TW202002956A - 三伸乙基四胺四氯化物之結晶型及其醫藥用途 - Google Patents

Abstract

本發明描述一種三伸乙基四胺四氯化物之新穎結晶型，其具有相較於已知形式及相較於二氯化物鹽改良之室溫穩定性。該新穎結晶型之特徵為在XRPD光譜中在22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處及拉曼位移943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 處具有峰值。該三伸乙基四胺四氯化物之結晶型適用於治療威爾森氏病。

Description

三伸乙基四胺四氯化物之結晶型及其醫藥用途

本發明係關於一種三伸乙基四胺四氯化物(TETA.4HCl)之結晶型及製造該結晶型之方法。本發明進一步關於使用結晶三伸乙基四胺四氯化物治療威爾森氏病(Wilson’s disease)。

三伸乙基四胺或N,N’-雙(2-胺基乙基)1,2-乙二胺(TETA)具有以下結構：

三伸乙基四胺

二氯化物鹽(TETA.2HCl)為銅(II)之多元胺螯合劑。其銅螯合特性使得其適用於治療各種病狀，尤其為威爾森氏病。威爾森氏病為由威爾森氏病蛋白(ATP7B基因)中之突變引起的遺傳病症。該病狀導致銅在體內積聚。 TETA.2HCl之銅螯合能力亦使得考慮將其用於治療多種病狀，諸如糖尿病患者之內部器官損傷、阿茲海默氏症(Alzheimer’s disease)及癌症(Henriet等人, International Journal of Pharmaceutics 511 (2016) 312-321)。

然而，儘管多年來已知TETA.2HCl適用於治療威爾森氏病，但其尚未成為成功治療。此至少部分地係因為已證實難以提供在室溫下具有足夠穩定性之適合形式之TETA.2HCl。因此，需要患者在低溫條件下儲存錠劑，其為終生都需要與每一餐一起服用之治療的繁重要求。

研究亦展示濕度之變化可影響鹽之穩定性。該鹽對水極為敏感且取決於濕度水平而以不同多晶型形式存在。高濕度導致化合物不穩定。此等穩定性效應給調配適用於治療患者之藥物及在諸如低溫之特殊條件下儲存材料之需求帶來挑戰。因此需要用於威爾森氏病之改善治療，其可經口遞送且在長時間段內在環境條件下穩定。

EP 1778618描述用於生產TETA及其鹽(包括.2HCl鹽及.4HCl鹽)之合成技術。據稱僅該2HCl鹽適用於治療威爾森氏病。

WO 2006/027705描述包括形式I及形式II三伸乙基四胺二氫氯化物之三伸乙基四胺的合成。此文獻未提及三伸乙基四胺四氫氯化物之結晶型。

本發明人已出人意料地發現TETA.4HCl之新穎結晶型具有改良之處理特性及室溫穩定性。因此，與二氯化物或已知形式之四氯化物鹽相比，其更適用於調配成藥物。先前已知之用於生產TETA.4HCl之技術(諸如在室溫下進行之反溶劑結晶方法，及包括高溫乾燥步驟之方法)產生本文中描述為形式A之結晶型。然而，本發明人已發現，藉由小心地控制製造條件，尤其是結晶之溫度及速率，可生產在本文中稱為形式B之新穎結晶型。此新穎形式具有良好處理特性以及良好穩定性及存放期特徵且因此有益於生產新穎調配物，例如錠劑，用於治療威爾森氏病。

因此，本發明提供一種具有以下特徵中之至少一者的三伸乙基四胺四氯化物之結晶型： (i) XRPD圖案，其具有至少兩個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值；及/或 (ii)拉曼光譜，其具有至少兩個選自943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 之拉曼位移處之峰值的峰值。

亦提供一種醫藥組合物，其包含如本文所描述之結晶型以及一或多種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。

亦提供一種生產三伸乙基四胺四氯化物之結晶型的方法，其包含將反溶劑添加至三伸乙基四胺四氯化物之水溶液且收集所獲得之晶體，其中反溶劑添加係在約20℃或更低之溫度下進行。

亦提供一種三伸乙基四胺四氯化物之結晶型，或一種含有三伸乙基四胺四氯化物之醫藥組合物，其可藉由本文所描述之方法獲得或藉由本文所描述之方法獲得。

亦提供藉由療法用於治療人體或動物體，較佳用於預防或治療威爾森氏病之如本文所描述之結晶型或醫藥組合物。

亦提供一種預防或治療有需要之個體之威爾森氏病的方法，該方法包含向個體投與有效量的如本文所描述之結晶型或醫藥組合物。

亦提供如本文所描述之結晶型或醫藥組合物之用途，其用於製造用以預防或治療威爾森氏病之藥劑。

本發明之特定態樣陳述如下：

1. 一種三伸乙基四胺四氯化物之結晶型，其具有以下特徵中之至少一者： (i) XRPD圖案，其具有至少兩個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值；及/或 (ii)拉曼光譜，其具有至少兩個選自943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 之拉曼位移處之峰值的峰值。

2. 如態樣1之結晶型，其具有具至少兩個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值之XRPD圖案。

3. 如態樣1或2之結晶型，其具至少三個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值之XRPD圖案。

4. 如態樣1至3中任一項之結晶型，其具有在25.4、34.6及35.3±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。

5. 如態樣1至4中任一項之結晶型，其含有不超過10重量%之三伸乙基四胺四氯化物形式A，該三伸乙基四胺四氯化物形式A具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。

6. 如態樣5之結晶型，其含有不超過5重量%之三伸乙基四胺四氯化物形式A，該三伸乙基四胺四氯化物形式A具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。

7. 一種如前述態樣中任一項之結晶型，其基本上由具有以下之三伸乙基四胺四氯化物形式B組成： (i)如技術方案1至4中任一項所定義之XRPD圖案；及/或 (ii)拉曼光譜，其具有至少兩個選自943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 之拉曼位移處之峰值的峰值。

8. 一種醫藥組合物，其包含如態樣1至7中任一項之結晶型及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。

9. 如態樣8之醫藥組合物，其為包含如技術方案1至7中任一項之結晶型及醫藥學上可接受之載劑的固體口服劑型。

10. 如態樣8或9之醫藥組合物，其含有不超過10重量%、較佳不超過5重量%、更佳不超過2重量%之三伸乙基四胺四氯化物形式A，該三伸乙基四胺四氯化物形式A具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。

11. 如態樣10之醫藥組合物，其基本上不含具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案的三伸乙基四胺四氯化物形式A。

12. 一種生產三伸乙基四胺四氯化物之結晶型之方法，該方法包含將反溶劑添加至三伸乙基四胺四氯化物之水溶液且收集所獲得之晶體，其中反溶劑添加係在約20℃或更低之溫度下進行。

13. 如態樣12之方法，其中向該溶液中添加反溶劑之速率不超過0.5 ml/min/g溶解於該水溶液中之TETA.4HCl。

14. 如態樣12或13之方法，該方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及/或以添加速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液； (ii)視情況添加TETA.4HCl晶種； (iii)視情況在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)視情況將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約20℃或更低；T2至少比T1低5℃；t1為至少1小時，R1為0.5 ml/min/g或更低，t1a為至少2小時且t2為至少30分鐘。

15. 如態樣14之方法，該方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及或以速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液； (ii)視情況添加TETA.4HCl晶種； (iii)視情況在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約20℃或更低；T2為約10℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.5 ml/min/g或更低，t1a為至少3小時且t2為至少30分鐘。

