EA046244B1 - Модифицированные аминовые липиды - Google Patents
Модифицированные аминовые липиды Download PDFInfo
- Publication number
- EA046244B1 EA046244B1 EA202191559 EA046244B1 EA 046244 B1 EA046244 B1 EA 046244B1 EA 202191559 EA202191559 EA 202191559 EA 046244 B1 EA046244 B1 EA 046244B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- compound
- oxy
- formula
- lipid
- nmr
- Prior art date
Links
- -1 AMINE LIPIDS Chemical class 0.000 title description 171
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 405
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 371
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 212
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 112
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 111
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 claims description 81
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 73
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 71
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 71
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 65
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 65
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 63
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 62
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 60
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 53
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 claims description 30
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 27
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 27
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 24
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 23
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 23
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 14
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 11
- 125000006705 (C5-C7) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002743 phosphorus functional group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 574
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 199
- 238000000034 method Methods 0.000 description 195
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 182
- OYHQOLUKZRVURQ-UHFFFAOYSA-M octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC([O-])=O OYHQOLUKZRVURQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 138
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 132
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 113
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 112
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 104
- 239000000047 product Substances 0.000 description 99
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 98
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 96
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 90
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 67
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 63
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 62
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 62
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 62
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 54
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 47
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 47
- 102000009190 Transthyretin Human genes 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 44
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 44
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 39
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 38
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 38
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 37
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 37
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 33
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 33
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 33
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 31
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 30
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 27
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 125000003258 trimethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 23
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 22
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 21
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 21
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 20
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 18
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-L azelaate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCCCCC([O-])=O BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 17
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 16
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 230000008859 change Effects 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 14
- WRXNJTBODVGDRY-UHFFFAOYSA-N 2-pyrrolidin-1-ylethanamine Chemical compound NCCN1CCCC1 WRXNJTBODVGDRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000010453 CRISPR/Cas method Methods 0.000 description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 13
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 13
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 12
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 239000002585 base Substances 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- JUFKJRCMBLLXNH-UHFFFAOYSA-N (1-methylpyrrolidin-2-yl)methanamine Chemical compound CN1CCCC1CN JUFKJRCMBLLXNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- ZMJQROKRSPSLFH-UHFFFAOYSA-N 3-pyrrolidin-1-ylpropan-1-ol Chemical compound OCCCN1CCCC1 ZMJQROKRSPSLFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 108091027544 Subgenomic mRNA Proteins 0.000 description 10
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 10
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 10
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 9
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 9
- MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M (3r,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-5-[methyl-[(1r)-1-phenylethyl]carbamoyl]-4-propan-2-ylpyrazol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound C1([C@@H](C)N(C)C(=O)C2=NN(C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C2C(C)C)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M 0.000 description 8
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 7
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 7
- 229940125844 compound 46 Drugs 0.000 description 7
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 7
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 7
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 7
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 7
- YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N (4R)-5-[(6-bromo-3-methyl-2-pyrrolidin-1-ylquinoline-4-carbonyl)amino]-4-(2-chlorophenyl)pentanoic acid Chemical compound CC1=C(C2=C(C=CC(=C2)Br)N=C1N3CCCC3)C(=O)NC[C@H](CCC(=O)O)C4=CC=CC=C4Cl YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 6
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 6
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 6
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N nonanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCC(O)=O BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 6
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 5
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 5
- 230000007018 DNA scission Effects 0.000 description 5
- 101100154776 Mus musculus Ttr gene Proteins 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 5
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 229940125851 compound 27 Drugs 0.000 description 5
- 229940125807 compound 37 Drugs 0.000 description 5
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 5
- 229940126179 compound 72 Drugs 0.000 description 5
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 5
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 5
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 4
- IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N (2r)-n-[(2s,3r)-4-[[(4s)-6-(2,2-dimethylpropyl)spiro[3,4-dihydropyrano[2,3-b]pyridine-2,1'-cyclobutane]-4-yl]amino]-3-hydroxy-1-[3-(1,3-thiazol-2-yl)phenyl]butan-2-yl]-2-methoxypropanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](C)OC)[C@H](O)CN[C@@H]1C2=CC(CC(C)(C)C)=CN=C2OC2(CCC2)C1)C(C=1)=CC=CC=1C1=NC=CS1 IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N 0.000 description 4
- VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4,4-dimethylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(C)=O VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N 0.000 description 4
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 4
- KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[3-(n-methylanilino)propyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCCN(C)C1=CC=CC=C1 KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QXOGPTXQGKQSJT-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4-[4-(3,4-dimethylphenyl)sulfanylanilino]-9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid Chemical compound Cc1ccc(Sc2ccc(Nc3cc(c(N)c4C(=O)c5ccccc5C(=O)c34)S(O)(=O)=O)cc2)cc1C QXOGPTXQGKQSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 2,6-difluoro-3-[(3-fluorophenyl)sulfonylamino]-n-(3-methoxy-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridin-5-yl)benzamide Chemical compound C1=C2C(OC)=NNC2=NC=C1NC(=O)C(C=1F)=C(F)C=CC=1NS(=O)(=O)C1=CC=CC(F)=C1 WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopyrimidin-4-yl)-4-(2-chloro-4-methoxyphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide Chemical compound ClC1=CC(OC)=CC=C1C1=C(C(N)=O)SC(C=2N=C(N)N=CC=2)=N1 VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QEBYEVQKHRUYPE-UHFFFAOYSA-N 2-(2-chlorophenyl)-5-[(1-methylpyrazol-3-yl)methyl]-4-[[methyl(pyridin-3-ylmethyl)amino]methyl]-1h-pyrazolo[4,3-c]pyridine-3,6-dione Chemical compound C1=CN(C)N=C1CN1C(=O)C=C2NN(C=3C(=CC=CC=3)Cl)C(=O)C2=C1CN(C)CC1=CC=CN=C1 QEBYEVQKHRUYPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynyl-1H-purine-6,8-dione Chemical compound NC=1NC(C=2N(C(N(C=2N=1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C)=O TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 0.000 description 4
- NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumylethyl 2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PYSGFFTXMUWEOT-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propan-1-ol Chemical compound CN(C)CCCO PYSGFFTXMUWEOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 4
- VKLKXFOZNHEBSW-UHFFFAOYSA-N 5-[[3-[(4-morpholin-4-ylbenzoyl)amino]phenyl]methoxy]pyridine-3-carboxamide Chemical compound O1CCN(CC1)C1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(COC=3C=NC=C(C(=O)N)C=3)C=CC=2)C=C1 VKLKXFOZNHEBSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 5-chloro-2-[4-[(1r,2s)-2-[2-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)oxyethyl]cyclopropyl]piperidin-1-yl]pyrimidine Chemical compound N1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1OCC[C@H]1[C@@H](C2CCN(CC2)C=2N=CC(Cl)=CN=2)C1 XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 4
- RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-7-[(1s)-1-(7h-purin-6-ylamino)ethyl]-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one Chemical compound C=1([C@@H](NC=2C=3N=CNC=3N=CN=2)C)N=C2SC=C(C)N2C(=O)C=1C1=CC=CC(F)=C1 RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 0.000 description 4
- XASOHFCUIQARJT-UHFFFAOYSA-N 8-methoxy-6-[7-(2-morpholin-4-ylethoxy)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl]-2-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,4-dihydroisoquinolin-1-one Chemical compound C(N1C(=O)C2=C(OC)C=C(C=3N4C(=NC=3)C=C(C=C4)OCCN3CCOCC3)C=C2CC1)C(F)(F)F XASOHFCUIQARJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N 0.000 description 4
- PKMUHQIDVVOXHQ-HXUWFJFHSA-N C[C@H](C1=CC(C2=CC=C(CNC3CCCC3)S2)=CC=C1)NC(C1=C(C)C=CC(NC2CNC2)=C1)=O Chemical compound C[C@H](C1=CC(C2=CC=C(CNC3CCCC3)S2)=CC=C1)NC(C1=C(C)C=CC(NC2CNC2)=C1)=O PKMUHQIDVVOXHQ-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 4
- 229940126639 Compound 33 Drugs 0.000 description 4
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 4
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 4
- QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O Chemical compound N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 4
- SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N [(2R)-1-[[4-[(3-phenylmethoxyphenoxy)methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OC=1C=C(OCC2=CC=C(CN3[C@H](CCC3)CO)C=C2)C=CC=1 SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N 0.000 description 4
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 4
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 4
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 4
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 4
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 4
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 4
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 4
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 4
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 4
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 4
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 4
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 4
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 4
- 229940125878 compound 36 Drugs 0.000 description 4
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 4
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 4
- 229940125936 compound 42 Drugs 0.000 description 4
- 229940127271 compound 49 Drugs 0.000 description 4
- 229940125900 compound 59 Drugs 0.000 description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-[8-[[4-methyl-5-[(3-methyl-4-oxophthalazin-1-yl)methyl]-1,2,4-triazol-3-yl]sulfanyl]octanoylamino]benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(NC(=O)CCCCCCCSC2=NN=C(CC3=NN(C)C(=O)C4=CC=CC=C34)N2C)=CC=C1 GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IPBFYZQJXZJBFQ-UHFFFAOYSA-N gamma-octalactone Chemical compound CCCCC1CCC(=O)O1 IPBFYZQJXZJBFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 4
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 4
- YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloropyrimidin-4-yl)-2,5-dimethyl-1-phenylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC=1N(C=2C=CC=CC=2)C(C)=NC=1C(=O)NC1=CC=NC(Cl)=N1 YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IFYYFLINQYPWGJ-UHFFFAOYSA-N n-hexyl-gamma-butyrolactone Natural products CCCCCCC1CCC(=O)O1 IFYYFLINQYPWGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 3
- UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N (1R,9R,10S,11R,12R,15S,18S,21R)-10,11,21-trihydroxy-8,8-dimethyl-14-methylidene-4-(prop-2-enylamino)-20-oxa-5-thia-3-azahexacyclo[9.7.2.112,15.01,9.02,6.012,18]henicosa-2(6),3-dien-13-one Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12C(N=C(NCC=C)S4)=C4CC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@]3(O)OC2 UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N 0.000 description 3
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 3
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 3
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 3
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 3
- GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-amino-n-[3-(difluoromethoxy)-4-(1,3-oxazol-5-yl)phenyl]-4-methylpentanamide Chemical compound FC(F)OC1=CC(NC(=O)[C@H](N)CC(C)C)=CC=C1C1=CN=CO1 GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 3
- ITOFPJRDSCGOSA-KZLRUDJFSA-N (2s)-2-[[(4r)-4-[(3r,5r,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-3-hydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H](CC[C@]13C)[C@@H]2[C@@H]3CC[C@@H]1[C@H](C)CCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 ITOFPJRDSCGOSA-KZLRUDJFSA-N 0.000 description 3
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 3
- STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N (2s)-n-[(3s,4s)-5-acetyl-7-cyano-4-methyl-1-[(2-methylnaphthalen-1-yl)methyl]-2-oxo-3,4-dihydro-1,5-benzodiazepin-3-yl]-2-(methylamino)propanamide Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC)[C@H](C)N(C(C)=O)C2=CC(C#N)=CC=C2N1CC1=C(C)C=CC2=CC=CC=C12 STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N 0.000 description 3
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 3
- FNHHVPPSBFQMEL-KQHDFZBMSA-N (3S)-5-N-[(1S,5R)-3-hydroxy-6-bicyclo[3.1.0]hexanyl]-7-N,3-dimethyl-3-phenyl-2H-1-benzofuran-5,7-dicarboxamide Chemical compound CNC(=O)c1cc(cc2c1OC[C@@]2(C)c1ccccc1)C(=O)NC1[C@H]2CC(O)C[C@@H]12 FNHHVPPSBFQMEL-KQHDFZBMSA-N 0.000 description 3
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 3
- UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N (3ar,5s,6s,7r,7ar)-5-(difluoromethyl)-2-(ethylamino)-5,6,7,7a-tetrahydro-3ah-pyrano[3,2-d][1,3]thiazole-6,7-diol Chemical compound S1C(NCC)=N[C@H]2[C@@H]1O[C@H](C(F)F)[C@@H](O)[C@@H]2O UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N 0.000 description 3
- OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N (3r)-7-[(1s,2s,4ar,6s,8s)-2,6-dimethyl-8-[(2s)-2-methylbutanoyl]oxy-1,2,4a,5,6,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl]-3-hydroxy-5-oxoheptanoic acid Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CCC(=O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H](C)C[C@@H]21 OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N 0.000 description 3
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 3
- STPKWKPURVSAJF-LJEWAXOPSA-N (4r,5r)-5-[4-[[4-(1-aza-4-azoniabicyclo[2.2.2]octan-4-ylmethyl)phenyl]methoxy]phenyl]-3,3-dibutyl-7-(dimethylamino)-1,1-dioxo-4,5-dihydro-2h-1$l^{6}-benzothiepin-4-ol Chemical compound O[C@H]1C(CCCC)(CCCC)CS(=O)(=O)C2=CC=C(N(C)C)C=C2[C@H]1C(C=C1)=CC=C1OCC(C=C1)=CC=C1C[N+]1(CC2)CCN2CC1 STPKWKPURVSAJF-LJEWAXOPSA-N 0.000 description 3
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 3
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 3
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 3
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 3
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 3
- BAUWRHPMUVYFOD-UHFFFAOYSA-N 1-methylpiperidin-4-ol Chemical compound CN1CCC(O)CC1 BAUWRHPMUVYFOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NNWAARLSYSBVPB-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-4,5-dicarboxamide Chemical compound NC(=O)C=1N=CNC=1C(N)=O NNWAARLSYSBVPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)-n-[2-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]quinolin-5-yl]acetamide Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13CC(=O)NC1=CC=CC2=NC(NCCNCCO)=CC=C21 FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(2-cyclopropylethoxy)-9-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-1h-phenanthro[9,10-d]imidazol-2-yl]-5-fluorobenzene-1,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=C2C3=CC(CC(C)(O)C)=CC=C3C=3NC(C=4C(=CC(F)=CC=4C#N)C#N)=NC=3C2=CC=C1OCCC1CC1 PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;[(2s,3r)-4-(dimethylamino)-3-methyl-1,2-diphenylbutan-2-yl] propanoate;1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C.C([C@](OC(=O)CC)([C@H](C)CN(C)C)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 0.000 description 3
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 3
- DFRAKBCRUYUFNT-UHFFFAOYSA-N 3,8-dicyclohexyl-2,4,7,9-tetrahydro-[1,3]oxazino[5,6-h][1,3]benzoxazine Chemical compound C1CCCCC1N1CC(C=CC2=C3OCN(C2)C2CCCCC2)=C3OC1 DFRAKBCRUYUFNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 3
- WFOVEDJTASPCIR-UHFFFAOYSA-N 3-[(4-methyl-5-pyridin-4-yl-1,2,4-triazol-3-yl)methylamino]-n-[[2-(trifluoromethyl)phenyl]methyl]benzamide Chemical compound N=1N=C(C=2C=CN=CC=2)N(C)C=1CNC(C=1)=CC=CC=1C(=O)NCC1=CC=CC=C1C(F)(F)F WFOVEDJTASPCIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MPMKMQHJHDHPBE-RUZDIDTESA-N 4-[[(2r)-1-(1-benzothiophene-3-carbonyl)-2-methylazetidine-2-carbonyl]-[(3-chlorophenyl)methyl]amino]butanoic acid Chemical compound O=C([C@@]1(N(CC1)C(=O)C=1C2=CC=CC=C2SC=1)C)N(CCCC(O)=O)CC1=CC=CC(Cl)=C1 MPMKMQHJHDHPBE-RUZDIDTESA-N 0.000 description 3
- DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-n-[4-(3-ethynylanilino)-7-methoxyquinazolin-6-yl]piperazine-1-carboxamide Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(=O)NC(C(=CC1=NC=N2)OC)=CC1=C2NC1=CC=CC(C#C)=C1 DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GDUANFXPOZTYKS-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-8-[(2,6-difluoro-4-methoxybenzoyl)amino]-4-oxochromene-2-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(OC)=CC(F)=C1C(=O)NC1=CC(Br)=CC2=C1OC(C(O)=O)=CC2=O GDUANFXPOZTYKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHNRLQRZRNKOKU-UHFFFAOYSA-N CCN(CC1=NC2=C(N1)C1=CC=C(C=C1N=C2N)C1=NNC=C1)C(C)=O Chemical compound CCN(CC1=NC2=C(N1)C1=CC=C(C=C1N=C2N)C1=NNC=C1)C(C)=O UHNRLQRZRNKOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BQXUPNKLZNSUMC-YUQWMIPFSA-N CCN(CCCCCOCC(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)c1ccc(cc1)-c1scnc1C)C(C)(C)C)CCOc1ccc(cc1)C(=O)c1c(sc2cc(O)ccc12)-c1ccc(O)cc1 Chemical compound CCN(CCCCCOCC(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)c1ccc(cc1)-c1scnc1C)C(C)(C)C)CCOc1ccc(cc1)C(=O)c1c(sc2cc(O)ccc12)-c1ccc(O)cc1 BQXUPNKLZNSUMC-YUQWMIPFSA-N 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OUSFTKFNBAZUKL-UHFFFAOYSA-N N-(5-{[(5-tert-butyl-1,3-oxazol-2-yl)methyl]sulfanyl}-1,3-thiazol-2-yl)piperidine-4-carboxamide Chemical compound O1C(C(C)(C)C)=CN=C1CSC(S1)=CN=C1NC(=O)C1CCNCC1 OUSFTKFNBAZUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZALYCGKBKHHGAF-UHFFFAOYSA-N N-Ethyl-N-methyl-1,2-ethanediamine Chemical compound CCN(C)CCN ZALYCGKBKHHGAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AVYVHIKSFXVDBG-UHFFFAOYSA-N N-benzyl-N-hydroxy-2,2-dimethylbutanamide Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)N(C(C(CC)(C)C)=O)O AVYVHIKSFXVDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N Sitafloxacin Chemical compound C([C@H]1N)N(C=2C(=C3C(C(C(C(O)=O)=CN3[C@H]3[C@H](C3)F)=O)=CC=2F)Cl)CC11CC1 PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N 0.000 description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 3
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 3
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 3
- PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-10,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-6-(2-pyridin-2-ylethylcarbamoyloxy)-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@](C)(CC(=O)[C@]2(O)[C@@]2(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]21)C=C)C)OC(=O)C)C(=O)NCCC1=CC=CC=N1 PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 125000004450 alkenylene group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002255 azelaic acid Drugs 0.000 description 3
- JHVLLYQQQYIWKX-UHFFFAOYSA-N benzyl 2-bromoacetate Chemical compound BrCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 JHVLLYQQQYIWKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 3
- WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N cholesteryl hemisuccinate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)CCC(O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- BJXYHBKEQFQVES-NWDGAFQWSA-N enpatoran Chemical compound N[C@H]1CN(C[C@H](C1)C(F)(F)F)C1=C2C=CC=NC2=C(C=C1)C#N BJXYHBKEQFQVES-NWDGAFQWSA-N 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- IXZFDJXHLQQSGQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-chloro-4-oxobutanoate Chemical compound CCOC(=O)CCC(Cl)=O IXZFDJXHLQQSGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N lnp023 Chemical compound C1([C@H]2N(CC=3C=4C=CNC=4C(C)=CC=3OC)CC[C@@H](C2)OCC)=CC=C(C(O)=O)C=C1 RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N n',n'-dimethylethane-1,2-diamine Chemical compound CN(C)CCN DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MXJYVLYENVWKQX-UHFFFAOYSA-N n'-ethyl-n-methylethane-1,2-diamine Chemical compound CCNCCNC MXJYVLYENVWKQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YGBMCLDVRUGXOV-UHFFFAOYSA-N n-[6-[6-chloro-5-[(4-fluorophenyl)sulfonylamino]pyridin-3-yl]-1,3-benzothiazol-2-yl]acetamide Chemical compound C1=C2SC(NC(=O)C)=NC2=CC=C1C(C=1)=CN=C(Cl)C=1NS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 YGBMCLDVRUGXOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 3
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 3
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 3
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-8-[(4-phenylphenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC=CC=2)C=CC=1CNC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N 0.000 description 2
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 2
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 description 2
- LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QBYSPFYUVWFCBF-UHFFFAOYSA-N 1,4-dimethylpiperidin-1-ium-4-carboxylate Chemical compound CN1CCC(C)(C(O)=O)CC1 QBYSPFYUVWFCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- RFVFQQWKPSOBED-PSXMRANNSA-N 1-myristoyl-2-palmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCC RFVFQQWKPSOBED-PSXMRANNSA-N 0.000 description 2
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 2
- RIHYLJLIMZMKTQ-UHFFFAOYSA-N 2-(azetidin-1-yl)ethanamine Chemical compound NCCN1CCC1 RIHYLJLIMZMKTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CJNRGSHEMCMUOE-UHFFFAOYSA-N 2-piperidin-1-ylethanamine Chemical compound NCCN1CCCCC1 CJNRGSHEMCMUOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 2
- PRDIIROHTWNJDB-UHFFFAOYSA-N 3-caproyl propionic acid Chemical compound CCCCCC(=O)CCC(O)=O PRDIIROHTWNJDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEJRWHAVMIAJKC-UHFFFAOYSA-N 4-Butyrolactone Chemical compound O=C1CCCO1 YEJRWHAVMIAJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SPUWOYCLMKSXKU-UHFFFAOYSA-N 4-oxo capric acid Chemical compound CCCCCCC(=O)CCC(O)=O SPUWOYCLMKSXKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBGNINPPDHJETF-UHFFFAOYSA-N 5-heptadecylresorcinol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC1=CC(O)=CC(O)=C1 BBGNINPPDHJETF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGOZCCWRZMKYRV-UHFFFAOYSA-N 9-oxo-9-undecan-3-yloxynonanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(CC)OC(=O)CCCCCCCC(=O)O NGOZCCWRZMKYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 101100096578 Arabidopsis thaliana SQD2 gene Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 2
- 125000006539 C12 alkyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000034628 Celiac artery compression syndrome Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 2
- 108091093094 Glycol nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 2
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSDRAZIPGVLSNP-UHFFFAOYSA-N O.P(=O)(O)(O)O.O.O.P(=O)(O)(O)O Chemical group O.P(=O)(O)(O)O.O.O.P(=O)(O)(O)O WSDRAZIPGVLSNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 2
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108091046915 Threose nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 108091028113 Trans-activating crRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBUYHLRHYXFFBC-UHFFFAOYSA-M [Br-].CC(C)CCCC[Mg+] Chemical compound [Br-].CC(C)CCCC[Mg+] OBUYHLRHYXFFBC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZDUZWGUHIRQPGP-UHFFFAOYSA-M [Br-].CCCCCCCC[Mg+] Chemical compound [Br-].CCCCCCCC[Mg+] ZDUZWGUHIRQPGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- VMURPYSNBJUYCK-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-(4-nitrophenoxy)carbonyloxydodecanoate Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(OC(=O)OC(CCC(=O)OCC2=CC=CC=C2)CCCCCCCC)C=C1 VMURPYSNBJUYCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDKWCJOYDZTKPJ-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-hydroxydodecanoate Chemical compound OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC CDKWCJOYDZTKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- 125000003074 decanoyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 150000001985 dialkylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 229940120503 dihydroxyacetone Drugs 0.000 description 2
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 2
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000034431 double-strand break repair via homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- WDAXFOBOLVPGLV-UHFFFAOYSA-N ethyl isobutyrate Chemical compound CCOC(=O)C(C)C WDAXFOBOLVPGLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- CWTPEXDGZPTZSH-UHFFFAOYSA-M magnesium;decane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].CCCCCCCCC[CH2-] CWTPEXDGZPTZSH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MBHQEXPGNCWWBP-UHFFFAOYSA-M magnesium;dodecane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].CCCCCCCCCCC[CH2-] MBHQEXPGNCWWBP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GYHFUZHODSMOHU-UHFFFAOYSA-N nonanal Chemical compound CCCCCCCCC=O GYHFUZHODSMOHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- SBOJXQVPLKSXOG-UHFFFAOYSA-N o-amino-hydroxylamine Chemical compound NON SBOJXQVPLKSXOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 2
- HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N pentanal Chemical compound CCCCC=O HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRJJQCWNZGRKAU-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;fluoride Chemical compound F.C1=CC=NC=C1 GRJJQCWNZGRKAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 2
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- WGPCZPLRVAWXPW-UHFFFAOYSA-N xi-Dihydro-5-octyl-2(3H)-furanone Chemical compound CCCCCCCCC1CCC(=O)O1 WGPCZPLRVAWXPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N (+/-)-Camphoric acid Chemical compound CC1(C)C(C(O)=O)CCC1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VCGRFBXVSFAGGA-UHFFFAOYSA-N (1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-[6-[[3-(4-fluorophenyl)-5-methyl-1,2-oxazol-4-yl]methoxy]pyridin-3-yl]methanone Chemical compound CC=1ON=C(C=2C=CC(F)=CC=2)C=1COC(N=C1)=CC=C1C(=O)N1CCS(=O)(=O)CC1 VCGRFBXVSFAGGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEZDNQCXEZDCBI-WJOKGBTCSA-N (2-aminoethoxy)[(2r)-2,3-bis(tetradecanoyloxy)propoxy]phosphinic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC NEZDNQCXEZDCBI-WJOKGBTCSA-N 0.000 description 1
- 125000006590 (C2-C6) alkenylene group Chemical group 0.000 description 1
- IFYYFLINQYPWGJ-SECBINFHSA-N (R)-gamma-Decalactone Chemical compound CCCCCC[C@@H]1CCC(=O)O1 IFYYFLINQYPWGJ-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- NSSALFVIQPAIQK-FPLPWBNLSA-N (Z)-2-Nonen-1-ol Chemical compound CCCCCC\C=C/CO NSSALFVIQPAIQK-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 1
- FVXDQWZBHIXIEJ-LNDKUQBDSA-N 1,2-di-[(9Z,12Z)-octadecadienoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC FVXDQWZBHIXIEJ-LNDKUQBDSA-N 0.000 description 1
- UHUSDOQQWJGJQS-QNGWXLTQSA-N 1,2-dioctadecanoyl-sn-glycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC UHUSDOQQWJGJQS-QNGWXLTQSA-N 0.000 description 1
- LYPGMYIQHDZFFD-MAZCIEHSSA-N 1,3-dilinoleoylglycerol Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC LYPGMYIQHDZFFD-MAZCIEHSSA-N 0.000 description 1
- DRAWQKGUORNASA-CLFAGFIQSA-N 1,3-dioleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC DRAWQKGUORNASA-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- VKKTUDKKYOOLGG-UHFFFAOYSA-N 1-(diethylamino)propan-1-ol Chemical compound CCC(O)N(CC)CC VKKTUDKKYOOLGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDLKWDQMIZRIBY-UHFFFAOYSA-N 1-(dimethylamino)ethanol Chemical compound CC(O)N(C)C MDLKWDQMIZRIBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUZOCIFIGKCISE-UHFFFAOYSA-N 1-(dimethylamino)propan-1-ol Chemical compound CCC(O)N(C)C SUZOCIFIGKCISE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKHPSESDXTWSQB-WRBBJXAJSA-N 1-[3,4-bis[(z)-octadec-9-enoxy]phenyl]-n,n-dimethylmethanamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOC1=CC=C(CN(C)C)C=C1OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC NKHPSESDXTWSQB-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 1
- STRJNQTYHDOBPZ-UHFFFAOYSA-N 1-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-3-hydroxypropan-2-one Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)OCC(=O)CO STRJNQTYHDOBPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGSUDZKDSKCYJP-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-3,7-dimethyloctane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCBr VGSUDZKDSKCYJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAOFMTDKQYEOES-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-5-methylhexane Chemical compound CC(C)CCCCBr XAOFMTDKQYEOES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFYPQDKZLOZOLQ-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-6-methylheptane Chemical compound CC(C)CCCCCBr BFYPQDKZLOZOLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMSJFSOOQERIO-UHFFFAOYSA-N 1-bromodecane Chemical compound CCCCCCCCCCBr MYMSJFSOOQERIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNTGIJLWHDPAFN-UHFFFAOYSA-N 1-bromohexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCBr HNTGIJLWHDPAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNDIARAMWBIKFW-UHFFFAOYSA-N 1-bromohexane Chemical compound CCCCCCBr MNDIARAMWBIKFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHOJTPZHHMJMCW-UHFFFAOYSA-N 1-ethylpiperidin-4-ol Chemical compound CCN1CCC(O)CC1 AHOJTPZHHMJMCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BIWZYRJXBPPLLA-UHFFFAOYSA-N 1-methylazetidin-3-amine Chemical compound CN1CC(N)C1 BIWZYRJXBPPLLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYEACNNYFNZCST-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrrolidine-2,5-dione Chemical compound CN1C(=O)CCC1=O KYEACNNYFNZCST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKIHEDZXVXKBKR-UHFFFAOYSA-N 1-nonanoylcyclopropane-1-carboxylic acid Chemical compound C(CCCCCCCC)(=O)C1(CC1)C(=O)O UKIHEDZXVXKBKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTPUUCIHKVMQIF-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethyl-3-oxononanoic acid Chemical compound CC(C(=O)O)(C(CCCCCC)=O)C UTPUUCIHKVMQIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- FYVMBPXFPFAECB-UHFFFAOYSA-N 2-(1-methylpyrrolidin-2-yl)ethanol Chemical compound CN1CCCC1CCO FYVMBPXFPFAECB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSTPEQSVYGELTA-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)ethanol;hydrobromide Chemical compound [Br-].C[NH+](C)CCO BSTPEQSVYGELTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKJVYOFPTRGCSP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-aminopropyl(2-hydroxyethyl)amino]ethanol Chemical compound NCCCN(CCO)CCO FKJVYOFPTRGCSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGYFLJKHWJVRMC-ZXRZDOCRSA-N 2-[4-[[(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]butoxy]-n,n-dimethyl-3-[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienoxy]propan-1-amine Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OCCCCOC(CN(C)C)COCCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)C1 PGYFLJKHWJVRMC-ZXRZDOCRSA-N 0.000 description 1
- MWBKOGAZOXPSCI-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1-pyrrolidin-1-ylpropan-2-amine Chemical compound CC(C)(N)CN1CCCC1 MWBKOGAZOXPSCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 2-methylbenzenesulfonate Chemical compound CC1=CC=CC=C1S([O-])(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940080296 2-naphthalenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- NYRQRXLYOLIHSX-UHFFFAOYSA-N 3-(2-pyrrolidin-1-ylethylcarbamoyloxy)heptanoic acid Chemical compound N1(CCCC1)CCNC(=O)OC(CC(=O)O)CCCC NYRQRXLYOLIHSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUEPSWDWSHCZHJ-UHFFFAOYSA-N 3-(azetidin-1-yl)propan-1-ol Chemical compound OCCCN1CCC1 FUEPSWDWSHCZHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CIXVSNIDDROFGR-UHFFFAOYSA-N 3-(diethylamino)butanoic acid Chemical compound CCN(CC)C(C)CC(O)=O CIXVSNIDDROFGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKCYFSZDBICRKL-UHFFFAOYSA-N 3-(diethylamino)propan-1-ol Chemical compound CCN(CC)CCCO WKCYFSZDBICRKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKRWLVOSGZDREG-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]undecanoic acid Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CC(=O)O)CCCCCCCC)C CKRWLVOSGZDREG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 3-phenylpropionate Chemical compound [O-]C(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PLRXAFVBCHEMGD-UHFFFAOYSA-N 3-piperidin-1-ylpropan-1-ol Chemical compound OCCCN1CCCCC1 PLRXAFVBCHEMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHYKXDSWXWVQTA-UHFFFAOYSA-N 4-(diethylamino)butan-1-ol Chemical compound CCN(CC)CCCCO KHYKXDSWXWVQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QQAVZEYXLCYOKO-UHFFFAOYSA-N 4-Hydroxycapric acid Chemical compound CCCCCCC(O)CCC(O)=O QQAVZEYXLCYOKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKDQDYFKPVXLTL-UHFFFAOYSA-N 4-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]butanoic acid Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OCCCC(=O)O)C GKDQDYFKPVXLTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMGCPNDSRGJBKB-UHFFFAOYSA-N 4-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]dodecanoic acid Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CCC(=O)O)CCCCCCCC)C XMGCPNDSRGJBKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- KVCQTKNUUQOELD-UHFFFAOYSA-N 4-amino-n-[1-(3-chloro-2-fluoroanilino)-6-methylisoquinolin-5-yl]thieno[3,2-d]pyrimidine-7-carboxamide Chemical compound N=1C=CC2=C(NC(=O)C=3C4=NC=NC(N)=C4SC=3)C(C)=CC=C2C=1NC1=CC=CC(Cl)=C1F KVCQTKNUUQOELD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIWROPDBVWQZOH-UHFFFAOYSA-N 4-cyclohexyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C1CCCCC1 AIWROPDBVWQZOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRNOVONGMRDZEL-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-octanoic acid Chemical compound CCCCC(O)CCC(O)=O ZRNOVONGMRDZEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZNDHCZORMBARB-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxylauric acid Chemical compound CCCCCCCCC(O)CCC(O)=O UZNDHCZORMBARB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJMCWLADNPBBMN-UHFFFAOYSA-N 4-keto lauric acid Chemical compound CCCCCCCCC(=O)CCC(O)=O HJMCWLADNPBBMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUVOKRXNCJSVKU-UHFFFAOYSA-N 4-keto myristic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(=O)CCC(O)=O OUVOKRXNCJSVKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRZROXXGLBIKCO-UHFFFAOYSA-N 4-keto palmitic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(=O)CCC(O)=O DRZROXXGLBIKCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RITBMTJPNSJVHF-UHFFFAOYSA-N 4-keto-n-caprylic acid Chemical compound CCCCC(=O)CCC(O)=O RITBMTJPNSJVHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHQKHPLQDPEOGI-UHFFFAOYSA-N 4-oxoicosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)CCC(O)=O NHQKHPLQDPEOGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- ATVRUKPOPHUPGJ-UHFFFAOYSA-N 5-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]tridecanoic acid Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CCCC(=O)O)CCCCCCCC)C ATVRUKPOPHUPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006043 5-hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- VZTODHONFCJYRL-UHFFFAOYSA-N 5-oxoheptadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(=O)CCCC(O)=O VZTODHONFCJYRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OALYTRUKMRCXNH-UHFFFAOYSA-N 5-pentyloxolan-2-one Chemical compound CCCCCC1CCC(=O)O1 OALYTRUKMRCXNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLMKXKBPTKTVJD-UHFFFAOYSA-N 6-ethyl-4-oxooctanoic acid Chemical compound C(C)C(CC(CCC(=O)O)=O)CC KLMKXKBPTKTVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWDBEAQIHAEVLV-UHFFFAOYSA-N 6-methylheptan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCCCO BWDBEAQIHAEVLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYJRNFFLTBEQSQ-UHFFFAOYSA-N 8-(3-methyl-1-benzothiophen-5-yl)-N-(4-methylsulfonylpyridin-3-yl)quinoxalin-6-amine Chemical compound CS(=O)(=O)C1=C(C=NC=C1)NC=1C=C2N=CC=NC2=C(C=1)C=1C=CC2=C(C(=CS2)C)C=1 CYJRNFFLTBEQSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOANFMLVWJGSMJ-UHFFFAOYSA-N 9-decoxy-9-oxononanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCC(O)=O BOANFMLVWJGSMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEXLHONSNTVICK-UHFFFAOYSA-N 9-methyl-4-oxodecanoic acid Chemical compound CC(CCCCC(CCC(=O)O)=O)C JEXLHONSNTVICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SEWTUVCFELVWLV-UHFFFAOYSA-N 9-oxo-9-undecoxynonanoic acid Chemical compound O=C(CCCCCCCC(=O)O)OCCCCCCCCCCC SEWTUVCFELVWLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229930188104 Alkylresorcinol Natural products 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 241000180579 Arca Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIMSHWDREOONQK-WWFGDGOQSA-N C(=O)(OCC(OC(=O)CCC(OC(=O)NCCN(CC)C)CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC(=O)OCCCCCCCCCCC)CCCCCCC/C=C\C/C=C\CCCCC Chemical compound C(=O)(OCC(OC(=O)CCC(OC(=O)NCCN(CC)C)CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC(=O)OCCCCCCCCCCC)CCCCCCC/C=C\C/C=C\CCCCC NIMSHWDREOONQK-WWFGDGOQSA-N 0.000 description 1
- LVLIWLOSUDSHMO-CLFAGFIQSA-N C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)OCC(COC(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)=O)=O Chemical compound C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)OCC(COC(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)=O)=O LVLIWLOSUDSHMO-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- NXFWPWQIMHSCSH-YEUCEMRASA-N C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)OCC(COC(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)=O)OC(CCC(CCCC)OC(NCCN1CCCC1)=O)=O Chemical compound C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)OCC(COC(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)=O)OC(CCC(CCCC)OC(NCCN1CCCC1)=O)=O NXFWPWQIMHSCSH-YEUCEMRASA-N 0.000 description 1
- GKUVYZCLMWODAW-UHFFFAOYSA-M CC(C)CCCCC[Mg]Br Chemical compound CC(C)CCCCC[Mg]Br GKUVYZCLMWODAW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QONQTFQFFDOZJA-UHFFFAOYSA-N CC(CCC(CCC(=O)O)=O)CCCC(C)C Chemical compound CC(CCC(CCC(=O)O)=O)CCCC(C)C QONQTFQFFDOZJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSGZOHPZBFJKBU-WWFGDGOQSA-N CCCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCC(=O)OCC(COC(=O)CCCCCCC/C=C\C/C=C\CCCCC)OC(=O)CCCC(CCCCCCCC)OC(=O)NCCN(C)CC Chemical compound CCCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCC(=O)OCC(COC(=O)CCCCCCC/C=C\C/C=C\CCCCC)OC(=O)CCCC(CCCCCCCC)OC(=O)NCCN(C)CC LSGZOHPZBFJKBU-WWFGDGOQSA-N 0.000 description 1
- 108091079001 CRISPR RNA Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102220605874 Cytosolic arginine sensor for mTORC1 subunit 2_D10A_mutation Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108700020911 DNA-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- RZZLMGATMUAJPX-UHFFFAOYSA-N Delta-Tridecalactone Chemical compound CCCCCCCCC1CCCC(=O)O1 RZZLMGATMUAJPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000823778 Homo sapiens Y-box-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100437231 Mus musculus B2m gene Proteins 0.000 description 1
- 101000772176 Mus musculus Transthyretin Proteins 0.000 description 1
- AYCPARAPKDAOEN-LJQANCHMSA-N N-[(1S)-2-(dimethylamino)-1-phenylethyl]-6,6-dimethyl-3-[(2-methyl-4-thieno[3,2-d]pyrimidinyl)amino]-1,4-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazole-5-carboxamide Chemical compound C1([C@H](NC(=O)N2C(C=3NN=C(NC=4C=5SC=CC=5N=C(C)N=4)C=3C2)(C)C)CN(C)C)=CC=CC=C1 AYCPARAPKDAOEN-LJQANCHMSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 108010084311 Novozyme 435 Proteins 0.000 description 1
- UCPJUENJTBOBLU-WWFGDGOQSA-N O=C(OCC(OC(=O)CC(OC(=O)NCCN(CC)C)CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC(=O)OCCCCCCCCCCC)CCCCCCC/C=C\C/C=C\CCCCC Chemical compound O=C(OCC(OC(=O)CC(OC(=O)NCCN(CC)C)CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC(=O)OCCCCCCCCCCC)CCCCCCC/C=C\C/C=C\CCCCC UCPJUENJTBOBLU-WWFGDGOQSA-N 0.000 description 1
- TTZMPOZCBFTTPR-UHFFFAOYSA-N O=P1OCO1 Chemical class O=P1OCO1 TTZMPOZCBFTTPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDSZRKBQUIABIV-UHFFFAOYSA-N OC1(CCC(N1C)=O)CCCCCCCC Chemical compound OC1(CCC(N1C)=O)CCCCCCCC DDSZRKBQUIABIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 102000015623 Polynucleotide Adenylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010024055 Polynucleotide adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000009609 Pyrophosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108010009413 Pyrophosphatases Proteins 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 101100208299 Rattus norvegicus Ttr gene Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- FGYYWCMRFGLJOB-MQWKRIRWSA-N [2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl] (2s)-2,6-diaminohexanoate Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)OP(O)(=O)OCC(O)CO FGYYWCMRFGLJOB-MQWKRIRWSA-N 0.000 description 1
- NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N [3-(dimethylamino)-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMAUJZFVTYSJRH-HDXUUTQWSA-N [3-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-2-oxopropyl] (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound C(CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)(=O)OCC(CO[Si](C)(C)C(C)(C)C)=O UMAUJZFVTYSJRH-HDXUUTQWSA-N 0.000 description 1
- CZIGPVDHJSGGIU-UHFFFAOYSA-M [Br-].CC(C)CCCC(C)CC[Mg+] Chemical compound [Br-].CC(C)CCCC(C)CC[Mg+] CZIGPVDHJSGGIU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DJEVYLLEXGHMJF-UHFFFAOYSA-M [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[Mg+] Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[Mg+] DJEVYLLEXGHMJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000010441 alabaster Substances 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical group OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 125000001204 arachidyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODPZNPRTRBKZLS-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-(2-pyrrolidin-1-ylethylcarbamoyloxy)heptanoate Chemical compound N1(CCCC1)CCNC(=O)OC(CC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCC ODPZNPRTRBKZLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGSNJKDXGDRMTE-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-(4-nitrophenoxy)carbonyloxyheptanoate Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(OC(=O)OC(CC(=O)OCC2=CC=CC=C2)CCCC)C=C1 MGSNJKDXGDRMTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJDNCXCFBFTMFF-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-(4-nitrophenoxy)carbonyloxyundecanoate Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(OC(=O)OC(CC(=O)OCC2=CC=CC=C2)CCCCCCCC)C=C1 IJDNCXCFBFTMFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DILMQFSLXOVNAW-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]undecanoate Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC)C DILMQFSLXOVNAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUAYKTNKKZPCCS-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-hydroxyheptanoate Chemical compound CCCCC(O)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 ZUAYKTNKKZPCCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKWJVEQLZKTNRH-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-hydroxyundecanoate Chemical compound OC(CC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC HKWJVEQLZKTNRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STCLFMVAFAICKO-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-(1-methylpiperidin-4-yl)oxycarbonyloxydodecanoate Chemical compound CN1CCC(CC1)OC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC STCLFMVAFAICKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMOYFFKUOVNZAI-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-(2-piperidin-1-ylethylcarbamoyloxy)dodecanoate Chemical compound N1(CCCCC1)CCNC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC LMOYFFKUOVNZAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SAPQOYLPEQIECW-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-(2-pyrrolidin-1-ylethylcarbamoyloxy)octanoate Chemical compound N1(CCCC1)CCNC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCC SAPQOYLPEQIECW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPSGNBNEPSWJLG-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-(4-nitrophenoxy)carbonyloxybutanoate Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(OC(=O)OCCCC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=C1 DPSGNBNEPSWJLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RPPYERPUOSVDQA-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-(4-nitrophenoxy)carbonyloxyoctanoate Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(OC(=O)OC(CCC(=O)OCC2=CC=CC=C2)CCCC)C=C1 RPPYERPUOSVDQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KBRQYQKQHLXENV-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[2-(azetidin-1-yl)ethylcarbamoyloxy]dodecanoate Chemical compound N1(CCC1)CCNC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC KBRQYQKQHLXENV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLHGVOZPRQYQSO-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[2-(diethylamino)ethylcarbamoyloxy]dodecanoate Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC)CC GLHGVOZPRQYQSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZMNGRHLKAVZIO-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[2-(dimethylamino)ethylcarbamoyloxy]dodecanoate Chemical compound CN(CCNC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC)C KZMNGRHLKAVZIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RCRJOIPIHZHJAP-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]butanoate Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OCCCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)C RCRJOIPIHZHJAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YDGKFMOXXQLYDD-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]dodecanoate Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC)C YDGKFMOXXQLYDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUYXJODUIHJXEU-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-[4-(diethylamino)butoxycarbonyloxy]dodecanoate Chemical compound C(C)N(CCCCOC(=O)OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC)CC BUYXJODUIHJXEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CRXCATWWXVJNJF-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-hydroxybutanoate Chemical compound OCCCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 CRXCATWWXVJNJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXKFJHRANLPOTP-UHFFFAOYSA-N benzyl 4-hydroxyoctanoate Chemical compound OC(CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCC BXKFJHRANLPOTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MODQNZDZLJCFAI-UHFFFAOYSA-N benzyl 5-(4-nitrophenoxy)carbonyloxytridecanoate Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(OC(=O)OC(CCCC(=O)OCC2=CC=CC=C2)CCCCCCCC)C=C1 MODQNZDZLJCFAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVODCQUYIMSWEO-UHFFFAOYSA-N benzyl 5-[2-[ethyl(methyl)amino]ethylcarbamoyloxy]tridecanoate Chemical compound C(C)N(CCNC(=O)OC(CCCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC)C TVODCQUYIMSWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IRZBOWURYLCHHI-UHFFFAOYSA-N benzyl 5-hydroxytridecanoate Chemical compound OC(CCCC(=O)OCC1=CC=CC=C1)CCCCCCCC IRZBOWURYLCHHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N beta-phenylpropanoic acid Natural products OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012455 biphasic mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L calcium glucoheptonate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L 0.000 description 1
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N camphorsulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)CC1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001369 canonical nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000004452 carbocyclyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012062 charged aerosol detection Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- BALGDZWGNCXXES-UHFFFAOYSA-N cyclopentane;propanoic acid Chemical compound CCC(O)=O.C1CCCC1 BALGDZWGNCXXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012350 deep sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M didecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KYYUCZOHNYSLFV-UHFFFAOYSA-N diethyl cyclopropane-1,1-dicarboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1(C(=O)OCC)CC1 KYYUCZOHNYSLFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- IUNMPGNGSSIWFP-UHFFFAOYSA-N dimethylaminopropylamine Chemical compound CN(C)CCCN IUNMPGNGSSIWFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JLFDFZCKGCPDQE-UHFFFAOYSA-N ethyl 1-nonanoylcyclopropane-1-carboxylate Chemical compound C(CCCCCCCC)(=O)C1(CC1)C(=O)OCC JLFDFZCKGCPDQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MJYRFNVZWIRHCH-UHFFFAOYSA-N ethyl 2,2-dimethyl-3-oxononanoate Chemical compound CC(C(=O)OCC)(C(CCCCCC)=O)C MJYRFNVZWIRHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQOOIBMTBSXSKR-UHFFFAOYSA-N ethyl 6-ethyl-4-oxooctanoate Chemical compound CCOC(=O)CCC(=O)CC(CC)CC PQOOIBMTBSXSKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISKDGFZMMHHSMB-UHFFFAOYSA-N ethyl 7,11-dimethyl-4-oxododecanoate Chemical compound C(C)OC(CCC(CCC(CCCC(C)C)C)=O)=O ISKDGFZMMHHSMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGAFSZXATJCUBS-UHFFFAOYSA-N ethyl 9-methyl-4-oxodecanoate Chemical compound CC(CCCCC(CCC(=O)OCC)=O)C VGAFSZXATJCUBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001249 flow field-flow fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical compound O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- UCVODTZQZHMTPN-UHFFFAOYSA-N heptanoyl chloride Chemical compound CCCCCCC(Cl)=O UCVODTZQZHMTPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 229940099584 lactobionate Drugs 0.000 description 1
- JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N lactobionic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 125000002463 lignoceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- DLEDOFVPSDKWEF-UHFFFAOYSA-N lithium butane Chemical compound [Li+].CCC[CH2-] DLEDOFVPSDKWEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000017156 mRNA modification Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- XITSKLDQPUOCGD-UHFFFAOYSA-M magnesium;3-methanidylpentane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].CCC([CH2-])CC XITSKLDQPUOCGD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GFTXWCQFWLOXAT-UHFFFAOYSA-M magnesium;cyclohexane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].C1CC[CH-]CC1 GFTXWCQFWLOXAT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IOOQQIVFCFWSIU-UHFFFAOYSA-M magnesium;octane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].CCCCCCC[CH2-] IOOQQIVFCFWSIU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UDGSVBYJWHOHNN-UHFFFAOYSA-N n',n'-diethylethane-1,2-diamine Chemical compound CCN(CC)CCN UDGSVBYJWHOHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOHMWDJIBGVPIF-UHFFFAOYSA-N n',n'-diethylpropane-1,3-diamine Chemical compound CCN(CC)CCCN QOHMWDJIBGVPIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDBRXOJCLVGHLX-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylmethanamine;propane Chemical compound CCC.CN(C)C DDBRXOJCLVGHLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N n-Butyllithium Substances [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M naphthalene-2-sulfonate Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)[O-])=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 230000006780 non-homologous end joining Effects 0.000 description 1
- NTQYXUJLILNTFH-UHFFFAOYSA-N nonanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCC(Cl)=O NTQYXUJLILNTFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L peroxydisulfate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229950010765 pivalate Drugs 0.000 description 1
- IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N pivalic acid Chemical compound CC(C)(C)C(O)=O IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- AOHJOMMDDJHIJH-UHFFFAOYSA-N propylenediamine Chemical compound CC(N)CN AOHJOMMDDJHIJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 235000019719 rose oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000010666 rose oil Substances 0.000 description 1
- JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-N selenophosphoric acid Chemical class OP(O)([SeH])=O JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- XGVXKJKTISMIOW-ZDUSSCGKSA-N simurosertib Chemical compound N1N=CC(C=2SC=3C(=O)NC(=NC=3C=2)[C@H]2N3CCC(CC3)C2)=C1C XGVXKJKTISMIOW-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- XYGBKMMCQDZQOZ-UHFFFAOYSA-M sodium;4-hydroxybutanoate Chemical compound [Na+].OCCCC([O-])=O XYGBKMMCQDZQOZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QZZGQOXRGFDEJP-UHFFFAOYSA-M sodium;6-(4-methylanilino)naphthalene-2-sulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(C)=CC=C1NC1=CC=C(C=C(C=C2)S([O-])(=O)=O)C2=C1 QZZGQOXRGFDEJP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- CBXCPBUEXACCNR-UHFFFAOYSA-N tetraethylammonium Chemical compound CC[N+](CC)(CC)CC CBXCPBUEXACCNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 150000004072 triols Chemical group 0.000 description 1
- FIQMHBFVRAXMOP-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphane oxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=O)C1=CC=CC=C1 FIQMHBFVRAXMOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N undecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(O)=O ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJIOQYGWTQBHNH-UHFFFAOYSA-N undecanol Chemical compound CCCCCCCCCCCO KJIOQYGWTQBHNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical class CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- PHXATPHONSXBIL-UHFFFAOYSA-N xi-gamma-Undecalactone Chemical compound CCCCCCCC1CCC(=O)O1 PHXATPHONSXBIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Description
Перекрестные ссылки на родственные заявки
Эта заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 62/775,783, поданной 5 декабря 2018 г., все содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Уровень техники
Липидные наночастицы, содержащие ионизируемые аминосодержащие липиды, могут служить транспортными средствами для доставки биологически активных агентов, в частности полинуклеотидов, таких как РНК, мРНК и гидовых РНК в клетки. Композиции LNP, содержащие ионизируемые липиды, могут способствовать доставке олигонуклеотидных агентов через клеточные мембраны и могут использоваться для введения компонентов и композиций для редактирования генов в живые клетки. Биологически активные агенты, которые особенно трудно доставить в клетки, включают белки, лекарства на основе нуклеиновых кислот и их производные, в особенности лекарства, которые включают относительно большие олигонуклеотиды, такие как мРНК. Особый интерес представляют композиции для доставки многообещающих технологий редактирования генома в клетки, к примеру, для доставки компонентов системы CRISPR/Cas9 (к примеру, мРНК, кодирующей нуклеазу, и ассоциированную гидовую РНК (гРНК)).
Необходимы композиции для доставки компонентов белка и нуклеиновой кислоты CRISPR/Cas в клетку, такую как клетка пациента. В частности, особый интерес представляют композиции для доставки мРНК, кодирующей белковый компонент CRISPR, и для доставки гидовых РНК CRISPR. Композиции с полезными свойствами для доставки in vitro и in vivo, которые могут стабилизировать и доставлять компоненты РНК, также представляют особый интерес.
Краткое содержание
В настоящем документе представлены аминосодержащие липиды, применимые для приготовления композиций липидных наночастиц (LNP). Такие композиции LNP могут обладать свойствами, полезными для доставки карго нуклеиновой кислоты, такого как компоненты редактирования генов CRISPR/Cas, в клетки.
В некоторых вариантах реализации настоящее описание относится к соединению, имеющему структуру формулы (IA):
где независимо для каждого случая
X1 представляет собой С1-3 алкилен или ’
X2 выбирают из О, NH, NMe и связи, при условии, что, когда X2 представляет собой O, R2 вместе с атомом азота и либо R1, либо атомом углерода X3 образует 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,
X3 представляет собой С2-4 алкилен,
X4 представляет собой C1 алкилен или связь,
X5 представляет собой C1 алкилен или связь,
R1 представляет собой С1-3 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой,
R2 представляет собой С1-3 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, или
R2 и R1, или R2 и атом углерода X3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,
Y1 выбирают из связи, -СН=СН-, -(С=О)О- и -О(С=О)-,
Y2 выбирают из -СН2-СН=СН- и С3-С4 алкилена,
R3 выбирают из Н, С5-7 циклоалкила, С8-С10 алкенила, и C3-18 алкила,
R4 представляет собой С4-8 алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
В некоторых вариантах реализации настоящее описание относится к соединению, имеющему структуру формулы (I):
- 1 046244
где независимо для каждого случая,
X1 представляет собой С1-3 алкилен,
X2 выбирают из О, NH, NMe и связи, при условии, что, когда X2 представляет собой О, R2 вместе с атомом азота и либо R1, либо атомом углерода X3 образует 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,
X3
X4
X5
R1 R2
R2 представляет собой C2-4 алкилен, представляет собой C1 алкилен или связь, представляет собой C1 алкилен или связь, представляет собой C1-2 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, представляет собой C1-2 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, или и R1, или R2 и атом углерода X3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют
5-членное или 6-членное кольцо,
Y1 выбирают из -СН=СН-, -(С=О)О- и -О(С=О)-,
R3 выбирают из Н, С5-7 циклоалкила, и C3-18 алкила,
R4 представляет собой C4-7 алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
В определенных вариантах реализации, X1 представляет собой линейный C2 алкилен. В других вариантах реализации, X1 представляет собой C1 алкилен.
В некоторых других вариантах реализации, X2 представляет собой NH или О.
В определенных вариантах реализации, X3 представляет собой C2-3 алкилен.
В некоторых других вариантах реализации, R2 и атом углерода X3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-6-членное кольцо.
В некоторых других вариантах реализации, R2 представляет собой C1-2 алкил.
В некоторых других вариантах реализации, R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-6-членное кольцо.
В некоторых других вариантах реализации, R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-членное кольцо.
В
В
В
В
В
В
В
В некоторых других вариантах реализации, некоторых других вариантах реализации, некоторых других вариантах реализации, некоторых других вариантах реализации, некоторых других вариантах реализации, некоторых других вариантах реализации,
R1
R3
R3
R3
R3
R4 некоторых других вариантах реализации, X некоторых других вариантах реализации, X5 представляет собой C1-2 алкил.
представляет собой линейный C4-16 алкил.
представляет собой разветвленный С6-10 алкил.
представляет собой С5-7 циклоалкил.
представляет собой С8-10 алкенил.
представляет собой линейный С5-6 алкил.
представляет собой связь.
представляет собой C1 алкилен.
В определенных вариантах реализации, соединение представляет собой соединение формулы (IA); и Y2-R4 представляет собой -CH2-CH=CH-R4.
