提供寡聚化合物，其由寡核苷酸(經修飾或未經修飾)及視情況一或多個綴合基團及/或末端基團組成。綴合基團由一或多個綴合部分及將綴合部分連接至寡核苷酸的綴合連接子組成。綴合基團可連接至寡核苷酸之任一或兩個末端及/或任何內部位置處。在某些實施例中，綴合基團連接至經修飾之寡核苷酸之核苷之2’位。在某些實施例中，連接至寡核苷酸之任一或兩個末端的綴合基團為末端基團。在某些實施例中，綴合基團或末端基團連接於寡核苷酸之3’及/或5’端。在某些此類實施例中，綴合基團(或末端基團)連接於寡核苷酸之3’端。在某些實施例中，綴合基團連接於寡核苷酸之3’端附近。在某些實施例中，綴合基團(或末端基團)連接於寡核苷酸之5’端。在某些實施例中，綴合基團連接於寡核苷酸之5’端附近。
末端基團之實例包括但不限於綴合基團、加帽基團、磷酸酯部分、保護基、無鹼基核苷、經修飾或未經修飾之核苷及二或更多個獨立地經修飾或未經修飾之核苷。某些綴合基團
在某些實施例中，寡核苷酸共價連接至一或多個綴合基團。在某些實施例中，綴合基團修飾連接之寡核苷酸之一或多種特性，把控但不限於藥效學、藥物動力學、穩定性、結合、吸收、組織分佈、細胞分佈、細胞攝取、電荷及清除。在某些實施例中，綴合基團在連接之寡核苷酸上賦予新特性，例如，能夠偵測寡核苷酸的螢光團或信息基團。先前已描述某些綴合基團及綴合部分，例如：膽固醇部分(Letsinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556)；膽酸(Manoharan等人,Bioorg. Med. Chem. Lett ., 1994,4 , 1053-1060)；硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人,Ann. N.Y. Acad. Sci ., 1992,660 , 306-309；Manoharan等人,Bioorg. Med. Chem. Lett., 1993,3 , 2765-2770)；硫膽固醇(Oberhauser等人,Nucl. Acids Res ., 1992,20 , 533-538)；脂肪族鏈，例如十二烷-二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等人,EMBO J., 1991,10 , 1111-1118；Kabanov等人,FEBS Lett ., 1990,259 , 327-330；Svinarchuk等人,Biochimie , 1993,75 , 49-54)；磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或1,2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油基-3-H-膦酸三乙基-銨(Manoharan等人,Tetrahedron Lett ., 1995,36 , 3651-3654；Shea等人,Nucl. Acids Res ., 1990,18 , 3777-3783)；聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人,Nucleosides & Nucleotides , 1995,14 , 969-973)或金剛烷乙酸棕櫚醯基部分(Mishra等人,Biochim. Biophys. Acta , 1995,1264, 229-237)；十八烷基胺或己胺基-羰基-羥膽固醇部分(Crooke等人,J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996,277 , 923-937)；生育酚基團(Nishina等人,Molecular Therapy Nucleic Acids , 2015,4 , e220；及Nishina等人,Molecular Therapy, 2008,16 , 734-740)或GalNAc簇(例如WO2014/179620)。綴合部分
綴合部分包括但不限於嵌插物、報告子分子、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合物、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫膽固醇、膽酸部分、葉酸鹽、脂質、親脂基團、磷脂、生物素、啡嗪、啡啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光素、羅丹明、香豆素、螢光團及染料。
在某些實施例中，綴合部分包含活性原料藥，例如阿斯匹林(aspirin)、華法林(warfarin)、苯基保泰松(phenylbutazone)、布洛芬(ibuprofen)、舒洛芬(suprofen)、芬布芬(fen-bufen)、酮洛芬(ketoprofen)、(S )-(+)-普拉洛芬(pranoprofen)、卡洛芬(carprofen)、丹磺醯肌胺酸(dansylsarcosine)、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德(fingolimod)、氟滅酸、亞葉酸、苯并噻二嗪、氯噻嗪、二氮呯、吲哚美辛(indo-methicin)、巴比妥酸鹽(barbiturate)、頭孢菌素(cephalosporin)、磺胺藥、抗糖尿病藥、抗細菌劑或抗生素。綴合連接子
綴合部分通過綴合連接子連接至寡核苷酸。在某些寡聚化合物中，綴合連接子為單化學鍵(亦即，綴合部分通過單鍵直接連接至寡核苷酸)。在某些寡聚化合物中，綴合部分經由包含一或多個綴合連接子部分的更複雜綴合連接子連接至寡核苷酸，該一或多個綴合連接子部分為構成綴合連接子的次單元。在某些實施例中，綴合連接子包含鏈結構(諸如烴基鏈)或重複單元(諸如乙二醇、核苷或胺基酸單元)之寡聚物。
在某些實施例中，綴合連接子包含一或多個選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基。在某些此類實施例中，綴合連接子包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基團。在某些實施例中，綴合連接子包含選自烷基及醯胺基團之基團。在某些實施例中，綴合連接子包含選自烷基及醚基團之基團。在某些實施例中，綴合連接子包含至少一個磷部分。在某些實施例中，綴合連接子包含至少一個磷酸酯部分。在某些實施例中，綴合連接子包括至少一個中性連接基團。
在某些實施例中，綴合連接子，包括上文所述之綴合連接子，為雙官能連接部分，例如此項技術中已知可用於將綴合基團連接至母體化合物的那些，諸如本文所提供之寡核苷酸。一般而言，雙官能連接部分包含至少兩個官能基。選擇一個官能基以結合母體化合物上的特定位點，且選擇另一官能團以結合綴合基團。用於雙官能連接部分中之官能基之實例包括但不限於用於與親核基團反應之親電子劑及用於與親電子基團反應之親核劑。在某些實施例中，雙官能連接部分包含一或多個選自以下之基團：胺基、羥基、羧酸、硫醇、烷基、烯基及炔基。
綴合連接子之實例包括但不限於吡咯啶、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(ADO)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯(SMCC)及6-胺基己酸(AHEX或AHA)。其他綴合連接子包括但不限於經取代或未經取代之C1 -C10 烷基、經取代或未經取代之C2 -C10 烯基或經取代或未經取代之C2 -C10 炔基，其中較佳取代基之非限制性清單包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基、硫醇、硫代烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。
在某些實施例中，綴合連接子包含1-10個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含2-5個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含確切地3個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含TCA模體。在某些實施例中，此類連接子-核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，此類連接子-核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，連接子-核苷未經修飾。在某些實施例中，連接子-核苷包含選自以下之視情況經保護之雜環鹼基：嘌呤、經取代之嘌呤、嘧啶或經取代之嘧啶。在某些實施例中，可裂解部分為選自以下之核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤及2-N-異丁醯基鳥嘌呤。通常期望在寡聚化合物到達靶組織之後使其自寡聚化合物裂解。因此，連接子-核苷通常通過可裂解鍵彼此連接且與寡聚化合物之其餘部分連接。在某些實施例中，此類可裂解鍵為磷酸二酯鍵。
在本文中，連接子-核苷不被視為寡核苷酸之一部分。因此，在寡聚化合物包含由指定數目或範圍的連接之核苷組成及/或與參考核酸有指定百分比互補性的寡核苷酸及/或寡聚化合物亦包含有包含具有連接子-核苷之綴合連接子的綴合基團的實施例中，那些連接子-核苷不計入寡核苷酸之長度且不用於確定寡核苷酸對於參考核酸的百分比互補性。例如，寡聚化合物可包含(1)由8-30個核苷組成之經修飾之寡核苷酸及(2)包含1-10個與經修飾之寡核苷酸之核苷連續的連接子-核苷的綴合基團。此類寡聚化合物中連續的連接之核苷之總數多於30。替代地，寡聚化合物可包含由8-30個核苷組成且無綴合基團的經修飾之寡核苷酸。此類寡聚化合物中連續的連接之核苷之總數不多於30。除非另外指示，否則綴合連接子包含不多於10個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於5個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於3個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於2個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於1個連接子-核苷。
在某些實施例中，期望自寡核苷酸裂解綴合基團。例如，在某些情況下，包含特定綴合部分的寡聚化合物可被特定細胞型更好地攝取，但一旦寡聚化合物經攝取，則期望將綴合基團裂解以釋放未綴合或母體寡核苷酸。因此，某些綴合連接子可包含一或多個可裂解部分。在某些實施例中，可裂解部分為可裂解鍵。在某些實施例中，可裂解部分為包含至少一個可裂解鍵的一組原子。在某些實施例中，可裂解部分包含具有一個、兩個、三個、四個或多於四個可裂解鍵的一組原子。在某些實施例中，可裂解部分在細胞或亞細胞區室如溶酶體內被選擇性裂解。在某些實施例中，可裂解部分藉由諸如核酸酶之內源性酶選擇性裂解。
在某些實施例中，可裂解鍵選自：醯胺、酯、醚、磷酸二酯之一個或兩個酯、磷酸酯、胺基甲酸酯或二硫化物。在某些實施例中，可裂解鍵為磷酸二酯之一個或兩個酯。在某些實施例中，可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施例中，可裂解部分為寡核苷酸與綴合部分或綴合基團之間的磷酸酯鍵聯。
在某些實施例中，可裂解部分包含一或多個連接子-核苷或由其組成。在某些此類實施例中，該一或多個連接子-核苷通過可裂解鍵彼此連接及/或與寡聚化合物之其餘部分連接。在某些實施例中，此類可裂解鍵為未經修飾之磷酸二酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分為2’-去氧核糖核苷，其藉由磷酸酯核苷間鍵聯連接至寡核苷酸之3’或5’未端核苷且藉由磷酸酯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯共價連接至綴合連接子或綴合部分之其餘部分。在某些此類實施例中，可裂解部分為2’-去氧腺苷。某些末端基團
在某些實施例中，寡聚化合物包含一或多個末端基團。在某些此類實施例中，寡聚化合物包含經穩定化之5’-磷酸酯。經穩定化之5’-磷酸酯包括但不限於5’-膦酸酯，包括但不限於5’-乙烯基膦酸酯。在某些實施例中，末端基團包含一或多個無鹼基核苷及/或反向核苷。在某些實施例中，末端基團包含一或多個2’-連接之核苷。在某些此類實施例中，2’-連接之核苷為無鹼基核苷。寡聚雙螺旋
在某些實施例中，本文所述之寡聚化合物包含核鹼基序列與靶核酸之序列互補的寡核苷酸。在某些實施例中，寡聚化合物與第二寡聚化合物配對以形成寡聚雙螺旋。此類寡聚雙螺旋包含一部分與靶核酸互補的第一寡聚化合物及一部分與第一寡聚化合物互補的第二寡聚化合物。在某些實施例中，寡聚雙螺旋之第一寡聚化合物包含(1)經修飾或未經修飾之寡核苷酸及視情況綴合基團及(2)第二經修飾或未經修飾之寡核苷酸及視情況綴合基團，或由其組成。寡聚雙螺旋之任一或兩種寡聚化合物可包含綴合基團。寡聚雙螺旋之各寡聚化合物之寡核苷酸可包括非互補的懸突核苷。反義活性
在某些實施例中，寡聚化合物及寡聚雙螺旋能夠與靶核酸雜交，產生至少一種反義活性；此類寡聚化合物及寡聚雙螺旋為反義化合物。在某些實施例中，當反義化合物在標準細胞檢定中使靶核酸之量或活性降低、調節或增加25%或更多時，其具有反義活性。在某些實施例中，反義化合物選擇性影響一或多種靶核酸。此類反義化合物包含以下核鹼基序列，其與一或多種靶核酸雜交，產生一或多種所需反義活性，且不與一或多種非靶核酸雜交，或不以產生顯著非所需反義活性的方式與一或多種非靶核酸雜交。
在某些反義活性中，反義化合物與靶核酸的雜交導致裂解靶核酸的蛋白之募集。例如，某些反義化合物導致RNA酶H介導之靶核酸裂解。RNA酶H為使RNA:DNA雙螺旋之RNA股裂解的細胞核酸內切酶。此類RNA:DNA雙螺旋中之DNA不必為未經修飾之DNA。在某些實施例中，本文提供了足夠「DNA樣」以引發RNA酶H活性的反義化合物。在某些實施例中，在間隔體間隙中的一或多個非DNA樣核苷為容許的。
在某些反義活性中，反義化合物或反義化合物之一部分被加載至RNA誘導之緘默複合物(RISC)，最終導致靶核酸裂解。例如，某些反義化合物藉由Argonaute導致靶核酸裂解。加載至RISC中之反義化合物為RNAi化合物。RNAi化合物可為雙股(siRNA)或單股(ssRNA)。
在某些實施例中，反義化合物與靶核酸的雜交不導致裂解該靶核酸的蛋白之募集。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸的雜交導致靶核酸之剪接之改變。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸的雜交導致靶核酸與蛋白或其他核酸之間的結合相互作用之抑制。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸的雜交導致靶核酸之轉譯之改變。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸的雜交導致外顯子包涵。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸的雜交導致靶核酸之量或活性增加。在某些實施例中，與靶核酸互補的反義化合物之雜交導致剪接之改變，從而導致mRNA中外顯子之包涵。
反義活性可直接或間接觀察到。在某些實施例中，觀察或偵測反義活性涉及觀察或偵測靶核酸或由該靶核酸編碼之蛋白之量之變化、核酸或蛋白之剪接變異體比率之變化及/或細胞或個體之表現型變化。某些靶核酸
在某些實施例中，寡聚化合物包含一部分與靶核酸互補的寡核苷酸或由其組成。在某些實施例中，靶核酸為內源性RNA分子。在某些實施例中，靶核酸編碼蛋白。在某些此類實施例中，靶核酸選自：成熟mRNA及前驅mRNA，包括內含子、外顯子及未轉譯區。在某些實施例中，靶核酸為成熟mRNA。在某些實施例中，靶核酸為前驅mRNA。在某些實施例中，靶區域完全在內含子內。在某些實施例中，靶區域跨越內含子/外顯子接點。在某些實施例中，靶區域至少50%在內含子內。與靶核酸互補 / 錯配
有可能在不消除活性之情況下引入錯配鹼基。例如，Gautschi等人(J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, 2001年3月)證明瞭與bcl-2 mRNA具有100%互補性且與abcl-xL mRNA具有3個錯配的寡核苷酸在體內及在體外降低bcl-2及bcl-xL之表現的能力。此外，此寡核苷酸在體內顯示了有效的抗腫瘤活性。Maher及Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)測試了一系列串聯之14個核鹼基之寡核苷酸及包含兩個或三個串聯寡核苷酸之序列的28個及42個核鹼基之寡核苷酸分別在兔網狀紅血球分析中抑制人類DHFR之轉譯的能力。三個14個核鹼基之寡核苷酸各自單獨地能夠抑制轉譯，不過與28個或42個核鹼基之寡核苷酸相比處於更適中之水準。
在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸互補。在某些實施例中，寡核苷酸與靶核酸99%、95%、90%、85%或80%互補。在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸至少80%互補且一部分與靶核酸100%或完全互補。在某些實施例中，完全互補之部分之長度為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個核鹼基。
在某些實施例中，寡核苷酸相對於靶核酸包含一或多個錯配核鹼基。在某些實施例中，錯配在自寡核苷酸之5’端的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20位處。SMN2
在某些實施例中，寡聚化合物包含與編碼SMN2之靶核酸或其一部分互補的經修飾之寡核苷酸或由其組成。在某些實施例中，SMN2具有SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷酸19939708至19967777截短)中所示之序列。
在某些實施例中，將細胞與和SEQ ID NO: 1互補的寡聚化合物接觸調節細胞中SMN2 RNA之剪接。在某些實施例中，將細胞與和SEQ ID NO: 1互補的寡聚化合物接觸增加包括外顯子7之SMN2 RNA之量。在某些實施例中，將細胞與和SEQ ID NO: 1互補的寡聚化合物接觸增加全長SMN2蛋白表現。在某些實施例中，寡聚化合物由經修飾之寡核苷酸組成。
在某些實施例中，將個體之細胞與和SEQ ID NO: 1互補的寡聚化合物接觸改善神經退化性疾病之一或多個症狀。在某些實施例中，神經退化性疾病為SMA，包括I型SMA、II型SMA、III型SMA及IV型SMA。在某些實施例中，症狀為以下中任一者：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。
在某些實施例中，當根據標準體內檢定投與時，與SEQ ID NO: 1互補的寡聚化合物能夠在體內使包括外顯子7之SMN2 RNA增加至少1倍、2倍或3倍。在某些實施例中，當根據標準體內檢定投與時，與SEQ ID NO: 1互補的寡聚化合物能夠在體內使全長SMN2蛋白增加至少1倍、2倍或3倍。某些組織中之某些靶核酸
在某些實施例中，寡聚化合物包含一部分與靶核酸互補的寡核苷酸或由其組成，其中靶核酸在藥理學相關組織中表現。在某些實施例中，藥理學相關組織為構成中樞神經系統(CNS)之細胞及組織。此類組織包括腦組織，諸如脊髓、皮質及冠狀腦組織。某些醫藥組成物
在某些實施例中，本文描述包含一或多種寡聚化合物之醫藥組成物。在某些實施例中，該一或多種寡聚化合物各自由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，醫藥組成物包含醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。在某些實施例中，醫藥組成物包含無菌鹽水溶液及一或多種寡聚化合物或由其組成。在某些實施例中，無菌鹽水為醫藥級鹽水。在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及無菌水或由其組成。在某些實施例中，無菌水為醫藥級水。在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或由其組成。在某些實施例中，無菌PBS為醫藥級PBS。在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及人工腦脊髓液(「人工CSF」或「aCSF」)或由其組成。在某些實施例中，人工腦脊髓液為醫藥級。
在某些實施例中，醫藥組成物包含經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液。在某些實施例中，醫藥組成物由經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中，醫藥組成物基本上由經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中，人工腦脊髓液為醫藥級。
在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及一或多種賦形劑。在某些實施例中，賦形劑選自水、鹽溶液、乙醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。
在某些實施例中，可將寡聚化合物與醫藥學上可接受之活性及/或惰性物質混合以用於製備醫藥組成物或調配物。醫藥組成物之調配之組成及方法取決於許多標準，包括但不限於投與途徑，疾病程度或欲投與之劑量。
在某些實施例中，包含寡聚化合物之醫藥組成物涵蓋寡聚化合物之任何醫藥學上可接受之鹽、寡聚化合物之酯或此類酯之鹽。在某些實施例中，包含有包含一或多種寡核苷酸的寡聚化合物之醫藥組成物，在向個體(包括人類)投與時，能夠提供(直接或間接)生物活性代謝物或其殘餘物。因此，例如，本揭露亦關於寡聚化合物之醫藥學上可接受之鹽、前藥、此類前藥之醫藥學上可接受之鹽及其他等效物。合適的醫藥學上可接受之鹽包括但不限於鈉鹽及鉀鹽。在某些實施例中，前藥包含一或多個連接至寡核苷酸的綴合基團，其中綴合基團在體內藉由內源性核酸酶而裂解。在某些實施例中，前藥包含一或多個連接至寡核苷酸的綴合基團，其中綴合基團在體內藉由內源性核酸酶而裂解。
在多種方法中已將脂質部分用於核酸療法中。在某些此類方法中，將核酸(諸如寡聚化合物)引入至預製脂質體或由陽離子脂質及中性脂質之混合物製成之脂質複合物(lipoplex)中。在某些方法中，在不存在中性脂質之情況下形成具有單陽離子脂質或聚陽離子脂質之DNA複合物。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加藥劑向特定細胞或組織的分佈。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加藥劑向脂肪組織的分佈。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加藥劑向肌肉組織的分佈。
在某些實施例中，醫藥組成物包含遞送系統。遞送系統之實例包括但不限於脂質體及乳液。某些遞送系統可用於製備某些醫藥組成物，包括包含疏水性化合物者。在某些實施例中，使用某些有機溶劑，諸如二甲亞碸。
在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種組織特異性遞送分子，其經設計以將一或多種包含本文所提供之寡聚化合物的藥劑遞送至特定組織或細胞型。例如，在某些實施例中，醫藥組成物包括用組織特異性抗體塗佈之脂質體。
在某些實施例中，醫藥組成物包含共溶劑系統。此類共溶劑系統中之某些包含例如苯甲醇、非極性界面活性劑、與水混溶的有機聚合物及水相。在某些實施例中，此類共溶劑系統用於疏水性化合物。此類共溶劑系統之非限制性實例為VPD共溶劑系統，其為包含3% w/v苯甲醇、8% w/v非極性界面活性劑聚山梨醇酯80™及65% w/v聚乙二醇300之絕對乙醇溶液。此類共溶劑系統之比例可在不顯著改變其溶解度及毒性特徵之情況下變化明顯。此外，共溶劑組分之身份可變化：例如，可使用其他界面活性劑代替聚山梨醇酯80™；聚乙二醇之級分大小可變化；其他生物相容性聚合物可置換聚乙二醇，例如，聚乙烯吡咯啶酮；且其他糖或多醣可取代右旋糖。
在某些實施例中，醫藥組成物經製備用於經口投與。在某些實施例中，醫藥組成物經製備用於經頰投與。在某些實施例中，醫藥組成物經製備用於藉由注射(例如靜脈內、皮下、肌內、鞘內(IT)、腦室內(ICV)等)進行投與。在某些此類實施例中，醫藥組成物包含載劑且在水溶液中調配，該水溶液為諸如水或生理學相容性緩衝液，諸如漢克氏溶液(Hanks's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理鹽水緩衝液。在某些實施例中，包括其他成分(例如幫助溶解或充當防腐劑之成分)。在某些實施例中，使用適當的液體載劑、懸浮劑及其類似者製備可注射懸液劑。某些注射用醫藥組成物以單位劑型存在於例如安瓿中或多劑量容器中。某些注射用醫藥組成物為在油性或水性媒介物中之懸液劑、溶液或乳液，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。適用於注射用醫藥組成物之某些溶劑包括但不限於：親脂性溶劑及脂肪油，諸如芝麻油；合成脂肪酸酯，諸如油酸乙酯或三酸甘油酯；及脂質體。
在某些條件下，本文所揭示之某些化合物充當酸。雖然此類化合物可以質子化(遊離酸)形式或離子化以及與陽離子締合(鹽)之形式繪製或描述，但此等化合物之水溶液以此等形式平衡存在。例如，水溶液中寡核苷酸之磷酸酯鍵聯以遊離酸、陰離子及鹽形式平衡而存在。除非另外指出，否則本文所描述之化合物旨在包括所有此等形式。此外，某些寡核苷酸具有若干此等鍵聯，其中之各者為平衡的。因此，溶液中之寡核苷酸以一系列形式存在於多個位置，全部處於平衡狀態。術語「寡核苷酸」旨在包括所有此類形式。繪製之結構必須描繪單一形式。然而，除非另外指出，否則此等圖式同樣旨在包括對應形式。在本文中，描繪化合物之遊離酸之結構繼之以術語「或其鹽」明確地包括可為完全或部分質子化/去質子化/與陽離子締合之所有此等形式。在某些情況下，鑑定一或多種特定陽離子。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在含鈉之水溶液中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在含鉀之水溶液中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在PBS中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在水中。在某些此類實施例中，用NaOH及/或HCl調節溶液之pH值以達成所需pH值。
在本文中，描述某些特定劑量。劑量可呈劑量單位形式。為清楚起見，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物之劑量(或劑量單位) (毫克)指示遊離酸形式之經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物的質量。如上文所描述，在水溶液中，遊離酸與陰離子及鹽形式平衡。然而，出於計算劑量之目的，假定經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物以無溶劑、無乙酸鈉、無水、遊離酸形式存在。例如，在經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在包含鈉之溶液(例如鹽水)中的情況下，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物可為部分或完全去質子化的且與Na+離子締合。然而，質子之質量仍然計入劑量之重量，而Na+離子之質量不計入劑量之重量。因此，例如，10 mg化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996 之劑量或劑量單位等於重10 mg的完全質子化分子之數目。這等效於：10.53 mg無溶劑、無乙酸鈉、無水鈉離子化(sodiated)化合物編號1263789；10.53 mg無溶劑、無乙酸鈉、無水鈉離子化化合物編號1287717；10.52 mg無溶劑、無乙酸鈉、無水鈉離子化化合物編號1287745；及10.51 mg無溶劑、無乙酸鈉、無水鈉離子化化合物編號1358996。當寡聚化合物包含綴合基團時，在計算此等寡聚化合物之劑量時包括綴合基團之質量。若綴合基團亦具有酸，則出於計算劑量之目的，同樣假定綴合基團為完全質子化的。某些組成物 化合物編號：1263789
在某些實施例中，化合物編號1263789經表徵為具有序列(5’至3’) CACTTTCATAATGCTGGC (SEQ ID NO: 21)之經修飾之寡核苷酸，其中各核苷包含2’-MOE糖部分，其中核苷2至3及4至5之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯，且核苷1至2、3至4、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17及17至18之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，化合物編號1263789由以下化學記法表示(5’至3’)：m Ces Aeo m Ces Teo Tes Tes m Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges m Ces Tes Ges Ges m Ce (SEQ ID NO: 21)， 其中， A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，化合物編號1263789由以下化學結構表示：
Figure 02_image001
(SEQ ID NO: 21)。結構 1. 化合物編號 1263789
在某些實施例中，化合物編號1263789之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image003
(SEQ ID NO: 21)。結構 2. 化合物編號 1263789 之鈉鹽 化合物編號：1287717
在某些實施例中，化合物編號1287717經表徵為具有序列(5’至3’) TTCACTTTCATAATGCTGGC (SEQ ID NO: 22)之經修飾之寡核苷酸，其中各核苷包含2’-MOE糖部分，其中核苷1至2及19至20之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯，且核苷2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17、17至18及18至19之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，化合物編號1287717由以下化學記法表示(5’至3’)： Teo Tes m Ces Aes m Ces Tes Tes Tes m Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges m Ces Tes Ges Geo m Ce (SEQ ID NO: 22) 其中， A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，化合物編號1287717由以下化學結構表示：
Figure 02_image005
(SEQ ID NO: 22)。結構 3. 化合物編號 1287717
在某些實施例中，化合物編號1287717之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image007
(SEQ ID NO: 22)。結構 4. 化合物編號 1287717 之鈉鹽 化合物編號：1287745
在某些實施例中，化合物編號1287745經表徵為具有序列(5’至3’) TTCACTTTCATAATGCTGGC (SEQ ID NO: 22)之經修飾之寡核苷酸，其中核苷1及20中之各者包含2’-MOE糖部分，核苷2-19中之各者包含2’-NMA糖部分，其中核苷1至2及19至20之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯，且核苷2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17、17至18及18至19之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，化合物編號1287745由以下化學記法表示(5’至3’)：  Teo Tns m Cns Ans m Cns Tns Tns Tns m Cns Ans Tns Ans Ans Tns Gns m Cns Tns Gns Gno m Ce (SEQ ID NO: 22) 其中， A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， n = 2’-NMA糖部分， s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，化合物編號1287745由以下化學結構表示：
Figure 02_image032
(SEQ ID NO: 22)。結構 5. 化合物編號 1287745
在某些實施例中，化合物編號1287745之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image034
(SEQ ID NO: 22)。結構 6. 化合物編號 1287745 之鈉鹽 化合物編號：1358996
