TW202039418A - 經修飾之胺脂質 - Google Patents

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Abstract

本揭示案提供可用於遞送生物活性劑、例如遞送生物活性劑至細胞以製備經工程改造之細胞的可離子化胺脂質及其鹽(例如其醫藥學上可接受之鹽)。本文揭示之該等可離子化胺脂質可用作基於脂質奈米粒子之組合物之調配中的可離子化脂質。

Description

經修飾之胺脂質
本揭示案係關於可用於遞送生物活性劑、例如遞送生物活性劑至細胞以製備經工程改造之細胞的可離子化胺脂質及其鹽(例如其醫藥學上可接受之鹽)。
用可離子化含胺脂質調配之脂質奈米粒子可用作貨品子媒劑，用於將生物活性劑、尤其多核苷酸、諸如RNA、mRNA及嚮導RNA遞送至細胞中。含有可離子化脂質之LNP組合物可促進寡核苷酸劑跨越細胞膜遞送，且可用於將基因編輯用組分及組合物引入活細胞中。尤其難以遞送至細胞之生物活性劑包括蛋白質、基於核酸之藥物及其衍生物，尤其是包括相對較大之寡核苷酸、諸如mRNA之藥物。用於遞送有前景之基因編輯技術至細胞中、諸如遞送CRISPR/Cas9系統組分的組合物尤其受到關注(例如編碼核酸酶之mRNA及相關嚮導RNA (gRNA))。
需要用於遞送CRISPR/Cas之蛋白質及核酸組分至細胞、諸如患者之細胞的組合物。具體而言，用於遞送編碼CRISPR蛋白質組分之mRNA及用於遞送CRISPR嚮導RNA之組合物尤其受到關注。具有適用於活體外及活體內遞送之特性且可穩定且遞送RNA組分之組合物亦尤其受到關注。
本揭示案提供可用於調配脂質奈米粒子(LNP)組合物之含胺脂質。該等LNP組合物可具有有利於遞送核酸貨品子、諸如CRISPR/Cas基因編輯組分至細胞之性質。
在某些實施例中，本揭示案係關於具有式(IA)結構之化合物：
Figure 02_image001
(IA) 其中，每次出現時獨立地， X1 為C1-3 伸烷基或
Figure 02_image004
， X2 係選自O、NH、NMe及一鍵， X3 為C2-4 伸烷基， X4 為C1 伸烷基或一鍵， X5 為C1 伸烷基或一鍵， R1 為C1-3 烷基， R2 為C1-3 烷基，或 R2 連同氮原子及R1 或X3 之碳原子一起形成4員、5員或6員環， Y1 係選自一鍵、-CH=CH-、-(C=O)O-及-O(C=O)-， Y2 係選自-CH2 -CH=CH-及C3 -C4 伸烷基， R3 係選自H、C5-7 環烷基、C8 -C10 烯基及C3-18 烷基， R4 為C4-8 烷基， 或其鹽， 限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基，Y1 為順式-CH=CH-，且-Y2 -R4 為順式-CH2 -CH=CH-(C5 烷基)時，R1 為C2-3 烷基。
在某些實施例中，本揭示案係關於具有式(I)結構之化合物：
Figure 02_image006
其中，每次出現時獨立地， X1 為C2-3 伸烷基， X2 係選自O、NH、NMe及一鍵， X3 為C2-4 伸烷基， X4 為C1 伸烷基或一鍵， X5 為C1 伸烷基或一鍵， R1 為C1-2 烷基， R2 為C1-2 烷基，或 R2 連同氮原子及R1 或X3 之碳原子一起形成5員或6員環， Y1 係選自-CH=CH-、-(C=O)O-及-O(C=O)-， R3 係選自H、C5-7 環烷基及C3-18 烷基， R4 為C4-7 烷基， 或其鹽， 限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基，Y1 為順式-CH=CH-且R4 為C5 烷基時，R1 為C2 烷基，或其鹽，諸如其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基且Y1 為順式-CH=CH-時，R1 為C2 烷基。
在某些實施例中，X1 為直鏈C2 伸烷基。在其他實施例中，X1 為C1 伸烷基。在一些實施例中，X1 為直鏈C3 伸烷基或支鏈C3 伸烷基。
在一些其他實施例中，X2 為NH或O。在某些較佳實施例中，X2 為O且X3 為C3-4 伸烷基。在一些實施例中，X3 為C2-3 伸烷基。在某些實施例中，X2 為NMe或一鍵。
在某些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成4員環。在某些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成5員環。在一些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成6員環。可替代地，R2 可為C2 烷基。在一些情況下，R2 為C1 烷基。在一些實施例中，R2 例如經羥基取代，R2 之一實例包括經羥基取代之C2 烷基。
在某些實施例中，R1 為C1 烷基。可替代地，R1 可為C2 烷基。在一些實施例中，R1 例如經羥基取代，R1 之一實例包括經羥基取代之C2 烷基。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成4員環。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成5員環。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成6員環。
在一些實施例中，R3 為直鏈C8-16 烷基，例如直鏈C7-12 烷基，諸如直鏈C7-9 烷基。可替代地，R3 可為直鏈C3-6 烷基。在一些實施例中，R3 為支鏈C6-10 烷基。在其他實施例中，R3 為C5-7 環烷基，例如C6 環烷基。在一些實施例中，R3 為H。在一些實施例中，R3 為C8-10 烯基。
在某些實施例中，R4 為直鏈C5-6 烷基。
在一些實施例中，X4 為一鍵。
在某些實施例中，X5 為C1 伸烷基。
在一些實施例中，Y2 -R4 為-CH2 -CH=CH-R4 。
在其他實施例中，Y2 為直鏈C3 伸烷基。
在一些實施例中，Y1 係選自一鍵、-CH=CH-及-O(C=O)-，例如-CH=CH-及-O(C=O)-。
在某些實施例中，化合物為式II化合物：
Figure 02_image008
(II)，其中變數如針對式(IA)所定義。
在某些實施例中，化合物為式III化合物：
Figure 02_image010
(III)，其中變數如針對式(IA)所定義。
式(IA)或(I)之代表性化合物包括：
Figure 02_image012
、
Figure 02_image014
、
Figure 02_image016
、
Figure 02_image018
、
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
、
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、
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、
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、
Figure 02_image030
、
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、
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、
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、
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、
Figure 02_image040
、
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、
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、
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、
Figure 02_image048
、
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、
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、
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、
Figure 02_image056
、
Figure 02_image058
、
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、
Figure 02_image062
、
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、
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、
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、
Figure 02_image070
、
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、
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、
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、
Figure 02_image080
、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
Figure 02_image120
、
Figure 02_image122
、
Figure 02_image124
、
Figure 02_image126
、
Figure 02_image128
、
Figure 02_image130
、
Figure 02_image132
、
Figure 02_image134
、
Figure 02_image136
、
Figure 02_image138
、
Figure 02_image140
、
Figure 02_image142
、
Figure 02_image144
、
Figure 02_image146
、
Figure 02_image148
、
Figure 02_image150
、
Figure 02_image152
、
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、
Figure 02_image156
、
Figure 02_image158
、
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、
Figure 02_image162
、
Figure 02_image164
、
Figure 02_image166
、
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、
Figure 02_image170
、
Figure 02_image172
、
Figure 02_image174
、
Figure 02_image176
、
Figure 02_image178
、
Figure 02_image180
、
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、
Figure 02_image184
、
Figure 02_image186
、
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、
Figure 02_image190
、
Figure 02_image192
、
Figure 02_image194
、
Figure 02_image196
、
Figure 02_image198
、
Figure 02_image200
、
Figure 02_image202
、
Figure 02_image204
、
Figure 02_image206
、
Figure 02_image208
、
Figure 02_image210
、
Figure 02_image212
、
Figure 02_image214
、
Figure 02_image216
、
Figure 02_image218
、
Figure 02_image220
、
Figure 02_image222
、
Figure 02_image224
、
Figure 02_image226
及
Figure 02_image228
，
或其鹽，較佳醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，化合物係選自
Figure 02_image022
、
Figure 02_image048
、
Figure 02_image086
、
Figure 02_image076
、
Figure 02_image152
、
Figure 02_image088
、
Figure 02_image144
、
Figure 02_image092
、
Figure 02_image094
及
Figure 02_image090
或其鹽。
在其他實施例中，化合物係選自
Figure 02_image026
、
Figure 02_image050
、
Figure 02_image136
、
Figure 02_image078
、
Figure 02_image154
、
Figure 02_image096
、
Figure 02_image146
及
Figure 02_image140
或其鹽。
在其他實施例中，化合物係選自
Figure 02_image016
、
Figure 02_image046
、
Figure 02_image138
、
Figure 02_image080
、
Figure 02_image156
、
Figure 02_image098
、
Figure 02_image148
及
Figure 02_image142
或其鹽。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何化合物，其中化合物之質子化形式的pKa為約5.1至約8.0，例如約5.6至約7.2、約5.7至約6.5或約5.8至約6.2。在一些實施例中，化合物之質子化形式的pKa為約5.5至約6.0。在某些實施例中，化合物之質子化形式的pKa為約6.1至約6.3。
在某些實施例中，本揭示案係關於一種組合物，其包含本文所述之任何化合物。
在某些實施例中，本揭示案係關於一種組合物，其包含本文所述之任何化合物及脂質組分，例如包含約50重量%之本文所述之化合物及脂質組分，例如胺脂質，較佳地式(IA)、(I)、(II)或式(III)化合物。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何組合物，其中該組合物係LNP組合物。舉例而言，本揭示案係關於包含本文所述之任何化合物及脂質組分的LNP組合物。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中脂質組分包含輔助脂質及PEG脂質。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中脂質組分包含輔助脂質、PEG脂質及中性脂質。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，該LNP組合物還包含低溫保護劑。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，該LNP組合物還包含緩衝液。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，該LNP組合物還包含核酸組分。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，該LNP組合物還包含RNA或DNA組分。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中LNP組合物之N/P比率為約3-10，例如N/P比率為約6 ± 1，或N/P比率為約6 ± 0.5。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中LNP組合物之N/P比率為約6。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中RNA組分包含mRNA。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中RNA組分包含RNA導向之DNA結合劑，例如Cas核酸酶mRNA，諸如2類Cas核酸酶mRNA或Cas9核酸酶mRNA。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中mRNA係經修飾之mRNA。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中RNA組分包含gRNA核酸。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中gRNA核酸係gRNA。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之LNP組合物，其中RNA組分包含2類Cas核酸酶mRNA及gRNA。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中gRNA核酸係或編碼雙重嚮導RNA (dgRNA)。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中gRNA核酸係或編碼單一嚮導RNA (sgRNA)。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中gRNA係經修飾之gRNA。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中經修飾之gRNA包含在5’端的前五個核苷酸中之一或多者處的修飾。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，其中經修飾之gRNA包含在3’端的後五個核苷酸中之一或多者處的修飾。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何LNP組合物，該LNP組合物還包含至少一種模板核酸。
在某些實施例中，本揭示案係關於一種基因編輯之方法，該方法包括使細胞與LNP接觸。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，該方法包括使DNA裂解。
在某些實施例中，本揭示案係關於一種使DNA裂解之方法，該方法包括使細胞與LNP組合物接觸。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何使DNA裂解之方法，其中裂解步驟包括引入單股DNA缺口。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何使DNA裂解之方法，其中裂解步驟包括引入雙股DNA斷裂。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何使DNA裂解之方法，其中LNP組合物包含2類Cas mRNA及嚮導RNA核酸。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何使DNA裂解之方法，該方法還包括向細胞中引入至少一種模板核酸。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何使DNA裂解之方法，該方法包括使細胞與包含模板核酸之LNP組合物接觸。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中該方法包括向動物，例如人類投與LNP組合物。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中該方法包括向細胞、諸如真核細胞投與LNP組合物。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中該方法包括投與調配於第一LNP組合物及第二LNP組合物中之mRNA，該第一LNP組合物及該第二LNP組合物包含mRNA、gRNA、gRNA核酸及模板核酸中之一或多者。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中第一LNP組合物及第二LNP組合物同時投與。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中第一LNP組合物及第二LNP組合物依序投與。在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中該方法包括投與調配於單一LNP組合物中之mRNA及嚮導RNA核酸。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中基因編輯引起基因剔除。
在某些實施例中，本揭示案係關於本文所述之任何基因編輯之方法，其中基因編輯引起基因修正。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張於2018年12月5日申請之美國臨時專利申請案第62/775,783號之優先權，該案之全部內容以引用之方式併入本文中。
本揭示案提供可用於遞送生物活性劑(包括核酸，諸如CRISPR/Cas組分RNA (「貨品子」))至細胞之脂質、尤其可離子化脂質，及製備及使用該等組合物之方法。脂質及其醫藥學上可接受之鹽視情況呈包含脂質之組合物、包括LNP組合物的形式提供。在某些實施例中，LNP組合物可包含生物活性劑，例如RNA組分，及包括如本文所定義之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物的脂質組分。在一些實施例中，RNA組分包含核酸。在一些實施例中，脂質用於遞送生物活性劑(例如核酸，諸如mRNA)至細胞(諸如肝細胞)。在某些實施例中，RNA組分包括gRNA及視情況存在之編碼2類Cas核酸酶之mRNA，及視情況存在之gRNA及編碼gRNA之核酸。亦提供基因編輯之方法及使用此等組合物製備經工程改造之細胞之方法。 脂質奈米粒子組合物
本文揭示各種LNP組合物，其用於遞送生物活性劑，諸如核酸，例如mRNA及gRNA，包括CRISPR/Cas貨品子。該等LNP組合物包括「可離子化胺脂質」，以及中性脂質、PEG脂質及輔助脂質。「脂質奈米粒子」或「LNP」係指但不限於意指，包含複數種(亦即，超過一種)藉由分子間力彼此物理締合之LNP組分的粒子。 脂質
本揭示案提供可用於LNP組合物中之脂質。
在某些實施例中，本揭示案係關於具有式(IA)之結構的化合物：
Figure 02_image001
(IA) 其中，每次出現時獨立地， X1 為C1-3 伸烷基或
Figure 02_image004
， X2 係選自O、NH、NMe及一鍵， X3 為C2-4 伸烷基， X4 為C1 伸烷基或一鍵， X5 為C1 伸烷基或一鍵， R1 為C1-3 烷基， R2 為C1-3 烷基，或 R2 連同氮原子及R1 或X3 之碳原子一起形成4員、5員或6員環， 各Y1 獨立地選自一鍵、-CH=CH-、-(C=O)O-及-O(C=O)-， 各Y2 獨立地選自-CH2 -CH=CH-及C3 -C4 伸烷基， R3 係選自H、C5-7 環烷基、C8 -C10 烯基及C3-18 烷基， 各R4 獨立地為C4-8 烷基， 或其鹽， 限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基，Y1 為順式-CH=CH-，且-Y2 -R4 為順式-CH2 -CH=CH-(C5 烷基)時，R1 為C2-3 烷基。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，限制條件為當R2 為Me時，R1 為C2-3 烷基。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中R2 不為Me。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中R1 不為Me。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中R3 不為直鏈C12 烷基。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中X1 不為C2 伸烷基。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中X2 不為O。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中X3 不為C3 伸烷基。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中X4 不為一鍵。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中X5 不為C1 伸烷基。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中Y1 不為順式-CH=CH-。
在某些實施例中，化合物為式(IA)化合物，其中-Y2 -R4 不為順式-CH2 -CH=CH-(C5 烷基)。
在某些實施例中，本揭示案係關於式(I)化合物：
Figure 02_image006
其中，每次出現時獨立地， X1 為C2-3 伸烷基， X2 係選自O、NH、NMe及一鍵， X3 為C2-4 伸烷基， X4 為C1 伸烷基或一鍵， X5 為C1 伸烷基或一鍵， R1 為C1-2 烷基， R2 為C1-2 烷基，或 R2 連同氮原子及R1 或X3 之碳原子一起形成5員或6員環， Y1 係選自-CH=CH-、-(C=O)O-及-O(C=O)-， R3 係選自H、C5-7 環烷基及C3-18 烷基， R4 為C4-7 烷基， 或其鹽， 限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基，Y1 為順式-CH=CH-，且R4 為C5 烷基時，R1 為C2 烷基，或其鹽，諸如其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基且Y1 為順式-CH=CH-時，R1 為C2 烷基。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，限制條件為當R2 為Me時，R1 為C2 烷基。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中R2 不為Me。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中R1 不為Me。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中R3 不為直鏈C12 烷基。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中X1 不為C2 伸烷基。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中X2 不為O。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中X3 不為C3 伸烷基。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中X4 不為一鍵。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中X5 不為C1 伸烷基。
在某些實施例中，化合物為式(I)化合物，其中Y1 不為順式-CH=CH-。
在一些實施例中，該化合物為對映異構體富集或非對映異構體富集的，例如該化合物為對映異構體富集的。
在某些實施例中，X1 為直鏈C2 伸烷基。在其他實施例中，X1 為C1 伸烷基。在一些實施例中，X1 為直鏈C3 伸烷基或支鏈C3 伸烷基。
在一些其他實施例中，X2 為NH或O。在某些較佳實施例中，X2 為O且X3 為C3-4 伸烷基。在一些實施例中，X3 為C2-3 伸烷基。在某些實施例中，X2 為NMe或一鍵。
在某些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成4員環。在某些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成5員環。在一些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成6員環。可替代地，R2 可為C2 烷基。在一些情況下，R2 為C1 烷基。在一些實施例中，R2 例如經羥基取代，R2 之一實例包括經羥基取代之C2 烷基。
在某些實施例中，R1 為C1 烷基。可替代地，R1 可為C2 烷基。在一些實施例中，R1 例如經羥基取代，R1 之一實例包括經羥基取代之C2 烷基。在一些實施例中，R1 未經取代。在一些實施例中，R2 未經取代。在較佳實施例中，R1 及R2 均未經取代。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成4員環。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成5員環。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成6員環。
在一些實施例中，R3 為直鏈C8-16 烷基，例如直鏈C7-12 烷基，諸如直鏈C7-9 烷基。可替代地，R3 可為直鏈C3-6 烷基。在一些實施例中，R3 為支鏈C6-10 烷基。在其他實施例中，R3 為C5-7 環烷基，例如C6 環烷基。在一些實施例中，R3 為H。在一些實施例中，R3 為C8-10 烯基。
在某些實施例中，R4 為直鏈C5-6 烷基。
在一些實施例中，X4 為一鍵。
在某些實施例中，X5 為C1 伸烷基。
在一些實施例中，Y2 -R4 為-CH2 -CH=CH-R4 。
在其他實施例中，Y2 為直鏈C3 伸烷基。
在一些實施例中，Y1 係選自一鍵、-CH=CH-及-O(C=O)-，例如-CH=CH-及-O(C=O)-。
在某些實施例中，化合物為式II化合物：
Figure 02_image008
(II)，其中變數如針對式(IA)所定義。
在某些實施例中，X1 為直鏈C2 伸烷基。在其他實施例中，X1 為C1 伸烷基。在一些實施例中，X1 為直鏈C3 伸烷基或支鏈C3 伸烷基。
在一些實施例中，R3 為直鏈C8-16 烷基，例如直鏈C7-12 烷基，諸如直鏈C7-9 烷基。可替代地，R3 可為直鏈C3-6 烷基。在一些實施例中，R3 為支鏈C6-10 烷基。在其他實施例中，R3 為C5-7 環烷基，例如C6 環烷基。在一些實施例中，R3 為H。在一些實施例中，R3 為C8-10 烯基。
在某些實施例中，R4 為直鏈C5-6 烷基。
在一些實施例中，X4 為一鍵。
在某些實施例中，X5 為C1 伸烷基。
在一些實施例中，Y2 -R4 為-CH2 -CH=CH-R4 。
在其他實施例中，Y2 為直鏈C3 伸烷基。
在一些實施例中，Y1 係選自一鍵、-CH=CH-及-O(C=O)-，例如-CH=CH-及-O(C=O)-。
在某些實施例中，化合物係選自：
Figure 02_image100
、
Figure 02_image108
、
Figure 02_image158
、
Figure 02_image106
、
Figure 02_image150
及
Figure 02_image176
或其鹽。
在某些實施例中，化合物為式III化合物：
Figure 02_image010
(III)，其中變數如針對式(IA)所定義。
在某些實施例中，X1 為直鏈C2 伸烷基。在其他實施例中，X1 為C1 伸烷基。在一些實施例中，X1 為直鏈C3 伸烷基或支鏈C3 伸烷基。
在一些其他實施例中，X2 為NH或O。在某些較佳實施例中，X2 為O且X3 為C3-4 伸烷基。在一些實施例中，X3 為C2-3 伸烷基。在某些實施例中，X2 為NMe或一鍵。
在某些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成4員環。在某些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成5員環。在一些實施例中，R2 及X3 之碳原子一起形成6員環。可替代地，R2 可為C2 烷基。在一些情況下，R2 為C1 烷基。在一些實施例中，R2 例如經羥基取代，R2 之一實例包括經羥基取代之C2 烷基。
在某些實施例中，R1 為C1 烷基。可替代地，R1 可為C2 烷基。在一些實施例中，R1 例如經羥基取代，R1 之一實例包括經羥基取代之C2 烷基。在一些實施例中，R1 未經取代。在一些實施例中，R2 未經取代。在較佳實施例中，R1 及R2 均未經取代。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成4員環。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成5員環。在其他實施例中，R1 及R2 一起形成6員環。
在一些實施例中，R3 為直鏈C8-16 烷基，例如直鏈C7-12 烷基，諸如直鏈C7-9 烷基。可替代地，R3 可為直鏈C3-6 烷基。在一些實施例中，R3 為支鏈C6-10 烷基。在其他實施例中，R3 為C5-7 環烷基，例如C6 環烷基。在一些實施例中，R3 為H。在一些實施例中，R3 為C8-10 烯基。
在一些實施例中，X4 為一鍵。
在某些實施例中，X5 為C1 伸烷基。
式(IA)或(I)之代表性化合物包括： 、
Figure 02_image012
、
Figure 02_image014
、
Figure 02_image016
、
Figure 02_image018
、
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
、
Figure 02_image024
、
Figure 02_image026
、
Figure 02_image028
、
Figure 02_image030
、
Figure 02_image032
、
Figure 02_image034
、
Figure 02_image036
、
Figure 02_image038
、
Figure 02_image040
、
Figure 02_image042
、
Figure 02_image044
、
Figure 02_image046
、
Figure 02_image048
、
Figure 02_image050
、
Figure 02_image052
、
Figure 02_image054
、
Figure 02_image056
、
Figure 02_image058
、
Figure 02_image060
、
Figure 02_image062
、
Figure 02_image064
、
Figure 02_image066
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Figure 02_image068
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Figure 02_image070
、
Figure 02_image072
、
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，
或其鹽，諸如其醫藥學上可接受之鹽。
式(IA)或(I)之代表性化合物包括：
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在一些實施例中，化合物係選自
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或其鹽。
在其他實施例中，化合物係選自
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或其鹽。
在其他實施例中，化合物係選自
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及
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或其鹽。
在某些實施例中，在投與後8小時、10小時、12小時、24小時或48小時或3天、4天、5天、6天、7天或10天內自個體之血漿清除如本文揭示之調配之脂質組合物的至少75%之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物。在某些實施例中，在投與後8小時、10小時、12小時、24小時或48小時或3天、4天、5天、6天、7天或10天內自個體之血漿清除如本文揭示之包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之脂質組合物的至少50%，此可例如藉由量測血漿中之脂質(例如式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物)、RNA (例如mRNA)或其他組分來測定。在某些實施例中，量測脂質組合物之脂質囊封對游離脂質、RNA或核酸組分。
可如文獻中所述量測脂質清除率。參見Maier, M.A.等人Biodegradable Lipids Enabling Rapidly Eliminated Lipid Nanoparticles for Systemic Delivery of RNAi Therapeutics.Mol. Ther. 2013, 21(8), 1570-78 (「Maier 」)。舉例而言，在Maier 中，向六至八週齡之雄性C57Bl/6小鼠經由外側尾靜脈藉由靜脈內濃注注射投與0.3 mg/kg之含有靶向螢光素酶之siRNA的LNP-siRNA系統。在投藥後0.083小時、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、8小時、24小時、48小時、96小時及168小時收集血液、肝及脾樣品。在組織收集之前用鹽水灌注小鼠且處理血液樣品以獲得血漿。所有樣品皆經處理且藉由LC-MS分析。此外，Maier 闡述用於評估投與LNP-siRNA組合物後之毒性之程序。舉例而言，經由單次靜脈內濃注注射以5 mL/kg之劑量體積向雄性史泊格多利大鼠(Sprague Dawley rat)以0、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg及10 mg/kg (5隻動物/組)投與靶向螢光素酶之siRNA。24小時後，自有意識動物之頸靜脈獲得約1 mL血液，且分離血清。在投藥後72小時，對所有動物進行安樂死以驗屍。評估臨床徵象、體重、血清化學、器官重量及組織病理學。儘管Maier 闡述用於評估siRNA-LNP組合物之方法，但該等方法可應用於評估投與本揭示案之脂質組合物(諸如LNP組合物)之清除率、藥物動力學及毒性。
在某些實施例中，使用本文揭示之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物的脂質組合物展現相對於替代可離子化胺脂質增加之清除率。在一些該等實施例中，清除率係脂質清除率，例如式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物自血液、血清或血漿清除之速率。在一些實施例中，清除率係貨品子(例如生物活性劑)清除率，例如貨品子組分自血液、血清或血漿清除之速率。在一些實施例中，清除率係RNA清除率，例如mRNA或gRNA自血液、血清或血漿清除之速率。在一些實施例中，清除率係LNP自血液、血清或血漿清除之速率。在一些實施例中，清除率係LNP自組織(諸如肝組織或脾組織)清除之速率。理想地，高清除率可產生無實質不良影響及/或在循環及/或組織中LNP累積減少的安全概況。
本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物視其所處於之介質之pH值而定可形成鹽。舉例而言，在略微酸性介質中，式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物可質子化且因此帶正電。相反，在略微鹼性介質(諸如，pH值約為7.35之血液)中，式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物可未質子化，且因此不帶電荷。在一些實施例中，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物可在至少約9之pH值下大部分質子化。在一些實施例中，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物可在至少約10之pH值下大部分質子化。
使式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物大部分質子化之pH值與其固有pKa有關。在較佳實施例中，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa在約5.1至約8.0、甚至更佳約5.5至約7.5、例如約6.1至約6.3的範圍內。在其他較佳實施例中，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa在約5.3至約8.0、例如約5.6至約7.2、約5.7至約6.5的範圍內。在其他實施例中，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa在約5.7至約6.4、例如約5.8至約6.2的範圍內。在其他較佳實施例中，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa在約5.7至約6.5、例如約5.8至約6.4的範圍內。可替代地，本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa在約5.8至約6.5的範圍內。在一些實施例中，式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之質子化形式的pKa為約5.5至約6.0。本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa可在約6.0至約8.0、較佳地約6.0至約7.5的範圍內。式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之鹽的pKa可為調配LNP中的重要考慮因素，此乃因為已發現，與pKa在約5.5至約7.0範圍內之某些脂質一起調配之LNP在活體內有效遞送貨品子至例如肝。此外，已發現，與pKa在約5.3至約6.4範圍內之某些脂質一起調配之LNP在活體內有效遞送至例如腫瘤。參見例如WO 2014/136086。
在某些實施例中，本揭示案係關於對映異構體富集之式(IA)、(I)、(II)或(III)之化合物。化合物之對映異構體富集水準可表示為對映異構體過量(ee)。化合物之ee可藉由將對映異構體之各部分之差除以對映異構體各部分之和來量測。舉例而言，若發現化合物包含98% (S)-對映異構體及2% (R)對映異構體，則化合物之ee為(98-2)/(98+2)或96%。在某些實施例中，式(IA)、(I)、(II)或(III)之化合物具有約30% ee或更大、40% ee或更大、50% ee或更大、60% ee或更大、70% ee或更大、約80% ee、約85% ee、約88% ee、約90% ee、約91% ee、約92% ee、約93% ee、約94% ee、約95% ee、約96% ee、約97% ee、約98% ee、約99% ee或超過約99% ee，甚至其中此% ee超過起始物質之% ee，例如0% ee (外消旋)。在某些實施例中，式(IA)、(I)、(II)或(III)之化合物為對映異構體富集的。在某些實施例中，式(IA)、(I)、(II)或(III)之化合物為對映異構體純的。在化合物具有超過一個立構中心之實施例中，該立構中心之富集可基本上與分子之任何其他立構中心之立體化學配置/富集無關。舉例而言，本文所述之化合物在特定立構中心處可具有30% de或更大、40% de或更大、50% de或更大、60% de或更大、70% de或更大、80% de或更大、90% de或更大、95% de或更大或甚至98% de或更大。 額外脂質
適用於本揭示案之脂質組合物中之「中性脂質」包括例如多種中性、不帶電或兩性離子脂質。適用於本揭示案中之中性磷脂的實例包括(但不限於)二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、磷酸膽鹼(DOPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、磷脂醯膽鹼(PLPC)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DAPC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、卵磷脂醯膽鹼(EPC)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼(DLPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、1-肉豆蔻醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(MPPC)、1-棕櫚醯基-2-肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(PMPC)、1-棕櫚醯基-2-硬脂醯基磷脂醯膽鹼(PSPC)、1,2-二花生醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DBPC)、1-硬脂醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(SPPC)、1,2-二(二十烯醯基)-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DEPC)、棕櫚醯基油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、溶血磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二亞麻油醯基磷脂醯膽鹼二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯乙醇胺(POPE)、溶血磷脂醯乙醇胺及其組合。在某些實施例中，中性磷脂可選自二硬脂醯基磷酯醯膽鹼(DSPC)及二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)，較佳地二硬脂醯基磷酯醯膽鹼(DSPC)。
「輔助脂質」包括類固醇、固醇及烷基間苯二酚。適用於本揭示案中之輔助脂質包括(但不限於)膽固醇、5-十七烷基間苯二酚及膽固醇半琥珀酸酯。在某些實施例中，輔助脂質可為膽固醇或其衍生物，諸如膽固醇半琥珀酸酯。
PEG脂質可影響奈米粒子可於活體內(例如在血液中)存在之時間長度。PEG脂質可藉由例如減少粒子聚集及控制粒徑而有助於調配過程。本文所用PEG脂質可調節LNP之藥物動力學性質。通常，PEG脂質包含脂質部分及基於PEG之聚合物部分(有時稱為聚(氧化乙烯)) (PEG部分)。適用於具有本揭示案之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之脂質組合物的PEG脂質及關於該等脂質之生物化學的資訊可參見Romberg等人, Pharmaceutical Research 25(1), 2008, 第55-71頁；及Hoekstra等人, Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52。額外適宜PEG脂質揭示於例如WO 2015/095340 (第31頁第14行至第37頁第6行)、WO 2006/007712及WO 2011/076807 (「隱秘脂質」)中。
在一些實施例中，脂質部分可源自二醯基甘油或二醯基咪唑雙醯胺，包括包含具有獨立地包含約C4至約C40飽和或不飽和碳原子之烷基鏈長度的二烷基甘油或二烷基咪唑雙醯胺基團之彼等二醯基甘油或二醯基咪唑雙醯胺，其中鏈可包含一或多個官能基，例如醯胺或酯。在一些實施例中，烷基鏈長度包含約C10至C20。二烷基甘油或二烷基咪唑雙醯胺基團還可包含一或多個經取代之烷基。鏈長度可為對稱的或不對稱的。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「PEG」意指任何聚乙二醇或其他伸烷基醚聚合物，諸如乙二醇或環氧乙烷之視情況地經取代之直鏈或支鏈聚合物。在某些實施例中，PEG部分未經取代。可替代地，PEG部分可經例如一或多個烷基、烷氧基、醯基、羥基或芳基取代。舉例而言，PEG部分可包含PEG共聚物，諸如PEG-聚胺基甲酸酯或PEG-聚丙烯(例如參見J. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992))；可替代地，PEG部分可為PEG均聚物。在某些實施例中，PEG部分之分子量為約130至約50,000，諸如約150至約30,000或甚至約150至約20,000。類似地，PEG部分之分子量可為約150至約15,000、約150至約10,000、約150至約6,000或甚至約150至約5,000。在某些較佳實施例中，PEG部分之分子量為約150至約4,000、約150至約3,000、約300至約3,000、約1,000至約3,000或約1,500至約2,500。
在某些較佳實施例中，PEG部分係「PEG-2K」，亦稱為「PEG 2000」，其平均分子量為約2,000道爾頓(dalton)。PEG-2K在本文中由下式(II)表示，其中n為45，此意謂數量平均聚合度包含約45個子單元
Figure 02_image302
(II)。然而，可使用業內已知之其他PEG實施例，包括例如數量平均聚合度包含約23個子單元(n = 23)及/或68個子單元(n = 68)之彼等PEG實施例。在一些實施例中，n可在約30至約60之範圍內。在一些實施例中，n可在約35至約55之範圍內。在一些實施例中，n可在約40至約50之範圍內。在一些實施例中，n可在約42至約48之範圍內。在一些實施例中，n可為45。在一些實施例中，R可選自H、經取代之烷基及未經取代之烷基。在一些實施例中，R可為未經取代之烷基，諸如甲基。
在本文所述實施例中之任一者中，PEG脂質可選自PEG-二月桂醯基甘油、PEG-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG) (目錄號GM-020，來自NOF, Tokyo, Japan)、PEG-二棕櫚醯基甘油、PEG-二硬脂醯基甘油(PEG-DSPE) (目錄號DSPE-020CN，NOF, Tokyo, Japan)、PEG-二月桂基咪唑雙醯胺、PEG-二肉豆蔻基咪唑雙醯胺、PEG-二棕櫚醯基咪唑雙醯胺及PEG-二硬脂醯基咪唑雙醯胺、PEG-膽固醇(1-[8'-(膽固-5-烯-3[β]-氧基)甲醯胺基-3',6'-二氧雜辛烷基]胺甲醯基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)、PEG-DMB (3,4-二-十四氧基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)醚)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DMG)(目錄號880150P，來自Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSPE) (目錄號880120C，來自Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(PEG2k-DSG；GS-020, NOF Tokyo, Japan)、聚(乙二醇)-2000-二甲基丙烯酸酯(PEG2k-DMA)及1,2-二硬脂醯基氧基丙基-3-胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSA)。在某些該等實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMG。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSG。在其他實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSPE。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMA。在其他實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C-DMA。在某些實施例中，PEG脂質可為WO2016/010840 (第[00240]段至第[00244]段)中所揭示之化合物S027。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSA。在其他實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C11。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C14。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C16。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C18。
適用於本揭示案之脂質組合物中的陽離子脂質包括(但不限於)氯化N,N-二油醇基-N,N-二甲基銨(DODAC)、溴化N,N-二硬脂醯基-N,N-二甲基銨(DDAB)、氯化N-(1-(2,3-二油醯基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基銨(DOTAP)、1,2-二油醯基-3-二甲基銨-丙烷(DODAP)、氯化N-(1-(2,3-二油醇氧基)丙基)-N,N,N-三甲基銨(DOTMA)、1,2-二油醯基胺甲醯基-3-二甲基銨-丙烷(DOCDAP)、1,2-二亞麻油醯氧基-3-二甲基銨-丙烷(DLINDAP)、二月桂基(C12:0)三甲基銨丙烷(DLTAP)、二-十八烷基醯胺基甘胺醯基精胺(DOGS)、DC-Choi、三氟乙酸二油醯基氧基-N-[2-(精胺甲醯胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙銨(DOSPA)、溴化1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羥基乙基銨(DMRIE)、3-二甲基胺基-2-(膽固-5-烯-3-β-氧基丁-4-氧基)-1-(順式,順式-9,12-十八二烯氧基)丙烷(CLinDMA)、N,N-二甲基-2,3-二油醇氧基)丙胺(DODMA)、2-[5'-(膽固-5-烯-3[β]-氧基)-3'-氧雜戊氧基)-3-二甲基-1-(順式,順式-9',1-2'-十八二烯氧基)丙烷(CpLinDMA)、N,N-二甲基-3,4-二油醇氧基苄基胺(DMOBA)及1,2-N,N'-二油醇基胺甲醯基-3-二甲基胺基丙烷(DOcarbDAP)。在一個實施例中，陽離子脂質係DOTAP或DLTAP。
適用於本揭示案之陰離子脂質包括(但不限於)磷脂醯基甘油、心磷脂、二醯基磷酯醯絲胺酸、二醯基磷脂酸、N-十二烷醯基磷脂醯乙醇胺、N-琥珀醯基磷脂醯乙醇胺、N-戊二醯基磷脂醯乙醇胺膽固醇半琥珀酸酯(CHEMS)及離胺醯基磷脂醯基甘油。 脂質組合物
本揭示案提供一種脂質組合物，該脂質組合物包含至少一種式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其鹽(例如其醫藥學上可接受之鹽)及至少一種其他脂質組分。該等組合物亦可含有生物活性劑，視情況與一或多種其他脂質組分組合。在一些實施例中，脂質組合物包含脂質組分及包含生物活性劑之水性組分。
在一個實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他脂質組分。在另一實施例中，脂質組合物還包含生物活性劑，視情況與一或多種其他脂質組分組合。在另一實施例中，脂質組合物係呈脂質體形式。在另一實施例中，脂質組合物係呈脂質奈米粒子(LNP)形式。在另一實施例中，脂質組合物適於遞送至肝。
在一個實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及另一脂質組分。該等其他脂質組分包括(但不限於)中性脂質、輔助脂質、PEG脂質、陽離子脂質及陰離子脂質。在某些實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及中性脂質，例如DSPC，視情況具有一或多種額外脂質組分。在另一實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及輔助脂質，例如膽固醇，視情況具有一或多種額外脂質組分。在其他實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及PEG脂質，視情況具有一或多種額外脂質組分。在其他實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及陽離子脂質，視情況具有一或多種額外脂質組分。在其他實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及陰離子脂質，視情況具有一或多種額外脂質組分。在子實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、輔助脂質及PEG脂質，視情況具有中性脂質。在又一子實施例中，脂質組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、輔助脂質、PEG脂質及中性脂質。
含有式(IA)、(I)、(II)或(III)之脂質或其醫藥學上可接受之鹽的組合物或其脂質組合物可呈各種形式，包括但不限於形成遞送劑之粒子，該等遞送劑包括可用於遞送各種分子至細胞之微米粒子、奈米粒子及轉染劑。特定組合物可有效轉染或遞送生物活性劑。較佳生物活性劑係RNA及DNA。在其他實施例中，生物活性劑係選自mRNA、gRNA及DNA。gRNA可為dgRNA或sgRNA。在某些實施例中，貨品子包括編碼RNA導向之DNA結合劑(例如Cas核酸酶、2類Cas核酸酶或Cas9)之mRNA、gRNA或編碼gRNA之核酸、或mRNA與gRNA之組合。
實例2-48、50-97、99-103及105-113中給出用於上述脂質組合物之示例性式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物。
在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物2。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物3。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物4。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物5。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物6。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物7。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物8。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物9。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物10。
在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物11。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物12。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物13。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物14。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物15。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物16。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物17。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物18。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物19。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物20。
在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物21。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物22。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物23。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物24。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物25。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物26。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物27。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物28。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物29。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物30。
在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物31。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物32。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物33。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物34。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物35。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物36。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物37。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物38。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物39。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物40。
在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物41。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物42。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物43。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物44。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物45。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物46。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物47。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物48。在某些實施例中，式(IA)化合物係化合物50。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物51。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物52。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物53。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物54。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物55。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物56。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物57。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物58。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物59。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物60。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物61。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物62。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物63。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物64。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物65。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物66。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物67。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物68。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物69。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物70。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物71。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物72。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物73。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物74。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物75。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物76。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物77。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物78。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物79。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物80。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物81。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物82。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物83。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物84。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物85。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物86。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物87。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物88。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物89。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物90。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物91。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物92。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物93。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物94。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物95。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物96。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物97。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物99。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物100。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物101。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物102。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物103。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物105。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物106。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物107。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物108。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物109。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物110。
在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物111。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物112。在某些實施例中，式(IA)化合物為化合物113。
在某些實施例中，化合物不為化合物1。在某些實施例中，化合物不為化合物49。在某些實施例中，化合物不為化合物114。LNP 組合物
脂質組合物可呈LNP組合物形式提供。脂質奈米粒子可為例如微球體(包括單層及多層囊泡，例如「脂質體」—層狀相脂質雙層，在一些實施例中其實質上為球形，且在更特定實施例中可包含水性核，例如包含很大一部分RNA分子)、於乳液中之分散相、膠束或於懸浮液中之內相。
LNP之大小為約1至約1,000 nm、約10至約500 nm、約20至約500 nm，在子實施例中約50至約400 nm，在子實施例中約50至約300 nm，在子實施例中約50至約200 nm，且在子實施例中約50至約150 nm，且在另一子實施例中約60至約120 nm。較佳地，LNP之大小為約60 nm至約100 nm。完全形成之LNP之平均大小(直徑)可藉由Malvern Zetasizer上之動態光散射來量測。將LNP樣品於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中稀釋，使得計數率為約200-400 kcps。數據表示為強度量測值之加權平均值。
本揭示案之實施例提供根據組合物中組分脂質之各別莫耳比闡述之脂質組合物。所有mol-%數皆隨LNP組合物或特別是LNP組合物之脂質組分變化給出。在某些實施例中，式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之mol-%可為約30 mol-%至約70 mol-%。在某些實施例中，式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之mol-%可為至少30 mol-%、至少40 mol-%、至少50 mol-%或至少60 mol-%。
在某些實施例中，中性脂質之mol-%可為約0 mol-%至約30 mol-%。在某些實施例中，中性脂質之mol-%可為約0 mol-%至約20 mol-%。在某些實施例中，中性脂質之mol-%可為約10 mol-%。在某些實施例中，中性脂質之mol-%可為約9 mol-%。