В некоторых других вариантах реализации, Y1 выбирают из связи, -СН=СН- и -О(С=О)-.
В определенных вариантах реализации, соединение представляет собой соединение формулы II:
где переменные определены как для формулы (IA).
В определенных вариантах реализации, соединение представляет собой соединение формулы III;
- 2 046244
где переменные определены как для формулы (IA).
Типичные соединения формул (IA) или (I) включают:
- 3 046244
- 4 046244
- 5 046244
- 6 046244
- 7 046244
- 8 046244
- 9 046244
- 10 046244
- 11 046244
- 12 046244
- 13 046244
- 14 046244
- 15 046244
- 16 046244
- 17 046244
- 18 046244
- 19 046244
- 20 046244
- 21 046244
- 22 046244
- 23 046244
или их фармацевтически приемлемая соль.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, изобретение относится к композиции липидных наночастиц (LNP), содержащей любое соединение, описанное в данном документе, в липидном компоненте.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, где липидный компонент дополнительно включает вспомогательный липид, липид полиэтиленгликоля (ПЭГ) и нейтральный липид.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, где композиция дополнительно содержит нуклеиновую кислоту.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, где композиция имеет отношение атомов азота/фосфорных групп (N/P) 3-10.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, где отношение N/P составляет 6±1.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, дополнительно содержащая компонент РНК, причем компонент РНК содержит мРНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, где РНК-компонент содержит последовательность, кодирующую РНК-направляемый связывающий ДНК агент, такой как мРНК нуклеазы Cas.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к любой описанной здесь композиции LNP, где РНК-компонент включает гРНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к применению композиции LNP для редактирования гена у субъекта.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к применению композиции LNP для получения лекарственного средства для редактирования гена у субъекта.
- 24 046244
Краткое описание фигур
На фиг. 1А-1С показано редактирование in vivo в локусе TTR и соединения, протестированных в исследовании. На фиг. 1А показаны химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 1В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 1С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после родов.
Фиг. 2 представляет собой график, показывающий процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки с использованием LNP, содержащих соединение формулы (IA) или контрольное соединение. Также показаны данные о реакции на дозу.
На фиг. 3А-3В показаны результаты после доставки с использованием LNP, содержащих соединение формулы (IA). Фиг. 3А представляет собой график, показывающий процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. Фиг. 3B представляет собой график, показывающий TTR сыворотки (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 4А-4С показано редактирование in vivo в локусе TTR и соединения, протестированных в исследовании. Фиг. 4А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 4В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 4С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после родов.
На фиг. 5А-5С показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 5А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 5В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 5С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после родов.
На фиг. 6А-6С показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 6А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 6В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 6С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 7А-7С показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 7А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 7В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 7С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 8А-8С показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 8А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений, где n=1, 2 или 3. Фиг. 8В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 8С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 9А-9С показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 9А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 9В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 9С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 10А-10С показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 10А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 10В показывает процент изменения TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 10С показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 11A-11D показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 11А и фиг. 11В иллюстрируют химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 11С показывает процент редактирования TTR в клетках печени мыши после доставки. На фиг. 11D показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 12А-12В показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 12А показывает процент изменения TTR в клетках печени крысы после доставки. На фиг. 12В показаны уровни TTR в сыворотке (мкг/мл) после доставки.
На фиг. 13А-13В показаны соединения формулы (IA) и результаты доставки с использованием этих соединений. Фиг. 13А иллюстрирует химические структуры тестируемых соединений. Фиг. 13В показывает процент редактирования TTR в клетках HUH7 после доставки.
Подробное описание
Настоящее изобретение относится к липидам, в частности ионизируемым липидам, которые можно использовать для доставки биологически активных агентов, включая нуклеиновые кислоты, такие как РНК-компоненты CRISPR/Cas (карго), в клетку, а также к способам получения и использования таких композиций. Предоставлены липиды и их фармацевтически приемлемые соли, необязательно в виде композиций, содержащих липиды, включая композиции LNP. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP может содержать биологически активный агент, к примеру компонент РНК и липидный компонент, который включает соединение формулы (IA), (I), (II) или (III), как определено в данном документе. В некоторых вариантах осуществления изобретения компонент РНК включает нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления изобретения липиды используются для доставки биологически активного агента, к примеру нуклеиновой кислоты, такой как мРНК, для клетки, такой как клетка печени. В некоторых вариантах осуществления компонент РНК включает гРНК и не
- 25 046244 обязательно мРНК, кодирующую нуклеазу Cas 2 класса, и необязательно гРНК или нуклеиновые кислоты, кодирующие гРНК. Также представлены методы редактирования генов и способы создания сконструированных клеток с использованием этих композиций.
Композиции липидных наночастиц.
В настоящем документе раскрыты различные композиции LNP для доставки биологически активных агентов, таких как нуклеиновые кислоты, к примеру, мРНК и гРНК, включая карго CRISPR/Cas. Такие композиции LNP включают ионизируемый аминовый липид вместе с нейтральным липидом, липидом ПЭГ и вспомогательным липидом. Липидная наночастица или LNP относится, без ограничения значения, к частице, которая включает множество (т.е. более одного) компонентов LNP, физически связанных друг с другом межмолекулярными силами.
Липиды.
Изобретение обеспечивает липиды, которые можно использовать в композициях LNP.
В некоторых вариантах реализации настоящее описание относится к соединению, имеющему структуру формулы (IA):
где независимо для каждого случая
X1 представляет собой C1-3 алкилен или
X2 выбирают из О, NH, NMe и связи, при условии, что, когда X2 представляет собой О, R2 вместе с атомом азота и либо R1, либо атомом углерода X3 образует 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,
X3 представляет собой С2-4 алкилен,
X4 представляет собой C1 алкилен или связь,
X5 представляет собой C1 алкилен или связь,
R1 представляет собой С1-3 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой,
R2 представляет собой С1-3 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, или
R2 и R1, или R2 и атом углерода X3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,
Y1 выбирают из связи, -СН=СН-, -(С=О)О- и -О(С=О)-,
Y2 выбирают из -СН2-СН=СН- и С3-С4 алкилена,
R3 выбирают из Н, С5-7 циклоалкила, С8-С10 алкенила, и C3_18 алкила,
R4 представляет собой С4-8 алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
В некоторых вариантах реализации настоящее описание относится к соединению, имеющему структуру формулы (I):
где независимо для каждого случая,
X1 представляет собой С2-3 алкилен,
X2 выбирают из О, NH, NMe и связи, при условии, что, когда X2 представляет собой О, R2 вместе с атомом азота и либо R1, либо атомом углерода X3 образует 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,
X3 представляет собой С2-4 алкилен,
X4 представляет собой C1 алкилен или связь,
X5 представляет собой C1 алкилен или связь,
R1 представляет собой C1-2 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой,
R2 представляет собой C1-2 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, или
R2 и R1, или R2 и атом углерода X3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-членное или 6-членное кольцо,
Y1 выбирают из -СН=СН-, -(С=О)О- и -О(С=О)-,
- 26 046244
R3 выбирают из Н, С5-7 циклоалкила, и C3-18 алкила,
R4 представляет собой С4-7 алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
В определенных вариантах реализации, X1 представляет собой линейный С2 алкилен. В других вариантах реализации, X1 представляет собой C1 алкилен.
В некоторых других вариантах реализации, X2 представляет собой NH или О.
В определенных вариантах реализации, X3 представляет собой С2-3 алкилен.
В некоторых других вариантах реализации, R2 и атом углерода X3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-6-членное кольцо.
В некоторых других вариантах реализации, R2 представляет собой C1-2 алкил.
В некоторых других вариантах реализации, R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-6-членное кольцо.
В некоторых других вариантах реализации, R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-членное кольцо.
В некоторых других вариантах реализации, R1 представляет собой C1-2 алкил.
В некоторых других вариантах реализации, R3 представляет собой линейный C4-16 алкил.
В некоторых других вариантах реализации, R3 представляет собой разветвленный С6-10 алкил.
В некоторых других вариантах реализации, R3 представляет собой С5-7 циклоалкил.
В некоторых других вариантах реализации, R3 представляет собой С8-10 алкенил.
В некоторых других вариантах реализации, R4 представляет собой линейный С5-6 алкил.
В некоторых других вариантах реализации, X4 представляет собой связь.
В некоторых других вариантах реализации, X5 представляет собой C1 алкилен.
В определенных вариантах реализации, соединение представляет собой соединение формулы (IA); и Y2-R4 представляет собой -CH2-CH=CH-R4.
В некоторых других вариантах реализации, Y1 выбирают из связи, -СН=СН- и -О(С=О)-.
В определенных вариантах реализации, соединение представляет собой соединение формулы II:
где переменные определены как для формулы (IA).
В определенных вариантах реализации, соединение представляет собой соединение формулы III;
где переменные определены как для формулы (IA).
Типичные соединения формул (IA) или (I) включают:
- 27 046244
- 28 046244
- 29 046244
- 30 046244
- 31 046244
- 32 046244
- 33 046244
- 34 046244
- 35 046244
- 36 046244
- 37 046244
- 38 046244
- 39 046244
- 40 046244
- 41 046244
- 42 046244
- 43 046244
- 44 046244
- 45 046244
- 46 046244
- 47 046244
- 48 046244
или их фармацевтически приемлемая соль.
В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 75% соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) липидных композиций, составленных, как описано в настоящем документе, выводится из плазмы субъекта в течение 8, 10, 12, 24, или через 48 часов, или через 3, 4, 5, 6, 7 или 10 дней после введения. В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 50% липидных композиций, содержащих соединение формулы (IA), (I), (II) или (III), как раскрыто в настоящем документе, выводятся из плазмы субъекта в течение 8, 10, 12, 24. или 48 часов, или 3, 4, 5, 6, 7 или 10 дней после введения, что может быть определено, к примеру, путем измерения липида (к примеру, соединения формулы (IA), (I), (II) или (III)), РНК (к примеру, мРНК) или другого компонента в плазме. В некоторых вариантах осуществления изобретения измеряется инкапсулированный липид по сравнению со свободным липидом, РНК или нуклеиновой кислотой в липидной композиции.
Липидный клиренс можно измерить, как описано в литературе. См. Maier, M.A., et al. Biodegradable Lipids Enabling Rapidly Eliminated Lipid Nanoparticles for Systemic Delivery of RNAi Therapeutics. Mol. Ther. 2013, 21(8), 1570-78 (Maier). К примеру, в Maier системы LNP-миРНК, содержащие миРНК, нацеленные на люциферазы, вводили самцам мышей С57В1/6 в возрасте от шести до восьми недель в дозе 0,3 мг/кг путем внутривенной болюсной инъекции через боковую хвостовую вену. Образцы крови, печени и селезенки собирали через 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 96 и 168 ч после введения дозы. Мышей перфузировали физиологическим раствором перед забором тканей и обрабатывали образцы крови для получения плазмы. Все образцы были обработаны и проанализированы с помощью LC-MS. Кроме того, Maier описывает процедуру оценки токсичности после введения композиций LNP-миРНК. Например, миРНК, нацеленную на люциферазу, вводили самцам крыс Спрег-Доули в дозе 0, 1, 3, 5 и 10 мг/кг (5 животных в группе) путем однократной внутривенной болюсной инъекции в дозе 5 мл/кг. Через 24 ч из яремной вены находившихся в сознании животных получали около 1 мл крови и выделяли сыворотку. Через 72 ч после введения дозы всех животных умерщвляли для вскрытия трупа. Была проведена оценка клинических признаков, веса тела, химического состава сыворотки, веса органов и гистопатологии. Хотя Maier описывает способы оценки композиций миРНК-LNP, эти способы можно применять для оценки клиренса, фармакокинетики и токсичности введения липидных композиций, таких как композиции LNP настоящего изобретения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидные композиции, в которых используются соединения формулы (IA), (I), (II) или (III), раскрытые в настоящем документе, демонстрируют повышенную скорость клиренса по сравнению с альтернативными ионизируемыми аминовыми липидами. В некоторых таких вариантах осуществления изобретения скорость клиренса представляет собой скорость клиренса липидов, к примеру скорость, с которой соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) выводится
- 49 046244 из крови, сыворотки или плазмы. В некоторых вариантах осуществления изобретения скорость очистки представляет собой скорость очистки карго (к примеру, биологически активного агента), к примеру скорость, с которой компонент карго удаляется из крови, сыворотки или плазмы. В некоторых вариантах осуществления изобретения скорость клиренса представляет собой скорость клиренса РНК, к примеру скорость, с которой мРНК или гРНК удаляются из крови, сыворотки или плазмы. В некоторых вариантах осуществления изобретения скорость выведения представляет собой скорость, с которой LNP выводится из крови, сыворотки или плазмы. В некоторых вариантах осуществления изобретения скорость клиренса представляет собой скорость, с которой LNP удаляется из ткани, такой как ткань печени или ткань селезенки. Желательно, чтобы высокая скорость выведения могла привести к профилю безопасности без существенных побочных эффектов и/или к снижению накопления LNP в кровообращении и/или в тканях.
Соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения могут образовывать соли в зависимости от pH среды, в которой они находятся. К примеру, в слабокислой среде соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) могут быть протонированы и, таким образом, нести положительный заряд. И наоборот, в слабощелочной среде, такой как, к примеру, кровь, где pH составляет приблизительно 7,35, соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) могут не протонироваться и, таким образом, не иметь заряда. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения могут быть преимущественно протонированы при pH по меньшей мере около 9. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения могут быть преимущественно протонированы при pH по меньшей мере примерно 10.
Значение pH, при котором соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) преимущественно протонируется, связано с его собственным pKa. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения соль соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения имеет pKa в диапазоне от около 5,1 до около 8,0, более предпочтительно от около 5,5 до около 7,5, к примеру от около 6,1 до около 6,3. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения соль соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения имеет pKa в диапазоне от около 5,3 до около 8,0, к примеру, от около 5,6 до около 7,2, от около 5,7 до около 6,5. В других вариантах осуществления изобретения соль соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения имеет pKa в диапазоне от около 5,7 до около 6,4, к примеру, от около 5,8 до около 6,2. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения соль соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения имеет pKa в диапазоне от около 5,7 до около 6,5, к примеру, от около 5,8 до около 6,4. В качестве альтернативы соль соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) настоящего изобретения имеет pKa в диапазоне от около 5,8 до около 6,5. В некоторых вариантах осуществления изобретения pKa протонированной формы соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) составляет от около 5,5 до около 6,0. Соль соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) по настоящему изобретению может иметь pKa в диапазоне от около 6,0 до около 8,0, предпочтительно от около 6,0 до около 7,5. pKa соли соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) может быть важным фактором при составлении LNP, поскольку было обнаружено, что LNP, составленные с определенными липидами, имеющими диапазон pKa от около 5,5 до около 7,0 эффективны для доставки карго in vivo, к примеру в печень. Кроме того, было обнаружено, что LNP, составленные с определенными липидами, имеющими pKa в диапазоне от около 5,3 до около 6,4, эффективны для доставки in vivo, например в опухоли. См, например, WO 2014/136086.
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к энантиообогащенному соединению формулы (IA), (I), (II) или (III). Уровень энантиообогащения соединения может быть выражен как энантиомерный избыток (ее). Соединение ее можно измерить делением разницы долей энантиомеров на сумму долей энантиомеров. К примеру, если обнаружено, что соединение содержит 98% (Ъ)-энантиомер и 2% (R) энантиомер, то ее соединения составляет (98-2)/(98+2) или 96%. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) имеет около 30% ее или больше, 40% ее или больше, 50% ее или больше, 60% ее или больше, 70% ее или больше, около 80% ее, около 85%, около 88% ее, около 90% ее, около 91%, около 92% ее, около 93%, около 94%, около 95%, около 96% ее, около 97% ее, около 98%, около 99% или выше, около 99% ее, даже если этот % ее больше, чем% ее исходного материала, к примеру 0% ее (рацемический). В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) является энантиообогащенным. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) является энантиочистым. В вариантах осуществления изобретения, где соединение имеет более одного стереоцентра, этот стереоцентр может быть обогащен существенным образом независимо от стереохимического расположения/обогащения любых других стереоцентров молекулы. К примеру, соединение, описанное здесь, может иметь 30% de или больше, 40% de или больше, 50% de или больше, 60% de или больше, 70% de или больше, 80% de или больше, 90% de или больше, 95% или больше или даже 98% или больше в конкретном стереоцентре.
Дополнительные липиды.
Нейтральные липиды, подходящие для использования в липидной композиции настоящего изобретения, включают, к примеру, множество нейтральных, незаряженных или цвиттерионных липидов. Примеры нейтральных фосфолипидов, подходящих для использования в настоящем описании, включа
- 50 046244 ют, но не ограничиваются ими, дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), фосфохолин (DOPC), димиристоилфосфатидилхолин (DMPC), фосфатидилхолин (PLPC), 1,2дистеароил-сн-глицеро-3-фосфохолин (DAPC), фосфатидилэтаноламин (РЕ), яичный фосфатидилхолин (ЕРС), дилаурилоилфосфатидилхолин (DLPC), димиристоилфосфатидилхолин (DMPC), 1-миристоил-2пальмитоил фосфатидилхолин (МРРС), 1-пальмитоил-2-миристоил фосфатидилхолин (РМРС), 1пальмитоил-2-стеароил фосфатидилхолин (PSPC), 1,2-диарахидоил-сн-глицеро-3-фосфохолин (DBPC), 1стеароил-2-пальмитоил фосфатидилхолин (SPPC), 1,2-диикосеноил-сн-глицеро-3-фосфохолин (DEPC), пальмитоилолеоил фосфатидилхолин (РОРС), лизофосфатидил холин, диолеоил фосфатидилэтаноламин (DOPE), дилинолеилфосфатидилхолин дистеароилфосфатидилэтаноламин (DSPE), димиристоил фосфатидилэтаноламин (DMPE), дипальмитоил фосфатидилэтаноламин (DPPE), пальмитоилолеил фосфатидилэтаноламин (POPE), лизофосфатидилэтаноламин и их комбинации. В некоторых вариантах реализации нейтральный фосфолипид может быть выбирают из дистеароилфосфатидилхолина (DSPC) и димиристоил фосфатидил этаноламина (DMPE), предпочтительно дистеароилфосфатидилхолина (DSPC).
Вспомогательные липиды включают стероиды, стерины и алкил резорцины. Вспомогательные липиды, подходящие для использования в настоящем описании, включают, но не ограничиваются ими, холестерин, 5-гептадецилрезорцин и гемисукцинат холестерина. В некоторых вариантах реализации вспомогательный липид может представлять собой холестерин или его производное, такое как гемисукцинат холестерина.
Липиды ПЭГ могут влиять на продолжительность существования наночастиц in vivo (к примеру, в крови). Липиды ПЭГ могут способствовать процессу приготовления, к примеру, уменьшая агрегацию частиц и контролируя размер частиц. Используемые здесь липиды ПЭГ могут модулировать фармакокинетические свойства LNP. Обычно липид ПЭГ включает липидный фрагмент и полимерный фрагмент на основе ПЭГ (иногда называемый поли(этиленоксидом)) (фрагмент ПЭГ). Липиды ПЭГ, подходящие для использования в липидной композиции с соединением формулы (IA), (I), (II) или (III) по настоящему изобретению, и информацию о биохимии таких липидов можно найти в Romberg et al., Pharmaceutical Research 25 (1), 2008, pp. 55-71 и Hoekstra et al., Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52. Дополнительные подходящие липиды ПЭГ описаны, к примеру, в WO 2015/095340 (стр. 31, строчка 14 - стр. 37, строчка 6), WO 2006/007712 и WO 2011/076807 (скрытые липиды).
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидный фрагмент может быть производным диацилглицерина или диацилгликамида, включая группы, содержащие диалкилглицерин или диалкилгликамидную группу, имеющую длину алкильной цепи, независимо содержащую от около С4 до около С40 насыщенных или ненасыщенных атомов углерода, где цепь может содержать один или несколько функциональных групп, таких как, к примеру, амид или сложный эфир. В некоторых вариантах осуществления изобретения длина алкильной цепи составляет примерно от С10 до С20. Группа диалкилглицерина или диалкилгликамида может дополнительно содержать одну или несколько замещенных алкильных групп. Длины цепочек могут быть симметричными или асимметричными.
Если не указано иное, термин ПЭГ в контексте настоящего описания означает любой полиэтиленгликоль или другой полимер на основе простого полиалкиленового эфира, такой как необязательно замещенный линейный или разветвленный полимер этиленгликоля или этиленоксида. В некоторых вариантах осуществления изобретения фрагмент ПЭГ не замещен. Альтернативно, фрагмент ПЭГ может быть замещен, к примеру, одной или несколькими алкильными, алкокси, ацильными, гидрокси или арильными группами. К примеру, фрагмент ПЭГ может включать сополимер ПЭГ, такой как ПЭГ-полиуретан или ПЭГ-полипропилен (см., к примеру, J. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992)); альтернативно, фрагмент ПЭГ может быть гомополимером ПЭГ. В некоторых вариантах осуществления изобретения фрагмент ПЭГ имеет молекулярную массу от около 130 до около 50000, к примеру от около 150 до около 30000, или даже от около 150 до около 20000. Точно так же фрагмент ПЭГ может иметь молекулярную массу от около 150 до около 15000, от около 150 до около 10000, от около 150 до около 6000, или даже от около 150 до около 5000. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения фрагмент ПЭГ имеет молекулярную массу от около 150 до около 4000, от около 150 до около 3000, от около 300 до около 3000, от около 1000 до около 3000 или от около 1500 до около 2500.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения фрагмент ПЭГ представляет собой ПЭГ-2К, также называемый ПЭГ 2000, который имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000 дальтон. ПЭГ-2К представлен здесь следующей формулой (II), где n равно 45, что означает, что
л. Lor ΐ^Ίη , . . . . <llL
Однако могут быть использованы другие варианты осуществления ПЭГ, известные в данной области техники, включая, к примеру, те, в которых усредненная по числу степень полимеризации составляет около 23 субъединиц (n=23) и/или 68 субъединиц (n=68). В некоторых вариантах осуществления изобретения n может находиться в диапазоне от около 30 до около 60. В некоторых вариантах осуществления изобретения n может находиться в диапазоне от около 35 до около 55. В некоторых вариантах осуществ
- 51 046244 ления изобретения n может находиться в диапазоне от около 40 до около 50. В некоторых вариантах осуществления изобретения n может находиться в диапазоне от около 42 до около 48. В некоторых вариантах осуществления изобретения n может быть 45. В некоторых вариантах осуществления изобретения R может быть выбирают из H, замещенного алкила и незамещенного алкила. В некоторых вариантах осуществления изобретения R может быть незамещенным алкилом, таким как метил.
В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, липид ПЭГ может быть выбирают из ПЭГ-дилауроилглицерина, ПЭГ-димиристоилглицерина (ПЭГ -DMG) (номер по каталогу GM020 от NOF, Токио, Япония), ПЭГ-дипальмитоилглицерина, ПЭГ-дистеароилглицерина (ПЭГ-DSPE) (номер по каталогу DSPE-020CN, NOF, Токио, Япония), ПЭГ-дилаурилгликамида, ПЭГдимиристилгликамида, ПЭГ-дипальмитоилгликамида и ПЭГ-дистеароилгликамида, ПЭГ-холестерина(1[8'-(Холест-5-ен-3[бета]-окси)карбоксамидо-3',6'-диоксаоктанил]карбамоил-[омега]-метилполи(этиленгликоля), ПЭГ-DMB (3,4-дитетрадекоксилбензил-[омега]-метил-поли(этиленгликоль)эфир), 1,2-димиристоил-сн-глицеро-3-фосфоэтаноламин-\-[метокси(полиэтиленгликоль)-2000] (ПЭГ2к-ЭМО) (кат. № 880150Р от Avanti Polar Lipids, Алабастер, Алабама, США), 1,2-дистеароил-сн-глицеро-Зфосфоэтаноламин-М-[метокси(полиэтиленгликоль)-2000] (TOr2k-DSPE) (кат. № 880120С от Avanti Polar Lipids, Алабастер, Алабама, США), 1,2-дистеароил-сн-глицерин, метоксиполиэтиленгликоль (ПЭГ2кDSG; GS-020, NOF Токио, Япония), поли(этиленгликоль)-2000-диметакрилат (ПЭГ2k-DMA) и 1,2дистеарилоксипропил-3-амин-Ы-[метокси(полиэтиленгликоль)-2000] (ПЭГ2k-DSA). В некоторых таких вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может быть ПЭГ2k-DMG. В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может представлять собой ПЭГ2k-DSG. В других вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может быть ПЭГ2k-DSPE. В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может представлять собой ПЭГ2k-DMA. В еще других вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может представлять собой ПЭГ2к-С.'-ОМЛ. В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может представлять собой соединение S027, раскрытое в WO2016/010840 (абзацы с [00240] по [00244]). В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может представлять собой ПЭГ2k-DSΛ. В других вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может быть ПЭГ2к-С11. В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может быть ПЭГ2к-С14. В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может быть ПЭГ2кС16. В некоторых вариантах осуществления изобретения липид ПЭГ может быть ПЭГ2к-С18.
Катионные липиды, подходящие для использования в липидной композиции согласно настоящему описанию, включают, но не ограничиваются ими, Н.'Н-диолеил-'Н.'Ы-диметиламмоний хлорид (DODAC), КН-дистеарил-КН-диметиламмоний бромид (DDAB), №(1-(2,3-диолеилокси)пропил)-Ы,^№ триметиламмоний хлорид (DOTAP), 1,2-диолеоил-3-диметиламмоний-пропан (DODAP), N-(1-(2,3диолейлокси)пропил)-Н,Н,Н-триметиламмоний хлорид (DOTMA), 1,2-диолеоилкарбамил-Здиметиламмоний-пропан (DOCDAP), 1,2-дилинеил-3-диметиламмоний-пропан (DLINDAP), дилаурил(С12:0) триметил аммоний пропан (DLTAP), Диоктадециламидоглицил спермин (DOGS), DC-Хои, диолеилокси-Н-[2-(сперминкарбоксамидо)этил]-Н,Н-диметил-1-пропанаминийтрифторацетат (DOSPA), 1,2-димиристилоксипропил-3-диметил-гидроксиэтил аммоний бромид (DMRIE), З-диметиламино-2(Холест-5-ен-3-бета-оксибутан-4-окси)-1-(цис,цис-9,12-октадекадиенокси)пропан (CLinDMA), N,Nдиметил-2,3-диолеилокси)пропиламин (DODMA), 2-[5‘-(холест-5-ен-3[бета]-окси)-3‘-оксапентокси)-3диметил-1 -(цис,цис-9‘, 1 -2‘-октадекадиенокси)пропан (CpLinDMA), N,N-диметил-3,4диолеилоксибензиламин (DMOBA) и ^-Ы^'-диолеилкарбамил-З-диметиламинопропан (DOcarbDAP). В одном варианте катионный липид представляет собой DOTAP или DLTAP.
Анионные липиды, подходящие для использования в настоящем описании, включают, но не ограничиваются ими, фосфатидилглицерин, кардиолипин, диацилфосфатидилсерин, диацилфосфатидиновую кислоту, N-додеканоил фосфатидил этаноламин, N-сукцинил фосфатидилэтаноламин, N-глутарил фосфатидилэтаноламин холестерин гемисукцинат (CHEMS) и лизилфосфатидилглицерин.
Липидные композиции.
Настоящее изобретение обеспечивает липидную композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его соль (к примеру, его фармацевтически приемлемую соль) и по меньшей мере один другой липидный компонент. Такие композиции также могут содержать биологически активный агент, необязательно в комбинации с одним или несколькими другими липидными компонентами. В некоторых вариантах реализации липидные композиции содержат липидный компонент и водный компонент, содержащий биологически активный агент.
В одном варианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один другой липидный компонент. В другом варианте осуществления изобретения липидная композиция дополнительно содержит биологически активный агент, необязательно в комбинации с одним или несколькими другими липидными компонентами. В другом варианте осуществления изобретения липидная композиция находится в форме липосом. В другом варианте осуществления изобретения липидная композиция находится в форме липидных наночастиц (LNP). В другом варианте осуществления изобретения липидная композиция подходит для доставки в печень.
- 52 046244
В одном варианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль и другой липидный компонент. Такие другие липидные компоненты включают, но не ограничиваются, нейтральные липиды, вспомогательные липиды, липиды ПЭГ, катионные липиды и анионные липиды. В некоторых вариантах осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, и нейтральный липид, к примеру DSPC, необязательно с одним или несколькими дополнительными липидными компонентами. В другом варианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль и вспомогательный липид, к примеру холестерин, необязательно с одним или несколькими дополнительными липидными компонентами. В дополнительном варианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль и липид ПЭГ, необязательно с одним или несколькими дополнительными липидными компонентами. В дополнительном варианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль и катионный липид, необязательно с одним или несколькими дополнительными липидными компонентами. В дополнительном варианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль и анионный липид, необязательно с одним или несколькими дополнительными липидными компонентами. В подварианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, вспомогательный липид и липид ПЭГ, необязательно с нейтральным липидом. В следующем подварианте осуществления изобретения липидная композиция содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, вспомогательный липид, липид ПЭГ и нейтральный липид.
Композиции, содержащие липиды Формулы (IA), (I), (II) или (III), или их фармацевтически приемлемые соли, или их липидные композиции, могут быть в различных формах, включая, но не ограничиваясь, агенты доставки, образующие частицы, включая микрочастицы, наночастицы и агенты трансфекции, которые используются для доставки различных молекул в клетки. Конкретные композиции эффективны для трансфекции или доставки биологически активных агентов. Предпочтительными биологически активными агентами являются РНК и ДНК. В дополнительных вариантах осуществления изобретения биологически активный агент выбирают из мРНК, гРНК и ДНК. гРНК может быть дгРНК или огРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения карго включает мРНК, кодирующую РНК-направляемый связывающий агент ДНК (к примеру, нуклеазу Cas, нуклеазу Cas 2 класса или Cas9), гРНК или нуклеиновую кислоту, кодирующую гРНК, или комбинацию мРНК и гРНК.
Типичные соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) для использования в вышеуказанных липидных композициях приведены в примерах 2-48, 50-97, 99-103 и 105-113.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 5. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 7. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 9. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (IA) представляет собой соединение 10.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 11. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 12. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 13. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 14. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 15. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 16. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 17. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 18. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 19. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 20.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 21. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 22. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 23. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 24. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 25. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 26. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 27. В некоторых вариантах реализации
- 53 046244 соединение формулы (IA) представляет собой соединение 28. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 29. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 30.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 31. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 32. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 33. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 34. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 35. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 36. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 37. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 38. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 39. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 40.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 41. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 42. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 43. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 44. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 45. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 46. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 47. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 48. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 50.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 51. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 52. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 53. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 54. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 55. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 56. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 57. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 58. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 59. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 60.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 61. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 62. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 63. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 64. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 65. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 66. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 67. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 68. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 69. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 70.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 71. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 72. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 73. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 74. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 75. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 76. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 77. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 78. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 79. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 80.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 81. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 82. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 83. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 84. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 85. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 86. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 87. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 88. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 89. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 90.
- 54 046244
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 91. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 92. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 93. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 94. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 95. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 96. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 97. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 99. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 100.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 101. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 102. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 103. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 105. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 106. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 107. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 108. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 109. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 110.
В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 111. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 112. В некоторых вариантах реализации соединение формулы (IA) представляет собой соединение 113.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение не является соединением 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение не является соединением 49. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение не является соединением 114.
Композиции LNP.
Липидные композиции могут быть представлены в виде композиций LNP. Липидные наночастицы могут быть, к примеру, микросферами (включая однослойные и многослойные везикулы, к примеру, липосомы - липидные бислои ламеллярной фазы, которые в некоторых вариантах осуществления изобретения являются существенным образом сферическими, а в более конкретных вариантах осуществления изобретения могут включать водное ядро, к примеру, содержащее часть молекул РНК), дисперсной фазой в эмульсии, мицеллами или внутренней фазой в суспензии.
LNP имеют размер от около 1 до около 1000 нм, от около 10 до около 500 нм, от около 20 до около 500 нм, в дополнительном варианте осуществления изобретения от около 50 до около 400 нм, в дополнительном варианте осуществления изобретения от около 50 до около 300 нм, в дополнительном варианте осуществления изобретения от около 50 до около 200 нм, и в дополнительном варианте осуществления изобретения от около 50 до около 150 нм, и в другом дополнительном варианте осуществления изобретения от около 60 до около 120 нм. Предпочтительно LNP имеют размер от около 60 нм до около 100 нм. Средние размеры (диаметры) полностью сформированного LNP могут быть измерены динамическим светорассеянием на Malvern Zetasizer. Образец LNP разводят в фосфатно-солевом буфере (PBS) так, чтобы интенсивность излучения составляла примерно 200-400 кгц/с. Данные представлены как средневзвешенное значение показателя интенсивности.
Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к липидным композициям, описанным в соответствии с соответствующими молярными соотношениями компонентов липидов в композиции. Все числа в мольных процентах даны как доли липидного компонента липидной композиции или, более конкретно, композиций LNP. В некоторых вариантах осуществления изобретения мол. % соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) может составлять от около 30 мол.% до около 70 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мол.% соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) может составлять по меньшей мере 30 мол.%, по меньшей мере 40 мол.%, по меньшей мере 50 мол. % или не менее 60 мол.%.
В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% нейтрального липида может составлять от около 0 мол.% до около 30 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% нейтрального липида может составлять от около 0 мол.% до около 20 мол.%. В некоторых вариантах осуществления мол.% нейтрального липида может составлять примерно 10 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% нейтрального липида может составлять примерно 9 мол.%.
В некоторых вариантах осуществления изобретения молярный процент вспомогательного липида может составлять от около 0 мол.% до около 80 мол.%. В некоторых вариантах осуществления мол.% вспомогательного липида может составлять от около 20 мол.% до около 60 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения молярный % вспомогательного липида может составлять от около 30 мол.% до около 50 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% вспомогательного липида может составлять от 30 мол.% до около 40 мол.% или от около 35 мол.% до около 45 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения молярный % вспомогательного липида регулируется в зависимости от концентрации соединения формулы (IA), (I), (II) или (III), нейтрального липида и/или
- 55 046244 липида ПЭГ для обеспечения липидного компонента до 100 мол.%.
В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% липида ПЭГ может составлять от около 1 мол.% до около 10 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мол.% липида ПЭГ может составлять от около 1 мол.% до около 4 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% липида ПЭГ может составлять от около 1 мол.% до около 2 мол.%. В некоторых вариантах осуществления изобретения мол.% липида ПЭГ может составлять примерно 1,5 мол.%.
В различных вариантах осуществления изобретения композиция LNP содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его соль (такую как его фармацевтически приемлемая соль (к примеру, как раскрытая в настоящем документе)), нейтральный липид (к примеру, DSPC), вспомогательный липид (к примеру, холестерин) и липид ПЭГ (к примеру, ПЭГ2k-DMG). В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль (к примеру, как описанная в данном документе), DSPC, холестерин и липид ПЭГ. В некоторых таких вариантах осуществления изобретения композиция LNP содержит липид ПЭГ, содержащий DMG, такой как ПЭГ2k-DMG. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция LNP содержит соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, холестерин, DSPC и ПЭГ2k-DMG.
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидные композиции, такие как композиции LNP, содержат липидный компонент и компонент нуклеиновой кислоты, к примеру компонент РНК и молярное отношение соединения формулы (IA), (I), (II) или (III) к нуклеиновой кислоте. Варианты осуществления настоящего изобретения также предоставляют липидные композиции, имеющие определенное молярное соотношение между положительно заряженными аминогруппами фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (IA), (I), (II) или (III) (N) и отрицательно заряженными фосфатными группами (P) нуклеиновой кислоты, подлежащей инкапсуляции. Это может быть математически представлено уравнением N/P. В некоторых вариантах осуществления изобретения липидная композиция, такая как композиция LNP, может содержать липидный компонент, который включает соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль; и компонент нуклеиновой кислоты, где отношение N/P составляет примерно от 3 до 10. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP может содержать липидный компонент, который включает соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль; и компонент РНК, в котором соотношение N/P составляет примерно от 3 до 10. К примеру, соотношение N/P может составлять около 4-7. В качестве альтернативы соотношение N/P может составлять около 6, к примеру 6±1 или 6±0,5.
В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент содержит биологически активный агент. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент включает полипептид, необязательно в комбинации с нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент содержит нуклеиновую кислоту, такую как РНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент представляет собой компонент нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления изобретения компонент нуклеиновой кислоты включает ДНК, и его можно назвать компонентом ДНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения компонент нуклеиновой кислоты включает РНК, и его можно назвать компонентом РНК. В некоторых вариантах осуществления водный компонент, такой как компонент РНК, может содержать мРНК, такую как мРНК, кодирующая агент связывания ДНК, управляемый РНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения агент, связывающий ДНК, управляемый РНК, представляет собой нуклеазу Cas. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент может содержать мРНК, кодирующую Cas9. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент может содержать гРНК. В некоторых композициях, содержащих мРНК, кодирующую агент, связывающий ДНК, управляемый РНК, композиция дополнительно содержит нуклеиновую кислоту гРНК, такую как гРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент содержит агент связывания ДНК, управляемый РНК и гРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент содержит мРНК нуклеазы Cas и гРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный компонент содержит мРНК нуклеазы Cas 2 класса и гРНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидная композиция, такая как композиция LNP, может содержать мРНК, кодирующую нуклеазу Cas, такую как нуклеаза Cas 2 класса, соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, вспомогательный липид, необязательно нейтральный липид и липид ПЭГ. В некоторых композициях, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas, такую как нуклеаза Cas 2 класса, вспомогательным липидом является холестерин. В других композициях, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas, такую как нуклеаза Cas 2 класса, нейтральным липидом является DSPC. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas, такую как нуклеаза Cas 2 класса, например Cas9, липидом ПЭГ является ПЭГ2k-DMG. В конкретных композициях, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas, такую как нуклеаза Cas 2 класса, и соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых композициях композиция дополнительно содержит гРНК, такую как дгРНК или огРНК.
- 56 046244
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидная композиция, такая как композиция LNP, может содержать гРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция может содержать соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, гРНК, вспомогательный липид, необязательно нейтральный липид и липид ПЭГ. В некоторых композициях LNP, содержащих гРНК, вспомогательный липид представляет собой холестерин. В некоторых композициях, содержащих гРНК, нейтральный липид представляет собой DSPC. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, содержащих гРНК, липид ПЭГ представляет собой ПЭГ2k-DMG. В некоторых композициях гРНК выбрана из дгРНК и огРНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидная композиция, такая как композиция LNP, содержит мРНК, кодирующую агент, связывающий ДНК, управляемый РНК, и гРНК, которая может быть огРНК, в водном компоненте и соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) в липидном компоненте. К примеру, композиция LNP может содержать соединение формулы (IA), (I), (II) или (III) или его фармацевтически приемлемую соль, мРНК, кодирующую нуклеазу Cas, мРНК, вспомогательный липид, нейтральный липид и липид ПЭГ. В некоторых композициях, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas и гРНК, вспомогательным липидом является холестерин. В некоторых композициях, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas и гРНК, нейтральным липидом является DSPC. В дополнительных вариантах осуществления изобретения, содержащих мРНК, кодирующую нуклеазу Cas и гРНК, липид ПЭГ представляет собой ПЭГ2k-DMG.
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидные композиции, такие как композиции LNP, включают РНК-направляемый ДНК-связывающий агент, такой как мРНК Cas 2 класса и по меньшей мере одну гРНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP включает соотношение гРНК и мРНК РНК-направляемого ДНК-связывающего агента, такого как мРНК нуклеазы Cas 2 класса, примерно 1:1 или примерно 1:2. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение составляет от около 25:1 до около 1:25, от около 10:1 до около 1:10, от около 8:1 до около 1:8, от около 4:1 до около 1:4, или от около 2:1 до около 1:2.
Раскрытые здесь липидные композиции, такие как композиции LNP, могут включать матричную нуклеиновую кислоту, например шаблон ДНК. Матричная нуклеиновая кислота может быть доставлена с липидными композициями, содержащими соединение формулы (IA), (I), (II) или (III), или его фармацевтически приемлемой солью, в том числе в виде композиций LNP, или отдельно от них. В некоторых вариантах осуществления изобретения матричная нуклеиновая кислота может быть одноцепочечной или двухцепочечной, в зависимости от желаемого механизма репарации. Матрица может иметь области гомологии с целевой ДНК, к примеру в последовательности ДНК-мишени и/или в последовательностях, примыкающих к ДНК-мишени.
В некоторых вариантах осуществления изобретения LNP образуются путем смешивания водного раствора РНК с липидным раствором на основе органического растворителя. Подходящие растворы или растворители включают или могут содержать: воду, PBS, Трис-буфер, NaCl, цитратный буфер, ацетатный буфер, этанол, хлороформ, диэтиловый эфир, циклогексан, тетрагидрофуран, метанол, изопропанол. К примеру, органический растворитель может быть 100% этанолом. Можно использовать фармацевтически приемлемый буфер, к примеру, для введения LNP in vivo. В некоторых вариантах осуществления изобретения буфер используется для поддержания pH композиции, содержащей LNP, на уровне или выше pH 6,5. В некоторых вариантах осуществления изобретения буфер используется для поддержания pH композиции, содержащей LNP, на уровне или выше pH 7,0. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH в диапазоне от около 7,2 до около 7,7. В дополнительных вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH в диапазоне от около 7,3 до около 7,7 или в диапазоне от около 7,4 до около 7,6. В дополнительных вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH примерно 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6 или 7,7. pH композиции можно измерить с помощью микрозонда pH. В некоторых вариантах осуществления изобретения в композицию включен криопротектор. Неограничивающие примеры криопротекторов включают сахарозу, трегалозу, глицерин, DMSO и этиленгликоль. Примерные композиции могут включать до 10% криопротектора, такого как, к примеру, сахароза. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция может содержать трис-солевой раствор сахарозы (TSS). В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP может включать примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10% криопротектора. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP может включать примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10% сахарозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP может включать буфер. В некоторых вариантах осуществления изобретения буфер может содержать фосфатный буфер (PBS), Трис-буфер, цитратный буфер и их смеси. В некоторых примерных вариантах осуществления изобретения буфер содержит NaCl. В некоторых вариантах осуществления изобретения в буфере отсутствует NaCl. Примерные количества NaCl могут находиться в диапазоне от около 20 мМ до около 45 мМ. Примерные количества NaCl могут находиться в диапазоне от около 40 мМ до около 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения количество NaCl составляет около 45 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения буфер представляет собой Трис-буфер. Примерные количества Трис могут варьироваться от около 20 мМ до около 60 мМ. Примерные количества Трис могут варьироваться от около 40 мМ до около 60 мМ. В
- 57 046244 некоторых вариантах осуществления изобретения количество Трис составляет около 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения буфер содержит NaCl и Трис. Некоторые иллюстративные варианты осуществления композиций LNP содержат 5% сахарозы и 45 мМ NaCl в Трис-буфере. В других иллюстративных вариантах осуществления композиции содержат сахарозу в количестве примерно 5 мас./об.%, примерно 45 мМ NaCl и примерно 50 мМ Трис при pH 7,5. Количество соли, буфера и криопротектора можно варьировать таким образом, чтобы поддерживать осмоляльность всей композиции. К примеру, конечная осмоляльность может поддерживаться на уровне менее 450 мОсм/л. В дополнительных вариантах осуществления изобретения осмоляльность составляет от 350 до 250 мОсм/л. Некоторые варианты осуществления изобретения имеют конечную осмоляльность 300±20 мОсм/л или 310±40 мОсм/л.
В некоторых вариантах осуществления изобретения используется микрожидкостное смешение, Тсмешение или перекрестное смешение водного раствора РНК и липидного раствора в органическом растворителе. В некоторых вариантах осуществления изобретения скорость потока, размер соединения, геометрия соединения, форма соединения, диаметр трубки, растворы и/или концентрации РНК и липидов могут варьироваться. LNP или композиции LNP могут быть концентрированы или очищены, к примеру, с помощью диализа, центробежного фильтра, фильтрации в тангенциальном потоке или хроматографии. LNP могут храниться, к примеру, в виде суспензии, эмульсии или лиофилизированного порошка. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция LNP хранится при 2-8°С, в некоторых вариантах осуществления изобретения композиции LNP хранятся при комнатной температуре. В дополнительных вариантах осуществления изобретения композиция LNP хранится в замороженном виде, к примеру, при -20°С или -80°С. В других вариантах осуществления изобретения композиция LNP хранится при температуре в диапазоне от около 0°С до около -80°С. Композиции LNP можно разморозить перед использованием, к примеру, на льду, при комнатной температуре или при 25°С.
LNP могут быть, к примеру, микросферами (включая однослойные и многослойные везикулы, к примеру, липосомы - липидные бислои ламеллярной фазы, которые в некоторых вариантах осуществления изобретения являются существенным образом сферическими, и, в более конкретных вариантах реализации, могут содержать водное ядро, к примеру, включающее значительную часть молекул РНК), дисперсную фазу в эмульсии, мицеллы или внутреннюю фазу в суспензии.
Предпочтительные липидные композиции, такие как композиции LNP, являются биоразлагаемыми, поскольку они не накапливаются до цитотоксических уровней in vivo при терапевтически эффективной дозе. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиции не вызывают врожденного иммунного ответа, который приводит к существенным побочным эффектам на уровне терапевтических доз. В некоторых вариантах осуществления изобретения представленные здесь композиции не вызывают токсичности на уровне терапевтических доз.
В некоторых вариантах осуществления изобретения LNP, раскрытые в настоящем документе, имеют индекс полидисперсности (PDI), который может находиться в диапазоне от около 0,005 до около 0,75. В некоторых вариантах осуществления изобретения LNP имеют PDI, который может находиться в диапазоне от около 0,01 до около 0,5. В некоторых вариантах реализации LNP имеет PDI, который может находиться в диапазоне от около нуля до около 0,4. В некоторых вариантах реализации LNP имеет PDI, который может находиться в диапазоне от около нуля до около 0,35. В некоторых вариантах реализации LNP имеет PDI, который может находиться в диапазоне от около нуля до около 0,35. В некоторых вариантах реализации LNP PDI может находиться в диапазоне от около нуля до около 0,3. В некоторых вариантах реализации LNP имеет PDI, который может находиться в диапазоне от около нуля до около 0,25. В некоторых вариантах реализации LNP PDI может находиться в диапазоне от около нуля до около 0,2. В некоторых вариантах реализации LNP имеет PDI, который может составлять менее примерно 0,08, 0,1, 0,15, 0,2 или 0,4.
Раскрытые здесь LNP имеют размер (например, Z-средний диаметр) от около 1 до около 250 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 10 до около 200 нм. В дополнительных вариантах осуществления LNP имеют размер от около 20 до около 150 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 50 до около 150 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 50 до около 100 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 50 до около 120 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 60 до около 100 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 75 до около 150 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 75 до около 120 нм. В некоторых вариантах реализации LNP имеют размер от около 75 до около 100 нм. Если не указано иное, все упомянутые здесь размеры представляют собой средние размеры (диаметры) полностью сформированных наночастиц, измеренные динамическим светорассеянием на Malvern Zetasizer. Образец наночастиц разводят в фосфатно-солевом буфере (PBS) так, чтобы интенсивность излучения составляла приблизительно 200-400 кгц/с. Данные представлены как средневзвешенное значение показателя интенсивности (Z-средний диаметр).
В некоторых вариантах осуществления изобретения LNP сформированы со средней эффективностью инкапсуляции в диапазоне от около 50% до около 100%. В некоторых вариантах реализации LNP сформированы со средней эффективностью инкапсуляции в диапазоне от около 50% до около 95%. В
- 58 046244 некоторых вариантах реализации LNP сформированы со средней эффективностью инкапсуляции в диапазоне от около 70% до около 90%. В некоторых вариантах реализации LNP сформированы со средней эффективностью инкапсуляции в диапазоне от около 90% до около 100%. В некоторых вариантах реализации LNP сформированы со средней эффективностью инкапсуляции в диапазоне от около 75% до около 95%.
Карго.
Груз, доставляемый с помощью композиции LNP, может быть биологически активным агентом. В некоторых вариантах реализации груз представляет собой или включает один или несколько биологически активных агентов, таких как мРНК, гидовая РНК, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, шаблонная нуклеиновая кислота, РНК-направляемый связывающий ДНК агент, антитело (например, моноклональное, химерное, гуманизированное, нанотело и их фрагменты и т. д.), холестерин, гормон, пептид, белок, химиотерапевтические и другие типы противоопухолевых агентов, низкомолекулярный препарат, витамин, кофактор, нуклеозид, нуклеотид, олигонуклеотид, ферментативная нуклеиновая кислота, антисмысловая нуклеиновая кислота, триплекс-образующий олигонуклеотид, антисмысловой ДНК или РНК состав, химерный ДНК:РНК состав, аллозим, аптамер, рибозим, приманки и их аналоги, плазмиды и другие типы векторов, а также малая молекула нуклеиновой кислоты, PHKi агент, короткая интерферирующая нуклеиновая кислота (siNA), короткая интерферирующая РНК (миРНК), двухцепочечная РНК (dsPHK), микро-РНК (miPHK), короткая шпилечная РНК (shPHK) и самореплицирующаяся РНК (кодирующая репликазу ферментативная активность и способность управлять собственной репликацией или амплификацией in vivo) молекул, пептидная нуклеиновая кислота (PNA), заблокированный рибонуклеотид нуклеиновой кислоты (LNA), морфолин нуклеотид, нуклеиновая кислота треозы (TNA), нуклеиновая кислота гликоля (GNA), si-миРНК (малая внутренне сегментированная интерферирующая РНК) и iPHK (асимметричная интерферирующая РНК). Приведенный выше список биологически активных агентов является только примерным и не предназначен для ограничения. Такие соединения могут быть очищенными или частично очищенными, могут быть встречающимися в природе или синтетическими, и могут быть химически модифицированными.
Карго, доставляемый посредством композиции LNP, может представлять собой РНК, такую как молекула мРНК, кодирующая интересующий белок. К примеру, включена мРНК для экспрессии белка, такого как зеленый флуоресцентный белок (GFP), агент связывания ДНК, управляемый РНК, или нуклеаза Cas. Предлагаются композиции LNP, которые включают мРНК нуклеазы Cas, к примеру мРНК нуклеазы Cas 2 класса, которая обеспечивает экспрессию в клетке нуклеазы Cas 2 класса, такой как белок Cas9 или Cpf 1. Кроме того, карго может содержать одну или несколько гидовых РНК или нуклеиновых кислот, кодирующих гидовые РНК. Матричная нуклеиновая кислота, к примеру, для репарации или рекомбинации, также может быть включена в композицию, или матричная нуклеиновая кислота может быть использована в способах, описанных в данном документе. В подварианте осуществления карго содержит мРНК, которая кодирует Streptococcus pyogenes Cas9, необязательно, и гРНК S. pyogenes. В дополнительном подварианте осуществления изобретения карго включает мРНК, которая кодирует Neisseria meningitidis Cas9, необязательно, и nme гРНК.
мРНК относится к полинуклеотиду и включает открытую рамку считывания, которая может транслироваться в полипептид (т.е. может служить субстратом для трансляции рибосомой и аминоацилированными tPHK). мРНК может включать фосфатно-сахарный остов, включая остатки рибозы или их аналоги, к примеру, остатки 2'-метокси-рибозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения сахары фосфатно-сахарного остова мРНК состоят в основном из остатков рибозы, остатков 2'-метоксирибозы или их комбинации. Как правило, мРНК не содержат значительного количества остатков тимидина (к примеру, 0 остатков или менее 30, 20, 10, 5, 4, 3 или 2 остатков тимидина; или менее 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,2% или 0,1% тимидина). мРНК может содержать модифицированные уридины в некоторых или во всех положениях уридина.
CRISPR/Cas карго.
В некоторых вариантах осуществления изобретения раскрытые композиции содержат мРНК, кодирующую агент связывания ДНК, управляемый РНК, такой как нуклеаза Cas. В конкретных вариантах осуществления изобретения раскрытые композиции содержат мРНК, кодирующую нуклеазу Cas 2 класса, такую как S. Pyogenes Cas9.
Используемый здесь термин агент, связывающий ДНК, управляемый РНК, означает полипептид или комплекс полипептидов, обладающих активностью связывания РНК и ДНК, или субъединицу связывания ДНК такого комплекса, где активность связывания ДНК является специфичной для последовательности и зависит от последовательности РНК. Типичные ДНК-связывающие агенты, управляемые РНК, включают Cas- расщепления/никазы и их инактивированные формы (ДНК-связывающие агенты dCas). Используемый здесь термин нуклеаза Cas охватывает Cas- расщепления, Cas-никазы и агенты, связывающие ДНК dCas. Cas-расщепляющие/никазы и dCas ДНК-связывающие агенты включают комплекс Csm или Cmr системы CRISPR типа III, ее субъединицу Cas10, Csm1 или Cmr2, комплекс Cascade системы CRISPR типа I, ее субъединицу Cas3 и класс 2 Cas нуклеазы. В данном контексте нуклеаза Cas 2 класса представляет собой одноцепочечный полипептид с РНК-направляемой ДНК-связывающей ак
- 59 046244 тивностью. Нуклеазы Cas 2 класса включают расщепления/никазы Cas 2 класса (например, варианты Н840А, D10A или N863A), которые дополнительно обладают РНК-направляемой ДНК-расщепляющей или никазной активностью, и ДНК-связывающие агенты класса 2 dCas, в которых активность расщепления/никазы является инактивированной. Нуклеазы Cas 2 класса включают, к примеру, Cas9, Cpf1, C2c1, C2c2, С2с3, HF Cas9 (к примеру, варианты N497A, R661A, Q695A, Q926A), HypaCas9 (к примеру, варианты N692A, М694А, Q695A, Н698А), eSPCas9(1.0) (к примеру, варианты К81ОА, К1ООЗА, R1060A) и eSPCas9(1.1) (к примеру, варианты К848А, К1ООЗА, R1060A) и их модификации. Белок Cpf1, Zetsche et al., Cell, 163: 1-13 (2015), гомологичен Cas9 и содержит RuvC-подобный домен нуклеазы. Последовательности Cpf1 Zetsche полностью включены в качестве ссылки. См., к примеру, Zetsche, Таблицы S1 и S3. См., к примеру, Makarova et al., Nat RevMicrobiol, 13(11): 722-36 (2015); Shmakov et al., Molecular Cell, 60:385-397 (2015).
Используемый здесь термин рибонуклеопротеин (RNP) или комплекс RNP относится к гидовой РНК вместе с РНК-направляемым ДНК-связывающим агентом, таким как Cas-нуклеаза, например, Casрасщепление, Cas-никаза или ДНК-связывающий агент dCas (например, Cas9). В некоторых вариантах реализации гидовая РНК направляет РНК-направляемый связывающий агент ДНК, такой как Cas9, к целевой последовательности, а гидовая РНК гибридизируется с целевой последовательностью и связывается с ней; в случаях, когда агент представляет собой расщепление или никазу, за связыванием может следовать отщепление или удачная сочетаемость пар при скрещивании.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения карго для композиции LNP включает по меньшей мере одну гидовую РНК, содержащую гидовые последовательности, которые направляют РНК-направляемый ДНК-связывающий агент, который может быть нуклеазой (к примеру, нуклеазой Cas, такой как Cas9), к целевой ДНК. гРНК может направлять нуклеазу Cas или нуклеазу Cas 2 класса к целевой последовательности на целевой молекуле нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления изобретения гРНК связывается с нуклеазой Cas 2 класса и обеспечивает специфичность расщепления. В некоторых вариантах осуществления изобретения гРНК и нуклеаза Cas могут образовывать рибонуклеопротеин (RNP), к примеру, комплекс CRISPR/Cas, такой как комплекс CRISPR/Cas9. В некоторых вариантах осуществления изобретения комплекс CRISPR/Cas может представлять собой комплекс CRISPR/Cas9 II типа. В некоторых вариантах осуществления изобретения комплекс CRISPR/Cas может представлять собой комплекс CRISPR/Cas V типа, такой как комплекс Cpf1/гидовая РНК. Cas-нуклеазы и родственные гРНК могут быть спарены. Структуры каркаса гРНК, которые соединяются с каждой нуклеазой Cas 2 класса, различаются в зависимости от конкретной системы CRISPR/Cas.
