以下製備及實例說明本發明而不以任何方式對其進行限制。
通用程序
所有獲自商業來源之試劑均未經進一步純化即使用。無水溶劑獲自商業來源且未經進一步乾燥即使用。
在具有預裝填矽膠濾筒(Redi
Sep ® R f
Gold High Performance)之ISCO CombiFlash Rf 200i上進行急驟層析。
使用塗佈有Merck Type 60 F254矽膠之5 × 10 cm板進行薄層層析。
在Anton Parr MonoWave或CEM Discover®儀器中進行微波加熱。
除非另外規定,否則在具有以118 mL min
-1
之流動速率操作之Gemini-NX
®
10 µM C18, 250 mm × 50 mm內徑管柱及UV二極體陣列偵測(210 - 400 nm)之Armen Spot液相層析系統上使用25 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑進行製備型HPLC純化。
分析型LC-MS:本發明化合物藉由在以正或負離子電噴霧電離模式操作之具有Agilent 6140四極桿LC/MS之Agilent HP1200上之高效液相層析-質譜分析(HPLC-MS)表徵。分子量掃描範圍為100至1350。在210 nm及254 nm進行並行UV偵測。樣品在5 µL迴路注射下以於ACN或THF/H
2
O (1:1)中之1 mM溶液形式供應。LCMS分析在兩個儀器上進行,其中一者用鹼性溶離劑操作,且另一者用酸性溶離劑操作。
鹼性LCMS:Gemini-NX, 3 µm, C18, 50 mm × 3.00 mm內徑管柱在23℃下,在1 mL min
-1
流動速率下使用5 mM碳酸氫銨(溶劑A)及乙腈(溶劑B),以自100%溶劑A起始且在100%溶劑B結束之梯度經各種/特定持續時間。
酸性LCMS:ZORBAX Eclipse XDB-C18, 1.8 µm, 50 mm × 4.6 mm內徑管柱在40℃下,在1 mL min
-1
之流動速率下使用0.02% v/v甲酸水溶液(溶劑A)及0.02% v/v甲酸/乙腈(溶劑B),以自100%溶劑A起始且在100%溶劑B結束之梯度經各種/特定持續時間。
在Bruker Avance III 500 MHz光譜儀及Bruker Avance III 400 MHz光譜儀上,使用DMSO-d
6
或CDCl
3
作為溶劑進行
1
H-NMR量測。
1
H NMR資料呈使用溶劑之殘餘峰(DMSO-d
6
之2.50 ppm及CDCl
3
之7.26 ppm)作為內標以百萬分率(ppm)給出之δ值形式。分裂圖案稱為:s (單峰)、d (二重峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、quint (五重峰)、m (多重峰)、br s (寬單峰)、dd (二重峰之二重峰)、td (二重峰之三重峰)、dt (三重峰之二重峰)、ddd (二重峰之二重峰之二重峰)。
在Agilent 6850氣相層析儀及Agilent 5975C質譜儀上,使用具有0.25 µm HP-5MS塗層之15 m × 0.25 mm管柱及作為載氣之氦氣進行組合氣相層析及低解析度質譜分析。離子源:EI
+
, 70 eV, 230℃,四極桿:150℃,介面:300℃。
在Shimadzu IT-TOF上測定HRMS,離子源溫度200℃,ESI +/-,電離電壓:(+-)4.5 kV。質量解析度最小值10000。
在Thermo Flash EA 1112元素分析儀上進行元素分析。
縮寫清單 縮寫 名稱
Ac 乙醯基
AIBN 2-[(1-氰基-1-甲基-乙基)偶氮]-2-甲基-丙腈
AtaPhos 雙(二-第三丁基(4-二甲胺基苯基)膦)二氯鈀(II)
DCM 二氯甲烷
DIPA 二異丙胺
DMF 二甲基甲醯胺
DSC 碳酸
N
,
N
'-二丁二醯亞胺酯
eq. 當量
Et 乙基
HMDS 六甲基二矽氮烷
i
Pr 異丙基
Me 甲基
MeCN 乙腈
NBS
N
-溴代丁二醯亞胺
n
Bu 正丁基
Ph 苯基
PPh
3
三苯基膦
r.t. 室溫
t
Bu 第三丁基
t
BuXPhos 2-二(第三丁基膦基)-2',4',6'-三異丙基聯苯
TEA 三乙胺
THF 四氫呋喃
通用程序 I 步驟 A
將1 eq.
製備物 1
、2 eq.適當
酸衍生物、2 eq.碳酸銫及0.1 eq.二氯化雙(PPh
3
)鈀(II)置於燒瓶中。添加1,4-二噁烷及水之混合物(4:1,10 mL/mmol)且在60℃下在氬氣氛圍下攪拌所得混合物,直至觀察到無進一步轉化。反應混合物用鹽水稀釋且用2M HCl水溶液設定至pH 6,且隨後用DCM萃取。減壓蒸發來自經分離有機相之揮發物,且藉由急驟層析使用DCM及甲醇作為溶離劑純化粗產物。
步驟 B
將所獲得之中間物溶解於二噁烷-水1:1 (10 mL/mmol)中且添加10 eq. LiOH × H
2
O。在室溫下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用鹽水稀釋,用2M HCl水溶液中和,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體。
通用程序 II 步驟 A
將1 eq.
製備物 2
或1 eq.
製備物 3
、2 eq.適當醇(除非另外陳述)及2 eq. PPh
3
溶解於無水甲苯(對於苯酚,0.2M)中。添加2 eq.偶氮二甲酸二第三丁酯且在60℃下在氮氣下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。減壓蒸發揮發物且經由急驟層析使用乙酸乙酯及甲醇作為溶離劑純化粗中間物。
步驟 B
將所獲得之中間物溶解於二噁烷-水1:1 (10 mL/mmol)中且添加10 eq. LiOH × H
2
O。在室溫下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用鹽水稀釋,用2M HCl水溶液中和且用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體。
通用程序 III 步驟 A
向1 eq.
製備物 5
於無水乙腈(15 mL/mmol)中之溶液中添加1.5 eq. DSC及3 eq. TEA且在室溫下攪拌混合物一小時。向所得混合物中添加2 eq.適當胺且在室溫下進一步攪拌1小時。將反應混合物直接注射於急驟二氧化矽管柱(160 g/mmol,用EtOAc調整)上且使用EtOAc及MeOH (含有1.2% NH
3
)作為溶離劑層析。
步驟 B
將步驟A之產物溶解於二噁烷-水(1:1,10 mL/mmol)中且添加10 eq. LiOH × H
2
O。在室溫下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用2M HCl中和且直接注射於RP18管柱上並使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑層析。收集較晚溶離之非對映異構體。
通用程序 IV 步驟 A
在N
2
氛圍下,將1 eq.適當苯酚衍生物、2 eq.適當醇衍生物及2 eq. PPh
3
溶解於無水甲苯(對於苯酚,0.2M)中,接著添加2 eq.偶氮二甲酸二第三丁酯且在60℃下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。減壓濃縮反應混合物且經由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化殘餘物。
步驟 B
將1 eq.步驟A中獲得之苯酚衍生物溶解於無水THF中。在氬氣下,將溶液冷卻至-78℃且隨後逐滴添加1.2 eq.
n
BuLi (1.6M於己烷中)。在15分鐘之後,逐滴添加1.5 eq. 2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
。移除冷卻浴且使混合物緩慢升溫至室溫。接著,混合物用NH
4
Cl溶液淬滅且用EtOAc萃取。減壓濃縮合併之有機層且經由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物。
通用程序 V
在N
2
氛圍下在60℃下攪拌含1 eq.