在某些實施例中，化合物編號1358996經表徵為具有序列(5’至3’) CACTTTCATAATGCTGGC (SEQ ID NO: 21)之經修飾之寡核苷酸，其中各核苷包含2’-NMA糖部分，其中核苷2至3及4至5之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯，且核苷1至2、3至4、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17及17至18之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，化合物編號1358996由以下化學記法表示(5’至3’)：m Cns Ano m Cns Tno Tns Tns m Cns Ans Tns Ans Ans Tns Gns m Cns Tns Gns Gns m Cn (SEQ ID NO: 21) 其中， A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， n = 2’-NMA糖部分， s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，化合物編號1358996由以下化學結構表示：
Figure 02_image036
(SEQ ID NO: 21)。結構 7. 化合物編號 1358996
在某些實施例中，化合物編號1358996之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image038
(SEQ ID NO: 21)。結構 8. 化合物編號 1358996 之鈉鹽 某些比較組成物
在某些實施例中，經批准用於治療SMA的Spinraza® (通名nusinersen；化合物編號396443)為比較化合物(參見例如，Chiroboga等人, Neurology, 86(10): 890-897, 2016；Finkel等人, Lancet¸ 338(10063): 3017-3026, 2016；Finkel等人, N. Engl. J. Med., 377(18):1723-1732 2017；Mercuri等人, N. Engl. J. Med., 378(7):625-635, 2018；Montes等人, Muscle Nerve. 60(4): 409-414, 2019；Darras等人, Neurology, 92(21):e2492-e2506, 2019)。Spinraza®先前描述於WO2010120820 (其以引用之方式併入本文)中且具有序列(5’至3’) TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 23)，其中各核苷包含2’-MOE糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，儘管未批准用於人類治療，但其他先前描述之化合物，包括化合物編號387954、396442、443305及819735為比較化合物。
化合物編號387954 先前描述於WO 2014/179620中，其以引用之方式併入本文。化合物編號387954具有序列(5’至3’) ATTCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 20)，其中各核苷包含2’-MOE糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
化合物編號396442 先前描述於WO 2010/120820中，其以引用之方式併入本文。化合物編號396442具有序列(5’至3’) CACTTTCATAATGCTGGC (SEQ ID NO: 21)，其中各核苷包含2’-MOE糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
化合物編號443305先前描述於WO 2018/014041中，其以引用之方式併入本文。化合物編號443305具有序列(5’至3’) TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 23)，其中各核苷包含2’-NMA糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
化合物編號819735先前描述於WO 2018/014041中，其以引用之方式併入本文。化合物編號819735具有序列(5’至3’) CACTTTCATAATGCTGGC (SEQ ID NO: 21)，其中各核苷包含2’-NMA糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。表 1 某些比較組成物
化合物 編號 核鹼基序列 (5’ 至3’ ) 糖模體 核苷間鍵聯模體 SEQ ID NO: 參考編號
396443 TCACTTTCATAATGCTGG 全2’-MOE 全PS 23 WO 2010/120820
387954 ATTCACTTTCATAATGCTGG 全2’-MOE 全PS 20 WO 2014/179620
396442 CACTTTCATAATGCTGGC 全2’-MOE 全PS 21 WO 2010/120820
443305 TCACTTTCATAATGCTGG 全2’-NMA 全PS 23 WO 2018/014041
819735 CACTTTCATAATGCTGGC 全2’-NMA 全PS 21 WO 2018/014041
在某些實施例中，本文所述之化合物相對於WO 2007/002390、WO2010/120820、WO 2015/161170及WO 2018/014041中所述之化合物為優異的，因為它們顯示出一或多種改良之特性，諸如效力、功效及耐受性。
例如，化合物編號1263789、化合物編號1287745及化合物編號1358996各自顯示出相較於化合物編號396443改良之體內效力。如實例5中所示，化合物編號1263789、化合物編號1287745及化合物編號1358996分別達成在脊髓中之ED50 13.3、8.8及7.4。相比之下，化合物編號396443達成在脊髓中之ED50 22.0。因此，化合物編號1263789、化合物編號1287745及化合物編號1358996中之各者在此檢定中比化合物編號396443更有效。
例如，化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996各自顯示出相較於化合物編號396443、化合物編號387954及化合物編號443305改良之3小時FOB得分。如實例6中所示，在700 µg下，化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996分別達成3小時FOB得分0、3.25、1及0。相比之下，在一半劑量(350 µg)下，化合物編號396443達成3小時FOB得分4.0；且在相同劑量(700 µg) 下，化合物編號387954及化合物編號443305分別達成3小時FOB得分4.0及4.75。因此，化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996 之各者在此檢定中比化合物編號396443、化合物編號387954及化合物編號443305更耐受。
例如，化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996各自顯示出相較於化合物編號396442及化合物編號819735改良之長期耐受性。如實例7中所示，化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996顯示無不良作用、無普金斯細胞損失及小於2倍對照的皮質GFAP mRNA。相比之下，396442及819735各自在某些處理之動物中顯示不良事件、普金斯細胞損失及在某些處理之動物中大於2倍對照的皮質GFAP mRNA。因此，化合物編號1263789、化合物編號1287717、化合物編號1287745及化合物編號1358996之各者在此檢定中比化合物編號396442及化合物編號819735更耐受。 非限制性揭示及以引用之方式併入
本文所列舉之各文獻及專利公開案以全文引用之方式併入本文中。儘管已經根據某些實施例特別描述了本文所述之某些化合物、組成物及方法，但以下實例僅用於說明本文所述之化合物且不旨在對其加以限制。本申請案中所引用之參考文獻、GenBank登錄號及其類似者中之各者均以全文引用之方式併入本文。
儘管伴隨此申請之序列表按需要將各序列鑑定為「RNA」或「DNA」，但實際上，那些序列可用化學修飾之任何組合進行修飾。熟習此項技術者將容易瞭解，此類描述經修飾之寡核苷酸之諸如「RNA」或「DNA」之命名在某些情況下為任意的。例如，可將包含有包含2’-OH糖部分及胸腺嘧啶鹼基之核苷的寡核苷酸描述為具有經修飾之糖部分(2’-OH替代DNA之一個2’-H)的DNA或描述為具有經修飾之鹼基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)替代RNA之尿嘧啶)的RNA。因此，本文所提供之核酸序列，包括但不限於序列表中之核酸序列，旨在涵蓋含有天然或經修飾之RNA及/或DNA之任何組合的核酸，包括但不限於具有經修飾之核鹼基的此等核酸。進一步例如但不加以限制，具有核鹼基序列「 ATCGATCG」之寡聚化合物涵蓋具有此類核鹼基序列之任何寡聚化合物，無論是經修飾還是未經修飾，包括但不限於：包含RNA鹼基之此類化合物，諸如具有序列「 AUCGAUCG」之序列；以及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基者，諸如「 AUCGATCG」；以及具有其他經修飾之核鹼基的寡聚化合物，諸如「 ATm CGAUCG」，其中m C表示在5位包含甲基的胞嘧啶鹼基。
本文所述之某些化合物(例如經修飾之寡核苷酸)具有一或多個不對稱中心且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構組態，其可根據絕對立體化學定義為(R )或(S )、α或β (諸如對於糖變旋異構物)或(D)或(L) (諸如對於胺基酸)等。本文所提供之繪製或描述為具有某些立體異構組態的化合物僅包括所指示之化合物。除非另外指明，否則本文所提供之繪製或描述為具有不確定之立體化學的化合物包括所有此等可能之異構物，包括其隨機立構及光學純形式。同樣，除非另外指出，否則亦包括本文化合物之所有順式及反式異構物以及互變異構形式。本文所述之寡聚化合物包括掌性純或掌性富集混合物以及外消旋混合物。例如，具有複數個硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物包括硫代磷酸酯核苷間鍵聯之掌性受控制或為隨機的此等化合物。除非另外指出，否則本文所述之化合物旨在包括對應的鹽形式。
本文所述之化合物包括其中一或多個原子被所指示之元素之非放射性同位素或放射性同位素代替的變型。例如，本文包含氫原子的化合物涵蓋各1 H氫原子之所有可能的氘取代。本文化合物所涵蓋之同位素取代包括但不限於：2 H或3 H代替1 H；13 C或14 C代替12 C；15 N代替14 N；17 O或18 O代替16 O；以及33 S、34 S、35 S或36 S代替32 S。在某些實施例中，非放射性同位素取代可賦予寡聚化合物有益於用作治療或研究工具的新特性。在某些實施例中，放射性同位素取代可使化合物合適於研究或診斷目的，諸如成像。實例
以下實例說明瞭本揭露之某些實施例但不為限制性的。此外，在提供特定實施例之情況下，本發明人考慮了彼等特定實施例之通用應用。實例 1 ：與人類 SMN2 核酸互補的經修飾之寡核苷酸之設計
如下表中所指示設計並合成與人類SMN2核酸互補的經修飾之寡核苷酸。
下表中經修飾之寡核苷酸之長度為16、17、18、19或20個核苷，如所指定。經修飾之寡核苷酸包含2’-MOE糖模體、2’-NMA糖模體、cEt糖模體、2’-OMe糖模體及/或2’-β-D-去氧核糖基糖模體，如所指定。整個經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯，如所指定。胞嘧啶為非甲基化胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，如所指定。
除非另外特別說明，否則下表中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。下表中列出之各經修飾之寡核苷酸靶向SMN2轉錄本之活性位點以包括外顯子7。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 2
以下表2中經修飾之寡核苷酸之長度為16、17、18、19或20個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表2中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 2 具有 PS 或混合 PS/PO 核苷間鍵聯之 2’-MOE 修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體(5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1287063 ACTTTCATAATGCTGGCAG eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27059 27077 24
1287048 CACTTTCATAATGCTGGCAG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssss 27059 27078 25
1287064 CACTTTCATAATGCTGGCA eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27060 27078 26
1287049 TCACTTTCATAATGCTGGCA eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssss 27060 27079 27
1210340 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssss 27061 27076 28
1212868 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sssssssssooooss 27061 27076 28
1212867 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssssssssoooosss 27061 27076 28
1212863 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssssssooossssss 27061 27076 28
1212866 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssssssoooosssss 27061 27076 28
1212861 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sssssooooosssss 27061 27076 28
1212860 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sssssoooooossss 27061 27076 28
1212865 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssssoooosssssss 27061 27076 28
1212859 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssssooooooossss 27061 27076 28
1212851 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sssosssosssosss 27061 27076 28
1212850 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssosssssssssoss 27061 27076 28
1212852 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssossossossosss 27061 27076 28
1212853 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssossossosososs 27061 27076 28
1212854 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssososososososs 27061 27076 28
1212864 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee ssoooosssssssss 27061 27076 28
1212855 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee soossssssssooss 27061 27076 28
1212856 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sooosssssssooss 27061 27076 28
1212857 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee sooossssssoooss 27061 27076 28
1212858 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeee soooosssssoooss 27061 27076 28
1210339 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212849 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssooooss 27061 27077 29
1212848 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssoooossss 27061 27077 29
1212845 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee sssssssooossssss 27061 27077 29
1212844 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssssssoooossssss 27061 27077 29
1212843 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssssssooooosssss 27061 27077 29
1212842 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee sssssoooooosssss 27061 27077 29
1212841 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee sssssooooooossss 27061 27077 29
1212847 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssssoooossssssss 27061 27077 29
1212832 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssossssssssssoss 27061 27077 29
1212833 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssosssssossssoss 27061 27077 29
1212834 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssosssosssossoss 27061 27077 29
1212835 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssossossossososs 27061 27077 29
1212836 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssososososososss 27061 27077 29
1212846 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee ssoooossssssssss 27061 27077 29
1212837 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee soosssssssssooss 27061 27077 29
1212838 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee sooossssssssooss 27061 27077 29
1212839 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee sooosssssssoooss 27061 27077 29
1212840 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeee soooossssssoooss 27061 27077 29
1263814 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssossssssssssssss 27061 27078 21
1263816 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssossssssssssss 27061 27078 21
1263818 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssossssssssss 27061 27078 21
1263820 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssossssssss 27061 27078 21
1263822 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssossssss 27061 27078 21
1263824 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssossss 27061 27078 21
1263826 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssoss 27061 27078 21
1210342 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssosssssssssssoss 27061 27078 21
1263778 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sossssssssssssoss 27061 27078 21
1263781 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssssssosssss 27061 27078 21
1263783 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssssosssssss 27061 27078 21
1263785 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssosssssssss 27061 27078 21
1263787 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sosssosssssssssss 27061 27078 21
1263789 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sososssssssssssss 27061 27078 21
1263791 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssosssssssssoss 27061 27078 21
1263793 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssosssssssoss 27061 27078 21
1263795 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssosssssoss 27061 27078 21
1263797 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssosssoss 27061 27078 21
1263799 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssososs 27061 27078 21
1263800 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee soossssssssssssss 27061 27078 21
1263802 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssoossssssssssss 27061 27078 21
1263804 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssoossssssssss 27061 27078 21
1263806 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssoossssssss 27061 27078 21
1263808 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssoossssss 27061 27078 21
1263810 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssoossss 27061 27078 21
1263812 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssooss 27061 27078 21
1210343 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssosssssosssssoss 27061 27078 21
1212825 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssooosssssss 27061 27078 21
1212817 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee soossssssssssooss 27061 27078 21
1212824 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssoooossssss 27061 27078 21
1212826 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssoooosssssssssss 27061 27078 21
1212827 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssoooosssssssss 27061 27078 21
1212828 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssoooosssssss 27061 27078 21
1212829 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssoooosssss 27061 27078 21
1212830 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssoooosss 27061 27078 21
1212831 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssooooss 27061 27078 21
1212818 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sooosssssssssooss 27061 27078 21
1212823 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssooooossssss 27061 27078 21
1212819 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sooossssssssoooss 27061 27078 21
1212822 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssoooooosssss 27061 27078 21
1212820 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee soooosssssssoooss 27061 27078 21
1212821 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssooooooosssss 27061 27078 21
1287065 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27061 27079 30
1210341 ACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssss 27062 27077 31
524403 CACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssss 27062 27078 32
1287121 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssoss 27062 27079 23
1287120 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssosss 27062 27079 23
1287113 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssooss 27062 27079 23
1287110 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssososs 27062 27079 23
1287119 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssosssss 27062 27079 23
1364782 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssososss 27062 27079 23
1364777 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssossosss 27062 27079 23
1287118 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssosssssss 27062 27079 23
1364783 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssosssosss 27062 27079 23
1287109 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssosssssoss 27062 27079 23
1364784 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssossssosss 27062 27079 23
1287117 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssosssssssss 27062 27079 23
1287112 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssoossssssss 27062 27079 23