Гидовая РНК, гРНК и просто гидовая используются здесь взаимозаменяемо для обозначения родственной гидовой нуклеиновой кислоты для РНК-направляемого ДНК-связывающего агента. гРНК может быть либо сгРНК (также известной как CRISPR РНК), либо комбинацией сгРНК и trPHK (также известной как tracrPHK). Гидовые РНК могут включать модифицированные РНК, как описано в данном документе. сгРНК и trPHK могут быть связаны как одна молекула РНК (одиночная гидовая РНК, огРНК) или как две отдельные молекулы РНК (двойная гидовая РНК, дгРНК). Гидовая РНК или гРНК относится к каждому типу. trPHK может быть природной последовательностью или последовательностью trPHK с модификациями или вариациями по сравнению с встречающимися в природе последовательностями.
В данном контексте гидовая последовательность относится к последовательности в гидовой РНК, которая комплементарна к целевой последовательности и функционирует, чтобы направлять гидовую РНК к целевой последовательности для связывания или модификации (к примеру, расщепления) с помощью РНК-направляемого ДНК-связывающего агента. Гидовая последовательность также может называться нацеливающей последовательностью или спейсерной последовательностью. Гидовая последовательность может иметь длину 20 пар оснований, к примеру, в случае Streptococcus pyogenes (т.е. Spy Cas9) и родственных гомологов/ортологов Cas9. Более короткие или более длинные последовательности также могут использоваться в качестве направляющих, к примеру, длиной 15, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения целевая последовательность находится, к примеру, в гене или хромосоме и комплементарна к гидовой последовательности. В некоторых вариантах осуществления изобретения степень комплементарности или идентичности между гидовой последовательностью и соответствующей ей целевой последовательностью может составлять примерно или по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%. В некоторых вариантах осуществления изобретения гидовая последовательность и целевая область могут быть на 100% комплементарными или идентичными в области по меньшей мере из 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеотидов. В других вариантах осуществления изобретения гидовая последовательность и целевая область могут содержать по меньшей мере одно несоответствие. К примеру, гидовая последовательность и целевая последовательность могут содержать 1, 2, 3 или 4 несовпадения, где общая длина целевой последовательности составляет по меньшей мере 17, 18, 19, 20 или более пар оснований. В некоторых вариантах осуществления изобретения гидовая последовательность и целевая область могут содержать 1-4 несовпадения, где гидовая последовательность содержит по меньшей мере 17, 18, 19, 20 или более нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения гидовая последовательность и целевая
- 60 046244 область могут содержать 1, 2, 3 или 4 несовпадения, где гидовая последовательность содержит 20 нуклеотидов.
Последовательности-мишени для РНК-направляемых ДНК-связывающих белков, таких как белки Cas, включают как положительные, так и отрицательные цепи геномной ДНК (т.е. заданную последовательность и обратный комплемент последовательности), поскольку субстратом нуклеиновой кислоты для белка Cas является двухцепочечный нуклеиновый кислота. Соответственно, когда говорится, что гидовая последовательность комплементарна целевой последовательности, следует понимать, что гидовая последовательность может направлять гРНК на связывание с обратным комплементом целевой последовательности. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, где гидовая последовательность связывает обратный комплемент целевой последовательности, гидовая последовательность идентична определенным нуклеотидам целевой последовательности (к примеру, целевая последовательность, не включающая РАМ), за исключением замены U на T в гидовой последовательности.
Длина целевой последовательности может зависеть от системы CRISPR/Cas и используемых компонентов. К примеру, разные нуклеазы Cas 2 класса из разных видов бактерий имеют разную оптимальную длину целевой последовательности. Соответственно, последовательность нацеливания может включать 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50 или более 50 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах осуществления изобретения длина целевой последовательности на 0, 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов длиннее или короче гидовой последовательности природной системы CRISPR/Cas. В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеаза Cas и каркас гРНК будут происходить из одной и той же системы CRISPR/Cas. В некоторых вариантах осуществления изобретения нацеливающая последовательность может содержать или состоять из 18-24 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения нацеливающая последовательность может содержать или состоять из 19-21 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления изобретения нацеливающая последовательность может содержать или состоять из 20 нуклеотидов.
В некоторых вариантах осуществления изобретения огРНК представляет собой Cas9 огРНК, способную опосредовать управляемое РНК расщепление ДНК белком Cas9. В некоторых вариантах осуществления изобретения огРНК представляет собой огРНК Cpf1, способную опосредовать управляемое РНК расщепление ДНК белком Cpf1. В некоторых вариантах осуществления изобретения гРНК содержит сгРНК и tracr-PHK, достаточные для образования активного комплекса с белком Cas9 и опосредованного РНК-направляемого расщепления ДНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения гРНК содержит сгРНК, достаточные для образования активного комплекса с белком Cpf1 и опосредованного РНК-направляемого расщепления ДНК. Смотри Zetsche 2015.
Некоторые варианты осуществления изобретения также предоставляют нуклеиновые кислоты, к примеру, кассеты экспрессии, кодирующие гРНК, описанную в данном документе. Нуклеиновая кислота гидовой РНК используется здесь для обозначения гидовой РНК (к примеру, огРНК или дгРНК) и кассеты экспрессии гидовой РНК, которая представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или несколько гидовых РНК.
Модифицированные РНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения липидные композиции, такие как композиции LNP, содержат модифицированные нуклеиновые кислоты, включая модифицированные РНК.
Модифицированные нуклеозиды или нуклеотиды могут присутствовать в РНК, к примеру гРНК или мРНК. гРНК или мРНК, содержащие, к примеру, один или несколько модифицированных нуклеозидов или нуклеотидов, называются модифицированной РНК для описания присутствия одного или нескольких неприродных и/или встречающихся в природе компонентов или конфигураций, которые используются вместо или в дополнение с каноническими вычетами A, G, C и U. В некоторых вариантах осуществления изобретения модифицированная РНК синтезируется с неканоническим нуклеозидом или нуклеотидом, называемым здесь модифицированной.
Модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды могут включать одно или несколько из: (i) изменения, к примеру, замены одного или обоих несвязывающих фосфатных атомов кислорода и/или одного или нескольких связывающих фосфатных атомов кислорода в связи фосфодиэфирного остова (примерная модификация остова); (ii) изменения, к примеру, замены составляющей сахара рибозы, к примеру 2'гидроксила в сахаре рибозы (примерная модификация сахара); (iii) полной замены фосфатной части линкерами дефосфо (типичная модификация основной цепи); (iv) модификации или замены встречающегося в природе азотистого основания, в том числе неканоническим азотистым основанием (примерная модификация основания); (v) замены или модификации рибозо-фосфатного остова (примерная модификация скелета); (vi) модификация 3'-конца или 5'-конца олигонуклеотида, к примеру, удаление, модификация или замена концевой фосфатной группы или конъюгация фрагмента, кэпа или линкера (такие модификации 3'-или 5'-кэпа могут включать сахар и/или модификацию основной цепи); и (vii) модификации или замены сахара (примерная модификация сахара).
Некоторые варианты осуществления изобретения включают модификацию мРНК, гРНК или нуклеиновой кислоты. Некоторые варианты осуществления изобретения содержат модификацию 5'-конца мРНК, гРНК или нуклеиновой кислоты. Некоторые варианты осуществления изобретения содержат мо
- 61 046244 дификацию З'-конца мРНК, гРНК или нуклеиновой кислоты. Модифицированная РНК может содержать модификации на 5'-конце и 3'-конце. Модифицированная РНК может содержать один или несколько модифицированных остатков в неконцевых местах. В некоторых вариантах осуществления изобретения гРНК включает по меньшей мере один модифицированный остаток. В некоторых вариантах осуществления изобретения мРНК включает по меньшей мере один модифицированный остаток.
Немодифицированные нуклеиновые кислоты могут быть подвержены деградации, к примеру, внутриклеточными нуклеазами или нуклеазами, обнаруженными в сыворотке. К примеру, нуклеазы могут гидролизовать фосфодиэфирные связи нуклеиновых кислот. Соответственно, в одном аспекте РНК (к примеру, мРНК, гРНК), описанные в настоящем документе, могут содержать один или несколько модифицированных нуклеозидов или нуклеотидов, к примеру, для придания стабильности по отношению к внутриклеточным нуклеазам или нуклеазам на основе сыворотки. В некоторых вариантах осуществления изобретения описанные здесь модифицированные молекулы гРНК могут проявлять сниженный врожденный иммунный ответ при введении в популяцию клеток как in vivo, так и ex vivo. Термин врожденный иммунный ответ включает клеточный ответ на экзогенные нуклеиновые кислоты, включая одноцепочечные нуклеиновые кислоты, который включает индукцию экспрессии и высвобождения цитокинов, особенно интерферонов, и гибель клеток.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления изобретения РНК или нуклеиновая кислота в раскрытых композициях LNP содержит по меньшей мере одну модификацию, которая придает повышенную или улучшенную стабильность нуклеиновой кислоте, включая, к примеру, повышенную устойчивость к расщеплению нуклеазами in vivo. Используемые в данном документе термины модификация и модифицированный, поскольку такие термины относятся к нуклеиновым кислотам, представленным в настоящем документе, включают по меньшей мере одно изменение, которое предпочтительно увеличивает стабильность и делает РНК или нуклеиновую кислоту более стабильной (к примеру, устойчивой к расщеплению нуклеазами), чем версия РНК или нуклеиновой кислоты дикого типа или встречающаяся в природе. В контексте настоящего описания термины стабильный и стабильность относятся к нуклеиновым кислотам настоящего изобретения и, в частности, в отношении РНК, относятся к повышенной или улучшенной устойчивости к деградации, к примеру, нуклеазами (т.е. эндонуклеазы или экзонуклеазы), которые обычно способны разрушать такую РНК. Повышенная стабильность может включать, к примеру, меньшую чувствительность к гидролизу или другому разрушению эндогенными ферментами (к примеру, эндонуклеазами или экзонуклеазами) или условиями в клетке или ткани-мишени, тем самым увеличивая или усиливая пребывание такой РНК или нуклеиновой кислоты в клетке-мишени, ткани, субъекте и/или цитоплазме. Стабилизированные молекулы РНК или нуклеиновой кислоты, представленные в настоящем документе, демонстрируют более длительные периоды полужизни по сравнению с их встречающимися в природе немодифицированными аналогами (к примеру, версией мРНК дикого типа). Также под терминами модификация и модифицированный подразумеваются термины, относящиеся к мРНК композиций LNP, раскрытых в данном документе, и изменения, которые улучшают или усиливают трансляцию нуклеиновых кислот мРНК, включая, к примеру, включение последовательностей, которые действуют в инициации трансляции белка (к примеру, консенсусной последовательности Козак). (Kozak, M., Nucleic Acids Res 15 (20):8125-48 (1987)).
В некоторых вариантах осуществления изобретения РНК или нуклеиновая кислота описанных здесь композиций LNP подвергли химической или биологической модификации, чтобы сделать ее более стабильной. Примеры модификаций РНК, такой как мРНК, включают истощение основания (к примеру, путем делеции или замены одного нуклеотида на другой) или модификацию основания, к примеру, химическую модификацию основания. Фраза химические модификации, используемая в данном документе, включает модификации, которые вводят химические составы, которые отличаются от тех, которые наблюдаются в природных РНК или нуклеиновых кислотах, к примеру, ковалентные модификации, такие как введение модифицированных нуклеотидов (к примеру, нуклеотидных аналогов или включение боковых групп, которые в природе не встречаются в таких молекулах РНК или нуклеиновых кислот).
В некоторых вариантах осуществления модификации основной цепи фосфатная группа модифицированного остатка может быть модифицирована путем замены одного или нескольких атомов кислорода другим заместителем. Кроме того, модифицированный остаток, к примеру, модифицированный остаток, присутствующий в модифицированной нуклеиновой кислоте, может включать полную замену немодифицированного фосфатного фрагмента модифицированной фосфатной группой, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления изобретения модификация основной цепи фосфатной основной цепи может включать изменения, которые приводят либо к незаряженному линкеру, либо к заряженному линкеру с несимметричным распределением заряда.
Примеры модифицированных фосфатных групп включают фосфоротиоат, фосфороселенаты, боранофосфаты, сложные эфиры боранофосфата, гидрофосфонаты, фосфороамидаты, алкил- или арилфосфонаты и фосфотриэфиры. Атом фосфора в немодифицированной фосфатной группе является ахиральным. Однако замена одного из атомов кислорода без образования мостиков на один из вышеуказанных атомов или групп атомов может сделать атом фосфора хиральным. Стереогенный атом фосфора может иметь конфигурацию R (здесь Rp) или конфигурацию S (здесь Sp). Остов также можно модифицировать
- 62 046244 путем замены мостикового кислорода (то есть кислорода, который связывает фосфат с нуклеозидом) на азот (мостиковые фосфорамидаты), серу (мостиковые фосфоротиоаты) и углерод (мостиковые метиленфосфонаты). Замена может происходить либо у связующего кислорода, либо у обоих связывающих атомов кислорода. Фосфатная группа может быть заменена не содержащими фосфор соединителями в некоторых модификациях основной цепи. В некоторых вариантах осуществления изобретения заряженная фосфатная группа может быть заменена нейтральным фрагментом. Примеры фрагментов, которые могут заменять фосфатную группу, могут включать, без ограничения, к примеру, метилфосфонат, гидроксиламино, силоксан, карбонат, карбоксиметил, карбамат, амид, тиоэфир, линкер оксида этилена, сульфонат, сульфонамид, тиоформацеталь, формацеталь, оксим, метиленимино, метиленметилимино, метиленгидразо, метилендиметилгидразо и метиленоксиметилимино.
мРНК.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция или состав, раскрытые в настоящем документе, содержат мРНК, содержащую открытую рамку считывания (ORF), кодирующую агент связывания ДНК, управляемый РНК, такой как нуклеаза Cas или нуклеаза Cas 2 класса, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления изобретения предоставляется, используется или вводится мРНК, содержащая ORF, кодирующую управляемый РНК связывающий ДНК агент, такой как нуклеаза Cas или нуклеаза Cas 2 класса. мРНК может содержать один или несколько из 5'-кэпа, 5'-нетранслируемой области (UTR), 3'-UTR и полиаденинового хвоста. мРНК может содержать модифицированную открытую рамку считывания, к примеру, для кодирования последовательности ядерной локализации или для использования альтернативных кодонов для кодирования белка.
мРНК в раскрытых композициях LNP может кодировать, к примеру, секретируемый гормон, фермент, рецептор, полипептид, пептид или другой представляющий интерес белок, который обычно секретируется. В одном варианте осуществления изобретения мРНК может необязательно иметь химические или биологические модификации, которые, к примеру, улучшают стабильность и/или период полужизни такой мРНК или которые улучшают или иным образом облегчают продукцию белка.
Кроме того, подходящие модификации включают изменения в одном или нескольких нуклеотидах кодона, так что кодон кодирует ту же аминокислоту, но является более стабильным, чем кодон, обнаруженный в версии мРНК дикого типа. К примеру, была продемонстрирована обратная зависимость между стабильностью РНК и большим количеством остатков цитидинов (С) и/или уридинов (U), и было обнаружено, что РНК, лишенная остатков С и U, устойчива к большинству РНКаз (Heidenreich, et al., J. Biol Chem. 269, 2131-8 (1994)). В некоторых вариантах осуществления изобретения количество остатков С и/или U в последовательности мРНК снижено. В другом варианте осуществления изобретения количество остатков С и/или U снижается путем замены одного кодона, кодирующего конкретную аминокислоту, на другой кодон, кодирующий ту же или родственную аминокислоту. Предполагаемые модификации нуклеиновых кислот мРНК также включают включение псевдоуридинов. Включение псевдоуридинов в нуклеиновую структуру мРНК может повысить стабильность и трансляционную способность, а также снизить иммуногенность in vivo. См., к примеру, Kariko, K., et al., Molecular Therapy 16 (11): 1833-1840 (2008). Замены и модификации мРНК могут быть выполнены способами, хорошо известными квалифицированному специалисту в данной области.
Ограничения на уменьшение количества остатков C и U в последовательности, вероятно, будут больше в кодирующей области мРНК по сравнению с нетранслируемой областью (т.е. вероятно, будет невозможно удалить все остатки C и U присутствующие в сообщении, сохраняя при этом способность сообщения кодировать желаемую аминокислотную последовательность). Однако вырожденность генетического кода дает возможность снизить количество остатков C и/или U, присутствующих в последовательности, при сохранении той же кодирующей способности (т.е. в зависимости от того, какая аминокислота кодируется кодоном, возможны несколько различных возможностей модификации последовательностей РНК).
Термин модификация также включает, к примеру, включение ненуклеотидных связей или модифицированных нуклеотидов в последовательности мРНК (к примеру, модификации одного или обоих 3'- и 5'-концов молекулы мРНК, кодирующей функционально секретируемый белок или фермент). Такие модификации включают добавление оснований к последовательности мРНК (к примеру, включение полиA-хвоста или более длинного поли-А-хвоста), изменение 3'-UTR или 5'-UTR, комплексообразование мРНК с агентом (к примеру, белком или комплементарной молекулой нуклеиновой кислоты), а также включение элементов, которые изменяют структуру молекулы мРНК (к примеру, образующие вторичные структуры).
Считается, что поли-А-хвост стабилизирует естественных посланников. Следовательно, в одном варианте осуществления длинный поли-А-хвост может быть добавлен к молекуле мРНК, что делает мРНК более стабильной. Поли-А-хвосты могут быть добавлены с использованием множества техник признанных в данной области. К примеру, длинные поли-А-хвосты могут быть добавлены к синтетической или транскрибируемой in vitro мРНК с использованием поли-А-полимеразы (Yokoe, et al., Nature Biotechnology. 1996; 14: 1252-1256). Вектор транскрипции также может кодировать длинные поли-Ахвосты. Кроме того, поли-А-хвосты могут быть добавлены путем транскрипции непосредственно из про
- 63 046244 дуктов PCR. В одном варианте длина поли A-хвоста составляет по меньшей мере примерно 90, 200, 300, 400 по меньшей мере 500 нуклеотидов. В одном варианте осуществления изобретения длину поли-Aхвоста регулируют для контроля стабильности модифицированной молекулы мРНК и, таким образом, транскрипции белка. К примеру, поскольку длина поли-A-хвоста может влиять на период полужизни молекулы мРНК, длину поли-A-хвоста можно отрегулировать, чтобы изменить уровень устойчивости мРНК к нуклеазам и, таким образом, контролировать временной ход экспрессии белка в клетке. В одном варианте осуществления изобретения стабилизированные молекулы мРНК являются достаточно устойчивыми к деградации in vivo (к примеру, нуклеазами), так что они могут быть доставлены в клеткумишень без носителя для переноса.
В одном варианте осуществления изобретения мРНК может быть модифицирована путем включения 3' и/или 5' нетранслируемых (UTR) последовательностей, которые в природе не обнаруживаются в мРНК дикого типа. В одном варианте осуществления 3'-и/или 5'-фланкирующая последовательность, которая естественным образом фланкирует мРНК и кодирует второй неродственный белок, может быть включена в нуклеотидную последовательность молекулы мРНК, кодирующей терапевтический или функциональный белок, для ее модификации. К примеру, 3' или 5' последовательности из молекул мРНК, которые являются стабильными (к примеру, глобин, актин, GAPDH, тубулин, гистон или ферменты цикла лимонной кислоты), могут быть включены в 3' и/или 5' область смысловой молекулы нуклеиновой кислоты мРНК для увеличения стабильности молекулы смысловой мРНК. См., к примеру, US2003/0083272.
Более подробные описания модификаций мРНК можно найти в US2017/0210698A1, на страницах 57-68, содержание которого включено в настоящий документ.
Матричная нуклеиновая кислота.
Раскрытые здесь композиции и способы могут включать матричную нуклеиновую кислоту. Матрица может использоваться для изменения или вставки последовательности нуклеиновой кислоты в сайтмишень или рядом с ним для РНК-направляемого ДНК-связывающего белка, такого как нуклеаза Cas, к примеру, нуклеаза Cas 2 класса. В некоторых вариантах осуществления изобретения способы включают введение шаблона в ячейку. В некоторых вариантах осуществления изобретения может быть предоставлен один шаблон. В других вариантах осуществления изобретения могут быть предоставлены два или более шаблонов, так что редактирование может происходить на двух или более целевых сайтах. К примеру, могут быть предоставлены разные шаблоны для редактирования одного гена в клетке или двух разных генов в клетке.
В некоторых вариантах осуществления изобретения шаблон можно использовать при гомологичной рекомбинации. В некоторых вариантах осуществления изобретения гомологичная рекомбинация может привести к интеграции матричной последовательности или части матричной последовательности в молекулу нуклеиновой кислоты-мишени. В других вариантах осуществления изобретения матрицу можно использовать в гомологически направленной репарации, которая включает инвазию цепи ДНК в сайт расщепления в нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах осуществления изобретения гомологически направленная репарация может привести к включению матричной последовательности в отредактированную молекулу нуклеиновой кислоты-мишени. В еще других вариантах осуществления изобретения матрицу можно использовать при редактировании гена, опосредованном негомологичным соединением концов. В некоторых вариантах осуществления изобретения матричная последовательность не имеет сходства с последовательностью нуклеиновой кислоты рядом с сайтом расщепления. В некоторых вариантах осуществления изобретения включен шаблон или часть последовательности шаблона. В некоторых вариантах осуществления изобретения матрица включает фланкирующие последовательности инвертированного концевого повтора (ITR).
В некоторых вариантах осуществления изобретения матричная последовательность может соответствовать, содержать или состоять из эндогенной последовательности клетки-мишени. Он также или альтернативно может соответствовать, содержать или состоять из экзогенной последовательности клеткимишени. Используемый здесь термин эндогенная последовательность относится к последовательности, которая является нативной для клетки. Термин экзогенная последовательность относится к последовательности, которая не является нативной для клетки, или к последовательности, естественная локализация которой в геноме клетки находится в другом месте. В некоторых вариантах осуществления изобретения эндогенная последовательность может быть геномной последовательностью клетки. В некоторых вариантах осуществления изобретения эндогенная последовательность может быть хромосомной или внехромосомной последовательностью. В некоторых вариантах осуществления изобретения эндогенная последовательность может быть плазмидной последовательностью клетки.
В некоторых вариантах осуществления изобретения матрица содержит ss,3HK или dS'^K, содержащие фланкирующие последовательности обратного концевого повтора (ITR). В некоторых вариантах осуществления изобретения матрица представлена в виде вектора, плазмида, миникольца, нанокольца или продукта PCR.
В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота очищается. В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота очищается с использованием метода осаж
- 64 046244 дения (к примеру, осаждения LiCl, осаждения спиртом или эквивалентного метода, к примеру, как описано в данном документе). В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота очищается с использованием метода на основе хроматографии, такого как метод на основе HPLC или эквивалентный метод (к примеру, как описано в настоящем документе). В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота очищается с использованием как метода осаждения (например, осаждение LiCl), так и метода на основе HPLC. В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота очищается фильтрацией в тангенциальном потоке (TFF).
Соединения или композиции обычно, но не обязательно, включают один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей. Термин эксципиент включает любой ингредиент, отличный от соединения (соединений) настоящего изобретения, другого липидного компонента(ов) и биологически активного агента. Наполнитель может придавать композициям функциональные (к примеру, контроль скорости высвобождения лекарственного средства) и/или нефункциональные (к примеру, технологическая добавка или разбавитель) характеристики. Выбор наполнителя будет в значительной степени зависеть от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние наполнителя на растворимость и стабильность и природа лекарственной формы.
Составы для парентерального введения обычно представляют собой водные или масляные растворы или суспензии. Если состав является водным, вспомогательные вещества, такие как сахара (включая, помимо прочего, глюкозу, маннит, сорбит и т.д.), соли, углеводы и буферные агенты (предпочтительно с pH от 3 до 9), но для некоторых применений они могут быть более подходящим составом со стерильным неводным раствором или в виде высушенной формы для использования в сочетании с подходящим носителем, таким как стерильная апирогенная вода (WFI).
Хотя изобретения описаны вместе с проиллюстрированными вариантами осуществления изобретения, следует понимать, что они не предназначены для ограничения изобретений этими вариантами осуществления. Напротив, изобретения предназначены для охвата всех альтернатив, модификаций и эквивалентов, включая эквиваленты конкретных признаков, которые могут быть включены в изобретение, как определено прилагаемой формулой изобретения.
Как предшествующее общее описание, так и подробное описание, а также следующие примеры являются только иллюстративными и пояснительными и не ограничивают идеи. Заголовки разделов, используемые в данном документе, предназначены только для организационных целей и никоим образом не должны рассматриваться как ограничение желаемого предмета. В случае, если любая литература, включенная посредством ссылки, противоречит любому термину, определенному в этом описании, это описание имеет преимущественную силу. Все диапазоны, указанные в приложении, охватывают конечные точки, если не указано иное.
Определения.
Следует отметить, что при использовании в этой заявке формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если контекст явно не диктует иное. Таким образом, к примеру, ссылка на состав включает множество композиций, а ссылка на ячейку включает множество ячеек и т.п. Использование или является включающим и означает и/или, если не указано иное.
Если специально не указано в вышеприведенном описании, варианты осуществления в описании, которые повторяют содержащие различные компоненты, также рассматриваются как состоящие из или состоящие существенным образом из перечисленных компонентов; варианты осуществления в описании, которые повторяют состоящие из различных компонентов, также рассматриваются как содержащие или состоящие существенным образом из перечисленных компонентов; варианты осуществления изобретения в описании, которые рассказывают о различных компонентах, также рассматриваются как при перечисленных компонентах; и варианты осуществления в описании, которые повторяют состоящие по существу из различных компонентов, также рассматриваются как состоящие из или содержащие перечисленные компоненты (эта взаимозаменяемость не применяется к использованию этих терминов в формуле изобретения).
Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. Измеренные и измеряемые значения считаются приблизительными с учетом значащих цифр и погрешности, связанной с измерением. Используемые в этой заявке термины примерно и приблизительно имеют свои значения, понятные в данной области техники; использование одного по сравнению с другим не обязательно подразумевает разную область применения. Если не указано иное, цифры, используемые в этой заявке, с модифицирующим термином или без него, к примеру, примерно или приблизительно, следует понимать как включающие нормальное расхождение и/или колебания, как будет принято во внимание квалифицирующим специалистом в соответствующей области. В некоторых вариантах осуществления изобретения термин приблизительно или примерно относится к диапазону значений, которые находятся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или меньше в любом направлении (больше или меньше) заявленного ссылочного значения, если иное не указано или иное не очевидно из контекста (кроме случаев, когда такое число превышает 100% возможного значения).
Используемый здесь термин установление контакта означает установление физического соедине
- 65 046244 ния между двумя или более объектами. К примеру, контактирование клетки млекопитающего с композицией наночастиц означает, что клетка млекопитающего и наночастица созданы для совместной физической связи. Способы контактирования клеток с внешними объектами как in vivo, так и ex vivo хорошо известны в области биологии. К примеру, приведение в контакт композиции наночастиц и клетки млекопитающего, расположенной внутри млекопитающего, можно осуществлять различными путями введения (к примеру, внутривенным, внутримышечным, внутрикожным и подкожным) и может включать различные количества композиций наночастиц. Более того, композиция наночастиц может контактировать с более чем одной клеткой млекопитающего.
Используемый здесь термин доставка означает доставление объекта адресату. К примеру, доставка терапевтического и/или профилактического средства субъекту может включать введение субъекту композиции наночастиц, включая терапевтическое и/или профилактическое средство (к примеру, внутривенным, внутримышечным, внутрикожным или подкожным путем). Введение композиции наночастиц в клетку млекопитающего или млекопитающего может включать контактирование одной или нескольких клеток с композицией наночастиц.
Используемый здесь термин эффективность инкапсуляции относится к количеству терапевтического и/или профилактического средства, которое становится частью композиции наночастиц, по отношению к начальному общему количеству терапевтического и/или профилактического средства, используемого при приготовлении композиции наночастиц. К примеру, если 97 мг терапевтического и/или профилактического средства инкапсулировано в композицию наночастиц из общих 100 мг терапевтического и/или профилактического средства, первоначально предоставленных в композицию, эффективность капсулирования может составлять 97%. Используемый здесь термин инкапсуляция может относиться к полному, существенному или частичному заключению, ограничению, окружению или заключению в оболочку.
В данном контексте термин биоразлагаемый используется для обозначения материалов, которые при введении в клетки разрушаются клеточными механизмами (к примеру, ферментативной деградацией) или гидролизом на компоненты, которые клетки могут повторно использовать или утилизировать без значительного токсического воздействия(й) на клетки. В некоторых вариантах осуществления изобретения компоненты, образующиеся при разложении биоразлагаемого материала, не вызывают воспаления и/или других неблагоприятных эффектов in vivo. В некоторых вариантах осуществления изобретения биоразлагаемые материалы расщепляются ферментативно. Альтернативно или дополнительно в некоторых вариантах осуществления биоразлагаемые материалы разрушаются путем гидролиза.
В данном контексте соотношение N/P представляет собой молярное соотношение ионизируемых (в физиологическом диапазоне pH) атомов азота в липиде (к примеру, соединении формулы I) к фосфатным группам в РНК, к примеру, в композиции наночастиц, включающей липидный компонент и РНК.
Композиции также могут включать соли одного или нескольких соединений. Соли могут быть фармацевтически приемлемыми солями. Используемый здесь термин фармацевтически приемлемые соли относится к производным описанных соединений, в которых исходное соединение изменено путем преобразования существующего кислотного или основного фрагмента в его солевую форму (например, путем взаимодействия группы свободного основания с подходящей органической кислотой). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются ими, соли минеральных или органических кислот основных остатков, таких как амины; щелочные или органические соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты; и тому подобное. Типичные кислотно-аддитивные соли включают ацетат, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, гемисульфат, гептонат, гексаноат, гидробромид, гидрохлорид, гидроиодид, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат, ундеканоат, валератные соли и т.п. Типичные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают натрий, литий, калий, кальций, магний и т.п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и аминов, включая, помимо прочего, аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, триэтиламин, этиламин и тому подобное. Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения включают обычные нетоксичные соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения можно синтезировать из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную составляющую, обычными химическими методами. Обычно такие соли могут быть получены взаимодействием свободных кислотных или основных форм этих соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, или в их смеси; обычно предпочтительны неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил являются предпочтительными. Списки подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.
- 66 046244
H. Stahl and С G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, and Berge et al., JouPHKl of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977), каждый из который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.
Используемый здесь термин индекс полидисперсности представляет собой соотношение, которое описывает однородность распределения частиц по размерам в системе. Небольшое значение, например, менее 0,3, указывает на узкое распределение частиц по размерам. В некоторых вариантах реализации индекс полидисперсности может быть меньше 0,1.
Используемый здесь термин трансфекция относится к введению вида (например, РНК) в клетку. Трансфекция может происходить, например, in vitro, ex vivo или in vivo.
Используемый здесь термин алкил означает разветвленную или неразветвленную насыщенную углеводородную группу, содержащую от 1 до 24 атомов углерода, такую как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, с-бутил, m-бутил, н-пентил, изопентил, с-пентил, неопентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, додецил, тетрадецил, гексадецил, эйкозил, тетракозил и т.п. Алкильная группа может быть циклической или ациклической. Алкильная группа может быть разветвленной или неразветвленной (т.е. линейной). Алкильная группа также может быть замещенной или незамещенной (предпочтительно незамещенной). Например, алкильная группа может быть замещена одной или несколькими группами, включая, помимо прочего, алкил, циклоалкил, алкокси, амино, простой эфир, галогенид, гидрокси, нитро, силил, сульфоксо, сульфонат, карбоксилат или тиол, как описано здесь. Группа низший алкил представляет собой алкильную группу, содержащую от одного до шести (например, от одного до четырех) атомов углерода.
Используемый здесь термин алкенил относится к алифатической группе, содержащей по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод, и предназначен для включения как незамещенных алкенилов, так и замещенных алкенилов, последний из которых относится к алкенильным фрагментам, имеющим заместители замена водорода на одном или нескольких атомах углерода алкенильной группы. Такие заместители могут встречаться у одного или нескольких атомов углерода, которые включены или не включены в одну или несколько двойных связей. Более того, такие заместители включают все заместители, предусмотренные для алкильных групп, как обсуждается ниже, за исключением случаев, когда стабильность является недопустимой. Например, предполагается, что алкенильная группа может быть замещена одной или несколькими алкильными, карбоциклильными, арильными, гетероциклильными или гетероарильными группами. Примеры алкенильных групп включают, но не ограничиваются ими, винил (-СН=СН2), аллил (-Сн2СН=СН2), циклопентил (-С5Н7) и 5-гексенил (-СН2СН2СН2СН2СН=СН2).
Алкиленовая группа относится к двухвалентному алкильному радикалу, который может быть разветвленным или неразветвленным (т.е. линейным). Любая из вышеупомянутых одновалентных алкильных групп может быть превращена в алкилен путем отщепления второго атома водорода от алкила. Типичные алкилены включают С2-4 алкилен и С2-3 алкилен. Типичные алкиленовые группы включают, но не ограничиваются ими -СН(СНз)-, -С(СНз)2-, -СН2СН2-, -СН2СН(СНз)-, -СН2С(СНз)2-, -СН2СН2СН2-, -СН2СН2СН2СН2- и тому подобное. Алкиленовая группа также может быть замещенной или незамещенной. Например, алкиленовая группа может быть замещена одной или несколькими группами, включая, помимо прочего, алкил, арил, гетероарил, циклоалкил, алкокси, амино, простой эфир, галогенид, гидрокси, нитро, силил, сульфоксо, сульфонат, сульфонамид, мочевину, амид, карбамат, сложный эфир, карбоксилат или тиол, как описано здесь.
Термин алкенилен включает двухвалентные, неразветвленные или разветвленные, ненасыщенные ациклические гидрокарбильные группы, имеющие по меньшей мере одну двойную связь углеродуглерод и, в одном варианте осуществления, отсутствие тройных связей углерод-углерод. Любая из вышеупомянутых одновалентных алкенильных групп может быть превращена в алкенилен путем отщепления второго атома водорода от алкенила. Типичные алкенилены включают С2-6алкенилены.
Термин Cx-y при использовании в сочетании с химическим фрагментом, таким как алкил или алкилен, означает включение групп, которые содержат от x до y атомов углерода в цепи. Например, термин Cx-y алкил относится к замещенным или незамещенным насыщенным углеводородным группам, включая линейные и разветвленные алкильные и алкиленовые группы, которые содержат от х до у атомов углерода в цепи.
Включение в описание изобретения сведений путем ссылки.
Содержание статей, патентов и патентных заявок, а также всех других документов и имеющейся в электронном виде информации, упомянутой или цитируемой здесь, настоящим включено в качестве ссылки во всей своей полноте в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация была специально и индивидуально указана для включения по ссылке. Заявитель оставляет за собой право физически включать в эту заявку любые материалы и информацию из любых таких статей, патентов, патентных заявок или других физических и электронных документов.
- 67 046244
Примеры
Основная информация.
Все реагенты и растворители были приобретены и использованы в том виде, в каком они были получены от коммерческих поставщиков, или синтезированы в соответствии с указанными процедурами. Все промежуточные и конечные соединения очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле. Спектры ЯМР записывали на спектрометре Bruker или Varian 400 МГц, а данные ЯМР собирали в CDCl3 при температуре окружающей среды. Химические сдвиги указаны в миллионных долях (ppm) относительно CDCl3 (7.26). Данные для 1Н ЯМР представлены следующим образом: химический сдвиг, множественность (Ьг=широкий, 8=синглет, d=дублет, t=триnлет, dd=дублет дублетов, dt=дублет триплетов, q=квартет, m=мультиnлет, ddd=дублет дублетов дублетов, td=триплет дублетов, tt триплет триплетов, tdd=триплет дублетов дублетов, dddd=дублет дублета дублетов дублетов), константа связи и интегрирование. Данные MS регистрировали на масс-спектрометре Waters SQD2 с источником ионизации электрораспылением (ESI). Чистоту конечных соединений определяли с помощью UPLC-MS-ELS с использованием прибора для жидкостной хроматографии Waters Acquity H-Class, оснащенного массспектрометром SQD2 с детекторами фотодиодной матрицы (PDA) и испарительного рассеяния света (ELS).
pKa каждого аминного липида определяли в соответствии с методом, описанным Jayaraman, et al. (Angewandte Chemie, 2012) со следующими адаптациями. pKa определяли для несформулированного аминового липида в этаноле. Исходные растворы липидов (2,94 мМ) разбавляли натрий-фосфатными буферами (0,1 М, Boston Bioproducts) с различным pH (диапазон pH: 4,5-9,0), получая конечную концентрацию липидов прибл. 100 мкМ. К тестовым образцам добавляли TNS {6-(п-толуидино)-2нафталинсульфоновой кислоты натриевую соль}, инкубировали и измеряли интенсивность флуоресценции, используя длины волн возбуждения и испускания 321 нм и 448 нм, соответственно. Записанные данные были нормализованы, и соответствующие значения pKa были получены из сигмоидальной ап проксимации.
Таблица 1 Соединения
| Соединение (рКа) | Структура |
| 1 (6,35) | О V ° % |
| 2 (5,28) | О % |
| 3 (5,89) | О V 0 % |
- 68 046244
- 69 046244
| 8 (7,54) | ( / \ / (1 > (I ) / ( \ c=x \ p 4 VW o=x '—X /—7 ° == ° z — / |
| 9 (6,32) | я ОД == yoy V° X ° X / / ) \ \ i) / x / ) |
| 10 (6,05) | 0 /X)__________ V о % |
| 11 (5,60) | ( / \ / (! < \ ( x Q=( X / ° / p4_ (W o=x 4—x )—7 ° )> |
- 70 046244
- 71 046244
| 16 (5,72) | ( / \ ) (1 /(( ( ο=λ ( / ο / ?л_ 0=4 о=\ '—\ /—z ° о Vo |
| 17 (6,18) | 0 ν θ % |
| 18 (5,83) | 0 ν ° % Ο'>/--,-^·---·^'------'''-..,-·'-'=·''-..,-''·=’-'--..,--'''·----·'^'--. |
| 19 (5,99) | 0 % |
- 72 046244
- 73 046244
- 74 046244
- 75 046244
| 32 (5,64) | 0 'JJ '''-'Ό Ao % |
| 33 (5,95) | 0 ' Ν ' Ό А) % |
| 34 (6,36) | Ν о -ν/·νΛο Η 1 V ο % ο''\-ζχ/'··- |
| 35 (6,35) | ( / / |ι (ι \ ) ( \ ο=\ ( ?Λ_ (jA == Ε° |
- 76 046244
| 36 (6,13) | 0 θγ-Q% |
| 37 (5,36) | у г о—2 —г V Η,^λ >° 2° } л’ / )=° / ) \ \ 1 1) / 2 ) |
| 38 (5,62) | ( / / (1 II \ / ( \ о=\ \ °ч ? °Ч о=< '^, г^ о г— л—о $ ° —Ζ \ |
| 39 (6,32) | \ ΛΆ ° / 0-2 3Ζ °ГСГ5 Ч?° \ ° \ / )=° / ) \ \ 1) / / ) |
- 77 046244
| 40 (6,34) | = г О—? IZ У° } с° / / ) \ 1) / \ ι| |
| 41 (6,51) | о Г оА IZ ) \ \ II 1) / ) ) |
| 42 (6,52) | пУ' ) \ 1) / ) ) |
| 43 (7,33) | ί / / (| / / (1 о > о—. ί о А Q=( i )—7 О ZX Vc $ “ г\ |
- 78 046244
| 44 (6,45) | 1 n.. | 0 ''Ν^Ό н X V 0 % | |
| 45 | 0 | ||
| (5,79) | GN | V θ Ογ-Ο^ % o''-zx-z | |
| 46 (6,16) | Ό. | О / мА, Η 1 V θ % | |
| f47 (5,99) | 'ν' | О )—7 о |
- 79 046244
- 80 046244
- 81 046244
| 57 (6,18) | 0 | O-( ZZ :% V’ | 0 | о 0 | |
| 58 | 0 | ||||
| (6,32) | •nA, | ||||
| η Λ | 0 | о | |||
| O' | cr | 0 | |||
| 59 | о | ||||
| (6,34) | X | A N O н 1 | 0 | о | |
| O:?Sx_ | 0 | ||||
| 0 | |||||
| 60 | 0 | ||||
| (6,22) | ,N. | A | |||
| h у | |||||
| 0 | °Αό | 0 | о | ||
| 0 | |||||
- 82 046244
| 61 (6,29) | > 0 .-ν--'-νΛο η JL jT ° ° Ο?Ό-.,—O Ό 0 |
| 62 (6,32) | w Ο IZ у \ > c о Vo s \ ° \ / )=o/ ) < / ^=0 |
| 63 (6,32) | A ° -—A Η 1 0 % |
| 64 (6,30) | ° о V ) ( ( / o=\ ( X ° / / ( Pa oV }—/ о °K '—\ P ZI it > ° r\ |
- 83 046244
- 84 046244
- 85 046244
| 73 (6,41) | ( / / |ι (i \ ) ( / ° / я o=\ '—\ )—7 ° Z= Vo 4 ° \ |
| 74 (6,44) | ( / ) (I / 1 |
| 75 (6,17) | 0 % |
| 76 (6,74) | ΑΊ 0 Η I V ο % |
- 86 046244
| 77 (7,23) | XZ m ) \ j) / ) ) |
| 78 (5,93) | о OA xz \ ° \ / )=° / ) \ j) / / ) |
| 79 (4,96) | ΟΟ’ζΧ Η 1 v ° % |
| 80 (6,41) | \ Λ\ ° / =Z Vo-5 / / ) \ \ I) j) / / |
- 87 046244
- 88 046244
| 85 (7,02) | ( ) ) (I (1 \ < ( J ° j j ==( A, V о ,= r; $ ° О |
| 86 (6,23) | ) — z О >40° / .0 / ) \ \ il I) / ) ) |
| 87 (ND) | 1 ° 0A 1 H l _ . , v ° |
| 88 (ND) | 1 0 r N—ΝΛΟ ' - - °0 0 ϋ·γ4Z=WX % |
- 89 046244
| 89 (6,76) | Н I .... ~ ... V о % |
| 90 (6,80) | о $0 O-# i z 3,Н · 3° Vo ) W.o V ) \ \ i) I) / \ ) |
| 91 (6,48) | 1 0 v ° % 0Ww-www^=wa=%w^w% |
| 92 (5,96) | г 7 <?x г-<^Л ^>o Vo Vo / о / / 1° / ) \ \ 1 I) / ) ) |
- 90 046244
- 91 046244
- 92 046244
| 102 (5,16) | 0 θγ^ % |
| 103 (6,09) | w о $ O-^ IZ V >o 5—0 ( о ( / /—\ ) \ i) / \ ) |
| 105 (6,53) | - Λ'Ν'3 н Λ I 0' Ύ^ο % |
| 106 (6,80) | ί / ? ί II \ \ ( оЛс4 ζτ λ-ο > ° σ |
- 93 046244
| 107 | % 0 |
| (6,35) | --NN'^'O Η I V о % |
| 108 (6,52) | u= ? О-ф IZ c z--( \--4 Vo Vo ) Vo ( ° \ / v° / //( ) / \ ( I) J / / ) |
| 109 | /V ° |
| (6,91) | vn-^nAo H V V о % |
| 110 | Λ^Ί о |
| (7,01) | о \ оД ΖΖ7 : . ) \ ) ) |
- 94 046244
Пример 1 - сравнительное соединение 1.
Промежуточное соединение 1а: 4-оксогексадекановая кислота
Раствор янтарного ангидрида (3,0 г, 1,0 эквив.) в ТГФ (0,1 М) охлаждали до -78°С с последующим добавлением додецилмагнийбромида (1,0 М раствор в гексане, 0,5 эквив.) по каплям в течение 5 мин. Реакцию поддерживали при -78°С в течение по крайней мере 18 ч, после чего ее гасили добавлением воды и 1 М HCl. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и полученный водный слой трижды экстрагировали DCM. Объединенные слои DCM затем экстрагировали 2 раза 2 М NaOH, и объединенные водные слои подкисляли до pH 1 с помощью концентрированной HCl. Затем смесь экстрагировали 3 раза DCM. Объединенные слои DCM сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного материала. Неочищенный материал трижды растирали с гексаном, и полученный осадок фильтровали с получением продукта в виде белого твердого вещества (1,31 г, 33%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,72 (ddd, J=7,0, 5,8, 1,1 Гц, 2Н), 2,67-2,60 (m, 2Н), 2,44 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,59 (q, J=7,4 Гц, 2Н), 1,26 (d, J=2,7 Гц, 18Н), 0,91-0,85 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 1b: 2-оксопропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12диеноат)
- 95 046244
К раствору дигидроксиацетона (1,55 г, 1,0 экв.) в DCM (0,1 М) добавляли линолевую кислоту (2,05 экв.), DMAP (0,2 экв.), DIPEA (2,4 экв.) И EDCI (2,4 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре по меньшей мере 18 ч. По завершении смесь гасили добавлением воды, и органический слой промывали 1 раз 1 М HCl и 1 раз 5% NaHCO3. Затем органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) до продукта в виде бесцветного масла (8,0 г, 75%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,28 (m, 8Н), 4,75 (s, 4Н), 2,82-2,74 (m, 4Н), 2,42 (t, J=7,5 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,67 (q, J=7,4 Гц, 4Н), 1,40-1,24 (m, 28H), 0,95-0,86 (m, 6H).
Промежуточное соединение 1с: 2-гидрокси-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диеноилокси]пропил (9Z, 12Z)-октадека-9,12-диеноат
Раствор промежуточного соединения 1b (8,1 г, 1,0 эквив.) в 4:2:1 ТГФ/вода/толуол (0,05-0,1 М) охлаждали до 0-5°С с последующим добавлением NaBH4 (1,7 экв.). Реакционную смесь перемешивали по меньшей мере 1 ч при 0-25°С. По завершении смесь гасили добавлением воды и EtOAc, и смесь экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (5,9 г, 73%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,46-5,26 (m, 8H), 4,23-4,10 (m, 4H), 2,81-2,73 (m, 4H), 2,42 (d, J=4,8 Гц, 1H), 2,38-2,31 (m, 4Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,68-1,57 (m, 4H), 1,42-1,23 (m, 29H), 0,93-0,85 (m, 6H).
Промежуточное соединение 1d: 2-((4-оксогексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 1с (1,0 эквив.) в DCM (0,2 М) добавляли промежуточное соединение 1а (1,0-1,2 эквив.), Et3N или DIPEA (1,5-4,5 эквив.), DMAP (0,1-0,2 эквив.) и EDCI (1-2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 12 ч, после чего гасили добавлением воды. Смесь промывали 1 раз 1 М HCl и 1 раз 5% NaHCO3. Затем органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (780 мг, 79%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,28 (m, 8H), 5,24 (tt, J=5,9, 4,3 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,15 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 2,84-2,74 (m, 4Н), 2,71 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,59 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,32 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,60 (dd, J=14,7, 7,3 Гц, 6Н), 1,44-1,20 (m, 49H), 0,88 (td, J=6,9, 4,3 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 1е: 2-((4-оксогексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
- 96 046244
Раствор промежуточного соединения 1d (1,43 г, 1,0 эквив.) в 4:2:1 ТГФ/вода/толуол (0,05-0,1 М) охлаждали до 0-5°С с последующим добавлением NaBH4 (5,0 экв.). Реакцию поддерживали при 0-25°С не менее 2 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и EtOAc, и полученную двухфазную смесь экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением промежуточного спирта в виде бесцветного масла.
Полученный спирт немедленно ресолюбилизировали в DCM (0,1 М) с последующим добавлением пиридина (2-3 эквив.) и 4-нитрофенилхлорформиата (1-1,5 эквив.). Реакционную смесь перемешивали не менее 1 ч при комнатной температуре. Смесь гасили добавлением воды и трижды экстрагировали DCM. Объединенные слои DCM сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (910 мг, 54%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,37-8,25 (m, 2H), 7,48-7,40 (m, 2H), 5,49-5,25 (m, 9Н), 4,96-4,84 (m, 1H), 4,34 (dd, J=12,0, 4,3 Гц, 2Н), 4,18 (dd, J=11,9, 5,7 Гц, 2Н), 2,79 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,49 (dd, J=8,4, 6,7 Гц, 2Н), 2,33 (tt, J=7,6, 4,2 Гц, 4Н), 2,16-1,95 (m, 10Н), 1,81-1,71 (m, 1H), 1,65 (ddq, J=15,2, 7,5, 4,8, 4,2 Гц, 6Н), 1,50-1,13 (m, 50H), 0,90 (td, J=6,8, 3,7 Гц, 9Н).
Соединение 1: 2-((4-(((3-(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 1е (250 мг, 1,0 эквив.) в MeCN (0,1 М) добавляли пиридин (3,0 эквив.), 3-(диметиламино)пропан-1-ол (1,5-3,0 эквив.) и DMAP (1,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивали не менее 2 ч при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли гептан (0,1 М) и слой гептана промывали 3 раза MeCN. Объединенные слои MeCN трижды экстрагировали гептаном, а объединенные слои гептана промывали один последний раз MeCN. Затем гептан удаляли в вакууме и неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (MeOH/DCM) с получением продукта в виде бесцветного масла (100 мг, 41%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,46-5,22 (m, 9Н), 4,72 (tdd, J=7,5, 5,3, 4,0 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=12,0, 4,4 Гц, 2Н), 4,23-4,10 (m, 4H), 2,84-2,73 (m, 4H), 2,62-2,27 (m, 13H), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 2,01-1,84 (m, 4H), 1,68-1,50 (m, 7H), 1,43-1,21 (m, 50H), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9Н). MS: 1001,2 m/z [M+H].
Пример 2 - соединение 2.
Соединение 2: 2-((4-(((3-(диэтиламино)пропокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 2 было синтезировано с выходом 64% из промежуточного соединения 1е и 3- 97 046244 (диэтиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,20 (m, 9H), 4,72 (tdd, J=7,5, 5,3, 4,0 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,23-4,10 (m, 4H), 2,81-2,73 (m, 4H), 2,57-2,36 (m, 8H), 2,31 (td, J=7,6, 1,3 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,97-1,77 (m, 4Н), 1,61 (t, J=7,4 Гц, 6Н), 1,40-1,21 (m, 49H), 1,01 (t, J=7,1 Гц, 6Н), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9Н). MS: 1029,7 m/z [M+H].
Пример 3 - соединение 3.
Соединение 3: 2-((4-(((3-(этил(метил)амино)пропокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 3 было синтезировано с выходом 79% из промежуточного соединения 1е и 3((метил)этиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,49-5,20 (m, 9H), 4,77-4,67 (m, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,16 (tdd, J=11,9, 6,2, 2,5 Гц, 4Н), 2,77 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,70-2,37 (m, 7H), 2,37-2,25 (m, 7H), 2,13-1,82 (m, 12H), 1,69-1,48 (m, 7H), 1,42-1,20 (m, 46H), 1,14 (s, 2H), 0,88 (td, J=6,8, 3,9 Гц, 7H). MS: 1015,7 m/z [M+H].
Пример 4 - соединение 4.
Соединение 4: 2-((4-(((2-(диметиламино)этокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 4 было синтезировано с выходом 93% из промежуточного соединения 1е и 2 диметиламиноэтан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,31 (m, 8H), 5,25 (tt, J=5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,73 (tdd, J=7,6, 5,5, 4,0 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 4Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,4 Гц, 2Н), 2,77 (td, J=6,0, 1,1 Гц, 4Н), 2,70 (d, J=16,4 Гц, 1H), 2,49-2,29 (m, 11Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,99-1,81 (m, 2H), 1,67-1,50 (m, 8H), 1,40-1,21 (m, 48H), 0,88 (td, J=7,0, 4,2 Гц, 9Н). MS: 987,6 m/z [M+H].
Пример 5 - соединение 5.
Соединение 5: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
О
Соединение 5 было синтезировано с выходом 54% из промежуточного соединения 1е и 3 (пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,21 (m, 9H), 4,72 (tdd, J=7,3, 5,5, 4,2 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,17 (dddd, J=15,3, 9,1, 7,3, 3,7 Гц, 4Н), 2,77 (td, J=6,0, 1,1 Гц, 4Н), 2,57 (d, J=8,8 Гц, 6Н), 2,40 (dt, J=8,7, 6,5 Гц, 2Н), 2,31 (td, J=7,6, 1,2 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,98-1,83 (m, 5Н), 1,80 (р, J=3,2 Гц, 4Н), 1,68-1,50 (m, 7H), 1,41-1,18 (m, 48H), 0,96-0,81 (m, 9Н). MS: 1027,6 m/z [M+H].
Пример 6 - соединение 6.
- 98 046244
Пример 6: 2-((4-((((1-этилпиперидин-4-ил)окси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-6uc(oKTageka-9,12-диеноат)
Соединение 6 было синтезировано с выходом 53% из промежуточного соединения 1е и 1этилпиперидин-4-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,21 (m, 9Н), 4,72 (tdd, J=7,6, 5,3, 4,0 Гц, 1H), 4,64 (d, J=5,1 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,1 Гц, 2Н), 2,84-2,70 (m, 6H), 2,51-2,36 (m, 4Н), 2,31 (td, J=7,6, 1,4 Гц, 4Н), 2,24 (d, J=23,1 Гц, 2Н), 2,11-1,93 (m, 11H), 1,92-1,73 (m, 4H), 1,70-1,52 (m, 8H), 1,431,21 (m, 48H), 1,09 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=7,0, 4,2 Гц, 9Н). MS: 1028,2 m/z [M+H].
Пример 7 - соединение 7.
Соединение 7: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 7 было синтезировано с выходом 66% из промежуточного соединения 1е и Ν1-3τηλ-Ν1 метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,47-5,08 (m, 10Н), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,3 Гц, 2Н), 3,24 (q, J=6,0 Гц, 2Н), 2,82-2,74 (m, 4H), 2,53-2,26 (m, 10Н), 2,21 (s, 3Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,98-1,74 (m, 2H), 1,68-1,41 (m, 8h), 1,41-1,19 (m, 49Н), 1,04 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,95-0,82 (m, 9Н). MS: 1001,1 m/z [M+H].
Пример 8 - соединение 8.
Соединение 8: 2-((4-(((3-(диметиламино)пропил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 8 синтезировали с выходом 55% из промежуточного соединения 1е и N1,N1 диметилпропан-1,3-диамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,46 (t, J=5,8 Гц, 1H), 5,43-5,28 (m, 8H), 5,24 (tt, J=5,8, 4,4 Гц, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 2,2 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 1,6 Гц, 2Н), 3,23 (h, J=6,4 Гц, 2Н), 2,822,73 (m, 4H), 2,48-2,20 (m, 14H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,97-1,42 (m, 12H), 1,42-1,20 (m, 48H), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9Н). MS: 1000,6 m/z [M+H].
