TW201800398A

TW201800398A - 肽環氧酮免疫蛋白酶體抑制劑的結晶鹽

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Publication number: TW201800398A
Application number: TW106121808A
Authority: TW
Inventors: 亨利強森; 伊凡路易斯; 西恩馬克丹澤; 達斯汀 L 麥克明
Original assignee: 基澤生命科學公司
Priority date: 2016-06-29
Filing date: 2017-06-29
Publication date: 2018-01-01
Also published as: JP2022106971A; FI3478670T3; US20210032232A1; AU2017290139B2; PL3478670T3; TWI751178B; US20190308961A1; HUE062106T2; IL263738A; IL263738B1; CL2018003872A1; SG11201811507YA; DK3478670T3; SI3478670T1; MX2018016387A; EP3478670A1; LT3478670T; PT3478670T; IL263738B2; HRP20230533T1

Abstract

本文提供一種肽環氧酮免疫蛋白酶體抑制劑、晶形、鹽及其製得方法及其調配物。

Description

肽環氧酮免疫蛋白酶體抑制劑的結晶鹽

本發明係關於(2S ,3R )-N -[(2S)-3-(環戊-1-烯-1-基)-1-[(2R )-2-甲基環氧乙烷-2-基]-1-側氧基丙-2-基]-3-羥基-3-(4-甲氧基苯基)-2-[(2S )-2-[2-(嗎啉-4-基)乙醯胺基]丙醯胺基]丙醯胺之新穎結晶鹽或其鹽水合物、醫藥組合物、其製備方法及其使用方法。

化合物(2S ,3R )-N-[(2S )-3-(環戊-1-烯-1-基)-1-[(2R )-2-甲基環氧乙烷-2-基]-1-側氧基丙-2-基]-3-羥基-3-(4-甲氧基苯基)-2-[(2S )-2-[2-(嗎啉-4-基)乙醯胺基]丙醯胺基]丙醯胺（「化合物G」）適用作免疫蛋白酶體抑制劑：

（G）。

在真核細胞中，蛋白質降解主要藉由泛素路徑介導，其中目標用於分解之蛋白質接合至76胺基酸多肽泛素。一旦標靶，則泛素化蛋白充當26S蛋白酶體之基質，所述蛋白酶體為多催化性蛋白酶，其藉由其三個主要蛋白分解活動之操作將蛋白質分解成短肽。儘管蛋白酶體介導之降解在細胞內蛋白質轉化中具有一般功能，但蛋白酶體介導之降解在多個方法中亦扮演關鍵角色，諸如主要組織相容複合體（major histocompatibility complex；MHC）I級抗原呈遞、細胞凋亡、細胞生長調控、NF-κΒ活化、抗原處理及促炎性信號之轉導。

PCT公開案第WO 2014/152134號描述三肽環氧酮蛋白酶體抑制劑及使用此等化合物來治療與異常免疫蛋白酶體活性相關的疾病及病狀之方法。因為諸如化合物G之三肽環氧酮蛋白酶體抑制劑適用於治療患者之疾病及病狀，需要用於其製造、運送、存儲及投與之此等化合物之高度可溶性及穩定形式。

在一個態樣中，本發明提供具有以下結構之結晶鹽：

，其中X^- 為相對離子。在一些實施例中，X^- 包括順丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、磷酸鹽、鹵化物、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、甲苯磺酸鹽、丙酸鹽及/或苯甲酸鹽。在各種情況下，所述鹽為鹽水合物。

在一些情況下，X^- 包括順丁烯二酸鹽。舉例而言，結晶鹽可為單順丁烯二酸鹽。

形式A.在一些實施例中，單順丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式A，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約6.9、17.3及17.8±0.2° 2θ處包括峰的X射線粉末繞射（「XRPD」）圖案，或（b）使用Cu Kα輻射，在約6.9、17.3、17.8、4.9、6.8、6.9、7.7、17.2及17.6±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（c）使用Cu Kα輻射，在約6.9、17.3、17.8、4.9、6.8、6.9、7.7、17.2、17.6、10.9、12.4、13.5、14.2、16.1、16.4、18.5、21.0、22.0、23.4、23.7、24.5及25.2±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（d）實質上如圖1中所示之XRPD圖案，或（e）實質上如圖2中所示之差示掃描熱量測定（「DSC」）熱分析圖。

形式B.在一些實施例中，單順丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式B，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約7.2、18.4及22.0±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（b）使用Cu Kα輻射，在約6.8、7.2、18.4、6.6、13.6、22.0、17.4、14.5、18.0及5.0±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（c）實質上如圖13中所示之XRPD圖案，或（d）實質上如圖17中所示之DSC熱分析圖。

形式C.在一些實施例中，單順丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式C，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約7.4、13.2及20.1±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（b）使用Cu Kα輻射，在約6.6、13.2、7.4、20.1、13.6、6.9、16.9、3.7、17.9及19.9±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（c）實質上如圖7中所示之XRPD圖案，或（d）實質上如圖8中所示之DSC熱分析圖。

形式D.在一些實施例中，單順丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式D，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約4.9、7.7、10.9、12.4、13.6及15.3±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（b）使用Cu Kα輻射，在約6.8、4.9、17.4、15.3、7.7、3.4、17.7、13.6、12.4及10.9±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（c）實質上如圖9中所示之XRPD圖案，或（d）實質上如圖10中所示之DSC熱分析圖。

形式.在一些實施例中，單順丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式E，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約6.4、7.3及19.8±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（b）使用Cu Kα輻射，在約6.5、3.3、7.3、19.8、6.8、16.5、12.1、21.5、4.0及13.0±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（c）實質上如圖11中所示之XRPD圖案，或（d）實質上如圖12中所示之DSC熱分析圖。

形式F.在一些實施例中，單順丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式F，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約6.3、19.0及19.6±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（b）使用Cu Kα輻射，在約6.3、7.1、19.0、17.5、19.6、17.9、22.0、13.5、18.2及15.5±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（c）實質上如圖19中所示之XRPD圖案，或（d）實質上如圖20中所示之DSC熱分析圖。

在一些情況下，X^- 包括反丁烯二酸鹽。舉例而言，結晶鹽可為單反丁烯二酸鹽。

形式G.在一些實施例中，單反丁烯二酸鹽結晶鹽展現形式G，其特徵在於（a）使用Cu Kα輻射，在約6.4、7.2、13.8、16.0、17.4、18.5、18.7、20.0、20.9、21.9、24.5及25.8±0.2° 2θ處包括峰的XRPD圖案，或（b）實質上如圖21中所示之XRPD圖案，或（c）實質上如圖22中所示之DSC熱分析圖。在一些情況下，單反丁烯二酸鹽包括單反丁烯二酸鹽水合物，且可為水合物與非水合物（或無水物）之混合物。

在一些實施例中，X^- 包括草酸鹽。在各種實施例中，X^- 包括蘋果酸鹽。在一些情況下，X^- 包括硫酸鹽。在各種情況下，X^- 包括甲磺酸鹽。在一些實施例中，X^- 包括2-萘磺酸鹽。在各種實施例中，X^- 包括磷酸鹽。在一些情況下，鹵化物（例如氯化物、溴化物、碘化物）。在各種情況下，X^- 包括酒石酸鹽。在一些實施例中，X^- 包括檸檬酸鹽。在各種實施例中，X^- 包括甲苯磺酸鹽。在一些情況下，X^- 包括丙酸鹽。在各種情況下，X^- 包括苯甲酸鹽。在此等情況中之任一者中，所述鹽以水合物或水合物與非水合物（或無水物）之混合物形式存在。

在另一態樣中，本發明提供一種藉由摻和製備本文所揭示之結晶鹽的方法：（a）化合物G：

（G），（b）順丁烯二酸，及（c）溶劑以形成懸浮液。

在一些實施例中，化合物G與順丁烯二酸之莫耳比在約1:0.5至1:2或約1:1範圍內。在各種情況下，所述溶劑選自由以下各者組成之群：甲醇（「MeOH」）、乙醇（「EtOH」）、異丙醇（「IPA」）、乙酸乙酯（「EtOAc」）、乙酸異丙酯（「IPAc」）、四氫呋喃（「THF」）、甲基第三丁基醚（「MTBE」）、丙酮/正庚烷、丙酮、二乙醚（「Et2O」）/EtOAc、己烷/EtOAc、MTBE/EtOAc、甲苯、1,4-二噁烷、乙腈（「ACN」）、1-丁醇、前述之水性混合物及其組合。舉例而言，溶劑可為EtOAc、IPAc、EtOH、其水性混合物或其組合。在一些實施例中，摻和在0℃至80℃範圍內之溫度下或在40℃至60℃範圍內之溫度下進行。摻和可進行至多約6小時。在各種實施例中，所述方法視情況包含使懸浮液冷卻至0℃。在一些情況下，所述方法視情況包含過濾所述懸浮液以形成濾餅。在各種情況下，所述方法視情況包含洗滌、乾燥或洗滌並乾燥濾餅。所述方法可進一步包含使濾餅再結晶。另外或替代地，所述方法可進一步包含：（i）由濾餅重新形成化合物G；及（ii）摻和重新形成的化合物G、順丁烯二酸及溶劑以形成結晶鹽。

本發明進一步提供包括本文所揭示之結晶鹽及一種或多種賦形劑的調配物。在一些實施例中，所述調配物可為液體調配物。在一些情況下，所述調配物可為凍乾調配物，其中凍乾調配物可復原至液態形式。在一些情況下，結晶鹽以按結晶鹽之游離鹼之重量計約1 mg/ml至約150 mg/ml，或約10 mg/ml至約70 mg/ml，或約30 mg/ml至約50 mg/ml範圍內之濃度存在於液體或復原凍乾調配物中。

在一些實施例中，調配物中之一種或多種賦形劑選自由以下各者組成之群：界面活性劑、張力劑、緩衝液及其組合。在一些情況下，凍乾調配物可視情況包含低溫保護劑、膨化劑或兩者。在各種實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯、聚乙二醇蓖麻油、聚(伸烷基)二醇、辛醯基己醯基聚乙二醇甘油酯、聚氧化烯嵌段共聚物及其組合。在各種情況下，張力劑為鹽、多元醇或其組合。在一些情況下，液體調配物或復原凍乾調配物為等張的。在一些實施例中，緩衝液選自由以下各者組成之群：檸檬酸鹽、磷酸鹽、組胺酸、丁二酸鹽、乙酸鹽、順丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽及其組合。在各種情況下，液體調配物或復原凍乾調配物展現在約3.0至約8.0，或約4.0至約6.5範圍內之pH。在各種實施例中，液體調配物或復原凍乾調配物適於非經腸投與至個體（例如人類）。在一些情況下，非經腸投與可為靜脈內、肌肉內、腹膜內或皮下。舉例而言，非經腸投與可為皮下。在一些實施例中，調配物展現至少55%，或至少60%，或至少65%之生物利用率。

本發明之另一態樣提供一種抑制細胞之免疫蛋白酶體之方法，其包括使細胞與本文所揭示之結晶鹽或其調配物接觸。在一些實施例中，免疫蛋白酶體LMP7經抑制。在一些情況下，接觸為活體內的。在各種實施例中，所述接觸包括投與至罹患與異常免疫蛋白酶體活性相關的病症之個體。在一些實施例中，所述病症為自體免疫疾病或發炎。在一些情況下，所述疾病為牛皮癬、皮膚炎、全身性硬皮病、硬化症、克羅恩氏病（Crohn's disease）、潰瘍性結腸炎、呼吸窘迫症候群、腦膜炎、腦炎、葡萄膜炎、結腸炎、絲球體腎炎、濕疹、哮喘、慢性發炎、動脈粥樣硬化、白細胞黏著缺乏症、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡症（SLE）、糖尿病、多發性硬化症、雷諾氏症候群（Reynaud's syndrome）、自體免疫甲狀腺炎、過敏性腦脊髓炎、休格連氏症候群（Sjogren's syndrome）、幼年發作糖尿病、肺結核、類肉瘤病、多發性肌炎、肉芽腫、血管炎、惡性貧血（阿狄森氏病（Addison's disease））、涉及白細胞血球滲出之疾病、中樞神經系統（CNS）發炎病症、多器官損傷症候群、溶血性貧血、重症肌無力、抗原-抗體複合物介導之疾病、抗腎小球基底膜疾病、抗磷脂症候群、過敏性神經炎、格雷夫氏病（Graves' disease）、蘭伯特-伊頓重肌無力症候群（Lambert-Eaton myasthenic syndrome）、大皰性類天疱瘡、天疱瘡、自體免疫多內分泌病變、萊特爾氏病（Reiter's disease）、全身肌僵直症候群、貝赫切特疾病（Beheet disease）、巨大細胞動脈炎、免疫複合物性腎炎、IgA腎病、IgM多發性神經病、免疫性血小板減少性紫癜（ITP）或自體免疫血小板減少。在各種情況下，所述病症為狼瘡、狼瘡性腎炎、類風濕性關節炎、糖尿病、硬皮病、僵直性脊椎炎、牛皮癬、多發性硬化症、橋本氏病（Hashimoto's disease）、腦膜炎或發炎性腸病。