製備物 1
、3 eq.適當
酸衍生物、4.5 eq.碳酸銫及0.15 eq.二氯化雙(PPh
3
)鈀(II)之二噁烷(30 mL/mmol)及水(15 mL/mmol),直至觀察到無進一步轉化。將反應混合物冷卻至室溫,接著添加20 eq. LiOH × H
2
O (832 mg/mmol)且攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。用鹽水稀釋反應混合物,使用1M HCl調整至pH 6,接著過濾混合物且用二噁烷洗滌沈澱物。減壓蒸發濾液之揮發物且經由製備型逆相層析使用25 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化殘餘物。
製備物 1 : (2R
)-2-[5-[3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[(2- 氯嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯 步驟 A : 6- 碘 -3
H
- 噻吩并 [2,3-
d
] 嘧啶 -4- 酮
向裝備有機械攪拌器、溫度計及回流冷凝器之2 L圓底燒瓶中裝入433 mL乙酸、13 mL硫酸及87 mL水之溶液。將69.3 g 3
H
-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-酮(0.46 mol)、51.9 g過碘酸(0.23 mol)及104 g碘(0.41 mol)添加至攪拌溶液中,加熱至60℃持續1小時。所得懸浮液冷卻至室溫,濾出,用乙酸與水(5:1)之混合物洗滌且隨後用乙醚洗滌。風乾所得米色結晶固體,得到6-碘-3
H
-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-酮。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 12.57 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.65 (s, 1H)
13
C NMR (125 MHz, DMSO-d
6
) δ 168.3, 155.9, 146.1, 130.8, 126.7, 76.4
步驟 B : 4- 氯 -6- 碘 - 噻吩并 [2,3-
d
] 嘧啶
向裝備有機械攪拌器、溫度計、回流冷凝器及CaCl
2
管之1 L圓底燒瓶中裝入113 mL氧氯化磷及35 mL
N,N
-二甲基苯胺(0.29 mol)。將75.54 g 6-碘-3
H
-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-酮(來自步驟A) (0.27 mol)在5分鐘期間逐份添加至混合物中。在105℃下攪拌反應混合物1小時。所得懸浮液冷卻至10℃,過濾且用己烷洗滌。將粗產物添加至冰水中且攪拌10分鐘,濾出,用冷水、乙醚洗滌並風乾,得到呈米色結晶固體狀之4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.89 (s, 1H), 7.98 (s, 1H)
13
C NMR (125 MHz, DMSO-d
6
) δ 172.3, 152.9, 151.9, 131.1, 128.9, 86.5
步驟 C : 5 - 溴 -4- 氯 -6- 碘 - 噻吩并 [2,3-d] 嘧啶
向裝備有機械攪拌器、溫度計及起泡器之2 L圓底燒瓶中裝入600 mL MeCN。添加84.9 g 4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶(來自步驟B) (0.29 mol)、50.9 g NBS (0.29 mol)及8.5 mL四氟硼酸乙醚複合物。在室溫下攪拌反應混合物16小時。再將22.9 g (0.12 mol) NBS分三份添加至混合物中。在懸浮液冷卻至0℃且再攪拌1小時之後,濾出沈澱物,用乙腈洗滌且風乾,得到呈米色結晶固體狀之5-溴-4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.88 (s, 1H)
13
C NMR (100 MHz, DMSO-d
6
) δ 171.3, 152.9, 152.3, 126.0, 112.4, 92.9
步驟 D
:
5- 溴 -4- 氯 -6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d] 嘧啶
將75.08 g 5-溴-4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-
d
]嘧啶(來自步驟C) (200 mmol)、53.63 g 2-(4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
(240 mmol)、130 g碳酸銫(400 mmol)、2.245 g Pd(OAc)
2
(10 mmol)及8.50 g
t
BuXPhos (20 mmol)置於2 L燒瓶中。添加600 mL THF及200 mL水,且隨後在70℃下在氬氣氛圍下攪拌隔夜。蒸發THF,且隨後藉由過濾收集產物。粗產物在250 mL MeCN經音波處理且再次過濾。接著,5-溴-4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-
d
]嘧啶自EtOH/THF (2:1)結晶。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
): 9.02 (s, 1H), 7.80-7.77 (m, 2H), 7.47-7.43 (m, 2H)
步驟 E :乙酸 [2-( 溴甲基 ) 苯基 ] 酯
將60.07 g乙酸2-甲基苯基酯(400 mmol)及106.8 g NBS (600 mmol)置於1 L燒瓶中。添加500 mL環己烷,且隨後在強力攪拌下經30分鐘添加3.284 g AIBN (20 mmol)。在80℃下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化,接著冷卻至室溫。濾出沈澱物且用環己烷洗滌。減壓濃縮母液,且粗產物未經進一步純化即用於步驟B。
步驟 F : 2- 乙醯氧基 -3-(2- 羥苯基 ) 丙酸乙酯
將23.10 g無水LiCl (545 mmol)及65.36 g無水ZnCl
2
(479.6 mmol)置於2 L燒瓶中,接著在160℃下在0.1 mmHg下乾燥1小時。在氬氣氛圍下冷卻至室溫後,添加26.49 g鎂屑(1090 mmol)及1 L預先冷卻(0℃)之無水THF。將所得混合物浸入至冰浴中,且隨後攪拌30分鐘。
將100 g 乙酸[2-(溴甲基)苯基]酯(來自步驟E) (~ 436 mmol)溶解於120 mL無水THF中且經15分鐘添加至預先冷卻之無機物中。在試劑添加之後,攪拌所得混合物45分鐘,同時保持溫度在0-5℃之間。接著,經5分鐘添加64.82 mL 2-側氧基乙酸乙酯(654 mmol,50%於甲苯中)且再攪拌所得混合物15分鐘。
藉由過濾自混合物中移除殘餘無機物,且接著將500 mL MeOH添加至濾液中。攪拌此混合物,直至分子內乙醯基自酚氧遷移至烷基氧完成。向混合物中添加30 mL乙酸,接著減壓蒸發揮發物。添加350 mL水至殘餘物中且用EtOAc萃取。合併之有機層用飽和NaHCO
3
及鹽水洗滌,且隨後經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓蒸發。向殘餘物中添加100 mL己烷且在0℃下攪拌30分鐘。所形成之白色晶體藉由過濾收集且用己烷洗滌,得到2-乙醯氧基-3-(2-羥苯基)乙酯-(外消旋)。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 9.53 (s, 1H), 7.06 (t, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.71 (t, 1H), 5.10 (dd, 1H), 4.05 (q, 2H), 3.06 (dd, 1H), 2.94 (dd, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.09 (t, 3H)
步驟 G : (2
R
)-2- 乙醯氧基 -3-(2- 羥苯基 ) 丙酸乙酯及 (2
S
)-2- 乙醯氧基 -3-(2- 羥苯基 ) 丙酸乙酯
經由對掌性層析分離2-乙醯氧基-3-(2-羥苯基)丙酸乙酯之對映異構體(來自步驟F).
管柱 :
OD;
溶離劑 :
庚烷/EtOH;收集較早溶離之對映異構體作為(2
S
)-2-乙醯氧基-3-(2-羥苯基)丙酸乙酯(99.8% ee)且收集較晚溶離之對映異構體作為(2
R
)-2-乙醯氧基-3-(2-羥苯基)丙酸乙酯(99.9% ee)。
步驟 H : (4- 溴 -2- 氯 - 苯氧基 )- 三甲基 - 矽烷
將20.8 g 4-溴-2-氯-苯酚(100 mmol)溶解於150 mL無水THF中,接著添加24.2 g HMDS (150 mmol)。反應混合物在85℃下在氬氣氛圍下攪拌1.5小時,接著減壓濃縮,產生產物,其未經進一步純化即使用。
1
H NMR (200 MHz, CDCl
3
): 7.49 (d, 1H), 7.23 (dd, 1H), 6.75 (d, 1H), 0.26 (s, 9H)
步驟 I : 4- 溴 -2- 氯 -3- 甲基 - 苯酚
在-78℃下,在氬氣氛圍下,將48 mL
n
BuLi於己烷中之溶液(2.5M,120 mmol)逐滴添加至12.1 g無水DIPA (120 mmol)於250 mL無水THF中之溶液中。在相同溫度下攪拌混合物30分鐘,接著逐滴添加28.0 g (4-溴-2-氯-苯氧基)-三甲基-矽烷(來自步驟H) (100 mmol)。在2.5小時之後,逐滴添加21.3 g MeI (150 mmol),接著移除冷卻浴,且攪拌混合物隔夜。反應物用100 mL NH
4
OH溶液及200 mL NH
4
Cl溶液淬滅且用EtOAc萃取,經Na
2
SO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。所得深色物質用純己烷回流數次(150-150 mL等分試樣)且傾析,留下黑色焦油。減壓濃縮合併之有機相,得到19.0 g 4-溴-2-氯-3-甲基-苯酚,粗產物未經進一步純化即使用。
1
H NMR (200 MHz, CDCl
3
): 7.32 (d, 1H), 6.76 (d, 1H), 5.62 (s, 1H), 2.49 (s, 3H)
步驟 J : (4- 溴 -2- 氯 -3- 甲基 - 苯氧基 )- 三甲基 - 矽烷
將20.8 g HMDS (129 mmol)添加至19.0 g 4-溴-2-氯-3-甲基-苯酚(來自步驟I) (86.0 mmol)於150 mL無水THF中之溶液中。混合物在85℃下在氬氣球下攪拌1.5小時,且隨後減壓濃縮。所獲得之(4-溴-2-氯-3-甲基-苯氧基)-三甲基-矽烷未經進一步純化即使用。
1
H NMR (200 MHz, CDCl
3
): 7.30 (d, 1H), 6.63 (d, 1H), 2.50 (s, 3H), 0.28 (s, 9H)
步驟 K : 2- 氯 -3- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯酚
在氬氣下,將25.2 g (4-溴-2-氯-3-甲基-苯氧基)-三甲基-矽烷(來自步驟J) (86.0 mmol)於250 mL無水THF中之溶液冷卻至-78℃,且隨後逐滴添加38 mL含
n
BuLi之己烷(2.5M,94.6 mmol)。在5分鐘之後,逐滴添加19.2 g 2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
(103 mmol)。移除冷卻浴且使混合物緩慢升溫至室溫。接著,混合物添加至200 mL NH
4
Cl溶液中且用EtOAc萃取。減壓濃縮合併之有機層且使用己烷及EtOAc作為溶離劑通過矽膠墊。粗產物自EtOAc及己烷之混合物再結晶,獲得2-氯-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 10.40 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 2.49 (s, 3H), 1.27 (s, 12H)
步驟 L : 1-[2-[2- 氯 -3- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯氧基 ] 乙基 ]-4- 甲基 - 哌嗪
將10.0 g 2-氯-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚(來自步驟K) (37.2 mmol)、8.7 g 2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇(60.3 mmol)及15.8 g PPh
3
(60.3 mmol)溶解於100 mL無水甲苯中,且隨後逐滴添加27 mL偶氮二甲酸二乙酯(60.3 mmol,40%於甲苯中之溶液)。在50℃下在氬氣下攪拌混合物1.5小時。減壓蒸發揮發物且添加100 mL Et
2
O。濾出所沈澱之白色晶體且用Et
2
O洗滌。減壓濃縮濾液且經由急驟層析使用CHCl
3
及MeOH作為溶離劑純化。所得淺棕色油狀物自己烷結晶,得到呈灰白色固體狀之1-[2-[2-氯-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.56 (d, 1H), 6.99 (d, 1H), 4.15 (t, 2H), 2.72 (t, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.50 (br s, 4H), 2.29 (br s, 4H), 2.13 (s, 3H), 1.29 (s, 12H)
步驟 M : (2
R
)-2- 乙醯氧基 -3-[2-[(2- 氯嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
將9.06 g (2
R
)-2-乙醯氧基-3-(2-羥苯基)丙酸乙酯(來自步驟G,36 mmol)、7.12 g 2-氯-4-(氯甲基)嘧啶(44 mmol)、5.97 g K
2
CO
3
(44 mmol)及1.22 g KI (1.22 mmol)置於250 mL燒瓶中。添加70 mL DMF且在室溫下在N
2
下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。接著,反應混合物用水稀釋且隨後用EtOAc萃取。合併之有機層經Na
2
SO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。經由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,得到(2
R
)-2-乙醯氧基-3-[2-[(2-氯嘧啶-4-基)甲氧基]苯基]丙酸乙酯。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.86 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.25 (td, 1H), 7.23 (dd, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.95 (td, 1H), 5.30 (d, 1H), 5.25 (d, 1H), 5.16-5.13 (m, 1H), 4.07 (qm, 2H), 3.28 (dd, 1H), 3.09 (dd, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.09 (t, 3H)
步驟 N : (2
R
)-3-[2-[(2- 氯嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 ]-2- 羥基 - 丙酸乙酯
將8.568 g (2
R
)-2-乙醯氧基-3-[2-[(2-氯嘧啶-4-基)甲氧基]苯基]丙酸乙酯(來自步驟M) (23 mmol)溶解於100 mL乙醇中,接著添加1.8 mL乙醇鈉溶液(1.0M於乙醇中)且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。反應混合物用水稀釋且用乙酸乙酯萃取。合併之有機物經Na
2
SO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。經由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,得到(2
R
)-3-[2-[(2-氯嘧啶-4-基)甲氧基]苯基]-2-羥基-丙酸乙酯。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.84 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.19 (dm, 1H), 7.00 (dm, 1H), 6.91 (m, 1H), 5.52 (d, 1H), 5.27 (d, 1H), 5.24 (d, 1H), 4.06 (m, 1H), 4.04 (m, 1H), 3.13 (dd, 1H), 2.84 (dd, 1H), 1.11 (t, 3H)
