WO2024140736A1 - 三肽环氧酮化合物、药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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WO2024140736A1
WO2024140736A1 PCT/CN2023/142116 CN2023142116W WO2024140736A1 WO 2024140736 A1 WO2024140736 A1 WO 2024140736A1 CN 2023142116 W CN2023142116 W CN 2023142116W WO 2024140736 A1 WO2024140736 A1 WO 2024140736A1
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alkyl
compound
mmol
membered
heterocyclic group
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胡玮
姚元山
栾林波
王朝东
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上海美悦生物科技发展有限公司
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the invention belongs to the field of medicine, and in particular relates to a tripeptide epoxyketone compound, a pharmaceutical composition, and a preparation method and use thereof.
  • the 26S proteasome consists of a 19S regulator that carries a ubiquitin receptor, deubiquitinating enzymes, a ring-shaped ATPase responsible for protein unfolding, and a 20S proteolytic core complex.
  • the 20S proteasome core particle is composed of ⁇ and ⁇ subunits, which form a barrel-shaped complex consisting of four rings, each with seven subunits.
  • the outer two rings are composed of ⁇ subunits
  • the inner two rings are composed of ⁇ subunits, containing the catalytically active proteasome subunits PSMB6 ( ⁇ 1c), PSMB7 ( ⁇ 2c), and PSMB5 ( ⁇ 5c).
  • proteolytically active subunits are responsible for at least three peptidase activities: caspase-like (acted by ⁇ 1c), trypsin-like (acted by ⁇ 2c), and chymotrypsin-like (acted by ⁇ 5c) activities.
  • caspase-like acted by ⁇ 1c
  • trypsin-like acted by ⁇ 2c
  • chymotrypsin-like acted by ⁇ 5c activities.
  • the catalytically active standard proteasome subunits ⁇ 1c, ⁇ 2c and ⁇ 5c in the two rings of the 20S proteasome are replaced by ⁇ 1i (LMP2; PSMB9), ⁇ 2i (multicatalytic endopeptidase complex-like (MECL-1; PSMB10) and ⁇ 5i (LMP7; PSMB8) to form immunoproteasomes.
  • the immunoproteasome subunit exchange changes the cleavage specificity of the 20S proteasome.
  • the caspase-like activity exerted by ⁇ 1c in the standard proteasome is strongly reduced, while the chymotrypsin-like activity is enhanced. This leads to the generation of peptides with hydrophobic C-terminal residues that are suitable for MHC-I presentation.
  • the involvement of immunoproteasomes in antigen processing affects pathogen-induced cytotoxic T lymphocytes ( CTL) response, pathogen clearance, and formation of CTL library.
  • immunoproteasomes are also involved in T cell expansion, T helper cell differentiation, macrophage polarization, and protection against brain immunopathological damage, lung-related diseases, neurodegenerative diseases, and inflammatory diseases.
  • Immunoproteasomes are expressed in hematopoietic cells, induced in IFN- ⁇ -stimulated cells, and upregulated in certain cancers.
  • proteasomes due to the role of proteasomes in regulating numerous cellular processes and the requirement of immunoproteasome subunits for T cell survival in a proinflammatory environment, inhibiting proteasomes is an attractive strategy to improve inflammatory diseases.
  • different immunoproteasome inhibitors have also been shown to be effective in preclinical models of inflammatory diseases. (Cells 2021,10,3216)
  • ONX 0914 the epoxyketone inhibitor PR-957 (later renamed ONX 0914) was described and characterized as selective for LMP7 in a concentration-dependent manner.
  • the molecular basis of this selectivity was explained after solving the crystal structure of ONX 0914-soaked immunoproteasomes, showing that the LMP7 substrate pocket theoretically favors ONX 0914 binding, but Phe31 of LMP2 sterically blocks binding. Therefore, ONX 0914 has been used as a tool compound as a selective inhibitor of LMP7 in many studies. For example, in preclinical mouse models, inhibition of LMP7 by ONX 0914 prevented immunopathological damage to the brain after viral infection, prevented the formation of colitis-associated cancers, and protected against several autoimmune diseases.
  • PRN1126 a new highly selective LMP7-specific inhibitor, PRN1126.
  • PRN1126 had no effect on cytokine secretion, Th17 differentiation, and autoimmune diseases.
  • ONX 0914 prolonged exposure of ONX 0914 in cells leads to co-inhibition of LMP7 and LMP2.
  • PRN1126 and LMP2-specific inhibitors it was found that co-inhibition of LMP2 and LMP7 is required to reduce IL-6 secretion and impair Th17 differentiation.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I), an isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • A is selected from a 4-8 membered monocyclic heterocyclic group, a 6-14 membered spiro heterocyclic group, a 6-14 membered bridged heterocyclic group or a 6-14 membered fused heterocyclic group;
  • the 4-8 membered monocyclic heterocyclic group is substituted by 1, 2 or more R w , and the heteroatoms in the heterocyclic group are independently selected from 1, 2 or 3 O or N;
  • R w is selected from CN, halogen, hydroxyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, halogenated C 1-6 alkyl, hydroxyl C 1-6 alkyl, cyano C 1-6 alkyl, -NH(C 1-6 alkyl), -N(C 1-6 alkyl) 2 , -(C 1-6 alkylene)N(C 1-6 alkyl) 2 , -(CH 2 ) n S(O) 2 C 1-6 alkyl, -(C 1-6 alkylene)-C 3-6 cycloalkyl or C 3-6 cycloalkyl; n is 0, 1, 2 or 3;
  • Ring C is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocyclic group, each of which is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxyl, C 1-3 alkyl, hydroxy C 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl; the heteroatoms in the heterocyclic group are independently selected from 1 or 2 N, O or S;
  • R4 is selected from H or C1-3 alkyl.
  • A is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-phenyl
  • R q is a C 1-6 alkyl group
  • Ra and Rb are each independently selected from H or C1-3 alkyl, or Ra and Rb together with the carbon to which they are attached form a ring B;
  • Ring B is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocyclic group, wherein the C 3-5 cycloalkyl or the 3-5 membered heterocyclic group is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxyl, C 1-3 alkyl, hydroxy C 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl;
  • the heteroatoms in the heterocyclic group are independently selected from 1 or 2 N, O or S; provided that at least one of Ra and R b , R c and R d , together with the carbon to which they are attached, forms a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocyclic group.
  • Ra and Rb together with the carbon to which they are attached form ring B;
  • Ring B Alternatively, R c and R d together with the carbon to which they are attached form Ring B;
  • Ring B is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocyclic group, each of which is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxyl, C 1-3 alkyl, hydroxy C 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl; the heteroatoms in the heterocyclic group are independently selected from 1 or 2 N, O or S.
  • Ring C is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocyclyl, each of which is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxyl, C 1-3 alkyl, hydroxyC 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl; the heteroatoms of the heterocyclyl are independently selected from 1 or 2 N, O or S.
  • the structure of the compound represented by Formula I is as shown in Formula Ia:
  • R 1 , R 3 , R 4 , R f , R g , R h , R p , R q , Ru and R v are as defined in the compound of formula (I).
  • R g and R h are the same or different, and are each independently selected from C 1-6 alkyl, hydroxy C 1-6 alkyl, cyano C 1-6 alkyl, -(C 1-6 alkylene)N(C 1-6 alkyl) 2 , -(CH 2 ) n S(O) 2 C 1-6 alkyl or C 3-6 cycloalkyl; n is 0 or 1; R f is H or C 1-6 alkyl.
  • Rg and Rh are the same or different and are independently selected from methyl, isopropyl, cyanomethyl, hydroxymethyl, -CH2 -N( CH3 ) 2 , -CH2S (O) 2CH3 , cyclopropyl and cyclobutyl; Rf is H or methyl.
  • R p is NH(CH 3 ) or N(CH 3 ) 2 .
  • R q is C 1-6 alkyl.
  • R q is C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, halogenated C 1-6 alkyl, cyano C 1-6 alkyl or -(C 1-6 alkylene)-C 3-6 cycloalkyl.
  • R q is methyl, ethyl or isopropyl.
  • R q is cyclopropyl, -CH 2 CF 3 , -CH 2 CN or -CH 2 -cyclobutyl.
  • R u and R v are the same and are each independently CN.
  • the structure of the compound shown in Formula I is shown in Formula II-1a, Formula II-2a, Formula II-3a, Formula II-4a, Formula II-5a, Formula II-6a, and Formula II-7a:
  • Rf and Rg are as defined in the compound of formula II-1; Rh is as defined in the compound of formula II-2; Rp is as defined in the compound of formula II-3; Rq is as defined in the compounds of formula II-4 and II-5; Ru is as defined in the compound of formula II-6; Rv is as defined in the compound of formula II-7; R1 , R3 and R4 are as defined in the compound of formula (I).
  • the structure of the compound shown in Formula I is shown in Formula II-1b, Formula II-2b, Formula II-3b, Formula II-4b, Formula II-5b, Formula II-6b, and Formula II-7b:
  • Rf and Rg are as defined in the compound of formula II-1; Rh is as defined in the compound of formula II-2; Rp is as defined in the compound of formula II-3; Rq is as defined in the compounds of formula II-4 and II-5; Ru is as defined in the compound of formula II-6; Rv is as defined in the compound of formula II-7; R1 , R3 and R4 are as defined in the compound of formula (I).
  • the structure of the compound represented by Formula I is as shown in Formula III-1 and III-2:
  • K is O or -NR k -, and R k is selected from H, C 1-6 alkyl, cyano C 1-6 alkyl, hydroxy C 1-6 alkyl, halo C 1-6 alkyl and -(C 1-6 alkylene)C(O)NH 2 .
  • Ring B is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocyclic group, each of which is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxyl, C 1-3 alkyl, hydroxy C 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl; the heteroatoms in the heterocyclic group are independently selected from 1 or 2 N, O or S.
  • Ra and Rb together with the carbon to which they are attached form a cyclopropyl group.
  • R c and R d together with the carbon to which they are attached form ring B;
  • Ring B is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocycloalkyl, each of which is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxy, C 1-3 alkyl, hydroxy C 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl; the heteroatoms in the heterocyclyl are independently selected from 1 or 2 N, O or S.
  • R c and R d together with the carbon to which they are attached form ring B;
  • ring B is cyclopropyl, cyclobutyl, oxetanyl and azetidinyl; or, azetidinyl is substituted by methyl.
  • the structure of the compound represented by Formula I is as shown in Formula III-1a and III-2a:
  • the structure of the compound represented by Formula I is as shown in Formula III-1b and III-2b:
  • the compound of formula I its isomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein A is selected from
  • R 1 is selected from H, deuterated C 1-6 alkyl, hydroxy C 1-6 alkyl or C 1-6 alkyl.
  • R1 is methyl
  • R3 is a 5-7 membered cycloalkenyl group; the 5-7 membered cycloalkenyl group is optionally substituted with 1, 2 or more H, C1-3 alkyl or C1-3 alkoxy groups.
  • R3 is
  • R4 is selected from H or C1-3 alkyl.
  • R4 is methyl
  • R1 is selected from H, deuterated C1-6 alkyl, hydroxy C1-6 alkyl or C1-6 alkyl;
  • R3 is a 5-7 membered heterocycloalkenyl; the 5-7 membered heterocycloalkenyl is optionally substituted with 1, 2 or more C1-3 alkyl or C1-3 alkoxy groups;
  • R4 is selected from H or C1- 3 alkyl; and
  • A is R g and R h are the same or different and are each independently selected from CN, halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, halo C 1-6 alkyl, hydroxy C 1-6 alkyl, cyano C 1-6 alkyl, -NH(C 1-6 alkyl), -N(C 1-6 alkyl) 2 , -(C 1-6 alkylene)N(C 1-6 alkyl) 2 , -(CH 2 ) n S(O) 2 C 1-6 alkyl or C
  • K is selected from O, -(CH 2 ) m -, -C( ⁇ O), S, -S( ⁇ O)-, S(O) 2 , -CHR k -, -NR k -, wherein R k is selected from H, C 1-6 alkyl, cyano C 1-6 alkyl, hydroxy C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkyl, -(C 1-6 alkylene)C(O)NH 2 ; m is 1, 2 and 3;
  • Ra and Rb together with the carbon to which they are attached form ring B;
  • Ring B is a C 3-5 cycloalkyl or a 3-5 membered heterocycloalkyl, each of which is optionally substituted by 1, 2 or more R t ;
  • R t is selected from halogen, hydroxy, C 1-3 alkyl, hydroxy C 1-3 alkyl and halogenated C 1-3 alkyl; the heteroatoms in the heterocyclic group are independently selected from 1 or 2 N, O or S.
  • the compound of formula I is selected from the following structures:
  • the present invention also provides the use of the compound represented by formula (I), its isomer or pharmaceutically acceptable salt or a pharmaceutical composition containing the same in the preparation of a dual inhibitor of LMP7 and LMP2.
  • the alkenyl group is, for example, vinyl, allyl, (E)-2-methylvinyl, (Z)-2-methylvinyl, (E)-but-2-enyl, (Z)-but-2-enyl, (E)-but-1-enyl, (Z)-but-1-enyl, pent-4-enyl, (E)-pent-3-enyl, (Z)-pent-3-enyl, (E)-pent-2-enyl, (Z)-pent-2-enyl, (E)- Pent-1-enyl, (Z)-pent-1-enyl, hex-5-enyl, (E)-hex-4-enyl, (Z)-hex-4-enyl, (E)-hex-3-enyl, (Z)-hex-3-enyl, (E)-hex-2-enyl, (Z)-hex-2-enyl, (E)-hex-1-enyl,
  • the alkynyl group is, for example, ethynyl, prop-1-ynyl, prop-2-ynyl, but-1-ynyl, but-2-ynyl, but-3-ynyl, pent-1-ynyl, pent-2-ynyl, pent-3-ynyl, pent-4-ynyl, hex-1-ynyl, hex-2-ynyl, hex-3-ynyl, hex-4-ynyl, hex-5-ynyl, 1-methylprop-2-ynyl, 2-methylbut-3-ynyl, 1-methylbut-3-ynyl, 1-methylbut-2-ynyl, 3-methylbut-1-ynyl, 1-ethylprop-2-ynyl, 3-methylpent-4-ynyl, 2-methylpent-4
  • the alkynyl group is ethynyl, prop-1-ynyl or prop
  • oxo i.e., forming sulfoxide or sulfone
  • spiro heterocyclic group refers to a polycyclic heterocyclic group of 5 to 20 yuan, in which one atom (called spiral atom) is shared between each monocyclic ring in the system, wherein one or more ring atoms are heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur, and the sulfur may be optionally oxoed (i.e., forming sulfoxide or sulfone), and the remaining ring atoms are carbon. It may contain one or more double bonds. It is preferably 6 to 14 yuan, more preferably 7 to 10 yuan (e.g., 7, 8, 9 or 10 yuan).
  • the heterocyclic group may be substituted or unsubstituted.
  • aryl refers to a 6- to 14-membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (fused polycyclic is a ring that shares adjacent carbon atom pairs) group with a conjugated ⁇ electron system, preferably 6- to 10-membered, such as phenyl and naphthyl.
  • the aryl group includes an aryl ring as described herein fused to a heteroaryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is an aryl ring, and non-limiting examples thereof include:
  • Aryl groups can be substituted or unsubstituted.
  • the heteroaryl ring includes a heteroaryl group as described herein fused to an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring attached to the parent structure is a heteroaryl ring, non-limiting examples of which include:
  • a heteroaryl group can be substituted or unsubstituted.
  • alkyl alkoxy
  • cycloalkyl heterocyclyl
  • aryl and “heteroaryl” and the like herein may be substituted or unsubstituted; when substituted, they may be substituted at any available point of attachment, and the substituents are preferably independently selected from one or more identical or different substituents of halogen, alkyl, alkoxy, haloalkyl, haloalkoxy, hydroxy, hydroxyalkyl, cyano, amino, nitro, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl.
  • cycloalkyl, heterocyclic, aryl and heteroaryl groups include residues derived from the parent ring atom by removing one H, or residues derived from the same or two different ring atoms of the parent by removing two H, i.e., "divalent cycloalkyl", “divalent heterocyclic", “arylene” and “heteroarylene”.
  • cycloalkyloxy refers to a cycloalkyl-O- group wherein cycloalkyl is as defined herein.
  • heterocyclyloxy refers to heterocyclyl-O- wherein heterocyclyl is as defined herein.
  • haloalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more halogens, wherein alkyl is as defined herein.
  • haloalkoxy refers to an alkoxy group substituted with one or more halogens, wherein alkoxy is as defined herein.
  • hydroxyalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more hydroxy groups, wherein alkyl is as defined herein.
  • halogen refers to F, Cl, Br or I.
  • hydroxy refers to -OH.
  • amino refers to -NH2 .
  • cyano refers to -CN.
  • nitro refers to -NO2 .
  • carboxylate refers to -C(O)O(alkyl), -C(O)O(cycloalkyl), (alkyl)C(O)O-, or (cycloalkyl)C(O)O-, where alkyl and cycloalkyl are as defined herein.
  • Optional or “optionally” means that the subsequently described event or circumstance may but need not occur, and the description includes instances where the event or circumstance occurs or does not occur.
  • a heterocycloalkyl group optionally substituted with an alkyl group means that an alkyl group may but need not be present, and the description includes instances where the heterocycloalkyl group is substituted with an alkyl group and instances where the heterocycloalkyl group is not substituted with an alkyl group.
  • Substituted means that one or more H in a given structure is replaced by a specific substituent. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art can determine (by experiment or theory) possible or impossible substitutions without undue effort. Furthermore, when the group is substituted by more than one of the substituents, the substituents are independent of each other (i.e., the more than one substituents may be different from each other or the same).
  • the compounds of the present invention may be chiral and therefore may exist in various enantiomeric forms. Thus, these compounds may exist in racemic form or optically active form.
  • the compounds of the present invention encompass isomers or mixtures, racemates in which each chiral carbon is in R or S configuration.
  • the compounds of the present invention or their intermediates can be separated into enantiomeric compounds by chemical or physical methods known to those skilled in the art, or used in synthesis in this form. In the case of racemic amines, diastereomers are prepared from the mixture by reaction with optically active resolution agents.
  • Suitable resolution agents are optically active acids, such as tartaric acid, diacetyltartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid, appropriate N-protected amino acids (such as N-benzoylproline or N-phenylsulfonylproline) or various optically active camphorsulfonic acids in R and S forms.