16. 如態樣15之方法，該方法包含： (i)在溫度T1下歷經時段t1及/或以速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液中； (ii)添加TETA.4HCl晶種； (iii)在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約15℃或更低；T2為約5℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.2 ml/min/g或更低，t1a為至少4小時且t2為至少30分鐘。

17. 如態樣12至16中任一項之方法，其進一步包含在低於約40℃，較佳低於約30℃之溫度下乾燥所收集之晶體。

18. 如態樣12至17中任一項之方法，其中將該等所收集之晶體與醫藥學上可接受之載劑組合以生產醫藥組合物。

19. 如態樣18之方法，其中該方法進一步包含壓縮晶體及醫藥學上可接受之載劑之混合物以形成錠劑且視情況對該錠劑包糖衣或包薄膜衣。

20. 一種結晶型或醫藥組合物，其可藉由如態樣12至19中任一項之方法獲得。

21. 如前述態樣中任一項之結晶型或醫藥組合物，其用於藉由療法治療人體或動物體之方法。

22. 如態樣21所使用之結晶型或醫藥組合物，其用於預防或治療威爾森氏病。

結晶 TETA . 4HCl 本文所描述之三伸乙基四胺四氯化物之結晶型(TETA.4HCl)稱為形式B。此結晶型可藉由其XRPD光譜、其拉曼光譜、其熔點、其FTIR光譜及其DVS特性中之一或多者表徵。結晶型之此等特徵中之各者的細節描述於下文中。通常，本發明之結晶型係藉由其XRPD光譜及/或其拉曼光譜，最佳其XRPD光譜表徵。因此，本發明之結晶型通常具有以下特徵中之至少一者： (i) X射線粉末繞射(XRPD)圖案，其具有至少兩個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值；及/或 (ii)拉曼光譜，其具有至少兩個選自943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 之拉曼位移處之峰值的峰值。

通常，本發明之TETA.4HCl之結晶型具有XRPD圖案，其具有至少兩個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值。較佳地，XRPD圖案具有選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值之至少三個峰值，更佳至少四個峰值。更佳地，在XRPD圖案中觀測到至少5個或所有此等峰值。更佳地，本發明之TETA.4HCl之結晶型具有具選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.05° 2θ處之峰值之至少兩個峰值，較佳至少三個、四個、五個或所有峰值之XRPD圖案。尤其較佳的是TETA.4HCl之結晶型具有在25.4、34.6及35.3±0.1° 2θ處，更佳在25.4、34.6及35.3±0.05° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。

通常，25.4及35.3±0.1° 2θ處之峰值為最強的，尤其為25.4±0.1° 2θ處之峰值。較佳地，25.4±0.1° 2θ處之峰值為下一最強峰值之至少兩倍強，更佳為至少三倍強。通常，35.3±0.1° 2θ處之峰值為下一個最強峰值之至少兩倍強。

通常，TETA.4HCl形式B之XRPD圖案基本上類似於圖4中描繪之XRPD圖案。

XRPD資料可使用PANALYTICAL X’PERT PRO MPD繞射儀獲得。繞射資料通常藉由將粉末樣品曝露於Cu-K_α X射線輻射來獲得，該輻射具有1.5418 Å之特徵波長(λ)。X射線由供應有40 kV及40 mA電流之Cu陽極產生。用於獲得XRPD資料之操作條件之其他細節陳述於本文實例部分中。

通常，本發明之TETA.4HCl之結晶型具有在943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 中之兩者或更多者處具有位移之拉曼光譜。較佳地，拉曼光譜展示在943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 處之峰值中之至少兩者、較佳三者、更佳所有四者。尤其較佳的是，TETA.4HCl之結晶型具有在943、1173、1527及1612±2 cm^{- 1} 中之兩者或更多者、較佳三者、更佳所有四者處具有位移之拉曼光譜。尤其較佳的是，TETA.4HCI之結晶型具有在943及1173±5 cm^{- 1} ，最佳943及1173±2 cm^{- 1} 處具有位移之拉曼光譜。通常，拉曼光譜類似於圖5a中所展示之拉曼光譜(上部光譜)。

拉曼光譜可例如使用Renishaw RA802醫藥分析儀獲得。此可在785 nm之雷射波長下操作。其他操作條件陳述於本文實例部分中。

TETA.4HCl形式B結晶型為儲存穩定的。因此，通常，已儲存於20℃下6個月、較佳10個月、更佳12個月之本發明之結晶型之樣品的XRPD圖案及/或拉曼光譜與上文所描述之本發明之結晶型的XRPD圖案及/或拉曼光譜相同或基本上相同。較佳地，已儲存於20℃下6個月、較佳10個月、更佳12個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%、更佳至少95重量%、更佳至少98重量%保持本文所描述之結晶型形式B。

TETA.4HCl形式B結晶型在潮濕環境中穩定。因此，通常，已儲存於40℃及75%濕度下1個月、較佳4個月、更佳6個月之本發明之結晶型之樣品的XRPD圖案及/或拉曼光譜與上文所描述之本發明之結晶型的XRPD圖案及/或拉曼光譜相同或基本上相同。較佳地，已儲存於40℃及75%濕度下1個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%、更佳至少95重量%、更佳至少98重量%保持本文所描述之結晶型形式B。較佳地，已儲存於40℃及75%濕度下4個月、較佳6個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%，更佳至少95重量%，更佳至少98重量%保持本文所描述之結晶型形式B。

較佳地，本發明之結晶型的儲存穩定性係由XRPD圖案測定。因此，較佳地，已儲存於20℃下6個月、較佳10個月、更佳12個月之本發明之結晶型之樣品的XRPD圖案與上文所描述之本發明之結晶型的XRPD圖案相同或基本上相同。較佳地，已儲存於20℃下6個月、較佳10個月、更佳12個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%、更佳至少95重量%、更佳至少98重量%保持與本文所描述之結晶型形式B相同或基本上相同的XRPD圖案。此外，較佳地，已儲存於40℃及75%濕度下1個月、較佳4個月、更佳6個月之本發明之結晶型之樣品的XRPD圖案與上文所描述之本發明之結晶型的XRPD圖案相同或基本上相同。較佳地，已儲存於40℃及75%濕度下1個月、較佳4個月、更佳6個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%、更佳至少95重量%、更佳至少98重量%保持與本文所描述之結晶型形式B相同或基本上相同的XRPD圖案。

或者，藉由拉曼光譜測定本發明之結晶型之儲存穩定性。因此，較佳地，已儲存於20℃下6個月、較佳10個月、更佳12個月之本發明之結晶型之樣品的拉曼光譜與上文所描述之本發明之結晶型的拉曼光譜相同或基本上相同。較佳地，已儲存於20℃下6個月、較佳10個月、更佳12個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%、更佳至少95重量%、更佳至少98重量%保持與本文所描述之結晶型形式B相同或基本上相同的XRPD圖案。此外，較佳地，已儲存於40℃及75%濕度下1個月、較佳4個月、更佳6個月之本發明之結晶型之樣品的拉曼光譜與上文所描述之本發明之結晶型的拉曼光譜相同或基本上相同。較佳地，已儲存於40℃及75%濕度下1個月、較佳4個月、更佳6個月之本發明之結晶型之樣品的至少90重量%、更佳至少95重量%、更佳至少98重量%保持與本文所描述之結晶型形式B相同或基本上相同的拉曼光譜。