在某些實施例中，輔助脂質之mol-%可為約0 mol-%至約80 mol-%。在某些實施例中，輔助脂質之mol-%可為約20 mol-%至約60 mol-%。在某些實施例中，輔助脂質之mol-%可為約30 mol-%至約50 mol-%。在某些實施例中，輔助脂質之mol-%可為30 mol-%至約40 mol-%或約35% mol-%至約45 mol-%。在某些實施例中，基於式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物、中性脂質及/或PEG脂質濃度調節輔助脂質之mol-%以使脂質組分達到100 mol-%。
在某些實施例中，PEG脂質之mol-%可為約1 mol-%至約10 mol-%。在某些實施例中，PEG脂質之mol-%可為約1 mol-%至約4 mol-%。在某些實施例中，PEG脂質之mol-%可為約1 mol-%至約2 mol-%。在某些實施例中，PEG脂質之mol-%可為約1.5 mol-%。
在各個實施例中，LNP組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其鹽(諸如其醫藥學上可接受之鹽(例如，如本文所揭示))、中性脂質(例如DSPC)、輔助脂質(例如膽固醇)及PEG脂質(例如PEG2k-DMG)。在一些實施例中，LNP組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽(例如，如本文所揭示)、DSPC、膽固醇及PEG脂質。在一些該等實施例中，LNP組合物包括包含DMG之PEG脂質，諸如PEG2k-DMG。在某些較佳實施例中，LNP組合物包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、膽固醇、DSPC及PEG2k-DMG。
在某些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)包含脂質組分及核酸組分(例如RNA組分)，且可量測式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物對核酸之莫耳比。本揭示案之實施例亦提供具有式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物之醫藥學上可接受之鹽的帶正電胺基(N)與欲囊封之核酸之帶負電磷酸根基團(P)之間的界定莫耳比的脂質組合物。此可由等式N/P在數學上表示。在一些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)可包括包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的脂質組分；及核酸組分，其中N/P比率為約3至10。在一些實施例中，LNP組合物可包括包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的脂質組分；及RNA組分，其中N/P比率為約3至10。舉例而言，N/P比率可為約4-7。或者，N/P比率可為約6，例如6 ±1或6 ± 0.5。
在一些實施例中，水性組分包含生物活性劑。在一些實施例中，水性組分包含多肽，視情況與核酸組合。在一些實施例中，水性組分包含核酸，諸如RNA。在一些實施例中，水性組分係核酸組分。在一些實施例中，核酸組分包含DNA且其可稱為DNA組分。在一些實施例中，核酸組分包含RNA且其可稱為RNA組分。在一些實施例中，水性組分(諸如RNA組分)可包含mRNA，諸如編碼RNA導向之DNA結合劑的mRNA。在一些實施例中，RNA導向之DNA結合劑係Cas核酸酶。在某些實施例中，水性組分可包含編碼Cas9之mRNA。在某些實施例中，水性組分可包含gRNA。在包含編碼RNA導向之DNA結合劑之mRNA的一些組合物中，組合物還包含gRNA核酸，諸如gRNA。在一些實施例中，水性組分包含RNA導向之DNA結合劑及gRNA。在一些實施例中，水性組分包含Cas核酸酶mRNA及gRNA。在一些實施例中，水性組分包含2類Cas核酸酶mRNA及gRNA。
在某些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)可包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA、式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、輔助脂質、視情況中性脂質及PEG脂質。在包含編碼Cas核酸酶(例如2類Cas核酸酶)之mRNA的某些組合物中，輔助脂質係膽固醇。在包含編碼Cas核酸酶(例如2類Cas核酸酶)之mRNA的其他組合物中，中性脂質係DSPC。在包含編碼Cas核酸酶(例如2類Cas核酸酶，例如Cas9)之mRNA的額外實施例中，PEG脂質係PEG2k-DMG。在包含編碼Cas核酸酶(諸如2類Cas核酸酶)之mRNA及式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的具體組合物中。在某些組合物中，組合物還包含gRNA，諸如dgRNA或sgRNA。
在一些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)可包含gRNA。在某些實施例中，組合物可包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、gRNA、輔助脂質、視情況存在之中性脂質及PEG脂質。在包含gRNA之某些LNP組合物中，輔助脂質係膽固醇。在包含gRNA之一些組合物中，中性脂質係DSPC。在包含gRNA之額外實施例中，PEG脂質係PEG2k-DMG。在某些組合物中，gRNA係選自dgRNA及sgRNA。
在某些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)包含水性組分中的編碼RNA導向之DNA結合劑之mRNA及gRNA (其可為sgRNA)及脂質組分中之式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物。舉例而言，LNP組合物可包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、編碼Cas核酸酶之mRNA、gRNA、輔助脂質、中性脂質及PEG脂質。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA及gRNA的某些組合物中，輔助脂質係膽固醇。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA及gRNA的一些組合物中，中性脂質係DSPC。在包含編碼Cas核酸酶之mRNA及gRNA的額外實施例中，PEG脂質係PEG2k-DMG。
在某些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)包括RNA導向之DNA結合劑(諸如2類Cas mRNA)及至少一種gRNA。在某些實施例中，LNP組合物包括約1:1或約1:2之gRNA對RNA導向之DNA結合劑mRNA (諸如2類Cas核酸酶mRNA)的比率。在一些實施例中，該比率為約25:1至約1:25、約10:1至約1:10、約8:1至約1:8、約4:1至約1:4或約2:1至約1:2。
本文揭示之脂質組合物(諸如LNP組合物)可包括模板核酸，例如DNA模板。模板核酸可與包含式(IA)、(I)、(II)或(III)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之脂質組合物、包括LNP組合物一起或分開遞送。在一些實施例中，視期望修復機制而定，模板核酸可為單股或雙股。模板可具有與靶DNA、例如在靶DNA序列內，及/或與毗鄰靶DNA之序列同源之區。
在一些實施例中，LNP係藉由將RNA水溶液與基於有機溶劑之脂質溶液混合來形成。適宜溶液或溶劑包括或可含有：水、PBS、Tris緩衝液、NaCl、檸檬酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液、乙醇、氯仿、二乙醚、環己烷、四氫呋喃、甲醇、異丙醇。舉例而言，有機溶劑可為100%乙醇。可使用醫藥學上可接受之緩衝液，例如用於活體內投與LNP。在某些實施例中，使用緩衝液以將包含LNP之組合物之pH值維持於pH 6.5下或高於pH 6.5。在某些實施例中，使用緩衝液以將包含LNP之組合物之pH值維持於pH 7.0下或高於pH 7.0。在某些實施例中，組合物之pH值在約7.2至約7.7之範圍內。在其他實施例中，組合物之pH值在約7.3至約7.7之範圍內或在約7.4至約7.6之範圍內。在其他實施例中，組合物之pH值為約7.2、7.3、7.4、7.5、7.6或7.7。可利用微型pH探針量測組合物之pH值。在某些實施例中，組合物中包括低溫保護劑。低溫保護劑之非限制性實例包括蔗糖、海藻糖、甘油、DMSO及乙二醇。示例性組合物可包括高達10%低溫保護劑，諸如蔗糖。在某些實施例中，組合物可包含tris鹽水蔗糖(TSS)。在某些實施例中，LNP組合物可包括約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%低溫保護劑。在某些實施例中，LNP組合物可包括約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%蔗糖。在一些實施例中，LNP組合物可包括緩衝液。在一些實施例中，緩衝液可包含磷酸鹽緩衝液(PBS)、Tris緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及其混合物。在某些示例性實施例中，緩衝液包含NaCl。在某些實施例中，緩衝液無NaCl。NaCl之示例性量可在約20 mM至約45 mM之範圍內。NaCl之示例性量可在約40 mM至約50 mM之範圍內。在一些實施例中，NaCl之量為約45 mM。在一些實施例中，緩衝液係Tris緩衝液。Tris之示例性量可在約20 mM至約60 mM之範圍內。Tris之示例性量可在約40 mM至約60 mM之範圍內。在一些實施例中，Tris之量為約50 mM。在一些實施例中，緩衝液包含NaCl及Tris。LNP組合物之某些示例性實施例含有5%蔗糖及Tris緩衝液中之45 mM NaCl。在其他示例性實施例中，組合物含有約5% w/v之量的蔗糖、約45 mM NaCl及約50 mM Tris (pH 7.5)。鹽、緩衝液及低溫保護劑之量可變，使得維持整體組合物之滲透壓。舉例而言，可維持最終滲透壓低於450 mOsm/L。在其他實施例中，滲透壓介於350 mOsm/L與250 mOsm/L之間。某些實施例具有300 +/- 20 mOsm/L或310 +/- 40 mOsm/L之最終滲透壓。
在一些實施例中，使用RNA水溶液及有機溶劑中之脂質溶液的微流體混合、T混合或交叉混合。在某些態樣中，流速、接頭大小、接頭幾何學、接頭形狀、管直徑、溶液及/或RNA及脂質濃度可變。LNP或LNP組合物可經由例如透析、離心式過濾器、切向流過濾或層析來濃縮或純化。例如，LNP可呈懸浮液、乳液或凍乾粉末儲存。在一些實施例中，LNP組合物儲存於2-8℃下，在某些態樣中，LNP組合物儲存於室溫下。在其他實施例中，LNP組合物於例如-20℃或-80℃下冷凍儲存。在其他實施例中，LNP組合物儲存於約0℃至約-80℃範圍內之溫度下。冷凍之LNP組合物可在使用之前例如在冰上、於室溫下或於25℃下解凍。
LNP可為例如微球體(包括單層及多層囊泡，例如「脂質體」—層狀相脂質雙層，在一些實施例中其實質上為球形—且在更特定實施例中可包含水性核，例如，包含很大一部分RNA分子)、於乳液中之分散相、膠束或懸浮液中之內相。
較佳脂質組合物(諸如LNP組合物)係生物可降解的，因為其在治療有效劑量下不會在活體內累積至細胞毒性水準。在一些實施例中，組合物在治療劑量水準下不會引起導致明顯不良影響之先天免疫反應。在一些實施例中，本文提供之組合物在治療劑量水準下不會引起毒性。
在一些實施例中，本文揭示之LNP的多分散性指數(PDI)可在約0.005至約0.75之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0.01至約0.5之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0至約0.4之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0至約0.35之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0至約0.35之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0至約0.3之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0至約0.25之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可在約0至約0.2之範圍內。在一些實施例中，LNP之PDI可小於約0.08、0.1、0.15、0.2或0.4。
本文揭示之LNP之大小(例如Z-平均直徑)為約1至約250 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約10至約200 nm。在其他實施例中，LNP之大小為約20至約150 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約50至約150 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約50至約100 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約50至約120 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約60至約100 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約75至約150 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約75至約120 nm。在一些實施例中，LNP之大小為約75至約100 nm。除非另外指示，否則本文中提及之所有大小皆係如藉由Malvern Zetasizer上之動態光散射量測之完全成形之奈米粒子的平均大小(直徑)。將奈米粒子樣品於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中稀釋，使得計數率為約200-400 kcps。數據表示為強度量測值之加權平均值(Z-平均直徑)。
在一些實施例中，LNP係以約50%至約100%範圍內之平均囊封效率形成。在一些實施例中，LNP係以約50%至約95%範圍內之平均囊封效率形成。在一些實施例中，LNP係以約70%至約90%範圍內之平均囊封效率形成。在一些實施例中，LNP係以約90%至約100%範圍內之平均囊封效率形成。在一些實施例中，LNP係以約75%至約95%範圍內之平均囊封效率形成。 貨品子
經由LNP組合物遞送之貨品子可為生物活性劑。在某些實施例中，貨品子係或包含一或多種生物活性劑、諸如mRNA、嚮導RNA、核酸、表現載體、模板核酸、RNA導向之DNA結合劑、抗體(例如單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、奈米抗體及其片段等)、膽固醇、激素、肽、蛋白質、化學治療劑及其他類型之抗瘤劑、低分子量藥物、維生素、輔因子、核苷、核苷酸、寡核苷酸、酶核酸、反義核酸、三聯體形成寡核苷酸、反義DNA或RNA組合物、嵌合DNA:RNA組合物、等位基因酶、適配體、核酶、誘餌及其類似物、質體及其他類型之載體及小核酸分子、RNAi劑、短干擾核酸(siNA)、短干擾RNA (siRNA)、雙股RNA (dsRNA)、微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)及「自我複製RNA」(編碼複製酶酶活性且能夠引導其自身活體內複製或擴增)分子、肽核酸(PNA)、鎖核酸核糖核苷酸(LNA)、嗎啉基核苷酸、蘇糖核酸(TNA)、二醇核酸(GNA)、sisiRNA (小內部片段化干擾RNA)及iRNA (不對稱干擾RNA)。生物活性劑之以上清單僅係示例性的，且並不意欲具有限制性。該等化合物可經純化或部分純化，且可為天然存在或合成的，且可經化學修飾。
經由LNP組合物遞送之貨品子可為RNA，諸如編碼所關注蛋白之mRNA分子。舉例而言，包括用於表現蛋白質(諸如綠色螢光蛋白(GFP))、RNA導向之DNA結合劑或Cas核酸酶之mRNA。提供包括Cas核酸酶mRNA (例如允許在細胞中表現2類Cas核酸酶(諸如Cas9或Cpf1蛋白)之2類Cas核酸酶mRNA)的LNP組合物。此外，貨品子可含有一或多種嚮導RNA或編碼嚮導RNA之核酸。組合物中亦可包括例如修復或重組用模板核酸，或本文所述之方法中可使用模板核酸。在一子實施例中，貨品子包含編碼釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes ) Cas9之mRNA，視情況以及釀膿鏈球菌gRNA。在又一子實施例中，貨品子包含編碼腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis ) Cas9之mRNA，視情況以及nme gRNA。
「mRNA」係指多核苷酸且包含可轉譯成多肽之開放閱讀框(亦即，可用作由核糖體及胺基-醯化tRNA轉譯之受質)。mRNA可包含磷酸酯-糖主鏈，包括核糖殘基或其類似物，例如2’-甲氧基核糖殘基。在一些實施例中，mRNA磷酸酯-糖主鏈之糖基本上由核糖殘基、2'-甲氧基核糖殘基或其組合組成。通常，mRNA不含有大量胸苷殘基(例如，0個殘基或少於30個、20個、10個、5個、4個、3個或2個胸苷殘基；或少於10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.2%或0.1%胸苷含量)。mRNA可在其一些或所有尿苷位置含有經修飾尿苷。 CRISPR/Cas貨品子
在某些實施例中，所揭示之組合物包含編碼RNA導向之DNA結合劑(諸如Cas核酸酶)之mRNA。在特定實施例中，所揭示之組合物包含編碼2類Cas核酸酶(諸如釀膿鏈球菌Cas9)之mRNA。
如本文所用，「RNA導向之DNA結合劑」意指具有RNA及DNA結合活性之多肽或多肽之複合物，或該複合物之DNA結合子單元，其中DNA結合活性具有序列特異性且視RNA之序列而定。示例性RNA導向之DNA結合劑包括Cas裂解酶/缺口酶及其不活化形式(「dCas DNA結合劑」)。如本文所用，「Cas核酸酶」涵蓋Cas裂解酶、Cas缺口酶及dCas DNA結合劑。Cas裂解酶/缺口酶及dCas DNA結合劑包括III型CRISPR系統之Csm或Cmr複合物、其Cas10、Csm1或Cmr2子單元、I型CRISPR系統之級聯複合物、其Cas3子單元及2類Cas核酸酶。如本文所用，「2類Cas核酸酶」係具有RNA導向之DNA結合活性的單鏈多肽。2類Cas核酸酶包括2類Cas裂解酶/缺口酶(例如H840A、D10A或N863A變異體)，其進一步具有RNA導向之DNA裂解酶或缺口酶活性；及2類dCas DNA結合劑，其中裂解酶/缺口酶活性不活化。2類Cas核酸酶包括例如Cas9、Cpf1、C2c1、C2c2、C2c3、HF Cas9 (例如N497A、R661A、Q695A、Q926A變異體)、HypaCas9 (例如N692A、M694A、Q695A、H698A變異體)、eSPCas9(1.0) (例如K810A、K1003A、R1060A變異體)及eSPCas9(1.1) (例如K848A、K1003A、R1060A變異體)蛋白及其修飾形式。Cpf1蛋白(Zetsche等人，Cell , 163: 1-13 (2015))與Cas9同源，且含有RuvC樣核酸酶結構域。Zetsche之Cpf1序列以引用方式整體併入。參見例如Zetsche, 表S1及S3。參見例如Makarova等人,Nat Rev Microbiol , 13(11): 722-36 (2015)；Shmakov等人,Molecular Cell, 60:385-397 (2015)。
如本文所用，「核糖核蛋白」(RNP)或「RNP複合物」係指嚮導RNA以及RNA導向之DNA結合劑，例如Cas核酸酶，例如Cas裂解酶、Cas缺口酶或dCas DNA結合劑(例如Cas9)。在一些實施例中，嚮導RNA將RNA導向之DNA結合劑(例如Cas9)引導至靶序列，且嚮導RNA與靶序列雜交且劑結合至靶序列；在劑係裂解酶或缺口酶之情形下，結合後可裂解或形成缺口。
在本揭示案之一些實施例中，LNP組合物之貨品子包括至少一種嚮導RNA，該嚮導RNA包含將可為核酸酶(例如Cas核酸酶，諸如Cas9)之RNA導向之DNA結合劑引導至靶DNA的嚮導序列。gRNA可將Cas核酸酶或2類Cas核酸酶引導至靶核酸分子上之靶序列。在一些實施例中，gRNA結合2類Cas核酸酶且提供由2類Cas核酸酶裂解之特異性。在一些實施例中，gRNA及Cas核酸酶可形成核糖核蛋白(RNP)，例如CRISPR/Cas複合物，諸如CRISPR/Cas9複合物。在一些實施例中，CRISPR/Cas複合物可為II型CRISPR/Cas9複合物。在一些實施例中，CRISPR/Cas複合物可為V型CRISPR/Cas複合物，諸如Cpf1/嚮導RNA複合物。Cas核酸酶及同源gRNA可配對。與每一2類Cas核酸酶配對之gRNA支架結構隨著特定CRISPR/Cas系統而變。
「嚮導RNA」、「gRNA」及簡單地「嚮導」在本文中可互換使用，係指RNA導向之DNA結合劑的同源嚮導核酸。gRNA可為crRNA (亦稱為CRISPR RNA)或crRNA與trRNA之組合(亦稱為tracrRNA)。嚮導RNA可包括如本文所述之經修飾之RNA。crRNA及trRNA可作為單一RNA分子(單嚮導RNA，sgRNA)或以兩個單獨RNA分子(雙重嚮導RNA，dgRNA)締合。「嚮導RNA」或「gRNA」係指每一類型。trRNA可為天然存在之序列，或與天然存在之序列相比具有修飾或變化之trRNA序列。
如本文所用，「嚮導序列」係指嚮導RNA內與靶序列互補且用於將嚮導RNA引導至靶序列以由RNA導向之DNA結合劑結合或修飾(例如裂解)之序列。「嚮導序列」亦可稱為「靶向序列」或「間隔序列」。例如，在釀膿鏈球菌(亦即，Spy Cas9)及相關之Cas9同係物/直向同源物之情形下，嚮導序列之長度可為20個鹼基對。亦可使用更短或更長之序列作為嚮導，例如長度為15個、16個、17個、18個、19個、21個、22個、23個、24個或25個核苷酸。在一些實施例中，例如，靶序列係在基因中或在染色體上，且與嚮導序列互補。在一些實施例中，嚮導序列與其相應靶序列之間的互補或一致性程度可為約或至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在一些實施例中，嚮導序列及靶區可在至少15個、16個、17個、18個、19個或20個鄰接核苷酸上100%互補或一致。在其他實施例中，嚮導序列及靶區可含有至少一個錯配。舉例而言，嚮導序列及靶序列可含有1個、2個、3個或4個錯配，其中靶序列之總長度為至少17個、18個、19個、20個或更多個鹼基對。在一些實施例中，嚮導序列及靶區可含有1-4個錯配，其中嚮導序列包含至少17個、18個、19個、20個或更多個核苷酸。在一些實施例中，嚮導序列及靶區可含有1個、2個、3個或4個錯配，其中嚮導序列包含20個核苷酸。
RNA導向之DNA結合蛋白(諸如Cas蛋白)之靶序列包括基因組DNA之正股及負股(亦即，給出之序列及序列之反向互補序列)，此乃因為Cas蛋白之核酸受質係雙股核酸。因此，當稱嚮導序列「與靶序列互補」時，應理解，嚮導序列可引導gRNA結合至靶序列之反向互補序列。因此，在嚮導序列結合靶序列之反向互補序列之一些實施例中，嚮導序列與靶序列之某些核苷酸一致(例如，靶序列不包括PAM)，只是在嚮導序列中用U取代T。
靶向序列之長度可視所用之CRISPR/Cas系統及組分而定。舉例而言，來自不同細菌物種之不同2類Cas核酸酶具有改變的最佳靶向序列長度。因此，靶向序列之長度可包含5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個、30個、35個、40個、45個、50個或超過50個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列長度比天然存在之CRISPR/Cas系統之嚮導序列長或短0個、1個、2個、3個、4個或5個核苷酸。在某些實施例中，Cas核酸酶及gRNA支架將源自相同CRISPR/Cas系統。在一些實施例中，靶向序列可包含18-24個核苷酸或由其組成。在一些實施例中，靶向序列可包含19-21個核苷酸或由其組成。在一些實施例中，靶向序列可包含20個核苷酸或由其組成。
在一些實施例中，sgRNA係能夠介導Cas9蛋白對RNA導向之DNA裂解的「Cas9 sgRNA」。在一些實施例中，sgRNA係能夠介導Cpf1蛋白對RNA導向之DNA裂解的「Cpf1 sgRNA」。在某些實施例中，gRNA包含足以與Cas9蛋白形成活性複合物且介導RNA導向之DNA裂解的crRNA及tracr RNA。在某些實施例中，gRNA包含足以與Cpf1蛋白形成活性複合物且介導RNA導向之DNA裂解的crRNA。參見Zetsche 2015。
本揭示案之某些實施例亦提供編碼本文所述之gRNA的核酸，例如表現卡匣。「嚮導RNA核酸」在本文中用於指嚮導RNA (例如sgRNA或dgRNA)及嚮導RNA表現卡匣，其係編碼一或多種嚮導RNA之核酸。 經修飾之RNA
在某些實施例中，脂質組合物(諸如LNP組合物)包含經修飾之核酸，包括經修飾之RNA。
經修飾之核苷或核苷酸可存在於RNA (例如gRNA或mRNA)中。例如，包含一或多個經修飾核苷或核苷酸之gRNA或mRNA稱為「經修飾」RNA，以闡述一或多種代替典型A、G、C及U殘基使用或除典型A、G、C及U殘基之外亦使用之非天然及/或天然存在之組分或構形的存在。在一些實施例中，利用非典型核苷或核苷酸合成經修飾之RNA，在此稱為「經修飾」。
經修飾之核苷及核苷酸可包括以下中之一或多者：(i)改變、例如置換非連接磷酸酯氧中之一者或二者及/或磷酸二酯主鏈連接中之連接磷酸酯氧中之一或多者(示例性主鏈修飾)；(ii)改變、例如置換核糖之成分，例如核糖上之2'羥基(示例性糖修飾)；(iii)用「去磷酸化」連接子大批置換磷酸酯部分(示例性主鏈修飾)；(iv)包括用非典型核鹼基修飾或置換天然存在之核鹼基(示例性鹼基修飾)；(v)置換或修飾核糖-磷酸酯主鏈(示例性主鏈修飾)；(vi)修飾寡核苷酸之3'端或5'端，例如移除、修飾或置換末端磷酸酯基團或結合部分、帽或連接子(該等3'或5'帽修飾可包含糖及/或主鏈修飾)；及(vii) 修飾或置換糖(示例性糖修飾)。
某些實施例包含對mRNA、gRNA或核酸之修飾。某些實施例包含對mRNA、gRNA或核酸之5'端修飾。某些實施例包含對mRNA、gRNA或核酸之3'端修飾。經修飾之RNA可含有5'端及3'端修飾。經修飾之RNA可在非末端位置含有一或多個經修飾之殘基。在某些實施例中，gRNA包括至少一個經修飾之殘基。在某些實施例中，mRNA包括至少一個經修飾之殘基。
未經修飾之核酸可易於經例如細胞核酸內切酶或血清中發現之彼等酶降解。舉例而言，核酸酶可水解核酸磷酸二酯鍵。因此，在一個態樣中，本文所述RNA (例如mRNA、gRNA)可含有一或多個經修飾核苷或核苷酸，例如，以引入對細胞內或基於血清之核酸酶之穩定性。在一些實施例中，當活體內及離體引入至細胞群體中時，本文所述之經修飾之gRNA分子可展現降低之先天免疫反應。術語「先天免疫反應」包括對外源性核酸(包括單股核酸)之細胞反應，反應包括誘導細胞介素、尤其是干擾素之表現及釋放，及細胞死亡。
因此，在一些實施例中，所揭示LNP組合物中之RNA或核酸包含至少一個賦予核酸增加或增強之穩定性(包括例如改良之對活體核酸內切酶消化之抗性)的修飾。如本文所用，術語「修飾」及「經修飾」在該等術語涉及本文提供之核酸時包括至少一個較佳地增強RNA或核酸之穩定性且使RNA或核酸比野生型或天然存在型式之RNA或核酸更穩定(例如，抗核酸酶消化)的改變。如本文所用，術語「穩定的」及「穩定性」在該等術語涉及本揭示案之核酸，且尤其是關於RNA時係指對由例如核酸酶(亦即，核酸內切酶或核酸外切酶)降解之抗性增加或增強，該等核酸酶通常能夠降解該RNA。增加之穩定性可包括例如對水解或由內源性酶(例如，核酸內切酶或核酸外切酶)之其他破壞或靶細胞或組織內之條件的敏感性較小，藉此增加或增強該等RNA或核酸在靶細胞、組織、個體及/或細胞質中之保留。本文提供之穩定之RNA或核酸分子相對於其天然存在之未經修飾之對應體(例如野生型型式之mRNA)展現更長之半衰期。術語「修飾」及「經修飾」在涉及本文揭示之LNP組合物之mRNA時該等術語亦涵蓋改良或增強mRNA核酸之轉譯的改變，包括例如納入在蛋白質轉譯之起始中起作用的序列(例如Kozak一致序列)。(Kozak, M., Nucleic Acids Res 15 (20): 8125-48 (1987))。
在一些實施例中，本文揭示之LNP組合物之RNA或核酸經歷化學或生物學修飾以使其更穩定。RNA、諸如mRNA之示例性修飾包括減少鹼基(例如，藉由缺失或藉由將一個核苷酸取代為另一個核苷酸)或鹼基修飾，例如鹼基化學修飾。如本文所用，片語「化學修飾」包括引入不同於天然存在之RNA或核酸中所觀察到之彼等化學之化學的修飾，例如共價修飾，諸如引入經修飾之核苷酸(例如核苷酸類似物，或納入在該等RNA或核酸分子中未天然發現之懸垂基團)。
在主鏈修飾之一些實施例中，經修飾之殘基之磷酸酯基團可藉由用不同取代基置換一或多個氧來修飾。此外，經修飾之殘基(例如經修飾之核酸中存在之經修飾之殘基)可包括用如本文所述之經修飾之磷酸酯基團大批置換未經修飾之磷酸酯部分。在一些實施例中，磷酸酯主鏈之主鏈修飾包括產生不帶電連接子或帶有不對稱電荷分佈之帶電連接子的改變。
經修飾之磷酸酯基團之實例包括硫代磷酸酯、磷酸硒酸酯、硼烷基磷酸酯(borano phosphates)、硼烷基磷酸酯(borano phosphate esters)、膦酸氫酯、磷醯胺酯、膦酸烷基酯或膦酸芳基酯及磷酸三酯。未經修飾之磷酸酯基團中之磷原子係非對掌性的。然而，用上述原子或原子群中之一者置換非橋接氧中之一者可使磷原子具有對掌性。立體異構磷原子可具有「R」構形(本文為Rp)或「S」構形(本文為Sp)。主鏈亦可藉由用氮(橋接磷醯胺酯)、硫(橋接硫代磷酸酯)及碳(橋接亞甲基膦酸酯)置換橋接氧(亦即將磷酸酯連接至核苷之氧)來修飾。置換可在任一連接氧或兩個連接氧處發生。在某些主鏈修飾中，磷酸酯基團可由不含磷之連接基團置換。在一些實施例中，帶電之磷酸酯基團可由天然部分置換。可置換磷酸酯基團之部分之實例可包括(但不限於)例如膦酸甲基酯、羥基胺基、矽氧烷、碳酸酯、羧基甲基、胺基甲酸酯、醯胺、硫醚、環氧乙烷連接子、磺酸酯、磺醯胺、硫代甲縮醛、甲縮醛、肟、亞甲基亞胺基、亞甲基甲基亞胺基、亞甲基伸肼基、亞甲基二甲基伸肼基及亞甲基氧基甲基亞胺基。mRNA
在一些實施例中，本文揭示之組合物或調配物包括包含編碼如本文所述之RNA導向之DNA結合劑(諸如Cas核酸酶或2類Cas核酸酶)之開放閱讀框(ORF)的mRNA。在一些實施例中，提供、使用或投與包含編碼RNA導向之DNA結合劑(諸如Cas核酸酶或2類Cas核酸酶)之ORF的mRNA。mRNA可包含5'帽、5'未轉譯區(UTR)、3' UTR及多腺嘌呤尾中之一或多者。mRNA可包含經修飾之開放閱讀框，例如以編碼核定位序列或使用替代密碼子編碼蛋白質。
所揭示LNP組合物中之mRNA可編碼例如分泌之激素、酶、受體、多肽、肽或正常分泌之其他所關注蛋白質。在一個實施例中，mRNA可視情況具有化學或生物學修飾，該等修飾例如改善該mRNA之穩定性及/或半衰期或者改善或以其他方式有利於蛋白質產生。
另外，適宜修飾包括密碼子之一或多個核苷酸的改變，使得密碼子編碼相同胺基酸，但比野生型型式之mRNA中發現之密碼子更穩定。舉例而言，已證明RNA之穩定性與較大數目之胞苷(C)及/或尿苷(U)殘基之間的反向關係，且已發現無C及U殘基之RNA對於大部分RNA酶穩定(Heidenreich等人 J Biol Chem 269, 2131-8 (1994))。在一些實施例中，mRNA序列中C及/或U殘基之數目減少。在另一實施例中，藉由用編碼特定胺基酸之一個密碼子取代編碼相同或有關胺基酸之另一密碼子來減少C及/或U殘基之數目。所涵蓋之對mRNA核酸之修飾亦包括納入假尿苷。向mRNA核酸中納入假尿苷可增強穩定性及轉譯能力，以及降低活體內免疫原性。參見例如Karikó, K.等人, Molecular Therapy 16 (11): 1833-1840 (2008)。對mRNA之取代及修飾可藉由熟習此項技術者易知之方法來實施。
與未轉譯區相比，對減少序列中C及U殘基之數目的限制在mRNA之編碼區內將可能更大(亦即，將可能無法消除信使中存在之所有C及U殘基，同時仍保留信使編碼期望胺基酸序列之能力)。然而，遺傳代碼之簡併性提供機會允許序列中存在之C及/或U殘基的數目減少，同時維持相同編碼能力(亦即，視密碼子所編碼之胺基酸而定，用於修飾RNA序列之若干不同可能性可為可能的)。
術語修飾亦包括例如向mRNA序列中納入非核苷酸鍵或經修飾之核苷酸(例如，修飾編碼功能性分泌蛋白質或酶之mRNA分子之3’及5’端中之一者或二者)。該等修飾包括向mRNA序列添加鹼基(例如，納入多A尾或更長的多A尾)、改變3’ UTR或5’ UTR、使mRNA與劑(例如，蛋白質或互補核酸分子)複合及納入改變mRNA分子之結構的要素(例如，該等要素形成二級結構)。
據信多A尾穩定天然信使。因此，在一個實施例中，可將長的多A尾添加至mRNA分子中，因此使得mRNA更穩定。多A尾可使用各種業內公認之技術添加。舉例而言，可使用多A聚合酶將長的多A尾添加至合成或活體外轉錄之mRNA中(Yokoe等人Nature Biotechnology. 1996; 14: 1252-1256)。轉錄載體亦可編碼長的多A尾。另外，多A尾可藉由直接自PCR產物轉錄來添加。在一個實施例中，多A尾之長度為至少約90個、200個、300個、400個、至少500個核苷酸。在一個實施例中，調節多A尾之長度以控制經修飾之mRNA分子的穩定性，且因此控制蛋白質之轉錄。舉例而言，由於多A尾之長度可影響mRNA分子之半衰期，故可調節多A尾之長度以修飾mRNA對核酸酶之抗性的水準且藉此控制細胞中蛋白質表現之時程。在一個實施例中，穩定之mRNA分子足以抵抗活體內降解(例如，核酸酶降解)，使得其可在無轉移媒劑之情況下遞送至靶細胞。
在一個實施例中，可藉由納入在野生型mRNA中未天然發現之3’及/或5’未轉譯(UTR)序列修飾mRNA。在一個實施例中，可將天然側接mRNA且編碼第二無關蛋白質之3’及/或5’側接序列納入編碼治療性或功能性蛋白質之mRNA分子的核苷酸序列中以對其進行修飾。舉例而言，可將穩定mRNA分子(例如，珠蛋白、肌動蛋白、GAPDH、微管蛋白、組織蛋白或檸檬酸循環酶)之3’或5’序列納入有義mRNA核酸分子之3’及/或5’區以提高有義mRNA分子之穩定性。參見例如US2003/0083272。
mRNA修飾之更詳細說明可參見US2017/0210698A1，第57-68頁，該案件之內容併入本文中。模板核酸
本文揭示之組合物及方法可包括模板核酸。模板可用於在RNA導向之DNA結合蛋白(諸如Cas核酸酶，例如2類Cas核酸酶)之靶位點處或附近改變或插入核酸序列。在一些實施例中，該等方法包括向細胞引入模板。在一些實施例中，可提供單一模板。在其他實施例中，可提供兩個或更多個模板，使得可在兩個或更多個靶位點處進行編輯。舉例而言，可提供不同模板以編輯細胞中之單一基因，或細胞中之兩個不同基因。
在一些實施例中，模板可用於同源重組。在一些實施例中，同源重組可將模板序列或一部分模板序列整合至靶核酸分子中。在其他實施例中，模板可用於同源性引導之修復，該同源性引導之修復涉及在核酸中之裂解位點處DNA股侵入。在一些實施例中，同源性引導之修復可引起編輯之靶核酸分子中納入模板序列。在其他實施例中，模板可用於由非同源端接合介導之基因編輯。在一些實施例中，模板序列與裂解位點附近之核酸序列無相似性。在一些實施例中，納入模板或一部分模板序列。在一些實施例中，模板包括側接反向末端重複(ITR)序列。
在一些實施例中，模板序列可對應於、包含靶細胞之內源序列或由其組成。其亦可或另一選擇為對應於、包含靶細胞之外源序列或由其組成。如本文所用之術語「內源序列」係指細胞天然之序列。術語「外源序列」係指細胞非天然之序列，或在細胞之基因組中之天然位置係在不同位置處的序列。在一些實施例中，內源序列可為細胞之基因組序列。在一些實施例中，內源序列可為染色體或染色體外序列。在一些實施例中，內源序列可為細胞之質體序列。
在一些實施例中，模板含有含側接反向末端重複(ITR)序列之ssDNA或dsDNA。在一些實施例中，模板以載體、質體、微環、奈米環或PCR產物形式提供。
在一些實施例中，核酸係經純化的。在一些實施例中，使用沈澱方法(例如LiCl沈澱、醇沈澱或例如如本文所述之等效方法)純化核酸。在一些實施例中，使用基於層析之方法(諸如基於HPLC之方法)或等效方法(例如，如本文所述)純化核酸。在一些實施例中，使用沈澱方法(例如LiCl沈澱)及基於HPLC之方法二者純化核酸。在一些實施例中，藉由切向流過濾(TFF)純化核酸。
化合物或組合物將通常(但不必)包括一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。術語「賦形劑」包括除本揭示案之化合物、其他脂質組分及生物活性劑以外的任何成分。賦形劑可賦予組合物功能(例如藥物釋放速率控制)及/或非功能(例如加工助劑或稀釋劑)特徵。賦形劑之選擇在很大程度上視諸如特定投與模式、賦形劑對溶解度及穩定性之影響以及劑型之性質的因素而定。
非經腸調配物通常為水性或油性溶液或懸浮液。在調配物為水性之情況下，賦形劑諸如為糖(包括但不限於葡萄糖、甘露醇、山梨醇等)、鹽、碳水化合物及緩衝劑(較佳至3至9之pH)，但對於一些應用，可能更適合與無菌非水性溶液調配在一起或調配為乾燥形式以結合適宜媒劑(諸如無菌無致熱源水(WFI))一起使用。
儘管將結合所闡釋實施例來闡述本發明，但應理解，該等實施例並不意欲將本發明限於彼等實施例。相反，本發明意欲涵蓋可包括於隨附申請專利範圍所界定之本發明內之所有替代、修改及等效形式，包括具體特徵之等效形式。
上述一般說明及詳細說明二者以及以下實例僅具有示例性及說明性，且不限制教示。本文所用各部分標題僅出於組織之目的，且不應視為以任何方式限制期望標的物。倘若以引用方式併入之任何文獻與本說明書中定義之任何術語出現衝突，則以本說明書為準。除非另外說明，否則申請案中給出之所有範圍皆涵蓋端點。定義
應注意，除非上下文另外明確規定，否則如本申請案中所用之單數形式「一」(「a」、「an」)及「該」包括複數個指示物。因此，例如，在提及「組合物」時包括複數個組合物且在提及「細胞」時包括複數個細胞及諸如此類。「或」之使用具有包括性且除非另外說明，否則意指「及/或」。
除非在上述說明書中另外明確指出，否則說明書中敍述「包含」各種組分之實施例亦涵蓋為「由所敍述組分組成」或「基本上由所敍述組分組成」；說明書中敍述「由各種組分組成」之實施例亦涵蓋為「包含」所敍述組分或「基本上由所敍述組分組成」；說明書中敍述「在各種組分附近」之實施例亦涵蓋為「在所敍述組分處」；且說明書中敍述「基本上由各種組分組成」之實施例亦涵蓋為「由所敍述組分組成」或「包含」所敍述組分(此互換性並不適用於該等術語在申請專利範圍中之使用)。
數字範圍包括界定該範圍之數字。量測值及可量測值應理解為近似值，考慮有效數位及與量測相關之誤差。如本申請案中所用之術語「約」及「大約」具有其業內理解之含義；一與其他之使用不一定暗指不同範疇。除非另外指示，否則本申請案中所用之具有或無修飾術語(諸如「約」或「大於」)之數字應理解為涵蓋如有關技術之熟練人員所瞭解之正常發散及/或波動。在某些實施例中，除非另外說明或另外自上下文明了(該數字將超過可能值之100%的情形除外)，否則術語「大約」或「約」係指在任一方向上(大於或小於)所述參照值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小內的值之範圍。
如本文所用，術語「接觸」意指建立兩個或更多個實體之間的物理連接。舉例而言，使哺乳動物細胞與奈米粒子組合物接觸意指使得哺乳動物細胞及奈米粒子共享物理連接。使細胞與外部實體在活體內及離體接觸之方法係生物技術中所熟知的。舉例而言，使奈米粒子組合物與安置於哺乳動物內之哺乳動物細胞接觸可藉由各種投與途徑(例如靜脈內、肌內、真皮內及皮下)來實施且可涉及各種量之奈米粒子組合物。此外，奈米粒子組合物可接觸超過一種哺乳動物細胞。
如本文所用，術語「遞送」意指將實體提供至目的地。舉例而言，遞送治療劑及/或預防劑至個體可涉及向個體投與包括治療劑及/或預防劑之奈米粒子組合物(例如藉由靜脈內、肌內、真皮內或皮下途徑)。向哺乳動物或哺乳動物細胞投與奈米粒子組合物可涉及使一或多個細胞與奈米粒子組合物接觸。
如本文所用之「囊封效率」係指相對於用於製備奈米粒子組合物之治療劑及/或預防劑之初始總量，變為奈米粒子組合物之一部分之治療劑及/或預防劑的量。舉例而言，若在初始提供給組合物之總共100 mg治療劑及/或預防劑中，97 mg治療劑及/或預防劑囊封於奈米粒子組合物中，則囊封效率可給出為97%。如本文所用之「囊封」可指完全、實質或部分圍繞、限制、包圍或包繞。
如本文所用之術語「生物可降解」用於指在引入細胞中時藉由細胞機制(例如酶降解)或藉由水解而分解成細胞可重新使用或處理但對細胞無毒性效應之組分的材料。在某些實施例中，生物可降解材料之分解所生成的組分在活體內不誘發炎症及/或其他不良影響。在一些實施例中，生物可降解材料以酶促方式分解。或者或另外，在一些實施例中，生物可降解材料藉由水解分解。
如本文所用，「N/P比率」係例如包括脂質組分及RNA之奈米粒子組合物中脂質(例如式I化合物)中可離子化(在生理pH範圍內)氮原子與RNA中之磷酸根基團的莫耳比。
組合物亦可包括一或多種化合物之鹽。鹽可為醫藥學上可接受之鹽。如本文所用之「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示化合物之衍生物，其中藉由將現存酸或鹼部分轉化為其鹽形式(例如藉由使游離鹼基團與適宜有機酸反應)改變母化合物。醫藥學上可接受之鹽之實例包括(但不限於)鹼性殘基(例如胺)之無機酸鹽或有機酸鹽；酸性殘基(例如羧酸)之鹼性鹽或有機鹽；及諸如此類。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、已酸鹽、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似物。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其類似物，以及無毒性銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺及其類似物。本揭示案之醫藥學上可接受之鹽包括例如自無毒無機酸或有機酸形成之母化合物之習用無毒鹽。本揭示案之醫藥學上可接受之鹽可藉由習用化學方法自含有鹼性或酸性部分之母化合物來合成。通常，該等鹽可藉由在水或有機溶劑或二者之混合物中使該等化合物之游離酸或鹼形式與化學計算量之適當鹼或酸反應來製備；通常，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈之非水性介質較佳。適宜鹽之清單可參見Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing公司, Easton, Pa., 1985, 第1418頁, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. H. Stahl及C. G. Wermuth (編輯), Wiley-VCH, 2008，及Berge等人, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)，各自係全文以引用方式併入本文中。
如本文所用，「多分散性指數」係闡述系統之粒徑分佈之均質性的比率。小的值(例如小於0.3)指示窄的粒徑分佈。在一些實施例中，多分散性指數可小於0.1。
如本文所用之「轉染」係指向細胞中引入物質(例如RNA)。轉染可在例如活體外、離體或活體內發生。
如本文所用之術語「烷基」係具有1至24個碳原子之支鏈或無支鏈飽和烴基，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、第二戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基及其類似基團。烷基可為環狀的或非環狀的。烷基可為支鏈或無支鏈(亦即直鏈)。烷基亦可經取代或未經取代(較佳地未經取代)。舉例而言，烷基可經一或多個基團取代，該一或多個基團包括但不限於如本文所述之烷基、環烷基、烷氧基、胺基、醚、鹵基、羥基、硝基、矽烷基、亞碸基、磺酸酯基、羧酸酯基或硫醇。「低碳烷基」係含有1至6個(例如1至4個)碳原子之烷基。
如本文所用之術語「烯基」係指含有至少一個碳-碳雙鍵之脂族基團且意欲包括「未經取代之烯基」及「經取代之烯基」二者，後者係指具有置換烯基之一或多個碳上之氫的取代基之烯基部分。該等取代基可在一或多個雙鍵中包括或不包括之一或多個碳上出現。此外，該等取代基包括烷基所涵蓋之所有彼等取代基，如下文所論述，只是穩定性禁止之情形除外。舉例而言，涵蓋烯基可經一或多個烷基、碳環基、芳基、雜環基或雜芳基取代。示例性烯基包括(但不限於)乙烯基(-CH=CH2 )、烯丙基(-CH2 CH=CH2 )、環戊烯基(-C5 H7 )及5-己烯基(-CH2 CH2 CH2 CH2 CH=CH2 )。
「伸烷基」係指可為支鏈或無支鏈(亦即直鏈)之二價烷基。上文所提及之單價烷基中之任一者可藉由自該烷基去除第二氫原子而轉化為伸烷基。代表性伸烷基包括C2-4 伸烷基及C2-3 伸烷基。典型伸烷基包括(但不限於) -CH(CH3 )-、-C(CH3 )2 -、-CH2 CH2 -、-CH2 CH(CH3 )-、-CH2 C(CH3 )2 -、-CH2 CH2 CH2 -、-CH2 CH2 CH2 CH2 -及其類似基團。伸烷基亦可經取代或未經取代。舉例而言，伸烷基可經一或多個基團取代，該一或多個基團包括但不限於如本文所述之烷基、芳基、雜芳基、環烷基、烷氧基、胺基、醚、鹵基、羥基、硝基、矽烷基、亞碸基、磺酸酯基、磺醯胺、脲、醯胺、胺基甲酸酯基、酯、羧酸酯基或硫醇。
術語「伸烯基」包括具有至少一個碳-碳雙鍵且在一個實施例中無碳-碳三鍵之二價、直鏈或支鏈、不飽和、非環狀烴基。上文所提及之單價烯基中之任一者可藉由自該烯基去除第二氫原子而轉化為伸烯基。代表性伸烯基包括C2-6 伸烯基。
術語「Cx-y 」在與化學部分(諸如烷基或伸烷基)結合使用時意指包括鏈中含有x至y個碳之基團。舉例而言，術語「Cx-y 烷基」係指經取代或未經取代之飽和烴基，包括鏈中含有x至y個碳之直鏈及支鏈烷基及伸烷基。以引用方式併入
本文中提及或引用之文章、專利及專利申請案以及所有其他文件及電子可用資訊之內容以引用方式全文併入本文中，其併入程度如同每一個別出版物明確且個別地指示以引用方式併入一般。申請人保留將任何此類文章、專利、專利申請案或其他實體及電子文件中之任何及所有材料及資訊以物理方式併入本申請案中的權利。實例 一般資訊
所有試劑及溶劑係購得且按自商業供應商接收時使用或根據所引用之程序合成。使用矽膠上急驟管柱層析法純化所有中間物及最終化合物。在Bruker或Varian 400 MHz光譜儀上記錄NMR譜，且於環境溫度下在CDCl3 中收集NMR數據。化學位移係以相對於CDCl3 (7.26)之百萬分率(ppm)報導。1 H NMR之數據報導如下：化學位移、多重峰(br = 寬峰，s = 單峰，d = 雙重峰，t = 三重峰，dd =雙二重峰，dt = 雙三重峰，q = 四重峰，m = 多重峰，ddd = 兩個雙二重峰，td = 三個雙峰，tt = 三個三重峰，tdd = 三個雙二重峰，dddd = 兩個雙雙二重峰)、耦合常數及整合。在具有電噴霧離子化(ESI)源之Waters SQD2質譜儀上記錄MS數據。藉由UPLC-MS-ELS使用配備有SQD2質譜儀與光電二極體陣列(PDA)及蒸發光散射(ELS)偵測器之Waters Acquity H-Class液相層析儀器測定最終化合物之純度。
根據Jayaraman等人(Angewandte Chemie, 2012)中之方法進行以下改編來測定每一胺脂質之pKa。測定於乙醇中之未調配胺脂質的pKa。將脂質原液(2.94 mM)在不同pH值(pH範圍：4.5-9.0)之磷酸鈉緩衝液(0.1 M，Boston Bioproducts)中稀釋，得到大約100 µM之最終脂質濃度。測試樣品補充有TNS {6-(對甲苯胺基)-2-萘磺酸鈉鹽}，培育，且使用321 nm及448 nm之激發波長及發射波長量測螢光強度。將所記錄之數據標準化且自S擬合推導出各自pKa值。 實例1-化合物
化合物 (pKa) 結構
1 (6.35)
Figure 02_image270
2 (5.28)
Figure 02_image012
3 (5.89)
Figure 02_image014
4 (＜5)
Figure 02_image016
5 (6.25)
Figure 02_image018
6 (5.37)
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7 (6.36)
Figure 02_image022
8 (7.54)
Figure 02_image024
9 (6.32)
Figure 02_image026
10 (6.05)
Figure 02_image028
11 (5.60)
Figure 02_image030
12 (6.82)
Figure 02_image032
13 (7.20)
Figure 02_image034
14 (5.91)
Figure 02_image036
15 (5.90)
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16 (5.72)
Figure 02_image040
17 (6.18)
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18 (5.83)
Figure 02_image044
19 (5.99)
Figure 02_image046
20 (6.17)
Figure 02_image048
21 (6.12)
Figure 02_image050
22 (6.06)
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23 (6.19)
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24 (6.10)
Figure 02_image056
25 (6.12)
Figure 02_image058
26 (5.82)
Figure 02_image060
27 (5.97)
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28 (6.06)
Figure 02_image064
29 (6.05)
Figure 02_image066
30 (6.53)
Figure 02_image068
31 化合物31 (6.28)
Figure 02_image070
32 (5.64)
Figure 02_image072
33 (5.95)
Figure 02_image074
34 (6.36)
Figure 02_image076
35 (6.35)
Figure 02_image078
36 (6.13)
Figure 02_image080
37 (5.36)
Figure 02_image082
38 (5.62)
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39 (6.32)
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40 (6.34)
Figure 02_image088
41 (6.51)
Figure 02_image090
42 (6.52)
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43 (7.33)
Figure 02_image094
44 (6.45)
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45 (5.79)
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46 (6.16)
Figure 02_image100
f47 (5.99)
Figure 02_image102
48 (ND)
Figure 02_image104
49
Figure 02_image352
50 (6.50)
Figure 02_image106
51 (6.37)
Figure 02_image108
52 (6.26)
Figure 02_image110
53 (6.29)
Figure 02_image112
54 (6.25)
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55 (6.43)
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56 (6.28)
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57 (6.18)
Figure 02_image120
58 (6.32)
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59 (6.34)
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60 (6.22)
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61 (6.29)
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62 (6.32)
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63 (6.32)
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64 (6.30)
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65 (6.37)
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66 (6.15)
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67 (6.43)
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68 (6.32)
Figure 02_image142
69 (6.44)
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70 (6.61)
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71 (6.28)
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72 (7.01)
Figure 02_image150
73 (6.41)
Figure 02_image152
74 (6.44)
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75 (6.17)
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76 (6.74)
Figure 02_image158
77 (7.23)
Figure 02_image160
78 (5.93)
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79 (4.96)
Figure 02_image164
80 (6.41)
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81 (6.42)
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82 (6.71)
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83 (6.61)
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84 (7.39)
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85 (7.02)
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87 (ND)
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88 (ND)
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89 (6.76)
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90 (6.80)
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91 (6.48)
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92 (5.96)
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93 (6.96)
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94 (5.80)
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95 (6.15)
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96 (6.14)
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101 (6.75)
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102 (5.16)
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103 (6.09)
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105 (6.53)
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107 (6.35)
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108 (6.52)
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109 (6.91)
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110 (7.01)
Figure 02_image222
111 (7.02)
Figure 02_image224
112 (7.02)
Figure 02_image226
113 (7.02)
Figure 02_image228
114 (6.93)
Figure 02_image416
實例1-比較化合物1 中間物1a：4-側氧基十六烷酸
Figure 02_image418
使丁二酸酐(3.0 g，1.0當量)於THF (0.1 M)中之溶液冷卻至-78℃，接著經5分鐘逐滴添加溴化十二烷基鎂(1.0 M於己烷中之溶液，0.5當量)。反應維持於-78℃下至少18 h，接著藉由添加水及1 M HCl淬滅。將反應混合物真空濃縮，且將所得水層用DCM萃取3次。接著將合併之DCM層用2 M NaOH萃取2次，且使用濃HCl將合併之水層酸化至pH = 1。接著將混合物用DCM萃取3次。合併之DCM層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮，得到粗物質。將粗物質用己烷濕磨3次，且過濾所得沈澱，得到呈白色固體狀之產物(1.31 g，33%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.72 (ddd, J = 7.0, 5.8, 1.1 Hz, 2H), 2.67 - 2.60 (m, 2H), 2.44 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.59 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.26 (d, J = 2.7 Hz, 18H), 0.91 - 0.85 (m, 3H)。 中間物1b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-側氧基丙-1,3-二酯
Figure 02_image420
向二羥基丙酮(1.55 g，1.0當量)於DCM (0.1 M)中之溶液添加亞油酸(2.05當量)、DMAP (0.2當量)、DIPEA (2.4當量)及EDCI (2.4當量)。將反應在室溫下攪拌至少18 h。結束後，混合物藉由添加水淬滅，且將有機層用1 M HCl洗滌1次且用5% NaHCO3 洗滌1次。接著有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(8.0 g，75%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.28 (m, 8H), 4.75 (s, 4H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.42 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.67 (q, J = 7.4 Hz, 4H), 1.40 - 1.24 (m, 28H), 0.95 - 0.86 (m, 6H)。 中間物1c：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸2-羥基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯氧基]丙酯
Figure 02_image422
使中間物1b (8.1 g，1.0當量)於4:2:1 THF/水/甲苯(0.05-0.1 M)中之溶液冷卻至0-5℃，接著添加NaBH4 (1.7當量)。將反應在0-25℃下攪拌至少1 h。結束後，混合物藉由添加水及EtOAc淬滅，且將混合物用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(5.9 g，73%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.26 (m, 8H), 4.23 - 4.10 (m, 4H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.42 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.38 - 2.31 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.68 - 1.57 (m, 4H), 1.42 - 1.23 (m, 29H), 0.93 - 0.85 (m, 6H)。 中間物1d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image424
向中間物1c (1.0當量)於DCM (0.2 M)中之溶液添加中間物1a (1.0-1.2當量)、Et3 N或DIPEA (1.5-4.5當量)、DMAP (0.1-0.2當量)及EDCI (1-2當量)。將反應在室溫下攪拌至少12 h，接著藉由添加水淬滅。將混合物用1 M HCl洗滌1次且用5% NaHCO3 洗滌1次。接著有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(780 mg，79%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (tt, J = 5.9, 4.3 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.15 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 2.84 - 2.74 (m, 4H), 2.71 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.60 (dd, J = 14.7, 7.3 Hz, 6H), 1.44 - 1.20 (m, 49H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.3 Hz, 9H)。 中間物1e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image426
使中間物1d (1.43 g，1.0當量)於4:2:1 THF/水/甲苯(0.05-0.1 M)中之溶液冷卻至0-5℃，接著添加NaBH4 (5.0當量)。反應維持於0-25℃下至少2 h。接著反應用水及EtOAc稀釋，且將所得兩相混合物用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之中間醇。
立即使所得醇再溶於DCM (0.1 M)中，接著添加吡啶(2-3當量)及氯甲酸4-硝基苯酯(1-1.5當量)。將反應在室溫下攪拌至少1 h。混合物藉由添加水淬滅且用DCM萃取3次。合併之DCM層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(910 mg，54%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.37 - 8.25 (m, 2H), 7.48 - 7.40 (m, 2H), 5.49 - 5.25 (m, 9H), 4.96 - 4.84 (m, 1H), 4.34 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 11.9, 5.7 Hz, 2H), 2.79 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.49 (dd, J = 8.4, 6.7 Hz, 2H), 2.33 (tt, J = 7.6, 4.2 Hz, 4H), 2.16 - 1.95 (m, 10H), 1.81 - 1.71 (m, 1H), 1.65 (ddq, J = 15.2, 7.5, 4.8, 4.2 Hz, 6H), 1.50 - 1.13 (m, 50H), 0.90 (td, J = 6.8, 3.7 Hz, 9H)。 化合物1：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image270
向中間物1e (250 mg，1.0當量)於MeCN (0.1 M)中之溶液添加吡啶(3.0當量)、3-(二甲基胺基)丙-1-醇(1.5-3.0當量)及DMAP (1.0當量)。將反應在室溫下攪拌至少2小時。接著庚烷(0.1 M)添加至反應混合物，且將庚烷層用MeCN洗滌3次。將合併之MeCN層用庚烷反萃取三次，且合併之庚烷層最後用MeCN洗滌一次。接著真空移除庚烷，且粗物質藉由管柱層析法(MeOH/DCM)來純化，得到呈無色油狀之產物(100 mg，41%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.22 (m, 9H), 4.72 (tdd, J = 7.5, 5.3, 4.0 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 12.0, 4.4 Hz, 2H), 4.23 - 4.10 (m, 4H), 2.84 - 2.73 (m, 4H), 2.62 - 2.27 (m, 13H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 2.01 - 1.84 (m, 4H), 1.68 - 1.50 (m, 7H), 1.43 - 1.21 (m, 50H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1001.2 m/z [M+H]。 實例2-化合物2 化合物2：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image012
化合物2係使用實例1所用之方法自中間物1e及3-(二乙基胺基)丙-1-醇合成，產率64%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.20 (m, 9H), 4.72 (tdd, J = 7.5, 5.3, 4.0 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.23 - 4.10 (m, 4H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.57 - 2.36 (m, 8H), 2.31 (td, J = 7.6, 1.3 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.97 - 1.77 (m, 4H), 1.61 (t, J = 7.4 Hz, 6H), 1.40 - 1.21 (m, 49H), 1.01 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1029.7 m/z [M+H]。 實例3-化合物3 化合物3：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(乙基(甲基)胺基)丙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image014
化合物3係使用實例1所用之方法自中間物1e及3-((甲基)乙基胺基)丙-1-醇合成，產率79%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.49 - 5.20 (m, 9H), 4.77 - 4.67 (m, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.16 (tdd, J = 11.9, 6.2, 2.5 Hz, 4H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.70 - 2.37 (m, 7H), 2.37 - 2.25 (m, 7H), 2.13 - 1.82 (m, 12H), 1.69 - 1.48 (m, 7H), 1.42 - 1.20 (m, 46H), 1.14 (s, 2H), 0.88 (td, J = 6.8, 3.9 Hz, 7H)。MS: 1015.7 m/z [M+H]。 實例4-化合物4 化合物4：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(二甲基胺基)乙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image016
化合物4係使用實例1所用之方法自中間物1e及2-二甲基胺基乙-1-醇合成，產率93%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.31 (m, 8H), 5.25 (tt, J = 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.73 (tdd, J = 7.6, 5.5, 4.0 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 4H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.4 Hz, 2H), 2.77 (td, J = 6.0, 1.1 Hz, 4H), 2.70 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.49 - 2.29 (m, 11H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.99 - 1.81 (m, 2H), 1.67 - 1.50 (m, 8H), 1.40 - 1.21 (m, 48H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.2 Hz, 9H)。MS: 987.6 m/z [M+H]。 實例5-化合物5 化合物5：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image018
化合物5係使用實例1所用之方法自中間物1e及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇合成，產率54%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.21 (m, 9H), 4.72 (tdd, J = 7.3, 5.5, 4.2 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.17 (dddd, J = 15.3, 9.1, 7.3, 3.7 Hz, 4H), 2.77 (td, J = 6.0, 1.1 Hz, 4H), 2.57 (d, J = 8.8 Hz, 6H), 2.40 (dt, J = 8.7, 6.5 Hz, 2H), 2.31 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.98 - 1.83 (m, 5H), 1.80 (p, J = 3.2 Hz, 4H), 1.68 - 1.50 (m, 7H), 1.41 - 1.18 (m, 48H), 0.96 - 0.81 (m, 9H)。MS: 1027.6 m/z [M+H]。 實例6-化合物6 實例6：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-乙基哌啶-4-基)氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image020