步驟 O :製備物 1
將17.18 g 5-溴-4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3
-d
]嘧啶(來自步驟D,50 mmol)及18.52 g (2
R
)-3-[2-[(2-氯嘧啶-4-基)甲氧基]苯基]-2-羥基-丙酸乙酯(來自步驟N,55 mmol)溶解於250 mL無水THF中,接著添加48.87 g Cs
2
CO
3
(150 mmol)且在70℃下在N
2
下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。將反應混合物冷卻至室溫,接著添加2.17 g 1-[2-[2-氯-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪(來自步驟L,55 mmol)、560 mg AtaPhos (2.5 mmol)及250 mL H
2
O,且在氮氣下在70℃下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用EtOAc及鹽水稀釋。在相分離之後,水相用EtOAc萃取。將有機層合併且經Na
2
SO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。經由急驟層析使用EtOAc及MeOH (含有1.2% NH
3
)作為溶離劑分離產物。獲得呈滯轉異構體混合物形式之
製備物 1
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.87(dd, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.35-7.26 (m, 2H), 7.22 (t, 2H), 7.20-7.10 (m, 2H), 7.02-6.91 (m, 1H), 6.87 (d, 1H), 6.72 (t, 1H), 6.15 (d, 1H), 5.47 (dd, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.29-4.11 (m, 2H), 4.10-4.00 (m, 2H), 3.15-2.15 (br s, 8H), 3.13 (dd, 2H), 2.73-2.65 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.06 (t, 3H)
(M+2H)
2+
= 416.1197
製備物 2 : (2R
)-2-[5-[3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-(3- 羥苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
使用通用程序I步驟A且使用3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚作為適當
酸衍生物,獲得呈非對映異構體混合物形式之
製備物 2
。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.65 (br s, 1H), 8.95 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.88-7.80 (m, 2H), 7.57 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.3 (t, 1H), 7.24-7.14 (m, 4H), 7.05 (d, 1H), 6.94-6.90 (dm, 1H), 6.78-6.73 (tm, 1H), 6.30 (dd, 1H), 5.51 (dd, 1H), 5.30 (d, 1H), 5.24 (d, 1H), 4.26-4.00 (m, 4H), 3.17 (dd, 1H), 2.76 (br s, 2H), 2.58 (dd, 1H), 2.42 (br s, 3H), 3.00-2.30 (br s, 8H), 1.86 (s, 3H), 1.06 (t, 3H)
(M+2H)
2+
= 445.1524
製備物 3 : (2R
)-2-[5-[3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-(4- 羥苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
使用通用程序I步驟A且使用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚作為適當
酸衍生物,獲得呈非對映異構體混合物形式之
製備物 3
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 10.01 (s, 1H), 8.86 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.24 (d, 2H), 7.46 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.21 (t, 2H), 7.21-7.15 (m, 2H), 7.04 (d, 1H), 6.87 (d, 2H), 6.74 (t, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.52 (dd, 1H), 5.26 (d, 1H), 5.20 (d, 1H), 4.19 (br s, 2H), 4.10-4.00 (m, 2H), 3.16 (dd, 1H), 3.03-2.41 (m, 13H), 2.56 (dd, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.05 (t, 3H)
(M+2H)
2+
= 445.1517
製備物 4a : 2-[2-[(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼
使用通用程序IV,使用2-碘苯酚作為適當苯酚及(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇作為適當醇,獲得
製備物 4a
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 7.50 (dd, 1H), 7.41 (tm, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.93 (td, 1H), 4.37-4.31 (m, 1H), 4.08-4.02 (m, 2H), 4.03 (dd, 1H), 3.96 (dd, 1H), 1.36 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.27 (s, 12H)
製備物 4b : 2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼
使用通用程序IV,使用2-碘苯酚作為適當苯酚及2-(2-甲氧基乙氧基乙醇作為適當醇,獲得
製備物 4b
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 7.48 (dm, 1H), 7.42-7.37 (m, 1H), 6.94 (dm, 1H), 6.92-6.90 (m, 1H), 4.05-4.01 (m, 2H), 3.76-3.72 (m, 2H), 3.70-3.67 (m, 2H), 3.46-3.43 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 1.26 (s, 12H)
製備物 4c : 2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼
使用通用程序IV,使用2-碘苯酚作為適當苯酚及2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醇作為適當醇,獲得
製備物 4c
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ 7.48 (dm, 1H), 7.49-7.46 (m, 1H), 6.94 (dm, 1H), 6.93-6.89 (m, 1H), 4.04-4.01 (m, 2H), 3.75-3.72 (m, 2H), 3.71-3.39 (m, 8H), 3.22 (s, 3H), 1.26 (s, 12H)
製備物 4d : 2-[2-(2- 甲氧基乙氧基甲基 ) 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 步驟 A : 1- 溴 -2-(2- 甲氧基乙氧基甲基 ) 苯
在0℃下,向20 mL 2-甲氧基乙醇(672 mmol,20 eq)中以小份添加4.03 g氫化鈉(100.8 mmol,60%於油中,3 eq.)。在30分鐘攪拌後,添加8.40 g 1-溴-2-(溴甲基)苯(33.6 mmol,1 eq.),接著自冷卻浴移出反應混合物且在室溫下進一步攪拌,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得1-溴-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)苯。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ 7.60 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.24 (t, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.63 (dd, 2H), 3.51 (dd, 2H), 3.27 (s, 3H)
步驟 B :製備物 4d
使用通用程序IV步驟B,將步驟A之產物轉化成適當
酸酯,獲得
製備物 4d
。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ 7.80 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.43 (t, 1H), 7.28 (t, 1H), 4.85 (s, 2H), 3.66 (dd, 2H), 3.59 (dd, 2H), 3.41 (s, 3H), 1.36 (s, 12H)
製備物 4e : 4,4,5,5- 四甲基 -2-[2-(2- 四氫哌喃 -2- 基氧基乙氧基甲基 ) 苯基 ]-1,3,2- 二氧硼 步驟 A : 2-[2-[(2- 碘苯基 ) 甲氧基 ] 乙氧基 ] 四氫哌喃
在0℃下,向2.34 g (2-碘苯基)甲醇(10 mmol,1 eq.)於25 mL無水DMF中之溶液中以小份添加440 mg氫化鈉(11 mmol,60%於油中,1.1 eq.)。在30分鐘攪拌後,添加2.5 g 2-(2-溴乙氧基)四氫哌喃(12 mmol,1.2 eq.),接著自冷卻浴移出反應混合物且在50℃下進一步攪拌,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得2-[2-[(2-碘苯基)甲氧基]乙氧基]四氫哌喃。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 7.83 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.36 (t, 1H), 6.99 (t, 1H), 4.70 (t, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.98-3.88 (m, 2H), 3.79-3.76 (m, 2H), 3.73-3.68 (m, 1H), 3.56-3.51 (m, 1H), 1.94-1.83 (m, 1H), 1.80-1.73 (m, 1H), 1.70-1.52 (m, 4H)
步驟 B :製備物 4e
在0℃下,經2分鐘向1.0 g步驟A之產物(2.76 mmol,1 eq.)於15 mL無水THF中之溶液中添加4.24 mL
i
PrMgCl × LiCl (5.52 mmol,1.3M於THF中,2 eq.)。在10分鐘攪拌之後,添加1.40 mL 2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
(6.9 mmol,2.5 eq.),接著在0℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得
製備物 4e
。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 7.80 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.44 (t, 1H), 7.28 (t, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.68 (t, 2H), 3.94-3.87 (m, 2H), 3.76-3.64 (m, 3H), 3.54-3.49 (m, 1H), 1.93-1.82 (m, 1H), 1.78-1.71 (m, 1H), 1.69-1.52 (m, 4H)
製備物 4f : 2-[2-[(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 甲氧基甲基 ] 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 步驟 A : 4-[(2- 溴苯基 ) 甲氧基甲基 ]-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環
在0℃下,向1.3 mL (2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇(11 mmol,1.1 eq)於25 mL無水DMF中之溶液中以小份添加440 mg氫化鈉(11 mmol,60%於油中,1.1 eq.)。在30分鐘攪拌後,添加2.5 g 1-溴-2-(溴甲基)苯(10 mmol,1 eq.),接著自冷卻浴移出反應混合物且在室溫下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得4-[(2-溴苯基)甲氧基甲基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 7.55 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.65 (dd, 2H), 4.36 (qui, 1H), 4.11 (dd, 1H), 3.82 (dd, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.59 (dd, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.39 (s, 3H)
步驟 B :製備物 4f
使用通用程序IV步驟B,將步驟A之產物轉化成適當
酸酯,獲得
製備物 4f
。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ 7.65 (d, 1H), 7.45 (t, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.29 (t, 1H), 4.68 (dd, 2H), 4.20 (qui, 1H), 3.98 (dd, 1H), 3.62 (dd, 1H), 3.51-3.42 (m, 2H), 1.30 (s, 3H), 1.30 (s, 12H), 1.26 (s, 3H)
製備物 4g : 4,4,5,5- 四甲基 -2-[3-(2- 四氫哌喃 -2- 基氧基乙氧基甲基 ) 苯基 ]-1,3,2- 二氧硼 步驟 A : 2-[2-[(3- 碘苯基 ) 甲氧基 ] 乙氧基 ] 四氫哌喃
在0℃下,向2.34 g (3-碘苯基)甲醇(10 mmol,1 eq.)於25 mL無水DMF中之溶液中以小份添加440 mg氫化鈉(11 mmol,60%於油中,1.1 eq.)。在30分鐘攪拌後,添加2.5 g 2-(2-溴乙氧基)四氫哌喃(12 mmol,1.2 eq.),接著自冷卻浴移出反應混合物且在50℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得2-[2-[(3-碘苯基)甲氧基]乙氧基]四氫哌喃。MS (EI, 70 eV) m/z (%相對強度, [離子]): 85 (100), 217 (57), 233 (15), 278 (15), 362 (1)