本發明之結晶型之特定優點與其儲存穩定性相關。觀測到獲自形式A TETA.4HCl之錠劑之儲存在40℃及75%濕度下儲存六個月之後具有褪色碎片。自已老化之TETA.4HCl形式A獲得之錠劑描繪於圖7b中。此展示錠劑隨時間推移之褪色。本發明及提供TETA.4HCl形式B，特定言之基本上純TETA.4HCl形式B旨在解決此問題。咸信獲自TETA.4HCl形式B之錠劑隨時間推移褪色之趨勢減小。

本發明之結晶型通常具有在1475、1525、16010、2380、2435、2580、2830及2880±5 cm^{- 1} 中之兩者或更多者，較佳四者或更多者，更佳五者或更多者，最佳所有者處具有峰值之FTIR光譜。較佳地，本發明之結晶型具有在1525、2435及2675±5 cm^{- 1} 處，最佳在1526、2436及2674±2 cm^{- 1} 處具有峰值之FTIR光譜。較佳地，本發明之結晶型含有不超過50重量%，例如不超過40重量%，較佳不超過20重量%，更佳不超過10重量%之在FTIR譜中在943±2 cm^{- 1} 處具有峰值之結晶型。最佳地，結晶型基本上不含在943±2 cm^{- 1} 處具有峰值之結晶型。

FTIR光譜通常為FTIR-ATR光譜且可在ATR diamond模式下使用Nicolet iS5 FT-IR光譜儀獲得。適合於獲得FTIR光譜之特定條件進一步詳細陳述於實例4中。

本發明之結晶型通常具有如藉由DSC所量測之約260℃、通常約259℃之熔融溫度。DSC分析可如實例4中所陳述進行。舉例而言，分析可如下進行：在氮氣沖洗下在50 mL/min下使用Toledo DSC3+裝置且將樣品提供於40 µL密封鋁盤中，其中在分析之前將蓋刺穿。

藉由DVS分析本發明之結晶型亦可用於將本發明之結晶形式B與形式A區分開來。本發明之結晶型通常在90%及更高RH下展示50-59%、通常54-57%之重量增加。通常，在完成吸附及解吸附循環(0%至95% RH)之後，樣品之重量增加不超過10%，較佳不超過5%。此與TETA.4HCl形式A形成對比，該形式A在吸附/解吸附(0-95% RH)之後展示14-15%之重量增加。

通常，根據本發明之TETA.4HCl之結晶型含有不超過50重量%，例如不超過40重量%，較佳不超過20重量%，更佳不超過10重量%之TETA.4HCl形式A。根據本發明之TETA.4HCl之較佳結晶型基本上不含TETA.4HCl形式A。如本文所用之基本上不含形式A意謂結晶型含有不超過5重量%之形式A，較佳不超過2重量%，更佳不超過1重量%且最佳不超過0.5重量%或不超過0.1重量%之形式A。

TETA.4HCl形式A為在標準結晶條件下獲得之結晶型，諸如本文之參考實例3中所描述之彼等。形式A係藉由在25.2及35.7±0.1° 2θ處，通常在25.2及35.7±0.05° 2θ處具有峰值之XRPD圖案表徵。較佳地，形式A之XRPD光譜在21.8、26.9及28.2±0.1° 2θ處，通常在21.8、26.9及28.2±0.05° 2θ處亦具有峰值。特定言之，形式A係藉由如圖3中所陳述之XRPD圖案(「曲線1」)表徵。形式A亦可藉由在933及/或1513±5 cm^{- 1} 處，通常在933及/或1513±2 cm^{- 1} 處具有峰值之拉曼光譜表徵。特定言之，形式A係藉由在933、1167、1513及1604±5 cm^{- 1} 處，通常在933、1167、1513及1604±2 cm^{- 1} 處具有峰值之拉曼光譜表徵。通常，形式A係藉由如本文之圖5a (下部光譜)所陳述之拉曼光譜表徵。

較佳地，根據本發明之結晶型含有不超過50重量%，例如不超過40重量%，較佳不超過20重量%，更佳不超過10重量%，更佳不超過5重量%，不超過2重量%，不超過1重量%，且最佳不超過0.5重量%或不超過0.1重量%之具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值或在21.8、25.2、26.9、28.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案的TETA.4HCl之結晶型。

較佳地，根據本發明之結晶型含有不超過50重量%，例如不超過40重量%，較佳不超過20重量%，更佳不超過10重量%，更佳不超過5重量%，不超過2重量%，不超過1重量%，且最佳不超過0.5重量%或不超過0.1重量%之具有拉曼光譜之TETA.4HCl之結晶型，該拉曼光譜在933及/或1513±5 cm^{- 1} 處、通常在933及/或1513±52 cm^{- 1} 處具有峰值，或在933、1167、1513及1604 cm^{- 1} ±5cm^{- 1} 處、通常在933、1167、1513及1604±2 cm^{- 1} 處具有峰值。

較佳地，TETA.4HCl之結晶型含有至少90重量%之形式B。更佳地，結晶型主要由形式B組成，亦即其為基本上純TETA.4HCl形式B。當結晶型基本上由形式B組成時，其通常含有至少95重量%之TETA.4HCl形式B，更佳至少98重量%、更佳至少99重量%且最佳至少99.5重量%或99.9重量%之TETA.4HCl形式B，其中TETA.3HCl形式B係藉由如本文所述之XRPD光譜及/或拉曼光譜表徵，較佳地，TETA.4HCl形式B係藉由如本文所陳述之XRPD光譜表徵。

本文所描述之TETA.4HCl晶體通常以乾燥形式提供。因此，其通常含有小於1重量%之水，較佳小於0.5重量%之水，更佳小於0.1重量%或0.05重量%之水。總殘餘溶劑較佳小於0.1重量%，更佳小於0.5重量%。

製造結晶 TETA . 4HCl 之方法 TETA.4HCl可藉由本領域中已知之技術生產。舉例而言，TETA游離鹼為市售的且可藉由常規方法轉化為結晶TETA水合物且分離。 TETA水合物可用HCl水溶液處理以得到TETA.4HCl鹽。通常，TETA.4HCl鹽在作為形式B多晶型再結晶之前以粗物質形式分離。

呈結晶型之TETA.4HCl可藉由反溶劑結晶方法，通常自水溶液獲得。此類方法涉及將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液中及收集所得晶體。當在標準結晶條件下進行時，例如藉由在室溫或高於室溫下結晶，及/或藉由包括在高溫下乾燥之方法，已發現此類方法產生在本文中稱為形式A之TETA.4HCl之單一結晶型。甚至基於溶劑系統之變化獲得形式A晶體。

舉例而言，本發明人已使用WO 2006/027705中所描述之方法生產TETA.4HCl，且發現此等方法導致形式A晶體之生產。本發明人以三伸乙基四胺之異構體之混合物為起始物，且使用如WO 2006/027705之實例17中所描述之結晶條件再生產WO 2006/027705之實例17。藉由XRPD分析產物且結果陳述於圖12a至12c中。所獲得之產物含有TETA.4HCl形式A之特徵峰值。然而，缺乏已知為TETA.4HCl形式B之特徵之某些峰值，尤其為大約35° 2θ處及25.4° 2θ處之峰值，表明所生產之產物為TETA.4HCl形式A，已知藉由標準室溫結晶生產之形式。