1287116 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssssosssssssssss 27062 27079 23
1287115 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sssosssssssssssss 27062 27079 23
1287114 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssssssssssss 27062 27079 23
1287106 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sossssssssssssoss 27062 27079 23
1287107 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sossssssossssssss 27062 27079 23
1287108 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee sososssssssssssss 27062 27079 23
1287111 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee soossssssssssssss 27062 27079 23
1287066 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27062 27080 33
1287074 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssoss 27062 27080 33
1287071 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssososs 27062 27080 33
1287073 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssosssssssss 27062 27080 33
1287070 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssossssssoss 27062 27080 33
1287072 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee sossssssssssssssss 27062 27080 33
1287067 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssssssssssoss 27062 27080 33
1287068 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee sossssssosssssssss 27062 27080 33
1287069 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee sosossssssssssssss 27062 27080 33
1287060 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssoss 27062 27081 20
1287057 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssooss 27062 27081 20
1287054 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssososs 27062 27081 20
1287059 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssosssssssss 27062 27081 20
1287053 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssossssssoss 27062 27081 20
1287056 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssoosssssssss 27062 27081 20
1287058 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssssssssssssss 27062 27081 20
1287050 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sossssssssssssssoss 27062 27081 20
1287051 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sosssssssosssssssss 27062 27081 20
1287052 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sososssssssssssssss 27062 27081 20
1287055 ATTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee soossssssssssssssss 27062 27081 20
1287075 ATTCACTTTCATAATGCTG eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27063 27081 34
1287062 AGATTCACTTTCATAATGCT eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssss 27064 27083 35
1287061 GATTCACTTTCATAATGCTG eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssss 27063 27082 49
1287076 GATTCACTTTCATAATGCT eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27064 27082 50
1287701 TCACTTTCATAATGCTGG T eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27062 27079 36
1287702 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssss 27062 27079 37
表 3
以下表3中經修飾之寡核苷酸之長度為16、17、18、19或20個核苷。各核苷包含2’-NMA糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『n』表示2’-NMA糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
以下表3中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 3 具有 PS 或混合 PS/PO 核苷間鍵聯之 2’-NMA 修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體(5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1287127 CACTTTCATAATGCTGGCA nnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssssss 27060 27078 26
1287122 TCACTTTCATAATGCTGGCA nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssssssss 27060 27079 27
1212871 CTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssss 27061 27076 28
1212869 ACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssss 27061 27077 29
1358996 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn sososssssssssssss 27061 27078 21
1212873 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssosssssssssssoss 27061 27078 21
1212874 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssosssssosssssoss 27061 27078 21
1212875 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssosssosssosssoss 27061 27078 21
1212879 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn soossssssssssooss 27061 27078 21
1212880 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn sooosssssssssooss 27061 27078 21
1212881 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn sooossssssssoooss 27061 27078 21
1212885 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssooooossssss 27061 27078 21
1212887 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssooosssssss 27061 27078 21
1287128 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssssss 27061 27079 30
1212870 CACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssss 27062 27078 32
1287132 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn sossssssssssssoss 27062 27079 23
1287133 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssossssssss 27062 27079 23
1332246 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssosssssoss 27062 27079 23
1332265 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssososs 27062 27079 23
1364778 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssososss 27062 27079 23
1364779 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssossosss 27062 27079 23
1364780 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssosssosss 27062 27079 23
1364781 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssossssosss 27062 27079 23
1287129 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssssss 27062 27080 33
1287130 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn sosssssssssssssoss 27062 27080 33
1287131 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssosssssssss 27062 27080 33
1332263 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssossssssoss 27062 27080 33
1332264 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssssoss 27062 27080 33
1332266 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssososs 27062 27080 33
1332270 TTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssooss 27062 27080 33
1287124 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssssssss 27062 27081 20
1287125 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sossssssssssssssoss 27062 27081 20
1287126 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssosssssssss 27062 27081 20
1332267 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssssoss 27062 27081 20
1332268 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssssooss 27062 27081 20
1332269 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn ssssssssssssssososs 27062 27081 20
1332271 ATTCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssossssssoss 27062 27081 20
1287123 TTCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn sssssssssssssssssss 27061 27080 22
表 4
以下表4中經修飾之寡核苷酸之長度為18或19個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分或2’-NMA糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，且各『n』表示2’-NMA糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表4中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以下劃線、粗體、斜體字體指定。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 4 具有 PS 核苷間鍵聯之混合 2’-MOE/ 2’-NMA 修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1212931 CACTTTCATAATGCTGGC nennnnneneennnnnnn sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212936 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnenneen sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212941 CACTTTCATAATGCTGGC nennnnneneenenneen sssssssssssssssss 27061 27078 21
1287728 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssss 27061 27079 30
1287729 TCACTTTCATAATGCTGG T nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssss 27062 27079 36
1287730 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssss 27062 27079 37
表 5
以下表5中經修飾之寡核苷酸之長度為16、17或18個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分或cEt糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，且各『k』表示cEt糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
以下表5中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 5 具有 PS 核苷間鍵聯之混合 2’-MOE/cEt 修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體(5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1212961 CACTTTCATAATGCTGGC keekeekeekeekeeeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212962 CACTTTCATAATGCTGGC keeekeeekeeekeeeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212963 CACTTTCATAATGCTGGC keeeeekeeeeekeeeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212964 CACTTTCATAATGCTGGC keeeeeeekeeeeeeeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212965 CACTTTCATAATGCTGGC keeeeeeeeeeeeeeeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212966 CACTTTCATAATGCTGGC eeekeekeekeekeekek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212967 CACTTTCATAATGCTGGC eeekeekeekeekeekee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212968 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeekeekeekeekee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212969 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeekeekeekeeeee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212970 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeekeeeeekeeeee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212971 CACTTTCATAATGCTGGC keekeekeekeeeeeeee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212972 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeekeekeekeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212973 CACTTTCATAATGCTGGC keekeekeeeeeeeeeee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212974 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeekeekeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212975 CACTTTCATAATGCTGGC keekeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212976 CACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeekeek sssssssssssssssss 27061 27078 21
1212977 ACTTTCATAATGCTGGC keekeekeekeekeeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212978 ACTTTCATAATGCTGGC keeekeeekeeekeeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212979 ACTTTCATAATGCTGGC keeeekeeeeekeeeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212980 ACTTTCATAATGCTGGC keeeeeeekeeeeeeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212981 ACTTTCATAATGCTGGC keeeeeeeeeeeeeeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212982 ACTTTCATAATGCTGGC eekeekeekeekeekek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212983 ACTTTCATAATGCTGGC eekeekeekeekeekee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212984 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeekeekeekeekee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212985 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeekeekeekeeeee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212986 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeekeeeeekeeeee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212987 ACTTTCATAATGCTGGC keekeekeekeeeeeee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212988 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeekeekeekeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212989 ACTTTCATAATGCTGGC keekeekeeeeeeeeee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212990 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeekeekeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212991 ACTTTCATAATGCTGGC keekeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212992 ACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeekeek ssssssssssssssss 27061 27077 29
1212993 CTTTCATAATGCTGGC keekeekeekeekeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1212994 CTTTCATAATGCTGGC keeekeeekeeekeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1212995 CTTTCATAATGCTGGC keeeekeeeekeeeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1212996 CTTTCATAATGCTGGC keeeeeeekeeeeeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1212997 CTTTCATAATGCTGGC keeeeeeeeeeeeeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1212998 CTTTCATAATGCTGGC kekeekeekeekeeke sssssssssssssss 27061 27076 28
1212999 CTTTCATAATGCTGGC eekeekeekeekeeke sssssssssssssss 27061 27076 28
1213000 CTTTCATAATGCTGGC eeeeekeekeekeeke sssssssssssssss 27061 27076 28
1213001 CTTTCATAATGCTGGC eeeeekeekeekeeee sssssssssssssss 27061 27076 28
1213002 CTTTCATAATGCTGGC eeeeekeeeeekeeee sssssssssssssss 27061 27076 28
1213003 CTTTCATAATGCTGGC keekeekeekeeeeee sssssssssssssss 27061 27076 28
1213004 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeekeekeekeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1213005 CTTTCATAATGCTGGC keekeekeeeeeeeee sssssssssssssss 27061 27076 28
1213006 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeekeekeek sssssssssssssss 27061 27076 28
1213007 CTTTCATAATGCTGGC keekeeeeeeeeeeee sssssssssssssss 27061 27076 28
1213008 CTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeekeek sssssssssssssss 27061 27076 28
表 6
以下表6中經修飾之寡核苷酸之長度為19或20個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分或2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，各『n』表示2’-NMA糖模體，各『y』表示2’-OMe糖模體，且各『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。提供於核苷間鍵聯模體欄中的各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體為(5’至3’)：ssssssssssssssssso；其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。胞嘧啶為非甲基化胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，其中核鹼基序列欄中之各小寫字母『c』表示非甲基化胞嘧啶，且核鹼基序列欄中之各大寫字母『C』表示5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表6中列出之經修飾寡核苷酸中之各核鹼基與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短)互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 6 具有混合 PS/PO 核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1287707 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287708 TCACTTTCATAATGCTGGc eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287709 TCACTTTCATAATGCTGG T eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssssssso 27062 27079 36
1287710 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssssssso 27062 27079 37
1287711 TCACTTTCATAATGCTGGc eeeeeeeeeeeeeeeeeey ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287712 TCACTTTCATAATGCTGG U eeeeeeeeeeeeeeeeeey ssssssssssssssssso 27062 27079 38
1287713 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeey ssssssssssssssssso 27062 27079 37
1287731 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287732 TCACTTTCATAATGCTGGc nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287733 TCACTTTCATAATGCTGG T nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssso 27062 27079 36
1287734 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssssso 27062 27079 37
1287735 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287736 TCACTTTCATAATGCTGGc nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287737 TCACTTTCATAATGCTGG T nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssssssso 27062 27079 36