對於本領域中一般熟習此項技術者而言，將自以下詳細描述之審閱而清楚其他態樣及優勢。儘管本文所揭示之方法易受各種形式實施例的影響，但下文之描述包含特定實施例，其中理解揭示內容為說明性的且不意欲將本發明限於本文所描述之特定實施例。

本文提供適用作蛋白酶體抑制劑之(2S ,3R )-N -[(2S)-3-(環戊-1-烯-1-基)-1-[(2R )-2-甲基環氧乙烷-2-基]-1-側氧基丙-2-基]-3-羥基-3-(4-甲氧基苯基)-2-[(2S )-2-[2-(嗎啉-4-基)乙醯胺基]丙醯胺基]丙醯胺（「化合物G」）之新穎結晶鹽形式及其水合物：

（G）。

如本文所揭示之化合物G之結晶鹽形式為在溶液中，甚至在較高濃度下可溶性且穩定的。因而，化合物G之結晶鹽形式適用於適於例如非經腸投與之醫藥調配物。化合物G之鹽之水合物亦適用於醫藥調配物。

如本文所使用，術語「結晶」係指組成原子、分子或離子在三維中以規律有序重複模式配置的固體。

如本文所使用，術語「水合物」係指含有物質與水之間的締合的物質之形式。水合物可為結晶的。如本文所使用，術語「單水合物」係指每一個基質分子含有一個水分子之水合物。

術語「預防性或治療性」治療為此項技術中公認的且包含向宿主投與目標組合物中之一或多者。若在臨床表現非所需病狀（例如宿主動物之疾病或其他非所需病況）之前投與目標組合物，則治療為預防性的（亦即，其保護宿主免於出現非所需病狀），而若在表現非所需病狀之後投與目標組合物，則治療為治療性的（亦即，意欲減少、改善或穩定現有非所需病狀或其副作用）。

相對於治療之目標方法的「治療有效量」之化合物係指根據待治療之病症或病狀之臨床上可接受的標準或美化目的，例如在適用於任何醫學治療之合理的效益/風險比率下，當作為所需給藥方案（向患者，例如人類）之部分投與時，緩解症狀、改善病狀或減緩疾病病狀發作的製劑中之化合物的量。

如本文所使用，術語「治療（treating）」或「治療（treatment）」包含以改善或穩定個體病狀之方式逆轉、減少或遏制病狀之症狀、臨床症狀及基本病變。

本文所揭示之化合物可藉由其化學結構及/或本文之化學名稱鑑別。當化學結構及化學名稱衝突時，化學結構決定化合物之身分。

除非另外指示，否則本說明書中使用之術語及縮寫包含對於相關領域中之彼等術語及縮寫而言正常及慣用的含義。

由於本發明之成分不限於本文所揭示之特定實施例或態樣，因此本發明向本領域中一般熟習此項技術者提供包含變化及修改的額外實施例，以適應於各種用途及狀況。舉例而言，對本文所描述之材料、合成方法或程序之變化及修改將為一般技術者顯而易見。

當本文所使用之範圍用於諸如分子量之物理特性或諸如化學式之化學特性時，意欲包含本文中範圍及特定實施例的所有組合與子組合。化合物G之結晶鹽及其水合物

在一個態樣中，本發明提供具有以下結構之化合物G之結晶鹽：

，其中X^- 為相對離子。X^- 之實例包含例如

（「順丁烯二酸鹽」）、

（「反丁烯二酸鹽」）、

（「草酸鹽」）、

或

（「蘋果酸鹽」）、SO₄ ^2- （硫酸鹽）、

（「甲磺酸鹽」）、

（「2-萘磺酸鹽」）、PO₄ ^3- （「磷酸鹽」）、鹵化物（例如氯化物、溴化物、碘化物、氟化物）、

（「酒石酸鹽」）、

或

（「檸檬酸鹽」）、

（「甲苯磺酸鹽」）、

（「丙酸鹽」）、

（「苯甲酸鹽」）。在一些實施例中，X可為二階陰離子（X^2- ）。在此等實施例中，可用與化合物G之兩個分子中之每一者形成離子鍵之一個X^2- 分子形成橋連鹽：

。

在另一態樣中，本發明提供化合物G之水合物，諸如化合物G之單水合物或化合物G之鹽水合物。化合物G之單順丁烯二酸鹽及水合物

在一些實施例中，X^- 為順丁烯二酸鹽。在此等實施例中，化合物G之結晶鹽可為單順丁烯二酸鹽（展示於下）。化合物G之單順丁烯二酸鹽具有586.7 g/mol之分子量、5之pKa，且呈現為白色至黃色固體。化合物G之單順丁烯二酸鹽展現超過100 mg/ml之較高水溶解度。此類較高溶解度為有利的，因為其允許形式A以較高濃度用於非經腸醫藥組合物中。

單順丁烯二酸鹽之形成為驚人的，因為順丁烯二酸具有兩個酸性質子，其中之每一者可與化合物G上的嗎啉基形成離子鍵，從而形成橋連的順丁烯二酸鹽（展示於下）。然而，形成單順丁烯二酸鹽而非橋連化合物，不管在其製備期間使用0.5:1莫耳比或1:1莫耳比之順丁烯二酸與化合物G。因此，單順丁烯二酸鹽可在製造期間可靠地結晶，不管所使用之順丁烯二酸起始材料之比率及在其製備期間順丁烯二酸添加至化合物G中時形成的反應混合物之非均質性。

單順丁烯二酸鹽（形成的）橋連順丁烯二酸鹽（未形成的）

化合物G（結晶）之單順丁烯二酸鹽優於化合物G（非晶形），此不僅歸因於其結晶度，且亦歸因於其具有提高的水溶性。舉例而言，化合物G之單順丁烯二酸鹽在環境溫度（例如20℃至25℃）下展現超過100 mg/ml之水溶性。相比之下，化合物G於水中之溶解度僅為8.9 mg/ml。參見化合物G之額外溶解度數據之下表1及化合物G之單順丁烯二酸鹽之額外溶解度數據之下表2。表1.化合物G（非晶形）之溶解度

表2.化合物G（結晶）之單順丁烯二酸鹽之溶解度數據

化合物G之單順丁烯二酸鹽於水中之較高水溶解度為驚人的，因為結晶鹽與非晶形式（化合物G）相比在熱力學上更穩定，且因此預期將具有較低水可溶性。此外，相比於其他相對離子，諸如反丁烯二酸鹽，已知的化合物（例如阿普洛爾（alprenolol）及哌唑嗪（prazosin））之順丁烯二酸鹽展現降低的溶解度。參見例如Olovson等人,《藥理學與毒理學學報（Acta Pharmacol Toxicol）》 58(1):55-60 (1986)及Kumar等人,《AAPS醫藥科學技術（AAPS PHarmSciTech）》 14(1):141-150 (2013)。

化合物G之單順丁烯二酸鹽可自例如乙酸乙酯（「形式A」）、95%乙醇或3%水/丙酮中結晶以形成單水合物（「形式B」）、丙酮（「形式C」）、乙腈（「形式D」）、異丙醇（「形式E」）或MeOH/MTBE（「形式F」）。此等形式中之每一者可藉由下文所描述之參數。各形式可藉由X射線粉末繞射（「XRPD」）、差異掃描熱量測定（「DSC」）或熱解重量分析（「TGA」）表徵，各自如下文方法部分中所描述。在DSC及TGA中進行之晶體形式之脫水為受實驗參數影響的動力學事件。

形式A（自乙酸乙酯中結晶）。形式A之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約6.9、17.3及17.8±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。形式A之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約4.9、6.8、6.9、7.7、17.2及17.6±0.2° 2θ處具有峰之XRPD圖案。形式A視情況之特徵亦可進一步在於使用Cu Kα輻射，在約10.9、12.4、13.5、14.2、16.1、16.4、18.5、21.0、22.0、23.4、23.7、24.5及25.2±0.2° 2θ處具有額外峰之X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，形式A可藉由實質上如圖1中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。

另外或替代地，形式A可藉由如方法部分中所闡述獲得之DSC表徵。當在鋁盤中加熱形式A（自乙酸乙酯中結晶）時，形式A可藉由具有約135℃至約150℃範圍內之起始之脫水吸熱的DSC熱分析圖表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式A加熱約30℃時，形式A之特徵可在於具有約148℃之起始之熔融事件及在約152℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖2中所示（自乙酸乙酯中結晶）。在一些實施例中，形式A可藉由實質上如圖2中所描繪之DSC熱分析圖表徵（自乙酸乙酯中結晶）。

另外或替代地，形式A可藉由如方法部分中所闡述獲得之TGA表徵。形式A之特徵可在於約1.5%至約2.5%範圍內之重量損失與約10℃至約30℃範圍內之起始溫度。舉例而言，形式A（自乙酸乙酯中結晶）之特徵可在於約0.8%之重量損失，其中在約34℃下開始，如圖3中所描繪。在一些實施例中，形式A（自乙酸乙酯中結晶）可藉由實質上如圖3中所描繪之TGA描繪圖表徵。

另外或替代地，形式A可藉由動態蒸汽吸附（「DVS」）表徵。舉例而言，當進行DVS時，如方法部分中所描述，在約40%與約95%之間的相對濕度下，形式A表明總重量增加約3.5 wt.%，如圖4中所描繪。在濕度範圍內，基於每莫耳形式A大約一莫耳水之吸收、在脫水後其可逆性、較低程度滯後及在低於熔融事件之溫度範圍下圖6（但不在圖2中）中之脫水吸熱之存在，基於濕度條件，形式A理解為在形式A之無水與水合物形式之間易於相互轉變。無水狀態可使用具有不佳水互溶性（諸如乙酸乙酯）之溶劑結晶。水合物版本可使用含有水之溶劑（諸如95%乙醇/5%水或3%丙酮/水）結晶。形式之間的相互轉化可經由可控制的濕度曝露在結晶後獲得。

形式B（自95%乙醇中結晶之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）。在一些實施例中，形式B（自95%乙醇中結晶）之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約6.1、6.6、7.2、7.7、9.4、9.9、10.8、12.8、14.5、16.0、16.4、17.0、17.4、18.4、18.8、19.8、20.6、21.8、23.4、26.6、27.0及42.0±0.2° 2θ處具有峰之XRPD。在一些情況下，形式B（自95%乙醇中結晶）可藉由實質上如圖5中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。另外或替代地，形式B（自95%乙醇中結晶）可藉由如方法部分中所闡述之DSC表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式B（自95%乙醇中結晶）加熱約30℃時，形式B（自95%乙醇中結晶）之特徵可在於具有約148℃之起始之熔融事件及在約152℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖6中所示。詳言之，形式B（自95%乙醇中結晶）可藉由實質上如圖6中所描繪之DSC熱分析圖表徵。形式B（化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）亦可自3%水/丙酮中結晶。在此等實施例中，形式B之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約7.2、18.4及22.0±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。形式B（自3%水/丙酮中結晶）之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約6.8、7.2、18.4、6.6、13.6、22.0、17.4、14.5、18.0及5.0±0.2° 2θ處具有峰之XRPD圖案。在一些實施例中，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可藉由實質上如圖13中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。在一些實施例中，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可經受進一步處理及乾燥以形成殘餘物，如實例9中所描述。如圖14及15中所示，乾燥條件不影響繞射圖案。另外或替代地，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可藉由如方法部分中所闡述之DSC表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式B（自3%水/丙酮中結晶）加熱約30℃時，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可藉由分別如實例9中所描述及圖16、17及18中所描繪之DSC、TGA及DVS表徵。在一些實施例中，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可藉由實質上如圖17中所描繪之DSC熱分析圖表徵。另外或替代地，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可藉由如方法部分中所描述之TGA表徵。在一些實施例中，形式B（自3%水/丙酮中結晶）可藉由實質上如圖17中所描繪之TGA描繪圖表徵。

形式C（自丙酮中結晶）。形式C之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約7.4、13.2及20.1±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。形式C之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約6.6、13.2、7.4、20.1、13.6、6.9、16.9、3.7、17.9及19.9±0.2° 2θ處具有峰之XRPD圖案。在一些實施例中，形式C可藉由實質上如圖7中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。另外或替代地，形式C可藉由如方法部分中所闡述之DSC表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式C加熱約30℃時，形式C之特徵可在於具有約142℃之起始之熔融事件及在約159℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖8中所示。詳言之，形式C可藉由實質上如圖8中所描繪之DSC熱分析圖表徵。另外或替代地，形式C可藉由如方法部分中所描述之TGA表徵。因此，形式C之特徵可在於約29℃至130℃之約6.0%之重量損失，如圖8中所描繪。在一些實施例中，形式C可藉由實質上如圖8中所描繪之TGA描繪圖表徵。