步驟 B :製備物 4g
在0℃下,經2分鐘向1.0 g步驟A之產物(2.76 mmol,1 eq.)於15 mL無水THF中之溶液中添加4.24 mL
i
PrMgCl × LiCl (5.52 mmol,1.3M於THF中,2 eq.)。在10分鐘攪拌之後,添加1.40 mL 2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
(6.9 mmol,2.5 eq.),接著在0℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得
製備物 4g
。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 7.79 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 4.67 (t, 1H), 4.63 (d, 1H), 4.59 (d, 1H), 3.95-3.83 (m, 2H), 3.71-3.62 (m, 3H), 3.55-3.48 (m, 1H), 1.94-1.47 (m, 6H), 1.37 (s, 12H)
製備物 4h : 2-[3-[2- 甲氧基 -1-( 甲氧基甲基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼
向880 mg (4 mmol,1 eq.) 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚及1371 mg (5.0 mmol,1.25 eq.) 4-甲基苯磺酸[2-甲氧基-1-(甲氧基甲基)乙基]酯於16 mL DMF中之溶液中添加1954 mg (6.0 mmol,1.5 eq.)碳酸銫且在75℃下攪拌16小時,接著在85℃下攪拌8小時。將反應混合物冷卻至室溫且減壓濃縮。向殘餘物中添加25 mL鹽水且用3 × 25 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機層經MgSO
4
乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到
製備物 4h
。HRMS C
17
H
27
BO
5
計算值:322.1952;實驗值323.2025 (M+H)
製備物 4i : 2-[4-[2- 甲氧基 -1-( 甲氧基甲基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼
向880 mg (4 mmol,1.0 eq.) 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚及1371 mg (5.0 mmol,1.25 eq.) 4-甲基苯磺酸[2-甲氧基-1-(甲氧基甲基)乙基]酯於16 mL DMF中之溶液中添加1954 mg (6.0 mmol,1.5 eq.)碳酸銫且在75℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫且減壓濃縮。向殘餘物中添加25 mL鹽水且用3 × 25 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機層經MgSO
4
乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到
製備物 4i
。HRMS C
17
H
27
BO
5
計算值:322.1952;實驗值323.2036 (M+H)
製備物 4j :乙酸 [(2R
)-4,5- 二乙醯氧基 -6- 甲氧基 -2-[[3-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯氧基 ] 甲基 ] 四氫哌喃 -3- 基 ] 酯 步驟 A : 2,3,4- 三 -
O
- 乙醯基 - α -
D
- 哌喃甘露糖苷甲酯
在85℃下,將2.25 g (4 mmol) 2,3,4-三-
O
-乙醯基-6-三苯甲基-α
- D
-哌喃甘露糖苷甲酯溶解於30 mL乙酸中,接著添加15 mL水且在90℃下攪拌1小時。將其冷卻至室溫,接著倒入冰冷的鹽水中。過濾混合物且用二氯甲烷萃取濾液。合併之有機層經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到2,3,4-三-
O
-乙醯基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲酯。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 5.11-5.03 (m, 3H), 4.85 (t, 1H), 4.73 (d, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.48 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 2.11-1.91 (s, 9H)
步驟 B :製備物 4j
以2,3,4-三-
O
-乙醯基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲酯及3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚為起始物質,使用通用程序IV步驟A,獲得
製備物 4j
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.31 (t, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 5.25 (t, 1H), 5.12 (m, 1H), 5.11 (m, 1H), 4.79 (d, 1H), 4.13 (dd, 1H), 4.05 (dd, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 2.15-1.92 (s, 9H), 1.29 (s, 12H)
製備物 4k : 4,4,5,5- 四甲基 -2-[3-[[(2S
)-3,4,5,6- 四甲氧基四氫哌喃 -2- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ]-1,3,2- 二氧硼 步驟 A : 2,3,4- 三 -
O
- 甲基 - α -
D
- 哌喃甘露糖苷甲基 -6- 三苯甲酯
在0℃下,向8.08 g (18.51 mmol) 6-三苯甲基-α-D-哌喃甘露糖苷甲酯於150 mL DMF中之溶液中逐份添加2.89 g氫化鈉(60%於礦物油中,72.2 mmol,3.9 eq.)且在此溫度下攪拌30分鐘。接著,在0℃下逐滴添加5.20 mL MeI (11.8 g,83.3 mmol,4.5 eq.)且在室溫下攪拌16小時。向反應混合物中添加10 mL MeOH且攪拌15分鐘,接著減壓濃縮。殘餘物用200 mL水稀釋且用DCM萃取。合併之有機層經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到2,3,4-三-
O
-甲基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲基-6-三苯甲酯。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.44-7.23 (m, 15H), 4.85 (d, 1H), 3.58 (dd, 1H), 3.48 (m, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.33 (dd, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.28 (t, 1H), 3.23 (dd, 1H), 3.11 (s, 3H), 3.1 (dd, 1H)
步驟 B : 2,3,4- 三 -
O
- 甲基 - α -
D
- 哌喃甘露糖苷甲酯
在85℃下,將1.914 g 2,3,4-三-
O
-甲基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲基-6-三苯甲酯(4.0 mmol)溶解於30 mL乙酸中,接著添加15 mL水且在90℃下攪拌1小時。將其冷卻至室溫且倒入冰冷的鹽水中。過濾混合物且用二氯甲烷萃取濾液。合併之有機層經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到2,3,4-三-
O
-甲基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲酯。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 4.72 (d, 1H), 4.63 (br s, 1H), 3.56 (dd, 1H), 3.54 (dd, 1H), 3.47 (dd, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.32 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.24 (m, 1H), 3.22 (m, 1H)
步驟 C :製備物 4k
以2,3,4-三-
O
-甲基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲酯及3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚為起始物質,使用通用程序IV步驟A,獲得
製備物 4k
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.31 (dd, 1H), 7.25 (dm, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.09 (dm, 1H), 4.77 (d, 1H), 4.14 (dd, 1H), 4.09 (dd, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.59 (dd, 1H), 3.41 (t, 1H), 3.38 (dd, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 1.29 (s, 12H)
製備物 4l :乙酸 [(2R
)-4,5- 二乙醯氧基 -6- 甲氧基 -2-[[4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯氧基 ] 甲基 ] 四氫哌喃 -3- 基 ] 酯
以2,3,4-三-
O
-乙醯基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲酯(來自
製備物 4j
步驟A)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚為起始物質,使用通用程序IV步驟A,獲得
製備物 4l
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.60(m, 2H), 6.92 (m, 2H), 5.23 (t, 1H), 5.13 (dd, 1H), 5.11 (dd, 1H), 4.80 (d, 1H), 4.14 (dd, 1H), 4.06 (dd, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 2.14-1.92 (s, 9H), 1.27 (s, 12H)
製備物 4m : 4,4,5,5- 四甲基 -2-[4-[[(2S
)-3,4,5,6- 四甲氧基四氫哌喃 -2- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ]-1,3,2- 二氧硼
以2,3,4-三-
O
-甲基-α-
D
-哌喃甘露糖苷甲酯(來自
製備物 4j
步驟A)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚為起始物質,使用通用程序IV步驟A,獲得
製備物 4m
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.61 (m, 2H), 6.96 (m, 2H), 4.77 (d, 1H), 4.16 (dd, 1H), 4.10 (dd, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.60 (d, 1H), 3.38 (m, 2H), 3.37-3.28 (s, 12H), 1.27 (s, 12H)
製備物 4n :乙酸 [(2R
)-4,5,6- 三乙醯氧基 -2-[[4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯氧基 ] 甲基 ] 四氫哌喃 -3- 基 ] 酯 步驟 A : 1,2,3,4- 四 -
O
- 乙醯基 -α/β-
D
- 哌喃甘露糖
在65℃下,將2.36 g 1,2,3,4-四-
O
-乙醯基-6-三苯甲基-α/β-
D
-哌喃甘露糖(4.0 mmol)溶解於30 mL乙酸中,接著添加15 mL水且在65℃下攪拌1小時。將其冷卻至室溫且倒入冰冷的鹽水中。過濾混合物且用二氯甲烷萃取濾液。合併之有機層經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到1,2,3,4-四-
O
-乙醯基-α/β-
D
-哌喃甘露糖。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 6.06-5.97 (d, 1H), 5.20-5.06 (t, 1H), 5.31-5.18 (dd, 1H), 5.35-5.14 (dd, 1H), 4.89-4.87 (t, 1H), 3.84-3.74 (m, 1H), 3.52-3.34 (m, 2H), 2.20-1.90 (s, 12H)
步驟 B :製備物 4n
以1,2,3,4-四-
O
-乙醯基-α/β-
D
-哌喃甘露糖及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯酚為起始物質,使用通用程序IV步驟A,獲得呈立體異構體混合物形式之
製備物 4n
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.60 (m, 2H), 6.91 (m, 2H), 6.15-6.00 (d, 1H), 5.43-5.15 (m, 3H), 4.23-4.20 (m, 1H), 4.14-4.00 (m, 2H), 2.19-1.92 (s, 12H), 1.27 (s, 12H)
製備物 4o :乙酸 [(3R
,4S
,6S
)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[[4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯基 ] 甲氧基 ] 四氫哌喃 -2- 基 ] 甲酯
及
製備物 4p :乙酸 [(2R
,3aS
,6R
,7S
)-6,7- 二乙醯氧基 -2- 甲基 -2-[[4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 苯基 ] 甲氧基 ]-5,6,7,7a- 四氫 -3aH
-[1,3] 間二氧雜環戊烯并 [4,5-b
] 哌喃 -5- 基 ] 甲酯 步驟 A : 1- 溴 -2,3,4,6- 四 -
O
- 乙醯基 -α/β-
D
- 哌喃甘露糖
將1 mL乙酸酐添加至30 mL含HBr之乙酸(33%)中且在室溫下攪拌16小時。將其冷卻至0℃,且在0℃下逐滴添加7.50 g 1,2,3,4,6-五-
O
-乙醯基
-
α/β-
D
-哌喃甘露糖(19.2 mmol)於30 mL二氯甲烷中之溶液。反應混合物在此溫度下攪拌2小時,接著在室溫下攪拌16小時。將混合物冷卻至0℃且傾倒於100 mL冰水上。將其用120 mL DCM稀釋,接著分離各相。有機層用冰冷的水、飽和NaHCO
3
洗滌且再用水洗滌。有機層經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮,得到1-溴-2,3,4,6-四-
O
-乙醯基
-
α/β-
D
-哌喃甘露糖。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 6.77 (d, 1H), 5.50 (dd, 1H), 5.35 (dd, 1H), 5.23 (t, 1H), 4.17 (m, 1H), 4.25 (dd, 1H), 4.08 (dd, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.96 (s, 3H)
步驟 B :製備物 4o 及 4p
在-78℃下,向819 mg [4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯基]甲醇(3.50 mmol,1 eq.)、2015 mg 1-溴-2,3,4,6-四-