  • optically active resolution agents such as dinitrobenzoylphenylglycine, triacetic acid immobilized on silica gel
  • Derivatives of cellulose or other carbohydrates or chiral derivatized methacrylate polymers can also be advantageously subjected to chromatographic enantiomer resolution.
  • Suitable eluents for this purpose are aqueous or alcoholic solvent mixtures, for example, hexane/isopropanol/acetonitrile.
  • Tautomer refers to structural isomers of different energies that can be interconverted via low energy barriers.
  • proton tautomers also referred to as prototransfer tautomers
  • prototransfer tautomers include interconversions via proton migration, such as keto-enol isomerization, imine-enamine isomerization, and lactam-lactimide isomerization. All tautomeric forms of all compounds in the present disclosure are within the scope of the present disclosure.
  • the name of the compound named in a single manner does not exclude any tautomer.
  • patient refers to any animal including mammals, preferably mice, rats, other rodents, rabbits, dogs, cats, pigs, cows, sheep, horses or primates, and most preferably humans.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometry
  • Mass spectrometry was measured using Waters 2767 HPLC/Waters SQD, Waters H-class UPLC-SQD2, and Agilent HPLC/Waters liquid chromatography-mass spectrometry.
  • TLC refers to thin layer chromatography
  • HATU (221 mg, 0.58 mmol) and DIPEA (186 mg, 1.44 mmol) were added to a DMF (2 mL) solution of compound 1-3 (82 mg, 0.48 mmol).
  • the reaction solution was stirred at 0°C for 10 minutes, and then compound 1-5 (177 mg. 0.48 mmol) was added, and the reaction solution was returned to room temperature and stirred overnight.
  • EA (20 mL) was added to the reaction solution for dilution, and then H 2 O (30 mL) was added to separate the two phases, and the aqueous phase was extracted with EA (10 mL ⁇ 2), and the obtained organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to obtain a residue.
  • the crude compound 2-1 (200 mg, 0.42 mmol) was dissolved in DMF (3 mL), and HATU (192 mg, 0.504 mmol), DIPEA (271 mg, 2.1 mmol) and compound 1-8 (164 mg, 0.504 mmol, 60%) were added.
  • the reaction solution was stirred at room temperature for 1 hour.
  • 20 mL of saturated brine was added to the reaction solution, extracted with EA (20 mL ⁇ 1), and the organic phase was washed with saturated brine (20 mL ⁇ 2).
  • the combined organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a residue.
  • HATU 232 mg, 0.61 mmol
  • DIPEA 198 mg, 1.53 mmol
  • the reaction solution was stirred at 0°C for 10 minutes, and then compound 1-5 (190 mg. 0.51 mmol) was added, and the reaction solution was returned to room temperature and stirred overnight.
  • the reaction solution was extracted with EA (20 ml ⁇ 2), the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a residue.
  • the crude product 8-4 (130 mg, 1.0 mmol) was dissolved in ACN (5 mL), and then ethyl bromoacetate (248.9 mg, 1.5 mmol) and DIPEA (388 mg, 3 mmol) were added and stirred at 80 ° C for 16 h.
  • the reaction solution was added with water (30 mL) to quench the reaction, extracted with DCM (30 ⁇ 3 mL), and the organic phase was washed with saturated brine (20 ml ⁇ 3), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a residue.
  • the crude compound 18-3 (200 mg, 1.1 mmol) was dissolved in acetonitrile (4 mL), and DIPEA (426.5 mg, 3.3 mmol) and benzyl bromoacetate (253.2 mg, 1.1 mmol) were added.
  • the reaction solution was stirred at room temperature for 2 h.
  • the reaction solution was extracted with DCM (30 ⁇ 3 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a residue.
  • DIPEA 360 mg, 2.79 mmol was slowly added dropwise to a DMF (8 mL) solution of 1-5 (230 mg, 0.62 mmol), and then HATU (424 mg, 1.11 mmol) was added and continued to stir at 0°C for 20 min, and then a DMF (2 mL) solution of compound 23-4 (210 mg, 0.83 mmol) was added dropwise, and continued to stir at room temperature for 1 h.
  • test compound Dissolve the test compound in DMSO to 10mM stock solution and store at -20°C for later use.
  • the initial concentration of the compound is 20 ⁇ M, 0.8% DMSO, 4-fold serial dilution, 10 concentrations, duplicate wells; 50mM HEPES, pH 7.4, 10mM EDTA, 1mM DTT, 1mM MgCl 2 ⁇ H 2 O, 1mM ATP, 0.035% SDS, 1% BSA are used as reaction buffer to prepare 4x c20s working solution, 4x i20s working solution, and the corresponding 4x substrate Suc-LLVY-AMC working solution, 4x substrate Ac-ANW-AMC working solution, which are prepared and used immediately.
  • the compounds of the present invention have an inhibitory effect on ⁇ 5i, but their inhibitory effect on ⁇ 5 is relatively weak, and thus do not affect the function of the proteasome in a normal body.
  • Human non-small cell lung cancer cells (A549) were plated in a 384-well plate (Greiner, 781079) at a number of 5*10 ⁇ 5/mL, and 20 ⁇ L of DMEM (Gibco#11995-065) + 10% FBS (Gibco, 10091-148) containing the above cells was added to each well, and pre-incubated for 2 hours at 37°C, 5% CO 2 ; the starting concentration of the test compound was 20 ⁇ M, 4-fold dilution, 10 concentrations, double wells, and the final DMSO concentration was 0.4%, and it was added to the 384-well culture plate at a volume of 5 ⁇ L/well; no cells and compounds were added to the negative control wells, and no compounds were added to the positive control wells.
  • the compounds of the present invention have relatively weak inhibition on ⁇ 1 and ⁇ 5, and thus do not affect the function of proteasome in normal organisms.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • the compounds of the present invention have inhibitory effects on both ⁇ 1i and ⁇ 5i. Therefore, the compounds of the present invention are a class of dual inhibitors that are effective against ⁇ 1i/ ⁇ 5i (LMP2/LMP7).
  • Test Example 4 Evaluation of the inhibitory effect of compounds on LPS-induced IL-12/IL-23p40 production by human PBMC cells
  • PBMC Peripheral blood mononuclear cells
  • Vehicle sc, 5mL/kg
  • animals in group 3-5 were subcutaneously injected with the corresponding

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Abstract

提供了一种式I所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其具有良好的蛋白酶体抑制作用，可用于治疗与炎症有关的疾病，以及制备用于此类病症或疾病的药物。

Description

三肽环氧酮化合物、药物组合物及其制备方法和用途
本申请要求享有：
于2022年12月27日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为2022116910995，名称为“三肽环氧酮化合物、药物组合物及其制备方法和用途”的在先申请的优先权；
于2023年12月19日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为2023117623367，名称为“三肽环氧酮化合物、药物组合物及其制备方法和用途”的在先申请的优先权；
所述在先申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及三肽环氧酮化合物、药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术
泛素-蛋白酶体系统(UPS)通过一种多酶机制，在真核生物胞内的蛋白降解和胞浆以及细胞核的周转中起着重要作用，包括目标蛋白泛素化和26S蛋白酶体随后的蛋白水解。蛋白酶体在几乎所有的细胞生物学通路中都发挥着重要的调节功能。UPS通常通过多泛素链与一个或多个赖氨酸的共价结合来降解蛋白质。包含至少四个泛素分子的多泛素链被26S蛋白酶体有效地识别和降解。26S蛋白酶体由26S蛋白酶体由一个承载泛素受体的19S调节体、去泛素化酶、一个负责蛋白质展开的环状的ATP酶以及一个20S蛋白水解核心复合物组成。在结构上，20S蛋白酶体核心粒子由α和β亚基组成，它们构成了一个桶状复合体，由四个环组成，每个环有七个亚基。外侧的两个环由α亚基组成，内侧的两个环由β亚基组成，含有催化活性蛋白酶体亚基PSMB6(β1c)、PSMB7(β2c)和PSMB5(β5c)。这三个蛋白水解活性亚基负责至少三种肽酶活性：caspase样(由β1c发挥作用)、类胰蛋白酶(由β2c发挥作用)和类凝乳胰蛋白酶(由β5c发挥作用)活性。在造血细胞和受IFN-γ刺激的细胞中，20S蛋白酶体内两环的催化活性标准蛋白酶体亚基β1c、β2c和β5c被β1i(LMP2；PSMB9)，β2i(多催化内肽酶复合物样(MECL-1；PSMB10)和β5i(LMP7；PSMB8)取代，形成免疫蛋白酶体。免疫蛋白酶体亚基交换改变了20S蛋白酶体的切割特异性。在免疫蛋白酶体中，标准蛋白酶体中β1c发挥的caspase样活性强烈降低，而糜凝胰蛋白酶样活性增强。这导致了具有疏水C端残基的多肽的生成，这些多肽适合MHC-I的表达。免疫蛋白酶体参与抗原处理影响病原体诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应，病原体清除，并形成CTL库。除了MHC-I抗原处理外，免疫蛋白酶体还参与T细胞的膨胀、T辅助细胞分化、巨噬细胞极化，以及对大脑免疫病理损伤、肺相关疾病、神经退行性疾病和炎症性疾病的保护。免疫蛋白酶体在造血细胞中表达，在IFN-γ刺激的细胞中诱导，并在某些癌症中上调。此外，由于蛋白酶体在调节众多细胞过程中的作用，以及T细胞在促炎环境中的生存需要免疫蛋白酶体亚基，抑制蛋白酶体是改善炎症性疾病的一种有吸引力的策略。事实上，不同的免疫蛋白酶体抑制剂也被证明在炎症疾病的临床前模型中有效。(Cells 2021,10,3216)
2009年，环氧酮抑制剂PR-957(后来更名为ONX 0914)被描述和表征为以浓度依赖的方式对LMP7具有选择性。在解析ONX 0914浸泡免疫蛋白酶体的晶体结构后，解释了这种选择性的分子基础，表明LMP7底物口袋理论上有利于ONX 0914的结合，但LMP2的Phe31空间位阻阻止了结合。因此，在许多研究中，ONX 0914被用作LMP7选择性抑制剂的工具化合物。例如，在临床前小鼠模型中，通过ONX 0914对LMP7的抑制可以防止病毒感染后大脑的免疫病理损伤，防止结肠炎相关癌症的形成，并预防几种自身免疫性疾病。在细胞水平上，这些影响被证明涉及疾病发展的两个主要途径，即细胞因子分泌和T辅助细胞分化。LPS刺激的人PBMCs或小鼠脾细胞以及TCR激活的T细胞分泌的不同促炎细胞因子被ONX 0914抑制(通过对LMP7抑制)。此外，ONX 0914处理可阻止T辅助细胞向体外极化Th17细胞的分化。因此，这些发现提出免疫蛋白酶体是治疗炎症性疾病的一个有趣的治疗靶点。(EMBO Reports(2018)19:e46512)
因此，新型高选择性LMP7特异性抑制剂PRN1126被开发出来。然而，与ONX0914相比，PRN1126对细胞因子分泌、Th17分化和自身免疫性疾病没有影响。有实验证实了延长ONX 0914在细胞中的暴露时间会导致LMP7和LMP2的共同抑制。结合严格的LMP7选择性抑制剂PRN1126和LMP2特异性抑制剂，发现LMP2和LMP7的共抑制是减少IL-6分泌和损害Th17分化所必需的。在体内，只有联合抑制LMP2和LMP7可以显著改善实验性结肠炎，并抑制EAE疾病的诱导，在剂量条件下，单独采用PRN1126治疗则无效。通过PRN1126和LMP2抑制剂LU-001i或ML604440来共抑制LMP7和LMP2可以损害MHC I类细胞表面表达、IL-6分泌和T辅助性细胞向T辅助性17细胞的分化，并强烈改善实验性结肠炎和EAE等自身免疫性疾病。因此，LMP2和LMP7的共抑制似乎具有协同作用，有利于自身免疫性疾病的治疗(EMBO Reports(2018)19:e46512)。2018年，Kezar Life Sciences公司报道(J.Med.Chem.2018,61,11127-11143)的Zetomipzomib也是一类LMP2/LMP7双重抑制剂，目前正处于临床二期，评估对多种免疫相关疾病的治疗效果。
因此，开发一种对LMP2/LMP7的双重抑制，不影响正常机体中蛋白酶体发挥作用的小分子药物具有重要的意义。
发明内容
为了改善本发明面对的技术问题，本发明提供了一种式(I)所示的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐：
其中：
A选自4-8元单环杂环基、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基或6-14元稠合杂环基；
所述4-8元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N；Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)-C3-6环烷基或C3-6环烷基；n为0、1、2或3；
所述6-14元螺杂环基为E为CH或N；
K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1- 6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基或-C1-6亚烷基C(O)NH2；m为1、2或3；
Ra和Rb各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；Rc和Rd各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环烷基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S；条件是Ra和Rb与Rc和Rd中至少有一组与它们所连接的碳一起形成C3-5环烷基或3-5元杂环基；
所述6-14元桥杂环基为T为-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；
所述6-14元稠合杂环基为Rm和Rn与它们所连接的碳一起形成环C；
环C为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S；
R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基或3-6元杂环烷基；
R2为C6-8芳基或6-10元杂芳基；所述C6-8芳基或6-10元杂芳基各自独立地任选被1个、2个或多个H、羟基、卤素、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基所取代；
R3选自C3-7环烷基、C3-7环烯基、3-7元杂环烷基或3-7元杂环烯基；所述C3-7环烷基、C3-7环烯基、3-7元杂环烷基或3-7元杂环烯基各自独立地任选被1个、2个或多个H、C1-6烷基或C1-6烷氧基所取代；
R4选自H或C1-3烷基。
在一些实施方式中，式(I)所示的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，A选自4-8元单环杂环基、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基或6-14元稠合杂环基；
所述4-8元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N；Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基、或C3-6环烷基；n为0、1、2或3。
在一些实施方式中，R2为优选为
在一些实施方式中，A选自5-7元单环杂环基；所述5-7元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N；Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1- 6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基；n为0或1；所述单环杂环基选自吗啉基、哌啶基、1,4-二氧六环基、四氢-2H-吡喃基和哌嗪基。
在一些实施方式中，A选自5-7元单环杂环基；所述5-7元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N；Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1- 6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)-C3-6环烷基或C3-6环烷基；n为0或1；所述单环杂环基选自吗啉基、哌啶基、1,4-二氧六环基、四氢-2H-吡喃基和哌嗪基。
在一些实施方式中，A为
Rg和Rh相同或不同，各自独自地选自C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基所取代；n为0或1；
Rf为H或C1-6烷基；
Rp为NH(C1-6烷基)或N(C1-6烷基)2；
Rq为C1-6烷基；
Ru和Rv相同，各自独立地为CN。
在一些实施方式中，A为
Rg和Rh相同或不同，各自独自地选自C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基所取代；n为0或1；
Rf为H或C1-6烷基；
Rp为NH(C1-6烷基)或N(C1-6烷基)2；
Rq为C1-6烷基、氰基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基或-(C1-6亚烷基)-C3-6环烷基；
Ru和Rv相同，各自独立地为CN。
在一些实施方式中，A选自任选被1个、2个或多个Rw所取代的6元单环杂环基；所述6元单杂环基选自吗啉基、哌嗪基、四氢吡喃基、哌啶基、二氧六环基。
在一些实施方式中，Rw、Rf、Rg、Rh、Rp、Rq、Ru和Rv相同或不同，各自独自地选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环丁基甲基、-(CH2)S(O)2CH3、甲氨基、二甲基氨基、二甲基氨基甲基、氰基、氰基甲基、羟甲基、
在一些实施方式中，A为E为CH或N；
K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基和-(C1-6亚烷基)C(O)NH2；m为1、2和3；
Ra和Rb各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
Rc和Rd各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环烷基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S；条件是Ra和Rb与Rc和Rd中至少有一组与它们所连接的碳一起形成C3-5环烷基或3-5元杂环基。
在一些实施方式中，A为K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-C1-6亚烷基C(O)NH2；m为1、2和3；
Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
或者，Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S。
在一些实施方式中，环B选自任选被1个、2个或多个Rt所取代的下列基团：
在一些实施方式中，Rk选自H、甲基、氰基甲基、羟基乙基、
在一些实施方式中，A为T为-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；Rm和Rn与它们所连接的碳一起形成环C；
环C为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S。
在一些实施方式中，环C为
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式Ia所示：
其中，A、R1、R3和R4如式(I)化合物中所定义。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式Ib所示：
其中，A、R1、R3和R4如式(I)化合物中所定义。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7所示：
其中R1、R3、R4、Rf、Rg、Rh、Rp、Rq、Ru和Rv如式(I)化合物中所定义。
在一些实施方式中，式Ⅱ-1和式Ⅱ-2化合物中，Rg和Rh相同或不同，各自独自地选自C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基所取代；n为0或1；Rf为H或C1-6烷基。
在一些实施方式中，式Ⅱ-1和式Ⅱ-2化合物中，Rg和Rh相同或不同，各自独自地选自甲基、异丙基、氰基甲基、羟甲基、-CH2-N(CH3)2、-CH2S(O)2CH3、环丙基和环丁基；Rf为H或甲基。
在一些实施方式中，式Ⅱ-3化合物中，Rp为NH(C1-6烷基)或N(C1-6烷基)2。
在一些实施方式中，式Ⅱ-3化合物中，Rp为NH(CH3)或N(CH3)2。
在一些实施方式中，式Ⅱ-4和式Ⅱ-5化合物中，Rq为C1-6烷基。
在一些实施方式中，式Ⅱ-4和式Ⅱ-5化合物中，Rq为C1-6烷基、C3-6环烷基、卤代C1-6烷基、氰基C1-6烷基或-(C1-6亚烷基)-C3-6环烷基。
在一些实施方式中，式Ⅱ-4和式Ⅱ-5化合物中，Rq为甲基、乙基或异丙基。
在一些实施方式中，式Ⅱ-4化合物中，Rq为环丙基、-CH2CF3、-CH2CN或-CH2-环丁基。
在一些实施方式中，式Ⅱ-6和式Ⅱ-7化合物中，Ru和Rv相同，各自独立地为CN。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a所示:

其中，Rf和Rg如式II-1化合物所定义；Rh如式II-2化合物所定义；Rp如式II-3化合物所定义；Rq如式Ⅱ-4和式Ⅱ-5化合物所定义；Ru如式II-6化合物所定义；Rv如式II-7化合物所定义；R1、R3和R4如式(I)化合物中所定义。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式II-1b、式II-2b、式II-3b、式II-4b、式II-5b、式II-6b、式II-7b所示:
其中，Rf和Rg如式II-1化合物所定义；Rh如式II-2化合物所定义；Rp如式II-3化合物所定义；Rq如式Ⅱ-4和式Ⅱ-5化合物所定义；Ru如式II-6化合物所定义；Rv如式II-7化合物所定义；R1、R3和R4如式(I)化合物中所定义。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式Ⅲ-1、Ⅲ-2所示：