化合物6係使用實例1所用之方法自中間物1e及1-乙基哌啶-4-醇合成，產率53%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.21 (m, 9H), 4.72 (tdd, J = 7.6, 5.3, 4.0 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.1 Hz, 2H), 2.84 - 2.70 (m, 6H), 2.51 - 2.36 (m, 4H), 2.31 (td, J = 7.6, 1.4 Hz, 4H), 2.24 (d, J = 23.1 Hz, 2H), 2.11 - 1.93 (m, 11H), 1.92 - 1.73 (m, 4H), 1.70 - 1.52 (m, 8H), 1.43 - 1.21 (m, 48H), 1.09 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1028.2 m/z [M+H]。 實例7-化合物7 化合物7：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image022
化合物7係使用實例1所用之方法自中間物1e及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率66%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.47 - 5.08 (m, 10H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.3 Hz, 2H), 3.24 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.53 - 2.26 (m, 10H), 2.21 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.98 - 1.74 (m, 2H), 1.68 - 1.41 (m, 8H), 1.41 - 1.19 (m, 49H), 1.04 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.95 - 0.82 (m, 9H)。MS: 1001.1 m/z [M+H]。 實例8-化合物8 化合物8：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二甲基胺基)丙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image024
化合物8係使用實例1所用之方法自中間物1e及N1,N1-二甲基丙-1,3-二胺合成，產率55%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.43 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (tt, J = 5.8, 4.4 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 2.2 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 1.6 Hz, 2H), 3.23 (h, J = 6.4 Hz, 2H), 2.82 - 2.73 (m, 4H), 2.48 - 2.20 (m, 14H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.97 - 1.42 (m, 12H), 1.42 - 1.20 (m, 48H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1000.6 m/z [M+H]。 實例9-化合物9 化合物9：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image026
化合物9係使用實例1所用之方法自中間物1e及(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺合成，產率65%。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.45 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (ddd, J = 10.2, 5.8, 4.4 Hz, 1H), 5.19 - 5.11 (m, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.0 Hz, 2H), 3.44 - 3.31 (m, 1H), 3.19 - 3.02 (m, 2H), 2.84 - 2.72 (m, 4H), 2.46 - 2.16 (m, 12H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.97 - 1.66 (m, 6H), 1.66 - 1.42 (m, 8H), 1.42 - 1.20 (m, 49H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1013.1 m/z [M+H]。 實例10-化合物10 化合物10：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((1,4-二甲基哌啶-4-羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image028
使中間物1d (360 mg，1.0當量)於4:2:1 THF/水/甲苯(0.05 M)中之溶液冷卻至0℃，接著添加NaBH4 (5.0當量)。反應維持於0℃下18 h。接著反應用水及EtOAc稀釋，且將所得兩相混合物用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之中間醇。
立即使所得粗醇再溶於DCM (0.1 M)中，接著添加1,4-二甲基哌啶-4-甲酸(1.0當量)、DMAP (0.1當量)、DIPEA (4.0當量)及EDCI (1.5當量)。將反應在室溫下攪拌。在16 h後，將額外1,4-二甲基哌啶-4-甲酸(1.0當量)、DMAP (0.05當量)、DIPEA (2.0當量)及EDCI (1.5當量)添加至反應，且將反應加熱至40℃。在又兩小時後，反應藉由添加水及DCM淬滅，且將有機層用1 M HCl洗滌1次，用5% NaHCO3 洗滌1次，且用鹽水洗滌1次。所得有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(MeOH/DCM)來純化，得到呈粉色油狀之產物(94 mg，22%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.22 (m, 9H), 4.92 (ddd, J = 11.6, 7.5, 4.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 12.0, 5.8, 1.9 Hz, 2H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.67 (s, 2H), 2.41 - 2.25 (m, 9H), 2.14 (d, J = 14.2 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.98 - 1.78 (m, 3H), 1.66 - 1.49 (m, 9H), 1.43 - 1.18 (m, 50H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.3 Hz, 9H)。 實例11-化合物11 化合物11：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((4-(二乙基胺基)丁醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image030
化合物11係使用實例10所用之方法自中間物1d及3-(二乙基胺基)丁酸合成，產率17%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.43 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (tt, J = 5.8, 4.4 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 2.2 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 1.6 Hz, 2H), 3.23 (h, J = 6.4 Hz, 2H), 2.82 - 2.73 (m, 4H), 2.48 - 2.20 (m, 14H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.97 - 1.42 (m, 12H), 1.42 - 1.20 (m, 48H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1013.9 m/z [M+H]。 實例12-化合物12 化合物12：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(二甲基胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image032
化合物12係使用實例1所用之方法自中間物1e及N1,N1-二甲基乙-1,2-二胺合成，產率67%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.29 (m, 8H), 5.29 - 5.18 (m, 2H), 4.75 (s, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.6 Hz, 2H), 3.25 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.77 (td, J = 6.2, 1.2 Hz, 4H), 2.47 - 2.35 (m, 4H), 2.35 - 2.28 (m, 4H), 2.24 (s, 6H), 2.05 (q, J = 7.1 Hz, 8H), 1.98 - 1.73 (m, 4H), 1.65 - 1.42 (m, 7H), 1.40 - 1.20 (m, 48H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.3 Hz, 9H)。MS: 987.2 m/z [M+H]。 實例13-化合物13 化合物13：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二乙基胺基)丙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image034
化合物13係使用實例1所用之方法自中間物1e及N1,N1-二乙基丙-1,3-二胺合成，產率62%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.93 (s, 1H), 5.44 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (ddd, J = 5.8, 4.5, 1.3 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 2.7 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 1.2 Hz, 2H), 3.24 (tt, J = 13.2, 6.6 Hz, 2H), 2.81 - 2.71 (m, 4H), 2.57 (d, J = 7.7 Hz, 6H), 2.38 (ddd, J = 8.9, 6.8, 3.2 Hz, 2H), 2.35 - 2.28 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.6 Hz, 8H), 1.94 - 1.85 (m, 2H), 1.79 (dq, J = 14.8, 8.1 Hz, 2H), 1.73 - 1.56 (m, 7H), 1.56 - 1.43 (m, 3H), 1.40 - 1.20 (m, 47H), 1.06 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.3 Hz, 9H)。MS: 1029.2 m/z [M+H]。 實例14-化合物14 化合物14：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-(二乙基胺基)丁氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image036
化合物14係使用實例1所用之方法自中間物1e及N1,N1-二甲基乙-1,2-二胺合成，產率60%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.30 (m, 9H), 5.28 (tt, J = 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.78 - 4.69 (m, 1H), 4.31 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.22 - 4.09 (m, 4H), 2.79 (td, J = 6.1, 1.1 Hz, 4H), 2.63 (q, J = 7.2 Hz, 4H), 2.55 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.47 - 2.38 (m, 2H), 2.38 - 2.30 (m, 4H), 2.07 (q, J = 7.1 Hz, 8H), 2.02 - 1.85 (m, 2H), 1.76 - 1.51 (m, 11H), 1.45 - 1.21 (m, 49H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 0.95 - 0.82 (m, 9H)。MS: 1044.1 m/z [M+H]。 實例15-化合物15 化合物15：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(二乙基胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image038
化合物15係使用實例1所用之方法自中間物1e及N1,N1-二乙基乙-1,2-二胺合成，產率75%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.29 (m, 9H), 5.25 (ddd, J = 5.8, 4.4, 1.4 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.2 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.0 Hz, 2H), 3.23 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 2.80 - 2.73 (m, 4H), 2.57 (q, J = 7.0 Hz, 6H), 2.38 (ddd, J = 9.0, 6.6, 4.7 Hz, 2H), 2.34 - 2.28 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.90 (h, J = 9.0, 7.9 Hz, 1H), 1.80 (p, J = 7.3, 6.5 Hz, 1H), 1.66 - 1.44 (m, 7H), 1.40 - 1.20 (m, 53H), 1.03 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.3 Hz, 9H)。MS: 1014.9 m/z [M+H]。 實例16-化合物16 化合物16：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image040
化合物16係使用實例1所用之方法自中間物1e及2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙-1-醇合成，產率78%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.28 (m, 9H), 5.25 (tt, J = 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.72 (qd, J = 7.6, 4.6 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.26 - 4.09 (m, 4H), 3.14 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.45 - 2.28 (m, 9H), 2.22 (td, J = 11.5, 10.9, 6.0 Hz, 2H), 2.15 - 1.91 (m, 12H), 1.69 - 1.48 (m, 9H), 1.42 - 1.20 (m, 50H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1027.9 m/z [M+H]。 實例17-化合物17 中間物17a：溴化十六烷基鎂
Figure 02_image442
向Mg (15.92 g，2當量)於THF (300 mL)中之溶液添加I2 (0.01當量)，接著在80℃下逐滴添加含1-溴十六烷(1.0當量)之THF (100 mL)至以上中。將混合物在80℃下攪拌6小時。獲得呈棕色液體狀之產物，產率定量且立即用於下一步。 中間物17b：4-側氧基二十烷酸
Figure 02_image444
使丁二酸酐(54 g，1.0當量)於THF (1.2 M)中之溶液冷卻至-78℃，接著添加中間物17a。反應維持於-78℃下12 h，接著傾倒至飽和NH4 Cl中且用EtOAc萃取3次。將合併之有機相用鹽水洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(4 g，2%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.11 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 2.80 - 2.62 (m, 4H), 2.46 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 1.63 (dq, J = 14.7, 7.1 Hz, 2H), 1.49 - 1.20 (m, 27H), 0.90 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物17c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image446
中間物17c係使用中間物1d所用之方法自中間物17b及中間物1c合成，產率53%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.21 (m, 9H), 4.29 (dt, J = 11.9, 4.1 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 2.73 (dt, J = 22.5, 6.5 Hz, 6H), 2.67 - 2.54 (m, 4H), 2.42 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 9H), 1.61 (q, J = 7.9, 7.3 Hz, 8H), 1.42 - 1.15 (m, 55H), 0.88 (td, J = 6.7, 4.0 Hz, 9H)。 中間物17d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image448
中間物17d係使用中間物1e所用之方法自中間物17c合成，產率29%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.33 - 8.24 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 2H), 5.45 - 5.23 (m, 8H), 4.92 - 4.82 (m, 1H), 4.31 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 4.20 - 4.09 (m, 2H), 2.76 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.47 (dd, J = 8.3, 6.7 Hz, 2H), 2.30 (td, J = 7.6, 4.2 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 7.2 Hz, 9H), 1.61 (ddt, J = 11.5, 7.4, 3.7 Hz, 4H), 1.43 - 1.22 (m, 49H), 0.88 (td, J = 6.9, 3.8 Hz, 9H)。 化合物17：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image042
化合物17係使用實例1所用之方法自中間物17d及3-(二甲基胺基)丙-1-醇合成，產率74%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.22 (m, 10H), 4.72 (tdd, J = 7.5, 5.4, 4.0 Hz, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 2H), 4.23 - 4.08 (m, 4H), 2.82 - 2.71 (m, 4H), 2.50 - 2.28 (m, 9H), 2.25 (s, 6H), 2.09 - 1.97 (m, 9H), 1.91 - 1.80 (m, 3H), 1.70 - 1.47 (m, 7H), 1.40 - 1.20 (m, 57H), 0.96 - 0.82 (m, 9H)。MS: 1058.1 m/z [M+H]。 實例18-化合物18 化合物18：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(乙基(甲基)胺基)丙氧基)羰基)氧基)二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image044
化合物18係使用實例1所用之方法自中間物17d及3-((甲基)乙基胺基)丙-1-醇合成，產率77%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.22 (m, 10H), 4.72 (qd, J = 7.7, 4.7 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 12.0, 4.4 Hz, 2H), 4.20 - 4.10 (m, 4H), 2.83 - 2.73 (m, 4H), 2.51 - 2.36 (m, 6H), 2.35 - 2.28 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.10 - 1.99 (m, 9H), 1.91 - 1.82 (m, 3H), 1.66 - 1.52 (m, 6H), 1.42 - 1.19 (m, 60H), 1.06 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1072.3 m/z [M+H]。 實例19-化合物19 化合物19：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image046
化合物19係使用實例1所用之方法自中間物17d及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇合成，產率67%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.22 (m, 9H), 4.72 (tt, J = 7.5, 4.5 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.24 - 4.10 (m, 4H), 2.83 - 2.72 (m, 4H), 2.57 (d, J = 8.3 Hz, 6H), 2.40 (dt, J = 8.6, 6.7 Hz, 2H), 2.31 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 4H), 2.04 (dd, J = 8.5, 5.3 Hz, 8H), 2.00 - 1.86 (m, 4H), 1.86 - 1.78 (m, 4H), 1.53 (ddt, J = 14.1, 8.3, 4.7 Hz, 7H), 1.44 - 1.20 (m, 56H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1084.2 m/z [M+H]。 實例20-化合物20 化合物20：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image048
化合物20係使用實例1所用之方法自中間物17d及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇合成，產率73%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.17 (m, 10H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.3 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.4 Hz, 2H), 3.25 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.50 - 2.36 (m, 6H), 2.36 - 2.28 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.94 - 1.71 (m, 4H), 1.66 - 1.20 (m, 63H), 1.05 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1056.6 m/z [M+H]。 實例21-化合物21 化合物21：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)二十烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image050
化合物21係使用實例1所用之方法自中間物17d (1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺合成，產率85%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.30 (m, 8H), 5.29 - 5.18 (m, 2H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.21 - 4.07 (m, 2H), 3.46 - 3.30 (m, 1H), 3.11 (ddt, J = 22.3, 8.9, 4.3 Hz, 2H), 2.80 - 2.72 (m, 4H), 2.45 - 2.15 (m, 12H), 2.04 (dd, J = 8.5, 5.3 Hz, 9H), 1.96 - 1.77 (m, 4H), 1.71 (tq, J = 8.4, 5.1, 4.0 Hz, 2H), 1.65 - 1.45 (m, 8H), 1.39 - 1.20 (m, 60H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.4 Hz, 9H)。MS: 1068.8 m/z [M+H]。 實例22-化合物22 中間物22a：(Z)-9-(壬-2-烯-1-基氧基)-9-側氧基壬酸
Figure 02_image455
在0℃下經一分鐘向壬二酸(25 g，1.3當量)於THF (100 mL)中之溶液逐滴添加乙二醯氯(1.0當量)。接著，經一分鐘逐滴添加DMF (0.1當量)。將反應混合物在0℃下攪拌10分鐘，接著室溫下攪拌10分鐘。接著，反應冷卻回至0℃，接著添加含順式-2-壬烯-1-醇(1.0當量)之THF (100 mL)。將反應在0℃下攪拌5分鐘，接著在室溫下攪拌16 h。結束後，反應真空濃縮，用DCM形成漿狀物，且過濾。濃縮濾液且藉由管柱層析法(80 g，MeOH/DCM)來純化，得到呈淺黃色油狀之產物(15 g，47%)，其直接用於隨後步驟中。 中間物22b：二(壬二酸) 9,9’-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯O'1,O1-(2-側氧基丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image457
中間物22b係藉由組合二羥基丙酮及中間物22a使用中間物1b所用之方法合成，產率73%。 中間物22c：二(壬二酸) O’1,O1-(2-羥基丙-1,3-二基)酯9,9'-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯
Figure 02_image459
除反應在45分鐘後結束外，中間物22c係使用中間物1c所用之方法自中間物22b合成，產率71%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.64 (dtt, J = 11.0, 7.3, 1.3 Hz, 2H), 5.52 (dtt, J = 10.9, 6.8, 1.5 Hz, 2H), 4.67 - 4.58 (m, 4H), 4.23 - 4.05 (m, 5H), 2.51 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.32 (dt, J = 18.1, 7.6 Hz, 8H), 2.15 - 2.00 (m, 4H), 1.61 (td, J = 10.0, 2.7 Hz, 8H), 1.42 - 1.20 (m, 28H), 0.93 - 0.83 (m, 6H)。 中間物22d：二(壬二酸) 9,9’-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯O'1,O1-(2-((4-側氧基十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image461
中間物22d係使用中間物1d所用之方法自中間物22c及中間物1a合成，產率38%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.66 (dtt, J = 11.0, 7.3, 1.3 Hz, 2H), 5.54 (dtt, J = 11.0, 6.9, 1.5 Hz, 2H), 5.26 (tt, J = 5.9, 4.3 Hz, 1H), 4.64 (dd, J = 6.9, 1.3 Hz, 4H), 4.31 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.17 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.74 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.68 - 2.56 (m, 2H), 2.45 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.33 (td, J = 7.6, 6.0 Hz, 8H), 2.19 - 2.07 (m, 4H), 1.70 - 1.57 (m, 12H), 1.43 - 1.23 (m, 46H), 0.98 - 0.84 (m, 9H)。 中間物22e：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯
Figure 02_image463
中間物22e係使用中間物1e所用之方法自中間物22d合成，產率51%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.38 - 8.31 (m, 1H), 8.31 - 8.24 (m, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 2H), 5.64 (dtt, J = 11.0, 7.3, 1.3 Hz, 2H), 5.51 (dtt, J = 11.0, 6.8, 1.5 Hz, 2H), 5.26 (tt, J = 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.86 (ddd, J = 11.8, 7.5, 4.8 Hz, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 4H), 4.36 - 4.25 (m, 2H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 2.50 - 2.44 (m, 2H), 2.30 (td, J = 7.5, 4.5 Hz, 8H), 2.13 - 2.05 (m, 4H), 1.62 (d, J = 37.2 Hz, 9H), 1.46 - 1.18 (m, 49H), 0.94 - 0.80 (m, 9H)。 化合物22：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((4-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯
Figure 02_image052
化合物22係使用實例1所用之方法自中間物22e及3-(二甲基胺基)丙-1-醇合成，產率54%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.71 - 5.58 (m, 2H), 5.52 (dtt, J = 10.9, 6.8, 1.5 Hz, 2H), 5.25 (tt, J = 5.7, 4.4 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 11.7, 7.4, 4.5 Hz, 1H), 4.62 (dd, J = 6.8, 1.3 Hz, 4H), 4.34 - 4.25 (m, 2H), 4.25 - 4.08 (m, 4H), 2.39 (ddd, J = 12.9, 8.4, 6.4 Hz, 4H), 2.34 - 2.21 (m, 13H), 2.09 (tdd, J = 7.4, 5.7, 1.5 Hz, 4H), 2.02 - 1.67 (m, 7H), 1.69 - 1.51 (m, 11H), 1.42 - 1.19 (m, 45H), 0.97 - 0.78 (m, 8H)。MS: 1065.7 m/z [M+H]。 實例23-化合物23 化合物23：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯
Figure 02_image054
化合物23係使用實例1中所用之方法自中間物22e及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率59%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.72 - 5.59 (m, 2H), 5.52 (dtt, J = 11.0, 6.8, 1.5 Hz, 2H), 5.36 - 5.18 (m, 2H), 4.75 (s, 1H), 4.62 (dd, J = 6.9, 1.2 Hz, 4H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.5 Hz, 2H), 3.35 - 3.20 (m, 2H), 2.56 - 2.43 (m, 4H), 2.38 (ddd, J = 8.7, 6.6, 4.1 Hz, 2H), 2.34 - 2.19 (m, 11H), 2.10 (qd, J = 7.4, 1.5 Hz, 4H), 1.96 - 1.72 (m, 3H), 1.63 (d, J = 6.9 Hz, 11H), 1.41 - 1.18 (m, 48H), 1.07 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 - 0.81 (m, 9H)。MS: 1065.2 m/z [M+H]。 實例24-化合物24 化合物24：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯
Figure 02_image056
化合物24係使用實例1中所用之方法自中間物22e及(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺合成。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.71 - 5.59 (m, 2H), 5.52 (dtt, J = 10.9, 6.8, 1.5 Hz, 2H), 5.24 (ddd, J = 8.8, 5.8, 4.4 Hz, 2H), 4.76 (s, 1H), 4.62 (dd, J = 6.9, 1.3 Hz, 4H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.2 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 11.2, 10.1 Hz, 1H), 3.10 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 2.50 - 2.20 (m, 15H), 2.10 (qd, J = 7.4, 1.5 Hz, 4H), 1.97 - 1.67 (m, 6H), 1.61 (d, J = 7.3 Hz, 12H), 1.41 - 1.18 (m, 47H), 0.97 - 0.79 (m, 9H)。MS: 1076.7 m/z [M+H]。 實例25-化合物25 中間物25a：5-側氧基十七烷酸
Figure 02_image468
中間物25a係使用中間物1a中所用之方法自戊二酸酐及溴化十二烷基鎂溶液合成，產率64%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.75 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 2.49 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.44 - 2.35 (m, 4H), 1.90 (p, J = 7.2 Hz, 2H), 1.56 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.26 (d, J = 4.0 Hz, 19H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物25b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-側氧基十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image470
中間物25b係使用中間物1d所用之方法自中間物25a及中間物1c合成，產率55%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.19 (m, 9H), 4.30 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.12 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.46 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.42 - 2.24 (m, 8H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.88 (p, J = 7.2 Hz, 2H), 1.57 (dp, J = 21.3, 7.2 Hz, 6H), 1.43 - 1.18 (m, 41H), 0.87 (td, J = 6.8, 4.1 Hz, 8H)。 中間物25c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image472
中間物25c係使用中間物1e所用之方法自中間物25b合成，產率23%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.31 - 8.24 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 5.44 - 5.19 (m, 9H), 4.83 (q, J = 5.7 Hz, 1H), 4.31 (ddd, J = 12.0, 4.4, 2.9 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 2.1 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.34 (dt, J = 30.7, 7.0 Hz, 6H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.80 - 1.52 (m, 14H), 1.29 (dd, J = 19.3, 12.3 Hz, 44H), 0.88 (td, J = 6.8, 3.7 Hz, 9H)。 化合物25：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image058
化合物25係使用實例1所用之方法自中間物25c及3-(二甲基胺基)丙-1-醇合成，產率94%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.19 (m, 9H), 4.74 - 4.65 (m, 1H), 4.29 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.7 Hz, 2H), 4.25 - 4.07 (m, 4H), 2.82 - 2.72 (m, 4H), 2.39 - 2.28 (m, 8H), 2.22 (s, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.84 (dq, J = 8.2, 6.7 Hz, 2H), 1.73 - 1.50 (m, 14H), 1.41 - 1.18 (m, 50H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1016.11 m/z [M+H]。 實例26-化合物26 化合物26：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-(((3-(乙基(甲基)胺基)丙氧基)羰基)氧基)十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image060
化合物26係使用實例1所用之方法自中間物25c及3-((甲基)乙基胺基)丙-1-醇合成，產率84%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.20 (m, 10H), 4.69 (dq, J = 7.5, 5.5 Hz, 1H), 4.29 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.6 Hz, 2H), 4.25 - 4.10 (m, 4H), 2.83 - 2.72 (m, 4H), 2.45 - 2.38 (m, 4H), 2.37 - 2.28 (m, 6H), 2.21 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.88 - 1.79 (m, 2H), 1.74 - 1.52 (m, 13H), 1.44 - 1.22 (m, 51H), 1.04 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.1 Hz, 9H)。MS: 1030.1 m/z [M+H]。 實例27-化合物27 化合物27：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image062
化合物27係使用實例1所用之方法自中間物25c及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇合成，產率79%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.21 (m, 10H), 4.69 (dt, J = 7.1, 5.3 Hz, 1H), 4.29 (ddd, J = 11.9, 4.3, 1.6 Hz, 2H), 4.25 - 4.10 (m, 4H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.52 (dd, J = 14.8, 7.1 Hz, 6H), 2.33 (dt, J = 13.4, 7.2 Hz, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.89 (dq, J = 10.8, 6.8 Hz, 2H), 1.82 - 1.74 (m, J = 3.8, 3.3 Hz, 4H), 1.71 - 1.53 (m, 13H), 1.40 - 1.21 (m, 49H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1041.8 m/z [M+H]。 實例28-化合物28 化合物28：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image064
化合物28係使用實例1所用之方法自中間物25c及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率87%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.21 (m, 10H), 5.12 (s, 1H), 4.80 - 4.65 (m, 1H), 4.29 (dt, J = 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.19 - 4.09 (m, 2H), 3.24 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 2.83 - 2.72 (m, 4H), 2.44 (dt, J = 14.6, 6.6 Hz, 4H), 2.38 - 2.27 (m, 6H), 2.20 (s, 3H), 2.04 (dd, J = 7.8, 5.7 Hz, 8H), 1.74 - 1.42 (m, 15H), 1.42 - 1.19 (m, 50H), 1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.4 Hz, 9H)。MS: 1014.1 m/z [M+H]。 實例29-化合物29 化合物29：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)十七烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image066
化合物29係使用實例1所用之方法自中間物25c及(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺合成，產率93%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.21 (m, 11H), 5.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.29 (dt, J = 11.9, 4.6 Hz, 2H), 4.13 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.5 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 11.3, 10.6 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 25.9 Hz, 2H), 2.82 - 2.73 (m, 4H), 2.39 - 2.18 (m, 12H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 9H), 1.91 - 1.82 (m, 1H), 1.62 (dddd, J = 27.4, 20.2, 13.2, 6.7 Hz, 18H), 1.42 - 1.20 (m, 52H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.4 Hz, 9H)。MS: 1026.8 m/z [M+H]。 實例30-化合物30 中間物30a：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 3-羥基丙-1,2-二酯
Figure 02_image479
向丙三醇(1.59 g，1.0當量)於DCM (0.1 M)中之溶液依次添加亞油酸(2.05當量)、DMAP (0.2當量)、DIPEA (2.4當量)、EDCI (2.4當量)及1 mL DMF。將反應在室溫下攪拌65 h。結束後，混合物藉由添加水淬滅，且將有機層用1 M HCl洗滌1次且用5% NaHCO3洗滌1次。接著有機層經Na2SO4乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.28 (m, 8H), 5.13 - 5.04 (m, 1H), 4.32 (dd, J = 11.9, 4.6 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 11.9, 5.6 Hz, 1H), 3.73 (ddd, J = 6.5, 5.0, 1.3 Hz, 2H), 2.82 - 2.73 (m, 4H), 2.33 (dt, J = 8.8, 7.5 Hz, 4H), 2.03 (dq, J = 13.1, 6.6 Hz, 9H), 1.69 - 1.57 (m, 4H), 1.44 - 1.23 (m, 29H), 0.96 - 0.83 (m, 6H)。 中間物30b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 3-((4-側氧基十六烷醯基)氧基)丙-1,2-二酯
Figure 02_image481
中間物30b係使用中間物1d中所用之方法自中間物30a及中間物1a合成，產率66%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.26 (m, 9H), 4.29 (ddd, J = 11.8, 4.3, 2.1 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 7.7, 6.0 Hz, 2H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.71 (td, J = 6.3, 5.6, 2.4 Hz, 2H), 2.62 - 2.55 (m, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.31 (td, J = 7.6, 5.4 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.66 - 1.54 (m, 8H), 1.41 - 1.19 (m, 47H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.4 Hz, 9H)。 中間物30c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 3-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,2-二酯
Figure 02_image483
中間物30c係使用中間物1e中所用之方法合成自中間物30b，產率40%。 化合物30：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸)9-十二烷基-2-甲基-7,12-二側氧基-6,8,13-三氧雜-2-氮雜十六烷-15,16-二酯
Figure 02_image068
化合物30係使用實例1中所用之方法自中間物30c及3-((甲基)乙基胺基)丙-1-醇合成，產率84%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.20 (m, 8H), 4.76 - 4.67 (m, 1H), 4.29 (ddd, J = 11.9, 4.3, 1.7 Hz, 2H), 4.22 - 4.11 (m, 4H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.45 - 2.28 (m, 8H), 2.22 (s, 6H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 2.00 - 1.79 (m, 4H), 1.69 - 1.51 (m, 6H), 1.40 - 1.17 (m, 48H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.8 Hz, 8H)。MS: 1002.2 m/z [M+H]。 實例31-化合物31 中間物31a：4-側氧基十二烷酸
Figure 02_image486
中間物31a係使用中間物1a中所用之方法自丁二酸酐及溴化辛基鎂溶液合成，產率9%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.57 (p, J = 7.1 Hz, 2H), 1.26 (d, J = 3.6 Hz, 10H), 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物31b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image488
中間物31b係使用中間物1d中所用之方法自中間物31a及中間物1c合成，產率38%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.47 - 5.19 (m, 8H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.15 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.71 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.67 - 1.53 (m, 6H), 1.40 - 1.20 (m, 37H), 0.88 (td, J = 6.8, 5.0 Hz, 9H)。 中間物31c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image490
中間物31c係使用中間物1e中所用之方法合成，產率68%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.26 - 8.16 (m, 2H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 5.39 - 5.05 (m, 9H), 4.80 (tdd, J = 7.5, 5.4, 4.0 Hz, 1H), 4.49 - 4.04 (m, 4H), 2.77 - 2.63 (m, 4H), 2.45 - 2.18 (m, 6H), 2.08 - 1.85 (m, 10H), 1.74 - 1.46 (m, 6H), 1.41 - 1.11 (m, 40H), 0.81 (td, J = 6.9, 2.4 Hz, 9H)。 化合物31：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二甲基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image070
化合物31係使用實例1中所用之方法自中間物31c及3-(二甲基胺基)丙-1-醇合成，產率71%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.22 (m, 9H), 4.72 (tdd, J = 7.4, 5.3, 4.0 Hz, 1H), 4.34 - 4.26 (m, 2H), 4.23 - 4.10 (m, 4H), 2.82 - 2.72 (m, 4H), 2.45 - 2.36 (m, 4H), 2.31 (ddd, J = 8.0, 7.1, 1.2 Hz, 4H), 2.25 (s, 6H), 2.05 (q, J = 6.6 Hz, 8H), 1.99 - 1.91 (m, 1H), 1.91 - 1.82 (m, 3H), 1.67 - 1.53 (m, 6H), 1.40 - 1.21 (m, 41H), 0.94 - 0.82 (m, 9H)。MS: 945.6 m/z [M+H]。 實例32-化合物32 化合物32：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image072
化合物32係使用實例1中所用之方法自中間物31c及3-(二乙基胺基)丙-1-醇合成，產率71%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.28 (m, 9H), 5.25 (ddd, J = 5.8, 4.4, 1.5 Hz, 1H), 4.72 (tdd, J = 7.6, 5.4, 4.0 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.25 - 4.08 (m, 5H), 2.77 (td, J = 6.1, 1.1 Hz, 4H), 2.64 - 2.53 (m, 6H), 2.40 (dt, J = 8.7, 6.8 Hz, 2H), 2.31 (ddd, J = 8.0, 7.2, 1.1 Hz, 4H), 2.10 - 2.01 (m, 10H), 1.95 (dddd, J = 11.1, 9.2, 6.9, 3.5 Hz, 1H), 1.91 - 1.81 (m, 3H), 1.69 - 1.49 (m, 7H), 1.39 - 1.20 (m, 42H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.9 Hz, 9H)。MS: 974.0 m/z [M+H]。 實例33-化合物33 化合物33：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(乙基(甲基)胺基)丙氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image074
化合物33係使用實例1中所用之方法自中間物31c及3-((甲基)乙基胺基)丙-1-醇合成，產率79%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.21 (m, 10H), 4.72 (tdd, J = 9.5, 6.7, 4.1 Hz, 1H), 4.38 - 4.25 (m, 2H), 4.25 - 4.10 (m, 4H), 2.77 (td, J = 6.2, 1.1 Hz, 4H), 2.51 - 2.38 (m, 6H), 2.37 - 2.27 (m, 5H), 2.24 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.05 (q, J = 7.1 Hz, 8H), 1.97 - 1.83 (m, 4H), 1.70 - 1.50 (m, 7H), 1.39 - 1.21 (m, 41H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.94 - 0.84 (m, 9H)。960.1 m/z [M+H]。 實例34-化合物34 化合物34：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image076
化合物34係使用實例1中所用之方法自中間物31c及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率59%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.13 (m, 10H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.25 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.73 (m, 4H), 2.53 - 2.35 (m, 6H), 2.35 - 2.27 (m, 4H), 2.21 (d, J = 3.3 Hz, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.96 - 1.74 (m, 3H), 1.66 - 1.43 (m, 7H), 1.41 - 1.21 (m, 41H), 1.05 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 6.9, 5.6 Hz, 9H)。944.7 m/z [M+H]。 實例35-化合物35 化合物35：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image078
化合物35係使用實例1中所用之方法自中間物31c及(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺合成，產率71%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.21 (m, 10H), 4.86 - 4.66 (m, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.1 Hz, 2H), 3.48 - 3.35 (m, 1H), 3.22 - 3.00 (m, 2H), 2.83 - 2.71 (m, 4H), 2.47 - 2.19 (m, 12H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.96 - 1.67 (m, 6H), 1.67 - 1.42 (m, 8H), 1.41 - 1.19 (m, 41H), 0.95 - 0.84 (m, 9H)。956.5 m/z [M+H]。 實例36-化合物36 化合物36：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image080
化合物36係使用實例1中所用之方法自中間物31c及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇合成，產率34%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.22 (m, 9H), 4.72 (tdd, J = 7.4, 5.4, 4.0 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.25 - 4.08 (m, 4H), 2.82 - 2.72 (m, 4H), 2.67 (t, J = 7.6 Hz, 5H), 2.47 - 2.27 (m, 6H), 2.09 - 1.91 (m, 11H), 1.91 - 1.80 (m, 4H), 1.68 - 1.47 (m, 7H), 1.47 - 1.19 (m, 42H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.8 Hz, 9H)。971.3 m/z [M+H]。 實例37-化合物37 化合物37：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image082
化合物37係使用實例1中所用之方法自中間物31c及N1-乙基-N1,N2-二甲基乙-1,2-二胺合成，產率67%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.18 (m, 8H), 4.78 (s, 1H), 4.28 (dt, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 3.44 - 3.24 (m, 2H), 2.91 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 2.81 - 2.71 (m, 4H), 2.60 - 2.21 (m, 12H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 7H), 1.98 - 1.46 (m, 14H), 1.43 - 1.19 (m, 37H), 1.14 - 1.00 (m, 3H), 0.88 (td, J = 7.0, 5.3 Hz, 8H)。958.6 m/z [M+H]。 實例38-化合物38 化合物38：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image084
化合物38係使用實例1中所用之方法自中間物31c及N1,N1,N2-三甲基乙-1,2-二胺合成，產率83%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.19 (m, 8H), 4.78 (s, 1H), 4.28 (dt, J = 11.9, 4.1 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 3.37 (d, J = 23.8 Hz, 2H), 2.91 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 2.82 - 2.72 (m, 4H), 2.54 - 2.21 (m, 13H), 2.04 (q, J = 6.7 Hz, 7H), 1.95 - 1.44 (m, 14H), 1.42 - 1.21 (m, 37H), 0.88 (td, J = 7.0, 5.3 Hz, 8H)。944.5 m/z [M+H]。 實例39-化合物39 中間物39a：溴化癸基鎂
Figure 02_image500
在80℃下經2小時向Mg (10.99 g，2當量)及I2 (0.0001當量)於THF (250 mL)中之溶液逐滴添加1-溴癸烷(1.0當量)。在添加後，將混合物在此溫度下攪拌2 h。獲得呈黑棕色溶液狀之粗產物溴化癸基鎂，其未經進一步純化立即用於下一步中。 中間物39b：4-側氧基十四烷酸
Figure 02_image502
使丁二酸酐(45 g，1.0當量)於THF (1.1 M)中之溶液冷卻至-78℃，接著添加中間物39a。反應維持於-78℃下2 h，接著在15℃下攪拌16 h。接著反應藉由添加飽和NH4 Cl淬滅，用H2 O稀釋，且用EtOAc萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(7.8 g，7%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.74 (dd, J = 6.9, 5.2 Hz, 2H), 2.70 - 2.63 (m, 2H), 2.46 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.67 - 1.54 (m, 2H), 1.29 (d, J = 5.2 Hz, 14H), 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物39c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基十四烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image504
中間物39c係使用中間物1d所用之方法自中間物39b及中間物1c製備。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.18 (m, 9H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.74 (dt, J = 22.1, 6.8 Hz, 6H), 2.66 - 2.56 (m, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.59 (tq, J = 14.2, 7.5 Hz, 7H), 1.41 - 1.18 (m, 44H), 0.88 (td, J = 6.9, 4.6 Hz, 9H)。 中間物39d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十四烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image506
在5℃下向中間物39c於MeOH (0.13 M)中之溶液緩慢添加NaBH4 (2.5當量)。將混合物在此溫度下攪拌2 h。反應混合物藉由添加H2 O淬滅且接著用EtOAc萃取2次。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到無色油狀物，其立即在DCM (1 M)中復原，接著在0℃下添加氯甲酸4-硝基苯酯(1.5當量)及吡啶(2當量)。將混合物在20℃下攪拌12 h，此後反應混合物在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到中間物39d，產率31%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.33 - 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.33 (m, 2H), 5.43 - 5.23 (m, 9H), 4.31 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 4.15 (dd, J = 12.0, 5.8 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.47 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.30 (td, J = 7.6, 4.2 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 7.3 Hz, 10H), 1.67 (dt, J = 47.7, 6.1 Hz, 7H), 1.30 (tq, J = 14.3, 4.9, 3.0 Hz, 53H), 0.88 (td, J = 6.8, 3.5 Hz, 10H)。 化合物39：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十四烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image086
化合物39係使用實例1所用之方法自中間物39d及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率78%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.49 - 5.17 (m, 9H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.3 Hz, 2H), 3.26 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.52 - 2.27 (m, 10H), 2.23 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.95 - 1.42 (m, 14H), 1.42 - 1.18 (m, 40H), 1.05 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 6.8, 4.5 Hz, 7H)。972.9 m/z [M+H]。 實例40-化合物40 中間物40a：4-羥基癸酸
Figure 02_image509
向5-己基四氫呋喃-2-酮(15 g，1.0當量)於EtOH (240 mL)及H2 O (80 mL)中之溶液添加NaOH (2.0當量)。將反應在25℃下攪拌12 h。濃縮混合物以移除EtOH。接著其藉由1 N HCl水溶液調整pH至5且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈白色固體狀之產物(48%)。 中間物40b：4-側氧基癸酸
Figure 02_image511