形式D（自乙腈中結晶）。形式D之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約4.9、7.7、10.9、12.4、13.6及15.3±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。形式D之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約6.8、4.9、17.4、15.3、7.7、3.4、17.7、13.6、12.4及10.9±0.2° 2θ處具有峰之XRPD圖案。在一些實施例中，形式D可藉由實質上如圖9中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。另外或替代地，形式D可藉由如方法部分中所闡述之DSC表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式D加熱約30℃時，形式D之特徵可在於具有約149℃之起始之熔融事件及在約152℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖10中所示。詳言之，形式D可藉由實質上如圖10中所描繪之DSC熱分析圖表徵。另外或替代地，形式D可藉由如方法部分中所描述之TGA表徵。因此，形式D之特徵可在於約27℃至130℃之約0.3%之重量損失，如圖10中所描繪。在一些實施例中，形式D可藉由實質上如圖10中所描繪之TGA描繪圖表徵。

形式E（自異丙醇中結晶）。形式E之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約6.4、7.3及19.8±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。形式E之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約6.5、3.3、7.3、19.8、6.8、16.5、12.1、21.5、4.0及13.0±0.2° 2θ處具有峰之XRPD圖案。在一些實施例中，形式E可藉由實質上如圖11中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。另外或替代地，形式E可藉由如方法部分中所闡述之DSC表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式E加熱約30℃時，形式E之特徵可在於具有約138℃之起始之熔融事件及在約148℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖12中所示。詳言之，形式E可藉由實質上如圖12中所描繪之DSC熱分析圖表徵。另外或替代地，形式E可藉由如方法部分中所描述之TGA表徵。因此，形式E之特徵可在於約32℃至99℃之約0.9%之重量損失，如圖12中所描繪。在一些實施例中，形式E可藉由實質上如圖12中所描繪之TGA描繪圖表徵。

形式F（自MeOH/MTBE中結晶）。形式F之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約6.3、19.0及19.6±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。形式F之特徵亦可在於使用Cu Kα輻射，在約6.3、7.1、19.0、17.5、19.6、17.9、22.0、13.5、18.2及15.5±0.2° 2θ處具有峰之XRPD圖案。在一些實施例中，形式F可藉由實質上如圖19中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。另外或替代地，形式F可藉由如方法部分中所闡述之DSC表徵。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式F加熱約30℃時，形式F之特徵可在於具有約128℃之起始之熔融事件及在約135℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖20中所示。詳言之，形式F可藉由實質上如圖20中所描繪之DSC熱分析圖表徵。另外或替代地，形式F可藉由如方法部分中所描述之TGA表徵。因此，形式F之特徵可在於約32℃至99℃之約1.4%之重量損失，如圖20中所描繪。在一些實施例中，形式F可藉由實質上如圖20中所描繪之TGA描繪圖表徵。化合物G之單反丁烯二酸鹽

在一些實施例中，X^- 為反丁烯二酸鹽。在此等實施例中，化合物G之結晶鹽可為單反丁烯二酸鹽（展示於下）。化合物G之單反丁烯二酸鹽之特異性結晶形式為形式G。

單反丁烯二酸鹽

形式G可藉由下文所描述之參數中之一或多者表徵。

形式G之特徵可在於使用Cu Kα輻射，在約6.4、7.2、13.8、16.0、17.4、18.5、18.7、20.0、20.9、21.9、24.5及25.8±0.2° 2θ處具有峰之如方法部分中所闡述獲得之XRPD圖案。在實施例中，形式G可藉由實質上如圖21中所描繪之X射線粉末繞射圖表徵。

另外或替代地，形式G可藉由DSC表徵。如方法部分中所闡述獲得DSC熱分析圖。形式G之脫水為受實驗參數影響之動力學事件。因此，形式G之特徵可在於當在捲曲鋁盤中加熱形式G時，具有約75℃至約90℃範圍內之起始之脫水吸熱之DSC熱分析圖。舉例而言，在實施例中，當以約10℃/min之速率將形式G加熱約25℃時，形式G之特徵可在於具有約82℃之起始之脫水吸熱及在約101℃下之峰的DSC熱分析圖，如圖22中所示。在一些實施例中，形式G可藉由實質上如圖22中所描繪之DSC熱分析圖表徵。化合物G之草酸鹽

在一些實施例中，X^- 為草酸鹽。在一些情況下，化合物G之結晶鹽可為單草酸鹽。在各種情況下，草酸鹽與兩種不同化合物G分子上之嗎啉基反應以形成橋連鹽。化合物G之草酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之蘋果酸鹽

在一些實施例中，X^- 為蘋果酸鹽。在一些情況下，化合物G之結晶鹽可為單蘋果酸鹽。在各種情況下，蘋果酸鹽與兩種不同化合物G分子上之嗎啉基反應以形成橋連鹽。化合物G之蘋果酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之硫酸鹽

在一些實施例中，X^- 為硫酸鹽。化合物G之硫酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之甲磺酸鹽

在一些實施例中，X^- 為甲磺酸鹽。化合物G之甲磺酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之2-萘磺酸鹽

在一些實施例中，X^- 為2-萘磺酸鹽。化合物G之2-萘磺酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之磷酸鹽

在一些實施例中，X^- 為磷酸鹽。化合物G之磷酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之鹵化鹽

在一些實施例中，X^- 為鹵化物（例如氯化物、溴化物、碘化物、氟化物）。化合物G之鹵化鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之酒石酸鹽

在一些實施例中，X^- 為酒石酸鹽。化合物G之酒石酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之檸檬酸鹽

在一些實施例中，X^- 為檸檬酸鹽。化合物G之檸檬酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之甲苯磺酸鹽

在一些實施例中，X^- 為甲苯磺酸鹽。化合物G之甲苯磺酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之丙酸鹽

在一些實施例中，X^- 為丙酸鹽。化合物G之丙酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之苯甲酸鹽

在一些實施例中，X^- 為苯甲酸鹽。化合物G之苯甲酸鹽可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。化合物G之鹽水合物

在一些實施例中，本發明提供化合物G之鹽水合物或化合物G之游離鹼單水合物。化合物G之鹽水合物或游離鹼單水合物可為結晶的，且可藉由方法部分中下文所描述之參數中之一或多者（例如XRPD、DSC、TGA及/或DVS）表徵。製備化合物G之結晶鹽、水合物及鹽水合物之方法

化合物G之結晶鹽、水合物及鹽水合物可在結晶技術中已知的多種方法中形成。化合物G之結晶鹽之以下論述可適用於形成結晶鹽水合物及游離鹼化合物G之結晶水合物。

在一些實施例中，將化合物G（非晶形式）與具有X^- 相對離子之對應的酸HX（例如順丁烯二酸、反丁烯二酸、鹽酸、草酸、硫酸、磷酸、蘋果酸、甲磺酸、2-萘磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲苯磺酸、丙酸、苯甲酸）在溶劑中摻和以形成懸浮液。化合物G與HX之莫耳比可在約1:05至約1:2範圍內，諸如約1:1。

添加至化合物G及HX中之溶劑可為任何溶劑，其中可形成所需結晶鹽。適合的溶劑包含（但不限於）甲醇（「MeOH」）、乙醇（「EtOH」）、異丙醇（「IPA」）、乙酸乙酯（「EtOAc」）、乙酸異丙酯（「IPAc」）、四氫呋喃（「THF」）、甲基第三丁基醚（「MTBE」）、丙酮/正庚烷、丙酮、二乙醚（「Et2O」）/EtOAc、己烷/EtOAc、MTBE/EtOAc、甲苯、1,4-二噁烷、乙腈（「ACN」）、1-丁醇、前述之水性混合物及其組合。在一些實施例中，溶劑包含EtOAc、IPAc、EtOH、其水性混合物或其組合。舉例而言，溶劑可為EtOAc。

摻和步驟可在約0℃至80℃，或約30℃至70℃，或約40℃至60℃範圍內之溫度（例如約0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80℃）下進行。在一些情況下，摻和步驟在50℃下進行。

摻和步驟可進行至多約6小時，或至多約5小時，或至多約4小時，或至多約3小時，或至多約2小時，或至多約1小時之時間段。在一些實施例中，摻和步驟進行至少15分鐘，或至少30分鐘，或至少45分鐘，或至少1小時，或至少2小時，或至少3小時，或至少4小時，或至少5小時。在各種情況下，摻和步驟進行約1小時至約6小時，或約4小時至約6小時，或約3小時至約5小時。

化合物G之結晶鹽可藉由使懸浮液冷卻至約-10℃至約10℃，或至約-5℃至約5℃，或至約0℃來自懸浮液中分離出。在一些實施例中，可過濾冷卻的懸浮液以形成濾餅。可隨後視情況洗滌、乾燥濾餅或兩者。

在一些情況下，化合物G之結晶鹽藉由再結晶純化。在各種情況下，藉由以下純化化合物G之結晶鹽：（i）由濾餅重新形成化合物G，及（ii）摻和重新形成的化合物G與HX及溶劑以重新形成化合物G之結晶鹽。

如以下實例部分中所表明，已鑑別出多種溶劑適用於以良好產率及純度製備化合物G之結晶鹽，諸如化合物G之單順丁烯二酸鹽。醫藥組合物及化合物G之結晶鹽之投與

本發明之另一態樣提供包含本文所描述之結晶鹽及一種或多種醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物（通篇替代地稱作調配物）。片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷之範疇內適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相匹配的彼等配位體、物質、組合物及/或劑型。可針對任何投與形式調配本文所描述之組合物。

在一些實施例中，針對非經腸投與，調配調配物。如本文所使用之片語「非經腸投與（parenteral administration及administered parenterally）」意謂除經腸及局部投與之外的投與模式，通常藉由注射，且包含（但不限於）靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊柱內及腦幹內注射及輸注。舉例而言，非經腸投與可包含靜脈內、肌肉內、腹膜內或皮下注射。非經腸醫藥調配物可為可復原至用於非經腸注射之液體的液體調配物或凍乾調配物。

本文所描述之化合物G之結晶鹽之較高溶解度使所述鹽適於皮下投與。皮下投與為投與之有利形式，因為此等調配物可在家自投與（而非必須到醫學設施以便進行輸注），其適宜患者，且與其他類型的液體投與（例如靜脈內或肌肉內）相比，其亦具有更少副作用（例如更小的注射位點疼痛及瘀傷）。皮下調配物之便利性及較低副作用產生更好的患者順應性。然而，皮下投與具有約0.3至約1.5 mL，例如約1.0 mL之實際注射體積限制。因此，非活性成分通常需要包含於具有較高濃度之原料藥之皮下調配物中以遞送治療有效量之原料藥。舉例而言，用於治療自體免疫病症之約10 mg至約100 mg 化合物G之遞送轉化成約6 mg/ml至約100 mg/ml之皮下注射濃度。因此，本文所揭示之化合物G結晶鹽之較高溶解度（超過100 mg/ml）使其適於皮下投與。

因此，在一些實施例中，醫藥調配物包含約0.1 mg/ml至約200 mg/ml，或約1 mg/ml至約150 mg/ml，或約10 mg/ml至約70 mg/ml，或約30 mg/ml至約50 mg/ml，或約100 mg/ml至約200 mg/ml，或約75 mg/ml至約125 mg/ml範圍內之濃度的化合物G之結晶鹽。舉例而言，濃度可為約30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150 mg/ml。

在一些實施例中，一種或多種賦形劑包含界面活性劑、張力劑、緩衝液或其組合。在實施例中，當調配物為凍乾調配物時，一種或多種賦形劑可進一步包含低溫保護劑、膨化劑或兩者。適合的低溫保護劑包含（但不限於）葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇、膠狀矽二氧化物、麥芽糖、聚(乙烯基吡咯啶酮)、果糖、葡聚糖、甘油、聚(乙烯醇)、甘胺酸、羥丙基-β-環糊精及明膠。適合的膨化劑包含（但不限於）糖，諸如甘露糖醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、葡萄糖及棉子糖；胺基酸，諸如精胺酸、甘胺酸及組胺酸；及聚合物，諸如葡聚糖及聚乙二醇。

一種或多種賦形劑可包含界面活性劑，諸如非離子界面活性劑。歸因於運送壓力及存儲，非離子界面活性劑可適用於穩定調配物而免於降解。用於包含在醫藥調配物中之適合的界面活性劑包含（但不限於）聚山梨醇酯及聚醚。舉例而言，界面活性劑可包含聚山梨醇酯（例如聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20）、聚乙二醇蓖麻油、聚(伸烷基)二醇（例如聚乙二醇、聚丙二醇）、辛醯基己醯基聚氧乙烯甘油酯、聚環氧烷嵌段共聚物（例如聚氧化乙烯-聚氧化丙烯）及其組合。在一些實施例中，界面活性劑可進一步包含共溶劑，諸如N-甲基-2-吡咯啶酮（「NMP」）。

一種或多種賦形劑可包含張力劑（有時稱為等張劑）。張力劑可包含於皮下調配物中以確保調配物具有匹配患者細胞（例如250至350 mOsm）之重量莫耳滲透濃度以使注射位點處的組織損傷降至最低或防止組織損傷。張力劑包含鹽及多元醇（例如糖，諸如非還原性糖、糖醇及糖酸）。確切而言，所涵蓋的張力劑包含（但不限於）NaCl、KCl、葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、棉子糖、甘露糖醇、木糖醇、半乳糖醇、葡萄糖醇、肌醇、山梨糖醇、海藻糖及丙三醇。因此，本文亦提供等張的醫藥調配物。