其中，K、R1、R3、R4、Ra、Rb、Rc和Rd如式(I)化合物中所定义。
在一些实施方式中，式Ⅲ-1和式Ⅲ-2化合物中，K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基和-C1-6亚烷基C(O)NH2；m为1、2和3。
在一些实施方式中，式Ⅲ-1和式Ⅲ-2化合物中，K为O或-NRk-，Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基和-(C1-6亚烷基)C(O)NH2。
在一些实施方式中，式Ⅲ-1和式Ⅲ-2化合物中，K选自O或-NRk-，Rk选自H、甲基、-CH2CN、-CH2CH2OH、-CH2CF3、-CH2C(O)NH2或
在一些实施方式中，式Ⅲ-1化合物中，Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S。
在一些实施方式中，式Ⅲ-1化合物中，Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环丙基。
在一些实施方式中，式Ⅲ-2化合物中，Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
环B为C3-5环烷基或3-5元杂环烷基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S。
在一些实施方式中，式Ⅲ-2化合物中，Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；环B为环丙基、环丁基、氧杂环丁基和氮杂环丁基；或者，氮杂环丁基被甲基所取代。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式Ⅲ-1a、Ⅲ-2a所示：
其中，K、R1、R3、R4、Ra、Rb、Rc和Rd如式Ⅲ-1和Ⅲ-2化合物定义。
在一些实施方式中，式I所示化合物的结构如式Ⅲ-1b、Ⅲ-2b所示：
其中，K、R1、R3、R4、Ra、Rb、Rc和Rd如式Ⅲ-1和Ⅲ-2化合物定义。
在一些实施方式中，式I所示的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中A选自
在一些实施方式中，式I、式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7、式Ⅲ-1、式Ⅲ-2、式Ia、式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a、式Ⅲ-1a和式Ⅲ-2a化合物中，R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基或C1-6烷基。
在一些实施方式中，式I、式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7、式Ⅲ-1、式Ⅲ-2、式Ia、式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a、式Ⅲ-1a和式Ⅲ-2a化合物中，R1为甲基。
在一些实施方式中，式I、式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7、式Ⅲ-1、式Ⅲ-2、式Ia、式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a、式Ⅲ-1a和式Ⅲ-2a化合物中，R3为5-7元环烯基；所述5-7元环烯基任选被1个、2个或多个H、C1-3烷基或C1-3烷氧基所取代。
在一些实施方式中，式I、式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7、式Ⅲ-1、式Ⅲ-2、式Ia、式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a、式Ⅲ-1a和式Ⅲ-2a化合物中，R3为
在一些实施方式中，式I、式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7、式Ⅲ-1、式Ⅲ-2、式Ia、式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a、式Ⅲ-1a和式Ⅲ-2a化合物中，R4选自H或C1-3烷基。
在一些实施方式中，式I、式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6、式II-7、式Ⅲ-1、式Ⅲ-2、式Ia、式II-1a、式II-2a、式II-3a、式II-4a、式II-5a、式II-6a、式II-7a、式Ⅲ-1a和式Ⅲ-2a化合物中，R4为甲基。
在一些实施方式中，式I化合物中，R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基或C1-6烷基；R3为5-7元杂环烯基；所述5-7元杂环烯基任选被1个、2个或多个C1-3烷基或C1-3烷氧基所取代；R4选自H或C1- 3烷基；和A为Rg和Rh相同或不同，各自独自地选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基；n为0或1；Rf为H或C1-6烷基。
在一些实施方式中，式I化合物中，R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基或C1-6烷基；R3为5-7元杂环烯基；所述5-7元杂环烯基任选被1个、2个或多个C1-3烷基或C1-3烷氧基所取代；R4选自H或C1- 3烷基；和A为
K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)C(O)NH2；m为1、2和3；
Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
或Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
环B为C3-5环烷基或3-5元杂环烷基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环烷基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S。
在一些实施方式中，式Ⅰ化合物选自以下结构：



在一些实施方式，式Ⅰ化合物选自以下结构：


在一些实施方式中，式I所示化合物具有以下结构：


本发明还提供式I所示化合物的制备方法，包括以下方案。
方案1：化合物a和化合物b发生缩合反应得到式Ⅰa所示化合物。反应式如下：
其中，R1、R3、R4和A如式(I)中所定义。
所述缩合反应在缩合剂和/或碱的存在下进行。
所述缩合剂选自HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)、HBTU(O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)和DEPBT(3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮)中的一种。
所述碱为有机碱，选自三乙胺或N,N-二异丙基乙胺。
方案2：化合物c和化合物d发生缩合反应得到式Ⅰa所示化合物。反应式如下：
其中，R1、R3、R4和A如式(I)中所定义。
所述缩合反应在缩合剂和/或碱的存在下进行。
所述缩合剂选自HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)、HBTU(O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)和DEPBT(3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮)中的一种。
所述碱为有机碱，选自三乙胺或N,N-二异丙基乙胺。
方案3：化合物e和化合物f发生缩合反应得到式Ⅰa所示化合物。反应式如下：
其中，R1、R3、R4和A如式(I)中所定义。
所述缩合反应在缩合剂和/或碱的存在下进行。
所述缩合剂选自HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)、HBTU(O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)和DEPBT(3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮)中的一种。
所述碱为有机碱，选自三乙胺或N,N-二异丙基乙胺。
本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐的至少一种以及一种或多种药学上可接受的辅料。
根据本发明的实施方案，所述药物组合物还可以进一步含有一种或多种额外的治疗剂。
本申请所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体pH值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
可作为药学上可接受辅料的物质包括，但并不限于，离子交换剂，铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，淀粉；纤维素和它的衍生物；树胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；辅料；油；二醇类化合物；酯类；琼脂；缓冲剂；海藻酸；无热原的水；等渗盐；林格(氏)溶液；乙醇，磷酸缓冲溶液，和其他无毒的合适的润滑剂，着色剂，释放剂，包衣衣料，甜味剂，调味剂和香料，防腐剂和抗氧化剂。
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
本发明的药物组合物可以通过多种途径施用，包括口服、经直肠、经皮、皮下、关节内、静脉内、肌内和鼻内。本发明的化合物优选被配制成可注射或口服组合物或者均用于经皮施用的药膏、乳液或贴剂。
用于口服施用的组合物可采取散装液体溶液或混悬液或散装粉末的形式。然而，组合物更通常以单位剂型呈现以便于精确给药。术语“单位剂型”指适宜作为用于人个体和其它哺乳动物的单位剂量的物理离散单元，各单元含有与适宜药物赋形剂、辅料或载体联合的经计算产生预期治疗作用的预定量的活性材料。典型的单位剂型包括液体组合物的预装、预测量安瓿或注射器或者就固体组合物而言丸剂、片剂、胶囊等。在这类组合物中，式I的本发明的化合物通常为小量组分(约0.1至约50％重量或优选约1至约40％重量)，其余为有助于形成预期剂型的各种辅料或载体以及加工助剂。
适于口服施用的液体形式可包括含有缓冲剂、混悬和分散剂、着色剂、矫味剂等的适宜的水性或非水性辅料。固体形式可包括例如以下成分或具有类似性质的本发明的化合物中的任一者：粘合剂，赋形剂，崩解剂，润滑剂，助流剂，甜味剂，或矫味剂。
可注射组合物通常基于可注射无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水或本领域已知的其它可注射载体。如前所述，该组合物中的式I的本发明的活性化合物通常是小量组分，经常为约0.05至10％重量，其余为可注射载体等。
经皮组合物通常配制成含有活性成分的局部用软膏或乳膏剂，所述活性成分的量通常为约0.01至约20％重量、优选约0.1至约20％重量、优选约0.1至约10％重量、更优选约0.5至约15％重量。当配制成软膏时，活性成分通常与石蜡或水混溶性软膏基质组合。或者，活性成分可使用例如水包油型乳膏基质配制成乳膏剂。这类经皮制剂是本领域熟知的，通常包括另外的成分以提高活性成分或制剂的皮肤渗透或稳定性。所有这类已知的经皮制剂和成分均包括在本发明的范围内。
本发明的化合物还可以通过经皮装置施用。因此，经皮施用可以采用储库或多孔膜型的贴剂或固体基质类型的贴剂来实现。
本发明还提供式(I)所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐或包含其药物组合物，在制备LMP7与LMP2双重抑制剂中的应用。
本发明还提供式(I)所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐或包含其组合物，制备用于预防和/或治疗LMP7与LMP2双重抑制剂介导的疾病或病症的药物中的用途。
本发明还提供式(I)所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐或包含其组合物，制备用于预防和/或治疗自身免疫性疾病和炎性疾病中的用途；优选的，制备用于类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、过敏性气道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和炎性肠病(例如克罗恩病、溃疡性结肠炎)。
本发明还提供一种抑制LMP7与LMP2的方法，包括给予患者预防或治疗有效量的式(I)所示的化合物、其异构体或其前药化合物中的至少一种，或者给予患者预防或治疗有效量的上述药物组合物。
本发明还提供了一种预防和/或治疗LMP7与LMP2双重抑制剂介导的疾病或病症的方法，包括给予患者预防或治疗有效量的式(I)所示的化合物、其异构体或其前药化合物中的至少一种，或者给予患者预防或治疗有效量的上述药物组合物。
本发明还提供了一种预防和/或治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的方法，包括给予患者预防或治疗有效量的式(I)所示的化合物、其异构体或其前药化合物中的至少一种，或者给予患者预防或治疗有效量的上述药物组合物。
本发明还提供了一种预防和/或治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、过敏性气道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和炎性肠病(例如克罗恩病、溃疡性结肠炎)的方法，包括给予患者预防或治疗有效量的式(I)所示的化合物、其异构体或其前药化合物中的至少一种，或者给予患者预防或治疗有效量的上述药物组合物。
有益效果
本发明的化合物具有良好LMP7与LMP2共同抑制作用，可用于治疗与LMP7与LMP2抑制剂相关的疾病，例如炎症有关的疾病，以及制备用于此类病症或疾病的药物。
术语定义与说明
除非有相反陈述，否则在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基(C1-6烷基)。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或未取代的。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如本文中所述。优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷氧基(C1-12烷氧基)，更优选含有1至6个碳原子的烷氧基(C1-6烷氧基)。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。烷氧基可以是取代的或未取代的。
术语“亚烷基”指从饱和的直链或支链烃基中去掉两个H后所得到的饱和的二价烃基基团，其可包含1-20个碳原子，优先包括1-12个碳原子。非限制性实施例包括亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)等。所述亚烷基可以是取代的或未取代的。
术语“烯基”应理解为优选表示直连或支链的烃基，其包含一个或多个双键并且具有2～20个碳原子，优选“C2-10烯基”。“C2-10烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，例如，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，C2-6烯基)，具有2或3个碳原子(即，C2-3烯基)。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。所述烯基可以是取代的或未取代的。
术语“炔基”应理解为表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2～20个碳原子，优选“C2-10炔基”。术语“C2-10炔基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，例如，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，“C2-6炔基”)，具有2或3个碳原子(“C2-3炔基”)。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。所述炔基可以是取代的或未取代的。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)碳原子或3至8个(例如3、4、5、6、7和8个)碳原子，更优选包含3至6个碳原子，所述的环原子可任选被氧代，环上的氧代基(＝O)属于环的一部分。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“环烯基”指环内具有碳碳双键的单环或多环的环状烃取代基。
术语“螺环烷基”指5至20元，系统中的每个单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、6元/3元、6元/4元、6元/5元和6元/6元的双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：
所述环烷基环包括如本文中所述的环烷基(包括单环、螺环、稠环和桥环)稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括 等；优选所述环烷基可以是取代的或未取代的。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳，所述的环碳原子可任选被氧代，环上的氧代基(＝O)属于环的一部分。优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)环原子，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选包含3至8个环原子(例如3、4、5、6、7和8个)，其中1-3个(例如1、2和3个)是杂原子；更优选包含3至6个环原子，其中1-3个是杂原子；最优选包含5或6个环原子，其中1-3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。所述“杂环基”可以为“杂环烷基”、“杂环烯基”或“杂环炔基”。
术语“杂环烷基”指饱和的单环或多环的环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳，所述的环碳原子可任选被氧代，环上的氧代基(＝O)属于环的一部分。优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)环原子，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选包含3至8个环原子(例如3、4、5、6、7和8个)，其中1-3个(例如1、2和3个)是杂原子；更优选包含3至6个环原子，其中1-3个是杂原子；最优选包含5或6个环原子，其中1-3个是杂原子。
术语“杂环烯基”指环内具有碳碳双键的单环或多环的环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳，所述的环碳原子可任选被氧代，环上的氧代基(＝O)属于环的一部分。优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)环原子，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选包含3至8个环原子(例如3、4、5、6、7和8个)，其中1-3个(例如1、2和3个)是杂原子；更优选包含3至6个环原子，其中1-3个是杂原子；最优选包含5或6个环原子，其中1-3个是杂原子。
术语“螺杂环基”指5至20元，系统中的每个单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
术语“稠合杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠合杂环基，优选为双环或三环，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、6元/3元、6元/4元、6元/5元和6元/6元双环稠合杂环基。稠合杂环基的非限制性实例包括：
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
所述杂环基环包括如本文中所述的杂环基(包括单环、螺杂环、稠合杂环和桥杂环)稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
等。所述杂环基可以是取代的或未取代的。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(稠合多环是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。所述芳基包括如本文中所述的芳基环稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或未取代的。
术语“杂芳基”指包含1至4个(例如1、2、3和4个)杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(例如5、6、7、8、9或10元)，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基等。所 述杂芳基环包括如本文中所述的杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是取代的或未取代的。
本文中的术语“烷基”、“烷氧基”、“环烷基”、“杂环基”、“芳基”和“杂芳基”等可以是取代的或未取代的；当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个相同或不同的取代基。
上述环烷基、杂环基、芳基和杂芳基包括从母体环原子上除去一个H所衍生的残基，或从母体的相同或两个不同的环原子上除去两个H所衍生的残基，即“二价环烷基”、“二价杂环基”、“亚芳基”、“亚杂芳基”。
术语“环烷基氧基”指环烷基-O-，其中环烷基如本文中所定义。
术语“杂环基氧基”指杂环基-O-，其中杂环基如本文中所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如本文中所定义。
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如本文中所定义。
术语“羟基烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如本文中所定义。
术语“氰基烷基”指烷基被一个或多个氰基取代，其中烷基如本文所定义。
术语“卤素”指F、Cl、Br或I。
术语“羟基”指-OH。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代基”或“氧代”指“＝O”。
术语“羰基”指C＝O。
术语“羧基”指-C(O)OH。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)、-C(O)O(环烷基)、(烷基)C(O)O-或(环烷基)C(O)O-，其中烷基和环烷基如本文中所定义。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环烷基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环烷基团被烷基取代的情形和杂环烷基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指所给结构中的一个或多个H被具体取代基所取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。进一步，当该基团被1个以上所述取代基取代的，所述取代基之间是相互独立地(即所述的1个以上的取代基可以是互不相同的，也可以是相同的)。
应当理解，本公开中使用的单数形式，如“一种”，包括复数指代，除非另有规定。此外，术语“包括”是开发性限定并非封闭式，即本公开所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。本领域技术人员可以理解，式I所示化合物可以以各种药学上可接受的盐的形式存在。如果这些化合物具有碱性中心，则其可以形成酸加成盐；如果这些化合物具有酸性中心，则其可以形成碱加成盐；如果这些化合物既包含酸性中心(例如羧基)又包含碱性中心(例如氨基)，则其还可以形成内盐。
本发明的化合物可以溶剂合物(如水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
根据其分子结构，本发明的化合物可以是手性的，因此可能存在各种对映异构体形式。因而这些化合物可以以消旋体形式或光学活性形式存在。本发明的化合物涵盖了各手性碳为R或S构型的异构体或其混合物、消旋体。本发明的化合物或其中间体可以通过本领域技术人员公知的化学或物理方法分离为对映异构体化合物，或者以此形式用于合成。在外消旋的胺的情况中，通过与光学活性的拆分试剂反应，从混合物制得非对映异构体。适当的拆分试剂的示例是光学活性的酸，例如R和S形式的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、适当的N-保护的氨基酸(例如N-苯甲酰脯氨酸或N-苯磺酰基脯氨酸)或各种光学活性的樟脑磺酸。借助光学活性的拆分试剂(例如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸、三乙酸 纤维素或其它碳水化合物的衍生物或手性衍生化的异丁烯酸酯聚合物)，也可有利地进行色谱对映体拆分。用于此目的的适当的洗脱剂是含水或含醇的溶剂混合物，例如，己烷/异丙醇/乙腈。
可以根据已知的方法，例如通过萃取、过滤或柱层析来分离相应的稳定异构体。
本申请所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，表示绝对构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键可以为或者同时包含两种构型。
键表示未指定构型，包括顺式(E)或反式(Z)构型。
另外，本申请的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。“互变异构体”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇异构化、亚胺-烯胺异构化和内酰胺-内酰亚胺异构化。本公开中的所有化合物的所有的互变异构形式均在本公开的范围内。用单一方式命名的化合物的名称不排除任何互变异构体。
本申请还包括一些与本文中记载的结构相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。本公开的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本公开的范围之内。
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(D)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或更高丰度的氘。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的化合物。在制备氘代形式的化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的技术方式做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件进行，或按照商品说明书进行。
化合物的结构通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定采用Bruker Avance III 400MHz核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
质谱(MS)的测定是通过Waters 2767 HPLC/Waters SQD，Waters H-class UPLC-SQD2，Agilent HPLC/Waters液相质谱联用仪进行测定。
手性HPLC分析测定使用Shimadzu LC-20AD进行测定。
薄层层析硅胶板使用于成化工(上海)有限公司GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板的规格是0.2～0.25mm，薄层层析分离纯化产品采用的硅胶板规格是0.4～0.5mm。
柱层析一般使用于成化工(上海)有限公司100～200目硅胶为载体。
高效液相制备使用Waters HPLC、Gilson HPLC和Biotage MPLC制备型色谱仪。
手性制备使用GilsonGX-281制备型HPLC。
下列实施例中如无特殊说明，反应均在氮气气氛下进行。氮气气氛是指反应瓶连接一个约1升容积的氮气气球。
室温的温度范围是20℃-30℃。
TLC是指薄层色谱法。
本领域技术人员应当理解，拆分的手性化合物可以通过在手性色谱柱中的保留时间的长短进行区分，因 此，针对保留时间先后拆分出来的手性化合物以编号后缀P1、P2等对应地进行区分。即，例如，后缀P1对应较早被洗脱出手性色谱柱的具有某个手性结构的手性化合物，则后缀P2对应较晚被洗脱出手性色谱柱的具有某个手性结构的手性化合物。结构式中若有列出化合物的绝对构型，则其不意味着与编号后缀P1、P2的化合物直接对应，仅是示意绝对构型的两种存在形式。编号后缀P1、P2的化合物的绝对构型以特定保留时间所标记的客观对应的绝对构型为准。
实施例1中的中间体1-4、1-5和1-8的合成参照文献：J.Med.Chem.2018,61,11127-11143.
