TW201106963A - Antigen-binding proteins - Google Patents

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TW201106963A TW099116868A TW99116868A TW201106963A TW 201106963 A TW201106963 A TW 201106963A TW 099116868 A TW099116868 A TW 099116868A TW 99116868 A TW99116868 A TW 99116868A TW 201106963 A TW201106963 A TW 201106963A
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Peter Franz Ertl
Volker Germaschewski
Gerald Wayne Gough
Michael Steward
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Description

201106963 六、發明說明： 【先前技術】 視力喪失已成為已開發經濟體之主要健康問題。失明或 視力差影響超過三百萬之4〇歲以上美國公民，且隨年齡而 顯著增加。舉例而言’ 80歲或80歲以上者佔美國人口之約 8%，但卻幾乎佔失明者之7〇%。通常與年齡相關之眼病包 括年齡相關黃斑變性（AMD)、白内障、糖尿病性黃斑水 腫、視網膜靜脈阻塞（RVO)及青光眼。 年齡相關黃斑變性（AMD)為已開發世界中失明之主要原 因AMD有兩種主要g品床表現。萎縮性（乾性）amd特徵為 視網膜色素上皮（RPE)及視網膜神經層之變性。早期萎縮 性AMD與RPE細胞層下脈絡膜小疣之形成相關。早期萎縮 性AMD可進展成末期疾病，在末期疾病中，RpE完全變性 且在黃斑區域中形成邊界清晰之RPE萎縮區：「地圖狀萎 縮」。在此形式之疾病中，RPE變性引起黃斑視桿及視錐 繼發性死亡，且在此等情形下導致嚴重年齡相關視力喪 失。 分AMD患者會發展可視為該疾病之不同形式戋另一 併發症的疾病。約10-20%tAMD患者發展脈絡膜新生血 管（CNV)。當此發生時，該形式之疾病稱為「濕性amd」 且可與某些最嚴重之視力喪失相關。在濕性AMD中，新脈 絡膜血管生長穿過布氏膜（Bruch，s membrane)中之裂口 ^ 增生至RPE及視網膜神經層中及其下方。目前尚無Hi 極普遍萎縮性形式之AMD的明確方法，亦無預防早期乾性 148213.doc 201106963 AMD進展為地圖狀萎縮或濕性AMD之明確方法（Petrukhin K，Expert Opin Ther Targets (2007) 11: 625-639)。 糖尿病性黃斑水腫（DME)為糖尿病患者閱讀視力喪失之 最常見原因。已患糖尿病29年或29年以上之個體之DME發 病率為約 30%(Klein R 等人，Ophthalmology 1984: 91; 1464-1474)。DME與IL-6、VEGF及其他細胞激素之含量增 加相關，其中血視網膜障壁普遍破損，伴隨自異常視網膜 毛細血管及形成於視網膜下腔之微動脈瘤滲漏。目前DME 治療之目標為減少水腫及滲漏，從而改良視力。有效之血 糠控制及雷射光凝或抗血管生成治療旨在防止或延缓糖尿 病性眼之中心黃斑區進一步惡化。亦使用玻璃體内注射皮 質類固醇法。 視網膜靜脈阻塞發生於穿過視網膜靜脈之血流阻塞之 後。此可能係由歸因於糖尿病、青光眼或高血壓之緊密關 聯視網膜動脈中凝塊形成或壓力增加所致。自視網膜之血 流減少導致眼血管中血壓普遍增加且眼中氧含量降低。此 又導致血管生長異常、出血及水腫、組織損傷及視力喪 失。RVO存在兩種主要形式：分支視網膜靜脈阻塞（BRVO) 及中心視網膜靜脈阻塞（CRVO)。視力突然模糊或喪失為 RVO之常見特徵。儘管存在白内障發展及眼内壓上升之相 關風險，但已使用眼内皮質類固醇來治療RVO(Kiernan DF 等人，Exp Opinion in Pharmacotherapy 2009 10(15) 251 1-2525)。RVO之發病率在約 0.2%(CRVO)至約 0.7%(BRVO)之 範圍内。 148213.doc 201106963 葡萄膜炎主要影響處於工作年齡之人且包含葡萄膜（虹 膜、睫狀體及脈絡膜）之炎症。前葡萄膜炎為葡萄膜炎之 最常見形式，其佔葡萄膜炎病例之約75%且其主要影響虹 膜及睫狀體。葡萄膜炎被視為自體免疫疾病且同時病因仍 然未知，約50%病例與HLA-B27相關。涉及後葡萄膜（亦即 脈絡膜）之炎症稱為後葡萄膜炎且通常繼發性涉及視網 膜。葡词膜炎主要為由C D 4 T細胞浸潤至眼隔室所致之發 炎疾病（Paroli MP等人，2007 17(6) 938-942 Eur J Ophthalmology) 〇 皮質類固醇再次成為局部、眼周或全身既定治療之支柱。 TNF-a(腫瘤壞死因子-α)為促炎性細胞激素，其與許多 眼發炎病狀相關聯（Theodossiadis 等人，Am. J. Ophthalmol. (2009)147: 825-830)。 已知VEGF (血管内皮生長因子）及VEGF受體刺激脈絡膜 與視網膜血管之血管生成且調節此等血管之血管滲透性 (Gragoudas等人，N. Engl. J. Med (2004) 351: 2805)。 新血管生成及渗漏為濕性形式之年齡相關黃斑變性的顯 著特徵。目前已批准使用以下適體：哌加他尼（pegaptanib， Macugen™)，其中和VEGF-A同功異型物165 ;及蘭尼單抗 (ranibizumab，Lucentis™)，其阻斷VEGF-A之所有同功異型 物。 發炎反應亦在新血管生成中起顯著病理生理學作用 (Sakuri 等人，Invest Ophthalmol Vis Sci (2003) 44: 5349-.5354 ; Oh等人，Invest Ophthalmol Vis Sci (1999) 40: 1891-1898 ; Shi等人，Exp Eye Res (2006) 83: 1325-1334)。 148213.doc 201106963 有關TNFa拮抗劑之參考文獻包括Olson等人，Arch Opthalmol (2007) 125: 1221-1224 ； Shi 等人，Exp Eye Res (2006) 83: 1325-1334 ; Kociok等人，Invest Ophthalmol
Vis Sci (2006) 1 1: 5057-5065 ; Markomichelakis等人，Am J Ophthalmol (2005) 139: 537-540 ° 需要有效預防眼病發展且為廣大患者群改善視力之治療 方案。 【發明内容】 本發明係關於TNFa拮抗劑與VEGF拮抗劑之組合，其特 定用於治療眼部疾病。 抗VEGF與抗TNF方法在治療AMD方面均有根據，且此 等藥徵之機制不重疊，使得對抗VEGF方法治療未成功反 應之患者可能對抗TNF治療有反應，且反之亦然。 抗TNF之抗炎益處與抗VEGF分子之抗血管生成活性組 合將提高治療此等眼病之功效。 本發明涵蓋投與個別TNFa拮抗劑與個別VEGF拮抗劑（亦 即各別TNFa及VEGF拮抗劑分子）之組合。此外，本發明涵 蓋投與充當TNFa拮抗劑與VEGF拮抗劑之具有雙靶向功能 性（亦即能夠結合並抑制、較佳阻斷TNFa或TNFa受體之功 能，且結合並抑制、較佳阻斷VEGF或VEGF受體之功能） 的單一構築體。該單一構築體可基於抗體骨架或其他此類 適合骨架。受體-Fc融合物亦視為本發明之一部分。 本發明尤其係關於抗原結合蛋白。 本發明尤其係關於一種用於治療眼部疾病之抗原結合蛋 148213.doc 201106963 白’其包含連接於一或多個抗原決定基結合域之蛋白質骨 架’其中該抗原結合蛋白具有至少兩個抗原結合位點，至 少一者來自抗原決定基結合域且至少一者來自成對vh/vl 域’且其中該等抗原結合位點中至少一者能夠結合於 TNFa或TNFa受體（例如TNFR1)，且該等抗原結合位點中 至少一者能夠結合於VEGF或VEGF受體（例如VEGFR2)。 連接於一或多個抗原決定基結合域之受體_FC融合物亦 為本發明之一部分，例如連接於VEGF或VEGF受體結合域 之丁 NFa受體-Fc融合物，或連接於TNFa或TNFa受體結合 域之VEGF受體_Fc融合物。 本發明提供一種雙靶向抗原結合分子，其包含TNFa拮 抗劑部分、VEGF拮抗劑部分及將該TNFa拮抗劑部分連接 於該VEGF拮抗劑部分之連接子，其中TNFa拮抗劑部分包 含任一列於表1中之TNFa拮抗劑之胺基酸序列；veGF拮 抗劑部分包含任一列於表2中之VEGF拮抗劑之胺基酸序 列；連接子為長度為1-150個胺基酸之胺基酸序列；且雙 靶向分子不為DMS4000或DMS4031。連接子亦可為基於非 肽之連接子，包括例如聚乙二醇（PEG)連接子及基於peg 之連接子。 本發明亦提供一種編碼本發明抗原結合蛋白之聚核皆酸 序列’例如編碼任一本文所述之抗原結合蛋白之重鏈的聚 核苷酸序列，及編碼任一本文所述之抗原結合蛋白之輕鏈 的聚核苷酸序列。此等聚核苷酸表示對應於等效多肽序列 之編碼序列。然而’應瞭解此等聚核苷酸序列可與起始密 148213.doc 201106963 碼子、 中0 適當信號序列及終止密碼子一 矣璉殖至表 現載體 本發明亦提供一種重組轉型或轉染 ^ 卞伯主細胞，其包合一 或夕種編碼本發明抗原結合蛋白（例 、 人番白夕舌如B ± 〇本文所述之抗原結 口蛋白之重鏈及輕鏈）之聚核苷酸。 本發明另外提供一種產生任一本 又所述之抗原結合蛋白 之方法’該方法包含在適合培養基（例如無血清培養基^ 培養宿主細胞之步驟’該宿主細胞包含至少—個包含編碼 本發明抗原結合蛋白之聚核苷酸之載體，例如第—及第二 載體’該第-載體包含編碼本文所述之抗原結合蛋白之重 鏈的聚核苷酸且該第二載體包含編碼本文所述之抗原結合 蛋白之輕鏈的聚核苷酸。 本發明提供一種適於全身遞送或局部遞送至眼部之醫藥 組合物’其包含如本文所述之抗原結合蛋白及醫藥學上可 接受之載劑。本發明醫藥組合物可另外包含另一活性劑。 本發明提供一種用於預防或治療眼病之選自由以下組成 之群的TNFa拮抗劑：阿達木單抗（ada丨imumab)、英利昔單 抗（infliximab)、依那西普（以&1161^1^)、£88八105、？丑？1-5_19、PEP1-5-490、PEP1-5-493、SEQ ID NO: 2之黏結素 (adnectin)、戈利木單抗（golimumab)、塞妥珠單抗 (certolizumab)、ALK-693 1、及包含 SEQ ID NO:30 之重鏈 及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體，其中TNFa拮抗劑將與選 自由以下組成之群之VEGF拮抗劑組合投與：貝伐珠單抗 (bevacizumab)、蘭尼單抗、r84、阿柏西普（afHbercept)、 148213.doc 201106963 CT01 ' DOM15-10-11 ' DOM15-26-593 ' PRS-050 ' PRS-05]、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010 及 DMS1571。 本發明亦提供一種用於預防或治療眼病之選自由以下組 成之群的VEGF拮抗劑：貝伐珠單抗、蘭尼單抗、r84、阿 柏西普、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、PRS-050、 PRS-051、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010 及DMS1571，其中VEGF拮抗劑將與選自由以下組成之群 ® 之TNFa拮抗劑組合投與：阿達木單抗、英利昔單抗、依 那西普、ESBA105、PEP1-5-19、PEP1-5-490、PEP1-5-493、 SEQ ID NO: 2之黏結素、戈利木單抗、塞妥珠單抗、ALK-693 1、及包含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕 鏈的抗體。 本發明亦提供一種雙靶向抗原結合分子，其包含TNFa 拮抗劑部分、VEGF拮抗劑部分及將該TNFa拮抗劑部分連 ^ 接於該VEGF拮抗劑部分之連接子，其中： TNFa拮抗劑部分包含任一列於表1中之TNFa拮抗劑之胺 基酸序列； VEGF拮抗劑部分包含任一列於表2中之VEGF拮抗劑之 胺基酸序列； 連接子為長度為1-150個胺基酸之胺基酸序列：且 雙靶向分子不為DMS4000或DMS403 1。 本發明亦提供一種雙靶向抗原結合分子，其包含TNFa 拮抗劑部分、VEGF拮抗劑部分及將該TNFa拮抗劑部分連 148213.doc 201106963 接於該VEGF拮抗劑部分之連接子，其中： TNFcx拮抗劑部分包含任一列於表i中之TNFa拮抗劑之胺 基酸序列； VEGF拮抗劑部分包含任一列於表2中之veGf拮抗劑之 胺基酸序列； 連接子為長度為1-150個胺基酸之胺基酸序列：且其中 雙乾向抗原結合分子用於預防或治療眼部疾病且將每心6 週經玻璃體内投與。 本發明亦k供一種抗原結合蛋白’其包含SEq id NO. 69、70、71或72之重鏈序列及SEQ ID NO: 12之輕鏈序 列。 亦提供一種預防或治療罹患眼病之患者的方法，其包含 向患者眼部全身或局部投與預防或治療有效量之如本文所 揭示之組合物或雙靶向蛋白質。 【實施方式】 定義 如本文所用之術語『蛋白質骨架』包括（但不限於）免疫 球蛋白（Ig)骨架，例如IgG骨架，其可為四鏈或兩鏈抗體， 或其可僅包含抗體之Fc區，或其可包含抗體之一或多個恆 定區，該一或多個恆定區可來源於人類或靈長類動物，^ 其可為人類與靈長類動物恆定區之人工嵌合體。除一咬^ 個恆定區外，此等蛋白質骨架亦可包含抗原結合位點，合 如在蛋白質骨架包含完全IgG之情況下。此等蛋白質骨穷 將能夠連接於其他蛋白質結構域，例如具有抗原結合位2 I48213.doc 201106963 之蛋白質結構域，例如抗原決定基結合域或心域。 斤用之術5吾『文體_Fc融合物』係、指受體或細胞 —面蛋白f之可溶性配位體或細胞外域連接於抗體Fc區。 右=受體或細胞表面蛋白質之可溶性配位體或細胞外域 入 留王長蛋白貝之生物功能’亦即若其保留抗原結 5此力，則其包括在此定義内。 「結構域」為具有獨立於蛋白質之其他部分之三級結構 的指疊蛋白智· έ士# “ 軋、'。構。—般而言’結構域負責蛋白質之離散 广質且在迕多情況下可添加、移除或轉移至其他蛋白 —而不喪失蛋白質其餘部分及/或該結構域之功能。「抗 :變域」為包含抗體可變域所特有之序列的指疊多肽 。^。其因此包括完全抗體可變域，及例如_或多個環 ^非抗體可變域所特有之序列置換的經修飾之可變域， 2截紐或包含w端延伸之抗體可變域，以及至少保 全長結構域之結合活性及特異性之可變域摺疊片段。 /語「免疫球蛋白單可變域」係指獨立於不同V區或V 2 ’特異性結合抗原或抗原決定基之抗體可變域（Vh、 hh、Vl)。免疫球蛋白單可變域可以與其他不同可變 可變=之格式（例如同源或異源多聚體）存在，其中該等其 他或可變域不為單免疫球蛋白可變域結合抗 ^即，中免疫球蛋白單可變域獨立於其他可變域結合抗 納田用於本文時’術語「結構域抗體」或「dAb」虚能 二=之「免疫球蛋白單可變域」相同。免疫球蛋白 早又’可為人類抗體可變域，但亦包括其他物種之單抗 1482l3.doc 201106963 體可變域，諸如齧齒動物（例如如WO 00/29004中所揭 示）、護士:及駱駝科（Came/z.c〇VHH dAb。駱駝科vHH為源 自包括駱駝、駝馬、羊駝、單峰駝及原駝之物種之免疫球 蛋白單可變域多肽’該等物種產生天然缺乏輕鏈之重鏈抗 體。可根據此項技術中可用之標準技術使此等vhh域人類 化，且此等結構域仍視為本發明之「結構域抗體」。如本 文所用之「VH」包括駱駝科vHH結構域。NARV為在包括 邊士鯊之軟骨魚中鑑別出的另一類型免疫球蛋白單可變 域。此等結構域亦稱為新穎抗原受體可變區（通常縮寫成 V(NAR)或NARV)。關於其他詳情，參見M〇1 Immun〇1 (2006) 44: 656-665及 US20050043519A。 術5吾「抗原決定基結合域」係指獨立於不同v區或v域 特異性結合抗原或抗原決定基之結構域，其可為結構域抗 體（dAb)，例如人類、駱駝科或鯊免疫球蛋白單可變域， 或其可為作為選自由以下組成之群的骨架之衍生物的結構 域：CTLA-4(伊維體（Evibody));脂質運載蛋白；蛋白質a 衍生分子，諸如蛋白質人之2結構域（親和體，SpA)、A結 構域（尚親和性多聚體（Avimer)/最大抗體（Maxib〇dy));熱 休克蛋白，諸如GroE1&Gr〇ES ;運鐵蛋白（運載體（transbody)); 錨蛋白重複蛋白 （DARPin); 肽適體 ； c型 凝集素 結構域（四連接素（Tetranectin));人類γ_晶狀體球蛋白及人 類泛素（親和素（affilins)) ; PDZ結構域；蠍毒素；人類蛋 白酶抑制劑之庫尼兹型結構域（kunitz type d〇main);及纖 維結合蛋白(黏結素(adnectin));已進行蛋白質工程改造以 148213.doc -12- 201106963 實現與除天然配位體外之配位體結合者。 CTLA-4(細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4)為主要在（：〇4+ τ 細胞上表現之CD2 8家族受體。其細胞外域具有可變域樣ig 摺疊。對應於抗體CDR之環可經異源序列取代以賦予不同 結合特性。經工程改造以具有不同結合特異性之Ctla-4 分子亦稱為伊維體。關於其他詳情，參見J〇urnal
Immunological Methods (2001) 248 (卜2): 31-45 ° 脂質運載蛋白為運載疏水性小分子（諸如類固醇、後膽 色素、類視色素及脂質）之細胞外蛋白質家族。其具有剛 性β摺疊二級結構，其中在該錐形結構之開口端具有多個 環，可經工程改造以結合不同標靶抗原。抗運載蛋白之尺 寸介於160-180個胺基酸之間，且源自脂質運載蛋白。關 於其他詳情’參見BiochimBiophys Acta (2000) 1482: 337-350、US7250297B1 及 US20070224633。 親和抗體（Affibody)為源自金黃色葡萄球菌 {Staphylococcus 之蛋白質A的骨架，其可經工程改 造以結合於抗原。該結構域由約58個胺基酸之三螺旋束組 成。已藉由隨機選擇表面殘基來產生文庫。關於其他詳 情’參見Protein Eng. Des. Sel· (2004) 17: 455-462 及 EP1641818A1 。 高親和性多聚體為源自A結構域骨架家族之多結構域蛋 白質。具有約35個胺基酸之該天然結構域採用確定之二硫 化物鍵結之結構。藉由改組A結構域家族所展現之天然變 體來產生多樣性。關於其他§羊情.參見Nature Biotechnology 148213.doc 201106963 (2205) 23(12): 1556-1561 及 Expert Opinion on Investigational Drugs (2007年 6月）16(6): 909-917。 運鐵蛋白為單體血清運載醣蛋白。運鐵蛋白可藉由將肽 序列插入容許之表面環中來工程改造以結合不同標靶抗 原。經工程改造之運鐵蛋白骨架的實例包括運載體。關於 其他詳情’參見 j_ Biol. Chem (1999) 274: 24066-24073。 經设计之錨蛋白重複蛋白（DARPin)源自錫蛋白，錯蛋白 為介導整合膜蛋白與細胞骨架附接之蛋白質家族。單個錨 蛋白重複序列為由兩個α螺旋及一個β轉角組成之具有3 3個 殘基之基元。其可藉由隨機選擇各重複序列之第一 α螺旋 及β轉角中之殘基來工程改造以結合不同靶抗原。其結合 界面可藉由增加模組數（一種親和力成熟法）而增加。關於 其他。羊清，參見 j. Mol. Biol. (2003) 332: 489-503、PN AS (2003) 100(4): 1700·1705、及 j. M〇1 Bi〇1 (2〇〇7) 369: 1015-1028及 US20040132028A1。 纖維結合蛋白為一種可經工程改造以結合於抗原之骨 架。黏結素由第III型人類纖維結合蛋白（1?]^3)的15個重複 單元之第十結構域之天然胺基酸序列的主鏈組成。在β夾 層一鈿之二個環可經工程改造以使黏結素能夠特異性識別 相關治療標靶。關於其他詳情，參見Pr〇tein Eng. Des.