一種或多種賦形劑可包含緩衝液。醫藥學上可接受之緩衝劑包含（但不限於）檸檬酸鹽、磷酸鹽、組胺酸、丁二酸鹽、乙酸鹽、順丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽及其組合。在一些實施例中，調配物之pH在約3.0至8.0，或約4.0至7.0，或約4.0至6.5範圍內。

可向個體，諸如人類個體或動物個體投與本文所揭示之結晶鹽之調配物。在一些實施例中，此等調配物展現至少約45%，或至少約50%，或至少約55%，或至少約60%，或至少約65%，或至少約70%之生物利用率。在一些情況下，本文所揭示之調配物展現至多約90%，或至多約85%，或至多約80%，或至多約75%，或至多約65%，或至多約60%之生物利用率。舉例而言，調配物可展現約45%至約90%，或約50%至約70%，或約50%至約65%之生物利用率。

本文所揭示之結晶鹽亦可調配至具有形式且包含下文詳細描述之賦形劑之醫藥組合物中。

在一些實施例中，醫藥組合物可包含醫藥學上可接受之載劑。如本文所使用之片語「醫藥學上可接受之載劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。如本文所使用，語言「醫藥學上可接受之載劑」包含緩衝劑、注射用無菌水、溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑及抗真菌劑、等張延緩劑及吸收延緩劑及其類似物，與醫藥投與相容。各載劑在與調配物之其他成分相容且對患者無害的意義上必須為「可接受的」。可充當醫藥學上可接受之載劑之材料之一些實例包含：（1）糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；（2）澱粉，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉及經取代或未經取代之β-環糊精；（3）纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；（4）粉末狀黃蓍膠；（5）麥芽；（6）明膠；（7）滑石；（8）賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；（9）油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；（10）二醇，諸如丙二醇；（11）多元醇，諸如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；（12）酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；（13）瓊脂；（14）緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；（15）褐藻酸；（16）無熱原質水；（17）等張生理鹽水；（18）林格氏溶液；（19）乙醇；（20）磷酸鹽緩衝溶液；及（21）醫藥調配物中採用之其他無毒可相容物質。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物為非熱解的，亦即，在投與患者時不誘導顯著溫度升高。

濕潤劑、乳化劑及潤滑劑（諸如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂）以及著色劑、脫模劑、塗佈劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於組合物中作為賦形劑。

作為賦形劑之醫藥學上可接受之抗氧化劑之實例包含：（1）水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉及其類似物；（2）油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基大茴香醚（BHA）、丁基化羥基甲苯（BHT）、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及其類似物；及（3）金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。

醫藥組合物亦可含有佐劑，諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。可藉由包含各種抗菌及抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸及類似物來預防微生物作用。將張力調節劑（諸如糖）及其類似物包含在組合物內亦可為合乎需要的。另外，可注射醫藥形式之延長吸收可藉由包含延遲吸收之藥劑（諸如單硬脂酸鋁及明膠）來達成。

在一些情況下，為延長本文所提供之一或多種化合物之效果，需要減緩自皮下或肌肉內注射吸收化合物。舉例而言，非經腸投與之化合物之延遲吸收可藉由將化合物溶解或懸浮於油性媒劑中來實現。

組合物在製造及儲存條件下應為穩定的，且必須針對微生物（諸如細菌及真菌）之污染作用加以保存。微生物作用之預防可藉由各種抗菌劑及抗真菌劑達成，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、抗壞血酸、硫柳汞及其類似物。在許多情況下，組合物中將較佳包含等張劑（例如糖）、多元醇（諸如甘露醇、山梨醇）及氯化鈉。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中包含延遲吸收劑（例如單硬脂酸鋁及明膠）來達成。

無菌可注射溶液可藉由如下方法來製備：將適當溶劑中之所需量之活性化合物與上文所列舉之成分中之一種或組合合併，並視需要，繼而進行過濾滅菌。一般而言，藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質及來自上文所列舉之彼等成分之所需其他成分的無菌媒劑中來製備分散液。在用於製備無菌可注射溶液的無菌散劑之情況下，製備方法為冷凍乾燥（凍乾），其產生活性成分加上來自其先前無菌過濾溶液之任何額外所需成分的散劑。

可藉由在生物可降解聚合物（諸如聚乳酸交酯-聚乙交酯）中形成本文所提供之化合物之微膠囊或奈米膠囊基質來製得可注射積存形式。視藥物與聚合物之比率及所用特定聚合物之性質而定，可控制藥物釋放之速率。其他生物可降解聚合物的實例包含聚(原酸酯)及聚(酸酐)。亦藉由將藥物包覆在與身體組織相容之脂質體、微乳液或奈米乳液中來製備積存可注射調配物。

在一個實施例中，治療性結晶鹽用將保護治療性化合物免於自身體快速消除之載劑來製備，所述載劑諸如控制釋放配製物，包含植入物及微囊封遞送系統。可使用可生物降解、生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。此類調配物可使用標準技術製備，或商業獲得（例如獲自Alza公司及Nova製藥公司）。脂質體懸浮液（包含靶向具有針對細胞抗原之單株抗體之所選細胞的脂質體）亦可用作醫藥學上可接受之載劑。其可根據本領域中熟習此項技術者已知之方法製備，例如如以全文引用之方式併入本文中的美國專利第4,522,811號中所描述。

醫藥組合物可與投與說明書一起包含於容器、包裝或分配器中。使用化合物G之結晶鹽之方法

本文所揭示之結晶鹽可充當免疫蛋白酶體（iP）之抑制劑。在一些情況下，本文所揭示之結晶鹽抑制iP次單元LMP7。LMP7活性可抑制至少10%，至少20%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，或至少80%，如實例中如下文所描述之蛋白酶體次單元分析中所量測。一種或多種額外iP次單元可藉由本文所揭示之結晶鹽，諸如LMP2、MECL-1、β1、β2及β5抑制。在各種實施例中，本文所揭示之結晶鹽抑制LMP7及LMP2及MECL-1中之一者或兩者。本文所揭示之化合物可降低細胞介素活性或表現，例如IL-2、MHC-I、IL-6、TNFα及IFN-β中之一或多者。因此，提供方法，其中如本文所揭示之化合物將IL-2、MHC-I、IL-6、TNFα及IFN-β中之一或多者之表現或活性抑制至少10%，至少20%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，或至少80%。

本文進一步提供在細胞中藉由使本文所描述之細胞與結晶鹽或其組合物中之一或多者接觸來抑制免疫蛋白酶體之方法。在一些實施例中，抑制免疫蛋白酶體LMP7次單元。本文所描述之接觸步驟可在活體內或活體外進行。

蛋白酶體抑制之生物學後果為大量的。已提出蛋白酶體抑制作為多種疾病之預防及/或治療，且所述疾病包含（但不限於）神經毒性/退行性疾病、阿茲海默氏病、局部缺血病狀、發炎、自體免疫疾病、HIV、器官移植排斥反應、敗血性休克、抗原呈遞抑制、減少病毒基因表現、寄生蟲感染、與酸中毒相關的病狀、黃斑變性、肺部病狀、肌肉萎縮疾病、纖維化疾病及骨骼及毛髮生長疾病。因此，含有本文所描述之結晶鹽之醫藥調配物提供向患者投與所述鹽以治療此等病狀之手段。

因此，本文所揭示之方法之接觸步驟可包含向遭受與異常免疫蛋白酶體活性相關的病症之個體投與本文所描述之結晶鹽或其組合物中之一或多者。如下文進一步詳細描述，所述病症可為自體免疫疾病或發炎。在一些實施例中，所述疾病可為牛皮癬、皮膚炎、全身性硬皮病、硬化症、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、呼吸窘迫症候群、腦膜炎、腦炎、葡萄膜炎、結腸炎、絲球體腎炎、濕疹、哮喘、慢性發炎、動脈粥樣硬化、白細胞黏著缺乏症、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡症（SLE）、糖尿病、多發性硬化症、雷諾氏症候群、自體免疫甲狀腺炎、過敏性腦脊髓炎、休格連氏症候群、幼年發作糖尿病、肺結核、類肉瘤病、多發性肌炎、肉芽腫、血管炎、惡性貧血（阿狄森氏病）、涉及白細胞血球滲出之疾病、中樞神經系統（CNS）發炎病症、多器官損傷症候群、溶血性貧血、重症肌無力、抗原-抗體複合物介導之疾病、抗腎小球基底膜疾病、抗磷脂症候群、過敏性神經炎、格雷夫氏病、蘭伯特-伊頓重肌無力症候群、大皰性類天疱瘡、天疱瘡、自體免疫多內分泌病變、萊特爾氏病、全身肌僵直症候群、貝赫切特疾病、巨大細胞動脈炎、免疫複合物性腎炎、IgA腎病、IgM多發性神經病、免疫性血小板減少性紫癜（ITP）或自體免疫血小板減少。在一些情況下，所述病症可為狼瘡、狼瘡性腎炎、類風濕性關節炎、糖尿病、硬皮病、僵直性脊椎炎、牛皮癬、多發性硬化症、橋本氏病、腦膜炎或發炎性腸病。

蛋白酶體調控NF-κB，其之後調控涉及免疫及發炎反應之基因。舉例而言，免疫球蛋白輕鏈κ基因、IL-2受體α-鏈基因、I級主要組織相容複合體基因及編碼例如IL-2、IL-6之多種細胞介素基因、粒細胞群落刺激因子及IFN-β（Palombella等人,《細胞（Cell）》 (1994) 78:773-785）之表現需要NF-κB。因此，本文提供影響IL-2、MHC-I、IL-6、TNFα、IFN-β或其他先前提及之蛋白質中之任一者之表現水準之方法，各方法包括向患者投與治療有效量之本文所揭示之結晶鹽或組合物。

本文亦提供治療患者之自體免疫疾病之方法，其包括投與治療有效量之本文所描述之結晶鹽。如本文所使用之「自體免疫疾病」為由個體自身組織產生且針對個體自身組織之疾病或病症。自體免疫疾病之實例包含（但不限於）發炎性反應，諸如發炎性皮膚病，包含牛皮癬及皮膚炎（例如異位性皮炎）；全身性硬皮病及硬化症；與發炎性腸病相關的反應（諸如克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎）；呼吸窘迫症候群（包含成人呼吸窘迫症候群（ARDS））；皮膚炎；腦膜炎；腦炎；葡萄膜炎；結腸炎；絲球體腎炎；過敏病狀，諸如濕疹及哮喘及涉及T細胞浸潤及慢性發炎性反應之其他病狀；動脈粥樣硬化；白細胞黏著缺乏症；類風濕性關節炎；全身性紅斑性狼瘡症（SLE）；糖尿病（例如I型糖尿病或胰島素依賴性糖尿病）；多發性硬化症；雷諾氏症候群；自體免疫甲狀腺炎；過敏性腦脊髓炎；休格連氏症候群；幼年發作糖尿病；及與肺結核、類肉瘤病、多發性肌炎、肉芽腫及血管炎中典型地可見之細胞因子及T淋巴細胞介導之急性及延遲超敏反應相關的免疫反應；惡性貧血（阿狄森氏病）；涉及白細胞血球滲出之疾病；中樞神經系統（CNS）發炎病症；多器官損傷症候群；溶血性貧血（包含（但不限於）冷球蛋白血症或庫姆斯陽性貧血）；重症肌無力；抗原-抗體複合物介導之疾病；抗腎小球基底膜疾病；抗磷脂症候群；過敏性神經炎；格雷夫氏病；蘭伯特-伊頓重肌無力症候群；大皰性類天疱瘡；天疱瘡；自體免疫多內分泌病變；萊特爾氏病；全身肌僵直症候群；貝赫切特疾病；巨大細胞動脈炎；免疫複合物性腎炎；IgA腎病；IgM多發性神經病；免疫性血小板減少性紫癜（ITP）或自體免疫血小板減少。

免疫系統篩檢經病毒感染之自體性細胞，經受致癌轉化或在其表面上存在陌生肽。細胞內蛋白分解產生用於呈遞至T淋巴細胞之較小肽以誘導MHC I級介導之免疫反應。因此，本文提供一種使用本文所提供之結晶鹽或組合物作為用於抑制或改變細胞中之抗原呈遞的免疫調節劑之方法，其包括使細胞曝露於（或向患者投與）本文所描述之化合物。特定實施例包含一種治療患者之移植或移植相關疾病，諸如移植物抗宿主病或宿主抗移植病之方法，其包括投與治療有效量之本文所描述之化合物。如本文所使用之術語「移植」係指用於移植至受體中之衍生自供體之生物材料。移植物包含諸如以下的不同材料，例如分離的細胞，諸如胰島細胞；組織，諸如新生兒之羊膜；骨髓；造血前驅體細胞；眼部組織，諸如角膜組織；及器官，諸如皮膚、心臟、肝臟、脾臟、胰臟、甲狀腺葉、肺臟、腎臟及管狀器官（例如腸道、血管或食道）。管狀器官可用於替換食道、血管或膽管之受損部分。皮膚移植物不僅可用於燒傷，且亦作為受損腸道的敷料或用於使某些缺損（諸如隔疝）閉合。移植物衍生自任何哺乳動物來源，包含人類，無論是否來自死的或活的供體。在一些情況下，供體及受體為同一患者。在一些實施例中，移植物為骨髓或器官，諸如心臟，且移植物之供體及宿主的HLA II類抗原匹配。