试剂英文缩写对应的试剂名称
实施例1化合物1的合成
第一步
将K2CO3(414g,2.64mmol)加入到化合物1-1(150mg,0.88mmol)和溴乙酸乙酯(200mg,1.10mmol)的乙腈(5mL)溶液中。将反应液加热到85℃，回流16小时。将反应液用EtOAc(20mL×3)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(EtOAc:PE＝1:10)纯化所得到化合物1-2(152mg)。
MS m/z(ESI):200.0[M+H]+。
第二步
将LiOH·H2O(64mg,1.52mmol)加入到化合物1-2(152mg,0.76mmol)的甲醇(2mL)和H2O(2mL)反应液中，室温下反应。TLC检测，原料反应完全后，用盐酸调节pH＝5，然后减压蒸馏除去有机溶剂，冻干水分，得到粗产品化合物1-3(150mg)。
MS m/z(ESI):172.2[M+H]+
第三步
向在DCM(4mL)中的化合物1-4(250mg,0.53mmol)加入TFA(2mL)，并将混合物在0℃下搅拌。反应1小时后，用DCM(10mL)稀释。将稀释后的溶液加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)，并分离两层。水层用DCM(10mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品化合物1-5(187mg)。
MS m/z(ESI):745.2[2M+H]+
第四步
将HATU(221mg,0.58mmol)和DIPEA(186mg,1.44mmol)加入到化合物1-3(82mg,0.48mmol)的DMF(2mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，然后再加入化合物1-5(177mg.0.48mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。向反应液中加入EA(20mL)稀释，再加入H2O(30mL)，分离两相，将水相用EA(10mL×2)萃取，将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩得到残余物。将残余物经快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝50:1)纯化后得到化合物1-6(80mg)。
MS m/z(ESI):526.3[M+H]+
第五步
将Pd/C(20mg)加到化合物1-6(80mg,0.16mmol)的THF(5mL)溶液中。在氢气氛围下，反应液室温搅拌3小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用THF洗涤两遍。将所得溶液浓缩，得到粗产品化合物1-7(65mg)。
MS m/z(ESI):436.2[M+H]+
第六步
将DEPBT(54mg,0.18mmol)和DIPEA(58mg,0.45mmol)加入到化合物1-7(65mg,0.15mmol)的DMF(1mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(29mg.0.15mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。将反应液用EA(10mL×2)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后得到残余物。将残余物依次通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化后，然后通过高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝60/40；流速：100ml/min)拆分得到化合物1(8.4mg)，SFC保留时间：1.303min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝7.6Hz,1H),8.15(d,J＝9.4Hz,1H),7.60(d,J＝7.4Hz,1H),7.22(d,J＝8.7Hz,2H),6.77(d,J＝8.7Hz,2H),5.42(d,J＝4.5Hz,1H),5.35(d,J＝8.2Hz,1H),4.62-4.55(m,2H),4.45(t,J＝9.1Hz,1H),4.21–4.08(m,3H),3.69(s,3H),3.27(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H), 2.84(d,J＝15.8Hz,1H),2.69–2.64(m,1H),2.41–2.15(m,10H),1.84(s,2H),1.80–1.64(m,4H),1.40(s,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H)。
MS m/z(ESI):613.3[M+H]+。
实施例2化合物2的合成
第一步
在氢气气氛下，将化合物1-4(200mg,0.14mmol)溶解于甲醇(5mL)中，加入10％Pd/C(44mg,0.04mmol,10％)。反应液在室温下搅拌4小时。将反应过滤后浓缩，得到粗品化合物2-1(200mg)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):365.3[M-17]。
第二步
将粗品化合物2-1(200mg，0.42mmol)溶解于DMF(3mL)中，加入HATU(192mg，0.504mmol)、DIPEA(271mg，2.1mmol)和化合物1-8(164mg，0.504mmol,60％)。反应液在室温下搅拌1小时。反应液中加入饱和食盐水20mL，用EA(20mL×1)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(20mL×2)。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物用快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH：DCM＝1：10)纯化得到化合物2-2(140mg)。
MS m/z(ESI):542.4[M-17]。
第三步
将化合物2-2(140mg,0.25mmol)溶于DCM(2mL)中，然后将TFA(2mL)慢慢加入。反应液在室温下搅拌1小时。将反应液减压浓缩得到粗产品化合物2-3(115mg)。
MS m/z(ESI):460.4[M+H]+。
第四步
将化合物2-4(80mg,0.59mmol)溶于THF(3mL)中，然后将DIPEA(229mg,1.77mmol)和溴乙酸乙酯(116mg,0.7mmol)加入。反应液在80℃下搅拌3小时。反应液中加入饱和食盐水(20mL)。用EA(20mL×3)萃取，合并有机相。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物用快速制备仪以洗脱剂体系(PE:EA＝2:1)纯化得到化合物2-5(80mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.76(td,J＝11.2,1.8Hz,1H),3.67–3.52(m,2H),3.38(dd,J＝47.9,16.5Hz,2H),2.79(dt,J＝11.2,2.2Hz,1H),2.56(td,J＝7.2,6.1Hz,1H),2.41(td,J＝11.2,2.9Hz,1H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H),0.71(td,J＝6.3,3.0Hz,1H),0.41(dd,J＝13.4,6.7Hz,1H)。
第五步
将化合物2-5(50mg,0.27mmol)溶于THF和H2O(1:1,4mL)，然后加入氢氧化锂(13mg,0.54mmol)。反应液在室温下搅拌2小时。将反应液浓缩得到粗品化合物2-6(42mg)。将粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):158.1[M+H]+。
第六步
将粗品化合物2-2(115mg，0.25mmol)溶解于DMF(3mL)中，加入HATU(114mg，0.25mmol)、DIPEA(161mg，1.25mmol)和化合物2-6(42mg，0.25mmol)。反应液在室温下搅拌1小时(一锅法加 料)。反应液中加入饱和食盐水(20mL)，用EA(20mL×1)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(20mL×2)。将分离后的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物依次用快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH：DCM)＝1：10)纯化得到粗品化合物2(80mg)，然后用高效液相色谱法纯化得到(25mg)，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物2(13.54mg)，SFC保留时间：1.292min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(s,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),6.94(s,1H),6.89–6.83(m,2H),6.14(t,J＝6.7Hz,1H),5.33(s,1H),4.96–4.83(m,1H),4.69–4.59(m,1H),4.55–4.35(m,2H),4.11(s,1H),3.79(s,3H),3.74–3.53(m,3H),3.43–3.01(m,3H),2.90(d,J＝5.0Hz,1H),2.69(s,1H),2.57–2.32(m,3H),2.31–2.11(m,5H),1.90–1.78(m,2H),1.50(s,3H),1.34(d,J＝7.0Hz,3H),0.81–0.42(m,2H)。
MS m/z(ESI):599.3[M+H]+。
实施例3化合物3的合成
第一步
将K2CO3(373mg,2.70mmol)加入到化合物3-1(135mg,0.90mmol)和溴乙酸乙酯(180mg,1.08mmol)的ACN(5mL)溶液中。将反应液加热回流，搅拌过夜。将反应液冷却至室温，用EtOAc(20mL×3)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(MeOH:DCM＝1:10)纯化得到化合物3-2(105mg)。
MS m/z(ESI):200.3[M+H]+
第二步
将化合物3-2(105mg,0.53mmol)和LiOH·H2O(44mg,1.1mmol)加入到MeOH/H2O(4mL,V/V＝1:1)中。反应液在室温下搅拌1小时。用稀盐酸调节反应液pH＝5，然后冻干溶剂得到粗品化合物3-3(130mg)。粗品不经纯化直接进行下一步。
MS m/z(ESI):172.2[M+H]+
第三步
将HATU(232mg,0.61mmol)和DIPEA(198mg,1.53mmol)加入到化合物3-3(87mg,0.51mmol)的DMF(5mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，然后加入化合物1-5(190mg.0.51mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。向反应液中加入EA(30mL)稀释，之后加入H2O(40mL)，分离两相，将水相用EA(20mL×2)萃取，将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化后得到化合物3-4(132mg,49％)。
MS m/z(ESI):526.2[M+H]+
第四步
在氢气氛围下，将Pd/C(20mg)加到化合物3-4(132mg,0.25mmol)的THF(5mL)溶液中，室温搅拌3小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用THF洗涤两遍，把所得溶液浓缩，得到粗品化合物3-5(109mg)。
第五步
将DEPBT(90mg,0.30mmol)和DIPEA(97mg,0.75mmol)加入到化合物3-5(109mg,0.25mmol)的DMF(5mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(49mg.0.25mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。将反应液用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到残余物。将残余物依次通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化，然后经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物3(35mg)，SFC保留时间：1.267min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(d,J＝7.7Hz,1H),8.03(d,J＝9.4Hz,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,1H), 7.20(d,J＝8.6Hz,2H),6.76(d,J＝8.7Hz,2H),5.42(d,J＝4.6Hz,1H),5.36(s,1H),4.65–4.53(m,2H),4.42(t,J＝9.0Hz,1H),4.27–4.15(m,1H),3.69(s,3H),3.60(t,J＝4.5Hz,2H),3.25(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.93(d,J＝15.8Hz,1H),2.78(d,J＝15.8Hz,1H),2.42–2.14(m,10H),1.80–1.71(m,2H),1.38(s,3H),1.06(d,J＝6.9Hz,3H),0.64–0.50(m,3H),0.44–0.38(m,1H)。
MS m/z(ESI):613.3[M+H]+。
实施例4化合物4的合成
第一步
将化合物4-1(125mg,0.57mmol)溶于THF(3mL)中，然后将DIPEA(221mg,1.71mmol)和溴乙酸乙酯(113.6mg,0.68mmol)加入。反应液在80℃下搅拌8小时。反应液中加入饱和食盐水(20mL)，用EA(20mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将粗品用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(PE:EA＝1:1)纯化得到化合物4-2(110mg,收率：88％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.60(d,J＝6.9Hz,2H),4.48(d,J＝7.1Hz,2H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.77–3.58(m,2H),3.25(s,2H),2.83(s,2H),2.56(dd,J＝5.6,3.9Hz,2H),1.35–1.21(m,3H)。
第二步
将化合物4-2(110mg,0.51mmol)溶于THF和H2O(1:1,2mL)，然后加入氢氧化锂(24.6mg,1.02mmol)。反应液在室温下搅拌2小时。将反应液浓缩得到粗品化合物4-3(118mg)。粗品不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):188[M+H]+。
第三步
将粗品化合物2-3(137mg，0.137mmol)溶解于DMF(2mL)中，加入HATU(62.5mg，0.16mmol)、DIPEA(88mg，0.68mmol)和化合物4-3(32mg，0.137mmol)。反应液在室温下搅拌1小时。反应液中，用EA(20mL×1)萃取，用饱和食盐水洗涤(20mL×2)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物依次用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH:DCM)＝1:10)纯化然后用高效液相色谱法纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝85/15；流速：100ml/min)拆分得到化合物4(11.1mg)，SFC保留时间：1.255min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(d,J＝8.6Hz,3H),6.87(d,J＝8.6Hz,3H),6.09(d,J＝6.4Hz,1H),5.30(s,1H),4.91(t,J＝4.4Hz,1H),4.70–4.59(m,3H),4.54–4.36(m,4H),4.16(s,1H),3.80(s,3H),3.76–3.60(m,2H),3.25(d,J＝4.8Hz,1H),3.19–2.92(m,2H),2.89(d,J＝5.0Hz,1H),2.85–2.62(m,2H),2.60–2.33(m,3H),2.26(t,J＝10.8Hz,2H),2.16(dd,J＝14.2,8.8Hz,3H),1.90–1.78(m,2H),1.50(s,3H),1.34(d,J＝7.0Hz,3H)。
MS m/z(ESI):629.3[M+H]+。
实施例5化合物5的合成
第一步
向在MeOH(5mL)中的化合物5-1(130mg,0.66mmol)加入甲醛(37％aq)(189mg,1.792.31mmol)和NaBH3CN(146mg,2.31mmol)，并将混合物在室温下搅拌。反应过夜后，将反应液浓缩得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化得到化合物5-2(100mg)。
MS m/z(ESI):174.3[M+H]+
第二步
将化合物5-2(100mg,0.58mmol)和LiOH·H2O(49mg,1.16mmol)加入MeOH/H2O(2mL,V/V＝1:1)中。反应液在室温下搅拌1小时。用稀盐酸调节反应液pH＝5，然后冻干溶剂，得到粗产物化合物5-3(100mg)。
MS m/z(ESI):160.1[M+H]+
第三步
将HATU(232mg,0.61mmol)和DIPEA(198mg,1.53mmol)加入到化合物5-3(87mg,0.51mmol)的DMF(5mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，然后加入化合物1-5(190mg.0.51mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。将反应液EA(20ml×2)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化后得到化合物5-4(132mg)。
MS m/z(ESI):536.2[M+23]+
第四步
将Pd/C(20mg)加到化合物5-4(132mg,0.25mmol)的THF(5mL)溶液中，在氢气氛围下，室温搅拌3小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用THF洗涤两次。将所得溶液浓缩，得到粗产品化合物5-5(109mg)。
第五步
将DEPBT(90mg,0.30mmol)和DIPEA(97mg,0.75mmol)加入到化合物5-5(109mg,0.25mmol)的DMF(5mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(49mg.0.25mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。将反应液EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到残余物。将残余物依次通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化，然后用高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝85/15；流速：100ml/min)拆分得到化合物5(35mg)，SFC保留时间：1.175min。
MS m/z(ESI):601.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(d,J＝7.7Hz,1H),8.03(d,J＝9.4Hz,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝8.6Hz,2H),6.76(d,J＝8.7Hz,2H),5.42(d,J＝4.6Hz,1H),5.36(s,1H),4.65–4.53(m,2H),4.42(t,J＝9.0Hz,1H),4.27–4.15(m,1H),3.69(s,3H),3.60(t,J＝4.5Hz,2H),3.25(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.93(d,J＝15.8Hz,1H),2.78(d,J＝15.8Hz,1H),2.42–2.14(m,10H),1.80–1.71(m,2H),1.38(s,3H),1.06(d,J＝6.9Hz,3H),0.64–0.50(m,3H),0.44–0.38(m,1H)。
实施例6化合物6的合成
第一步
将氢化钠(1.8g,0.08mol)加入无水四氢呋喃(50mL)中，搅拌形成悬浮液。在0℃下，滴加化合物6-2(17.8g,0.08mol)，滴加完毕后搅拌20min，然后加入化合物6-1(5g,0.05mol)，室温搅拌反应2h。反应结束后，将反应液慢慢倾入饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:0-5:1)得到化合物6-3(5.3g)。
MS m/z(ESI):171.1[M+H]+。
第二步
取100mL高压反应釜，加入氨(60mL,7M于MeOH中)和化合物6-3(5.3g,0.03mol)。将反应体系密封并加热至80℃，搅拌反应48h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝1:0-10:1)得到化合物6-4(4.8g)。
MS m/z(ESI):188.2[M+H]+。
第三步
将(Boc)2O(3.2g,14.66mmol)和三乙胺(1.9g,18.78mmol)加入到化合物6-4(2.3g,12.29mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中。将反应混合物升温至70℃，搅拌2h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:0-1:1)得到化合物6-5(3g)。
MS m/z(ESI):288.2[M+H]+。
第四步
将化合物6-5(2g,6.96mmol)加入到氢化钠(167mg,6.96mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中，然后加入碘甲烷(2g,14.1mmol)。反应液在室温条件下搅拌3h。反应结束后，将反应液慢慢加入到饱和氯化铵溶液中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩。将残余物经硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:0-1:1)得到化合物6-6(1.5g)。
MS m/z(ESI):324.2[M+23]+。
第五步
将LiOH·H2O(18mg,0.42mmol)加入到化合物6-6(63mg,0.21mmol)的THF(4mL)和H2O(1mL)反应液中。反应液在室温下反应。TLC检测，原料反应完全。将反应液减压浓缩，冻干水分，得到粗产品化合物6-7(72mg)。
MS m/z(ESI):274.2[M+H]+。
第六步
将HBTU(80mg,0.25mmol)和DIPEA(81mg,0.63mmol)加入到化合物6-7(57mg,0.21mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物2-3(64mg,0.14mmol)。将反应液恢复到室温，搅拌1小时。将反应液中用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝10:1)纯化后得到化合物6-8(40mg)。
MS m/z(ESI):715.4[M+H]+。
第七步
向在DCM(2mL)中的化合物6-8(40mg,0.04mmol)加入TFA(1mL)。反应液在室温下搅拌1小时。LCMS检测反应完全。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品用高效液相色谱制备纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝85/15；流速：100ml/min)拆分得到化合物6(3.03mg)，SFC保留时间：1.194min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,J＝7.5Hz,2H),7.70(d,J＝9.1Hz,1H),7.19(d,J＝8.7Hz,2H),6.80(d,J＝8.7Hz,2H),5.41(d,J＝4.7Hz,1H),5.35(s,1H),4.63(dd,J＝7.8,4.7Hz,1H),4.57-4.52(m,1H),4.48–4.42(m,1H),4.14(p,J＝6.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.64-3.57(m,2H),3.50–3.42(m,2H),3.23(d,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.38(dd,J＝14.6,5.1Hz,1H),2.27–2.08(m,11H),1.80–1.74(m,2H),1.42(d,J＝3.8Hz,4H),1.38(s,3H),1.01(d,J＝7.1Hz,3H)。
MS m/z(ESI):615.4[M+H]+。
实施例7化合物7的合成
第一步
将化合物6-4(2.3g,12.29mmol)，甲醛(20mL,35％于水中)加入甲酸(20mL)中。将反应液加热至110℃，搅拌反应5h。反应结束后，将反应液减压浓缩除去部分溶剂。将残余物用饱和碳酸钾溶液调节至中性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物经硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:0-0:1)得到化合物7-1(1.3g)。