Sel. (2005) 18: 435-444、US20080139791、W02005056764 及 US6818418B1。 肽適體為由在活性位點處插入限制性可變肽環之恆定骨 架蛋白裊組成的組合識別分子，通常為硫氧還蛋白 148213.doc -14- 201106963 (TrxA)。關於其他詳情，參見 Expert Opin. Biol· Ther. (2005) 5: 783-797 ° 微體源自長度為25-50個胺基酸且含有3-4個半胱胺酸橋 之天然存在之微蛋白，微蛋白之實例包括KalataB 1及芋螺 毒素及打結素。微蛋白具有一環，該環可經工程改造以包 括多達25個胺基酸而不影響微蛋白之總體摺疊。關於經工 程改造之打結素結構域之其他詳情，參見W02008098796。 其他抗原決定基結合域包括用作工程改造不同標靶抗原 結合性質之骨架的蛋白質，包括人類γ-晶狀體球蛋白及人 類泛素（親和素）、人類蛋白酶抑制劑之庫尼茲型結構域、 Ras結合蛋白AF-6之PDZ結構域、蠍毒素（卡律蠍毒素）、C 型凝集素結構域（四連接素），如Handbook of Therapeutic Antibodies 之第 7 章 Non-Antibody Scaffolds(2007, Stefan Dubel 編）及 Protein Science (2006) 15:14-27 中所評述。本 發明抗原決定基結合域可源自任一此等替代蛋白質結構 域。 「雙可變域免疫球蛋白（DVD-Ig)」為雙特異性四價免疫 球蛋白 G(IgG)樣分子（Wu 等人，Nature Biotechnology (2007) 25: 1290-1297)。DVD-Ig可定義為包含多肽鏈之結 合蛋白，其中該多肽鏈包含VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n，其 中VD1為第一可變域，VD2為第二可變域，C為恆定域， XI表示胺基酸或多肽（連接子），X2表示Fc區且η為0或 1(W0 2007024715)。在本發明之情形下，VD1結合於 TNFa或TNFa受體，且VD2結合於VEGF或VEGF受體，或 148213.doc 201106963 反之亦然。 如本文所用，術語「成對Vh域」、「成對、域」及「成 對vH/vL域」係指僅在與搭配可變域成對時才特里性结合 抗原之抗體可變域。在任—成對中，總有-VdlVL，且 術語「^對VH域」係指Vh搭配物，術語「成對Vl域」係 才曰L搭配物且術5吾「成對Vh/Vl域」係指兩個結構域一 起。 如本文所用之術語「抗原結合蛋白」係指能夠結合於 TNFa及/或VEGF之抗體、抗體片段（例如結構域抗體 (dAb) ' ScFv、FAb、FAb2)及其他蛋白質構築體（諸如受 體-Fc融合物抗原結合分子可包含至少一•可變域， 例如抗體、結構域抗體、多個結構域抗體(例如啞鈴體)、 dAb-dAb内嵌融合物、Fab、Fab，、F(ab，)2 Fv ScFv、 雙功能抗體、mAbdAb、DVD_Ig、親和抗體、異源結合抗 體或雙特異性抗體（包括對TNF〇^TNFa受體具有第一特 異性及對VEGF或VEGF受體具有第二特異性之雙特異性抗 體）。在一實施例中，抗原結合分子為抗體。在另一實施 例中’抗原結合分子為dAb ’亦即免疫球蛋白單可變域， 諸士獨立於不同V區或V域特異性結合抗原或抗原決定基 Η VHH或VL。杬原結合分子可能夠結合於兩個標乾， 1即其可為雙#向蛋白質。抗原結合分子可為抗體與抗原 結合片段之組合’諸如一或多個結構域抗體及/或一或多 個SCFV連接於單株抗體。抗原結合分子亦可包含非Ig結構 域’例如作為選自由以下組成之群的骨架之魅物的結構 148213.doc 201106963 域：CTLA-4(伊維體））；脂質運載蛋白；蛋白質a衍生分 子，諸如蛋白質A之Z結構域（親和抗體’ SpA)、A結構域 (高親和性多聚體/最大抗體）；熱休克蛋白，諸如GroE1& GroES ;運鐵蛋白（運載體）；錨蛋白重複蛋白（DARPin); 狀適體；C型凝集素結構域（四連接素人類γ_晶狀體球蛋 白及人類泛素（親和素）；PDZ結構域；蠍毒素、人類蛋白 酶抑制劑之庫尼茲型結構域；及纖維結合蛋白（黏結素）； 已進行蛋白質工程改造以獲得與TNFa及/或VEGF結合者。 如本文所用’「抗原結合蛋白」將能夠拮抗及/或中和人類 TNFa及/或VEGF。此外，抗原結合蛋白可藉由結合於 TNFcx及/或VEGF且阻止天然配位體結合及/或活化受體來 阻斷TNFa及/或VEGF活性。 如本文所用’「VEGF拮抗劑」包括任何能夠降低及/或 消除VEGF之至少一種活性的化合物。舉例而言，vegF拮 抗劑可結合於VEGF且彼結合可直接降低或消除VEGF活性 或戌VEGF拮抗劑可藉由阻斷至少一種配位體結合受體而 間接發揮作用。 如本文所用’「TNFa拮抗劑」包括任何能夠降低及/或消 除TNFa之至少一種活性的化合物。舉例而言，TNFa拮抗 劑可結合於TNFot且彼結合可直接降低或消除TNFa活性或 s亥TNFa括抗劑可藉由阻斷至少一種配位體結合受體而間 接發揮作用。 術si·「KD」係指平衡解離常數。在本發明之一實施例 中對各抗原而言’如BiacoreTM所量測，抗原結合位點以 148213.doc -17· 201106963 至多 1 mM之KD，例如 10 nM、1 nM、5〇〇 pM、2〇〇 pM、 100 pM之KD結合於抗原。在本發明之一實施例中，對各 抗原而言，如BiaC〇reTM所量測，抗原結合位點以1〇 n]yut 10 nM以下、1 nM或1 nM以下、500 pM或50〇 pM以下、 200 pM或200 ρΜ以下、1〇〇 pM或1〇〇 pM以下之KD結合於 抗原。 如本文所用，術語「抗原結合位點」係指構築體上能夠 特異性結合於抗原之位點，其可為單結構域，例如抗原決 定基結合域，或其可為如可在標準抗體發現上之成對 VH/VL域。在本發明之一些態樣中，單鏈Fv(ScFv)域可提 供抗原結合位點。 本文中術語「mAb/dAb」及「dAb/mAb」用以指本發明 之抗原結合蛋白。兩個術語可互換使用且當用於本文中時 意欲具有相同含義。 本文中術語「恆定重鏈丨」用以指免疫球蛋白重鏈之恆 定域Ch 1。 本文中衔丨亙疋輕鏈」用以指免疫球蛋白輕鏈之怪定 域Cl 0 術5吾文庫」係指異源多肽或核酸之混合物。文庫由各 自具有單一多肽或核酸序列之成員構成。在此程度上， 「文庫」與「譜系」同義。 通用構杀」為對應於如Kabat(「Sequences of Proteins nologieal interest」，美國衛生及人類服務部
Department of Health and Human Services))所定義之抗體 1482J3.doc 201106963 序列保守區或對應於如Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. (1987) 196·· 910-917所定義之人類生殖系免疫球蛋白譜系或結構 的單一抗體構架序列。 實施方式 本發明提供包含TNFa拮抗劑及/或VEGF拮抗劑之適用於 眼中之組合物。本發明亦提供TNFa拮抗劑與VEGF拮抗劑 之組合，用於預防或治療眼部疾病。本發明亦提供一種藉 由投與TNFa拮抗劑與VEGF拮抗劑組合來預防或治療眼部 疾病之方法。TNFa拮抗劑及VEGF拮抗劑可各別、依序或 同時投與。 本發明涵蓋投與個別TNFa拮抗劑與個別VEGF拮抗劑（亦 即各別TNFa及VEGF拮抗劑分子）之組合。此外，本發明涵 蓋投與能夠結合於兩種或兩種以上抗原之單一分子或構築 體，例如本發明涵蓋充當TNFa拮抗劑與VEGF拮抗劑之具 有雙靶向功能性（亦即能夠結合並抑制、較佳阻斷TNFa或 TNFa受體之功能，且結合並抑制、較佳阻斷VEGF或 VEGF受體之功能）之分子。舉例而言，本發明提供一種能 夠結合於TNFa及VEGFR2等之雙靶向分子。在一實施例 中，雙靶向分子能夠結合於TNF受體及VEGF受體。 本發明TNFa拮抗劑可抑制經由TNF受體之信號傳導 3 0% ' 40% ' 50%、60%、70%、80%、85%、90% ' 95%、 98%或100%。本發明VEGF拮抗劑可抑制經由VEGF受體之 信號傳導 30% ' 40% > 50%、60%、70%、80%、85%、 90%、95%、98% 或 100%。 148213.doc 19 201106963 拮抗劑可基於抗體骨架或如本文所述之其他此類適合骨 架。此等拮抗劑可為抗體或抗原決定基結合域，例如 dAb。受體-Fc融合物視為本發明之一部分。 本發明拮抗劑可以在同一時間（同時）投與之各別分子的 混合物形式共投與，或彼此在指定時期内（依序），例如彼 此在一個月、一週内或在24小時内，例如彼此在20小時 内，或在1 5小時内，或在12小時内，或在10小時内，或在 8小時内，或在6小時内，或在4小時内，或在2小時内，或 在1小時内，或在30分鐘内投與。本發明拮抗劑可以各別鲁 調配物形式或以單一調配物形式（例如含有兩種拮抗劑之 脂質體）共投與。 在本發明範疇内可與本發明VEGF拮抗劑組合投與或可 用於產生本發明之雙靶向分子之TNFa拮抗劑包括下表1列 出之拮抗劑。
表1 : TNFa拮抗劑 名稱 格式 SEQ ID NO 阿達木單抗(Humira™) 人類mAb 10(重鏈） 12(輕鏈） 英利昔單抗(Remicade™) 敌合mAb 32(重鏈） 33(輕鏈） 依那西普(Enbrel™) TNF受體-Fc融合物 34 ESBA105 人類化scFv 38 PEP 1-5-19 人類Vk dAb 35 PEP 1-5-490 人類Vk dAb 36 PEP 1-5-493 人類Vk dAb 37 - 黏結素 2 戈利木單抗(Simponi™) 人類mAb - 塞妥珠單抗(Cimiza™) 人類化Fab(聚乙二醇化） - ALK-6931 TNF受體-Fc(IgGl)融合物 - 除由表1中之名稱鑑別之TNFa拮抗劑外，本發明TNFa拮 148213.doc -20- 201106963 抗劑包括包含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕 鍵的抗體。 在本發明範疇内可與本發明TNFa拮抗劑組合投與或可 用於產生本發明之雙靶向分子之VEGF拮抗劑包括下表2列 出之拮抗劑。
表2 : VEGF拮抗劑 名稱 格式 SEQ ID NO 貝伐珠單抗(AvastinIM) 人類化mAb 22(重鏈） 21(輕鏈） 蘭尼單抗(Lucentis™) 人類化Fab 39(重鏈） 40(輕鏈） r84 人類化mAb 41(Vh) 42(Vl) 阿柏西普(VEGF捕獲劑） 受體-Fc融合物 43 CT01 黏結素 45 DOM15-10-11 人類Vk dAb 44 DOM15-26-593 人類VicdAb 1 PRS-050 抗運載蛋白 - PRS-051 抗運載蛋白 - MP0112 Darpin - CT-322 人類化scFv - ESBA903 人類化scFv - EPI-0030 人類化mAb - EPI-0010 人類化mAb - DMS1571 DOM15-26-593 人類Vk dAb 之Fc格式化型式（以此序列 之二聚體存在） 65
本發明提供一種用於治療眼部疾病之抗原結合蛋白，其 包含連接於一或多個抗原決定基結合域之蛋白質骨架，其 中抗原結合蛋白具有至少兩個抗原結合位點，至少一者來 自抗原決定基結合域且至少一者來自成對VH/VL域，且其 中抗原結合位點中至少一者能夠結合於TNFa或TNFa受 體，且抗原結合位點中至少一者能夠結合於VEGF或VEGF 148213.doc -21 - 201106963 受體。 此等抗原、、。合蛋白包含連接於-或多個抗原決定基社人 域⑼如結構域抗體)之蛋白質骨架(例如Ig骨架； 吵’例如單株抗體)，其中結合蛋白具有至少兩個抗原結 合位點^少—者來自抗原決定基結合域，且其中抗原結 合位點、至少_者結合於TNFasilTNFa受體，抗原結合位 點中至^ -者結合於VEGi^VEGF受體，及其產生方法及 用途’詳言之在眼部治療中之用途。 本發明之此等抗原結合蛋白亦稱為mAbdAb。 幻中，本發明抗原結合蛋白之蛋白質骨架為 月架，例如IgG骨架或IgA骨架。IgG骨架可包含所有抗體 Hi CH2 ' CH3 ' VH ' VL、cL)。本發明抗原 結合蛋白可包含選自IgG1、IgG2 ' IgG3 '邮4或邮概 之IgG骨架。 本發月抗原結合蛋白具有至少兩個抗原結合位點，例如 其具有兩個結合位點，例如其中第一結合位點對抗原上第 一抗原決定基具有特異性且第二結合位點對同一抗原上第 二抗原決定基具有特異性。在另一實施例中，存在4個抗 原結合位點，或6個抗原結合位點，或8個抗原結合位點， 或10個或10個以上抗原結合位點。在一實施例中，抗原結 合蛋白對一個以上抗原、例如兩個抗原或三個抗原或四個 抗原具有特異性。 在另一態樣中’本發明係關於一種能夠結合於TNFa或 TNFa受體及VEGF或VEGF受體之抗原結合蛋白，其包含 148213.doc -22- 201106963 至少一個已3式I之兩個或兩個結構的同源二聚體: (R7)m (R8)m
I I (R6)m (R3)m
I I 恆定 恆定 輕鏈…··重鏈1
I I (R5)m (R2)m
I I
(R4)m X
I (R1)n (Ο 其中 X表系包含重鏈恆定域2(CH2)及重鏈恆定域3(Ch3)之抗 體恆定匾； r 1、r4、R及R各表示抗原決定基結合域； R2表系選自由重鏈恒定域1 (Ch 1)及抗原決定基結合域纽_ 成之群的結構域； R3表示選自由成對VH域及抗原決定基結合域組成之群的 結構域； R5表示選自由輕鏈恆定域（cL)及抗原決定基結合域挺成 之群的結構域； R6表示選自由成對vL域及抗原決定基結合域組成之群的 結構域； n表示獨立選自〇、1、2、3及4之整數； ,4«213.doc -23- 201106963 m表示獨立選自〇及i之整數， 鏈定域1(Ch1)與輕鏈恆定域(C。締合； '、子在至少—個抗原決定基結合域· 且當R3表示成對vH域時，R6表;成對 以便兩個 結構域能夠一起結合抗原。 在實施例中，R6表示成對VLiR3表示成對VH。 在另一實施例中，R7與R8中—或兩者表示抗原決定基結 合域。 在另一實施例中，R丨血R 4 Λ 1 -、R中一或兩者表示抗原決定基結 合域® 在一實施例中 在一實施例中 在一實施例中 域。 ’ R4存在。 ’R、R7及R8表示抗原決定基結合域。 ，R、R7及R8以及R4表示抗原決定基結合 在-實施例中，（Ri)n、（R2)m、（R4)j(R5)m=〇，亦即不 存在’ R3為成對VH域’ r6為成對&域，r^Vh⑽，且 R 為 Vl dAb 〇 在另-實施例中，（A、（R2)m、（仏及（R5)m=〇，亦即 不存在，R3為成對VH域，R6為成對&域，汉8為％⑽， 且（R7)m = 〇，亦即不存在。 在另一實施例中，（R2)m'及（R5)m = 〇，亦即不存在，r 為dAb，R4為dAb，R3為成對％域，r6為成對、域，（r、 及（R7)m=o，亦即不存在。 n 在本發明之-實施例中，抗原決定基結合域為_。 1482l3.doc -24- 201106963 在本發明之另一態樣中，抗原結合蛋白為對TNFa或 TNFa受體具有第一特異性及對VEGF或VEGF受體具有第 二特異性之雙特異性抗體。 在本發明之另一態樣中，抗原結合蛋白為雙可變域免疫 球蛋白（DVD-Ig)。 在本發明之另一態樣中，抗原結合蛋白為dAb-dAb内嵌 融合物。 在本發明之另一態樣中，抗原結合蛋白為受體-Fc融合 物，其可連接於一或多個抗原決定基結合域。受體-Fc融 合物包含免疫球蛋白骨架，亦即其包含抗體Fc部分連接於 受體或細胞表面蛋白質之可溶性配位體或細胞外域及一或 多個抗原決定基結合域。此等受體-Fc-抗原決定基結合域 融合物亦可稱為受體-Ig-抗原決定基結合域融合物。Fc部 分可選自任一同型之抗體，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4 或 IgG4PE。 在一實施例中，本發明抗原結合蛋白對VEGF具有特異 性，例如其包含受體-Fc融合物連接於結合VEGF之抗原決 定基結合域（例如結合VEGF之dAb、抗運載蛋白或黏結 素）。 在一實施例中，本發明抗原結合蛋白對VEGFR2具有特 異性，例如其包含受體-Fc融合物連接於結合VEGFR2之抗 原決定基結合域（例如結合VEGFR2之dAb或黏結素）。 在一實施例中，本發明抗原結合蛋白對TNFa具有特異 性，例如其包含受體-Fc融合物連接於結合TNFa之抗原決 148213.doc -25- 201106963 定基結合域（例如結合TNFct之dAb或黏結素）。 在一實施例中，本發明抗原結合蛋白對TNFa或TNFa受 體及VEGF或VEGF受體具有特異性，例如其包含TNFa受 體-Fc融合物連接於結合VEGF或VEGF受體之抗原決定基 結合域。另一實例為包含VEGF受體_Fc融合物連接於結合 TNFa或TNFa受體之抗原決定基結合域的抗原結合蛋白。 應瞭解任一本文所述之抗原結合蛋白能夠中和—或多種 抗原，例如其能夠令和TNFa及/或其亦能夠中和vegf。 「如通篇本說明書關於本發明抗原結合蛋白所用之術語 中和」及其法上之變體意謂在本發明抗原結合蛋白存 在下之標靶生物活性相較於此等抗原结合蛋白不存在之標 把活性完全或部分降低。中和可歸因於（但不限於）以下一 或夕者.阻斷配位體結合、阻止配位體活化受體、下調受 體或影響效應功能性。 右 式，例如在可例如如實例1.3中所述進行 細胞中Μ分泌分析法，來量測中和程度。在此 “I * ’藉由評估在中和抗原結合蛋白存在下1"分泌 =量測™Fa之中和。亦可在量測 ==法中量測中和程度，該分析法可例如如； 在此分析法中，評估在中和㈣ VEGF中和。配位體與其受體之間的結合減少來量分 白存在下配位體與其受 之其他方法為此項技術 例如藉由評估在中和抗原結合蛋 體之間的結合減少來㈣中和作用 J482J3.doc -26- 201106963 中已知且包括例如BiacoreTM分析法。 在本發明之一替代態樣中，提供中和活性與本文例示之 抗原結合蛋白至少實質上等效之抗原結合蛋白。 本發明抗原結合蛋白對TNFa或TNFa受體具有特異性， 例如其包含能夠結合於TNFa之抗原決定基結合域，及/或 其包含結合於TNFa之成對VH/VL。抗原結合蛋白可包含能 夠結合於TNFa之抗體。抗原結合蛋白可包含能夠結合於 TNFa之 dAb ° • 本發明抗原結合蛋白亦對VEGF或VEGF受體具有特異 性。在一實施例中，本發明抗原結合蛋白能夠同時結合 TNFa與 VEGF。 應瞭解例如如藉由使用適合分析法（諸如實例3中所述之 分析法）經由化學計量分析所測定，任一本文所述之抗原 結合蛋白能夠同時結合兩種或兩種以上抗原。 此等抗原結合蛋白之實例包括具有作為TNFa拮抗劑之 ^ 抗原決定基結合域（例如抗TNFa黏結素）附接於重鏈之c端 或η端或輕鏈之c端或η端的VEGF抗體。實例包括包含SEQ ID NO: 20或22中所示之重鏈序列及SEQ ID NO: 21中所示 之輕鏈序列的抗原結合蛋白，其中重鏈與輕鏈中一或兩者 另外包含一或多個結合於TNFa之抗原決定基結合域，例 如選自SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 17中所示者之抗原決 定基結合域。 在一實施例中，抗原結合蛋白包含抗VEGF抗體連接於 作為TNFa拮抗劑之抗原決定基結合域，其中抗VEGF抗體 148213.doc -27- 201106963 之CDR與具有SEQ ID NO: 20或22之重鏈序列及SEQ ID NO: 2 1之輕鏈序列的抗體相同。 此等抗原結合蛋白之實例包括具有作為VEGF拮抗劑之 抗原決定基結合域附接於重鏈之c端或η端或c端的TNFa抗 體。實例包括包含SEQ ID NO: 10中所示之重鏈序列及SEQ ID NO: 1 2中所示之輕鏈序列的抗原結合蛋白，其中重鏈 與輕鏈中一或兩者另外包含一或多個能夠例如藉由結合於 VEGF或VEGF受體（例如VEGFR2)而拮抗VEGF之抗原決定 基結合域。此等抗原決定基結合域可選自SEQ ID NO: 1、 18、19、23或44中所示者。 在一實施例中，本發明之抗原結合構築體包含SEQ ID NO: 14之重鏈序列及SEQ ID NO: 12之輕鏈序列，或SEQ ID NO: 15之重鏈序列及SEQ ID NO: 12之輕鏈序列，或 SEQ ID NO: 24之重鏈序列及SEQ ID NO: 12之輕鏈序歹ij。 在一實施例中，抗原結合蛋白包含抗TNFa抗體連接於 作為VEGF拮抗劑之抗原決定基結合域，其中抗TNFa抗體 之CDR與具有SEQ ID NO: 10之重鏈序歹ij及SEQ ID NO: 12 之輕鍵序列的抗體相同。 此等抗原結合蛋白之其他實例包括具有抗VEGF抗原決 定基結合域附接於重鏈之c端或η端或輕鏈之c端或η端的抗 TNFa抗體，其中VEGF抗原決定基結合域如下：選自 W020070803 92(以引用的方式併入本文中）中所述之任一 VEGF dAb序列的 VEGF dAb，尤其為 SEQ ID NO: 117、 119、123、127-198、5 39 及 540 中所示之 dAb ;或選自 148213.doc -28- 201106963 W02008149 146(以引用的方式併入本文中）中所述之任一 VEGF dAb序列的VEGF dAb，尤其為描述為00^^15-26-501、DOM15-26-555、DOM15-26-558、DOM15-26-589、 DOM15-26-591、DOM15-26-594 及 DOM15-26-595 之 dAb ; 或選自W02007066106(以引用的方式併入本文中）中所述 之任一 VEGF dAb序列的VEGF dAb ;或選自WO 2008 149147(以引用的方式併入本文中）中所述之任一 VEGF dAb序列的VEGF dAb ;或選自WO 2008 149150(以引用的 # 方式併入本文中）中所述之任一 VEGF dAb序列的VEGF dAb 〇 W02007080392、WO2008149146、W02007066106、 \^02008149147及\¥02008149150中之此等特定序列及相關 揭示内容以引用的方式併入本文中’如同明確寫入本文中 一般，其明確目的在於提供揭示内容以併入本文之申請專 利範圍中且作為應用於本發明之情形中之可變域及拮抗劑 | 的實例。 此等抗原結合構築體之其他實例包括具有一或多個抗 TNFa抗原決定基結合域附接於重鏈之c端或η端或輕鏈之c 端或η端的抗VEGF抗體，其中TNFa抗原決定基結合域為 選自W004003 019(以引用的方式併入本文中）中所揭示之 任一 TNFa dAb 的 TNFa dAb，尤其為描述為 TAR1-5-19、 TAR1-5及TAR1-27之dAb。W004003019中之此等特定序列 及相關揭示内容以引用的方式併入本文中，如同明確寫入 本文中一般，其明確目的在於提供揭示内容以併入本文之 148213.doc •29- 201106963 申請專利範圍中且作為應用於本發明之情形中之可變域及 拮抗劑的實例。 此等抗原結合構築體之其他實例包括具有一或多個抗 TNFR1抗原決定基結合域附接於重鏈之c端或η端或輕鏈之 c端或η端的抗VEGF抗體，其中TNFR1抗原決定基結合域 如下：選自W004003019(以引用的方式併入本文中）中任 一TNFR1 dAb序列之TNFR1 dAb，尤其為描述為TAR2-10 及TAR2-5之dAb ;或選自W02006038027(以引用的方式併 入本文中）中任一 TNFR1 dAb序列之TNFR1 dAb，尤其為 SEQ ID NO: 32-98、167-179、373-401、431、433-517及 627中所示之dAb ;或選自W02008149144(以引用的方式併 入本文中）中任一TNFR1 dAb序列之TNFR1 dAb，尤其為描 述為 DOMlh-131-511、DOMlh-13 Ρ201、ϋΟΜ11ι-131-202、DOMlh-131-203、DOMlh-131-204、DOMlh-131-205 之dAb ;或選自W02008149148(以引用的方式併入本文中） 中任一 TNFR1 dAb序列之TNFR1 dAb，尤其為描述為 DOMlh-131-206之 dAb。 W0200603 8027及WO2008149144中之此等特定序列及相 關揭示内容以引用的方式併入本文中，如同明確寫入本文 中一般，其明確目的在於提供揭示内容以併入本文之申請 專利範圍中且作為應用於本發明之情形中之可變域及拮抗 劑的實例。 抗原結合蛋白之其他實例包括TNFR2-Ig融合物連接於對 VEGFR2具有特異性之抗原決定基結合域（例如連接於 148213.doc •30· 201106963 TNFR2-Ig融合物之c端或η端之抗VEGFR2黏結素），例如包 含SEQ ID NO: 34中所示之TNFR2-Ig序列且另外包含一或 多個結合於VEGFR2之抗原決定基結合域（例如SEQ ID NO: 1 8中所示之黏結素）的抗原結合蛋白。 此等抗原結合蛋白之其他實例包括TNFR2-Ig融合物連接 於對VEGF具有特異性之抗原決定基結合域（例如連接於 TNFR2-Ig融合物之c端或η端之抗VEGF dAb或抗VEGF抗運 載蛋白），例如包含SEQ ID NO: 34中所示之TNFR2-Ig序列 且另外包含一或多個結合於VEGF之抗原決定基結合域（例 如SEQ ID NO: 1中所示之dAb，或SEQ ID NO: 19中所示之 抗運載蛋白）的受體-Fc-抗原決定基結合域融合物。 此等抗原結合蛋白亦可具有另外一或多個具有相同或不 同抗原特異性之抗原決定基結合域附接於重鏈之c端及/或 η端及/或輕鏈之c端及/或η端及/或受體-Fc或受體-Fc-dAb融 合物之η端或c端。 在本發明之一實施例中，提供一種本文所述且包含恆定 區以使抗體或受體-Fc融合物之ADCC及/或補體活化或效 應功能性降低之本發明抗原結合蛋白。在一個此類實施例 中，重鏈恆定區可包含IgG2或IgG4同型之天然失效恆定區 或突變IgGl悝定區。適合修飾之實例描述於EP0307434 中。一實例包含位置23 5及23 7(丑11索引編號，{^0&1等人， (1983)「Sequences of Proteins of Immunological Interest」，美 國衛生及人類服務部）處丙胺酸殘基之取代。 在一實施例中，抗原結合蛋白之F c部分功能失效。此F c 148213.doc 201106963 失效可使抗原結合蛋白之安全型態改善。 本电明亦提供一種藉由將抗原決定基結合域定位於抗體 重鍵上’尤其藉由將抗原決定基結合域定位於重鏈C端 上’來降低抗原結合蛋白之CDC功能的方法。 在一實施例中’本發明抗原結合蛋白將保留Fc之功能 性，例如能夠具有ADCC與CDc活性中一或兩者。 本發明抗原結合蛋白可具有某些效應功能❶舉例而言， 右免疫球蛋白骨架含有源自具有效應功能之抗體之以區， 例如若免疫球蛋白骨架包含來自IgG1之CH2及CH3。效應 功能之程度可根據已知技術而變化，例如經由CH2域中之 突變，例如其中IgGl CH2域在選自239及332及330之位置 處具有一或多個突變，例如該等突變係選自8239〇及1332£ 及A3 3 0L，使得抗體具有增強之效應功能，及/或例如改變 本發明抗原結合蛋白之糖基化型態，使得Fc區之岩藻糖基 化減少。 在一實施例中’抗原結合蛋白包含作為結構域抗體 (dAb)之抗原決定基結合域，例如抗原決定基結合域可為 人類Vη或人類"Vl、或路，轮科Vhh或:K dAb(NARV)。 在一實施例中，抗原結合蛋白包含作為選自由以下組成 之群的骨架之衍生物的抗原決定基結合域：CTLA-4(伊維 體）；脂質運載蛋白；蛋白質A衍生分子，諸如蛋白質a之 Z結構域（親和抗體’ SpA)、A結構域（高親和性多聚體/最 大抗體）；熱休克蛋白’諸如GroEl及GroES ;運鐵蛋白（運 載體）；錨蛋白重複蛋白（DARPin);肽適體；c型凝集素結 148213.doc •32· 201106963 構域（四連接素）；人類γ·晶狀體球蛋白及人類泛素（親和 素），PDZ結構域；蠍毒素；人類蛋白酶抑制劑之庫尼茲型 結構域；及纖維結合蛋白（黏結素）；已進行蛋白質工程改 造以實現與除天然配位體外之配位體結合者。 本發明抗原結合蛋白可包含附槔於抗原決定基結合域黏 結素之蛋白質骨架，例如黏結素附接於重鏈c端之igG骨 架，或其可包含附接於黏結素之蛋白質骨架，例如黏結素 附接於重鏈η端之IgG骨架，或其可包含附接於黏結素之蛋 • 白質骨架，例如黏結素附接於輕鏈c端之IgG骨架，或其可 包含附接於黏結素之蛋白質骨架，例如黏結素附接於輕鏈 η端之IgG骨架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域 CTLA-4之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如CTLa_4附接 於重鏈η端之IgG骨架，或其可包含例如CTLA_4附接於重 鏈c端之IgG骨架，或其可包含例如cTLA_4附接於輕鏈11端 φ 之1gG骨架，或其可包含CTLA-4附接於輕鏈c端之IgG骨 架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域脂 貝運載蛋白之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如脂質運栽 蛋白附接於重鏈11端之IgG骨架，或其可包含例如脂質運載 蛋白附接於重鏈〇端之IgG骨架，或其可包含例如脂質運裁 蛋白附接於輕鏈η端之IgG骨架，或其可包含脂質運載蛋白 附接於輕鏈c端之IgG骨架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域 148213.doc -33- 201106963 SPA之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如SpA附接於重鏈n 端之IgG骨架’或其可包含例如SpA附接於重鏈c端之砂 骨架，或其可包含例如SpA附接於輕鏈n端之骨架，或 其可包含SpA附接於輕鏈c端之igG骨架。 在其他實施财，訪包含附接於抗原決定基結合域親 和抗體之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如親和抗體附接 於重鏈η端之IgG骨架，或其可包含例如親和抗體附接於重 鏈c端之IgG骨架’或其可包含例如親和抗體附接於輕鏈n 端之IgG骨架’或其可包含親和抗體附接於輕鏈^端之砂 骨架。 在其他實施例中’其可包含附接於抗原決定基結合域高 親和性多聚體之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如高親和 性多聚體附接於重鏈n端之IgG骨架，或其可包含例如高親 和性多聚體附接於f鏈e端之邮骨架，或其可包含例如高 親和性多聚體附接於輕鏈n端之IgG骨架，或其可包含高親 和性多聚體附接於輕鏈c端之IgG骨架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域 Gr〇EI之蛋白質骨架，例如JgG骨架，例如GroEI附接於重 鍵η端之妙骨帛，或其可包含例如以他附接於重鏈c端之 IgG骨架，或其可包含例如Gr〇EI附接於輕鏈n端之骨 架，或其可包含GroEI附接於輕鏈c端之Ig(}骨架。 在其他實施例中’其可包含附接於抗原決定基結合域運 鐵蛋白之蛋白質骨帛，例如IgG骨帛，例如運鐵蛋白附接 於重鏈η端之IgG骨架，或其可包含例如運鐵蛋白附接於重 148213.doc -34- 201106963 鏈c端之I g G骨架，或其可包含例如運鐵蛋白附接於輕鏈η 端之IgG骨架，或其可包含運鐵蛋白附接於輕鏈c端之IgG 骨架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域 GroES之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如GroES附接於重 键η端之IgG骨架，或其可包含例如GroES附接於重鏈c端之 IgG骨架，或其可包含例如GroES附接於輕鏈η端之IgG骨 架，或其可包含GroES附接於輕鏈c端之IgG骨架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域 DARPin之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如DARPin附接 於重鏈η端之IgG骨架，或其可包含例如DARPin附接於重 鏈c端之IgG骨架，或其可包含例如DARPin附接於輕鏈η端 之IgG骨架，或其可包含DARPin附接於輕鏈c端之IgG骨 架。 在其他實施例中，其可包含附接於抗原決定基結合域肽 適體之蛋白質骨架，例如IgG骨架，例如肽適體附接於重 鏈η端之IgG骨架，或其可包含例如肽適體附接於重鏈c端 之IgG骨架，或其可包含例如肽適體附接於輕鏈η端之IgG 骨架，或其可包含肽適體附接於輕鏈c端之IgG骨架。 在本發明之一實施例中，存在四個抗原決定基結合域， 例如四個結構域抗體，其中兩個抗原決定基結合域可對同 一抗原具有特異性，或所有存在於抗原結合蛋白中之抗原 決定基結合域可對同一抗原均具有特異性。 本發明蛋白質骨架可藉由使用連接子連接於抗原決定基 148213.doc -35- 201106963 結合域。類似地，本發明之受體_FC融合物可藉由使用連 接子連接於抗原決定基結合域^ DVD-Ig之VD1及VD2域亦 可藉助於連接子連接在一起，諸如此類^適合連接子之實 例包括長度可為1個胺基酸至1 50個胺基酸，或i個胺基酸 至140個胺基酸’例如i個胺基酸至13〇個胺基酸，或1至 120個胺基酸，或1至80個胺基酸，或1至5〇個胺基酸，或i 至20個胺基酸，或1至10個胺基酸，或5至18個胺基酸之胺 基酸序列。此等序列可具有其自身三級結構，例如本發明 連接子可包含單可變域。一實施例中連接子尺寸等同於單 可變域。適合連接子尺寸可為1至2〇埃（angstr〇m)，例如小 於15埃’或小於1〇埃，或小於5埃。 在本發明之一實施例中，至少一個抗原決定基結合域以 包含1至150個胺基酸，例如！至2〇個胺基酸，例如i至1〇個 胺基酸之連接子直接附接於Ig骨架。 此等連接子可選自SEQ ID NO: 3-8、SEQ ID NO: 25或 SEQ ID NO: 66-68中所示任一者，或此等連接子之多者。 舉例而言，連接子可為『TVAAPS』，或連接子可為 『GGGGS』’或此等連接子之多者。 在本發明之一實施例中，連接子為『STG』（SEq ID NO: 25) 〇 連接子可為如本文所述具有一或兩個胺基酸變化之任一 連接子。適用於本發明抗原結合蛋白中之連接子可僅包含 一組或一組以上GS殘基，或除其他連接子外亦包含一組或 一組以上GS殘基，例如『GSTVAAps』或『TVAApSGS』 148213.doc • 36 - 201106963 或『GSTVAAPSGS』，或此等連接子之多者。在一實施例 中，連接子包含『GSTVAAPSGS』或由其組成。 在一實施例中，連接子包含GS(TVAAPSGS)x2(例如 『GSTVAAPSGSTVAAPSGS』，SEQ ID NO: 66)或由其組 成。在一實施例中，連接子包含GS(TVAAPSGS)x3(例如 『GSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGS』，SEQ ID NO: 67)或 由其組成。在一實施例中，連接子包含GS(TVAAPSGS)x4 (例如『GSTVAAPSGSTVAAPSGS TVAAPSGSTVAAPSGS』， SEQ ID NO: 68)或由組成。 在一實施例中，抗原決定基結合域經由連接子 『（PAS)n(GS)m』連接於Ig骨架。在另一實施例中，抗原決 定基結合域經由連接子『（GGGGS)n*p(GS)m』連接於Ig骨 架》在另一實施例中，抗原決定基結合域經由連接子 『（TVAAPS)nijip(GS)m』連接於Ig骨架。在另一實施例中’ 抗原決定基結合域經由連接子『（GS)m(TVAAPSGS)nAp』 連接於Ig骨架。在另一實施例中，抗原決定基結合域經由 連接子『（GSUJVAAPS^GSh』連接於Ig骨架。在另一 實施例中，抗原決定基結合域經由連接子 『（PAVPPP)n(GS)m』連接於Ig骨架。在另一實施例中，抗 原決定基結合域經由連接子『（TVSDVP)n(GS)m』連接於Ig 骨架。在另一實施例中，抗原決定基結合域經由連接子 『（TGLDSP)n(GS)m』連接於Ig骨架。在所有此等實施例 中，n=l-10，且 m=0-4，且 p=2-10。 