Пример 9 - соединение 9.
Соединение 9: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 99 046244
Соединение 9 было синтезировано с выходом 65% из промежуточного соединения 1е и (1метилпирролидин-2-ил)метанамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 5,45-5,28 (m, 8H), 5,25 (ddd, J=10,2, 5,8, 4,4 Гц, 1H), 5,19-5,11 (m, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,0 Гц, 2Н), 3,44-3,31 (m, 1H), 3,193,02 (m, 2H), 2,84-2,72 (m, 4H), 2,46-2,16 (m, 12H), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,97-1,66 (m, 6H), 1,66-1,42 (m, 8H), 1,42-1,20 (m, 49H), 0,88 (td, J=7,0, 4,2 Гц, 9Н). MS: 1013,1 m/z [M+H].
Пример 10 - соединение 10.
Соединение 10: 2-((4-((1,4-диметилпиперидин-4-карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Раствор промежуточного соединения 1d (360 мг, 1,0 эквив.) в 4:2:1 ТГФ/вода/толуол (0,05 М) охлаждали до 0°С с последующим добавлением NaBH4 (5,0 экв.). Реакцию поддерживали при 0°С в течение 18 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и EtOAc, и полученную двухфазную смесь экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением промежуточного спирта в виде бесцветного масла.
Полученный неочищенный спирт немедленно ресолюбилизировали в DCM (0,1 М) с последующим добавлением 1,4-диметилпиперидин-4-карбоновой кислоты (1,0 экв.), DMAP (0,1 экв.), DIPEA (4,0 экв.) и EDCI (1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 16 ч в реакционную смесь добавляли дополнительно 1,4-диметилпиперидин-4-карбоновую кислоту (1,0 эквив.), DMAP (0,05 эквив.), DIPEA (2,0 эквив.) и EDCI (1,5 эквив.) и реакционную смесь нагревали до 40°С. Еще через два часа реакцию гасили добавлением воды и DCM, и органический слой промывали 1 раз 1 М HCl, 1 раз 5% NaHCO3 и 1 раз рассолом. Полученный органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (MeOH/DCM) с получением продукта в виде розового масла (94 мг, 22%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,46-5,22 (m, 9H), 4,92 (ddd, J=11,6, 7,5, 4,7 Гц, 1H), 4,30 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=12,0, 5,8, 1,9 Гц, 2Н), 2,82-2,74 (m, 4H), 2,67 (s, 2H), 2,41-2,25 (m, 9Н), 2,14 (d, J=14,2 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,98-1,78 (m, 3Н), 1,66-1,49 (m, 9Н), 1,43-1,18 (m, 50H), 0,88 (td, J=6,9, 4,3 Гц, 9Н).
Пример 11 - соединение 11.
Соединение 11: 2-((4-((4-(диэтиламино)бутаноил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 11 было синтезировано с выходом 17% из промежуточного соединения 1d и 3- (диэтиламино)бутановой кислоты с использованием метода, применяемого для примера 10.
- 100 046244
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,46 (t, J=5,8 Гц, 1H), 5,43-5,28 (m, 8H), 5,24 (tt, J=5,8, 4,4 Гц, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 2,2 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 1,6 Гц, 2Н), 3,23 (h, J=6,4 Гц, 2Н), 2,822,73 (m, 4H), 2,48-2,20 (m, 14H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,97-1,42 (m, 12H), 1,42-1,20 (m, 48H), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9Н). MS: 1013,9 m/z [M+H].
Пример 12 - соединение 12.
Соединение 12: 2-((4-(((2-(диметиламино)этил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 12 было синтезировано с выходом 67% из промежуточного соединения 1е и N1,N1диметилэтан-1,2-диамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,29 (m, 8H), 5,29-5,18 (m, 2H), 4,75 (s, 1H), 4,34-4,24 (m, 2H), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,6 Гц, 2Н), 3,25 (q, J=5,8 Гц, 2Н), 2,77 (td, J=6,2, 1,2 Гц, 4Н), 2,47-2,35 (m, 4Н), 2,35-2,28 (m, 4Н), 2,24 (s, 6Н), 2,05 (q, J=7,1 Гц, 8Н), 1,98-1,73 (m, 4H), 1,65-1,42 (m, 7Н), 1,40-1,20 (m, 48Н), 0,88 (td, J=7,0, 4,3 Гц, 9H). MS: 987,2 m/z [M+H].
Пример 13 - соединение 13.
Соединение 13: 2-((4-(((3-(диэтиламино)пропил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 13 было синтезировано с выходом 62% из промежуточного соединения 1е и N1,N1 диэтилпропан-1,3-диамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,93 (s, 1H), 5,44-5,28 (m, 8H), 5,24 (ddd, J=5,8, 4,5, 1,3 Гц, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 2,7 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 1,2 Гц, 2Н), 3,24 (tt, J=13,2, 6,6 Гц, 2Н), 2,812,71 (m, 4Н), 2,57 (d, J=7,7 Гц, 6Н), 2,38 (ddd, J=8,9, 6,8, 3,2 Гц, 2Н), 2,35-2,28 (m, 4Н), 2,05 (q, J=6,6 Гц, 8Н), 1,94-1,85 (m, 2Н), 1,79 (dq, J=14,8, 8,1 Гц, 2Н), 1,73-1,56 (m, 7H), 1,56-1,43 (m, 3Н), 1,40-1,20 (m, 47H), 1,06 (t, J=7,1 Гц, 6Н), 0,88 (td, J=7,0, 4,3 Гц, 9H). MS: 1029,2 m/z [M+H].
Пример 14 - соединение 14.
Соединение 14: 2-((4-(((4-(диэтиламино)бутокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 14 синтезировали с выходом 60% из промежуточного соединения 1е и N1,N1диметилэтан-1,2-диамин, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,30 (m, 9H), 5,28 (tt, J=5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,78-4,69 (m, 1H), 4,31 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,22-4,09 (m, 4Н), 2,79 (td, J=6,1, 1,1 Гц, 4Н), 2,63 (q, J=7,2 Гц, 4Н), 2,55 (t, J=7,6 Гц,
- 101 046244
2Н), 2,47-2,38 (m, 2Н), 2,38-2,30 (m, 4Н), 2,07 (q, J=7,1 Гц, 8Н), 2,02-1,85 (m, 2H), 1,76-1,51 (m, 11Н), 1,451,21 (m, 49H), 1,08 (t, J=7,2 Гц, 6Н), 0,95-0,82 (m, 9H). MS: 1044,1 m/z [M+H].
Пример 15 - соединение 15.
Соединение 15: 2-((4-(((2-(диэтиламино)этил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 15 было синтезировано с выходом 75% из промежуточного соединения 1е и N1,N1диэтилэтан-1,2-диамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 5,44-5,29 (m, 9H), 5,25 (ddd, J=5,8, 4,4, 1,4 Гц, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,2 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,0 Гц, 2Н), 3,23 (q, J=5,7 Гц, 2Н), 2,80-2,73 (m, 4H), 2,57 (q, J=7,0 Гц, 6H), 2,38 (ddd, J=9,0, 6,6, 4,7 Гц, 2H), 2,34-2,28 (m, 4H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8H), 1,90 (h, J=9,0, 7,9 Гц, 1H), 1,80 (p, J=7,3, 6,5 Гц, 1H), 1,66-1,44 (m, 7H), 1,40-1,20 (m, 53H), 1,03 (t, J=7,1 Гц, 6Н), 0,88 (td, J=6,9, 4,3 Гц, 9Н). MS: 1014,9 m/z [M+H].
Пример 16 - соединение 16.
Соединение 16: 2-((4-(((2-(1-метилпирролидин-2-ил)этокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 16 было синтезировано с выходом 78% из промежуточного соединения 1е и 2-(1метилпирролидин-2-ил)этан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,28 (m, 9H), 5,25 (tt, J=5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,72 (qd, J=7,6, 4,6 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,26-4,09 (m, 4H), 3,14 (t, J=8,8 Гц, 1H), 2,82-2,74 (m, 4Н), 2,45-2,28 (m, 9Н), 2,22 (td, J=11,5, 10,9, 6,0 Гц, 2Н), 2,15-1,91 (m, 12H), 1,69-1,48 (m, 9Н), 1,42-1,20 (m, 50Н), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9H). MS: 1027,9 m/z [M+H].
Пример 17 - соединение 17.
Промежуточное соединение 17а: гексадецилмагнийбромид
К раствору Mg (15,92 г, 2 эквив.) в ТГФ (300 мл) добавляли I2 (0,01 экв.), затем к вышеуказанному по каплям при 80°С добавляли 1-бромгексадекан (1,0 экв.) в ТГФ (100 мл). Смесь перемешивали 6 ч при 80°С. Продукт получали с количественным выходом в виде коричневой жидкости и сразу использовали на следующей стадии.
Промежуточное соединение 17b: 4-оксойкозановая кислота
Раствор янтарного ангидрида (54 г, 1,0 экв.) в ТГФ (1,2 М) охлаждали до -78°С с последующим добавлением промежуточного соединения 17а. Реакционную смесь выдерживали при -78°С в течение 12 ч перед тем, как вылить в насыщ. NH4Cl и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Очистка колоночной хроматографией дала продукт в виде белого твердого вещества (4 г, 2%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,11 (t, J=6,7 Гц, 1H), 2,80-2,62 (m, 4H), 2,46 (t, J=7,5 Гц, 1H), 1,63 (dq, J=14,7, 7,1 Гц, 2Н), 1,49-1,20 (m, 27H), 0,90 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
- 102 046244
Промежуточное соединение 17с: 2-((4-оксоикозаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 17с было синтезировано с выходом 53% из промежуточного соединения 17b и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,21 (m, 9Н), 4,29 (dt, J=11,9, 4,1 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 4,06 (t, J=6,8 Гц, 1H), 2,73 (dt, J=22,5, 6,5 Гц, 6Н), 2,67-2,54 (m, 4Н), 2,42 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 9Н), 1,61 (q, J=7,9, 7,3 Гц, 8Н), 1,42-1,15 (m, 55H), 0,88 (td, J=6,7, 4,0 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 17d: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)икозаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 17d было синтезировано с выходом 29% из промежуточного соединения 17с с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,33-8,24 (m, 2H), 7,43-7,34 (m, 2Н), 5,45-5,23 (m, 8Н), 4,92-4,82 (m, 1H), 4,31 (dd, J=12,0, 4,3 Гц, 2Н), 4,20-4,09 (m, 2H), 2,76 (t, J=6,3 Гц, 4Н), 2,47 (dd, J=8,3, 6,7 Гц, 2Н), 2,30 (td, J=7,6, 4,2 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=7,2 Гц, 9Н), 1,61 (ddt, J=11,5, 7,4, 3,7 Гц, 4Н), 1,43-1,22 (m, 49H), 0,88 (td, J=6,9, 3,8 Гц, 9Н).
Соединение 17: 2-((4-(((3-(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)икозаноил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 17 было синтезировано с выходом 74% из промежуточного соединения 17d и 3- (диметиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,22 (m, 10Н), 4,72 (tdd, J=7,5, 5,4, 4,0 Гц, 1H), 4,36-4,25 (m, 2H), 4,23-4,08 (m, 4H), 2,82-2,71 (m, 4H), 2,50-2,28 (m, 9H), 2,25 (s, 6H), 2,09-1,97 (m, 9H), 1,91-1,80 (m, 3Н), 1,70-1,47 (m, 7H), 1,40-1,20 (m, 57H), 0,96-0,82 (m, 9H). MS: 1058,1 m/z [M+H].
Пример 18 - соединение 18.
Соединение 18: 2-((4-(((3-(этил(метил)амино)пропокси)карбонил)окси)икозаноил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 103 046244
Соединение 18 было синтезировано с выходом 77% из промежуточного соединения 17d и 3((метил)этиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,22 (m, 10Н), 4,72 (qd, J=7,7, 4,7 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=12,0, 4,4 Гц, 2Н), 4,20-4,10 (m, 4H), 2,83-2,73 (m, 4H), 2,51-2,36 (m, 6H), 2,35-2,28 (m, 4Н), 2,24 (s, 3Н), 2,10-1,99 (m, 9H), 1,91-1,82 (m, 3Н), 1,66-1,52 (m, 6H), 1,42-1,19 (m, 60H), 1,06 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9Н). MS: 1072,3 m/z [M+H].
Пример 19 - соединение 19.
Соединение 19: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)икозаноил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 19 было синтезировано с выходом 67% из промежуточного соединения 17d и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,22 (m, 9H), 4,72 (tt, J=7,5, 4,5 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,24-4,10 (m, 4Н), 2,83-2,72 (m, 4Н), 2,57 (d, J=8,3 Гц, 6Н), 2,40 (dt, J=8,6, 6,7 Гц, 2Н), 2,31 (td, J=7,6, 1,2 Гц, 4Н), 2,04 (dd, J=8,5, 5,3 Гц, 8Н), 2,00-1,86 (m, 4H), 1,86-1,78 (m, 4Н), 1,53 (ddt, J=14,1, 8,3, 4,7 Гц, 7Н), 1,44-1,20 (m, 56H), 0,88 (td, J=6,9, 4,2 Гц, 9H). MS: 1084,2 m/z [M+H].
Пример 20 - соединение 20.
Соединение 20: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)икозаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 20 было синтезировано с выходом 73% из промежуточного соединения 17d и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,17 (m, 10Н), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,3 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,4 Гц, 2Н), 3,25 (d, J=6,2 Гц, 2Н), 2,81-2,73 (m, 4H), 2,50-2,36 (m, 6Н), 2,36-2,28 (m, 4Н), 2,22 (s, 3Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,94-1,71 (m, 4H), 1,66-1,20 (m, 63Н), 1,05 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=6,9, 4,2 Гц, 9H). MS: 1056,6 m/z [M+H].
Пример 21 - соединение 21.
Соединение 21: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)икозаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 104 046244
Соединение 21 было синтезировано с выходом 85% из промежуточного соединения 17d (1метилпирролидин-2-ил)метанамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,30 (m, 8H), 5,29-5,18 (m, 2H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,21-4,07 (m, 2Н), 3,46-3,30 (m, 1H), 3,11 (ddt, J=22,3, 8,9, 4,3 Гц, 2Н), 2,80-2,72 (m, 4H), 2,45-2,15 (m, 12H), 2,04 (dd, J=8,5, 5,3 Гц, 9Н), 1,96-1,77 (m, 4H), 1,71 (tq, J=8,4, 5,1, 4,0 Гц, 2Н), 1,65-1,45 (m, 8H), 1,391,20 (m, 60H), 0,88 (td, J=6,9, 4,4 Гц, 9Н). MS: 1068,8 m/z [M+H].
Пример 22 - соединение 22.
Промежуточное соединение 22а: (2)-9-(нон-2-ен-1-илокси)-9-оксононановая кислота
К раствору нонандиовой кислоты (25 г, 1,3 экв.) в THF (100 мл) при 0°С по каплям в течение одной минуты добавляли оксалилхлорид (1,0 экв.). Затем по каплям в течение одной минуты добавляли ДМФ (0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин, затем при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°С с последующим добавлением цис-2нонен-1-ола (1,0 эквив.) в ТГФ (100 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 5 мин, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По завершении реакционную смесь концентрировали в вакууме, суспендировали с DCM и фильтровали. Фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией (80 г, MeOH/DCM) с получением продукта в виде бледно-желтого масла (15 г, 47%), которое использовали непосредственно на последующих стадиях.
Промежуточное соединение 22b: 9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1-ил)О'1,О1-(2-оксопропан-1,3-диил) ди(нонандиоат)
Промежуточное соединение 22b было синтезировано с выходом 73% путем объединения дигидроксиацетона и промежуточного соединения 22а с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1b.
Промежуточное соединение 22с: О'1,О1-(2-гидроксипропан-1,3-диил)9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1ил)ди(нонандиоат)
Промежуточное соединение 22с было синтезировано с выходом 71% из промежуточного соединения 22b с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1с, за исключением того, что реакция завершилась через 45 мин.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,64 (dtt, J=11,0, 7,3, 1,3 Гц, 2Н), 5,52 (dtt, J=10,9, 6,8, 1,5 Гц, 2Н), 4,674,58 (m, 4H), 4,23-4,05 (m, 5H), 2,51 (d, J=4,6 Гц, 1H), 2,32 (dt, J=18,1, 7,6 Гц, 8Н), 2,15-2,00 (m, 4Н), 1,61 (td, J=10,0, 2,7 Гц, 8Н), 1,42-1,20 (m, 28H), 0,93-0,83 (m, 6H).
Промежуточное соединение 22d: 9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1-ил)О'1,О1-(2-((4оксогексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил)ди(нонандиоат)
- 105 046244
Промежуточное соединение 22d было синтезировано с выходом 38% из промежуточного соединения 22с и промежуточного соединения 1а, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,66 (dtt, J=11,0, 7,3, 1,3 Гц, 2Н), 5,54 (dtt, J=11,0, 6,9, 1,5 Гц, 2H), 5,26 (tt, J=5,9, 4,3 Гц, 1H), 4,64 (dd, J=6,9, 1,3 Гц, 4Н), 4,31 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,17 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,74 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,68-2,56 (m, 2Н), 2,45 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,33 (td, J=7,6, 6,0 Гц, 8Н), 2,19-2,07 (m, 4H), 1,70-1,57 (m, 12H), 1,43-1,23 (m, 46H), 0,98-0,84 (m, 9H).
Промежуточное соединение 22е: О'1,О1-(2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил)9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1-ил)ди(нонандиоат)
Промежуточное соединение 22е было синтезировано с выходом 51% из промежуточного соединения 22d с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,38-8,31 (m, 1H), 8,31-8,24 (m, 2Н), 7,54-7,47 (m, 1H), 7,44-7,36 (m, 2Н), 5,64 (dtt, J=11,0, 7,3, 1,3 Гц, 2Н), 5,51 (dtt, J=11,0, 6,8, 1,5 Гц, 2Н), 5,26 (tt, J=5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,86 (ddd, J=11,8, 7,5, 4,8 Гц, 1H), 4,65-4,57 (m, 4Н), 4,36-4,25 (m, 2Н), 4,21-4,10 (m, 2Н), 2,50-2,44 (m, 2Н), 2,30 (td, J=7,5, 4,5 Гц, 8Н), 2,13-2,05 (m, 4Н), 1,62 (d, J=37,2 Гц, 9Н), 1,46-1,18 (m, 49H), 0,94-0,80 (m, 9H).
Соединение 22: О'1,О1-(2-((4-(((3-(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил)9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1-ил)ди(нонандиоат) о
O.,J у о о % о
Соединение 22 синтезировали с выходом 54% из промежуточного соединения 22е и 3(диметиламино)пропан-1-ола, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,71-5,58 (m, 2Н), 5,52 (dtt, J=10,9, 6,8, 1,5 Гц, 2Н), 5,25 (tt, J=5,7, 4,4 Гц, 1H), 4,72 (ddd, J=11,7, 7,4, 4,5 Гц, 1H), 4,62 (dd, J=6,8, 1,3 Гц, 4Н), 4,34-4,25 (m, 2H), 4,25-4,08 (m, 4Н), 2,39 (ddd, J=12,9, 8,4, 6,4 Гц, 4Н), 2,34-2,21 (m, 13H), 2,09 (tdd, J=7,4, 5,7, 1,5 Гц, 4Н), 2,02-1,67 (m, 7H), 1,69-1,51 (m, 11Н), 1,42-1,19 (m, 45H), 0,97-0,78 (m, 8H). MS: 1065,7 m/z [M+H].
Пример 23 - соединение 23.
Соединение 23: О'1,О1 -(2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил)9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1-ил)ди(нонандиоат)
- 106 046244
Соединение 23 было синтезировано с выходом 59% из промежуточного соединения 22е и NI-этил№-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,72-5,59 (m, 2H), 5,52 (dtt, J=11,0, 6,8, 1,5 Гц, 2Н), 5,36-5,18 (m, 2Н), 4,75 (s, 1H), 4,62 (dd, J=6,9, 1,2 Гц, 4Н), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,5 Гц, 2Н), 3,35-3,20 (m, 2H), 2,56-2,43 (m, 4H), 2,38 (ddd, J=8,7, 6,6, 4,1 Гц, 2Н), 2,34-2,19 (m, 11Н), 2,10 (qd, J=7,4, 1,5 Гц, 4Н), 1,96-1,72 (m, 3H), 1,63 (d, J=6,9 Гц, 11Н), 1,41-1,18 (m, 48H), 1,07 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,93-0,81 (m, 9H). MS: 1065,2 m/z [M+H].
Пример 24 - соединение 24.
Соединение 24: О'1,О1-(2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил)9,9'-ди((2)-нон-2-ен-1-ил)ди(нонандиоат)
Соединение 24 синтезировали из промежуточного соединения 22е и (1-метилпирролидин-2ил)метанамина с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 5,71-5,59 (m, 2Н), 5,52 (dtt, J=10,9, 6,8, 1,5 Гц, 2Н), 5,24 (ddd, J=8,8, 5,8, 4,4 Гц, 2Н), 4,76 (s, 1H), 4,62 (dd, J=6,9, 1,3 Гц, 4Н), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,2 Гц, 2Н), 3,39 (q, J=11,2, 10,1 Гц, 1H), 3,10 (t, J=14,0 Гц, 2Н), 2,50-2,20 (m, 15H), 2,10 (qd, J=7,4, 1,5 Гц, 4Н), 1,97-1,67 (m, 6H), 1,61 (d, J=7,3 Гц, 12Н), 1,41-1,18 (m, 47H), 0,97-0,79 (m, 9H). MS: 1076,7 m/z [M+H].
Пример 25 - соединение 25.
Промежуточное соединение 25а: 5-оксогептадекановая кислота
Промежуточное соединение 25а было синтезировано с выходом 64% из раствора глутарового ангидрида и додецилмагнийбромида с использованием метода, применяемого в Промежуточном соединении 1а.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 2,75 (t, J=6,7 Гц, 1H), 2,49 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 2,44-2,35 (m, 4Н), 1,90 (р, J=7,2 Гц, 2Н), 1,56 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,26 (d, J=4,0 Гц, 19Н), 0,88 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 25b: 2-((5-оксогептадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 25b было синтезировано с выходом 55% из промежуточного соединения 25а и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для промежуточного
- 107 046244 соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 5,45-5,19 (m, 9Н), 4,30 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,12 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,46 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 2,42-2,24 (m, 8Н), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,88 (р, J=7,2 Гц, 2Н), 1,57 (dp, J=21,3, 7,2 Гц, 6Н), 1,43-1,18 (m, 41H), 0,87 (td, J=6,8, 4,1 Гц, 8Н).
Промежуточное соединение 25с: 2-((5-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)гептадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 25с было синтезировано с выходом 23% из промежуточного соединения 25b с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,31-8,24 (m, 2H), 7,42-7,35 (m, 2Н), 5,44-5,19 (m, 9Н), 4,83 (q, J=5,7 Гц, 1H), 4,31 (ddd, J=12,0, 4,4, 2,9 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 2,1 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,3 Гц, 4Н), 2,34 (dt,
J=30,7, 7,0 Гц, 6Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,80-1,52 (m, 14H), 1,29 (dd, J=19,3, 12,3 Гц, 44Н), 0,88 (td, J=6,8, 3,7 Гц, 9Н).
Соединение 25: 2-((5-(((3-(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)гептадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 25 было синтезировано с выходом 94% из промежуточного соединения 25с и 3(диметиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDO3) δ 5,46-5,19 (m, 9H), 4,74-4,65 (m, 1H), 4,29 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,7 Гц, 2Н), 4,25-4,07 (m, 4H), 2,82-2,72 (m, 4H), 2,39-2,28 (m, 8H), 2,22 (s, 6H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,84 (dq, J=8,2, 6,7 Гц, 2Н), 1,73-1,50 (m, 14H), 1,41-1,18 (m, 50H), 0,88 (td, J=7,0, 4,2 Гц, 9H). MS: 1016,11 m/z [M+H].
Пример 26 - соединение 26.
Соединение 26: 2-((5-(((3-(этил(метил)амино)пропокси)карбонил)окси)гептадеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 26 было синтезировано с выходом 84% из промежуточного соединения 25с и 3((метил)этиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDO3) δ 5,46-5,20 (m, 10Н), 4,69 (dq, J=7,5, 5,5 Гц, 1H), 4,29 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,6 Гц, 2Н), 4,25-4,10 (m, 4H), 2,83-2,72 (m, 4H), 2,45-2,38 (m, 4H), 2,37-2,28 (m, 6Н), 2,21 (s, 3Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,88-1,79 (m, 2H), 1,74-1,52 (m, 13H), 1,44-1,22 (m, 51H), 1,04 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=6,9, 4,1 Гц, 9Н). MS: 1030,1 m/z [M+H].
Пример 27 - соединение 27.
Соединение 27: 2-((5-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)гептадеканоил)окси)пропан- 108 046244
1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-6uc(oKTageka-9,12-диеноат)
Соединение 27 было синтезировано с выходом 79% из промежуточного соединения 25с и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,21 (m, 10Н), 4,69 (dt, J=7,1, 5,3 Гц, 1H), 4,29 (ddd, J=11,9, 4,3, 1,6 Гц, 2Н), 4,25-4,10 (m, 4H), 2,81-2,73 (m, 4H), 2,52 (dd, J=14,8, 7,1 Гц, 6Н), 2,33 (dt, J=13,4, 7,2 Гц, 6Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,89 (dq, J=10,8, 6,8 Гц, 2Н), 1,82-1,74 (m, J=3,8, 3,3 Гц, 4Н), 1,71-1,53 (m, 13H), 1,40-1,21 (m, 49H), 0,88 (td, J=6,9, 4,2 Гц, 9Н). MS: 1041,8 m/z [M+H].
Пример 28 - соединение 28.
Соединение 28: 2-((5-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)гептадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 28 было синтезировано с выходом 87% из промежуточного соединения 25с и NI-этилЫ1-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,43-5,21 (m, 10Н), 5,12 (s, 1H), 4,80-4,65 (m, 1H), 4,29 (dt, J=11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,19-4,09 (m, 2Н), 3,24 (d, J=4,8 Гц, 2Н), 2,83-2,72 (m, 4H), 2,44 (dt, J=14,6, 6,6 Гц, 4Н), 2,38-2,27 (m, 6Н), 2,20 (s, 3Н), 2,04 (dd, J=7,8, 5,7 Гц, 8Н), 1,74-1,42 (m, 15H), 1,42-1,19 (m, 50H), 1,04 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=7,0, 4,4 Гц, 9Н). MS: 1014,1 m/z [M+H].
Пример 29 - соединение 29.
Соединение 29: 2-((5-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)гептадеканоил)окси)пропан-1,3 -диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 29 было синтезировано с выходом 93% из промежуточного соединения 25с и (1метилпирролидин-2-ил)метанамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,21 (m, 11Н), 5,08 (d, J=8,8 Гц, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,29 (dt, J=11,9, 4,6 Гц, 2Н), 4,13 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,5 Гц, 2Н), 3,39 (q, J=11,3, 10,6 Гц, 1H), 3,08 (d, J=25,9 Гц, 2Н), 2,822,73 (m, 4H), 2,39-2,18 (m, 12H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 9Н), 1,91-1,82 (m, 1H), 1,62 (dddd, J=27,4, 20,2, 13,2, 6,7 Гц, 18Н), 1,42-1,20 (m, 52H), 0,88 (td, J=6,9, 4,4 Гц, 9H). MS: 1026,8 m/z [M+H].
Пример 30 - соединение 30.
Промежуточное соединение 30а: 3-гидроксипропан-1,2-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12диеноат)
- 109 046244
К раствору глицерина (1,59 г, 1,0 экв.) в DCM (0,1 М) добавляли линолевую кислоту (2,05 экв.), DMAP (0,2 экв.), DIPEA (2,4 экв.), EDCI (2,4 экв.) и 1 мл DMF последовательно. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 65 часов. По завершении смесь гасили добавлением воды, и органический слой промывали 1 раз 1 М HCl и 1 раз 5% NaHCO3. Затем органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) до продукта в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,28 (m, 8H), 5,13-5,04 (m, 1H), 4,32 (dd, J=11,9, 4,6 Гц, 1H), 4,23 (dd, J=11,9, 5,6 Гц, 1H), 3,73 (ddd, J=6,5, 5,0, 1,3 Гц, 2Н), 2,82-2,73 (m, 4Н), 2,33 (dt, J=8,8, 7,5 Гц, 4Н), 2,03 (dq, J=13,1, 6,6 Гц, 9Н), 1,69-1,57 (m, 4H), 1,44-1,23 (m, 29H), 0,96-0,83 (m, 6H).
Промежуточное соединение 30b: 3-((4-оксогексадеканоил)окси)пропан-1,2-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 30b было синтезировано с выходом 66% из промежуточного соединения 30а и промежуточного соединения 1а с использованием метода, примененного в промежуточном соединении 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,26 (m, 9Н), 4,29 (ddd, J=11,8, 4,3, 2,1 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 7,7, 6,0 Гц, 2Н), 2,82-2,74 (m, 4Н), 2,71 (td, J=6,3, 5,6, 2,4 Гц, 2Н), 2,62-2,55 (m, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,31 (td, J=7,6, 5,4 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,66-1,54 (m, 8H), 1,41-1,19 (m, 47H), 0,88 (td, J=7,0, 4,4 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 30с: 3-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,2-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 30с было синтезировано с выходом 40% из промежуточного соединения 30b с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1е.
Соединение 30: 9-додецил-2-метил-7,12-диоксо-6,8,13-триокса-2-азагексадекан-15,16-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 30 было синтезировано с выходом 84% из промежуточного соединения 30с и 3
- 110 046244 ((метил)этиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,20 (m, 8H), 4,76-4,67 (m, 1H), 4,29 (ddd, J=11,9, 4,3, 1,7 Гц, 2Н), 4,22-4,11 (m, 4Н), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 4Н), 2,45-2,28 (m, 8H), 2,22 (s, 6Н), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 2,00-1,79 (m, 4H), 1,69-1,51 (m, 6H), 1,40-1,17 (m, 48H), 0,88 (td, J=6,9, 4,8 Гц, 8Н). MS: 1002,2 m/z [M+H].
Пример 31 - соединение 31.
Промежуточное соединение 31а: 4-оксододекановая кислота
Промежуточное соединение 31а было синтезировано с выходом 9% из раствора янтарного ангидрида и октилмагнийбромида с использованием метода, применяемого в промежуточном соединении 1а.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,71 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2,62 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,57 (р, J=7,1 Гц, 2Н), 1,26 (d, J=3,6 Гц, 10Н), 0,87 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение бис(октадека-9,12-диеноат)
31b: 2-((4-оксододеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z, 12'Z)-
Промежуточное соединение 31b было синтезировано с выходом 38% из промежуточного соединения 31а и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого в промежуточном соединении 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,47-5,19 (m, 8Н), 4,28 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,15 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,77 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,71 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,59 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,32 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8H), 1,67-1,53 (m, 6H), 1,40-1,20 (m, 37H), 0,88 (td, J=6,8, 5,0 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 31с: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 31с было синтезировано с выходом 68% с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,26-8,16 (m, 2H), 7,40-7,30 (m, 2H), 5,39-5,05 (m, 9H), 4,80 (tdd, J=7,5, 5,4, 4,0 Гц, 1H), 4,49-4,04 (m, 4H), 2,77-2,63 (m, 4H), 2,45-2,18 (m, 6H), 2,08-1,85 (m, 10Н), 1,74-1,46 (m, 6H), 1,41-1,11 (m, 40H), 0,81 (td, J=6,9, 2,4 Гц, 9Н).
Соединение 31: 2-((4-(((3-(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 31 было синтезировано с выходом 71% из промежуточного соединения 31с и 3- 111 046244 (диметиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDO3) δ 5,42-5,22 (m, 9H), 4,72 (tdd, J=7,4, 5,3, 4,0 Гц, 1H), 4,34-4,26 (m, 2H), 4,23-4,10 (m, 4H), 2,82-2,72 (m, 4H), 2,45-2,36 (m, 4H), 2,31 (ddd, J=8,0, 7,1, 1,2 Гц, 4Н), 2,25 (s, 6Н), 2,05 (q, J=6,6 Гц, 8Н), 1,99-1,91 (m, 1H), 1,91-1,82 (m, 3Н), 1,67-1,53 (m, 6Н), 1,40-1,21 (m, 41H), 0,94-0,82 (m, 9H). MS: 945,6 m/z [M+H].
Пример 32 - соединение 32.
Соединение 32: 2-((4-(((3-(диэтиламино)пропокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан- 1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 32 было синтезировано с выходом 71% из промежуточного соединения 31с и 3(диэтиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,28 (m, 9H), 5,25 (ddd, J=5,8, 4,4, 1,5 Гц, 1H), 4,72 (tdd, J=7,6, 5,4, 4,0 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,25-4,08 (m, 5H), 2,77 (td, J=6,1, 1,1 Гц, 4Н), 2,64-2,53 (m, 6Н), 2,40 (dt, J=8,7, 6,8 Гц, 2Н), 2,31 (ddd, J=8,0, 7,2, 1,1 Гц, 4Н), 2,10-2,01 (m, 10Н), 1,95 (dddd, J=11,1, 9,2, 6,9, 3,5 Гц, 1H), 1,91-1,81 (m, 3Н), 1,69-1,49 (m, 7H), 1,39-1,20 (m, 42H), 1,05 (t, J=7,2 Гц, 6Н), 0,88 (td, J=7,0, 4,9 Гц, 9Н). MS: 974,0 m/z [M+H].
Пример 33 - соединение 33.
Соединение 33: 2-((4-(((3-(этил(метил)амино)пропокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 33 было синтезировано с выходом 79% из промежуточного соединения 31с и 3((метил)этиламино)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDO3) δ 5,45-5,21 (m, 10Н), 4,72 (tdd, J=9,5, 6,7, 4,1 Гц, 1H), 4,38-4,25 (m, 2Н), 4,25-4,10 (m, 4Н), 2,77 (td, J=6,2, 1,1 Гц, 4Н), 2,51-2,38 (m, 6H), 2,37-2,27 (m, 5Н), 2,24 (d, J=2,4 Гц, 3Н), 2,05 (q, J=7,1 Гц, 8Н), 1,97-1,83 (m, 4H), 1,70-1,50 (m, 7H), 1,39-1,21 (m, 41Н), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,940,84 (m, 9Н). 960,1 m/z [M+H].
Пример 34 - соединение 34.
Соединение 34: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 34 было синтезировано с выходом 59% из промежуточного соединения 31с и NI-этилМ-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,13 (m, 10Н), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,3 Гц, 2Н), 3,25 (q, J=5,7 Гц, 2Н), 2,83-2,73 (m, 4H), 2,53-2,35 (m, 6Н), 2,35-2,27 (m, 4Н), 2,21 (d, J=3,3 Гц, 3Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,96-1,74 (m, 3Н), 1,66-1,43 (m, 7H), 1,41-1,21 (m, 41H), 1,05
- 112 046244 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=6,9, 5,6 Гц, 9H). 944,7 m/z [M+H].
Пример 35 - соединение 35.
Соединение 35: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 35 было синтезировано с выходом 71% из промежуточного соединения 31с и (1метилпирролидин-2-ил)метанамина с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,44-5,21 (m, 10Н), 4,86-4,66 (m, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,1 Гц, 2Н), 3,48-3,35 (m, 1H), 3,22-3,00 (m, 2H), 2,83-2,71 (m, 4H), 2,47-2,19 (m, 12H), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,96-1,67 (m, 6H), 1,67-1,42 (m, 8Н), 1,41-1,19 (m, 41Н), 0,95-0,84 (m, 9H). 956,5 m/z [M+H].
Пример 36 - соединение 36.
Соединение 36: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 36 было синтезировано с выходом 34% из промежуточного соединения 31с и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 5,43-5,22 (m, 9H), 4,72 (tdd, J=7,4, 5,4, 4,0 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,25-4,08 (m, 4Н), 2,82-2,72 (m, 4Н), 2,67 (t, J=7,6 Гц, 5Н), 2,47-2,27 (m, 6H), 2,09-1,91 (m, 11Н), 1,91-1,80 (m, 4H), 1,68-1,47 (m, 7H), 1,47-1,19 (m, 42H), 0,88 (td, J=7,0, 4,8 Гц, 9Н). 971,3 m/z [M+H].
Пример 37 - соединение 37.
Соединение 37: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)(метил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 37 было синтезировано с выходом 67% из промежуточного соединения 31с и NI-этил\1,\2-димети.тэн111-1,2-диамина с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,44-5,18 (m, 8H), 4,78 (s, 1H), 4,28 (dt, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 3,44-3,24 (m, 2H), 2,91 (d, J=8,1 Гц, 3Н), 2,81-2,71 (m, 4Н), 2,60-2,21 (m, 12H), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 7Н), 1,98-1,46 (m, 14H), 1,43-1,19 (m, 37H), 1,14-1,00 (m, 3Н), 0,88 (td, J=7,0, 5,3 Гц, 8H). 958,6 m/z [M+H].
Пример 38 - соединение 38.
Соединение 38: 2-((4-(((2-(диметиламино)этил)(метил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 113 046244
Соединение 38 было синтезировано с выходом 83% из промежуточного соединения 31с и \1,\1,\2-триметилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,19 (m, 8H), 4,78 (s, 1H), 4,28 (dt, J=11,9, 4,1 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 3,37 (d, J=23,8 Гц, 2Н), 2,91 (d, J=6,8 Гц, 3Н), 2,82-2,72 (m, 4H), 2,54-2,21 (m, 13H), 2,04 (q, J=6,7 Гц, 7Н), 1,95-1,44 (m, 14H), 1,42-1,21 (m, 37H), 0,88 (td, J=7,0, 5,3 Гц, 8H). 944,5 m/z [M+H].
Пример 39 - соединение 39.
Промежуточное соединение 39а: бромид децилмагния
К раствору Mg (10,99 г, 2 эквив.) и I2 (0,0001 экв.) в THF (250 мл) по каплям добавляли 1бромодекан (1,0 экв.) при 80°С в течение 2 ч. После добавления смесь перемешивали при этой температуре в течение 2 ч. Неочищенный продукт децилмагнийбромид получали в виде раствора чернокоричневого цвета, который немедленно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 39b: 4-оксотетрадекановая кислота
Раствор янтарного ангидрида (45 г, 1,0 экв.) в THF (1,1 М) охлаждали до -78°С с последующим добавлением промежуточного соединения 39а. Реакционную смесь выдерживали при -78°С в течение 2 ч перед перемешиванием при 15°С в течение 16 ч. Затем реакцию гасили добавлением нас. NH4Cl, разбавляли Н2О и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Очистка колоночной хроматографией дала продукт в виде белого твердого вещества. (7,8 г, 7%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDO3) δ 2,74 (dd, J=6,9, 5,2 Гц, 2Н), 2,70-2,63 (m, 2Н), 2,46 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,671,54 (m, 2H), 1,29 (d, J=5,2 Гц, 14Н), 0,90 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 39с: 2-((4-оксотетрадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 39с было получено из промежуточных соединений 39b и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDO3) δ 5,42-5,18 (m, 9H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,74 (dt, J=22,1, 6,8 Гц, 6Н), 2,66-2,56 (m, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,59 (tq, J=14,2, 7,5 Гц, 7Н), 1,41-1,18 (m, 44H), 0,88 (td, J=6,9, 4,6 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 39d: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)тетрадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 114 046244
К раствору промежуточного соединения 39с в МеОН (0,13 М) медленно добавляли NaBH4 (2,5 экв.) при 5°С. Смесь перемешивали при этой температуре 2 ч. Реакционную смесь гасили добавлением Н2О, а затем дважды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии, чтобы получить бесцветное масло, которое немедленно восстанавливали в DCM (1 М) с последующим добавлением 4-нитрофенилхлофоромата (1,5 эквив.) и пиридина (2 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч, после чего реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением промежуточного соединения 39d с выходом 31%.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,33-8,22 (m, 2Н), 7,46-7,33 (m, 2Н), 5,43-5,23 (m, 9Н), 4,31 (dd, J=12,0, 4,3 Гц, 2Н), 4,15 (dd, J=12,0, 5,8 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,3 Гц, 4Н), 2,47 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,30 (td, J=7,6, 4,2 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=7,3 Гц, 10Н), 1,67 (dt, J=47,7, 6,1 Гц, 7Н), 1,30 (tq, J=14,3, 4,9, 3,0 Гц, 53Н), 0,88 (td, J=6,8, 3,5 Гц, 10Н).
Соединение 39: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тетрадеканоил)окси)пропан-1,3диил (92,9'2,122,12'2)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 39 было синтезировано с выходом 78% из промежуточного соединения 39d и NI-этил№-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,49-5,17 (m, 9H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,3 Гц, 2Н), 3,26 (q, J=6,0 Гц, 2Н), 2,77 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,52-2,27 (m, 10Н), 2,23 (s, 3Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,95-1,42 (m, 14H), 1,42-1,18 (m, 40H), 1,05 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=6,8, 4,5 Гц, 7H). 972,9 m/z [M+H].
Пример 40 - соединение 40.
Промежуточное соединение 40а: 4-гидроксидекановая кислота
К раствору 5-гексилтетрагидрофуран-2-она (15 г, 1,0 экв.) в EtOH (240 мл) и Н2О (80 мл) добавляли NaOH (2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 12 ч. Смесь концентрировали для удаления EtOH. Затем доводили pH до 5 водн. 1 н. HCl и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (48%).
Промежуточное соединение 40b: 4-оксодекановая кислота
К раствору NaH2PO4 (17 экв.) и Na2HPO4 (2,4 экв.) в Н2О (1000 мл) добавляли промежуточное соединение 40а (10 г, 1,0 экв.). Затем к раствору добавляли NaClO (200 мл, 6-8% Cl). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 12 ч. Затем к смеси добавляли Н3РО4 (200 мл, 85%) и силикагель (300
- 115 046244
г). Смесь сушили при пониженном давлении и промывали 3 раза EtOAc. Органический слой концентрировали при пониженном давлении, получая сырой продукт. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (EtoAc/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (80%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,70 (dd, J=7,0, 5,3 Гц, 2Н), 2,63-2,58 (m, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,58 (q, J=7,4 Гц, 2Н), 1,33-1,19 (m, 6H), 0,90-0,83 (m, 3Н).
Промежуточное соединение бис(октадека-9,12-диеноат)
40с: 2-((4-оксодеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-
Промежуточное соединение 40с было синтезировано с выходом 40% из промежуточного соединения 40b и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,28 (m, 8Н), 5,24 (tt, J=5,9, 4,3 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,73 (dt, J=22,4, 6,7 Гц, 7Н), 2,58 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,59 (q, J=6,7 Гц, 7Н), 1,40-1,22 (m, 35H), 0,88 (td, J=6,8, 4,0 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 40d: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)деканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 40d было синтезировано с выходом 31% из промежуточного соединения 40с с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,37-8,27 (m, 2H), 7,43 (dd, J=9,1, 5,9 Гц, 2Н), 5,45-5,24 (m, 9Н), 4,34 (dd, J=12,0, 4,3 Гц, 2Н), 4,18 (dd, J=11,9, 6,0 Гц, 2Н), 2,79 (t, J=6,3 Гц, 4Н), 2,49 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,41-2,30 (m, 4Н), 2,07 (q, J=6,9 Гц, 9Н), 1,83-1,58 (m, 7H), 1,48-1,12 (m, 37H), 1,00-0,82 (m, 9H).
Соединение 40: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 40 было синтезировано с выходом 53% из промежуточного соединения 40d и Nl-этилЮ-мети.тэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,19 (m, 9H), 4,76 (s, 1H), 4,32-4,22 (m, 2H), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,4 Гц, 2Н), 3,26 (s, 2Н), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,57-2,36 (m, 6H), 2,36-2,27 (m, 4Н), 2,23 (s, 3Н), 2,05 (q, J=6,6 Гц, 8Н), 1,98-1,42 (m, 15H), 1,41-1,19 (m, 35H), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=9,7, 8,2, 4,2 Гц, 9Н). MS: 916,7 m/z [M+H].
Пример 41 - соединение 41.
Промежуточное соединение 41а: 4-циклогексил-4-оксобутановая кислота
- 116 046244
К раствору янтарного ангидрида (30 г, 1,0 экв.) в Et2O (300 мл) добавляли CuI (0,1 экв.). Смесь охлаждали до -20°С. Затем к смеси добавляли циклогексилмагнийбромид (1,0 экв.). Реакционную смесь нагревали до 25°С и перемешивали в течение 14 ч. Реакцию гасили добавлением 1 М водн. HCl и перемешивали 15 мин. Затем реакционную смесь фильтровали, и фильтрат экстрагировали 3 раза DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бледнорозового твердого вещества (13%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 10,09 (s, 1H), 2,66 (dt, J=55,4, 6,5 Гц, 4Н), 2,35 (td, J=10,8, 9,3, 5,2 Гц, 1H), 1,75 (ddd, J=43,2, 36,6, 11,9 Гц, 5Н), 1,46-1,09 (m, 5H).
Промежуточное соединение 41b: 2-((4-циклогексил-4-оксобутаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 41b было синтезировано с выходом 34% из промежуточного соединения 41а и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,28 (m, 8H), 5,24 (ddd, J=10,2, 5,6, 4,2 Гц, 1H), 4,28 (dt, J=11,9, 4,6 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 2,3 Гц, 2Н), 2,81-2,70 (m, 6Н), 2,64-2,54 (m, 3Н), 2,38-2,27 (m, 5Н), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,89-1,55 (m, 11Н), 1,40-1,20 (m, 34H), 0,88 (t, J=6,8 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 41с: 2-((4-циклогексил-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)бутаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 41с было синтезировано с выходом 14% из промежуточного соединения 41b с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,33-8,21 (m, 2H), 7,45-7,34 (m, 2H), 5,44-5,13 (m, 9H), 4,70 (ddd, J=9,3, 6,1, 3,4 Гц, 1H), 4,50 (dd, J=12,3, 3,9 Гц, 1H), 4,35-4,10 (m, 4Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,50-2,40 (m, 2H), 2,38-2,22 (m, 4H), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 10Н), 1,85-1,52 (m, 10Н), 1,49-1,00 (m, 31Н), 0,88 (t, J=6,8 Гц, 6Н).
Соединение 41: 2-((4-циклогексил-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)бутаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 41 синтезировали с выходом 60% из промежуточного соединения 41d и М-этил-Мметилэтан-1,2-диамина, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,09 (m, 9H), 4,60 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 1,6 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 2,9 Гц, 2Н), 3,25 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,54-2,15 (m, 12H), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,99-0,95 (m, 50H), 0,93-0,80 (m, 6H). MS: 914,5 m/z [M+H].
- 117 046244
Пример 42 - соединение 42.
Промежуточное соединение 42а: 4-гидроксиоктановая кислота
Промежуточное соединение 42а было синтезировано с выходом 53% из 5-бутилтетрагидрофуран-2она, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 39b.
Промежуточное соединение 42b: 4-оксооктановая кислота
Промежуточное соединение 42b было синтезировано с выходом 61% из промежуточного соединения 42а, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 38b.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,65 (ddd, J=7,0, 5,8, 1,1 Гц, 2Н), 2,56 (ddd, J=7,1, 6,0, 1,2 Гц, 2Н), 2,38 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,56-1,44 (m, 2H), 1,30-1,17 (m, 2H), 0,84 (t, J=7,3 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 42с: 2-((4-оксооктаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 42с было синтезировано с выходом 29% из промежуточного соединения 42b и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,35 (tq, J=18,2, 9,4, 7,6 Гц, 8Н), 5,24 (t, J=5,3 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=12,0, 3,9 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=12,1, 5,8 Гц, 2Н), 2,74 (dt, J=20,9, 6,7 Гц, 6Н), 2,59 (d, J=6,6 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,6 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,7 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,60 (t, J=7,5 Гц, 8Н), 1,31 (d, J=14,1 Гц, 29Н), 0,88 (t, J=6,9 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 42d: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)октаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 42d было синтезировано с выходом 51% из промежуточного соедине ния 40с, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,28 (dd, J=7,8, 4,7 Гц, 2Н), 7,47-7,36 (m, 2H), 5,32 (dp, J=19,8, 9,2 Гц, 8Н), 5,17 (s, 1H), 4,87 (d, J=7,3 Гц, 1H), 4,49 (d, J=12,2 Гц, 1H), 4,36-4,09 (m, 4Н), 2,75 (d, J=6,7 Гц, 4Н), 2,49 (dt, J=23,8, 7,9 Гц, 2Н), 2,42-2,14 (m, 5H), 2,03 (q, J=7,2 Гц, 10Н), 1,73 (s, 1H), 1,61 (dd, J=23,8, 11,9 Гц, 6Н), 1,31 (d, J=14,4 Гц, 30Н), 0,89 (tt, J=9,5, 7,0, 2,7 Гц, 9Н).
Соединение 42: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 118 046244
Соединение 42 было синтезировано с выходом 93% из промежуточного соединения 42d и Nl-этил№-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,10 (m, 11Н), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 1,3 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,8, 5,8, 3,3 Гц, 2Н), 3,25 (s, 2Н), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,39 (ddd, J=8,7, 6,6, 4,3 Гц, 6Н), 2,35-2,28 (m, 4Н), 2,22 (s, 3Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,96-1,74 (m, 3Н), 1,61 (s, 11Н), 1,42-1,22 (m, 34h), 1,10-0,99 (m, 3Н), 0,95-0,83 (m, 9H).
Пример 43 - соединение 43.
Промежуточное соединение 43 а: 4-гидроксибутаноат натрия
К смеси тетрагидрофуран-2-она (10 г, 1,0 экв.) в Н2О (100 мл) добавляли NaOH (4,0 экв.), смесь дегазировали и продували 3 раза N2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 24 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка в виде бесцветного масла, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (12 г, неочищенное).
Промежуточное соединение 43b: бензил-4-гидроксибутаноат
К смеси промежуточного соединения 43а (12 г, 1,0 эквив.) в ацетоне (100 мл) добавляли ТВАВ (0,05 эквив.) и бензилбромид (1,2 эквив.), смесь дегазировали и продували 3 раза N2. Смесь перемешивали при 60°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток разбавляли EtOAc и промывали l раз каждый раз l н. NaHsO4, NaHCO3 и Н2О. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали, а неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (43%).
Промежуточное соединение 43 с: бензил-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)бутаноат
К смеси промежуточного соединения 43b (5 г, 1,0 эквив.) в DCM (150 мл) добавляли 4нитрофенилхлорформиат (1,0 эквив.), смесь дегазировали и продували 3 раза N2. Реакционную смесь охлаждали до 0°С с последующим добавлением пиридина (2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, разбавляли гексаном и фильтровали. Фильтрат промывали 10 раз Н2О, и объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (32%).
Промежуточное соединение 43 d: бензил-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)бутаноат
К смеси промежуточного соединения 43 с (3 г, 1,0 эквив.) в MeCN (50 мл) добавляли Ν1-3τβλ-Ν1метилэтан-1,2-диамин (2,5 эквив.), пиридин (3,0 эквив.) и DMAP (1,0 эквив.). Смесь дегазировали и продували 3 раза N2, и смесь перемешивали при 70°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (56%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,33-7,23 (m, 4H), 5,24 (d, J=12,8 Гц, 1H), 5,05 (s, 2Н), 4,04 (dt, J=12,9, 6,7 Гц, 2Н), 3,19 (q, J=5,8 Гц, 2Н), 3,00 (s, 1H), 2,39 (dt, J=10,4, 6,6 Гц, 6H), 2,13 (s, 3H), 1,89 (p, J=6,9 Гц, 2Н), 0,98 (t, J=7,1 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 43e: 4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)бутановая кислота
- 119 046244
В смесь Промежуточного соединения 43d (1,5 г, 1,0 эквив.) в МеОН (30 мл) добавляли Pd/C (10% масс, 0,05 экв.), смесь дегазировали и продували 3 раза Н2. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 1 ч в атмосфере Н2, после чего фильтрат концентрировали с получением неочищенного остатка, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 4,11 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 3,49 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 3,29-3,21 (m, 5Н), 2,89 (s, 3Н), 2,38 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 1,92 (р, J=6,7 Гц, 2Н), 1,34 (t, J=7,3 Гц, 3Н).
Соединение 43: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)бутаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 43 было синтезировано с выходом 45% из промежуточного соединения 43 d и промежуточного соединения 1с, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,22 (m, 9H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,18-4,06 (m, 4Н), 3,25 (q, J=5,8 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,43 (dt, J=10,5, 7,3 Гц, 6Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,20 (s, 3Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,95 (q, J=6,9 Гц, 2Н), 1,59 (d, J=7,1 Гц, 7Н), 1,40-1,22 (m, 26Н), 1,04 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (t, J=6,8 Гц, 6Н).
Пример 44 - соединение 44.
Соединение 44: 2-((4-(((( 1 -метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 44 было синтезировано с выходом 35% из промежуточного соединения 40d и (1метилпирролидин-2-ил)метанамина, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,20 (m, 9H), 5,16 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,0 Гц, 2Н), 3,39 (s, 1H), 3,10 (d, J=27,2 Гц, 2Н), 2,81-2,73 (m, 4Н), 2,43-2,18 (m, 11Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,96-1,42 (m, 17Н), 1,30 (dqt, J=12,8, 8,8, 5,4 Гц, 36Н), 0,92-0,83 (m, 9H). MS: 928,9 m/z [M+H].
Пример 45 - соединение 45.
Соединение 45: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 45 было синтезировано с выходом 52% из промежуточного соединения 40d и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,21 (m, 9Н), 4,72 (ddd, J=11,3, 8,8, 5,7 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,25-4,10 (m, 4H), 2,81-2,74 (m, 4H), 2,59 (s, 5H), 2,40 (dt, J=8,6, 6,4 Гц, 2Н), 2,36-2,27 (m, 4Н),
- 120 046244
2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,98-1,78 (m, 9H), 1,67-1,51 (m, 7H), 1,41-1,21 (m, 36Н), 0,88 (td, J=7,0, 5,0 Гц, 9H). MS: 943,8 m/z [M+H].
Пример 46 - соединение 46.
Соединение 46: 2-((4-(((2-(пирролидин- 1-ил)этил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 46 было синтезировано с выходом 53% из промежуточного соединения 1е и 2- (пирролидин-1-ил)этан-1-амина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,55 (s, 1H), 5,46-5,21 (m, 9H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,6 Гц, 2Н), 3,35 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 2,81-2,60 (m, 9Н), 2,39 (ddd, J=8,6, 6,7, 3,8 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,84 (s, 7Н), 1,66-1,19 (m, 55H), 0,88 (td, J=7,0, 4,3 Гц, 9Н). MS: 1012,5 m/z [M+H].
Пример 47 - соединение 47.
Соединение 47: 2-((4-((((1-метилпиперидин-4-ил)окси)карбонил)окси)гексадеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 1е (250 мг, 1,0 экв.) в MeCN (0,1 М) добавляли пиридин (3,0 экв.), 1-метилпиперидин-4-ол (1,5 экв.) и DMAP (1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали 18 ч при комнатной температуре. Добавляли дополнительную порцию 1-метилпиперидин-4-ола (3,0 экв.), и смесь нагревали до 50°С. Через 2 ч добавляли дополнительную порцию DMAP (1,0 экв.) и реакцию поддерживали еще 2 ч. По завершении к реакционной смеси добавляли гептан (0,1 М) и слой гептана промывали 3 раза MeCN. Объединенные слои MeCN трижды экстрагировали гептаном, а объединенные слои гептана промывали один последний раз MeCN. Затем гептан удаляли в вакууме и неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (MeOH/DCM) с получением продукта в виде бесцветного масла (62 мг, 32%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,20 (m, 9Н), 4,77-4,60 (m, 2Н), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,6 Гц, 2Н), 2,83-2,66 (m, 6H), 2,46-2,26 (m, 11Н), 2,08-1,71 (m, 18H), 1,71-1,47 (m, 8H), 1,40-1,21 (m, 47Н), 0,88 (td, J=7,0, 4,2 Гц, 9Н). MS: 1013,7 m/z [M+H].