MS m/z(ESI):216.2[M+H]+。
第二步
将化合物7-1(100mg,0.46mmol)，氢氧化锂(33.4mg,1.40mmol)加入到四氢呋喃(6mL)和水(2mL)的混合溶液中。反应液在室温条件下，搅拌反应12h。反应结束后，将反应体系减压浓缩得到粗品。粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):188.3[M+H]+。
第三步
将化合物7-2(87mg,0.46mmol)，N,N-二异丙基乙胺(180.1mg,1.40mmol)，HATU(212mg,0.56mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，搅拌10min，加入化合物1-5(173.1mg,0.46mmol)。反应液在室温条件下，搅拌反应16h。反应结束后，将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝1:0-5:1)得到化合物7-3(180mg)。
MS m/z(ESI):542.2[M+H]+。
第四步
将化合物7-3(180mg,0.33mmol)，钯炭(20mg)加入四氢呋喃(10mL)中。在氢气氛围下，室温搅拌反应16h。反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到粗品化合物7-4(100mg)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):452.4[M+H]+。
第五步
将化合物7-4(100mg,0.22mmol)，化合物1-8(43.3mg,0.22mmol)，N,N-二异丙基乙胺(85.8mg,0.66mmol)，DEPBT(79.5mg,0.27mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中。反应液在室温条件下搅拌反应16h。反应结束后，将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝1:0-5:1)得到粗品，再经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物7(24.8mg)，SFC保留时间：1.336min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(dd,J＝14.5,7.5Hz,2H),7.54(d,J＝9.1Hz,1H),7.19(d,J＝8.6Hz,2H),6.80(d,J＝8.7Hz,2H),5.42(d,J＝4.7Hz,1H),5.36(s,1H),4.66(dd,J＝7.3,4.7Hz,1H),4.59–4.51(m,1H),4.51–4.42(m,1H),4.24–4.11(m,1H),3.71(s,3H),3.65–3.55(m,2H),3.48–3.39(m,2H),3.23(d,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.38(dd,J＝14.2,5.3Hz,1H),2.25–2.07(m,13H),1.81–1.73(m,2H),1.70–1.53(m,4H),1.38(s,3H),1.05(d,J＝7.0Hz,3H)。
MS m/z(ESI):629.3[M+H]+。
实施例8化合物8的合成
第一步
将化合物8-1(450mg,2.04mmol)溶于DCM(10mL)中，然后将MsCl(284.9mg，2.48mmol)，Et3N(418.9mg,4.14mmol)加入，并在室温下搅拌2h。将反应液加入水(30mL)淬灭反应，用EA(30×3mL)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩得到粗品。粗品用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(EA:PE＝1:3)纯化得到化合物8-2(420mg)。
MS m/z(ESI):196.2[M-99]。
第二步
将化合物8-2(420mg,1.42mmol)溶于ACN(10mL)中，然后将TMSCN(282.2mg，2.84mmol)，TBAF(2.84mL，2.84mmol，1M THF溶液)加入，并在80℃下搅拌16h。将反应液加入水(50mL)淬灭反应，用EA(30×3mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将粗品用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(EA:PE＝1:2)纯化得到化合物8-3(220mg)。
MS m/z(ESI):171.1[M-55]。
第三步
将化合物8-3(220mg,1.mmol)溶于DCM(2mL)中，然后将TFA(2mL)加入，并在室温下搅拌2h。将反应液浓缩得到粗品化合物8-4(130mg)，未经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):127.1[M+H]+。
第四步
将粗品8-4(130mg,1.0mmol)溶于ACN(5mL)中，然后将溴乙酸乙酯(248.9mg,1.5mmol)和DIPEA(388mg,3mmol)加入，并在80℃下搅拌16h。将反应液加入水(30mL)淬灭反应，用DCM(30×3mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3),无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(EA:PE＝1:1)纯化得到化合物8-5(70mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.96–3.86(m,2H),3.79(td,J＝11.3,2.5Hz,1H),3.27(s,2H),2.96(d,J＝10.9Hz,1H),2.79(d,J＝11.4Hz,1H),2.60–2.43(m,3H),2.31(t,J＝10.4Hz,1H),1.29(t,J＝7.1Hz,3H)。
MS m/z(ESI):213.3[M+H]+。
第五步
将化合物8-5(70mg,0.33mmol)溶于MeOH/H2O(2mL，V/V＝1:1)中，加入LiOH(15.8mg,0.66mmol)搅拌2h。将反应液浓缩得到粗品8-6(60mg，收率不计)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ3.89–3.78(m,2H),3.73(td,J＝11.3,2.5Hz,1H),3.00–2.90(m,3H),2.79(dd,J＝11.5,1.8Hz,1H),2.64(qd,J＝17.0,5.8Hz,2H),2.23(td,J＝11.4,3.5Hz,1H),2.07–1.96(m,1H)。
第六步
将化合物8-6(60mg,0.33mmol)溶于DMF(2mL)中，冷却至0℃下，加入HATU(163mg,0.429mmol)和DIPEA(128mg,0.99mmol)搅拌10min后，加入化合物1-5(160mg,0.429mmol)溶于DMF(1mL)室温搅拌过夜。将反应液加入饱和食盐水(30mL)淬灭反应，用EA(30×3mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将粗品用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH:DCM＝1:10)纯化得到化合物8-7(76mg)。
MS m/z(ESI):521.3[M-17]。
第七步
将化合物8-7(76mg,0.14mmol)溶于甲醇(3mL)中，加入Pd/C(10.6mg，0.01mmol,10％)。在氢气氛围下，反应液室温下搅拌3h。将反应液过滤后浓缩得到粗品化合物8-8(63mg)。
MS m/z(ESI):449.3[M+H]+。
第八步
将化合物8-8(63mg,0.14mmol)溶于DMF(2mL)中，冷却至0℃下，加入DEPBT(54.8mg,0.18mmol)和DIPEA(90mg,0.7mmol)搅拌10min后，加入化合物1-8(82mg,0.18mmol，40％)溶于DMF (1mL)室温搅拌过夜。将反应液加入饱和食盐水(30mL)淬灭反应，用EA(30×3mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将粗品依次用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH:DCM＝1:10)纯化，然后用高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物8(5.53mg)；SFC保留时间：1.453min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37–7.29(m,3H),6.95–6.80(m,3H),6.21–6.03(m,1H),5.31(d,J＝8.8Hz,1H),4.89(d,J＝19.2Hz,1H),4.70–4.59(m,1H),4.55–4.35(m,2H),4.28–4.05(m,1H),3.97–3.87(m,1H),3.82–3.60(m,5H),3.25(t,J＝5.2Hz,1H),3.11–2.87(m,3H),2.79(t,J＝10.5Hz,1H),2.66–2.47(m,4H),2.44–2.10(m,7H),1.90–1.78(m,2H),1.51(d,J＝1.2Hz,3H),1.37–1.31(m,3H)。
MS m/z(ESI):626.3[M+H]+。
实施例9化合物9的合成
第一步
将DIEPA(264mg,2.08mmol)加入到化合物9-1(146mg,0.68mmol)和溴乙酸乙酯(170mg,1.02mmol)的乙腈溶液中。将反应液在室温中搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩得到残余物。将残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(EtOAc:PE＝1:2)纯化得到化合物9-2(130mg)。
MS m/z(ESI):197.3[M+H]+。
第二步
将氢氧化锂(48mg,2.00mmol)加入到化合物9-2(130mg,0.66mmol)的甲醇(3mL)和水(1mL)溶液中。将反应液在室温搅拌反应1小时。将反应液减压浓缩得残余物，冻干得到化合物9-3(111mg)。
MS m/z(ESI):169.2[M+H]+
第三步
将(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)(315.6mg,0.83mmol)加入到化合物9-3(93mg,0.55mmol)、N,N-二异丙基乙胺(214mg,1.66mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液中(5mL)。将反应液在室温下搅拌反应0.25小时，加入化合物1-5(206mg,0.55mmol)，然后在室温下继续搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。将反应液EtOAc(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(25mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(DCM:MeOH＝10:3)纯化得到化合物物9-4(80mg)。
MS m/z(ESI):523.4[M+H]+
第四步
将10％钯碳(50％水)(200mg)加入化合物9-4(80mg,0.15mmol)甲醇溶液中(5.0mL)。在氢气氛围下，将反应物室温下搅拌反应3小时。将反应液过滤后减压浓缩，得到化合物9-5(50mg)。
MS m/z(ESI):433.4[M+H]+
第五步
将DEPBT(41mg，0.14mmol)加入到9-5(50mg,0.12mmol)、N,N-二异丙基乙胺(45mg,0.35mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液中(5mL)，在室温下搅拌反应0.25小时，然后加入化合物1-8(27mg,0.14mmol)，在室温下继续搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。将反应液中用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(30mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将粗品用硅胶柱谱法以洗脱剂体系(DCM:MeOH＝10:1)纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝85/15；流速：100ml/min)拆分得到化合物9(4.44mg)，SFC保留时间：1.347min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(s,1H),7.33(d,J＝8.6Hz,2H),7.10–6.94(m,1H),6.87(d,J＝8.6Hz,2H),6.19(d,J＝6.4Hz,1H),5.53–5.21(m,2H),4.89(d,J＝5.1Hz,1H),4.64(dd,J＝7.7,5.6Hz,1H),4.50(ddd,J＝10.7,6.4,4.5Hz,1H),4.40(dd,J＝14.2,7.1Hz,1H),4.35–4.15(m,1H),3.80(s,3H),3.25(d,J＝5.0 Hz,1H),3.13–2.87(m,3H),2.82–2.66(m,3H),2.61–2.40(m,3H),2.30–2.11(m,6H),1.86–1.80(m,3H),1.50(s,3H),1.33(d,J＝7.0Hz,4H)。
MS m/z(ESI):610.4[M+H]+。
实施例10化合物10、10-P1和10-P2的合成
第一步
向在DCM(4mL)中的化合物10-1(300mg,1.38mmol)加入TFA(2mL)。将混合物在室温下搅拌1小时。将反应液浓缩得到粗品化合物10-2(160mg)。
第二步
将溴乙酸苄酯(348mg,1.52mmol)加入到粗品化合物10-2(160mg,1.38mmol)和DIPEA(535mg,4.14mmol)的ACN(2mL)溶液中。将反应液在室温下搅拌2小时。将反应液用EA(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱柱(EA:PE＝1:8)纯化后得到化合物10-3(190mg)。
MS m/z(ESI):266.3[M+H]+。
第三步
将Pd/C(30mg)加到化合物10-3(190mg,0.72mmol)的MeOH(15mL)溶液中。在氢气氛围下，将反应液室温搅拌过夜。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(20mL)洗涤两遍。将所得溶液浓缩得到粗品化合物10-4(119mg)。
MS m/z(ESI):176.2[M+H]+。
第四步
将HATU(327mg,0.86mmol)和DIPEA(279mg,2.16mmol)加入到化合物10-4(126mg,0.72mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-5(268mg,0.72mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌1小时。往反应液中加入EA(40mL)稀释，之后加入H2O(40mL)，分离两相，将水相用EA(20mL×2)萃取，将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝50:1)纯化后得到化合物10-5(162mg,45％)。
MS m/z(ESI):530.3[M+H]+。
第五步
将Pd/C(30mg)加到化合物10-5(162mg,0.31mmol)的MeOH(10mL)溶液中。在氢气氛围下，将反应液室温搅拌4小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(10mL)洗涤两遍。将所得溶液浓缩，得到粗品化合物10-6(149mg)。
MS m/z(ESI):440.3[M+H]+。
第六步
将DEPBT(203mg,0.68mmol)和DIPEA(131mg,1.02mmol)加入到化合物10-6(149mg,0.34mmol)的DMF(10mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(66mg,0.34mmol)。将反应液恢复到室温搅拌16小时。将反应液用EA(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将浓缩后的残余物通过快速硅胶色谱柱(MeOH:DCM＝1:10)纯化后得到化合物10(16mg)，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝75/25；流速：100ml/min)拆分后得到10-P1(2.60mg)和10-P2(2.25mg)，SFC保留时间：10-P1 1.619min和10-P2 2.010min。
10-P1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,J＝7.6Hz,1H),7.87(d,J＝9.2Hz,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,2H),6.80(d,J＝8.7Hz,2H),5.44(d,J＝4.7Hz,1H),5.36(s,1H),4.69–4.61(m,2H),4.57(dd,J＝13.4,8.0Hz,1H),4.44(t,J＝8.6Hz,1H),4.23-4.16(m,1H),3.75(d,J＝10.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.49(d,J＝11.2Hz,1H),3.30–3.20(m,3H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.92–2.80(m,2H),2.69–2.62(m,1H),2.56(d,J＝11.3Hz,1H),2.38(dd,J＝14.5,4.6Hz,1H),2.35–1.96(m,7H),1.89(t,J＝10.4Hz,1H),1.70-1.73(m,2H),1.39(s,3H),1.08(d,J＝7.0Hz,3H)。
MS m/z(ESI):617.4[M+H]+。
10-P2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(d,J＝9.3Hz,1H),7.64(d,J＝7.7Hz,1H),7.20(d,J＝8.7Hz,2H),6.78(d,J＝8.7Hz,2H),5.43(d,J＝4.6Hz,1H),5.36(s,1H),4.65(t,J＝5.4Hz,1H),4.61-4.59(m,2H),4.43(t,J＝8.8Hz,1H),4.23-4.16(m,1H),3.70(s,4H),3.44(d,J＝12.4Hz,1H),3.26(dd,J＝8.2,5.5Hz,3H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.92(d,J＝15.6Hz,1H),2.75(dd,J＝26.0,13.5Hz,2H),2.43-2.36(m,2H),2.34–1.98(m,7H),1.88(t,J＝10.4Hz,1H),1.81–1.71(m,2H),1.39(s,3H),1.07(d,J＝6.9Hz,3H)。
MS m/z(ESI):617.4[M+H]+。
实施例11化合物11的合成
第一步
向化合物11-1(1g,5.2mmol)的DCM(30mL)溶液中加入MeOH(3mL)，然后加入K2CO3(3.5g,138.2mmol)，缓慢滴加2-甲氨基乙醇(5.1g，67.9mmol)的DCM溶液。滴加完毕后，在室温下搅拌过夜。反应结束后，将减压浓缩除去有机溶剂，然后加入水(30mL)，用DCM(30×3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(DCM/MeOH＝20:1)纯化得到化合物11-2(450mg)
MS m/z(ESI):188.1[M+H]+。
第二步
向11-2(450mg，2.4mmol)的甲苯(10mL)溶液中加入DBU(368mg，2.4mmol)，然后加热100℃下搅拌过夜。反应结束后，将反应液减压浓缩除去甲苯，然后加入水(10mL)，用DCM(30×3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品。将粗品经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(DCM/MeOH＝20:1)纯化得到化合物11-3(278mg)
MS m/z(ESI):188.1[M+H]+。
第三步
向化合物11-3(278mg，1.48mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入H2O(2mL)，然后加入LiOH·H2O(304mg，7.24mmol)，然后在室温搅拌1h。反应结束后，缓慢加入HCl溶液(1mol/L)至pH＝3，减压浓缩除去有机溶剂，然后冻干，得到粗品化合物11-4(230mg)。粗品不经纯化直接进行下一步。
MS m/z(ESI):160.1[M+H]+。
第四步
在0℃下，向化合物1-5(250mg)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(550mg，1.4mmol)和DIPEA(470mg，3.6mmol)，低温下搅拌10min，然后再缓慢滴加粗产品11-4(230mg，1.44mmol)的DMF溶液。加料完毕后，将反应液缓慢升至室温搅拌1.5h。将反应液用EA(30×3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产品。将所得粗产品经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(DCM/MeOH＝10:1)纯化得到化合物11-5(220mg)。
MS m/z(ESI):514.4[M+H]+。
第五步
将Pd/C(70mg)加入到化合物11-5(220mg,0.43mmol)的MeOH(15mL)溶液中。在氢气氛围下，反应液在室温下搅拌4h。反应结束后，将反应液过滤除去Pd/C，然后浓缩得到粗品化合物11-6(173mg)。粗品不经纯化直接进行下一步。
MS m/z(ESI):424.2[M+H]+。
第六步
室温下，向化合物11-6(173mg，0.41mmol)的DMF(10mL)溶液中加入DEPBT(183mg，0.61mmol)和DIEPA(264mg，2.01mmol)，搅拌20min，然后滴加化合物1-8(40％于TFA，200mg，0.41mmol)，继续搅拌过夜。将反应液缓慢加入水(30mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(30×3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到残余物。将残余物依次经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(DCM/MeOH＝10:1)纯化，然后经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20； 流速：100ml/min)拆分得到化合物11(3.81mg)，SFC保留时间：0.986min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32(dd,J＝8.6,1.8Hz,2H),6.94(d,J＝7.6Hz,3H),6.61–6.45(m,1H),6.27–6.08(m,1H),5.33(d,J＝9.4Hz,1H),4.98–4.80(m,1H),4.68–4.59(m,1H),4.56–4.46(m,1H),4.42–4.32(m,1H),4.18(s,1H),3.87(d,J＝11.6Hz,2H),3.80(s,3H),3.70(d,J＝10.6Hz,1H),3.27(dd,J＝7.4,5.0Hz,1H),2.89(d,J＝5.0Hz,1H),2.77–2.62(m,2H),2.53(d,J＝13.9Hz,1H),2.30(dd,J＝8.0,3.5Hz,7H),2.19(d,J＝13.5Hz,4H),1.91–1.76(m,3H),1.50(s,3H),1.27(dd,J＝9.4,7.1Hz,3H)。
MS m/z(ESI):601.3[M+H]+。
实施例12化合物13的合成
第一步
将N,N-二异丙基乙胺(857mg,6.63mmol)，溴乙酸苄酯(604.8mg,2.65mg)加入到化合物13-1(250mg,2.21mmol)的乙腈(10mL)溶液中。室温条件下，反应液搅拌反应2h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝1:0-10:1)得到化合物13-2(460mg)。
MS m/z(ESI):262.2[M+H]+。
第二步
将氢氧化锂(55.1mg,2.30mmol)加入化合物13-2(200mg,0.77mmol)的四氢呋喃(5mL)和水(1mL)中。室温条件下，反应液搅拌2h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到化合物13-3，不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):172.2[M+H]+。
第三步
将N,N-二异丙基乙胺(294.6mg,2.28mmol)，HATU(346.7mg,0.91mmol)加入到化合物13-3(130mg,0.76mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，搅拌10min，然后加入化合物1-5(282.8mg,0.76mmol)。室温条件下，反应液搅拌反应1h。反应结束后，将反应液中加入适量水，用乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝1:0-10:1)得到化合物13-4(210mg)。
MS m/z(ESI):526.3[M+H]+。
第四步