此等連接子之實例包括（PAS)n(GS)m，其中n=l且 148213.doc •37- 201106963 m=l(SEQ ID NO: 145) ; (PAS)n(GS)m，其中 n=2且 m=l(SEQ ID NO: 146); (PAS)n(GS)m，其中 n=3且 m=l(SEQ ID NO: 147) ; (PAS)n(GS)m，其中 n=4且 m=l ; (PAS)n(GS)m，其中 n=2 且 m=0 ; (PAS)n(GS)m，其中 n=3 且 m=0 ; (PAS)n(GS)m， 其中n=4且m=0。 此等連接子之實例包括（GGGGS)n(GS)m，其中n=l且 m=l ; (GGGGS)n(GS)m，其中 n=2 且 m=l ; (GGGGS)n(GS)m， 其中 n=3 且 m=l ; (GGGGS)n(GS)m，其中 n=4 且 m=l ; (GGGGS)n(GS)m，其中 n=2 且 m=0(SEQ ID NO: 148)； (GGGGS)n(GS)m，其中 n=3 且 m=0(SEQ ID NO: 149)； (GGGGS)n(GS)m，其中 n=4且 m=0。 此等連接子之實例包括（GS)m(TVAAPS)p，其中p=l且 m=l ; (GS)m(TVAAPS)p，其中 p=2 且 m=l ; (GS)m(TVAAPS)p， 其中 p=3 且 m=l ； (GS)m(TVAAPS)p，其中 p=4 且 m=l ； (GS)m(TVAAPS)p，其中 p=5 且 m=l ;或（GS)m(TVAAPS)p， 其中p=6且m= 1。 此等連接子之實例包括（TVAAPS)n(GS)m，其中n=l且 m=l ; (TVAAPS)n(GS)m，其中 n=2 且 m=l(SEQ ID NO: 150) ; (TVAAPS)n(GS)m，其中n=3且m=l(SEQ ID NO: 151); (TVAAPS)n(GS)m，其中 n=4 且 m=l ; (TVAAPShCGSU，其 中 n=2 且 m=0 ； (TVAAPS)n(GS)m ’ 其中 n=3 且 m=0 ； (TVAAPS)n(GS)m，其中 n=4且 m=0。 此等連接子之實例包括（GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=l且 m=l ; (GS)m(TVAAPSGS)n，其中 n=2 且 m=l(SEQ ID NO: 148213.doc -38 * 201106963 66) ; (GS)m(TVAAPSGS)n，其中 n=3 且 m=l(SEQ ID NO: 67) ;或（GS)m(TVAAPSGS)n，其中 n=4且 m=l(SEQ ID NO: 68) ; (GS)m(TVAAPSGS)n，其中 n=5 且 m= 1 (SEQ ID NO: 152) ; (GS)m(TVAAPSGS)n ，其中 n=6 且 m=l(SEQ ID NO:153) ; (GS)m(TVAAPSGS)n，其中 n=l 且 m=0(SEQ ID NO: 8) ; (GS)m(TVAAPSGS)n ，其中 n=2 且 m=10 ; (GS)m(TVAAPSGS)n，其中 n=3 且 m=0 ;或（GS)m(TVAAPSGS)n， 其中n=0。 此等連接子之實例包括（TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=2且 m=l ; (TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=3且m=l ; (TVAAPSGS)p(GS)m， 其中 p=4 且 m=l ; (TVAAPSGS)p(GS)m，其中 p=2 且 m=0 ; (TVAAPSGS)p(GS)m，其中 p=3 且 m=0 ; (TVAAPSGS)p(GS)m，其 中 p=4 且 m=0。 此等連接子之實例包括（PAVPPP)n(GS)m，其中n=l且 m=l(SEQ ID NO: 154) ; (PAVPPP)n(GS)m，其中 n = 2 且 m=l(SEQ ID NO: 155) ; (PAVPPP)n(GS)m，其中 n=3 且 m=l(SEQ ID NO: 156) ; (PAVPPP)n(GS)m，其中 n=4 且 m=l ; (PAVPPP)n(GS)m，其中 n=2且m=0 ; (PAVPPP)n(GS)m，其 中 n=3 且 m=0 ; (PAVPPP)n(GS)m，其中 n=4且 m=0。 此等連接子之實例包括（TVSDVP)n(GS)m，其中n=l且 m=l(SEQ ID NO: 157) ; (TVSDVP)n(GS)m，其中 n=2 且 m=l(SEQ ID NO: 158) ; (TVSDVP)n(GS)m，其中 n=3 且 m=l(SEQ ID NO: 159) ; (TVSDVP)n(GS)m，其中 n=4 且 m=l ; (TVSDVP)n(GS)m，其中 n=2 且 m=0 ; (TVSDVP)n(GS)m， 148213.doc -39- 201106963 其中 n=3 且 m=0 ; (TVSDVP)n(GS)m，其中 n=4且 m=0。 此等連接子之實例包括（TGLDSP)n(GS)m，其中n=l且 m=l(SEQ ID NO: 160) ; (TGLDSP)n(GS)m，其中 n=2 且 m=l(SEQ ID NO: 161) ; (TGLDSP)n(GS)m，其中 n=3 且 m=l(SEQ ID NO: 162) ; (TGLDSP)n(GS)m，其中 n=4 且 m=l ; (TGLDSP)n(GS)m，其中 n=2 且 m=0 ; (TGLDSP)n(GS)m， 其中 n=3 且 m=0 ; (TGLDSP)n(GS)m，其中 n=4且 m=0。 在另一實施例中，抗原決定基結合域與Ig骨架之間無連 接子。在另一實施例中，抗原決定基結合域經由連接子 『TVAAPS』連接於Ig骨架。在另一實施例中，抗原決定 基結合域經由連接子『TVAAPSGS』連接於Ig骨架。在另 一實施例中，抗原決定基結合域經由連接子『GS』連接於 Ig骨架。在另一實施例中，抗原決定基結合域經由連接子 『ASTKGPT』連接於Ig骨架。 在一實施例中，本發明之抗原結合蛋白包含至少一個能 夠結合人血清白蛋白之抗原結合位點，例如至少一個抗原 決定基結合域。 在一實施例中，存在至少3個抗原結合位點，例如存在4 或5或6或8或10個抗原結合位點且抗原結合蛋白能夠結合 至少3或4或5或6或8或10個抗原，例如其能夠同時結合3或 4或5或6或8或10個抗原。 本發明亦提供本文所揭示之抗原結合蛋白，其用於醫學 中，例如用於製造供治療例如以下之眼部疾病（或者本文 中稱為『眼病』）之藥劑：糖尿病性黃斑水腫（DME)、囊樣 148213.doc -40- 201106963 黃斑水腫、葡萄膜炎、AMD(年齡相關黃斑 新生血管性卿、地圖狀萎縮 '糖展病性視網膜= 網膜靜脈阻塞（BRV◦及/或CRV0)及其他黃斑病及眼血管病 變。在-實施例m療之疾病為AMD。在另_實施例 中’待治療之疾病為DME。
本發明提供—種治療罹患例如以下之眼部錢之患者的 方法：糖尿病性黃斑水腫(DME)、囊樣黃斑水腫、葡萄膜 炎、AMD(年齡相關黃斑變性）、脈絡膜新生血管性AMD、 地圖狀萎縮、糖尿病性視網膜病冑、視網膜靜脈阻塞 (BRVO及/或CRVC))及其他黃斑病及^病變，該方法包 括投與治療量之本發明抗原結合蛋白。 本發明抗原結合蛋白可用於治療例如以下之眼部疾病： 糖尿病性黃斑水腫(DME)、囊樣黃斑水腔、葡萄膜炎、 繼（年齡相關黃斑變性）、脈絡膜新生血管性AMD、地圖 狀奏縮、糖尿錢視_病變、視網膜靜脈阻塞（BRVO及/ 或CRVO)及任一其他黃斑病及眼血管病變或與㈣“及/或 VEGF過度產生相關聯之任何其他疾病。 在一特定實施例中，佐拉Α Λ 管性amd。 疾病為—尤其為脈絡膜新生血 適用於本發明中之蛋丹 龙白貝β木包括包含抗體所有結構域 之完全單株抗體骨架、 苒义 省知抗體之Fc部分，或本發明蛋白 /骨架可包含非習知抗 ^ 机肢構’堵如早價抗體或非習知抗 體結構之Fc部分。此笼。。 ^ ^ 荨早價抗體可包含成對重鏈及輕鏈， 其中重鏈之鉸鏈區痤你^ 4修飾，使得重鏈不發生同源二聚合， 148213.doc 201106963 諸如W02007059782中所述之單價抗體。其他單價抗體可 包含成對重鏈及輕鏈，其與缺乏功能可變區及Ch1區之第 二重鏈進行二聚合，其中第一及第二重鏈經修飾，使得其 將形成異源二聚體而非同源二聚體，產生具有兩條重鏈及 一條輕鏈之單價抗體，諸如W02006015371中所述之單價 抗體。此等單價抗體可提供抗原決定基結合域可連接之本 發明蛋白質骨架。此等單價抗體之Fc區可提供本發明免疫 求蛋白月木’其可連接受體或細胞表面蛋白質之可溶性配 位體或細胞外域及抗原決定基結合域。在此類單價結構 中，可使爻體或細胞表面蛋白質之可溶性配位體或細胞外 域連接於第一重鏈且一或多個抗原決定基結合域連接於第 二重鏈。 用於本發明中之抗原決定基結合域為獨立於不同V區或 V域，特異性結合抗原或抗原決定基之結構域，此可為結 構域抗體，或可為作為選自由以下組成之群的骨架之衍生 物的結構域：CTLA-4(伊維體）；脂質運載蛋白；蛋白質A 衍生分子，諸如蛋白質八之2結構域（親和抗體，SpA)、A 結構域（高親和性多聚體/最大抗體）；熱休克蛋白，諸如
Gr〇EI&GroES ;運鐵蛋白（運載體）；錨蛋白重複蛋白 (DARPm);肽適體；凝集素結構域（四連接素”人類 γ-晶狀體球蛋白及人類泛素（親和素）；順結構域；缴毒 素；人類蛋白酶抑制劑之庫尼茲型結構域；及纖維結合蛋 白（黏結素）；已進行蛋白質工程改造以實現與除天然配位 體外之配位體結合者。在—實施例中，此可為結構域抗體 148213.doc -42- 201106963 或其他適合結構域，諸如選自由以下組成之群之結構域： CTLA-4、脂質運載蛋白、SpA、親和抗體、高親和性多聚 體、GroEI、運鐵蛋白、GroES及纖維結合蛋白。在一實施 例中，此可選自dAb、親和抗體、錨蛋白重複蛋白 (DARPin)及黏結素。在另一實施例中，此可選自親和抗 體、錯蛋白重複蛋白（DARPin)及黏結素。在另一實施例 中’此可為結構域抗體’例如選自人類、絡敢科或嘗 (NARV)結構域抗體之結構域抗體。 ® 抗原決定基結合域可在一或多個位置處連接於蛋白質骨 架。此等位置包括蛋白質骨架之C端及n端，例如IgG之重 鏈C端及/或輕鏈c端，或例如1§(3之重鏈N端及/或輕鏈N 端。 在一實施例t，第一抗原決定基結合域連接於蛋白質骨 ‘且第二抗原決定基結合域連接於第一抗原決定基結合 域，舉例而言，在蛋白質骨架為IgG骨架之情況下，第一 φ 抗原决疋基結合域可連接於bG骨架之重鏈c端，且該抗原 決定基結合域可在其c端連接於第二抗原決定基結合域， 或例如第一抗原決定基結合域可連接於IgG骨架之輕鏈C 知，且該第一抗原決定基結合域可在其C端另外連接於第 一抗原決定基結合域，或例如第一抗原決定基結合域可連 接於IgG骨架之輕鏈11端，且該第一抗原決定基結合域可在 其η端另外連接於第二抗原決定基結合域或例如第一抗 原決定基結合域可連接於IgG骨架之重鏈11端，且該第一抗 原決定基結合域可在其n端另外連接於第二抗原決定基結 148213.doc -43- 201106963 合域。 當抗原決定基結合域為結構域抗體時，一些結構域抗體 可匹配於骨架内之特定位置。 用於本發明中之結構域抗體可在習知IgG之重鏈及/或輕 鏈之c端連接。此外，—些dAb可連接於習知抗體之重鏈 與輕鏈之C端。 抗原決定基結合域可在一或多個位置處連接於受體_Fc W合物。此等位置包括受體_Fc融合物之c端及n端。舉例 而言’其可直接連接於受體-Fc融合物之fc部分，或其可 連接於受體-Fc融合物之受體或細胞表面蛋白質部分之可 溶性配位體或細胞外域。在受體或細胞表面蛋白質之可溶 性配位體或細胞外域連接於Fc部分之N端的情況下，抗原 決定基結合域可直接連接於Fc部分之c端、或受體或細胞 表面蛋白質之可溶性配位體或細胞外域之N端。 在一實施例中，第一抗原決定基結合域連接於受體_Fc 融合物且第二抗原決定基結合域連接於第一抗原決定基梦 合域，例如第一抗原決定基結合域可連接於受體_Fc融人 物之c端’且該抗原決定基結合域可在其^端連接於第二抗 原決定基結合域，或例如第一抗原決定基結合域可連接於 受體-Fc融合物之η端，且該第一抗原決定基結合域可在其 η端另外連接於第二抗原決定基結合域。當抗原決定& # 合域為結構域抗體時，一些結構域抗體可匹配於骨架内之 特定位置。 在dAb之Ν端融合於抗體恆定域（Ch3或CL)之構築體中， •44· 148213.doc 201106963 肽連接子可有助於dAb結合於抗原。實際上，dAbiN端緊 靠涉及抗原結合活性之互補決定區（CC)R)。因此，短肽連 接子充S抗原決疋基結合域與蛋白質骨架之怪定域之間的 間隔子，可使dAb CDR更易到達抗原，因此可以高親和力 結合。 d.Ab連接於lgG之環境將視其融合於哪條抗體鏈而不 同。當在IgG骨架之抗體輕鏈C端融合時，預期各dAb位於 抗體鉸鏈及Fc部分附近。此等dAb將可能彼此遠離。在習 # 知抗體中，片段之間的角度及各Fab片段與以部分之間 的角度可非常顯著地變化。就111八1)(1八1)而言，Fab片段之間 的角度可能不會相差很大，而可觀測到各Fab片段與Fc部 分之間的角度有一些角度限制。 當在IgG骨架之抗體重鏈c端融合時，預期各dAb位於以 部分之CH3域附近。認為此不會影響以對r受體（例如 FcyfU、FcYRII、FcyRIII及FcRn)之結合性質，因為此等受 φ 體與Ch2域嚙合（對FcyRI、FcYRn及FqRIII類受體而言）或 與介於CH2與CH3域之間的鉸鏈嚙合（例如FcRn受體）。此等 抗原結合蛋白之另一特徵為，預期兩個dAb在空間上彼此 接近，且若藉由提供適當連接子來提供靈活性，則此等 dAb甚至可形成同源二聚體形式’因此擴展&部分之『拉 鏈』（zipped)四級結構，可增強構築體之穩定性。 此等結構考慮可有助於選擇將抗原決定基結合域（例如 dAb)連接於蛋白質骨架（例如抗體）或受體_Fc融合物上之最 適合位置。 148213.doc •45- 201106963 抗原尺寸、其定位（金液中或細胞表面上）、其四級結構 (單體或多聚體）可變化。習知抗體由於存在鉸鏈區而自然 設計用於充當接附構築體，其中在Fab片段尖端之兩個抗 原結合位點的取向可廣泛變化且因此適應抗原之分子特徵 及其環境。相反，連接於抗體或其他蛋白質骨架（例如包 含無絞鏈區之抗體的蛋白質骨架）之dAb可能直接或間接具 有較小之結構靈活性。 瞭解dAb之溶解狀態及結合模式亦有幫助。已累積有證 據§登明活體外dAb在溶解狀態中可主要以單體、同源二聚 體或多I體形式存在（Reiter等人，J Mol Biol (1999) 290: 685-698 ’ Ewert等人，J Mol Biol (2003) 325: 531-553 ; Jespers等人 ’ J Mol Biol (2004) 337: 893-903 ; Jespers等 人，Nat Biotechnol (2004) 22: 1161-1165 ; Martin等人， Protein Eng. (1997) 10: 607-614; Sepulvada等人，J Mol
Biol (2003) 333: 355-365)。此使吾人清楚想起在活體内觀 測到之Ig結構域之多聚化事件’該等Ig結構域諸如本壤氏 蛋白質（Bence-Jones protein，其為免疫球蛋白輕鍵之二聚 體（Epp等人 ’ Biochemistry (1975) 14: 4943-4952 ; Huan等 人，Biochemistry (1994) 33: 14848-14857 ; Huang等人，
Mol immunol (1997) 34: 129 1 -1 301))及澱粉狀蛋白纖維 (James等人，J Mol Biol· (2007) 367: 603-8) 〇 舉例而言，可能需要將傾向於在溶解狀態中二聚之結構 域抗體連接於Fc部分C端，優先於輕鏈C端或受體_Fc融合 物N端，因為連接於Fc之C端將允許該等dAb在本發明抗原 148213.doc •46· 201106963 結合蛋白之環境下二聚。 本發明之抗原結合蛋白可包含對單一抗原具有特異性之 抗原結合位點，或可具有對兩種或兩種以上抗原，或對單 一抗原上之兩個或兩個以上抗原決定基具有特異性之抗原 結合位點，或可存在各自對相同或不同抗原上之不同抗原 決定基具有特異性之抗原結合位點。 詳言之，本發明抗原結合蛋白可適用於治療與TNFa及 VEGF相關聯之疾病，例如眼部疾病，例如糖尿病性黃斑 # 水腫、囊樣黃斑水腫、葡萄膜炎、AMD(年齡相關黃斑變 性）、脈絡膜新生血管性AMD、地圖狀萎縮、糖尿病性視 網膜病變、視網膜靜脈阻塞（BRVO及/或CRVO)及其他黃斑 病及眼血管病變。 可組合投與用於治療任一上述眼部疾病（尤其為AMD)之 特定TNFa拮抗劑及VEGF拮抗劑如下。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為阿達木單抗且VEGF拮抗 I 劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為阿達木 單抗且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為阿達木單抗且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中， TNFa拮抗劑為阿達木單抗且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在 一實施例中，TNFa拮抗劑為阿達木單抗且VEGF拮抗劑為 CTO 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為阿達木單抗且VEGF 拮抗劑為DOM15-10-11。在一實施例中，TNFot拮抗劑為阿 達木單抗且VEGF拮抗劑為DOM1 5-26-593。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為阿達木單抗且VEGF拮抗劑為PRS- 148213.doc -47- 201106963 050。在一實施例中，TNFtx拮抗劑為阿達木單抗且VEGF 拮抗劑為PRS-05 1。在一實施例中，TNFcx拮抗劑為阿達木 單抗且VEGF拮抗劑為MP0112。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為阿達木單抗且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為阿達木單抗且VEGF拮抗劑為 ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗劑為阿達木單抗且 VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 阿達木單抗且VEGF拮抗劑為ΕΡΙ-00 10。在一實施例中， TNFa#抗劑為阿達木單抗且VEGF才吉抗劑為DMS 1571 。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗 劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔 單抗且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中， TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在 一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為 CTO 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF 拮抗劑為DOM1 5-1 0-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為英 利昔單抗且VEGF拮抗劑為DOM1 5-26-593。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF 拮抗劑為PRS-05 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔 單抗且VEGF拮抗劑為MP0112。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為 148213.doc -48- 201106963 ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗劑為英利昔單抗且 VEGF拮抗劑為EPI-0030 〇在一實施例中，TNFa拮抗劑為 英利昔單抗且VEGF拮抗劑為EPI-00 1 0。在一實施例中， TNFa拮抗劑為英利昔單抗且VEGF拮抗劑為DMS 1 57 1。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑 為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為依那西普 且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑 為依那西普且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中，TNFa拮 • 抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為CTO 1。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為 DOM1 5-10-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為依那西普且 VEGF拮抗劑為DOM1 5-26-5 93。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為依那西普且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例中， TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為PRS-051。在一 ^ 實施例中，TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為 ΜΡ0 112。在一實施例中，TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF 拮抗劑為CT-322。在一實施例中，TNFa拮抗劑為依那西 普且VEGF拮抗劑為ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為依那西普且VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為EPI-0010。 在一實施例中，TNFct拮抗劑為依那西普且VEGF拮抗劑為 DMS1571。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為ESB A105且VEGF拮抗劑 148213.doc -49- 201106963 為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ESBA105 且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑 為ESBA105且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為ESB A105且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為ESBA105且VEGF拮抗劑為CT01。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為ESB A105且VEGF拮抗劑為 DOM15-1 0-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ESB A105且 VEGF拮抗劑為DOM1 5-26-5 93。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為ESBA105且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例中， TNFa拮抗劑為ESBA105且VEGF拮抗劑為PRS-051。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為ESBA105且VEGF拮抗劑為 MP0112。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ESB A105且VEGF 拮抗劑為CT-322。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 ESBA105且VEGF拮抗劑為ESBA903 。在一實施例中， TNFa拮抗劑為ESBA105且VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為ESBA105且VEGF拮抗劑為EPI-0010。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ESBA105且VEGF拮 抗劑為DMS 1571。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-19且VEGF拮抗 劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1 -5-19且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為PEP1-5-19且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中， TNFa拮抗劑為PEP 1-5-19且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-1 9且VEGF拮抗劑為 148213.doc -50- 201106963 CT01。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-19且VEGF 拮抗劑為DOM15-10-11 °在一實施例中，TNFa拮抗劑為 PEP1-5-19且VEGF拮抗劑為DOM15-26-593。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為PEPi_5-19且VEGF拮抗劑為PRS-050。 在一實施例中，TNFc^抗劑為PEPl-5-19且VEGF拮抗劑為
PRS-051。在一實施例中’ TNFa拮抗劑為PEP1-5-19且 VEGF拮抗劑為MP〇1 U。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 PEP1-5-19且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例中， TNFa拮抗劑為PEP卜5-19且VEGF拮抗劑為ESBA903。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-19且VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例中’ TNFa拮抗劑為PEP1-5-19且VEGF拮 抗劑為EPI-0010。在—實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-19且VEGF拮抗劑為01^81 5?1。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-490且VEGF拮抗 劑為貝伐珠單抗。在—實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-490且VEGF括抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，™Fa拮 抗劑為PEP1-5-490且VEGF拮抗劑為咖。在一實施例中’ 議枯抗劑為㈣抗劑為阿柏西普。在 -實施例中，TNF4 “為ΡΕΡ1·5·49()且VEGF拮抗劑為 —士，TNFa拮抗劑為 PEP卜 5-490 且 VEGF CT01。在一實施例中 A““ i η 1 1。在一實施例中’ TNFa拮抗劑為 结抗劑為DOM15-l(Ml ^ PEP1-5-49〇且 VEGF拮抗 _ 為 D〇M15_26-593。在一實施例 中，TNFa括抗劑為PEPH490且VEGF括抗劑為PRS-[)50。在z實施例中，抗劑為ΡΕΡ1·5·490且VEGF拮 148213.doc -51- 201106963 抗劑為PRS-051。在一實施例中，TNFα拮抗劑為PEPl-5-490且VEGF拮抗劑為MP0112。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為PEP1-5-490且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-490且VEGF拮抗劑為 ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-490且 VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 PEPl-5-490且VEGF拮抗劑為EPI-0010。在一實施例中， TNFa拮抗劑為PEP 1-5-490且VEGF拮抗劑為DMS 1571。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-493且VEGF拮抗 劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-493且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為卩£卩1-5-493且¥£0?拮抗劑為以4。在一實施例中， TNFa拮抗劑為PEP 1-5-493且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在 一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-493且VEGF拮抗劑為 CT01。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-493且VEGF 拮抗劑為DOM15-10-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 PEP1-5-493 且 VEGF拮抗劑為 DOM15-26-593。在一實施例 中’ TNFa拮抗劑為ΡΕΡ1-5·493且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-493且VEGF拮 抗劑為PRS-051。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP1-5-493且VEGF拮抗劑為ΜΡ0112。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為PEP 1-5-493且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例 中’ TNFct拮抗劑為PEP 1-5-493且VEGF拮抗劑為 ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗劑為PEP 1-5-493且 148213.doc •52· 201106963 VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例中，TNFot拮抗劑為 PEP1-5-493且VEGF括抗劑為EPI-0010。在一實施例中， TNFcx拮抗劑為PEPl-5-493且VEGF拮抗劑為DMS1571。 在一實施例中，TNFot拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素 且VEGF拮抗劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且 VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ • ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在一實施 例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗 劑為CT01。在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2 之黏結素且VEGF拮抗劑為DOM 15-10-11。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑 為DOM15-26-593。在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例 ^ 中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑 為PRS-051。在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID ΝΟ·_ 2 之黏結素且VEGF拮抗劑為ΜΡΟ11 2。在一實施例中，TNFa 拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑為CT-3 22。在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結 素且VEGF拮抗劑為ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑為EPI-0030。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為SEQ ID NO: 2之黏結素且 VEGF拮抗劑為ΕΡΙ-00 10。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 1482I3.doc -53- 201106963 SEQ ID NO: 2之黏結素且VEGF拮抗劑為DMS1571。 在一實施例中，TNFcx拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗 劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木 單抗且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中， TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在 一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑為 CTO 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF 拮抗劑為DOM 15-10-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈 利木單抗且VEGF拮抗劑為DOM1 5-26-593。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑為PRS-050。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑 為PRS-05 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且 VEGF拮抗劑為MP0112。