本發明人已發現使用相同溶劑系統但改變結晶條件(尤其處理時間及溫度)可獲得形式B晶體。

在約20℃或更低、尤其約15℃或更低之溫度下，TETA.4HCl可作為形式B生產。在約20℃至30℃下，所生產之結晶型可視除了僅結晶溫度以外的條件而定。因此，通常亦需要控制高於約20℃之其他條件以確保生產形式B。特定言之，所生產之結晶型可視結晶速率而定。因此，緩慢結晶有利於形式B之形成，而更快速結晶有利於形式A。即使在15-20℃之溫度下，亦可生產一些形式A晶體，除非緩慢地進行結晶。舉例而言，在使用反溶劑添加來形成結晶的情況下，反溶劑較佳應緩慢添加至溶液中以便確保生產形式B而非形式A。

通常，藉由在約20℃或更低、較佳約15℃或更低、更佳約10℃或更低之溫度下藉由結晶來生產本發明之結晶型。在一個實施例中，結晶之較佳溫度為13℃或更低、更佳為7-13℃。在約15℃或更低、尤其在13℃或更低之溫度下，形式B為熱力學上有利之形式且結晶一般將產生基本上純形式B。

較佳地，結晶製程中之所有步驟在低於30℃、較佳約20℃或更低、較佳約15℃或更低、更佳約10℃或更低之溫度下進行。在溫度高於約15℃之情況下，可生產形式A與形式B之混合物。在溫度高於約30℃之情況下，將僅產生形式A。為確保所生產之產物為基本上純形式B，在結晶期間較佳將溫度始終保持在約15℃或更低。在約15℃與20℃之間的溫度下，可藉由在緩慢反溶劑添加速率下進行結晶來生產形式B晶體。特定言之，將形式B晶種添加與緩慢溶劑添加組合促進形成基本上純形式B。以緩慢及受控方式添加反溶劑確保結晶自晶種產生且不發生形式A之獨立成核。

通常，結晶藉由反溶劑添加以0.5 ml添加至TETA.4HCl之水溶液中之反溶劑每分鐘每公克溶解於水溶液中之TETA.4HCl或更低之速率進行。因此，較佳添加速率為0.5 ml反溶劑每分鐘每公克TETA.4HCl或更低，亦即0.5 ml/min/g或更低。較佳反溶劑添加速率為0.2 ml/min/g或更低，更佳為約0.1 ml/min/g或更低。較佳添加速率為0.01至0.2 ml/min/g，最佳為0.01至0.1 ml/min/g。

因此，為提供基本上純形式B晶體，結晶較佳在約15℃或更低之溫度下且較佳以5 ml/min/g或更低、更佳0.2 ml/min/g或更低(例如約0.1 ml/min/g)之添加速率進行。最佳地，結晶係在13℃或更低，例如7至13℃之溫度下，且較佳以低於0.2 ml/min/g，例如約0.1 ml/min/g或更低之添加速率進行。

較佳添加TETA.4HCl形式B之晶種。晶種可在反溶劑添加之前、期間或之後，通常在反溶劑添加之前或期間，最佳在反溶劑添加之前添加。若晶種在反溶劑添加期間或之後添加，則其較佳在觀測到晶體形成之前添加。

較佳結晶方法使用TETA.4HCl，較佳純化TETA.4HCl作為起始物質。起始物質中雜質之存在可影響使所需多晶型物結晶之能力。因此，TETA.4HCl較佳呈分離形式，亦即其自任何反應混合物分離，其中其在開始結晶以生產形式B之前生產(且通常純化)。此外，粗TETA.4HCl較佳在開始生產形式B之製程之前再結晶。此亦提供較高純度起始物質且使得形式B晶體能夠藉由遵循如本文所陳述之方法可靠地生產。

TETA.4HCl通常在結晶之前溶解於水溶液中。通常，溶液包含0.01至10 g TETA.4HCl/ml水。較佳地，溶液包含0.1至5 g TETA.4HCl/ml水，最佳0.6至1.2 g TETA.4HCl/ml水。用於再結晶之反溶劑之量通常為0.5 ml/g溶解於水溶液中之TETA.4HCl或更小。反溶劑之較佳量為0.2 ml/g TETA.4HCl或更小，更佳約0.1 ml/g TETA.4HCl或更小。反溶劑之較佳量為0.01至0.2 ml/g TETA.4HCl，最佳0.01至0.1 ml/g TETA.4HCl。

形式B之較佳結晶方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及/或以添加速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液，較佳攪動水溶液中； (ii)視情況添加TETA.4HCl晶種； (iii)視情況在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)視情況將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體。

T1為約20℃或更低、較佳約15℃或更低、更佳約10℃或更低。為了生產基本上純形式B，T1較佳為約15℃或更低，更佳為約10℃或更低。

反溶劑可為任何溶劑，TETA.4HCl在其中為基本上不溶的。適合之反溶劑包括乙醇、甲醇、乙腈、丙-2-醇、丙酮及1,4-二噁烷及其混合物。甲醇及乙醇及其混合物較佳，尤其為乙醇。

溶液通常在添加期間經攪動或混合，通常藉由攪拌。混合物之進一步攪動(例如攪拌)可在步驟(iii)及步驟(iv)中施加。

結晶製程通常在長時間內進行。因此，t1通常為至少1小時，較佳至少1.5小時。反溶劑R1之添加速率通常為0.5 ml/min/g或更低。較佳速率R1為0.2 ml/min/g或更低、更佳約0.1 ml/min/g或更低，例如0.01至0.2 ml/min/g、最佳0.01至0.1 ml/min/g。

若添加晶種，則此等晶種通常在進行步驟(i)之前、期間或之後添加。較佳地，晶種在步驟(i)之前或在步驟(i)之反溶劑添加期間添加。若晶種在添加反溶劑期間或之後添加，則通常攪拌混合物另一延長時段t1a，其較佳為至少2小時，例如至少3小時或4小時，例如約5小時。較佳地，在收集晶體之前亦包括在低溫下之另一攪拌時段。持續時段t2進行此進一步攪拌步驟，t2較佳至少30分鐘。進一步攪拌步驟係在低溫T2下進行。T2通常低於T1，較佳比T1低至少5℃，更佳低至少10℃。T2通常為約10℃或更低，較佳約5℃或更低，更佳約0℃。已發現增加結晶之時間或速率及降低結晶之溫度提供更高純度之形式B。引入晶種亦有助於提高形式B結晶型之純度。

在以上方法中，通常，T1為約20℃或更低；T2至少比T1低5℃；t1為至少1小時，R1為0.5 ml/min/g或更低，t1a為至少2小時且t2為至少30分鐘。較佳地，T1為約20℃或更低；T2為約10℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.5 ml/min/g或更低，t1a為至少3小時且t2為至少30分鐘。更佳地，T1為約15℃或更低；T2為約5℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.2 ml/min/g或更低，t1a為至少4小時且t2為至少30分鐘。

結晶較佳在惰性氛圍下，例如在氮氣下進行。

較佳結晶方法至少包括以上步驟(i)、(iv)及(v)。更佳方法包括步驟(i)、(iii)、(iv)及(v)。最佳方法包括所有步驟(i)至(v)。因此，製造TETA.4HCl之較佳方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及或以速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液，通常攪動水溶液中； (ii)視情況添加TETA.4HCl晶種； (iii)視情況在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約20℃或更低；T2為約10℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.5 ml/min/g或更低，t1a為至少3小時且t2為至少30分鐘。