向NaH2 PO4 (17當量)及Na2 HPO4 (2.4當量)於H2 O (1000 mL)中之溶液添加中間物40a (10 g，1.0當量)。接著將NaClO (200 mL，6~8% Cl)添加至溶液。將反應混合物在25℃下攪拌12 h。接著向混合物添加H3 PO4 (200 mL，85%)及矽膠(300 g)。混合物在減壓下乾燥且用EtOAc洗滌3次。有機層在減壓下濃縮，得到粗產物。粗產物藉由矽膠層析法(EtoAc/己烷)來純化，得到呈白色固體狀之產物(80%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.70 (dd, J = 7.0, 5.3 Hz, 2H), 2.63 - 2.58 (m, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.58 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.33 - 1.19 (m, 6H), 0.90 - 0.83 (m, 3H)。 中間物40c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image513
中間物40c係使用實例1所用之方法自中間物40b及中間物1c合成，產率40%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (tt, J = 5.9, 4.3 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.73 (dt, J = 22.4, 6.7 Hz, 7H), 2.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.59 (q, J = 6.7 Hz, 7H), 1.40 - 1.22 (m, 35H), 0.88 (td, J = 6.8, 4.0 Hz, 9H)。 中間物40d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image515
中間物40d係使用中間物1e所用之方法自中間物40c合成，產率31%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.37 - 8.27 (m, 2H), 7.43 (dd, J = 9.1, 5.9 Hz, 2H), 5.45 - 5.24 (m, 9H), 4.34 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 11.9, 6.0 Hz, 2H), 2.79 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.49 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.41 - 2.30 (m, 4H), 2.07 (q, J = 6.9 Hz, 9H), 1.83 - 1.58 (m, 7H), 1.48 - 1.12 (m, 37H), 1.00 - 0.82 (m, 9H)。 化合物40：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image088
化合物40係使用實例1所用之方法自中間物40d及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率53%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.19 (m, 9H), 4.76 (s, 1H), 4.32 - 4.22 (m, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.4 Hz, 2H), 3.26 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.57 - 2.36 (m, 6H), 2.36 - 2.27 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.6 Hz, 8H), 1.98 - 1.42 (m, 15H), 1.41 - 1.19 (m, 35H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 9.7, 8.2, 4.2 Hz, 9H)。MS: 916.7 m/z [M+H]。 實例41-化合物41 中間物41a：4-環己基-4-側氧基丁酸
Figure 02_image518
向丁二酸酐(30 g，1.0當量)於Et2 O (300 mL)中之溶液添加CuI (0.1當量)。使混合物冷卻至-20℃。接著，將溴化環己基鎂(1.0當量)添加至混合物。反應升溫至25℃且攪拌14 h。反應藉由添加1 M HCl水溶液淬滅且攪拌15分鐘。接著將反應過濾，且將濾液用DCM萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈淺粉色固體狀之產物(13%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.09 (s, 1H), 2.66 (dt, J = 55.4, 6.5 Hz, 4H), 2.35 (td, J = 10.8, 9.3, 5.2 Hz, 1H), 1.75 (ddd, J = 43.2, 36.6, 11.9 Hz, 5H), 1.46 - 1.09 (m, 5H)。 中間物41b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-環己基-4-側氧基丁醯基)氧基)丙-1,3-二基酯
Figure 02_image520
中間物41b係使用實例1所用之方法自中間物41a及中間物1c合成，產率34%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (ddd, J = 10.2, 5.6, 4.2 Hz, 1H), 4.28 (dt, J = 11.9, 4.6 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 2.3 Hz, 2H), 2.81 - 2.70 (m, 6H), 2.64 - 2.54 (m, 3H), 2.38 - 2.27 (m, 5H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.89 - 1.55 (m, 11H), 1.40 - 1.20 (m, 34H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H)。 中間物41c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-環己基-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丁醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image522
中間物41c係使用實例1所用之方法自中間物41b合成，產率14%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.33 - 8.21 (m, 2H), 7.45 - 7.34 (m, 2H), 5.44 - 5.13 (m, 9H), 4.70 (ddd, J = 9.3, 6.1, 3.4 Hz, 1H), 4.50 (dd, J = 12.3, 3.9 Hz, 1H), 4.35 - 4.10 (m, 4H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.50 - 2.40 (m, 2H), 2.38 - 2.22 (m, 4H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 10H), 1.85 - 1.52 (m, 10H), 1.49 - 1.00 (m, 31H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H)。 化合物41：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-環己基-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)丁醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image090
化合物41係使用中間物1e所用之方法自中間物41d及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率60%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.09 (m, 9H), 4.60 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 1.6 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 2.9 Hz, 2H), 3.25 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.54 - 2.15 (m, 12H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.99 - 0.95 (m, 50H), 0.93 - 0.80 (m, 6H)。MS: 914.5 m/z [M+H]。 實例42-化合物42 中間物42a：4-羥基辛酸
Figure 02_image525
中間物42a係使用中間物39b所用之方法自5-丁基四氫呋喃-2-酮合成，產率53%。 中間物42b：4-側氧基辛酸
Figure 02_image527
中間物42b係使用中間物38b所用之方法自中間物42a合成，產率61%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.65 (ddd, J = 7.0, 5.8, 1.1 Hz, 2H), 2.56 (ddd, J = 7.1, 6.0, 1.2 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.56 - 1.44 (m, 2H), 1.30 - 1.17 (m, 2H), 0.84 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。 中間物42c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image529
中間物42c係使用實例1所用之方法自中間物42b及中間物1c合成，產率29%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.35 (tq, J = 18.2, 9.4, 7.6 Hz, 8H), 5.24 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 12.0, 3.9 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 12.1, 5.8 Hz, 2H), 2.74 (dt, J = 20.9, 6.7 Hz, 6H), 2.59 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.60 (t, J = 7.5 Hz, 8H), 1.31 (d, J = 14.1 Hz, 29H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H)。 中間物42d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image531
中間物42d係使用中間物1e所用之方法自中間物40c合成，產率51%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.28 (dd, J = 7.8, 4.7 Hz, 2H), 7.47 - 7.36 (m, 2H), 5.32 (dp, J = 19.8, 9.2 Hz, 8H), 5.17 (s, 1H), 4.87 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.36 - 4.09 (m, 4H), 2.75 (d, J = 6.7 Hz, 4H), 2.49 (dt, J = 23.8, 7.9 Hz, 2H), 2.42 - 2.14 (m, 5H), 2.03 (q, J = 7.2 Hz, 10H), 1.73 (s, 1H), 1.61 (dd, J = 23.8, 11.9 Hz, 6H), 1.31 (d, J = 14.4 Hz, 30H), 0.89 (tt, J = 9.5, 7.0, 2.7 Hz, 9H)。 化合物42：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image533
化合物42係使用實例1所用之方法自中間物42d及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率93%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.10 (m, 11H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 1.3 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.8, 5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.25 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.39 (ddd, J = 8.7, 6.6, 4.3 Hz, 6H), 2.35 - 2.28 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.96 - 1.74 (m, 3H), 1.61 (s, 11H), 1.42 - 1.22 (m, 34H), 1.10 - 0.99 (m, 3H), 0.95 - 0.83 (m, 9H)。 實例43-化合物43 中間物43a：4-羥基丁酸鈉
Figure 02_image535
向四氫呋喃-2-酮(10 g，1.0當量)於H2 O (100 mL)中之混合物添加NaOH (4.0當量)，且將混合物脫氣且用N2 淨化3次。將混合物在N2 氛圍下在25℃下攪拌24小時。接著在減壓下濃縮反應混合物，得到呈無色油狀之粗殘餘物，其未經進一步純化即用於下一步中(12 g，粗)。 中間物43b：4-羥基丁酸苯甲酯
Figure 02_image537
向中間物43a (12 g，1.0當量)於丙酮(100 mL)中之混合物添加TBAB (0.05當量)及苯甲基溴(1.2當量)，且將混合物脫氣且用N2 淨化3次。將混合物在N2 氛圍下在60℃下攪拌12小時。接著在減壓下濃縮反應混合物，且所得殘餘物用EtOAc稀釋且用1 N NaHS O4 、NaHCO3 及H2 O各洗滌1次。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，且粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(43%)。 中間物43c：4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丁酸苯甲酯
Figure 02_image539
向中間物43b (5 g，1.0當量)於DCM (150 mL)中之混合物添加氯甲酸4-硝基苯酯(1.0當量)，且將混合物脫氣且用N2 淨化3次。使反應冷卻至0℃，接著添加吡啶(2.0當量)。將反應在N2 氛圍下在25℃下攪拌5 h。接著在減壓下濃縮反應混合物，用己烷稀釋，且過濾。將濾液用H2 O洗滌10次，且將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。粗物質藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(32%)。 中間物43d：4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)丁酸苯甲酯
Figure 02_image541
向中間物43c (3 g，1.0當量)於MeCN (50 mL)中之混合物添加N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺(2.5當量)、吡啶(3.0當量)及DMAP (1.0當量)。將混合物脫氣且用N2 淨化3次，且將混合物在N2 下在70℃下攪拌12 h。接著在減壓下濃縮反應混合物，且粗殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(56%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.33 - 7.23 (m, 4H), 5.24 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.04 (dt, J = 12.9, 6.7 Hz, 2H), 3.19 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 3.00 (s, 1H), 2.39 (dt, J = 10.4, 6.6 Hz, 6H), 2.13 (s, 3H), 1.89 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 0.98 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 中間物43e：4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)丁酸
Figure 02_image543
向中間物43d (1.5 g，1.0當量)於MeOH (30 mL)中之混合物添加Pd/C (10% wt，0.05當量)，且將混合物脫氣且用H2 淨化3次。將反應混合物在H2 氛圍下在25℃下攪拌1 h，此後濃縮濾液，得到粗殘餘物，其未經進一步純化即用於下一步中。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 4.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.49 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.29 - 3.21 (m, 5H), 2.89 (s, 3H), 2.38 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.92 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 1.34 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。 化合物43：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)丁醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image094
化合物43係使用中間物1d所用之方法自中間物43d及中間物1c合成，產率45%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.22 (m, 9H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.18 - 4.06 (m, 4H), 3.25 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.43 (dt, J = 10.5, 7.3 Hz, 6H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.95 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 1.59 (d, J = 7.1 Hz, 7H), 1.40 - 1.22 (m, 26H), 1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H)。 實例44-化合物44 化合物44：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image545
化合物44係使用中間物1e所用之方法自中間物40d及(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺合成，35%產率。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.20 (m, 9H), 5.16 (s, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.0 Hz, 2H), 3.39 (s, 1H), 3.10 (d, J = 27.2 Hz, 2H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.43 - 2.18 (m, 11H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.96 - 1.42 (m, 17H), 1.30 (dqt, J = 12.8, 8.8, 5.4 Hz, 36H), 0.92 - 0.83 (m, 9H)。MS: 928.9 m/z [M+H]。 實例45-化合物45 化合物45：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image547
化合物45係使用實例1所用之方法自中間物40d及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇合成，產率52%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.21 (m, 9H), 4.72 (ddd, J = 11.3, 8.8, 5.7 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.25 - 4.10 (m, 4H), 2.81 - 2.74 (m, 4H), 2.59 (s, 5H), 2.40 (dt, J = 8.6, 6.4 Hz, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.98 - 1.78 (m, 9H), 1.67 - 1.51 (m, 7H), 1.41 - 1.21 (m, 36H), 0.88 (td, J = 7.0, 5.0 Hz, 9H)。MS: 943.8 m/z [M+H]。 實例46-化合物46 化合物46：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image549
化合物46係使用實例1所用之方法自中間物1e及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺合成，產率53%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.55 (s, 1H), 5.46 - 5.21 (m, 9H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.6 Hz, 2H), 3.35 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.81 - 2.60 (m, 9H), 2.39 (ddd, J = 8.6, 6.7, 3.8 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.84 (s, 7H), 1.66 - 1.19 (m, 55H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.3 Hz, 9H)。MS: 1012.5 m/z [M+H]。 實例47-化合物47 化合物47：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基哌啶-4-基)氧基)羰基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image551
向中間物1e (250 mg，1.0當量)於MeCN (0.1 M)中之溶液添加吡啶(3.0當量)、1-甲基哌啶-4-醇(1.5當量)及DMAP (1.0當量)。將反應在室溫下攪拌18 h。添加另一部分1-甲基哌啶-4-醇(3.0當量)，且將混合物加熱至50℃。在2 h後，添加另一部分DMAP (1.0當量)，且反應再維持2 h。結束後，接著將庚烷(0.1 M)添加至反應混合物，且將庚烷層用MeCN洗滌3次。將合併之MeCN層用庚烷反萃取三次，且合併之庚烷層最後用MeCN洗滌一次。接著真空移除庚烷，且粗物質藉由管柱層析法(MeOH/DCM)來純化，得到呈無色油狀之產物(62 mg，32%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.20 (m, 9H), 4.77 - 4.60 (m, 2H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.6 Hz, 2H), 2.83 - 2.66 (m, 6H), 2.46 - 2.26 (m, 11H), 2.08 - 1.71 (m, 18H), 1.71 - 1.47 (m, 8H), 1.40 - 1.21 (m, 47H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.2 Hz, 9H)。MS: 1013.7 m/z [M+H]。 實例48-化合物48 化合物48：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(雙(2-羥基乙基)胺基)丙基)胺甲醯基)氧基)十六烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image553
向中間物1e (250 mg，1.0當量)於MeCN (0.1 M)中之溶液添加吡啶(3.0當量)及2-[(3-胺基丙基)(2-羥基乙基)胺基]乙-1-醇(1.5當量)。將反應在室溫下攪拌2 h。結束後，接著將庚烷(0.1 M)添加至反應混合物，且將庚烷層用MeCN洗滌3次。將合併之MeCN層用庚烷反萃取三次，且合併之庚烷層最後用MeCN洗滌一次。接著真空移除庚烷，且粗物質藉由管柱層析法(MeOH/DCM)來純化，得到呈無色油狀之產物(97 mg，48%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.20 (m, 9H), 4.76 (s, 1H), 4.29 (ddd, J = 11.9, 4.6, 1.8 Hz, 2H), 4.16 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 3.72 (t, J = 5.0 Hz, 4H), 3.35 - 3.22 (m, 2H), 2.98 - 2.46 (m, 14H), 2.41 - 2.28 (m, 6H), 2.09 - 1.86 (m, 9H), 1.80 (dd, J = 14.2, 7.2 Hz, 3H), 1.67 - 1.42 (m, 7H), 1.42 - 1.18 (m, 46H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.3 Hz, 9H)。MS: 1060.6 m/z [M+H]。 實例49 - 比較化合物49 化合物49：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)-2-((((3-(二乙基胺基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯
Figure 02_image555
化合物49係根據WO 2015/095340 Al (實例13)中所述之方法合成。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 5.35 (m, 4H), 4.48 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.17 (m, 8H), 3.56 (m, 2H), 3.40 (m, 2H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.55 (q, J = 7.2 Hz, 6H), 2.40 (m, 3H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 1.92 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.57 (m, 6H), 1.30 (m, 34H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 0.88 (m, 9H) ppm；MS: 853 m/z [M+H]。 實例50-化合物50 化合物50：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image106
化合物50係使用實例1所用之方法自中間物40d及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺合成，產率36%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.49 - 5.29 (m, 8H), 5.27 - 5.20 (m, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.8 Hz, 2H), 3.35 (s, 2H), 2.83 - 2.44 (m, 10H), 2.39 (ddd, J = 8.4, 6.7, 3.3 Hz, 2H), 2.36 - 2.25 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.98 - 1.43 (m, 15H), 1.42 - 1.20 (m, 33H), 0.89 (td, J = 6.1, 5.4, 0.9 Hz, 9H)。MS: 928.6 m/z [M+H]。 實例51-化合物51 化合物51：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image558
化合物51係使用實例1所用之方法自中間物31c及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺合成，產率27%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.55 (s, 1H), 5.44 - 5.28 (m, 8H), 5.28 - 5.22 (m, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.9 Hz, 2H), 3.37 (s, 2H), 2.83 - 2.51 (m, 10H), 2.39 (ddd, J = 8.4, 6.8, 3.1 Hz, 2H), 2.35 - 2.27 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.97 - 1.41 (m, 17H), 1.41 - 1.20 (m, 40H), 0.94 - 0.84 (m, 9H)。MS: 957.0 m/z [M+H]。 實例52-化合物52 中間物52a：3-羥基十一烷酸苯甲酯
Figure 02_image560
在N2 下在66℃下向THF溶液(150 mL)逐滴添加Zn (22.99 g，1.0當量)及壬醛(25 g，1.0當量)。接著，將2-溴乙酸苯甲酯(50.00 g，1.24當量)逐滴緩慢且小心地添加至反應混合物。在添加2-溴乙酸苯甲酯結束後，使混合物冷卻且在20℃下攪拌2 h。接著在減壓下濃縮反應混合物以移除THF，且將所得殘餘物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮且藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(25 g，49%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.33 - 7.24 (m, 5H), 5.09 (s, 2H), 3.95 (tt, J = 7.7, 3.8 Hz, 1H), 2.75 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 2.56 - 2.35 (m, 2H), 1.54 - 1.11 (m, 18H), 0.81 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物52b：3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十一烷酸苯甲酯
Figure 02_image562
在N2 氛圍下向中間物52a (25 g，1.0當量)於DCM (250 mL)中之溶液添加氯甲酸(4-硝基苯基)酯(17.23 g，1.0當量)及吡啶(13.80 mL，2.0當量)。將混合物在20℃下攪拌2 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM，且所得殘餘物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮且藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(12 g，31%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.31 - 8.01 (m, 4H), 7.28 (s, 5H), 5.22 - 5.14 (m, 2H), 5.13 - 5.01 (m, 4H), 2.68 (dd, J = 14.8, 6.4 Hz, 3H), 1.75 - 1.64 (m, 2H), 1.30 - 1.19 (m, 18H), 0.80 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物52c：3-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷酸苯甲酯
Figure 02_image564
向中間物52b (14 g，1.0當量)及N'-乙基-N'-甲基-乙-1,2-二胺(6.25 g，2.0當量)於MeCN (400 mL)中之溶液添加吡啶(7.41 mL，3.0當量)及DMAP (3.74 g，1.0當量)。將混合物在20℃下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除MeCN，且所得殘餘物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。在減壓下濃縮合併之有機層且藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(6 g，47%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.39 - 7.28 (m, 5H), 5.11 (s, 4H), 3.21 (h, J = 6.8 Hz, 2H), 2.62 (td, J = 14.4, 13.6, 6.4 Hz, 2H), 2.50 - 2.39 (m, 4H), 1.59 (h, J = 8.2 Hz, 2H), 1.25 (d, J = 16.1 Hz, 14H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物52d：3-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷酸
Figure 02_image566
向中間物52c (6 g，1.0當量)於MeOH (60 mL)中之溶液添加Pd/C (2 g，10% w/w)。將混合物在H2 下在20℃下攪拌2 h。接著過濾反應混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈棕色油狀之產物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 12.76 (s, 1H), 6.28 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.01 (p, J = 6.1, 5.6 Hz, 1H), 3.30 (qq, J = 13.8, 6.0 Hz, 2H), 2.70 (hd, J = 12.1, 11.0, 5.4 Hz, 3H), 2.37 (d, J = 14.1 Hz, 4H), 1.51 (ddq, J = 21.6, 14.2, 6.7 Hz, 2H), 1.34 - 1.14 (m, 11H), 1.10 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 化合物52：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((3-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image568
向中間物52d (1.0-1.1當量)及中間物1c (1.0-1.1當量)於DCM (0.1-0.25當量)中之溶液依次添加DMAP (0.25當量)、DIPEA (3.5當量)及EDCI (1.5當量)。將反應在23℃下攪拌至少16 h。將額外DMAP (0.25當量)添加至反應，且將反應在23℃下再攪拌6 h。接著反應藉由添加水淬滅，用1 M HCl洗滌1次且用5% NaHCO3 洗滌1次。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(28%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.53 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 15.9, 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 13.4, 6.8 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.59 (tt, J = 15.9, 9.0 Hz, 6H), 2.37 - 2.14 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 7H), 1.59 (d, J = 14.2 Hz, 12H), 1.46 - 0.97 (m, 42H), 0.96 - 0.81 (m, 9H)。MS: 930.8 m/z [M+H]。 實例53-化合物53 中間物53a：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(羥基甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image570
向亞油酸(20 g，1.0當量)及2-(羥基甲基)丙-1,3-二醇(7.57 g，1.0當量)於DCM (200 mL)中之溶液添加EDCI (13.67 g，1.0當量)、DMAP (1.39 g，0.16當量)及DIPEA (37.27 mL，3.0當量)。將混合物在20℃下攪拌2小時。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM，且將所得殘餘物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(6.3 g，11%)。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 5.44 - 5.30 (m, 8H), 4.17 (qd, J = 11.1, 6.0 Hz, 4H), 3.63 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.80 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 2.35 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 2.21 (h, J = 6.0 Hz, 1H), 2.14 - 2.03 (m, 8H), 1.64 (p, J = 7.4 Hz, 4H), 1.46 - 1.28 (m, 27H), 0.93 (t, J = 6.7 Hz, 6H)。 化合物53：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(11-甲基-5-辛基-3,7-二側氧基-2,6-二氧雜-8,11-二氮雜十三烷基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image572
化合物53係使用化合物52所用之方法自中間物52d及中間物53a合成，產率45%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.48 - 5.24 (m, 8H), 5.07 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.20 - 4.07 (m, 6H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.62 - 2.46 (m, 4H), 2.45 - 2.37 (m, 2H), 2.34 - 2.15 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.43 - 0.97 (m, 43H), 0.95 - 0.83 (m, 9H)。MS: 944.8 m/z [M+H]。 實例54-化合物54 中間物54a：4-羥基十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image574
向5-辛基四氫呋喃-2-酮(20 g，1.0當量)於水(200-250 mL)中之溶液添加NaOH (1.1當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌24小時。接著，在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑水。在丙酮(200 mL)中復原所得粗物質，接著添加TBAB (0.05當量)及BnBr (1.2-1.5當量)。將混合物加熱至60℃且在N2 氛圍下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮混合物，且將所得殘餘物傾倒至飽和NaHCO3 溶液中。將產物用EtOAc萃取3次，且將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(20 g，39%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45 - 7.29 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.65 - 3.57 (m, 1H), 2.51 (td, J = 7.2, 2.7 Hz, 2H), 1.86 (dtd, J = 14.6, 7.4, 3.5 Hz, 1H), 1.71 (ddd, J = 14.2, 8.6, 7.1 Hz, 1H), 1.61 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 1.52 - 1.17 (m, 17H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物54b：4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image576
向中間物54a (10 g，1.0當量)於DCM (80-100 mL)中之溶液添加氯甲酸(4-硝基苯基)酯(1.5當量)。將反應脫氣且用N2 淨化3次且冷卻至0℃，接著添加吡啶(2.0當量)。將反應混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5 h。結束後，在減壓下濃縮混合物且所得殘餘物在己烷中復原且過濾。將所得濾液用水洗滌3次，且將有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(9 g，29%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.27 (dd, J = 9.8, 7.8 Hz, 2H), 7.50 - 7.30 (m, 8H), 5.12 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.87 (ddt, J = 12.2, 7.3, 4.1 Hz, 1H), 2.50 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.16 - 2.06 (m, 1H), 1.99 (dq, J = 14.8, 7.5 Hz, 1H), 1.73 (ddd, J = 14.0, 12.0, 7.0 Hz, 1H), 1.63 (tt, J = 8.6, 4.5 Hz, 1H), 1.45 - 1.19 (m, 12H), 0.94 - 0.84 (m, 3H)。 中間物54c：4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image578
向中間物54b (9 g，1.0當量)於MeCN (45-90 mL)中之溶液添加N'-乙基-N'-甲基-乙-1,2-二胺(1.5- 2.5當量)、吡啶(3-4當量)及DMAP (2.33 g，1.0當量)，且將所得混合物脫氣且用N2 淨化3次。將反應加熱至70℃且在N2 氛圍下攪拌2 h。結束後，混合物濃縮以移除溶劑，且所得殘餘物用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3 洗滌3次，且用水洗滌3次。接著有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈淺黃色油狀之產物(5 g，60%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.38 - 7.22 (m, 5H), 5.04 (s, 2H), 4.69 (s, 1H), 3.16 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.45 - 2.27 (m, 6H), 2.13 (s, 3H), 1.95 - 1.71 (m, 2H), 1.40 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 1.34 - 1.09 (m, 13H), 0.96 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物54d：4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸
Figure 02_image580
向中間物54c (6 g，1.0當量)於MeOH (60 mL)中之溶液添加Pd/C (1.8 g，10% w/w)。將混合物在H2 下在20℃下攪拌5 h。接著過濾反應混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈棕色油狀之產物(3.2 g，67%)。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 4.76 (dp, J = 8.1, 4.1 Hz, 1H), 3.65 (dt, J = 14.0, 7.0 Hz, 1H), 3.28 - 3.10 (m, 4H), 3.07 (ddd, J = 11.3, 7.5, 2.1 Hz, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.27 (ddd, J = 14.0, 8.2, 4.4 Hz, 1H), 2.20 - 1.99 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 1H), 1.71 - 1.56 (m, 1H), 1.48 (dq, J = 13.7, 7.6, 6.8 Hz, 1H), 1.31 (dd, J = 14.1, 7.0 Hz, 14H), 0.94 - 0.83 (m, 3H)。 化合物54：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(12-甲基-6-辛基-3,8-二側氧基-2,7-二氧雜-9,12-二氮雜十四烷基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image582
化合物54係使用化合物52所用之方法自中間物54d及中間物53a合成，產率47%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.26 (m, 8H), 4.75 (s, 1H), 4.12 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.55 - 2.34 (m, 6H), 2.34 - 2.19 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.97 - 1.70 (m, 4H), 1.61 (t, J = 7.2 Hz, 10H), 1.41 - 1.00 (m, 43H), 0.94 - 0.82 (m, 9H)。MS: 959.1 m/z [M+H]。 實例55-化合物55 中間物55a：5-羥基十三烷酸苯甲酯
Figure 02_image584
中間物55a係使用中間物54a所用之方法自6-辛基四氫哌喃-2-酮製備，產率25%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.34 (qt, J = 9.5, 4.5 Hz, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.57 (s, 1H), 2.39 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.85 - 1.65 (m, 2H), 1.60 - 1.11 (m, 18H), 0.98 - 0.80 (m, 3H)。 中間物55b：5-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十三烷酸苯甲酯
Figure 02_image586
中間物55b係使用中間物54b所用之方法，自中間物55a製備，產率37%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.32 - 8.24 (m, 3H), 7.39 (dddd, J = 20.3, 9.9, 5.7, 1.9 Hz, 8H), 5.12 (s, 2H), 4.87 - 4.75 (m, 1H), 2.41 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.69 (dddt, J = 33.5, 23.3, 14.2, 6.0 Hz, 6H), 1.51 - 1.01 (m, 13H), 0.87 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物55c：5-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三烷酸苯甲酯
Figure 02_image588
中間物55c係使用中間物54c所用之方法自中間物55b製備，產率53%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.41 - 7.18 (m, 5H), 5.04 (s, 2H), 4.65 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 3.19 (q, J = 6.4, 5.9 Hz, 2H), 2.49 - 2.23 (m, 6H), 2.16 (d, J = 29.0 Hz, 3H), 1.69 - 1.54 (m, J = 6.7 Hz, 2H), 1.44 (tt, J = 13.6, 7.1 Hz, 4H), 1.37 - 1.05 (m, 14H), 0.98 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物55d：5-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三烷酸
Figure 02_image590
向中間物55c (2.2 g，1.0當量)於THF (20 mL)中之溶液添加Pd/C (2.5 g，10% w/w)。將混合物在H2 下在20℃下攪拌5 h。接著過濾反應混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈棕色油狀之產物(1 g，58%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 12.81 (s, 1H), 5.93 - 5.72 (m, 1H), 4.61 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.68 - 3.47 (m, 1H), 3.29 - 3.04 (m, 1H), 2.76 (tt, J = 17.2, 9.1 Hz, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.34 - 2.06 (m, 2H), 1.85 - 0.87 (m, 22H), 0.80 (t, J = 6.4 Hz, 3H)。 化合物55：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(13-甲基-7-辛基-3,9-二側氧基-2,8-二氧雜-10,13-二氮雜十五烷基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image592
化合物55係使用化合物52所用之方法自中間物53a及中間物55d製備，產率58%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.27 (m, 8H), 4.73 (s, 1H), 4.12 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 3.32 (s, 2H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.49 (d, J = 45.9 Hz, 4H), 2.43 - 2.22 (m, 10H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.75 - 1.42 (m, 13H), 1.42 - 1.21 (m, 40H), 1.11 (s, 3H), 0.95 - 0.82 (m, 9H)。MS: 972.8 m/z [M+H]。 實例56-化合物56 中間物56a：9-(癸基氧基)-9-側氧基壬酸
Figure 02_image594
在0℃下向壬二酸(90 g，1.0當量)於THF (300-900 mL)中之混合物逐滴添加DMF (0.1-0.2當量)及(COCl)2 (1.0當量)。將混合物脫氣且用N2 淨化3次，且接著將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌2 h。在0℃下將癸-1-醇(1.0當量)逐滴添加至反應混合物且在N2 氛圍下在20℃下攪拌2 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑，且將所得溶液傾倒至水中且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，接著經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈白色固體狀之產物(20 g，6%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.05 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.62 (q, J = 7.3 Hz, 6H), 1.41 - 1.15 (m, 19H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物56b：二(壬二酸) 9,9'-二癸酯O'1,O1-(2-側氧基丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image596
在0℃下向1,3-二羥基丙-2-酮(1.37 g，0.5當量)、EDCI (1.0當量)及DMAP (1.0當量)於DCM (100-200 mL)中之混合物逐份添加中間物56a (1.0當量)，且將混合物脫氣且用N2 淨化3次。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5小時。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑，且將所得溶液傾倒至水中且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，接著經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈白色固體狀之產物(10 g，46%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.74 (d, J = 2.1 Hz, 4H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.41 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.28 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 1.62 (d, J = 8.8 Hz, 12H), 1.39 - 1.19 (m, 39H), 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 6H)。 中間物56c：二(壬二酸) 9,9’-二癸酯O'1,O1-(2-羥基丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image598
在0℃下在N2 下向中間物56b (13.4 g，1.0當量)於THF/甲苯/水(4:1:2，0.4 M)中之溶液添加NaBH4 (1.5當量)。將混合物在N2 下在15-20℃下攪拌5 h。結束後，將反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，接著經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈白色固體狀之產物(5.1 g，38%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.15 - 4.03 (m, 5H), 3.98 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.44 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.25 (dt, J = 24.2, 7.5 Hz, 8H), 1.55 (q, J = 7.1 Hz, 12H), 1.22 (d, J = 22.7 Hz, 38H), 0.81 (t, J = 6.7 Hz, 6H)。 化合物56：二(壬二酸) 9,9’-二癸酯O'1,O1-(2-((3-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image600
化合物56係使用化合物52所用之方法自中間物52d及中間物56c製備，產率36%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.24 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.13 - 5.04 (m, 1H), 4.28 (ddd, J = 14.5, 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 8.3, 5.8 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.31 (s, 2H), 2.58 (qd, J = 15.3, 6.4 Hz, 6H), 2.30 (dt, J = 10.3, 7.6 Hz, 10H), 1.61 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 16H), 1.29 (dt, J = 17.6, 3.3 Hz, 54H), 0.88 (td, J = 6.9, 1.9 Hz, 9H)。MS: 1027.2 m/z [M+H]。 實例57-化合物57 化合物57：二(壬二酸) 9,9’-二癸酯O'1,O1-(2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image602
化合物57係使用化合物52所用之方法自中間物54d及中間物56c製備，產率55%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 - 5.21 (m, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.8, 4.4, 1.2 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.9, 4.6 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.29 (s, 2H), 2.38 (ddd, J = 8.6, 6.9, 2.7 Hz, 5H), 2.35 - 2.12 (m, 10H), 1.98 - 1.73 (m, 3H), 1.68 - 1.37 (m, 17H), 1.29 (dt, J = 19.5, 4.1 Hz, 54H), 0.88 (td, J = 6.9, 1.9 Hz, 9H)。MS: 1040.8 m/z [M+H]。 實例58-化合物58 化合物58：二(壬二酸) 9,9’-二癸酯O'1,O1-(2-((5-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯
Figure 02_image604
化合物58係使用化合物52所用之方法自中間物55d及中間物56c製備，產率60%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.27 - 5.20 (m, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 2.8 Hz, 2H), 4.13 (ddd, J = 11.9, 5.9, 2.6 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 3.31 (s, 2H), 2.39 - 2.09 (m, 12H), 1.62 (dq, J = 13.8, 7.2, 6.5 Hz, 22H), 1.41 - 0.99 (m, 54H), 0.88 (td, J = 6.9, 2.0 Hz, 9H)。MS: 1055.0 m/z [M+H]。 實例59-化合物59 中間物59a：9-側氧基-9-(十一烷基氧基)壬酸
Figure 02_image606
中間物59a係使用中間物56a所用之方法自壬二酸及十一-1-醇製備，產率41%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.05 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.31 (dt, J = 22.6, 7.5 Hz, 4H), 1.62 (q, J = 7.1 Hz, 6H), 1.40 - 1.18 (m, 23H), 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物59b：二(壬二酸) O’1,O1-(2-側氧基丙-1,3-二基)酯9,9'-雙十一烷酯
Figure 02_image608
中間物59b係使用中間物56b所用之方法自1,3-二羥基丙-2-酮及中間物59a製備，產率23%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.98 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.57 (dt, J = 18.6, 6.9 Hz, 6H), 1.36 - 1.12 (m, 23H), 0.89 - 0.76 (m, 3H)。 中間物59c：二(壬二酸) O’1,O1-(2-羥基丙-1,3-二基)酯9,9'-雙十一烷酯
Figure 02_image610
中間物59c係使用中間物56c所用之方法自中間物59b製備，產率47%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.23 - 4.00 (m, 9H), 2.52 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.31 (dt, J = 24.2, 7.5 Hz, 8H), 1.62 (q, J = 7.0 Hz, 13H), 1.29 (d, J = 23.9 Hz, 43H), 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 6H)。 化合物59：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((3-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-雙十一烷酯
Figure 02_image124
化合物59係使用化合物52所用之方法自中間物52d及中間物59c製備，產率35%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.23 (s, 1H), 5.08 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 4.28 (ddd, J = 15.0, 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.14 (dt, J = 13.1, 6.7 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.58 (qd, J = 15.4, 6.6 Hz, 4H), 2.30 (dt, J = 10.4, 7.5 Hz, 10H), 1.60 (q, J = 7.7, 6.9 Hz, 20H), 1.43 - 0.97 (m, 58H), 0.88 (td, J = 6.9, 1.9 Hz, 9H)。MS: 1054.9 m/z [M+H]。 實例60-化合物60 化合物60：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-雙十一烷酯
Figure 02_image613
化合物60係使用化合物52所用之方法自中間物54d及中間物59c製備，產率79%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.25 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 2.7 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 11.7, 5.6 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.38 (t, J = 7.5 Hz, 5H), 2.35 - 2.11 (m, 10H), 1.98 - 1.41 (m, 23H), 1.41 - 0.96 (m, 57H), 0.88 (td, J = 6.9, 1.8 Hz, 9H)。MS: 1068.9 m/z [M+H]。 實例61-化合物61 化合物61：二(壬二酸) O’1,O1-(2-((5-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三烷醯基)氧基)丙-1,3-二基)酯9,9'-雙十一烷酯
Figure 02_image615
化合物61係使用化合物52所用之方法自中間物55d及中間物59c製備，產率61%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.29 - 5.20 (m, 1H), 4.72 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 2.3 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.9, 2.0 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.82 - 2.13 (m, 15H), 1.82 - 1.39 (m, 21H), 1.39 - 0.97 (m, 56H), 0.88 (td, J = 6.9, 1.9 Hz, 9H)。MS: 1083.0 m/z [M+H]。 實例62-化合物62 中間物62a：1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-羥基丙-2-酮
Figure 02_image617
在0℃下向1,3-二羥基丙-2-酮(50 g，1.0當量)、咪唑(37.79 g，1.0當量)於THF (40 mL)中之混合物添加TBSCl (83.66 g，1.0當量)，且將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌2 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物，其藉由管柱層析法(EtOAc/hex)來純化，得到呈無色油狀之產物(15 g，13%)。 中間物62b：壬二酸1-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-側氧基丙基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image619
在0℃下向中間物62a (10 g，1.0當量)、EDCI (9.38 g，1.0當量)及DMAP (5.98 g，1.0當量)於DCM (300 mL)中之混合物添加中間物59a (16.76 g，1.0當量)，且將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM且將所得殘餘物用水稀釋。將粗物質用EtOAc萃取3次，且合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(11 g，43%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.84 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.95 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.18 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.61 - 1.48 (m, 6H), 1.30 - 1.12 (m, 22H), 0.82 (s, 9H), 0.78 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物62c：壬二酸1-(3-羥基-2-側氧基丙基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image621
向中間物62b (11 g，1.0當量)於THF (50 mL)中之混合物添加HF吡啶(3.75 mL，8.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5 h。結束後，將反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈白色固體狀之產物(6 g，70%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.70 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.95 (s, 1H), 2.36 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.57 (dt, J = 20.3, 7.1 Hz, 6H), 1.37 - 1.10 (m, 22H), 0.81 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物62d：壬二酸1-(3-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯基)氧基)-2-側氧基丙基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image623