在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈 利木單抗且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例中，TNFa 拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑為ESBA903。在一實 施例中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF拮抗劑為EPI-0030 〇在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木單抗且VEGF 拮抗劑為EPI-0010。在一實施例中，TNFa拮抗劑為戈利木 單抗且VEGF拮抗劑為DMS 1571。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗 劑為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠 單抗且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中， 148213.doc -54- 201106963 TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在 一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為 CTO 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF 拮抗劑為DOM1 5-1 0-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞 妥珠單抗且VEGF拮抗劑為DOM15-26-593。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF 拮抗劑為PRS-05 1。在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠 單抗且VEGF拮抗劑為ΜΡ0 112。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為CT-322。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為 ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且 VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為EPI-0010。在一實施例中， TNFa拮抗劑為塞妥珠單抗且VEGF拮抗劑為DMS 1 57 1 〇 在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1且VEGF拮抗劑 為貝伐珠單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1 且VEGF拮抗劑為蘭尼單抗。在一實施例中，TNFct拮抗劑 為ALK-693 1且VEGF拮抗劑為r84。在一實施例中，TNFa 拮抗劑為ALK-693 1且VEGF拮抗劑為阿柏西普。在一實施 例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1且VEGF拮抗劑為CT01。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1且VEGF拮抗劑為 DOM1 5-10-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1 且VEGF拮抗劑為DOM 15-26-593。在一實施例中，TNFa拮 <··> 148213.doc -55- 201106963 抗劑為ALK-6931且VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例 中，TNFa拮抗劑為ALK-6931且VEGF拮抗劑為PRS-051。 在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-6931且VEGF拮抗劑為 MP0112。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1且 VEGF枯抗劑為CT-322。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 ALK-693 1且VEGF拮抗劑為ESBA903。在一實施例中， TNFa拮抗劑為ALK-693 1且VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一 實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-693 1且VEGF拮抗劑為EPI-0010。在一實施例中，TNFa拮抗劑為ALK-6931且VEGF拮 抗劑為DMS 1571。 在一實施例中’ TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 30之重 鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且VEGF拮抗劑為貝伐珠 單抗。在一實施例中’ TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 30 之重鏈及SEQ ID NO: 3 1之輕鏈的抗體且VEGF拮抗劑為蘭 尼單抗。在一實施例中，TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 3 0之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且VEGF拮抗劑為 r84。在一實施例中’ TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 30之 重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且veGF拮抗劑為阿柏 西普。在一實施例中，TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 30 之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且VEGF拮抗劑為 CT01。在一實施例中’ TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 30 之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且VEGF拮抗劑為 DOM15-10-11。在一實施例中，TNFa拮抗劑為包含SEQ ID NO: 30之重鍵及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且VEGF拮 148213.doc -56- 201106963 抗劑為DOMl 5-26-593。在一實施例中，TNFa拮抗劑為包 含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體且 VEGF拮抗劑為PRS-050。在一實施例中，TNFa拮抗劑為 包含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體 且VEGF拮抗劑為PRS-051。在一實施例中，TNFa拮抗劑 為包含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗 體且VEGF拮抗劑為ΜΡ0112。在一實施例中，TNFa拮抗劑 為包含SEQ ID NO: 3 0之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗 體且VEGF拮抗劑為CT-3 22。在一實施例中，TNFa拮抗劑 為包含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗 體且VEGF拮抗劑為ESBA903。在一實施例中，TNFa拮抗 劑為包含SEQ ID NO: 30之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的 抗體且VEGF拮抗劑為EPI-0030。在一實施例中，TNFa拮 抗劑為包含SEQ ID NO: 3 0之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈 的抗體且VEGF拮抗劑為EPI-0010。在一實施例中，TNFa 拮抗劑為包含SEQ ID NO: 3 0之重鏈及SEQ ID NO: 31之輕 鏈的抗體且VEGF拮抗劑為DMS 1 5 71。
以上組合之每一者皆亦可用於產生本發明之雙靶向分 子。本發明之雙靶向分子之特定及非限制性實例如下：Fc 有效之DMS4000(SEQ ID NO: 14及 SEQ ID NO: 12)、Fc失 效之 DMS4000(SEQ ID NO· 47 及 SEQ ID NO· 12)、 DMS403 1(SEQ ID NO: 16及 SEQ ID NO: 12)、DOM-PEP 内 嵌融合物（SEQ ID NO: 62)、PEP-DOM内嵌融合物（SEQ ID NO: 64)、具有選自 SEQ ID NO: 69-72 之重鏈及 SEQ ID 148213.doc -57- 201106963 NO: 12之輕鏈的雙靶向分子、及彼等列於SED id NO: 72_ 140中者。 本發明k原結合蛋白可藉由用包含本發明抗原結合蛋白 之編碼序列的表現載體轉染宿主細胞產生。藉由置放抗原 結合蛋白之此等編碼序列與能夠控制宿主細胞中之複製及 表現、及/或自宿主細胞之分泌的習知調節控制序列操作 關聯來產生表現載體或重組質體。調節序列包括啟動子序 歹U例如CMV啟動子）及可源自其他已知抗體之信號序列。 類似地’可產生具有編碼互補抗原結合蛋白輕鏈或重鏈之 DNA序列的第二表現載體。在某些實施例中，除所關注之 編碼序列及可選擇標記範圍以外，此第二表現載體與第一 表現載體一致，如此以儘可能地確保各多肽鏈功能上表 現。或者，抗原結合蛋白之重鏈及輕鏈編碼序列可存在於 單一載體上，例如在同一載體中之兩個表現卡匣中。 經由習知技術，用第一載體與第二載體來共轉染所選宿 主細胞（或僅經由單一載體轉染），以產生包含重組或合成 輕鏈及重鏈之本發明之經轉染宿主細胞。接著經由習知技 術培養經轉染細胞，以產生本發明之經工程改造之抗原結 合蛋白。藉由諸如ELISA或RIA之適當分析法，自培養物 中4檢包括重組重鏈及/或輕鏈兩者締合之抗原結合蛋 白。類似習知技術可用於構築其他抗原結合蛋白。 熟習此項技術者可選擇適用於本發明方法及組合物構築 中所採用之選殖及次選殖步驟的載體。舉例而言，可使用 習知pUC系列之選殖載體，一種載體pUcl9可自供應機構 148213.doc •58· 201106963 (諸如 Amersham(BUckinghamshire , United Kingd〇m)或 Pharmacia(Uppsala，Sweden))購得。另外能夠易於複 製、具有多個選殖位點及可選擇基因（例如抗生素抗性）且 易於操作之任何載體可用於選殖。因此，選殖載體之選擇 不為本發明中之限制因素。 表現载體之特徵亦可為適於擴增異源DNA序列之表現的 基因，例如哺乳動物二氫葉酸還原酶基因（DHFR)。其他 載體序列包括諸如來自牛生長激素（BGH)之聚A信號序列 及β球蛋白啟動子序列（pgl〇pr〇)。適用於本文中之表現載 體可經由熟習此項技術者熟知之技術來合成。 此等载體之組份（例如複製子、選擇基因、強化子啟 動亍、信號序列及其類似物）可自商業或天然來源獲得， 或纹由已知用於指導在所選宿主中使重組DNA之產物表現 及/或分泌的程序來合成。亦可選擇其他適當表現載體來 達成此目的，該等表現載體之許多類型為用於哺乳動物、 、、’田菌昆**、酵母及真菌表現之技術中所知。 本發明亦涵蓋一種細胞株，其用含有本發明抗原結合蛋 白之編碼序列之重組質體轉染。適用於此等選殖載體之選 殖及其他操作之宿主細胞亦為習知的。然而，纟自大腸桿 菌之各種®株的細胞可用於選瘦載體之複製及構築本發明 抗原結合蛋白中之其他步驟。 、I於表現本發明抗原結合蛋白之宿主細胞或細胞株包括 甫乳動物細胞（諸如NS〇、Sp2/0、CHO(例如DG44)、 COS HEK)、纖維母細胞（例如3丁3)及骨髓瘤細胞，舉例 148213.doc -59· 201106963 而。，本發明抗原結合蛋白可在CH〇或骨髓瘤細胞中表 現。可使用人類細胞，因此使分子能夠經人類糖基化型態 修飾。或者，可使用其他真核細胞株。適合哺乳動物宿主 細胞之選擇及轉型、培養、擴增、筛檢及產物產生及純化 之方法為此項技術中已知。參見例如上文引用之Sambr00k 等人。 可5登貫細菌細胞適用作適於重組Fab表現或本發明之其 他實施例的宿主細胞（參見例如Pliickthun，A.，Immun〇1
Rev· (1992) 13 0: 151-188)。然而，由於在細菌細胞中表現 之蛋白質傾向於呈未摺疊或不適當摺疊形式或呈非糖基化 形式，所以需要針對抗原結合能力之保留’篩檢在細菌細 胞中產生之任何重組Fab。若經由細菌細胞表現之分子以 適當摺疊形式產生’則該細菌細胞將為所需宿主，或在替 代實施例中，分子可在細菌宿主令表現且隨後再次摺疊。 舉例而言，在生物領域中熟知用於表現之大腸桿菌之各種 菌株作為宿主細胞。在此方法中亦可採用枯草桿菌（B. subtilis)、鏈黴菌（Streptomyces)、其他桿菌及其類似物之 各種菌株。 需要時’熟習此項技術者已知之酵母細胞菌株以及昆蟲 細胞（例如果蠅（Drosophila)及鱗翅目昆蟲（Lepid〇ptera))及 病毒表現系統亦可用作宿主細胞。參見例如Miner等人，
Genetic Engineering (1986) 8: 277-298, Plenum Press及其 中所引用之參考文獻。 可構築載體之一般方法、產生本發明宿主細胞所需之轉 148213.doc • 60 - 201106963 染方法、及自此宿主細胞產生本發明抗原結合蛋白所需 培養方法皆可為習知技術。通常，本發明之培養方法為通 常藉由在懸浮液中無血清下培養細胞之無血清培養方法^ 同樣，本發明之抗原結合蛋白一旦產纟，則可根據此項技 術之標準程序，包括硫酸銨沈澱、親和管柱、管柱層析 法、凝膠電泳法及其類似方法，自細胞培養内含物純化。 此等技術在此項技術之技能内且不限制本發明。舉例而 言，WO 99/58679及W〇 96/16990中描述改變抗體之掣 備。 义
表現抗原結合蛋白之又一方法可利用在轉殖基因動物中 表現，諸如美國專利第4,873,316號中所述。此涉及一種使 用動物酪蛋白啟動子之表現系統，當該啟動子以轉殖基因 方式併入哺乳動物中時，其允許雌性動物在其乳汁中產生 所需重組蛋白質。 在本發明之另一態樣中，提供—種產生本發明抗體之方 法°亥方去包含培養經編碼本發明抗體之輕鏈及/或重鏈 載體轉型或轉染的宿主細胞，及回收由此產生之抗體的 步驟。 根據本發明，提供一種產生本發明抗原結合蛋白之方 法’該方法包含以下步驟： (cl)提供包含編碼抗原結合蛋白之聚核苷酸的載體； (b)用該載體轉型哺乳動物宿主細胞（例如CHO); (0在有助於抗原結合蛋白自該宿主細胞分泌至該培養 基中之條件下培養步驟（b)之宿主細胞； 148213.doc •61 · 201106963 (d)回收步驟（c)中分泌之抗原結合蛋白。 根據本發明，提供一種產生本發明抗原結合蛋白之方 法，該方法包含以下步驟： (a) k供編碼抗原結合蛋白重鍵之第一載體. (b) 提供編碼抗原結合蛋白輕鏈之第二載體； ⑷用該第一及第二載體轉型喷乳動物宿主細胞（例如 CHO); (d) 在有助於抗原結合蛋白自該宿主細胞分泌至該培養 基中之條件下培養步驟（c)之宿主細胞； (e) 回收步驟（d)中分泌之抗原結合蛋白。 抗原結合蛋白-纟由所需方法表5見，即接著#由使用適 當分析法檢驗其活體外活性。目前採用習知Elisa分析格 式來定性及定量評估抗原結合蛋白與其標靶之結合。另 外，在隨後進行人類臨床研究以不管通常清除機制而評估 抗原結合蛋白在體内之持久性之前，亦可使用其他活體外 分析法驗證中和功效。 治療劑量及持續時間與本發明分子在人體循環中之相對 持續時間有關，且可由熟習此項技術者視所治療病狀及患 者之一般健康狀況而調整。預計可能需要在長時期（例如 四至六個月）内重複給藥（例如一週一次或每兩週一次）來實 現最大治療功效。 本發明治療劑之投藥模式可為將藥劑遞送至主體眼部之 任何適當途徑。經由被動（例如靜脈内或皮下）投與之全身 性投藥可足以遞送有效量之本發明抗原結合蛋白及醫藥組 148213.doc -62· 201106963 合物。本發明抗原結合蛋白及醫藥組合物亦可藉由局部施 用’例如滴眼劑或凝膠、玻璃體内注射、前房内或眼周投 藥，亦即藉由眼球後、眼球周、眼球筋膜下或結膜下注射 或藉由遞送至下、上或側直肌以鞏膜下方式投藥，更局部 地遞送至眼部。局部投藥之其他途徑可使本發明抗原結合 蛋白及醫藥組合物在較低劑量下更輕易地到達眼後段。已 描述在兔模型中局部施用可使抗體片段穿透至眼後部 (Wimams KA等人，（2005))。已描述玻璃體内注射抗體^ 段或完全單株抗體且AMD患者對產物蘭尼單抗及貝伐珠單 抗具有良好耐受性。 在一實施例中，TNF拮抗劑&VEGF拮抗劑均經玻璃體 内投與。在一實施例_，VEGF拮抗劑經玻璃體内投與且 TNl·拮抗劑、尤其ESBA1〇5經由除局部方式（例如亦為玻璃 體内方式或結膜下方式）以外之方式投與。在一實施例 中’ TNF拮抗劑經玻璃體内投與且vegf拮抗劑以局部方 式投與。 適用之目標為將抗原結合蛋白遞送至眼睛特定區域（諸 如眼表面）中，遞送至淚管（tear duct)或淚腺，或可存在眼 内遞送（例如遞送至眼睛前房或後房，諸如玻璃狀液），及 遞送至眼結構，諸如虹膜、睫狀體、淚腺。因此，本發明 另外提供一種將組合物直接遞送至眼睛之方法，其包含經 由選自眼内注射、局部遞送（例如滴眼劑）、眼周投藥及使 用緩釋調配物之方法向眼睛投與該組合物。 若抗原結合蛋白例如經由局部遞送（例如以滴眼劑形式） 148213.doc -63- 201106963 遞送至眼睛，則亦可適於連同眼穿透增強劑（例如癸酸鈉） 或連同黏度增強劑（例如羥丙基曱基纖維素（HPMC))一起遞 送。因此，例如對局部遞送至眼睛而言，本發明另外提供 包含（a)本發明抗原結合蛋白以及眼穿透增強劑及/或（e) 黏度增強劑之組合物。 本發明抗原結合蛋白及醫藥組合物之遞送亦可經由玻璃 體内植入物來進行。眼球後及眼球周注射可用專用23至26 規格之針來達成且其侵襲性小於玻璃體内注射。泰諾膜下 注射使組合物與鞏膜接觸較長時期，可有助於穿透至後 眼。已描述在兔模型中恰在結膜下方注射蛋白質且此使分 子更直接地跨越鞏膜擴散以達到眼後段。 亦可使用持續釋放藥物遞送系統，其使物質歷經較長時 間範圍釋放至眼中或眼周圍，從而可以較低頻率給藥。此 等系統包括可填充有或塗有治療組合物之微胞、凝膠、水 嘁膠、奈米粒子、微囊或植入物。此等遞送系統可藉由注 射或任一其他先前所述之侵襲性較小之途徑（亦即經由眼 周或鞏膜下途徑）遞送入眼睛之玻璃體。此等持續釋放系 統及局部遞送途徑之實例包括在鞏膜下投與或玻璃體内投 與靶向後視網膜及RPE層之基於奈米粒子之調配物的熱敏 性緩釋水凝膠（Janoira KG等人，（2007) ; Birch DG (2〇〇7))。 遞送系統可與局部投藥途徑進行多種其他組合且可為抗原 結合蛋白之組合物及本發明醫藥組合物所考慮。 在-特定實施例中’纟發明抗原結合蛋白藉由玻璃體内 注射經玻璃體内投與。在一特定實施例中，本發明抗原蛋 148213.doc -64· 201106963 广向構築體每“週、較佳每"週經玻璃體内 二。在-特定實施例中，抗原結合蛋白藉由結膜下注射 較實施例中，本發明抗原結合蛋白以局部方 式投與。在另一實施例中，本發明抗原結合蛋白經由持續 釋放樂物遞送系統投與。在__特定實施例中，本發明抗原 結合蛋白藉由靜脈内注射投與。在—特定實施例中本發 明抗原結合蛋白藉由皮下注射投與。
在本發明之一特定實施例中’抗原結合蛋白為 DM_0,或由SEQ ID N〇: 69、7〇 71或72之重鍵序列 ，SEQ ID N0: 12之輕鍵序列組成的抗原結合蛋白其將 每4-8週藉由玻璃體内注射投與。 本發明之冶療劑可製成含有有效量之本發明抗原結合蛋 白作為活性成份於醫藥學上可接受之載劑中的醫藥組合 物。在本發明之預防劑中，含有抗原結合蛋白之水性懸浮 =或溶液可在生理pH值下緩衝，呈即注射形式。非經腸投 樂之組合物將通常包含本發明抗原結合蛋白或其混合物溶 於醫藥學上可接受之載劑（例如水性載劑）之溶液。可採用 多種水性載劑，例如〇.9%鹽水、〇 3%甘胺酸及其類似物。 可使此等，谷液無菌且一般不含顆粒物質。此等溶液可經由 習知之熟知滅菌技術（例如過濾）進行滅菌。組合物可含有 模擬生理條件所需之醫藥學上可接受之辅助物質，諸如pH 值調節劑及緩衝劑等。本發明抗原結合蛋白在此醫藥調配 物中之濃度可廣泛變化，亦即自小於約〇 5重量％(通常為 或至少約1重量％)至多達15重量％或20重量％，且根據所選 148213.doc •65- 201106963 特定投藥模式，將主要基於流體體積、黏度等來選擇。 因此，用於肌肉内注射之本發明醫藥組合物可經製備以 含有1 mL無菌緩衝水，及介於約1 ng至約200 mg，例如約 50 ng至約30 mg或30 mg以上，或約5 mg至約25 mg之間的 本發明抗原結合蛋白。類似地，用於靜脈内輸注之本發明 醫藥組合物可經製備以含有約250 ml無菌林格氏液 (Ringer's solution)，及每毫升林格氏液約1 mg至約30 mg 或約5 mg至約25 mg之本發明抗原結合蛋白。製備可非經 腸投與之組合物之實際方法為熟知的或為熟習此項技術者 顯而易知’且更詳細地描述於例如Remington's Pharmaceutical Science,第 15版，Mack Publishing Company, Easton，Pennsylvania 中。關於製備可靜脈内投與之本發明抗原結合蛋白調配 物，參見 Lasmar U 及 Parkins D， 「The formulation of Biopharmaceutical products」，Pharma. Sci.Tech.today 5 第 129-137 頁，第 3卷（2000年 4 月 3 日）；Wang, W，「Instability， stabilisation and formulation of liquid protein pharmaceuticals」， Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188 I Stability of Protein
Pharmaceuticals Part A and B Ahern T.J.編，Manning M.C·，New York，NY: Plenum Press (1992) ; Akers，M.J.，「Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations」，J.Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300 ; Imamura，K等人，「Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the dried state」，J Pharm Sci 92 (2003) 266-274 ; Izutsu, Kkojima，S.，「Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying」，J 148213.doc -66- 201106963
Pharm. Pharmacol，54 (2002) 1033-1039 ; Johnson，R，「Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization」， J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922 ； Ha, E Wang W, Wang Y.j., 「Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability」，J. Pharm Sci，91，2252-2264(2002)，其全部内容以引用的方式併 入本文中且讀者可具體參考該等文獻。 在一實施例中，當本發明之治療劑呈醫藥製劑時，其以 單位劑型存在。熟習此項技術者易於確定適當治療有效劑 量。適於患者之劑量可根據患者體重來計算，舉例而言， 適合劑量可在0.00001至約20 mg/kg，例如0.0001至約20 mg/kg，例如0.1至20 mg/kg，例如1至20 mg/kg或例如1至 1 5 mg/kg，例如10至1 5 mg/kg之範圍内。為有效治療人類 中本發明中所用之病狀，本發明抗原結合蛋白之適合劑量 可在以下範圍内：0.0001至1000 mg，例如0.001至1000 mg，例如 0.01 至 500 mg，例如 500 mg，例如 0·1 至 100 mg ’ 或 0·1 至 80 mg ’ 或 〇.1 至 60 mg，或0.1至40 mg ’ 或例 如1至100 mg，或1至50 mg ’其可非經腸（例如皮下、靜脈 内或肌肉内）或局部投與。需要時，可在由醫師酌情所選 之適當時間間隔下重複此劑量。 本文所述之抗原結合蛋白可凍乾儲存且在使用之前於適 合載劑中復原。此技術已顯示對習知免疫球蛋白有效且可 使用此項技術已知之;東乾及復原技術。 此項技術中已知之若干方法可用於找出適用於本發明中 之抗原決定基結合域。 148213.doc •67· 201106963 術°°文庫」係指異源多肽或核酸之混合物。文庫由各 自「具有單-多肽或核酸序列之成員構成。就此方面而言， 文庫」與「譜系」同義。文庫成員間之序列差異導致文 庫中存在之多樣性。文庫可呈多肽或核酸之單純混合物之 形式，或可呈經核酸文庫轉型之有機體或細胞之形式，例 如細菌、病毒、動物或植物細胞及其類似物。在一實例 中，每一個別有機體或細胞僅含有一個或含有有限數目之 文庫成員。核酸宜併入表現載體中以使經由核酸編碼之多 肽表現。因此，在一態樣中，文庫可呈宿主有機體之群體 的七式各有機體含有表現載體之一或多個複本，表現載 體3有呈核酸形式之文庫單一成員，該成員可經表現以產 生其相應多肽成員。因此，宿主有機體之群體具有編碼較 多種多肽之大譜系的潛力。 通用構.」為對應於如Kabat(「Sequences of Proteins of Immunological Interest」，美國衛生及人類服務部）所定 義之抗體序列保守區或對應於如Chothia及Lesk，（1987) J. Mol. Biol· 196:910-917所定義之人類生殖系免疫球蛋白譜 系或結構的單一抗體構架序列。可能存在單一構架或一組 此等構架，已發現其儘管僅在高變區中有變化但允許衍生 出實際上任何結合特異性。 在一實施例中，使用演算法BLAST 2 Sequences，使用 預設參數來制定且確定如本文定義之胺基酸及核苷酸序列 比對及同源性、類似性或一致性（Tatusova，T. A.等人， FEMS Microbiol Lett，（1999) 174: 187-188)。 148213.doc •68· 201106963 當呈現系統（例如連接核酸之編碼功能 刀月b興由該核酸編碼 之狀或多肽之功能特徵的呈現系統）用於本文所述方 例如選擇dAb或其他抗原決定基結合域 法 Ί $有利地擴增 或增加編碼所選肽或多肽之核酸的複本數。 '* ^*|j
文所述之方法或其他適合方法進行額外輪之選擇或為製備 額外譜系（例如親和力成熟譜系）提供獲得足量核酸及/或肽 或多狀之有效方法。因此，在一些實施例中，選擇抗原決 定基結合域之方法包含使用呈現“（例如連接核酸之編 碼功能與由該核酸編碼之肽或多肽之功能特徵者，諸如噬 菌體呈現）且另外包含擴增或增加編碼所選肽或多肽之核 酸的複本數目。可使用任何適合方法擴增核酸，諸如藉由 嗤菌體擴增、細胞生長或聚合酶鏈反應。 在一貫例中，該等方法採用連接核酸之編碼功能與由該 核酸編碼之多肽之物理、化學及/或功能特徵的呈現系 統。此類呈現系統可包含複數個可複製遺傳包，諸如細菌 嗟菌體或細胞（細菌）。呈現系統可包含文庫，諸如細菌噬 菌體呈現文庫。細菌噬菌體呈現為呈現系統之一實例。 已描述許多適合細菌噬菌體呈現系統（例如單價呈現及 多價呈現系統）。（參見例如Griffiths等人，美國專利第 6,555,313 B1號（以引用的方式併入本文中）；j〇hnson等 人’美國專利第5,733,743號（以引用的方式併入本文中）； ]\4(^^£61^等人，美國專利第5,969，108號（以引用的方式併 入本文_ ) ; Mulligan-Kehoe，美國專利第5,702,892號（以 引用的方式併入本文中）；Winter, G.等人，Annu. Rev. 148213.doc -69- 201106963
Immunol. (1994) 12: 433-455 ; Soumillion，P.等人，Appl
Biochem. Biotechnol. (1994) 47(2-3): 175-189 ; Castagnoli L.等人，Comb. Chem. High Throughput Screen (2001) 4(2): 121-133)。呈現於細菌嗤菌體呈現系統中之肽或多肽 可呈現於任何適合細菌噬菌體上，諸如絲狀噬菌體（例如 fd、Μ13、F1)、溶解性噬菌體（例如T4、T7、λ)或例如 RNA噬菌體（例如MS2)。 一般而言，產生或提供將肽或噬菌體多肽之譜系以與適 合噬菌體鞘蛋白（例如fd pill蛋白質）之融合蛋白質的形式 呈現的嗟菌體文庫。融合蛋白質可在噬菌體鞘蛋白尖端 (或必要時在内部位置）呈現肽或多肽。舉例而言，呈現之 肽或多肽可存在於pill之結構域1的胺基端位置β (ρΙΠ之結 構域1亦稱為N1)。呈現之多肽可直接融合於pIII(例如pIII 之結構域1的N端）’或使用連接子融合於ρΙΠ。必要時，融 合物可另外包含標籤（例如myc抗原決定基、標籤）。可 使用諸如以下之任何適合方法，產生包含以與嗟菌體鞘蛋 白之融合蛋白質形式呈現的肽或多肽之譜系的文庫：將編 碼所呈現之肽或多肽之噬菌體載體或噬菌粒載體引入適合 伯主細菌中，且培養所得細菌以產生噬菌體（例如必要時 使用適合輔助噬菌體或補償質體可使用任何適合方 法，諸如沈澱及離心，自培養物中回收噬菌體文庫。 呈現系統可包含具有任何所需量之多樣性的肽或多肽之 譜系。舉例而言，譜系可含有胺基酸序列對應於由有機 體、有機體群、所需組織或所需細胞類型表現之天然存在 148213.doc -70· 201106963 之多月太的月太或客壯，斗， 夕狀或可含有具有隨機或隨機化胺基酸序 列线或多肽。必要時，多狀可共有共同核心或骨架。舉 例而言m文庫中之所有多肽皆可基於選自以下之骨 架.蛋白質A、茶白暂T re ^ 蛋白貝L、蛋白質G、纖維結合蛋白結構 f抗運載蛋白、CTLA4、所需酶⑼如聚合酶、纖維素 酶）或來自免疫球蛋白超家族之多肽，諸如抗體或抗體 片段（例如抗體可變域）。此類譜系或文庫中之乡肽可包含
隨機«機化胺基酸序列界定區及共同胺基酸序列區。在 某些實施例中’譜系中之所有或實質上所有多肽均為所需 類型’諸如所需酶(例如聚合酶)或抗體之所需抗原結合片 (人類VH或人類Vl)。在一些實施例甲，多肽呈現系 統包含各多肽包含抗體可變域之多肽的譜系。舉例而言， 譜系中之每-多肽皆可含有VH、VL或Fv(例如單鏈Fv)。 Γ使用任何適合方法，將胺基酸序列多樣性引入肽或多 2或骨架之任何所需區域。舉例而言，可藉由使用任何適 合突變誘發方法（例如低保真度PCR、募核苷酸介導之突變 誘發或定點突變誘發、使用NNK密碼子之多樣化）或任何 其他適合方法製備編碼多樣化多肽之核酸文庫，將胺基酸 序列多樣性引入標靶區，諸如抗體可變域或疏水域之互補 決定區。必要時，可隨機選擇欲多樣化之多肽區。組成譜 系之多肽的尺寸主要取決於選擇情況，且多肽尺寸無需相 同。譜系中之多肽可具有至少三級結構（亦即形成至少一 個結構域）。 選擇/分離/回收 148213.doc -71 - 201106963 可使用任饤適合方法，自譜系或文庫（例如在呈現系統 中）選擇、分離及/或回收抗原決定基結合域或結構域群 體。舉例而言，基於可選特徵（例如物理特徵、化學特 徵、功能特徵）選擇或分離結構域。適合可選功能特徵包 括譜系中之肽或多肽之生物活性，例如結合於通用配位體 (例如超級抗原）、結合於標靶配位體（例如抗原、抗原決定 基、受質）、結合於抗體（例如經由肽或多肽上表現之抗原 決疋基），及催化活性（參見例如T〇miinson等人、 99/20749 ； WO 01/57065 ； WO 99/58655)= 在一些實施例中，自實質上所有結構域分享共同可選特 徵之肽或多肽之文庫或譜系選擇及/或分離蛋白酶抗性肽 或多肽。舉例而言，結構域可選自實質上所有結構域皆結 合共同通用配位體、結合共同標靶配位體、結合共同抗體 (或被共同抗體結合）或具有共同催化活性之文庫或譜系。 此類型選擇尤其適用於製備基於具有所需生物活性之親本 肽或多肽之結構域的譜系，例如當進行免疫球蛋白單可變 域之親和力成熟時。 基於結合於共同通用配位體之選擇可產生含有所有或實 質上所有作為起始文庫或譜系之組份之結構域的結構域集 合或群體。舉例而言，可藉由淘選或使用適合親和力基 質，選擇、分離及/或回收結合標靶配位體或通用配位體 之結構域’諸如蛋白質A、UfL或抗體。藉由添加配 位體（例如通用配位體、標靶配位體）溶液至適合容器（例如 官、皮氏培養皿（petri dish))中且使配位體沈積或塗佈至容 148213.doc -72· 201106963 實現淘選。過量配位體可洗掉，.且可添加結構域 Z中，且將容器維持在適於肽或多肽結合固定配位體 ’、下。未結合結構域可洗掉，且可使用任何適合方法 *如到擦或例如降低pH值）回收結合結構域。 適合配位體親和性基質一般含有配位體共價或非共價附 矣之固體切物或珠粒（例如it脂糖）。可使用分批法、管 柱法或任何其他適合方法，在適於結構域結合於基質上^ 配位體的條件下，使親和性基質與肽或多肽(例如已與蛋 白扭一起培育之譜系）組合。未結合親和性基質之結構域 可洗掉，且可使用任何適合方法溶離且回收結合結構域， 诸如用較低PH值緩衝液、用輕度變性劑（例如尿素）或用競 爭結合於該配位體之肽或結構域溶離。在一實例中，生物 素標記之標乾配位體與譜系在適於譜系中之結構域〜1 標乾配位體之條件下結合。使用固定抗生物素蛋白或= 蛋白鏈菌素（例如在珠粒上）回收結合結構域。 ▲在-些實施例t ’通用配位體或標㈣位體為抗體或其 =原結合片段。結合在文庫或譜系之肽或多肽中實質上保 守之肽或多肽結構特徵的抗體或抗原結合片段尤其適用作 通用配位體。適用作供分離、選擇及/或回收蛋白酶抗性 肽或多肽之配位體的抗體及抗原結合片段可為單株或多株 且可使用任何適合方法製備。 文庫/譜系 可使用任何適合方法製備或獲得編碼及/或含有抗原決 疋基結合域之文庫。文庫可經設計以編碼基於相關結構域 I48213.doc -73- 201106963 或骨架（例如選自文庫之結構域）之結構域或可使用本文所 述之方法選自另一文庫。舉例而言，可使用適合多肽呈現 系統製備富含結構域之文庫。 可使用任何適合方法，輕易地產生編碼所需類型結構域 之譜系的文庫。舉例而言，例如藉由使用易錯聚合酶鏈反 應（PCR)系統擴增核酸，經由化學突變誘發（〇6叫等人，/ 扪〇/. 鼠，269:9533 (丨叩4))，或使用細菌突變菌株（L〇w 等人，乂 出0/·，260:359 (1996))，可獲得編碼所需類 型多肽（例如免疫球蛋白可變域）之核酸序列且可製備各自 含有一或多個突變之核酸集合。 在其他實施例中，可耙向核酸之特定區域以獲得多樣 化。用於使所選位置突變之方法亦為此項技術中熟知，且 包括例如在使用或不使用PCR下使用錯配寡核苷酸或簡併 寡核苷酸。舉例而言，藉由將突變靶向抗原結合環來產生 合成抗體文庫。隨機或半隨機抗體H3及L3區附加至生殖 系免疫球蛋白V基因區段以產生具有未突變構架區之大文 庫（Hoogenboom 及 Winter (1992)，同上文；Nissim 等人 (1994)，同上文；Griffiths等人（1994)，同上文； 等人（1995)，同上文）。此等多樣化已擴展包括一些或所有 其他抗原結合環（Crameri等人，Nature Med. (1996) 2. 100，Riechmann等人，Bio/Technology (1995) 13· 475 .