1287738 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssssssso 27062 27079 37
1287739 TCACTTTCATAATGCTGGc nnnnnnnnnnnnnnnnnny ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287740 TCACTTTCATAATGCTGG U nnnnnnnnnnnnnnnnnny ssssssssssssssssso 27062 27079 38
1287741 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnny ssssssssssssssssso 27062 27079 37
1287705 TCACTTTCATAATGCTGG T eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssso 27062 27079 36
1287706 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssso 27062 27079 37
1287704 TCACTTTCATAATGCTGGc eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssso 27061 27079 30
1287703 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssssso 27061 27079 30
表 7
以下表7中經修飾之寡核苷酸之長度為19或20個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分或2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，各『n』表示2’-NMA糖模體，且各『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。提供於核苷間鍵聯模體欄中的各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體為(5’至3’)：sssssssssssssssssoo；其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表6中列出之經修飾寡核苷酸中之各核鹼基與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短)互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 7 具有混合 PS/PO 核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1318749 TCACTTTCATAATGCTGG A A nnnnnnnnnnnnnnnnnndd sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318750 TCACTTTCATAATGCTGGCA nnnnnnnnnnnnnnnnnned sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1318751 TCACTTTCATAATGCTGGCA nnnnnnnnnnnnnnnnnndd sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1318752 TCACTTTCATAATGCTGG A A nnnnnnnnnnnnnnnnnned sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318753 TCACTTTCATAATGCTGG A A nnnnnnnnnnnnnnnnnnde sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318754 TCACTTTCATAATGCTGGCA nnnnnnnnnnnnnnnnnnde sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1318755 TCACTTTCATAATGCTGG A A nnnnnnnnnnnnnnnnnnee sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318756 TCACTTTCATAATGCTGGCA nnnnnnnnnnnnnnnnnnee sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1318757 TCACTTTCATAATGCTGG AT eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27062 27079 40
1318758 TCACTTTCATAATGCTGG AC eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27062 27079 41
1318759 TCACTTTCATAATGCTGG TC eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27062 27079 42
1318760 TCACTTTCATAATGCTGG A A eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318761 TCACTTTCATAATGCTGG TT eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27062 27079 43
1318762 TCACTTTCATAATGCTGG T A eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27062 27079 44
1318763 TCACTTTCATAATGCTGGC C eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27061 27079 45
1318764 TCACTTTCATAATGCTGG A A eeeeeeeeeeeeeeeeeeed sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318765 TCACTTTCATAATGCTGG AC eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27062 27079 41
1318766 TCACTTTCATAATGCTGGC T eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27061 27079 46
1318767 TCACTTTCATAATGCTGG TT eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27062 27079 43
1318768 TCACTTTCATAATGCTGGCA eeeeeeeeeeeeeeeeeedd sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1318769 TCACTTTCATAATGCTGGCA eeeeeeeeeeeeeeeeeeed sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1318770 TCACTTTCATAATGCTGG AT eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27062 27079 40
1318771 TCACTTTCATAATGCTGG T A eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27062 27079 44
1318772 TCACTTTCATAATGCTGG A A eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318773 TCACTTTCATAATGCTGG TC eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27062 27079 42
1318774 TCACTTTCATAATGCTGGC C eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27061 27079 45
1318775 TCACTTTCATAATGCTGGC T eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27061 27079 46
1318776 TCACTTTCATAATGCTGGCA eeeeeeeeeeeeeeeeeede sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
1333508 TCACTTTCATAATGCTGGC T nnnnnnnnnnnnnnnnnnee sssssssssssssssssoo 27061 27079 46
1318777 TCACTTTCATAATGCTGG AC eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27062 27079 41
1318778 TCACTTTCATAATGCTGG TT eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27062 27079 43
1318779 TCACTTTCATAATGCTGG A A eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27062 27079 39
1318780 TCACTTTCATAATGCTGG TC eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27062 27079 42
1318781 TCACTTTCATAATGCTGG AT eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27062 27079 40
1318782 TCACTTTCATAATGCTGGC T eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27061 27079 46
1318783 TCACTTTCATAATGCTGG T A eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27062 27079 44
1318784 TCACTTTCATAATGCTGGC C eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27061 27079 45
1318748 TCACTTTCATAATGCTGGCA eeeeeeeeeeeeeeeeeeee sssssssssssssssssoo 27060 27079 27
表 8
以下表8中經修飾之寡核苷酸之長度各自為19個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分或2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，各『n』表示2’-NMA糖模體，且各『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。提供於核苷間鍵聯模體欄中的各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體為(5’至3’)：ssssssssssssososso；其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表8中列出之經修飾寡核苷酸中之各核鹼基與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短)互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 8 具有混合 PS/PO 核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1332247 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssososso 27061 27079 30
1332248 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssososso 27062 27079 37
1332249 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssososso 27062 27079 37
1332251 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssososso 27061 27079 30
1332255 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssososso 27061 27079 30
1332257 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssososso 27062 27079 37
1332256 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssososso 27062 27079 37
1332258 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssososso 27061 27079 30
表 9
以下表9中經修飾之寡核苷酸之長度各自為19個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分或2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，各『n』表示2’-NMA糖模體，且各『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。提供於核苷間鍵聯模體欄中的各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體為(5’至3’)：ssssssssssssssosso；其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表9中列出之經修飾寡核苷酸中之各核鹼基與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短)互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 9 具有混合 PS/PO 核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1332250 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssssosso 27062 27079 37
1332252 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnnd ssssssssssssssosso 27061 27079 30
1332253 TCACTTTCATAATGCTGG A nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssosso 27062 27079 37
1332254 TCACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnnne ssssssssssssssosso 27061 27079 30
1332259 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssssosso 27062 27079 37
1332260 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeed ssssssssssssssosso 27061 27079 30
1332261 TCACTTTCATAATGCTGG A eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssosso 27062 27079 37
1332262 TCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssssssosso 27061 27079 30
表 10
以下表10中經修飾之寡核苷酸之長度各自為19個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分或2’-NMA糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，且各『n』表示2’-NMA糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。提供於核苷間鍵聯模體欄中的各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體為(5’至3’)：osssssssssssssssss；其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
除非另外特別說明，否則以下表10中列出之經修飾寡核苷酸中之各核鹼基與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短)互補。非互補核鹼基在核鹼基序列欄中以 下劃線、粗體、斜體字體指定 。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 10 具有混合 PS/PO 核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1287742 C TCACTTTCATAATGCTGG ennnnnnnnnnnnnnnnnn osssssssssssssssss 27062 27079 47
1287743 TTCACTTTCATAATGCTGG ennnnnnnnnnnnnnnnnn osssssssssssssssss 27062 27080 33
1287744 A TCACTTTCATAATGCTGG ennnnnnnnnnnnnnnnnn osssssssssssssssss 27062 27079 48
1287714 C TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee osssssssssssssssss 27062 27079 47
1287716 A TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee osssssssssssssssss 27062 27079 48
1287715 TTCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeeee osssssssssssssssss 27062 27080 33
表 11
以下表11中經修飾之寡核苷酸之長度各自為20個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分或2’-NMA糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，且各『n』表示2’-NMA糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。提供於核苷間鍵聯模體欄中的各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體為(5’至3’)：ossssssssssssssssso；其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
以下表11中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。表 11 具有混合 PS/PO 核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸
化合物編號 核鹼基序列 (5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1287745 TTCACTTTCATAATGCTGGC ennnnnnnnnnnnnnnnnne ossssssssssssssssso 27061 27080 22
1287717 TTCACTTTCATAATGCTGGC eeeeeeeeeeeeeeeeeeee ossssssssssssssssso 27061 27080 22
實例 2 ： 在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，單一劑量 (35 µg)
在人類SMN2基因轉殖小鼠中測試了上文所述之所選經修飾之寡核苷酸之活性。SMA III型小鼠之台灣品系獲自美國傑克遜實驗室(Bar Harbor, Maine)。這些小鼠缺乏小鼠SMN且為人類SMN2 (mSMN -/-；hSMN2 +/+；FVB.Cg-Tg(SMN2)2HungSMN1tm1Hung/J，庫存編號005058；Bar Harbor, Maine)同型接合的，或為小鼠異型接合且為藉由將HOM/HOM (庫存編號00005058)與FVB/NJ (庫存編號001800)育種獲得之人類SMN2 (mSMN +/-；hSMN2 +/-；FVB.Cg-Tg(SMN2)2HungSMN1tm1Hung/J)異型接合的。處理
將同型接合或異型接合基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠接受35 µg經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。此檢定中亦測試了比較化合物編號387954、396442及396443。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。RNA 分析
處理之後兩週，將小鼠處死，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。使用引子探針組hSMN2vd#4_LTS00216_MGB (正向序列：GCTGATGCTTTGGGAAGTATGTTA (SEQ ID NO: 11)；反向序列：CACCTTCCTTCTTTTTGATTTTGTC，本文中命名為SEQ ID NO: 12；探針序列：TACATGAGTGGCTATCATACT (SEQ ID NO: 13))確定包括外顯子7 (外顯子7+ )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_Sumner68_PPS50481 (正向序列：CATGGTACATGAGTGGCTATCATACTG (SEQ ID NO: 14)；反向序列：TGGTGTCATTTAGTGCTGCTCTATG (SEQ ID NO: 15)；探針序列CCAGCATTTCCATATAATAGC (SEQ ID NO: 16) )確定不包括外顯子7 (外顯子7- )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_LTS00935 (正向序列：CAGGAGGATTCCGTGCTGTT (SEQ ID NO: 17)；反向序列：CAGTGCTGTATCATCCCAAATGTC, (SEQ ID NO: 18)；探針序列：ACAGGCCAGAGCGAT (SEQ ID NO: 19))量測總SMN2 RNA水準。
結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。表12-18中之各者表示不同實驗。表 12 同型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
396442 35 3.3 0.3 3.4 0.3
396443 35 3.0 0.5 2.3 0.5
524403 35 3.3 0.4 2.5 0.5
1210339 35 2.5 0.5 3.0 0.3
1210340 35 2.1 0.6 2.6 0.4
1210341 35 1.8 0.7 2.0 0.6
1210342 35 2.5 0.5 2.9 0.3
1210343 35 3.0 0.4 2.4 0.5
1212817 35 2.4 0.6 2.2 0.6
1212818 35 2.4 0.5 2.1 0.6
1212823 35 2.0 0.6 2.0 0.6
1212824 35 2.1 0.6 2.1 0.6
1212825 35 2.9 0.4 2.5 0.5
1212826 35 2.5 0.6 2.2 0.7
1212827 35 2.5 0.6 2.6 0.5
1212828 35 2.9 0.5 2.4 0.6
1212830 35 2.8 0.7 2.1 0.8
1212831 35 2.5 0.7 2.3 0.7
1212832 35 2.9 0.6 2.9 0.5
1212833 35 2.4 0.7 2.7 0.5
1212837 35 2.5 0.6 2.7 0.5
1212838 35 2.1 0.7 2.5 0.6
1212844 35 2.6 0.6 2.4 0.7
1212845 35 2.3 0.7 2.5 0.7
1212846 35 2.8 0.6 2.6 0.6
1212849 35 2.1 0.7 2.3 0.6
1212850 35 1.8 0.8 2.2 0.7
1212855 35 2.0 0.7 2.1 0.8
表 13 同型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1.0 1.0 1.0 1.0
396443 35 2.7 0.3 1.9 0.5
1210342 35 2.4 0.5 2.5 0.4
1212961 35 1.8 0.7 1.7 0.6
1212962 35 2.0 0.6 1.9 0.5
1212963 35 2.3 0.5 2.5 0.3
1212966 35 1.6 0.8 2.0 0.5
1212967 35 1.9 0.6 1.9 0.4
1212971 35 1.6 0.5 2.0 0.4
1212972 35 1.8 0.6 2.2 0.5
1212977 35 2.1 0.5 2.2 0.4
1212978 35 2.1 0.6 2.2 0.4
1212979 35 2.1 0.5 2.6 0.3
1212982 35 2.0 0.7 1.8 0.6
1212983 35 1.9 0.6 1.7 0.5
1212984 35 1.9 0.6 1.9 0.5
1212987 35 2.4 0.4 2.5 0.4
1212988 35 1.8 0.7 1.8 0.5
1212995 35 2.5 0.5 2.5 0.4
1212998 35 1.8 0.6 1.8 0.7
1212999 35 2.0 0.6 2.0 0.5
1213003 35 1.9 0.7 2.3 0.5
1213004 35 1.8 0.7 2.3 0.6
表 14 同型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1.0 1.0 1.0 1.0
396443 35 2.6 0.5 3.1 0.5
1212964 35 2.5 0.6 3.6 0.4
1212965 35 2.9 0.5 3.3 0.4
1212968 35 2.2 0.6 2.3 0.6
1212973 35 2.6 0.5 3.2 0.4
1212974 35 2.3 0.6 2.8 0.5
1212975 35 2.9 0.3 3.1 0.4
1212976 35 2.5 0.5 2.8 0.5
1212980 35 2.6 0.5 3.2 0.4
1212981 35 2.9 0.4 3.6 0.3
1212985 35 2.4 0.6 2.9 0.5
1212986 35 2.8 0.4 3.3 0.4
1212989 35 3.3 0.3 3.6 0.2
1212990 35 1.8 0.8 2.1 0.7
1212991 35 3.2 0.3 3.8 0.3
1212992 35 2.4 0.5 2.2 0.6
1212996 35 2.2 0.6 3.2 0.5
1212997 35 2.9 0.4 3.9 0.4
1213001 35 2.1 0.5 2.8 0.6
1213002 35 2.0 0.6 2.9 0.6
1213005 35 2.8 0.5 3.2 0.3
1213006 35 1.9 0.9 2.0 0.8
1213007 35 3.3 0.2 2.9 0.5
1213008 35 2.3 0.7 2.2 0.7
表 15 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1.0 1.0 1.0 1.0
387954 35 2.3 0.6 2.2 0.5
396443 35 2.5 0.5 2.4 0.5
1287048 35 2.2 0.5 2.2 0.5
1287049 35 2.3 0.6 2.5 0.4
1287061 35 2.4 0.5 2.2 0.4
1287062 35 3.0 0.3 2.3 0.4
1287050 35 2.8 0.5 2.3 0.4
1287054 35 2.2 0.5 2.3 0.4
1287063 35 1.8 0.7 1.7 0.6
1287064 35 2.6 0.3 2.4 0.4
1287065 35 2.5 0.4 2.3 0.4
1287066 35 2.2 0.5 2 0.5
1287075 35 2.3 0.6 1.8 0.7
1287076 35 2.6 0.4 1.9 0.6
1287067 35 2.7 0.4 1.9 0.6
1287070 35 2.5 0.5 1.8 0.7
1287071 35 2.6 0.4 1.8 0.7
1287074 35 2.6 0.5 2 0.6
1287109 35 2.7 0.6 2.4 0.5
1287110 35 2.6 0.5 2.3 0.5
1287701 35 2.6 0.6 2.8 0.3
1287702 35 3 0.5 2.8 0.4
1287703 35 2.3 0.6 2.4 0.4
1287704 35 2.7 0.5 2.3 0.4
1287717 35 3.3 0.3 2.4 0.6
表 16 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
396442 35 2.5 0.6 3.2 0.3
396443 35 3 0.5 2.8 0.5
1263783 35 3 0.3 2.6 0.5
1263785 35 3.1 0.4 2.9 0.5
1263787 35 2.4 0.6 2.9 0.4
1263789 35 3.8 0.2 2.6 0.5
1263800 35 3.6 0.2 2.6 0.5
1263802 35 3.4 0.3 2.9 0.4
1263806 35 3.5 0.2 2.7 0.5
1263808 35 3.2 0.4 2.7 0.5
1263810 35 2.8 0.5 2.4 0.5
表 17 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
396443 35 2.5 0.6 2.9 0.4
1364784 35 2.3 0.7 2.8 0.5
1364783 35 2.9 0.5 2.4 0.5
1364777 35 2.7 0.6 2.3 0.5
1364782 35 2.7 0.6 2.6 0.5
表 18 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
396443 35 2 0.7 2.7 0.5
1318748 35 2.1 0.7 2.5 0.6
1318782 35 2.2 0.8 2.5 0.6
1332262 35 3.3 0.4 2.9 0.5
1332258 35 2.4 0.7 2.3 0.6
實例 3 ：在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，單一劑量 (15 µg)
基本上如上文在實例2中所述，測試了人類SMN2基因轉殖小鼠中上文所述之選定經修飾之寡核苷酸之活性。此檢定中亦測試了比較化合物編號396443及819735。將基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠接受15 µg經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。處理之後兩週，將小鼠處死，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。表19-23中之各者表示不同實驗。表 19 同型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1.0 1.0 1.0 1.0