在0℃下向中間物62c (6 g，1.0當量)於DCM (100 mL)中之溶液添加EDCI (1.0當量)、DMAP (1.0當量)。將溶液脫氣且用N2 淨化3次，接著添加亞油酸(4 mL，1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM且將所得殘餘物用水稀釋。將粗物質用EtOAc萃取3次，且合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(7.5 g，55%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.70 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.95 (s, 1H), 2.36 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.22 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.57 (dt, J = 20.3, 7.1 Hz, 6H), 1.37 - 1.10 (m, 22H), 0.81 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物62e：壬二酸1-(2-羥基-3-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯基)氧基)丙基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image625
在0℃下向中間物62d (7 g，1.0當量)於THF/甲苯/水(4:1:2，0.04 M)中之溶液添加NaBH4 (5當量)，且將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5 h。結束後，在5℃下將混合物用飽和NH4 Cl淬滅且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌2次，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮，得到殘餘物。粗殘餘物藉由管柱層析法(EtOAc/hex)來純化，得到呈無色油狀之產物(6 g，85%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.25 (m, 4H), 4.25 - 3.90 (m, 8H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.55 (s, 1H), 2.30 (dt, J = 24.5, 7.6 Hz, 6H), 2.03 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 1.61 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.48 - 1.06 (m, 35H), 0.87 (td, J = 6.8, 3.8 Hz, 6H)。 化合物62：壬二酸1-(3-甲基-13-((((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯基)氧基)甲基)-9-辛基-7,11-二側氧基-8,12-二氧雜-3,6-二氮雜十四烷-14-基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image627
化合物62係使用化合物52所用之方法自中間物52d及中間物62e製備，產率36%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.47 - 5.28 (m, 4H), 5.23 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.14 - 5.04 (m, 1H), 4.28 (ddd, J = 15.3, 11.9, 4.6 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.8, 7.5, 5.8 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.38 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.58 (qd, J = 15.2, 6.3 Hz, 5H), 2.37 - 2.22 (m, 7H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 4H), 1.62 (d, J = 6.8 Hz, 14H), 1.48 - 0.97 (m, 50H), 0.97 - 0.79 (m, 9H)。MS: 992.3 m/z [M+H]。 實例63-化合物63 化合物63：壬二酸1-(3-甲基-14-((((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯基)氧基)甲基)-9-辛基-7,12-二側氧基-8,13-二氧雜-3,6-二氮雜十五烷-15-基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image132
化合物63係使用化合物52所用之方法自中間物54d及中間物62e製備，產率79%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.28 (m, 4H), 5.25 (ddd, J = 5.8, 4.5, 1.4 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.2 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.31 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.70 - 2.12 (m, 15H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 1.97 - 1.72 (m, 3H), 1.61 (h, J = 6.5 Hz, 12H), 1.40 - 1.19 (m, 47H), 1.11 (s, 3H), 0.96 - 0.81 (m, 9H)。MS: 1006.9 m/z [M+H]。 實例64-化合物64 化合物64：壬二酸1-(3-甲基-15-((((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯醯基)氧基)甲基)-9-辛基-7,13-二側氧基-8,14-二氧雜-3,6-二氮雜十六烷-16-基)酯9-十一烷酯
Figure 02_image630
化合物64係使用化合物52所用之方法自中間物55d及中間物62e製備，產率79%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.48 - 5.28 (m, 4H), 5.24 (h, J = 4.9, 4.4 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.29 (ddd, J = 11.9, 4.4, 3.3 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.1 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.31 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.67 - 2.11 (m, 14H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 1.73 - 1.41 (m, 17H), 1.41 - 0.95 (m, 50H), 0.94 - 0.82 (m, 9H)。MS: 1021.0 m/z [M+H]。 實例65-化合物65 化合物65：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)十四烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image632
化合物65係使用實例1所用之方法自中間物39d及1-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺製備，產率75%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (ddd, J = 10.2, 5.7, 4.4 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.20 - 4.11 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 3.21 (s, 2H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.46 - 2.24 (m, 9H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 2.01 - 1.42 (m, 16H), 1.41 - 1.20 (m, 45H), 0.88 (td, J = 7.0, 4.7 Hz, 9H)。MS: 984.9 m/z [M+H]。 實例66-化合物66 化合物66：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)十四烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image138
化合物66係使用實例1所用之方法自中間物39d及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇製備，產率65%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.57 - 5.21 (m, 9H), 4.72 (dt, J = 12.2, 5.2 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.24 - 4.07 (m, 4H), 2.82 - 2.74 (m, 4H), 2.60 (d, J = 102.7 Hz, 5H), 2.45 - 2.38 (m, 2H), 2.38 - 2.26 (m, 4H), 2.13 - 1.73 (m, 16H), 1.73 - 1.43 (m, 9H), 1.41 - 1.16 (m, 42H), 1.04 - 0.74 (m, 9H)。MS: 999.4 m/z [M+H]。 實例67-化合物67 化合物67：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image635
化合物67係使用實例1所用之方法自中間物42d及1-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺製備，產率50%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.08 (m, 9H), 4.77 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.8, 4.5, 1.8 Hz, 2H), 4.20 - 4.12 (m, 2H), 3.48 (s, 1H), 3.33 (s, 2H), 2.77 (td, J = 6.1, 1.2 Hz, 4H), 2.63 - 2.23 (m, 11H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 9H), 1.98 - 1.42 (m, 14H), 1.42 - 1.22 (m, 32H), 0.96 - 0.81 (m, 9H)。MS: 900.0 m/z [M+H]。 實例68-化合物68 化合物68：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image637
化合物68係使用實例1所用之方法自中間物42d及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇製備，產率43%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.04 (m, 9H), 4.72 (tt, J = 7.4, 5.1 Hz, 1H), 4.40 - 4.10 (m, 6H), 2.81 - 2.74 (m, 4H), 2.54 (d, J = 58.1 Hz, 5H), 2.40 (ddd, J = 8.4, 6.8, 4.4 Hz, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 4H), 2.11 - 1.73 (m, 16H), 1.73 - 1.43 (m, 8H), 1.43 - 1.21 (m, 31H), 0.99 - 0.77 (m, 9H)。MS: 915.7 m/z [M+H]。 實例69-化合物69 中間物69a：4-側氧基壬酸
Figure 02_image639
在15℃下在N2 下向5-戊基四氫呋喃-2-酮(50 g，1.0當量)於3:1 EtOH/H2 O (500 mL)中之混合物一次性添加NaOH (2.0當量)。將混合物在15℃下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物，且所得殘餘物用DCM萃取2次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且濃縮，得到粗殘餘物。
隨後在DCM (1 L)中復原粗殘餘物，接著在15℃下在N2 下一次性添加DMP (3當量)。將混合物在15℃下攪拌4 h。結束後，在減壓下濃縮反應且溶液用1 M HCl調整至pH = 3。將漿狀物過濾且用H2 O洗滌。所得濾餅溶於EtOAc中，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮，得到呈白色固體狀之產物(22 g，45%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.72 (dd, J = 7.0, 5.4 Hz, 2H), 2.63 (ddd, J = 7.2, 5.9, 1.2 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 2H), 1.36 - 1.20 (m, 4H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。 中間物69b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基壬醯基)氧基)丙-1,3-二基酯
Figure 02_image641
中間物69b係使用中間物1d所用之方法自中間物69a及中間物1c合成，產率74%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.16 (m, 9H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.14 (dt, J = 11.8, 6.0 Hz, 2H), 2.74 (dt, J = 21.5, 6.5 Hz, 6H), 2.59 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (dd, J = 8.6, 5.3 Hz, 8H), 1.60 (ddd, J = 14.2, 8.4, 4.8 Hz, 6H), 1.50 - 1.06 (m, 32H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 9H)。 中間物69c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)壬醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image643
在5℃下向中間物69b (10 g，1.0當量)於THF (300 mL)、甲苯(150 mL)及H2 O (75 mL)中之溶液添加NaBH4 (5.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在15℃下攪拌3 h。結束後，在0℃下將Na2 SO4 添加至反應混合物，且將所得混合物過濾且在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之醇中間物。
中間物立即在DCM (80 mL)中復原，接著在0℃下添加吡啶(1.67當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(2當量)。將混合物在N2 氛圍下在0℃下攪拌5 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物，其藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(4.05 g，33%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.26 - 8.19 (m, 2H), 7.40 - 7.28 (m, 2H), 5.43 - 5.11 (m, 9H), 4.80 (tt, J = 7.5, 4.4 Hz, 1H), 4.25 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.09 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.40 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.33 - 2.16 (m, 4H), 1.97 (q, J = 6.8 Hz, 10H), 1.67 (ddt, J = 13.4, 9.9, 4.7 Hz, 1H), 1.55 (dtd, J = 15.7, 8.4, 7.4, 4.8 Hz, 5H), 1.43 - 1.16 (m, 36H), 0.83 (q, J = 6.8 Hz, 9H)。 化合物69：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)壬醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image645
化合物69係使用實例1所用之方法自中間物69c及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺製備，產率77%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.35 (pt, J = 8.8, 4.4 Hz, 8H), 5.25 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 4.76 (dt, J = 12.3, 6.7 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.15 (dh, J = 11.4, 5.9 Hz, 2H), 3.31 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.62 - 2.45 (m, 4H), 2.38 (dt, J = 9.0, 6.2 Hz, 2H), 2.30 (q, J = 13.0, 10.4 Hz, 8H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 9H), 1.91 (tt, J = 9.5, 4.5 Hz, 1H), 1.81 (dt, J = 14.7, 7.8 Hz, 1H), 1.65 - 1.43 (m, 7H), 1.40 - 1.17 (m, 36H), 1.09 (q, J = 8.8, 8.2 Hz, 3H), 0.88 (q, J = 6.5 Hz, 9H)。MS: 902.6 m/z [M+H]。 實例70-化合物70 化合物70：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)壬醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image647
化合物70係使用實例1所用之方法自中間物69c及1-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺製備，產率62%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.29 (m, 8H), 5.25 (p, J = 5.2 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.15 (dq, J = 11.7, 5.8 Hz, 2H), 3.46 (d, J = 25.9 Hz, 1H), 3.19 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.34 (dt, J = 31.1, 8.3 Hz, 12H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.99 - 1.42 (m, 16H), 1.42 - 1.19 (m, 35H), 0.88 (q, J = 6.8 Hz, 9H)。MS: 914.4 m/z [M+H]。 實例71-化合物71 化合物71：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)壬醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image649
化合物71係使用實例1所用之方法自中間物69c及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇製備，產率78%。1 H NMR (500 MHz, 氯仿-d) δ 5.50 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 4.72 (tt, J = 7.8, 4.5 Hz, 1H), 4.36 - 4.26 (m, 2H), 4.23 - 4.11 (m, 4H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.41 (dt, J = 15.0, 9.0 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.5 Hz, 5H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 2.00 - 1.75 (m, 9H), 1.72 - 1.48 (m, 8H), 1.43 - 1.20 (m, 35H), 1.00 - 0.75 (m, 9H)。MS: 929.4 m/z [M+H]。 實例72-化合物72 化合物72：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)壬醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image651
化合物72係使用實例1所用之方法自中間物69c及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺製備，產率72%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.49 (s, 1H), 5.34 (dtt, J = 18.0, 6.9, 3.9 Hz, 8H), 5.25 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 11.6, 5.4 Hz, 2H), 3.40 - 3.27 (m, 2H), 2.80 - 2.50 (m, 11H), 2.45 - 2.35 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 5H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 9H), 1.97 - 1.67 (m, 8H), 1.60 (q, J = 7.3 Hz, 8H), 1.33 (d, J = 26.5 Hz, 36H), 0.88 (q, J = 6.5 Hz, 9H)。MS: 914.7 m/z [M+H]。 實例73-化合物73 中間物73a：4-側氧基十一烷酸
Figure 02_image653
向5-庚基四氫呋喃-2-酮(20 g，1.0當量)於2:1 EtOH/H2 O (400 mL)中之溶液添加NaOH (1.1當量)。將混合物脫氣且用N2 淨化3次，且接著將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑，且將1 N HCl添加至所得殘餘物直至pH = 3。過濾所得漿狀物，且在減壓下濃縮濾餅，得到殘餘物。
在DCM (200 mL)中復原所得殘餘物，接著添加DMP (3當量)。將混合物在20℃下攪拌5 h。結束後，在減壓下濃縮混合物，且將所得殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。粗物質藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(10 g，46%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.65 (dd, J = 7.0, 5.3 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.27 - 1.13 (m, 8H), 0.86 - 0.76 (m, 3H)。 中間物73b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-側氧基十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image655
中間物73b係使用中間物1d所用之方法自中間物73a及中間物1c合成，產率42%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 (dddd, J = 12.3, 10.7, 8.7, 5.5 Hz, 8H), 5.21 - 5.15 (m, 1H), 4.22 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.13 - 4.05 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.64 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.52 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.36 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.02 - 1.95 (m, 8H), 1.53 (h, J = 7.0 Hz, 6H), 1.33 - 1.16 (m, 37H), 0.81 (td, J = 6.8, 4.7 Hz, 9H)。 中間物73c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image657
在0℃下在N2 下向中間物73b (25 g，1.0當量)於THF (500 mL)、甲苯(125 mL)及H2 O (250 mL)中之溶液添加NaBH4 (5.0當量)。在N2 氛圍下將混合物在5℃下攪拌1 h。結束後，殘餘物傾倒至飽和NH4 Cl溶液中且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色殘餘物形式之中間醇。
立即在DCM (100 mL)中復原中間物，接著在0℃下添加吡啶(2當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(2當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5 h，此後在減壓下濃縮反應混合物。將所得殘餘物用己烷稀釋且過濾。將濾液用水洗滌3次且用鹽水洗滌1次，接著經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(5.2 g，40%)。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.28 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.41 (dd, J = 8.6, 6.1 Hz, 2H), 5.33 (tdd, J = 23.5, 11.3, 6.1 Hz, 9H), 4.87 (tt, J = 7.7, 4.6 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 12.0, 4.4 Hz, 2H), 4.16 (dd, J = 12.0, 5.8 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.47 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.39 - 2.25 (m, 4H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 10H), 1.79 - 1.55 (m, 7H), 1.48 - 1.15 (m, 36H), 0.89 (t, J = 6.7 Hz, 9H)。 化合物73：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image152
化合物73係使用實例1所用之方法自中間物73c及(2-胺基乙基)(乙基)甲基胺製備，產率53%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.47 - 5.27 (m, 8H), 5.24 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 11.6, 5.4 Hz, 2H), 3.31 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.61 - 2.35 (m, 6H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 7H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.90 (q, J = 11.5, 9.0 Hz, 1H), 1.81 (dt, J = 14.5, 7.6 Hz, 1H), 1.65 - 1.41 (m, 9H), 1.39 - 1.19 (m, 38H), 1.10 (s, 3H), 0.88 (q, J = 7.0 Hz, 9H)。MS: 930.3 m/z [M+H]。 實例74-化合物74 化合物74：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺甲醯基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image660
化合物74係使用實例1所用之方法自中間物73c及1-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺製備，產率55%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.34 (dtt, J = 18.0, 6.9, 3.8 Hz, 8H), 5.25 (p, J = 5.2 Hz, 1H), 4.81 - 4.72 (m, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 11.7, 5.2 Hz, 2H), 3.43 (s, 1H), 3.17 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.34 (dt, J = 31.2, 8.3 Hz, 11H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.99 - 1.43 (m, 16H), 1.43 - 1.13 (m, 39H), 0.88 (q, J = 7.7, 7.2 Hz, 9H)。MS: 942.8 m/z [M+H]。 實例75-化合物75 化合物75：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image662
化合物75係使用實例1所用之方法自中間物73c及3-(吡咯啶-1-基)丙-1-醇製備，產率73%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.46 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 4.72 (tt, J = 7.8, 4.5 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.22 - 4.11 (m, 4H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.45 - 2.37 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 2.01 - 1.91 (m, 3H), 1.91 - 1.78 (m, 5H), 1.67 - 1.50 (m, 9H), 1.39 - 1.22 (m, 39H), 0.88 (q, J = 6.6 Hz, 9H)。MS: 957.4 m/z [M+H]。 實例76-化合物76 化合物76：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image664
化合物76係使用實例1所用之方法自中間物73c及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺製備，產率81%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.56 (s, 1H), 5.46 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (p, J = 5.2 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 11.7, 5.5 Hz, 2H), 3.43 - 3.31 (m, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 11H), 2.45 - 2.35 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.97 - 1.74 (m, 7H), 1.69 - 1.43 (m, 8H), 1.43 - 1.09 (m, 39H), 0.88 (q, J = 7.0 Hz, 9H)。MS: 943.2 m/z [M+H]。 實例77-化合物77 化合物77：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image666
化合物77係使用實例1所用之方法自中間物40d及2-(氮雜環丁烷-1-基)乙-1-胺製備，產率36%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.29 (m, 8H), 5.25 (h, J = 4.6, 4.1 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 1.9 Hz, 2H), 4.15 (ddt, J = 11.9, 5.8, 3.6 Hz, 2H), 3.74 - 3.54 (m, 3H), 3.48 - 3.38 (m, 1H), 3.31 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 2.86 (s, 1H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.41 - 2.26 (m, 7H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.97 - 1.87 (m, 2H), 1.87 - 1.77 (m, 2H), 1.60 (d, J = 7.2 Hz, 8H), 1.44 - 1.15 (m, 37H), 0.96 - 0.84 (m, 9H)。MS: 914.7 m/z [M+H]。 實例78-化合物78 化合物78：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(哌啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image162
化合物78係使用實例1所用之方法自中間物40d及2-(哌啶-1-基)乙-1-胺製備，產率60%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.47 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (h, J = 4.8 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.4, 1.3 Hz, 2H), 4.15 (dt, J = 11.8, 5.7 Hz, 2H), 3.42 (s, 2H), 2.80 - 2.72 (m, 4H), 2.44 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 2.39 (ddd, J = 8.6, 6.9, 2.5 Hz, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 5H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.95 - 1.41 (m, 18H), 1.41 - 1.20 (m, 37H), 0.96 - 0.81 (m, 9H)。MS: 942.4 m/z [M+H]。 實例79-化合物79 化合物79：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-甲基-1-(吡咯啶-1-基)丙烷-2-基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image669
化合物79係使用實例1所用之方法自中間物40d及2-甲基-1-(吡咯啶-1-基)丙-2-胺製備，產率48%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.21 (m, 9H), 4.72 (s, 1H), 4.28 (ddt, J = 11.9, 4.4, 2.2 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.6 Hz, 2H), 2.86 - 2.49 (m, 8H), 2.39 (td, J = 8.2, 7.4, 2.2 Hz, 1H), 2.31 (td, J = 7.6, 1.8 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 2.00 - 1.45 (m, 17H), 1.45 - 1.03 (m, 41H), 0.98 - 0.77 (m, 9H)。MS: 956.5 m/z [M+H]。 實例80-化合物80 中間物80a：溴化(5-甲基己基)鎂
Figure 02_image671
在15℃下向Mg (1.63 g，1.2當量)及I2 (0.1當量)於THF (100 mL)中之溶液添加1-溴-5-甲基-己烷(1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在40℃下攪拌2 h。未作進一步處理。反應混合物直接用於下一步中。獲得溴(5-甲基己基)鎂於THF中之灰色溶液。 中間物80b：9-甲基-4-側氧基癸酸乙酯
Figure 02_image673
在-78℃下向4-氯-4-側氧基-丁酸乙酯(16 g，1.0當量)於THF (150 mL)中之溶液添加CuI (1.0當量)及中間物80a (2.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在-78℃下攪拌2 h。結束後，將反應混合物用水淬滅且用EtOAc萃取3次。合併之有機層用鹽水洗滌2次，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。粗殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(10 g，45%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.06 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.55 - 1.45 (m, 3H), 1.28 - 1.15 (m, 6H), 1.15 - 1.06 (m, 2H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H)。 中間物80c：9-甲基-4-側氧基癸酸
Figure 02_image675
在20℃下向中間物80b (10 g，1.0當量)於EtOH (100 mL)中之溶液添加KOH (3.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在50℃下攪拌12 h。接著濃縮反應以移除EtOH，且將pH值用HCl (1 M)調整至5.5。所得混合物用水稀釋且用EtOAc萃取2次。合併之有機層用鹽水洗滌2次，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮。粗物質藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(4.4 g，50%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.71 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.63 (ddd, J = 7.0, 5.8, 1.1 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.53 (dq, J = 19.8, 7.0, 6.6 Hz, 3H), 1.31 - 1.24 (m, 2H), 1.16 (dt, J = 8.6, 6.7 Hz, 2H), 0.85 (d, J = 6.6 Hz, 6H)。 中間物80d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((9-甲基-4-側氧基癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image677
中間物80d係使用中間物1d所用之方法自中間物80c及中間物1c合成，產率40%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.71 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.67 - 1.50 (m, 8H), 1.39 - 1.21 (m, 29H), 1.22 - 1.12 (m, 3H), 0.93 - 0.82 (m, 12H)。 中間物80e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((9-甲基-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image679
在0℃下向中間物80d (1.5 g，1.0當量)於THF (30 mL)、甲苯(15 mL)及H2O (7.5 mL)中之溶液添加NaBH4 (5.0當量)。將混合物在5℃下攪拌5 h。在完全還原後，反應混合物分配於THF與H2 O之間，且分離所得有機層，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之中間醇。
立即在DCM (10 mL)中復原所得中間物，接著在0℃下添加吡啶(2.0當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(2.0當量)。將混合物在0℃下攪拌5 h。接著過濾反應混合物且在減壓下濃縮，得到粗殘餘物，其藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.25 - 8.18 (m, 2H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 5.39 - 5.15 (m, 9H), 4.80 (tt, J = 7.1, 4.3 Hz, 1H), 4.25 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 4.13 - 4.04 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.40 (dd, J = 8.3, 6.6 Hz, 2H), 2.33 - 2.19 (m, 4H), 2.05 - 1.85 (m, 10H), 1.67 (ddt, J = 14.6, 9.4, 4.8 Hz, 1H), 1.52 (dddq, J = 32.6, 26.2, 13.2, 6.6, 6.1 Hz, 8H), 1.37 - 1.17 (m, 30H), 1.11 (dt, J = 9.0, 6.5 Hz, 2H), 0.94 - 0.66 (m, 12H)。 化合物80：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)-9-甲基癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image166
化合物80係使用實例1所用之方法自中間物80e及(2-胺基乙基)(乙基)甲基胺製備，產率68%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.22 (m, 9H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 12.0, 4.5, 1.5 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.7 Hz, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.77 (td, J = 6.0, 1.3 Hz, 4H), 2.39 (ddd, J = 8.4, 6.9, 2.4 Hz, 2H), 2.35 - 2.28 (m, 5H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.86 (ddt, J = 37.3, 14.4, 7.1 Hz, 3H), 1.77 - 1.38 (m, 12H), 1.39 - 1.19 (m, 34H), 1.15 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.94 - 0.79 (m, 12H)。MS: 929.9 m/z [M+H]。 實例81-化合物81 中間物81a：1-溴-6-甲基庚烷
Figure 02_image682
在0℃下向PPh3 (66.97 g，1.33當量)於DCM (300 mL)中之溶液添加Br2 (1.33當量)。接著，一次性添加6-甲基庚-1-醇(1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在0℃下攪拌2 h。結束後，將反應混合物用H2 O稀釋，且分離有機層。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。添加戊烷，且濾去沈澱之三苯基氧化膦。在減壓下濃縮有機層，得到殘餘物，其藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(30 g，81%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.41 (td, J = 6.9, 1.1 Hz, 2H), 1.91 - 1.79 (m, 2H), 1.59 - 1.49 (m, 1H), 1.45 - 1.35 (m, 2H), 1.34 - 1.25 (m, 3H), 1.21 - 1.12 (m, 2H), 0.86 (dd, J = 6.6, 1.1 Hz, 6H)。 中間物81b：溴化(6-甲基庚基)鎂
Figure 02_image684
在15℃下向Mg (4.53 g，1.2當量)及I2 (0.1當量)於THF (300 mL)中之溶液添加中間物81a (1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在40℃下攪拌2 h。未作進一步處理。反應混合物直接用於下一步中。獲得溴(6-甲基庚基)鎂於THF中之灰色溶液。 中間物81c：10-甲基-4-側氧基十一烷酸乙酯
Figure 02_image686
在-78℃下向4-氯-4-側氧基-丁酸乙酯(25 g，1.0當量)及CuI (1.0當量)於THF (200 mL)中之溶液添加中間物81b (1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在-78℃下攪拌5 h。接著將反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層分離，用鹽水洗滌2次，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(10 g，27%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.06 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.51 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.43 (dq, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.26 - 1.15 (m, 7H), 1.14 - 1.04 (m, 2H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H)。 中間物81d：10-甲基-4-側氧基十一烷酸
Figure 02_image688
將中間物81c (10 g，1.0當量)及KOH (3.0當量)於EtOH (50 mL)中之混合物脫氣且用N2 淨化3次，且接著將混合物在N2 氛圍下在50℃下攪拌12 h 。濃縮混合物以移除EtOH，接著用HCl (1 M)調整至pH 5.5。接著將反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層分離，用鹽水洗滌2次，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(4 g，45%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.65 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.56 (ddd, J = 7.1, 5.9, 1.2 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.51 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.42 (dt, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.20 (tt, J = 4.9, 2.5 Hz, 4H), 1.14 - 1.05 (m, 2H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H)。 中間物81e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((10-甲基-4-側氧基十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image690
中間物81e係使用中間物1d所用之方法自中間物81d及中間物1c合成，產率40%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.39 - 5.20 (m, 8H), 5.17 (ddd, J = 10.1, 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.07 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.64 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.52 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.36 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 1.97 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.66 - 1.46 (m, 7H), 1.33 - 1.13 (m, 35H), 1.08 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 0.84 - 0.77 (m, 12H)。 中間物81f：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((10-甲基-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image692
在0℃下向中間物81e (6 g，1.0當量)於THF (120 mL)、甲苯(30 mL)及H2 O (60 mL)中之溶液添加NaBH4 (5.0當量)。將混合物在5℃下攪拌5 h。在完全還原後，反應混合物分配於THF與H2 O之間，且分離所得有機層，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之中間醇。
立即在DCM (10 mL)中復原所得中間物，接著在0℃下添加吡啶(2.0當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(2.0當量)。將混合物在0℃下攪拌1 h。接著過濾反應混合物且在減壓下濃縮，得到粗殘餘物，其藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(4.3 g，59%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.27 - 8.16 (m, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 5.43 - 5.12 (m, 9H), 4.80 (s, 1H), 4.25 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 - 4.06 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.40 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.24 (td, J = 7.5, 4.1 Hz, 4H), 2.05 - 1.88 (m, 9H), 1.71 - 1.62 (m, 1H), 1.62 - 1.47 (m, 6H), 1.45 - 0.97 (m, 35H), 0.89 - 0.66 (m, 12H)。 化合物81：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)-10-甲基十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image694
化合物81係使用實例1所用之方法自中間物81f及(2-胺基乙基)(乙基)甲基胺製備，產率85%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.21 (m, 9H), 4.76 (s, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 2H), 4.15 (dt, J = 11.8, 5.7 Hz, 2H), 3.38 (d, J = 40.4 Hz, 3H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.38 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.32 (td, J = 7.6, 1.1 Hz, 5H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.96 - 1.78 (m, 3H), 1.68 - 1.43 (m, 12H), 1.43 - 1.20 (m, 36H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.93 - 0.80 (m, 12H)。MS: 944.5 m/z [M+H]。 實例82-化合物82 化合物82：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((9-甲基-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image696
化合物82係使用實例1所用之方法自中間物80e及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺製備，產率86%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.87 (s, 1H), 5.43 - 5.23 (m, 9H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 12.0, 4.5, 2.6 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.6 Hz, 2H), 3.52 - 3.42 (m, 2H), 2.94 (s, 5H), 2.82 - 2.75 (m, 4H), 2.39 (ddd, J = 8.4, 6.9, 2.0 Hz, 2H), 2.36 - 2.29 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 2.01 - 1.76 (m, 7H), 1.67 - 1.45 (m, 8H), 1.40 - 1.21 (m, 33H), 1.15 (s, 2H), 0.93 - 0.81 (m, 12H)。MS: 942.3 m/z [M+H]。 實例83-化合物83 化合物83：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((10-甲基-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十一烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image698
化合物83係使用實例1所用之方法自中間物81f及2-(吡咯啶-1-基)乙-1-胺製備，87%產率。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.99 (s, 1H), 5.45 - 5.19 (m, 9H), 4.76 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 3.2 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.7 Hz, 2H), 3.50 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.99 (s, 5H), 2.81 - 2.73 (m, 4H), 2.39 (ddd, J = 8.2, 6.9, 1.8 Hz, 2H), 2.35 - 2.28 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 2.02 - 1.77 (m, 7H), 1.66 - 1.43 (m, 8H), 1.41 - 1.20 (m, 35H), 1.14 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 0.95 - 0.81 (m, 12H)。MS: 956.5 m/z [M+H]。 實例84-化合物84 化合物84：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((1-甲基氮雜環丁烷-3-基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image700
化合物84係使用實例1所用之方法自中間物40d及1-甲基氮雜環丁烷-3-胺製備，產率87%。1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.28 (m, 8H), 5.23 (p, J = 5.2 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.28 (dt, J = 10.9, 5.2 Hz, 2H), 4.16 (ddd, J = 8.7, 5.6, 2.8 Hz, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.81 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.65 (s, 2H), 2.40 - 2.29 (m, 6H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 1.93 (dtd, J = 15.1, 7.6, 3.8 Hz, 1H), 1.83 (q, J = 7.4 Hz, 1H), 1.66 - 1.44 (m, 7H), 1.40 - 1.17 (m, 37H), 0.88 (q, J = 7.0 Hz, 9H)。MS: 900.4 m/z [M+H]。 實例85-化合物85 中間物85a：4-羥基辛酸苯甲酯
Figure 02_image702
向5-丁基四氫呋喃-2-酮(20 g，1.0當量)於H2 O (50 mL)中之溶液添加NaOH (5.63 g，1.0當量)。將混合物在25℃下攪拌12 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物以移除H2 O。
在DMF (100 mL)中復原所得殘餘物，接著添加BnBr (14.08 g，1.0當量)。將混合物在25℃下攪拌2 h。接著在減壓下濃縮反應混合物以移除DMF。將殘餘物用H2 O (150 mL)稀釋且用EtOAc萃取3次，經Na2 SO4 乾燥，且過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(15 g，43%)。 中間物85b：4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)辛酸苯甲酯
Figure 02_image704
在N2 下向中間物85a (15 g，1.0當量)於DCM (150 mL)中之混合物添加氯甲酸(4-硝基苯基)酯(32.21 g，5.0當量)，且接著將吡啶(5.16 mL，2.0當量)添加至混合物。將反應混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌1 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑。將殘餘物用己烷稀釋且過濾。將濾液用H2 O洗滌3次。將有機層用鹽水洗滌1次，經Na2 SO4 乾燥，且過濾，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(12 g，48%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.31 - 8.17 (m, 2H), 7.42 - 7.30 (m, 6H), 5.13 (s, 2H), 4.87 (qd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 2.50 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.11 (dtd, J = 15.3, 7.8, 4.0 Hz, 1H), 2.00 (dt, J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 1.82 - 1.69 (m, 1H), 1.63 (ddt, J = 14.3, 8.5, 5.0 Hz, 1H), 1.45 - 1.27 (m, 4H), 1.01 - 0.83 (m, 3H)。 中間物85c：4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛酸苯甲酯
Figure 02_image706
在0℃下向中間物85b (4 g，2.0當量)及2-吡咯啶-1-基乙胺(550 mg，1.0當量)於MeCN (20 mL)中之溶液添加DMAP (59 mg，0.1當量)，接著添加吡啶(1.17 mL，3.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除MeCN (20 mL)。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(1.8 g，48%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.32 - 7.23 (m, 5H), 5.03 (d, J = 10.2 Hz, 3H), 4.69 (s, 1H), 3.23 (dq, J = 18.7, 5.9 Hz, 3H), 2.70 (s, 2H), 2.60 - 2.40 (m, 7H), 2.34 (td, J = 8.3, 7.6, 2.7 Hz, 2H), 1.87 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 1.70 (t, J = 3.8 Hz, 6H), 1.44 (d, J = 24.4 Hz, 2H), 1.22 (q, J = 11.9 Hz, 4H), 0.80 (t, J = 4.2 Hz, 3H)。 化合物85：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image176
在Ar氛圍下向中間物85c (1.8 g，1.0當量)於THF (9 mL)中之溶液添加Pd/C (0.5 g，10% w/w)。將混合物用H2 淨化3次，且接著將混合物在H2 氛圍(15 Psi)下在20℃下攪拌5 h。過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液以移除THF。
所得粗物質溶於DCM (10 mL)中，接著添加DMAP (65 mg，0.16當量)、DIPEA (1.74 mL，3.0當量)及EDCI (638 mg，1.0當量)。接著，在0℃下添加中間物1c (2.05 g，1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌16 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取2次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(1.1 g，50%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.39 - 5.21 (m, 7H), 5.18 (p, J = 5.0 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.22 (dd, J = 12.0, 4.4 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.4 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.51 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.43 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 2.32 (ddd, J = 8.9, 6.6, 3.9 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.9 Hz, 7H), 1.91 - 1.66 (m, 6H), 1.63 - 1.35 (m, 8H), 1.25 (tq, J = 7.2, 4.6, 3.6 Hz, 30H), 0.82 (t, J = 6.7 Hz, 9H)。MS: 900.4 m/z [M+H]。 實例86-化合物86 中間物86a：1-壬醯基環丙烷-1-甲酸乙酯
Figure 02_image709
在N2 下在-78℃下向環丙烷-1,1-二甲酸二乙酯(15 g，1.0當量)於THF (200 mL)中之溶液逐滴添加溴(辛基)鎂溶液(2 M，40.28 mL，1.0當量)。將反應混合物在N2 氛圍下在-78℃下攪拌5 h。將反應混合物傾倒至NH4 Cl水溶液中。將水相用乙酸乙酯萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液。殘餘物與另一批一起藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(20 g，48%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.13 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.75 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.57 - 1.49 (m, 2H), 1.35 (s, 4H), 1.21 (dd, J = 8.7, 5.5 Hz, 16H), 0.81 (t, J = 6.9 Hz, 6H)。 中間物86b：1-壬醯基環丙烷-1-甲酸
Figure 02_image711
在N2 下向中間物86a (10 g，1.0當量)於EtOH (60 mL)及H2 O (30 mL)中之溶液添加NaOH (2.36 g，1.5當量)及LiOH (1.41 g，1.5當量)。接著將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物藉由添加2 N HCl調整至pH = 3。接著將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌1 h。將混合物用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液。收集呈無色油狀之產物(5 g，28%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.25 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.96 (q, J = 4.4 Hz, 2H), 1.71 (q, J = 4.4 Hz, 2H), 1.64 - 1.55 (m, 2H), 1.26 (d, J = 3.7 Hz, 11H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物86c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((1-壬醯基環丙烷-1-羰基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image713