Morphosys，W〇 97/08320 ’同上文）。在其他實施例中，可 經由例如採用第一 PCR產物作為「大引子」之兩步pcR策 略，靶向核酸之特定區域以獲得多樣化（參見例如Landt， 148213.doc -74· 201106963
〇.等人，Gene (199〇) 96: 125-128)。亦可例如經由 s〇E PCR實現靶向多樣化。（參見例如H〇rt〇 R 1 A•寻人 ’ Gene (1989) 77: 61-68)。 使得許多可能胺 °丁藉由改變指定多肽序列之編碼序列 基酸（例如所有20個胺基酸或其子集）可併於所選位置處， 來獲得該位置處之序列多樣性。使用IUPAC命名法，最通 用密碼子為nnκ ’其編碼所有胺基酸以及TAG終止密^
子。可使用NNK密碼子來引入所需多樣性。亦可使用達成 相同目的之其他密碼子，包括咖密碼子，Μ起額外線 止密碼子似及ΤΑΑ產生。此_向方法可允許探測標乾 區域中之完整序列空間。 一些文庫包含作為免疫球蛋白超家族之成員的結構域 (例如抗體或其部分)。舉例而言，文庫可包含具有已知主 鏈構形之結構域。（參見例如T〇mli_等人，w〇 99/20749) 〇 可在適合質體或載體中製備 文庫。如本文所用，載體係 才日用於將異源DNA引入供其表 _ 衣現及/或複製之細胞中的離 散元件。可使用任何適合菊 笨·體’包括質體（例如細菌質 體）、病毒或細菌噬菌體載髀 、 料體、人工染色體及游離型載 體。此等載體可用於單純選 4、殖及突變誘發，或表現載體可 用於驅動文庫表現。載體及 貝體通常含有一或多個選殖位 點（例如多酶切點接頭）、禮制 4起點及至少一個可選擇標記 基因。表現載體可另外含有躯 ’ 15動多肽轉錄及轉譯之元件， 諸如強化子元件、啟動子、M ^ 轉錄終止信號、信號序列及其 148213.doc 201106963 類似物此等元件可以可操作地連接於編碼多肽之經選殖 插入物的方式排列，使得在此類表現載體維持在適於表現 之條件下（例如在適合宿主細胞中）時，表現且產生多肽。 選殖及表現載體一般含有使载體能夠在一或多種所選宿 主、、田胞中複製之核酸序列。通常在選殖載體時，此序列為 使載體能夠獨立於宿主染色體DNA進行複製之序列且包括 複製起點或自主複製序列。熟知用於多種細菌、酵母及病 毒之此等序列。來自質體PBR322之複製起點適於大多數 革闌氏陰性細菌（Gram_negative bacteHa)，2微米質體起點 適於酵母’且各種病毒起點（例如sv4〇、腺病毒）適用於喷 礼動物細胞中之選殖載體…般而言，哺乳動物表現載體 不需要複製起點，除非此等表現載體用於能夠複製高含量 DNA之哺乳動物細胞中，諸如c〇s細胞。 選殖或表現載體可含有選擇基因，’亦稱為可選擇標記。 此等標記基因編碼在選擇性培養基中生長之經轉型宿主細 胞存活或生長所必需之蛋白質。因此，未經含有選擇基因 之載體轉型的宿主細胞將無法在培養基中存活。典型選擇 基因編碼賦予抗生素及其他毒素（例如安比西林 (ampicimn)、新黴素（ne〇mycin)、甲胺嗓呤伽地） 或四環素（tetracycline))抗性、彌補營養缺陷不足或供應生 長培養基中不可獲得之關鍵養分的蛋白質。 適合表現載體可含有許多組份，例如複製起點、可選擇 標記基因、-或多個表現控制元件，諸如轉錄控制元件 (例如啟動子、強化子、終止子）及/或—或多個轉譯信號、 1482J3.doc -76· 201106963 信號序列或前導序列及其類似物。表現控制元件及信號或 前導序列若存在，則可由載體或其他來源提供。舉例而 言’編碼抗體鏈之經選殖_核酸的轉錄及/或轉譯控制序列 可用以引導表現。 可提供啟動子用於所需宿主細胞中之表現。啟動子可為 組成性或誘導性的。舉例而言，可將啟動子可操作地連接 於編碼彳几體、抗體鍵或其部分之核酸，以便其引導核酸轉 錄，5可獲得多種適合原核（例如P-内醯胺酶及乳糖啟動子系 籲 統、鹼性磷酸酶、色胺酸（trp)啟動子系統、針對大腸桿菌 之lac、tac、T3、T7啟動子）及真核（例如猿猴病毒4〇早期 及晚期啟動子 '勞斯肉瘤病毒（R〇us sarcoma virus)長末端 重複序列啟動子、細胞巨大病毒啟動子、腺病毒晚期啟動 子、EG-la啟動子）宿主之啟動子。 此外，表現載體通常包含用於選擇運載載體之宿主細胞 的可選擇標記，且在可複製表現載體之情形下，包含複製 φ 起點。編碼賦予抗生素或藥物抗性之產物的基因為常用可 選擇標§己且可用於原核（例如β_内醯胺酶基因（安比西林抗 性）、針對四環素抗性之基因）及真核細胞（例如新黴素 (G418或遺傳黴素）、gpt(黴酚酸）、安比西林或潮黴素 (hygromycin)抗性基因）中。二氫葉酸還原酶標記基因允許 在多種宿主中用曱胺喋呤選擇。編碼宿主營養缺陷標記之 基因產物的基因（例如、¢/以3、价幻）常用作酵母中 之可選擇標記。亦涵蓋使用病毒（例如桿狀病毒）或噬菌體 載體及能夠整合至宿主細胞基因組中之載體，諸如反轉錄 148213.doc •77- 201106963 病毒載體。 適於原核細胞（例如細菌細胞，諸如大腸桿菌）或哺乳動 物細胞中表現之表現載體包括例如ρΕΤ載體UMWpET-12a、pET-36、pET-37、pET-39、pET-40，Novagen及其他 公司）、噬菌體載體（例如pCANTAB 5 E，Pharmacia)、 pRIT2T(蛋白質 A 融合載體，Pharmacia) 、pCDM8 、 pCDNAl. 1/amp ' pcDNA3.1、pRc/RSV、pEF-1 (Invitrogen, Carlsbad，CA)、pCMV-SCRIPT、pFB、pSG5、pXTl(Stratagene， La Jolla, CA)、pCDEF3(Goldman，L.A·等人， 27:1013-1015 (1996)) > pSVSPORT(GibcoBRL, Rockville, MD) ' pEF-Bos(Mizushima, S.等人，Nucleic Acids Res. (1990) 18: 5322) 及其類似物。可獲得適用於各種表現宿主（諸如原核細胞 (大腸桿菌）、昆蟲細胞（果繩施奈德S2細胞（Drosop/n'/a Schnieder S2 cell)、Sf9)、酵母（曱醇畢赤酵母（Ρ· methanolica)、甲醇酵母（P_ 、離酒酵母（《S. cereWhae)))及哺乳動物細胞（例如COS細胞）中之表現載 體。 載體之一些實例為能夠使對應於多肽文庫成員之核苷酸 序列表現的表現載體。因此，可經由表現多肽文庫成員之 單一純系的各別繁殖及表現來進行以通用配位體及/或標 靶配位體之選擇。如上所述，特定選擇呈現系統為細菌噬 菌體呈現。因此，可使用噬菌體或噬菌粒載體，例如載體 可為具有大腸桿菌複製起點（針對雙股複製）以及噬菌體複 製起點（為產生單股DNA)之噬菌粒載體。此等載體之操作 148213.doc -78- 201106963 及表現為此項技術中熟知（H〇〇genb〇〇m及Winter (1992)， 同上文；Nissim等人（1994)，同上文）。簡言之，載體可含 有賦予噬菌粒上選擇性之β_内醯胺酶基因，及位於表現卡 匣上游之lac啟動子’該表現卡匣可含有適合前導序列、多 選殖位點、一或多個肽標籤、一或多個tag終止密碼子及 噬菌體蛋白質pin。因此，使用大腸桿菌之各種抑制及非 抑制菌株且添加葡萄糖、異丙基-硫代_p_D_半乳糖苷 (IPTG)或辅助嗟菌體（諸如vcs M13)’可使載體能夠如質 籲 體般不表現即複製，僅產生大量多肽文庫成員，或產生噬 菌體，其中一些噬菌體在其表面上含有多肽_?111融合物之 至少一個複本。 抗體可變域可包含標靶配位體結合位點及/或通用配位 體結合位點。在某些實施例中，通用配位體結合位點為超 級抗原（諸如蛋白質A、蛋白質L或蛋白質G)之結合位點。 可變域可基於任何所需可變域，例如人類VH(例如Vh丨a、 _ VHlb、VH2、νΗ3、VH4、VH5、VH6)、人類 νλ(例如 νλΐ、 νλΐ:[、νλίπ、νλΐν、νλν、νλνι 或 νκ1)或人類 νκ(例如
Vk2、Vk3、Vk4、Vk5、Vk6、Vk7、Vk8、Vk9或 VkIO)。 另一類別之技術包括在人工隔室中選擇譜系，該等隔室 使基因與其基因產物相連。舉例而言，在W〇99/02671、 W00040712及 Tawfik及 Griffiths Nature Biotechnol (1998) 16(7): 652-6中描述一種選擇系統，其中可在由油包水乳劑 形成之微囊中選擇編碼所需基因產物之核酸。將編碼具有 所需活性之基因產物的遺傳元件劃入微囊中，且接著經轉 148213.doc •79- 201106963 錄及/或轉#，在微囊内產生其各別基因產物（rna或蛋白 質）酼後为選產生具有所需活性之基因產物的遺傳元 件此方法藉由、經由多帛方式偵測所需活性來選擇相關基 因產物。 表徵抗原決定基結合域 可經由熟習此項技術者所熟知且包括ELISA之方法來測 試結構域與其特異性抗原或抗原決^基之、结合。在一實例 中’使用單株噬菌體ELISA測試結合。 可根據任何適合程序，進行噬菌體EUSA :下文闡述一 例示性方案。 可經由ELISA，篩檢每一輪選擇下所產生之噬菌體群體 與所選抗原或抗原決定基之結合，以鑑別「多株」噬菌體 抗體接著可經由elISA，自此等群體篩檢來自單感染細 菌群落之噬菌體以鑑別r單株」噬菌體抗體。亦需要篩檢 了 /谷抗體片^又與抗原或抗原決定基之結合，且此亦可經由 ELIS A，使用針對對抗c端或N端標籤之試劑進行（參見例 如 Winter等人，Ann. Rev. Immunology (1994) 12: 433-55及 其中引用之參考文獻）。 所選噬菌體單株抗體之多樣性亦可藉由pcR產物之凝膠 電泳及探測（(Marks等人，1991，同上文；Nissim等人， B94，同上文）、（T〇mlins〇n 等人 ’（1992) j M〇1 Bi〇1 227’ 776)或藉由對載體dna測序或用諸如BSTNI常見切割 劑進行限制性消化分析來評估。 dAb之結構 148213.doc •80· 201106963 &dAb係選自例如使用如本文所述之嗟菌體呈現技術所 :擇之V基因譜系的情況下，此等可變域包含通用構架 區以便其可為如本文所定義之特定通用配位體所識別。 L用構木、通用配位體及其類似物之使用描述於 WO99/20749 中。 杜使用V基因瑨系之情況下，多肽序列之變化可位於可 變域之結構環内。任一可變域之多肽序列可藉由繼改組 I藉由突變而改變’以增強各可變域與其互補對之相互作 用。DNA改組為此項技術中已知且例如由Stemmer，1994, Nature 370: 389_391及美國專利第6 297,⑹號所教示兩 者均以引用的方式併入本文中。突變誘發之其他方法為熟 習此項技術者所熟知。 用於構築dAb之骨架 i.選擇主鏈構形 免疫球蛋白超家族之成員的多肽鏈均享有類似摺疊。舉 φ 例而言，儘管抗體之一級序列非常不同，但對序列及結晶 結構之比較顯示，與預期相反，抗體六個抗原結合環中有 五個（HI、H2、LI、L2、L3)採用有限數目之主鏈構形或 典型結構（Chothia及Lesk，J. Mol. Biol. (1987) 196. 901 ; Chothia等人，Nature (1989) 342: 877)。因此，對環長度 及關鍵殘基之分析能夠預測在大部分人類抗體中發現之 HI、H2、LI、L2及 L3之主鏈構形（chothia等人，j. Mol
Biol. (1992) 227: 799 ; Tomlinson等人，EMBO J. (1995) 14: 4628 ; Williams等人，Mol. Biol. (1996) 264: 220)。儘 148213.doc -81 - 201106963 官H3區在序列、長度及結構方面之多樣性多得多（歸因於d 區段之使用但其因環長度短而亦形成有限數目之主鍵 構形，該等主鏈構形視環及抗體構架中關鍵位置處之特定 殘基之長度及存在或殘基類型而定（Martin等人，】m〇i
Biol. (1996), 263: 800 ； Shiraif Λ ^ FEBS Letters (1996) 399: 1) 〇 dAb宜自結構域文庫（諸如Vh結構域文庫及/或&結構域 文庫)組裝。在-態樣中’設計其中某些環長度及關鍵殘 基經選擇以確保成員之主鏈構形為已知的結構域文庫。如 上文所論述，此等構形宜為天然存在之免疫球蛋白超家族 分子之真實構形，以使此等構形為非功能構形之可能性最 小。生殖系v基因區段充當一種適於構築抗體或τ細胞受 體文庫之基本構架；其他序列亦適用。發生變化之頻率 低，因此少量功能成員可具有不影響其功能之改變主鏈構 形。 典型結構理論亦適用於評估由配位體編碼之不同主鏈構 形之數目，預測基於配位體序列之主鏈構形，及選擇不影 響典型結構之殘基進行多樣化。已知在人類Vk域中，= 可採用四種典型結構之一，L2環具有單—典型結構且9〇^ 之人類VK域採用L3環之四種或五種典型結構之一 (T〇mlinson等人，（1995)，同上文）；因此，在單獨、結構 域中，不同典型結構可組合，產生多種不同主鏈構形。假 定νλ域編碼LI、L2及L3環之一系列不同典型結構且v及 Υλ域可與可編碼η1&η2環之若干典型結構的任何▽心结^籌 148213.doc -82- 201106963 :成對，則觀測到此五個環之典型結構組合的數目非常 二此意味主鏈構形多樣性之產生可能為產生廣泛結合特 異，所必需。然而，藉由構築基於單—已知之主鍵構形之 =文庫’已發現’與預期相反’無需主鏈構形多樣性來 產生革巴向貫質上所有抗原之足夠多樣性。甚至更意外地， =主鏈構形不必為—致結構單—天然存在之構形可用 作整個文庫之基礎…匕，在一特定態樣中，心具有單 一巳知之主鏈構形。 八所選單-主鏈構形在所論述之免疫球蛋白超家族類型之 分于中可為普通的。當觀察到大量天然存在之分子採用一 種構形時，則該構形為普通的。因此，在—態樣中，各別 考慮免疫球蛋白結構域之各結合環之不同主鍵構形的天然 存在’且接著選擇不同環之主鏈構形如所需組合之天然存 在=可變域。若無—者可用，則可選擇最接近之等效物。 可藉由選擇編碼所需主鏈構形之生殖系基因區段，來產生 不同環之主鏈構形的所需組合。在一實例中，所選生歹直系 基因£段常天然表現’且詳言之’其可為所有天然生殖系 基因區段中最常表現者。 在又计文庫時，可各別考慮六個抗原結合環之各自不同 主鍵構形的發生率。對於出、H2、L1、L2AL3，選擇由 20=與ι00%之間的天然存在之分子之抗原結合環所採用的 无疋構$。通常’觀測到之其發生率在35%以上（亦即介於 35%與loo/。之間）且理想地在以上或甚至以上。 因為大多數H3環不具有典型結構，所以較佳選擇在顯示典 148213.doc -83· 201106963 型結構之環中普通之主鏈構形。對各環而言，因此選擇在 天然譜系中最常觀測到之構形。在人類抗體中，各環之最 常見典型結構（CS)如下：Hl-CS 1 (表現譜系之79%)、Η2_ CS 3(46%)、VK之 L1-CS 2(39%)、L2-CS 1(100%)、\^之 L3-CS 1(36%)(計算假定 ka比率為 70:30，H〇〇d等人，c〇ld Spring Harbor Symp. Quant. Bi〇1 (1967) 48· 133)。對具有 典型結構之Η3環而言，自殘基94至殘基1〇1具有鹽橋之七 殘基 CDR3 長度（Kabat 等人，（1991) 〇/^〇如似 V /mm⑽，美國衛生及人類服務部）似乎最 常見。在EMBL資料文庫中存在至少16個具有形成此構形 所需之H3長度及關鍵殘基的人類抗體序列，且在該蛋白質 資料庫中存在至少兩種可用作抗體模型化之&礎的結晶結 構(2cgr及Uet)。最常表現之生殖系基因區段為％區段二 23(DP-47)、JH 區段 JH4b、V/c 區段 〇2/〇12(DpK9)及 k 區 段hi之典型結構組合。Vh區段DP45&Dp38亦適合。此等 區段可因此組合用作構築具有所需單一主鏈構形之文庫的 基礎。 或者’代替單獨選擇基於各結合環之不同主鍵構形之天 然存在的單-主鏈構形，使用主鏈構形之級合的天然存在 料選擇單—主鏈構形之基礎。在抗體情形下，舉例而 吕：可確定任兩個、三個、四個、五個或全部六個抗原結 合％之典型結構組合的天然存在。此處，所選構形在天缺 存在之抗體中可為普通的且可在天然譜系中最常觀測到。 因此’在人類抗體中，舉例而言，當考慮五個抗原結合環 148213.doc •84· 201106963 HI、H2、Ll、L2及L3之天然組合時，確定典型結構之最 常見組合且接著與H3環之最常見構形組合，作為選擇單一 主鏈構形之基礎。 典塑序列之多樣化 在選擇若干已知之主鏈構形或單一已知之主鏈構形後’ 可藉由改變分子之結合位點構築dAb ’以產生具有結構及/ 或功能多樣性之譜系。此意謂產生變體因，使得其結構及 /或功能具有足夠多樣性，以便其能夠提供一系列活性。 ® 通常藉由在一或多個位置處改變所選分子來產生所需多 樣性。欲改變之位置可隨機選擇或可經挑選。接著可藉由 隨機選擇’存在之胺基酸經任一天然或合成胺基酸或其類 似物置換，產生極大量變體’或藉由以一或多個確定子集 之胺基酸置換存在之胺基酸，產生較有限數目之變體，來 達成改變。 業已報導引入此多樣性之各種方法。易錯PCR(Hawkins φ 等人，J. Mol· Bio1. Π992) 226: 889)、化學突變誘發（Deng 等人，J. Biol. Chem· (1994) 269: 9533)或細菌突變菌株 (Low等人，j· Mol. Biol. (1996) 260: 359)可用於將隨機突 變引入編碼分子之基因中。使所選位置突變之方法亦為此 項技術中熟知且包括在使用或不使用PCR下使用錯配寡核 苷酸或簡併寡核苷酸。舉例而言，藉由將突變靶向抗原結 合環來產生若干合成抗體文庫。已隨機選擇人類破傷風類 毒素結合Fab之H3區來產生一系列新的結合特異性（Barbas 等人，Proc. Natl. Acad· Sci. USA (1992) 89: 4457)。已將 148213.doc -85 - 201106963 隨機或半隨機H3及L3區附加至生殖系V基因區段，以產生 具有未突變構架區之大文庫（Hoogenboom及Winter，J. Mol. Biol. (1992) 227: 381 ; Barbas等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89: 4457 ; Nissim等人，EMBO J. (1994) 13: 692 ; Griffiths等人，EMBO J. (1994) 13: 3245 ; De Kruif 等人’ J. Mol. Biol. (1995) 248: 97)。此多樣化已擴展包括 一些或所有其他抗原結合環（Crameri等人，Nature Med. (1996) 2: 100 ; Riechmann等人，Bio/Technology (1995) 13: 475 ; Morphosys，W097/08320，同上文）。 因為環隨機選擇可產生約1015個以上之單獨H3結構及類 似大量之其他五個環之變體，所以無法使用目前轉型技術 或甚至藉由使用無細胞系統來產生代表所有可能組合之文 庫。即使對一些使用諸如核糖體呈現之技術以超過6 x 1 〇12 種不同抗體構築之最大文庫而言，具有此設計之文庫中僅 代表一小部分潛在多樣性（He及Taussig，Nucleic Acid
Research 1997 25(24): 5132)。 在一實施例中，僅使直接涉及所需分子之功能產生或修 飾的殘基多樣化。對許多分子而言，功能為結合標靶且因 此多樣性應集中在標靶結合位點，同時避免改變對分子之 總體裝配或維持所選主鏈構形至關重要的殘基。 在一態樣中，使用僅改變抗原結合位點中之殘基的dAb 文庫。此等殘基在人類抗體譜系中變化極大，且已知在高 解析度抗體/抗原複合物中實現接觸。舉例而言，在L2 中，已知位置50及53在天然存在之抗體中不同，且觀測到 148213.doc -86· 201106963 與抗原接觸。相比之下，相較於該文庫中兩個殘基多樣 化，習知方法使如Kabat等人（1991，同上文）所定義之相應 互補決定區（CDR1)中的所有殘基多樣化，約七個殘基。此 表示在產生一系列抗原結合特異性所需之功能多樣性方面 顯著改良。 杜自然界中，抗體多樣性為兩個過程之結果：產生未處 理初級冶系之生殖系V、D及J基因區段的體細胞重組（所謂 生殖系及接合多樣性），及所得重排v基因之體細胞超突 鲁變。對人類抗體序列之分析顯示初級譜系中之多樣性集中 在抗原結合位點中心，而體細胞超突變使多樣性擴大至在 初級4系中尚度保守的抗原結合位點周邊之區域（參見
Tomlmson等人，J. Mol. Biol. (1996) 256: 813)。此互補性 可能已發展為搜尋序列空間之有效策略，且儘管表面上為 抗體所特有，但其可容易地施用於其他多肽譜系。改變之 殘基為形成標靶之結合位點的殘基子集。必要時在選擇 φ 期間之不同階段，使標靶結合位點中之殘基的不同（包括 重疊）子集多樣化。 在抗體譜系情形下，產生抗原結合位點中之一些而非全 部殘基多樣化的初始『未處理』譜系。如本文在此情形下 所用之術語「未處理」或「啞巴」係指無預定標靶之抗體 分子。此等分子類似於由尚未經受免疫多樣化之個體（如 同免疫系統尚未經由多種抗原刺激激發的胎兒及新生兒個 體之情形）之免疫球蛋白基因編碼者。接著針對—系列抗 原或抗原決定基選擇此譜系。若需要，可接著在初始譜系 148213.doc -87- 201106963 中多樣化區域外引入另外多樣性。可針對修飾功能、特異 性或親和力來選擇此成熟譜系。 應瞭解本文所狀序心括與本域叙序列實質上一 致之序列，例如與本文所述之序列至少9〇%_致例如至 少㈣。，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少 95%，或至少96% ’或至少97%或至少％%，或至少_ — 致之序列。 一對核酸而言’術語「實質-致性」_個核酸或其指 定序列在以適當核錢插人或缺失進行最佳比對及比較 時，至少約80%核普酸，通常至少約9〇%至95%，或至少 約⑽至99·5%核苦酸一致。或者，當該等區段在選擇性 雜交條件下與該股之互補序列雜 對⑽及胺基酸序列而言，術語「一致」指示當：個 核酸或胺基酸序列以適當插入或缺失進行最佳比對及比較 時兩者之間的-致性程度。或者，當dna區段在選擇性雜 又條件下與s亥股之互補序列雜交時存在實質—致性。 兩個序列之間的一致性百分比為該等序歹4共有之相同位 置數的函數（亦即一致性％=相同位置數/總位置數X丨〇〇)， 其考慮到為達成兩個序列之最佳比對而需要引入之間隙數 及各間隙長度。如下文非限制性實例中所述，可使用數學 廣算法比較序列且確定兩個序列之間的—致性百分比。 可使用GCG套裴軟體中之GAp程式，使用 NWSgapdna.CMP矩陣及間隙權數4〇、5〇、6〇、7〇或8〇及 長度權數1、2、3、4、5或6，確定兩個核序列之間的 148213.doc -88- 201106963
一致性百分比。亦可使用已併入ALIGN程式（2.0版）中之E
Meyers及 W. Miller之演算法（Comput. Appl· Biosci·，4:11. 17 (1988))，使用ΡΑΜΙ 20重量殘餘表、間隙長度罰分12及 間隙罰分4，確定兩個核苷酸或胺基酸序列之間的一致性 百分比。此外，可使用已併入GCG套裝軟體之GAP程式中 的 Needleman及 Wunsch(J_ Mol, Biol. 48:444-453 (1970))演 算法，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，及間隙權數 16、14、12、10、8、6或 4及長度權數4、5或 6，確定兩個胺基酸序列之間的一致性百分比。 舉例而言’本發明之多肽序列可與*SEQ m NO: 14編 碼之參考序列一致，亦即1 〇〇% —致’或相較於該參考序 列，其可包括多達某一整數個胺基酸變化，使得一致性％ 小於100。/。。此等變化係選自由至少一個胺基酸缺失、取 代（包括保守及非保守取代）或插入組成之群，且其中該等 變化可存在於參考多肽序列之胺基或羧基末端位置處或介 於彼等末端位置之間的任何位置處，個別散佈於參考序列 之胺基酸中或散佈在參考序列内一或多個鄰接基團中。對 於既定一致性％而言，藉由SEQ ID NO: 14編碼之多肽序列 中之胺基酸總數乘以各別一致性百分比之數字百分比（除 以100)且接著自SEq ID NO: 14編碼之多肽序列中之胺基 酸的該總數減去該乘積，確定胺基酸變化之數目，或： na<xa-(xa*y) > 其中na為胺基酸變化之數目，以為紐。id NO: 14編碼之 多肽序列中胺基酸總數，且y例如對於之一致性百分 148213.doc -89 - 201106963 比為0.70，對於80%為0.80，對於85%為0.85等，且其中xa 與y之任何非整數乘積均在自xa將其減去之前捨入至最接 近之整數。 實例 實例1 1.1 產生雙靶向抗 TNFa/抗 VEGF mAbdAb(DMS4000) 藉由將dAb融合於mAb(阿達木單抗）重鏈之C端來產生抗 TNFa/抗VEGF mAbdAb(稱為DMS4000)。為構築重鏈表現 卡匣，將編碼替代mAbdAb重鏈之載體DNA作為起始點。 使用限制酶Sail及Hindlll切除dAb部分。經由PCR(使用編 碼Sail及Hindlll末端之引子）擴增DOM 15-26-593(—種抗 VEGF dAb)，且接合至已使用相同限制位點切除dAb，產 生介於mAb與dAb之間的『STG』（絲胺酸、蘇胺酸、甘胺 酸）連接子之載體主鏈中。 選擇序列經驗證之純系（對輕鏈及重鏈而言分別為SEQ ID NO: 11及13)且進行大規模DNA製備，且使用短暫轉染技 術，藉由共轉染輕鏈與重鏈（SEQ ID NO: 12及14)，使抗 TNFa/抗VEGF mAbdAb在哺乳動物HEK293-6E細胞中表現。 抗TNFa/抗VEGF mAbdAb重鏈序列經進一步修飾以具有 抗VEGF dAb之密碼子優化序列，且將L235A及G237A突變 (Kabat編號）併入以使FC效應功能失效（SEQ ID NO 46及47 之Fc失效之DMS4000 mAbdAb重鍵）。 1.2雙靶向抗TNFa/抗VEGF mAbdAb(DMS4000)之純化及 SEC分析 148213.doc •90· 201106963 根據已確立之方案’使用蛋白質A親和層析法，自澄清 表現上清液中純化抗TNFot/抗VEGF mAbdAb(稱為 DMS4000)。經由分光光度測定法，自280 nm下吸光度之 量測結果來確定純化樣品之濃度。純化樣品之SDS-PAGE 分析（圖1 )顯示非還原樣品跑在約170 kDa處，而經還原樣 品顯示兩條跑在約25及約60 kDa處之色帶，分別對應輕鏈 及dAb融合重鏈。 關於尺寸排阻層析法（SEC)分析，將抗TNFa/抗VEGF mAbdAb施加於經預平衡且以PBS在0.5 ml/min下流動之 Superdex-200 10/30 HR管柱（附接於 Akta Express FPLC 系 統）上。SEC型態顯示單一物質呈對稱峰流動（圖2)。 1.3雙靶向抗TNFa/抗VEGF mAbdAb(DMS4000)之結合親 和力 VEGF受體結合分析法
該分析法量測VEGF〗65與VEGF R2(VEGF受體）之結合以 及測試分子阻斷此相互作用之能力。用VEGF受體（R&D
Systems’目錄號357-KD-050)(於0.2 Μ碳酸鈉-碳酸氫鈉中 最終濃度為0.5 pg/ml ’ pH值9.4)塗佈ELISA盤隔夜，用含 2% BSA之PBS洗滌且阻斷。預培Systems， 目錄號293-VE-050)及測試分子（用含〇 1〇/〇 bsa之0.05% Tween 20TM PBS稀釋）1小時，接著添加至培養盤中（VEGF 最終濃度為3 ng/ml)。使用生物素標記之抗VEGF抗體（最 終濃度為〇·5 pg/ml)(R&D Systems，目錄號BAF293)及過氧 化酶結合之抗生物素二次抗體（1:5000稀釋）（Stratech，目 148213.doc •91 - 201106963 錄號200-032-096)偵測VEGF與VEGF受體之結合，且在用 等體積之1 M HC1終止反應後，使用比色受質（Sure Blue TMB過氧化酶受質，KPL)在OD450下顯現。 MRC-5/TNFa分析法 使用人類肺纖維母細胞MRC-5細胞，測定測試分子阻止 人類TNFa結合於人類TNFR1且中和IL-8分泌之能力。將一 系列稀釋度之測試樣品與TNFa(500 pg /ml)(Peprotech) — 起培育1小時。接著用MRC-5細胞（ATCC，目錄號CCL-171)懸浮液（5χ103個細胞/孔）1:2稀釋《在培育隔夜之後， 將樣品1:10稀釋，且使用IL-8 ΑΒΙ 8200細胞偵測分析法 (FMAT)測定IL-8之釋放，其中使用抗IL-8(R&D systems， 目錄號208-IL)塗佈之聚苯乙烯珠、生物素標記之抗IL_ 8(R&D systems，目錄號BAF208)及抗生蛋白鏈菌素
Alexafluor 647(Molecular'Probes，目錄號S32357)測定 IL-8 濃度。分析示值讀數侷限於647 nm下之螢光發射且使用包 括分析法中所包括之IL-8標準曲線内推未知IL-8濃度。 如上所述測定對VEGF及TNFa之結合親和力。使用 GraphPad Prism分析法分析數據。使用S形劑量反應曲線及 使用最佳擬合模型擬合之數據來確定效能值。算出該 mAbdAb之抗VEGF效能（圖3)為57 pM，而對照抗VEGF mAb給出366 pM之EC5〇值。在抗TNFa生物分析法（圖4) 中，效能為10 pM ’而抗TNFa對照mAb產生22 pM之EC5〇。 總之，分析數據顯示該雙靶向mAbdAb有效對抗兩種抗原 (TNFa及 VEGF)。 148213.doc -92- 201106963
1.4 雙靶向抗TNFa/抗VEGF mAbdAb(DMS4000)之大氣PIC 在大鼠中，測試此分子之活體内藥物動力學性質。經靜 脈内向三隻大鼠投與抗TNFa/抗VEGF mAbdAb，且歷經1〇 天（240小時）之時期收集血清樣品。經由針對TNFa與VEGF 之ELISA評估給藥後各時間點之剩餘藥物濃度。結果展示 於圖5中。 PK參數證實該分子具有與抗TNFa mAb相當之活體内藥 物動力學性質。觀測到之VEGF組份之較短ί1/;2β不視為有 意義的，且可能為分析假像。進一步詳情展示於表3中。 表3 抗原 半衰期 (h) Cmax (pg/mL) AUC(O-inf) (hr*Vg/mL) 清除率 (mL/h/kg) 外推之AUC% TNFa 180.1 89.9 7286.3 0.7 35.8 VEGF 94.2 102.8 4747.1 1.1 14.3 1.5 產生替代抗 TNFa/抗 VEGF mAbdAb(DMS4031) 以類似於上文實例1.1中所述之方式，使用STG連接子將 相同抗TNFa mAb(阿達木單抗）在重鏈C端上連接於VEGF dAb，來構築替代抗TNFa/抗VEGF mAbdAb(稱為 DMS403 1)。在此情形中使用之抗VEGF dAb為ϋΟΜΒ-ΙΟ-ΐ 1 。 使用 短暫轉 染技術 ，藉 由共轉 染輕鏈 與重鏈 （SEQ ID NO: 12及16)，使該分子在哺乳動物HEK293-6E細胞中表 現。該分子經表現，得到表現量類似於實例1.2中所述量 之mAbdAb，然而在與實例1.3中所述相同之VEGF分析法 中測試效能時，發現在該分析法中VEGF結合於VEGF受體 之抑制程度不可偵測。 148213.doc -93- 201106963 實例2 雙靶向抗TNFa/抗VEGF mAbdAb之Biacore分析 測試mAbdAb進行BIAcore分析，以測定其結合於其相應 抗原之動力學締合及解離常數。分析在BIAcore™ 3 000儀 器上進行。儀器溫度設為25°C。HBS-EP緩衝液用作操作 缓衝液。在儀器之最高可能速率下收集實驗數據。根據製 造商說明書，使用標準胺偶聯化學，用蛋白質A塗佈研究 級CM5晶片上之一流槽，且同等處理第二流槽，但使用緩 衝液代替蛋白質A，以產生參考表面。接著使用塗有蛋白 質A之流槽捕捉mAbdAb。注射經一系列2倍連續稀釋之如 表2中詳述之抗原。一式兩份操作若干稀釋液。僅注射緩 衝液代替配位體，用於背景扣除。使用儀器軟體固有之動 力學Wizard以隨機順序來注射樣品。在各循環結束時藉由 注射10 mM甘胺酸（pH值1.5)使表面再生。使用 BI Aevaluation軟體4.1進行數據處理與動力學擬合。展示 一式兩份結果之平均值（來自同一操作）的數據展示於表4 中。DMS403 1所展示之多個值表示在各別時刻操作之兩個 實驗。值787 nM可能由於所分析配位體之濃度而過高估計 親和力。 表4 分子編號 抗原 Ka [1/Ms] Kd [1/s] KD[pM] 最兩濃度 (nM) 稀釋液號 DMS4000 TNFa 3.65E+05 4.16E-05 112 10 6 DMS4000 VEGF 9.19E+05 4.78E-04 520 2.5 5 實例3 148213.doc -94- 201106963 抗原結合蛋白之化學計量評估（使用BiacoreTM) 此實例為預示性的。其為進行可測試本發明抗原結合蛋 白之另一分析法提供指導。 經由一級胺偶聯，將抗人類IgG固定在CM5生物感測器 晶片上。抗原結合蛋白捕捉於此表面上，接著使單一濃度 之TNFa或VEGF經過，此濃度足以使結合表面飽和且觀測 到之結合信號達到完全R-max。接著使用既定公式計算化 學計量： 化學計量=Rmax * Mw(配位體）/Mw(分析物）* R(所固定 或捕捉之配位體） 在計算一種以上分析物同時結合之化學計量時，使不同 抗原以飽和抗原濃度依序經過且如上計算化學計量。該工 作可在25°(：下使用1«8-£?操作緩衝液在則&(：〇“ 3 000上進 行。 實例4 經由GS連接子融合於抗VEGFR2黏結素之CTLA4-Ig的設 計及構築（BPC1821) 構築編碼CTLA4-Ig之密碼子優化DNA序列（包括N端處 之Hindlll位點及C端處之BamHI位點以便於選殖）且選殖至 含有CT01黏結素之哺乳動物表現載體中。此使黏結素經由 GS連接子融合至CTLA4-Ig之C端上。所得抗原結合蛋白命 名為BPC1821。BPC1821之DNA及蛋白質序列分別以SEQ ID No. 26及 27給出。 使用 293fectin(Invitrogen，12347019)，將編碼 BPC1821 148213.doc -95- 201106963 之表現質體短暫轉染至HEK 293-6E細胞中。24小時後胰化 蛋白饋入物添加至細胞培養物中，且96小時後收穫上清 液。使用蛋白質A管柱純化BPC 1821，隨後在結合分析法 中進行測試。 實例5 VEGFR2及 B7-1 結合 ELISA(BPC1821) 用PBS中0.4 pg/ml重組人類VEGFR2 Fc嵌合體（R&D Systems，357-KD-050)塗佈96孔高結合培養盤且在4°C下 儲存隔夜。用含0.05%吐溫-20(Tween-20)之Tris-緩衝鹽水 洗滌培養盤兩次。添加200 gL阻斷溶液（含5°/。BSA之DPBS 缓衝液）至各孔中且在室溫下培育培養盤至少1小時。接著 再次進行洗滌步驟。用阻斷溶液橫跨培養盤依次稀釋 BPC 1821及兩種陰性對照抗體（Sigma 15 154及雙特異性 IGF1R-VEGFR2抗原結合構築體BPC1801)。培育1小時 後，洗滌培養盤。使用得自GE Healthcare之ECL生物素標 記模組對重組人類B7-1 Fc嵌合體（RnD Systems，140-BL· 100)進行生物素標記。用阻斷溶液稀釋生物素標記之B7-1 至1 pg/mL且添力σ 5 0 pL至各孔中。將培養盤培育1小時， 接著洗蘇。用阻斷溶液1:1 〇〇〇稀釋ExtrAvidin過氧化酶 (Sigma，E2886)且添加50 μί至各孔中。另一洗蘇步驟之 後，添加50 μΐ OPD SigmaFast受質溶液至各孔中，且15分 鐘後，藉由添加25 μ!^ 3M硫酸終止反應。使用鹼性終點 (basic endpoint)方案，使用VersaMax可調微定量盤式讀取 器（Molecular Devices)在490 nm下讀取吸光度。 148213.doc -96- 201106963 圖6展示ELISA之結果且證實雙特異性BPC 1821顯示結合 於VEGFR2與B7-1兩者。陰性對照抗體未顯示結合於 VEGFR2與 B7-1兩者。 實例6 經由GS連接子融合於抗VEGF dAb之CTLA4-Ig(BPC1825) 的設計及構築 含有CTLA4-Ig融合於抗VEGFR2黏結素之DNA質體用作 構築CTLA4-Ig-抗VEGF dAb雙特異體之基礎質體。藉由用 φ BamHI及EcoRI消化基礎質體以移除黏結素序列來製備載 體。用BamHI及EcoRI限制編碼抗VEGF dAb之DNA序列且 接合至载體中。所得CTLA4-Ig-抗VEGF dAb雙特異體命名 為BPC1825，其中dAb經由GS連接子融合至CTLA4-Ig之C 端上。BPC1825之DNA及蛋白質序列分別以SEQ ID NO: 28及29給出。 使用 293fectin(Invitrogen，12347019)，將編碼BPC1825 之表現質體短暫轉染至HEK 293-6E細胞中。24小時後胰化 ^ 蛋白饋入物添加至各細胞培養物中，且9 6小時後收穫上清 液。上清液用作結合分析法中之測試品。 實例7 VEGF及 B7-1 結合 ELISA(BPC1825) 用PBS中0_4 pg/ml人類VEGF165(自製材料）塗佈96孔高結 合培養盤且在4°C下儲存隔夜。用含0.05%吐溫_2〇之Tris-緩衝鹽水洗滌培養盤兩次。添加200 μΐ^阻斷溶液（含5% BSA之DPBS緩衝液）至各孔中且在室溫下培育培養盤至少1 148213.doc •97· 201106963 小時。接著再次進行洗滌步驟。用阻斷溶液橫跨培養盤依 次稀釋BPC1825及兩種陰性對照抗體（Sigma 15154及 BPC1824( 一 種 CTLA4-Ig -抗 IL-13 dAb 融合物））。培育 1 小 時後，洗務培養盤。使用得自GE Healthcare之ECL生物素 標記模組對重組人類B7-1 Fc嵌合體（RnD Systems，140-B1-100)進行生物素標記。用阻斷溶液稀釋生物素標記之 B7-1至1 pg/mL且添加50 μί至各孔中。將培養盤培育1小 時，接著洗滌。用阻斷溶液1:1000稀釋ExtrAvidin過氧化 酶（Sigma，E2886)且添加50 μι至各孔中。另一洗務步驟 之後，添加50 μΐ OPD SigmaFast受質溶液至各孔中，且15 分鐘後，藉由添加25 pL 3M硫酸終止反應。使用鹼性終點 方案，使用VersaMax可調微定量盤式讀取器（Molecular Devices)在490 nm下讀取吸光度。 圖7展示ELISA之結果且證實雙特異性BPC 1 825顯示結合 於VEGF與B7-1兩者。陰性對照抗體未顯示結合於VEGF與 B 7-1兩者。 實例8 經由STG或TVAAPPSTG連接子融合於VEGF dAb之TNFa 受體Fc融合物的設計及構築 構築編碼人類TNFa受體Fc融合物（依那西普）之密碼子優 化DNA序列且連同來自DMS4000構築體之DOM15-26-593 抗VEGF dAb—起選殖至哺乳動物表現載體中。
受體Fc側接額外序列以提供N端Campathl信號肽，且在C 端處提供 STG連接子或 TVAAPSTVAAPSTVAAPSTVAAPSTG 148213.doc -98- 201106963 連接子以融合於dAb。側接序列包括Agel限制位點及Sail 限制位點，以便於與dAb —起選殖至載體中。所得抗原結 合蛋白分別命名為EtanSTG593及EtanTV4593 。 EtanSTG593之DNA及蛋白質序列分別以SEQ ID No. 48及 49給出，且EtanTV4593之DNA及蛋白質序列分別以SEQ ID No. 50及 51給出。 實例9
EtanSTG593 及 EtanTV4593純化及 VEGF 及 TNFa結合分析 使用供轉染之 293Fectin，使 EtanSTG593 及 EtanTV4593 質體獨立地在HEK 293-6E細胞中表現。5天後’收穫 EtanSTG593 及 EtanTV4593，且經由 MAb Select Sure 親和 層析法純化，分別產生分批樣品M4004及M4005。經由尺 寸排阻層析法，在HiLoad Superdex S200 PG管柱（GE Healthcare)上進一步純化蛋白質，以降低聚集物含量。接 著蛋白質在F1緩衝液（0.1 Μ檸檬酸鹽（pH 6)、10% PEG300、5%蔗糖）或 ET緩衝液（10 mM Tris(pH 7.5)、4%甘 露醇、1%蔗糖）中調配。 在ProteOn XPR36機器（Bi〇RadTM)上進行結合分析。經 由一級胺偶聯，將蛋白質A固定在GLM晶片上。在該蛋白 質A表面上捕捉欲測試之構築體。使用256 nM、64 nM、 16 nM、4 nM及 1 nM之分析物 TNFa及 VEGF。0 nM TNFa 及VEGF(亦即僅有緩衝液）用作雙重參考結合曲線。
ProteOn之新穎6x6流槽設置允許同時捕捉多達6個構築 體且亦允許6種濃度之分析物流過所捕捉抗體，每個循環 148213.doc -99- 201106963 總計產生3 6次相互作用。 為使蛋白質A表面再生，使用50 mM NaOH，此移除所 捕捉之構築體且允許開始另一捕捉及結合循環。所得數據 擬合成ProteOn分析軟體固有之1:1模型。使用HBS-EP作為 操作緩衝液且在25°C下進行操作。 表5 : VEGF結合結果 構築體 ka kd KD(nM) M4004 FI 1.18E+05 1.01E-04 0.850 M4005 FI 3.18E+05 1.85E-05 0.058 M4004 ET 1.24E+05 7.84E-05 0.631 M4005 ET 4.54E+05 4.44E-05 0.098 表6 : TNFcx結合結果 構築體 ka kd KD(nM) M4004 FI 5.10E+06 1.22E-04 0.024 M4005 FI 4.95E+06 1.05E-04 0.021 M4004 ET 4.81E+06 1.15E-04 0.024 M4005 ET 4.87E+06 1.38E-04 0.028 實例10-預示性實例 10.1產生雙靶向抗原結合蛋白 可藉由在兩個先前鑑別之抗原結合蛋白（例如抗體片段 或完整單株抗體）之間引入物理連接來工程改造雙靶向抗 原結合構築體。該等物理連接可藉由編碼兩部分之間的遺 傳連接子序列而引入。連接子在長度及胺基酸組成方面之 特性可與雙特異性劑中該等部分之一或兩者的性質有關。 若有多個抗體或抗體片段用於產生雙特異體，則可採用經 驗方法來鑑別產生之最優組合。 針對確定標把之個別結合部分（諸如mAb、FAb、ScFv、 148213.doc -100- 201106963
dAb等）可使用多種經充分證明之活體内（例如：Hari〇w，E 及 Lane, D (1998) Antibodies, A Laboratory Manual Cold
Spring Harbor Laboratory Press)及活體外（例如：Barbas III，CF等人 ’ (2001) Phage Display，A Laboratory Manual,
Cold Spring Harbor Laboratory Press)技術單獨鑑別且發展 以提供具有已知效能、功效及生物物理學行為之性質的藥 劑。自此等個別藥劑可出現大量不同雙特異性機會，該等 機會僅受產生該等藥劑所需之分子工程改造的複雜度限 _ 制。所需分子構造通常由欲治療之病狀之性質決定。舉例 而言’對於慢性給藥’青睞提供固有長活體内半衰期之分 子格式。此最易藉由包括因救助再循環路徑而提供長終末 半农期的IgG抗體之Fc區來達成。因此基於mAb或其他Fc 之雙特異體為常用格式。 為發展基於mAb之雙乾向分子，一種潛在方法為將抗體 片段附加至完整IgG。在分子水準上，此可藉由在mAb鏈 φ 末端之一端上引入限制位點且插入抗體片段以使mAb鏈擴 充有另一功能單元來達成。可能需要改變介於功能單元之 間的連接子之特性以優化雙特異體之總體性質。若可獲得 瞄準同一標靶之多種不同抗體片段，則可使用該方法直接 彼此比較。具有該特性之雙特異體將通常在哺乳動物細胞 中表現，通常為HEK293細胞用於短暫表現，而cjiO細胞 用於穩疋細胞株及大規模製造。對於Tnf/VEGF雙特異體 而έ ’可以此方式將抗TNFa mAb連接於VEGF結合蛋白 (諸如抗體片段），或者可將抗VEGF mAb連接於抗TNFa結 148213.doc -101- 201106963 合蛋白。舉例而言，可以此方式利用之TNFa及VEGF拮抗 劑分別列於表1及2中。在此類練習中，若所有可能之藥劑 皆可用，則將測試所有潛在組合。 可藉由以大體上類似方式將結合抗原之兩個抗體片段或 其他蛋白質以基因融合物形式連接在一起來製備非基於 mAb之雙特異體。兩個單元之接合通常由長度及序列組成 可憑經驗確定之連接子來體現。此等分子由於其模組化單 鏈特性而使分子工程改造自由地進行且提供在除哺乳動物 細胞外之系統中表現的可能性。 圖8展示可根據本發明使用之可能雙靶向構築體之矩 陣。展示於圖8中之多個可能雙靶向構築體之序列以SEQ ID NO: 73-140給出。在此等特定雙靶向分子中， 『TVAAPS』連接子（SED ID NO: 4)用於連接組成部分， 其中例外為DVD-Ig中之重鏈、具有N端ScFv之DVD-Fab融 合物（SEQ ID NO: 116-118)及具有N端VH dAb之融合物 (SEQ ID NO:133、134)，其中連接子為『ASTKGPS』 (SEQ ID NO: 6)。SEQ ID NO: 73-140僅為例示性的且熟習 此項技術者將認識到其他連接子及構築體亦為可能的。 表7:用於圖8中之縮寫
IgG 免疫球蛋白G mAb 單株抗體 FAb 抗原結合片段 ScFv 單鏈可變片段 dAb 結構域抗體 VHH 駱駝科單結構域抗體 AJC 抗運載蛋白 Dpn Darpin Axn 黏結素 I48213.doc •102- 201106963 DVIM^ - 雙可變域IgG Fc IgGCH2-CH3 區 Rec 受體 PEG 聚乙二醇 10.2針對所需特徵測試雙靶向抗原結合蛋白 效能/親和力：適於進一步發展之雙特異性分子之基本 性質為對抗原之動力學結合親和力（通常由一種表面電漿 共振（SPR)形式、例如BiAcore來測定），基於抗原濃度及 可用性之先前知識，結合親和力又用以預測在既定治療劑 量之後的最小藥理學有效濃度。亦可預測親和力與中和效 月b有關’中和效能為通常經由測定介導特定藥理學作用之 化合物濃度的活體外分析法來評估的屬性。其可為受體/ 配位體結合事件之抑制或下游反應路徑之刺激/抑制。舉 例而&，TNF拮抗劑之效能可藉由其阻止由TNF調控之其 他細胞激素產生的程度來評估。其常見形式為江8對tnf 起反應而自MRC-5細胞之分泌減少。對於VEGF拮抗劑， 又盔外I化降低之程度為抗VEGF劑之抑制效能的直接結 果，而HUVEC細胞增殖減少為此效應之生物關聯。如同 動力學親和力—般’需要證明雙特異體對兩種抗原皆具有 標把效能。 生物物理學·因為已知習知mAb具有良好表現、生物物 i及藥物動力學型態’所以任何可發展雙特異性分子均 =證=具有類似特徵。將在過渡及穩定細胞培養期間測 疋、現罝且需要其處於與習知治療抗體相同之正 内°雙特異體將需要經過類似於mAb之純化製程（例^ 148213.doc 201106963 白質A捕捉法）及其他在產生臨床級物質中所需之下游卢里 (DSP)步驟。經純化蛋白質將需要證明具有純淨、對=之 尺寸排阻層析（SEC)型態、在生物相容緩衝液中在高（>25 mg/mi)蛋白質濃度下之穩定性及對多種應激條件（:度>、5 PH、凍融、脫醯胺條件等）之抗性。 又 藥物動力學（PK)/藥效學（PD): 雙特異性抗原結合蛋白之藥物動力學型態需要與標靶特 性及疾病背景-致。在大多數情況下，抗體由於血清半衰 期長而明確區分，且長血清半衰期通常為所需型態。通常 在齧齒動物與靈長類動物物種中所評估雙特異體之及終 末半衰期（tmP)應與針對相同標靶之抗體藥劑相當（假設兩 種活性在完全不同速率下代謝，則雙特異體將反映更快速 清除之物質）。雙特異性分子之p K分析法理想地在單一分 析法（橋接分析法）中量測兩種活性’藉此確信循環中之殘 餘藥物完整且具有完整雙功能性（舉例而言，將丁^^^固定在 培養盤上，添加含有藥物之樣品至培養盤中且藉由添加例 如生物素標記之V E G F (其自身由抗.生物素劑偵測）來分析存 在之雙特異體的量）。其他關於雙特異性化合物之活體内 分析包括在疾病模型中測試，但須存在此等模型且充分瞭 解又特異體與主體物質之交叉反應性。對於tnf/vegf雙 特異體而言，此可包括因血管滲漏增加而使發炎惡化之炎 症，或局部環境中巨噬細胞活化使疾病病狀惡化之血管增 殖病狀。在靈長類動物中，亦可由此等模型推斷其活性可 能影響劑量計算，等等之某些藥效學標記。 148213.doc 201106963 安全性：雙特異體格式之相對新穎性（即使組成部分及 標靶有前例)提出關於安全性及耐受性之問題。如同任何 生物藥物-般，需要整套毒理學測試，更著重於為與雙特 異性=子格式相關之任何假設憂慮。此可包括額外未曾預 料之藥理學或關於免疫原性增加之潛力。後—可能性可使 用電子雜交工具尋找可用力構築關於分子土匕方面之風險型 態的τ細胞抗原決定基來闡明。 儘管有些属性、尤其1>1<：可能隨不同分子格式而變化， 但仍可根據親和力、效能及生物物理學行為之許多相同準 則來判定非基於mAb之雙特異體格式（例如兩個抗體或抗 體樣片段之直接融合）。此等分子亦可在不同表現系統中 (例如在原核細胞中）產生，此舉本身可能產生尤其關於純 化、DSP及安全性研究之不同要求。 實例11 TNWVEGF dAb-dAb内喪融合物（ilf) 以下詳述一種構築供製備TNF-VEGF雙特異體之dAb_ dAb内嵌融合物的方法。然而，如上文實例^中所述可 使用相同方法產生任何其他基於抗體或抗體片段之具有類 似標把特異性的雙特異體。 藉由將兩個單結構域抗體（dAb)經基因融合至dAb_dAb内 嵌融合物（ILF)中來構築具有抑制丁1^1?〇1與Vegf兩者之潛力 的雙特異性分子。為構築此等分子，㈣㈣體呈現來分 離針對兩種標靶之經獨立選擇之dAb，且使用一系列適合 技術，經由數輪親和力成熟，來達成針對標靶之高親和力 148213.doc 201106963 及效能。選擇用於ILF之最終分子為DOM15-26-593(抗 VEGF)(SEQ ID NO: 1)及 ΡΕΡ1-5-19(抗 TNFo〇(SEQ ID NO: 35)。 DOM15-26-593為VH dAb，其對人類VEGF-A之單體親 和力為約lnM。PEPl-5-19為VκdAb，其對人類TNFα之單 體親和力為約8 nlV^製備兩種不同ILF構築體，一種在胺 基末端含有DOM15-26-593 dAb(以下縮寫為「DOM-PEP」），且一種在該位置含有？£卩1-5-19(1八^「？丑？-DOM」）。ILF中之兩個dAb由源自與VH或Vk dAb之C端天 然相關之序列的短連接子分隔。因此在N端含有VH dAb之 ILF包括連接子「ASTKGPS」（SEQ ID NO: 6-自VH天然延 伸至CHl中），且在N端含有PEPl-5-19之ILF包括連接子序 列「TVAAPS」（SEQ ID NO: 4-自Vk天然延伸至Ck中）。 為製備ILF，哺乳動物短暫表現載體pTT5(NRC， Canada)經修飾以包括分泌信號及適當選殖位點。此等如 下表8中所詳述。為製備DOM-PEP構築體，用如下所述之 各別基因特異性引子擴增對應於DOM1 5-26-593 dAb及 PEP1-5-19結構域dAb之個別片段。連接子序列及限制位點 併入引子序列中。 表8 引子 序列5’-3’ 註解 AVG18 attatgGG AT CCaccggcgaggtgcagct gttggtgt(SEQ ID NO :52) DOM15-26-593之正向引子 (DOM-PEP，具有BamHI位點） AVG19 Gctggggcccttggtgctagcgctcgag Acggtgaccagg(SEQ ID NO:53) DOM15-26-593之反向引子 (DOM-PEP，具有Nhel位點） AVG26 ctcgagcgcTagcaccaagggcccca gcgacatccagatgaccc(SEQ ID NO:54) PEP之正向引子(DOM-PEP， 具有Nhel位點） 148213.doc -106- 201106963 AVG21 TtatgtcAAGCTTttaccgtttgatttcca ccttggt(SEQ IDNO:55) PEP之反向引子(DOM-PEP， 具有Hindlll位點） AVG22 attatgGGATCCaccggcgacatcca gatgacccagtctcc(SEQ ID NO:56) PEP之正向引子(PEP-DOM， 具有BamHI位點） AVG36 Gcgccgccaccgtacgtttgatttccacc ttggtccc(SEQ ID NO :5 7) EP之反向引子(DOM-PEP， 具有BsiWI位點） AVG37 caaaCGTACGgtggcggcgccgagc gaggtgcagctgttggtgtc(SEQ ID NO： 58) DOM15-26-593 之正向引子(PEP-DOM，具有BsiWI位點但短突出 物供消化） AVG25 ttatgtcAAGCTTttagctcgagacggt gaccag(SEQ ID NO: 59) DOM15-26-593 之反向引子(PEP-DOM，具有Hindlll位點） AVG24 ggtggaaatcaaaCGTACGgtggcggc gccgagcga(SEQ ID NO: 60) DOM15-26-593 之正向引子(PEP-DOM，具有BsiWI位點適當突出 物供隨後消化） 用 AVG18 及 AVG19 擴增 DOM-ΡΕΡ 構築體之 DOM15-26-593且用AVG26及AVG21擴增DOM-PEP構築體之PEP1-5-19。純化後，分別用BamHI與Nhel、及Nhel與Hindlll消化 PCR片段，且純化片段。接著其與載體PTT5之經修飾形式 一起添加至3片段接合反應中，該載體ρΤΤ5含有使BamHI-Hindlll片段插入真核啟動子下游之多選殖位點。使用標準 技術進行接合、轉型及所得純系之分析，其中核苷酸序列 分析證實所得載體含有序列如SEQ ID NO: 61中所示之插 入物，預測展示於SEQ ID NO: 62中之轉譯產物。 對於PEP-DOM構築體，用AVG22及AVG36擴增PEP1-5-19 dAb且用 AVG3 7及 AVG25擴增 DOM15-26-593 dAb。分別 用 BamHI 與 BsiWI(PEP)、及 BsiWI 與 Hindlll(DOM)消化此 等片段。發現DOM片段消化不充分且此歸於引子y端上之 突出物短所致。因此用AVG25及AVG24再擴增PCR產物以 延長突出物，重複消化，且如上所述，將片段連同經消化 之PEP插入物及pTT5載體一起添加至3片段接合反應中。 148213.doc •107· 201106963 使用標準技術進行接合、轉型及所得純系之分析，其中核 苷酸序列分析證實所得載體含有序列如SEQ ID NO: 63中所 示之插入物，預測展示於SEQ ID NO: 64中之轉譯產物。 經由DNA maxiprep製備供轉染之經測序純系且使用標準 方法學將DNA轉染至HEK293/6E細胞中。在使培養基澄清 後，經由蛋白質A親和層析法及替換成PBS之純化物質緩 衝液，自經轉染細胞上清液中收穫重組蛋白質，且定量。 接著經由如下所述之SPR評估此等蛋白質結合TNFa與 VEGF兩者之能力。 使用多個咸信遠離dAb CDR區結合於VH或Vk dAb之單 株抗體，經由mAb在感測器表面上捕捉到DOM-PEP及PEP-DOM蛋白質，使TNF及VEGF配位體流過所捕捉之雙特異 體且分析結合特徵。分析確定，當用兩種不同測試抗Vk dAb之任一者捕捉化合物時，TNF配位體之結合削弱，表 明該捕捉抗體在空間上干擾配位體結合。因此，進一步分 析侷限於用抗VH dAb單株抗體捕捉之雙特異體。 在蛋白質A表面上捕捉到抗VH單株之約1600個反應單元 (RU)且測試化合物經過複合物。實驗裝置經設計以提供結 合活性之定性而非定量量測，因此不可能估測動力學等。 獲得PEP-DOM蛋白之最清晰數據，其中如藉由附加結合曲 線（圖9及1 0)所證明，兩種dAb均明顯能夠獨立且同時結合 於配位體。 對圖9中曲線之結合事件的更進一步分析證明兩種配位 體均結合於PEP-DOM蛋白。 148213.doc -108- 201106963 對DOM-ΡΕΡ蛋白之分析顯示兩種配位體之結合程度低得 多（未展示），表明在取向上可能有某些空間效應。在抗VH mAb上捕捉DOM-PEP亦比捕捉PEP-DOM效果差，加大解 釋數據之難度。 實例12 活體内研究：大鼠之雷射誘導之脈絡膜新生血管（CNV) 基本原理 在先前實驗中獲得之結果顯示抗VEGF拮抗劑DMS 1571 Φ (DOM 15-26-593抗VEGF dAb之Fc格式化型式，其以SEQ ID NO: 65之二聚體形式存在）在大鼠之雷射誘導之脈絡膜 新生血管（CNV)模型中有效。該實驗之目的在於進一步評 估該分子在大鼠CNV模型中之劑量範圍且此外在相同模型 中進行TNFa拮抗劑（EnbrelTM)之劑量範圍研究。在該研究 中亦測試DMS4000。 方法 | 動物 此等研究中使用12週齡D A大鼠。在程序之前，藉由以 0·2 ml/100 g經腹膜内注射氣胺酮（37.5%)、休眠素 (Dormitor，25%)及無菌水（Pfizer Animal Health，Exton， PA)之混合物，對動物進行外科麻醉，且用局部1 %托品醯 胺（Alcon Laboratories，Fort Worth，TX)及 2.5%苯腎上腺 素（Akorn，Inc.，Decatur，IL)之組合擴張瞳孔。所有動物 實驗皆遵守ARVO眼科及視力研究動物使用說明（ARVO Statement on the Use of Animals in Ophthalmic and Vision 148213.doc -109- 201106963