Пример 48 - соединение 48.
Соединение 48: 2-((4-(((3-(бис(2-гидроксиэтил)амино)пропил)карбамоил)окси)гексадеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 1е (250 мг, 1,0 эквив.) В MeCN (0,1 М) добавляли пиридин (3,0 эквив.) и 2 - [(3-аминопропил)(2-гидроксиэтил)амино]этан-1-ол (1,5 эквив.). Реакционную смесь перемешивали 2 ч при комнатной температуре. По завершении к реакционной смеси добавляли гептан (0,1 М) и слой гептана промывали 3 раза MeCN. Объединенные слои MeCN трижды экстрагировали гептаном, а объединенные слои гептана промывали один последний раз MeCN. Затем гептан удаляли в вакуу
- 121 046244 ме и неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (MeOH/DCM) с получением продукта в виде бесцветного масла (97 мг, 48%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 5,43-5,20 (m, 9Н), 4,76 (s, 1H), 4,29 (ddd, J=11,9, 4,6, 1,8 Гц, 2Н), 4,16 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 3,72 (t, J=5,0 Гц, 4Н), 3,35-3,22 (m, 2H), 2,98-2,46 (m, 14H), 2,41-2,28 (m, 6H), 2,091,86 (m, 9H), 1,80 (dd, J=14,2, 7,2 Гц, 3Н), 1,67-1,42 (m, 7H), 1,42-1,18 (m, 46H), 0,88 (td, J=7,0, 4,3 Гц, 9Н). MS: 1060,6 m/z [M+H].
Пример 49 - сравнительное соединение 49.
Соединение 49: 3-((4,4-бис(октилокси)бутаноил)окси)-2-((((3-(диэтиламино)пропокси)карбонил)окси)метил)пропил (9Z, 127)-октадека-9,12-диеноат
О %
Соединение 49 синтезировали в соответствии со способами, описанными в WO 2015/095340 А1 (пример 13).
1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 5,35 (m, 4H), 4,48 (t, J=5,6 Гц, 1H), 4,17 (m, 8Н), 3,56 (m, 2Н), 3,40 (m, 2Н), 2,77 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,55 (q, J=7,2 Гц, 6Н), 2,40 (m, 3Н), 2,30 (t, J=7,6 Гц, 2Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 4Н), 1,92 (m, 2H), 1,84 (m, 2H), 1,57 (m, 6H), 1,30 (m, 34Н), 1,03 (t, J=7,2 Гц, 6Н), 0,88 (m, 9H) ppm; MS: 853 m/z [M+H].
Пример 50 - соединение 50.
Соединение 50: 2-((4-(((2-(пирролидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан- 1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 50 было синтезировано с выходом 36% из промежуточного соединения 40d и 2(пирролидин-1-ил)этан-1-амина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,49-5,29 (m, 8H), 5,27-5,20 (m, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,8 Гц, 2Н), 3,35 (s, 2H), 2,83-2,44 (m, 10Н), 2,39 (ddd, J=8,4, 6,7, 3,3 Гц, 2Н), 2,36-2,25 (m, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,98-1,43 (m, 15Н), 1,42-1,20 (m, 33Н), 0,89 (td, J=6,1, 5,4, 0,9 Гц, 9Н). MS: 928,6 m/z [M+H].
Пример 51 - соединение 51.
Соединение 51: 2-((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 51 было синтезировано с выходом 27% из промежуточного соединения 31с и 2(пирролидин-1-ил)этан-1-амина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,55 (s, 1H), 5,44-5,28 (m, 8H), 5,28-5,22 (m, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,9 Гц, 2Н), 3,37 (s, 2H), 2,83-2,51 (m, 10Н), 2,39 (ddd, J=8,4, 6,8, 3,1 Гц, 2Н), 2,35-2,27 (m, 4Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,97-1,41 (m, 17Н), 1,41-1,20 (m, 40Н), 0,94-0,84 (m, 9H). MS: 957,0 m/z [M+H].
- 122 046244
Пример 52 - соединение 52.
Промежуточное соединение 52а: бензил-3-гидроксиундеканоат
ОН oZr™
К раствору THF (150 мл) при 66°С в атмосфере N2 по каплям добавляли Zn (22,99 г, 1,0 эквив.) и нонаналь (25 г, 1,0 эквив.). Затем к реакционной смеси медленно и осторожно по каплям добавляли бензил-2-бромацетат (50,00 г, 1,24 экв.). После полного добавления бензил-2-бромацетата смесь охлаждали и перемешивали при 20°С в течение 2 ч. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления ТГФ, и полученный остаток разбавляли водой и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (25 г, 49%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 7,33-7,24 (m, 5H), 5,09 (s, 2H), 3,95 (tt, J=7,7, 3,8 Гц, 1H), 2,75 (d, J=3,9 Гц, 1H), 2,56-2,35 (m, 2H), 1,54-1,11 (m, 18H), 0,81 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 52b: бензил 3-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)ундеканоат
L L л
К раствору промежуточного соединения 52а (25 г, 1,0 эквив.) в DCM (250 мл) добавляли (4нитрофенил)карбонохлоридат (17,23 г, 1,0 эквив.) и пиридин (13,80 мл, 2,0 эквив.) в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч. По завершении, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM, и полученный остаток разбавляли водой и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (12 г, 31%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,31-8,01 (m, 4H), 7,28 (s, 5H), 5,22-5,14 (m, 2H), 5,13-5,01 (m, 4H), 2,68 (dd, J=14,8, 6,4 Гц, 3Н), 1,75-1,64 (m, 2H), 1,30-1,19 (m, 18H), 0,80 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 52с: бензил 3-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)ундеканоат
К раствору промежуточного соединения 52b (14 г, 1,0 эквив.) и №-этил-№-метилэтан-1,2-диамина (6,25 г, 2,0 эквив.) в MeCN (400 мл) добавляли пиридин (7,41 мл, 3,0 экв.) и DMAP (3,74 г, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления MeCN, и полученный остаток разбавляли водой и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла. (6 г, 47%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,39-7,28 (m, 5Н), 5,11 (s, 4Н), 3,21 (h, J=6,8 Гц, 2Н), 2,62 (td, J=14,4, 13,6, 6,4 Гц, 2Н), 2,50-2,39 (m, 4Н), 1,59 (h, J=8,2 Гц, 2Н), 1,25 (d, J=16,1 Гц, 14Н), 1,03 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,86 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 52d: 3-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)ундекановая кислота
К раствору промежуточного соединения 52с (6 г, 1,0 эквив.) в МеОН (60 мл) добавляли Pd/C (2 г, 10% мас./мас.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере Н2. Затем реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде коричневого масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 12,76 (s, 1h), 6,28 (t, J=5,8 Гц, 1H), 5,01 (р, J=6,1, 5,6 Гц, 1H), 3,30 (qq, J=13,8, 6,0 Гц, 2Н), 2,70 (hd, J=12,1, 11,0, 5,4 Гц, 3Н), 2,37 (d, J=14,1 Гц, 4Н), 1,51 (ddq, J=21,6, 14,2, 6,7 Гц, 2Н), 1,34-1,14 (m, 11H), 1,10 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,80 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Соединение 52: 2-((3-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 123 046244
К раствору промежуточного соединения 52d (1,0-1,1 экв.) и промежуточного соединения 1с (1,0-1,1 экв.) в DCM (0,1-0,25 экв.) добавляли DMAP (0,25 экв.), DIPEA (3,5 экв.) и EDCI (1,5 экв.) последовательно. Реакционную смесь перемешивали при 23°С в течение не менее 16 ч. К реакционной смеси добавляли дополнительное количество DMAP (0,25 эквив.) и реакционную смесь перемешивали при 23°С в течение еще 6 ч. Затем реакцию гасили добавлением воды, промывали 1 раз 1 М HCl и 1 раз 5% NaHCO3. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Очистка колоночной хроматографией дала продукт в виде бесцветного масла (28%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,53-5,28 (m, 8H), 5,24 (s, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=15,9, 11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=13,4, 6,8 Гц, 2Н), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,59 (tt, J=15,9, 9,0 Гц, 6Н), 2,37-2,14 (m, 6H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 7H), 1,59 (d, J=14,2 Гц, 12H), 1,46-0,97 (m, 42H), 0,96-0,81 (m, 9H). MS: 930,8 m/z [M+H].
Пример 53 - соединение 53.
Промежуточное соединение 53а: 2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диил (92,9'2,122,12'2)-бис(октадека9,12-диеноат)
К раствору линолевой кислоты (20 г, 1,0 экв.) и 2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диола (7,57 г, 1,0 экв.) в DCM (200 мл) добавляли EDCI (13,67 г, 1,0 экв.), DMAP (1,39 г, 0,16 экв.) и DIPEA (37,27 мл, 3,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM, и полученный остаток разбавляли водой и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (6,3 г, 11%).
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 5,44-5,30 (m, 8Н), 4,17 (qd, J=11,1, 6,0 Гц, 4Н), 3,63 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 2,80 (t, J=6,1 Гц, 4Н), 2,35 (t, J=7,4 Гц, 4Н), 2,21 (h, J=6,0 Гц, 1H), 2,14-2,03 (m, 8Н), 1,64 (р, J=7,4 Гц, 4Н), 1,46-1,28 (m, 27H), 0,93 (t, J=6,7 Гц, 6Н).
Соединение 53: 2-(11-метил-5-октил-3,7-диоксо-2,6-диокса-8,11-диазатридецил)пропан-1,3-диил (92,9'2,122,12'2)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 53 было синтезировано с выходом 45% из промежуточного соединения 52d и промежуточного соединения 53 а, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,48-5,24 (m, 8H), 5,07 (t, J=6,5 Гц, 1H), 4,20-4,07 (m, 6H), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,62-2,46 (m, 4Н), 2,45-2,37 (m, 2Н), 2,34-2,15 (m, 6Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,43-0,97 (m, 43Н), 0,95-0,83 (m, 9Н). MS: 944,8 m/z [M+H].
Пример 54 - соединение 54.
Промежуточное соединение 54а: бензил-4-гидроксидодеканоат
К раствору 5-октилтетрагидрофуран-2-она (20 г, 1,0 экв.) в воде (200-250 мл) добавляли NaOH (1,1 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 24 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь концен
- 124 046244 трировали при пониженном давлении для удаления растворителя - воды. Полученный неочищенный материал восстанавливали в ацетоне (200 мл) с последующим добавлением ТВАВ (0,05 экв.) и BnBr (1,2-1,5 экв.). Смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 12 ч в атмосфере N2. По завершении смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток выливали в нас. раствор NaHCO3. Продукт экстрагировали 3 раза EtOAc, и объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (20 г, 39%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,45-7,29 (m, 5Н), 5,12 (s, 2Н), 3,65-3,57 (m, 1H), 2,51 (td, J=7,2, 2,7 Гц, 2Н), 1,86 (dtd, J=14,6, 7,4, 3,5 Гц, 1H), 1,71 (ddd, J=14,2, 8,6, 7,1 Гц, 1H), 1,61 (d, J=5,0 Гц, 1H), 1,52-1,17 (m, 17H), 0,88 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 54b: бензил 4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)додеканоат
К раствору промежуточного соединения 54а (10 г, 1,0 эквив.) в DCM (80-100 мл) добавляли (4нитрофенил)карбонохлоридат (1,5 эквив.). Реакционную смесь дегазировали и продували 3 раза N2 и охлаждали до 0°С перед добавлением пиридина (2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере N2. По завершении смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток восстанавливали в гексане и фильтровали. Полученный фильтрат промывали 3 раза водой, и органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (9 г, 29%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 8,27 (dd, J=9,8, 7,8 Гц, 2Н), 7,50-7,30 (m, 8Н), 5,12 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 4,87 (ddt, J=12,2, 7,3, 4,1 Гц, 1H), 2,50 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,16-2,06 (m, 1H), 1,99 (dq, J=14,8, 7,5 Гц, 1H), 1,73 (ddd, J=14,0, 12,0, 7,0 Гц, 1H), 1,63 (tt, J=8,6, 4,5 Гц, 1H), 1,45-1,19 (m, 12H), 0,94-0,84 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 54с: бензил 4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додеканоат
К раствору промежуточного соединения 54b (9 г, 1,0 эквив.) в MeCN (45-90 мл) добавляли N'-этилУ-метилэтан-1,2-диамин (1,5-2,5 эквив.), пиридин (3-4 экв.) и DMAP (2,33 г, 1,0 экв.), и полученную смесь дегазировали и продували 3 раза N2. Реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 2 ч в атмосфере N2. По завершении смесь концентрировали для удаления растворителя, и полученный остаток разбавляли EtOAc, промывали 3 раза нас. NaHCO3 и 3 раза водой. Затем органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бледно-желтого масла (5 г, 60%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 7,38-7,22 (m, 5H), 5,04 (s, 2H), 4,69 (s, 1H), 3,16 (q, J=6,0 Гц, 2Н), 2,452,27 (m, 6H), 2,13 (s, 3Н), 1,95-1,71 (m, 2H), 1,40 (d, J=7,3 Гц, 2Н), 1,34-1,09 (m, 13H), 0,96 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,80 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 54d: 4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додекановая кислота
К раствору промежуточного соединения 54с (6 г, 1,0 эквив.) в МеОН (60 мл) добавляли Pd/C (1,8 г, 10% мас./мас.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере Н2. Затем реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде коричневого масла (3,2 г, 67%).
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 4,76 (dp, J=8,1, 4,1 Гц, 1H), 3,65 (dt, J=14,0, 7,0 Гц, 1H), 3,28-3,10 (m, 4Н), 3,07 (ddd, J=11,3, 7,5, 2,1 Гц, 1H), 2,79 (s, 3Н), 2,27 (ddd, J=14,0, 8,2, 4,4 Гц, 1H), 2,20-1,99 (m, 2H),
- 125 046244
1,86- 1,74 (m, 1H), 1,71-1,56 (m, 1H), 1,48 (dq, J=13,7, 7,6, 6,8 Гц, 1H), 1,31 (dd, J=14,1, 7,0 Гц, 14Н), 0,940,83 (m, 3Н).
Соединение 54: 2-(12-метил-6-октил-3,8-диоксо-2,7-диокса-9,12-диазатетрадецил)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12У)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 54 было синтезировано с выходом 47% из промежуточного соединения 54d и промежуточного соединения 53а, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,26 (m, 8Н), 4,75 (s, 1H), 4,12 (d, J=6,0 Гц, 6Н), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,55-2,34 (m, 6Н), 2,34-2,19 (m, 6Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,97-1,70 (m, 4H), 1,61 (t, J=7,2 Гц, 10Н), 1,41-1,00 (m, 43H), 0,94-0,82 (m, 9H). MS: 959,1 m/z [M+H].
Пример 55 - соединение 55.
Промежуточное соединение 55а: бензил 5-гидрокситридеканоат
Промежуточное соединение 55а получали с выходом 25% из 6-октилтетрагидропиран-2-она, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 54а.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,34 (qt, J=9,5, 4,5 Гц, 5Н), 5,11 (s, 2H), 3,57 (s, 1H), 2,39 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,85-1,65 (m, 2H), 1,60-1,11 (m, 18H), 0,98-0,80 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 55b: бензил 5-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)тридеканоат
Промежуточное соединение 55b было получено с выходом 37% из промежуточного соединения 55а, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 54b.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,32-8,24 (m, 3Н), 7,39 (dddd, J=20,3, 9,9, 5,7, 1,9 Гц, 8Н), 5,12 (s, 2Н), 4,87-4,75 (m, 1H), 2,41 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 1,69 (dddt, J=33,5, 23,3, 14,2, 6,0 Гц, 6Н), 1,51-1,01 (m, 13H), 0,87 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 55с: бензил 5-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тридеканоат
Промежуточное соединение 55с было получено с выходом 53% из промежуточного соединения 55b, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 54с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,41-7,18 (m, 5Н), 5,04 (s, 2Н), 4,65 (р, J=6,5 Гц, 1H), 3,19 (q, J=6,4, 5,9 Гц, 2Н), 2,49-2,23 (m, 6Н), 2,16 (d, J=29,0 Гц, 3Н), 1,69-1,54 (m, J=6,7 Гц, 2Н), 1,44 (tt, J=13,6, 7,1 Гц, 4Н), 1,37-1,05 (m, 14H), 0,98 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,80 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 55d: 5-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тридекановая ки слота
- 126 046244
К раствору промежуточного соединения 55с (2,2 г, 1,0 эквив.) в ТГФ (20 мл) добавляли Pd/C (2,5 г, 10% мас./мас.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере Н2. Затем реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде коричневого масла (1 г, 58%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 12,81 (s, 1H), 5,93-5,72 (m, 1H), 4,61 (q, J=7,1 Гц, 1H), 3,68-3,47 (m, 1H), 3,29-3,04 (m, 1H), 2,76 (tt, J=17,2, 9,1 Гц, 3Н), 2,40 (s, 3Н), 2,34-2,06 (m, 2H), 1,85-0,87 (m, 22H), 0,80 (t, J=6,4 Гц, 3Н).
Соединение 55: 2-(13-метил-7-октил-3,9-диоксо-2,8-диокса-10,13-диазапентадецил)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'Я)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 55 было получено с выходом 58% из промежуточного соединения 53а и промежуточного соединения 55d, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCh) δ 5,44-5,27 (m, 8Н), 4,73 (s, 1H), 4,12 (d, J=6,0 Гц, 6Н), 3,32 (s, 2H), 2,812,73 (m, 4Н), 2,49 (d, J=45,9 Гц, 4Н), 2,43-2,22 (m, 10Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,75-1,42 (m, 13H), 1,421,21 (m, 40H), 1,11 (s, 3H), 0,95-0,82 (m, 9H). MS: 972,8 m/z [M+H].
Пример 56 - соединение 56.
Промежуточное соединение 56а: 9-(децилокси)-9-оксононановая кислота
К смеси нонандиовой кислоты (90 г, 1,0 эквив.) в ТГФ (300-900 мл) при 0°С по каплям добавляли ДМФ (0,1-0,2 эквив.) и (COCl)2 (1,0 экв.). Смесь дегазировали и продували 3 раза N2, а затем смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N2. К реакционной смеси по каплям добавляли декан-1-ол (1,0 эквив.) при 0°С и перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя, полученный раствор выливали в воду и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (20 г, 6%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCh) δ 4,05 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,34 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,29 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,62 (q, J=7,3 Гц, 6Н), 1,41-1,15 (m, 19H), 0,88 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 56b: 9,9'-дидецил О'1,О1-(2-оксопропан-1,3-диил)ди(нонандиоат)
К смеси 1,3-дигидроксипропан-2-она (1,37 г, 0,5 экв.), EDCI (1,0 экв.) и DMAP (1,0 экв.) в DCM (100-200 мл) добавляли промежуточное соединение 56а (1,0 экв.) порциями при 0°С, и смесь дегазировали и продували 3 раза N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя, полученный раствор выливали в воду и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (10 г, 46%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCh) δ 4,74 (d, J=2,1 Гц, 4Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,41 (t, J=7,5 Гц, 4Н), 2,28 (t, J=7,5 Гц, 4Н), 1,62 (d, J=8,8 Гц, 12Н), 1,39-1,19 (m, 39H), 0,87 (t, J=6,7 Гц, 6Н).
- 127 046244
Промежуточное соединение 56с: 9,9'-дидецил О'1,О1-(2-гидроксипропан-1,3-диил)ди(нонандиоат)
К раствору промежуточного соединения 56b (13,4 г, 1,0 эквив.) в ТГФ/толуоле/воде (4:1:2, 0,4 М) при 0°С в атмосфере N2 добавляли NaBH4 (1,5 эквив.). Смесь перемешивали при 15-20°С в течение 5 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь разбавляли водой и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (5,1 г, 38%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,15-4,03 (m, 5Н), 3,98 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,44 (d, J=4,8 Гц, 1H), 2,25 (dt, J=24,2, 7,5 Гц, 8Н), 1,55 (q, J=7,1 Гц, 12Н), 1,22 (d, J=22,7 Гц, 38Н), 0,81 (t, J=6,7 Гц, 6Н).
Соединение 56: 9,9'-дидецил О'1,О1-(2-((3-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3 -диил)ди(нонандиоат)
Соединение 56 было получено с выходом 36% из промежуточного соединения 52d и промежуточного соединения 56с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,24 (t, J=5,2 Гц, 1H), 5,13-5,04 (m, 1H), 4,28 (ddd, J=14,5, 11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 8,3, 5,8 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 3,31 (s, 2Н), 2,58 (qd, J=15,3, 6,4 Гц, 6Н), 2,30 (dt, J=10,3, 7,6 Гц, 10Н), 1,61 (dd, J=10,1, 4,1 Гц, 16Н), 1,29 (dt, J=17,6, 3,3 Гц, 54Н), 0,88 (td, J=6,9, 1,9 Гц, 9Н). MS: 1027,2 m/z [M+H].
Пример 57 - соединение 57.
Соединение 57: 9,9'-дидецил О'1,О1-(2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3 -диил)ди(нонандиоат)
Соединение 57 было получено с выходом 55% из промежуточного соединения 54d и промежуточного соединения 56с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,28-5,21 (m, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,8, 4,4, 1,2 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,9, 4,6 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 3,29 (s, 2H), 2,38 (ddd, J=8,6, 6,9, 2,7 Гц, 5Н), 2,35-2,12 (m, 10Н), 1,98-1,73 (m, 3H), 1,68-1,37 (m, 17H), 1,29 (dt, J=19,5, 4,1 Гц, 54H), 0,88 (td, J=6,9, 1,9 Гц, 9Н). MS: 1040,8 m/z [M+H].
Пример 58 - соединение 58.
Соединение 58: 9,9'-дидецил О'1,О1-(2-((5-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тридеканоил)окси)пропан-1,3-диил)ди(нонандиоат))
- 128 046244
Соединение 58 было получено с выходом 60% из промежуточного соединения 55d и промежуточного соединения 56с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,27-5,20 (m, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 2,8 Гц, 2Н), 4,13 (ddd, J=11,9, 5,9, 2,6 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,7 Гц, 4Н), 3,31 (s, 2H), 2,39-2,09 (m, 12H), 1,62 (dq, J=13,8, 7,2, 6,5 Гц, 22Н), 1,41-0,99 (m, 54H), 0,88 (td, J=6,9, 2,0 Гц, 9Н). MS: 1055,0 m/z [M+H].
Пример 59 - соединение 59.
Промежуточное соединение 59а: 9-оксо-9-(ундецилокси)нонановая кислота
Промежуточное соединение 59а получали с выходом 41% из нонандиовой кислоты и ундекан-1-ола, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 56а.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,05 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,31 (dt, J=22,6, 7,5 Гц, 4Н), 1,62 (q, J=7,1 Гц, 6H), 1,40-1,18 (m, 23H), 0,87 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 59b: О'1,О1-(2-оксопропан-1,3-диил) 9,9'-диундецил ди(нонандиоат)
Промежуточное соединение 59b получали с выходом 23% из 1,3-дигидроксипропан-2-она и промежуточного соединения 59а, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 56b.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 3,98 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,35 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,22 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,57 (dt, J=18,6, 6,9 Гц, 6Н), 1,36-1,12 (m, 23H), 0,89-0,76 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 59с: О'1,О1-(2-гидроксипропан-1,3-диил) 9,9'-диундецил ди(нонандиоат)
Промежуточное соединение 59с было получено с выходом 47% из промежуточного соединения 59b с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 56с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,23-4,00 (m, 9H), 2,52 (d, J=4,7 Гц, 1H), 2,31 (dt, J=24,2, 7,5 Гц, 8Н), 1,62 (q, J=7,0 Гц, 13Н), 1,29 (d, J=23,9 Гц, 43Н), 0,88 (t, J=6,7 Гц, 6Н).
Соединение
О'1,О1 -(2-((3-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)ундеканоил)59:
окси)пропан-1,3-диил) 9,9'-диундецил ди(нонандиоат)
Соединение 59 получали с выходом 35% из промежуточного соединения 52d и промежуточного соединения 59с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,23 (s, 1H), 5,08 (d, J=6,5 Гц, 1H), 4,28 (ddd, J=15,0, 11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,14 (dt, J=13,1, 6,7 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,58 (qd, J=15,4, 6,6 Гц, 4Н), 2,30 (dt, J=10,4, 7,5 Гц, 10Н), 1,60 (q, J=7,7, 6,9 Гц, 20Н), 1,43-0,97 (m, 58H), 0,88 (td, J=6,9, 1,9 Гц, 9H). MS: 1054,9 m/z [M+H].
- 129 046244
Пример 60 - соединение 60.
Соединение 60: О'1,О1-(2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил) 9,9'-диундецил ди(нонандиоат)
Соединение 60 было получено с выходом 79% из промежуточного соединения 54d и промежуточного соединения 59с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,25 (р, J=5,1 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 2,7 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=11,7, 5,6 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,38 (t, J=7,5 Гц, 5Н), 2,35-2,11 (m, 10Н), 1,98-1,41 (m, 23Н), 1,41-0,96 (m, 57Н), 0,88 (td, J=6,9, 1,8 Гц, 9Н). MS: 1068,9 m/z [М+Н].
Пример 61 - соединение 61.
Соединение 61: О'1,О1-(2-((5-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тридеканоил)окси)пропан-1,3-диил) 9,9'-диундецил ди(нонандиоат)
Соединение 61 было получено с выходом 61% из промежуточного соединения 55d и промежуточного соединения 59с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,29-5,20 (m, 1H), 4,72 (d, J=7,4 Гц, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 2,3 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,9, 2,0 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,82-2,13 (m, 15H), 1,82-1,39 (m, 21H), 1,390,97 (m, 56H), 0,88 (td, J=6,9, 1,9 Гц, 9Н). MS: 1083,0 m/z [M+H].
Пример 62 - соединение 62.
Промежуточное соединение 62а: 1-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-3-гидроксипропан-2-он
К смеси 1,3-дигидроксипропан-2-она (50 г, 1,0 экв.), имидазола (37,79 г, 1,0 экв.) в ТГФ (40 мл) при 0°С добавляли TBSC1 (83,66 г, 1,0 экв.), и смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (15 г, 13%).
Промежуточное соединение 62b: 1-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-оксопропил) 9ундецилнонандиоат
К смеси промежуточного соединения 62а (10 г, 1,0 эквив.), EDCI (9,38 г, 1,0 эквив.) и DMAP (5,98 г, 1,0 эквив.) в DCM (300 мл) при 0°С добавляли промежуточное соединение 59а (16,76 г, 1,0 экв.), и смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь концентри ровали при пониженном давлении для удаления DCM, и полученный остаток разбавляли водой. Неочищенный материал трижды экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (11 г, 43%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,84 (s, 2Н), 4,16 (s, 2Н), 3,95 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,32 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,18 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,61-1,48 (m, 6H), 1,30-1,12 (m, 22H), 0,82 (s, 9H), 0,78 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 62с: 1-(3-гидрокси-2-оксопропил) 9-ундецилнонандиоат
- 130 046244
К смеси промежуточного соединения 62b (11 г, 1,0 эквив.) в THF (50 мл) добавляли HF-пиридин (3,75 мл, 8,0 эквив.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь разбавляли водой и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (6 г, 70%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,70 (s, 2Н), 4,30 (s, 2Н), 3,98 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,95 (s, 1H), 2,36 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,22 (t, J=7,6 Гц, 2Н), 1,57 (dt, J=20,3, 7,1 Гц, 6Н), 1,37-1,10 (m, 22H), 0,81 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 62d: 1-(3-(((92,122)-октадека-9,12-диеноил)окси)-2-оксопропил) 9ундецил нонандиоат
К раствору промежуточного соединения 62с (6 г, 1,0 эквив.) в DCM (100 мл) при 0°С добавляли EDCI (1,0 эквив.), DMAP (1,0 эквив.). Раствор дегазировали и продували 3 раза N2 с последующим добавлением линолевой кислоты (4 мл, 1,0 эквив.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмо сфере N2. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM, и полученный остаток разбавляли водой. Неочищенный материал трижды экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (7,5 г, 55%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,70 (s, 2Н), 4,30 (s, 2Н), 3,98 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,95 (s, 1H), 2,36 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,22 (t, J=7,6 Гц, 2Н), 1,57 (dt, J=20,3, 7,1 Гц, 6Н), 1,37-1,10 (m, 22H), 0,81 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 62е: 1-(2-гидрокси-3-(((92,122)-октадека-9,12-диеноил)окси)пропил) 9ундецил нонандиоат
К раствору промежуточного соединения 62d (7 г, 1,0 эквив.) в ТГФ/толуоле/воде (4:1:2, 0,04 М) при 0°С добавляли NaBH4 (5 эквив.) и смесь перемешивали при 20°С в течение 5 часов в атмосфере N2. По завершении смесь гасили насыщ. NH4Cl при 5°С и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои дважды промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексагон) с получением продукта в виде бесцветного масла (6 г, 85%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,42-5,25 (m, 4Н), 4,25-3,90 (m, 8Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2,55 (s, 1H), 2,30 (dt, J=24,5, 7,6 Гц, 6Н), 2,03 (q, J=6,8 Гц, 4Н), 1,61 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,48-1,06 (m, 35H), 0,87 (td, J=6,8, 3,8 Гц, 6Н).
Соединение 62: 1 -(3-метил-13 -((((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диеноил)окси)метил)-9-октил-7,11 -диоксо8,12-диокса-3,6-диазатетрадекан-14-ил) 9-ундецил нонандиоат
Соединение 62 получали с выходом 36% из промежуточного соединения 52d и промежуточного соединения 62е, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,47-5,28 (m, 4H), 5,23 (t, J=5,2 Гц, 1H), 5,14-5,04 (m, 1H), 4,28 (ddd, J=15,3, 11,9, 4,6 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,8, 7,5, 5,8 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3,38 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,58 (qd, J=15,2, 6,3 Гц, 5Н), 2,37-2,22 (m, 7Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 4Н), 1,62 (d, J=6,8 Гц, 14Н), 1,48
- 131 046244
0,97 (m, 50H), 0,97-0,79 (m, 9H). MS: 992,3 m/z [M+H].
Пример 63 - соединение 63.
Соединение 63: 1-(3 -метил- 14-((((9Z,12Z)-октадека-9,12 -диеноил)окси)метил)-9-октил-7,12 -диоксо8,13-диокса-3,6-диазапентадекан-15-ил) 9-ундецил нонандиоат
Соединение 63 было получено с выходом 79% из промежуточного соединения 54d и промежуточного соединения 62е, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,28 (m, 4H), 5,25 (ddd, J=5,8, 4,5, 1,4 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,2 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3,31 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,70-2,12 (m, 15H), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 4Н), 1,97-1,72 (m, 3H), 1,61 (h, J=6,5 Гц, 12H), 1,40-1,19 (m, 47H), 1,11 (s, 3H), 0,96-0,81 (m, 9H). MS: 1006,9 m/z [M+H].
Пример 64 - соединение 64.
Соединение 64: 1-(3 -метил-15 -((((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диеноил)окси)метил)-9-октил-7,13 -диоксо8,14-диокса-3,6-диазагексадекан-16-ил) 9-ундецил нонандиоат
Соединение 64 было получено с выходом 79% из промежуточного соединения 55d и промежуточного соединения 62е, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,48-5,28 (m, 4H), 5,24 (h, J=4,9, 4,4 Гц, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,29 (ddd, J=11,9, 4,4, 3,3 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,1 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 3,31 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,67-2,11 (m, 14H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 4Н), 1,73-1,41 (m, 17H), 1,41-0,95 (m, 50H), 0,94-0,82 (m, 9H). MS: 1021,0 m/z [M+H].
Пример 65 - соединение 65.
Соединение 65: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)тетрадеканоил)окси)пропан-1,3 -диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 65 было получено с выходом 75% из промежуточного соединения 39d и 1-(1метилпирролидин-2-ил)метанамина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,28 (m, 8H), 5,25 (ddd, J=10,2, 5,7, 4,4 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,20-4,11 (m, 2H), 3,45 (s, 1H), 3,21 (s, 2H), 2,82-2,74 (m, 4Н), 2,46-2,24 (m, 9Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 2,01-1,42 (m, 16H), 1,41-1,20 (m, 45H), 0,88 (td, J=7,0, 4,7 Гц, 9H). MS: 984,9 m/z [M+H].
Пример 66 - соединение 66.
Соединение 66: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)тетрадеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 132 046244
Соединение 66 было получено с выходом 65% из промежуточного соединения 39d и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,57-5,21 (m, 9Н), 4,72 (dt, J=12,2, 5,2 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,24-4,07 (m, 4Н), 2,82-2,74 (m, 4Н), 2,60 (d, J=102,7 Гц, 5Н), 2,45-2,38 (m, 2H), 2,38-2,26 (m, 4H), 2,13-1,73 (m, 16H), 1,73-1,43 (m, 9H), 1,41-1,16 (m, 42H), 1,04-0,74 (m, 9H). MS: 999,4 m/z [M+H].
Пример 67 - соединение 67.
Соединение 67: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 67 было получено с выходом 50% из промежуточного соединения 42d и 1-(1метилпирролидин-2-ил)метанамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,08 (m, 9H), 4,77 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,8, 4,5, 1,8 Гц, 2Н), 4,204,12 (m, 2Н), 3,48 (s, 1H), 3,33 (s, 2Н), 2,77 (td, J=6,1, 1,2 Гц, 4Н), 2,63-2,23 (m, 1Ш), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 9Н), 1,98-1,42 (m, 14H), 1,42-1,22 (m, 32H), 0,96-0,81 (m, 9H). MS: 900,0 m/z [M+H].
Пример 68 - соединение 68.
Соединение 68: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)октаноил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'7)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 68 было получено с выходом 43% из промежуточного соединения 42d и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,04 (m, 9H), 4,72 (tt, J=7,4, 5,1 Гц, 1H), 4,40-4,10 (m, 6Н), 2,81-2,74 (m, 4Н), 2,54 (d, J=58,1 Гц, 5Н), 2,40 (ddd, J=8,4, 6,8, 4,4 Гц, 2Н), 2,36-2,27 (m, 4Н), 2,11-1,73 (m, 16H), 1,73-1,43 (m, 8H), 1,43-1,21 (m, 31H), 0,99-0,77 (m, 9H). MS: 915,7 m/z [M+H].
Пример 69 - соединение 69.
Промежуточное соединение 69а: 4-оксононановая кислота
К смеси 5-пентилтетрагидрофуран-2-она (50 г, 1,0 эквив.) в 3:1 EtOH/H2O (500 мл) добавляли NaOH (2,0 эквив.) одной порцией при 15°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 15°С в течение 12 ч. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток дважды экстрагировали DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали, получая неочищенный остаток.
- 133 046244
Затем неочищенный остаток восстанавливали в DCM (1 л) с последующим добавлением DMP (3 экв.) одной порцией при 15°С в N2. Смесь перемешивали при 15°С в течение 4 ч. По завершении реакцию концентрировали при пониженном давлении, и раствор доводили до pH 3 с помощью 1 М HCl. Суспензию фильтровали и промывали Н2О. Полученный осадок на фильтре растворяли в EtOAc, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением продукта в виде белого твердого вещества (22 г, 45%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,72 (dd, J=7,0, 5,4 Гц, 2Н), 2,63 (ddd, J=7,2, 5,9, 1,2 Гц, 2Н), 2,44 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 1,64-1,54 (m, 2H), 1,36-1,20 (m, 4H), 0,89 (t, J=6,9 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 69b: 2-((4-оксононаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 69b было синтезировано с выходом 74% из промежуточного соединения 69а и промежуточного соединения 1с, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,46-5,16 (m, 9Н), 4,29 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,14 (dt, J=11,8, 6,0 Гц, 2Н), 2,74 (dt, J=21,5, 6,5 Гц, 6Н), 2,59 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,32 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (dd, J=8,6, 5,3 Гц, 8Н), 1,60 (ddd, J=14,2, 8,4, 4,8 Гц, 6Н), 1,50-1,06 (m, 32H), 0,89 (t, J=6,8 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 69с: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)нонаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 69b (10 г, 1,0 экв.) в THF (300 мл), толуоле (150 мл) и Н2О (75 мл) добавляли NaBH4 (5,0 экв.) при 5°С. Смесь перемешивали при 15°С в течение 3 ч в атмосфере N2. По завершении к реакционной смеси добавляли Na2SO4 при 0°С, и полученную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией с получением промежуточного спирта в виде бесцветного масла.
Промежуточный продукт немедленно восстанавливали в DCM (80 мл) с последующим добавлением пиридина (1,67 экв.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (2 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 5 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (4,05 г, 33%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,26-8,19 (m, 2H), 7,40-7,28 (m, 2H), 5,43-5,11 (m, 9Н), 4,80 (tt, J=7,5, 4,4 Гц, 1H), 4,25 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,09 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,40 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 2,33-2,16 (m, 4H), 1,97 (q, J=6,8 Гц, 10Н), 1,67 (ddt, J=13,4, 9,9, 4,7 Гц, 1H), 1,55 (dtd, J=15,7, 8,4, 7,4, 4,8 Гц, 5Н), 1,43-1,16 (m, 36H), 0,83 (q, J=6,8 Гц, 9Н).
Соединение 69: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)нонаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 134 046244
Соединение 69 было получено с выходом 77% из промежуточного соединения 69с и К1-этил-К1метилэтан-1,2-диамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,35 (pt, J=8,8, 4,4 Гц, 8Н), 5,25 (р, J=5,1 Гц, 1H), 4,76 (dt, J=12,3, 6,7 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,15 (dh, J=11,4, 5,9 Гц, 2Н), 3,31 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,62-2,45 (m, 4Н), 2,38 (dt, J=9,0, 6,2 Гц, 2Н), 2,30 (q, J=13,0, 10,4 Гц, 8Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 9Н), 1,91 (tt, J=9,5, 4,5 Гц, 1H), 1,81 (dt, J=14,7, 7,8 Гц, 1H), 1,65-1,43 (m, 7H), 1,40-1,17 (m, 36H), 1,09 (q, J=8,8, 8,2 Гц, 3Н), 0,88 (q, J=6,5 Гц, 9Н). MS: 902,6 m/z [M+H].
Пример 70 - соединение 70.
Соединение 70: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)нонаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 70 было получено с выходом 62% из промежуточного соединения 69с и 1-(1метилпирролидин-2-ил)метанамина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,29 (m, 8H), 5,25 (р, J=5,2 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,15 (dq, J=11,7, 5,8 Гц, 2Н), 3,46 (d, J=25,9 Гц, 1H), 3,19 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,34 (dt, J=31,1, 8,3 Гц, 12Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,99-1,42 (m, 16H), 1,42-1,19 (m, 35Н), 0,88 (q, J=6,8 Гц, 9H). MS: 914,4 m/z [M+H].
Пример 71 - соединение 71.
Соединение 71: 2-((4-(((3 -(пирролидин-1 -ил)пропокси)карбонил)окси)нонаноил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12Д-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 71 было получено с выходом 78% из промежуточного соединения 69с и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 5,50-5,28 (m, 8Н), 5,25 (р, J=5,1 Гц, 1H), 4,72 (tt, J=7,8, 4,5 Гц, 1H), 4,36-4,26 (m, 2Н), 4,23-4,11 (m, 4Н), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 4Н), 2,41 (dt, J=15,0, 9,0 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,5 Гц, 5Н), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 2,00-1,75 (m, 9H), 1,72-1,48 (m, 8H), 1,43-1,20 (m, 35H), 1,00-0,75 (m, 9H). MS: 929,4 m/z [M+H].
Пример 72 - соединение 72.
Соединение 72: 2-((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)нонаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 72 получали с выходом 72% из промежуточного соединения 69с и 2-(пирролидин-1-ил) этан-1-амина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,49 (s, 1H), 5,34 (dtt, J=18,0, 6,9, 3,9 Гц, 8Н), 5,25 (р, J=5,1 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=11,6, 5,4 Гц, 2Н), 3,40-3,27 (m, 2H), 2,80-2,50 (m, 11Н), 2,45-2,35 (m, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 5Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 9Н), 1,97-1,67 (m, 8H), 1,60 (q, J=7,3 Гц, 8Н), 1,33 (d, J=26,5 Гц, 36Н), 0,88 (q, J=6,5 Гц, 9Н). MS: 914,7 m/z [M+H].
- 135 046244
Пример 73 - соединение 73.
Промежуточное соединение 73а: 4-оксундекановая кислота
К раствору 5-гептилтетрагидрофуран-2-она (20 г, 1,0 экв.) в 2:1 EtOH/H2O (400 мл) добавляли NaOH (1,1 экв.). Смесь дегазировали и продували 3 раза N2, а затем смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и к полученному остатку добавляли 1 н. HCl до pH 3. Полученную суспензию фильтровали, и отфильтрованный осадок концентрировали при пониженном давлении с получением остатка.
Полученный остаток восстанавливали в DCM (200 мл) с последующим добавлением DMP (3 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч. По завершении смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде белого твердого вещества (10 г, 46%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,65 (dd, J=7,0, 5,3 Гц, 2Н), 2,56 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,37 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,51 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 1,27-1,13 (m, 8H), 0,86-0,76 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 73b: 2-((4-оксоундеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 73b было синтезировано с выходом 42% из промежуточного соединения 73 а и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,28 (dddd, J=12,3, 10,7, 8,7, 5,5 Гц, 8Н), 5,21-5,15 (m, 1H), 4,22 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,13-4,05 (m, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,64 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,52 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,36 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,02-1,95 (m, 8Н), 1,53 (h, J=7,0 Гц, 6Н), 1,33-1,16 (m, 37H), 0,81 (td, J=6,8,4,7 Гц,9Н).
Промежуточное соединение 73 с: 2-((4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)ундеканоил)окси)пропан1,3-диил (92,9'2,122,12'2)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 73b (25 г, 1,0 экв.) в THF (500 мл), толуоле (125 мл) и Н2О (250 мл) при 0°С в атмосфере N2 добавляли NaBH4 (5,0 экв.). Смесь перемешивали при 5°С в течение 1 ч в атмосфере N2. По завершении остаток выливали в насыщенный раствор NH4Cl и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением промежуточного спирта в виде бесцветного остатка.
Промежуточный продукт немедленно восстанавливали в DCM (100 мл) с последующим добавлением пиридина (2 экв.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (2 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в атмосфере N2 в течение 5 ч, после чего реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток разбавляли гексаном и фильтровали. Фильтрат промывали 3 раза водой и 1 раз
- 136 046244 рассолом, затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Очистка колоночной хроматографией дала продукт в виде бесцветного масла (5,2 г, 40%).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 8,28 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,41 (dd, J=8,6, 6,1 Гц, 2Н), 5,33 (tdd, J=23,5, 11,3, 6,1 Гц, 9Н), 4,87 (tt, J=7,7, 4,6 Гц, 1H), 4,32 (dd, J=12,0, 4,4 Гц, 2Н), 4,16 (dd, J=12,0, 5,8 Гц, 2Н), 2,77 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,47 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,39-2,25 (m, 4H), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 10Н), 1,79-1,55 (m, 7H), 1,48-1,15 (m, 36H), 0,89 (t, J=6,7 Гц, 9Н).
Соединение 73: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 73 получали с выходом 53% из промежуточного соединения 73 с и (2аминоэтил)(этил)метиламина, используя метод, примененный для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,47-5,27 (m, 8Н), 5,24 (q, J=5,1 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=11,6, 5,4 Гц, 2Н), 3,31 (s, 2Н), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 4Н), 2,61-2,35 (m, 6H), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 7Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,90 (q, J=11,5, 9,0 Гц, 1H), 1,81 (dt, J=14,5, 7,6 Гц, 1H), 1,65-1,41 (m, 9H), 1,391,19 (m, 38H), 1,10 (s, 3Н), 0,88 (q, J=7,0 Гц, 9Н). MS: 930,3 m/z [M+H].
Пример 74 - соединение 74.
Соединение 74: 2-((4-((((1-метилпирролидин-2-ил)метил)карбамоил)окси)ундеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 74 было получено с выходом 55% из промежуточного соединения 73с и 1-(1метилпирролидин-2-ил)метанамина, используя метод, примененный для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,34 (dtt, J=18,0, 6,9, 3,8 Гц, 8Н), 5,25 (р, J=5,2 Гц, 1H), 4,81-4,72 (m, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=11,7, 5,2 Гц, 2Н), 3,43 (s, 1H), 3,17 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,8 Гц, 4Н), 2,34 (dt, J=31,2, 8,3 Гц, 11Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,99-1,43 (m, 16H), 1,43-1,13 (m, 39Н), 0,88 (q, J=7,7, 7,2 Гц, 9Н). MS: 942,8 m/z [M+H].
Пример 75 - соединение 75.
Соединение 7 5: 2-((4-(((3-(пирролидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 75 было получено с выходом 73% из промежуточного соединения 73с и 3(пирролидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, примененного для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,46-5,28 (m, 8Н), 5,25 (р, J=5,1 Гц, 1H), 4,72 (tt, J=7,8, 4,5 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2H), 4,22-4,11 (m, 4H), 2,77 (t, J=6,8 Гц, 4H), 2,45-2,37 (m, 2H), 2,31 (t, J=7,5 Гц, 4H), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 8H), 2,01-1,91 (m, 3H), 1,91-1,78 (m, 5H), 1,67-1,50 (m, 9H), 1,39-1,22 (m, 39H), 0,88 (q, J=6,6 Гц, 9Н). MS: 957,4 m/z [M+H].
- 137 046244
Пример 76 - соединение 76.
Соединение 76: 2-((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 76 было получено с выходом 81% из промежуточного соединения 73с и 2(пирролидин-1-ил)этан-1-амина с использованием метода, примененного для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,56 (s, 1H), 5,46-5,28 (m, 8Н), 5,25 (р, J=5,2 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=11,7, 5,5 Гц, 2Н), 3,43-3,31 (m, 2H), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 11Н), 2,45-2,35 (m, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,97-1,74 (m, 7H), 1,69-1,43 (m, 8Н), 1,43-1,09 (m, 39Н), 0,88 (q, J=7,0 Гц, 9Н). MS: 943,2 m/z [M+H].
Пример 77 - соединение 77.
Соединение 77: 2-((4-(((2-(азетидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 77 было получено с выходом 36% из промежуточного соединения 40d и 2- (азетидин-1ил)этан-1-амина с использованием метода, примененного для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,29 (m, 8H), 5,25 (h, J=4,6, 4,1 Гц, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 1,9 Гц, 2Н), 4,15 (ddt, J=11,9, 5,8, 3,6 Гц, 2Н), 3,74-3,54 (m, 3H), 3,48-3,38 (m, 1H), 3,31 (d, J=6,3 Гц, 1H), 2,86 (s, 1H), 2,81-2,73 (m, 4H), 2,41-2,26 (m, 7H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,97-1,87 (m, 2Н), 1,87-1,77 (m, 2Н), 1,60 (d, J=7,2 Гц, 8Н), 1,44-1,15 (m, 37H), 0,96-0,84 (m, 9H). MS: 914,7 m/z [M+H].
Пример 78 - соединение 78.
Соединение 78: 2-((4-(((2-(пиперидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 78 было получено с выходом 60% из промежуточного соединения 40d и 2- (пиперидин1-ил)этан-1-амина с использованием метода, примененного для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,47-5,28 (m, 8H), 5,25 (h, J=4,8 Гц, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,4, 1,3 Гц, 2Н), 4,15 (dt, J=11,8, 5,7 Гц, 2Н), 3,42 (s, 2H), 2,80-2,72 (m, 4H), 2,44 (d, J=6,7 Гц, 2Н), 2,39 (ddd, J=8,6, 6,9, 2,5 Гц, 2Н), 2,36-2,27 (m, 5Н), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,95-1,41 (m, 18Н), 1,41-1,20 (m, 37Н), 0,96-0,81 (m, 9H). MS: 942,4 m/z [M+H].
Пример 79 - соединение 79.
Соединение 79: 2-((4-(((2-метил-1-(пирролидин-1-ил)пропан-2-ил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 138 046244
Соединение 79 было получено с выходом 48% из промежуточного соединения 40d и 2-метил-1(пирролидин-1-ил)пропан-2-амина, используя метод, примененный для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,21 (m, 9H), 4,72 (s, 1H), 4,28 (ddt, J=11,9, 4,4, 2,2 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,6 Гц, 2Н), 2,86-2,49 (m, 8H), 2,39 (td, J=8,2, 7,4, 2,2 Гц, 1H), 2,31 (td, J=7,6, 1,8 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 2,00-1,45 (m, 17H), 1,45-1,03 (m, 41H), 0,98-0,77 (m, 9H). MS: 956,5 m/z [M+H].
Пример 80 - соединение 80.
Промежуточное соединение 80а: (5-метилгексил)бромид магния.
К раствору Mg (1,63 г, 1,2эквив.) и I2 (0,1 эквив.) в ТГФ (100 мл) добавляли 1-бром-5-метилгексан (1,0 эквив.) при 15°С. Смесь перемешивали при 40°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Никаких дальнейших исследований. Реакционную смесь использовали непосредственно на следующей стадии. Бром(5метилгексил) магний в ТГФ получали в виде серого раствора.
Промежуточное соединение 80b: этил 9-метил-4-оксодеканоат о
К раствору этил 4-хлор-4-оксобутаноата (16 г, 1,0 экв.) в ТГФ (150 мл) добавляли CuI (1,0 экв.) и промежуточное соединение 80а (2,0 экв.) при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 2 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали 2 раза рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта (10 г, выход 45%) в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,06 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,64 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,50 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,38 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,55-1,45 (m, 3Н), 1,28-1,15 (m, 6Н), 1,15-1,06 (m, 2Н), 0,79 (d, J=6,6 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 80с: 9-метил-4-оксодекановая кислота О
ОН
К раствору промежуточного соединения 80b (10 г, 1,0 эквив.) в EtOH (100 мл) добавляли KOH (3,0 эквив.) при 20°С. Смесь перемешивали при 50°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь концентрировали для удаления EtOH, и pH доводили до 5,5 с помощью HCl (1 М). Полученную смесь разбавляли водой и дважды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои дважды промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией с получением продукта (4,4 г, 50%) в виде белого твердого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,71 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 2,63 (ddd, J=7,0, 5,8, 1,1 Гц, 2Н), 2,44 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,53 (dq, J=19,8, 7,0, 6,6 Гц, 3Н), 1,31-1,24 (m, 2Н), 1,16 (dt, J=8,6, 6,7 Гц, 2Н), 0,85 (d, J=6,6 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 80d: 2-((9-метил-4-оксодеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 139 046244
Промежуточное соединение 80d было синтезировано с выходом 40% из промежуточного соединения 80с и промежуточного соединения 1с с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,28 (m, 8Н), 5,24 (р, J=5,1 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,71 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,59 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,67-1,50 (m, 8H), 1,39-1,21 (m, 29H), 1,22-1,12 (m, 3Н), 0,93-0,82 (m, 12H).
Промежуточное соединение 80е: 2-((9-метил-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 80d (1,5 г, 1,0 экв.) в THF (30 мл), толуоле (15 мл) и Н2О (7,5 мл) добавляли NaBH4 (5,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 5°С в течение 5 ч. После полного восстановления реакционную смесь распределяли между THF и Н2О, и полученную органическую фазу отделяли, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением промежуточного спирта в виде желтого масла.
Полученное промежуточное соединение немедленно восстанавливали в DCM (10 мл) с последующим добавлением пиридина (2,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (2,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 5 ч. Затем реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,25-8,18 (m, 2H), 7,38-7,28 (m, 2Н), 5,39-5,15 (m, 9Н), 4,80 (tt, J=7,1, 4,3 Гц, 1H), 4,25 (dd, J=12,0, 4,3 Гц, 2Н), 4,13-4,04 (m, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,40 (dd, J=8,3, 6,6 Гц, 2Н), 2,33-2,19 (m, 4H), 2,05-1,85 (m, 10Н), 1,67 (ddt, J=14,6, 9,4, 4,8 Гц, 1H), 1,52 (dddq, J=32,6, 26,2, 13,2, 6,6, 6,1 Гц, 8Н), 1,37-1,17 (m, 30Н), 1,11 (dt, J=9,0, 6,5 Гц, 2Н), 0,94-0,66 (m, 12H).
Соединение 80: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)-9-метилдеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 80 получали с выходом 68% из промежуточного соединения 80е и (2аминоэтил)(этил)метиламина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,22 (m, 9Н), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=12,0, 4,5, 1,5 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,7 Гц, 2Н), 3,37 (s, 3Н), 2,77 (td, J=6,0, 1,3 Гц, 4Н), 2,39 (ddd, J=8,4, 6,9, 2,4 Гц, 2Н), 2,352,28 (m, 5Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,86 (ddt, J=37,3, 14,4, 7,1 Гц, 3Н), 1,77-1,38 (m, 12Н), 1,39-1,19 (m, 34H), 1,15 (d, J=6,7 Гц, 3Н), 0,94-0,79 (m, 12H). MS: 929,9 m/z [M+H].
Пример 81 - соединение 81.
Промежуточное соединение 81а: 1-бром-6-метилгептан
К раствору PPh3 (66,97 г, 1,33 экв.) в DCM (300 мл) добавляли Br2 (1,33 экв.) при 0°С. Затем одной порцией добавляли 6-метилгептан-1-ол (1,0 эквив.). Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч в атмосфере N2. По завершении реакционную смесь разбавляли Н2 и отделяли органическую фазу. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли пентан и выпавший в осадок оксид трифенилфосфина отфильтровывали. Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении, получая остаток, который очищали колоночной
- 140 046244 хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (30 г, 81%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 3,41 (td, J=6,9, 1,1 Гц, 2Н), 1,91-1,79 (m, 2H), 1,59-1,49 (m, 1H), 1,45-1,35 (m, 2Н), 1,34-1,25 (m, 3Н), 1,21-1,12 (m, 2Н), 0,86 (dd, J=6,6, 1,1 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 81b: (6-метилгептил)бромид магния.
BrMg
К раствору Mg (4,53 г, 1,2 экв.) и I2 (0,1 экв.) в THF (300 мл) добавляли промежуточное соединение 81а (1,0 экв.) при 15°С. Смесь перемешивали при 40°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Никаких дальнейших исследований. Реакционную смесь использовали непосредственно на следующей стадии. Бром (6метилгептил) магний в ТГФ получали в виде серого раствора.
Промежуточное соединение 81с: этил-10-метил-4-оксундеканоат
EtO2C
К раствору этил 4-хлор-4-оксобутаноата (25 г, 1,0 эквив.) и CuI (1,0 эквив.) в ТГФ (200 мл) добавляли промежуточное соединение 81b (1,0 эквив.) при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Затем реакционную смесь разбавляли водой и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои разделяли, промывали 2 раза рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (10 г, 27%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 4,06 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,64 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,50 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,37 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,51 (q, J=7,5 Гц, 2Н), 1,43 (dq, J=13,2, 6,6 Гц, 1H), 1,26-1,15 (m, 7H), 1,14-1,04 (m, 2Н), 0,79 (d, J=6,6 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 81d: 10-метил-4-оксундекановая кислота но2с
Смесь Промежуточного соединения 81с (10 г, 1,0 эквив.) и KOH (3,0 эквив.) в EtOH (50 мл) дегазировали и продували 3 раза N2, а затем смесь перемешивали при 50°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Смесь концентрировали для удаления EtOH, затем доводили до pH 5,5 с помощью HCl (1 М). Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 3 раза EtOAc. Объединенные органические слои разделяли, промывали 2 раза рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде белого твердого вещества (4 г, 45%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 2,65 (t, J=6,1 Гц, 2Н), 2,56 (ddd, J=7,1, 5,9, 1,2 Гц, 2Н), 2,37 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,51 (q, J=7,3 Гц, 2Н), 1,42 (dt, J=13,2, 6,6 Гц, 1H), 1,20 (tt, J=4,9, 2,5 Гц, 4Н), 1,14-1,05 (m, 2H), 0,79 (d, J=6,6 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 81е: 2-((10-метил-4-оксоундеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,2'Z)-бис(октaдекa-9,12-диеноaт)
Промежуточное соединение 81е было синтезировано с выходом 40% из промежуточного соединения 81d и промежуточного соединения 1с, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 1d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 5,39-5,20 (m, 8Н), 5,17 (ddd, J=10,1, 5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,21 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,07 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,69 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,64 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,52 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,36 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,24 (t, J=7,5 Гц, 4Н), 1,97 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,66-1,46 (m, 7H), 1,33-1,13 (m, 35H), 1,08 (q, J=6,9 Гц, 2Н), 0,84-0,77 (m, 12H).