819735 15 2.4 0.4 3.3 0.3
1212869 15 2.4 0.4 3.2 0.4
1212870 15 2.1 0.5 2.8 0.4
1212873 15 2.2 0.4 2.0 0.6
1212874 15 2.1 0.5 2.4 0.6
1212875 15 2.1 0.5 2.3 0.5
1212880 15 1.7 0.6 2.0 0.6
1212881 15 1.8 0.6 2.3 0.6
1212885 15 2.3 0.4 2.4 0.5
1212887 15 2.0 0.5 2.2 0.5
1212931 15 2.9 0.2 2.9 0.3
1212936 15 2.9 0.3 3.3 0.3
1212941 15 3.0 0.1 3.4 0.2
表 20 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1.0 1.0 1.0 1.0
396443 15 2.2 0.5 2.2 0.7
819735 15 2.7 0.5 3.1 0.5
1287122 15 2.9 0.5 2.3 0.6
1287123 15 3.0 0.4 3.0 0.4
1287124 15 3.0 0.4 3.2 0.3
1287125 15 3.0 0.4 3.0 0.4
1287126 15 2.8 0.4 2.8 0.4
1287127 15 2.7 0.5 3.0 0.5
1287128 15 2.6 0.5 3.2 0.5
1287129 15 2.9 0.4 2.9 0.5
1287130 15 3.7 0.1 3.1 0.5
1287131 15 2.2 0.6 2.7 0.4
1287132 15 3.2 0.3 2.2 0.6
1287133 15 2.9 0.4 2.8 0.4
1287728 15 2.8 0.6 3.4 0.3
1287729 15 3.1 0.4 3.0 0.3
1287730 15 3.1 0.3 2.7 0.4
1287731 15 3.3 0.3 2.8 0.5
1287735 15 2.9 0.5 2.6 0.5
1287738 15 3.7 0.2 3.2 0.3
1287739 15 3.3 0.4 3.2 0.4
1287743 15 3.6 0.4 3.8 0.4
1287745 15 3.1 0.5 3.8 0.5
表 21 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1.0
396443 15 1.9 0.6 1.7 0.7
819735 15 2.3 0.5 1.9 0.6
表 22 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
1364781 15 2.5 0.6 2.7 0.4
1364780 15 2.8 0.5 2.6 0.5
1364779 15 2.7 0.5 2.6 0.5
1364778 15 3 0.5 2.7 0.4
表 23 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
819735 15 2.8 0.5 2.4 0.6
1332265 15 2.1 0.7 2.6 0.6
1332269 15 2.5 0.6 2.7 0.5
1332268 15 2.9 0.5 2.3 0.6
1318756 15 2.2 0.7 2.4 0.6
1333508 15 2 0.6 2.2 0.6
1332251 15 2.9 0.5 1.9 0.7
1332249 15 2.3 0.7 2.3 0.7
實例 4 ：在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，單一劑量 (70 µg)
基本上如上文在實例2中所述，測試了人類SMN2基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸之活性。將基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠接受70 µg經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。處理之後兩週，將小鼠處死，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。表 24 同型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
1212969 70 2.5 0.4 2.4 0.3
1212970 70 2.7 0.3 2.6 0.3
實例 5 ：在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，多次劑量
基本上如上文在實例2中所述，測試了人類SMN2基因轉殖小鼠中上文所述之選定經修飾之寡核苷酸之活性。此檢定中亦測試了比較化合物編號396443。將基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠以如下表中所指示之多次劑量接受經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。處理之後兩週，將小鼠處死，且自冠狀腦及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。在GraphPad Prism 7中，使用非線性迴歸4參數劑量反應曲線[ Y=底部 + (頂部-底部)/(1+ (10^logEC50 /X)^HillSlope)]計算外顯子包涵(外顯子7+ )之ED50 。表 25 同型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 冠狀腦 ED50 (µg) 脊髓 ED50 (µg)
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1.0 1.0 1.0 1.0
396443 3 1.4 0.9 32.5 1.3 0.9 22.1
10 1.8 0.8 2.0 0.7
30 2.6 0.5 2.6 0.4
100 3.5 0.4 3.2 0.3
300 4.2 0.1 3.6 0.2
1263789 3 1.5 0.9 38.3 1.5 0.8 13.3
10 2.0 0.7 2.2 0.6
30 2.3 0.6 3.0 0.4
100 3.4 0.3 3.4 0.3
300 3.9 0.1 3.7 0.2
1287717 3 1.3 0.8 38.7 1.3 0.9 20.5
10 1.8 0.7 1.9 0.7
30 2.4 0.7 2.7 0.5
100 3.5 0.4 3.3 0.3
300 4.1 0.1 3.8 0.2
1358996 3 1.6 0.9 16.6 1.7 0.8 7.4
10 2.5 0.6 2.6 0.5
30 3.0 0.4 3.5 0.2
100 4.0 0.2 3.6 0.2
300 4.0 0.1 3.9 0.1
1287745 3 1.5 0.8 22.8 1.7 0.7 8.8
10 2.1 0.6 2.4 0.5
30 3.0 0.3 3.3 0.3
100 3.6 0.1 3.5 0.2
300 4.2 0.1 3.8 0.1
實例 6 ：在野生型小鼠中與 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之耐受性， 3 小時研究
在野生型雌性C57/Bl6小鼠中對上文所述之經修飾之寡核苷酸進行測試，以評估耐受性。野生型雌性C57/Bl6小鼠各自接受700 μg下表中列出之經修飾之寡核苷酸之單一ICV劑量。此檢定中亦以350 µg之劑量測試了比較化合物編號396443。此檢定中亦以700 µg之劑量測試了比較化合物編號387954、396442、443305及819735。各處理組由4隻小鼠組成。一組4隻小鼠接受PBS作為各實驗之陰性對照(以下單獨的表中所識別)。在注射後3小時，根據七個不同準則評估小鼠。準則為(1)小鼠為聰明的、警覺的且具反應性；(2)在沒有刺激之情況下小鼠站立或弓起背部；(3)在沒有刺激之情況下小鼠顯示任何移動；(4)小鼠在其被提起之後展示向前之移動；(5)小鼠在其被提起之後展示任何移動；(6)小鼠對尾部夾捏作出反應；(7)均勻呼吸。對於7個準則中之各者，若小鼠滿足準則，則給予小鼠子得分0，且若其不滿足準則，則給予子得分1 (功能觀測實驗組合得分或FOB)。在評估所有7個準則之後，對得分求和且在各處理組內取平均值。結果呈現於下表中。表26-49中之各者表示不同實驗。表 26 在 350 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0
396443 4.0
表 27 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
443305 4.75
表 28 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0
396442 2.5
524403 3.25
1210339 1.25
1210340 2.25
1210341 3.75
1210342 0
1210343 0
1212817 0
1212818 0
1212819 0
1212820 0
1212821 0
1212822 0
1212823 0
1212824 0
1212825 1
1212826 0
1212827 0
1212828 0
1212829 0
1212830 0
1212831 0
表 29 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
396442 2.50
1210340 3.50
1212850 0.50
1212851 0.75
1212852 0.00
1212853 0.00
1212854 0.25
1212855 0.25
1212856 0.00
1212857 0.00
1212858 0.00
1212859 0.00
1212860 0.75
1212861 1.00
1212863 2.00
1212864 0.00
1212866 0.75
1212867 0.00
1212868 0.00
表 30 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
396442 3.25
1212961 0.00
1212963 1.00
1212964 2.00
1212965 1.25
1212966 1.25
1212968 0.00
1212971 1.00
1212972 3.25
1212973 0.50
1212974 2.00
1212975 0.50
1212976 1.75
表 31 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1212977 0.75
1212978 0.00
1212979 1.75
1212980 1.50
1212981 0.00
1212982 0.50
1212983 0.75
1212984 2.75
1212985 0.00
1212986 1.00
1212987 1.75
1212988 4.50
1212989 1.75
1212990 4.50
1212991 1.25
1212992 3.75
表 32 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1212993 7.00
1212994 6.50
1212995 4.25
1212996 3.25
1212997 4.00
1212998 2.00
1212999 1.00
1213000 1.25
1213001 3.00
1213002 2.00
1213003 4.00
1213004 3.00
1213005 3.75
1213006 4.00
1213007 4.00
1213008 3.50
表 33 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1212832 0.00
1212833 0.00
1212834 0.00
1212835 0.00
1212836 0.00
1212837 0.00
1212838 0.00
1212839 0.00
1212840 0.00
1212841 0.00
1212842 0.00
1212843 0.00
1212844 0.25
1212845 1.00
1212846 0.00
1212847 0.00
1212848 0.00
1212849 0.00
表 34 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
396442 1.75
1210339 1.00
1212865 1.00
1212962 0.00
1212967 0.50
1212969 0.50
1212970 1.25
表 35 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
819735 2.00
1212869 2.00
1212870 4.75
1212871 1.00
1212873 0.00
1212874 0.00
1212875 0.00
1212879 3.00
1212880 0.00
1212881 4.00
1212885 1.00
1212887 2.25
1212931 2.00
1212936 2.00
1212941 1.25
表 36 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1263778 0.00
1263781 0.00
1263783 0.00
1263785 1.00
1263787 0.00
1263789 0.00
1263791 0.00
1263793 0.00
1263795 0.00
1263797 0.00
1263799 0.00
1263800 0.00
1263802 0.00
1263804 0.00
1263806 0.00
1263808 1.00
1263810 0.00
1263812 0.00
1263814 1.00
1263816 0.50
1263818 0.00
1263820 0.00
1263822 0.25
1263824 0.00
表 37 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1263826 0.00
表 38 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
387954 4.00
1287048 0.00
1287049 0.00
1287050 2.00
1287051 3.25
1287052 3.50
1287053 2.75
1287054 2.00
1287055 3.25
1287056 4.00
1287057 3.00
1287058 4.00
1287059 4.00
1287060 4.00
1287061 4.00
1287062 3.50
表 39 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1287106 3.50
1287107 4.00
1287108 3.75
1287109 3.25
1287110 3.00
1287111 4.75
1287112 4.00
1287113 3.50
1287114 3.25
1287115 3.50
1287116 4.00
1287117 4.25
1287118 3.00
1287119 3.50
1287120 3.75
1287121 2.75
表 40 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1287063 0.00
1287064 0.00
1287065 1.00
1287066 3.75
1287067 1.00
1287068 2.50
1287069 2.25
1287071 1.00
1287072 3.00
1287073 3.75
1287074 1.75
1287075 3.50
1287076 2.00
表 41 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1287070 2.00
1287701 2.50
1287702 3.75
1287703 3.75
1287705 4.00
1287706 4.00
1287707 4.00
1287709 4.75
1287710 4.00
1287711 4.75
1287712 4.00
1287713 4.00
1287714 3.50
1287715 4.00
1287716 4.00
1287717 3.25
表 42 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1287728 1.00
1287729 1.25
1287730 2.00
1287731 2.50
1287732 3.00
1287733 3.25
1287734 3.00
1287735 0.50
1287736 2.50
1287737 4.00
1287738 3.00
1287739 2.50
1287740 2.75
1287741 3.75
1287742 3.00
1287743 2.75
1287744 2.25
1287745 1.00
表 43 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1287122 0.00
1287123 0.00
1287124 3.50
1287125 3.00
1287126 3.00
1287127 0.00
1287128 0.00
1287129 4.00
1287130 2.75
1287131 2.50
1287132 2.75
1287133 3.25
1287704 3.50
1287708 3.50
表 44 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1318748 2.00
1318765 4.00
1318767 4.25
1318770 3.75
1318771 4.50
1318772 4.25
1318773 4.25
1318774 3.50
1318775 3.75
1318776 3.75
1318777 4.00
1318778 4.00
1318779 4.00
1318780 4.00
1318781 4.00
1318782 1.00
1318783 4.00
1318784 2.00
表 45 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1318757 4.00
1318758 4.25
1318759 3.75
1318760 3.75
1318761 4.00
1318762 4.00
1318763 4.00
1318764 3.75
1318766 3.75
1318768 4.00
1318769 4.00
表 46 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1318749 4.25
1318750 2.25
1318751 4.00
1318752 3.75
1318753 2.25
1318754 3.00
1318755 3.75
1318756 0.00
表 47 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1332247 1.75
1332248 0.25
1332249 0.00
1332250 3.75
1332251 0.00
1332252 3.00
1332263 2.00
1332265 1.50
1332266 1.00
1332267 3.75
1332268 2.75
1332269 1.25
1332270 2.25
1332271 2.50
1333508 0.00
表 48 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1332255 1.00
1332256 2.00
1332257 1.25
1332258 1.25
1332259 2.25
1332260 2.25
1332261 2.50
1332262 2.00
表 49 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1358996 0.00
1364777 2.00
1364778 3.00
1364779 3.50
1364780 3.50
1364781 5.25
1364782 2.50
1364783 3.50
1364784 3.50
實例 7 ：在大鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之耐受性，長期評估
在相同條件下進行之單獨研究中，在史-道二氏大鼠中測試了上文所述之選定經修飾之寡核苷酸以評估長期耐受性。此檢定中亦測試了比較化合物編號396442及819735。史-道二氏大鼠各自接受3 mg寡核苷酸之單一鞘內(IT)遞送劑量或PBS。治療後1週開始，將各動物稱重且由經訓練之觀察人員每週評估不良事件。不良事件定義為在PBS處理之對照動物中不典型的神經功能障礙，包括但不限於：肢體張開異常、步態異常、震顫、呼吸異常、麻痺及痙攣。不良事件之發作定義為給藥後首次記錄功能障礙的一週。若未達成不良事件，則無發作(-)。不良事件之發作通常與如藉由缺乏體重增加/維持所定義之成長障礙有關，與PBS處理之動物類似。類似的耐受性評估描述於Oestergaard等人,Nucleic Acids Res., 2013年11月,41 (21), 9634-9650及Southwell等人,Mol Ther ., 2014年12月,22 (12), 2093-2106。
在研究結束時，處死大鼠並收集組織。使用鈣結合蛋白(calbindin)染色在小腦切片上進行組織病理學檢查。如下表所指示，在鈣結合蛋白染色之小腦切片中觀察到普金斯細胞損失。亦使用對經修飾之寡核苷酸具有特異性的抗體評估了小腦及脊髓。從組織病理學分析中排除顯示無寡核苷酸攝取的動物。對於因不良事件而提前處死的動物，組織學未完成。此外，使用RT-PCR量測了皮質GFAP，星狀細胞增生(astrogliosis)之標誌物(Abdelhak等人,Scientific Reports , 2018,8 , 14798)，且下文說明瞭＞2倍的平均升高。表 50 在 3 mg 劑量下在大鼠中之長期耐受性
化合物編號 不良事件發作，治療後週數，個別動物 普金斯細胞損失 (有損失的動物數目/測試之動物數目) 皮質GFAP mRNA ＞2倍PBS對照
PBS 無 未觀察到 N/A
396442 6, 6, 2 2/3 是
819735 4,6,6,- 1/4 是
1263789 -,-,- 0/3 否
1287717 -,-,-,-,-,-,-,- 0/8 否
1287745 -,-,-,-,-,-,- 0/7 否
1358996 -,-,-,- 0/4 否
1263783 -,-,-,- 0/4 否
1263785 -,-,- 0/3 否
1263787 -,-,-,- 0/4 否
1263800 -,- 0/2 否
1263802 -,-,- 0/3 否
1263806 -,-,- 0/3 否
1263808 -,-,- 0/3 否
1263810 -,-,- 0/3 否
實例 8 ：在非人類靈長類動物中經修飾之寡核苷酸之耐受性及藥物動力學，單次或重複給藥
用經修飾之寡核苷酸處理石蟹獼猴以確定經修飾之寡核苷酸之局部及全身耐受性及藥物動力學。各組接受人工CSF或呈單次鞘內腰部推注劑量注射(IT)之經修飾之寡核苷酸，或對於重複給藥組，研究第1天為IT推注劑量，接著在以後時間點接受IT推注劑量。最後一次注射後1週收集組織。
在單劑量研究中，向猴子投與單劑量經修飾之寡核苷酸並評估耐受性。成年石蟹獼猴中單劑量研究之代表性劑量包括1 mg、3 mg、7 mg及35 mg。
在重複給藥研究中，在研究第1天向猴子投與IT推注劑量，接著每週(例如，四週研究之第8天、第15天及第22天)或每月(例如，13週研究之第29天、第57天及第84天)進行IT推注給藥。成年石蟹獼猴研究中重複劑量研究之代表性劑量包括1 mg、3 mg、7 mg及35 mg。
耐受性之評估係基於臨床觀察、體重、食物消耗、身體及神經學檢查(包括感覺運動反射、腦反射及脊柱反射)、凝血、血液學、臨床化學(血液及腦脊髓液(CSF))、細胞計數及解剖病理學評估。進行完整的屍體剖檢，記錄任何宏觀異常。進行器官稱重並進行顯微鏡檢查。收集血液以用於補充分析。另外，收集血液、CSF及組織(屍體剖檢時)以用於毒物動力學評估。
藉由量測用經修飾之寡核苷酸或對照處理之石蟹獼猴之Aif1及Gfap水準，分析腦及脊髓組織中經修飾之寡核苷酸之耐受性。收集腦及脊髓樣品並在液氮中速凍且冷凍(-60℃至-90℃)儲存。在取樣時，使用2 mm活檢打孔器從冷凍組織收集樣品以用於RNA分析。在多個腦及脊髓區域進行打孔。實例 9 ：以化合物編號 1263789 、 1287717 、 1287745 或 1358996 之 Ia 期人類臨床試驗
在臨床試驗環境中評估了與人類SMN2互補的經修飾之寡核苷酸之安全性、耐受性、藥物動力學、藥效學及功效。在具有確認之SMA (諸如I型SMA、II型SMA、III型SMA或IV型SMA)之患者中評估經修飾之寡核苷酸之單及/或多劑量。
在研究期間會密切監測患者安全。安全性及耐受性評估包括：體格檢查及標準神經學評估(包括基底)、生命體徵(HR、BP、體位變化、體重)、ECG、AE及伴隨用藥、哥倫比亞自殺嚴重程度量表(Columbia Suicide Severity Rating Scale；C-SSRS)、CSF安全性實驗室(細胞計數、蛋白質、葡萄糖)、血漿實驗室測試(臨床化學、血液學)及尿分析。
選擇適合年齡及類型的功效評估且包括例如：漢默史密斯功能性動作量表延伸版(Hammersmith Motor Function Scale-Expanded；HFMSE)，其為用於評估SMA兒童之運動功能的可靠且經過驗證的工具；兒童生活品質問卷(PedsQL™)量測4.0普通適用核心量表；兒童生活品質問卷3.0神經肌肉模塊；複合肌肉動作電位(Compound Muscle Action Potential；CMAP)；運動單元估計(Motor Unit Number Estimation；MUNE)；上肢模塊(Upper Limb Module；ULM)以及6分鐘行走測試(6MWT) (Darras等人,Neurology , 2019,92 : e2492-e2506)。實例 10 ：與人類 SMN2 核酸互補的經修飾之寡核苷酸之設計
如下表中所指示設計並合成與人類SMN2核酸互補的經修飾之寡核苷酸。
以下各表中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NT_006713.14，自核苷19939708至19967777截短) 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。
下表中經修飾之寡核苷酸之長度為18個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分或2’-NMA糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，且各『n』表示2’-NMA糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯、磷酸二酯核苷間鍵聯、甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯或甲磺醯胺基磷酸酯(MsP)核苷間鍵聯。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯，各『x』表示甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯，且各『z』表示甲磺醯胺基磷酸酯(MsP)核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。經修飾之寡核苷酸449320先前已描述於WO2015/161170 A2中。表 51 具有混合 PO/PS 、 PO/MsP 、均勻 MsP 或 PS/MOP 核苷間鍵聯之 MOE 及 NMA 修飾之寡核苷酸
化合物編號 序列(5’ 至3’) 糖模體 (5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體 (5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
449320 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssoooooooooooooss 27062 27079 23
1287723 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnenn sssssssssssssssxs 27062 27079 23
1287724 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnen ssssssssssssssssx 27062 27079 23
1287727 CACTTTCATAATGCTGGC nnnnnnnnnnnnnnnnen ssssssssssssssssx 27061 27078 21
1405549 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzzzzzzzzzzzzzz 27062 27079 23
1405552 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssssssssszzzzzz 27062 27079 23
1405553 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee ssssszzzzzzssssss 27062 27079 23
1545359 TCACTTTCATAATGCTGG nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssoooooooooooooss 27062 27079 23
1547773 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee zzooooooooooooozz 27062 27079 23
1549028 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzooooooooooozz 27062 27079 23
1549029 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzzzooooooooozz 27062 27079 23
1549030 TCACTTTCATAATGCTGG eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzzzzzooooooozz 27062 27079 23
下表中經修飾之寡核苷酸全部由以下序列組成(5’至3’)：TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 23)。以下各表中列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (本文在上文描述) 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。
下表中經修飾之寡核苷酸之長度為18個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分或2’-NMA糖部分。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖模體，且各『n』表示2’-NMA糖模體。各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯、磷酸二酯核苷間鍵聯或甲磺醯胺基磷酸酯(MsP)核苷間鍵聯。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯模體提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯，且各『z』表示甲磺醯胺基磷酸酯(MsP)核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。下表中經修飾之寡核苷酸與連接至寡核苷酸之5’-OH的6-棕櫚醯胺基己基磷酸酯綴合基團綴合。綴合基團之結構為：
Figure 02_image040
。表 52 6- 棕櫚醯胺基己基磷酸酯綴合之具有混合 PO/PS 、 PO/MsP 或均勻 MsP 核苷間鍵聯之 MOE 及 NMA 修飾之寡核苷酸
化合物編號 糖模體(5’ 至3’) 核苷間鍵聯模體(5’ 至3’) SEQ ID No: 1 起始位點 SEQ ID No: 1 終止位點 SEQ ID No.