Research) 〇
實驗性CNV 在2-4個月齡雌性暗刺鼠（Dark Agouti，DA)大鼠之組 中，藉由使用雷射光光凝術（PC)使布氏膜破裂，單側誘導 實驗性CNV。使用連接於狹縫燈眼底鏡之二極體激發之 532 nm 氬雷射器（Novus Omni Coherent Inc.，Santa Clara，CA)及施加於角膜以中和視力之手持型平凹隱形眼 鏡（Moorfields Eye hospital，London，UK)進行染料雷射 PC。以視乳頭周圍分佈及標準化方式，以視神經為中心， 在500 μηι半徑下且避開各隻眼中之主要血管來產生八處損 害（532 nm，150 mW，0.2秒，200 μιη直徑）。雷射損傷之 形態學終點鑑別為暫時出現空泡，此為與布氏膜破裂相關 之跡象（Campos, Amaral，Becerra, & Fariss, 2006 A novel imaging technique for experimental choroidal neovascularization. Invest Ophthalmol Vis Sci，47(12)，5163-5170)。未導致空泡形 成之雷射點排除在研究之外。 活體内成像 在損害產生後第7天，使用共焦高解析度掃描雷射檢眼 鏡（SLO)螢光素血管造影術（FA)(〇.2 ml 10%經腹内注射之 螢光素鈉’ FS)產生CNV及相關滲漏之活體内影像資料， 隨後在程序開始後第14天為第二成像期。基於關於未處理 大鼠中雷射PC後所拍攝之血管造影照片中螢光素染色強度 及面積變化之時程的先前歷史對照研究來選擇時間點。此 等研究顯示在PC後第4天首次觀測到螢光素染色且隨後染 148213.doc • 110· 201106963 色強度快速增加，在光凝後約第1 4天達到頂點（Kamizuru 等人，2001; Monoclonal antibody-mediated drug targeting to choroidal neovascularization in the rat. Invest Ophthalmol Vis Sci，42(11)，2664-2672 ; Takehana等人，1999 Suppression of laser-induced choroidal neovascularization by oral tranilast in the rat. Invest Ophthalmol Vis Sci, 40(2)，459-466)。未進行進一步 評估，因為此等研究中之實驗性CNV之時程表明，在光凝 後約第5週螢光素滲漏開始減少。在注射FS之前產生基線 反射（488 nm及790 nm下）及自發螢光（激發488 nm，發射> 498 nm)影像以幫助定位FA影像中之損害。在FS注射後即 刻記錄動靜脈期。接著在注射之後一分鐘記錄螢光素血管 造影照片且在注射之後四分鐘再次記錄螢光素血管造影照 片，後4分鐘之資料集用於統計分析。 影像資料之評估及統計分析 藉由後期（FS注射之後4 ± 1分鐘）螢光素血管造影之定量 評估來評估藥物處理之作用。滲漏定義為在反射影像中存 在與損害相對應之高螢光區。在定量之前，校炎用於分析 中之所有影像之增益及亮度。晚期螢光素血管造影中滲漏 強度及面積藉由滲漏直徑（μηι)乘以該面積中之肀均像素亮 度值（〇至1)來定量。使用非配對t檢驗比較測試，組之間的結 果。P<0.05之值視為統計上顯著的。除非另有説明，否則 數據顯示為平均值土 SEM。在進行影像分析之前，攪亂身 分且以遮蔽方式進行定量。 處理 148213.doc • 111 - 201106963 下表（表9)展示給予各實驗組之處理。 編號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物 媒劑A-50mM乙酸納、104nM NaCh 0.025%吐溫80(pH 7,4) DMS1571於媒劑A中 DMS1571於媒劑A中 DMS1571於媒劑A中 DMS1571於媒劑A中 DMS1571於媒劑A中 媒劑B-4%甘露醇，1%蔗糖、 lOnMTris HCl(pH7.4) Enbrel於媒劑B + Enbrel於媒劑B中 Enbrel於媒劑B中 Enbrel於媒劑B中 Enbrel於媒劑B中 DMS4000於媒劑C中 媒劑C-100mM檸檬酸鈉 (pH 6) - 10%PEG300、5%蔗糠 總劑量 濃度
2pg lmg/ml lpg 0.5mg/ml 0.5pg 0.25mg/ml 02μ% 0.lmg/ml 0.1 pg 0.05mg/ml
30pg 15mg/ml 10pg 5mg/ml 3\x% 1.5mg/ml lpg 0.5mg/ml 0.3pg 0.15mg/ml 2pg lmg/ml
體積2μ1 2μ1 2μ1 2μ1 2μ1 2μ1 2μ1 2μ12μ12μ1 2μ12μ12μ1 2μ1 投藥 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 玻璃體内 雷射誘導之CNV研究之結果 在兩個時間點，PC之後第7天及第14天，對經處理之眼 睛進行高放大率螢光素血管造影。針對與實驗性CNV相關 之脈絡膜滲漏及其他與所述處理相關之血管異常，對圖像 進行分級。以近紅外反射（IR)及螢光模式（AF)記錄影像。 IR影像用於在注射螢光素造影劑之前定位視網膜中之損 害。所有影像皆在RPE水準記錄。 DMS1571(VEGF-Dab)及 EnbrelTM 在大鼠 CNV 中之作用 表 10 : DMS1571 1.0_2^0_3L0_4,0_5,0_6.0 平均值071~49?7 38^9 3Λ5 43Λ 533 55^8~ 平均值 14 53.0_36.7 43.5 39.6 49.1 48.9 1 2 3 4 5 6 SEM〇7 SEM14 2.189 1.967 1.623 1.613 1.738 3.054 2.877 1.834 2.761 2.503 2.952 4.389 •112- 148213.doc 201106963 在第7天及第14天評估DMS1571之CNV滲漏平均值七 從从：i.0·媒劑、2.0-2 DMS1571、3.0-1 DMS1571、 4.0-0.5 DMS1571、5.0-0.2 pg DMS1571、6.0-0.1 pg DMS 1571。在即將誘導雷射損傷之前注射藥劑。所有情形 下每組之動物數N=5。所有化合物皆以2 μ]體積藉由玻璃 體内注射投與。 圖11為表1 〇中所呈現之數據之圖示。所有化合物皆以2 μΐ體積藉由玻璃體内注射投與。
表 11 __ EnbrelTM 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12 〇 平均值07 平均值14 43,7 45.2 37.0 37.4 42.9 45.2 46.0 41.4 45.3 40.8 38.3 45 4 7 8 9 10 11 12 SEM〇7 sem14 3.934 2.469 1.247 1.302 1.649 1.167 1.912 1.794 2.294 1.246 1.917 2.268 在第7天及第14天評估測試EnbrefM之CNV滲漏平均值 +/- S五Μ : 7.0-媒劑、8 〇_3〇 ㈣ EnbrelTM、9 〇1〇 叩
EnbrelTM、10·0-3 叫 enbre卜 11.0-1 pg EnbrelTM、12.0-0.3 pg .EnbrelTM。在即將誘導雷射損傷之前注射藥劑。所有情 形下每組之動物數>^=5。所有化合物皆以2 μ1體積藉由玻 璃體内注射投與。 圖12為表11中所呈現之數據之圖示。所有化合物皆以2 μ1 體積藉由玻璃體内注射投與。 圖13展示紅外（IR，左上圖）、自發螢光（AF，左下圖）、 及雷射PC後第7天（第一次FS)及第Μ天（第二次FS)之螢光 素血管造影（FS，大圖）_展示例示影像^丨媒劑處理之 148213.doc -113· 201106963 眼，2.用2 pg DMS1571處理之眼及用30 pg EnbrelTM處理 之眼。可注意到CNV損害似乎比對用DMS1571處理作出反 應之損害更加強且彌漫性更小。 表 12 : DMS4000 13.0 14.0 平均值07 33.4 36.8 平均值14- 35.7 42.5 13 14 SEM〇7 1.888 2.559 SEM14 1.241 2.131 在第7天及第14天評估DMS4000之CNV滲漏平均值+/-: 13.0-2 pg DMS4000、14.0-媒劑。在即將誘導雷射 損傷之前注射藥劑。所有情形下每組之動物數N=5。所有 化合物皆以2 μΐ體積藉由玻璃體内注射投與。 圖14為表12中所呈現之數據之圖示。所有化合物皆以2 μΐ體積藉由玻璃體内注射投與。 結論 結果說明DMS1571有效地顯著減弱CNV疾病。注意到1 pg以上劑量下有強烈及穩定作用，同時0.5 pg劑量顯示次 最大作用，且在小於0.5 pg之劑量下治療劑不起作用。類 似實驗顯示，30 pg或超過30 pg之EnbrelTM之劑量在模型 中亦有效且較低之劑量不起作用。發現如DMS 1 571所例示 之VEGF抑制劑與如EnbrelTM所例示之TNFcx抑制劑均能夠 獨立地減弱齧齒動物模型中之脈絡膜新生血管性疾病，此 表明如DMS4000所例示之包含VEGF與TNFa兩者能力之單 一治療實體將適用於治療脈絡膜新生血管性AMD。可看出 148213.doc •114- 201106963 DMS4000(其中TNFa結合功能不與結合大鼠TNFa相容）在 同等劑量下在大鼠CNV模型中表現與DMS 1 571同等優良。 展望 在該大鼠CNV模型中共投與VEGF拮抗劑與TNF拮抗劑 (其對大鼠TNFa起反應，諸如EnbrelTM，或對TNFa受體起 反應）之額外實驗可用於研究此兩種機制在促進CNV疾病 抑制中之協同作用。 自螢光血管造影照片上注意到，當比較DMS 1 57 1處理之 眼與EnbrelTM處理之眼時，EnbrelTM眼具有明顯不同之圖 案，其中當相較於DMS1571處理之眼時損害似乎更加強且 彌漫性更小。損害圖案之此等差異高度表明， DMS1571(VEGF拮抗劑）及EnbrelTM(TNFa拮抗劑）治療劑之 作用機制為獨立的。 實例13-DME模型-預示實例 設想本文揭示之抗原結合蛋白將有效治療及/或預防糖 尿病性黃斑水腫（DME)。此可在如Ishida, T. Usui及K. Yamashiro 等人（VEGF164 is pro inflammatory in the diabetic retina, Invest Ophthalmol Vis Sci 44 (2003)，第 2 155-2 162頁）中在引發高血糖症後觀測到DME及視網膜血 管渗漏之糖尿病性黃斑水腫模型中得以驗證。 序列 蛋白質或聚核苷酸描述 SE〇 ID VO: DNA 胺基酸 抗VEGF dAb DOM15-26-593 1 抗TNFa黏結素 2 G4S連接子 3 148213.doc -115 - 201106963 連接子 ............. 4 連接子 ~ 5 連接子 6 連接子 ~ 7 連接子 --- 8 信號肽序列 9 抗TNFa mAb(阿達木單抗)重键 10 抗TNFa mAb(阿達木單抗)輕鏈 11 12 抗 i N a mAb( Η 達木單抗)-d〇m15-26-593 重鍵(DMS4000 mAbdAb 重鍵） 13 14 DUM l5_2e>-抗INFamAb(阿遠木單抗)重鍵 - 15 抗 iMta mAb(阿達木單抗)_d〇M15-10-11 重鏈(DMS4031 mAbdAb 重鍵） - 16 抗 TNFR1 dAb(DOMlh-131-206) 17 抗VEGFR2黏結素 " -- 18 抗VEGF抗運載蛋白 19 替代抗VEGF抗體重鍵 20 抗\^(_^抗禮(貝伐珠單抗)輕鍵 21 替代抗VEGF抗體(貝伐珠單抗)重鏈 22 抗 VEGFdAbDOM15-26 23 DOM 15 93 _抗TNFa mAb(阿遠木單杭)會鰱 24 連接子 25 BPC1821 (經由GS連接子融合於抗VEGFR2黏結素之CTLA4-Ig) 26 27 BPC1825(經由GS連接子融合於抗VEGF dAb之CTLA4-Ig) 28 29 抗TNFa mAb重鍵 30 抗TNFa mAb輕鍵 31 抗TNFa mAb(英利昔單抗)重鍵 32 抗TNFa mAb(英利昔單抗)輕鍵 33 TNFR-Fc融合物(依那西普） 34 抗 TNFa Vk dAb(PEPl -5-19) 35 抗 TNFa Vk dAb(PEPl-5-490)' 36 抗 TNFa Vk dAb(PEP 1-5-493) 37 抗 TNFa scFv(ESBA105) " 38 抗VEGF Fab(蘭尼單抗)重鏈 39 抗VEGF Fab(蘭尼單抗)輕鏈 40 抗VEGF Vk dAb(DOMl 5-10-11) 44 抗VEGF抗體(R84)重鏈 41 抗VEGF抗體(R84)輕鏈 42 VEGFR1/2雜合物-Fc融合物(阿柏西普-VEGF-捕獲劑） 43 CT01 45 FC失效之抗TNFa mAb(阿達木單抗)-DOMl 5-26-593重鏈(Fc 失效之DMS4000 mAbdAb重鏈） 46 47 EtanSTG593 48 49 EtanTV4593 50 51 148213.doc • 116· 201106963
AVG18引子 _ 52 AVG19引子 ' 53 AVG26引子 - 54 AVG21引子 55 AVG22引子 56 AVG36引子 57 AVG37引子 _ 58 AVG:2—5引子 59 AVG24引子 60 DOM15-26-593-PEP1-5-19 内嵌融合物 - 61 62 PEP1-5-19-DOM15-26-593 内嵌融合物 _ 63 64 DMS1571-DOM 15-26-593抗VEGF dAb之具有myc標藏之fc 格式化型式(以該序列之二聚體形式存在）' 65 連接子 66 連接罕 ' 67 連接¥ 68 莫有GSTVAAPSGS連接子之Fc失效之抗TNFa mAb(阿達木 單抗)-DOMl 5-26-593 重鏈 141 69 具有GS(TVAAPSGS)x2連接子之Fc失效之抗TNFa mAb(阿達 木單坑)-DOM 15-26-593重鏈 142 70 具有〇8(1^八？3〇3>3連接子之[(：失效之抗1^0111^15(阿達 木單抗)-DOM15-26-593重鏈 143 71 具有GS(TVAAPSGS)><4連接子之Fc失效之抗TNFa mAb(阿達 木單抗)-DOMl 5-26-593重鏈 144 72 依那西普-DOM15-26-593 73 依那西普-DOM15-10-11 74 依却西普-VEGF抗運載蛋白 75 英利昔單抗-貝伐珠單抗DVD_Ig重鏈 76 英利昔單抗-貝伐珠單抗DVD-Ig輕鏈 77 英利昔單抗-r84 DVD-Ig重鍵 78 英利昔單抗·γ84 DVD-Ig輕鏈 79 英利昔單抗-蘭尼單抗DVD-Fab 80 英利昔單抗-蘭尼單抗DVD-Fab 81 央利昔皁抗-DOM 15-26-593 mAb-dAb重鍵 82 央利昔早抗-JJUM15-10-11 rnAb-dAb重鍵 83 英利昔單抗-VEGF抗運載蛋白重鏈 84 央利昔單抗*ΟΟΜ15·26·593 mAb-dAb輕鏈 85 兵利昔單抗-UUM15-10-11 mAb-dAb輕鍵 86 英利昔單抗-VEGF抗逵載蛋白鉬鉍 87 阿違木單k·貝伐珠單抗DVD-Ig重鏈 88 阿達木單抗-貝伐珠單抗DVD-Ie鉍1* 89 阿達木單抗-r84 DVD-Ig曹铖 90 阿達木單抗_r84 DVD-Ie刼鰱 91 阿達木單抗-蘭尼單抗DVD-Fab 92 148213.doc -117· 201106963 阿達木單抗-蘭尼單抗DVD-Fab 93 阿達木單抗-VEGF抗運載蛋白重鏈 94 阿達木單抗-DOM15-26-593 mAb-dAb輕鏈 95 阿達木單抗-DOM15-10-11 mAb-dAb輕鏈 96 阿達木單抗-VEGF抗運載蛋白輕鏈 97 戈利木單抗-貝伐珠單抗DVD-Ig重鏈 98 戈利木單抗-貝伐珠單抗DVD-Ig輕鏈 99 戈利木單抗-r84 DVD-Ig重鏈 100 戈利木單抗-r84 DVD-Ig輕鏈 101 戈利木單抗-蘭尼單抗DVD-Fab重鏈 102 戈利木單抗-蘭尼單抗DVD-Fab輕鏈 103 戈利木單抗-DOM15-26-593 mAb-dAb重鏈 104 戈利木單抗-DOM15-10-11 mAb-dAb重鏈 105 戈利木單抗-VEGF抗運載蛋白重鏈 106 戈利木單抗-DOM15-26-593 mAb-dAb輕鏈 107 戈利木單抗-DOM15-10-11 mAb-dAb輕鏈 108 戈利木單抗-VEGF抗運載蛋白輕鏈 109 ESBA105-貝伐珠單抗DVD-Ig重鏈 110 ESBA105-貝伐珠單抗DVD-Ig輕鏈 111 ESBA105-r84 DVD-Ig 重鏈 112 ESBA105-r84 DVD-Ig輕鏈 113 ESBA105-蘭尼單抗DVD-Fab重鏈 114 ESBA105-蘭尼單抗DVD-Fab輕鏈 115 ESBA105-DOM15-26-593 scFv-VH dAb 116 ESBA105-DOM15-10-11 scFv-VKdAb 117 ESBA105-VEGF抗運載蛋白 118 PEP1-5-19-DOM15-10-11 dAb-dAb 119 PEPh5-19-VEGF抗運載蛋白 120 抗TNF黏結素-DOM15-26-593 121 抗TNF黏結素-DOM 15-10-11 122 抗TNF黏結素-VEGF抗運載蛋白 123 貝伐珠單抗-ESBA105 mAb-scFv，重鏈 124 貝伐珠單抗-ESBA105 mAb-scFv，輕鏈 125 貝伐珠單抗-PEP1-5-1.9 mAb-dAb重鏈 126 貝伐珠單抗-PEP1-5-19 mAb-dAb輕鏈 127 貝伐珠單抗-TNF黏結素重鏈 128 貝伐珠單抗-TNF黏結素輕鏈 129 阿柏西普-ESBA105 130 阿柏西普-PEP1-5-19 131 阿柏西普-TNF黏結素 132 DOM15-26-593-ESBA105 dAb-scFv 133 DOM15-26-593-TNF黏結素 134 DOM 15-10-11-ESBA105 dAb-scFv 135 DOM15-10-11-PEP1-5-19 dAb-dAb 136 DOM 15-10-11-TNF黏結素 137 148213.doc -118- 201106963
VEGF抗運載蛋白-ESBA105 138 VEGF抗運載蛋白-PEP 1 -5-19 139 VEGF抗運載蛋白-TNF黏結素 140 連接子 145 連接子 146 連接子 147 連接子 148 連接子 149 連接子 150 連接子 151 連接子 152 連接子 153 連接子 154 連接子 155 連接子 156 連接子 157 連接子 158 連接子 159 連接子 160 連接子 161 連接子 162
148213.doc 119- 201106963 SEQIDNO:1
EVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ IDNO:2
VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGL
KPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISINHRT SEQ ID NO:3
GG.GGS SEQ ID NO:4
TVAAPS SEQ ID NO:5
ASTKGPT SEQ ID NO:6
ASTKGPS SEQ ID NO:7
GS SEQ ID NO:8
TVAAPSGS SEQ ID NO:9
MGWS C11LFLVATATGVHS SEQIDNO:10
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL
SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL
TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE
ALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:11
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCAT
CACCTGCCGGGCCAGCCAGGGCATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCA
AGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCACCCTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCAGATTC •120· 1482l3.doc 201106963
AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGT
GGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAGAGCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGG
TGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAG
CTCAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAA
AGTGCAGTGGAAAGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGC
AGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTAC
GAGAAGCACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAA
GAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC SEQIDNO:12
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLS S PVTKS FNRGE C
SEQ IDNO:13
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAG
CTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTG
GCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGAC
AGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGAT
GAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCA
CCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCGAGCGCTAGCACC
AAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGC
CCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAG
CCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTG
AGC；^GCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA
CCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCC
ACAC：CTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCTAGCGTGTTCCTGTTCCCC
CCC-PiAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGA
TGTGiAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACA
ACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTG
ACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGC
CCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGG
TCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG
GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAA
CAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGC
TGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAG
GCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGTCGACCGGTGA
GGTGCAGCTGTTGGTGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGCGTCTCTCCT
GTGCAGCCTCCGGATTCACCTTTAAGGCTTATCCGATGATGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGG
AAGGGTCTAGAGTGGGTTTCAGAGATTTCGCCTTCGGGTTCTTATACATACTACGCAGACTC
CGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGCGAC7VATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGA -121 - I48213.doc 201106963
ACAGCCTGCGTGCCGAGGACACCGCGGTATATTACTGTGCGAAAGATCCTCGGAAGTTAGAC
TACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC SEQ IDNO:14
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL
SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL
TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE
ALHNHYTQKSLSLSPGKSTGEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPG
KGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLD
YWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:15
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKFDYWGQGTLVTVSSASTKG'PSE VQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADS VEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKS LS LS PGK SEQIDNO:16
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISR
DNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD
KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD
ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM
HEALHNHYTQKSLSLSPGKSTGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYH
TSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQIDNO:17
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAHETMVWVRQAPGKGLEWVSHIPPDGQDPFYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYHCALLPKRGPWFDYWGQGTLVTVSS SEQ IDNO:18 -122-
148213.doc 201106963
EWAATPTSLLISWRHPHFPTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPLQPPTATISGLKPGVDYTI TVYAVTDGRNGRLLSIP 工 SINYRT SEQID NO:19
DGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKA
VLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALE
DFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQ ID NO:20
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKS LS LS PGK SEQ ID NO:21
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF工FPPSDEQ LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO:22
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA
DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS
VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM
HEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:23
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:24
EVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSE VQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADS VEGRFT工SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTK -123- 148213.doc 201106963
GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS
SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP
KPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV
KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA
LHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:25
STG SEQ ID NO:26
ATGCATGTCGCCCAGCCAGCGGTGGTGCTGGCCAGCTCCCGCGGCATTGCCTCCTTCGTGTG
CGAGTACGCCAGCCCCGGCAAGGCCACCGAGGTGCGCGTCACGGTGCTCCGCCAGGCCGATA
GCCAGGTGACCGAAGTGTGTGCCGCTACGTACATGATGGGGAACGAGCTGACCTTCCTGGAC
GACTCTATCTGCACCGGGACCTCGAGCGGGAACCAGGTGAACCTGACCATCCAGGGCCTGCG
CGCGATGGACACGGGCCTGTACATCTGCAAGGTGGAGTTGATGTACCCCCCCCCGTACTACC
TGGGGATCGGCAACGGCACGCAGATCTACGTCATCGACCCCGAACCTTGCCCTGACAGCGAC
CAGGAGCCCAAGTCTAGTGACAAGACCCATACCTCTCCCCCCAGCCCCGCTCCAGAGCTGCT
GGGGGGCTCCAGCGTGTTCCTGTTTCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCAGAA
CCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTCGTGGATGTGAGTCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGGGTGGAGGTGCAT7\ACGCCAAGACCAAGCCTCGCGAGGAGCAGTACAA
CAGTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAGG
AGTATAAGTGCAAGGTGTCTAACAAGGCCTTGCCCGCCCCCATCGAGAAAACAATCTCCAAG
GCCAAAGGGCAGCCCAGGGAACCTCAGGTGTACACCCTCCCTCCAAGCCGTGACGAGCTGAC
CAAGAACCAGGTCTCTCTGACCTGCTTGGTGAAGGGCTTCTACCCTAGCGACATCGCTGTGG
AGTGGGAGTCCAACGGGCAGCCCGAGAACAACTACAAAACCACCCCGCCCGTGCTGGACTCT
GACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAACTGACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGT^AA
CGTGTTCAGCTGCAGCGTCATGCATGAGGCCCTGCATAACCATTACACACAGAAGAGCCTGT
CCCTGAGCCCCGGCAAGGGATCCGAGGTGGTGGCCGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATTTCC
TGGAGGCACCCCCACTTCCCCACACGCTACTACAGGATCACCTACGGCGAGACCGGCGGCAA
CAGCCCCGTGCAGGAGTTCACCGTGCCCCTGCAGCCTCCCACTGCCACCATCAGCGGCCTCA
AGCCCGGCGTGGACTACACCATCACCGTGTACGCCGTCACCGACGGAAGGAACGGCAGGCTG
CTGAGCATCCCCATCAGCATCAACTACAGGACC SEQ ID NO:27
MHVAQPAWLASSRGIASFVCEYASPGKATEVRVTVLRQADSQVTEVCAATYMMGNELTFLD
DSICTGTSSGNQVNLTIQGLRAMDTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSD
QEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFN
WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEWAATPTSLLIS
WRHPHFPTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPLQPPTATISGLKPGVDYTITVYAVTDGRNGRL
LSIPISINYRT •124-
148213.doc 201106963 SEQ ID NO:28
ATGCATGTCGCCCAGCCAGCGGTGGTGCTGGCCAGCTCCCGCGGCATTGCCTCCTTCGTGTG
CGAGTACGCCAGCCCCGGCAAGGCCACCGAGGTGCGCGTCACGGTGCTCCGCCAGGCCGATA
GCCAGGTGACCGAAGTGTGTGCCGCTACGTACATGATGGGGAACGAGCTGACCTTCCTGGAC
GACTCTATCTGCACCGGGACCTCGAGCGGGAACCAGGTGAACCTGACCATCCAGGGCCTGCG
CGCGATGGACACGGGCCTGTACATCTGCAAGGTGGAGTTGATGTACCCCCCCCCGTACTACC
TGGGGATCGGCAACGGCACGCAGATCTACGTCATCGACCCCGAACCTTGCCCTGACAGCGAC
CAGGAGCCCAAGTCTAGTGACAAGACCCATACCTCTCCCCCCAGCCCCGCTCCAGAGCTGCT
GGGGGGCTCCAGCGTGTTCCTGTTTCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCAGAA
CCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTCGTGGATGTGAGTCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGGGTGGAGGTGCATAACGCCAAGACCAAGCCTCGCGAGGAGCAGTACAA
CAGTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAGG
AGTATAAGTGCAAGGTGTCTAACAAGGCCTTGCCCGCCCCCATCGAGAAAACAATCTCCAAG
GCCi\AAGGGCAGCCCAGGGAACCTCAGGTGTACACCCTCCCTCCAAGCCGTGACGAGCTGAC
CAAGAACCAGGTCTCTCTGACCTGCTTGGTGAAGGGCTTCTACCCTAGCGACATCGCTGTGG
AGTGGGAGTCCAACGGGCAGCCCGAGAACAACTACAAAACCACCCCGCCCGTGCTGGACTCT
GACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAACTGACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGAAA
CGTGTTCAGCTGCAGCGTCATGCATGAGGCCCTGCATAACCATTACACACAGAAGAGCCTGT
CCCTGAGCCCCGGCAAGGGATCCGAGGTGCAGCTCCTGGTCAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAG
CCCGGAGGCTCACTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCAT
GATGTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGGTGTCTGAGATCAGCCCCAGCG
GCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGC
AAG/^ACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTG
CGCCAAGGACCCCAGGAAGCTGGACTATTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQ ID NO:29
MHVAQPAWLASSRGIASFVCEYASPGKATEVRVTVLRQADSQVTEVCAATYMMGNELTFLD
DSICTGTSSGNQVNLTIQGLRAMDTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSD
QEPKSSDKTHTSPPSPAPELLGGSSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFN
WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEVQLLVSGGGLVQ
PGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNS
KNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ IDNO:30
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTV
SS -125- 148213.doc 201106963 SEQ IDNO:31
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKR SEQ ID NO:32
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKS LS LS PGK SEQ ID NO:33
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSVF工FPPSDEQ LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO:34
LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYT
QLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPG
FGVARPGTETSDWCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNWAIPGNASMDAVCTSTSPTRS
MAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPIVIGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:35
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:36
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:37
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQA工DSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLLIPEDFATYYCQQ'^VWRPFTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:38
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF
SGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSS -126-
148213.doc 201106963
GGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEP
TYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:39
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA
DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL SEQ ID NO:40
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQIDNO:41
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGFDPEDGETIYAQ KFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGRSMFRGV工工PFNGMDVWGQGTTVTV ss SEQIDNO:42
DIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO:43 ΞϋΤαΚΡΡνΕΜΥβΕΙΡΕΙΙΗΜΤΕΘΙΙΕΕνίΡα^^ΡΝΙΤνΤΙΚΚΡΡΙ^ΊΧΙΡΟαΚΚΙΐν^δΙΙΚ
GFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDWLSPSHGIELSVGEKLVLNC
TARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCA
ASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGPYPSDIAVEWESNGQP
ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:44
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIRG SEQ iD NO:45
EWAATPTSLLISWRHPHFPTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPLQPPTATISGLKPGVDYTI TVYAVTDGRNGRLLSIPISINYRT SEQ ID NO:46
ATGGGCTGGTCCTGCATCATCCTGTTTCTGGTGGCCACCGCCACCGGCGTGCACAGCGAGGT
GCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTG -127- 148213.doc 201106963
CCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAG
GGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGT
GGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACA
GCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCC
AGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCGAGCGCTAGCACCAAGGG
CCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGG
GCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAGCCCTG
ACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAG
CGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACA
AGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCCACACC
TGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGGCCGGCGCCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAA
GCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGA
GCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCC
AAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTGACCGT
GCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGCCCTGC
CTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGGTCTAC
ACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAA
GGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACT
ACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACC
GTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCT^ACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCT
GCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGTCGACCGGTGAGGTGC
AGCTGCTGGTGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCC
GCCAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCAAGGG
CCTGGAATGGGTGTCCGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGA
AGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGC
CTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGACCCCCGGAAGCTGGACTACTG
GGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQ ID NO:47
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTY 工 CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGKSTGEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPG KGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLD YWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:48