蛋白酶體抑制亦與NF-κB活化抑制及p53水準穩定相關。因此，本文所提供之結晶鹽及其組合物亦可用於在細胞培養物中抑制NF-κB活化及穩定p53水準。因為NF-κB為發炎之關鍵調節因子，其為用於消炎劑治療性干預之吸引性靶標。因此，本文所提供之結晶鹽及其組合物可適用於治療與發炎相關的病狀，包含（但不限於）COPD、牛皮癬、哮喘、支氣管炎、氣腫及囊腫性纖維化。

所揭示之結晶鹽及其組合物可用於治療直接藉由蛋白酶體之蛋白分解（諸如肌肉萎縮）功能介導或間接經由藉由諸如NF-κB之蛋白酶體處理之蛋白質介導之病狀。蛋白酶體參與涉及細胞調控（例如細胞週期、基因轉錄及代謝路徑）、細胞間連通及免疫反應（例如抗原呈遞）之蛋白質（例如酶）之快速消除及翻譯後處理。下文論述之特定實例包含β-澱粉狀蛋白及調節蛋白質，諸如細胞週期蛋白及轉錄因子NF-κB。

在一些實施例中，本文提供適用於治療神經退化性疾病及病狀之結晶鹽或其組合物，所述疾病及病狀包含（但不限於）中風、神經系統局部缺血損傷、類神經外傷（例如衝擊性大腦損傷、脊髓損傷及神經系統創傷性損傷）、多發性硬化症及其他免疫介導性神經病（例如格-巴二氏症候群及其變體，急性運動軸突神經病、急性發炎性脫髓鞘多發性神經病及費舍爾症候群）、HIV/AIDS癡呆複合征、軸突切斷、糖尿病神經病變、帕金森病、亨廷頓氏病、細菌、寄生蟲、真菌及病毒腦膜炎、腦炎、血管性癡呆、多梗塞性癡呆、路易體性癡呆、前額葉癡呆（諸如皮克病）、皮層下癡呆（諸如亨廷頓氏或進行性核上麻痹）、局部皮質萎縮症候群（諸如原發性失語）、代謝毒性癡呆（諸如慢性甲狀腺功能低下或B12缺乏症）及由感染（諸如梅毒或慢性腦膜炎）引起之癡呆。

阿茲海默氏病之特徵在於老年斑及大腦血管中之β-澱粉狀蛋白（β-AP）之細胞外沈積。β-AP為衍生自澱粉狀蛋白前驅體（APP）之39至42個胺基酸之肽片段。至少三種APP同功異型物為吾人所知的（695、751及770個胺基酸）。mRNA之替代性拼接產生同功異型物；正常處理影響β-AP序列的一部分，進而防止產生β-AP。據相信，藉由蛋白酶體處理異常蛋白質促進阿茲海默症大腦中之β-AP豐度。大鼠中之APP處理酶含有約十個不同次單元（22 kDa-32 kDa）。25 kDa次單元具有X-Gln-Asn-Pro-Met-X-Thr-Gly-Thr-Ser之N端序列，其與人類巨蛋白因子之β-次單元相同（Kojima, S.等人, 歐洲生物化學學會聯合會（Fed. Eur. Biochem. Soc.）, (1992) 304:57-60）。APP處理酶在Gln15--Lys16鍵處分解；在鈣離子存在下，酶亦在Met-1--Asp1鍵及Asp1--Ala2鍵處分解以釋放β-AP之細胞外結構域。

因此，本文提供一種治療阿茲海默氏病之方法，其包含向患者投與治療有效量之本文所揭示之結晶鹽或其組合物。此類治療包含降低β-AP處理速率，降低β-AP空斑形成速率，降低β-AP產生速率，及減少阿茲海默氏病臨床症狀。

本文亦提供治療惡病質及肌肉消耗性疾病之方法。蛋白酶體使成熟化網織紅細胞及生長纖維母細胞中之多種蛋白質降解。在缺乏胰島素或血清之細胞中，蛋白分解速率幾乎加倍。抑制蛋白酶體減少蛋白分解，進而減少肌肉蛋白質缺失及腎臟或肝臟上的含氮負荷。肽蛋白酶體抑制劑（例如本文所提供之化合物或組合物）適用於治療病狀，諸如慢性傳染病、發熱、肌肉廢用性（萎縮）及去神經、神經損傷、禁食、與酸中毒相關的腎衰竭、腎臟疾病及肝臟衰竭。參見例如Goldberg之美國專利第5,340,736號，其以全文引用之方式併入本文中。治療方法包含：降低細胞中之肌肉蛋白質降解之速率；降低細胞內蛋白質降解之速率；及降低細胞中之p53蛋白質之降解之速率。此等方法中之每一者包含使細胞（活體內或活體外，例如患者之肌肉）與有效量之本文所揭示之醫藥組合物接觸以降低細胞中之肌肉蛋白質降解之速率；降低細胞中之細胞內蛋白質降解之速率；及/或降低細胞中之p53蛋白質之降解之速率。在一些實施例中，所述方法包含向患者投與治療有效量之結晶鹽或本文所揭示之其醫藥組合物。

纖維化為由纖維母細胞之過度增殖生長產生且與TGF-β信號傳導路徑活化相關的疤痕組織之過度及持續形成。纖維化涉及細胞外基質之廣泛沈積且可在幾乎任何組織內或跨越若干不同組織進行。通常，在TGF-β刺激後使靶基因之轉錄活化之細胞內信號傳導蛋白質（Smad）之含量藉由蛋白酶體活性調控。然而，在過度增殖條件中觀測到TGF-β信號傳導組分之加速降解。因此，在某些實施例中，提供一種用於治療過度增殖病狀之方法，所述病狀諸如糖尿病性視網膜病變、黃斑變性、糖尿病性腎病、腎小球硬化、IgA腎病、肝硬化、膽道閉鎖、充血性心臟衰竭、硬皮病、放射線誘發之纖維化及肺臟纖維化（特發性肺纖維化、膠原蛋白血管疾病、類肉瘤病、間質肺病及外源性肺臟病症）。燒傷受害者之治療通常受纖維化妨礙，因此，在一些實施例中，可藉由局部或全身投與來投與本文所提供之化合物以治療燒傷。手術之後的創傷閉合通常與損毀疤痕相關，其可藉由抑制纖維化來預防。因此，在某些實施例中，本文藉由投與本文所揭示之結晶鹽或其組合物來提供一種用於預防或減少疤痕之方法。

藉由蛋白酶體處理之另一蛋白質為NF-κB，其為Rel蛋白質家族之一員。轉錄活化劑蛋白質之Rel家族可分成兩組。第一組需要蛋白分解處理，且包含p50（NF-κB1，105 kDa）及p52（NF-κ2，100 kDa）。第二組不需要蛋白分解處理，且包含p65（RelA、Rel（c-Rel）及RelB）。均二聚體及雜二聚體可藉由Rel家庭成員形成；例如NF-κB為p50-p65雜二聚體。在IκB及p105之磷酸化及泛素化之後，兩種蛋白質分別經降解且處理以產生活性NF-κB，其自細胞質易位至細胞核。泛素化p105亦藉由純化蛋白酶體處理（Palombella等人,《細胞》(1994) 78:773-785）。活性NF-κB與其他轉錄活化劑及例如HMG I（Y）一起形成立體特異性增強子複合物，誘導特定基因之選擇性表現。

NF-κB調控基因涉及免疫及發炎反應及有絲分裂事件。舉例而言，免疫球蛋白輕鏈κ基因、IL-2受體α-鏈基因、I級主要組織相容複合體基因及編碼例如IL-2、IL-6之多種細胞介素基因、粒細胞群落刺激因子及IFN-β（Palombella等人,《細胞》 (1994) 78:773-785）之表現需要NF-κB。一些實施例包含影響IL-2、MHC-I、IL-6、TNFα、IFN-β或其他先前提及之蛋白質中之任一者之表現水準的方法，各方法包含向患者投與治療有效量之本文所揭示之結晶鹽或其組合物。包含p50之複合物為急性發炎及免疫反應之快速介體（Thanos, D.及Maniatis, T.,《細胞》(1995) 80:529-532）。

NF-κB亦參與編碼E-選擇素、P-選擇素、ICAM及VCAM-1之細胞黏附基因之表現（Collins, T.,《實驗室研究（Lab. Invest.）》 (1993) 68:499-508）。在一些實施例中，提供一種用於抑制細胞黏附（例如藉由E-選擇素、P-選擇素、ICAM或VCAM-1介導之細胞黏附）的方法，包含使細胞與有效量之結晶鹽或本文所揭示之其醫藥組合物接觸。在一些實施例中，提供一種用於抑制細胞黏附（例如藉由E-選擇素、P-選擇素、ICAM或VCAM-1介導之細胞黏附）的方法，包含向患者投與治療有效量之本文所揭示之醫藥組合物。

缺血及再灌注損傷導致低氧症，其為氧缺乏達到身體組織之病狀。此病狀導致Iκ-Bα降解提高，進而導致NF-κB活化。其已表明，導致低氧症之損傷之嚴重程度可藉由投與蛋白酶體抑制劑而減小。因此，本文提供一種治療局部缺血病狀或再灌注損傷之方法，其包括向需要此類治療之患者投與治療有效量之本文所提供之結晶鹽或其組合物。此類病狀或損傷之實例包含（但不限於）急性冠狀動脈症候群（易損斑塊）、動脈閉塞疾病（心臟、大腦、外周動脈及血管閉塞）、動脈粥樣硬化（冠狀動脈硬化症、冠狀動脈疾病）、梗塞、心臟衰竭、胰臟炎、心肌肥大、狹窄及再狹窄。

NF-κB亦尤其結合至HIV增強子/啟動子。當相比於mac239之Nef時，pbj14之HIV調節蛋白質Nef之不同之處在於控制蛋白激酶結合之區域中之兩個胺基酸。據相信，蛋白激酶向IκB之磷酸化傳送信號，通過泛素-蛋白酶體路徑觸發IκB降解。在降解之後，NF-κB釋放至細胞核中，因此增強HIV之轉錄（Cohen, J.,《科學（Science）》, (1995) 267:960）。本文提供一種用於抑制或降低患者之HIV感染的方法及一種用於降低病毒基因表現之水準的方法，各方法包含向患者投與治療有效量之本文所揭示之結晶鹽或其組合物。

病毒感染促進多種疾病之病變。諸如持續心肌炎及擴張型心肌症之心臟病狀與柯薩奇病毒（coxsackievirus）B3相關。在經感染之小鼠心臟之比較性全基因組微陣列分析中，在患有慢性心肌炎之小鼠之心臟中特異性蛋白酶體次單元均勻地上調（Szalay等人,《美國病理學雜誌（Am J Pathol）》 168:1542-52, 2006）。一些病毒利用病毒進入步驟中之泛素-蛋白酶體系統，其中病毒自內體釋放至胞溶質中。小鼠肝炎病毒（MHV）屬於冠狀病毒科家族，其亦包含嚴重急性呼吸症候群（SARS）冠狀病毒。Yu及Lai（《病毒學雜誌（J Virol）》 79:644-648, 2005）表明用蛋白酶體抑制劑治療感染有MHV之細胞使得病毒複製降低，此相比於未經處理之細胞，與降低的病毒效價有關。人類B型肝炎病毒（HBV）（肝炎DNA病毒家族之成員）同樣地需要傳播經病毒編碼包封之蛋白質。抑制蛋白酶體降解路徑導致分泌的包膜蛋白之量顯著減少（Simsek等人,《病毒學雜誌》79:12914-12920, 2005）。除HBV以外，其他肝炎病毒（A、C、D及E）亦可利用用於分泌、形態發生及發病機制之泛素-蛋白酶體降解路徑。因此，在某些實施例中，提供一種用於治療病毒感染，諸如SARS或A型、B型、C型、D型及E型肝炎之方法，其包括使細胞與有效量之本文所揭示之結晶鹽或其組合物接觸。在一些實施例中，提供一種用於治療病毒感染，諸如SARS或A型、B型、C型、D型及E型肝炎之方法，其包括向患者投與治療有效量之本文所揭示之結晶鹽或其組合物。

脂多醣（LPS）誘導之細胞因子（諸如TNFα）之過度產生應視為對與敗血性休克相關的處理而言重要的。此外，一般可接受的為藉由LPS活化細胞之第一步驟為LPS結合至特異性膜受體。20S蛋白酶體複合物之α-次單元及β-次單元已鑑別為LPS結合蛋白，表明LPS誘導之信號轉導可為敗血症之治療或預防中重要的治療目標（Qureshi, N.等人, 《自體免疫雜誌（J. Immun.）》 (2003) 171: 1515-1525）。因此，在某些實施例中，如本文所提供之結晶鹽及其組合物可用於抑制TNFα以預防及/或治療敗血性休克。