適用於生產基本上純TETA.4HCl形式B之另一較佳方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及/或以速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液，通常攪動水溶液中； (ii)添加TETA.4HCl晶種； (iii)在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約15℃或更低；T2為約5℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.2 ml/min/g或更低，t1a為至少4小時且t2為至少30分鐘。

晶體可藉由任何適合手段收集，只要收集步驟之溫度維持低於約40℃、較佳低於約30℃即可。已發現在晶體完全乾燥之前進行的較高溫度步驟僅產生形式A晶體。最佳地，晶體收集係在低於約25℃，例如約20℃或更低溫度下進行。

用於收集晶體之適合方法包括過濾及離心。通常，所得晶體隨後通常在低於約40℃、較佳低於約30℃之溫度下乾燥。晶體可在乾燥之前洗滌(例如用反溶劑)。用於洗滌之適合反溶劑為上文所提及之彼等反溶劑，尤其為甲醇或乙醇，最佳為乙醇。乾燥通常為真空乾燥，因為加熱將導致生產形式A晶體。在低於約40℃下之真空乾燥為較佳的。

必要時，所得乾燥產物可經進一步處理(例如藉由研磨或粒化)。晶體形式B在研磨時基本上穩定。

當相關時，收集及諸如洗滌、乾燥及研磨之其他處理步驟通常在惰性氛圍下，諸如在氮氣下進行。

醫藥組合物及劑型 本發明之醫藥組合物包含如本文所描述之結晶TETA.4HCl形式B以及一或多種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。醫藥組合物可呈任何適合之形式，但較佳為口服劑型。舉例而言，組合物可呈錠劑、膠囊、粉末、半固體、持續釋放調配物、溶液、懸浮液或任何其他適當組合物之形式。錠劑、膠囊及粉末，尤其錠劑為較佳的。

在替代性實施例中，組合物係非經腸投與，例如皮下或靜脈內投與。

醫藥劑型可藉由對如本文所描述生產之晶體進行進一步處理步驟來生產。因此，組合物通常為口服劑型，可如下地生產：(a)獲得TETA.4HCl形式B，例如使用上文所描述之方法；(b)視情況研磨及/或粒化所獲得之晶體；(c)將TETA.4HCl形式B與醫藥學上可接受之載劑組合；及(d)視情況混合TETA.4HCl形式B與載劑。適合之載劑進一步描述於下文中。當口服劑型為錠劑時，該製程可進一步包含(e)壓縮混合物以形成錠劑且視情況對該錠劑包糖衣或包薄膜衣。或者，固體口服劑型可為膠囊或粉末。在此情況下，本發明之方法可進一步包含(e)將所得混合物封裝於例如膠囊中。其他標準步驟可包括於製程中，例如研磨、粒化、包糖衣或包薄膜衣。

醫藥組合物通常包含至多85重量%之TETA.4HCl，例如至多50重量%之TETA.4HCl。較佳組合物為無菌及無熱原質的。

用於製備口服劑型之適合的醫藥學上可接受之載劑包括例如溶解劑(例如環糊精或改質環糊精)；稀釋劑(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、纖維素、玉米澱粉或馬鈴薯澱粉)；潤滑劑(例如二氧化矽、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣及/或聚乙二醇)；結合劑(例如澱粉、黃蓍膠、明膠、糖漿、阿拉伯膠、山梨糖醇、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；解聚劑(例如澱粉、褐藻酸、海藻酸鹽或羥基乙酸澱粉鈉)；起泡混合物；染料；甜味劑；濕潤劑(諸如卵磷脂、聚山梨醇酯、月桂基硫酸鹽)；及大體上用於醫藥調配物之無毒及藥理學非活性物質。此類醫藥製劑可以已知方式製造，例如藉助於混合之手段。

本發明之組合物通常含有高比例之TETA.4HCl形式B及少量形式A。較佳地，本發明之醫藥組合物含有不超過10重量%之TETA.4HCl形式A。較佳地，本發明之組合物基本上不含三伸乙基四胺四氯化物形式A。如本文所使用之基本上不含形式A意謂組合物含有不超過5重量%、較佳不超過2重量%、更佳不超過1重量%或0.5重量%且最佳不超過0.1重量%之TETA.4HCl形式A。

醫學用途 向個體投與治療有效量的本發明之化合物。應理解，針對任何特定個體之特異性劑量水準將取決於多種因素，包括所採用之特定化合物之活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、膳食、投與時間、投與途徑、排泄率、藥物組合及進行治療之特定疾病的嚴重性。最佳劑量水準及給藥頻率通常將藉由臨床試驗確定。

根據待治療之個體之年齡、體重及狀況、疾病之類型及嚴重性以及投與頻率及途徑，典型日劑量為每公斤體重至多50 mg，例如每公斤體重0.001至50 mg。較佳地，日劑量水準為0.05 mg至2 g，較佳0.1 mg至10 mg。本發明化合物通常以無毒量向患者投與。

本發明亦提供如本文所定義之結晶型或如本文所定義之組合物，其用於藉由療法治療人體或動物體之方法中。特定言之，本發明之結晶型及組合物適用於降低個體中之銅含量及/或降低個體中之銅滯留之毒性作用。因此，其適用於治療與升高之銅水準相關之病症及疾病。特定言之，其適用於預防或治療威爾森氏病。

TETA自身為用於威爾森氏病及與升高之銅水準相關之疾病及病症的已知治療。在投與本發明之結晶型之後，化合物將溶解於活體內系統中且可預期結晶型之治療效果與已知形式之TETA相同。

根據本發明治療之個體可為人類或動物個體，尤其為人類或哺乳動物，通常為人類。

實例 參考實例 1 ： 合成 TETA . 4HCl 粗物質形式 呈粗物質形式之TETA.4HCl係如圖1a及1b中所陳述地生產。

實例 2 ： 合成 TETA . 4HCl 形式 B 呈基本上純形式之TETA.4HCl形式B係藉由遵循圖2中所陳述之步驟而生產。

參考實例 3 ： 合成 TETA . 4HCl 形式 A 將粗TETA.4HCl在氮氣下溶解於2體積之純化水中，且隨後藉由過濾澄清所獲得之溶液。在70℃ (夾套反應器溫度)下加熱反應器且當反應混合物之溫度在55℃與60℃之間時，添加7體積之甲醇以使產物再結晶，添加速率為使得溫度總體上保持在55℃與65℃之間。

在65℃ (夾套反應器溫度)下攪拌至少30分鐘之後，反應混合物經至少2小時30分鐘之時段緩慢冷卻，同時維持約5℃/30分鐘之冷卻速度以獲得總體上在30℃與35℃之間的溫度。隨後在總體上維持於30℃與35℃之間的溫度下攪拌懸浮液至少1小時。

將產物在具有10 µm膜孔隙度之漆包Nutsch過濾器上過濾且用1.5體積之甲醇洗滌兩次。在最後一次洗滌之後進行強制過濾以乾燥產物。在60℃下在真空烘箱中乾燥產物至少14小時。