Промежуточное соединение 81f: 2-((10-метил-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z) -бис(октадека-9,12-диеноат)
- 141 046244
К раствору промежуточного соединения 81е (6 г, 1,0 экв.) в THF (120 мл), толуоле (30 мл) и Н2О (60 мл) добавляли NaBH4 (5,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 5°С в течение 5 ч. После полного восстановления реакционную смесь распределяли между THF и Н2О, и полученную органическую фазу отделяли, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением промежуточного спирта в виде желтого масла.
Полученное промежуточное соединение немедленно восстанавливали в DCM (10 мл) с последующим добавлением пиридина (2,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (2,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Затем реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (4,3 г, 59%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,27-8,16 (m, 2H), 7,37-7,29 (m, 2Н), 5,43-5,12 (m, 9Н), 4,80 (s, 1H), 4,25 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14-4,06 (m, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,40 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,24 (td, J=7,5, 4,1 Гц, 4Н), 2,05-1,88 (m, 9H), 1,71-1,62 (m, 1H), 1,62-1,47 (m, 6H), 1,45-0,97 (m, 35H), 0,89-0,66 (m, 12H).
Соединение 81: 2-((4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)-10-метилундеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 81 получали с выходом 85% из промежуточного соединения 81f и (2аминоэтил)(этил)метиламина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,21 (m, 9Н), 4,76 (s, 1H), 4,33-4,23 (m, 2Н), 4,15 (dt, J=11,8, 5,7 Гц, 2Н), 3,38 (d, J=40,4 Гц, 3Н), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,38 (t, J=7,7 Гц, 2Н), 2,32 (td, J=7,6, 1,1 Гц, 5Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,96-1,78 (m, 3Н), 1,68-1,43 (m, 12H), 1,43-1,20 (m, 36H), 1,14 (d, J=6,6 Гц, 3Н), 0,93-0,80 (m, 12H). MS: 944,5 m/z [M+H].
Пример 82 - соединение 82.
Соединение 82: 2-((9-метил-4-(((2-(пирролидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 82 получали с выходом 86% из промежуточного соединения 80е и 2-(пирролидин-1ил)этан-1-амина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,87 (s, 1H), 5,43-5,23 (m, 9H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=12,0, 4,5, 2,6 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,6 Гц, 2Н), 3,52-3,42 (m, 2H), 2,94 (s, 5H), 2,82-2,75 (m, 4H), 2,39 (ddd, J=8,4, 6,9, 2,0 Гц, 2Н), 2,36-2,29 (m, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 2,01-1,76 (m, 7H), 1,67-1,45 (m, 8H), 1,40-1,21 (m, 33Н), 1,15 (s, 2H), 0,93-0,81 (m, 12H). MS: 942,3 m/z [M+H].
Пример 83 - соединение 83.
- 142 046244
Соединение 83: 2-(( 10-метил-4-(((2-(пирролидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)ундеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 83 было получено с выходом 87% из промежуточного соединения 81f и 2-(пирролидин1-ил)этан-1-амина, используя метод, применяемый для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCh) δ 5,99 (s, 1H), 5,45-5,19 (m, 9H), 4,76 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 3,2 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,7 Гц, 2Н), 3,50 (d, J=6,3 Гц, 2Н), 2,99 (s, 5H), 2,81-2,73 (m, 4Н), 2,39 (ddd, J=8,2, 6,9, 1,8 Гц, 2Н), 2,35-2,28 (m, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 2,02-1,77 (m, 7H), 1,66-1,43 (m, 8H), 1,411,20 (m, 35H), 1,14 (d, J=6,7 Гц, 2Н), 0,95-0,81 (m, 12H). MS: 956,5 m/z [M+H].
Пример 84 - соединение 84.
Соединение 84: 2-((4-(((1-метилазетидин-3-ил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'7)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 84 было получено с выходом 87% из промежуточного соединения 40d и 1метилазетидин-3-амина с использованием метода, применяемого для примера 1.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,28 (m, 8H), 5,23 (р, J=5,2 Гц, 1H), 4,77 (d, J=7,0 Гц, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,28 (dt, J=10,9, 5,2 Гц, 2Н), 4,16 (ddd, J=8,7, 5,6, 2,8 Гц, 2Н), 3,99 (s, 2H), 3,81 (s, 2H), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 4Н), 2,65 (s, 2Н), 2,40-2,29 (m, 6Н), 2,05 (q, J=7,0 Гц, 8Н), 1,93 (dtd, J=15,1, 7,6, 3,8 Гц, 1H), 1,83 (q, J=7,4 Гц, 1H), 1,66-1,44 (m, 7H), 1,40-1,17 (m, 37H), 0,88 (q, J=7,0 Гц, 9Н). MS: 900,4 m/z [M+H].
Пример 85 - соединение 85
Промежуточное соединение 85а: бензил-4-гидроксиоктаноат
К раствору 5-бутилтетрагидрофуран-2-она (20 г, 1,0 экв.) в Н2О (50 мл) добавляли NaOH (5,63 г, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 12 ч. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления Н2О.
Полученный остаток восстанавливали в ДМФ (100 мл) с последующим добавлением BnBr (14,08 г, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 2 ч. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления ДМФ. Остаток разбавляли Н2О (150 мл) и экстрагировали 3х EtOAc, сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (15 г, 43%).
Промежуточное соединение 85b: бензил 4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)октаноат
К смеси промежуточного соединения 85а (15 г, 1,0 эквив.) в DCM (150 мл) добавляли (4нитрофенил)карбонохлоридат (32,21 г, 5,0 эквив.) в атмосфере N2, а затем в смесь был добавлен пиридин (5,16 мл, 2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя. Остаток разбавляли гексаном и фильтровали. Фильтрат промывали 3 раза Н2О. Органический слой промывали 1 раз соле
- 143 046244 вым раствором, сушили над Na2SO4 и фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (12 г, 48%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,31-8,17 (m, 2Н), 7,42-7,30 (m, 6Н), 5,13 (s, 2Н), 4,87 (qd, J=7,6, 4,8 Гц, 1H), 2,50 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 2,11 (dtd, J=15,3, 7,8, 4,0 Гц, 1H), 2,00 (dt, J=14,7, 7,6 Гц, 1H), 1,82-1,69 (m, 1H), 1,63 (ddt, J=14,3, 8,5, 5,0 Гц, 1H), 1,45-1,27 (m, 4H), 1,01-0,83 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 85с: бензил 4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)октаноат
К раствору промежуточного соединения 85b (4 г, 2,0 эквив.) и 2-пирролидин-1-илэтанамина (550 мг, 1,0 эквив.) в MeCN (20 мл) добавляли DMAP (59 мг, 0,1 эквив.), затем пиридин (1,17 мл, 3,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления MeCN (20 мл). Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (1,8 г, 48%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,32-7,23 (m, 5H), 5,03 (d, J=10,2 Гц, 3Н), 4,69 (s, 1H), 3,23 (dq, J=18,7, 5,9 Гц, 3Н), 2,70 (s, 2H), 2,60-2,40 (m, 7H), 2,34 (td, J=8,3, 7,6, 2,7 Гц, 2Н), 1,87 (d, J=10,5 Гц, 1H), 1,70 (t, J=3,8 Гц, 6Н), 1,44 (d, J=24,4 Гц, 2Н), 1,22 (q, J=11,9 Гц, 4Н), 0,80 (t, J=4,2 Гц, 3Н).
Соединение 85: 2-((4-(((2-(пирролидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 85с (1,8 г, 1,0 эквив.) в ТГФ (9 мл) добавляли Pd/C (0,5 г, 10% мас./мас.) в атмосфере Ar. Смесь продували 3х Н2, а затем смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере Н2 (15 фунтов на квадратный дюйм). Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления ТГФ.
Полученный неочищенный материал растворяли в DCM (10 мл) с последующим добавлением DMAP (65 мг, 0,16 эквив.), DIPEA (1,74 мл, 3,0 эквив.) и EDCI (638 мг, 1,0 эквив.). Затем добавляли промежуточное соединение 1с (2,05 г, 1,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 16 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 2х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (1,1 г, 50%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,39-5,21 (m, 7H), 5,18 (р, J=5,0 Гц, 1H), 5,09 (s, 1H), 4,76-4,65 (m, 1H), 4,22 (dd, J=12,0, 4,4 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,4 Гц, 2Н), 3,21 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,51 (t, J=6,1 Гц, 2Н), 2,43 (d, J=5,8 Гц, 4Н), 2,32 (ddd, J=8,9, 6,6, 3,9 Гц, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,9 Гц, 7Н), 1,91-1,66 (m, 6H), 1,63-1,35 (m, 8H), 1,25 (tq, J=7,2, 4,6, 3,6 Гц, 30Н), 0,82 (t, J=6,7 Гц, 9Н). MS: 900,4 m/z [M+H].
Пример 86 - соединение 86.
Промежуточное соединение 86а: этил 1-нонаноилциклопропан-1-карбоксилат
К раствору диэтилциклопропан-1,1-дикарбоксилата (15 г, 1,0 экв.) в ТГФ (200 мл) по каплям добавляли раствор бром(октил)магния (2 М, 40,28 мл, 1,0 экв.) при -78°С под N2. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь выливали в водн. NH4Cl. Водную фазу экстрагировали 3 раза этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью другой порции колоночной хроматографии с получением продукта в виде бесцветного масла (20 г, 48%).
- 144 046244
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,13 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,75 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 1,57-1,49 (m, 2Н), 1,35 (s, 4Н), 1,21 (dd, J=8,7, 5,5 Гц, 16Н), 0,81 (t, J=6,9 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 86b: 1-нонаноилциклопропан-1-карбоновая кислота
К раствору промежуточного соединения 86а (10 г, 1,0 эквив.) в EtOH (60 мл) и Н2О (30 мл) добавляли NaOH (2,36 г, 1,5 эквив.) и LiOH (1,41 г, 1,5 эквив.) под N2. Затем смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток доводили до pH 3, добавляя 2 н. HCl. Затем смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч в атмосфере N2. Смесь экстрагировали 3 раза EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Собранный продукт в виде бесцветного масла (5 г, 28%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,25 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,96 (q, J=4,4 Гц, 2Н), 1,71 (q, J=4,4 Гц, 2Н), 1,641,55 (m, 2H), 1,26 (d, J=3,7 Гц, 11Н), 0,87 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 86с: 2-((1-нонаноилциклопропан-1-карбонил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 86b (6 г, 1,0 экв.), промежуточное соединение 1С (16,36 г, 1,0 эквив.), EDCI (6,10 г, 1,5 эквив.) и DMAP (324 мг, 0,1 эквив.) в DCM (60 мл) добавляли Et3N (5,54 мл, 1,5 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Затем его выливали в воду и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (8 г, 37%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,28 (dtt, J=15,4, 10,8, 5,8 Гц, 8Н), 4,26 (dd, J=12,1, 4,1 Гц, 2Н), 4,08 (dd, J=12,0, 6,1 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,24 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,54 (р, J=7,0 Гц, 9Н), 1,43-1,33 (m, 4H), 1,33-1,15 (m, 40H), 0,85-0,79 (m, 9H).
Промежуточное соединение 86d: 2-((1-(1-гидроксинонил)циклопропан-1-карбонил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Раствор промежуточного соединения 86с (8 г, 1,0 экв.) в 4:2:1 ТГФ/вода/толуол (0,05-0,1 М) охлаждали до 0-5°С с последующим добавлением NaBH4 (5,0 экв.). Реакцию поддерживали при 0-25°С не менее 2 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и EtOAc, и полученную двухфазную смесь экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (EtOAc/гексаны) с получением продукта в виде бесцветного масла (4 г, 50%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,33 (tdq, J=20,3, 10,0, 5,6, 4,9 Гц, 9Н), 4,28 (dt, J=12,0, 4,0 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=12,1, 8,0, 6,0 Гц, 2Н), 3,18-3,12 (m, 1H), 2,77 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,68 (s, 1H), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,68-1,48 (m, 9H), 1,40-1,16 (m, 43H), 0,98 (ddd, J=10,7, 6,7, 4,1 Гц, 1H), 0,93-0,84 (m, 9Н), 0,81 (ddd, J=9,7, 6,8, 4,2 Гц, 1Н).
Промежуточное соединение 86е: 2-((1-(1-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)нонил)циклопропан-1карбонил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 145 046244
К раствору промежуточного соединения 86d (4 г, 1,0 эквив.) в DCM (40 мл) добавляли (4нитрофенил)карбонохлоридат (1,95 г, 2,0 эквив.), пиридин (781 мкл, 2,0 эквив.) при 0°С. Затем реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя. Остаток восстанавливали петролейным эфиром и фильтровали. Фильтрат промывали Н2О. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта (2,8 г, 59%) в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,25-8,16 (m, 2Н), 7,36-7,26 (m, 2Н), 5,27 (tdd, J=17,5, 8,5, 4,0 Гц, 9Н), 4,84 (dd, J=9,1, 4,4 Гц, 1H), 4,24 (dt, J=11,9, 3,8 Гц, 2Н), 4,08 (dd, J=11,8, 5,8 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,3 Гц, 4Н), 2,23 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,02-1,93 (m, 8H), 1,82 (qd, J=9,4, 4,9 Гц, 1H), 1,69 (ddt, J=14,4, 10,0, 5,1 Гц, 1H), 1,53 (t, J=7,2 Гц, 5Н), 1,35-1,16 (m, 41H), 1,07-1,01 (m, 1H), 0,95-0,89 (m, 1H), 0,81 (td, J=6,8, 3,8 Гц, 9Н).
Соединение 86: 2-((1-(1-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)нонил)циклопропан-1карбонил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 86 было синтезировано с выходом 90% из промежуточного соединения 86е и NI-этил^-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, примененного в примере 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,53-5,22 (m, 9H), 4,75 (dd, J=8,7, 4,5 Гц, 1H), 4,29 (ddd, J=22,5, 11,8, 4,3 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 3,30 (s, 2Н), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,54 (d, J=13,7 Гц, 4Н), 2,38-2,21 (m, 7Н), 2,05 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,60 (t, J=7,4 Гц, 4Н), 1,40-1,17 (m, 40H), 1,12-1,00 (m, 4H), 0,91-0,85 (m, 9H). MS: 956,1 m/z [M+H].
Пример 87 - соединение 87.
Промежуточное соединение 87а: 5-гидрокси-1-метил-5-октилпирролидин-2-он
К раствору 1-метилпирролидин-2,5-диона (20 г, 1,0 экв.) в ТГФ (150 мл) добавляли бром(октил)магний (1 М, 265 мл, 1,5 экв.) по каплям при 15°С под N2. Смесь перемешивали при 15°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь гасили добавлением NH4Cl при 0°С. Затем его разбавляли Н2О и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде белого твердого вещества (20 г, 50%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 3,75 (s, 1H), 2,68 (s, 3H), 2,43 (ddd, J=16,4, 10,0, 6,4 Гц, 1H), 2,24 (ddd, J=16,7, 10,0, 4,5 Гц, 1H), 2,13 (ddd, J=13,6, 10,0, 6,4 Гц, 1H), 1,93 (ddd, J=14,0, 10,0, 4,7 Гц, 1H), 1,73 (td, J=13,4, 3,7 Гц, 1H), 1,65-1,53 (m, 1H), 1,35-1,07 (m, 12H), 0,88-0,76 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 87b: 4-гидрокси-М-метилдодеканамид
К раствору промежуточного соединения 87а (15 г, 1,0 экв.) в МеОН (150 мл) порциями добавляли NaBH4 (4,99 г, 2,0 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили добавлением NH4Cl при 0°С, затем ее разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде белого твердого вещества (8 г, 53%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,93 (s, 1H), 3,60-3,50 (m, 1H), 3,11 (s, 1H), 2,73 (d, J=4,8 Гц, 3Н), 2,36
- 146 046244
2,20 (m, 2H), 1,78 (dddd, J=14,3, 7,7, 6,5, 3,1 Гц, 1H), 1,58 (ddt, J=13,8, 8,9, 6,7 Гц, 1H), 1,46-1,09 (m, 14H), 0,87-0,77 (m, 3Н).
Промежуточные продукты 87с: ^)-4-гидрокси^-метилдодеканамид
К раствору промежуточного соединения 87b (1,0 экв.) в Et2O (0,2-1 М) добавляли Novozym 435 (0,89 экв.) и винилацетат (2,0 экв.). Смесь перемешивали при 40°С в течение 96 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали колоночной хроматографией. Материал, собранный из колонки, трижды подвергали указанным выше условиям реакции с получением (R)-88c в виде желтого твердого вещества (выход 24%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,57 (s, 1H), 3,54 (tt, J=7,7, 3,6 Гц, 1H), 2,74 (d, J=4,8 Гц, 3Н), 2,64 (d, J=4,6 Гц, 1H), 2,28 (td, J=6,9, 3,2 Гц, 2Н), 1,79 (dtd, J=14,3, 7,0, 3,1 Гц, 1H), 1,60 (ddd, J=14,3, 8,8, 6,8 Гц, 2Н), 1,47-1,12 (m, 14H), 0,87-0,74 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 87d: ^)-5-октилдигидрофуран-2(3Н)-он
К раствору промежуточного соединения 87d (1,0 экв.) в МеОН (0,1-1,0 М) добавляли NaOH (10 экв.). Смесь перемешивали при 80°С в течение не менее 2 ч, после чего добавляли HCl (1-2 М, 10,0 эквив.), и смесь перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Затем реакционную смесь разбавляли Н2О и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,41 (р, J=6,9 Гц, 1H), 2,46 (dd, J=9,5, 6,8 Гц, 2Н), 2,25 (dq, J=13,4, 6,7 Гц, 1H), 1,78 (dq, J=12,7, 9,3 Гц, 1H), 1,72-1,62 (m, 1H), 1,60-1,47 (m, 1H), 1,45-1,10 (m, 14Н), 0,81 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 87е: ^)-4-гидроксидодекановая кислота
К раствору промежуточного соединения 87d (1,0 экв.) в Н2О (0,1-0,5 М) добавляли NaOH (1,0-1,5 экв.). Смесь перемешивали при 20°С не менее 12 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 88f: бензил ^)-4-гидроксидодеканоат
К раствору промежуточного соединения 87е (1,0 экв.) в ацетоне (0,3 М) добавляли BnBr (1,0-1,5 экв.) и ТВАВ (0,05 экв.). Смесь перемешивали при 60°С не менее 12 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток либо (1) очищали колоночной хроматографией, либо (2) разбавляли насыщ. NaHCO3, трижды экстрагировали EtOAc, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали перед очисткой с помощью колоночной хроматографии. Оба метода дали продукт в виде желтого масла (выход 54%).
Промежуточное соединение 87g: бензил^)-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)додеканоат
К раствору промежуточного соединения 87f (1,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (3,0 эквив.) в DCM (0,3-1,2 М) добавляли пиридин (3,0 эквив.) при 0-20°С. Смесь перемешивали при 20°С не менее 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток либо (1) очищали колоночной хроматографией, либо (2) использовали на следующей стадии без допол
- 147 046244 нительной очистки. Продукт собирали в виде бледно-желтого масла (36%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,22-8,13 (m, 2Н), 7,29 (d, J=2,0 Гц, 2Н), 5,06 (s, 2H), 4,80 (tt, J=7,6, 4,5 Гц, 1H), 2,43 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,04 (ddt, J=15,3, 7,8, 3,9 Гц, 1H), 1,92 (dq, J=14,8, 7,4 Гц, 1H), 1,71-1,61 (m, 1H), 1,55 (ddd, J=14,3, 9,1, 5,2 Гц, 1H), 1,36-1,13 (m, 11Н), 0,81 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 87h: окси)додеканоат бензил ^)-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)-
К раствору промежуточного соединения 87 г (1,0 эквив.) и №-этил-№-метилэтан-1,2-диамина (3,0 эквив.) в MeCN (0,1-0,2 М) добавляли пиридин (3,0 эквив.) и DMAP (1,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (88%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,60-7,23 (m, 5Н), 5,04 (s, 2Н), 4,77-4,64 (m, 1H), 3,15 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 2,36 (ddt, J=12,3, 8,2, 4,3 Гц, 5Н), 2,13 (s, 3Н), 1,96-1,70 (m, 3Н), 1,55-1,33 (m, 2H), 1,29-1,10 (m, 13Н), 0,96 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,80 (t, J=6,7 Гц, 4Н).
Соединение 87: 2-((^)-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 87h (1,0 эквив.) в ТГФ (0,1-0,3 М) добавляли Pd/C (10% мас./мас., 1,0 эквив.). Смесь перемешивали при 15-20°С в течение 5 ч в атмосфере Н2 (15 фунтов на квадратный дюйм). По завершении реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка.
К раствору остатка и промежуточного соединения 1с (1,0 эквив.) в DCM (10 мл) добавляли EDCI (1,0 эквив.), DMAP (0,1 эквив.) и Et3N (1,05 эквив.). Смесь перемешивали при 15-20°С в течение не менее 12 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бледно-желтого масла (61%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,40-5,14 (m, 8Н), 5,08 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,21 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=12,0, 5,9, 3,3 Гц, 2Н), 3,17 (q, J=6,0 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,43-2,28 (m, 5Н), 2,24 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,14 (s, 3Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 7Н), 1,79 (ddd, J=42,6, 15,1, 7,5 Гц, 3Н), 1,53 (q, J=7,6 Гц, 8Н), 1,33-1,06 (m, 37Н), 0,97 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,81 (q, J=6,3 Гц, 9Н).
MS: 944,1 m/z [M+H].
Пример 88 - соединение 88.
Промежуточное соединение 88а: ^)-1-(метиламино)-1-оксододекан-4-илацетат
Промежуточное соединение 88а было синтезировано с выходом 23% из промежуточного соединения 87b, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 87с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,81 (s, 1H), 4,79 (tq, J=8,5, 3,8 Гц, 1H), 2,73 (d, J=4,8 Гц, 3Н), 2,17-2,03 (m, 2H), 1,98 (s, 3Н), 1,95-1,63 (m, 3Н), 1,56-1,36 (m, 2H), 1,19 (d, J=8,4 Гц, 11Н), 0,81 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 88b: ^)-5-октилдигидрофуран-2(3Н)-он
Промежуточное соединение 88b получали из промежуточного соединения 88а с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 87d.
- 148 046244
Промежуточное соединение 88с: бензил (S)-4-rugpoKCugogeKaHoaT
Промежуточное соединение 88с получали из промежуточного соединения 88b с использованием способов, используемых для промежуточного соединения 87е и 87f.
Промежуточное соединение 88d: бензил ^)-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)додеканоат
Промежуточное соединение 88d получали из промежуточного соединения 88с, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 88g.
Промежуточное соединение карбамоил)окси)додеканоат
^)-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)88е:
бензил
Промежуточное соединение 88е было синтезировано с выходом 47% из промежуточного соединения 88е, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 87h.
Соединение 88: 2-((^)-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'2)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 88 было синтезировано с выходом 42% из промежуточного соединения 88d, используя метод, применяемый для соединения 87.
Пример 89 - соединение 89.
Промежуточное соединение 89а: 4-гидрокси-М-метилдеканамид
К смеси гидрохлорида метанамина (19,83 г, 2,0 экв.) в DCM (250 мл) добавляли AlMe3 (2 М, 152,72 мл, 2,08 экв.) по каплям при 0°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Затем этот раствор по каплям добавляли к раствору 5-гексилтетрагидрофуран-2-она (25 г, 1,0 эквив.) в DCM (100 мл) в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь гасят, добавляя HCl (1 н.) при 0°С. Органический слой отделяли, а водный слой трижды экстрагировали DCM. Объединенную органическую фазу промывали 3 раза рассолом, сушили безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде белого твердого вещества (67%).
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 3,50 (td, J=7,7, 3,8 Гц, 1H), 2,70 (s, 3Н), 2,29 (ddt, J=25,9, 16,6, 6,8 Гц, 2Н), 1,77 (dddd, J=13,3, 9,2, 6,8, 3,9 Гц, 1H), 1,66-1,55 (m, 1H), 1,42 (h, J=4,0 Гц, 3Н), 1,39-1,25 (m, 8H), 0,95-0,87 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 89b: ^)-1-(метиламино)-1-оксодекан-4-ил ацетат
- 149 046244
Промежуточное соединение 89b было синтезировано с выходом 23% с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 87с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,70 (s, 1H), 4,79 (tt, J=8,4, 4,4 Гц, 1H), 2,74 (d, J=4,8 Гц, 3Н), 2,11 (dp, J=21,3, 7,7, 7,2 Гц, 2Н), 1,98 (s, 3Н), 1,86 (tdd, J=13,6, 6,7, 3,2 Гц, 1H), 1,81-1,70 (m, 1H), 1,45 (ddp, J=19,0, 13,6, 6,6, 6,1 Гц, 2Н), 1,27-1,12 (m, 8H), 0,80 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 89с: ^)-5-гексилдигидрофуран-2(3Н)-он
Промежуточное соединение 89с было синтезировано с выходом 78% из промежуточного соединения 89b с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 87d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,48 (ddd, J=13,7, 7,5, 5,6 Гц, 1H), 2,52 (dd, J=9,5, 6,9 Гц, 2Н), 2,31 (dq, J=13,4, 6,7 Гц, 1H), 1,91-1,80 (m, 1H), 1,80-1,68 (m, 1H), 1,58 (dq, J=13,8, 5,2 Гц, 1H), 1,51-1,21 (m, 8H), 0,87 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 89d: бензил ^)-4-гидроксидеканоат
К раствору промежуточного соединения 89с (3 г, 1,0 эквив.) в EtOH (25 мл) и Н2О (5 мл) добавляли NaOH (1,1 эквив.) в атмосфере N2. Затем смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя.
Полученный остаток подвергали методу, использованному в промежуточном соединении 87f, с получением продукта в виде бесцветного масла (3 г, 50%).
Промежуточное соединение 89е: бензил ^)-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)деканоат
К раствору промежуточного соединения 89d (3 г, 1,0 эквив.) в DCM (30 мл) добавляли (4нитрофенил)карбонохлоридат (3,26 г, 1,5 эквив.) в атмосфере N2. Затем к смеси добавляли пиридин (1,74 мл, 2,0 эквив.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя с получением остатка. Остаток разбавляли гексаном и фильтровали. Фильтрат промывали 3 раза Н2О. Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (2 г, 42%).
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,23-8,13 (m, 2H), 7,37-7,18 (m, 7H), 5,39 (s, 1H), 5,03 (s, 2H), 4,47 (s, 1H), 4,00 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,42 (t, J=7,1 Гц, 2Н), 2,00 (ddt, J=15,0, 7,6, 3,8 Гц, 1H), 1,85 (dt, J=14,7, 7,3 Гц, 1H), 1,57 (ddt, J=21,1, 14,0, 6,8 Гц, 2Н), 1,35-1,16 (m, 8H), 0,91-0,75 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 89f: бензил ^)-4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)деканоат
OB η
К раствору промежуточного соединения 89е (1,5 г, 1,0 экв.) в MeCN (15 мл) добавляли 2пирролидин-1-илэтанамин (1,16 г, 3,0 экв.), пиридин (819 мкл, 3,0 экв.), DMAP (413 мг, 1,0 экв.) в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя. Остаток разбавляли EtOAc и промывали 5 раз 1 н. NaHCO3 и 3 раза Н2О. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматогра
- 150 046244 фией с получением продукта в виде бледно-желтого масла (0,65 г, 41%).
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 7,41-7,26 (m, 5Н), 5,11 (d, J=1,1 Гц, 2Н), 4,73 (dd, J=10,9, 5,7 Гц, 1H), 3,26 (dd, J=6,7, 1,7 Гц, 2Н), 2,79-2,57 (m, 7Н), 2,41 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 1,99-1,74 (m, 7H), 1,53 (s, 3Н), 1,361,24 (m, 9H), 0,92-0,86 (m, 3Н).
Соединение 89: 2-((^)-4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9 'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К суспензии Pd/C (10% мас./мас., 1,0-3,0 экв.) в ТГФ (0,2-0,5 М) добавляли промежуточное соединение 89f (1,0 экв.). Смесь перемешивали при 15-25°С в течение не менее 5 ч в атмосфере Н2. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде густого коричневого масла.
Коричневое масло немедленно восстанавливали в DCM (0,2-0,5 М) с последующим добавлением промежуточного соединения 1с (1,0 эквив.), EDCI (1,2 эквив.), DMAP (0,1-0,2 эквив.) и Et3N (1,5 эквив.) при 0°С под N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение не менее 12 ч в атмосфере N2. Смесь разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (23%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,49-5,22 (m, 8Н), 5,18 (t, J=5,0 Гц, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,22 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,12-4,04 (m, 2Н), 3,28-3,15 (m, 2Н), 2,70 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,50 (d, J=6,4 Гц, 2Н), 2,44 (s, 3H), 2,32 (s, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,83 (s, 1H), 1,70 (s, 5H), 1,38-0,94 (m, 37Н), 0,81 (q, J=6,6 Гц, 9Н). MS: 928,4 m/z [M+H].
Пример 90 - соединение 90.
Промежуточное соединение 90а: бензил ^)-4-гидроксидеканоат
Промежуточное соединение 90а было синтезировано с выходом 27% из (5R)-5гексилтетрагидрофуран-2-она, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 89d.
Промежуточное соединение 90b: бензил ^)-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)деканоат
Промежуточное соединение 90b было синтезировано с выходом 57% из промежуточного соединения 90а с использованием метода, применяемого в промежуточном соединении 89е.
Промежуточное соединение 90с: бензил ^)-4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)деканоат
Промежуточное соединение 90с было синтезировано с выходом 47% из промежуточного соединения 90b с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 89f.
Соединение 90: 2-((^)-4-(((2-(пирролидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 151 046244
Соединение 90 было синтезировано с выходом 27% из промежуточного соединения 90с, используя метод, применяемый для соединения 89.
Пример 91 - соединение 91.
Промежуточное соединение 91а: 4-гидроксидодекановая кислота
К раствору 5-октилтетрагидрофуран-2-она (20 г, 1,0 экв.) в Н2О (200 мл) добавляли NaOH (4,03 г, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления Н2О. Это давало сырой продукт в виде белого твердого вещества (14 г, 65%).
1Н ЯМР (400 МГц, D2O) δ 3,55 (ddd, J=9,5, 7,5, 4,6 Гц 1H), 2,19 (qdd, J=15,0, 9,3, 6,3 Гц, 2Н), 1,69 (dddd, J=13,9, 9,4, 6,4, 4,4 Гц, 1H), 1,59 (dddd, J=14,0, 9,2, 7,7, 6,4 Гц, 1H), 1,46-1,30 (m, 3H), 1,23 (d, J=6,6 Гц, 11Н), 0,86-0,77 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 91b: бензил-4-гидроксидодеканоат
OH
O^J
OBn
К раствору промежуточного соединения 91а (10 г, 1,0 экв.) в ДМФ (100 мл) добавляли BnBr (7,91 г, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Смесь разбавляли Н2О и экстрагировали 2х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (5,7 г, 40%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 7,46-7,28 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 3,61 (h, J=4,6 Гц, 1H), 2,51 (td, J=7,3, 2,9 Гц, 2Н), 1,86 (dtd, J=14,6, 7,4, 3,5 Гц, 1H), 1,76-1,59 (m, 3Н), 1,42 (q, J=12,1, 9,1 Гц, 4Н), 1,28 (d, J=11,9 Гц, 12Н), 0,88 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 91с: бензил 4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)додеканоат
L 1 н
OBn
К раствору промежуточного соединения 91b (10 г, 1,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (9,87 г, 1,05 эквив.) в DCM (100 мл) добавляли пиридин (3,95 мл, 1,5 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (7,5 г, 49%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 8,30-8,21 (m, 2Н), 7,48-7,26 (m, 7Н), 5,22 (d, J=69,6 Гц, 2Н), 4,87 (tt, J=7,5, 4,5 Гц, 1H), 2,59-2,42 (m, 2H), 1,80-1,57 (m, 2H), 1,52-1,16 (m, 13H), 0,88 (t, J=6,6 Гц 3Н).
Промежуточное соединение 91d: бензил 4-(((2-(диметиламино)этил)карбамоил)окси)додеканоат
- 152 046244
К раствору промежуточного соединения 91с (1,0 экв.) в MeCN (0,1-0,5 М) добавляли диамин или аминоспирт (№,№-диметилэтан-1,2-диамин (2,0-3,0 экв.)), пиридин (3,0 экв.) и DMAP (0,1 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 15-25°С в течение не менее 2 ч. По завершении реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали, получая остаток, который очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (79%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,46-7,28 (m, 5H), 5,08 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 3,23 (q, J=5,9 Гц, 2H), 2,40 (ddt, J=12,0, 8,9, 4,5 Гц, 4H), 2,21 (s, 7H), 1,94 (d, J=9,9 Гц, 1H), 1,82 (p, J=7,6 Гц, 1H), 1,61-1,40 (m, 3H), 1,39-1,16 (m, 14H), 0,87 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Соединение 91: 2-((4-(((2-(диметиламино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 91d в ТГФ (0,1-0,5 М) добавляли Pd/C (10% мас./мас.). Смесь перемешивали при 25°С в течение по меньшей мере 5 ч в атмосфере Н2 при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм. Полученный продукт разбавляли в ТГФ и фильтровали для удаления твердого вещества. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением промежуточного соединения карбоновой кислоты в виде коричневого масла.
Из полученного масла впоследствии было синтезировано соединение 91с выходом 15% с использованием метода, применяемого в промежуточном соединении 90f
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,26 (m, 8H), 5,27-5,20 (m, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,28 (ddd, J=11,9, 4,5, 1,3 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,4 Гц, 2Н), 3,24 (q, J=5,7 Гц, 2Н), 2,77 (t, J=6,7 Гц, 4Н), 2,442,35 (m, 4Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,22 (s, 6Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,97-1,84 (m, 2H), 1,80 (dt, J=14,9, 7,7 Гц, 1H), 1,67-1,42 (m, 8H), 1,42-1,14 (m, 39H), 0,88 (td, J=6,8, 5,2 Гц, 9Н). MS: 930,4 m/z [M+H].
Пример 92 - соединение 92.
Промежуточное соединение 92а: бензил 4-((((1-метилпиперидин-4-ил)окси)карбонил)окси)додеканоат
Промежуточное соединение 92а было синтезировано с выходом 94% из промежуточного соединения 91с и 1-метилпиперидин-4-ола с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,39-7,28 (m, 5Н), 5,11 (s, 2Н), 4,73 (dtd, J=11,8, 5,4, 4,6, 2,7 Гц, 1H), 4,62 (tt, J=8,6, 4,2 Гц, 1H), 2,68 (s, 2Н), 2,48-2,37 (m, 2Н), 2,29 (s, 5Н), 2,01-1,84 (m, 4Н), 1,78 (dtt, J=12,5, 8,2, 3,5 Гц, 2Н), 1,67-1,58 (m, 1H), 1,58-1,46 (m, 1H), 1,27 (d, J=15,6 Гц, 13Н), 0,87 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Соединение 92: 2-((4-((((1-метилпиперидин-4-ил)окси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 153 046244
Соединение 92 синтезировали с выходом 28% из промежуточного соединения 92а, используя метод, применяемый для соединения 91.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,39-5,21 (m, 8H), 5,21-5,16 (m, 1H), 4,65 (d, J=6,9 Гц, 1H), 4,57-4,52 (m, 1H), 4,22 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=11,9, 5,8, 4,1 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,61 (s, 2H), 2,362,29 (m, 2H), 2,29-2,18 (m, 7Н), 2,14 (s, 2Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,93-1,84 (m, 4H), 1,83-1,77 (m, 1H), 1,77-1,65 (m, 3Н), 1,54 (t, J=7,3 Гц, 13Н), 1,33-1,12 (m, 41H), 0,81 (td, J=6,9, 5,3 Гц, 9Н). MS: 957,4 m/z [M+H].
Пример 93 - соединение 93.
Промежуточное соединение 93 а: бензил 4-(((2-(азетидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)додеканоат
Промежуточное соединение 93 а синтезировали с выходом 80% из промежуточного соединения 91с и 2-(азетидин-1-ил)этанамина, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 92d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,49-7,26 (m, 5H), 5,11 (s, 2Н), 5,04 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 3,20 (t, J=7,0 Гц, 4Н), 3,11 (q, J=5,8 Гц, 2Н), 2,50 (t, J=5,9 Гц, 2Н), 2,41 (ddd, J=8,6, 6,7, 3,2 Гц, 2Н), 2,10-2,00 (m, 2H), 1,961,88 (m, 1H), 1,82 (d, J=15,4 Гц, 4Н), 1,46 (d, J=6,9 Гц, 3Н), 1,34-1,18 (m, 14H), 0,87 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Соединение 93: 2-((4-(((2-(азетидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 93 синтезировали с выходом 18% из промежуточного соединения 93а, используя метод, применяемый для соединения 91.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,36-5,22 (m, 8Н), 5,18 (р, J=5,0 Гц, 1H), 4,98 (t, J=5,6 Гц, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,22 (ddd, J=11,9, 4,5, 1,6 Гц, 2Н), 4,08 (ddq, J=11,7, 5,8, 2,8 Гц, 2Н), 3,12 (t, J=7,0 Гц, 4Н), 3,05 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,43 (t, J=5,9 Гц, 2Н), 2,31 (ddd, J=8,8, 6,6, 4,2 Гц, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,99 (dq, J=10,0, 6,9 Гц, 10Н), 1,88-1,68 (m, 3Н), 1,59-1,36 (m, 7H), 1,34-1,11 (m, 42H), 0,86-0,77 (m, 9H). MS: 942,1 m/z [M+H].
Пример 94 - соединение 94.
Промежуточное соединение 94а: бензил 4-(((2-(пиперидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)додеканоат СЛЛ н А оЗ
ОВп
Промежуточное соединение 94а было синтезировано с выходом 68% из промежуточного соединения 91с и 2- (пиперидин-1-ил)этан-1-амина с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,38-7,28 (m, 5Н), 5,10 (s, 3Н), 4,75 (s, 1H), 3,22 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 2,64 (s, 1H), 2,45-2,29 (m, 8Н), 1,99-1,88 (m, 1H), 1,82 (dq, J=15,0, 8,0 Гц, 1H), 1,48 (dt, J=53,9, 5,8 Гц, 9Н), 1,34- 154 046244
1,17 (m, 12Н), 0,86 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Соединение 94: 2-((4-(((2-(пиперидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 94 было синтезировано с выходом 22% из промежуточного соединения 94а, используя метод, применяемый для соединения 91.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,29 (qq, J=11,7,6,7 Гц, 8Н), 5,18 (р, J=5,1 Гц, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,22 (ddd, J=11,9, 4,5, 2,2 Гц, 2Н), 4,08 (ddd J=11,9, 5,9, 3,6 Гц, 2Н), 3,18 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,39-2,18 (m, 12Н), 1,98 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,91-1,79 (m, 1H), 1,79-1,68 (m, 1H), 1,61-1,33 (m, 15Н), 1,33-1,10 (m, 42H), 0,81 (q, J=6,4 Гц, 9Н). MS: 970,2 m/z [M+H].
Пример 95 - соединение 95.
Промежуточное соединение 95а: бензил 4-(((4-(диэтиламино)бутокси)карбонил)окси)додеканоат
Промежуточное соединение 95 а было синтезировано с выходом 83% из промежуточного соединения 91с и 4-(диэтиламино)бутан-1-ола с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 92d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,44-7,28 (m, 5Н), 5,11 (s, 2Н), 4,72 (tdd, J=7,6, 5,4, 4,0 Гц, 1H), 4,11 (td, J=6,7, 3,8 Гц, 2Н), 2,49 (q, J=7,1 Гц, 4Н), 2,42 (dtd, J=7,7, 5,1, 4,4, 2,5 Гц, 4Н), 1,99 (dddd, J=14,4, 8,9, 7,0, 4,1 Гц, 1H), 1,89 (dtd, J=14,7, 8,4, 6,5 Гц, 1H), 1,64 (ddt, J=17,4, 10,5, 6,2 Гц, 3Н), 1,56-1,46 (m, 3H), 1,341,21 (m, 13Н), 1,00 (t, J=7,1 Гц, 6Н), 0,87 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Соединение 95: 2-((4-(((4-(диэтиламино)бутокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 95 было получено с выходом 27% из промежуточного соединения 95а, используя метод, применяемый для соединения 91.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,35 (qdd, J=10,6, 4,4, 1,7 Гц, 8Н), 5,27-5,22 (m, 1H), 4,71 (tt, J=7,6, 2,7 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,13 (dtt, J=10,4, 6,6, 3,7 Гц, 4Н), 2,76 (t, J=6,6 Гц, 4Н), 2,50 (q, J=7,2 Гц, 4Н), 2,41 (ddd, J=15,2, 8,0, 6,4 Гц, 4Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,98-1,82 (m, 3H), 1,72-1,47 (m, 12H), 1,39-1,21 (m, 42H), 1,00 (t, J=7,1 Гц, 6Н), 0,88 (td, J=6,8, 4,8 Гц, 9Н). MS: 987,5 m/z [M+H].
Пример 96 - соединение 96.
Промежуточное соединение 96а: бензил 4-(((2-(диэтиламино)этил)карбамоил)окси)додеканоат
- 155 046244
Промежуточное соединение 96а было синтезировано с выходом 58% из промежуточного соединения 91с и Х',Х'-диэтилэтан-1,2-диамина, используя метод, применяемый для промежуточного соединения 91d. lH ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 7,39-7,28 (m, 5H), 5,19 (s, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,76 (s, 1H), 3,51 (s, 2H), 3,27-3,15 (m, 2H), 2,54 (dd, J=8,7, 5,9 Гц, 6Н), 2,41 (ddd, J=9,0, 6,9, 2,6 Гц, 2Н), 1,94 (d, J=7,5 Гц, 1H), 1,83 (р, J=7,3 Гц, 1H), 1,63-1,40 (m, 3Н), 1,35-1,17 (m, 13Н), 1,01 (t, J=7,1 Гц, 6Н), 0,87 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Соединение 96: 2-((4-(((2-(диэтиламино)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 96 было получено с выходом 42% из промежуточного соединения 96а, используя метод, применяемый для соединения 91.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 5,29 (qq, J=11,4, 6,5 Гц, 8Н), 5,18 (р, J=5,2 Гц, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,21 (ddd, J=11,8, 4,5, 2,0 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=12,0, 5,9, 2,7 Гц, 2Н), 3,12 (dt, J=13,0, 6,3 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,45 (q, J=7,3 Гц, 6Н), 2,28 (dt, J=27,2, 8,0 Гц, 6Н), 1,98 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,83 (s, 1H), 1,78-1,68 (m, 1H), 1,54 (t, J=7,2 Гц, 9Н), 1,35-1,11 (m, 42Н), 0,81 (q, J=6,3 Гц, 9Н). MS: 958,4 m/z [М+Н].
Пример 97 - соединение 97.
Соединение 97: 2-((5-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тридеканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12Д-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 96 было получено с выходом 75% из промежуточного соединения 55d и промежуточного соединения 1с, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 5,42-5,28 (m, 8H), 5,27-5,22 (m, 1H), 5,12 (d, J=5,7 Гц, 1H), 4,76-4,67 (m, 1H), 4,28 (dt, J=11,9, 4,5 Гц, 2Н), 4,13 (ddd, J=12,0, 5,9, 4,5 Гц, 2Н), 3,23 (h, J=7,2, 6,2 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,6 Гц, 4Н), 2,43 (dt, J=14,5, 6,6 Гц, 4Н), 2,35-2,27 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,71-1,46 (m, 13H), 1,40-1,19 (m, 42H), 1,03 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,92-0,83 (m, 9H). MS: 958,5 m/z [M+H].
Пример 98.
Промежуточное соединение 98а: этил-2,2-диметил-3-оксундеканоат.
К раствору Х-изопропилпропан-З-амина (20,0 мл, 1,0 эквив.) в ТГФ (1-3 М) добавляли n-BuLi (2,5 М, 56,60 мл, 1,0 эквив.) при -78°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при -78°С в течение 20 мин. Затем добавляли этил 2-метилпропаноат (18,96 мл, 1,0 эквив.) при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С еще 20 мин. К вышеуказанному раствору по каплям добавляли нонаноилхлорид (26,60 мл, 1,0 эквив.) в ТГФ (200 мл). Смеси давали нагреться до 15°С и перемешивали при 15°С в течение 12 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь гасили добавлением ледяной воды, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Органическую фазу отделяли, промывали рассолом, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (15 г, 41%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 4,11 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,36 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,56-1,46 (m, 2H), 1,28 (s, 6H), 1,25-1,13 (m, 13H), 0,80 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 98b: 2,2-диметил-3-оксундекановая кислота.
- 156 046244
Смесь Промежуточного соединения 98а (15 г, 1,0 экв.), LiOH (2,10 г, 1,5 экв.), KOH (4,92 г, 1,5 экв.) в EtOH (120 мл) и Н2О (40 мл) дегазировали и продували 3 раза с N2, а затем смесь перемешивали при 40°С в течение 3 часов в атмосфере N2. Смесь концентрировали для удаления EtOH. Затем pH доводили до 5-6 с помощью HCl (1 М). Смесь распределяли между Н2О и EtOAc. Органическую фазу отделяли, промывали рассолом, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде желтого масла (5 г, 37%).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 2,46 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,58-1,47 (m, 2H), 1,33 (s, 6H), 1,20 (s, 10Н), 0,81 (t, J=6,6 Гц, 3Н).
Пример 99 - соединение 99.
Промежуточное соединение 99а: 2-(((2,2-диметил-3-оксундеканоил)окси)метил)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 53а (12,16 г, 1,1 эквив.) в ТГФ (20 мл) добавляли промежуточное соединение 98b (4 г, 1,0 эквив.), DBAD (8,07 г, 2,0 эквив.) и PPh3 (9,19 г, 2,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Затем смесь перемешивали при 15°С в течение 16 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь разбавляли Н2О и трижды экстрагировали EtOAc. Органическую фазу отделяли, промывали рассолом, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (3 г, 20%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,27 (dtt, J=10,8, 8,7, 6,1 Гц, 8Н), 4,10 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 4,03 (d, J=6,0 Гц, 4Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,37 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 2,23 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,52 (tt, J=14,2, 7,4 Гц, 8Н), 1,31-1,17 (m, 46H), 0,85-0,77 (m, 12H).
Промежуточное соединение 99b: 2-(((3-гидрокси-2,2-диметилундеканоил)окси)метил)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 99а (1,0 экв.) в 4:2:1 ТНР:Н2О:толуол (0,025-0,1 добавляли NaBH4 (5,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 15°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь распределяли между THF и Н2О, и органическую фазу концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (33%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,41-5,25 (m, 8H), 4,20-4,07 (m, 7H), 3,63 (dd, J=10,2, 6,7 Гц, 1H), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,40 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 2,30 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,59 (q, J=7,3 Гц, 6Н), 1,40-1,22 (m, 40Н), 1,16 (d, J=4,5 Гц, 6H), 0,88 (td, J=6,8, 4,0 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 99с: 2-(((2,2-диметил-3-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)ундеканоил)окси)метил)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 157 046244
К раствору промежуточного соединения 99b (1 г, 1,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (478 мг, 2,0 эквив.) в DCM (10 мл) добавляли пиридин (191 мкл, 2,0 эквив.) при О°С. под N2. Смесь перемешивали при 15-25°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (0,8 г, 67%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCi3) δ 8,20 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,30 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 5,29 (dq, J=13,1, 7,1, 6,1 Гц, 8Н), 5,03 (dd, J=10,4, 2,3 Гц, 1H), 4,08 (dd, J=6,0, 2,5 Гц, 6Н), 2,69 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,35 (р, J=6,0 Гц, 1H), 2,23 (q, J=8,4, 7,7 Гц, 4Н), 1,97 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,53 (h, J=7,1, 5,9 Гц, 8Н), 1,36-1,12 (m, 56H), 0,85-0,77 (m, 12H).
Соединение 99: 2-(4,4,11-триметил-5-октил-3,7-диоксо-2,6-диокса-8,11-диазатридецил)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 99с (1,0 экв.) в MeCN (0,1 М) добавляли диамин (N'-этил№-метилэтан-1,2-диамин (3,0 экв.)), DMAP (1,0 экв.) и пиридин (3,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 15°С в течение не менее 2 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Органическую фазу отделяли, промывали рассолом, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (66%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCi3) δ 5,28 (pt, J=11,5, 5,8 Гц, 8Н), 4,90 (t, J=6,4 Гц, 1H), 4,11-4,02 (m, 5H), 3,17 (dt, J=13,4, 7,3 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,37 (dq, J=12,3, 6,2 Гц, 5Н), 2,23 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,14 (s, 3Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 7Н), 1,54 (р, J=6,8 Гц, 4Н), 1,37-1,06 (m, 49H), 0,97 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,81 (q, J=6,9 Гц, 9Н). MS: 973,5 m/z [M+H].
Пример 100 - соединение 100.
Промежуточное соединение 100а: этил-2,2-диметил-3-оксононаноат
Промежуточное соединение 100а было синтезировано с выходом 26% из №изопропилпропан-2амина, этил 2-метилпропаноата и гептаноилхлорида с использованием метода, применяемого для промежуточного соединения 99а.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCi3) δ 4,14 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,40 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,60-1,47 (m, 2H), 1,36-1,14 (m, 13H), 0,84 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 100b: 2,2-диметил-3-оксононановая кислота
Смесь Промежуточного соединения 100а (20 г, 1,0 экв.), LiOH (3,15 г, 1,5 экв.), KOH (7,37 г, 1,5 экв.) в EtOH (6 мл) и Н2О (2 мл) перемешивали при 40°С в течение 4 ч в атмосфере N2. Смесь концентрировали для удаления EtOH. Затем pH доводили до 5-6 с помощью HCl (1 М). Смесь распределяли между Н2О и EtOAc и дважды экстрагировали EtOAc. Органическую фазу отделяли, промывали рассолом,
- 158 046244 сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (6 г, 34%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,53 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 1,58 (р, J=7,2 Гц, 2Н), 1,40 (s, 6H), 1,34-1,23 (m, 6H), 0,92-0,81 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 100с: 2-(((2,2-диметил-3-оксононаноил)окси)метил)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 1с (19,06 г, 1,1 эквив.) в ТГФ (50 мл) добавляли PPh3 (14,41 г, 2,0 эквив.) и DBAD (12,65 г, 2,0 эквив.) и промежуточное соединение 100b (5,5 г, 1,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 20 мин, смеси давали возможность нагреться до 15°С и перемешивали при 15°С в течение 16 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь разбавляли Н2О и трижды экстрагировали EtOAc. Органическую фазу отделяли, промывали рассолом, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (4 г, 18%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,28 (tt, J=11,1, 5,4 Гц, 8Н), 4,10 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 4,05 (dd, J=10,4, 6,0 Гц, 4Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,34 (dt, J=17,5, 6,6 Гц, 3Н), 2,23 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,61-1,44 (m, 8Н), 1,39 (d, J=14,2 Гц, 3Н), 1,35-1,14 (m, 41H), 0,85-0,76 (m, 9H).
Промежуточное соединение 100d: 2-(((3-гидрокси-2,2-диметилнонаноил)окси)метил)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 100с (1,0 экв.) в 4:2:1 TI IF:112('):то.луо.л (0,025-0,1 добавляли NaBH4 (5,0 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 5°С в течение 5 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь распределяли между THF и Н2О, и органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (20%).
Промежуточное соединение 100е: 2-(((2,2-диметил-3-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)нонаноил)окси)метил)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 100d (0,4 г, 1,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (890 мг, 9,0 эквив.) в DCM (5 мл) добавляли пиридин (119 мкл, 3,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 15°С в течение 3 ч в атмосфере N2. Затем смесь перемешивали при 25°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (0,2 г, 42%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 8,21 (dd, J=9,3, 2,5 Гц, 2Н), 7,31 (dd, J=9,4, 2,8 Гц, 2Н), 5,43-5,16 (m, 8Н), 5,03 (dd, J=10,3, 2,3 Гц, 1H), 4,12-3,99 (m, 6Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,35 (h, J=6,0 Гц, 1H), 2,22 (t,
- 159 046244
J=7,6 Гц, 4Н), 1,97 (t, J=6,9 Гц, 7Н), 1,63-1,47 (m, 6H), 1,40-1,12 (m, 41H), 0,82 (t, J=6,7 Гц, 9Н).
Соединение 100: 2-(((2,2-диметил-3 -(((2-(пирролидин-1 -ил)этил)карбамоил)окси)нонаноил)окси)метил)пропан-1,3 -диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 100 синтезировали с выходом 90% из промежуточного соединения 100е и 2пирролидин-1-илэтанамина, используя метод, примененный для соединения 99.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,28 (tdq, J=17,2, 12,4, 5,8, 5,3 Гц, 8Н), 4,90 (t, J=6,4 Гц, 1H), 4,13-4,00 (m, 6Н), 3,22 (ddq, J=19,5, 12,8, 6,3, 5,8 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,51 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 2,44 (d, J=6,0 Гц, 4Н), 2,34 (р, J=6,0 Гц, 1H), 2,23 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,70 (h, J=7,5 Гц, 4Н), 1,54 (р, J=7,0 Гц, 4Н), 1,41-1,06 (m, 44H), 0,81 (dt, J=9,6, 6,7 Гц, 9Н). MS: 956,4 m/z [M+H].
Пример 101 - соединение 101.
Соединение 101: 2-((4-(((3-(азетидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 101 было синтезировано с выходом 65% из промежуточного соединения 40d и 3- (азетидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, примененного для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,45-5,28 (m, 8H), 5,25 (tt, J=5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,71 (ddd, J=11,5, 7,6, 4,7 Гц, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,3 Гц, 2Н), 4,15 (dddd, J=13,3, 7,2, 5,5, 3,2 Гц, 4Н), 3,18 (t, J=7,0 Гц, 4Н), 2,822,72 (m, 4Н), 2,48 (t, J=7,3 Гц, 2Н), 2,40 (dt, J=8,8, 6,8 Гц, 2Н), 2,31 (td, J=7,6, 1,2 Гц, 4Н), 2,10-1,99 (m, 10Н), 1,99-1,84 (m, 2H), 1,77-1,50 (m, 15H), 1,42-1,21 (m, 37Н), 0,88 (td, J=6,9, 5,4 Гц, 9H). MS: 929,3 m/z [M+H].
Пример 102 - соединение 102.