細胞內蛋白分解產生用於呈遞至T淋巴細胞之較小肽以誘導MHC I級介導之免疫反應。免疫系統篩檢經病毒感染之自體性細胞或經受致癌轉化。一個實施例為用於抑制細胞中之抗原呈遞之方法，其包含使細胞曝露於本文所描述之組合物。在一些實施例中，使細胞與有效量之本文所提供之化合物或組合物接觸以抑制細胞中之抗原呈遞。另一實施例為用於抑制患者之免疫系統（例如抑制移植排斥反應、過敏症、哮喘）之方法，其包含向患者投與治療有效量之本文所描述之組合物。本文所提供之結晶鹽及組合物亦可用於治療自體免疫疾病，諸如狼瘡、類風濕性關節炎、多發性硬化症及發炎性腸病，諸如潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病。

另一實施例為用於改變藉由蛋白酶體或具有多催化性活性之其他Ntn產生的抗原肽之基因譜的方法。舉例而言，若選擇性地抑制20S蛋白酶體之PGPH活性，則與在無任何酶抑制的情況下或在例如蛋白酶體之類胰凝乳蛋白酶活性之選擇性抑制的情況下將產生及呈現相比，不同組抗原肽將藉由蛋白酶體產生且呈遞在細胞表面上的MHC分子中。

某些蛋白酶體抑制劑活體外及活體內阻擋泛素化NF-κB之降解及處理。蛋白酶體抑制劑亦阻擋IκB-α降解及NF-κB活化（Palombella,等人《細胞》(1994) 78:773-785；及Traenckner,等人,《歐洲分子生物學學會雜誌（EMBO J.）》 (1994) 13:5433-5441）。在一些實施例中，提供一種用於抑制IκB-α降解之方法，其包含使細胞與本文所描述之結晶鹽或其組合物接觸。在一些實施例中，使細胞與有效量之結晶鹽或其組合物接觸以抑制IκB-α降解。另一實施例為用於降低細胞、肌肉、器官或患者中之NF-κB之細胞含量的方法，其包含使細胞、肌肉、器官或患者與本文所描述之結晶鹽或其組合物接觸。在一些實施例中，使細胞與有效量之組合物接觸以降低細胞中之NF-κB之細胞含量。

需要蛋白分解處理之其他真核轉錄因子包含一般轉錄因子TFIIA、單純疱疹病毒VP16輔助蛋白（宿主細胞因子）、病毒誘導型IFN調節因子2蛋白質及膜結合固醇調節元件結合蛋白1。

本文進一步提供用於影響週期素依賴性真核細胞週期之方法，其包含使細胞曝露於（活體外或活體內）本文所揭示之組合物。細胞週期蛋白為涉及細胞週期控制的蛋白質。蛋白酶體參與細胞週期蛋白之降解。細胞週期蛋白之實例包含有絲分裂細胞週期蛋白、G1細胞週期蛋白及細胞週期素B。細胞週期蛋白之降解使得細胞能夠結束一個細胞週期階段（例如有絲分裂）且進入另一階段（例如分裂）。據相信，所有細胞週期蛋白均與p34cdc2蛋白激酶或相關激酶相關。蛋白分解靶向信號位於胺基酸42-RAALGNISEN-50（破壞盒）。有跡象表明週期素轉化成易受泛素連接酶影響之形式或週期素特異性連接酶在有絲分裂期間活化（Ciechanover, A.,《細胞》, (1994) 79:13-21）。抑制蛋白酶體抑制了週期素降解，且因此抑制了細胞增殖（Kumatori等人,《美國科學學院學報（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）》(1990) 87:7071-7075）。本文提供一種用於治療患者之增生性疾病（例如牛皮癬或再狹窄）之方法，其包含向患者投與治療有效量之本文所揭示之結晶鹽或其組合物。本文亦提供一種用於治療患者之週期素相關發炎之方法，其包含向患者投與治療有效量之本文所描述之結晶鹽或其組合物。

在另一實施例中，所揭示之組合物適用於治療寄生蟲感染，諸如由原蟲寄生蟲引起的感染。此等寄生蟲之蛋白酶體視為主要涉及細胞分化及複製活動（Paugam等人, 《寄生蟲學趨勢（Trends Parasitol.）》 2003, 19(2): 55-59）。此外，當曝露於蛋白酶體抑制劑時，內阿米巴屬（entamoeba）物質已展示失去成囊能力（Gonzales,等人, 《醫學研究檔案（Arch. Med. Res.）》 1997, 28,規格編號：139-140）。在某些此類實施例中，所揭示之結晶鹽及其組合物適用於治療人類中由選自以下各者之原蟲寄生引起的寄生蟲感染：瘧原蟲屬（Plasmodium sps.）（包含惡性瘧原蟲（P. falciparum）、間日瘧原蟲（P. vivax）、三日瘧原蟲（P. malariae）及卵形瘧原蟲（P. ovale），其引起瘧疾）；錐蟲屬（Trypanosoma sps.）（包含克氏錐蟲（T. cruzi），其引起查加斯病（Chagas' disease）；及布氏錐蟲（T. brucei），其引起非洲昏睡病）；利什曼原蟲屬（Leishmania sps.）（包含艾氏利什曼原蟲（L. amazonesis）、杜氏利什曼原蟲（L. donovani）、嬰兒利什曼原蟲（L. infantum）、墨西哥利什曼原蟲（L. mexicana）等）；肺炎肺囊蟲（Pneumocystis carinii）（已知造成AIDS及其他免疫抑制患者患肺炎之原蟲）；剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）；溶組織內阿米巴（Entamoeba histolytica）；侵入內阿米巴（Entamoeba invadens）及梨形鞭毛蟲（Giardia lamblia）。在某些實施例中，所揭示之結晶鹽及其組合物適用於治療動物及家畜中由選自以下各者之原蟲動物寄生蟲引起的寄生蟲感染：赫氏瘧原蟲（Plasmodium hermani）、隱孢子蟲屬（Cryptosporidium sps.）、細粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）、柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）、神經肉孢子蟲（Sarcocystis neurona）及粗厚神經胞子菌（Neurospora crassa）。其他適用作寄生蟲疾病治療中之蛋白酶體抑制劑的化合物描述於WO 98/10779（其全文併入本文中）中。

在某些實施例中，所揭示之結晶鹽及其組合物不可逆地抑制寄生蟲中之蛋白酶體活性。此類不可逆抑制已展示在不回收紅血細胞及白血球之情況下誘導酶活性關閉。在某些此類實施例中，血細胞之較長半衰期可提供關於重複曝露於寄生蟲之療法之較長保護。在某些實施例中，血細胞之較長半衰期可提供關於針對將來感染之化學預防之較長保護。

原核細胞具有等效於真核生物20S蛋白酶體粒子之物質。儘管原核生物20S粒子之次單元組合物比真核細胞更簡單，其具有以類似方式使肽鍵水解之能力。舉例而言，肽鍵上之親核攻擊通過β-次單元之N端上之蘇胺酸殘基進行。在一些實施例中，提供一種治療原核感染之方法，其包括向患者投與治療有效量之本文所提供之結晶鹽或其組合物。原核感染可包含由分枝桿菌（諸如肺結核、麻風或布魯利潰瘍（Buruli Ulcer））或太古細菌引起的疾病。

亦表明，結合至20S蛋白酶體之抑制劑刺激骨骼器官培養物中之骨骼形成。此外，當已向小鼠全身性投與此類抑制劑時，一定蛋白酶體抑制劑將骨骼體積及骨骼形成速率提高了70%（Garrett, I. R.等人, 《臨床研究雜誌（J. Clin. Invest.）》 (2003) 111: 1771-1782），因此表明泛素-蛋白酶體機器調控成骨細胞分化及骨骼形成。因此，所揭示之結晶鹽及其組合物可適用於與骨質流失（諸如骨質疏鬆）相關的疾病之治療及/或預防。

本文提供一種用於治療選自以下各者之疾病或病況的方法：自體免疫疾病、移植物或移植相關病狀、神經退化性疾病、纖維化相關病狀、局部缺血相關病狀、感染（病毒、寄生蟲或原核）及與骨質流失相關的疾病，其包括投與如本文所提供之結晶鹽或其組合物。

骨骼組織為具有用於刺激骨骼細胞之能力的因子之極佳來源。因此，牛骨骼組織之提取物不僅含有對維持骨骼之結構完整性負責的結構蛋白，且亦含有可刺激骨骼細胞增殖之生物活性骨骼生長因子。其中，後者因子為稱作骨骼形態生成蛋白質（BMP）之蛋白質的最近描述的家族。所有此等生長因子對其他類型的細胞以及骨骼細胞具有作用，包含Hardy, M. H.,等人,《轉基因學（Trans Genet）》 (1992) 8:55-61描述骨骼形態生成蛋白質（BMP）在發育期間在毛囊中有差異地表現的證據。Harris, S. E.,等人,《骨骼與礦物質研究雜誌（J Bone Miner Res）》 (1994) 9:855-863描述TGF-β對BMP-2及骨骼細胞中之其他物質之表現的作用。成熟毛囊中之BMP-2表現亦在成熟期間及細胞增殖時間段之後進行（Hardy，等人，1992，上文）。因此，本文所提供之結晶鹽及其組合物亦可適用於毛囊生長刺激。

本文亦提供一種藉由投與如本文所揭示之化合物治療溶酶體貯積病之方法。溶酶體貯積病為由各種基質（包含鞘醣脂、肝糖、黏多醣及糖蛋白）之異常代謝產生的疾病群組。外及內源性高分子量化合物之代謝通常在溶酶體中進行，且所述方法通常以逐步方法藉由降解酶調控。因此，一種酶之缺陷活性可能損害所述方法，導致特定基質積聚。已展示蛋白酶體之抑制可改良罹患溶酶體貯積病之患者中之某些基質之功能（Y. Shimada等人《生物化學與生物物理學研究通訊（Biochem. Biophys. Res. Commun.）》(2011) 415(2):274-8）。大多數此等疾病可臨床上分成以下亞型：i）嬰兒發作；ii）幼年發作；或iii）晚期發作。嬰兒發作形式通常最嚴重，通常無殘餘酶活性。晚期發作形式通常更溫和，具有較低但通常可偵測到的殘餘酶活性。幼年發作形式之嚴重程度在嬰兒發作形式與晚期發作形式中間。此類病症之非限制性實例包含：龐培病（Pompe disease）、戈謝病（Gaucher disease）、法布立病（Fabry disease）、GM1-神經節苷脂貯積病、泰-薩克斯病（Tay-Sachs disease）、桑多霍夫病（Sandhoff disease）、尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease）、克拉培病（Krabbe disease）、法伯病（Farber disease）、異染性腦白質營養不良、賀勒-謝氏病（Hurler-Scheie disease）、亨特病（Hunter disease）、聖菲利波病A（Sanfilippo disease A）、聖菲利波病B（Sanfilippo disease B）、聖菲利波病C（Sanfilippo disease C）、聖菲利波病D（Sanfilippo disease D）、莫奎病A（Morquio disease A）、莫奎病B（Morquio disease B）、馬洛特-拉米病（Maroteaux-Lamy disease）、斯利病（Sly disease）、α-甘露糖苷貯積病、β-甘露糖苷貯積病、岩藻糖苷貯積症、•唾液酸沈積症及辛德勒-神埼病（Schindler-Kanzaki disease）。因此，一個實施例為一種治療龐培病之方法，其包含向患者投與治療有效量之本文所提供之結晶鹽或其組合物。

所揭示之結晶鹽及其組合物亦適用作用於篩選Ntn水解酶（包含蛋白酶體）處理之蛋白質（例如酶、轉錄因子）之診斷劑（例如在診斷套組中或適用於臨床實驗室）。所揭示之結晶鹽及其組合物亦適用作特異性結合X/MB1次單元或α-鏈及抑制與其相關的蛋白分解活性之研究試劑。舉例而言，可測定蛋白酶體之其他次單元之活性（及特異性抑制劑）。

大多數細胞蛋白質為在成熟或活化期間蛋白分解處理之目標。本文所揭示之酶抑制劑可用於判定細胞、發育或生理學過程或結果是否藉由特定Ntn水解酶之蛋白分解活性調控。一種此類方法包含獲得生物體、完整細胞製劑或細胞提取物；使生物體、細胞製劑或細胞提取物曝露於本文所揭示之組合物；使經化合物曝露之生物體、細胞製劑或細胞提取物曝露於信號；及監測過程或結果。本文所揭示之化合物之較高選擇率准許在給定細胞、發育或生理學過程中快速且準確消除Ntn或暗示Ntn（例如20S蛋白酶體）。實例

提供以下實例用於說明且並不意欲限制本發明之範疇實例1：表徵方法

在帕納科（PANalytical）X'Pert3X射線（圖1、21及22-27）、島津（Shimadzu）XRD-7000（圖5）或布魯克（Bruker）D8Advance X射線粉末繞射儀（圖1、9、11、13-15及19）上獲得X射線粉末繞射（「XRPD」）數據。在連續模式下，以0.02°之步長自4至40°（2θ），在40 kV及40 mA下，利用CuKα輻射（1.54 Å）掃描樣品（圖1）。在連續模式下，以0.013°之步長自3至40°（2θ），在45 kV及40 mA下，利用CuKα輻射（1.54 Å）掃描樣品（圖21及23-27）。在連續模式下，以0.02°之步長自5至70°（2θ），在40 kV及35 mA下，利用CuKα輻射（1.54 Å）掃描樣品（圖5）。在連續模式下，以0.02°之步長自3至40°（2θ），在40 kV及40 mA下，利用CuKα輻射（1.54 Å）掃描樣品（圖1、9、11、13-15及19）。