實例 4 ： TETA . 4HCl 晶體形式之分析 X 射線粉末繞射

將幾毫克在上文實例2及參考實例3中獲得之樣品置放於三個聚合物箔(Kapton®及聚丙烯)之間。 Kapton®展現繞射圖中之寬峰，具有約2θ=5.5°之弱強度。

將樣品置放於組態呈透射模式之PANALYTICAL X’PERT PRO MPD繞射儀中，且使用下表1中所指示之條件分析。繞射資料係藉由將粉末樣品曝露於Cu-K_α X射線輻射來獲得，該輻射具有1.5418 Å之特徵波長(λ)。X射線係由供應有40 kV及40 mA電流之Cu陽極產生。分析係在2°與50°之間進行(除非另外說明)。在各分析之前驗證繞射儀之校準。

圖3展示形式A與形式B之混合物之XRPD圖案(「曲線1+2」)以及根據參考實例3生產之晶體的XRPD圖案(基本上純形式A：「曲線1」)。箭頭標記形式B獨有之峰值。圖4展示根據實例2生產之晶體(基本上純形式B)的XRPD圖案。

表 1 ： XRPD 分析條件

拉曼光譜法 藉由拉曼光譜法分析實例2及參考實例3之樣品。在以下條件下使用Renishaw RA802醫藥分析儀：

表 2 ：

光譜提供於圖5a及5b中。在圖5b中，下部線表示實例2 (形式B)，而上部線表示參考實例3 (形式A)。箭頭描繪形式B獨有之位移。實例2之拉曼光譜展示在943、1173、1527及1612 cm^{- 1} 處之帶。參考實例3 (形式A)之拉曼光譜展示在933、1167、1513及1604 cm^{- 1} 處之峰值。

FTIR-ATR 分析 紅外線光譜在配備有iS7 ATR模組之Nicolet iS5 FT-IR光譜儀上量測，參數陳述於下文：

表 3 ：

獲得實例2 (形式B)之紅外線光譜。光譜展示於圖8a及8b中。

DSC 分析 在氮氣沖洗下在20 mL/min下，使用Mettler Toledo DSC3+ (序號B531255222)在40 µl密封鋁盤中進行DSC分析，其中在分析之前將蓋刺穿。

表 4 ：

觀測到對應於樣品熔融之吸熱事件。起始溫度及峰值溫度展示於下表中。

表 5 ：

起始、峰值溫度及焓

熱解重量分析 ( TGA ) 在氮氣沖洗下在20 mL/min下，使用Pyris 1 TGA分析儀(序號537N7052501)在密封鋁盤中進行熱解重量分析，該等盤在分析之前刺穿。

表 6 ：

熱解重量分析展示在225℃處開始之重量損失，其在289.5℃之後增加。此可能歸因於降解。重量損失為10.24%：在225.0℃至289.5℃之間的2.64%及在289.5℃至299.0℃之間的7.60%。

動態蒸汽吸附 ( DVS ) 分析 使用SMS DVS Intrinsic分析儀(序號PF 140088)在開口鋁盤中在25℃下用100 ml/min的氮氣淨化氣體進行DVS分析。穩定性標準為在5分鐘時間範圍上(最小值為10分鐘且最大值為100分鐘)低於0.002%之重量變化。

表 7 ：

DVS等溫線圖提供於圖11a (實例2)及圖11b (參考實例3)中。對此兩種樣品進行之DVS分析展示在高相對濕度值(90% RH及更高)下之顯著重量增加： - 實例2之至少+55.8% - 參考實例3之至少+60.8%

解吸附階段呈現兩種固體之不同行為。實例2在第二解吸附階段幾乎達到其參考重量。對於參考實例3，重量仍比在第二解吸附階段結束時之參考重量高+14.4% (對於達到之最小值，仍高出+7.9%)。值得注意的是，對於後者，在此等步驟上達到時限標準(因此樣品之重量不穩定)。

實例 5 ： 赫克爾測試 (Heckel Test) 赫克爾測試之目標為在受控條件下壓縮測試材料以得到散裝材料之屈服壓力。已知重量之材料在10 mm直徑模具內在平面衝頭以設定速度移動之情況下壓縮。衝頭上之力係以頻繁間隔準確地量測，而衝頭之移位係用於計算粉末之體積。在緩慢及快速穿孔速度下計算屈服壓力以評估材料變形之時間依賴性分量。對根據實例2及參考實例3生產之樣品進行赫克爾測試。

方法藉由氦比重瓶測定法測定真實密度。

所用設備：Micromeritics AccuPyc II 1340 測試參數： 杯尺寸3.5 cm3 淨化次數5 淨化壓力19.5 psig 操作次數10 操作填充壓力19.5 psig 平衡速率0.02 psig 操作精確度 是 百分比全標度0.05% 一式兩份地進行測試。(假定目標＜所達成之2%可變性)。

壓縮 使用10 mm直徑平面衝頭將已知重量之純藥物壓實至理論零孔隙率。在以下條件下使用壓實模擬器： 工具：10 mm圓形平面 曲線：V形曲線 衝頭速度-緩慢0.1 mm/s 衝頭速度-快速300 mm/s 模具之潤滑：是，用含硬脂酸沒之丙酮 重複次數：3 彈性校正：是

在壓縮期間，準確地判定衝頭尖端的位置且力藉由產生主要壓縮參數之記錄的測力計量測。在測試期間每隔一段時間監測溫度及濕度。藉由壓實分析軟體程式分析資料以使用赫克爾方程式產生屈服壓力(Py)之值：

其中D=壓實之相對密度 P=所施加之壓力 K=線性區域中之線之梯度 [參考文獻：R.W. Heckel. Trans. Metall. Soc. AIME 221 (1961)1001-1008]

應變率敏感性 ( SRS ) 對於一些材料，變形特徵隨施加力之速率而改變。此可藉由計算應變率敏感性來評估。使用以下方程式在高速壓縮下之屈服壓力與在慢速下之屈服應力相比：

[參考文獻：R.J. Roberts及R.C. Roe, Chem. Eng. Sci. 42(1987) 第903頁]。

結果真實密度

表 8 ：

*操作1與2之間的變化超出2%。進行第3操作。來自操作2之資料假定離群值且未用於平均計算中。

表 9 ： 壓實結果 ： 參考實例 3

實驗室條件 ： 21 . 3 ℃ / 52 . 1 % RH

表 10 ： 壓實結果 ： 參考實例 3

實驗室條件 ： 21 . 6 ℃ / 50 . 0 % RH

表 11 ： 結果及觀測結果之概述

表 12 ： 壓實結果 ： 實例 2

實驗室條件 ： 21 . 7 ℃ / 51 . 1 % RH

表 13 ： 壓實結果 ： 實例 2

實驗室條件 ： 21 . 7 ℃ / 51 . 2 % RH

表 14 ： 結果及觀測結果之概述

赫克爾測試為所形成之錠劑之變形之量度。壓實強度為停留時間影響壓實結合之程度的指示。發現，以慢速產生之參考實例2壓實具有中等拉伸強度(6-11公斤力)。在快速下，強度降低至約4-6公斤力。另一方面，實例3展示在慢速下7-12公斤力之強度，但在快速速度下9-11公斤力，此展示實例3在快速壓實速率下具有壓實產物之較大拉伸強度。圖6展示在不同生產速度下之實例2及參考實例3之應變率敏感性。

實例 6 ： 錠劑之老化 將根據參考實例3獲得之TETA.HCl壓縮以形成錠劑。錠劑之影像提供於圖7a中。錠劑在40℃及75%濕度下老化六個月。在老化之後，觀測到錠劑具有許多褪色碎片。老化錠劑之影像提供於圖7b中。