在0℃下向中間物86b (6 g，1.0當量)、中間物1C (16.36 g，1.0當量)、EDCI (6.10 g，1.5當量)及DMAP (324 mg，0.1當量)於DCM (60 mL)中之溶液添加Et3 N (5.54 mL，1.5當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。接著將其傾倒至水中且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(8 g，37%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 (dtt, J = 15.4, 10.8, 5.8 Hz, 8H), 4.26 (dd, J = 12.1, 4.1 Hz, 2H), 4.08 (dd, J = 12.0, 6.1 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.54 (p, J = 7.0 Hz, 9H), 1.43 - 1.33 (m, 4H), 1.33 - 1.15 (m, 40H), 0.85 - 0.79 (m, 9H)。 中間物86d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((1-(1-羥基壬基)環丙烷-1-羰基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image715
使中間物86c (8 g，1.0當量)於4:2:1 THF/水/甲苯(0.05-0.1 M)中之溶液冷卻至0-5℃，接著添加NaBH4 (5.0當量)。反應維持於0-25℃下至少2 h。接著將反應用水及EtOAc稀釋，且將所得兩相混合物用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析法(EtOAc/己烷)來純化，得到呈無色油狀之產物(4 g，50%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.33 (tdq, J = 20.3, 10.0, 5.6, 4.9 Hz, 9H), 4.28 (dt, J = 12.0, 4.0 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 12.1, 8.0, 6.0 Hz, 2H), 3.18 - 3.12 (m, 1H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.68 (s, 1H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.68 - 1.48 (m, 9H), 1.40 - 1.16 (m, 43H), 0.98 (ddd, J = 10.7, 6.7, 4.1 Hz, 1H), 0.93 - 0.84 (m, 9H), 0.81 (ddd, J = 9.7, 6.8, 4.2 Hz, 1H)。 中間物86e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((1-(1-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)壬基)環丙烷-1-羰基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image717
在0℃下向中間物86d (4 g，1.0當量)於DCM (40 mL)中之溶液添加氯甲酸(4-硝基苯基)酯(1.95 g，2.0當量)、吡啶(781 uL，2.0當量)。接著將反應混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑。在石油醚中復原殘餘物且過濾。將濾液用H2 O洗滌。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(2.8 g，59%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.25 - 8.16 (m, 2H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 5.27 (tdd, J = 17.5, 8.5, 4.0 Hz, 9H), 4.84 (dd, J = 9.1, 4.4 Hz, 1H), 4.24 (dt, J = 11.9, 3.8 Hz, 2H), 4.08 (dd, J = 11.8, 5.8 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.23 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.02 - 1.93 (m, 8H), 1.82 (qd, J = 9.4, 4.9 Hz, 1H), 1.69 (ddt, J = 14.4, 10.0, 5.1 Hz, 1H), 1.53 (t, J = 7.2 Hz, 5H), 1.35 - 1.16 (m, 41H), 1.07 - 1.01 (m, 1H), 0.95 - 0.89 (m, 1H), 0.81 (td, J = 6.8, 3.8 Hz, 9H)。 化合物86：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((1-(1-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)壬基)環丙烷-1-羰基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image719
化合物86係使用實例1中所用之方法自中間物86e及N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺合成，產率90%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.53 - 5.22 (m, 9H), 4.75 (dd, J = 8.7, 4.5 Hz, 1H), 4.29 (ddd, J = 22.5, 11.8, 4.3 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 3.30 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.54 (d, J = 13.7 Hz, 4H), 2.38 - 2.21 (m, 7H), 2.05 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.60 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 1.40 - 1.17 (m, 40H), 1.12 - 1.00 (m, 4H), 0.91 - 0.85 (m, 9H)。MS: 956.1 m/z [M+H]。 實例87-化合物87 中間物87a：5-羥基-1-甲基-5-辛基吡咯啶-2-酮
Figure 02_image721
在15℃下在N2 下向1-甲基吡咯啶-2,5-二酮(20 g，1.0當量)於THF (150 mL)逐滴添加溴(辛基)鎂(1 M，265 mL，1.5當量)中之溶液。將混合物在N2 下在15℃下攪拌12 h。反應混合物藉由在0℃下添加NH4 Cl淬滅。接著將其用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(20 g，50%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.75 (s, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.43 (ddd, J = 16.4, 10.0, 6.4 Hz, 1H), 2.24 (ddd, J = 16.7, 10.0, 4.5 Hz, 1H), 2.13 (ddd, J = 13.6, 10.0, 6.4 Hz, 1H), 1.93 (ddd, J = 14.0, 10.0, 4.7 Hz, 1H), 1.73 (td, J = 13.4, 3.7 Hz, 1H), 1.65 - 1.53 (m, 1H), 1.35 - 1.07 (m, 12H), 0.88 - 0.76 (m, 3H)。 中間物87b：4-羥基-N-甲基十二醯胺
Figure 02_image723
向中間物87a (15 g，1.0當量)於MeOH (150 mL)中之溶液逐份添加NaBH4 (4.99 g，2.0當量)。將混合物在15℃下攪拌1 h。反應混合物藉由在0℃下添加NH4 Cl淬滅，且接著將其用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(8 g，53%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.93 (s, 1H), 3.60 - 3.50 (m, 1H), 3.11 (s, 1H), 2.73 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.36 - 2.20 (m, 2H), 1.78 (dddd, J = 14.3, 7.7, 6.5, 3.1 Hz, 1H), 1.58 (ddt, J = 13.8, 8.9, 6.7 Hz, 1H), 1.46 - 1.09 (m, 14H), 0.87 - 0.77 (m, 3H)。 中間物87c：(R)-4-羥基-N-甲基十二醯胺
Figure 02_image725
向中間物87b (1.0當量)於Et2 O (0.2-1 M)中之溶液添加Novozym 435 (0.89當量)及乙酸乙烯酯(2.0當量)。將混合物在40℃下攪拌96 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物，其藉由管柱層析法來純化。自管柱收集之物質再經受反應條件超過三次，得到呈黃色固體狀之(R)-88c (產率24%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.57 (s, 1H), 3.54 (tt, J = 7.7, 3.6 Hz, 1H), 2.74 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.64 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.28 (td, J = 6.9, 3.2 Hz, 2H), 1.79 (dtd, J = 14.3, 7.0, 3.1 Hz, 1H), 1.60 (ddd, J = 14.3, 8.8, 6.8 Hz, 2H), 1.47 - 1.12 (m, 14H), 0.87 - 0.74 (m, 3H)。 中間物87d：(R)-5-辛基二氫呋喃-2(3H)-酮
Figure 02_image727
向中間物87d (1.0當量)於MeOH (0.1-1.0 M)中之溶液添加NaOH (10當量)。將混合物在80℃下攪拌至少2 h，此後添加HCl (1-2 M，10.0當量)，且將混合物在25℃下攪拌1 h。接著反應混合物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.41 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 2.46 (dd, J = 9.5, 6.8 Hz, 2H), 2.25 (dq, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 1.78 (dq, J = 12.7, 9.3 Hz, 1H), 1.72 - 1.62 (m, 1H), 1.60 - 1.47 (m, 1H), 1.45 - 1.10 (m, 14H), 0.81 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物87e：(R)-4-羥基十二烷酸
Figure 02_image729
向中間物87d (1.0當量)於H2 O (0.1-0.5 M)中之溶液添加NaOH (1.0-1.5當量)。將混合物在20℃下攪拌至少12 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物未經額外純化直接用於下一步中。 中間物88f：(R)-4-羥基十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image731
向中間物87e (1.0當量)於丙酮(0.3 M)中之溶液添加BnBr (1.0-1.5當量)及TBAB (0.05當量)。將混合物在60℃下攪拌至少12 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物(1)藉由管柱層析法來純化，或(2)用飽和NaHCO3 稀釋，用EtOAc萃取3次，經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮，接著藉由管柱層析法來純化。兩種方法均得到呈黃色油狀之產物(產率54%)。 中間物87g：(R)-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image733
在0-20℃下向中間物87f (1.0當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(3.0當量)於DCM (0.3-1.2 M)中之溶液添加吡啶(3.0當量)。將混合物在20℃下攪拌至少1 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物(1)藉由管柱層析法來純化，或(2)未經額外純化即用於下一步中。收集呈淺黃色油狀之產物(36%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.22 - 8.13 (m, 2H), 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.80 (tt, J = 7.6, 4.5 Hz, 1H), 2.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.04 (ddt, J = 15.3, 7.8, 3.9 Hz, 1H), 1.92 (dq, J = 14.8, 7.4 Hz, 1H), 1.71 - 1.61 (m, 1H), 1.55 (ddd, J = 14.3, 9.1, 5.2 Hz, 1H), 1.36 - 1.13 (m, 11H), 0.81 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物87h：(R)-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image735
向中間物87g (1.0當量)及N'-乙基-N'-甲基-乙-1,2-二胺(3.0當量)於MeCN (0.1-0.2 M)中之溶液添加吡啶(3.0當量)及DMAP (1.0當量)。將混合物在20℃下攪拌12 h。接著在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(88%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.60 - 7.23 (m, 5H), 5.04 (s, 2H), 4.77 - 4.64 (m, 1H), 3.15 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.36 (ddt, J = 12.3, 8.2, 4.3 Hz, 5H), 2.13 (s, 3H), 1.96 - 1.70 (m, 3H), 1.55 - 1.33 (m, 2H), 1.29 - 1.10 (m, 13H), 0.96 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 6.7 Hz, 4H)。 化合物87：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((R)-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image737
向中間物87h (1.0當量)於THF (0.1-0.3 M)中之溶液添加Pd/C (10% w/w，1.0當量)。將混合物在H2 (15 Psi)下在15-20℃下攪拌5 h。結束後，將反應混合物過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。
向殘餘物及中間物1c (1.0當量)於DCM (10 mL)中之溶液添加EDCI (1.0當量)、DMAP (0.1當量)及Et3 N (1.05當量)。將混合物在15-20℃下攪拌至少12 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈淺黃色油狀之產物(61%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.40 - 5.14 (m, 8H), 5.08 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.21 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 12.0, 5.9, 3.3 Hz, 2H), 3.17 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.43 - 2.28 (m, 5H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.14 (s, 3H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 7H), 1.79 (ddd, J = 42.6, 15.1, 7.5 Hz, 3H), 1.53 (q, J = 7.6 Hz, 8H), 1.33 - 1.06 (m, 37H), 0.97 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.81 (q, J = 6.3 Hz, 9H)。MS: 944.1 m/z [M+H]。 實例88-化合物88 中間物88a：乙酸(S)-1-(甲基胺基)-1-側氧基十二烷-4-基酯
Figure 02_image739
中間物88a係使用中間物87c所用之方法自中間物87b合成，產率23%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.81 (s, 1H), 4.79 (tq, J = 8.5, 3.8 Hz, 1H), 2.73 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.17 - 2.03 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.95 - 1.63 (m, 3H), 1.56 - 1.36 (m, 2H), 1.19 (d, J = 8.4 Hz, 11H), 0.81 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物88b：(S)-5-辛基二氫呋喃-2(3H)-酮
Figure 02_image741
]
中間物88b係使用中間物87d所用之方法自中間物88a製備。 中間物88c：(S)-4-羥基十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image743
中間物88c係使用中間物87e及87f所用之方法自中間物88b製備。 中間物88d：(S)-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image745
中間物88d係自使用中間物88g所用之方法中間物88c製備。 中間物88e：(S)-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image747
中間物88e係使用中間物87h所用之方法自中間物88e合成，產率47%。 化合物88：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((S)-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image749
化合物88係使用化合物87中所用之方法自中間物88d合成，產率42%。 實例89-化合物89 中間物89a：4-羥基-N-甲基癸醯胺
Figure 02_image751
在N2 下在0℃下向甲胺鹽酸鹽(19.83 g，2.0當量)於DCM (250 mL)中之混合物逐滴添加AlMe3 (2 M，152.72 mL，2.08當量)。將混合物在N2 氛圍下在0℃下攪拌2 h。接著在N2 下將此溶液逐滴添加至5-己基四氫呋喃-2-酮(25 g，1.0當量)於DCM (100 ml)中之溶液。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。反應混合物藉由在0℃下添加HCl (1 N)淬滅。分離有機層且將水層用DCM萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌3次，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈白色固體狀之產物(67%)。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 3.50 (td, J = 7.7, 3.8 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.29 (ddt, J = 25.9, 16.6, 6.8 Hz, 2H), 1.77 (dddd, J = 13.3, 9.2, 6.8, 3.9 Hz, 1H), 1.66 - 1.55 (m, 1H), 1.42 (h, J = 4.0 Hz, 3H), 1.39 - 1.25 (m, 8H), 0.95 - 0.87 (m, 3H)。 中間物89b：乙酸(S)-1-(甲基胺基)-1-側氧基癸烷-4-基酯
Figure 02_image753
中間物89b係使用中間物87c中所用之方法合成，產率23%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.70 (s, 1H), 4.79 (tt, J = 8.4, 4.4 Hz, 1H), 2.74 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.11 (dp, J = 21.3, 7.7, 7.2 Hz, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.86 (tdd, J = 13.6, 6.7, 3.2 Hz, 1H), 1.81 - 1.70 (m, 1H), 1.45 (ddp, J = 19.0, 13.6, 6.6, 6.1 Hz, 2H), 1.27 - 1.12 (m, 8H), 0.80 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物89c：(S)-5-己基二氫呋喃-2(3H)-酮
Figure 02_image755
中間物89c係使用中間物87d中所用之方法自中間物89b合成，產率78%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.48 (ddd, J = 13.7, 7.5, 5.6 Hz, 1H), 2.52 (dd, J = 9.5, 6.9 Hz, 2H), 2.31 (dq, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.80 - 1.68 (m, 1H), 1.58 (dq, J = 13.8, 5.2 Hz, 1H), 1.51 - 1.21 (m, 8H), 0.87 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物89d：(S)-4-羥基癸酸苯甲酯
Figure 02_image757
在N2 下向中間物89c (3 g，1.0當量)於EtOH (25 mL)及H2 O (5 mL)中之溶液添加NaOH (1.1當量)。接著將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑。
所得殘餘物經受中間物87f中所用之方法，得到呈無色油狀之產物(3 g，50%)。 中間物89e：(S)-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)癸酸苯甲酯
Figure 02_image759
在N2 下向中間物89d (3 g，1.0當量)於DCM (30 mL)中之溶液添加氯甲酸(4-硝基苯基)酯(3.26 g，1.5當量)。接著在0℃下將吡啶(1.74 mL，2.0當量)添加至混合物。將反應混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌1 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑，得到殘餘物。將殘餘物用己烷稀釋且過濾。將濾液用H2 O洗滌3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(2 g，42%)。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 8.23 - 8.13 (m, 2H), 7.37 - 7.18 (m, 7H), 5.39 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.47 (s, 1H), 4.00 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.42 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.00 (ddt, J = 15.0, 7.6, 3.8 Hz, 1H), 1.85 (dt, J = 14.7, 7.3 Hz, 1H), 1.57 (ddt, J = 21.1, 14.0, 6.8 Hz, 2H), 1.35 - 1.16 (m, 8H), 0.91 - 0.75 (m, 3H)。 中間物89f：(S)-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸酸苯甲酯
Figure 02_image761
在N2 下向中間物89e (1.5 g，1.0當量)於MeCN (15 mL)中之溶液添加2-吡咯啶-1-基乙胺(1.16 g，3.0當量)、吡啶(819 uL, 3.0當量)、DMAP (413 mg，1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌5 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除溶劑。將殘餘物用EtOAc稀釋，且用1 N NaHCO3 洗滌5次且用H2 O洗滌3次。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈淺黃色油狀之產物(0.65 g，41%)。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.41 - 7.26 (m, 5H), 5.11 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 4.73 (dd, J = 10.9, 5.7 Hz, 1H), 3.26 (dd, J = 6.7, 1.7 Hz, 2H), 2.79 - 2.57 (m, 7H), 2.41 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.99 - 1.74 (m, 7H), 1.53 (s, 3H), 1.36 - 1.24 (m, 9H), 0.92 - 0.86 (m, 3H)。 化合物89：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((S)-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image763
向Pd/C (10% w/w，1.0 - 3.0當量)於THF (0.2-0.5 M)中之懸浮液添加中間物89f (1.0當量)。將混合物在H2 氛圍下在15-25℃下攪拌至少5 h。將反應混合物過濾，且濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈稠棕色油狀之產物。
立即在DCM (0.2-0.5 M)中復原棕色油狀物，接著在N2 下在0℃下添加中間物1c (1.0當量)、EDCI (1.2當量)、DMAP (0.1-0.2當量)及Et3 N (1.5當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌至少12 h。將混合物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。將合併之有機層用鹽水洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(23%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.49 - 5.22 (m, 8H), 5.18 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.22 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.12 - 4.04 (m, 2H), 3.28 - 3.15 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.50 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.32 (s, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.83 (s, 1H), 1.70 (s, 5H), 1.38 - 0.94 (m, 37H), 0.81 (q, J = 6.6 Hz, 9H)。MS: 928.4 m/z [M+H]。 實例90-化合物90 中間物90a：(R)-4-羥基癸酸苯甲酯
Figure 02_image765
中間物90a係使用中間物89d中所用之方法自(5R)-5-己基四氫呋喃-2-酮合成，產率27%。 中間物90b：(R)-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)癸酸苯甲酯
Figure 02_image767
中間物90b係使用中間物89e中所用之方法自中間物90a合成，產率57%。 中間物90c：(R)-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸酸苯甲酯
Figure 02_image769
中間物90c係使用中間物89f中所用之方法自中間物90b合成，產率47%。 化合物90：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((R)-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image771
化合物90係使用化合物89中所用之方法自中間物90c合成，產率27%。 實例91-化合物91 中間物91a：4-羥基十二烷酸
Figure 02_image773
向5-辛基四氫呋喃-2-酮(20 g，1.0當量)於H2 O (200 mL)中之溶液添加NaOH (4.03 g，1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除H2 O。此得到呈白色固體狀之粗產物(14 g，65%)。1 H NMR (400 MHz, D2 O) δ 3.55 (ddd, J = 9.5, 7.5, 4.6 Hz, 1H), 2.19 (qdd, J = 15.0, 9.3, 6.3 Hz, 2H), 1.69 (dddd, J = 13.9, 9.4, 6.4, 4.4 Hz, 1H), 1.59 (dddd, J = 14.0, 9.2, 7.7, 6.4 Hz, 1H), 1.46 - 1.30 (m, 3H), 1.23 (d, J = 6.6 Hz, 11H), 0.86 - 0.77 (m, 3H)。 中間物91b：4-羥基十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image775
向中間物91a (10 g，1.0當量)於DMF (100 mL)中之溶液添加BnBr (7.91 g，1.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌2 h。將混合物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取2次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(5.7 g，40%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.46 - 7.28 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.61 (h, J = 4.6 Hz, 1H), 2.51 (td, J = 7.3, 2.9 Hz, 2H), 1.86 (dtd, J = 14.6, 7.4, 3.5 Hz, 1H), 1.76 - 1.59 (m, 3H), 1.42 (q, J = 12.1, 9.1 Hz, 4H), 1.28 (d, J = 11.9 Hz, 12H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物91c：4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image777
在0℃下向中間物91b (10 g，1.0當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(9.87 g，1.05當量)於DCM (100 mL)中之溶液添加吡啶(3.95 mL，1.5當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌1 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(7.5 g，49%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.30 - 8.21 (m, 2H), 7.48 - 7.26 (m, 7H), 5.22 (d, J = 69.6 Hz, 2H), 4.87 (tt, J = 7.5, 4.5 Hz, 1H), 2.59 - 2.42 (m, 2H), 1.80 - 1.57 (m, 2H), 1.52 - 1.16 (m, 13H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 中間物91d：4-(((2-(二甲基胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image779
在0℃下向中間物91c (1.0當量)於MeCN (0.1-0.5 M)中之溶液添加二胺或胺基醇(N',N'-二甲基乙-1,2-二胺(2.0-3.0當量))、吡啶(3.0當量)及DMAP (0.1當量)。將混合物在15-25℃下攪拌至少2 h。結束後，在減壓下濃縮反應混合物，用H2 O稀釋，且用EtOAc萃取3次。濃縮合併之有機層，得到殘餘物，其藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(79%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.46 - 7.28 (m, 5H), 5.08 (s, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.23 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.40 (ddt, J = 12.0, 8.9, 4.5 Hz, 4H), 2.21 (s, 7H), 1.94 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 1.82 (p, J = 7.6 Hz, 1H), 1.61 - 1.40 (m, 3H), 1.39 - 1.16 (m, 14H), 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 化合物91：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(二甲基胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image781
向中間物91d於THF (0.1-0.5 M)中之溶液添加Pd/C (10% w/w)。將混合物在H2 氛圍下在15 Psi下在25℃下攪拌至少5 h。所得產物在THF中稀釋且過濾以移除固體。濾液真空濃縮。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈棕色油狀之甲酸中間物。
隨後化合物91使用中間物90f中所用之方法自所得油狀物合成，產率15%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.26 (m, 8H), 5.27 - 5.20 (m, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.28 (ddd, J = 11.9, 4.5, 1.3 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.4 Hz, 2H), 3.24 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.44 - 2.35 (m, 4H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.22 (s, 6H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.97 - 1.84 (m, 2H), 1.80 (dt, J = 14.9, 7.7 Hz, 1H), 1.67 - 1.42 (m, 8H), 1.42 - 1.14 (m, 39H), 0.88 (td, J = 6.8, 5.2 Hz, 9H)。MS: 930.4 m/z [M+H]。 實例92-化合物92 中間物92a：4-((((1-甲基哌啶-4-基)氧基)羰基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image783
中間物92a係使用中間物91d中所用之方法自中間物91c及1-甲基哌啶-4-醇合成，產率94%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.39 - 7.28 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.73 (dtd, J = 11.8, 5.4, 4.6, 2.7 Hz, 1H), 4.62 (tt, J = 8.6, 4.2 Hz, 1H), 2.68 (s, 2H), 2.48 - 2.37 (m, 2H), 2.29 (s, 5H), 2.01 - 1.84 (m, 4H), 1.78 (dtt, J = 12.5, 8.2, 3.5 Hz, 2H), 1.67 - 1.58 (m, 1H), 1.58 - 1.46 (m, 1H), 1.27 (d, J = 15.6 Hz, 13H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 化合物92：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-((((1-甲基哌啶-4-基)氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image785
化合物92係使用化合物91中所用之方法自中間物92a合成，產率28%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.39 - 5.21 (m, 8H), 5.21 - 5.16 (m, 1H), 4.65 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.57 - 4.52 (m, 1H), 4.22 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 11.9, 5.8, 4.1 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.61 (s, 2H), 2.36 - 2.29 (m, 2H), 2.29 - 2.18 (m, 7H), 2.14 (s, 2H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.93 - 1.84 (m, 4H), 1.83 - 1.77 (m, 1H), 1.77 - 1.65 (m, 3H), 1.54 (t, J = 7.3 Hz, 13H), 1.33 - 1.12 (m, 41H), 0.81 (td, J = 6.9, 5.3 Hz, 9H)。MS: 957.4 m/z [M+H]。 實例93-化合物93 中間物93a：4-(((2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image787
中間物93a係使用中間物92d中所用之方法自中間物91c及2-(氮雜環丁烷-1-基)乙胺合成，產率80%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.49 - 7.26 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 5.04 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 3.20 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 3.11 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.41 (ddd, J = 8.6, 6.7, 3.2 Hz, 2H), 2.10 - 2.00 (m, 2H), 1.96 - 1.88 (m, 1H), 1.82 (d, J = 15.4 Hz, 4H), 1.46 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.34 - 1.18 (m, 14H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 化合物93：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image789
化合物93係使用化合物91中所用之方法自中間物93a合成，產率18%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.36 - 5.22 (m, 8H), 5.18 (p, J = 5.0 Hz, 1H), 4.98 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.22 (ddd, J = 11.9, 4.5, 1.6 Hz, 2H), 4.08 (ddq, J = 11.7, 5.8, 2.8 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 3.05 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.43 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.31 (ddd, J = 8.8, 6.6, 4.2 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.99 (dq, J = 10.0, 6.9 Hz, 10H), 1.88 - 1.68 (m, 3H), 1.59 - 1.36 (m, 7H), 1.34 - 1.11 (m, 42H), 0.86 - 0.77 (m, 9H)。MS: 942.1 m/z [M+H]。 實例94-化合物94 中間物94a：4-(((2-(哌啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image791
中間物94a係使用中間物91d中所用之方法自中間物91c及2-(哌啶-1-基)乙-1-胺合成，產率68%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.38 - 7.28 (m, 5H), 5.10 (s, 3H), 4.75 (s, 1H), 3.22 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.64 (s, 1H), 2.45 - 2.29 (m, 8H), 1.99 - 1.88 (m, 1H), 1.82 (dq, J = 15.0, 8.0 Hz, 1H), 1.48 (dt, J = 53.9, 5.8 Hz, 9H), 1.34 - 1.17 (m, 12H), 0.86 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 化合物94：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(哌啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image793
化合物94係使用化合物91中所用之方法自中間物94a合成，產率22%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.29 (qq, J = 11.7, 6.7 Hz, 8H), 5.18 (p, J = 5.1 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.22 (ddd, J = 11.9, 4.5, 2.2 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.6 Hz, 2H), 3.18 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.39 - 2.18 (m, 12H), 1.98 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.91 - 1.79 (m, 1H), 1.79 - 1.68 (m, 1H), 1.61 - 1.33 (m, 15H), 1.33 - 1.10 (m, 42H), 0.81 (q, J = 6.4 Hz, 9H)。MS: 970.2 m/z [M+H]。 實例95-化合物95 中間物95a：4-(((4-(二乙基胺基)丁氧基)羰基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image795
中間物95a係使用中間物92d中所用之方法自中間物91c及4-(二乙基胺基)丁-1-醇合成，產率83%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.44 - 7.28 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.72 (tdd, J = 7.6, 5.4, 4.0 Hz, 1H), 4.11 (td, J = 6.7, 3.8 Hz, 2H), 2.49 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 2.42 (dtd, J = 7.7, 5.1, 4.4, 2.5 Hz, 4H), 1.99 (dddd, J = 14.4, 8.9, 7.0, 4.1 Hz, 1H), 1.89 (dtd, J = 14.7, 8.4, 6.5 Hz, 1H), 1.64 (ddt, J = 17.4, 10.5, 6.2 Hz, 3H), 1.56 - 1.46 (m, 3H), 1.34 - 1.21 (m, 13H), 1.00 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 化合物95：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((4-(二乙基胺基)丁氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image797
化合物95係使用化合物91中所用之方法自中間物95a製備，產率27%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.35 (qdd, J = 10.6, 4.4, 1.7 Hz, 8H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 4.71 (tt, J = 7.6, 2.7 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.13 (dtt, J = 10.4, 6.6, 3.7 Hz, 4H), 2.76 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 2.50 (q, J = 7.2 Hz, 4H), 2.41 (ddd, J = 15.2, 8.0, 6.4 Hz, 4H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.98 - 1.82 (m, 3H), 1.72 - 1.47 (m, 12H), 1.39 - 1.21 (m, 42H), 1.00 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.88 (td, J = 6.8, 4.8 Hz, 9H)。MS: 987.5 m/z [M+H]。 實例96-化合物96 中間物96a：4-(((2-(二乙基胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷酸苯甲酯
Figure 02_image799
中間物96a係使用中間物91d中所用之方法自中間物91c及N',N'-二乙基乙-1,2-二胺合成，產率58%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.39 - 7.28 (m, 5H), 5.19 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.76 (s, 1H), 3.51 (s, 2H), 3.27 - 3.15 (m, 2H), 2.54 (dd, J = 8.7, 5.9 Hz, 6H), 2.41 (ddd, J = 9.0, 6.9, 2.6 Hz, 2H), 1.94 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 1.83 (p, J = 7.3 Hz, 1H), 1.63 - 1.40 (m, 3H), 1.35 - 1.17 (m, 13H), 1.01 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 化合物96：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((2-(二乙基胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image198
化合物96係使用化合物91中所用之方法自中間物96a製備，產率42%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.29 (qq, J = 11.4, 6.5 Hz, 8H), 5.18 (p, J = 5.2 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.21 (ddd, J = 11.8, 4.5, 2.0 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 12.0, 5.9, 2.7 Hz, 2H), 3.12 (dt, J = 13.0, 6.3 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.45 (q, J = 7.3 Hz, 6H), 2.28 (dt, J = 27.2, 8.0 Hz, 6H), 1.98 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.83 (s, 1H), 1.78 - 1.68 (m, 1H), 1.54 (t, J = 7.2 Hz, 9H), 1.35 - 1.11 (m, 42H), 0.81 (q, J = 6.3 Hz, 9H)。MS: 958.4 m/z [M+H]。 實例97-化合物97 化合物97：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((5-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image802
化合物96係使用化合物52所用之方法自中間物55d及中間物1c製備，產率75%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.28 (m, 8H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 5.12 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.76 - 4.67 (m, 1H), 4.28 (dt, J = 11.9, 4.5 Hz, 2H), 4.13 (ddd, J = 12.0, 5.9, 4.5 Hz, 2H), 3.23 (h, J = 7.2, 6.2 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 2.43 (dt, J = 14.5, 6.6 Hz, 4H), 2.35 - 2.27 (m, 6H), 2.19 (s, 3H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.71 - 1.46 (m, 13H), 1.40 - 1.19 (m, 42H), 1.03 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 - 0.83 (m, 9H)。MS: 958.5 m/z [M+H]。 實例98 中間物98a：2,2-二甲基-3-側氧基十一烷酸乙酯
Figure 02_image804
在N2 下在-78℃下向N-異丙基丙-2-胺(20.0 mL，1.0當量)於THF (1-3 M)中之溶液添加n-BuLi (2.5 M，56.60 mL，1.0當量)。將混合物在-78℃下攪拌20分鐘。接著在-78℃下添加2-甲基丙酸乙酯(18.96 mL，1.0當量)。將混合物在-78℃下再攪拌20分鐘。將含壬醯氯(26.60 mL，1.0當量)之THF (200 mL)逐滴添加至以上溶液。使混合物升溫至15℃且在N2 氛圍下在15℃下攪拌12 h。反應混合物藉由添加冰水淬滅，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。將有機層分離，用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(15 g，41%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.11 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.36 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.56 - 1.46 (m, 2H), 1.28 (s, 6H), 1.25 - 1.13 (m, 13H), 0.80 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物98b：2,2-二甲基-3-側氧基十一烷酸
Figure 02_image806
將中間物98a (15 g，1.0當量)、LiOH (2.10 g，1.5當量)、KOH (4.92 g，1.5當量)於EtOH (120 mL)及H2 O (40 mL)中之混合物脫氣且用N2 淨化3次，且接著將混合物在N2 氛圍下在40℃下攪拌3 h。濃縮混合物以移除EtOH。接著，pH值用HCl (1 M)調整至5-6。混合物分配於H2 O與EtOAc之間。將有機層分離，用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(5 g，37%)。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 2.46 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.58 - 1.47 (m, 2H), 1.33 (s, 6H), 1.20 (s, 10H), 0.81 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 實例99-化合物99 中間物99a：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((2,2-二甲基-3-側氧基十一烷醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image808
在0℃下向中間物53a (12.16 g，1.1當量)於THF (20 mL)中之溶液添加中間物98b (4 g，1.0當量)、DBAD (8.07 g，2.0當量)及PPh3 (9.19 g，2.0當量)。將混合物在0℃下攪拌15分鐘。接著將混合物在N2 氛圍下在15℃下攪拌16 h。將反應混合物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。將有機層分離，用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(3 g，20%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.27 (dtt, J = 10.8, 8.7, 6.1 Hz, 8H), 4.10 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.03 (d, J = 6.0 Hz, 4H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.37 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.23 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.52 (tt, J = 14.2, 7.4 Hz, 8H), 1.31 - 1.17 (m, 46H), 0.85 - 0.77 (m, 12H)。 中間物99b：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((3-羥基-2,2-二甲基十一烷醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image810
在0℃下向中間物99a (1.0當量)於4:2:1 THF:H2 O:甲苯(0.025 - 0.1)中之溶液添加NaBH4 (5.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在15℃下攪拌5 h。反應混合物分配於THF與H2 O之間，且在減壓下濃縮有機層，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(33%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.41 - 5.25 (m, 8H), 4.20 - 4.07 (m, 7H), 3.63 (dd, J = 10.2, 6.7 Hz, 1H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.59 (q, J = 7.3 Hz, 6H), 1.40 - 1.22 (m, 40H), 1.16 (d, J = 4.5 Hz, 6H), 0.88 (td, J = 6.8, 4.0 Hz, 9H)。 中間物99c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((2,2-二甲基-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十一烷醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image812
在0℃下在N2 下向中間物99b (1 g，1.0當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(478 mg，2.0當量)於DCM (10 mL)中之溶液添加吡啶(191 uL，2.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在15-25℃下攪拌5 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(0.8 g，67%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.20 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.29 (dq, J = 13.1, 7.1, 6.1 Hz, 8H), 5.03 (dd, J = 10.4, 2.3 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 6.0, 2.5 Hz, 6H), 2.69 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.35 (p, J = 6.0 Hz, 1H), 2.23 (q, J = 8.4, 7.7 Hz, 4H), 1.97 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.53 (h, J = 7.1, 5.9 Hz, 8H), 1.36 - 1.12 (m, 56H), 0.85 - 0.77 (m, 12H)。 化合物99：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(4,4,11-三甲基-5-辛基-3,7-二側氧基-2,6-二氧雜-8,11-二氮雜十三烷基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image202
在0℃下向中間物99c (1.0當量)於MeCN (0.1 M)中之溶液添加二胺(N'-乙基-N'-甲基-乙-1,2-二胺(3.0當量))、DMAP (1.0當量)及吡啶(3.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在15℃下攪拌至少2 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。將有機層分離，用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(66%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 (pt, J = 11.5, 5.8 Hz, 8H), 4.90 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.11 - 4.02 (m, 5H), 3.17 (dt, J = 13.4, 7.3 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.37 (dq, J = 12.3, 6.2 Hz, 5H), 2.23 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.14 (s, 3H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 7H), 1.54 (p, J = 6.8 Hz, 4H), 1.37 - 1.06 (m, 49H), 0.97 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.81 (q, J = 6.9 Hz, 9H)。MS: 973.5 m/z [M+H]。 實例100-化合物100 中間物100a：2,2-二甲基-3-側氧基壬酸乙酯
Figure 02_image815
中間物100a係使用中間物99a中所用之方法自N-異丙基丙-2-胺、2-甲基丙酸乙酯及庚醯氯合成，產率26%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.14 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.60 - 1.47 (m, 2H), 1.36 - 1.14 (m, 13H), 0.84 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物100b：2,2-二甲基-3-側氧基壬酸
Figure 02_image817
將中間物100a (20 g，1.0當量)、LiOH (3.15 g，1.5當量)、KOH (7.37 g，1.5當量)於EtOH (6 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物在N2 氛圍下在40℃下攪拌4 h。濃縮混合物以移除EtOH。接著，pH值用HCl (1 M)調整至5-6。混合物分配於H2 O與EtOAc之間且用EtOAc萃取2次。將有機層分離，用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(6 g，34%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.53 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.58 (p, J = 7.2 Hz, 2H), 1.40 (s, 6H), 1.34 - 1.23 (m, 6H), 0.92 - 0.81 (m, 3H)。 中間物100c：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((2,2-二甲基-3-側氧基壬醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image819
在0℃下向中間物1c (19.06 g，1.1當量)於THF (50 mL)中之溶液添加PPh3 (14.41 g，2.0當量)及DBAD (12.65 g，2.0當量)及中間物100b (5.5 g，1.0當量)。將混合物在0℃下攪拌20分鐘，且使混合物升溫至15℃且在N2 氛圍下在15℃下攪拌16小時。反應混合物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。將有機層分離，用鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(4 g，18%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 (tt, J = 11.1, 5.4 Hz, 8H), 4.10 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.05 (dd, J = 10.4, 6.0 Hz, 4H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.34 (dt, J = 17.5, 6.6 Hz, 3H), 2.23 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.61 - 1.44 (m, 8H), 1.39 (d, J = 14.2 Hz, 3H), 1.35 - 1.14 (m, 41H), 0.85 - 0.76 (m, 9H)。 中間物100d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((3-羥基-2,2-二甲基壬醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image821
在0℃下向中間物100c (1.0當量)於4:2:1 THF:H2 O:甲苯(0.025 - 0.1)中之溶液添加NaBH4 (5.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在5℃下攪拌5 h。反應混合物分配於THF與H2 O之間，且有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(20%)。 中間物100e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((2,2-二甲基-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)壬醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image823
在0℃下向中間物100d (0.4 g，1.0當量)及(4-硝基苯基)氯甲酸酯(890 mg，9.0當量)於DCM (5 mL)中之溶液添加吡啶(119 uL，3.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在15℃下攪拌3 h。接著將混合物在N2 氛圍下在25℃下攪拌2 h。將反應混合物過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(0.2 g，42%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.21 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 2H), 7.31 (dd, J = 9.4, 2.8 Hz, 2H), 5.43 - 5.16 (m, 8H), 5.03 (dd, J = 10.3, 2.3 Hz, 1H), 4.12 - 3.99 (m, 6H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.35 (h, J = 6.0 Hz, 1H), 2.22 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.97 (t, J = 6.9 Hz, 7H), 1.63 - 1.47 (m, 6H), 1.40 - 1.12 (m, 41H), 0.82 (t, J = 6.7 Hz, 9H)。 化合物100：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸酯)2-(((2,2-二甲基-3-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)壬醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image825
化合物100係使用化合物99中所用之方法自中間物100e及2-吡咯啶-1-基乙胺合成，產率90%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 (tdq, J = 17.2, 12.4, 5.8, 5.3 Hz, 8H), 4.90 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.13 - 4.00 (m, 6H), 3.22 (ddq, J = 19.5, 12.8, 6.3, 5.8 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.51 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.44 (d, J = 6.0 Hz, 4H), 2.34 (p, J = 6.0 Hz, 1H), 2.23 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.70 (h, J = 7.5 Hz, 4H), 1.54 (p, J = 7.0 Hz, 4H), 1.41 - 1.06 (m, 44H), 0.81 (dt, J = 9.6, 6.7 Hz, 9H)。MS: 956.4 m/z [M+H]。 實例101-化合物101 化合物101：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(氮雜環丁烷-1-基)丙氧基)羰基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image827