在乾燥氮氣下，在鋁捲曲盤中之TA儀器公司Q2000量熱計（圖22）、Tzero Low-Mass盤中之TA Q20 DSC（圖2）或鋁Tzero盤中之TA儀器公司Q20（圖6）或使用捲曲鋁盤之動態蒸汽吸附有利系統（Dynamic Vapor Sorption Advantage System）（圖8、10、12、16、17及20）上進行差示掃描熱量測定（「DSC」）。

在乾燥氮氣下，在鉑盤（圖22）或鋁Tzero盤（圖3）中之TA儀器公司Q500分析器（圖22）或NETZSCH TG209 F1（圖3）上進行熱解重量分析（TGA）。

使用SMS（表面量測系統）DVSIntrinsic（圖4）或動態蒸汽吸附有利系統（圖18）採集濕氣吸附數據。平衡標準設定在10分鐘內±0.002%（圖4）重量變化下，其中最大平衡時間為180分鐘。

在瓦里安（Varian）400 MHz儀器上進行¹ H NMR。使固體樣品溶解於DMSO-d6 中且轉移至NMR套管中以便分析。實例2：化合物G之鹽篩選

使化合物G與六種不同酸反應，各自在六種不同溶劑系統（總共36個篩選實驗）中以測定是否可形成化合物G之結晶鹽。

詳言之，將約15 mg 化合物G及等效莫耳量之酸摻和至2.0 mL玻璃瓶中。將約1.0 mL對應的溶劑系統添加至小瓶中。將所得懸浮液以大約600 rpm在室溫下攪拌約兩天。隨後使懸浮液離心以分離固體以便XRPD分析。篩選實驗結果可見於表3中。在測試的六種酸中，兩種酸使得化合物G之結晶鹽形成：順丁烯二酸及反丁烯二酸。表3.化合物G之鹽篩選結果

澄清：無或有限固體沈澱出。實例3：化合物G之額外鹽篩選

向化合物G（20 mg，預溶解於140 µL溶劑中）中添加1當量酸（預溶解於40-240 µL溶劑中），且在密封小瓶中將混合物靜置超過96小時。採用以下溶劑：甲苯、乙醇、甲醇、異丙醇、己烷/乙酸乙酯（1:1）、1,4-二噁烷、乙腈、1-丁醇、乙酸乙酯、丙酮、MTBE/乙酸乙酯（1:1）及二乙醚/乙酸乙酯（1:1）。利用以下酸：硫酸、甲磺酸、對甲基苯磺酸（單水合物）、2-萘磺酸、L-蘋果酸、丙酸、苯甲酸、草酸及磷酸。在展示於表4中之組合的情況下，觀測到固體沈澱物。表4.鹽篩選變量

實例4：化合物G順丁烯二酸鹽之規模放大

化合物G之單順丁烯二酸鹽形式之製備規模放大如下。藉由將兩種起始材料稱取至玻璃瓶中，以1:1或1:2之莫耳比使化合物G（約200 mg）與順丁烯二酸反應。將一定體積的MTBE或丙酮添加至各玻璃瓶中且在磁性板上攪拌所得懸浮液。隨後在室溫下真空乾燥懸浮液以產生形式B。

使用EtOAc作為溶劑，亦使化合物G（約200 mg）與順丁烯二酸（約20 mg；1:0.5之莫耳比）反應。在室溫下，在磁性板上以約600 rpm攪拌所得懸浮液。若攪拌後析出白色固體，則將約9.0 mL EtOAc添加至懸浮液中。將懸浮液攪拌兩天，且隨後藉由離心機分離。在空氣中或在50℃下在真空下將分離的固體乾燥隔夜以產生形式A。

規模放大實驗中製得之化合物G順丁烯二酸鹽之概述可見於表5中。表5.化合物G順丁烯二酸鹽之規模放大實驗

規模放大實驗之XRPD結果展示於圖23中。對於來自相同溶劑之順丁烯二酸鹽，觀測到不變的XRPD圖案。來自MTBE之順丁烯二酸鹽（形式A）展示較弱結晶度，且來自丙酮（形式B）之順丁烯二酸鹽展示與EtOAc中結晶（形式A）略微不同的XRPD。然而，在藉由TGA熱處理至100℃之後，如圖24及25中所示，自MTBE（形式A）及丙酮（形式B）中結晶之化合物G之單順丁烯二酸鹽之XRPD與自EtOAc（形式A）中結晶之單順丁烯二酸鹽良好匹配。實例5：形式A之進一步處理及表徵

利用不同乾燥條件（風乾、真空乾燥、濕度循環）以處理形式A（自EtOAc中結晶）。所得結晶鹽藉由XRPD（圖25及26）、DSC及TGA表徵。在真空乾燥之後順丁烯二酸鹽亦藉由¹ H NMR表徵以測定游離鹼/順丁烯二酸之化學計量。圖26中之XRPD結果展示在不同乾燥條件下所有樣品具有相同繞射圖案。亦應用動態蒸汽吸附測試（DVS）以表徵來自EtOAc之形式A，如圖4中所示。此等實驗之表徵數據概述在表6中。表6.1:0.5之形式A（來自EtOAc）之表徵數據

*:濕度週期（DVS）為40%RH-95%RH-0%RH-95%RH-空氣條件。實例6：合成程序程序1：用乙酸異丙酯/乙醇製備化合物G之單順丁烯二酸鹽

向化合物G（3.6 kg在37.88 kg IPAc中）中添加EtOH（11.5 kg）。將所得溶液加熱至50℃且在15分鐘內添加順丁烯二酸（1.62 kg 12.4 wt% EtOH溶液），繼而添加所需化合物晶種（18.0 g）。在50℃下攪拌懸浮液0.5小時且歷經3小時添加順丁烯二酸（4.90 kg 13.4 wt% EtOH溶液）。在50℃下攪拌混合物4小時，歷經9.5小時冷卻至-3℃，保持在-2-3℃下2小時，過濾，且在-5-5℃下用IPAc/EtOH（2:1，12.0 kg）洗滌。在真空下在40-45℃下乾燥濕濾餅17小時以提供化合物G之單順丁烯二酸鹽（3.86 kg，99.0%純度）。程序2：鹽-用乙酸乙酯裂化以產生形式A

為了形成A（3.56 kg），在15-25℃下添加IPAc（37.8 kg），繼而3.5% NaHCO₃ （37.8 kg），且攪拌所得懸浮液1小時以提供溶液。移除水層且在15-25℃下用5% Na₂ SO₄ （水溶液，36.9 kg）洗滌有機層。移除水層且在低於45℃下濃縮有機層至4-7 L。在15-25℃下用乙酸乙酯（32.0 kg）沖洗有機層三次，且在低於45℃下將溶液濃縮至約7-11 L。隨後添加乙酸乙酯（28.8 kg），且將溶液加熱至45-55℃。使順丁烯二酸（720 g）溶解於19.4 kg乙酸乙酯中且歷經30分鐘在45-55℃下添加1/10此溶液。在45-55℃下添加晶種（9.09 g）且攪拌混合物30分鐘。歷經1小時在45-55℃下添加順丁烯二酸溶液之其餘部分。在45-55℃下攪拌混合物額外2小時，隨後歷經8小時冷卻至1℃。在-5-5℃下攪拌混合物1小時，隨後過濾，用乙酸乙酯（13.0 kg）洗滌，且在40-50℃下在真空下乾燥26-28小時以提供3.42 kg呈無色固體狀之順丁烯二酸鹽（99.1%純度）。圖1中展示XRPD圖案，圖2中展示特徵性DSC數據，圖3中展示TGA數據。程序3：使用0.5當量順丁烯二酸（形式A）製備化合物G之單順丁烯二酸鹽

向含化合物G（100 mg，0.170 mmol）之THF（0.5 mL）中添加順丁烯二酸（0.085 mmol，9.9 mg於THF（0.5 mL）中）。使混合物靜置隔夜並過濾以提供呈無色固體狀之化合物G之單順丁烯二酸鹽（50.5 mg）。程序4：化合物G之單順丁烯二酸鹽之再結晶

為了形成A（0.05 g，0.0852 mmol），添加乙醇（0.5 mL），且將溶液加熱至回流5分鐘且使其冷卻至20℃隔夜。分離呈無色固體狀之純化化合物（42 mg）。

使用以下溶劑進行類似再結晶方法以提供化合物G之單順丁烯二酸鹽：THF、iPrOH-EtOAc（1:1）、iPrOH、iPrOH-甲苯（1:1）、二噁烷及乙腈。實例7：使用形式A之PK研究

針對皮下投與，以45 mg/ml之濃度調配形式A，如表7中所描述。當以約3 mg/kg之單一皮下劑量將各調配物投與至食蟹獼猴（3雄性/劑量）時，形式A之生物利用率百分比（F%）亦可見於表7中。表7.用於猴PK研究之調配物

實例8：多晶型物篩選

方法A：將約30 mg 化合物G添加至表8中所指定之溶劑，隨後在50℃下以700 rpm之速率搖晃。藉由離心機（5分鐘，在9,000 rpm下）分離化合物之殘餘物，且在7天之後藉由XRPD、DSC及TGA進行研究，如表8及圖7-13中所示。

方法B：向50 mg化合物G中添加甲醇（1.0 mL），繼而MTBE（0.5 mL）。在使混合物靜置隔夜之後，採集沈澱物且藉由XRPD、DSC及TGA進行研究，如表8及圖19及20中所示。表8.多晶型物篩選

實例9：形式B之進一步處理及表徵

程序：將2 g 化合物G添加至3%丙酮水溶液（20 mL）中，隨後以700 rpm之速率在50℃下搖晃隔夜。藉由XRPD、DSC及TGA研究殘餘物。

在真空下在室溫或30℃下乾燥殘餘物1小時、4小時或24小時。圖14-15中之XRPD結果展示在不同乾燥條件下所有樣品具有相同繞射圖案。圖16中展示在室溫下乾燥隔夜之樣品的DSC/TGA結果且在30℃下乾燥隔夜展示於圖17中。亦應用動態蒸汽吸附測試（DVS）以表徵來自3% H₂ O/丙酮之形式F，如圖18中所示。在室溫下乾燥隔夜之後，卡爾費雪（Karl Fisher）測試表明具有2.51%之水含量之形式F。實例10：形式A及C-G之特徵峰

以下表9包含各多晶型物特有的XRPD峰。表9.多晶型物篩選

實例11：形式A之穩定性

歷經一個月之持續時間，在環境條件（25℃及40%相對濕度，「RH」）下且在高溫及高濕度（40℃及75% RH）下測試形式A及其游離鹼之穩定性。游離鹼形式在高溫及高濕度下展示快速分解。然而，在相同條件下且歷經相同時間段，觀測到形式A無顯著變化。參見以下表10。因此，形式A展現相比於其游離鹼提高的穩定性。表10.形式A及其游離鹼之穩定性比較

給出先前描述僅為清楚理解，且不應自其理解為不必要的限制，因為在本發明之範疇內的修改可對本領域的技術人員顯而易見。

在整個本說明書及隨後之申請專利範圍中，除非上下文另外要求，否則詞語「包括（comprise）」及諸如「包括（comprises/comprising）」之變化形式應理解為暗示包含所描述整體或步驟或者整體或步驟之群組，但不排除任何其他整體或步驟或者整體或步驟之群組。

在整個本說明書中，除非以其他方式描述，否則當將組合物描述為包含組分或物質時，預期所述組合物亦可基本上由所述組分或物質的任何組合組成或由所述組合組成。同樣，除非以其他方式描述，否則當將方法描述為包含特定步驟時，預期所述方法亦可基本上由所述步驟的任何組合組成或由所述組合組成。在不存在非特定揭示於本文中之任何要素或步驟之情況下，可適當地實踐本文中說明性地揭示之本發明。

本文中所揭示之方法及其個別步驟之實踐可以手動地及/或藉助於電子設備或由電子設備提供之自動化來執行。儘管已參考特定實施例描述方法，但本領域中一般熟習此項技術者將易於瞭解可使用與所述方法有關之其他方式執行行動。舉例而言，除非以其他方式描述，否則在不背離所述方法之範疇或精神之情況下，可以改變各種步驟之次序。另外，可將個別步驟中之一些組合、省略或進一步再分成其他步驟。

本文中所引用之所有專利、公開案及參考文獻在此以引用的方式全部併入本文中。在本發明與所併入之專利、公開案及參考文獻之間發生衝突之情況下，應控制本發明。

無。

圖1描繪形式A（乙酸乙酯中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之X射線粉末繞射（XRPD）圖案。

圖2描繪形式A（乙酸乙酯中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之差示掃描熱量測定（DSC）熱分析圖。