O
-乙醯基
-
α/β-
D
-哌喃甘露糖(4.90 mmol,1.4 eq.)、467 mg s-三甲基吡啶(3.85 mmol,1.1 eq.)於100 mL DCM中之溶液中逐滴添加含1708 mg三氟甲磺酸銀(6.65 mmol,1.9 eq.)之15 mL甲苯,且在此溫度下攪拌混合物10分鐘。使混合物緩慢升溫至室溫(3小時),接著將其攪拌10小時。經由矽藻土墊過濾混合物,濃縮濾液。藉由矽膠急驟層析使用庚烷及乙酸乙酯作為溶離劑純化殘餘物,得到作為第一溶離產物之
製備物 4o 1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.69 (m, 2H), 7.39 (m, 2H), 5.15-5.10 (m, 3H), 4.96 (d, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.57 (d, 1H), 4.15 (dd, 1H), 4.04 (dd, 1H), 3.96 (m, 1H), 2.12-1.91 (s, 12H), 1.29 (s, 12H);
及作為較晚溶離之產物的
製備物 4p
。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
): 7.63 (m, 2H), 7.31 (m, 2H), 5.68 (d, 1H), 5.32 (dd, 1H), 5.05 (t, 1H), 4.59 (d, 1h) 4.54 (dd, 1H), 4.53 (d, 1H), 4.12 (dd, 1H), 4.03 (dd, 1H), 3.94 (m, 1H), 2.01-1.97 (s, 9H), 1.70 (s, 3H), 1.29 (s, 12H)
製備物 4q : [5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 -2- 基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 甲醇
將113 mg (5-溴嘧啶-2-基)甲醇(0.6 mmol)及609 mg 4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-1,3,2-二氧硼
(2.4 mmol)溶解於6 mL二噁烷中,接著添加353 mg KOAc (3.6 mmol)及66 mg PdCl
2
×dppf (0.09 mmol)。在氮氣下在60℃下攪拌混合物2小時。所得混合物未經進一步操作即使用。MS (M+H): 237.1
製備物 5 : (2R
)-2-[5-[3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
使用通用程序I步驟A且使用[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯基]甲醇作為適當
酸酯,獲得呈非對映異構體混合物形式之
製備物 5
。MS: [M+H]
+
= 903.2
實例 1 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(3- 羥苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 2
為起始物質,使用通用程序I步驟B,獲得
實例 1
。HRMS C
46
H
42
ClFN
6
O
6
S計算值:860.2559;實驗值431.1349 (M+2H)
2+ 實例 2 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(4- 羥苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 3
為起始物質,使用通用程序I步驟B,獲得
實例 2
。HRMS C
46
H
42
ClFN
6
O
6
S計算值:860.2559;實驗值431.1371 (M+2H)
2+ 實例 3 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 1
及[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯基]甲醇為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 3
。HRMS C
47
H
44
ClFN
6
O
6
S計算值:874.2715;實驗值438.141 (M+2H)
2+ 實例 4 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[4-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 1
及[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯基]甲醇為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 4
。HRMS C
47
H
44
ClFN
6
O
6
S計算值:874.2715;實驗值438.1449 (M+2H)
2+ 實例 5 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{2-[(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4a
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 5
。HRMS C
52
H
52
ClFN
6
O
8
S計算值:974.324;實驗值488.1698 (M+2H)
2+ 實例 6 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4b
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 6
。HRMS C
51
H
52
ClFN
6
O
8
S計算值:962.324;實驗值482.1695 (M+2H)
2+ 實例 7 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(2-{2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4c
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 7
。HRMS C
53
H
56
ClFN
6
O
9
S計算值:1006.3502;實驗值504.1828 (M+2H)
2+ 實例 8 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[2-( 甲氧基甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 1
及[2-(甲氧基甲基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 8
。HRMS C
48
H
46
ClFN
6
O
7
S計算值:888.2872;實驗值445.1518 (M+2H)
2+ 實例 9 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{2-[(2- 甲氧基乙氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4d
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 9
。HRMS C
50
H
50
ClFN
6
O
7
S計算值:932.3134;實驗值467.164 (M+2H)
2+ 實例 10 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{2-[(2- 羥基乙氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4e
為起始物質,使用通用程序I,在步驟B中之反應完成後,用2M HCl水溶液設定至pH 1且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用10% K
2
CO
3
水溶液中和,用鹽水稀釋,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 10
。HRMS C
49
H
48
N
6
O
7
FSCl計算值:918.2978;實驗值460.1572 (M+2H)
2+ 實例 11 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(2-{[(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 甲氧基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4f
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 11
。HRMS C
53
H
54
ClFN
6
O
8
S計算值:988.3397;實驗值495.1762 (M+2H)
2+ 實例 12 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[(2- 羥基乙氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4g
為起始物質,使用通用程序I,在步驟B中之反應完成後,用2M HCl水溶液設定至pH 1且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用10% K
2
CO
3
水溶液中和,用鹽水稀釋,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 12
。HRMS C
49
H
48
ClFN
6
O
7
S計算值:918.2978;實驗值460.1556 (M+2H)
2+ 實例 13 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[(1,3- 二甲氧基丙 -2- 基 ) 氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4h
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 13
。HRMS C
51
H
52
ClFN
6
O
8
S計算值:962.324;實驗值482.1694 (M+2H)
2+ 實例 14 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[(1,3- 二甲氧基丙 -2- 基 ) 氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4i
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 14
。HRMS C
51
H
52
ClFN
6
O
8
S計算值:962.324;實驗值482.1678 (M+2H)
2+ 實例 15 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[4-(2,3- 二羥基丙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 3
及(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇為起始物質,使用通用程序II,在步驟B中之反應完成後,用2M HCl水溶液設定至pH 1且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用10% K
2
CO
3
水溶液中和,用鹽水稀釋,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 15
。HRMS C
49
H
48
N
6
O
8
FSCl計算值:934.2927;實驗值468.1531 (M+2H)
2+ 實例 16 : 6-O
-{3-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基 }- α -D- 哌喃甘露糖苷甲酯
以
製備物 1
及
製備物 4j
為起始物質,使用通用程序V,獲得
實例 16
。HRMS C
53
H
54
ClFN
6
O
11
S計算值:1036.3243;實驗值519.1696 (M+2H)
2+ 實例 17 : 6-O
-{3-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基 }-2,3,4- 三 -O
- 甲基 -α-D- 哌喃甘露糖苷甲酯
以
製備物 1
及
製備物 4k
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 17
。HRMS C
56
H
60
ClFN
6
O
11
S計算值:1078.3713;實驗值540.1936 (M+2H)
2+ 實例 18 : 6-O
-{4-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基 }-α-D- 哌喃甘露糖苷甲酯
以
製備物 1
及
製備物 4l
為起始物質,使用通用程序V,獲得
實例 18
。HRMS C
53
H
54
ClFN
6
O
11
S計算值:1036.3243;實驗值519.1714 (M+2H)
2+ 實例 19 : 6-O
-{4-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基 }-2,3,4- 三 -O
- 甲基 -α-D- 哌喃甘露糖苷甲酯
以
製備物 1
及
製備物 4m
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 19
。HRMS C
56
H
60
ClFN
6
O
11
S計算值:1078.3713;實驗值540.1925 (M+2H)
2+ 實例 20 : 6-O
-{4-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基 }-D- 哌喃甘露糖
及
實例 21 : 6-O
-{2-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基 }-D- 甘露糖酸
以
製備物 1
及
製備物 4n
為起始物質,使用通用程序V,
實例 20
作為較早溶離之化合物而獲得。HRMS C
52
H
52
ClFN
6
O
11
S計算值:1022.3087;實驗值512.1611 (M+2H)
2+ 實例 21
作為較晚溶離之化合物而獲得。HRMS C
52
H
52
ClFN
6
O
12
S計算值:1038.3036;實驗值520.1604 (M+2H)
2+ 實例 22 : 1,2-O
-[(1R
)-1-({4-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯甲基 } 氧基 ) 亞乙基 ]-β-D- 哌喃甘露糖
以
製備物 1
及
製備物 4o
為起始物質,使用通用程序V,獲得
實例 22
。HRMS C
55
H
56
ClFN
6
O
12
S計算值:1078.335;實驗值1079.343 (M+H)
+ 實例 23 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[(α-D- 哌喃甘露糖基氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4p
為起始物質,使用通用程序V,獲得
實例 23
。HRMS C
53
H
54
ClFN
6
O
11
S計算值:1036.3243;實驗值519.1682 (M+2H)
2+ 實例 24 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[4-(2- 羥乙基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 1
及[4-(2-羥乙基)苯基]
酸為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 24
。HRMS C
48
H
46
N
6
O
6
FSCl計算值:888.2872;實驗值445.1512 (M+2H)
2+ 實例 25 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[2-(2,3- 二羥基丙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4a
為起始物質,使用通用程序I,在步驟B中之反應完成後,用2M HCl水溶液設定至pH 1且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用10% K