化合物101係使用實例1所用之方法自中間物40d及3-(氮雜環丁烷-1-基)丙-1-醇合成，產率65%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.45 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (tt, J = 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.71 (ddd, J = 11.5, 7.6, 4.7 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.3 Hz, 2H), 4.15 (dddd, J = 13.3, 7.2, 5.5, 3.2 Hz, 4H), 3.18 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 2.82 - 2.72 (m, 4H), 2.48 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.40 (dt, J = 8.8, 6.8 Hz, 2H), 2.31 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 4H), 2.10 - 1.99 (m, 10H), 1.99 - 1.84 (m, 2H), 1.77 - 1.50 (m, 15H), 1.42 - 1.21 (m, 37H), 0.88 (td, J = 6.9, 5.4 Hz, 9H)。MS: 929.3 m/z [M+H]。 實例102-化合物102 化合物102：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((4-(((3-(哌啶-1-基)丙氧基)羰基)氧基)癸醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image829
化合物102係使用實例1所用之方法自中間物40d及3-(哌啶-1-基)丙-1-醇合成，產率72%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.28 (m, 8H), 5.25 (ddd, J = 5.8, 4.3, 1.5 Hz, 1H), 4.76 - 4.69 (m, 1H), 4.37 - 4.24 (m, 2H), 4.24 - 4.10 (m, 4H), 2.82 - 2.71 (m, 4H), 2.48 - 2.26 (m, 12H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 2.01 - 1.81 (m, 4H), 1.71 - 1.49 (m, 17H), 1.43 (s, 2H), 1.40 - 1.24 (m, 37H), 0.88 (td, J = 6.9, 5.0 Hz, 9H)。MS: 957.1 m/z [M+H]。 實例103-化合物103 中間物103a：溴化(2-乙基丁基)鎂
Figure 02_image831
向Mg (1.1當量)及I2 (0.1當量)於THF (0.4-0.5 M)中之溶液逐滴添加3-(溴甲基)戊烷(1.0當量)。將混合物在40℃下攪拌至少1 h。反應混合物未經額外純化直接用於下一步中。 中間物103b：6-乙基-4-側氧基辛酸乙酯
Figure 02_image833
在-78℃下向4-氯-4-側氧基-丁酸乙酯(1.0當量)於THF (0.3 M)中之溶液逐滴添加CuI (1-2當量)及中間物103a (1-2當量)。將混合物在-78℃下攪拌至少1.5 h。結束後，添加飽和NH4 Cl，且將反應用EtOAc萃取3次。有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈棕色油狀之產物(82%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.05 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.65 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.49 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 2.30 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.82 - 1.71 (m, J = 6.5 Hz, 1H), 1.33 - 1.13 (m, 7H), 0.78 (t, J = 7.4 Hz, 6H)。 中間物103c：6-乙基-4-側氧基辛酸
Figure 02_image835
向中間物103c (1.0當量)於3:1 EtOH/H2 O (0.2 M)中之溶液添加NaOH (1.5當量)、LiOH (1.5當量)。將混合物在40℃下攪拌至少1 h。結束後，反應之pH值使用1 M HCl調整至3，且反應用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(46%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.69 - 2.60 (m, 2H), 2.56 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.30 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 1.75 (hept, J = 6.4 Hz, 1H), 1.22 (qp, J = 13.8, 6.6 Hz, 4H), 0.78 (t, J = 7.4 Hz, 6H)。 中間物103d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((6-乙基-4-側氧基辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image837
在0℃下在N2 下向中間物103c (1.0當量)於DCM (0.2-0.5 M)中之溶液添加中間物1c (1.0當量)、EDCI (1.2當量)、DMAP (0.1-0.2當量)及Et3 N (1.5當量)。將混合物在N2 氛圍下在20-25℃下攪拌至少12 h。混合物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮濾液。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈黃色油狀之產物(40%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.40 - 5.21 (m, 8H), 5.18 (p, J = 5.0 Hz, 1H), 4.23 (dt, J = 11.9, 5.0 Hz, 2H), 4.08 (dd, J = 11.9, 5.9 Hz, 2H), 2.67 (dt, J = 20.4, 6.5 Hz, 6H), 2.51 (td, J = 6.5, 2.9 Hz, 2H), 2.32 - 2.22 (m, 5H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.75 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 1.53 (q, J = 7.2 Hz, 4H), 1.35 - 1.09 (m, 31H), 0.80 (dt, J = 16.7, 6.9 Hz, 12H)。 中間物103e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((6-乙基-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image839
中間物103e係使用中間物1e中所用之方法自中間物103d合成，產率46%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.21 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.27 (tt, J = 14.1, 7.8 Hz, 8H), 4.89 (p, J = 7.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.02 (m, 4H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.41 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.32 - 2.19 (m, 4H), 1.98 (q, J = 7.2 Hz, 10H), 1.69 - 1.40 (m, 7H), 1.39 - 1.16 (m, 36H), 0.82 (t, J = 6.9 Hz, 12H)。 化合物103：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((6-乙基-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image210
化合物103係使用中間物91d中所用之方法自中間物103e及N'-乙基-N'-甲基-乙-1,2-二胺合成，產率98%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.42 - 5.21 (m, 8H), 5.18 (q, J = 5.0 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.21 (ddd, J = 11.8, 4.4, 1.8 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.4 Hz, 2H), 3.17 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.44 - 2.27 (m, 6H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.13 (s, 3H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.84 (dq, J = 8.4, 4.4 Hz, 1H), 1.71 (dd, J = 14.8, 7.5 Hz, 1H), 1.58 - 1.43 (m, 8H), 1.29 - 1.16 (m, 38H), 0.96 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.80 (ddd, J = 13.4, 6.7, 3.7 Hz, 13H)。MS: 916.3 m/z [M+H]。 實例104 中間物104a：溴化(3,7-二甲基辛基)鎂
Figure 02_image842
中間物104a係使用中間物104a中所用之方法自1-溴-3,7-二甲基-辛烷合成。 中間物104b：7,11-二甲基-4-側氧基十二烷酸乙酯
Figure 02_image844
中間物104b係使用中間物103b中所用之方法自中間物104a合成，產率66%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.11 (qd, J = 7.1, 2.5 Hz, 2H), 2.71 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.49 - 2.35 (m, 2H), 1.68 - 1.54 (m, 1H), 1.49 (dq, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.43 - 1.31 (m, 2H), 1.24 (td, J = 8.0, 7.1, 3.6 Hz, 6H), 1.10 (dddd, J = 16.9, 9.9, 4.7, 2.0 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 6.5 Hz, 9H)。 中間物104c：7,11-二甲基-4-側氧基十二烷酸
Figure 02_image846
中間物104c係使用中間物103c中所用之方法自中間物104b合成，產率51%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 2.72 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 1.61 (ddt, J = 11.8, 9.0, 4.3 Hz, 1H), 1.51 (hept, J = 6.6 Hz, 1H), 1.45 - 1.34 (m, 2H), 1.24 (ddt, J = 16.2, 13.5, 4.2 Hz, 4H), 1.11 (ddt, J = 16.0, 9.6, 5.9 Hz, 3H), 0.91 - 0.81 (m, 9H)。 中間物104d：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((7,11-二甲基-4-側氧基十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image848
中間物104d係使用中間物103d中所用之方法自中間物104c合成，產率58%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.41 - 5.28 (m, 8H), 5.24 (ddd, J = 10.2, 5.8, 4.3 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (dd, J = 11.9, 5.8 Hz, 2H), 2.74 (dt, J = 17.5, 6.5 Hz, 6H), 2.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.48 - 2.37 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.60 (ddd, J = 10.0, 5.6, 2.6 Hz, 6H), 1.54 - 1.47 (m, 1H), 1.42 - 1.19 (m, 34H), 1.10 (ddt, J = 19.6, 10.0, 6.9 Hz, 4H), 0.93 - 0.80 (m, 15H)。 中間物104e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((7,11-二甲基-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image850
中間物104e係使用中間物1e中所用之方法自中間物104d合成，產率58%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.27 - 8.11 (m, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 5.36 - 5.16 (m, 9H), 4.78 (ddq, J = 12.5, 7.0, 3.4 Hz, 1H), 4.25 (dd, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.40 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.24 (tt, J = 7.7, 4.0 Hz, 4H), 2.07 - 1.88 (m, 10H), 1.72 - 1.48 (m, 7H), 1.44 (ddd, J = 13.3, 6.6, 1.3 Hz, 1H), 1.39 - 1.14 (m, 34H), 1.06 (dtd, J = 8.6, 6.7, 4.7 Hz, 3H), 0.86 - 0.76 (m, 15H)。 實例105-化合物105 化合物105：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((7,11-二甲基-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十二烷醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image852
化合物105係使用中間物91d中所用之方法自中間物104e及2-吡咯啶-1-基乙胺合成，產率62%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.38 - 5.22 (m, 8H), 5.22 - 5.15 (m, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.22 (dd, J = 12.0, 4.4 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 11.9, 5.9, 3.5 Hz, 2H), 3.20 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.51 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.43 (d, J = 5.9 Hz, 4H), 2.32 (ddd, J = 9.2, 6.7, 3.7 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.84 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 1.77 - 1.66 (m, 5H), 1.54 (p, J = 7.1 Hz, 7H), 1.44 (p, J = 6.6 Hz, 3H), 1.35 - 1.10 (m, 34H), 1.10 - 0.96 (m, 5H), 0.86 - 0.74 (m, 15H)。MS: 984.2 m/z [M+H]。 實例106-化合物106 化合物106：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-((6-乙基-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image854
化合物106係使用中間物91d中所用之方法自中間物103e及2-吡咯啶-1-基乙胺製備，產率78%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 (qt, J = 11.5, 6.0 Hz, 8H), 5.19 (q, J = 5.0 Hz, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.22 (dd, J = 12.2, 4.5 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J = 11.8, 5.8, 3.5 Hz, 2H), 3.22 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.53 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.33 (dd, J = 9.6, 7.0 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 7H), 1.89 - 1.80 (m, 2H), 1.76 - 1.61 (m, 7H), 1.60 - 1.45 (m, 6H), 1.34 - 1.16 (m, 33H), 0.87 - 0.72 (m, 12H)。MS: 928.4 m/z [M+H]。 實例107-化合物107 中間物107a：(Z)-1-溴壬-3-烯
Figure 02_image856
在0℃下向PPh3 (36.79 g，1.33當量)於DCM (1 M)中之溶液添加Br2 (7.23 mL，1.33當量)。將(Z)-壬-3-烯-1-醇(15 g，1.0當量)添加至反應混合物且將混合物在0℃下攪拌2 h。反應混合物藉由在0℃下添加H2 O淬滅且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(15 g，69%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.47 - 5.30 (m, 2H), 3.64 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 2.02 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 1.77 (s, 1H), 1.62 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 1.38 - 1.20 (m, 6H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物107b：溴化(Z)-壬-3-烯-1-基鎂
Figure 02_image858
向Mg (2.13 g，1.2當量)於THF (150 mL)中之懸浮液添加I2 (1.86 g，0.1當量)。接著將中間物107a (15 g，1.0當量)添加至混合物且將混合物在45℃下攪拌2 h。反應混合物未經額外純化直接用於下一步。 中間物107c：(Z)-4-側氧基十三碳-7-烯酸乙酯
Figure 02_image860
中間物107c係使用中間物103b中所用之方法自中間物107b合成，產率75%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.23 (m, 2H), 4.10 (qd, J = 7.1, 3.2 Hz, 3H), 2.69 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.55 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.47 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.30 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.01 - 1.95 (m, 2H), 1.34 - 1.18 (m, 11H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。 中間物107d：(Z)-4-側氧基十三碳-7-烯酸
Figure 02_image862
中間物107d係使用中間物103c中所用之方法自中間物107c合成，產率80%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.23 (ddt, J = 34.8, 17.4, 7.8 Hz, 2H), 4.27 - 3.96 (m, 2H), 2.58 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.31 - 2.08 (m, 4H), 1.92 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 1.75 (s, 2H), 1.21 (dq, J = 15.0, 9.2, 8.0 Hz, 6H), 0.80 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物107e：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((Z)-4-側氧基十三碳-7-烯醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image864
中間物107e係使用中間物104c中所用之方法自中間物107d及中間物1c合成，產率80%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.35 - 5.22 (m, 9H), 5.21 - 5.15 (m, 1H), 4.23 (dt, J = 11.9, 4.8 Hz, 2H), 4.12 - 4.01 (m, 4H), 2.76 - 2.67 (m, 4H), 2.65 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.55 - 2.49 (m, 2H), 2.42 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 1.98 (q, J = 7.2 Hz, 13H), 1.54 (p, J = 7.6 Hz, 4H), 1.32 - 1.18 (m, 37H), 0.82 (td, J = 7.0, 1.7 Hz, 9H)。 中間物107f：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((Z)-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)十三碳-7-烯醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image866
中間物107f係使用中間物1e中所用之方法自中間物107e合成，產率21%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.48 - 8.20 (m, 2H), 7.56 - 7.32 (m, 2H), 5.45 - 5.20 (m, 10H), 4.88 (tt, J = 7.9, 4.6 Hz, 1H), 4.30 (ddd, J = 12.1, 10.3, 4.5 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 2.1 Hz, 2H), 2.74 (dt, J = 19.6, 6.5 Hz, 5H), 2.59 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 2.48 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.41 - 2.24 (m, 5H), 2.15 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 2.09 - 1.96 (m, 10H), 1.61 (q, J = 12.7, 9.4 Hz, 5H), 1.39 - 1.20 (m, 30H), 0.99 - 0.69 (m, 9H)。 化合物107：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((Z)-4-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三碳-7-烯醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image216
化合物107係使用中間物91d中所用之方法自中間物107f及N'-乙基-N'-甲基-乙-1,2-二胺合成，產率56%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.41 - 5.29 (m, 9H), 5.24 (p, J = 5.0 Hz, 1H), 5.16 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.74 (m, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.23 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.48 - 2.36 (m, 6H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.02 (dq, J = 20.4, 7.0 Hz, 12H), 1.96 - 1.87 (m, 2H), 1.81 (dd, J = 14.7, 7.3 Hz, 1H), 1.65 - 1.55 (m, 7H), 1.39 - 1.22 (m, 35H), 1.03 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.88 (td, J = 7.0, 2.3 Hz, 9H)。MS: 955.3 m/z [M+H]。 實例108-化合物108 化合物108：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((Z)-4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)十三碳-7-烯醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image869
化合物108係使用中間物91d中所用之方法自中間物107f及2-吡咯啶-1-基乙胺合成，產率51%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.26 (m, 9H), 5.24 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 4.78 (tt, J = 8.6, 4.6 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.14 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.5 Hz, 2H), 3.29 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.66 - 2.50 (m, 5H), 2.39 (ddd, J = 9.6, 6.7, 3.6 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.01 (dq, J = 20.4, 7.1 Hz, 12H), 1.87 - 1.72 (m, 5H), 1.59 (q, J = 7.3 Hz, 6H), 1.40 - 1.15 (m, 31H), 0.88 (td, J = 6.9, 2.2 Hz, 9H)。MS: 967.3 m/z [M+H]。 實例109-化合物109 中間物109a：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-側氧基丙酯
Figure 02_image871
中間物109a係使用中間物62b中所用之方法自中間物62a及亞油酸合成，產率63%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.31 - 5.19 (m, 4H), 4.84 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 2.67 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.94 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 1.57 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.31 - 1.13 (m, 15H), 0.80 (d, J = 15.1 Hz, 12H)。 中間物109b：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-羥基-2-側氧基丙酯
Figure 02_image873
向中間物109a (1.0當量)於THF (180 mL)中之溶液添加HF-吡啶(5.0當量)。將混合物在25℃下攪拌1 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除THF。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(66%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.33 (dtd, J = 12.5, 10.3, 9.5, 5.6 Hz, 4H), 4.74 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 2.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 2.37 - 2.27 (m, 1H), 2.03 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 1.65 (p, J = 7.1 Hz, 2H), 1.41 - 1.24 (m, 14H), 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 中間物109c：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-(油醯基氧基)-2-側氧基丙酯
Figure 02_image875
中間物109c係使用化合物52中所用之方法自中間物109b及油酸合成，產率50%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.37 - 5.22 (m, 6H), 4.68 (s, 4H), 2.70 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.02 - 1.91 (m, 8H), 1.60 (q, J = 7.3 Hz, 4H), 1.33 - 1.17 (m, 33H), 0.81 (dt, J = 7.0, 3.3 Hz, 6H)。 中間物109d：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸2-羥基-3-(油醯基氧基)丙酯
Figure 02_image877
中間物109d係使用中間物1c中所用之方法自中間物109c合成，產率50%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.37 - 5.21 (m, 6H), 4.15 - 4.00 (m, 4H), 2.70 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.28 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.04 - 1.89 (m, 8H), 1.56 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 1.23 (dt, J = 13.9, 7.0 Hz, 34H), 0.82 (td, J = 6.8, 3.8 Hz, 6H)。 化合物109：(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-(油醯基氧基)-2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙酯
Figure 02_image879
化合物109係使用化合物85中所用之方法自中間物109d及中間物85c合成。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.35 (tdd, J = 8.8, 6.5, 3.6 Hz, 5H), 5.28 - 5.22 (m, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.29 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 11.9, 5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.34 - 3.22 (m, 2H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.55 (d, J = 30.6 Hz, 5H), 2.39 (ddd, J = 8.8, 6.6, 3.8 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.09 - 1.97 (m, 7H), 1.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.78 (d, J = 6.0 Hz, 4H), 1.61 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 1.30 (td, J = 10.5, 9.4, 4.7 Hz, 30H), 0.91 - 0.87 (m, 6H)。MS: 902.3 m/z [M+H]。 實例110 - 化合物110 中間物110a：二油酸2-側氧基丙-1,3-二酯
Figure 02_image881
向1,3-二羥基丙-2-酮(5 g，0.5當量)於DCM (300 mL)中之溶液添加DMAP (1.1當量)及EDCI (1.0當量)。接著向以上混合物添加油酸(1.0當量)且在25℃下攪拌12 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(8 g，12%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.34 - 5.21 (m, 4H), 4.68 (s, 4H), 2.35 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 1.94 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.60 (q, J = 7.4 Hz, 4H), 1.31 - 1.14 (m, 38H), 0.89 - 0.75 (m, 6H)。 中間物110b：二油酸2-羥基丙-1,3-二酯
Figure 02_image883
中間物110b係使用中間物1c中所用之方法自中間物110a合成，產率47%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.41 - 5.26 (m, 4H), 4.22 - 4.06 (m, 4H), 2.34 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 7H), 1.63 (p, J = 7.2 Hz, 4H), 1.28 (d, J = 14.2 Hz, 33H), 0.90 - 0.81 (m, 6H)。 化合物110：二油酸2-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image885
化合物110係使用化合物85中所用之方法自中間物110b及中間物85c合成。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.33 - 5.22 (m, 4H), 5.22 - 5.15 (m, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.28 - 4.17 (m, 2H), 4.08 (ddq, J = 12.2, 6.4, 2.9 Hz, 2H), 3.21 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.51 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.43 (d, J = 6.0 Hz, 4H), 2.32 (ddd, J = 8.6, 6.6, 3.7 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.94 (q, J = 6.7 Hz, 8H), 1.87 - 1.78 (m, 1H), 1.70 (p, J = 3.1 Hz, 5H), 1.61 - 1.36 (m, 9H), 1.22 (d, J = 13.2 Hz, 45H), 0.82 (td, J = 6.9, 3.7 Hz, 9H)。MS: 904.2 m/z [M+H]。 實例111-化合物111 化合物111-(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 3-((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)丙-1,2-二酯
Figure 02_image887
化合物111係使用化合物85中所用之方法自中間物85c及中間物30a合成。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.43 - 5.27 (m, 8H), 5.24 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.27 (ddd, J = 12.2, 8.2, 4.2 Hz, 2H), 4.18 - 4.09 (m, 2H), 3.27 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.75 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.57 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.50 (s, 4H), 2.37 (td, J = 8.9, 7.8, 3.5 Hz, 2H), 2.30 (td, J = 7.5, 4.4 Hz, 4H), 2.03 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.98 - 1.86 (m, 2H), 1.76 (h, J = 3.1 Hz, 5H), 1.59 (tt, J = 9.8, 5.1 Hz, 7H), 1.38 - 1.21 (m, 30H), 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 9H)。MS: 900.1 m/z [M+H]。 實例112-化合物112 化合物112：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((4-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)辛醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image889
化合物112係使用化合物84中所用之方法自中間物86c及中間物53a合成。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.44 - 5.28 (m, 8H), 5.19 (s, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.12 (d, J = 5.9 Hz, 6H), 3.29 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.64 - 2.49 (m, 6H), 2.38 (ddd, J = 10.1, 8.5, 4.8 Hz, 3H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.90 (s, 2H), 1.86 - 1.72 (m, 6H), 1.61 (t, J = 7.3 Hz, 7H), 1.32 (tq, J = 7.6, 4.9, 3.7 Hz, 33H), 0.89 (t, J = 6.7 Hz, 9H)。MS: 914.1 m/z [M+H]。 實例113-化合物113 中間物113a：3-羥基庚酸苯甲酯
Figure 02_image891
將Zn傾倒至HCl (1 M)中且攪拌30分鐘。將混合物過濾，且將沈澱用EtOH洗滌。在減壓下乾燥固體，得到新鮮製備之Zn。在66℃下向Zn (15.18 g，2.0當量)於THF (50 mL)中之懸浮液逐滴添加戊醛(1.0當量)及2-溴乙酸苯甲酯(1.5當量)，歷時0.5 h。將反應混合物過濾，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(10 g，36%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.34 (d, J = 4.1 Hz, 5H), 5.14 (s, 2H), 4.01 (tt, J = 8.4, 3.6 Hz, 1H), 2.87 (s, 1H), 2.59 - 2.41 (m, 2H), 1.57 - 1.47 (m, 1H), 1.43 (qd, J = 9.6, 8.9, 4.6 Hz, 2H), 1.37 - 1.24 (m, 4H), 0.93 - 0.87 (m, 3H)。 中間物113b：3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)庚酸苯甲酯
Figure 02_image893
在0℃下向中間物113a (8 g，1.0當量)及氯甲酸(4-硝基苯基)酯(2.0當量)於DCM (10 mL)中之溶液添加吡啶(3.0當量)。將混合物在N2 氛圍下在20℃下攪拌2 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除DCM。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(8 g，59%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.30 - 8.21 (m, 2H), 7.39 - 7.28 (m, 7H), 5.16 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 2.82 - 2.69 (m, 2H), 1.81 - 1.68 (m, 2H), 1.43 - 1.30 (m, 5H), 0.94 - 0.89 (m, 3H)。 中間物113c：3-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)庚酸苯甲酯
Figure 02_image895
在0℃下向中間物113b (0.5 g，1.0當量)及2-吡咯啶-1-基乙胺(3.0當量)於MeCN (10 mL)中之溶液添加DMAP (0.1當量)及吡啶(3.0當量)。將混合物在20℃下攪拌2 h。在減壓下濃縮反應混合物以移除MeCN。將殘餘物用H2 O稀釋且用EtOAc萃取3次。合併之有機層在減壓下濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(0.4 g，85%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.36 - 7.20 (m, 5H), 5.05 (s, 2H), 3.17 (dt, J = 13.3, 6.4 Hz, 2H), 2.56 (td, J = 13.2, 11.4, 6.3 Hz, 2H), 2.50 - 2.37 (m, 6H), 1.72 - 1.63 (m, J = 4.0, 3.5 Hz, 4H), 1.49 (s, 2H), 1.28 - 1.20 (m, 4H), 0.81 (q, J = 4.2, 3.2 Hz, 3H)。 中間物113d：3-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)庚酸
Figure 02_image897
向中間物113c (3.5 g，1.0當量)於THF (10 mL)中之溶液添加Pd/C (10% w/w)。將混合物用H2 淨化3次，且接著將混合物在H2 氛圍下在20℃下攪拌12 h。將反應混合物過濾，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析法來純化，得到呈無色油狀之產物(2 g，75%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.00 (s, 1H), 6.46 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.02 (dt, J = 10.0, 5.2 Hz, 1H), 3.43 - 3.25 (m, 3H), 2.92 (dt, J = 21.7, 6.5 Hz, 6H), 2.37 (qd, J = 14.9, 6.4 Hz, 2H), 1.87 (q, J = 4.4, 2.9 Hz, 4H), 1.64 - 1.45 (m, 2H), 1.24 (h, J = 7.7, 6.7 Hz, 4H), 0.88 - 0.75 (m, 3H)。 化合物113：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((3-(((2-(吡咯啶-1-基)乙基)胺甲醯基)氧基)庚醯基)氧基)甲基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image899
化合物113係使用化合物52中所用之方法自中間物113c及中間物53a合成。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.37 - 5.18 (m, 8H), 5.00 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.06 (p, J = 6.5, 6.1 Hz, 6H), 3.21 (p, J = 7.3, 6.8 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.55 - 2.39 (m, 7H), 2.32 (p, J = 6.0 Hz, 1H), 2.23 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 7H), 1.76 - 1.63 (m, 5H), 1.54 (t, J = 7.3 Hz, 6H), 1.33 - 1.15 (m, 30H), 0.82 (t, J = 6.7 Hz, 9H)。MS: 900.1 m/z [M+H]。 實例114 - 比較化合物114 化合物114：(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-雙(十八碳-9,12-二烯酸) 2-(((2-(乙基(甲基)胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)丙-1,3-二酯
Figure 02_image901
向中間物1c (250 mg，1.0當量)於DCM (2 mL)中之溶液添加吡啶(3.0當量)及氯甲酸4-硝基苯酯(1.1當量)。將反應在25℃下攪拌2 h，此後反應藉由添加水淬滅且用DCM萃取3次。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。在MeCN (2 mL)中復原所得粗殘餘物，接著添加吡啶(3.0當量)、N1-乙基-N1-甲基乙-1,2-二胺(1.5當量)及DMAP (1.0當量)。將反應在25℃下攪拌16 h。接著將庚烷添加至反應混合物，且將庚烷層用MeCN洗滌3次。將合併之MeCN層用庚烷反萃取三次，且合併之庚烷層最後用MeCN洗滌一次。接著真空移除庚烷，且粗物質藉由管柱層析法(MeOH/DCM)來純化，得到呈無色油狀之產物(138 mg，46%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.49 - 5.27 (m, 8H), 5.14 (p, J = 5.0 Hz, 1H), 4.33 - 4.12 (m, 4H), 3.29 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.71 (m, 4H), 2.60 - 2.38 (m, 5H), 2.38 - 2.16 (m, 7H), 2.04 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 1.69 - 1.56 (m, 4H), 1.42 - 1.22 (m, 28H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.96 - 0.85 (m, 6H)。 實例115-材料與方法 LNP組合物
在由可離子化脂質(例如胺脂質)、DSPC、膽固醇及PEG-2k-DMG組成之4組分脂質系統中，利用各種胺脂質製備LNP。在小鼠中肝編輯%之分析中，將Cas9 mRNA及靶向小鼠序列之經化學修飾之sgRNA以1:1 w/w比率或1:2 w/w比率調配於LNP中。 LNP調配物-交叉流
使脂質組分溶於100%乙醇中，其中脂質組分莫耳比率如以下所述。將經化學修飾之sgRNA及Cas9 mRNA組合且溶於25 mM檸檬酸鹽、100 mM NaCl (pH 5.0)中，產生大約0.45 mg/mL總RNA貨品子之濃度。LNP係以約6之N/P比率調配，其中如下所述，經化學修飾之sgRNA:Cas9 mRNA之比率為1:1或1:2 w/w比率。
藉由乙醇中之脂質與兩體積之RNA溶液及一體積之水的碰撞噴射混合形成LNP。乙醇中之脂質經由混合交叉與兩體積之RNA溶液混合。第四水流經由線內T形管與十字架之出口流混合。(例如參見WO2016010840，圖2。)將LNP於室溫下保持1小時，且進一步用水(約1:1 v/v)稀釋。使用切向流過濾在平板盒(Sartorius，100kD MWCO)上濃縮稀釋之LNP，且接著藉由滲濾，緩衝液更換為50 mM Tris、45 mM NaCl、5%(w/v)蔗糖(pH 7.5) (TSS)。可替代地，用PD-10脫鹽管柱(GE)完成至TSS之最終緩衝液更換。若需要，藉由用Amicon 100 kDa離心過濾器(Millipore)離心來濃縮組合物。接著使用0.2 μm無菌過濾器過濾所得混合物。將最終LNP儲存於4℃或-80℃下直至進一步使用。 LNP組成分析學
動態光散射(「DLS」)用於表徵本揭示案之LNP的多分散性指數(「pdi」)及大小。DLS量測將樣品置於光源下而產生之光散射。如自DLS量測所測定之PDI代表群體中之粒徑分佈(在平均粒徑附近)，其中完全均勻之群體的PDI為零。
電泳光散射用於表徵在指定pH下LNP之表面電荷。表面電荷或ζ電位係LNP懸浮液中粒子之間的靜電排斥/吸引大小之量度。
非對稱流場流分離-多角度光散射(AF4-MALS)用於藉由流體力學半徑分離組合物中之粒子，且接著量測分級分離之粒子的分子量、流體力學半徑及均方根半徑。此允許評估分子量及大小分佈以及二級特徵，諸如Burchard-Stockmeyer圖(隨時間變化之均方根(「rms」)半徑與流體力學半徑之比率，表明粒子之內部核密度)，及rms構象圖(均方根半徑之對數對分子量之對數，其中所得線性擬合之斜率給出緊密度對伸長度)。
奈米粒子跟蹤分析(NTA，Malvern Nanosight)可用於確定粒徑分佈以及粒子濃度。將LNP樣品適當稀釋且注射至顯微鏡載玻片上。當經由視野緩慢輸注粒子時，相機會記錄散射光。捕獲影片後，奈米粒子跟蹤分析藉由跟蹤像素且計算擴散係數來處理影片。此擴散係數可轉化為粒子之流體力學半徑。儀器亦對分析中計數之個別粒子之數目進行計數，以得出粒子濃度。
低溫電子顯微鏡(「低溫EM」)可用於確定LNP之粒徑、形態及結構特徵。
LNP之脂質組成分析可自液相層析、之後帶電氣溶膠偵測(LC-CAD)來確定。此分析可比較實際脂質含量對理論脂質含量。
分析LNP組合物之平均粒徑、多分散性指數(pdi)、總RNA含量、RNA之囊封效率及ζ電位。LNP組合物可藉由脂質分析、AF4-MALS、NTA及/或低溫EM進一步表徵。平均粒徑及多分散性係使用Malvern Zetasizer DLS儀器藉由動態光散射(DLS)量測。LNP樣品在藉由DLS量測之前用PBS緩衝液稀釋。報導Z平均直徑以及數目平均直徑及pdi，該Z平均直徑係基於強度之平均粒徑量測值。Malvern Zetasizer儀器亦用於量測LNP之ζ電位。在量測之前，將樣品以1:17 (50 µL稀釋為800 µL)於0.1X PBS (pH 7.4)中稀釋。
基於螢光之分析(Ribogreen®，ThermoFisher Scientific)用於確定總RNA濃度及游離RNA。囊封效率計算為(總RNA-游離RNA)/總RNA。將LNP樣品用含0.2% Triton-X 100之1x TE緩衝液適當稀釋以確定總RNA，或用1x TE緩衝液適當稀釋以確定游離RNA。藉由利用起始RNA溶液製備標準曲線，該起始RNA溶液用於製備組合物且於1x TE緩衝液+/- 0.2% Triton-X 100中稀釋。接著將稀釋之RiboGreen®染料(根據製造商之說明)添加至標準品及樣品中之每一者中，且在不存在光下在室溫下培育大約10分鐘。SpectraMax M5微量盤讀取儀(Molecular Devices)用於讀取樣品，激發、自動截止及發射波長分別設置為488 nm、515 nm及525 nm。自適當標準曲線確定總RNA及游離RNA。
囊封效率計算為(總RNA-游離RNA)/總RNA。可使用相同程序確定基於DNA之貨品子組分之囊封效率。對於單股DNA，可使用Oligreen染料，且對於雙股DNA，可使用Picogreen染料。
AF4-MALS用於查看分子量及大小分佈以及來自彼等計算之次級統計學。對LNP進行適當稀釋，且使用HPLC自動取樣器將其注入AF4分離通道中，該等LNP在此處集中且接著跨越通道以交叉流中之指數梯度溶析。所有流體皆由HPLC泵及Wyatt Eclipse儀器驅動。自AF4通道溶析之粒子流過UV偵測器、多角度光散射偵測器、準彈性光散射偵測器及示差折射率偵測器。藉由使用Debeye模型處理原始數據，以根據偵測器信號確定分子量及均方根半徑。
藉由與帶電氣溶膠偵測器(CAD)耦合之HPLC定量分析LNP中之脂質組分。藉由逆相HPLC達成4種脂質組分之層析分離。CAD係一種偵測所有非揮發性化合物的基於質量之破壞性偵測器，且無論分析物之結構如何，信號皆一致。 Cas9 mRNA及gRNA貨品子
藉由活體外轉錄製備Cas9 mRNA貨品子。使用線性化質體DNA模板及T7 RNA聚合酶藉由活體外轉錄生成包含1X NLS (SEQ ID NO: 3)或PCT/US2019/053423 (其以引用方式併入本文中)之表24之序列的加帽及多聚腺苷酸化Cas9 mRNA。舉例而言，可藉由在以下條件下在37℃下與XbaI一起培育2小時來線性化含有T7啟動子及100 nt聚(A/T)區的質體DNA：200 ng/µL質體、2 U/µL XbaI (NEB)及1x反應緩衝液。可藉由在65℃下加熱反應20 min使XbaI不活化。可使用二氧化矽maxi旋轉管柱(Epoch Life Sciences)自酶及緩衝液鹽純化線性化質體，且藉由瓊脂糖凝膠進行分析以確認線性化。可藉由在以下條件下在37℃下培育4小時來進行IVT反應以生成Cas9修飾之mRNA：50 ng/µL線性化質體；各2 mM GTP、ATP、CTP及N1-甲基偽-UTP (Trilink)；10 mM ARCA (Trilink)；5 U/µL T7 RNA聚合酶(NEB)；1 U/µL鼠類RNA酶抑制劑(NEB)；0.004 U/µL無機大腸桿菌焦磷酸酶(NEB)；及1x反應緩衝液。4 h培育後，添加TURBO DNA酶(ThermoFisher)至最終濃度為0.01 U/μL，且將反應物再培育30分鐘以去除DNA模板。利用含有LiCl沈澱之方法純化Cas9 mRNA。
以下實例中之sgRNA係以化學方式合成。 活體內LNP遞送
每個研究中使用在6-10週齡範圍內之CD-1雌性小鼠。稱重動物且根據體重分組，以基於組平均重量製備給藥溶液。經由側尾靜脈以每隻動物0.2 mL (每公斤體重大約10 mL)之體積給與LNP。在給藥後至少24小時定期觀察動物之不良影響。
對於量測活體內肝內編輯之研究，除非另外註釋，否則以0.1 mpk給與CD-1雌性小鼠。在第6天或第7天，藉由在異氟醚麻醉下經由心臟穿刺驅血對動物施以安樂死。自每隻動物收集肝臟組織以供提取DNA及分析。如本文所述，將血液收集至血清分離管中或含有緩衝檸檬酸鈉之管中，以獲得血漿。藉由下一代測序(NGS)量測小鼠組之編輯。 NGS測序
簡言之，為定量確定在基因組中靶位置處之編輯效率，分離基因組DNA，且利用深度測序來鑑別藉由基因編輯引入之插入及缺失的存在。
在靶位點(例如B2M)周圍設計PCR引子，且使所關注基因組區擴增。根據製造商之方案(Illumina)進行額外PCR，以添加測序所需之化學物質。在Illumina MiSeq儀器上對擴增子進行測序。在消除具有低品質評分之彼等讀段後，將讀段與相關參考基因組(例如GRCm38)進行比對。將含有讀段之所得文件映射至參考基因組(BAM文件)，其中選擇與所關注靶區域重迭之讀段，且計算野生型讀段數對含有插入、取代或缺失之讀段數。
編輯百分比(例如「編輯效率」或「編輯%」)定義為相對於序列讀段(包括野生型)總數的具有插入或缺失之序列讀段之總數。 轉甲狀腺素蛋白(TTR) ELISA分析
如所指示收集血液且分離血清。使用小鼠前白蛋白(轉甲狀腺素蛋白) ELISA套組(Aviva Systems Biology，目錄號OKIA00111)測定總小鼠TTR血清水準。簡言之，將血清用套組樣品稀釋劑連續稀釋至例如10,000倍及/或2,500倍之最終稀釋度。接著將此稀釋之樣品添加至ELISA盤中，且接著根據指示進行分析。來自處理組之血清TTR數據表示為媒劑對照水準之百分比。 實例116-藉由活體內編輯評定脂質功效
評定用包括各種胺脂質化合物之調配物遞送的材料的活體內編輯效率。使用靶向小鼠TTR基因之G282 (SEQ ID No: 1)或者靶向小鼠B2M基因之G650 (SEQ ID No. 2)量測編輯。經由活體內編輯實驗評定上述脂質之功效。LNP係以1:1 w/w比率之sgRNA及Cas9 mRNA以及約6之N/P比率調配。LNP之脂質組分中脂質之莫耳濃度表示為mol%胺脂質/DSPC/膽固醇/PEG-2k-DMG，例如50/10/38.5/1.5。根據上文提供之分析方法表徵最終LNP，以確定囊封效率、多分散性指數及平均粒徑。表2中顯示平均粒徑、多分散性(PDI)、總RNA含量及RNA之囊封效率的分析。亦量測以下可離子化脂質之pKa值且提供於表1中。
在以下實驗9中，測試一系列化合物，該等化合物係基於化合物7且變化之處在於在式(1A)之R3 位置處包括C6 環烷基或C4-12 烷基，如圖1A中所示出。如表3及圖1B及1C中所示，所有六種測試化合物均有效進行活體內編輯。亦在以下實例119中測試基於化合物7之化合物系列中的額外R3 基團。 表2-組成分析學
化合物編號 組成比率(mol%) 囊封(%) Z平均大小(nm) PDI 數目平均大小(nm) 實驗
1 50/10/38.5/1.5 99 79.25 0.085 57.00 1
3 50/10/38.5/1.5 98 83.58 0.042 67.38 1
7 50/10/38.5/1.5 98 87.93 0.052 70.97 1
8 50/10/38.5/1.5 98 94.18 0.066 71.54 1
9 50/10/38.5/1.5 97 83.72 0.049 67.39 1
30 50/10/38.5/1.5 98 116.20 0.040 97.58 1
49 50/9/38/3 99 86.06 0.033 71.23 1
5 50/10/38.5/1.5 97 88.86 0.003 73.37 2
6 50/10/38.5/1.5 98 68.98 0.075 50.12 2
10 50/10/38.5/1.5 98 68.38 0.079 51.46 2
49 50/9/38/3 98 75.34 0.052 59.17 2
11 50/10/38.5/1.5 98 92.55 0.063 70.42 3
12 50/10/38.5/1.5 98 73.87 0.051 56.58 3
49 50/9/38/3 97 78.85 0.036 64.05 3
14 50/10/38.5/1.5 96 95.77 0.023 77.66 4
15 50/10/38.5/1.5 97 90.90 0.055 71.35 4
16 50/10/38.5/1.5 98 84.13 0.039 66.00 4
49 50/9/38/3 98 82.71 0.056 64.97 4
1 50/9/39.5/1.5 96 89.37 0.041 70.27 5
17 50/10/38.5/1.5 98 91.32 0.037 72.26 5
18 50/10/38.5/1.5 99 77.64 0.057 58.93 5
19 50/10/38.5/1.5 99 82.31 0.011 66.83 5
20 50/10/38.5/1.5 98 88.10 0.056 70.77 5
21 50/10/38.5/1.5 99 80.80 0.041 65.00 5
31 50/10/38.5/1.5 98 93.72 0.009 76.38 5
32 50/10/38.5/1.5 98 78.88 0.054 62.21 5
33 50/10/38.5/1.5 98 87.33 0.036 70.78 5
34 50/10/38.5/1.5 96 90.69 0.044 73.81 5
35 50/10/38.5/1.5 97 85.62 0.063 68.07 5
36 50/10/38.5/1.5 97 76.38 0.058 60.24 5
49 50/9/38/3 98 82.71 0.056 64.97 5
7 50/10/38.5/1.5 98 95.20 0.020 76.61 6
9 50/10/38.5/1.5 98 85.62 0.048 68.63 6
22 50/10/38.5/1.5 98 98.32 0.026 79.28 6
23 50/10/38.5/1.5 97 94.38 0.048 75.29 6
24 50/10/38.5/1.5 98 109.50 0.133 72.78 6
49 50/9/38/3 99 75.92 0.040 60.22 6
1 50/9/39.5/1.5 97 90.24 0.002 74.63 7
25 50/10/38.5/1.5 99 81.90 0.029 64.59 7
26 50/10/38.5/1.5 99 79.29 0.047 62.17 7
27 50/10/38.5/1.5 99 85.38 0.040 65.81 7
28 50/10/38.5/1.5 98 90.56 0.029 73.19 7
29 50/10/38.5/1.5 83 90.05 0.002 74.44 7
49 50/9/38/3 98 80.07 0.019 64.16 7
34 50/10/38.5/1.5 98 92.98 0.014 75.69 8
38 50/10/38.5/1.5 98 87.14 0.045 68.11 8
49 50/9/38/3 98 86.84 0.020 71.49 8
7 50/10/38.5/1.5 97 89.00 0.034 73.67 9
34 50/10/38.5/1.5 97 85.93 0.043 68.07 9
39 50/10/38.5/1.5 98 89.19 0.004 73.72 9
40 50/10/38.5/1.5 97 98.55 0.023 81.09 9
41 50/10/38.5/1.5 98 109.00 0.036 88.36 9
42 50/10/38.5/1.5 98 113.80 0.014 93.70 9
43   50/10/38.5/1.5 97 136.60 0.014 113.90 9
49 50/9/38/3 99 86.26 0.017 70.81 9
49 50/9/38/3 96 83.65 0.031 67.22 9
114 50/10/38.5/1.5 95 120.3 0.011 100.5 9
34 50/10/38.5/1.5 98 92.98 0.014 75.69 10
38 50/10/38.5/1.5 98 87.14 0.045 68.11 10
49 50/9/38/3 98 86.84 0.020 71.49 10
49 50/9/38/3 96 83.65 0.031 67.22 10
表3顯示如藉由NGS量測之小鼠肝中之編輯百分比。 表3. 小鼠肝臟中之編輯效率，提供G282及G650實驗之插入缺失形成%及G282實驗之血清TTR水準
化合物編號 編輯 血清TTR 嚮導 實驗
平均插入缺失% SD N 血清TTR (ug/ml) SD 樣品數目(n) 血清TTR (%TSS)
TSS 0.1 0.1 4 884 113 5 100% G282 1
1  13.1 8.2 5 671 201 5 76% G282 1
3 23.7 8.5 5 691 182 5 78% G282 1
7 45.3 8.3 5 270 132 5 31% G282 1
8 0.1 0.1 5 745 97 5 84% G282 1
9 44.1 13.3 5 339 184 5 38% G282 1
30 10.4 4.8 5 841 89 5 95% G282 1
49 33.5 8.9 5 388 103 5 44% G282 1
TSS 0.1 0.1 5         G650 2
5 17.5 4.4 5         G650 2
6 0.4 0.1 5         G650 2
10 5.3 1.3 5         G650 2
49 10.2 2.8 4         G650 2
TSS 0.1 0.1 5         G650 3
11 9.2 1.2 5         G650 3
12 5.5 2.4 5         G650 3
49 15.7 5.5 5         G650 3
TSS 0.1 0.0 5         G650 4
14 20.6 8.7 5         G650 4
15 18.0 2.4 5         G650 4
16 10.1 1.7 5         G650 4
49 15.4 3.5 5         G650 4
TSS 0.2 0.1 5         G650 5
1 18.6 3.9 5         G650 5
17 12.3 4.4 5         G650 5
18 4.5 1.4 5         G650 5
19 13.0 4.1 5         G650 5
20 15.4 5.1 5         G650 5
21 12.1 1.4 5         G650 5
31 15.6 1.8 5         G650 5
32 11.6 2.0 5         G650 5
33 20.0 5.0 5         G650 5
34 44.8 8.3 5         G650 5
35 35.5 6.6 5         G650 5
36 30.0 8.4 5         G650 5
49 22.3 4.6 5         G650 5
TSS 0.0 0.0 5         G650 6
7 22.6 5.6 5         G650 6
9 20.3 2.0 5         G650 6
22 6.7 2.4 5         G650 6
23 7.3 2.0 5         G650 6
24 6.8 0.9 5         G650 6
49 11.4 2.2 5         G650 6
TSS 0.0 0.1 5         G650 7
1 3.2 0.8 5         G650 7
25 10.2 5.5 5         G650 7
26 5.2 1.4 5         G650 7
27 13.0 2.8 5         G650 7
28 17.8 2.5 5         G650 7
29 3.6 0.7 5         G650 7
49 20.5 4.3 5         G650 7
TSS 0.1 0 5 777 89 5 100% G282 8
34 50.4 6.3 5 101 62 5 13% G282 8
38 26.7 6.1 5 301 51 5 39% G282 8
49 38.6 8.0 5 247 82 5 32% G282 8
TSS 0.1 0.1 5 812 33 5 100% G282 9
7 46.1 6.8 5 271 73 5 33% G282 9
34 32.4 5.4 5 367 97 5 45% G282 9
39 36.5 7.3 5 335 99 5 41% G282 9
40 44.7 8.1 5 251 61 5 31% G282 9
41 28.8 15.9 5 393 190 5 48% G282 9
42 21.6 7.3 5 473 122 5 58% G282 9
49 15.8 6.6 5 602 60 5 74% G282 9
49 30.7 6.7 5 527 145 5 65% G282 9
114 0.8 1.1 5 637 49 5 78% G282 9
TSS 0.1 0 5 777 89 5 100% G282 10
34 50.4 6.3 5 101 62 5 13% G282 10
38 26.7 6.1 5 301 51 5 39% G282 10
49 38.6 8.0 5 247 82 5 32% G282 10
49 30.4 5.1 5 311 76 5 38% G282 10
實例117-肝中編輯之劑量反應
為評估編輯是否為劑量反應性的，在活體內在各種LNP劑量水準下進行實驗。將實例115之Cas9 mRNA調配為具有靶向TTR (G00282；SEQ ID NO:1)之sgRNA的LNP。此等LNP以1:1 w/w比率之sgRNA及Cas9 mRNA調配。使用交叉流程序在6.0之N:P比率下用如表4中所述之脂質莫耳組成調配LNP。
如實例115中所述，分析LNP組合物之平均粒徑、多分散性(pdi)、總RNA含量及RNA之囊封效率。
表4中顯示平均粒徑、多分散性(PDI)、總RNA含量及RNA之囊封效率的分析。 表4：組成分析學
化合物編號 組成比率(mol%) 囊封(%) Z平均大小(nm) PDI 數目平均大小(nm)
7 50/10/38.5/1.5 97 85.09 0.033 68.39
9 50/10/38.5/1.5 97 74.83 0.033 59.99
49 50/9/38/3 98 84.93 0.007 69.51
CD-1雌性小鼠以0.1 mpk或0.3 mpk i.v.給藥且評估肝內編輯。結果展示於圖2及表5中。 表5針對劑量反應之TTR肝編輯及血清TTR水準