藉由拉曼光譜法在與上文實例4中所陳述相同之條件下分析錠劑且將結果與形式A及形式B TETA.4HCl之拉曼光譜進行比較。圖7c展示在變暗區域中，展示TETA.4HCl形式A之存在的錠劑面積。如自圖7b及圖7c之比較顯而易見，TETA.4HCl形式A之面積與錠劑表面上之褪色區域之位置相關。

在錠劑中偵測到少量TETA.4HCl形式B，其可在壓縮TETA.4HCl下形成以形成錠劑。 TETA.4HCl形式B之面積與老化錠劑中所觀測到之褪色區域不相關。

實例 7 ： 結晶製程 用於製備形式B之結晶測試係在20℃下進行。在(25:75)之乙醇/水之混合物中製備起始溶液且進行乙醇添加直至達到(75:25)比率。藉由手動添加乙醇進行第一測試。隨後使用注射泵進行額外測試，以緩慢且受控之速率進行添加。

手動添加 ( 逐滴 ) 在此等測試中，使用微量吸管手動進行添加。 將TETA.4HCl於(25:75)乙醇/水混合物中之溶液置於攪拌下且保持恆溫於20℃下。TETA.4HCl起始物質之量陳述於表15中。

以常規時間間隔逐滴添加反溶劑(乙醇)。測試兩種添加「速率」。在添加反溶劑之後，對固相取樣且藉由X射線繞射分析以便測定固相之性質。X射線繞射之條件如實例4中所陳述。最後測試係用在添加開始時存在之形式B之晶種，且以較慢添加速率進行(PE1716E007 - L - 5 )。此測試產生在繞射圖上未觀測到形式A之信號的固相。

結果陳述於表15中，且在乙醇添加結束時在分析懸浮液中之固相之後獲得的繞射圖呈現於圖9a、圖9b及圖9c中。圖9a至圖9c展示在最低線開始之XRPD繞射圖： 形式A之參考(圖9a至圖9c中之底部線) 形式B之參考 PE1716E007-L-5 PE1716E007-L-4 PE1716E007-L-3 PE1716E007-L-2 PE1716E007-L-1 PE1716E007-R-1 (圖9a至圖9c中之頂部線)

表 15 ：

表 15 . 藉由手動添加之結晶測試之結果。

程式化添加 ( 連續 ) 在此系列測試中，藉由注射泵驅動反溶劑添加。此允許在極低速率下連續添加。使用與上文相同之方案：在如表16中所陳述之25:75乙醇/水混合物中製備接近飽和之起始物質之溶液。該溶液隨後經形式B飽和直至固相保持在懸浮液中：此確保在反溶劑添加開始時形式B之晶種的存在。

測試兩種添加速率：0.05 mL/min及0.1 mL/min (含750 mg起始物質之溶液)。在此等選擇速率下添加乙醇直至獲得75:25乙醇/水比率。藉由添加至多82:18比率(其對應於約12.5%之濃度)及至多87.5/12.5比率(其對應於約9%(起始物質/總重量)之濃度)來進行兩次額外測試。

使用實例4中所陳述之條件進行X射線繞射分析。結果展示於下表16中，且在乙醇添加結束時在分析懸浮液中之固相之後獲得的繞射圖呈現於圖10a至圖10c中。此等結果展示對於最終乙醇/水比率為75:25之兩個測試及87.5:12.5之測試，未觀測到形式A之信號的繞射曲線。對於82:18之測試，觀測到在峰左側上在2θ=25.4°處之小肩峰(對應於形式A)。

圖10a至10c展示在最低線開始之XRPD繞射圖： 形式A之參考(圖10a至圖10c中之底部線) 形式B之參考 PE1716E007-L-6 PE1716E007-L-7 PE1716E007-L-8 PE1716E007-L-9 (圖10a至圖10c中之頂部線)

表 16 ： 藉由程式化添加之結晶測試之結果

實例 8 ： 結晶製程 合成三伸乙基四胺(曲恩汀)四氫氯化物(TETA4HCl)之概述展示於以下流程中。

在步驟I中，在水及TBME存在下藉由攪拌將三伸乙基四胺(TETA)轉化成對應三伸乙基四胺水合物(TETA水合物)。添加異丙醇作為反溶劑且必要時用TETA水合物接種。使TETA水合物結晶、過濾及分離。粗三伸乙基四胺四氫氯化物(粗TETA 4HCl)係藉由三伸乙基四胺水合物(TETA水合物)與鹽酸水溶液在乙醇中之反應(步驟II)獲得。粗三伸乙基四胺四氫氯化物(粗TETA 4HCl)自純化水與乙醇之混合物再結晶。粗三伸乙基四胺四氫氯化物(粗TETA 4HCl)藉由在形式B晶種存在下自純化水與乙醇之混合物再結晶而進一步純化，以得到三伸乙基四胺四氫氯化物(TETA 4HCl) (步驟III)。

該方法自125 kg之TETA生產分批量為110至130 kg之TETA 4HCl。合成之總產率為約50%，其包括粗TETA 4HCl之兩次再結晶。

用於生產形式B晶體之再結晶如圖1a、1b及2之流程圖中所概述地進行，但在步驟II (圖1b)結束時及在步驟III (圖2)之前添加粗TETA.4HCl之進一步再結晶。該製程可描述如下：

在已進行裝置之惰性化之後，在氮氣流下執行所有操作。

步驟 I ： 製造三伸乙基四胺水合物 ( TETA 水合物 ) ● 將三伸乙基四胺(標稱量125 kg)裝入反應器中，隨後裝入TBME (185±5 kg)。在經≥15分鐘攪拌之情況下添加水(約28 kg)，同時將溫度維持在≤30℃下。 ● 用三伸乙基四胺水合物(約0.1 kg)接種溶液，同時在必要時在25℃至35℃下攪拌以促進結晶。 ● 在25℃至35℃下添加異丙醇(64±1 kg)。 ● 將懸浮液在30℃至40℃下加熱≥15分鐘，隨後經≥90分鐘緩慢冷卻至15℃至25℃。 ● 將懸浮液冷卻至-5℃至5℃且攪拌≥30分鐘。 ● 將產物過濾且離心。隨後，獲取樣品用於分析(GC檢定)及測定雜質。 ● 若樣品足夠純，則將濕式TETA水合物填充於乾燥器中且在≤25℃下乾燥直至其滿足下一步驟中陳述之要求。 ● 藉由GC分析乾燥產物之純度；藉由KF分析外觀、殘餘水，藉由FTIR分析特性，藉由GC分析硫酸灰分及殘餘溶劑。

步驟 II ： 製造粗三伸乙基四胺四氫氯化物 ( 粗 TETA . 4HCl ) ● 將三伸乙基四胺水合物(TETA水合物)溶解於水(85±1 kg)中且在≤40℃下用經≥1 h裝入之濃鹽酸水溶液(200±5 kg)酸化。檢查pH值(目標pH=1.0)且添加濃鹽酸水溶液直至符合pH≤1.0。 ● 將反應混合物冷卻至15℃至25℃且攪拌≥10分鐘。 ● 用經≥1.5 h裝入之乙醇(672±5 kg)處理溶液，將維持溫度在≤30℃下。 ● 將懸浮液冷卻至-5℃至5℃且攪拌≥30分鐘。 ● 過濾產物且用乙醇(1×20 kg，隨後3×25 kg)連續洗滌固體。 ● 將粗三伸乙基四胺四氫氯化物(粗TETA.4HCl)溶解於水(340±10 kg)中。 ● 溶液用經≥1.5 h裝入之乙醇(909±10 kg)處理，將溫度維持在≤30℃下。 ● 將懸浮液冷卻至-5℃至5℃且攪拌≥30分鐘。 ● 過濾產物且用乙醇(1×14 kg，隨後3×15 kg)連續洗滌固體。