2
CO
3
水溶液中和,用鹽水稀釋,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 25
。HRMS C
49
H
48
ClFN
6
O
8
S計算值:934.2927;實驗值468.1536 (M+2H)
2+ 實例 26 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 步驟 A : (2
R
)-2- 羥基 -3-[2-[[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
在70℃下攪拌1.01 g (2
R
)-3-[2-[(2-氯嘧啶-4-基)甲氧基]苯基]-2-羥基-丙酸乙酯(來自
製備物 1
步驟E) (3 mmol,1 eq.)、1.17 g [2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]
酸(6 mmol,2 eq.)、2.93 g碳酸銫(9 mmol,3 eq.)及210 mg Pd(PPh
3
)
2
Cl
2
於30 mL二噁烷/H
2
O (1:1)中之溶液,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得呈無色油狀之(2
R
)-2-羥基-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.92 (d, 1H), 7.60 (dd, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.24-7.15 (m, 3H), 7.08 (t, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.91 (t, 1H), 5.55 (d, 1H), 5.27 (d, 1H), 5.23 (d, 1H), 4.40-4.32 m, 1H), 4.17-4.11 (m, 2H), 4.06 (q, 2H), 3.62-3.60 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.17 (dd, 1H), 2.88 (dd, 1H), 1.18 (t, 3H)
步驟 B : (2
R
)-2-[5- 溴 -6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-
d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
在70℃下攪拌995 mg步驟A中獲得之產物(2.2 mmol,1.1 eq.)、687 mg 5-溴-4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-
d
]嘧啶(來自
製備物 1
步驟D) (2 mmol,1 eq.)及1.95 g碳酸銫(6 mmol,3 eq.)於10 mL無水THF中之懸浮液,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得(2
R
)-2-[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d
6
) δ 8.90 (d, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.77-7.72 (m, 2H), 7.61 (d, 1H), 7.55 (dd, 1H), 7.49 (dd, 1H), 7.45-7.38 (m, 3H), 7.25 (dd, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.09-7.01 (m, 2H), 6.94 (t, 1H), 5.79 (dd, 1H), 5.31 (d, 1H), 5.25 (d, 1H), 4.17 (q, 2H), 4.15-4.10 (m, 2H), 3.64-3.56 (m, 3H), 3.33 (dd, 1H), 3.21 (s, 3H), 1.14 (t, 3H)
步驟 C : (2
R
)-2-[5- 溴 -6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-
d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
在室溫下,向760 mg 步驟B中獲得之產物(1 mmol,1 eq.)於10 mL無水DCM中之溶液中逐滴添加1 mL BBr
3
(1 mmol,1M DCM溶液,1 eq.),接著攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用庚烷及EtOAc作為溶離劑純化粗產物,獲得(2
R
)-2-[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-[2-(2-羥基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 8.99 (d, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.92 (dd, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.69-7.62 (m, 2H), 7.54-7.45 (m, 2H), 7.27-7.12 (m, 5H), 6.98 (7, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.87 (dd, 1H), 5.34 (d, 1H), 5.29 (d, 1H), 4.41 (t, 2H), 4.29 (q, 2H), 3.94 (t, 2H), 3.72 (dd, 1H), 3.42 (dd, 1H), 1.28 (t, 3H)
步驟 D : (2
R
)-2-[5-[3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-
d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
向200 mg步驟C之產物(0.27 mmol,1 eq.)於4 mL二噁烷/H
2
O (1:1)中之溶液中,在70℃下攪拌127 mg 1-[2-[2-氯-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪(來自
製備物 1
步驟L) (0.32 mmol,1.2 eq.)、3.1 mg Pd(OAc)
2
(0.05 eq.)、11 mg AtaPhos (0.1 eq.)及262 mg碳酸銫(0.8 mmol,3 eq.),直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用EtOAc/MeOH (含有1.2% NH
3
)作為溶離劑純化粗產物,獲得(2
R
)-2-[5-[3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-[2-(2-羥基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。MS: [M+H]
+
= 933.2
步驟 E :實例 26
向120 mg步驟D之產物(0.13 mmol)於4 mL二噁烷/H
2
O (1:1)中之溶液中添加100 mg LiOH × H
2
O (2.6 mmol,20 eq.)且在室溫下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用2M HCl中和且隨後直接注射至RP18管柱,使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 26
。HRMS C
48
H
46
ClFN
6
O
7
S計算值:904.2821;實驗值453.1496 (M+2H)
2+ 實例 27 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{2-[(2,3- 二羥基丙氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4f
為起始物質,使用通用程序I,在步驟B中之反應完成後,用2M HCl水溶液設定至pH 1且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用10% K
2
CO
3
水溶液中和,用鹽水稀釋,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 27
。HRMS C
50
H
50
ClFN
6
O
8
S計算值:948.3083;實驗值475.1621 (M+2H)
2+ 實例 28 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-( 膦醯氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
在室溫下,向444 mg
製備物 2
(0.5 mmol,1 eq.)及210 µL TEA (1.5 mmol,3 eq.)於5 mL無水THF中之THF溶液中逐滴添加140 µL (1.5 mmol, 3 eq.) POCl
3
。在15分鐘攪拌之後,添加5 mL氫氧化鈉(10 mmol,2M於水中),且隨後在50℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。將反應混合物直接注射至經預調整(EtOAc/MeOH [含有1.2% NH
3
] - 80/20)之220 g急驟矽膠管柱,使用EtOAc/MeOH (含有1.2% NH
3
)作為溶離劑,藉由梯度方法得到呈非對映異構體混合物形式之所需產物。經由製備型逆相層析使用50 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeOH作為溶離劑分離非對映異構體。收集較晚溶離之非對映異構體作為
實例 28
。HRMS C
46
H
43
N
6
O
9
FPSCl計算值:940.2222;實驗值471.1194 (M+2H)
2+ 實例 29 :磷酸 4-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯酯
在室溫下,向444 mg
製備物 3
乙酯(0.5 mmol,1 eq.)及210 µL TEA (1.5 mmol,3 eq.)於5 mL無水THF中之THF溶液中逐滴添加140 µL (1.5 mmol, 3 eq.) POCl
3
。在15分鐘攪拌之後,添加5 mL氫氧化鈉(10 mmol,2M於水中),且隨後在50℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。將反應混合物直接注射至經預調節(EtOAc/MeOH [含有1.2% NH
3
] - 80/20)之220 g急驟矽膠管柱,使用EtOAc/MeOH (含有1.2% NH
3
)作為溶離劑,藉由梯度方法得到呈非對映異構體混合物形式之所需產物。在凍乾之後收集較晚溶離之非對映異構體作為
實例 29
。HRMS C
46
H
43
N
6
O
9
FPSCl計算值:940.2222;實驗值471.1188 (M+2H)
2+ 實例 30 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-(2- 羥基乙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 步驟 A : (2
R
)-2-[5-[3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 ]-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-
d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 -3-[2-[[2-[3-[2-( 對甲苯基磺醯氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 ] 苯基 ] 丙酸乙酯
向178 mg
製備物 2
(0.2 mmol)之DMF溶液中添加195 mg碳酸銫(0.6 mmol)及222 mg 4-甲基苯磺酸2-(對甲苯基磺醯氧基)乙酯(0.6 mmol),且在60℃下攪拌混合物,直至觀察到無進一步轉化。用EtOAc及鹽水稀釋反應混合物。在萃取之後,有機相用鹽水洗滌且經MgSO
4
乾燥,過濾並減壓濃縮。藉由急驟層析使用EtOAc及MeOH (含有1.2% NH
3
)作為溶離劑純化粗產物,獲得(2
R
)-2-[5-[3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-
d
]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-[3-[2-(
對甲苯基磺醯氧基
)乙氧基]苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。MS: [M+H]
+
= 1087.2
步驟 B :實例 30
向120 mg步驟A產物(0.11 mmol)於4 mL二噁烷/H
2
O (1:1)中之溶液中添加92 mg LiOH × H
2
O (2.2 mmol)且在60℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用2M HCl中和且隨後直接注射至RP18管柱,使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 30
。HRMS C
48
H
46
ClFN
6
O
7
S計算值:904.2821;實驗值453.1475 (M+2H)
2+ 實例 31 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 3
及2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 31
。HRMS C
51
H
52
N
6
O
8
FSCl計算值:962.324;實驗值482.1703 (M+2H)
2+ 實例 32 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 3
及10 eq. 2-(2-羥基乙氧基)乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 32
。HRMS C
50
H
50
N
6
O
8
FSCl計算值:948.3083;實驗值475.1613 (M+2H)
2+ 實例 33 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(4-{2- [2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 3
及2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 33
。HRMS C
53
H
56
N
6
O
9
FSCl計算值:1006.3502;實驗值504.183 (M+2H)
2+ 實例 34 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[2-( 二甲胺基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 3
及2-(二甲胺基)乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 34
。HRMS C
50
H
51
N
7
O
6
FSCl計算值:931.3294;實驗值466.6709 (M+2H)
2+ 實例 35 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙 氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 2
及(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 35
。HRMS C
52
H
52
N
6
O
8
FSCl計算值:974.324;實驗值488.1677 (M+2H)
2+ 實例 36 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-(15- 羥基 -3- 側氧基 -2,7,10,13- 四氧雜 -4- 氮雜十五烷 -1- 基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及2-[2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 36
。HRMS C
56
H
61
ClFN
7
O
11
S計算值:1093.3822;實驗值547.7006 (M+2H)
2+ 實例 37 : (2R