化合物編號 劑量(mpk) 平均插入缺失% SD N
TSS n/a 0.4 0.1 5
7 0.1 49.1 8.9 5
7 0.3 69.4 0.8 5
9 0.1 50.6 6.5 5
9 0.3 64.5 3.8 5
49 0.1 26.8 5.7 5
49 0.3 60.6 5.9 5
實例118
為評估給藥之可伸縮性，在活體內進行劑量反應實驗。將實例115之Cas9 mRNA調配為具有靶向TTR (G00282；SEQ ID NO: 1)之gRNA的LNP。如實例115中所述，使用1:1 w/w比率之sgRNA及Cas9 mRNA調配、製備及分析此等LNP。此等LNP之組成分析描述於表6中。 表6：組成分析學
化合物編號 組成比率(mol%) 囊封(%) Z平均大小(nm) PDI 數目平均大小(nm)
化合物5 50/10/38.5/1.5 99 76.02 0.009 62.64
化合物34 50/10/38.5/1.5 98 86.45 0.015 71.97
化合物49 50/9/38/3 99 83.63 0.011 69.75
CD-1雌性小鼠以0.1 mpk或0.3 mpk i.v.給藥且評估肝內編輯。結果展示於圖3A及圖3B以及表7中。 表7：編輯及血清TTR水準
化合物編號 劑量(mpk) 編輯 血清TTR
平均插入缺失% SD N 血清TTR (ug/ml) SD N %TSS
TSS TSS 0.1 0.0 5 818 118 5 100%
5 0.1 26.1 2.2 5 549 33 5 67%
5 0.3 52.5 5.1 5 233 100 5 28%
34 0.1 54.9 4.6 4 170 55 4 21%
34 0.3 68.3 1.5 5 45 12 5 5%
49 0.1 50.0 11.5 5 254 107 4 31%
49 0.3 67.7 2.5 5 40 13 3 5%
實例119-藉由活體內編輯評估脂質遞送功效
經由活體內編輯實驗，評定用具有可變尾長之調配物遞送之材料的活體內編輯效率。如上所述用靶向小鼠TTR基因之G502 (SEQ ID No: 4)調配LNP，其用於量測編輯。調配物含有1:2 w/w比率之sgRNA與Cas9 mRNA。最終LNP之表徵展示於表8中。量測可離子化脂質之pKa值且展示於表1中。
在實驗4中，測試一系列基於化合物7之化合物，該等化合物之變化之處在於在式(1A)之R3 位置處包括C5-12 烷基，如圖4A中所示出。如表9及圖4B及4C中所示，所有五種測試化合物均有效進行活體內編輯。
在實驗8中，測試一系列基於化合物9之化合物，該等化合物之變化之處在於在式(1A)之R3 位置處包括C5-12 烷基，如圖5A中所示出。實驗2測試此系列之化合物287，其在R3 位置處包括C4 烷基。如表9及圖5B及5C中所示，此系列中之所有測試化合物均有效進行活體內編輯。
在實驗3中，測試一系列基於化合物46之化合物，該等化合物之變化之處在於在式(1A)之R3 位置處包括C5-8 烷基，如圖6A中所示出。化合物46在R3 位置處包括C12 烷基，且測試變化尾長之化合物。如表9及圖6B及6C中所示，具有C5 (化合物72)、C6 (化合物50)、C7 (化合物76)及C8 (化合物51) R3 基團之化合物有效進行活體內編輯。
在實驗7中，測試一系列基於化合物5之化合物，該等化合物之變化之處在於在式(1A)之R3 位置處包括C5-10 烷基，如圖7A中所示出。實驗2測試此系列之化合物66，其在R3 位置處包括C4 烷基。化合物5在R3 位置處包括C12 烷基且在實例116及118中顯示有效進行活體內編輯。如表9及圖7B及7C中所示，此系列中之所有其他測試化合物均有效進行活體內編輯。
在實驗1中，測試基於化合物34之化合物系列，其在式(1A)之位置X1 及Y1 處變化，如圖8A中所示出。化合物52及化合物34在位置Y1 處共享二亞油酸基團且變化之處在於在位置X1 處包括C0-1 伸烷基。化合物53、化合物54及化合物55在位置Y1 處共享三醇基團且變化之處在於在位置X1 處包括C0-2 伸烷基。化合物56、化合物57及化合物58在位置Y1 處共享20原子基團且變化之處在於位置X1 處包括伸烷基。化合物59、化合物60及化合物61在位置Y1 處共享21原子基團且變化之處在於在位置X1 處包括C0-2 伸烷基。化合物62、化合物63及化合物64在位置Y1 處共享非均質亞油酸及21原子基團且變化之處在於在位置X1 處包括C0-2 伸烷基。如表9及圖8B及8C中所示，所有五種測試化合物均有效進行活體內編輯。
在實驗5中，測試基於化合物50之化合物系列，其在式(1A)之位置X2 處變化，如圖9A中所示出。如表9及圖9B及9C中所示，所有五種測試化合物在0.1 mpk劑量下均有效進行活體內編輯。
在實驗6中，測試基於化合物34之化合物系列，如圖10A中示出。化合物86及化合物99在式(1A)之X1 位置處不同於化合物34。化合物103在式(1A)之R3 位置處不同於化合物34。化合物87及化合物88表示在介於外消旋化合物34之R3 與X1 位置之間的碳上的R-對映異構體及S-對映異構體。資料展示於表9及圖10B及10C中。在小鼠中測試之此系列中之所有化合物均有效進行活體內編輯。
在實驗9中，測試基於化合物50之一系列化合物，如圖11A中示出。化合物90及化合物89表示在介於外消旋化合物50之R3 與X1 位置之間的碳上的R-對映異構體及S-對映異構體。化合物100及化合物107在R3 及X1 位置處均不同於化合物50。化合物105、化合物106及化合物108在R3 位置處不同於化合物50。資料展示於表9及圖11B及11C中。在小鼠中測試之此系列中之所有化合物均有效進行活體內編輯。 表8-組成分析學
化合物編號 組成比率(mol%) 囊封(%) Z平均大小(nm) PDI 數目平均大小(nm) 實驗
49 50/9/38/3 98% 87.92 0.05 69.84 1
1 50/10/38.5/1.5 99% 68.63 0.04 54.84 1
34 50/10/38.5/1.5 98% 93.66 0.02 76.32 1
52 50/10/38.5/1.5 98% 90.75 0.03 74.35 1
53 50/10/38.5/1.5 99% 92.99 0.05 75.76 1
54 50/10/38.5/1.5 99% 94.16 0.04 75.05 1
55 50/10/38.5/1.5 97% 117.30 0.02 99.29 1
56 50/10/38.5/1.5 96% 112.50 0.03 91.81 1
57 50/10/38.5/1.5 98% 100.40 0.02 83.73 1
59 50/10/38.5/1.5 97% 109.90 0.03 88.36 1
60 50/10/38.5/1.5 97% 103.40 0.07 79.57 1
61 50/10/38.5/1.5 97% 102.00 0.06 79.7 1
62 50/10/38.5/1.5 97% 106.40 0.04 87.26 1
63 50/10/38.5/1.5 98% 106.00 0.04 82.18 1
64 50/10/38.5/1.5 97% 106.40 0.02 86.19 1
49 50/9/39.5/3 98% 88.36 0.014 73.13 2
44 50/9/39.5/1.5 99% 97.65 0.034 78.34 2
45 50/9/39.5/1.5 99% 102.70 0.021 85.54 2
67 50/9/39.5/1.5 99% 102.20 0.043 82.14 2
68 50/9/39.5/1.5 99% 122.30 0.051 100.4 2
49 50/9/38/3 93 77.07 0.03 63.19 3
50 50/10/38.5/1.5 98 94.33 0.02 76.57 3
51 50/10/38.5/1.5 98 96.78 0.02 80.57 3
72 50/10/38.5/1.5 98 106.80 0.02 88.38 3
76 50/10/38.5/1.5 98 94.32 0.01 78.11 3
49 50/9/38/3 98 81.83 0.026 66.26 4
7 50/10/38.5/1.5 98 87.61 0.002 73.07 4
39 50/10/38.5/1.5 98 89.83 0.015 73.52 4
40 50/10/38.5/1.5 97 101.10 0.027 81.51 4
69 50/10/38.5/1.5 96 108.90 0.017 88.76 4
73 50/10/38.5/1.5 97 95.81 0.029 76.59 4
49 50/10/38.5/1.5 98 83.00 0.03 65 5
50 50/10/38.5/1.5 98 103.00 0.06 77 5
77 50/10/38.5/1.5 98 104.00 0.08 78 5
78 50/10/38.5/1.5 97 91.00 0.13 59 5
79 50/10/38.5/1.5 98 75.00 0.09 55 5
84 50/10/38.5/1.5 99 91.00 0.03 75 5
49 50/9/38/3 99% 90.00 0.02 74 6
34 50/10/38.5/1.5 98% 89.00 0.03 73 6
86 50/10/38.5/1.5 98% 87.00 0.04 68 6
99 50/10/38.5/1.5 99% 79.00 0.03 64 6
103 50/10/38.5/1.5 91% 102.00 0.01 82 6
87 50/10/38.5/1.5 98% 83.00 0.06 63 6
88 50/10/38.5/1.5 98% 88.00 0.02 73 6
49 50/9/38/3 93 77.07 0.026 63.19 7
66 50/10/38.5/1.5 98 79.79 0.035 65.07 7
36 50/10/38.5/1.5 98 75.9 0.058 58.34 7
75 50/10/38.5/1.5 98 89.78 0.02 73.46 7
45 50/10/38.5/1.5 98 95.26 0.012 77.92 7
71 50/10/38.5/1.5 97 104.5 0.035 86.63 7
49 50/9/38/3 98% 84.47 0.026 69.01 8
9 50/10/38.5/1.5 98% 64.83 0.074 48.82 8
65 50/10/38.5/1.5 99% 69.67 0.056 52.04 8
35 50/10/38.5/1.5 99% 81.51 0.068 62.82 8
74 50/10/38.5/1.5 99% 92.14 0.024 74.58 8
44 50/10/38.5/1.5 99% 104.3 0.034 85.76 8
70 50/10/38.5/1.5 99% 124.2 0.018 102 8
49 50/9/38/3 98 87 0.04 70 9
50 50/10/38.5/1.5 97 98 0.04 78 9
90 50/10/38.5/1.5 98 99 0.02 81 9
89 50/10/38.5/1.5 98 88 0.01 73 9
100 50/10/38.5/1.5 99 102 0.05 83 9
105 50/10/38.5/1.5 99 80 0.02 64 9
106 50/10/38.5/1.5 99 91 0.01 74 9
107 50/10/38.5/1.5 98 89 0.03 72 9
108 50/10/38.5/1.5 99 89 0.03 73 9
49 50/9/38/3 0.98 90 0.04 75 10
34 50/10/38.5/1.5 0.98 95 0.03 77 10
91 50/10/38.5/1.5 0.98 97 0.01 82 10
92 50/10/38.5/1.5 0.98 67 0.06 51 10
93 50/10/38.5/1.5 0.98 103 0.01 86 10
94 50/10/38.5/1.5 0.98 70 0.06 53 10
95 50/10/38.5/1.5 0.98 105 0.01 88 10
51 50/10/38.5/1.5 0.98 98 0.02 82 10
96 50/10/38.5/1.5 0.98 89 0.03 73 10
97 50/10/38.5/1.5 0.98 92 0.03 75 10
表9展示如藉由NGS量測之小鼠肝臟中之編輯百分比。 表9. 小鼠肝臟中之編輯效率，提供G502實驗之插入缺失形成%及血清TTR水準。
編輯 血清TTR
化合物編號 劑量(mpk) 編輯% SD N 血清TTR (ug/ml) SD N %TSS 實驗
TSS n/a 0.1 0.00 5 1076.77 368.43 5 100.00 1
49 0.1 37.58 10.65 5 501.07 107.20 5 46.53 1
1 0.1 28.82 9.24 5 522.07 212.60 5 48.49 1
34 0.1 64.95 4.74 5 101.04 45.14 5 9.38 1
52 0.1 60.14 8.13 5 186.42 92.64 5 17.31 1
53 0.1 61.50 4.89 5 150.43 53.66 5 13.97 1
54 0.1 57.22 5.81 5 197.28 90.55 5 18.32 1
55 0.1 15.86 7.12 5 783.74 94.62 5 72.79 1
56 0.1 16.94 2.41 5 750.53 94.88 5 69.70 1
57 0.1 50.76 11.63 5 264.64 112.65 5 24.58 1
59 0.1 10.28 6.63 5 868.93 145.85 5 80.70 1
60 0.1 23.88 12.59 5 651.52 199.20 5 60.51 1
61 0.1 9.40 1.17 5 877.31 93.63 5 81.48 1
62 0.1 23.74 9.69 5 623.37 138.65 5 57.89 1
63 0.1 6.53 2.41 5 902.96 96.13 5 83.86 1
64 0.1 5.84 1.04 5 919.42 90.82 5 85.39 1
TSS n/a 0.24 0.05 5 1232.25 259.96 5 100.00 2
49 0.03 6.5 0.39 5 1128.34 197.52 5 91.56 2
4 0.03 8.6 1.00 5 900.69 291.61 5 73.09 2
45 0.03 5.16 1.38 5 965.93 156.29 5 78.39 2
67 0.03 5.94 1.63 5 806 219.39 5 65.41 2
68 0.03 6.48 0.05 5 845.04 259.96 5 68.58 2
TSS n/a 0.18 0.04 5 1161.07 311.28 5 100.00 3
49 0.03 5.02 2.30 5 960.376 129.68 5 82.71 3
49 0.1 30.66 10.27 5 544.37 183.72 5 46.89 3
50 0.03 37.54 24.51 5 528.43 165.52 5 45.51 3
50 0.1 65.56 3.59 5 160.42 44.32 5 13.82 3
51 0.03 38.8 5.98 5 447.172 44.70 5 38.51 3
51 0.1 65.62 4.90 5 108.258 49.36 5 9.32 3
72 0.03 27.72 10.69 5 777 191.77 5 66.92 3
72 0.1 53.06 8.34 5 306.856 39.10 5 26.43 3
76 0.03 27.32 14.64 5 939.50 171.63 5 69.72 3
76 0.1 63.08 6.07 5 148.554 67.25 5 12.79 3
TSS n/a 0.24 0.05 5 690.45 84.84 5 100% 4
49 0.03 28.78 9.67 5 464.17 74.74 5 67% 4
49 0.1 56.82 4.70 5 154.53 60.30 5 22% 4
7 0.03 38.23 13.85 4 397.92 52.45 4 58% 4
7 0.1 66.72 5.63 5 66.59 45.44 5 10% 4
69 0.03 36.68 6.47 5 370.88 69.44 5 54% 4
69 0.1 67.38 5.13 4 85.93 27.44 4 12% 4
40 0.03 34.53 5.48 4 529.70 128.79 4 77% 4
40 0.1 69.44 2.12 5 64.65 21.93 5 9% 4
73 0.03 57.32 7.29 5 173.78 81.14 5 25% 4
73 0.1 70.76 2.03 5 30.62 14.97 5 4% 4
39 0.03 44.74 14.44 5 286.24 100.55 5 41% 4
39 0.1 66.66 4.44 5 39.85 20.49 5 6% 4
TSS n/a 0.16 0.05 5 809.30 145.45 5 100 5
49 0.03 16.98 10.77 5 592.00 150.58 5 73.1 5
49 0.1 40.32 11.31 5 379.70 106.18 5 46.9 5
77 0.03 5.18 0.79 5 552.80 84.36 5 68.3 5
77 0.1 10.36 3.05 5 652.20 179.50 5 80.6 5
78 0.03 7 2.04 5 807.50 97.21 5 99.8 5
78 0.1 24.2 7.13 5 537.90 74.96 5 66.5 5
79 0.03 0.58 0.19 5 703.50 195.81 5 86.9 5
79 0.1 3.34 1.51 5 812.20 203.80 5 100.4 5
84 0.03 11.24 3.37 5 649.70 161.07 5 80.3 5
84 0.1 18.86 9.21 5 592.10 98.42 5 73.2 5
50 0.03 23.92 3.08 5 567.70 202.13 5 70.1 5
50 0.1 49.6 14.63 5 241.90 104.88 5 29.9 5
TSS n/a 0.1 0.07 5 964.34 179.38 5 100.00 6
49 0.03 3.28 1.05 5 969.91 131.91 5 100.57 6
49 0.1 26.88 6.84 5 609.23 222.39 5 63.17 6
34 0.03 19.66 3.87 5 820.73 196.33 5 85.10 6
34 0.1 50.82 2.43 5 306.74 84.07 5 31.80 6
86 0.03 9.62 5.42 5 897.846 166.96 5 93.10 6
86 0.1 50.7 6.45 5 277.696 38.44 5 28.80 6
99 0.03 10.2 4.30 5 891.268 228.52 5 92.42 6
99 0.1 37.12 6.54 5 413.382 113.60 5 42.87 6
103 0.03 20.16 7.23 5 696.58 103.62 5 72.23 6
103 0.1 51.98 7.53 5 280.156 106.56 5 29.05 6
87 0.03 16.08 4.23 5 773.57 157.56 5 80.21 6
87 0.1 51.78 6.51 5 321.386 85.50 5 33.33 6
88 0.03 20.66 9.33 5 723.87 105.48 5 75.06 6
88 0.1 57.32 7.41 5 322.566 132.08 5 33.45 6
TSS n/a 0.16 0.05 5 1648.15 261.09 5 100 7
49 0.03 4.08 1.33 5 1459.99 292.22 5 88.584 7
49 0.1 27.5 8.04 5 860.90 343.62 5 52.234 7
66 0.03 27.64 8.25 5 901.24 307.33 5 54.682 7
66 0.1 55.26 4.08 5 324.25 115.30 5 19.674 7
36 0.03 9.96 0.82 5 1249.04 115.28 5 75.785 7
36 0.1 35.92 2.78 5 722.28 85.81 5 43.824 7
75 0.03 29.6 6.95 5 743.29 58.71 5 45.098 7
75 0.1 57.22 7.58 5 197.72 99.45 5 11.996 7
45 0.03 31.1 4.96 5 715.87 97.41 5 43.435 7
45 0.1 60.3 6.80 5 166.30 55.94 5 10.09 7
71 0.03 20.94 7.55 5 781.63 115.04 5 47.425 7
71 0.1 55.78 2.10 5 248.13 55.94 5 15.055 7
TSS n/a 0.1 0.00 5 748.33 130.95 5 100.00 8
49 0.03 7.62 6.50 5 735.41 83.84 5 98.27 8
49 0.1 37.46 4.17 5 369.43 45.54 5 49.37 8
9 0.03 0.84 0.46 5 853.25 107.87 5 114.02 8
9 0.1 3.46 1.09 5 772.22 172.17 5 103.19 8
65 0.03 1.32 0.31 5 896.77 143.42 5 119.84 8
65 0.1 10.12 9.68 5 742.52 151.70 5 99.22 8
35 0.03 4.46 0.70 5 780.47 74.29 5 104.30 8
35 0.1 17.94 4.99 5 741.82 79.87 5 99.13 8
74 0.03 4.36 1.25 5 752.38 120.29 5 100.54 8
74 0.1 11.12 1.63 5 823.58 126.35 5 110.06 8
44 0.03 4.76 1.10 5 897.76 51.74 5 119.97 8
44 0.1 17.97 7.30 5 589.60 52.34 5 78.79 8
70 0.03 4.84 1.77 5 945.08 81.30 5 126.29 8
70 0.1 8.04 1.17 5 654.70 98.42 5 87.49 8
TSS n/a 0.1 0.00 5 964.50 154.71 5 100 9
49 0.03 20.54 12.51 5 677.31 194.76 5 70.22 9
50 0.03 21.74 8.62 5 687.70 218.46 5 71.3 9
90 0.03 26.02 5.64 5 578.26 188.44 5 59.95 9
89 0.03 31.02 2.76 5 469.27 63.53 5 48.65 9
100 0.03 31.3 6.03 5 450.19 47.05 5 46.68 9
105 0.03 33.86 8.75 5 462.70 120.85 5 47.97 9
106 0.03 11.58 3.69 5 795.41 161.67 5 82.47 9
106 0.03 1.98 1.16 5 855.49 158.34 5 88.7 9
107 0.03 26.98 4.62 5 564.55 102.79 5 58.53 9
108 0.03 27 4.04 5 550.89 102.92 5 57.12 9
TSS n/a 0.14 0.05 5 767.76 98.15 5 100% 10
49 0.03 10.33 2.15 4 704.2 126.26 4 92% 10
34 0.03 37.44 10.7 5 419.07 133.1 5 55% 10
91 0.03 22.7 6.77 5 681.26 63.6 5 89% 10
92 0.03 2.38 0.79 5 923.39 226.76 5 120% 10
93 0.03 12.68 1.94 5 765.38 95.14 5 100% 10
94 0.03 1.82 1.29 5 838.22 110.3 5 109% 10
95 0.03 37.96 13.54 5 589.77 283.04 5 77% 10
51 0.03 30.86 4.36 5 619.84 114.91 5 81% 10
96 0.03 28.04 3.67 5 540.39 120 5 70% 10
97 0.03 28.26 3.88 5 603.03 177.26 5 79% 10
實例120. 活體內脂質之編輯功效及耐受性
為評定脂質功效，在活體內進行劑量反應實驗。實例115之Cas9 mRNA用靶向TTR之gRNA (G00534；SEQ ID NO: 5)調配為LNP。如實例115中所述，使用1:2 w/w比率之sgRNA及Cas9 mRNA調配、製備及分析此等LNP。此等LNP之組成分析描述於表10中。 表10. 組成分析學
化合物編號 組成 囊封(%) Z平均大小(nm) PDI 數目平均大小(nm)
49 50/9/38/3 97 87.84 0.028 69.85
34 50/10/38.5/1.5 93 96.43 0.052 76.08
45 50/10/38.5/1.5 95 101.00 0.052 83.48
50 50/10/38.5/1.5 87 98.55 0.050 79.18
為求功效，以0.1 mpk或0.03 mpk靜脈內給與史泊格多利雌性大鼠。給藥後6-7天，藉由CO2窒息處死大鼠。將血液收集至血清分離管中。針對gDNA，加工加工肝生檢，且藉由實例115中所述之NGS法評定編輯。結果展示於表11及圖12A及12B中。對於耐受性，以6 mpk給與史泊格多利雌性大鼠，且在給藥後24小時藉由CO2窒息處死動物。將血液收集至血清分離管中且送至外部CRO以經由肝酶小組定量肝酶。結果展示於表12中。 表11. 大鼠中之編輯效率，提供G534實驗之插入缺失形成%及血清TTR水準。
編輯 血清TTR
化合物編號 劑量(mpk) 編輯% SD N 血清TTR (ug/ml) SD N %TSS 嚮導(gRNA) 實驗
TSS 0.1 0.00 5 845.3 70.69 5 100% G534 1
49 0.03 4.76 1.49 5 790.9 82.94 5 94% G534 1
49 0.1 25.62 14.18 5 669.5 181.13 5 79% G534 1
34 0.03 21.22 6.54 5 514.2 119.36 5 61% G534 1
34 0.1 53.9 7.17 5 188.9 112.67 5 22% G534 1
45 0.03 10.76 8.80 5 910.4 73.77 5 110% G534 1
45 0.1 48.16 2.90 5 270.7 109.71 5 32% G534 1
50 0.03 26.9 9.04 5 581.7 76.89 5 69% G534 1
50 0.1 62.6 1.04 5 116.6 24.78 5 14% G534 1
表12. 大鼠肝臟之肝酶小組之結果
化合物編號 劑量(mg/kg) ALT (U/L) AST (U/L) 肌酸激酶(U/L) GGT (U/L) ALP (U/L) 總膽紅素(mg/dL)
TSS 47 72 132.2 0 318.4 0.1
49 6 408.5 534.8 157.5 2 784.3 0.6
34 6 179.6 349.6 184.8 3.4 542 0.2
45 6 163.2 681 1103 2.4 439.8 0.3
50 6 250.8 820.8 272 11 508.6 0.4
實例121-利用R3 烷基系列化合物進行活體外編輯
測試一系列基於化合物46之化合物的活體外編輯，該等化合物之變化之處在於在式(1A)之R3 位置處包括C4-12 烷基(如圖13A中示出)。將人類肝細胞癌細胞株HUH7 (Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank，目錄號JCRB0403)在補充有10%胎牛血清及1%青黴素(Penicillin)-鏈黴素(Streptomycin)的DMEM培養基中培養。將細胞以20,000個細胞/孔之密度塗鋪於96孔盤中，24小時後轉染(在轉染時約80%匯合)。LNP係使用交叉流程序，利用如表13中所述之脂質莫耳組成，以6.0之N/P比率，以1:2 w/w比率之sgRNA及Cas9 mRNA調配。如實例115中所述，分析LNP組合物之平均粒度、多分散性(pdi)、總RNA含量及RNA之囊封效率。平均粒度、多分散性(PDI)、總RNA含量及RNA之囊封效率的分析展示於表13。將LNP在培養基中稀釋，在37℃下培育5分鐘，且以每孔2000 ng RNA之劑量移液至細胞上。每個條件在生物複製品中分析。在轉染後6小時收穫細胞。根據製造商方案使用50微升/孔BuccalAmp DNA提取溶液(Epicentre，目錄號QE09050)提取基因組DNA。如上所述，所有DNA樣品均進行PCR且隨後針對在G000502目標基因座上之編輯進行NGS分析。如表14及圖13B中所示，所有測試化合物均有效進行活體外編輯。 表13-組成分析學
化合物編號 組成比率(mol%) Z平均大小[nm] PDI 數目平均值[nm] %E
49 50/9/38/3 93.14 0.015 74.82 98
34 50/10/38.5/1.5 93.01 0.009 75.88 97
46 50/10/38.5/1.5 94.54 0.003 76.76 99
51 50/10/38.5/1.5 97.21 0.009 80 98
76 50/10/38.5/1.5 98.79 0.024 81.12 97
50 50/10/38.5/1.5 102.8 0.021 84.16 97
72 50/10/38.5/1.5 111.4 0.018 91.47 94
85 50/10/38.5/1.5 117.1 0.045 93.05 96
表14-活體外編輯
化合物編號 編輯 SD
49 22.6 0.8
34 49.0 2.5
46 63.7 6.4
51 69.0 9.7
76 61.2 9.9
50 64.3 5.6
72 65.8 7.3
85 66.4 0.4
序列表
描述 序列 SEQ ID No.
G00282 靶向小鼠TTR之sgRNA mU*mU*mA*CAGCCACGUCUACAGCAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU 11
G00650 靶向人類B2M之sgRNA mG*mA*mC*AAGCACCAGAAAGACCAGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU 22
編碼Cas9之mRNA GGGUCCCGCAGUCGGCGUCCAGCGGCUCUGCUUGUUCGUGUGUGUGUCGUUGCAGGCCUUAUUCGGAUCCGCCACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGACAUCGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGACGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCUGGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCUGAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGAUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCAGGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGACAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGUCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUUCGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAAGUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGUCGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUACCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACACUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAGCGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGACAUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGCAAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAGACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGCACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGGAAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAACUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAAGCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCUGGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGCAGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGCAAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGAAAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAAGAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCUGAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUACAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUACGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAAUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAUGGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAGAGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAACGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACUGCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCCGUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAUCCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCUGGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGAAGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUUCAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCCGAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUACGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGUCAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUUCCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCUGCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCAGCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUUCGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUUCAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAAGAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGAAAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACUGACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAGACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGUCAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUGGGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCUGAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCAGCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGACAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAGCCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCCGGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGUCGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAAGCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAACUGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAAACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACUACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGGAACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCGACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACAGCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAGUCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGCUGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACAACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAACUGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCGAAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCCUGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACGACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGAAGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCCAGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACCACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAACAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCGAAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCAGAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAAAGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCAUGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACGGAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAGACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGCAGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAGGAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGGACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAGUCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAACUGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCGAAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAUACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGCCGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAAAGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGGGAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACUUCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCGUCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCGAACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGGCAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACAACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAGAAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGGGAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAAUCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCCUGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGACUGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAGGAGACGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGUCUAGCUAGCCAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCUACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAUAGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAAAGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUAAUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUAAAAAAUGGAAAGAACCUCGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG 33
G000502 靶向小鼠TTR之sgRNA mA*mC*mA*CAAAUACCAGUCCAGCGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU 44
G000534 靶向大鼠TTR之sgRNA mA*mC*mG*CAAAUAUCAGUCCAGCGGUUUUAGAmGmCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmAmGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmGmCmU*mU*mU*mU 55
2’-O-甲基修飾及硫代磷酸酯鍵如下文所表示(m = 2’-OMe；* = 硫代磷酸酯)
圖 1A-1C 展示在TTR基因座之活體內編輯及分析中所測試之化合物。圖1A示出所測試化合物之化學結構。圖1B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖1C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 2 係展示在使用包含式(IA)化合物或對照化合物之LNP遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比的圖。亦展示劑量反應數據。
圖 3A-3B 展示在使用包含式(IA)化合物之LNP遞送後的結果。圖3A係展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比的圖。圖3B係展示遞送後之血清TTR (μg/mL)之圖。
圖 4A-4C 展示在TTR基因座之活體內編輯及分析中測試之化合物。圖4A示出測試化合物之化學結構。圖4B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖4C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 5A-5C 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖5A示出測試化合物之化學結構。圖5B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖5C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 6A-6C 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖6A示出測試化合物之化學結構。圖6B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖6C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 7A-7C 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖7A示出測試化合物之化學結構。圖7B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖7C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 8A-8C 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖8A示出測試化合物之化學結構，其中n=1、2或3。圖8B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖8C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 9A-9C 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖9A示出測試化合物之化學結構。圖9B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖9C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 10A-10C 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖10A示出測試化合物之化學結構。圖10B展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖10C展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 11A-11D 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖11A及圖11B示出測試化合物之化學結構。圖11C展示在遞送後小鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖11D展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 12A-12B 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖12A展示在遞送後大鼠肝細胞中TTR之編輯百分比。圖12B展示遞送後之血清TTR水準(μg/mL)。
圖 13A-13B 展示式(IA)化合物及使用該等化合物遞送之結果。圖13A示出測試化合物之化學結構。圖13B展示遞送後HUH7細胞中TTR之編輯百分比。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 108144579-A0101-11-0001-1

Claims (96)

  1. 一種式IA化合物，
    Figure 03_image001
    (IA) 其中，每次出現時獨立地， X1 為C1-3 伸烷基或
    Figure 03_image004
    ， X2 係選自O、NH、NMe及一鍵， X3 為C2-4 伸烷基， X4 為C1 伸烷基或一鍵， X5 為C1 伸烷基或一鍵， R1 為C1-3 烷基， R2 為C1-3 烷基，或 R2 連同氮原子及R1 或X3 之碳原子一起形成4員、5員或6員環， Y1 係選自一鍵、-CH=CH-、-(C=O)O-及-O(C=O)-， Y2 係選自-CH2 -CH=CH-及C3 -C4 伸烷基， R3 係選自H、C5-7 環烷基、C8 -C10 烯基及C3-18 烷基， R4 為C4-8 烷基， 或其鹽， 限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基，Y1 為順式-CH=CH-，且-Y2 -R4 為順式-CH2 -CH=CH-(C5 烷基)時，R1 為C2-3 烷基。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物為式I化合物：
    Figure 03_image006
    (I) 其中，每次出現時獨立地， X1 為C2-3 伸烷基， X2 係選自O、NH、NMe及一鍵， X3 為C2-4 伸烷基， X4 為C1 伸烷基或一鍵， X5 為C1 伸烷基或一鍵， R1 為C1-2 烷基， R2 為C1-2 烷基，或 R2 連同氮原子及R1 或X3 之碳原子一起形成5員或6員環， Y1 係選自-CH=CH-、-(C=O)O-及-O(C=O)-， R3 係選自H、C5-7 環烷基及C3-18 烷基， R4 為C4-7 烷基， 或其鹽， 限制條件為當R2 為Me，R3 為直鏈C12 烷基，X1 為C2 伸烷基，X2 為O，X3 為C3 伸烷基，X4 為一鍵，X5 為C1 伸烷基，Y1 為順式-CH=CH-，且R4 為C5 烷基時，R1 為C2 烷基。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之化合物，其中該化合物為對映異構體富集或非對映異構體富集的。
  4. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中X1 為C2 伸烷基。
  5. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中X1 為C1 伸烷基。
  6. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之化合物，其中X1 為直鏈C3 伸烷基。
  7. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之化合物，其中X1 為支鏈C3 伸烷基。
  8. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中X2 為NH。
  9. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之化合物，其中X2 為O。
  10. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之化合物，其中X2 為NMe。
  11. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之化合物，其中X2 為一鍵。
  12. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中X3 為C2-3 伸烷基。
  13. 如申請專利範圍第1項至第11項中任一項之化合物，其中X3 為C3-4 伸烷基。
  14. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中R2 及X3 之碳原子一起形成4員環。
  15. 如申請專利範圍第1項至第13項中任一項之化合物，其中R2 及X3 之碳原子一起形成5員環。
  16. 如申請專利範圍第1項至第13項中任一項之化合物，其中R2 及X3 之碳原子一起形成6員環。
  17. 如申請專利範圍第1項至第15項中任一項之化合物，其中R2 為C1 烷基。
  18. 如申請專利範圍第1項至第16項中任一項之化合物，其中R2 為C2 烷基。
  19. 如申請專利範圍第1項至第13項中任一項之化合物，其中R1 及R2 一起形成4員環。
  20. 如申請專利範圍第1項至第13項中任一項之化合物，其中R1 及R2 一起形成5員環。
  21. 如申請專利範圍第1項至第13項中任一項之化合物，其中R1 及R2 一起形成6員環。
  22. 如申請專利範圍第1項至第18項中任一項之化合物，其中R1 為C1 烷基。
  23. 如申請專利範圍第1項至第18項中任一項之化合物，其中R1 為C2 烷基。
  24. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中R3 為直鏈C8-16 烷基。
  25. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中R3 為直鏈C7-12 烷基。
  26. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中R3 為直鏈C7-9 烷基。
  27. 如申請專利範圍第1項至第23項中任一項之化合物，其中R3 為直鏈C3-6 烷基。
  28. 如申請專利範圍第1項至第23項中任一項之化合物，其中R3 為支鏈C6-10 烷基。
  29. 如申請專利範圍第1項至第23項中任一項之化合物，其中R3 為C5-7 環烷基。
  30. 如申請專利範圍第29項之化合物，其中R3 為C6 環烷基。
  31. 如申請專利範圍第1項至第23項中任一項之化合物，其中R3 為C8-10 烯基。
  32. 如申請專利範圍第1項至第23項中任一項之化合物，其中R3 為H。
  33. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中R4 為直鏈C5-6 烷基。
  34. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中X4 為一鍵。
  35. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中X5 為C1 伸烷基。
  36. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中該化合物為式(IA)化合物；且Y2 -R4 為-CH2 -CH=CH-R4 。
  37. 如申請專利範圍第1項至第35項中任一項之化合物，其中該化合物為式(IA)化合物；且Y2 為直鏈C3 伸烷基。
  38. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中Y1 係選自一鍵、-CH=CH-及-O(C=O)-。
  39. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中Y1 係選自-CH=CH-及-O(C=O)-。
  40. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物為式II化合物：
    Figure 03_image008
    (II)。
  41. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物為式III化合物；
    Figure 03_image010
    (III)。
  42. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自：
    Figure 03_image012
    、
    Figure 03_image014
    、
    Figure 03_image016
    、
    Figure 03_image018
    、
    Figure 03_image020
    、
    Figure 03_image022
    、
    Figure 03_image024
    、
    Figure 03_image026
    、
    Figure 03_image028
    、
    Figure 03_image030
    、
    Figure 03_image032
    、
    Figure 03_image034
    、
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image038
    、
    Figure 03_image040
    、
    Figure 03_image042
    、
    Figure 03_image044
    、
    Figure 03_image046
    、
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    、
    Figure 03_image050
    、
    Figure 03_image052
    、
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    、
    Figure 03_image056
    、
    Figure 03_image058
    、
    Figure 03_image060
    、
    Figure 03_image062
    、
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    、
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    、
    Figure 03_image068
    、
    Figure 03_image070
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    、
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    、
    Figure 03_image080
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    、
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    、
    Figure 03_image104
    、
    Figure 03_image106
    、
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    、
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    、
    Figure 03_image112
    、
    Figure 03_image114
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    、
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    、
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    、
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    、
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    Figure 03_image134
    、
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    、
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    、
    Figure 03_image140
    、
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    、
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    、
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    、
    Figure 03_image148
    、
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    、
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    、
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    、
    Figure 03_image156
    、
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    、
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    、
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    、
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    、
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    、
    Figure 03_image168
    、
    Figure 03_image170
    、
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    、
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    、
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    、
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    Figure 03_image190
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    Figure 03_image208
    、
    Figure 03_image210
    、
    Figure 03_image212
    、
    Figure 03_image214
    、
    Figure 03_image216
    、
    Figure 03_image218
    、          
    Figure 03_image220
    、
    Figure 03_image222
    、
    Figure 03_image224
    、
    Figure 03_image226
    及
    Figure 03_image228
    或其鹽。
  43. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自：
    Figure 03_image034
    、
    Figure 03_image090
    及
    Figure 03_image092
    或其鹽。
  44. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自
    Figure 03_image022
    、
    Figure 03_image048
    、
    Figure 03_image086
    、
    Figure 03_image076
    、
    Figure 03_image152
    、
    Figure 03_image088
    、
    Figure 03_image144
    、
    Figure 03_image092
    、
    Figure 03_image094
    及
    Figure 03_image090
    或其鹽。
  45. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自
    Figure 03_image026
    、
    Figure 03_image050
    、
    Figure 03_image136
    、
    Figure 03_image078
    、
    Figure 03_image154
    、
    Figure 03_image096
    、
    Figure 03_image146
    及
    Figure 03_image140
    或其鹽。
  46. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自
    Figure 03_image016
    、
    Figure 03_image046
    、
    Figure 03_image138
    、
    Figure 03_image080
    、
    Figure 03_image156
    、
    Figure 03_image098
    、
    Figure 03_image148
    及
    Figure 03_image142
    或其鹽。
  47. 如申請專利範圍第1項至第46項中任一項之化合物，其中該鹽係醫藥學上可接受之鹽。
  48. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中該化合物之質子化形式的pKa為約5.1至約8.0。
  49. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中該化合物之該質子化形式的pKa為約5.6至約7.2。
  50. 如前述申請專利範圍中任一項之化合物，其中該化合物之pKa為約5.7至約6.5。
  51. 一種組合物，該組合物包含在脂質組分中之如前述申請專利範圍中任一項之化合物。
  52. 如申請專利範圍第51項之組合物，其中該脂質組合物包括約50重量%之如申請專利範圍第1項至第50項中任一項之化合物。
  53. 如申請專利範圍第51項或第52項之組合物，其中該組合物係LNP組合物。
  54. 如申請專利範圍第51項至第53項中任一項之組合物，其中該脂質組分包含輔助脂質及PEG脂質。
  55. 如申請專利範圍第51項至第54項中任一項之組合物，其中該脂質組分包含輔助脂質、PEG脂質及中性脂質。
  56. 如申請專利範圍第51項至第55項中任一項之組合物，該組合物還包含低溫保護劑。
  57. 如申請專利範圍第51項至第56項中任一項之組合物，該組合物還包含緩衝液。
  58. 如申請專利範圍第51項至第57項中任一項之組合物，其中該組合物還包含包括生物活性劑之水性組分。
  59. 如申請專利範圍第58項之組合物，其中該生物活性劑包含多肽。
  60. 如申請專利範圍第58項之組合物，其中該生物活性劑包含核酸。
  61. 如申請專利範圍第60項之組合物，其中該核酸包含RNA。
  62. 如申請專利範圍第60項或第61項之組合物，其中該組合物之N/P比率為約3-10。
  63. 如申請專利範圍第62項之組合物，其中該N/P比率為約6 ± 1。
  64. 如申請專利範圍第62項之組合物，其中該N/P比率為約6 ± 0.5。
  65. 如申請專利範圍第62項之組合物，其中該N/P比率為約6。
  66. 如申請專利範圍第51項至第65項中任一項之組合物，該組合物包含RNA組分，其中該RNA組分包含mRNA。
  67. 如申請專利範圍第66項之組合物，其中該RNA組分包含編碼RNA導向之DNA結合劑之序列，諸如Cas核酸酶mRNA。
  68. 如申請專利範圍第66項或第67項之組合物，其中該RNA組分包含2類Cas核酸酶mRNA。
  69. 如申請專利範圍第66項至第68項中任一項之組合物，其中該RNA組分包含Cas9核酸酶mRNA。
  70. 如申請專利範圍第66項至第69項中任一項之組合物，其中該RNA組分包含經修飾之RNA。
  71. 如申請專利範圍第66項至第70項中任一項之組合物，其中該RNA組分包含gRNA核酸。
  72. 如申請專利範圍第71項之組合物，其中該gRNA核酸係gRNA。
  73. 如申請專利範圍第66項至第72項中任一項之組合物，其中該RNA組分包含2類Cas核酸酶mRNA及gRNA。
  74. 如申請專利範圍第71項至第73項中任一項之組合物，其中該gRNA核酸係或編碼雙重嚮導RNA (dgRNA)。
  75. 如申請專利範圍第71項至第73項中任一項之組合物，其中該gRNA核酸係或編碼單一嚮導RNA (sgRNA)。
  76. 如申請專利範圍第71項至第75項中任一項之組合物，其中該gRNA係經修飾之gRNA。
  77. 如申請專利範圍第76項之組合物，其中該經修飾之gRNA包含在5’端之前五個核苷酸中之一或多者處的修飾。
  78. 如申請專利範圍第76項或第77項之組合物，其中該經修飾之gRNA包含在3’端之後五個核苷酸中之一或多者處的修飾。
  79. 如申請專利範圍第58項至第78項中任一項之組合物，該組合物還包含至少一種模板核酸。
  80. 一種基因編輯之方法，該方法包括使細胞與如申請專利範圍第51項至第79項中任一項之組合物接觸。
  81. 一種使DNA裂解之方法，該方法包括使細胞與如申請專利範圍第51項至第80項中任一項之組合物接觸。
  82. 如申請專利範圍第81項之方法，其中該接觸步驟產生單股DNA缺口。
  83. 如申請專利範圍第81項之方法，其中該接觸步驟產生雙股DNA斷裂。
  84. 如申請專利範圍第81項之方法，其中該組合物包含2類Cas mRNA及gRNA核酸。
  85. 如申請專利範圍第80項或第84項之方法，該方法還包括將至少一種模板核酸引入該細胞中。
  86. 如申請專利範圍第85項之方法，該方法包括使該細胞與包含模板核酸之組合物接觸。
  87. 如申請專利範圍第80項至第86項中任一項之方法，其中該方法包括向動物投與該組合物。
  88. 如申請專利範圍第80項至第86項中任一項之方法，其中該方法包括向人類投與該組合物。
  89. 如申請專利範圍第80項至第86項中任一項之方法，其中該方法包括向細胞投與該組合物。
  90. 如申請專利範圍第89項之方法，其中該細胞係真核細胞。
  91. 如申請專利範圍第80項之方法，其中該方法包括投與調配於第一LNP組合物及第二LNP組合物中之mRNA，該第一LNP組合物及該第二LNP組合物包含mRNA、gRNA、gRNA核酸及模板核酸中之一或多者。
  92. 如申請專利範圍第91項之方法，其中該第一LNP組合物及該第二LNP組合物係同時投與。
  93. 如申請專利範圍第91項之方法，其中該第一LNP組合物及該第二LNP組合物係依序投與。
  94. 如申請專利範圍第91項之方法，其中該方法包括投與調配於單一LNP組合物中之該mRNA及該gRNA核酸。
  95. 如申請專利範圍第80項至第94項中任一項之方法，其中該基因編輯引起基因剔除。
  96. 如申請專利範圍第80項至第94項中任一項之方法，其中該基因編輯引起基因修正。
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