1545361 eeeeeeeeeeeeeeeeee ssoooooooooooooss 27062 27079 23
1545362 nnnnnnnnnnnnnnnnnn ssoooooooooooooss 27062 27079 23
1547772 eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzzzzzzzzzzzzzz 27062 27079 23
1547774 eeeeeeeeeeeeeeeeee zzooooooooooooozz 27062 27079 23
1549031 eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzooooooooooozz 27062 27079 23
1549032 eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzzzooooooooozz 27062 27079 23
1549033 eeeeeeeeeeeeeeeeee zzzzzzzzooooooozz 27062 27079 23
下表中經修飾之寡核苷酸全部由以下序列組成(5’至3’)：TCACTTTCATAATGCTGG (SEQ ID NO: 23)，起始位點為SEQ ID No: 1 (本文在上文描述)上之27062且終止位點為27079，其中「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’-核苷，且其中「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’-核苷。
下表中經修飾之寡核苷酸之長度為18個核苷。各經修飾之寡核苷酸之糖及核苷間鍵聯模體提供於序列及化學記法欄中，其中各下標『n』表示2’-NMA糖部分，各下標『[DMA]』表示2’-O-(N,N-二甲基)乙醯胺部分，各下標『[NEA]』表示2’-O-(N-乙基)乙醯胺部分，各下標『[NPA]』表示2’-O-(N-丙基)乙醯胺部分，各下標『[NcPA]』表示2’O-(N-環丙基)乙醯胺部分，各下標『[McPA]』表示2’-O-(N-環丙基甲基)乙醯胺部分，且各下標『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶，其中在胞嘧啶殘基(m C)之前的下標『m』表示5-甲基胞嘧啶。下表中表示之各糖之結構為：
Figure 02_image042
表 53 具有均勻 PS 核苷間鍵聯之 NMA 及 NMA 類似物修飾之寡核苷酸
化合物編號 序列及化學記法(5’ 至3’) SEQ ID No.
1355763 T[DMA]s m C[DMA]s Ans m C[DMA]s T[DMA]s T[DMA]s T[DMA]s m C[DMA]s Ans T[DMA]s Ans Ans T[DMA]s Gns m C[DMA]s T[DMA]s Gns Gn 23
1359463 T[NEA]s m C[NEA]s Ans m C[NEA]s T[NEA]s T[NEA]s T[NEA]s m C[NEA]s Ans T[NEA]s Ans Ans T[NEA]s Gns m C[NEA]s T[NEA]s Gns Gn 23
1358995 T[NPA]s m C[NPA]s Ans m C[NPA]s T[NPA]s T[NPA]s T[NPA]s m C[NPA]s Ans T[NPA]s Ans Ans T[NPA]s Gns m C[NPA]s T[NPA]s Gns Gn 23
1355776 T[NcPA]s m C[NcPA]s Ans m C[NcPA]s T[NcPA]s T[NcPA]s T[NcPA]s m C[NcPA]s Ans T[NcPA]s Ans Ans T[NcPA]s Gns m C[NcPA]s T[NcPA]s Gns Gn 23
1355777 T[McPA]s m C[McPA]s Ans m C[McPA]s T[McPA]s T[McPA]s T[McPA]s m C[McPA]s Ans T[McPA]s Ans Ans T[McPA]s Gns m C[McPA]s T[McPA]s Gns Gn 23
實例 11 ：在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，單一劑量 (35 µg)
基本上如上文在實例2中所述，測試了人類SMN2基因轉殖小鼠中上文所述之選定經修飾之寡核苷酸之活性。處理
將基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠以如下表中所指示之劑量接受經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。處理之後兩週，將小鼠處死，且自冠狀腦及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。在GraphPad Prism 7中，使用非線性迴歸4參數劑量反應曲線[ Y=底部 + (頂部-底部)/(1+ (10^logEC50 /X)^HillSlope)]計算外顯子包涵(外顯子7+ )之ED50 。RNA 分析
處理之後兩週，將小鼠處死，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。使用引子探針組hSMN2vd#4_LTS00216_MGB確定包括外顯子7 (外顯子7+ )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_Sumner68_PPS50481確定不包括外顯子7 (外顯子7- )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_LTS00935量測總SMN2 RNA水準。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。表 54 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
396443 35 3 0.6 3 0.5
1405549 35 1.6 0.9 1.2 0.9
1405552 35 3.2 0.6 2.1 0.7
1405553 35 2.4 0.7 1.7 0.8
表 55 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 N/A
396443 35 2.7 0.5 3 N/A
1405549 35 1.5 0.8 1.9 N/A
1547772 35 1.8 0.8 1.8 N/A
1547773 35 1.6 0.9 1.9 N/A
1547774 35 1.6 1 1.6 N/A
1549028 35 1.5 1 1.5 N/A
1549029 35 1.4 1 1.7 N/A
1549030 35 1.4 1 1.4 N/A
1549031 35 1.7 0.8 1.6 N/A
1549032 35 1.4† 0.9† 1.7† N/A
1549033 35 1.4 1 1.3 N/A
† 指示少於四個樣品可用實例 12 ：在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，單一劑量 (15 µg)
基本上如上文在實例2中所述，測試了人類SMN2基因轉殖小鼠中上文所述之選定經修飾之寡核苷酸之活性。處理
將基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠以如下表中所指示之劑量接受經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。處理之後兩週，將小鼠處死，且自冠狀腦及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。在GraphPad Prism 7中，使用非線性迴歸4參數劑量反應曲線[ Y=底部 + (頂部-底部)/(1+ (10^logEC50 /X)^HillSlope)]計算外顯子包涵(外顯子7+ )之ED50 。RNA 分析
處理之後兩週，將小鼠處死，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。使用引子探針組hSMN2vd#4_LTS00216_MGB確定包括外顯子7 (外顯子7+ )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_Sumner68_PPS50481確定不包括外顯子7 (外顯子7- )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_LTS00935量測總SMN2 RNA水準。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。表 56 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 脊髓
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 1 1
443305 15 3.4 0.4 3.3 0.3
1287723 15 3.9 0.3 3.3 0.3
1287724 15 4.2 0.2 3.7 0.2
1287727 15 4.5 0.2 3.4 0.2
實例 13 ：在基因轉殖小鼠中與人類 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之活性，多次劑量
基本上如上文在實例2中所述，測試了人類SMN2基因轉殖小鼠中上文所述之選定經修飾之寡核苷酸之活性。處理
將基因轉殖小鼠分組，各組4隻小鼠。各小鼠以如下表中所指示之多次劑量接受經修飾之寡核苷酸之單次ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。處理之後兩週，將小鼠處死，且自冠狀腦及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。在GraphPad Prism 7中，使用非線性迴歸4參數劑量反應曲線[ Y=底部 + (頂部-底部)/(1+ (10^logEC50 /X)^HillSlope)]計算外顯子包涵(外顯子7+ )之ED50 。RNA 分析
處理之後兩週，將小鼠處死，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於SMN2 RNA之即時qPCR分析。使用引子探針組hSMN2vd#4_LTS00216_MGB確定包括外顯子7 (外顯子7+ )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_Sumner68_PPS50481確定不包括外顯子7 (外顯子7- )之SMN2 RNA之量。使用引子探針組hSMN2_LTS00935量測總SMN2 RNA水準。結果呈正規化為SMN2水準的RNA水準相對於PBS對照的倍數變化來呈現。表 57 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 ED50 (µg) 脊髓 ED50 (µg)
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 - 1 1 -
396443 10 2.1 0.7    1.9 0.8   
   30 2.8 0.5 26 2.6 0.7 22
   100 3.2 0.3    2.8 0.4   
449320 10 1.2 1.0    1.2 1.2   
   30 1.5 1.0 ＞100 1.3 1.2 ＞100
   100 1.5 0.9    1.3 0.9   
1545361 10 1.4 1.0    1.2 1.1   
   30 1.8 1.1 ＞100 1.6 1.3 ＞100
   100 1.3 0.9    1.4 0.9   
443305 10 2.4 0.6    2.6 0.5   
   30 3.5 0.3 14 3.0 0.4 9
   100 3.7 0.1    3.3 0.1   
1545359 10 1.4 1.0    1.4 1.1   
   30 2.0 0.9 ＞100 1.7 1.1 ＞100
   100 2.3 0.6    1.7 0.8   
1545362 10 1.4 0.9    1.3 1.1   
   30 1.9 0.8 95 2.4 1.0 51
   100 2.7 0.5    2.6 0.6   
表 58 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 ED50 (µg) 脊髓 ED50 (µg)
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 - 1 1 -
1263789 3 1.5 0.9 35 1.6 0.8 16
10 1.9 0.8 2.2 0.6
30 2.7 0.6 2.9 0.5
100 3.8 0.3 3.5 0.3
300 4.3 0.2 3.9 0.2
1287703 3 1.5 0.7 43 1.5 0.8 28
10 1.6 0.7 2.0 0.7
30 2.7 0.5 2.6 0.5
100 3.7 0.3 3.2 0.4
300 4.0 0.2 3.5 0.2
1287717 3 1.4 0.8 31 1.4 0.9 30
10 1.7 0.7 1.8 0.7
30 3.1 0.4 2.4† 0.5†
100 3.8 0.3 3.3 0.3
300 4.3 0.2 3.8 0.2
1318768 3 1.3 0.8 49 1.2 0.8 32
10 1.8 0.7 1.8 0.8
30 2.4 0.6 2.4 0.6
100 3.5 0.3 3.3 0.4
300 4.1 0.2 3.9 0.2
1287731 3 1.5 0.8 29 1.5 1.0 13
10 2.0 0.6 2.4 0.6
30 2.7 0.4 3.2 0.4
100 4.3 0.2 3.8 0.2
300 4.2 0.1 3.7 0.1
1287735 3 1.7 0.7 22 1.5 0.8 15
10 2.4 0.6 2.2 0.6
30 3.0 0.3 3.1 0.3
100 4.0 0.2 3.5 0.2
300 4.2 0.1 3.9 0.1
1287745 3 1.5 0.7 35 1.4 0.8 13
10 2.0 0.6 2.4 0.6
30 2.9 0.4 3.2 0.4
100 3.7 0.2 3.6 0.2
300 3.7 0.2 3.8 0.2
396443 3 1.7 0.7 47 1.5 0.9 22
10 1.4 0.7 1.6 0.8
30 2.8 0.5 3.1 0.4
100 3.3 0.4 3.3 0.5
300 4.3 0.2 4.0 0.2
† 指示少於四個樣品可用表 59 異型接合基因轉殖小鼠中經修飾之寡核苷酸對人類 SMN2 RNA 剪接的影響
化合物編號 劑量(µg) 皮質 ED50 (µg) 脊髓 ED50 (µg)
外顯子7+ 外顯子7- 外顯子7+ 外顯子7-
PBS - 1 1 - 1 1 -
396443 3 1.1 0.9 39 1.2 0.9 33
30 2.0 0.6 2.3 0.5
100 2.3 0.4 2.7 0.3
443305 3 1.4 0.7 13 1.6 0.7 10
30 2.4 0.3 3.0 0.2
100 2.9 0.2 3.1 0.2
1355763 3 1.1 0.8 54 1.1 0.8 45
30 1.7 0.6 2.1 0.5
100 2.4 0.4 2.6 0.3
1359463 3 1.3 0.8 18 1.3 0.7 19
30 2.3 0.3 2.7 0.3
100 2.9 0.2 2.7 0.2
1358995 3 1.2 0.8 45 1.0 0.8 59
30 2.0 0.4 1.8 0.4
100 2.2 0.4 2.6 0.3
1355776 3 1.1 0.8 25 1.3 0.7 24
30 2.2 0.4 2.4 0.4
100 2.6 0.3 2.9 0.3
1355777 3 1.0 0.9 107 0.9 0.9 72
30 1.6 0.7 1.8 0.6
100 1.7 0.5 2.2 0.6
實例 15 ：在野生型小鼠中與 SMN2 互補的經修飾之寡核苷酸之耐受性
在野生型雌性C57/Bl6小鼠中對上文所述之經修飾之寡核苷酸進行測試，以評估寡核苷酸之耐受性。野生型雌性C57/Bl6小鼠各自接受700 μg下表中所列之經修飾之寡核苷酸之單一ICV劑量。各處理組由4隻小鼠組成。一組4隻小鼠接受PBS作為各實驗之陰性對照(以下單獨的表中所識別)。在注射後3小時，根據七個不同準則評估小鼠。準則為(1)小鼠為聰明的、警覺的且具反應性；(2)在沒有刺激之情況下小鼠站立或弓起背部；(3)在沒有刺激之情況下小鼠顯示任何移動；(4)小鼠在其被提起之後展示向前之移動；(5)小鼠在其被提起之後展示任何移動；(6)小鼠對尾部夾捏作出反應；(7)均勻呼吸。對於7個準則中之各者，若小鼠滿足準則，則給予小鼠子得分0，且若其不滿足準則，則給予子得分1 (功能觀測實驗組合得分或FOB)。在評估所有7個準則之後，對各小鼠之得分求和且在各處理組內取平均值。結果呈現於下表中。表 60 在 700 μg 劑量下在小鼠中之耐受性得分
化合物編號 3 h FOB
PBS 0.00
1287723 2.00
1287724 1.00
1287727 2.00
無
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030

Claims (71)

  1. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16、17、18、19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20-50中任一者之至少15或至少16個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  2. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由17、18、19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20-27、29-30或32-50中任一者之至少15、至少16或至少17個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  3. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由18、19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20-27、30或33-50中任一者之至少15、至少16、或至少17或至少18個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  4. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由19或20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20、22、24-27、30、33-50中任一者之至少15、至少16、或至少17、至少18或至少19個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  5. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由20個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO: 20、22、25、27、35、39-46或49中任一者之至少15、至少16、或至少17、至少18、至少19或至少20個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  6. 如請求項1至5中任一項之寡聚化合物，其中當在該經修飾之寡核苷酸之整個核鹼基序列上量測時，該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與核鹼基序列SEQ ID NO: 1至少80%、85%、87.5%、88.2%、89%、89.4%、90%、93.7%、94%、94.7%、95%或100%互補。
  7. 如請求項1至6中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯模體(motif)(5’至3’)：sososssssssssssss、ssosssssssssssoss、ssosssssosssssoss、ssosssosssosssoss、soossssssssssooss、sooosssssssssooss、sooossssssssoooss、sssssssooosssssss、ssossssssssssssss、ssssossssssssssss、ssssssossssssssss、ssssssssossssssss、ssssssssssossssss、ssssssssssssossss、ssssssssssssssoss、sossssssssssssoss、sosssssssssosssss、sosssssssosssssss、sosssssosssssssss、sosssosssssssssss、ssssosssssssssoss、ssssssosssssssoss、ssssssssosssssoss、ssssssssssosssoss、ssssssssssssososs、soossssssssssssss、sssoossssssssssss、sssssoossssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss、sssssssssssoossss、sssssssssssssooss、sssssssoooossssss、ssoooosssssssssss、ssssoooosssssssss、ssssssssoooosssss、ssssssssssoooosss、sssssssssssooooss、ssssssooooossssss、ssssssoooooosssss、soooosssssssoooss、sssssooooooosssss、ssssssssssssssoss、ssssssssssssosss、sssssssssssssooss、ssssssssssssososs、sssssssssssosssss、sssssssssssososss、ssssssssssossosss、sssssssssosssssss、sssssssssosssosss、ssssssssosssssoss、ssssssssossssosss、sssssssosssssssss、sssssssoossssssss、sssssosssssssssss、sssosssssssssssss、sosssssssssssssss、sossssssossssssss、soossssssssssssss、ossssssssssssssssso、sssssssssssssssssoo、ssssssssssssssssoss、sssssssssssssssooss、ssssssssssssssososs、sssssssssosssssssss、sssssssssossssssoss、ssssssssoosssssssss、sosssssssssssssssss、sossssssssssssssoss、sosssssssosssssssss、sososssssssssssssss、soossssssssssssssss、sssssssssssssssssss、ssssssssssssssssso、ossssssssssssssssss、ssssssssssssososso、sssssssssssssssoss、sssssssssssssososs、ssssssssosssssssss、ssssssssossssssoss、sossssssssssssssss、sosssssssssssssoss、sossssssosssssssss、sosossssssssssssss、ssssssssssooooss、ssssssssoooossss、sssssssooossssss、ssssssoooossssss、ssssssooooosssss、sssssoooooosssss、sssssooooooossss、ssssoooossssssss、ssossssssssssoss、ssosssssossssoss、ssosssosssossoss、ssossossossososs、ssososososososss、ssoooossssssssss、soosssssssssooss、sooossssssssooss、sooosssssssoooss、soooossssssoooss、sssssssssooooss、ssssssssoooosss、ssssssooossssss、ssssssoooosssss、sssssooooosssss、sssssoooooossss、ssssoooosssssss、ssssooooooossss、sssosssosssosss、ssosssssssssoss、ssossossossosss、ssossossosososs、ssososososososs、ssoooosssssssss、soossssssssooss、sooosssssssooss、sooossssssoooss及soooosssssoooss；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
  8. 如請求項1至6中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯：sssssssssssssssxs及ssssssssssssssssx；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯且「x」表示甲氧基丙基膦酸酯核苷間鍵聯。
  9. 如請求項1至6中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯：zzzzzzzzzzzzzzzzz、ssssssssssszzzzzz、ssssszzzzzzssssss、zzooooooooooooozz、zzzzooooooooooozz、zzzzzzooooooooozz、zzzzzzzzooooooozz及ssoooooooooooooss；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯且「z」表示甲磺醯基胺基磷酸酯核苷間鍵聯。
  10. 如請求項1至9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：eeeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeee、nnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn、nennnnneneennnnnnn、nnnnnnnnnnnnenneen、nennnnneneenenneen、nnnnnnnnnnnnnnnnnne、nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、nnnnnnnnnnnnnnnnnny、nnnnnnnnnnnnnnnnnndd、nnnnnnnnnnnnnnnnnned、nnnnnnnnnnnnnnnnnnde、nnnnnnnnnnnnnnnnnnee、eeeeeeeeeeeeeeeeeedd、eeeeeeeeeeeeeeeeeeed、eeeeeeeeeeeeeeeeeede、nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、nnnnnnnnnnnnnnnnnne、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、keekeekeekeekeeeek、keeekeeekeeekeeeek、keeeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeeeek、eeekeekeekeekeekek、eeekeekeekeekeekee、eeeeeekeekeekeekee、eeeeeekeekeekeeeee、eeeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeeee、eeeeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeekeek、keekeekeekeekeeek、keeekeeekeeekeeek、keeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeeek、eekeekeekeekeekek、eekeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeeeee、eeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeee、eeeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeeee、eeeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeekeek、keekeekeekeekeek、keeekeeekeeekeek、keeeekeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeek、kekeekeekeekeeke、eekeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeee、eeeeekeeeeekeeee、keekeekeekeeeeee,eeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeee、eeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeekeek、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、eeeeeeeeeeeeeeeeeey、ennnnnnnnnnnnnnnnnn及ennnnnnnnnnnnnnnnnne；其中『e』表示2’-MOE糖部分，『n』表示2’-NMA糖部分，『k』表示cEt糖部分，『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分且『y』表示2’-OMe糖部分。