将氢氧化锂(27.4mg,1.14mmol)加入到化合物13-4(200mg,0.38mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(2mL)中。室温条件下，反应液搅拌1h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到化合物13-5，不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):436.3[M+H]+。
第五步
将N,N-二异丙基乙胺(147.9mg,1.14mmol)，化合物13-5(74.4mg,0.38mmol)，DEPBT(137.0mg,0.46mmol)加入到化合物1-8(166mg,0.38mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。室温条件下，反应液搅拌反应16h。反应结束后，向反应液中加入适量水，乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到残余物。将残余物经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物13(9.7mg)，SFC保留时间：1.229min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(d,J＝7.6Hz,1H),7.99(d,J＝9.2Hz,1H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.21(d,J＝8.6Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),5.56(s,1H),5.36(s,1H),4.67–4.51(m,2H),4.42(t,J＝8.8Hz,1H),4.21–4.08(m,1H),3.70(s,3H),3.56(t,J＝4.8Hz,2H),3.38–3.34(m,1H),3.31–3.27(m,1H),3.25(d,J＝5.2Hz,1H),3.17–2.97(m,3H),2.75–2.62(m,2H),2.40–2.19(m,6H),1.76(p,J＝7.6Hz,2H),1.39(s,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),0.55(t,J＝4.9Hz,2H),0.39(t,J＝4.9Hz,2H)。MS m/z(ESI):613.3[M+H]+。
实施例13化合物14的合成
第一步
将N,N-二异丙基乙胺(762.6mg,5.90mmol)，溴乙酸苄酯(538.2mg,2.36mg)加入到化合物14-1(250mg,1.97mmol)的乙腈(10mL)中。室温条件下，反应液搅拌反应2h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝1:0-10:1)得到化合物14-2(470mg)。
MS m/z(ESI):276.2[M+H]+。
第二步
将钯炭(20mg)加入到化合物14-2(200mg,0.73mmol)的甲醇(5mL)溶液中。在氢气氛围下，反应液搅拌反应2h。反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物14-3，不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):186.2[M+H]+。
第三步
将N,N-二异丙基乙胺(282.8mg,2.19mmol)，HATU(332.8mg,0.88mmol)加入化合物14-3(135mg,0.73mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，搅拌10min，加入化合物1-5(271.4mg,0.73mmol)，室温条件下，搅拌1h。反应结束后，向反应液中加入适量水，乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝1:0-10:1)得到化合物14-4(230mg)。
MS m/z(ESI):540.4[M+H]+。
第四步
将钯炭(23mg)加入到化合物14-4(230mg,0.43mmol)的甲醇(5mL)中。在氢气氛围下，反应液在室温搅拌2h。反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物14-5，不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):450.3[M+H]+。
第五步
将N,N-二异丙基乙胺(165.7mg,1.28mmol)，化合物1-8(83.4mg,0.43mmol)，DEPBT(153.5mg,0.51mmol)加入到化合物14-5(192mg,0.43mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。室温条件下，反应液搅拌反应16h。反应结束后，向反应液中加入适量水，乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到残余物。将残余物依次经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物14(19.5mg)，SFC保留时间：1.347min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝7.7Hz,1H),8.06(d,J＝9.4Hz,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,2H),6.78(d,J＝8.7Hz,2H),5.42(d,J＝4.6Hz,1H),5.35(s,1H),4.62–4.55(m,2H),4.43(t,J＝8.9Hz,1H),4.27–4.18(m,1H),3.70(s,3H),3.49–3.43(m,2H),3.25(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.90–2.78(m,2H),2.39–2.17(m,10H),2.00–1.92(m,2H),1.90–1.81(m,2H),1.79–1.72(m,2H),1.70–1.62(m,1H),1.52–1.41(m,1H),1.39(s,3H),1.08(d,J＝6.9Hz,3H)。
MS m/z(ESI):627.3[M+H]+。
实施例14化合物15的合成
第一步
将溴乙酸苄酯(1.25g,5.44mmol)加入到化合物15-1(500mg,4.94mmol)和DIPEA(1.92g,14.82mmol)的ACN(20mL)溶液中。反应液在室温下搅拌2小时。将反应液用EA(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将浓缩后的残余物通过快速硅胶色谱柱(EA:PE＝1:8)纯化后得到化合物15-2(770mg)。
MS m/z(ESI):250.1[M+H]+。
第二步
将Pd/C(100mg)加到化合物15-2(500mg,1.60mmol)的MeOH(30mL)溶液中。在氢气氛围下，反应液室温搅拌过夜。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(20mL)洗涤两遍。将所得溶液浓缩得到粗品化合物15-3(310mg)。
MS m/z(ESI):160.3[M+H]+。
第三步
将HATU(689mg,1.81mmol)和DIPEA(585mg,4.53mmol)加入到化合物15-3(240mg,1.51mmol)的DMF(20mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌20分钟，之后加入化合物1-5(376mg.1.01mmol)。然后将反应液恢复到室温搅拌过夜。将反应液用EA(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将浓缩后得到的残余物通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝40:1)纯化得到化合物15-4(320mg)。
MS m/z(ESI):514.3[M+H]+。
第四步
将Pd/C(50mg)加到15-4(320mg,0.62mmol)的MeOH(10mL)溶液中。在氢气氛围下，将反应液在室温搅拌4小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(10mL)洗涤两遍。将所得溶液浓缩得到粗品化合物15-5(260mg)。
MS m/z(ESI):424.3[M+H]+。
第五步
将DEPBT(278mg,0.93mmol)和DIPEA(240mg,1.86mmol)加入到化合物15-5(260mg,0.62mmol)的DMF(10mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(121mg,0.62mmol)。将反应液恢复到室温，搅拌16小时。将反应液用EA(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将浓缩后得到的残余物依次通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化，然后用高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)＝75/25；流速：100ml/min)拆分得到化合物15(64mg)，SFC保留时间：1.047min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(dd,J＝7.6,3.3Hz,1H),7.91(dd,J＝16.1,9.3Hz,1H),7.65(dd,J＝7.7,6.0Hz,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),6.78(dd,J＝8.7,1.7Hz,2H),5.43(d,J＝4.5Hz,1H),5.35(s,1H),4.66–4.53(m,2H),4.43(t,J＝8.7Hz,1H),4.26–4.13(m,1H),3.75–3.64(m,4H),3.53–3.38(m,2H),3.25(dd,J＝5.1,2.9Hz,1H),2.99(d,J＝5.3Hz,1H),2.89(dd,J＝15.6,4.4Hz,1H),2.78(dd,J＝15.5,12.7Hz,1H),2.66–2.54(m,1H),2.38(dd,J＝13.9,6.9Hz,2H),2.24-2.18(m,5H),2.13-1.98(m,1H),1.84–1.70(m,3H),1.39(s,3H),1.07(d,J＝6.9Hz,3H),1.01(t,J＝6.2Hz,3H)。
MS m/z(ESI):601.3[M+H]+。
实施例15化合物16的合成
第一步
将N,N-二异丙基乙胺(842.1mg,6.52mmol)，溴乙酸苄酯(594.3mg,2.61mmol)加入到化合物16-1(250mg,2.17mmol)的乙腈(10mL)中。反应液室温条件下搅拌反应2h。反应结束后，将反应液减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝1:0-10:1)得到化合物16-2(500mg)。
MS m/z(ESI):264.3[M+H]+。
第二步
将钯炭(20mg)加入化合物16-2(200mg,0.76mmol)的甲醇(5mL)中。在氢气的氛围下，反应液搅拌反应2h。反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物16-3，不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):174.3[M+H]+。
第三步
将N,N-二异丙基乙胺(291.4mg,2.25mmol)，HATU(342.9mg,0.90mmol)加入化合物16-3(130mg,0.75mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，搅拌10min，加入化合物1-5(279.5mg,0.75mmol)。室温条件下，反应液搅拌反应1h。反应结束后，向反应液中加入适量水，乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到残余物。将残余物经硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝1:0-10:1)得到化合物16-4(230mg)。
MS m/z(ESI):528.4[M+H]+。
第四步
将钯炭(20mg)加入到化合物16-4(200mg,0.38mmol)的甲醇(5mL)中。在氢气氛围下，反应液搅拌2h。反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到粗品化合物16-5，粗品不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):438.3[M+H]+。
第五步
将N,N-二异丙基乙胺(147.2mg,1.14mmol)，化合物1-8(74.1mg,0.38mmol)，DEPBT(136.3mg,0.46mmol)加入到粗品化合物16-5(166mg,0.38mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。室温条件下，反应液搅拌反应16h。反应结束后，向反应液中加入适量水，乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到残余物。将残余物依次经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物16(17.1mg)，SFC保留时间：1.207min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(d,J＝9.3Hz,1H),7.60(d,J＝7.6Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,2H),6.78(d,J＝8.7Hz,2H),5.42(d,J＝4.4Hz,1H),5.35(s,1H),4.62–4.54(m,2H),4.44(t,J＝8.9Hz,1H),4.24–4.13(m,1H),3.69(s,3H),3.56(t,J＝4.7Hz,2H),3.26(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.87–2.71(m,2H),2.42–2.34(m,1H),2.27–2.12(m,8H),2.07(d,J＝11.0Hz,1H),1.80–1.71(m,2H),1.39(s,3H),1.14(s,3H),1.11–1.06(m,6H)。
MS m/z(ESI):615.3[M+H]+。
实施例16化合物17、17-P1和17-P2的合成
第一步
将化合物17-2(485mg,2.12mmol)加入到化合物17-1(250mg,1.93mmol)和DIEPA(748mg,5.79mmol)的ACN(30mL)溶液中。将反应液在室温下搅拌2小时。将反应液浓缩后得到的残余物，通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝50:1)纯化后得到化合物17-3(434mg)。
MS m/z(ESI):278.2[M+H]+。
第二步
将Pd/C(70mg)加到化合物17-3(434mg,1.57mmol)的MeOH(45mL)溶液中。在氢气氛围下，反应液室温下搅拌4小时。将反应液经硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤两遍。将所得溶液浓缩得到粗品化合物17-4(293mg)。
MS m/z(ESI):188.2[M+H]+。
第三步
将HATU(684mg，1.88mmol)和DIPEA(609mg,4.71mmol)加入到化合物17-4(293mg,1.57mmol)的DMF(35mL)溶液中，反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-5(391mg,1.05mmol)。将反应液温度恢复至室温，搅拌1小时。将反应液中用EA(80mLx2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM：MeOH＝50：1)纯化后得到化合物17-5(234mg)。
MS m/z(ESI):542.4[M+H]+。
第四步
将Pd/C(38mg)加到化合物17-5(234mg,0.43mmol)的MeOH(25mL)溶液中。在氢气氛围下，反应液室温下搅拌4小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤两遍。将所得溶液浓缩得到粗品化合物17-6(195mg)。
MS m/z(ESI):452.4[M+H]+。
第五步
将DEPBT(194mg，0.65mmol)和DIPEA(129mg,1.30mmol)加入到化合物17-6(195mg,0.43mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(84mg,0.43mmol)，将反应液置于室温，搅拌16小时。将反应液用EA(60mLx2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。将浓缩后的残余物依次通过快速硅胶色谱柱(DCM：MeOH＝20：1)纯化，然后再经高效液相色谱纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝80/20；流速：100ml/min)拆分得到化合物17-P1(6.55mg，SFC保留时间：1.106min)和化合物17-P2(12.71mg，SFC保留时间：1.073min)。
17-P1:
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(d,J＝7.7Hz,1H),7.92(d,J＝9.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝8.7Hz,2H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),5.44(s,1H),5.36(s,1H),4.67–4.54(m,2H),4.48–4.39(m,1H),4.26–4.15(m,1H),3.81–3.74(m,1H),3.71(s,3H),3.50–3.41(m,1H),3.24(d,J＝5.3Hz,1H),3.12–3.06(m,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.86(s,2H),2.66–2.61(m,1H),2.58–2.54(m,1H),2.41–2.36(m,1H),2.25–2.15(m,5H),2.13–2.04(m,1H),1.87(t,J＝10.6Hz,1H),1.81–1.72(m,2H),1.63–1.52(m,1H),1.39(s,3H),1.07(d,J＝7.0Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.81(d,J＝6.8Hz,3H)。
MS m/z(ESI):629.4[M+H]+。
17-P2:
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(d,J＝7.7Hz,1H),7.92(d,J＝9.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝8.7Hz,2H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),5.44(s,1H),5.36(s,1H),4.66–4.53(m,2H),4.47–4.39(m,1H),4.25–4.15(m,1H),3.80–3.73(m,1H),3.71(s,3H),3.52–3.40(m,1H),3.24(d,J＝5.3Hz,1H),3.13–3.06(m,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.86(s,2H),2.66–2.61(m,1H),2.57(s,1H),2.41–2.35(m,1H),2.27–2.14(m,5H),2.13–2.04(m,1H),1.91–1.83(m,1H),1.81–1.72(m,2H),1.63–1.52(m,1H),1.39(s,3H),1.07(d,J＝7.0Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.81(d,J＝6.8Hz,3H)。
MS m/z(ESI):629.4[M+H]+。
实施例17化合物18的合成
第一步
将化合物18-1(200mg,0.94mmol)溶于甲醇(4mL)中，加入多聚甲醛(56.6mg,1.88mmol)和NaBH3CN(118mg,1.88mmol)室温搅拌2h。加入甲醇淬灭反应，滤液减压浓缩得到粗品。将粗品用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH：DCM＝1：20)纯化得到化合物18-2(200mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.46(d,J＝4.9Hz,2H),3.25(s,2H),2.94–2.80(m,2H),2.39(s,3H),1.45(s,9H),0.70(t,J＝5.4Hz,2H),0.51(s,2H)。
MS m/z(ESI):227.2[M+H]+。
第二步
将化合物18-2(200mg,0.88mmol)溶于DCM(4mL)中，加入三氟乙酸(2mL)中。反应液室温搅拌2h。将反应液浓缩得到粗品化合物18-3(200mg)。
MS m/z(ESI):127.2[M+H]+。
第三步
将粗品化合物18-3(200mg,1.1mmol)溶于乙腈(4mL)中，加入DIPEA(426.5mg,3.3mmol)和溴乙酸苄酯(253.2mg,1.1mmol)。反应液室温搅拌2h。反应液用DCM(30×3mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH：DCM＝1：10)纯化得到化合物18-4(205mg)。
MS m/z(ESI):275.2[M+H]+。
第四步
将化合物18-4(205mg,0.75mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入10％Pd/C(74mg,0.07mmol)。在氢气氛围下，反应液室温搅拌4h。反应液过滤浓缩得到粗品化合物18-5(140mg)。
MS m/z(ESI):185.1[M+H]+。
第五步
将化合物18-5(140mg,0.75mmol)溶于DMF(3mL)中，冷却至0℃下，加入HATU(311mg,0.82mmol)和DIPEA(263.6mg,2.04mmol)搅拌10min后，加入化合物1-5(234mg,0.684mmol)溶于DMF(2mL)室温搅拌过夜。加入饱和食盐水(50mL)淬灭反应，用EA(50×3mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品。将粗品用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH：DCM＝1：10)纯化得到化合物18-6(290mg)。
MS m/z(ESI):539.4[M+H]+。
第六步
将化合物18-6(290mg,0.54mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入Pd/C(57.2mg，0.05mmol,10％)。在氢气氛围下室温下搅拌3h。将反应液过滤后浓缩得到粗品化合物18-7(241mg)。
MS m/z(ESI):449.3[M+H]+。
第七步
将化合物18-7(241mg,0.54mmol)溶于DMF(3mL)中，冷却至0℃下，加入DEPBT(194mg,0.65mmol)和DIPEA(349mg,2.7mmol)搅拌10min后，加入化合物1-8(263mg,0.54mmol，40％)溶于 DMF(2mL)，在室温下搅拌过夜。加入饱和食盐水(50mL)淬灭反应，用EA(50×3mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到残余物。将残余物依次用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系(MeOH：DCM＝1：10)纯化得到产品，然后用高效液相色谱制备纯化，再经超临界流体制备色谱(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD(25*250mm,10um)；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M，于MeOH中)]＝75/25；流速：100ml/min)拆分得到化合物18(6.46mg)，SFC保留时间：1.398min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55–7.44(m,1H),7.31(d,J＝8.6Hz,2H),6.86(d,J＝8.7Hz,3H),6.16(d,J＝6.4Hz,1H),5.34(s,1H),4.85(d,J＝5.6Hz,1H),4.67–4.58(m,1H),4.56–4.46(m,1H),4.41–4.31(m,1H),4.14(s,1H),3.79(s,3H),3.26(d,J＝5.0Hz,1H),3.03–2.79(m,5H),2.61–2.48(m,3H),2.43–2.07(m,10H),1.89–1.80(m,2H),1.51(s,3H),1.31(d,J＝7.0Hz,3H),0.96–0.33(m,4H)。
MS m/z(ESI):626.4[M+H]+。
实施例18化合物23的合成
第一步
向化合物18-1(500mg，2.36mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入碳酸铯(2.30g，7.06mmol)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(1.64g，7.08mmol)，然后加热至75℃搅拌18h。反应结束后，减压浓缩除去有机溶剂，加入水(10mL)稀释，然后用DCM(20x 3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，通过柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝1:0-20:1)纯化得到化合物23-1(350mg)。
MS m/z(ESI):295.1[M+H]+。
第二步