Соединение 102: 2-((4-(((3-(пиперидин-1-ил)пропокси)карбонил)окси)деканоил)окси)пропан-1,3диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 102 было синтезировано с выходом 72% из промежуточного соединения 40d и 3(пиперидин-1-ил)пропан-1-ола с использованием метода, примененного для примера 1.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,28 (m, 8H), 5,25 (ddd, J=5,8, 4,3, 1,5 Гц, 1H), 4,76-4,69 (m, 1H), 4,37-4,24 (m, 2H), 4,24-4,10 (m, 4H), 2,82-2,71 (m, 4H), 2,48-2,26 (m, 12H), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 2,01-1,81 (m, 4H), 1,71-1,49 (m, 17H), 1,43 (s, 2H), 1,40-1,24 (m, 37H), 0,88 (td, J=6,9, 5,0 Гц, 9Н). MS: 957,1 m/z [M+H].
Пример 103 - соединение 103.
Промежуточное соединение 103а: (2-этилбутил)бромид магния.
К раствору Mg (1,1 эквив.) и I2 (0,1 эквив.) в THF (0,4-0,5 М) по каплям добавляли 3
- 160 046244 (бромметил)пентан (1,0 эквив.). Смесь перемешивали при 40°С не менее 1 ч. Реакционную смесь использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 103b: этил-6-этил-4-оксооктаноат.
К раствору этил 4-хлор-4-оксобутаноата (1,0 экв.) в THF (0,3 М) добавляли CuI (1-2 экв.) и промежуточное соединение 103а (1-2 экв. экв.) при -78°С по каплям. Смесь перемешивали при -78°С не менее 1,5 ч. По завершении добавляли насыщенный NH4Cl и реакционную смесь экстрагировали 3х EtOAc. Органический слой концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде коричневого масла (82%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,05 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,65 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,49 (d, J=13,1 Гц, 2Н), 2,30 (d, J=6,8 Гц, 2Н), 1,82-1,71 (m, J=6,5 Гц, 1H), 1,33-1,13 (m, 7Н), 0,78 (t, J=7,4 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 103с: 6-этил-4-оксооктановая кислота
К раствору промежуточного соединения 103с (1,0 эквив.) в 3:1 ЕЮН/Н2О (0,2 М) добавляли NaOH (1,5 эквив.), LiOH (1,5 эквив.). Смесь перемешивали при 40°С не менее 1 ч. По завершении pH реакции доводили до 3 с помощью 1 М HCl, реакционную смесь разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (46%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,69-2,60 (m, 2Н), 2,56 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,30 (d, J=6,7 Гц, 2Н), 1,75 (гепт, J=6,4 Гц, 1H), 1,22 (qp, J=13,8, 6,6 Гц, 4Н), 0,78 (t, J=7,4 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 103d: 2-((6-этил-4-оксооктаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору промежуточного соединения 103с (1,0 эквив.) в DCM (0,2-0,5 М) добавляли промежуточное соединение 1с (1,0 эквив.), EDCI (1,2 эквив.), DMAP (0,1-0,2 эквив.) и Et3N (1,5 эквив.) при 0°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 20-25°С в течение не менее 12 ч в атмосфере N2. Смесь разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенную органическую фазу сушили безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде желтого масла (40%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,40-5,21 (m, 8H), 5,18 (р, J=5,0 Гц, 1H), 4,23 (dt, J=11,9, 5,0 Гц, 2Н), 4,08 (dd, J=11,9, 5,9 Гц, 2Н), 2,67 (dt, J=20,4, 6,5 Гц, 6Н), 2,51 (td, J=6,5, 2,9 Гц, 2Н), 2,32-2,22 (m, 5Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,75 (р, J=6,4 Гц, 1H), 1,53 (q, J=7,2 Гц, 4Н), 1,35-1,09 (m, 31H), 0,80 (dt, J=16,7, 6,9 Гц, 12Н).
Промежуточное соединение 103е: 2-((6-этил-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)октаноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 103е было синтезировано с выходом 46% из промежуточного соедине
- 161 046244 ния 103 d с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,21 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 7,32 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 5,27 (tt, J=14,1, 7,8 Гц, 8Н), 4,89 (р, J=7,4 Гц, 1H), 4,32-4,02 (m, 4H), 2,70 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,41 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,32-2,19 (m, 4H), 1,98 (q, J=7,2 Гц, 10Н), 1,69-1,40 (m, 7Н), 1,39-1,16 (m, 36H), 0,82 (t, J=6,9 Гц, 12Н).
Соединение 103: 2-((6-этил-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12'7)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 103 было синтезировано с выходом 98% из промежуточного соединения 103е и N'этил-№-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, использованного в промежуточном соединении 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,42-5,21 (m, 8Н), 5,18 (q, J=5,0 Гц, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,21 (ddd, J=11,8, 4,4, 1,8 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,4 Гц, 2Н), 3,17 (d, J=6,2 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,44-2,27 (m, 6Н), 2,24 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,13 (s, 3Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,84 (dq, J=8,4, 4,4 Гц, 1H), 1,71 (dd, J=14,8, 7,5 Гц, 1H), 1,58-1,43 (m, 8H), 1,29-1,16 (m, 38H), 0,96 (d, J=7,2 Гц, 3Н), 0,80 (ddd, J=13,4, 6,7, 3,7 Гц, 13Н). MS: 916,3 m/z [M+H].
Пример 104.
Промежуточное соединение 104а: (3,7-диметилоктил)бромид магния
Промежуточное соединение 104а синтезировали из 1-бром-3,7-диметилоктана с использованием метода, примененного в промежуточном соединении 104а.
Промежуточное соединение 104b: этил 7,11-диметил-4-оксододеканоат
Промежуточное соединение 104b было синтезировано с выходом 66% из промежуточного соединения 104а с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 103b.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,11 (qd, J=7,1, 2,5 Гц, 2Н), 2,71 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,56 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,49-2,35 (m, 2H), 1,68-1,54 (m, 1H), 1,49 (dq, J=13,2, 6,6 Гц, 1H), 1,43-1,31 (m, 2Н), 1,24 (td, J=8,0, 7,1, 3,6 Гц, 6Н), 1,10 (dddd, J=16,9, 9,9, 4,7, 2,0 Гц, 3Н), 0,84 (d, J=6,5 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 104с: 7,11-диметил-4-оксододекановая кислота
Промежуточное соединение 104с было синтезировано с выходом 51% из промежуточного соединения 104b с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 103с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,72 (t, J=6,1 Гц, 2Н), 2,63 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,50-2,36 (m, 2Н), 1,61 (ddt, J=11,8, 9,0, 4,3 Гц, 1H), 1,51 (hept, J=6,6 Гц, 1H), 1,45-1,34 (m, 2Н), 1,24 (ddt, J=16,2, 13,5, 4,2 Гц, 4Н), 1,11 (ddt, J=16,0, 9,6, 5,9 Гц, 3Н), 0,91-0,81 (m, 9H).
Промежуточное соединение 104d: 2-((7,11-диметил-4-оксододеканоил)окси)пропан-1,3-диил
Промежуточное соединение 104d было синтезировано с выходом 58% из промежуточного соединения 104с с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 103d.
- 162 046244
1Н ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 5,41-5,28 (m, 8H), 5,24 (ddd, J=10,2, 5,8, 4,3 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=11,9, 5,8 Гц, 2Н), 2,74 (dt, J=17,5, 6,5 Гц, 6Н), 2,58 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,48-2,37 (m, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,60 (ddd, J=10,0, 5,6, 2,6 Гц, 6Н), 1,54-1,47 (m, 1H), 1,42-1,19 (m, 34H), 1,10 (ddt, J=19,6, 10,0, 6,9 Гц, 4Н), 0,93-0,80 (m, 15H).
Промежуточное соединение 104е: 2-((7,11-диметил-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 104е было синтезировано с выходом 58% из промежуточного соединения 104d с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,27-8,11 (m, 2H), 7,36-7,29 (m, 2Н), 5,36-5,16 (m, 9Н), 4,78 (ddq, J=12,5, 7,0, 3,4 Гц, 1H), 4,25 (dd, J=12,0, 4,3 Гц, 2Н), 4,12-4,05 (m, 2Н), 2,70 (t, J=6,3 Гц, 4Н), 2,40 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,24 (tt, J=7,7, 4,0 Гц, 4Н), 2,07-1,88 (m, 10Н), 1,72-1,48 (m, 7H), 1,44 (ddd, J=13,3, 6,6, 1,3 Гц, 1H), 1,391,14 (m, 34H), 1,06 (dtd, J=8,6, 6,7, 4,7 Гц, 3Н), 0,86-0,76 (m, 15H).
Пример 105 - соединение 105.
Соединение 105: 2-((7,11-диметил-4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)додеканоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 105 было синтезировано с выходом 62% из промежуточного соединения 104е и 2пирролидин-1-илэтанамина с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,38-5,22 (m, 8H), 5,22-5,15 (m, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,67 (s, 1H), 4,22 (dd, J=12,0, 4,4 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=11,9, 5,9, 3,5 Гц, 2Н), 3,20 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,51 (t, J=6,1 Гц, 2Н), 2,43 (d, J=5,9 Гц, 4Н), 2,32 (ddd, J=9,2, 6,7, 3,7 Гц, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,84 (d, J=7,5 Гц, 1H), 1,77-1,66 (m, 5Н), 1,54 (р, J=7,1 Гц, 7Н), 1,44 (р, J=6,6 Гц, 3Н), 1,35-1,10 (m, 34Н), 1,10-0,96 (m, 5H), 0,86-0,74 (m, 15H). MS: 984,2 m/z [M+H].
Пример 106 - соединение 106.
Соединение 106: 2-((6-этил-4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 106 было получено с выходом 78% из промежуточного соединения 103e и 2пирролидин-1-илэтанамина с использованием метода, примененного в промежуточном соединении 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,28 (qt, J=11,5, 6,0 Гц, 8Н), 5,19 (q, J=5,0 Гц, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,22 (dd, J=12,2, 4,5 Гц, 2Н), 4,08 (ddd, J=11,8, 5,8, 3,5 Гц, 2Н), 3,22 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,53 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 2,46 (s, 3Н), 2,33 (dd, J=9,6, 7,0 Гц, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 7Н), 1,89
- 163 046244
1,80 (m, 2H), 1,76-1,61 (m, 7H), 1,60-1,45 (m, 6H), 1,34-1,16 (m, 33H), 0,87-0,72 (m, 12H). MS: 928,4 m/z [M+H].
Пример 107 - соединение 107.
Промежуточное соединение 107а: ^)-1-бромонон-3-ен
Вг._ - К раствору PPh3 (36,79 г, 1,33 экв.) в DCM (1 М) добавляли Br2 (7,23 мл, 1,33 экв.) при 0°С. (Z)-hoh3-ен-1-ол (15 г, 1,0 эквив.) добавляли к реакционной смеси и смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили добавлением Н2О при 0°С и трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (15 г, 69%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,47-5,30 (m, 2Н), 3,64 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,18-2,06 (m, 2H), 2,02 (q, J=6,7 Гц, 2Н), 1,77 (s, 1H), 1,62 (р, J=6,9 Гц, 2Н), 1,38-1,20 (m, 6H), 0,87 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 107b: ^)-нон-3-ен-1-илмагнийбромид
К суспензии Mg (2,13 г, 1,2 экв.) в THF (150 мл) добавляли I2 (1,86 г, 0,1 экв.). Затем к смеси добавляли промежуточное соединение 107а (15 г, 1,0 эквив.) и смесь перемешивали при 45°С в течение 2 ч. Реакционную смесь использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 107с: этил ^)-4-оксотридец-7-еноат
О
ЕЮ2С
Промежуточное соединение 107с было синтезировано с выходом 75% из промежуточного соединения 107b с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 103b.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,43-5,23 (m, 2H), 4,10 (qd, J=7,1, 3,2 Гц, 3Н), 2,69 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,55 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 2,47 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 2,30 (q, J=7,3 Гц, 2Н), 2,01-1,95 (m, 2H), 1,34-1,18 (m, 11H), 0,86 (t, J=6,8 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 107d: ^)-4-оксотридек-7-еновая кислота
Промежуточное соединение 107d было синтезировано с выходом 80% из промежуточного соединения 107с с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 103с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,23 (ddt, J=34,8, 17,4, 7,8 Гц, 2Н), 4,27-3,96 (m, 2Н), 2,58 (t, J=6,1 Гц, 2Н), 2,38 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 2,31-2,08 (m, 4H), 1,92 (q, J=6,9 Гц, 2Н), 1,75 (s, 2Н), 1,21 (dq, J=15,0, 9,2, 8,0 Гц, 6Н), 0,80 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 107е: 2-((^)-4-оксотридек-7-эноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Промежуточное соединение 107е было синтезировано с выходом 80% из промежуточного соединения 107d и промежуточного соединения 1с с использованием метода, примененного в промежуточном соединении 104с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,35-5,22 (m, 9Н), 5,21-5,15 (m, 1H), 4,23 (dt, J=11,9, 4,8 Гц, 2Н), 4,124,01 (m, 4H), 2,76-2,67 (m, 4Н), 2,65 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,55-2,49 (m, 2Н), 2,42 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 2,25 (t, J=7,6 Гц, 6Н), 1,98 (q, J=7,2 Гц, 13Н), 1,54 (р, J=7,6 Гц, 4Н), 1,32-1,18 (m, 37H), 0,82 (td, J=7,0, 1,7 Гц, 9Н).
Промежуточное соединение 107f: 2-((^)-4-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)тридек-7эноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
- 164 046244
Промежуточное соединение 107f было синтезировано с выходом 21% из промежуточного соединения 107е с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,48-8,20 (m, 2H), 7,56-7,32 (m, 2Н), 5,45-5,20 (m, 10Н), 4,88 (tt, J=7,9, 4,6 Гц, 1H), 4,30 (ddd, J=12,1, 10,3, 4,5 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 2,1 Гц, 2Н), 2,74 (dt, J=19,6, 6,5 Гц, 5Н), 2,59 (t, J=6,5 Гц, 1H), 2,48 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 2,41-2,24 (m, 5H), 2,15 (q, J=7,7 Гц, 1H), 2,09-1,96 (m, 10Н), 1,61 (q, J=12,7, 9,4 Гц, 5Н), 1,39-1,20 (m, 30Н), 0,99-0,69 (m, 9H).
Соединение 107: 2-((^)-4-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)тридек-7эноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 107 было синтезировано с выходом 56% из промежуточного соединения 107f и N'-этил№-метилэтан-1,2-диамина с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,41-5,29 (m, 9Н), 5,24 (р, J=5,0 Гц, 1H), 5,16 (d, J=5,3 Гц, 1H), 4,81-4,74 (m, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,3 Гц, 2Н), 3,23 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,48-2,36 (m, 6Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,20 (s, 3Н), 2,02 (dq, J=20,4, 7,0 Гц, 12Н), 1,96-1,87 (m, 2Н), 1,81 (dd, J=14,7, 7,3 Гц, 1H), 1,65-1,55 (m, 7H), 1,39-1,22 (m, 35H), 1,03 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 0,88 (td, J=7,0, 2,3 Гц, 9Н). MS: 955,3 m/z [M+H].
Пример 108 - соединение 108.
Соединение 108: 2-((^)-4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)тридек-7эноил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 108 было синтезировано с выходом 51% из промежуточного соединения 107f и 2пирролидин-1-илэтанамина с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 91d.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,26 (m, 9H), 5,24 (q, J=5,1 Гц, 1H), 4,78 (tt, J=8,6, 4,6 Гц, 1H), 4,28 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,14 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,5 Гц, 2Н), 3,29 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,66-2,50 (m, 5H), 2,39 (ddd, J=9,6, 6,7, 3,6 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,01 (dq, J=20,4, 7,1 Гц, 12Н), 1,87-1,72 (m, 5H), 1,59 (q, J=7,3 Гц, 6H), 1,40-1,15 (m, 31Н), 0,88 (td, J=6,9, 2,2 Гц, 9H). MS: 967,3 m/z [M+H].
Пример 109 - соединение 109.
Промежуточное соединение 109а: 3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-оксопропил (9Z,12Z)октадека-9,12-диеноат
- 165 046244
Промежуточное соединение 109а было синтезировано с выходом 63% из промежуточного соединения 62а и линолевой кислоты с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 62b.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,31-5,19 (m, 4Н), 4,84 (s, 2Н), 4,16 (s, 2Н), 2,67 (t, J=6,7 Гц, 2Н), 2,32 (t, J=7,5 Гц, 2Н), 1,94 (q, J=6,9 Гц, 4Н), 1,57 (q, J=7,4 Гц, 2Н), 1,31-1,13 (m, 15H), 0,80 (d, J=15,1 Гц, 12Н).
Промежуточное соединение 109b: 3-гидрокси-2-оксопропил (92,122)-октадека-9,12-диеноат
К раствору промежуточного соединения 109а (1,0 экв.) в THF (180 мл) добавляли HF-пиридин (5,0 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления ТГФ. Остаток разбавляли H2O и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (66%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,33 (dtd, J=12,5, 10,3, 9,5, 5,6 Гц, 4Н), 4,74 (s, 1H), 4,36 (s, 1H), 2,76 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2,41 (t, J=7,5 Гц, 1H), 2,37-2,27 (m, 1H), 2,03 (q, J=6,9 Гц, 4Н), 1,65 (р, J=7,1 Гц, 2Н), 1,411,24 (m, 14H), 0,87 (t, J=6,7 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 109с: 3-(олеоилокси)-2-оксопропил (92,122)-октадека-9,12-диеноат
Промежуточное соединение 109с было синтезировано с выходом 50% из промежуточного соединения 109b и олеиновой кислоты с использованием метода, примененного в соединении 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,37-5,22 (m, 6H), 4,68 (s, 4H), 2,70 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2,35 (t, J=7,5 Гц, 4Н), 2,02-1,91 (m, 8Н), 1,60 (q, J=7,3 Гц, 4Н), 1,33-1,17 (m, 33Н), 0,81 (dt, J=7,0, 3,3 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 109d: 2-гидрокси-3-(олеоилокси)пропил(92,122)-октадека-9,12-диеноат
Промежуточное соединение 109d было синтезировано с выходом 50% из промежуточного соединения 109с с использованием метода, примененного для промежуточного соединения 1с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDQ3) δ 5,37-5,21 (m, 6H), 4,15-4,00 (m, 4Н), 2,70 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 2,28 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,04-1,89 (m, 8Н), 1,56 (t, J=7,4 Гц, 4Н), 1,23 (dt, J=13,9, 7,0 Гц, 34Н), 0,82 (td, J=6,8, 3,8 Гц, 6Н).
Соединение 109: 3-(олеоилокси)-2-((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропил(92,122)-октадека-9,12-диеноат
Соединение 109 синтезировали из промежуточного соединения 109d и промежуточного соединения 85с, используя метод, примененный для соединения 85.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCi3) δ 5,35 (tdd, J=8,8, 6,5, 3,6 Гц, 5Н), 5,28-5,22 (m, 1H), 5,16 (s, 1H), 4,29 (dd, J=11,9, 4,4 Гц, 2Н), 4,15 (ddd, J=11,9, 5,8, 3,3 Гц, 2Н), 3,34-3,22 (m, 2H), 2,77 (t, J=6,5 Гц, 2Н), 2,55 (d, J=30,6 Гц, 5Н), 2,39 (ddd, J=8,8, 6,6, 3,8 Гц, 2Н), 2,31 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,09-1,97 (m, 7Н), 1,91 (d, J=7,2 Гц, 1H), 1,78 (d, J=6,0 Гц, 4Н), 1,61 (t, J=7,2 Гц, 6Н), 1,30 (td, J=10,5, 9,4, 4,7 Гц, 30Н), 0,91-0,87 (m, 6H). MS:
- 166 046244
902,3 m/z [M+H].
Пример 110 - соединение 110.
Промежуточное соединение 110а: 2-оксопропан-1,3-диил диолеат
К раствору 1,3-дигидроксипропан-2-она (5 г, 0,5 эквив.) в DCM (300 мл) добавляли DMAP (1,1 эквив.) и EDCI (1,0 эквив.). Затем в указанную выше смесь добавляли олеиновую кислоту (1,0 эквив.) и перемешивали при 25°С в течение 12 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией, получая продукт в виде бесцветного масла (8 г, 12%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,34-5,21 (m, 4H), 4,68 (s, 4H), 2,35 (t, J=7,5 Гц, 4Н), 1,94 (q, J=6,4 Гц, 8Н), 1,60 (q, J=7,4 Гц, 4Н), 1,31-1,14 (m, 38H), 0,89-0,75 (m, 6H).
Промежуточное соединение 110b: 2-гидроксипропан-1,3-диил диолеат
Промежуточное соединение 110b было синтезировано с выходом 47% из промежуточного соединения 110а с использованием метода, используя метод применяемый в промежуточном соединении 1с.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,41-5,26 (m, 4Н), 4,22-4,06 (m, 4Н), 2,34 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,01 (q, J=6,4 Гц, 7Н), 1,63 (р, J=7,2 Гц, 4Н), 1,28 (d, J=14,2 Гц, 33Н), 0,90-0,81 (m, 6H).
Соединение 110: 2-((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан-1,3-диил диолеат
Соединение 110 было синтезировано из промежуточного соединения 110b и промежуточного соединения 85с, используя метод, применяемый для соединения 85.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,33-5,22 (m, 4H), 5,22-5,15 (m, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,28-4,17 (m, 2Н), 4,08 (ddq, J=12,2, 6,4, 2,9 Гц, 2Н), 3,21 (d, J=6,8 Гц, 2Н), 2,51 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 2,43 (d, J=6,0 Гц, 4Н), 2,32 (ddd, J=8,6, 6,6, 3,7 Гц, 2Н), 2,24 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 1,94 (q, J=6,7 Гц, 8Н), 1,87-1,78 (m, 1H), 1,70 (р, J=3,1 Гц, 5Н), 1,61-1,36 (m, 9H), 1,22 (d, J=13,2 Гц, 45Н), 0,82 (td, J=6,9, 3,7 Гц, 9Н). MS: 904,2 m/z [M+H].
Пример 111 - соединение 111.
Соединение 111-3-((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)пропан-1,2-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 111 было синтезировано из промежуточного соединения 85с и промежуточного соеди- 167 046244 нения 30а, используя метод, примененный для соединения 85.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,43-5,27 (m, 8H), 5,24 (t, J=5,2 Гц, 1H), 5,14 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,27 (ddd, J=12,2, 8,2, 4,2 Гц, 2Н), 4,18-4,09 (m, 2Н), 3,27 (q, J=5,9 Гц, 2Н), 2,75 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,57 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 2,50 (s, 4Н), 2,37 (td, J=8,9, 7,8, 3,5 Гц, 2Н), 2,30 (td, J=7,5, 4,4 Гц, 4Н), 2,03 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,981,86 (m, 2Н), 1,76 (h, J=3,1 Гц, 5Н), 1,59 (tt, J=9,8, 5,1 Гц, 7Н), 1,38-1,21 (m, 30Н), 0,87 (t, J=6,7 Гц, 9Н). MS: 900,1 m/z [M+H].
Пример 112 - соединение 112.
Соединение 112: 2-(((4-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)октаноил)окси)метил)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 112 было синтезировано из промежуточного соединения 86с и промежуточного соединения 53 а, используя метод, примененный для соединения 84.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,44-5,28 (m, 8Н), 5,19 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,12 (d, J=5,9 Гц, 6Н), 3,29 (q, J=6,1 Гц, 2Н), 2,77 (t, J=6,4 Гц, 4Н), 2,64-2,49 (m, 6H), 2,38 (ddd, J=10,1, 8,5, 4,8 Гц, 3Н), 2,30 (t, J=7,6 Гц, 4Н), 2,05 (q, J=6,8 Гц, 8Н), 1,90 (s, 2H), 1,86-1,72 (m, 6H), 1,61 (t, J=7,3 Гц, 7Н), 1,32 (tq, J=7,6, 4,9, 3,7 Гц, 33Н), 0,89 (t, J=6,7 Гц, 9Н). MS: 914,1 m/z [M+H].
Пример 113 - соединение 113.
Промежуточное соединение 113а: бензил 3-гидроксигептаноат он
Zn выливали в HCl (1 М) и перемешивали в течение 30 мин. Смесь фильтровали, и осадок промывали EtOH. Твердое вещество сушили при пониженном давлении, получая свежеприготовленный Zn. К суспензии Zn (15,18 г, 2,0 экв.) в THF (50 мл) по каплям добавляли пентаналь (1,0 экв.) и бензил-2бромацетат (1,5 экв.) при 66°С в течение 0,5 часа. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (10 г, 36%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,34 (d, J=4,1 Гц, 5Н), 5,14 (s, 2H), 4,01 (tt, J=8,4, 3,6 Гц, 1H), 2,87 (s, 1H), 2,59-2,41 (m, 2H), 1,57-1,47 (m, 1H), 1,43 (qd, J=9,6, 8,9, 4,6 Гц, 2Н), 1,37-1,24 (m, 4H), 0,93-0,87 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 113b: бензил 3-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)гептаноат
К раствору промежуточного соединения 113а (8 г, 1,0 эквив.) и (4-нитрофенил)карбонохлоридата (2,0 эквив.) в DCM (10 мл) добавляли пиридин (3,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления DCM. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (8 г, выход 59%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,30-8,21 (m, 2Н), 7,39-7,28 (m, 7Н), 5,16 (d, J=3,3 Гц, 2Н), 2,82-2,69 (m, 2Н), 1,81-1,68 (m, 2H), 1,43-1,30 (m, 5H), 0,94-0,89 (m, 3Н).
Промежуточное соединение 113с: бензил 3-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)гептаноат
- 168 046244
К раствору промежуточного соединения 113b (0,5 г, 1,0 эквив.) и 2-пирролидин-1-илэтанамина (3,0 эквив.) в MeCN (10 мл) добавляли DMAP (0,1 эквив.) и пиридин (3,0 эквив.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления MeCN. Остаток разбавляли Н2О и экстрагировали 3х EtOAc. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (0,4 г, 85%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,36-7,20 (m, 5Н), 5,05 (s, 2Н), 3,17 (dt, J=13,3, 6,4 Гц, 2Н), 2,56 (td, J=13,2, 11,4, 6,3 Гц, 2Н), 2,50-2,37 (m, 6Н), 1,72-1,63 (m, J=4,0, 3,5 Гц, 4Н), 1,49 (s, 2H), 1,28-1,20 (m, 4H), 0,81 (q, J=4,2, 3,2 Гц,3И).
Промежуточное соединение 113d: 3-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)гептановая кислота
К раствору промежуточного соединения 113с (3,5 г, 1,0 эквив.) в ТГФ (10 мл) добавляли Pd/C (10% мас./мас.). Смесь продували 3 раза Н2, а затем смесь перемешивали при 20°С в течение 12 ч в атмосфере Н2. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали колоночной хроматографией с получением продукта в виде бесцветного масла (2 г, 75%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 10,00 (s, 1H), 6,46 (t, J=6,0 Гц, 1H), 5,02 (dt, J=10,0, 5,2 Гц, 1H), 3,43-3,25 (m, 3Н), 2,92 (dt, J=21,7, 6,5 Гц, 6Н), 2,37 (qd, J=14,9, 6,4 Гц, 2Н), 1,87 (q, J=4,4, 2,9 Гц, 4Н), 1,64-1,45 (m, 2Н), 1,24 (h, J=7,7, 6,7 Гц, 4Н), 0,88-0,75 (m, 3Н).
Соединение 113: 2-(((3-(((2-(пирролидин-1-ил)этил)карбамоил)окси)гептаноил)окси)метил)пропан1,3-диил (9Z,9'Z, 12Z,12^)-бис(октадека-9,12-диеноат)
Соединение 113 синтезировали из промежуточного соединения 113с и промежуточного соединения 53 а, используя метод, применяемый для соединения 52.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,37-5,18 (m, 8Н), 5,00 (q, J=6,4 Гц, 1H), 4,06 (р, J=6,5, 6,1 Гц, 6Н), 3,21 (р, J=7,3, 6,8 Гц, 2Н), 2,70 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,55-2,39 (m, 7H), 2,32 (р, J=6,0 Гц, 1H), 2,23 (t, J=7,6 Гц, 4H), 1,98 (q, J=6,8 Гц, 7H), 1,76-1,63 (m, 5H), 1,54 (t, J=7,3 Гц, 6Н), 1,33-1,15 (m, 30Н), 0,82 (t, J=6,7 Гц, 9Н). MS: 900,1 m/z [M+H].
Пример 114 - сравнительное соединение 114.
Соединение 114: 2-(((2-(этил(метил)амино)этил)карбамоил)окси)пропан-1,3-диил (9Z,9'Z,12Z,12'Z)бис(октадека-9,12-диеноат)
- 169 046244
К раствору промежуточного соединения 1с (250 мг, 1,0 эквив.) в DCM (2 мл) добавляли пиридин (3,0 эквив.) и 4-нитрофенилхлорформиат (1,1 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 2 ч, после чего реакцию гасили добавлением воды и экстрагировали 3 раза DCM. Органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный остаток восстанавливали в MeCN (2 мл) с последующим добавлением пиридина (3,0 эквив.), №-этил-Ы1-метилэтан1,2-диамина (1,5 эквив.) и DMAP (1,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 16 ч. Затем к реакционной смеси добавляли гептан и слой гептана промывали 3 раза MeCN. Объединенные слои MeCN трижды экстрагировали гептаном, а объединенные слои гептана промывали один последний раз MeCN. Затем гептан удаляли в вакууме и неочищенный материал очищали колоночной хроматографией (MeOH/DCM), получая продукт в виде бесцветного масла (138 мг, 46%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,49-5,27 (m, 8Н), 5,14 (р, J=5,0 Гц, 1H), 4,33-4,12 (m, 4Н), 3,29 (q, J=5,7 Гц, 2Н), 2,83-2,71 (m, 4H), 2,60-2,38 (m, 5Н), 2,38-2,16 (m, 7Н), 2,04 (q, J=6,9 Гц, 8Н), 1,69-1,56 (m, 4H), 1,42-1,22 (m, 28H), 1,07 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0,96-0,85 (m, 6H).
Пример 115 - Материалы и методы.
Композиции LNP.
LNP были приготовлены с использованием различных аминовых липидов в 4-компонентной липидной системе, состоящей из ионизируемого липида (к примеру, аминного липида), DSPC, холестерина и ПЭГ -2k-DMG. В исследованиях на процентное изменение печени у мышей мРНК Cas9 и химически модифицированная огРНК, нацеленная на мышиную последовательность, были составлены в LNP либо в соотношении 1:1 мас./мас., либо в соотношении 1:2 мас./мас.
Композиция LNP - поперечный поток.
Липидные компоненты растворяли в 100% этаноле с молярными соотношениями липидных компонентов, описанными ниже. Химически модифицированную огРНК и мРНК Cas9 объединяли и растворяли в 25 мМ цитрате, 100 мМ NaCl, pH 5,0, в результате чего концентрация общего карго РНК составляла приблизительно 0,45 мг/мл. LNP были составлены с соотношением N/P около 6, с соотношением химически модифицированной огРНК:мРНК Cas9 либо 1:1, либо 1:2 мас./мас., как описано ниже.
LNP были сформированы путем смешивания липида в этаноле с двумя объемами растворов РНК и одним объемом воды. Липид в этаноле смешивают через крестовину для смешивания с двумя объемами раствора РНК. Четвертый поток воды смешивается с выходным потоком крестовины через встроенный тройник, (см., к примеру, WO2016010840, фиг. 2.) LNP выдерживали в течение 1 ч при комнатной температуре и затем разбавляли водой (приблизительно 1:1 об./об.). Разбавленные LNP концентрировали с использованием фильтрации в тангенциальном потоке на плоском картридже (Sartorius, 100 кДа MWCO), а затем заменяли буфер диафильтрацией на 50 мМ Трис, 45 мМ NaCl, 5% (мас./об.) сахарозы, pH 7,5 (TSS). В качестве альтернативы, окончательная замена буфера в TSS была завершена с помощью обессоливающих колонн PD-10 (GE). При необходимости композиции концентрировали центрифугированием на центробежных фильтрах Amicon 100 кДа (Millipore). Затем полученную смесь фильтровали с использованием стерильного 0,2 мкм фильтра. Конечный LNP хранили при 4°С или -80°С до дальнейшего использования.
Аналитика композиции LNP.
Динамическое рассеяние света (DLS) используется для характеристики индекса полидисперсности (pdi) и размера LNP настоящего изобретения. DLS измеряет рассеяние света, которое возникает в результате воздействия на образец источника света. PDI, как определено из измерений DLS, представляет собой распределение размера частиц (около среднего размера частиц) в популяции с совершенно однородной популяцией, имеющей PDI, равное нулю.
Электроферетическое рассеяние света используется для характеристики поверхностного заряда LNP при заданном pH. Поверхностный заряд или дзета-потенциал является мерой величины электростатического отталкивания/притяжения между частицами в суспензии LNP.
Фракционирование потока в поле с асимметричным потоком - многоугловое рассеяние света (AF4MALS) используется для разделения частиц в составе по гидродинамическому радиусу, а затем для измерения молекулярных масс, гидродинамических радиусов и среднеквадратичных радиусов фракционированных частиц. Это позволяет оценить молекулярную массу и распределение по размерам, а также вторичные характеристики, такие как график Бурхарда-Стокмейера (соотношение среднеквадратичного (среднеквадратичного) радиуса к гидродинамическому радиусу с течением времени, предполагая внутреннюю плотность ядра частицы) и график среднеквадратичной конформации (логарифм среднеквадратичного радиуса по сравнению с логарифмом молекулярной массы, где наклон полученной линейной аппроксимации дает степень компактности по сравнению с удлинением).
Анализ слежения за наночастицами (NTA, Malvern Nanosight) можно использовать для определения распределения частиц по размерам, а также концентрации частиц. Образцы LNP соответствующим образом разбавляют и вводят на предметное стекло микроскопа. Камера записывает рассеянный свет по мере того, как частицы медленно проникают через поле зрения. После того как видеофрагмент снят, анализ траектории движения наночастиц обрабатывает видеофрагмент, отслеживая пиксели и вычисляя коэффициент диффузии. Этот коэффициент диффузии можно перевести в гидродинамический радиус части
- 170 046244 цы. Прибор также подсчитывает количество отдельных частиц, подсчитанных в анализе, для определения концентрации частиц.
Криоэлектронная микроскопия (cryo-EM) может использоваться для определения размера частиц, морфологии и структурных характеристик LNP.
Анализ состава липидов LNPs может быть определен с помощью жидкостной хроматографии с последующим обнаружением заряженного аэрозоля (LC-CAD). Этот анализ может обеспечить сравнение фактического содержания липидов с теоретическим содержанием липидов.
Композиции LNP анализируют на средний размер частиц, индекс полидисперсности (pdi), общее содержание РНК, эффективность инкапсуляции РНК и дзета-потенциал. Композиции LNP можно дополнительно охарактеризовать с помощью анализа липидов, AF4-MALS, NTA и/или cryo-EM. Средний размер частиц и полидисперсность измеряют методом динамического рассеяния света (DLS) с использованием прибора Malvern Zetasizer DLS. Образцы LNP были разбавлены буфером PBS перед измерением с помощью DLS. Z-средний диаметр, который является измерением среднего размера частиц на основе интенсивности, был представлен вместе со среднечисленным диаметром и pdi. Инструмент Malvern Zetasizer также используется для измерения дзета-потенциала LNP. Перед измерением образцы разбавляют 1:17 (50 мкл на 800 мкл) в 0,1Х PBS, pH 7,4.
Анализ на основе флуоресценции (Ribogreen®, ThermoFisher Scientific) используется для определения концентрации общей и свободной РНК. Эффективность инкапсуляции рассчитывается как (Общая РНК - Свободная РНК)/Общая РНК. Образцы LNP соответствующим образом разбавляют 1х ТЕбуфером, содержащим 0,2% Triton-X 100, для определения общей РНК или 1х ТЕ-буфером для определения свободной РНК. Стандартные кривые получают с использованием исходного раствора РНК, используемого для приготовления композиций, и его разбавления в буфере 1х ТЕ ±0,2% Triton-X 100. Затем разбавленный краситель RiboGreen® (в соответствии с инструкциями производителя) добавляется к каждому из стандартов и образцов и инкубируется в течение примерно 10 мин при комнатной температуре в отсутствие света. Считывающее устройство для микропланшетов SpectraMax M5 (Molecular Devices) используется для считывания образцов с длинами волн возбуждения, авто отсечки и излучения, установленными на 488 нм, 515 нм и 525 нм соответственно. Суммарную РНК и свободную РНК определяют по соответствующим стандартным кривым.
Эффективность инкапсуляции рассчитывается как (Общая РНК - Свободная РНК)/Общая РНК. Ту же процедуру можно использовать для определения эффективности инкапсуляции компонента карго на основе ДНК. Для одноцепочечной ДНК можно использовать краситель Oligreen, а для двухцепочечной ДНК - краситель Picogreen.
AF4-MALS используется для анализа распределения молекулярной массы и размера, а также вторичной статистики этих расчетов. LNPs разбавляют соответствующим образом и вводят в канал разделения AF4 с помощью автоматического пробоотборника HPLC, где они фокусируются, а затем элюируются с экспоненциальным градиентом поперечного потока через канал. Вся жидкость приводится в действие насосом HPLC и прибором Wyatt Eclipse. Частицы, выходящие из канала AF4, проходят через УФдетектор, детектор многоуглового светорассеяния, детектор квазиупругого светорассеяния и детектор дифференциального показателя преломления. Необработанные данные обрабатываются с использованием модели Дебая для определения молекулярной массы и среднеквадратичного радиуса по сигналам детектора.
Липидные компоненты в LNPs количественно анализируются с помощью HPLC в сочетании с детектором заряженных аэрозолей (CAD). Хроматографическое разделение 4 липидных компонентов достигается обращенно-фазовой HPLC. CAD - это разрушающий масс-детектор, который обнаруживает все нелетучие соединения, и сигнал остается неизменным независимо от структуры анализируемого вещества.
Карго мРНК Cas9 и гРНК.
Карго мРНК Cas9 получали транскрипцией in vitro. Кепированная и полиаденилированная мРНК Cas9, содержащая 1х NLS (SEQ ID NO: 3) или последовательность из табл. 24 документа PCT/US2019/053423 (которая включена в настоящее описание в качестве ссылки), была получена путем транскрипции in vitro с использованием линеаризованной плазмидной ДНК-матрицы и Т7 РНК полимеразы. К примеру, плазмидная ДНК, содержащая промотор Т7 и область поли(А/Т) размером 100 нуклеотидов, может быть линеаризована путем инкубации при 37°С в течение 2 ч с XbaI в следующих условиях: 200 нг/мкл плазмиды, 2 ед./мкл XbaI. (NEB) и 1х реакционный буфер. XbaI можно инактивировать нагреванием реакционной смеси при 65°С в течение 20 мин. Линеаризованная плазмида может быть очищена от ферментов и буферных солей с использованием спин-колонки с силикагелем (Epoch Life Sciences) и проанализирована с помощью агарозного геля для подтверждения линеаризации. Реакция IVT для генерации модифицированной мРНК Cas9 может быть проведена путем инкубации при 37°С в течение 4 ч в следующих условиях: 50 нг/мкл линеаризованной плазмиды; по 2 мМ каждого из GTP, АТР, СТР и №-метил псевдо-UTP (Trilink); 10 мМ ARCA (Trilink); 5 ед/мкл РНК-полимеразы Т7 (NEB); 1 ед/мкл ингибитора мышиной РНКазы (NEB); 0,004 ед/мкл неорганической пирофосфатазы E. coli (NEB);
- 171 046244 и 1х реакционный буфер. После 4-часовой инкубации добавляли TURBO ДНКазу (ThermoFisher) до конечной концентрации 0,01 ед/мкл, и реакционную смесь инкубировали в течение дополнительных 30 мин для удаления матрицы ДНК. мРНК Cas9 очищали методом преципитации LiCl.
огРНК в следующих примерах были синтезированы химическим путем.
Доставка LNP In Vivo.
В каждом исследовании использовали самок мышей CD-1 в возрасте 6-10 недель. Животных взвешивали и группировали в соответствии с массой тела для приготовления дозируемых растворов на основе среднего веса группы. LNP вводили через боковую хвостовую вену в объеме 0,2 мл на животное (приблизительно 10 мл на килограмм веса тела). За животными периодически наблюдали на предмет побочных эффектов в течение по меньшей мере 24 ч после введения дозы.
Для исследований по измерению редактирования in vivo в печени самкам мышей CD-1 вводили дозу 0,1 мг/кг массы тела, если не указано иное. Животных умерщвляли через 6 или 7 дней путем обескровливания через пункцию сердца под изофлорановой анестезией. Ткань печени собирали у каждого животного для выделения и анализа ДНК. Кровь собирали в пробирки с сепаратором сыворотки или в пробирки, содержащие забуференный цитрат натрия для плазмы, как описано здесь. Когорты мышей были измерены для редактирования с помощью секвенирования следующего поколения (NGS).
Секвенирование NGS.
Вкратце, для количественного определения эффективности редактирования в целевом участке генома была выделена геномная ДНК и использовано глубокое секвенирование для выявления присутствия вставок и делеций, внесенных редактированием гена.
Праймеры для PCR были сконструированы вокруг сайта-мишени (к примеру, В2М), и интересующая область генома была амплифицирована. Дополнительную PCR выполняли в соответствии с протоколами производителя (Illumina), чтобы добавить необходимый химический состав для секвенирования. Ампликоны секвенировали на приборе Illumina MiSeq. Считывания были сопоставлены с соответствующим эталонным геномом (к примеру, GRCm38) после исключения тех, которые имели низкие оценки качества. Полученные файлы, содержащие считывания, были сопоставлены с эталонным геномом (файлы ВАМ), где были выбраны считывания, которые перекрывали интересующую целевую область, и количество считываний дикого типа по сравнению с числом считываний, содержащих вставку, замену или удаление, было рассчитано.
Процент редактирования (к примеру, эффективность редактирования или процент редактирования) определяется как общее количество считываний последовательности со вставками или удалениями по сравнению с общим количеством считываний последовательностей, включая дикий тип.
Транстиретиновый (TTR) ELISA-анализ.
Была собрана кровь и выделена сыворотка, как указано. Общие уровни мышиного TTR в сыворотке определяли с использованием набора ELISA для мышиного преальбумина (транстиретина) (Aviva Systems Biology, Cat. OKIA00111). Вкратце, сыворотки серийно разбавляли разбавителем для образцов из набора, к примеру до конечного разведения в 10 000 и/или 2500 раз. Затем разбавленный образец добавляли в планшеты для ELISA и затем проводили анализ в соответствии с инструкциями. Данные TTR сыворотки из групп лечения выражены в процентах от контрольных уровней носителя.
Пример 116 - оценка липидной эффективности путем редактирования in vivo.
Авторы изобретения оценили эффективность редактирования in vivo материалов, поставляемых с составами, включающими различные амино-липидные соединения. Редактирование измеряли с использованием либо G282 (SEQ ID NO: 1), который нацелен на ген TTR мыши, либо G650 (SEQ ID NO: 2), который нацелен на ген В2М мыши. Описанные выше липиды оценивали на эффективность в экспериментах по редактированию in vivo. LNP были составлены при соотношении огРНК к мРНК Cas9 1:1 и при соотношении N/P около 6. Молярные концентрации липидов в липидном компоненте LNP выражены как молярные% амино-лиπид/DSPC/холестерин/ПЭГ-2k-DMG, к примеру 50/10/38,5/1,5. Конечные LNP были охарактеризованы для определения эффективности инкапсуляции, индекса полидисперсности и среднего размера частиц в соответствии с аналитическими методами, приведенными выше. Анализ среднего размера частиц, полидисперсности (PDI), общего содержания РНК и эффективности инкапсуляции РНК показан в табл. 2. Значения pKa следующих ионизируемых липидов также были измерены и представлены в табл. 1.
В эксперименте 9, представленном ниже, была протестирована серия соединений, которые основаны на соединении 7 и которые различаются включением либо С6-циклоалкила, либо С4-12-алкила в положение R3 формулы (1А), как показано на фиг. 1А. Как показано в табл. 3 и на фиг. 1В и 1С, все шесть испытанных соединений оказались эффективными для редактирования in vivo. Дополнительные группы R3 в серии соединений на основе соединения 7 также тестируются в примере 119 ниже.
- 172 046244
Таблица 2 Аналитика состава
| Соед. No. | Композиция соотношение (мол. %) | Инкапсулирование (%) | Z-Ave Размер (нм) | PDI | Num Ave Размер (нм) | Эксп. |
| 1 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 79,25 | 0,085 | 57,00 | 1 |
| 3 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 83,58 | 0,042 | 67,38 | 1 |
| 7 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 87,93 | 0,052 | 70,97 | 1 |
| 8 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 94,18 | 0,066 | 71,54 | 1 |
| 9 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 83,72 | 0,049 | 67,39 | 1 |
| 30 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 116,20 | 0,040 | 97,58 | 1 |
| 49 | 50/9/38/3 | 99 | 86,06 | 0,033 | 71,23 | 1 |
| 5 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 88,86 | 0,003 | 73,37 | 2 |
| 6 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 68,98 | 0,075 | 50,12 | 2 |
| 10 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 68,38 | 0,079 | 51,46 | 2 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 75,34 | 0,052 | 59,17 | 2 |
| 11 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 92,55 | 0,063 | 70,42 | 3 |
| 12 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 73,87 | 0,051 | 56,58 | 3 |
- 173 046244
| 49 | 50/9/38/3 | 97 | 78,85 | 0,036 | 64,05 | 3 |
| 14 | 50/10/38,5/1,5 | 96 | 95,77 | 0,023 | 77,66 | 4 |
| 15 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 90,90 | 0,055 | 71,35 | 4 |
| 16 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 84,13 | 0,039 | 66,00 | 4 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 82,71 | 0,056 | 64,97 | 4 |
| 1 | 50/9/39,5/1,5 | 96 | 89,37 | 0,041 | 70,27 | 5 |
| 17 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 91,32 | 0,037 | 72,26 | 5 |
| 18 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 77,64 | 0,057 | 58,93 | 5 |
| 19 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 82,31 | 0,011 | 66,83 | 5 |
| 20 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 88,10 | 0,056 | 70,77 | 5 |
| 21 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 80,80 | 0,041 | 65,00 | 5 |
| 31 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 93,72 | 0,009 | 76,38 | 5 |
| 32 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 78,88 | 0,054 | 62,21 | 5 |
| 33 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 87,33 | 0,036 | 70,78 | 5 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 96 | 90,69 | 0,044 | 73,81 | 5 |
| 35 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 85,62 | 0,063 | 68,07 | 5 |
| 36 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 76,38 | 0,058 | 60,24 | 5 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 82,71 | 0,056 | 64,97 | 5 |
| 7 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 95,20 | 0,020 | 76,61 | 6 |
| 9 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 85,62 | 0,048 | 68,63 | 6 |
| 22 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 98,32 | 0,026 | 79,28 | 6 |
| 23 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 94,38 | 0,048 | 75,29 | 6 |
| 24 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 109,50 | 0,133 | 72,78 | 6 |
| 49 | 50/9/38/3 | 99 | 75,92 | 0,040 | 60,22 | 6 |
| 1 | 50/9/39,5/1,5 | 97 | 90,24 | 0,002 | 74,63 | 7 |
| 25 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 81,90 | 0,029 | 64,59 | 7 |
| 26 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 79,29 | 0,047 | 62,17 | 7 |
| 27 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 85,38 | 0,040 | 65,81 | 7 |
| 28 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 90,56 | 0,029 | 73,19 | 7 |
| 29 | 50/10/38,5/1,5 | 83 | 90,05 | 0,002 | 74,44 | 7 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 80,07 | 0,019 | 64,16 | 7 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 92,98 | 0,014 | 75,69 | 8 |
| 38 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 87,14 | 0,045 | 68,11 | 8 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 86,84 | 0,020 | 71,49 | 8 |
- 174 046244
| 7 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 89,00 | 0,034 | 73,67 | 9 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 85,93 | 0,043 | 68,07 | 9 |
| 39 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 89,19 | 0,004 | 73,72 | 9 |
| 40 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 98,55 | 0,023 | 81,09 | 9 |
| 41 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 109,00 | 0,036 | 88,36 | 9 |
| 42 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 113,80 | 0,014 | 93,70 | 9 |
| 43 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 136,60 | 0,014 | 113,90 | 9 |
| 49 | 50/9/38/3 | 99 | 86,26 | 0,017 | 70,81 | 9 |
| 49 | 50/9/38/3 | 96 | 83,65 | 0,031 | 67,22 | 9 |
| 114 | 50/10/38,5/1,5 | 95 | 120,3 | 0,011 | 100,5 | 9 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 92,98 | 0,014 | 75,69 | 10 |
| 38 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 87,14 | 0,045 | 68,11 | 10 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 86,84 | 0,020 | 71,49 | 10 |
| 49 | 50/9/38/3 | 96 | 83,65 | 0,031 | 67,22 | 10 |
Табл. 3 показывает процент редактирования в печени мышей, измеренный NGS.
Таблица 3
Эффективность редактирования в печени мышей, обеспечивающая% образования делеции для экспериментов с G282 и G650 и уровни TTR в сыворотке для экспериментов с G282
| Соедине ние № | Редактирование | Сыворотка TTR | Показа тель | Эксп. | |||||
| Средний % делеции | SD | N | Сыворот ка TTR (мкг/мл) | SD | Номер образца (п) | Сыворо тка TTR (%TSS) | |||
| TSS | 0,1 | 0,1 | 4 | 884 | ИЗ | 5 | 100% | G282 | 1 |
| 1 | 13,1 | 8,2 | 5 | 671 | 201 | 5 | 76% | G282 | 1 |
| 3 | 23,7 | 8,5 | 5 | 691 | 182 | 5 | 78% | G282 | 1 |
| 7 | 45,3 | 8,3 | 5 | 270 | 132 | 5 | 31% | G282 | 1 |
| 8 | 0,1 | 0,1 | 5 | 745 | 97 | 5 | 84% | G282 | 1 |
| 9 | 44,1 | 13,3 | 5 | 339 | 184 | 5 | 38% | G282 | 1 |
| 30 | 10,4 | 4,8 | 5 | 841 | 89 | 5 | 95% | G282 | 1 |
| 49 | 33,5 | 8,9 | 5 | 388 | 103 | 5 | 44% | G282 | 1 |
| TSS | 0,1 | 0,1 | 5 | G650 | 2 | ||||
| 5 | 17,5 | 4,4 | 5 | G650 | 2 | ||||
| 6 | 0,4 | 0,1 | 5 | G650 | 2 |
- 175 046244
| 10 | 5,3 | 1,3 | 5 | G650 | 2 | ||||
| 49 | 10,2 | 2,8 | 4 | G650 | 2 | ||||
| TSS | 0,1 | 0,1 | 5 | G650 | 3 | ||||
| 11 | 9,2 | 1,2 | 5 | G650 | 3 | ||||
| 12 | 5,5 | 2,4 | 5 | G650 | 3 | ||||
| 49 | 15,7 | 5,5 | 5 | G650 | 3 | ||||
| TSS | 0,1 | o,o | 5 | G650 | 4 | ||||
| 14 | 20,6 | 8,7 | 5 | G650 | 4 | ||||
| 15 | 18,0 | 2,4 | 5 | G650 | 4 | ||||
| 16 | 10,1 | 1,7 | 5 | G650 | 4 | ||||
| 49 | 15,4 | 3,5 | 5 | G650 | 4 | ||||
| TSS | 0,2 | 0,1 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 1 | 18,6 | 3,9 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 17 | 12,3 | 4,4 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 18 | 4,5 | 1,4 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 19 | 13,0 | 4,1 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 20 | 15,4 | 5,1 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 21 | 12,1 | 1,4 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 31 | 15,6 | 1,8 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 32 | H,6 | 2,0 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 33 | 20,0 | 5,0 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 34 | 44,8 | 8,3 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 35 | 35,5 | 6,6 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 36 | 30,0 | 8,4 | 5 | G650 | 5 | ||||
| 49 | 22,3 | 4,6 | 5 | G650 | 5 | ||||
| TSS | 0,0 | o,o | 5 | G650 | 6 | ||||
| 7 | 22,6 | 5,6 | 5 | G650 | 6 | ||||
| 9 | 20,3 | 2,0 | 5 | G650 | 6 | ||||
| 22 | 6,7 | 2,4 | 5 | G650 | 6 | ||||
| 23 | 7,3 | 2,0 | 5 | G650 | 6 | ||||
| 24 | 6,8 | 0,9 | 5 | G650 | 6 | ||||
| 49 | H,4 | 2,2 | 5 | G650 | 6 | ||||
| TSS | o,o | 0,1 | 5 | G650 | 7 | ||||
| 1 | 3,2 | 0,8 | 5 | G650 | 7 |
- 176 046244
| 25 | 10,2 | 5,5 | 5 | G650 | 7 | ||||
| 26 | 5,2 | 1,4 | 5 | G650 | 7 | ||||
| 27 | 13,0 | 2,8 | 5 | G650 | 7 | ||||
| 28 | 17,8 | 2,5 | 5 | G650 | 7 | ||||
| 29 | 3,6 | 0,7 | 5 | G650 | 7 | ||||
| 49 | 20,5 | 4,3 | 5 | G650 | 7 | ||||
| TSS | 0,1 | 0 | 5 | 777 | 89 | 5 | 100% | G282 | 8 |
| 34 | 50,4 | 6,3 | 5 | 101 | 62 | 5 | 13% | G282 | 8 |
| 38 | 26,7 | 6,1 | 5 | 301 | 51 | 5 | 39% | G282 | 8 |
| 49 | 38,6 | 8,0 | 5 | 247 | 82 | 5 | 32% | G282 | 8 |
| TSS | 0,1 | 0,1 | 5 | 812 | 33 | 5 | 100% | G282 | 9 |
| 7 | 46,1 | 6,8 | 5 | 271 | 73 | 5 | 33% | G282 | 9 |
| 34 | 32,4 | 5,4 | 5 | 367 | 97 | 5 | 45% | G282 | 9 |
| 39 | 36,5 | 7,3 | 5 | 335 | 99 | 5 | 41% | G282 | 9 |
| 40 | 44,7 | 8,1 | 5 | 251 | 61 | 5 | 31% | G282 | 9 |
| 41 | 28,8 | 15,9 | 5 | 393 | 190 | 5 | 48% | G282 | 9 |
| 42 | 21,6 | 7,3 | 5 | 473 | 122 | 5 | 58% | G282 | 9 |
| 49 | 15,8 | 6,6 | 5 | 602 | 60 | 5 | 74% | G282 | 9 |
| 49 | 30,7 | 6,7 | 5 | 527 | 145 | 5 | 65% | G282 | 9 |
| 114 | 0,8 | 1,1 | 5 | 637 | 49 | 5 | 78% | G282 | 9 |
| TSS | 0,1 | 0 | 5 | 777 | 89 | 5 | 100% | G282 | 10 |
| 34 | 50,4 | 6,3 | 5 | 101 | 62 | 5 | 13% | G282 | 10 |
| 38 | 26,7 | 6,1 | 5 | 301 | 51 | 5 | 39% | G282 | 10 |
| 49 | 38,6 | 8,0 | 5 | 247 | 82 | 5 | 32% | G282 | 10 |
| 49 | 30,4 | 5,1 | 5 | 311 | 76 | 5 | 38% | G282 | 10 |
Пример 117 - доза-чувствительность редактирования в печени.
Чтобы оценить, было ли редактирование зависимым от дозы, эксперименты проводили in vivo при различных уровнях доз LNP. мРНК Cas9 Примера 115 получали в виде LNP с огРНК, нацеленной на TTR (G00282; SEQ ID NO: 1). Эти LNP были составлены при соотношении огРНК и мРНК Cas9 1:1. LNP были составлены с использованием процедуры перекрестного потока с липидными молярными композициями, как описано в табл. 4, при соотношении N/P 6,0.