  11. 如請求項1至9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：nnnnnnnnnnnnnnnenn及nnnnnnnnnnnnnnnnen，其中『e』表示2’-MOE糖部分且『n』表示2’-NMA糖部分。
  12. 如請求項1至9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有糖模體(5’至3’) qqnqqqqqnqnnqnqqnn，其中各『n』表示2’-NMA糖部分，且各『q』獨立地選自2’-O-(N,N-二甲基)乙醯胺糖部分、2’-O-(N-乙基)乙醯胺糖部分、2’-O-(N-丙基)乙醯胺糖部分、2’O-(N-環丙基)乙醯胺糖部分及2’-O-(N-環丙基甲基)乙醯胺糖部分。
  13. 如請求項1至9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖部分。
  14. 如請求項13之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個雙環糖部分。
  15. 如請求項14之寡聚化合物，其中該雙環糖部分具有4’-2’橋，其中該4’-2’橋選自-CH2 -O-及-CH(CH3 )-O-。
  16. 如請求項13之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個非雙環經修飾之糖部分。
  17. 如請求項16之寡聚化合物，其中該非雙環經修飾之糖部分為2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分或2’-F糖部分中任一者。
  18. 如請求項13之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個糖替代物。
  19. 如請求項18之寡聚化合物，其中該糖替代物為N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、PNA、THP及F-HNA中任一者。
  20. 如請求項1至6及10至16中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
  21. 如請求項20之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
  22. 如請求項20或請求項21之寡聚化合物，其中該經修飾之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  23. 如請求項1至20或22中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
  24. 如請求項20、22或23之寡聚化合物，其中各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  25. 如請求項10至16中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sososssssssssssss、soossssssssssssss、sosssosssssssssss、sosssssosssssssss、sosssssssosssssss、sssoossssssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss及sssssssssssoossss；其中『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
  26. 如請求項1至25中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含經修飾之核鹼基。
  27. 如請求項26之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
  28. 如請求項1至27中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由16、17、18、19或20個連接之核苷組成。
  29. 如請求項1至28中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含1或2個非互補核鹼基。
  30. 如請求項1至29中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含1或2個可裂解部分。
  31. 如請求項30之寡聚化合物，其中該可裂解部分為磷酸二酯核苷間鍵聯。
  32. 如請求項1至31中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
  33. 如請求項1至32中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物為單股寡聚化合物。
  34. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：m Ces Aeo m Ces Teo Tes Tes m Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges m Ces Tes Ges Ges m Ce (SEQ ID NO: 21)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  35. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：Teo Tes m Ces Aes m Ces Tes Tes Tes m Ces Aes Tes Aes Aes Tes Ges m Ces Tes Ges Geo m Ce (SEQ ID NO: 22)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  36. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：Teo Tns m Cns Ans m Cns Tns Tns Tns m Cns Ans Tns Ans Ans Tns Gns m Cns Tns Gns Gno m Ce (SEQ ID NO: 22)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， n = 2’-NMA糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  37. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：m Cns Ano m Cns Tno Tns Tns m Cns Ans Tns Ans Ans Tns Gns m Cns Tns Gns Gns m Cn (SEQ ID NO: 21)，其中： A =腺嘌呤核鹼基，m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， n = 2’-NMA糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  38. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image001
    (SEQ ID NO: 21)，或其鹽。
  39. 如請求項38之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
  40. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image003
    (SEQ ID NO: 21)。
  41. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image005
    (SEQ ID NO: 22)，或其鹽。
  42. 如請求項41之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
  43. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image007
    (SEQ ID NO: 22)。
  44. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image009
    (SEQ ID NO: 22)，或其鹽。
  45. 如請求項44之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
  46. 一種對應於以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image011
    (SEQ ID NO: 22)。
  47. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image013
    (SEQ ID NO: 21)，或其鹽。
  48. 如請求項47之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
  49. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
    Figure 03_image015
    (SEQ ID NO: 21)。
  50. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至37中任一項之寡聚化合物或如請求項38至49中任一項之經修飾之寡核苷酸及醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。
  51. 如請求項50之醫藥組成物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑，且其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為人工CSF (aCSF)或PBS。
  52. 如請求項51之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由該經修飾之寡核苷酸及人工CSF (aCSF)組成。
  53. 如請求項52之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由該經修飾之寡核苷酸及PBS組成。
  54. 一種如請求項38至49中任一項之經修飾之寡核苷酸之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
  55. 如請求項54之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(S p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
  56. 如請求項54之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(R p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
  57. 如請求項54之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定經獨立選擇之立體化學組態的經修飾之寡核苷酸。
  58. 如請求項57之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸或在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態的經修飾之寡核苷酸。
  59. 如請求項57之掌性富集群體，其中該群體富集在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態且在各其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸。
  60. 如請求項57之掌性富集群體，其中該群體富集在5’至3’方向上具有呈S p、S p及R p組態的至少3個連續硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
  61. 一種如請求項38至49中任一項之經修飾之寡核苷酸之群體，其中該經修飾之寡核苷酸之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為隨機立構。
  62. 一種治療與SMN1或SMN2相關之疾病之方法，其包含向患有與SMN1或SMN2相關之疾病或處於發展該疾病之風險中的個體投與治療有效量如請求項50至53中任一項之醫藥組成物；及由此治療該與SMN1或SMN2相關之疾病。
  63. 如請求項62之方法，其中該與SMN1或SMN2相關之疾病為神經退化性疾病。
  64. 如請求項63之方法，其中該神經退化性疾病為脊髓性肌肉萎縮症(SMA)。
  65. 如請求項64之方法，其中該SMA為I型SMA、II型SMA、III型SMA或IV型SMA中任一者。
  66. 如請求項64或請求項65之方法，其中SMA之至少一個症狀經改善。
  67. 如請求項66之方法，其中該症狀為以下中任一者：肌力降低；不能直立就坐、站立及/或行走或能力降低；神經肌肉活動減少；一或多塊肌肉之電活動減少；呼吸作用降低；在沒有幫助之情況下不能吃、喝及/或呼吸或能力降低；體重減輕或體重增加減少；及/或存活率降低。
  68. 如請求項62至67中任一項之方法，其中向中樞神經系統或全身投與該醫藥組成物。
  69. 如請求項68之方法，其中向中樞神經系統且全身投與該醫藥組成物。
  70. 如請求項62至67中任一項之方法，其中以鞘內、全身、皮下或肌內中任一方式投與該醫藥組成物。
  71. 一種增加包括外顯子7之SMN2 RNA的方法，其包含將細胞、組織或器官與如請求項1至37中任一項之寡聚化合物、如請求項38至49中任一項之經修飾之寡核苷酸或如請求項50至53中任一項之醫藥組成物接觸。
TW110106883A 2020-02-28 2021-02-26 用於調節ｓｍｎ２之化合物及方法 TW202140787A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062983545P 2020-02-28 2020-02-28
US62/983,545 2020-02-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202140787A true TW202140787A (zh) 2021-11-01

Family

ID=77490338

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110106883A TW202140787A (zh) 2020-02-28 2021-02-26 用於調節ｓｍｎ２之化合物及方法

Country Status (19)

Country Link
US (2) US20220064638A1 (zh)
EP (1) EP4051292A4 (zh)
JP (2) JP7446443B2 (zh)
KR (1) KR20220148230A (zh)
CN (1) CN115279379A (zh)
AR (1) AR121446A1 (zh)
AU (1) AU2021225957A1 (zh)
BR (1) BR112022016238A2 (zh)
CA (1) CA3173034A1 (zh)
CL (2) CL2022002316A1 (zh)
CO (1) CO2022013679A2 (zh)
CR (1) CR20220485A (zh)
IL (1) IL295605A (zh)
JO (1) JOP20220201A1 (zh)
MX (1) MX2022010602A (zh)
PE (1) PE20221913A1 (zh)
TW (1) TW202140787A (zh)
UY (1) UY39105A (zh)
WO (1) WO2021174019A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10436802B2 (en) 2014-09-12 2019-10-08 Biogen Ma Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
CN115279379A (zh) 2020-02-28 2022-11-01 Ionis 制药公司 用于调节smn2的化合物和方法

Family Cites Families (312)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
EP0260032B1 (en) 1986-09-08 1994-01-26 Ajinomoto Co., Inc. Compounds for the cleavage at a specific position of RNA, oligomers employed for the formation of said compounds, and starting materials for the synthesis of said oligomers
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
WO1988010264A1 (en) 1987-06-24 1988-12-29 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology Nucleoside derivatives
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
DE3855864T2 (de) 1987-11-30 1997-09-25 Univ Iowa Res Found Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5176996A (en) 1988-12-20 1993-01-05 Baylor College Of Medicine Method for making synthetic oligonucleotides which bind specifically to target sites on duplex DNA molecules, by forming a colinear triplex, the synthetic oligonucleotides and methods of use
FR2645345A1 (fr) 1989-03-31 1990-10-05 Thomson Csf Procede de modulation dirigee de la composition ou du dopage de semi-conducteurs, notamment pour la realisation de composants electroniques monolithiques de type planar, utilisation et produits correspondants
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
DE69034150T2 (de) 1989-10-24 2005-08-25 Isis Pharmaceuticals, Inc., Carlsbad 2'-Modifizierte Oligonukleotide
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US6753423B1 (en) 1990-01-11 2004-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhanced biostability and altered biodistribution of oligonucleotides in mammals
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DE69032425T2 (de) 1990-05-11 1998-11-26 Microprobe Corp Teststreifen zum Eintauchen für Nukleinsäure-Hybridisierungsassays und Verfahren zur kovalenten Immobilisierung von Oligonucleotiden
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
WO1992002258A1 (en) 1990-07-27 1992-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
KR100211552B1 (ko) 1990-08-03 1999-08-02 디. 꼬쉬 유전자 발현 억제용 화합물 및 방법
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
US5596086A (en) 1990-09-20 1997-01-21 Gilead Sciences, Inc. Modified internucleoside linkages having one nitrogen and two carbon atoms
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
WO1993010820A1 (en) 1991-11-26 1993-06-10 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
EP0691968B1 (en) 1993-03-30 1997-07-16 Sanofi Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
CA2162361C (en) 1993-05-11 2008-10-21 Ryszard Kole Antisense oligonucleotides which combat aberrant splicing and methods of using the same
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
WO1995015972A1 (en) 1993-12-09 1995-06-15 Thomas Jefferson University Compounds and methods for site-directed mutations in eukaryotic cells
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
RU2170100C2 (ru) 1994-02-28 2001-07-10 Агритек Текнолоджиз, Лтд. Способ увеличения продуктивности птиц, слитый гетерологичный белок и способ его получения
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
EP0708178A1 (en) 1994-10-19 1996-04-24 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Survival motor neuron (SMN) gene: a gene for spinal muscular atrophy
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
US7034009B2 (en) 1995-10-26 2006-04-25 Sirna Therapeutics, Inc. Enzymatic nucleic acid-mediated treatment of ocular diseases or conditions related to levels of vascular endothelial growth factor receptor (VEGF-R)
WO1997020563A1 (en) 1995-11-22 1997-06-12 The Johns-Hopkins University Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US7875733B2 (en) 2003-09-18 2011-01-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising 4′-thionucleosides for use in gene modulation
CN1231675A (zh) 1996-09-26 1999-10-13 味之素株式会社 修饰的生理活性蛋白及含有该蛋白的药物组合物
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
CN1273476C (zh) 1997-09-12 2006-09-06 埃克西康有限公司 寡核苷酸类似物
US20010049436A1 (en) * 1998-04-01 2001-12-06 Wen-Qiang Zhou Mixed-backbone oligonucleotides containing pops blocks to obtain reduced phosphorothioate content
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
US6214986B1 (en) 1998-10-07 2001-04-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of bcl-x expression
US6172216B1 (en) 1998-10-07 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of BCL-X expression
ATE356824T1 (de) 1999-05-04 2007-04-15 Santaris Pharma As L-ribo-lna analoge
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6998259B1 (en) 1999-05-20 2006-02-14 Davisco Foods International Enzymatic treatment of whey proteins for the production of antihypertensive peptides and the resulting products
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
US6649411B2 (en) 1999-07-30 2003-11-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Methods of inhibiting cancer cells with ADNF III antisense oligonucleotides
US6770633B1 (en) 1999-10-26 2004-08-03 Immusol, Inc. Ribozyme therapy for the treatment of proliferative skin and eye diseases
US20030100505A1 (en) 1999-11-01 2003-05-29 Chiron Corporation Compositions and methods of therapy for IGF-I-responsive conditions
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
EP1133993A1 (en) 2000-03-10 2001-09-19 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Substances for the treatment of spinal muscular atrophy
US6962906B2 (en) 2000-03-14 2005-11-08 Active Motif Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use
WO2001085751A1 (en) 2000-05-09 2001-11-15 Reliable Biopharmaceutical, Inc. Polymeric compounds useful as prodrugs
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
WO2002038738A2 (en) 2000-11-09 2002-05-16 Cold Spring Harbor Laboratory Chimeric molecules to modulate gene expression
JP2004536027A (ja) 2000-12-01 2004-12-02 ジョーンズ・ホプキンス・ユニーバーシティー グリコシル化／ガラクトシル化ペプチドの接合体、二官能性リンカー、およびヌクレオチドのモノマー／ポリマー、および関連する組成物および使用方法
US6376508B1 (en) 2000-12-13 2002-04-23 Academia Sinica Treatments for spinal muscular atrophy
DK1399568T3 (da) 2001-02-01 2006-03-27 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til fremstilling af rekombinant trypsin
ES2260414T3 (es) 2001-03-16 2006-11-01 Suntory Limited Agentes reguladores del sistema autonomo y bebidas y alimentos dieteticos.