将三氟醋酸(4mL)缓慢滴加入到化合物23-1(350mg，1.19mmol)的DCM(12mL)溶液中，继续在室温下搅拌2h。反应结束后，向体系中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液至pH＝7，然后用DCM(20x 3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产品23-2(230mg)。
MS m/z(ESI):195.0[M+H]+。
第三步
将DIPEA(450mg，3.55mmol)加入到化合物23-2(230mg，1.18mmol)的乙腈(20mL)溶液中，然后再加入溴乙酸苄酯(285mg，1.24mmol)，继续在室温下搅拌4h。减压浓缩除去有机溶剂，加水(10mL)稀释，然后用DCM(15x 3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品23-3(300mg)。
MS m/z(ESI):343.1[M+H]+。
第四步
将Pd/C(240mg)加入到化合物23-3(300mg，0.88mmol)的MeOH(10mL)溶液中，在室温下，氢气氛围中搅拌搅拌2h。抽滤，除去Pd/C，将滤液减压浓缩，得到化合物23-4粗产品(210mg)，无需纯化直接进行下一步。
MS m/z(ESI):253.1[M+H]+。
第五步
在0℃下，将DIPEA(360mg,2.79mmol)缓慢滴加入到1-5(230mg，0.62mmol)的DMF(8mL)溶液中，然后加入HATU(424mg，1.11mmol)继续在0℃下搅拌20min，然后再滴加化合物23-4(210mg，0.83mmol)的DMF(2mL)溶液，继续在室温下搅拌1h。向体系中加入乙酸乙酯稀释，然后加入水(10mL)，然后用乙酸乙酯(30x 3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产品。将粗产品经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷：甲醇＝1:0-4:1)纯化得到化合物23- 5(304mg)。
MS m/z(ESI):607.3[M+H]+。
第六步
在氮气保护下，将Pd/C(100mg)加入到化合物23-5(250mg，0.41mmol)的甲醇(10mL)溶液中，然后在室温下搅拌2h。过滤除去Pd/C，然后将滤液减压浓缩，得到粗产品。将粗品用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷：甲醇＝1:0-20:1)纯化得到化合物23-6(150mg)。
MS m/z(ESI):517.2[M+H]+。
第七步
室温下，向化合物23-6(150mg，0.29mmol)的DMF(4mL)溶液中加入DEPBT(131mg，0.44mmol)和DIEA(113mg，0.87mmol)，搅拌20min，然后滴加化合物1-8(37％in TFA，169mg，0.32mmol)，继续搅拌过夜。反应结束后，缓慢加入水(30mL)稀释，然后用乙酸乙酯(30x 3mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产品。将粗产品先经过柱层析纯化，然后经反相制备和SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：25％甲醇(甲醇/二氧化碳，0.2％的氨水)；流速：100mL/min)后，得到化合物23(37.72mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49(s,1H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),6.98–6.72(m,3H),6.15(d,J＝6.4Hz,1H),5.33(s,1H),4.86(t,J＝6.2Hz,1H),4.62(dd,J＝8.0,5.6Hz,1H),4.50(ddd,J＝9.2,6.4,4.4Hz,1H),4.41–4.30(m,1H),4.16(d,J＝6.4Hz,1H),3.79(s,3H),3.28–3.13(m,3H),3.05(s,2H),2.89(d,J＝5.2Hz,3H),2.62–2.39(m,3H),2.38–2.01(m,7H),1.88–1.80(m,2H),1.50(s,3H),1.31(d,J＝7.2Hz,3H),0.78(s,2H),0.50(dd,J＝32.8,9.2Hz,2H)。
MS m/z(ESI):694.3[M+H]+。
实施例19化合物26、26-P1、26-P2的合成
第一步
将实施例11中的第一步的初始原料2-甲氨基乙醇替换成2-异丙氨基乙醇，经过多步反应得到化合物26的粗品，然后经过Prep-HPLC和SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)纯化得到化合物26(33.66mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(t,J＝6.8Hz,1H),7.94–7.88(m,1H),7.56–7.48(m,1H),7.20–7.16(m,2H),6.80(d,J＝7.8Hz,2H),5.43–5.42(m,1H),5.35(s,1H),4.67–4.63(m,1H),4.59–4.51(m,1H),4.47–4.40(m,1H),4.18–4.13(m,1H),3.71–3.69(m,4H),3.68–3.62(m,1H),3.43–3.37(m,1H),3.22(t,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.68(d,J＝11.0Hz,1H),2.59–2.52(m,2H),2.37–2.31(m,1H),2.30–2.06(m,8H),1.90–1.83(m,1H),1.81–1.73(m,2H),1.38(s,3H),1.04–1.01(m,3H),0.94(d,J＝6.2Hz,6H)。
MS m/z(ESI):629.2[M+H]+；SFC：保留时间＝1.071min。
第二步
化合物26(33.66mg,0.053mmol)通过SFC(Regis(R,R)Whelk-O1(25*250mm,10um)；CO2/IPA[0.5％NH3(7M in MeOH)]＝65/35)拆分得到化合物26-P1(7.57mg)和化合物26-P2(8.74mg)。
化合物26-P1:MS m/z(ESI):629.2[M+H]+，SFC保留时间＝1.172min；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝7.4Hz,1H),7.93(d,J＝7.4Hz,1H),7.50(d,J＝9.0Hz,1H),7.18(d,J＝8.6Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.43(d,J＝4.8Hz,1H),5.34(s,1H),4.68–4.65(m,1H),4.57–4.52(m,1H),4.45–4.42(m,1H),4.15(t,J＝7.2Hz,1H),3.74–3.70(m,4H),3.68–3.63(m,1H),3.44–3.35(m,1H),3.22(d,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.69–2.66(m,1H),2.62–2.53(m,2H),2.41–2.34(m,1H),2.31–2.09(m,8H),1.86(t,J＝10.4Hz,1H),1.82–1.71(m,2H),1.38(s,3H),1.03(d,J＝7.2Hz,3H),0.95(d,J＝6.6Hz,6H).
化合物26-P2:MS m/z(ESI):629.2[M+H]+，SFC保留时间＝1.332min；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(d,J＝7.4Hz,1H),7.90(d,J＝7.4Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H), 7.19(d,J＝8.6Hz,2H),6.80(d,J＝8.8Hz,2H),5.43(d,J＝4.6Hz,1H),5.35(s,1H),4.66–4.63(m,1H),4.58–4.53(m,1H),4.47–4.40(m,1H),4.18–4.13(m,1H),3.74–3.67(m,4H),3.65–3.62(m,1H),3.44–3.38(m,1H),3.23(d,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.69–2.65(m,1H),2.58–2.52(m,2H),2.41–2.35(m,1H),2.28–2.10(m,8H),1.91–1.83(m,1H),1.80–1.73(m,2H),1.38(s,3H),1.02(d,J＝7.0Hz,3H),0.94(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例20化合物30的合成
第一步
将DIPEA(394mg,3.06mmol)加入到化合物30-1(130mg,1.02mmol)和溴乙酸苄酯(256mg,1.12mmol)的ACN(20mL)溶液中，反应液加热回流，搅拌过夜。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)和水(120mL),分液收集有机相，之后水相用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，将残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(MeOH:DCM＝1:40)纯化所得化合物30-2(230mg)。
MS m/z(ESI):276.1[M+H]+。
第二步
将Pd/C(40mg)加到化合物30-2(230mg,0.84mmol)的MeOH(20mL)溶液中，在氢气氛围下，室温搅拌过夜。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(10mL)洗涤两遍，把所得溶液浓缩，得到粗产品30-3(260mg)。
MS m/z(ESI):186.1[M+H]+。
第三步
将HATU(384mg,1.01mmol)和DIPEA(326mg,2.52mmol)加入到酸化后的化合物30-3(156mg,0.84mmol)的DMF(20mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，然后加入化合物1-5(312mg.0.84mmol)。将反应液恢复到室温，搅拌2小时。往反应液中加入乙酸乙酯(100mL)稀释，之后加入水(120mL)，分离两相，将水相用EA(30mL x 2)萃取。将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝50:1)纯化得到化合物30-4(290mg)。
MS m/z(ESI):540.3[M+H]+。
第四步
将Pd/C(50mg)加到化合物30-4(290mg,0.54mmol)的MeOH(10mL)溶液中，在氢气氛围下，室温搅拌4小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(5mL)洗涤两遍，把所得溶液浓缩，得到粗产品30-5(330mg)。
MS m/z(ESI):450.1[M+H]+。
第五步
将DEPBT(243mg,0.81mmol)和DIPEA(209mg,1.62mmol)加入到化合物30-5(243mg,0.54mmol)的DMF(15mL)溶液中，反应液在0℃下搅拌15分钟，之后加入化合物1-8(105mg,0.54mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌16小时。往反应液中加入乙酸乙酯(80mL)稀释，之后加入水(100mL)，分离两相，将水相用乙酸乙酯(40mL x 2)萃取，将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱 (DCM:MeOH＝45:1)纯化后，再经高效液相色谱制备，然后经SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)拆分得到化合物30(33mg)。
MS m/z(ESI):627.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(dd,J＝9.6,7.6Hz,1H),8.03–7.85(m,1H),7.63(dd,J＝9.6,8.4Hz,1H),7.20(dd,J＝8.4,1.2Hz,2H),6.85–6.71(m,2H),5.43(t,J＝4.0Hz,1H),5.35(s,1H),4.67–4.52(m,2H),4.45–4.40(m,1H),4.28–4.13(m,1H),3.78–3.64(m,4H),3.46–3.34(m,1H),3.27–3.22(m,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.95–2.62(m,4H),2.54(d,J＝11.6Hz,1H),2.38(d,J＝10.4Hz,1H),2.27–1.93(m,7H),1.76(p,J＝7.2Hz,2H),1.39(s,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),0.83–0.71(m,1H),0.46–0.34(m,2H),0.29–0.10(m,2H).
MS m/z(ESI):581.1[M+H]+。SFC保留时间＝1.276min。
第六步
将化合物30(33mg)经过SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝70/30；流速：100mL/min)纯化得到化合物30-P1(11.41mg)和化合物30-P2(11.12mg)。
化合物30-P1:MS m/z(ESI):627.4[M+H]+，SFC保留时间：1.266min；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝7.6Hz,1H),7.93(d,J＝9.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.20(d,J＝8.6Hz,2H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),5.43(d,J＝4.8Hz,1H),5.35(s,1H),4.64–4.55(m,2H),4.43(t,J＝8.6Hz,1H),4.25–4.17(m,1H),3.78–3.69(m,4H),3.41(td,J＝11.2,2.2Hz,1H),3.24(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.93–2.79(m,2H),2.77–2.61(m,2H),2.55(s,1H),2.40–2.33(m,1H),2.25–2.08(m,6H),2.00–1.92(m,1H),1.82–1.71(m,2H),1.39(s,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),0.83–0.73(m,1H),0.47–0.33(m,2H),0.28–0.14(m,2H)。
化合物30-P2:MS m/z(ESI):627.4[M+H]+，SFC保留时间：1.362min；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝7.6Hz,1H),7.95(d,J＝9.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝8.6Hz,2H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),5.43(s,1H),5.35(s,1H),4.65–4.52(m,2H),4.42(t,J＝8.8Hz,1H),4.19(p,J＝7.0Hz,1H),3.70–3.68(m,4H),3.39–3.34(m,1H),3.25(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),2.93(d,J＝15.6Hz,1H),2.81–2.66(m,3H),2.38(d,J＝10.8Hz,2H),2.24–2.18(m,5H),2.07–1.97(m,2H),1.81–1.71(m,2H),1.39(s,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),0.82–0.72(m,1H),0.46–0.34(m,2H),0.29–0.21(m,1H),0.19–0.10(m,1H)。
实施例21化合物33、33-P1、33-P2的合成
第一步
将2-碘乙醇(3.02g,17.55mmol)加入到化合物33-1(2g,35.09mmol)的乙醇(40mL)溶液，在50℃下，搅拌16小时。将反应液浓缩后得到粗产物33-2(2.6g)。
MS m/z(ESI):102.1[M+H]+；
第二步
将实施例11中的第一步的初始原料2-甲氨基乙醇替换成化合物33-2，经过多步反应得到化合物33的粗品，然后经高效液相色谱纯化，再经SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)拆分后得到化合物33(36.95mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(t,J＝8.0Hz,1H),7.92(t,J＝7.4Hz,1H),7.53(dd,J＝14.8,9.0Hz,1H),7.19(dd,J＝8.6,2.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.43(dd,J＝4.4,1.8Hz,1H),5.35(s,1H),4.71–4.61(m,1H),4.58-4.53(m,1H),4.44(dd,J＝9.0,7.6Hz,1H),4.22–4.09(m,1H),3.72-3.71(m,4H),3.65–3.55(m,1H),3.40–3.33(m,1H),3.22(dd,J＝5.2,1.4Hz,1H),2.98(d,J＝5.0Hz,1H),2.80(d,J＝11.0Hz,1H),2.68(d,J＝11.0Hz,1H),2.38(dd,J＝14.2,5.2Hz,1H),2.30–2.05(m,8H),1.96(t,J＝10.6Hz,1H),1.77(p,J＝7.4Hz,2H),1.63–1.55(m,1H),1.38(s,3H),1.03(dd,J＝7.0,2.8Hz,3H),0.44–0.34(m,2H),0.34–0.23(m,2H)。
MS m/z(ESI):627.1[M+H]+；SFC：保留时间＝1.12min。
第三步
将化合物33(36mg)通过SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel WHELK，25×250mm，10μm；流动相：CO2/MeOH[0.5％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)拆分后得到化合物33-P1(10.35mg)和化合物33-P2(11.59mg)。
化合物33-P1:MS m/z(ESI):627.2[M+H]+，SFC保留时间：1.650min；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.08(d,J＝7.4Hz,1H),7.94(d,J＝7.4Hz,1H),7.52(d,J＝9.0Hz,1H),7.18(d,J＝8.6Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.45-5.34(m,2H),4.67(d,J＝7.2Hz,1H),4.55(dd,J＝13.4,7.6Hz,1H),4.43(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),4.19–4.11(m,1H),3.72-3.68(m,4H),3.64–3.58(m,2H),3.22(d,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.80(d,J＝11.0Hz,1H),2.67(d,J＝10.8Hz,1H),2.38(dd,J＝14.2,5.2Hz,1H),2.33–2.05(m,8H),1.96(t,J＝10.6Hz,1H),1.86–1.71(m,2H),1.62-1.57(m,1H),1.38(s,3H),1.03(d,J＝7.0Hz,3H),0.49–0.36(m,2H),0.35–0.22(m,2H)。
化合物33-P2:MS m/z(ESI):627.2[M+H]+，SFC保留时间：1.817min；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(d,J＝7.4Hz,1H),7.92(d,J＝7.4Hz,1H),7.55(d,J＝9.0Hz,1H),7.19(d,J＝8.6Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.43(s,1H),5.35(s,1H),4.65(d,J＝7.6Hz,1H),4.55(dd,J＝13.6,7.8Hz,1H),4.48–4.38(m,1H),4.16(p,J＝7.0Hz,1H),3.71-3.68(m,4H),3.62–3.55(m,2H),3.23(d,J＝5.2Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.80(d,J＝11.0Hz,1H),2.68(d,J＝11.0Hz,1H),2.38(dd,J＝14.2,5.0Hz,1H),2.31–2.11(m,8H),1.96(t,J＝10.6Hz,1H),1.82–1.71(m,2H),1.61-1.57(m,1H),1.38(s,3H),1.02(d,J＝7.0Hz,3H),0.45–0.35(m,2H),0.35–0.23(m,2H)。
实施例22化合物34的合成
第一步
将HATU(1.42g,3.73mmol)和DIPEA(1.21g,9.33mmol)加入到N-BOC-2-吗啉乙酸(763mg,3.11mmol)的DMF(30mL)溶液中，反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入1-5(1.16g,3.11mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。往反应液中加入乙酸乙酯(200mL)稀释，之后加入水(200mL)，分离两相，将水相用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取。将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩，通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝50:1)纯化后得到化合物34-1(1.62g)。
MS m/z(ESI):600.3[M+H]+。
第二步
将化合物34-1(500mg,1.06mmol)加入到六氟异丙醇(15mL)中，在微波环境下，80℃搅拌8小时。待反应液恢复至室温后，浓缩通过快速硅胶色谱柱(MeOH(10％NH3·H2O):DCM＝15:85)纯化后得到化合物34-2(298mg)。
MS m/z(ESI):500.1[M+H]+。
第三步
将2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(130mg,0.56mmol)加入到化合物34-2(140mg,0.28mmol)和三乙胺(85mg,0.84mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应液在到室温下搅拌3小时。往反应液中加入EA(50mL)稀释，之后加入水(60mL)，分离两相，将水相用EA(10mL x 2)萃取。将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝40:1)纯化后得到化合物34-3(107mg)。
MS m/z(ESI):564.1[M-17]+。
第四步
将10％Pd/C(40mg)加到化合物34-3(107mg,0.18mmol)的MeOH(10mL)溶液中。在氢气氛围下，将反应液室温搅拌3小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(10mL)洗涤两遍。将所得溶液浓缩，得到粗产品34-4(90mg)。
MS m/z(ESI):492.1[M+H]+。
第五步
将DEPBT(81mg,0.27mmol)和DIPEA(116mg,0.90mmol)加入到化合物34-4(88mg,0.18mmol)的DMF(10mL)溶液中。反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入化合物1-8(35mg,0.18mmol)。将反应液恢复到室温，搅拌16小时。往反应液中加入EA(50mL)稀释，之后加入H2O(50mL)，分离两相，将水相用EA(10mL x 2)萃取。将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝40:1)纯化得到粗品34(63mg)，再经过prep-HPLC纯化后，然后经SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)拆分后得到化合物34(22.38mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(d,J＝7.4Hz,1H),7.96(dd,J＝14.0,7.4Hz,1H),7.53(dd,J＝31.4,9.0Hz,1H),7.19(dd,J＝8.7,2.8Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.45(s,1H),5.35(s,1H),4.66(t,J＝7.0Hz,1H),4.61–4.50(m,1H),4.49–4.40(m,1H),4.22–4.10(m,1H),3.72(s,5H),3.49-3.44(m,1H),3.24–3.09(m,3H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.81(dd,J＝9.8,3.2Hz,1H),2.71(d,J＝11.0Hz,1H),2.39(d,J＝11.8Hz,2H),2.32–2.04(m,8H),1.77(p,J＝7.4Hz,2H),1.38(s,3H),1.03(dd,J＝7.0,4.2Hz,3H).