圖3描繪形式A（乙酸乙酯中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之熱解重量分析（「TGA」）描繪圖。

圖4描繪形式A（40%相對濕度至95%相對濕度）之DVS等溫曲線。

圖5描繪形式B（95%乙醇中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）之XRPD圖案。

圖6描繪形式B（95%乙醇中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）之DSC熱分析圖。

圖7描繪形式C（丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖8描繪形式C（丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖9描繪形式D（乙腈中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖10描繪形式D（乙腈中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖11描繪形式E（異丙醇中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖12描繪形式E（異丙醇中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖13描繪形式B（3%水/丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）之XRPD圖案。

圖14描繪形式B（3%水/丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）在指定的乾燥條件下之XRPD圖案。

圖15描繪形式B（3%水/丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）在指定的乾燥條件下之XRPD圖案。

圖16描繪形式B（3%水/丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）在室溫下乾燥過夜之後的TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖17描繪形式B（3%水/丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）在30℃下乾燥過夜之後的TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖18描繪形式B（3%水/丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽水合物）之動態蒸汽吸附（「DVS」）等溫曲線。

圖19描繪形式F（MeOH/MTBE中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖20描繪形式F（MeOH/MTBE中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖21描繪形式G（化合物G之單反丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖22描繪形式G（化合物G之單反丁烯二酸鹽）之TGA描繪圖（頂部描繪圖）及DSC熱分析圖（底部描繪圖）。

圖23描繪使用指定比率之順丁烯二酸，在指定溶劑（形式A及B）中所製備且在室溫下真空乾燥之化合物G之單順丁烯二酸鹽之XRPD圖案。

圖24描繪相比於形式A，在真空乾燥且加熱至100℃之後形式F（MBTE中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖25描繪在真空乾燥且加熱至100℃之後形式C（丙酮中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖26描繪在指定乾燥條件之後形式A（EtOAc中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

圖27描繪在DVS測試之前及之後形式A（EtOAc中所製備之化合物G之單順丁烯二酸鹽）之XRPD圖案。

：無。

Claims

一種具有以下結構之結晶鹽：
，其中X^- 為相對離子。
如申請專利範圍第1項所述之結晶鹽，其中X^- 包括順丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、磷酸鹽、鹵化物、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、甲苯磺酸鹽、丙酸鹽或苯甲酸鹽。
如申請專利範圍第1項或第2項所述之結晶鹽，其呈鹽水合物形式。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括順丁烯二酸鹽。
如申請專利範圍第4項所述之結晶鹽，其中該結晶鹽為單順丁烯二酸鹽。
如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式A），在約6.9、17.3及17.8±0.2° 2θ處包括峰之X射線粉末繞射（XRPD）圖案。
如申請專利範圍第6項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約4.9、6.8及7.7±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第7項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約10.9、12.4、13.5、14.2、16.1、16.4、18.5、21.0、22.0、23.4、23.7、24.5及25.2±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第4項至第8項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖1中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第4項至第9項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖2中所示之差示掃描熱量測定（DSC）熱分析圖。
如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式B），在約7.2、18.4及22.0±0.2° 2θ處包括峰之XRPD圖案。
如申請專利範圍第11項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約6.8、6.6、13.6、22.0、17.4、14.5、18.0及5.0±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第4項至第5項及第11項至第12項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖13中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第4項至第5項及第11項至第13項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖16中所示之DSC熱分析圖。
如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式C），在約7.4、13.2及20.1±0.2° 2θ處包括峰之XRPD圖案。
如申請專利範圍第15項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約6.6、13.6、6.9、16.9、3.7、17.9及19.9±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第4項至第5項及第15項至第16項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖7中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第4項至第5項及第15項至第17項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖8中所示之DSC熱分析圖。
如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式D），在約4.9、7.7、10.9、12.4、13.6及15.3±0.2° 2θ處包括峰之XRPD圖案。
如申請專利範圍第19項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約6.8、17.4、3.4及17.7及±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第4項至第5項及第19項至第20項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖9中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第4項至第5項及第19項至第21項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖10中所示之DSC熱分析圖。
如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式E），在約6.4、7.3及19.8±0.2° 2θ處包括峰之XRPD圖案。
如申請專利範圍第23項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約3.3、6.8、16.5、12.1、21.5、4.0及13.0及±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第4項至第5項及第23項至第24項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖11中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第4項至第5項及第23項至第25項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖12中所示之DSC熱分析圖。
如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式F），在約6.3、19.0及19.6±0.2° 2θ處包括峰之XRPD圖案。
如申請專利範圍第27項所述之結晶鹽，其使用Cu Kα輻射，在約7.1、17.5、17.9、22.0、13.5、18.2及15.5及±0.2° 2θ處進一步包括峰。
如申請專利範圍第4項至第5項及第27項至第28項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖19中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第4項至第5項及第27項至第29項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖20中所示之DSC熱分析圖。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括反丁烯二酸鹽。
如申請專利範圍第31項所述之結晶鹽，其中該結晶鹽為單反丁烯二酸鹽。
如申請專利範圍第31項或第32項所述之結晶鹽，其具有使用Cu Kα輻射（形式G），在約6.4、7.2、13.8、16.0、17.4、18.5、18.7、20.0、20.9、21.9、24.5及25.8±0.2° 2θ處包括峰之XRPD圖案。
如申請專利範圍第31項至第33項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖21中所示之XRPD圖案。
如申請專利範圍第31項至第34項中任一項所述之結晶鹽，其具有實質上如圖22中所示之DSC熱分析圖。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括草酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括蘋果酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括硫酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括甲磺酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括2-萘磺酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括磷酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括鹵化物。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括酒石酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括檸檬酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括甲苯磺酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括丙酸鹽。
如申請專利範圍第2項或第3項所述之結晶鹽，其中X^- 包括苯甲酸鹽。
一種製備如申請專利範圍第4項或第5項所述之結晶鹽的方法，其包括摻和以下各者：（a）化合物G：
（G），（b）順丁烯二酸，及（c）溶劑以形成懸浮液。
如申請專利範圍第48項所述之方法，其中化合物G與順丁烯二酸之莫耳比在約1:0.5至1:2範圍內。
如申請專利範圍第49項所述之方法，其中化合物G與順丁烯二酸之莫耳比為1:1。
如申請專利範圍第48項至第50項中任一項所述之方法，其中該溶劑選自由以下各者組成之群：甲醇（MeOH）、乙醇（EtOH）、異丙醇（IPA）、乙酸乙酯（EtOAc）、乙酸異丙酯（IPAc）、四氫呋喃（THF）、甲基第三丁基醚（MTBE）、丙酮/正庚烷、丙酮、二乙醚（Et2O）/EtOAc、己烷/EtOAc、MTBE/EtOAc、甲苯、1,4-二噁烷、乙腈（ACN）、1-丁醇、其水性混合物及其組合。
如申請專利範圍第51項所述之方法，其中該溶劑包括EtOAc、IPAc、EtOH、其水性混合物或其組合。
如申請專利範圍第48項至第52項中任一項所述之方法，其中摻和步驟係在0℃至80℃範圍內之溫度下進行。
如申請專利範圍第53項所述之方法，其中摻和步驟係在40℃至60℃範圍內之溫度下進行。
如申請專利範圍第48項至第55項中任一項所述之方法，其中摻和步驟進行至多約6小時。
如申請專利範圍第48項至第55項中任一項所述之方法，其進一步包括使該懸浮液冷卻至0℃。
如申請專利範圍第56項所述之方法，其進一步包括過濾該懸浮液以形成濾餅。
如申請專利範圍第57項所述之方法，其進一步包括洗滌、乾燥或洗滌並乾燥該濾餅。
如申請專利範圍第58項所述之方法，其進一步包括使該濾餅再結晶。
如申請專利範圍第58項所述之方法，其進一步包括（i）由該濾餅重新形成化合物G；及（ii）摻和重新形成的化合物G、順丁烯二酸及溶劑以形成該結晶鹽。
一種包括如申請專利範圍第1項至第47項中任一項所述之結晶鹽及一種或多種賦形劑的調配物。
如申請專利範圍第61項所述之調配物，其呈液體調配物形式。
如申請專利範圍第61項所述之調配物，其呈凍乾調配物形式，其中該凍乾調配物可復原至液態形式。
如申請專利範圍第62項或第63項所述之調配物，其中該結晶鹽以按結晶鹽之游離鹼之重量計約1 mg/ml至約150 mg/ml範圍內之濃度存在於該液體調配物或復原之該凍乾調配物中。
如申請專利範圍第64項所述之調配物，其中該結晶鹽以按結晶鹽之游離鹼之重量計約10 mg/ml至約70 mg/ml範圍內之濃度存在於該液體調配物或復原之該凍乾調配物中。
如申請專利範圍第65項所述之調配物，其中該結晶鹽以按結晶鹽之游離鹼之重量計約30 mg/ml至約50 mg/ml範圍內之濃度存在於該液體調配物或復原之該凍乾調配物中。
如申請專利範圍第61項至第66項中任一項所述之調配物，其中該一種或多種賦形劑選自由以下各者組成之群：界面活性劑、張力劑、緩衝液及其組合。
如申請專利範圍第67項所述之調配物，其中該凍乾調配物進一步包括低溫保護劑、膨化劑或兩者。
如申請專利範圍第67項所述之調配物，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯、聚乙二醇蓖麻油、聚(伸烷基)二醇、辛醯基己醯基聚乙二醇甘油酯、聚氧化烯嵌段共聚物及其組合。
如申請專利範圍第67項所述之調配物，其中該張力劑為鹽、多元醇或其組合。
如申請專利範圍第61項至第70項中任一項所述之調配物，其中該液體調配物或復原之該凍乾調配物為等張的。
如申請專利範圍第67項所述之調配物，其中該緩衝液選自由以下各者組成之群：檸檬酸鹽、磷酸鹽、組胺酸、丁二酸鹽、乙酸鹽、順丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽及其組合。
如申請專利範圍第61項至第70項中任一項所述之調配物，其中該液體調配物或復原之該凍乾調配物展現約3.0至約8.0範圍內之pH。
如申請專利範圍第73項所述之調配物，其中該液體調配物或復原之該凍乾調配物展現約4.0至約6.5範圍內之pH。
如申請專利範圍第62項至第74項中任一項所述之調配物，其中該液體調配物或復原之該凍乾調配物適於非經腸投與至個體。
如申請專利範圍第75項所述之調配物，其中非經腸投與為靜脈內、肌肉內、腹膜內或皮下。
如申請專利範圍第76項所述之調配物，其中非經腸投與為皮下。
如申請專利範圍第65項所述之調配物，其中該個體為人類。
如申請專利範圍第61項至第78項中任一項所述之調配物，其中該調配物展現至少55%之生物利用率。
如申請專利範圍第79項所述之調配物，其中該調配物展現至少60%之生物利用率。
如申請專利範圍第80項所述之調配物，其中該調配物展現至少65%之生物利用率。
一種抑制細胞之免疫蛋白酶體之方法，其包括使細胞與如申請專利範圍第1項至第47項中任一項所述之結晶鹽或如申請專利範圍第61項至第81項中任一項所述之調配物接觸。
如申請專利範圍第82項所述之方法，其中免疫蛋白酶體LMP7經抑制。
如申請專利範圍第82項或第83項所述之方法，其中該接觸步驟為活體內的。
如申請專利範圍第82項所述之方法，其中該接觸步驟包括投與至罹患與異常免疫蛋白酶體活性相關的病症之個體。
如申請專利範圍第85項所述之方法，其中病症為自體免疫疾病或發炎。
如申請專利範圍第86項所述之方法，其中疾病為牛皮癬、皮膚炎、全身性硬皮病、硬化症、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、呼吸窘迫症候群、腦膜炎、腦炎、葡萄膜炎、結腸炎、絲球體腎炎、濕疹、哮喘、慢性發炎、動脈粥樣硬化、白細胞黏著缺乏症、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡症（SLE）、糖尿病、多發性硬化症、雷諾氏症候群、自體免疫甲狀腺炎、過敏性腦脊髓炎、休格連氏症候群、幼年發作糖尿病、肺結核、類肉瘤病、多發性肌炎、肉芽腫、血管炎、惡性貧血（阿狄森氏病）、涉及白細胞血球滲出之疾病、中樞神經系統（CNS）發炎病症、多器官損傷症候群、溶血性貧血、重症肌無力、抗原-抗體複合物介導之疾病、抗腎小球基底膜疾病、抗磷脂症候群、過敏性神經炎、格雷夫氏病、蘭伯特-伊頓重肌無力症候群、大皰性類天疱瘡、天疱瘡、自體免疫多內分泌病變、萊特爾氏病、全身肌僵直症候群、貝赫切特疾病、巨大細胞動脈炎、免疫複合物性腎炎、IgA腎病、IgM多發性神經病、免疫性血小板減少性紫癜（ITP）或自體免疫血小板減少。
如申請專利範圍第86項所述之方法，其中病症為狼瘡、狼瘡性腎炎、類風濕性關節炎、糖尿病、硬皮病、僵直性脊椎炎、牛皮癬、多發性硬化症、橋本氏病、腦膜炎或發炎性腸病。