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
JP2003063992A (ja) 2001-08-28 2003-03-05 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Ｎ型Ｃａ２＋チャネル電流特異的増強剤
EP1440079B1 (en) 2001-10-29 2006-12-13 McGILL UNIVERSITY Acyclic linker-containing oligonucleotides and uses thereof
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
GB0219143D0 (en) 2002-08-16 2002-09-25 Univ Leicester Modified tailed oligonucleotides
AU2003260289A1 (en) 2002-09-11 2004-04-30 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
WO2004044132A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
EP1562971B1 (en) 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003295600A1 (en) 2002-11-14 2004-06-15 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
EP1620544B1 (en) 2003-04-17 2018-09-19 Alnylam Pharmaceuticals Inc. MODIFIED iRNA AGENTS
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
JPWO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2006-10-26 塩野義製薬株式会社 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
WO2004113867A2 (en) 2003-06-16 2004-12-29 University Of Massachusetts Exon analysis
US7427672B2 (en) 2003-08-28 2008-09-23 Takeshi Imanishi Artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type
US20050214288A1 (en) 2004-03-26 2005-09-29 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against Nogo receptor
AU2005272816B2 (en) 2004-08-10 2011-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides
WO2006031461A2 (en) 2004-09-09 2006-03-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
GB0425625D0 (en) 2004-11-22 2004-12-22 Royal College Of Surgeons Ie Treatment of disease
US7838657B2 (en) 2004-12-03 2010-11-23 University Of Massachusetts Spinal muscular atrophy (SMA) treatment via targeting of SMN2 splice site inhibitory sequences
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
JP2008527993A (ja) 2005-01-24 2008-07-31 アヴァリス・アクチエボラーグ 特異性及び送達の改善のためのｓｉＲＮＡ分子、ｓｈＲＮＡ分子又はアンチセンス分子及び機能的実体を含む複合体
ES2397113T3 (es) 2005-06-23 2013-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Composiciones y procedimientos para modular el corte y empalme de SMN2
CN102908630B (zh) 2006-01-27 2014-11-19 Isis制药公司 6-修饰的双环核酸类似物
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
EP2066684B1 (en) 2006-05-11 2012-07-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2008022309A2 (en) 2006-08-18 2008-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
EP2410054B2 (en) 2006-10-18 2019-12-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
WO2008101157A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
WO2008098788A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Receptor and antigen targeted prodrug
US8877917B2 (en) 2007-04-23 2014-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of RNA interference agents
US8278425B2 (en) 2007-05-30 2012-10-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
DK2176280T4 (en) 2007-07-05 2015-07-20 Isis Pharmaceuticals Inc 6-Disubstituerede bicykliske nukleinsyreanaloge
CN101790385A (zh) 2007-07-12 2010-07-28 普罗森那技术公司 用于使化合物靶向多种选定器官、组织或肿瘤细胞的分子
ES2439591T3 (es) 2007-08-15 2014-01-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácido nucleico de tetrahidropirano
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
MX2010005909A (es) 2007-11-30 2010-06-23 Novartis Ag Combinacion de inhibidores de fosfatasa de proteina tirosina y hormona de crecimiento humana para el tratamiento de atrofia muscular y trastornos relacionados.
US20090247608A1 (en) 2007-12-04 2009-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting Lipids
MX2010008394A (es) 2008-01-31 2010-11-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Metodos optimizados para administracion de arndc focalizando el gen pcsk9.
EP2265627A2 (en) 2008-02-07 2010-12-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
WO2009120878A2 (en) 2008-03-26 2009-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
WO2009120700A2 (en) 2008-03-26 2009-10-01 Families Of Spinal Muscular Atrophy Inhibition of dcps
JP5788312B2 (ja) 2008-04-11 2015-09-30 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
JP2012513953A (ja) 2008-09-23 2012-06-21 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド 付加環化を用いたモノマーおよびオリゴヌクレオチドの化学修飾
WO2010036698A1 (en) 2008-09-24 2010-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
KR102264822B1 (ko) 2008-11-10 2021-06-14 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물
US9156037B2 (en) 2009-01-15 2015-10-13 Children's Medical Center Corporation Microfluidic device and uses thereof
US20120101148A1 (en) 2009-01-29 2012-04-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. lipid formulation
US20120021515A1 (en) * 2009-02-06 2012-01-26 Swayze Eric E Oligomeric compounds and methods
PL2417257T3 (pl) 2009-04-10 2016-11-30 Antysensowne oligonukleotydy tricyklo-dna, kompozycje i sposoby leczenia choroby
WO2010120820A1 (en) 2009-04-13 2010-10-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of smn2 splicing
CA3042927C (en) 2009-05-05 2022-05-17 Arbutus Biopharma Corporation Lipid compositions for the delivery of therapeutic agents
EA028860B1 (ru) 2009-06-10 2018-01-31 Арбутус Биофарма Корпорэйшн Улучшенная липидная композиция
WO2010148013A2 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
RU2566724C9 (ru) 2009-06-17 2019-03-12 Байоджен Ma Инк. Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011032109A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Sma Foundation Biomarkers for spinal muscular atrophy
TWI458493B (zh) 2009-09-25 2014-11-01 Iner Aec Executive Yuan 新穎肝標靶藥劑與合成方法
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
US8183002B2 (en) 2009-12-03 2012-05-22 Abbott Laboratories Autoantibody enhanced immunoassays and kits
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
JP6137834B2 (ja) 2010-02-24 2017-05-31 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ｓｉＲＮＡの標的化送達のための組成物
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
US8349308B2 (en) 2010-03-26 2013-01-08 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
US10913767B2 (en) 2010-04-22 2021-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
US8802642B2 (en) 2010-04-28 2014-08-12 Iowa State University Research Foundation, Inc. Spinal muscular atrophy treatment via targeting SMN2 catalytic core
NZ603339A (en) 2010-04-29 2015-01-30 Isis Pharmaceuticals Inc Modulation of transthyretin expression
CA2799501C (en) 2010-05-28 2022-02-15 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
EP2582397A4 (en) 2010-06-15 2014-10-29 Isis Pharmaceuticals Inc COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING THE INTERACTION BETWEEN PROTEINS AND TARGET NUCLEIC ACIDS
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
EP3031920B1 (en) 2010-07-19 2019-08-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of dystrophia myotonica-protein kinase (dmpk) expression
JP2013541334A (ja) 2010-09-15 2013-11-14 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド 修飾されたｉＲＮＡ剤
US10653713B2 (en) 2010-10-06 2020-05-19 Medtronic, Inc. Methods for distributing agents to areas of brain
WO2012058462A2 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
EP2640400A4 (en) 2010-11-19 2016-01-20 Sirna Therapeutics Inc POLYMERIC POLYMERS (AMIDE) FOR THE ADMINISTRATION OF OLIGONUCLEOTIDES
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
WO2012083046A2 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Arrowhead Research Corporation Galactose cluster-pharmacokinetic modulator targeting moiety for sirna
BR112013016761B1 (pt) 2010-12-29 2021-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de um composto, composto e composição farmacêutica
EP3067421B1 (en) 2011-02-08 2018-10-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2012138487A2 (en) * 2011-04-07 2012-10-11 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Oligonucleotide modulation of splicing
US9161948B2 (en) 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
CA3092114A1 (en) 2011-05-05 2012-11-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
CA3191066A1 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) genes
US20140357558A1 (en) * 2011-06-24 2014-12-04 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of spinal muscular atrophy
DK2732289T3 (en) 2011-07-13 2018-05-22 Acumen Pharmaceuticals Inc ANTIBODIES, KIT AND IN VITRO METHOD FOR DETECTING BETA AMYLOID OLIGOMERS
KR20140051357A (ko) 2011-08-26 2014-04-30 애로우헤드 리서치 코오포레이션 Ｉｎ Ｖｉｖｏ 핵산 전달용 폴리(비닐 에스테르) 고분자
EP3640332A1 (en) 2011-08-29 2020-04-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
PT2581448E (pt) 2011-10-13 2015-05-21 Institut National De La Santé Et De La Rech Médicale (Inserm) Dna triciclo-fosforotioato
SG189598A1 (en) * 2011-11-03 2013-05-31 Singapore Health Serv Pte Ltd Antisense oligonucleotides for modulating survival motor neuron 2 (smn2) splicing
BR112014011018A2 (pt) 2011-11-11 2017-05-02 Santaris Pharma As compostos para modulação de splining de smn2
IN2014CN03463A (zh) 2011-11-18 2015-10-09 Alnylam Pharmaceuticals Inc
US9944926B2 (en) * 2011-11-30 2018-04-17 Sarepta Therapeutics, Inc. Induced exon inclusion in spinal muscle atrophy
US9725716B2 (en) 2011-12-06 2017-08-08 Ohio State Innovation Foundation and Research Institute at Nationwide Children's Hospital Non-ionic, low osmolar contrast agents for delivery of antisense oligonucleotides and treatment of disease
SG10201609188WA (en) 2012-02-10 2016-12-29 Ptc Therapeutics Inc Compounds for treating spinal muscular atrophy
EP3336189A1 (en) 2012-04-20 2018-06-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
TWI595885B (zh) 2012-05-02 2017-08-21 喜納製藥公司 包含四ｇａｌｎａｃ之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法
EP3453762B1 (en) 2012-05-02 2021-04-21 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
US10837014B2 (en) 2012-05-16 2020-11-17 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for modulating SMN gene family expression
EP2850186B1 (en) 2012-05-16 2018-12-19 Translate Bio MA, Inc. Compositions and methods for modulating smn gene family expression
WO2013188881A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 President And Fellows Of Harvard College Compounds, compositions and methods for treating or preventing neurodegenerative disorders
WO2014016830A1 (en) 2012-07-25 2014-01-30 Mapi Pharma Ltd. Process and intermediates for the preparation of abiraterone acetate
EP2906699A4 (en) 2012-10-11 2016-06-08 Ionis Pharmaceuticals Inc OLIGOMER COMPOUNDS WITH BICYCLIC NUCLEOSIDES AND USES THEREOF
US20160138014A1 (en) 2012-10-12 2016-05-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds and uses thereof
AU2013346767B2 (en) 2012-11-15 2019-04-11 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide conjugates
WO2014110291A1 (en) 2013-01-09 2014-07-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject
US9856474B2 (en) 2013-01-16 2018-01-02 Iowa State University Research Foundation, Inc. Deep intronic target for splicing correction on spinal muscular atrophy gene
AU2014236728B2 (en) 2013-03-15 2018-09-13 Amgen Inc. Method of treating metabolic disorders using PLA2G12A polypeptides and PLA2G12A mutant polypeptides
WO2014169243A2 (en) 2013-04-12 2014-10-16 The Curators Of The University Of Missouri Smn2 element 1 antisense compositions and methods and uses thereof
US10821154B2 (en) 2013-05-01 2020-11-03 Genzyme Corporation Compositions and methods for treating spinal muscular atrophy
NZ631552A (en) 2013-05-01 2017-02-24 Ionis Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for modulating hbv expression
US20140367278A1 (en) 2013-06-12 2014-12-18 PharmOptima, LLC Methods for Detecting Survival Motor Neuron (SMN) Protein in Whole Blood or Cerebral Spinal Fluid
US9988626B2 (en) 2013-07-29 2018-06-05 Universität Zu Köln Neurocalcin delta inhibitors and therapeutic and non-therapeutic uses thereof
JP2016531570A (ja) 2013-08-16 2016-10-13 ラナ セラピューティクス インコーポレイテッド ユークロマチン領域を標的とするオリゴヌクレオチド
EP3044317A1 (en) 2013-09-13 2016-07-20 The University Of Western Australia Antisense oligomers and methods for treating smn-related pathologies
WO2015051283A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis
WO2015106128A2 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED RNAi AGENTS
ES2932304T3 (es) * 2014-04-17 2023-01-17 Biogen Ma Inc Composiciones y métodos para la modulación del empalme de SMN2 en un sujeto
WO2015168172A1 (en) * 2014-04-28 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified oligomeric compounds
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
US10436802B2 (en) * 2014-09-12 2019-10-08 Biogen Ma Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
WO2016164896A2 (en) 2015-04-10 2016-10-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of smn expression
EP3341480A1 (en) 2015-08-28 2018-07-04 Sarepta Therapeutics, Inc. Modified antisense oligomers for exon inclusion in spinal muscular atrophy
WO2017053995A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
US20180312839A1 (en) 2015-10-26 2018-11-01 Translate Bio Ma, Inc. Methods and compositions for increasing smn expression
BR112018075667B1 (pt) 2016-06-14 2024-02-20 Biogen Ma, Inc Métodos para separar um oligonucleotídeo alvo de uma mistura contendo o oligonucleotídeo alvo e uma impureza relacionada com o produto
WO2017218884A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Combinations for the modulation of smn expression
EP3475292A1 (en) 2016-06-24 2019-05-01 Biogen MA Inc. Synthesis of thiolated oligonucleotides without a capping step
IL301091A (en) 2016-07-05 2023-05-01 Biomarin Tech Bv Oligonucleotides containing a bicyclic skeleton and their use for the treatment of genetic diseases
EP3484524B1 (en) * 2016-07-15 2022-11-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of smn2
EP3485015A4 (en) 2016-07-15 2020-07-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS OF MODULATION OF DYSTROPHINE TRANSCRIPT
AU2017297624B2 (en) 2016-07-15 2023-11-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of transcript processing
WO2018055577A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Synthena Ag Mixed tricyclo-dna, 2'-modified rna oligonucleotide compositions and uses thereof
WO2018150196A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Oxford University Innovation Limited Cell penetrating peptides modified by glycosylation
WO2018193428A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Synthena Ag Modified oligomeric compounds comprising tricyclo-dna nucleosides and uses thereof
EP3406719A1 (en) 2017-05-24 2018-11-28 Universität zu Köln Calcineurin b homologous protein 1 inhibitors and therapeutic and non-therapeutic uses thereof
US11596646B2 (en) * 2017-10-12 2023-03-07 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
GB2610100B (en) * 2017-10-23 2023-08-16 Stoke Therapeutics Inc Antisense oligomers for treatment of non-sense mediated RNA decay based conditions and diseases
US20210002640A1 (en) 2018-02-28 2021-01-07 Exicure, Inc. Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors
WO2019168558A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Exicure, Inc. Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors
EP4110924A4 (en) * 2020-02-28 2024-03-13 Ionis Pharmaceuticals Inc COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING PRE-MRNA SPLICEING
CN115279379A (zh) * 2020-02-28 2022-11-01 Ionis 制药公司 用于调节smn2的化合物和方法

Also Published As

Publication number Publication date
CO2022013679A2 (es) 2022-10-11
EP4051292A1 (en) 2022-09-07
CL2023002935A1 (es) 2024-02-23
JOP20220201A1 (ar) 2023-01-30
UY39105A (es) 2021-08-31
JP2023511895A (ja) 2023-03-23
CA3173034A1 (en) 2021-09-02
KR20220148230A (ko) 2022-11-04
EP4051292A4 (en) 2023-12-06
JP2024059839A (ja) 2024-05-01
CN115279379A (zh) 2022-11-01
CR20220485A (es) 2022-11-10
CL2022002316A1 (es) 2023-04-21
WO2021174019A1 (en) 2021-09-02
PE20221913A1 (es) 2022-12-23
BR112022016238A2 (pt) 2022-10-11
MX2022010602A (es) 2022-09-09
AU2021225957A1 (en) 2022-09-08
JP7446443B2 (ja) 2024-03-08
US11299737B1 (en) 2022-04-12
US20220064638A1 (en) 2022-03-03
IL295605A (en) 2022-10-01
AR121446A1 (es) 2022-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI833770B (zh) 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法
US11053498B2 (en) Compounds and methods for reducing Tau expression
CN112189053B (zh) 用于减少atxn3表达的化合物和方法
TW201819397A (zh) 減少atxn3表現之化合物及方法
TW202102675A (zh) 降低kcnt1 表現之化合物及方法
CN113286886A (zh) 用于减少朊病毒表达的化合物和方法
WO2021174031A2 (en) Compounds and methods for modulating splicing of pre-mrna
JP2024059839A (ja) Ｓｍｎ２を調節するための化合物及び方法
TW202111123A (zh) 用於減少fus 表現之化合物及方法
US20190211332A1 (en) Compounds and methods for reducing tau expression
TW202140788A (zh) 用於調節ｓｃｎ１ａ表現之化合物及方法
TW202043251A (zh) 用於調節ube3a-ats 之化合物及方法
CN116322707A (zh) 用于调节scn2a的化合物和方法
CN116940683A (zh) 用于调节亨廷顿蛋白的化合物和方法
CN116096899A (zh) 调节plp1的化合物和方法
AU2022334739A1 (en) Compounds and methods for modulating scn1a expression
WO2023122666A2 (en) Compounds and methods for modulating glycogen synthase 1
WO2022066956A1 (en) Compounds and methods for reducing apoe expression
TW202020154A (zh) 用於減少atxn2表現之化合物及方法