步驟 III ： 製造三伸乙基四胺四氫氯化物 ( TETA . 4HCl ) ● 將粗三伸乙基四胺四氫氯化物(粗TETA.4HCl)溶解於水(340±10 kg)中。 ● 溶液用經≥1.5 h裝入之乙醇(909±15 kg)處理，將溫度維持在7℃至13℃。 ● 在乙醇添加期間用TETA.4HCl (2重量%)接種溶液。 ● 攪拌懸浮液≥5小時，隨後冷卻至-5℃且攪拌≥30分鐘。 ● 過濾產物且用乙醇(1×14 kg，隨後3×15 kg)連續洗滌固體。 ● 藉由GC分析產物樣品之純度。 ● 產物在≤40℃下乾燥且若符合乾燥失重之控制參數，則研磨產物。 ● 經研磨之藥物物質在氮氣下轉移至雙層食品品質聚乙烯袋中，且隨後置放於鋁袋中且密封。將鋁袋插入於HDPE筒中。

再處理 藉由GC測試再結晶之後獲得之TETA 4HCl之雜質。若雜質之含量過高，則可重複步驟III。

圖1a及1b為展示用於生產呈粗產物形式之TETA.4HCl之方法的流程圖。 圖2為展示用於生產呈基本上純形式之TETA.4HCl形式B之方法的流程圖。 圖3描繪TETA.4HCl形式A (「曲線1」)及TETA.4HCl形式A及B之混合物(「曲線1+2」)之X射線粉末繞射圖案。箭頭突出顯示TETA.4HCl形式B之特徵峰值。 圖4描繪TETA.4HCl形式B之X射線繞射圖案。 圖5a展示TETA.4HCl形式A (下方)及形式B (上方)之拉曼光譜。圖5b展示用覆蓋有形式A (下部線)及形式B (下部線)之光譜。突出顯示形式B峰值。 圖6描繪TETA.4HCl形式A及TETA.4HCl形式B之赫克爾圖(Heckel plot)。 圖7a展示由TETA.4HCl形式A形成之TETA.4HCl之錠劑。圖7b展示相同錠劑在老化之後的影像。圖7c展示老化錠劑之拉曼分析，其中變暗區域對應於錠劑中之TETA.4HCl形式A之位置。 圖8a及8b展示TETA.4HCl形式B之FTIR-ATR光譜。圖8a展示全光譜4000-525 cm^{- 1} 。圖8b展示指紋區1800-525 cm^{- 1} 。 圖9a展示在以不同速度手動添加乙醇且與形式A及形式B之參考圖案進行比較之後，對實例7之樣品的X射線粉末繞射分析。圖9b展示圖9a在2θ=20-29°上之放大率。圖9c展示圖9a在2θ=34-37°上之放大率。 圖10a展示在程式化添加乙醇且與形式A及形式B之參考圖案比較之後，對實例7之樣品的X射線粉末繞射分析。圖10b展示圖10a在2θ=20-29°上之放大率。圖10c展示圖10a在2θ=34-37°上之放大率。 圖11a及11b分別展示實例2及參考實例3之DVS分析之相對於相對濕度的質量變化。 圖12a至12c展示根據先前技術方法所生產之產物的XRPD光譜分析。

Claims (17)

1. 一種三伸乙基四胺四氯化物之結晶型，其具有以下特徵中之至少一者： (i) XRPD圖案，其具有至少兩個選自22.9、25.4、25.8、26.6、34.6及35.3±0.1° 2θ處之峰值的峰值；及/或 (ii)拉曼光譜，其具有至少兩個選自943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 之拉曼位移處之峰值的峰值。
2. 如請求項1之結晶型，其具有在25.4、34.6及35.3±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。
3. 如請求項1或2之結晶型，其含有不超過10重量%之三伸乙基四胺四氯化物形式A，該三伸乙基四胺四氯化物形式A具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。
4. 如前述請求項中任一項之結晶型，其主要由具有以下各者之三伸乙基四胺四氯化物形式B組成： (i)如請求項1或2所定義之XRPD圖案；及/或 (ii)拉曼光譜，其具有至少兩個選自943、1173、1527及1612±5 cm^{- 1} 之拉曼位移處之峰值的峰值。
5. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至4中任一項之結晶型及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
6. 如請求項5之醫藥組合物，其為包含如請求項1至4中任一項之結晶型及醫藥學上可接受之載劑的固體口服劑型。
7. 如請求項5或6之醫藥組合物，其含有不超過10重量%、較佳不超過5重量%、更佳不超過重量2%之三伸乙基四胺四氯化物形式A，該三伸乙基四胺四氯化物形式A具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案。
8. 如請求項7之醫藥組合物，其基本上不含具有在25.2及35.7±0.1° 2θ處具有峰值之XRPD圖案的三伸乙基四胺四氯化物形式A。
9. 一種生產三伸乙基四胺四氯化物之結晶型之方法，該方法包含將反溶劑添加至三伸乙基四胺四氯化物之水溶液中及收集所獲得之晶體，其中反溶劑添加係在約20℃或更低之溫度下進行。
10. 如請求項9之方法，其中向該溶液中添加反溶劑之速率不超過0.5 ml/min/g溶解於該水溶液中之TETA.4HCl。
11. 如請求項9或10之方法，該方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及/或以添加速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液中； (ii)視情況添加TETA.4HCl晶種； (iii)視情況在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)視情況將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約20℃或更低；T2至少比T1低5℃；t1為至少1小時，R1為0.5 ml/min/g或更低，t1a為至少2小時且t2為至少30分鐘。
12. 如請求項11之方法，該方法包含： (i)在溫度T1下歷經時間段t1及/或以速率R1將反溶劑添加至TETA.4HCl之水溶液中； (ii)添加TETA.4HCl晶種； (iii)在T1下攪拌所得混合物另一時段t1a； (iv)將該溫度降低至溫度T2且攪拌該混合物另一時段t2；及 (v)收集所得晶體； 其中T1為約15℃或更低；T2為約5℃或更低；t1為至少1小時，R1為0.2 ml/min/g或更低，t1a為至少4小時且t2為至少30分鐘。
13. 如請求項9至12中任一項之方法，其進一步包含在低於約40℃、較佳低於約30℃之溫度下乾燥該等收集之晶體。
14. 如請求項9至13中任一項之方法，其中將該等收集之晶體與醫藥學上可接受之載劑組合以生產醫藥組合物。
15. 如請求項14之方法，其中該方法進一步包含壓縮晶體及醫藥學上可接受之載劑之混合物以形成錠劑及視情況對該錠劑包糖衣或包薄膜衣。
16. 一種結晶型或醫藥組合物，其可藉由如請求項9至15中任一項之方法獲得。
17. 如前述請求項中任一項之結晶型或醫藥組合物，其用於預防或治療威爾森氏病。

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