)-3-(2-{[2-(3-{[(1,4'- 聯哌啶 -1'- 基羰基 ) 氧基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及1-(4-哌啶基)哌啶作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 37
。HRMS C
58
H
62
ClFN
8
O
7
S計算值:1068.4135;實驗值1069.419 (M+H)
+ 實例 38 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(3-{2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 2
及10 eq. 2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 38
。HRMS C
52
H
54
ClFN
6
O
9
S計算值:992.3345;實驗值497.1748 (M+2H)
2+ 實例 39 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 2
及10 eq. 2-(2-羥基乙氧基)乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 39
。HRMS C
50
H
50
ClFN
6
O
8
S計算值:948.3083;實驗值475.1604 (M+2H)
2+ 實例 40 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 2
及2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 40
。HRMS C
51
H
52
ClFN
6
O
8
S計算值:962.324;實驗值482.1675 (M+2H)
2+ 實例 41 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[({[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙基 ] 胺甲醯基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙胺作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 41
。HRMS C
55
H
59
ClFN
9
O
7
S計算值:1043.3931;實驗值522.7052 (M+2H)
2+ 實例 42 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[({[2-( 嗎啉 -4- 基 ) 乙基 ] 胺甲醯基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及2-(N-嗎啉基)乙胺作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 42
。HRMS C
54
H
56
ClFN
8
O
8
S計算值:1030.3615;實驗值516.1871 (M+2H)
2+ 實例 43 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[({[2-( 二甲胺基 ) 乙基 ] 胺甲醯基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及
N'
,
N'
-二甲基乙-1,2-二胺作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 43
。HRMS C
52
H
54
ClFN
8
O
7
S計算值:988.3509;實驗值989.3586 (M+H)
+ 實例 44 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[({[2-( 吡咯啶 -1- 基 ) 乙基 ] 胺甲醯基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及2-吡咯啶-1-基乙胺作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 44
。HRMS C
54
H
56
ClFN
8
O
7
S計算值:1014.3665;實驗值508.1916 (M+2H)
2+ 實例 45 : (2R
)-3-[2-({2-[3-({[ 雙 (2- 甲氧基乙基 ) 胺甲醯基 ] 氧基 } 甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ]-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及2-甲氧基-
N
-(2-甲氧基乙基)乙胺作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 45
。HRMS C
54
H
57
N
7
O
9
FSCl計算值:1033.3611;實驗值517.6883 (M+2H)
2+ 實例 46 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(3-{[(1,4,7,10,13- 五氧雜 -16- 氮雜環十八烷 -16- 基羰基 ) 氧基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及1,4,7,10,13-五氧雜-16-氮雜環十八烷作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 46
。HRMS C
60
H
67
N
7
O
12
FSCl計算值:1163.4241;實驗值582.7187 (M+2H)
2+ 實例 47 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-(2,3- 二羥基丙氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 2
及(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇為起始物質,使用通用程序II,在步驟B中之反應完成後,用2M HCl水溶液設定至pH 1且攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,其用10% K
2
CO
3
水溶液中和,用鹽水稀釋,用DCM萃取。合併之有機相經MgSO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮濾液。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeCN作為溶離劑純化粗產物。收集較晚溶離之非對映異構體,獲得
實例 47
。HRMS C
49
H
48
N
6
O
8
FSCl計算值:934.2927;實驗值468.1538 (M+2H)
2+ 實例 48 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(3-{2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 2
及2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 48
。HRMS C
53
H
56
N
6
O
9
FSCl計算值:1006.3502;實驗值504.1829 (M+2H)
2+ 實例 49 : (2R
)-3-(2-{[2-(3-{2-[ 雙 (2- 羥乙基 ) 胺基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸
以
製備物 2
及10 eq. 2-[雙(2-羥乙基)胺基]乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 49
。HRMS C
52
H
55
N
7
O
8
FSCl計算值:991.3505;實驗值496.6833 (M+2H)
2+ 實例 50 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{2,3- 二甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[({[2-( 哌啶 -1- 基 ) 乙基 ] 胺甲醯基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 5
為起始物質及
N
-(2-胺基乙基)哌啶作為適當胺,使用通用程序III,獲得
實例 50
。HRMS C
55
H
58
ClFN
8
O
7
S計算值:1028.3822;實驗值1029.3893 (M+H)
+ 實例 51 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[2-( 嗎啉 -4- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 2
及
N
-(2-羥乙基)嗎啉為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 51
。HRMS C
52
H
53
ClFN
7
O
7
S計算值:973.3400;實驗值487.6785 (M+2H)
2+ 實例 52 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[2-( 二甲胺基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 2
及2-二甲胺基乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 52
。HRMS C
50
H
51
ClFN
7
O
6
S計算值:931.3294;實驗值466.6722 (M+2H)
2+ 實例 53 : (2R
)-3-(2-{[2-(4-{2-[ 雙 (2- 羥乙基 ) 胺基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸
以
製備物 3
及2-[雙(2-羥乙基)胺基]乙醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 53
。HRMS C
52
H
55
N
7
O
8
FSCl計算值:991.3505;實驗值496.6822 (M+2H)
2+ 實例 54 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(4-{2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 3
及10 eq.三乙二醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 54
。HRMS C
52
H
54
N
6
O
9
FSCl計算值:992.3345;實驗值497.1743 (M+2H)
2+ 實例 55 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 3
及(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 55
。HRMS C
52
H
52
N
6
O
8
FSCl計算值:974.3240;實驗值488.1689 (M+2H)
2+ 實例 56 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[2-( 嗎啉 -4- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸
以
製備物 3
及N-(2-羥乙基)嗎啉為起始物質,使用通用程序II,獲得
實例 56
。HRMS C
52
H
53
N
7
O
7
FSCl計算值:973.3400;實驗值487.6775 (M+2H)
2+ 實例 57 : 4-[4-({2-[(2R
)-2- 羧基 -2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 乙基 ] 苯氧基 } 甲基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 苯基磷酸二鈉鹽
在室溫下,向444 mg
製備物 3
(0.5 mmol,1 eq.)及210 µL TEA (1.5 mmol,3 eq.)於5 mL無水THF中之THF溶液中逐滴添加140 µL POCl
3
(1.5 mmol,3 eq.)。在15分鐘攪拌之後,添加5 mL氫氧化鈉(10 mmol,2M於水中),且隨後在50℃下攪拌,直至觀察到無進一步轉化。接著,用TFA調整pH至6,且隨後此反應混合物直接注射至RP18管柱,使用50 mM NH
4
HCO
3
水溶液及MeOH作為溶離劑。收集較晚溶離之非對映異構體。在凍乾之後,將剩餘白色固體懸浮於5 mL二噁烷/飽和NH
4
HCO
3
(1:1)中。在室溫下攪拌1小時之後,將反應混合物直接注射至RP18管柱,使用水及MeCN作為溶離劑,得到
實例 57
。HRMS C
46
H
43
N
6
O
9
FPSCl計算值:940.2222;實驗值469.1054 (M-2H)
2-
。
實例 58 : (2R
)-3-(2-{[2-(2-{2-[ 雙 (2- 羥乙基 ) 胺基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸 實例 59 : (2R
)-3-(2-{[2-(4-{[ 雙 (2- 羥乙基 ) 胺基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸 實例 60 : (2R
)-3-(2-{[2-(3-{[ 雙 (2- 羥乙基 ) 胺基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸 實例 61 : (2R
)-3-(2-{[2-(2-{[ 雙 (2- 羥乙基 ) 胺基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 )-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 } 丙酸 實例 62 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{4-[(2- 羥基乙氧基 ) 甲基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸 實例 63 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸 實例 64 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(2-{2-[2-(2- 羥基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸 實例 65 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[( 膦醯氧基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸 實例 66 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(3-{[( 膦醯氧基 ) 甲氧基 ] 甲基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸 實例 67 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2-(3-{[( 膦醯氧基 ) 羰基 ] 氧基 } 苯基 ) 嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸 實例 68 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-({[( 膦醯氧基 ) 羰基 ] 氧基 } 甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 69 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[(1,3- 二甲氧基丙 -2- 基 ) 氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸 1-[( 乙氧基羰基 ) 氧基 ] 乙酯 步驟 A : 碳酸乙酯 1- 氯乙酯
將1 eq.乙醇及1.2 eq.吡啶溶解於二氯甲烷(1.2 mL/mmol)中。在-78℃下在氮氣下緩慢添加1.05 eq.氯甲酸1-氯乙酯,且在-78℃下攪拌反應混合物3小時。過濾冷的混合物且減壓濃縮濾液。粗產物未經進一步純化即使用。
步驟 B :實例 69
在氮氣下,將1 eq.