MS m/z(ESI):669.1[M+H]+。SFC：保留时间＝0.940min。
实施例23化合物35的合成
第一步
将溴乙腈(72mg,0.60mmol)加入到化合物34-2(150mg,0.30mmol)和三乙胺(91mg,0.90mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应液在到室温下搅拌16小时。往反应液中加入EA(50mL)稀释，之后加入H2O(60mL)，分离两相，将水相用EA(10mL x 2)萃取。将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝30:1)纯化得到化合物35-1(104mg)。
MS m/z(ESI):661.3[M+H]+。
第二步
将LiOH·H2O(13mg,0.30mmol)加入到化合物35-1(80mg,0.15mmol)的MeOH(5mL)和H2O(0.5mL)反应液中，室温反应。TLC检测，原料反应完全后，用1M稀盐酸调节反应液pH＝7。然后将反应液浓缩，得到粗产品35-2(90mg)。
MS m/z(ESI):449.1[M+H]+。
第三步
将DEPBT(69mg,0.23mmol)和DIPEA(97mg,0.75mmol)加入到化合物35-2(67mg,0.15mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应液在0℃下搅拌10分钟，然后加入化合物1-8(29mg,0.15mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌过夜。往反应液中加入EA(50mL)稀释，之后加入H2O(60mL)，分离两相，将水相用EA(10mL x 2)萃取。将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩后通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝25:1)纯化得到粗品35(85mg)，再经过prep-HPLC纯化后，然后经SFC纯化(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)拆分后得到化合物35(9.23mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(dd,J＝7.4,4.4Hz,1H),7.97(t,J＝8.0Hz,1H),7.53(dd,J＝17.8,9.0Hz,1H),7.19(dd,J＝8.6,1.4Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.44(dd,J＝4.6,1.2Hz,1H),5.35(s,1H),4.66-4.64(m,1H),4.56(dd,J＝13.4,7.8Hz,1H),4.44(t,J＝8.2Hz,1H),4.20-4.12(m,1H),3.81–3.69(m,7H),3.48–3.45(m,1H),3.27–3.17(m,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.71(d,J＝10.8Hz,1H),2.61(d,J＝10.8Hz,1H),2.38(dd,J＝14.2,5.2Hz,1H),2.34–2.11(m,8H),1.96(t,J＝10.4Hz,1H),1.87–1.72(m,2H),1.38(s,3H),1.03(d,J＝7.0Hz,3H)。
MS m/z(ESI):626.1[M+H]+。SFC：保留时间＝1.539min。
实施例24化合物36的合成
第一步
将NaBH3CN(83mg,1.32mmol)加入到化合物34-2(110mg,0.22mmol)和环丁基甲醛(74mg,0.88mmol)的MeOH(10mL)溶液，室温搅拌过夜。将反应液浓缩，通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝50:1)纯化后得到化合物36-1(120mg)。
MS m/z(ESI):568.3[M+H]+。
第二步
将10％Pd/C(50mg)加到化合物36-1(120mg,0.21mmol)的MeOH(10mL)溶液中，在氢气氛围下，室温搅拌3小时。将反应液经过硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH(10mL)洗涤两遍，把所得溶液浓缩，得到粗产品36-2(110mg)。
MS m/z(ESI):478.2[M+H]+。
第三步
将DEPBT(94mg,0.32mmol)和DIPEA(136mg,1.05mmol)加入到化合物36-2(100mg,0.21mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应液在0℃下搅拌10分钟，之后加入1-8(41mg,0.21mmol)，将反应液恢复到室温，搅拌16小时。往反应液中加入EA(50mL)稀释，之后加入H2O(50mL)，分离两相，将水相用EA(10mL x 2)萃取，将所得有机相合并，加入无水硫酸钠干燥，浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱柱(DCM:MeOH＝20:1)纯化得到粗品36(80mg)，再经prep-HPLC纯化后，然后经SFC(设备：SFC-150mgm(waters)；柱子：Daicel OD，25×250mm，10um；流动相：CO2/MeOH[0.2％NH3(7M in MeOH)]＝75/25；流速：100mL/min)拆分后得到化合物36(20.45mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(t,J＝8.0Hz,1H),7.92(dd,J＝10.8,7.4Hz,1H),7.52(dd,J＝21.2,9.0Hz,1H),7.18(dd,J＝8.6,2.8Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),5.47–5.41(m,1H),5.35(s,1H),4.69–4.63(m,1H),4.55(dd,J＝13.4,6.0Hz,1H),4.44(t,J＝7.8Hz,1H),4.15(dd,J＝13.8,7.0Hz,1H),3.74–3.65(m,5H),3.42(d,J＝2.4Hz,1H),3.22(t,J＝4.6Hz,1H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.66(d,J＝11.0Hz,1H),2.56(d,J＝11.2Hz,1H),2.41–2.15(m,10H),2.04–1.58(m,11H),1.38(s,3H),1.02(dd,J＝7.0,4.0Hz,3H)。
MS m/z(ESI):655.3[M+H]+。SFC：保留时间＝1.248min。
对比实施例
参考WO2014152134A1制备得到。
生物学评价
测试例1化合物对β5、β5i的抑制作用评价试验
DMSO溶解受试化合物至10mM母液，-20℃保存待用。化合物起始浓度为20μM，0.8％DMSO,4倍倍比稀释，10个浓度，双复孔；50mM HEPES，pH 7.4，10mM EDTA，1mM DTT，1mM MgCl2·H2O，1mM ATP，0.035％SDS，1％BSA作为反应缓冲液用来配置4x c20s工作液、4x i20s工作液，以及相应4x底物Suc-LLVY-AMC工作液、4x底物Ac-ANW-AMC工作液，现配现用，最终20μL的反应体系在384孔板(PerkinElmer,6006280)中进行。对于β5的抑制作用评价，终体系中含有2nM c20s(R&D systems,E360),10μM Suc-LLVY-AMC((R&D systems,S-280-05M)；对于β5i的抑制作用评价，终体系中含有0.2nM i20s(R&D systems,E370),25μM Ac-ANW-AMC((R&D systems,S-320-02M)，其中阴性对照孔不含蛋白以及化合物，阳性对照孔不 含化合物。蛋白和化合物在室温下预孵育30min后加入对应底物启动反应，37℃孵育2h，酶标仪检测以激发光345nm、发射光445nm读数。用GraphPad Prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即IC50，如表1所示。
表1
从表1可知，本发明的化合物对β5i具有抑制作用，而对β5的抑制作用均较弱，因而不影响正常机体中蛋白酶体发挥作用。
测试例2化合物对人A549细胞中β1，β5抑制作用评价
人非小细胞肺癌细胞(A549)以5*10^5/mL的数量铺在384孔板(Greiner,781079)中，每孔加入20μL含上述细胞的DMEM(Gibco#11995-065)+10％FBS(Gibco,10091-148)，37℃，5％CO2中预孵育2h；待测化合物的起始浓度为20μM，4倍倍比稀释，10个浓度，双复孔，DMSO终浓度为0.4％，以5μL/孔的体积加入384孔培养板中；阴性对照孔不加细胞和化合物，阳性对照孔不加化合物，继续培养2h后，对于β1的检测，每孔加入12.5μL的Z-nLPnLD-aminoluciferin，使其终浓度为10μM(稀释所用试剂为Luciferin Detection Reagent(Promega,V8598)和Proteasome-Gllo Cell-Based Buffer(Promega，G865B)混合配制，对于β5的检测，每孔加入12.5μL的Suc-LLVY-aminoluciferin(Promega,G856D)，使其终浓度为10μM，短暂离心，室温孵育30min后，酶标仪检测(Luminescence)。用GraphPad Prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即IC50，如表2所示。
表2
注：NT表示未测试。
从表2可知，本发明化合物对β1、β5的抑制均较弱，因而不影响正常机体中蛋白酶体发挥作用。
测试例3化合物对人PBMC细胞中β1i，β5i抑制作用评价
新鲜人外周血单个核细胞(PBMC)(赛笠生物)以5*10^5/mL的数量铺在384孔板(Greiner,781079)中，每孔加入20μL含上述细胞的RPMI-1640(Gibco#A1049101)+10％FBS(Gibco,10091-148)，37℃，5％CO2中预孵育2h；待测化合物的起始浓度为20μM，4倍倍比稀释，10个浓度，双复孔，DMSO终浓度为0.4％，以 5μL/孔的体积加入384孔培养板中；阴性对照孔不加细胞和化合物，阳性对照孔不加化合物，继续培养2h后，对于β1i的检测，每孔加入12.5μL的Ac-PAL-aminoluciferin，使其终浓度为33.33μM(稀释所用试剂为Luciferin Detection Reagent(Promega,V8598)和Proteasome-Gllo Cell-Based Buffer(Promega，G865B)混合配制)；对于β5i的检测，每孔加入12.5μL的Ac-ANW-aminoluciferin，使其终浓度为30μM，短暂离心，室温孵育30min后，酶标仪检测(Luminescence)。用GraphPad Prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即IC50，如表3所示。
表3
注：NT表示未测试。
从表3可知，本发明化合物对β1i与β5i均具有抑制作用，因此本发明的化合物是一类对β1i/β5i(LMP2/LMP7)均有效的双重抑制剂。
测试例4化合物对LPS诱导的人PBMC细胞产生IL-12/IL-23p40的抑制作用评价
外周血单个核细胞(PBMC)(赛笠购买)以2.5*10^6/mL的数量铺在96孔板(Corning,3599)中，每孔加入100μL含上述细胞的RPMI-1640(Gibco,222400-089)+10％FBS(Gibco,10091-148)，37℃，5％CO2中孵育；待测化合物的起始浓度为10μM，5倍倍比稀释，6个浓度，DMSO终浓度为0.4％，以25μL/孔的体积加入96孔培养板中；37℃，5％CO2预孵育60分钟，洗去培养基后，再加入等体积新鲜培养基；LPS(Sigma，L2630-100MG)以12.5μL/孔的体积加入96孔培养板中，终浓度为1μg/mL；设置空白对照孔，阴性对照孔(不加LPS)，阳性对照孔(不加化合物)；继续培养24h后，2000rpm离心10min，收集细胞培养上清；使用Human IL-12/IL-23p40 Precoated ELISA kit(达优，1111232)进行检测，检测样本需稀释2倍，按照供应商的操作指南进行操作，酶标仪检测波长(measurement wavelength)450nm读值。用GraphPad Prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即IC50。
表4

测试例5化合物对Balbc小鼠炎症模型血浆中产生IL-12/IL-23p40和IL23的抑制作用评价
实验方法：雄性6-8W龄Balb/c小鼠随机分组，每组n＝4，分组如下，0h时，组1组2动物皮下注射给予Vehicle(s.c,5mL/kg)，组3-5动物按下表皮下注射给予相应剂量的化合物；组1动物给药后4.5小时接受saline(ip,10mL/kg)注射；组2-5动物给药4.5h后，接受LPS刺激(ip,10mL/kg，0.2mpk)，LPS刺激时间为1.5h,所有动物给药后在相应时间节点，CO2安乐死，心脏采血。血样采集后，EDTA-K2抗凝，置于湿冰中，随后4000rpm*5min分离血浆，低温冻存备分析用。
实验结果：
使用Mouse IL-23 Immunoassay(R&D，M2300)进行检测，检测样本需稀释8倍，按照供应商的操作指南进行操作，酶标仪检测波长(measurement wavelength)450nm读值。用GraphPad Prism 8软件拟合标准曲线，计算样本表达量。
结论：本发明化合物的抑制效果好于对比例。
使用Mouse IL-12/IL-23p40 Precoated ELISA kit(达优，1211232)进行检测，检测样本需稀释30倍，按照供应商的操作指南进行操作，酶标仪检测波长(measurement wavelength)450nm读值。用GraphPad Prism 8软件拟合标准曲线，计算样本表达量。
结论：本发明化合物在6小时的抑制率好于对比例，并且具有统计学差异。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (19)

  1. 式(I)的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐：
    其中：
    A选自4-8元单环杂环基、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基或6-14元稠合杂环基；所述4-8元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N；Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)-C3-6环烷基或C3-6环烷基；n为0、1、2或3；
    所述6-14元螺杂环基为E为CH或N；
    K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基或-C1-6亚烷基C(O)NH2；m为1、2或3；
    Ra和Rb各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
    Rc和Rd各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
    环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S；条件是Ra和Rb与Rc和Rd中至少有一组与它们所连接的碳一起形成C3-5环烷基或3-5元杂环基；
    所述6-14元桥杂环基为T为-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；
    所述6-14元稠合杂环基为Rm和Rn与它们所连接的碳一起形成环C；
    环C为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S；
    R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基或3-6元杂环烷基；
    R2为C6-8芳基或6-10元杂芳基；所述C6-8芳基或6-10元杂芳基各自独立地任选被1个、2个或多个H、羟基、卤素、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基所取代；
    R3选自C3-7环烷基、C3-7环烯基、3-7元杂环烷基或3-7元杂环烯基；所述C3-7环烷基、C3-7环烯基、3-7元杂环烷基或3-7元杂环烯基各自独立地任选被1个、2个或多个H、C1-6烷基和C1-6烷氧基所取代；
    R4选自H或C1-3烷基。
  2. 根据权利要求1所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：
    A选自4-8元单环杂环基、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基或6-14元稠合杂环基；所述4-8元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N；Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基；n为0、1、2或3。
  3. 根据权利要求1所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中R2为优选为
  4. 根据权利要求1-3任一所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中A选自5-7元单环杂环基；所述5-7元单环杂环基被1个、2个或多个Rw所取代，且所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个、2个或3个O或N，Rw选自CN、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-(C1-6亚烷基)N(C1-6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3- 6环烷基所取代；n为0或1；所述单环杂环基选自吗啉基、哌啶基、1,4-二氧六环基、四氢-2H-吡喃基和哌嗪基。
  5. 根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中A为
    Rg和Rh相同或不同，各自独自地选自C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)N(C1- 6烷基)2、-(CH2)nS(O)2C1-6烷基或C3-6环烷基所取代；n为0或1；Rf为H或C1-6烷基；
    Rp为NH(C1-6烷基)或N(C1-6烷基)2；
    Rq为C1-6烷基；
    Ru和Rv相同，各自独立地为CN。
  6. 根据权利要求1或2所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中A为E为CH或N；
    K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)C(O)NH2；m为1、2和3；
    Ra和Rb各自独立地选自H或C1-3烷基，或者Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
    Rc和Rd各自独立的地选自H或C1-3烷基，或者Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
    环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S；条件是Ra和Rb与Rc和Rd中至少有一组与它们所连接的碳一起形成C3-5环烷基或3-5元杂环基。
  7. 根据权利要求1-6任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中A选自
  8. 根据权利要求1-7任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基或C1-6烷基，优选为甲基。
  9. 根据权利要求1-8任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中R3为5-7元环烯基，所述5-7元环烯基任选被1个、2个或多个H、C1-3烷基或C1-3烷氧基所取代；优选地，R3为
  10. 根据权利要求1-9任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中R4为H或C1-3烷基，优选为甲基。
  11. 根据权利要求1-10任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中R1选自H、氘代C1-6烷基、羟基C1-6烷基或C1-6烷基；R3为5-7元杂环烯基；所述5-7元杂环烯基任选被1个、2个或多个C1-3烷基或C1-3烷氧基所取代；R4选自H或C1-3烷基；和A为K选自O、-(CH2)m-、-C(＝O)、S、-S(＝O)-、S(O)2、-CHRk-、-NRk-，其中Rk选自H、C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-(C1-6亚烷基)C(O)NH2；m为1、2和3；Ra和Rb与它们所连接的碳一起形成环B；
    或Rc和Rd与它们所连接的碳一起形成环B；
    环B为C3-5环烷基或3-5元杂环基，所述C3-5环烷基或3-5元杂环基各自任选被1个、2个或多个Rt所取代；Rt选自卤素、羟基、C1-3烷基、羟基C1-3烷基和卤代C1-3烷基；所述杂环基中的杂原子彼此独立地选自1个或2个N、O或S。
  12. 根据权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，式I所示化合物的结构如式Ia所示：
    其中R1、R3、R4和A如权利要求1-11任一项中所定义。
  13. 根据权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，式I所示化合物的结构如式Ⅲ-1、Ⅲ-2所示：
    其中Ra、Rb、Rc、Rd和K如权利要求1所述定义，R1、R3和R4如权利要求1-11任一项中所定义。
  14. 根据权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，式I所示化合物的结构如式Ⅲ-1a、Ⅲ-2a所示：
    其中Ra、Rb、Rc、Rd和K如权利要求1中所定义，R1、R3和R4如权利要求1-11任一项中所定义。
  15. 根据权利要求1-14任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物选自以下结构：



  16. 根据权利要求1-15任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自以下结构：



    优选地，所述化合物选自以下结构：



  17. 制备如权利要求1-16中任一项所述的化合物的方法，包括：
    化合物a和化合物b发生缩合反应得到式Ⅰa所示化合物，反应式如下：
    其中，R1、R3、R4和A如权利要求1-16任一项中所定义；
    优选地，化合物c和化合物d发生缩合反应得到式Ⅰa所示化合物，反应式如下：
    其中，R1、R3、R4和A如权利要求1-16任一项中所定义；
    优选地，化合物e和化合物f发生缩合反应得到式Ⅰa所示化合物，反应式如下：
    其中，R1、R3、R4和A如权利要求1-16任一项中所定义。
  18. 一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐的至少一种以及一种或多种药学上可接受的辅料。
  19. 如权利要求1-16中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐或如权利要求18所述的组合物制备用于预防和/或治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的药物的用途；优选的，制备用于预防和/或治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、过敏性气道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和炎性肠病(例如克罗恩病、溃疡性结肠炎)的用途。
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