Композиции LNP анализировали на средний размер частиц, полидисперсность (pdi), общее содержание РНК и эффективность инкапсуляции РНК, как описано в примере 115.
Анализ среднего размера частиц, полидисперсности (PDI), общего содержания РНК и эффективности инкапсуляции РНК показан в табл. 4.
Таблица 4 Аналитика композиции
| Номер соединения | Соотношение композиции (мол.%) | Инкапсуляция (%) | Z-средний размер (нм) | PDI | Числовой средний размер (нм) |
| 7 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 85,09 | 0,033 | 68,39 |
| 9 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 74,83 | 0,033 | 59,99 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 84,93 | 0,007 | 69,51 |
Самкам мышей CD-1 вводили i.v. при 0,1 мг/кг массы тела или 0,3 мг/кг массы тела и оценивается для редактирования в печени. Результаты показаны на фиг. 2 и в табл. 5.
- 177 046244
Таблица 5
Редактирование TTR печени и уровни TTR в сыворотке в зависимости от дозы
| Номер соединения | Доза (мг/кг) | Средний % делеции | SD | N |
| TSS | п/а | 0,4 | 0,1 | 5 |
| 7 | 0,1 | 49,1 | 8,9 | 5 |
| 7 | о,з | 69,4 | 0,8 | 5 |
| 9 | 0,1 | 50,6 | 6,5 | 5 |
| 9 | о,з | 64,5 | 3,8 | 5 |
| 49 | 0,1 | 26,8 | 5,7 | 5 |
| 49 | о,з | 60,6 | 5,9 | 5 |
Пример 118.
Для оценки масштабируемости дозирования эксперименты доза-ответ были проведены in vivo. мРНК Cas9 примера 115 получали в виде LNP с гРНК, нацеленной на TTR (G00282; SEQ ID NO: 1). Эти LNP были составлены, получены и проанализированы, как описано в примере 115, с использованием соотношения огРНК и мРНК Cas9 1:1 мас./мас. Компонентный состав этих LNP описан в табл. 6.
Таблица 6
Аналитика композиции
| Номер соединения | Соотношение композиции (мол.%) | Инкапсуляция (%) | Z-средний размер (нм) | PDI | Числовой средний размер (нм) |
| Соединение 5 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 76,02 | 0,009 | 62,64 |
| Соединение 34 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 86,45 | 0,015 | 71,97 |
| Соединение 49 | 50/9/38/3 | 99 | 83,63 | 0,011 | 69,75 |
Самкам мышей CD-1 вводили i.v. при 0,1 мг/кг массы тела или 0,3 мг/кг массы тела и оценивается для редактирования в печени. Результаты показаны на фиг. 3А, фиг. 3В и в табл. 7.
Таблица 7 Редактирование и уровни TTR в сыворотке
| Соединени е Число | Доза (мг/кг) | Редактирование | Сыворотка TTR | |||||
| Средни й % делеции | SD | N | Сыворотка TTR (мкг/мл) | SD | N | % TSS | ||
| TSS | TSS | 0,1 | 0,0 | 5 | 818 | 118 | 5 | 100% |
| 5 | 0,1 | 26,1 | 2,2 | 5 | 549 | 33 | 5 | 67% |
| 5 | 0,3 | 52,5 | 5,1 | 5 | 233 | 100 | 5 | 28% |
| 34 | 0,1 | 54,9 | 4,6 | 4 | 170 | 55 | 4 | 21% |
| 34 | 0,3 | 68,3 | 1,5 | 5 | 45 | 12 | 5 | 5% |
| 49 | 0,1 | 50,0 | И,5 | 5 | 254 | 107 | 4 | 31% |
| 49 | 0,3 | 67,7 | 2,5 | 5 | 40 | 13 | 3 | 5% |
Пример 119 - оценка эффективности доставки липидов путем редактирования in vivo.
Авторы изобретения оценили эффективность редактирования in vivo для материалов, поставляемых с составами с переменной длиной хвоста, в экспериментах по редактированию in vivo. LNP были составлены, как описано выше, с G502 (SEQ ID NO: 4), который нацелен на ген TTR мыши, который использовали для измерения редактирования. Составы содержали соотношение огРНК к мРНК Cas9 1:2. Характеристики конечных LNP показаны в табл. 8. Значения pKa ионизируемых липидов были измерены и показаны в табл. 1.
В эксперименте 4 тестировали ряд соединений на основе соединения 7, которые различаются включением С5-12 алкила в положение R3 формулы (1А), как показано на фиг. 4А. Как показано в табл. 9 и на фиг. 4В и 4С, все пять испытанных соединений оказались эффективными для редактирования in vivo.
В эксперименте 8 тестировали ряд соединений на основе соединения 9, которые различаются включением С5-12 алкила в положение R3 формулы (1А), как показано на фиг. 5А. В эксперименте 2 тестировалось соединение 287 этой серии, которое включает С4-алкил в R3-положении. Как показано в табл. 9 и на фиг. 5В и 5С, все соединения в этой серии были эффективны для редактирования in vivo.
- 178 046244
В эксперименте 3 тестировали ряд соединений на основе соединения 46, которые различаются включением С5-8 алкила в положение R3 формулы (1А), как показано на фиг. 6А. Соединение 46 включает С12-алкил в положении R3, и были протестированы соединения с различной длиной хвоста. Как показано в табл. 9 и на фиг. 6В и 6С, соединения с R3 группами C5 (соединение 72), C6 (соединение 50), С7 (соединение 76) и C8 (соединение 51) были эффективны для редактирования in vivo.
В эксперименте 7 тестировали ряд соединений на основе соединения 5, которые различаются включением ^-^-алкила в положение R3 формулы (1А), как показано на фиг. 7А. В эксперименте 2 тестировалось соединение 66 этой серии, которое включает С4-алкил в положении R3. Соединение 5 включает С12-алкил в положении R3, и в примерах 116 и 118 было показано, что оно эффективно для редактирования in vivo. Как показано в табл. 9 и на фиг. 7В и 7С, все дополнительные соединения, испытанные в этой серии, были эффективны для редактирования in vivo.
В эксперименте 1 тестировали серию соединений на основе соединения 34, которые изменяются в положениях X1 и Y1 формулы (1А), как показано на фиг. 8А. Соединение 52 и соединение 34 имеют общие дилинолевые группы в положении Y1 и варьируются включением C0-1 алкиленовых групп в положение X1. Соединение 53, соединение 54 и соединение 55 имеют общие триольные группы в положении Y1 и варьируются включением С0-2 алкиленовых групп в положение X1. Соединение 56, соединение 57 и соединение 58 имеют общие группы из 20 атомов в положении Y1 и варьируются включением C0-1 алкиленовых групп в положение X1. Соединение 59, соединение 60 и соединение 61 имеют общую группу из 21 атома в положении Y1 и варьируются включением С0-2 алкиленовых групп в положение X1. Соединение 62, соединение 63 и соединение 64 имеют общие гетерогенные линолевые и 21 атомные группы в положении Y1 и варьируются включением С0-2 алкиленовых групп в положение X1. Как показано в табл. 9 и на фиг. 8В и 8С, все протестированные соединения были эффективны для редактирования in vivo.
В эксперименте 5 были протестированы серии соединений на основе соединения 50, которые изменяются в положениях X2 формулы (1А), как показано на фиг. 9А. Как показано в табл. 9 и на фиг. 9В и 9С, все протестированные соединения были эффективны для редактирования in vivo при дозе 0,1 мг/кг.
В эксперименте 6 была протестирована серия соединений на основе соединения 34, как показано на фиг. 10А. Соединение 86 и соединение 99 отличаются от соединения 34 в положении X1 формулы (1А). Соединение 103 отличается от соединения 34 в положении R3 формулы (1А). Соединение 87 и соединение 88 представляют собой R- и S-этантиомеры при атоме углерода между положениями R3 и X1 рацемического соединения 34. Данные представлены в табл. 9 и на фиг. 10В и 10С. Все соединения в этой серии, испытанные на мышах, были эффективны для редактирования in vivo.
В эксперименте 9 была протестирована серия соединений на основе соединения 50, как показано на фиг. 11А. Соединение 90 и соединение 89 представляют собой R- и S-энантиомеры при атоме углерода между положениями R3 и X1 рацемического соединения 50. Соединение 100 и соединение 107 отличаются от соединения 50 и позиций R3 и X1. Соединение 105, соединение 106 и соединение 108 отличаются от соединения 50 в положении R3. Данные представлены в табл. 9 и на фиг. 11В и 11С. Все соединения в этой серии, испытанные на мышах, были эффективны для редактирования in vivo.
- 179 046244
Таблица 8
Аналитика композиции
| Соединение № | Композиция соотношение (мол. %) | Инкапсуляция (%) | Z-средний размер (нм) | PDI | Числовой средний размер (нм) | Эксп. |
| 49 | 50/9/38/3 | 98% | 87,92 | 0,05 | 69,84 | 1 |
| 1 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 68,63 | 0,04 | 54,84 | 1 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 93,66 | 0,02 | 76,32 | 1 |
| 52 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 90,75 | 0,03 | 74,35 | 1 |
| 53 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 92,99 | 0,05 | 75,76 | 1 |
| 54 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 94,16 | 0,04 | 75,05 | 1 |
| 55 | 50/10/38,5/1,5 | 97% | 117,30 | 0,02 | 99,29 | 1 |
| 56 | 50/10/38,5/1,5 | 96% | 112,50 | 0,03 | 91,81 | 1 |
| 57 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 100,40 | 0,02 | 83,73 | 1 |
| 59 | 50/10/38,5/1,5 | 97% | 109,90 | 0,03 | 88,36 | 1 |
| 60 | 50/10/38,5/1,5 | 97% | 103,40 | 0,07 | 79,57 | 1 |
| 61 | 50/10/38,5/1,5 | 97% | 102,00 | 0,06 | 79,7 | 1 |
| 62 | 50/10/38,5/1,5 | 97% | 106,40 | 0,04 | 87,26 | 1 |
| 63 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 106,00 | 0,04 | 82,18 | 1 |
| 64 | 50/10/38,5/1,5 | 97% | 106,40 | 0,02 | 86,19 | 1 |
| 49 | 50/9/39,5/3 | 98% | 88,36 | 0,014 | 73,13 | 2 |
| 44 | 50/9/39,5/1,5 | 99% | 97,65 | 0,034 | 78,34 | 2 |
| 45 | 50/9/39,5/1,5 | 99% | 102,70 | 0,021 | 85,54 | 2 |
| 67 | 50/9/39,5/1,5 | 99% | 102,20 | 0,043 | 82,14 | 2 |
| 68 | 50/9/39,5/1,5 | 99% | 122,30 | 0,051 | 100,4 | 2 |
| 49 | 50/9/38/3 | 93 | 77,07 | 0,03 | 63,19 | 3 |
| 50 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 94,33 | 0,02 | 76,57 | 3 |
| 51 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 96,78 | 0,02 | 80,57 | 3 |
| 72 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 106,80 | 0,02 | 88,38 | 3 |
| 76 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 94,32 | 0,01 | 78,11 | 3 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 81,83 | 0,026 | 66,26 | 4 |
| 7 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 87,61 | 0,002 | 73,07 | 4 |
| 39 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 89,83 | 0,015 | 73,52 | 4 |
| 40 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 101,10 | 0,027 | 81,51 | 4 |
| 69 | 50/10/38,5/1,5 | 96 | 108,90 | 0,017 | 88,76 | 4 |
| 73 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 95,81 | 0,029 | 76,59 | 4 |
| 49 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 83,00 | 0,03 | 65 | 5 |
| 50 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 103,00 | 0,06 | 77 | 5 |
| 77 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 104,00 | 0,08 | 78 | 5 |
- 180 046244
| 78 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 91,00 | 0,13 | 59 | 5 |
| 79 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 75,00 | 0,09 | 55 | 5 |
| 84 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 91,00 | 0,03 | 75 | 5 |
| 49 | 50/9/38/3 | 99% | 90,00 | 0,02 | 74 | 6 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 89,00 | 0,03 | 73 | 6 |
| 86 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 87,00 | 0,04 | 68 | 6 |
| 99 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 79,00 | 0,03 | 64 | 6 |
| 103 | 50/10/38,5/1,5 | 91% | 102,00 | 0,01 | 82 | 6 |
| 87 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 83,00 | 0,06 | 63 | 6 |
| 88 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 88,00 | 0,02 | 73 | 6 |
| 49 | 50/9/38/3 | 93 | 77,07 | 0,026 | 63,19 | 7 |
| 66 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 79,79 | 0,035 | 65,07 | 7 |
| 36 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 75,9 | 0,058 | 58,34 | 7 |
| 75 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 89,78 | 0,02 | 73,46 | 7 |
| 45 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 95,26 | 0,012 | 77,92 | 7 |
| 71 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 104,5 | 0,035 | 86,63 | 7 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98% | 84,47 | 0,026 | 69,01 | 8 |
| 9 | 50/10/38,5/1,5 | 98% | 64,83 | 0,074 | 48,82 | 8 |
| 65 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 69,67 | 0,056 | 52,04 | 8 |
| 35 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 81,51 | 0,068 | 62,82 | 8 |
| 74 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 92,14 | 0,024 | 74,58 | 8 |
| 44 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 104,3 | 0,034 | 85,76 | 8 |
| 70 | 50/10/38,5/1,5 | 99% | 124,2 | 0,018 | 102 | 8 |
| 49 | 50/9/38/3 | 98 | 87 | 0,04 | 70 | 9 |
| 50 | 50/10/38,5/1,5 | 97 | 98 | 0,04 | 78 | 9 |
| 90 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 99 | 0,02 | 81 | 9 |
| 89 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 88 | 0,01 | 73 | 9 |
| 100 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 102 | 0,05 | 83 | 9 |
| 105 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 80 | 0,02 | 64 | 9 |
| 106 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 91 | 0,01 | 74 | 9 |
| 107 | 50/10/38,5/1,5 | 98 | 89 | 0,03 | 72 | 9 |
| 108 | 50/10/38,5/1,5 | 99 | 89 | 0,03 | 73 | 9 |
| 49 | 50/9/38/3 | 0,98 | 90 | 0,04 | 75 | 10 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 95 | 0,03 | 77 | 10 |
| 91 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 97 | 0,01 | 82 | 10 |
| 92 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 67 | 0,06 | 51 | 10 |
| 93 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 103 | 0,01 | 86 | 10 |
| 94 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 70 | 0,06 | 53 | 10 |
| 95 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 105 | 0,01 | 88 | 10 |
| 51 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 98 | 0,02 | 82 | 10 |
| 96 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 89 | 0,03 | 73 | 10 |
| 97 | 50/10/38,5/1,5 | 0,98 | 92 | 0,03 | 75 | 10 |
- 181 046244
Табл. 9 показывает процент редактирования в печени мышей, измеренный NGS.
Таблица 9
Эффективность редактирования в печени мышей, обеспечивающая% образования делеции для экспериментов с G502 и уровнем TTR в сыворотке
| Редактирование | Сыворотка TTR | ||||||||
| Соед. No. | Доза (мг/кг) | % Редактирования | SD | N | Сыворотк a TTR (мкг/мл) | SD | N | % TSS | Эксп. |
| TSS | п/а | од | 0,00 | 5 | 1076,77 | 368,43 | 5 | 100,00 | 1 |
| 49 | ОД | 37,58 | 10,65 | 5 | 501,07 | 107,20 | 5 | 46,53 | 1 |
| 1 | ОД | 28,82 | 9,24 | 5 | 522,07 | 212,60 | 5 | 48,49 | 1 |
| 34 | од | 64,95 | 4,74 | 5 | 101,04 | 45,14 | 5 | 9,38 | 1 |
| 52 | од | 60,14 | 8,13 | 5 | 186,42 | 92,64 | 5 | 17,31 | 1 |
| 53 | од | 61,50 | 4,89 | 5 | 150,43 | 53,66 | 5 | 13,97 | 1 |
| 54 | од | 57,22 | 5,81 | 5 | 197,28 | 90,55 | 5 | 18,32 | 1 |
| 55 | од | 15,86 | 7,12 | 5 | 783,74 | 94,62 | 5 | 72,79 | 1 |
| 56 | од | 16,94 | 2,41 | 5 | 750,53 | 94,88 | 5 | 69,70 | 1 |
| 57 | од | 50,76 | 11,63 | 5 | 264,64 | 112,65 | 5 | 24,58 | 1 |
| 59 | од | 10,28 | 6,63 | 5 | 868,93 | 145,85 | 5 | 80,70 | 1 |
| 60 | од | 23,88 | 12,59 | 5 | 651,52 | 199,20 | 5 | 60,51 | 1 |
| 61 | од | 9,40 | 1,17 | 5 | 877,31 | 93,63 | 5 | 81,48 | 1 |
| 62 | од | 23,74 | 9,69 | 5 | 623,37 | 138,65 | 5 | 57,89 | 1 |
| 63 | од | 6,53 | 2,41 | 5 | 902,96 | 96,13 | 5 | 83,86 | 1 |
| 64 | од | 5,84 | 1,04 | 5 | 919,42 | 90,82 | 5 | 85,39 | 1 |
| TSS | п/а | 0,24 | 0,05 | 5 | 1232,25 | 259,96 | 5 | 100,00 | 2 |
| 49 | 0,03 | 6,5 | 0,39 | 5 | 1128,34 | 197,52 | 5 | 91,56 | 2 |
| 4 | 0,03 | 8,6 | 1,00 | 5 | 900,69 | 291,61 | 5 | 73,09 | 2 |
- 182 046244
| 45 | 0,03 | 5,16 | 1,38 | 5 | 965,93 | 156,29 | 5 | 78,39 | 2 |
| 67 | 0,03 | 5,94 | 1,63 | 5 | 806 | 219,39 | 5 | 65,41 | 2 |
| 68 | 0,03 | 6,48 | 0,05 | 5 | 845,04 | 259,96 | 5 | 68,58 | 2 |
| TSS | n/a | 0,18 | 0,04 | 5 | 1161,07 | 311,28 | 5 | 100,00 | 3 |
| 49 | 0,03 | 5,02 | 2,30 | 5 | 960,376 | 129,68 | 5 | 82,71 | 3 |
| 49 | 0,1 | 30,66 | 10,27 | 5 | 544,37 | 183,72 | 5 | 46,89 | 3 |
| 50 | 0,03 | 37,54 | 24,51 | 5 | 528,43 | 165,52 | 5 | 45,51 | 3 |
| 50 | 0,1 | 65,56 | 3,59 | 5 | 160,42 | 44,32 | 5 | 13,82 | 3 |
| 51 | 0,03 | 38,8 | 5,98 | 5 | 447,172 | 44,70 | 5 | 38,51 | 3 |
| 51 | 0,1 | 65,62 | 4,90 | 5 | 108,258 | 49,36 | 5 | 9,32 | 3 |
| 72 | 0,03 | 27,72 | 10,69 | 5 | 777 | 191,77 | 5 | 66,92 | 3 |
| 72 | 0,1 | 53,06 | 8,34 | 5 | 306,856 | 39,10 | 5 | 26,43 | 3 |
| 76 | 0,03 | 27,32 | 14,64 | 5 | 939,50 | 171,63 | 5 | 69,72 | 3 |
| 76 | 0,1 | 63,08 | 6,07 | 5 | 148,554 | 67,25 | 5 | 12,79 | 3 |
| TSS | n/a | 0,24 | 0,05 | 5 | 690,45 | 84,84 | 5 | 100% | 4 |
| 49 | 0,03 | 28,78 | 9,67 | 5 | 464,17 | 74,74 | 5 | 67% | 4 |
| 49 | 0,1 | 56,82 | 4,70 | 5 | 154,53 | 60,30 | 5 | 22% | 4 |
| 7 | 0,03 | 38,23 | 13,85 | 4 | 397,92 | 52,45 | 4 | 58% | 4 |
| 7 | 0,1 | 66,72 | 5,63 | 5 | 66,59 | 45,44 | 5 | 10% | 4 |
| 69 | 0,03 | 36,68 | 6,47 | 5 | 370,88 | 69,44 | 5 | 54% | 4 |
| 69 | 0,1 | 67,38 | 5,13 | 4 | 85,93 | 27,44 | 4 | 12% | 4 |
| 40 | 0,03 | 34,53 | 5,48 | 4 | 529,70 | 128,79 | 4 | 77% | 4 |
| 40 | 0,1 | 69,44 | 2,12 | 5 | 64,65 | 21,93 | 5 | 9% | 4 |
| 73 | 0,03 | 57,32 | 7,29 | 5 | 173,78 | 81,14 | 5 | 25% | 4 |
| 73 | 0,1 | 70,76 | 2,03 | 5 | 30,62 | 14,97 | 5 | 4% | 4 |
| 39 | 0,03 | 44,74 | 14,44 | 5 | 286,24 | 100,55 | 5 | 41% | 4 |
| 39 | 0,1 | 66,66 | 4,44 | 5 | 39,85 | 20,49 | 5 | 6% | 4 |
| TSS | n/a | 0,16 | 0,05 | 5 | 809,30 | 145,45 | 5 | 100 | 5 |
| 49 | 0,03 | 16,98 | 10,77 | 5 | 592,00 | 150,58 | 5 | 73,1 | 5 |
| 49 | 0,1 | 40,32 | 11,31 | 5 | 379,70 | 106,18 | 5 | 46,9 | 5 |
| 77 | 0,03 | 5,18 | 0,79 | 5 | 552,80 | 84,36 | 5 | 68,3 | 5 |
| 77 | 0,1 | 10,36 | 3,05 | 5 | 652,20 | 179,50 | 5 | 80,6 | 5 |
| 78 | 0,03 | 7 | 2,04 | 5 | 807,50 | 97,21 | 5 | 99,8 | 5 |
| 78 | 0,1 | 24,2 | 7,13 | 5 | 537,90 | 74,96 | 5 | 66,5 | 5 |
- 183 046244
| 79 | 0,03 | 0,58 | 0,19 | 5 | 703,50 | 195,81 | 5 | 86,9 | 5 |
| 79 | ОД | 3,34 | 1,51 | 5 | 812,20 | 203,80 | 5 | 100,4 | 5 |
| 84 | 0,03 | 11,24 | 3,37 | 5 | 649,70 | 161,07 | 5 | 80,3 | 5 |
| 84 | 0,1 | 18,86 | 9,21 | 5 | 592,10 | 98,42 | 5 | 73,2 | 5 |
| 50 | 0,03 | 23,92 | 3,08 | 5 | 567,70 | 202,13 | 5 | 70,1 | 5 |
| 50 | 0,1 | 49,6 | 14,63 | 5 | 241,90 | 104,88 | 5 | 29,9 | 5 |
| TSS | n/a | 0,1 | 0,07 | 5 | 964,34 | 179,38 | 5 | 100,00 | 6 |
| 49 | 0,03 | 3,28 | 1,05 | 5 | 969,91 | 131,91 | 5 | 100,57 | 6 |
| 49 | 0,1 | 26,88 | 6,84 | 5 | 609,23 | 222,39 | 5 | 63,17 | 6 |
| 34 | 0,03 | 19,66 | 3,87 | 5 | 820,73 | 196,33 | 5 | 85,10 | 6 |
| 34 | 0,1 | 50,82 | 2,43 | 5 | 306,74 | 84,07 | 5 | 31,80 | 6 |
| 86 | 0,03 | 9,62 | 5,42 | 5 | 897,846 | 166,96 | 5 | 93,10 | 6 |
| 86 | 0,1 | 50,7 | 6,45 | 5 | 277,696 | 38,44 | 5 | 28,80 | 6 |
| 99 | 0,03 | 10,2 | 4,30 | 5 | 891,268 | 228,52 | 5 | 92,42 | 6 |
| 99 | 0,1 | 37,12 | 6,54 | 5 | 413,382 | 113,60 | 5 | 42,87 | 6 |
| 103 | 0,03 | 20,16 | 7,23 | 5 | 696,58 | 103,62 | 5 | 72,23 | 6 |
| 103 | 0,1 | 51,98 | 7,53 | 5 | 280,156 | 106,56 | 5 | 29,05 | 6 |
| 87 | 0,03 | 16,08 | 4,23 | 5 | 773,57 | 157,56 | 5 | 80,21 | 6 |
| 87 | 0,1 | 51,78 | 6,51 | 5 | 321,386 | 85,50 | 5 | 33,33 | 6 |
| 88 | 0,03 | 20,66 | 9,33 | 5 | 723,87 | 105,48 | 5 | 75,06 | 6 |
| 88 | 0,1 | 57,32 | 7,41 | 5 | 322,566 | 132,08 | 5 | 33,45 | 6 |
| TSS | n/a | 0,16 | 0,05 | 5 | 1648,15 | 261,09 | 5 | 100 | 7 |
| 49 | 0,03 | 4,08 | 1,33 | 5 | 1459,99 | 292,22 | 5 | 88,584 | 7 |
| 49 | 0,1 | 27,5 | 8,04 | 5 | 860,90 | 343,62 | 5 | 52,234 | 7 |
| 66 | 0,03 | 27,64 | 8,25 | 5 | 901,24 | 307,33 | 5 | 54,682 | 7 |
| 66 | 0,1 | 55,26 | 4,08 | 5 | 324,25 | 115,30 | 5 | 19,674 | 7 |
| 36 | 0,03 | 9,96 | 0,82 | 5 | 1249,04 | 115,28 | 5 | 75,785 | 7 |
| 36 | 0,1 | 35,92 | 2,78 | 5 | 722,28 | 85,81 | 5 | 43,824 | 7 |
| 75 | 0,03 | 29,6 | 6,95 | 5 | 743,29 | 58,71 | 5 | 45,098 | 7 |
| 75 | 0,1 | 57,22 | 7,58 | 5 | 197,72 | 99,45 | 5 | 11,996 | 7 |
| 45 | 0,03 | 31,1 | 4,96 | 5 | 715,87 | 97,41 | 5 | 43,435 | 7 |
| 45 | 0,1 | 60,3 | 6,80 | 5 | 166,30 | 55,94 | 5 | 10,09 | 7 |
| 71 | 0,03 | 20,94 | 7,55 | 5 | 781,63 | 115,04 | 5 | 47,425 | 7 |
| 71 | 0,1 | 55,78 | 2,10 | 5 | 248,13 | 55,94 | 5 | 15,055 | 7 |
- 184 046244
| TSS | п/а | 0,1 | 0,00 | 5 | 748,33 | 130,95 | 5 | 100,00 | 8 |
| 49 | 0,03 | 7,62 | 6,50 | 5 | 735,41 | 83,84 | 5 | 98,27 | 8 |
| 49 | 0,1 | 37,46 | 4,17 | 5 | 369,43 | 45,54 | 5 | 49,37 | 8 |
| 9 | 0,03 | 0,84 | 0,46 | 5 | 853,25 | 107,87 | 5 | 114,02 | 8 |
| 9 | 0,1 | 3,46 | 1,09 | 5 | 772,22 | 172,17 | 5 | 103,19 | 8 |
| 65 | 0,03 | 1,32 | 0,31 | 5 | 896,77 | 143,42 | 5 | 119,84 | 8 |
| 65 | 0,1 | 10,12 | 9,68 | 5 | 742,52 | 151,70 | 5 | 99,22 | 8 |
| 35 | 0,03 | 4,46 | 0,70 | 5 | 780,47 | 74,29 | 5 | 104,30 | 8 |
| 35 | 0,1 | 17,94 | 4,99 | 5 | 741,82 | 79,87 | 5 | 99,13 | 8 |
| 74 | 0,03 | 4,36 | 1,25 | 5 | 752,38 | 120,29 | 5 | 100,54 | 8 |
| 74 | 0,1 | 11,12 | 1,63 | 5 | 823,58 | 126,35 | 5 | 110,06 | 8 |
| 44 | 0,03 | 4,76 | 1,Ю | 5 | 897,76 | 51,74 | 5 | 119,97 | 8 |
| 44 | 0,1 | 17,97 | 7,30 | 5 | 589,60 | 52,34 | 5 | 78,79 | 8 |
| 70 | 0,03 | 4,84 | 1,77 | 5 | 945,08 | 81,30 | 5 | 126,29 | 8 |
| 70 | 0,1 | 8,04 | 1,17 | 5 | 654,70 | 98,42 | 5 | 87,49 | 8 |
| TSS | п/а | 0,1 | 0,00 | 5 | 964,50 | 154,71 | 5 | 100 | 9 |
| 49 | 0,03 | 20,54 | 12,51 | 5 | 677,31 | 194,76 | 5 | 70,22 | 9 |
| 50 | 0,03 | 21,74 | 8,62 | 5 | 687,70 | 218,46 | 5 | 71,3 | 9 |
| 90 | 0,03 | 26,02 | 5,64 | 5 | 578,26 | 188,44 | 5 | 59,95 | 9 |
| 89 | 0,03 | 31,02 | 2,76 | 5 | 469,27 | 63,53 | 5 | 48,65 | 9 |
| 100 | 0,03 | 31,3 | 6,03 | 5 | 450,19 | 47,05 | 5 | 46,68 | 9 |
| 105 | 0,03 | 33,86 | 8,75 | 5 | 462,70 | 120,85 | 5 | 47,97 | 9 |
| 106 | 0,03 | 11,58 | 3,69 | 5 | 795,41 | 161,67 | 5 | 82,47 | 9 |
| 106 | 0,03 | 1,98 | 1,16 | 5 | 855,49 | 158,34 | 5 | 88,7 | 9 |
| 107 | 0,03 | 26,98 | 4,62 | 5 | 564,55 | 102,79 | 5 | 58,53 | 9 |
| 108 | 0,03 | 27 | 4,04 | 5 | 550,89 | 102,92 | 5 | 57,12 | 9 |
| TSS | п/а | 0,14 | 0,05 | 5 | 767,76 | 98,15 | 5 | 100% | 10 |
| 49 | 0,03 | 10,33 | 2,15 | 4 | 704,2 | 126,26 | 4 | 92% | 10 |
| 34 | 0,03 | 37,44 | 10,7 | 5 | 419,07 | 133,1 | 5 | 55% | 10 |
| 91 | 0,03 | 22,7 | 6,77 | 5 | 681,26 | 63,6 | 5 | 89% | 10 |
| 92 | 0,03 | 2,38 | 0,79 | 5 | 923,39 | 226,76 | 5 | 120% | 10 |
| 93 | 0,03 | 12,68 | 1,94 | 5 | 765,38 | 95,14 | 5 | 100% | 10 |
| 94 | 0,03 | 1,82 | 1,29 | 5 | 838,22 | 110,3 | 5 | 109% | 10 |
| 95 | 0,03 | 37,96 | 13,54 | 5 | 589,77 | 283,04 | 5 | 77% | 10 |
| 51 | 0,03 | 30,86 | 4,36 | 5 | 619,84 | 114,91 | 5 | 81% | 10 |
| 96 | 0,03 | 28,04 | 3,67 | 5 | 540,39 | 120 | 5 | 70% | 10 |
| 97 | 0,03 | 28,26 | 3,88 | 5 | 603,03 | 177,26 | 5 | 79% | 10 |
Пример 120. Редактирование эффективности и переносимости липидов in vivo.
Чтобы оценить липидную эффективность, эксперименты доза-ответ проводили in vivo. мРНК Cas9 Примера 115 получали в виде LNP с гРНК, нацеленной на TTR (G00534; SEQ ID NO: 5). Эти LNP были составлены, получены и проанализированы, как описано в Примере 115, с использованием соотношения огРНК и Cas9 мРНК 1:2 мас./мас.
Компонентный состав этих LNP описан в табл. 10.
- 185 046244
Таблица 10 Аналитика композиции
| Соединение Число | Композиция | Инкапсуляция (%) | Z-Средний Размер (нм) | PDI | Числовой средний размер (нм) |
| 49 | 50/9/38/3 | 97 | 87,84 | 0,028 | 69,85 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 93 | 96,43 | 0,052 | 76,08 |
| 45 | 50/10/38,5/1,5 | 95 | 101,00 | 0,052 | 83,48 |
| 50 | 50/10/38,5/1,5 | 87 | 98,55 | 0,050 | 79,18 |
Для эффективности самкам крыс Sprague Dawley вводили в/в при 0,1 мг/кг или 0,03 мг/кг. Через 6-7 дней после введения дозы крыс умерщвляли удушением СО2. Кровь собирали в пробирки с сепаратором сыворотки. Биопсия печени обрабатывалась на гДНК и оценивалась на предмет редактирования методами NGS, описанными в примере 115. Результаты представлены в табл. 11 и на фиг. 12А и 12В. Для обеспечения переносимости самкам крыс Sprague Dawley вводили дозу 6 мг/кг, и через 24 ч после введения дозы животных умерщвляли удушением СО2. Кровь собирали в пробирки с сепаратором сыворотки и отправляли внешнему CRO для количественного определения ферментов печени с помощью панели ферментов печени. Результаты представлены в табл. 12.
Таблица 11
Эффективность редактирования у крыс, обеспечивающая% образования делеции для экспериментов с _________________G534 и уровни TTR в сыворотке__________________
| Соед. No. | Доза (мг/кг) | Редактирование | Сыворотка TTR | Гидов ые (гРНК) | Эксп | |||||
| % Редакти рования | SD | N | Сыворот ка TTR (мкг/мл) | SD | N | % TSS | ||||
| TSS | 0,1 | 0,00 | 5 | 845,3 | 70,69 | 5 | 100% | G534 | 1 | |
| 49 | 0,03 | 4,76 | 1,49 | 5 | 790,9 | 82,94 | 5 | 94% | G534 | 1 |
| 49 | 0,1 | 25,62 | 14,1 8 | 5 | 669,5 | 181,1 3 | 5 | 79% | G534 | 1 |
| 34 | 0,03 | 21,22 | 6,54 | 5 | 514,2 | 119,3 6 | 5 | 61% | G534 | 1 |
| 34 | 0,1 | 53,9 | 7,17 | 5 | 188,9 | 112,6 7 | 5 | 22% | G534 | 1 |
| 45 | 0,03 | 10,76 | 8,80 | 5 | 910,4 | 73,77 | 5 | 110% | G534 | 1 |
| 45 | 0,1 | 48,16 | 2,90 | 5 | 270,7 | 109,7 1 | 5 | 32% | G534 | 1 |
| 50 | 0,03 | 26,9 | 9,04 | 5 | 581,7 | 76,89 | 5 | 69% | G534 | 1 |
| 50 | 0,1 | 62,6 | 1,04 | 5 | 116,6 | 24,78 | 5 | 14% | G534 | 1 |
Таблица 12
Результаты панели ферментов печени крыс
| Соединени е № | Дозы (мг/кг) | ALT (U/L) | AST (U/L) | Креатинкиназа (U/L) | GGT (U/L) | ALP (U/L) | Билируби h Общий (мг/дл) |
| TSS | 47 | 72 | 132,2 | 0 | 318,4 | ο,ι | |
| 49 | 6 | 408,5 | 534,8 | 157,5 | 2 | 784,3 | 0,6 |
| 34 | 6 | 179,6 | 349,6 | 184,8 | 3,4 | 542 | 0,2 |
| 45 | 6 | 163,2 | 681 | 1103 | 2,4 | 439,8 | о,з |
| 50 | 6 | 250,8 | 820,8 | 272 | 11 | 508,6 | 0,4 |
Пример 121 - редактирование in vitro с помощью соединений алкильного ряда R3.
Ряд соединений на основе соединения 46, которые различаются включением С4-12 алкила в положение R3 формулы (1А) (как показано на фиг. 13А), тестировали для редактирования in vitro. Клеточную линию гепатоцеллюлярной карциномы человека HUH7 (Японская коллекция исследовательского банка
- 186 046244 клеток биоресурсов, каталожный JCRB0403) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицина. Клетки высевали при плотности 20000 клеток/лунку в 96-луночный планшет за 24 ч до трансфекции (~ 80% конфлюэнтности во время трансфекции). LNP были составлены при соотношении огРНК и мРНК Cas9 1:2 мас./мас., используя процедуру перекрестного потока с липидными молярными композициями, как описано в табл. 13, при соотношении N/P 6,0. Композиции LNP анализировали на средний размер частиц, полидисперсность (pdi), общее содержание РНК и эффективность инкапсуляции РНК, как описано в примере 115. Анализ среднего размера частиц, полидисперсности (PDI), общего содержания РНК и эффективности инкапсуляции РНК показан в табл. 13. LNP разводили в среде, инкубировали в течение 5 мин при 37°С и наносили пипеткой на клетки в дозе 2000 нг РНК на лунку. Каждое состояние исследовали в биологическом дубликате. Клетки собирали после трансфекции через 6 ч. Геномную ДНК экстрагировали с использованием 50 мкл/лунку раствора для экстракции ДНК BuccalAmp (Epicenter, Cat. QE09050) в соответствии с протоколом производителя. Все образцы ДНК были подвергнуты ПЦР и последующему NGS-анализу для редактирования в целевом локусе G000502, как описано выше. Как показано в табл. 14 и на фиг. 13В, все протестированные соединения были эффективны для редактирования in vitro.
Таблица 13
Аналитика композиции
| Соединени е № | Соотношение композиции (мол.%) | Z-Средний Размер [нм] | PDI | Средне е Число [нм] | %Е |
| 49 | 50/9/38/3 | 93,14 | 0,015 | 74,82 | 98 |
| 34 | 50/10/38,5/1,5 | 93,01 | 0,009 | 75,88 | 97 |
| 46 | 50/10/38,5/1,5 | 94,54 | 0,003 | 76,76 | 99 |
| 51 | 50/10/38,5/1,5 | 97,21 | 0,009 | 80 | 98 |
| 76 | 50/10/38,5/1,5 | 98,79 | 0,024 | 81,12 | 97 |
| 50 | 50/10/38,5/1,5 | 102,8 | 0,021 | 84,16 | 97 |
| 72 | 50/10/38,5/1,5 | 111,4 | 0,018 | 91,47 | 94 |
| 85 | 50/10/38,5/1,5 | 117,1 | 0,045 | 93,05 | 96 |
Таблица 14
Редактирование in vitro
| Соединение № | Редактирование | SD |
| 49 | 22,6 | 0,8 |
| 34 | 49,0 | 2,5 |
| 46 | 63,7 | 6,4 |
| 51 | 69,0 | 9,7 |
| 76 | 61,2 | 9,9 |
| 50 | 64,3 | 5,6 |
| 72 | 65,8 | 7,3 |
| 85 | 66,4 | 0,4 |
- 187 046244
Таблица последовательности
| Описание | Последовательность | SEQ ID No. |
| G00282 огРНК, нацеленная на TTR мыши | mU*mU*mA*CAGCCACGUCUACAGCAGUUUUAGAmG mCmUmAmGmAm AmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAG GCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmA mGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmG mCmU*mU*mU*mU | 11 |
| G00650 | mG*mA*mC*AAGCACCAGAAAGACCAGUUUUAGAmG | 22 |
| огРНК, нацеленная на В2М человека мРНК, кодирующая Cas9 | mCmUmAmGmAm AmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAG GCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmA mGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmG mCmU*mU*mU*mU GGGUCCCGCAGUCGGCGUCCAGCGGCUCUGCUUGUU CGUGUGUGUGUCGUUGCAGGCCUUAUUCGGAUCCGC CACCAUGGACAAGAAGUACAGCAUCGGACUGGACAU CGGAACAAACAGCGUCGGAUGGGCAGUCAUCACAGA CGAAUACAAGGUCCCGAGCAAGAAGUUCAAGGUCCU GGGAAACACAGACAGACACAGCAUCAAGAAGAACCU GAUCGGAGCACUGCUGUUCGACAGCGGAGAAACAGC AGAAGCAACAAGACUGAAGAGAACAGCAAGAAGAAG AUACACAAGAAGAAAGAACAGAAUCUGCUACCUGCA GGAAAUCUUCAGCAACGAAAUGGCAAAGGUCGACGA CAGCUUCUUCCACAGACUGGAAGAAAGCUUCCUGGU CGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGAUCUU CGGAAACAUCGUCGACGAAGUCGCAUACCACGAAAA GUACCCGACAAUCUACCACCUGAGAAAGAAGCUGGU CGACAGCACAGACAAGGCAGACCUGAGACUGAUCUA CCUGGCACUGGCACACAUGAUCAAGUUCAGAGGACA CUUCCUGAUCGAAGGAGACCUGAACCCGGACAACAG CGACGUCGACAAGCUGUUCAUCCAGCUGGUCCAGAC AUACAACCAGCUGUUCGAAGAAAACCCGAUCAACGC AAGCGGAGUCGACGCAAAGGCAAUCCUGAGCGCAAG ACUGAGCAAGAGCAGAAGACUGGAAAACCUGAUCGC ACAGCUGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACUGUUCGG AAACCUGAUCGCACUGAGCCUGGGACUGACACCGAA CUUCAAGAGCAACUUCGACCUGGCAGAAGACGCAAA GCUGCAGCUGAGCAAGGACACAUACGACGACGACCU GGACAACCUGCUGGCACAGAUCGGAGACCAGUACGC AGACCUGUUCCUGGCAGCAAAGAACCUGAGCGACGC AAUCCUGCUGAGCGACAUCCUGAGAGUCAACACAGA AAUCACAAAGGCACCGCUGAGCGCAAGCAUGAUCAA GAGAUACGACGAACACCACCAGGACCUGACACUGCU GAAGGCACUGGUCAGACAGCAGCUGCCGGAAAAGUA | 33 |
- 188 046244
| CAAGGAAAUCUUCUUCGACCAGAGCAAGAACGGAUA CGCAGGAUACAUCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGA AUUCUACAAGUUCAUCAAGCCGAUCCUGGAAAAGAU GGACGGAACAGAAGAACUGCUGGUCAAGCUGAACAG AGAAGACCUGCUGAGAAAGCAGAGAACAUUCGACAA CGGAAGCAUCCCGCACCAGAUCCACCUGGGAGAACU GCACGCAAUCCUGAGAAGACAGGAAGACUUCUACCC GUUCCUGAAGGACAACAGAGAAAAGAUCGAAAAGAU CCUGACAUUCAGAAUCCCGUACUACGUCGGACCGCU GGCAAGAGGAAACAGCAGAUUCGCAUGGAUGACAAG AAAGAGCGAAGAAACAAUCACACCGUGGAACUUCGA AGAAGUCGUCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCUU CAUCGAAAGAAUGACAAACUUCGACAAGAACCUGCC GAACGAAAAGGUCCUGCCGAAGCACAGCCUGCUGUA CGAAUACUUCACAGUCUACAACGAACUGACAAAGGU CAAGUACGUCACAGAAGGAAUGAGAAAGCCGGCAUU CCUGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAAUCGUCGACCU GCUGUUCAAGACAAACAGAAAGGUCACAGUCAAGCA GCUGAAGGAAGACUACUUCAAGAAGAUCGAAUGCUU CGACAGCGUCGAAAUCAGCGGAGUCGAAGACAGAUU CAACGCAAGCCUGGGAACAUACCACGACCUGCUGAA GAUCAUCAAGGACAAGGACUUCCUGGACAACGAAGA AAACGAAGACAUCCUGGAAGACAUCGUCCUGACACU GACACUGUUCGAAGACAGAGAAAUGAUCGAAGAAAG ACUGAAGACAUACGCACACCUGUUCGACGACAAGGU CAUGAAGCAGCUGAAGAGAAGAAGAUACACAGGAUG GGGAAGACUGAGCAGAAAGCUGAUCAACGGAAUCAG AGACAAGCAGAGCGGAAAGACAAUCCUGGACUUCCU GAAGAGCGACGGAUUCGCAAACAGAAACUUCAUGCA GCUGAUCCACGACGACAGCCUGACAUUCAAGGAAGA CAUCCAGAAGGCACAGGUCAGCGGACAGGGAGACAG CCUGCACGAACACAUCGCAAACCUGGCAGGAAGCCC GGCAAUCAAGAAGGGAAUCCUGCAGACAGUCAAGGU CGUCGACGAACUGGUCAAGGUCAUGGGAAGACACAA GCCGGAAAACAUCGUCAUCGAAAUGGCAAGAGAAAA |
- 189 046244
| CCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGA AAGAAUGAAGAGAAUCGAAGAAGGAAUCAAGGAAC UGGGAAGCCAGAUCCUGAAGGAACACCCGGUCGAAA ACACACAGCUGCAGAACGAAAAGCUGUACCUGUACU ACCUGCAGAACGGAAGAGACAUGUACGUCGACCAGG AACUGGACAUCAACAGACUGAGCGACUACGACGUCG ACCACAUCGUCCCGCAGAGCUUCCUGAAGGACGACA GCAUCGACAACAAGGUCCUGACAAGAAGCGACAAGA ACAGAGGAAAGAGCGACAACGUCCCGAGCGAAGAAG UCGUCAAGAAGAUGAAGAACUACUGGAGACAGCUGC UGAACGCAAAGCUGAUCACACAGAGAAAGUUCGACA ACCUGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACUGAGCGAAC UGGACAAGGCAGGAUUCAUCAAGAGACAGCUGGUCG AAACAAGACAGAUCACAAAGCACGUCGCACAGAUCC UGGACAGCAGAAUGAACACAAAGUACGACGAAAACG ACAAGCUGAUCAGAGAAGUCAAGGUCAUCACACUGA AGAGCAAGCUGGUCAGCGACUUCAGAAAGGACUUCC AGUUCUACAAGGUCAGAGAAAUCAACAACUACCACC ACGCACACGACGCAUACCUGAACGCAGUCGUCGGAA CAGCACUGAUCAAGAAGUACCCGAAGCUGGAAAGCG AAUUCGUCUACGGAGACUACAAGGUCUACGACGUCA GAAAGAUGAUCGCAAAGAGCGAACAGGAAAUCGGAA AGGCAACAGCAAAGUACUUCUUCUACAGCAACAUCA UGAACUUCUUCAAGACAGAAAUCACACUGGCAAACG GAGAAAUCAGAAAGAGACCGCUGAUCGAAACAAACG GAGAAACAGGAGAAAUCGUCUGGGACAAGGGAAGAG ACUUCGCAACAGUCAGAAAGGUCCUGAGCAUGCCGC AGGUCAACAUCGUCAAGAAGACAGAAGUCCAGACAG GAGGAUUCAGCAAGGAAAGCAUCCUGCCGAAGAGAA ACAGCGACAAGCUGAUCGCAAGAAAGAAGGACUGGG ACCCGAAGAAGUACGGAGGAUUCGACAGCCCGACAG UCGCAUACAGCGUCCUGGUCGUCGCAAAGGUCGAAA AGGGAAAGAGCAAGAAGCUGAAGAGCGUCAAGGAAC UGCUGGGAAUCACAAUCAUGGAAAGAAGCAGCUUCG AAAAGAACCCGAUCGACUUCCUGGAAGCAAAGGGAU |
- 190 046244
| ACAAGGAAGUCAAGAAGGACCUGAUCAUCAAGCUGC CGAAGUACAGCCUGUUCGAACUGGAAAACGGAAGAA AGAGAAUGCUGGCAAGCGCAGGAGAACUGCAGAAGG GAAACGAACUGGCACUGCCGAGCAAGUACGUCAACU UCCUGUACCUGGCAAGCCACUACGAAAAGCUGAAGG GAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCUGUUCG UCGAACAGCACAAGCACUACCUGGACGAAAUCAUCG AACAGAUCAGCGAAUUCAGCAAGAGAGUCAUCCUGG CAGACGCAAACCUGGACAAGGUCCUGAGCGCAUACA ACAAGCACAGAGACAAGCCGAUCAGAGAACAGGCAG AAAACAUCAUCCACCUGUUCACACUGACAAACCUGG GAGCACCGGCAGCAUUCAAGUACUUCGACACAACAA UCGACAGAAAGAGAUACACAAGCACAAAGGAAGUCC UGGACGCAACACUGAUCCACCAGAGCAUCACAGGAC UGUACGAAACAAGAAUCGACCUGAGCCAGCUGGGAG GAGACGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGG UCUAGCUAGCCAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCU ACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAU AGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAA AGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUA AUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUA AAAAAUGGAAAGAACCUCGAGAAAAAAAAAAAAAA ААААААААААААААААААААААААААААААААААА ААААААААААААААААААААААААААААААААААА AAAAAAAAAAAAAAAAUCUAG | ||
| G000502 огРНК, нацеленная на TTR мыши | mA*mC*mA*CAAAUACCAGUCCAGCGGUUUUAGAmG mCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAG GCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmA mGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmG mCmU*mU*mU*mU | 44 |
| G000534 огРНК, нацеленная на TTR крысы | mA*mC*mG*CAAAUAUCAGUCCAGCGGUUUUAGAmG mCmUmAmGmAmAmAmUmAmGmCAAGUUAAAAUAAG GCUAGUCCGUUAUCAmAmCmUmUmGmAmAmAmAmA mGmUmGmGmCmAmCmCmGmAmGmUmCmGmGmUmG mCmU*mU*mU*mU | 55 |
2'-О-метиловые модификации и фосфоротиоатные связи, как представлено ниже (m=2'-OMe;
*=фосфоротиоат).
Claims (33)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение формулы IA(IA) где независимо для каждого случаяX1 представляет собой С1-3 алкилен илиX2 выбирают из О, NH, NMe и связи, при условии, что, когда X2 представляет собой О, R2 вместе с атомом азота и либо R1, либо атомом углерода X3 образует 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,X3 представляет собой С2-4 алкилен,X4 представляет собой C1 алкилен или связь,X5 представляет собой C1 алкилен или связь,R1 представляет собой C1-3 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой,R2 представляет собой C1-3 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, илиR2 и R1, или R2 и атом углерода X3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,Y1 выбирают из связи, -СН=СН-, -(С=О)О- и -О(С=О)-,Y2 выбирают из -СН2-СН=СН- и С3-С4 алкилена,R3 выбирают из H, С5-7 циклоалкила, C8-C1o алкенила, и С3-18 алкила,R4 представляет собой С4-8 алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 2. Соединение по п.1, в котором соединение представляет собой соединение формулы Iгде независимо для каждого случаяX1 представляет собой С2-3 алкилен,X2 выбирают из О, NH, NMe и связи, при условии, что, когда X2 представляет собой О, R2 вместе с атомом азота и либо R1, либо атомом углерода X3 образует 4-членное, 5-членное или 6-членное кольцо,X3 представляет собой С2-4 алкилен,X4 представляет собой C1 алкилен или связь,X5 представляет собой C1 алкилен или связь,R1 представляет собой C1-2 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой,R2 представляет собой C1-2 алкил, необязательно замещенный гидроксильной группой, илиR2 и R1, или R2 и атом углерода X3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-членное или 6-членное кольцо,Y1 выбирают из -СН=СН-, -(С=О)О- и -О(С=О)-,R3 выбирают из H, С5-7 циклоалкила, и C3-18 алкила,R4 представляет собой С4-7 алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 3. Соединение по п.1 или 2, где X1 представляет собой С2 алкилен.
- 4. Соединение по п.1, где X1 представляет собой C1 алкилен.
- 5. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где X2 представляет собой NH или О.
- 6. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где X3 представляет собой С2-3 алкилен.
- 7. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R2 и атом углерода X3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-6-членное кольцо.
- 8. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R2 представляет собой C1-2 алкил.- 192 046244
- 9. Соединение по любому из пп.1-6, где R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-6-членное кольцо.
- 10. Соединение по любому из пп.1-6, где R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-членное кольцо.
- 11. Соединение по любому из пп.1-8, где R1 представляет собой C1-2 алкил.
- 12. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R3 представляет собой линейный C4-16 ал кил.
- 13. Соединение по любому из пп.1-11, где R3 представляет собой разветвленный С6-10 алкил.
- 14. Соединение по любому из пп.1-11, где R3 представляет собой С5-7 циклоалкил.
- 15. Соединение по любому из пп.1-11, где R3 представляет собой С8-10 алкенил.
- 16. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R4 представляет собой линейный С5-6 ал кил.
- 17. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где X4 представляет собой связь.
- 18. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где X5 представляет собой C1 алкилен.
- 19. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где соединение представляет собой соединение формулы (IA); и Y2-R4 представляет собой -CH2-CH=CH-R4.
- 20. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где Y1 выбирают из связи, -СН=СН- и -О(С=О)-.
- 21. Соединение поп.1, где соединение представляет собой соединение формулы II:
- 22. Соединение поп.1, где соединение представляет собой соединение формулы III
- 23. Соединение по п.1, где соединение выбирают из:- 193 046244- 194 046244- 195 046244- 196 046244- 197 046244- 198 046244- 199 046244- 200 046244- 201 046244- 202 046244- 203 046244- 204 046244- 205 046244- 206 046244- 207 046244- 208 046244- 209 046244- 210 046244- 211 046244- 212 046244- 213 046244- 214 046244или его фармацевтически приемлемой соли.
- 24. Композиция липидных наночастиц (LNP), содержащая соединение по любому из предыдущих пунктов в липидном компоненте.
- 25. Композиция LNP по п.24, отличающаяся тем, что липидный компонент дополнительно включает вспомогательный липид, липид полиэтиленгликоля (ПЭГ) и нейтральный липид.
- 26. Композиция LNP по п.24 или 25, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит нуклеиновую кислоту.
- 27. Композиция LNP по п.26, отличающаяся тем, что композиция имеет отношение атомов азота/фосфорных групп (N/P) 3-10.
- 28. Композиция LNP по п.27, отличающаяся тем, что отношение N/P составляет 6±1.
- 29. Композиция LNP по любому из пп.24-28, дополнительно содержащая компонент РНК, причем компонент РНК содержит мРНК.
- 30. Композиция LNP по п.29, отличающаяся тем, что РНК-компонент содержит последовательность, кодирующую РНК-напрвляемый связывающий ДНК агент, такой как мРНК нуклеазы Cas.
- 31. Композиция LNP по п.29 или 30, отличающаяся тем, что РНК-компонент включает гРНК.
- 32. Применение композиции LNP по любому из пп.24-31 для редактирования гена у субъекта.
- 33. Применение композиции LNP по любому из пп.24-31 для получения лекарственного средства для редактирования гена у субъекта.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/775,783 | 2018-12-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA046244B1 true EA046244B1 (ru) | 2024-02-20 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220119341A1 (en) | Modified amine lipids | |
| JP7485659B2 (ja) | イオン化可能なアミン脂質 | |
| US20220402862A1 (en) | Ionizable amine lipids and lipid nanoparticles | |
| TW201330874A (zh) | 含有陽離子性脂質之組合之脂質奈米粒子 | |
| EP3153172A1 (en) | Ckap5-gene-silencing rnai pharmaceutical composition | |
| TWI841639B (zh) | 經修飾之胺脂質 | |
| WO2023176822A1 (ja) | 化合物および脂質組成物 | |
| EA046244B1 (ru) | Модифицированные аминовые липиды | |
| JP6495408B2 (ja) | カチオン性脂質 | |
| KR20010081924A (ko) | 환원 조건에 민감한 형질감염 조성물, 이를 함유한 약학조성물, 및 이들의 용도 | |
| EA045069B1 (ru) | Ионизируемые аминолипиды | |
| TW201815736A (zh) | 作為陽離子性脂質之化合物 | |
| EP4372027A1 (en) | Use of polyethylenoxide polymers for the preparation of lipids conjugated with poly(ethylene oxide) having c1 to c3-alkyloxymethyl side chains | |
| WO2024105068A1 (en) | Lipids conjugated with poly(ethylene oxide) having c1 to c3-alkyloxymethyl side chains | |
| WO2024105071A1 (en) | Polyoxyalkylene-1,2-dimyristoyl-glycerol compounds, wherein the polyoxyalkylene is a poly(ethylene oxide) having c1 to c3-alkyloxymethyl side chains | |
| JP2024521852A (ja) | Ｍｃ３型脂質及び脂質ナノ粒子の調製におけるその使用 | |
| UA128190C2 (ru) |