實例 13
溶解於DMF (20 ml/mmol)中。添加6.7 eq. Cs
2
CO
3
及8 eq.步驟A之碳酸乙酯1-氯乙酯。在室溫下攪拌反應混合物,直至觀察到無進一步轉化。混合物用鹽水稀釋且用DCM萃取,用Na
2
SO
4
乾燥,過濾且減壓濃縮。經由製備型逆相層析使用5 mM NH
4
HCO
3
水溶液及乙腈作為溶離劑純化粗產物,獲得
實例 69
。HRMS C
56
H
60
ClFN
6
O
11
S計算值:1078.3713;實驗值1079.3796及1079.3786 (M+H)
實例 70 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-{2-[(2-{3-[(1,3- 二甲氧基丙 -2- 基 ) 氧基 ] 苯基 } 嘧啶 -4- 基 ) 甲氧基 ] 苯基 } 丙酸 1-[( 二甲基胺甲醯基 ) 氧基 ] 乙酯 實例 71 : (2R
)-2-{[5-{2,6- 二甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 72 : (2R
)-2-{[5-{3,5- 二氯 -2,6- 二甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 73 : (2R
)-2-{[5-{2,6- 二甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[4-( 膦醯氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 74 : (2R
)-2-{[5-{3,5- 二氯 -2,6- 二甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[4-( 膦醯氧基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 75 : 2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3- 羥基 -3-[2-({2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 76 : 2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-4- 羥基 -3-[2-({2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丁酸 實例 77 : 2-O
-[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ]-3,4- 二去氧 -3-[2-({2-[3-( 羥甲基 ) 苯基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 戊糖酸 實例 78 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[2-( 羥甲基 ) 吡啶 -4- 基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 79 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[5-( 羥甲基 ) 吡啶 -3- 基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸
以
製備物 1
及[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-3-吡啶基]甲醇為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 79
。HRMS C
46
H
43
ClFN
7
O
6
S計算值:875.2668;實驗值438.6428 (M+2H)
2+ 實例 80 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[6-( 羥甲基 ) 噠嗪 -4- 基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 81 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-[2-({2-[6-( 羥甲基 ) 吡嗪 -2- 基 ] 嘧啶 -4- 基 } 甲氧基 ) 苯基 ] 丙酸 實例 82 : (2R
)-2-{[(5Sa
)-5-{3- 氯 -2- 甲基 -4-[2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 乙氧基 ] 苯基 }-6-(4- 氟苯基 ) 噻吩并 [2,3-d
] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 }-3-(2-{[2'-( 羥甲基 )-2,5'- 聯嘧啶 -4- 基 ] 甲氧基 } 苯基 ) 丙酸
以
製備物 1
及
製備物 4q
為起始物質,使用通用程序I,獲得
實例 82
。HRMS C
45
H
42
ClFN
8
O
6
S計算值:876.2621;實驗值439.1402 (M+2H)
2+ 藥理學研究 實例 A :藉由螢光偏振技術測定之 Mcl-1 抑制
各化合物之相對結合效力經由螢光偏振(FP)測定。該方法利用螢光素標記配位體(螢光素-βAla-Ahx-A-REIGAQLRRMADDLNAQY-OH;mw 2,765),其結合於Mcl-1蛋白(使得Mcl-1對應於UniProtKB
®
原始寄存編號:Q07820),導致使用讀取器以毫偏振(mP)單位量測之各向異性增加。添加競爭性結合於相同位點之化合物作為配位體將導致系統中未結合配位體之比例更大,藉由mP單位減小所指示。
在DMSO中製備各化合物之11點連續稀釋液,且將2 μl轉移至平底、低結合的384孔盤中(最終DMSO濃度5%)。接著添加含有螢光素標記配位體(最終濃度1 nM)及Mcl-1蛋白(最終濃度5 nM)之38 µl緩衝液(10 mM 4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸[HEPES]、150 mM NaCl、0.05% Tween 20,pH 7.4)。
分析盤在室溫下培育約2小時,隨後在Biomek Synergy2讀取器(Ex. 528 nm,Em. 640 nm,截止510 nm)上量測FP且計算mP單位。與在『僅5% DMSO』與『100%抑制』對照物之間確立的窗口相比,增加劑量之測試化合物的結合表示為mP的減小百分比。11點劑量反應曲線用XL-Fit軟體使用4參數對數模型(S形劑量-反應模型)標繪,且確定給出50% mP減小之抑制濃度(IC
50
)。獲得之結果呈現於下表1中。
結果顯示本發明化合物抑制上文描述之Mcl-1蛋白與螢光肽之間的相互作用。
實例 B :活體外細胞毒性
在H929多發性骨髓瘤腫瘤細胞株上進行細胞毒性研究。
將細胞分佈至微量培養盤上且暴露於測試化合物48小時。隨後藉由比色分析,亦即微量細胞培養四唑鎓分析定量細胞活力(Cancer Res., 1987,
47
, 939-942)。
結果以IC
50
(將細胞活力抑制50%之化合物濃度)表示且呈現於下表1中。
結果顯示本發明化合物具有細胞毒性。
表 1 : Mcl-1 抑制 ( 螢光偏振測試 ) 及 H929 細胞之細胞毒性的 IC50 | IC50
(M) Mcl-1 FP | IC50
(M) MTT H929 | | IC50
(M) Mcl-1 FP | IC50
(M) MTT H929 |
實例 1 | 8.4E-09 | 9.31E-09 | 實例 19 | 4.95E-09 | 2.47E-09 |
實例 2 | 1.32E-08 | 1.59E-08 | 實例 20 | 4.35E-09 | 5.68E-08 |
實例 3 | 4.05E-09 | 4.08E-09 | 實例 21 | 4.85E-09 | >1.50E-07 |
實例 4 | 4.9E-09 | 3.64E-09 | 實例 22 | 5.5E-09 | 5.97E-09 |
實例 5 | 3.7E-09 | 1.65E-09 | 實例 23 | 2.7E-09 | 3.97E-08 |
實例 6 | 1.57E-08 | 3.25E-09 | 實例 24 | 3.15E-09 | 2.55E-09 |
實例 7 | 3.75E-09 | 4.45E-09 | 實例 25 | 3.45E-09 | 1.00E-08 |
實例 8 | 7.35E-09 | 2.07E-09 | 實例 26 | 3.45E-09 | 1.72E-09 |
實例 9 | 8.15E-09 | 1.40E-09 | 實例 27 | 2.2E-09 | 1.39E-08 |
實例 10 | 1.09E-08 | 2.79E-09 | 實例 28 | 4.15E-09 | 4.84E-08 |
實例 11 | 4.05E-09 | 1.99E-09 | 實例 29 | 4.6E-09 | 2.27E-08 |
實例 12 | 4.25E-09 | 3.82E-09 | 實例 30 | 4.5E-09 | 3.60E-09 |
實例 13 | 5.1E-09 | 3.59E-09 | 實例 31 | 3.85E-09 | 1.68E-09 |
實例 14 | 6.15E-09 | 3.37E-09 | 實例 32 | 1.53E-08 | 1.68E-09 |
實例 15 | 2.75E-09 | 3.59E-09 | 實例 33 | 2.24E-08 | 1.18E-09 |
實例 16 | 7.2E-09 | 3.71E-08 | 實例 34 | 7.1E-09 | 4.76E-09 |
實例 17 | 4.8E-09 | 3.03E-09 | 實例 35 | 5.15E-09 | 4.76E-09 |
實例 18 | 4.1E-09 | 1.39E-08 | 實例 36 | 4.65E-09 | 7.59E-08 |
| IC50
(M) Mcl-1 FP | IC50
(M) MTT H929 | | IC50
(M) Mcl-1 FP | IC50
(M) MTT H929 |
實例 37 | 6.3E-09 | 2.05E-08 | 實例 60 | ND | ND |
實例 38 | 2.8E-09 | 2.76E-09 | 實例 61 | ND | ND |
實例 39 | 3.05E-09 | 3.25E-09 | 實例 62 | ND | ND |
實例 40 | 3.75E-09 | 6.15E-09 | 實例 63 | ND | ND |
實例 41 | 3.45E-09 | 9.08E-08 | 實例 64 | ND | ND |
實例 42 | 4.45E-09 | 4.45E-08 | 實例 65 | ND | ND |
實例 43 | 4.55E-09 | 3.11E-08 | 實例 66 | ND | ND |
實例 44 | 3.7E-09 | 2.87E-08 | 實例 67 | ND | ND |
實例 45 | 3.2E-09 | 4.58E-09 | 實例 68 | ND | ND |
實例 46 | 2.55E-09 | 2.34E-08 | 實例 69 | 7.6E-08 | ND |
實例 47 | 4.05E-09 | 1.82E-08 | 實例 70 | ND | ND |
實例 48 | 3.85E-09 | ND | 實例 71 | ND | ND |
實例 49 | 4.65E-09 | ND | 實例 72 | ND | ND |
實例 50 | 6.6E-09 | ND | 實例 73 | ND | ND |
實例 51 | 4.15E-09 | ND | 實例 74 | ND | ND |
實例 52 | 3.7E-09 | ND | 實例 75 | ND | ND |
實例 53 | 4.65E-9 | ND | 實例 76 | ND | ND |
實例 54 | 4.6E-09 | ND | 實例 77 | ND | ND |
實例 55 | 6.35E-09 | ND | 實例 78 | ND | ND |
實例 56 | 4.75E-09 | ND | 實例 79 | 7.6E-09 | ND |
實例 57 | 4.6E-09 | 2.27E-08 | 實例 80 | ND | ND |
實例 58 | ND | ND | 實例 81 | ND | ND |
實例 59 | ND | ND | 實例 82 | 7.7E-09 | ND |
ND:未測定
實例 C :活體內 PARP 之裂解形式的定量
在AMO-1多發性骨髓瘤細胞之異種移植模型中評估本發明化合物誘發細胞凋亡之能力(藉由量測裂解之PARP含量)。
將1.10
7
個AMO-1細胞皮下移植至免疫抑制小鼠(SCID品系)中。在移植後12至14天,動物藉由靜脈內或經口途徑用各種化合物處理。在處理之後,將腫瘤塊回收及溶解,且在腫瘤溶解物中定量PARP之裂解形式。
使用專門分析PARP之裂解形式的「Meso Scale Discovery (MSD) ELISA平台」測試進行定量。將其以對應於經處理之小鼠中裂解PARP之數量除以對照小鼠中裂解PARP之數量的比率的活化係數形式表示。
結果顯示本發明化合物能夠誘發活體內AMO-1腫瘤細胞之細胞凋亡。
實例 D :活體內抗腫瘤活性
在AMO-1多發性骨髓瘤細胞之異種移植模型中評估本發明化合物之抗腫瘤活性。
將1×10
7
個AMO-1細胞皮下移植至免疫抑制小鼠(SCID品系)中。
在移植後6至8天,當腫瘤塊已達至約150 mm
3
時,小鼠按每日時程用各種化合物處理(5天處理)。自處理開始時每週量測腫瘤塊兩次。
使用ΔT/C (亦即,產物活性之檢核參數,其定義為處理組之腫瘤體積/未處理對照組之腫瘤體積比率)獲得之結果顯示本發明化合物在處理期期間誘發顯著腫瘤消退。
實例 E :醫藥組合物:錠劑
1000個含有5 mg劑量之選自實例1至82之化合物的錠劑..... 5 g
小麥澱粉.................................................................. 20 g
玉米澱粉.................................................................. 20 g
乳糖........................................................................ 30 g
硬脂酸鎂.................................................................... 2 g
二氧化矽.................................................................... 1 g
羥丙基纖維素.............................................................. 2 g