CTGCCCGCTCAGGTGGCCTTCACTCCCTACGCCCCAGAGCCCGGCTCTACCTGCAGGCTGAG
GGAGTACTACGACCAGACCGCCCAGATGTGCTGCAGCAAGTGCAGCCCCGGCCAGCACGCCA
AAGTGTTCTGCACCAAGACCAGCGACACCGTGTGCGATAGCTGCGAGGACAGCACCTACACC -128-
148213.doc 201106963
CAGCTGTGGAACTGGGTCCCCGAGTGCCTGAGCTGCGGCTCTAGGTGTAGCAGCGACCAGGT
CGAGACCCAGGCCTGCACCAGGGAACAGAACCGGATCTGCACATGCAGGCCCGGCTGGTACT
GCGCCCTCAGCAAACAGGAGGGCTGCAGGCTGTGTGCCCCCCTCAGGAAGTGCAGGCCCGGG
TTTGGCGTGGCCAGGCCCGGAACCGAGACTAGCGACGTGGTGTGCAAACCCTGCGCCCCCGG
CACCTTCAGCAATACCACTAGCAGCACCGACATCTGCAGGCCTCACCAGATCTGCAACGTGG
TGGCCATTCCCGGCAACGCAAGCATGGACGCCGTGTGCACCAGCACCAGCCCCACCAGGTCA
ATGGCCCCTGGAGCCGTGCATCTGCCCCAGCCCGTGAGCACCAGAAGCCAGCACACCCAGCC
TACCCCCGAGCCCAGCACCGCCCCTAGCACCAGCTTCCTGCTGCCTATGGGCCCCTCCCCTC
CCGCCGAGGGCTCAACCGGCGACGAACCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCC
TGCCCCGCACCAGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGA
CACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGG
ACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAG
CCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTCCTGACCGTGCTGCACCA
GGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCA
TCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAGCCCAGGGAGCCACAGGTGTACACACTGCCC
CCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTA
TCCCAGCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCA
CCCCCCCCGTCCTGGACTCCGACGGGAGCTTCTTCCTGTACAGC7VAGCTGACCGTGGACAAG
AGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCA
CTACACCCAGAAGTCCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAGTCGACCGGTGAGGTGCAGCTGCTGG
TGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGC
TTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATG
GGTGTCCGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGT
TCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCC
GAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGACCCCCGGAAGCTGGACTACTGGGGCCAGGG
CACCCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQ ID NO:49
LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYT
QLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPG
FGVARPGTETSDWCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNWAIPGNASMDAVCTSTSPTRS
MAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSTGEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASG
FTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA
EDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:SO
CTGCCCGCTCAGGTGGCCTTCACTCCCTACGCCCCAGAGCCCGGCTCTACCTGCAGGCTGAG
GGAGTACTACGACCAGACCGCCCAGATGTGCTGCAGCAAGTGCAGCCCCGGCCAGCACGCCA
AAGTGTTCTGCACCAAGACCAGCGACACCGTGTGCGATAGCTGCGAGGACAGCACCTACACC
CAGCTGTGGAACTGGGTCCCCGAGTGCCTGAGCTGCGGCTCTAGGTGTAGCAGCGACCAGGT -129- 148213.doc 201106963
CGAGACCCAGGCCTGCACCAGGGAACAGAACCGGATCTGCACATGCAGGCCCGGCTGGTACT
GCGCCCTCAGCAAACAGGAGGGCTGCAGGCTGTGTGCCCCCCTCAGGAAGTGCAGGCCCGGG
TTTGGCGTGGCCAGGCCCGGAACCGAGACTAGCGACGTGGTGTGCAAACCCTGCGCCCCCGG
CACCTTCAGCAATACCACTAGCAGCACCGACATCTGCAGGCCTCACCAGATCTGCAACGTGG
TGGCCATTCCCGGCAACGCAAGCATGGACGCCGTGTGCACCAGCACCAGCCCCACCAGGTCA
ATGGCCCCTGGAGCCGTGCATCTGCCCCAGCCCGTGAGCACCAGAAGCCAGCACACCCAGCC
TACCCCCGAGCCCAGCACCGCCCCTAGCACCAGCTTCCTGCTGCCTATGGGCCCCTCCCCTC
CCGCCGAGGGCTCAACCGGCGACGAACCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCC
TGCCCCGCACCAGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGA
CACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGG
ACCCCGAGGTG7VAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAG
CCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTCCTGACCGTGCTGCACCA
GGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCA
TCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAGCCCAGGGAGCCACAGGTGTACACAQTGCCC
CCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTA
TCCCAGCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCA
CCCCCCCCGTCCTGGACTCCGACGGGAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAG
AGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCA
CTACACCCAG7^GTCCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAGACCGTGGCGGCGCCCAGCACGGTGG
CCGCCCCCTCCACCGTCGCCGCGCCAAGCACCGTGGCTGCTCCGTCGACCGGTGAGGTGCAG
CTGCTGGTGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGC
CAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCC
TGGAATGGGTGTCCGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAG
GGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGT^ACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCT
GCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGACCCCCGGAAGCTGGACTACTGGG
GCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQ ID NO:51
LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYT
QLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPG
FGVARPGTETSDWCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNWAIPGNASMDAVCTSTSPTRS
MAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSTVAAPSTVAAPSTVAAPSTGEVQ
LLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVK
GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:52
ATTATGGGATCCACCGGCGAGGTGCAGCTGTTGGTGT SEQ ID NO:53
GCTGGGGCCCTTGGTGCTAGCGCTCGAGACGGTGACCAGG -130-
148213.doc 201106963 SEQ ΙΟ NO:54
CTCGAGCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGACATCCAGATGACCC SEQ ΙΟ NO:55
TTATGTCAAGCTTTTACCGTTTGATTTCCACCTTGGT SEQ ID NO:56
ATTATGGGATCCACCGGCGACATCCAGATGACCCAGTCTCC SEQ ID NO:57
GCGCCGCCACCGTACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCC SEQ ID NO:58
CAAACGTACGGTGGCGGCGCCGAGCGAGGTGCAGCTGTTGGTGTC
SEQIDNO:59
TTATGTCAAGCTTTTAGCTCGAGACGGTGACCAG SEQ ID NO：60
GGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCGGCGCCGAGCGA SEQ IDNO:61
GAGGTGCAGCTGTTGGTGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGCGTCTCTC
CTGTGCAGCCTCCGGATTCACCTTTAAGGCTTATCCGATGATGTGGGTCCGCCAGGCTCCAG
GGAAGGGTCTAGAGTGGGTTTCAGAGATTTCGCCTTCGGGTTCTTATACATACTACGCAGAC
TCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGCGACAATTCCAAGT^CACGCTGTATCTGCAAAT
GAACAGCCTGCGTGCCGAGGACACCGCGGTATATTACTGTGCGAAAGATCCTCGGAAGTTAG
ACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGAC
ATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCTCTGTCTGCATCTGTAGGAGACCGTGTCACCATCAC
TTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAGTTATTTACATTGGTACCAGCAGAAACCAGGGAAAG
CCCCTAAGCTCCTGATCTATAGTGCATCCGAGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCACGTTTCAGT
GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGC
TACGTACTACTGTCAACAGGTTGTGTGGCGTCCTTTTACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGG
AAATCAAACGG SEQIDNO:62
EVQLIjVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSD 工QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGSQLSWYQQKPGKAPKLLIMWRSSLQSGVPSRFS GSGSGTDFTLTISSLQPEDFM'YYCAQGAALPRTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:63
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCTCTGTCTGCATCTGTAGGAGACCGTGTCACCAT
CACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAGTTATTTACATTGGTACCAGCAGAAACCAGGGA
AAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGTGCATCCGAGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCACGTTTC • 131 - 148213.doc 201106963
AGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTT
TGCTACGTACTACTGTCAACAGGTTGTGTGGCGTCCTTTTACGTTCGGCCAAGGGACCAAGG
TGGAAATCAAACGTACGGTGGCGGCGCCGAGCGAGGTGCAGCTGTTGGTGTCTGGGGGAGGC
TTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGCGTCTCTCCTGTGCAGCCTCCGGATTCACCTTTAAGGC
TTATCCGATGATGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGTCTAGAGTGGGTTTCAGAGATTT
CGCCTTCGGGTTCTTATACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGC
GACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCCGAGGACACCGCGGT
ATATTACTGTGCGAAAGATCCTCGGAAGTTAGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCG
TCTCGAGC SEQ ID NO：64
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSEVQLLVSGGG
LVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISR
DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:65
EVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSSASTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEQKLISEEDLN SEQ ID NO:66
GSTVAAPSGSTVAAPSGS SEQ ID NO:67
GSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGS SEQ ID NO:68
GSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGS SEQ ID NO:69
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP工EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGKGSTVAAPSGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMM WVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA KDPRKLDYWGQGTLVTVSS -132· 148213.doc 201106963 SEQ ID NO:70
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYIjSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL
SSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL
TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE
ALHNHYTQKSLSLSPGKGSTVAAPSGSTVAAPSGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGF
TFK^YPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE
DTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:71
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL
SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFP
PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL
TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE
ALHNHYTQKSLSLSPGKGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLR
LSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYL
QMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:72
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL
SSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFP
PKPKJDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL
TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE
ALHNHYTQKSLSLSPGKGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSEVQLLVSGGGL
VQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRD
NSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:73
LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYT
QLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPG
FGVARPGTETSDWCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNWAIPGNASMDAVCTSTSPTRS
MAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK 148213.doc -133- t： 201106963
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCA
ASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS
LRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:74
LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYT
QLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPG
FGVARPGTETSDWCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNWAIPGNASMDAVCTSTSPTRS
MAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
YYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:75
LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYT
QLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPG
FGVARPGTETSDWCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNWAIPGNASMDAVCTSTSPTRS
MAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGDEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDRE
FPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYII
PSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSE
TCSPG SEQ ID NO:76
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK GPSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPT YAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR WSVLTVLHQDWLiNGKEYKCKVSNKALPAP 工 EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SV SEQ ID NO:77
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF
SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSDIQMTQSPSS -134-
148213.doc 201106963
LSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLS S PVT KS FNRGE C SECI ID NO:78
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK GPSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGFDPEDGETI YAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGRSMFRGVIIPFNGMDVWGQGTT VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS TYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG3STV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQIDNO:79
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSDIRMTQSPSS LSASVGDRVT工TCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLS S PVTKS FNRGE C SEQ ID NO:80
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY
AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK
GPSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPT
YAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTV
SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL SEQ ID NO:81
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSDIQLTQSPSS LSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLSS PVTKS FNRGE C SEQ ID NO:82
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY
AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK -135· 148213.doc 201106963
GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS
SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP
KPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV
KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA
LHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQA
PGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRK
LDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:83
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY
AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK
GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS
SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP
KPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV
KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA
LHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKP
GKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGT
KVEIKR SEQ ID NO:84
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGF工FSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHY AESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPE3STNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLL KGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQLH GKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQ ID NO:85
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF
SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT
FKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED
TAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:86
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF
SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQ -136-
148213.doc 201106963
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQW IGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ YMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:87
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRF
SGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMN
LESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVR
DHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQ ID NO:88
EVQ31.VESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST KGPSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEP TYA；\DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKS LS LS PGK SEQ ID NO:89
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIQMTQSPSS
LSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC
LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV
THQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO:90
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST KGPSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGFDPEDGET IYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGRSMFRGVIIPFNGMDVWGQGT TVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK -137. 148213.doc 201106963 SEQ ID NO:91
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIRMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLS S PVTKS FNRGEC SEQ ID NO:92
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD
SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEP
TYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVT
VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL SEQ ID NO:93
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIQLTQSPSS LSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLS S PVTKS FNRGEC SEQ ID NO:94
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYAD SVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWyVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL VKGFYPSD工AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE
LKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQL
HGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQIDNO:95
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT
FKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED
TAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS •138·
148213.doc 201106963 SEQ ID NO:96
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQW IGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ YMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:97
DIQ.MTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMN
LESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVR
DHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQ ID NO:98
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTV
SSASTKGPSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINT
YTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQ
GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP
AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE
LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:99
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSDIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLS S PVTKS FNRGEC SEQ ID N0:100
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTV
SSASTKGPSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGFDP
EDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGRSMFRGVIIPFNGMDV
WGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH
TFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR -139- 148213.doc 201106963
EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR
WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:101
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATG 工 PARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSDIRMTQSPS SLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO:102
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIT^GGNYYYYGMDVWGQGTTVTV
SSASTKGPSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINT
YTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQ
GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP
AVLQSSGIiYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL SEQIDNO:103
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDF
TLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASW
CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE
VTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO:104
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTV
SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR νν3νΐ/Γν：ϋΗί2ϋν«^ΝΟΚΕΥΚ(：Κν3ΝΚΑ1^ΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΑΙ^ΡΙΙΕΡ〇νΥΤΕΡΡ3Ι^Ε]7ΓΚΝ〇ν
SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC
SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPM
MWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
AKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:105
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTV
SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR
WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQV -140-
1482l3.doc 201106963
SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC
SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELR
WYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPM
TFGQGTKVEIKR SEQIDNO:106
QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYAD SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTP MTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFY SEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQIDNO:107
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDE
QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD
YEKIiKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGF
TFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE
DTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQIDNO:108
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDE
QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD
YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ
WIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ
QYMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO:109
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEM NLES VTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAY 工 IPSAV RDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSP G SEQ ID NO:110
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTYAD .141 - 148213.doc 201106963
KFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPS
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA
DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS
VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM
HEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQIDNO:111
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF
SGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRTVAAPSDIQMTQSPSS
LSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWC
LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV
THQGLSSPVTKSFNRGEC SEQIDNO:112
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTYAD KFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGFDPEDGETIYAQ KFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGRSMFRGVIIPFNGMDVWGQGTTVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKS LS LS PGK SEQ ID NO:113
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF
SGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRTVAAPSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATIjSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFT
LTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSDIRMTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPE
DFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPRE
AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPV
TKSFNRGEC SEQ ID NO:114
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTYAD
KFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPS
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA -142-
148213.doc 201106963
DFKE.RFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL
SEQIDNO:11S
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF SGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRTVAAPSDIQLTQSPSS LSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFT L/TISSLQPEDFATYTCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVC LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLSS PVTKS FNRGEC SEQIDNO:116
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF
SGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSS
GGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEP
TYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSSAST
KGPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYT
YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQ IIDNO:117
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF SGRGYGTDFTLT工SSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSS GGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEP TYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSSAST KGPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQ IONO:118
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRF SGRGYGTDFTLT工SSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSS GGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEP TYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSSAST KGPSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQ EVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNL EALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG SEQIDNO:119
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIQMTQSPSS
LSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQIDNO:120
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRF •143· 148213.doc 201106963
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSDGGGIRRSMS
GTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKK
YTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARG
LSTESILIPRQSETCSPG SEQID NO:121
VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGL
KPGVDDTITyYAVTNHHMPLRIFGPISINHRTTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAA
SGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL
RAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS SEQID NO:122
VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGL
KPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISINHRTTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCR
ASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY
YCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKR SEQIDNO:123
VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGL KPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISINHRTTVAAPSDGGG工RRSMSGTWYLKAMTVDREF PEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIP SAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDPEKAAGARGLSTESILIPRQSET CSPG SEQIDNO:124
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA
DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS
VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM
HEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQ
QRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRFSGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVyyCQQDYNSPRTFG
QGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSSGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYG
MNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTY7UDKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYY
CARERGDAMDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:125
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQS
VSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRFSGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQ • 144-
148213.doc 201106963
DYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSSGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTA
SGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSL
TSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSS SEQIDNO:126
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAA
DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS
VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM
HEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQ
QKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFG
QGTKVEIKR
SEQIDNO:127
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRF SGSGiSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSD工QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS IDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ WWRPFTFGQGTKVEIKR SEQIDNO:128
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYT^A
DFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS
VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAiCGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT
CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM
HEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYG
ETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGLKPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISINHRT SEQ ID NO:129
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAY
NGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGLKPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISI
NHRT -145- 148213.doc 201106963 SEQIDNO:130
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRK
GFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDWLSPSHGIELSVGEKIjVLNC
TARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCA
ASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP
ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTV
AAPSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGV
PSRFSGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGG
GGSSGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTY
TGEPTYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVS
S SEQIDNO:131
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRK
GFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDWLSPSHGIELSVGEKLVLNC
TARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCA
ASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW
VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN
KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP
ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTV
AAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGV
PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKR SEQ IDNO:132
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRK GFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDWLSPSHGIELSVGEKLVLNC TARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCA ASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM工SRTPEVTCW VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTV AAPSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTAT 工SGLKPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISINHRT SEQIDNO:133
EVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSD 工VMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRFS GRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSSG GGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPT YADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSS -!46- 1482I3.doc 201106963 SEQ ID NO:134
EVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYAD
SVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSSASTKGSPV
SDVPRDLEVVAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGLK
PGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISINHRT SEQ ID NO:135
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIVMTQSPSS
LSASVGDRVTLTCTASQSVSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRFSGRGYGTDFT
LTISSLQPEDVAVYYCQQDYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSSGGGSQVQLVQ
SGAEVKKPGASVKVSCTASGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTYADKFKDRF
TFSLETSASTVYMELTSLTSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSS SEQ IDNO:136
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIQMTQSPSS
LSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRFSGSGSGTDFT
LTISSLQPEDFATYYCQQWWRPFTFGQGTKVEIKR SEQ IIDNO:137
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGPELRWYQQKPGKAPKLLIYHTSILQSGVPSRF
SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMFQPMTFGQGTKVEIKRTVAAPSVSDVPRDLEV
VAATPTSLLISWDTHNAYNGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGLKPGVDDTITV
YAVTNHHMPLRIFGPISINHRT SEQIDNO:138
DGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKA VLGRTKERKKYTADGGKHVAY11PSAVRDHVIFYS EGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALE DFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPGTVAAPSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTLTCTASQS VSNDWWYQQRPGKAPKLLIYSAFNRYTGVPSRFSGRGYGTDFTLTISSLQPEDVAVYYCQQ DYNSPRTFGQGTKLEVKRGGGGSGGGGSGGGGSSGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTA SGYTFTHYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYTGEPTYADKFKDRFTFSLETSASTVYMELTSL TSDDTAVYYCARERGDAMDYWGQGTLVTVSS SEQIDNO:139
DGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKA VLGRTKERKKYTADGGKHVAY工工PSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALE DFEKiiAGARGLSTESILIPRQSETCSPGTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQS IDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASELQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ WWRPFTFGQGTKVE 工 KR SEQ ID NO:140
DGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKA VLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALE -147- I482l3.doc 201106963
DFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPGTVAAPSVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDTHNAY
NGYYRITYGETGGNSPVREFTVPHPEVTATISGLKPGVDDTITVYAVTNHHMPLRIFGPISI
NHRT SEQIDNO:141
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAG
CTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTG
GCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGAC
AGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGAT
GAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCA
CCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCGAGCGCTAGCACC
AAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGC
CCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAG
CCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTG
AGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA
CCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCC
ACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGGCCGGCGCCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCC
CCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGA
TGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACA
ACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTG
ACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGC
CCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGG
TCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG
GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAA
CAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGC
TGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAG
GCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCACCGT
GGCCGCTCCCAGCGGATCAGAGGTGCAGCTGCTGGTGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTG
GCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATG
TGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGAGATCAGCCCCAGCGGCAG
CTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGA
ACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCC
AAGGACCCCCGGAAGCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQ ID NO:142
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAG
CTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTG
GCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGAC
AGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGAT
GAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCA
CCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCGAGCGCTAGCACC
AAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGC
CCTGGGCTGCCTGGTG7\AGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAG
CCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTG -148·
I48213.doc 201106963
AGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA
CCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCC
ACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGGCCGGCGCCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCC
CCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGA
TGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACA
ACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTG
ACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGC
CCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGG
TCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG
GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAA
CAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGC
TGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAG
GCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCACAGT
GGCTGCACCTTCCGGGTCAACCGTCGCCGCCCCCAGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGCTGGTGT
CTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTC
ACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGT
GTCCGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCA
CCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAG
GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGACCCCCGGAAGCTGGACTACTGGGGCCAGGGCAC
CCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQIDNO:143
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAG
CTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTG
GCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGAC
AGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGAT
GAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCA
CCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCGAGCGCTAGCACC
AAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGC
CCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAG
CCCTC3ACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTG
AGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA
CCAC；^AGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCC
ACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGGCCGGCGCCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCC
CCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGA
TGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACA
ACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTG
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CCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGG
TCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG
GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAA
CAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGC
TGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAG -149- I48213.doc 201106963
GCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCACCGT
CGCCGCACCAAGCGGGTCAACAGTGGCCGCTCCCTCCGGCAGCACTGTGGCTGCCCCCAGCG
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CTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTGCGGCAGGC
CCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACG
CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTG
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GCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC SEQIDNO:144
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAG
CTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTG
GCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGAC
AGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGAT
GAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCA
CCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTCTCGAGCGCTAGCACC
AAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGC
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CCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTG
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CCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCC
ACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGGCCGGCGCCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCC
CCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGA
TGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACA
ACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTG
ACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGC
CCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGG
TCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTG
GTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAA
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GCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCACCGT
CGCCGCACCAAGCGGATCTACCGTCGCAGCCCCTTCCGGGTCAACAGTGGCCGCTCCCTCCG
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GTGCAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTA
CCCCATGATGTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGAGATCAGCC
CCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGAC
AACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTA
CTACTGCGCCAAGGACCCCCGGAAGCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGA
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PASGS -150-
1482l3.doc 201106963 SEQ ΙΟ NO:146
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PASPASPASGS SEQ ID NO:148
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GGGGSGGGGSGGGGS SEQ ID NO:150
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TVAAPSTVAAPSTVAAPSGS
SEQ ID NO:152
GSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGS SEQIDNO:153
GSTV.AAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGS SEQ IDNO:154
PAVPPPGS SEQ IIDNO:1S5
PAVPPPPAVPPPGS SEQ ID NO:156
PAVPPPPAVPPPPAVPPPGS SEQ ID NO:157
TVSDVPGS SEQ ID NO:1S8
TVSDVPTVSDVPGS SEQ ID NO:159
TVSDVPTVSDVPTVSDVPGS SEQ ID NO:160
TGLDSPGS SEQ ID NO:161
TGLDSPTGLDSPGS SEQ ID NO:162
TGLDS PTGLDS PTGLDS PGS 151 - 1482 丨 3.doc 201106963 【圖式簡單說明】 圖 1 展示抗 TNFa/抗 VEGF mAb-dAb DMS4000 之 SDS-PAGE分析； 圖 2 展示抗 TNFa/抗 VEGF mAb-dAb DMS4000 之 SEC 型 態； 圖3展示DMS4000之抗VEGF活性； 圖4展示DMS4000之抗TNFa活性； 圖5展示DMS4〇00之（PK)性質； 圖6展示ELISA結果且證實雙特異性BPC1 821結合 VEGFR2與 B7-1兩者； 圖7展示ELISA結果且證實雙特異性BPC1825展示結合 VEGF與B7-1兩者； 圖8(a)及8(b)描繪構築本發明雙靶向抗原結合分子之基 質； 圖9展示PEP-DOM構築體之BIAcore分析； 圖10展示PEP-DOM構築體之BIAcore分析（圖9結合曲線 之TNF/VEGF結合區之特寫）； 圖11為表10中所呈現之數據之圖示； 所有化合物皆以2 μΐ之體積藉由玻璃體内注射投與； 圖12為表11中所呈現之數據之圖示； 所有化合物皆以2 μΐ之體積藉由玻璃體内注射投與； 圖13展示紅外（IR，左上圖）、自發螢光（AF，左下圖）、 及雷射PC後第7天（第一次FS)及第14天（第二次FS)之螢光 素血管造影（FS，大圖），展示例示影像。1，媒劑處理之 148213.doc -152- 201106963 眼睛；2 ’ 2 pg DMS 1 571處理之眼睛及用3〇 EnbrelTi^ 理之眼睛。注意<：]^乂損害似乎比對用DMS 1 571處理作出反 應之損害更加強且彌漫性更小；及 圖14為表12中所呈現之數據之圖示。 所有化合物皆以2 μΐ之體積藉由玻璃體内注射投與。
148213.doc •153- 201106963 序列表 <uo>英商葛蘭素集團有限公司 <120>抗原結合蛋白 <130> PB63684 <140> 099116868 <141> 2010-05-26 <150> 61/181,887 <151> 2009-05-28 <160> 162 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> ] <211> 116 <212> PRT <213>人工序列 <220>
<22：3> ^VEGF dAb DOM15-26-593 <400> I Glu Val 1 Ser Leu Pro Met
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Arg Leu Ser 20 Mel 丁卬 Val 35 lie Ser Pro
Gly Leu Val 10 Gly Phc Thr
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Ala Lys Thr Va)
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Arg Asp Ala Glu Asp Tyr 105
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Gin Pro Phe Lys 30 Leu Glu 45 Ala Asp Asn Thr Val Tyr Gly Thr 110
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<210> 2 <2M> 94 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>抗胃(1黏結素 <400> 2
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Ala Ser Thr Lys Gly Pro Thr <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 6
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser <2I0> 7 <211> 2 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 7 Gly Ser <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 8
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atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgclggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320 acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagtcgaccg gtgaggtgca gctgttggtg 1380 tctgggggag gcttggtaca gcctgggggg tccctgcgtc tctcctgtgc agcctccgga 1440 ticacctua aggcttatcc gatgatgtgg gtccgccagg ctccagggaa gggtctagag 1500 tgggtttcag agatttcgcc ttcgggttct tatacatact acgcagactc cgtgaagggc 1560 cggttcacca tctcccgcga caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg 1620 cgtgccgagg acaccgcggt atattactgt gcgaaagatc ctcggaagtt agactactgg 1680 ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 1710 <210> 14 <211> 554 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223:>抗11处〇111^13 (阿達木單抗）-DOM15-26-593重鏈 (· DMS4000 mAbdAb 重鏈） <400> 14
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148213·序列表.doc 201106963
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Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 485 490 495
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 500 505 510
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Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe 530 535 540
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
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Val Leu Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190
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Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 21〇 215 220
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Fhe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Va) Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335 Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430
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Leu A&n Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu lie 35 40 45
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
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<210> 22 <2]1> 447 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>替代抗VEGF抗體（貝伐珠單抗）重鏈
<400> 22
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Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 185 190
Ttu Tyr lie Cys Asn Val Asn His 205
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His 265 270
Trp 丁yr Val Asp Gly Val Glu Val 285
Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val 300 • 11 - 148213-序列表.doc 201106963
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335
Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg 405 410 415
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 23 <211〉 116 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>替代抗VEGF抗體（貝伐珠單抗）重鏈 <400> 23
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gty Ala Tyr 20 25 30
Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Phe Asp Tyr 丁rp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser 115 <210> 24 <211> 568 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>DOM15-26-593·抗TNFamAb (阿達木單抗）重鏈 <400> 24
Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr 20 25 30
Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gin Leu Val 115 120 125
Glu Ser Gly Gly Giy Leu Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser 130 135 140 -12-
148213·序列表.doc 201106963
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val 145 150 155 160
Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala lie Thr Trp 165 170 175
Asn Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr 180 185 190 lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser 195 200 205
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr 210 215 220
Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 245 250 255
Pro Scr Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 260 265 270
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 275 280 285
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser 290 295 300
Gly Se;r Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 305 310 315 320
Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 325 330 335
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 340 345 350
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 355 360 365
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val 370 375 380
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 385 390 395 400
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 405 410 415
Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 420 425 430
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 435 440 445
Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 450 455 460
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 465 470 475 480
Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 485 490 495
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 500 505 510
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 515 520 525
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe 530 535 540
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 545 . 550 555 560
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 <210> 25 <211> 3 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 25 Ser Thr Gly ] <210> 26 <2U> )335 <212> DNA <213>人工序列 <220> -13· 148213·序列表,doc 201106963 <223> BPC1821 (經由GS連接子融合於抗VEGFR2黏結素之CTLA4-Ig) <400> 26 atgcatgtcg cccagccagc ggtggtgctg gccagctccc gcggcattgc ctccttcgtg 60 tgcgagtacg ccagccccgg caaggccacc gaggtgcgcg tcacggtgct ccgccaggcc 120 gatagccagg tgaccgaagt gtgtgccgct acgtacatga tggggaacga gctgaccttc 180 ctggacgact ctatctgcac cgggacctcg agcgggaacc aggtgaacct gaccatccag 240 ggcctgcgcg cgatggacac gggcctgtac atctgcaagg tggagttgat gtaccccccc 300 ccgtactacc tggggatcgg caacggcacg cagatctacg tcatcgaccc cgaaccttgc 360 cctgacagcg accaggagcc caagtctagt gacaagaccc atacctctcc ccccagcccc 420 gctccagagc tgctgggggg ctccagcgtg ttcctgtttc cccccaagcc taaggacacc 480 ctgatgatct ccagaacccc cgaggtgacc tgcgtggtcg tggatgtgag tcacgaggac 540 cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggggtggagg tgcataacgc caagaccaag 600 cctcgcgagg agcagtacaa cagtacctac cgcgtggtgt ccgtgctcac tgtgclgcal 660 caggactggc tgaacggcaa ggagtataag tgcaaggtgt ctaacaaggc cttgcccgcc 720 cccatcgaga aaacaatctc caaggccaaa gggcagccca gggaacctca ggtgtacacc 780 ctccctccaa gccgtgacga gctgaccaag aaccaggtct ctctgacctg cttggtgaag 840 ggcttctacc ctagcgacat cgctgtggag tgggagtcca acgggcagcc cgagaacaac 900 tacaaaacca ccccgcccgt gctggactct gacggctcct tcttcctgta cagcaaactg 960 accgtggaca agtccaggtg gcagcaggga aacgtgttca gctgcagcgt catgcatgag 1020 gccctgcata accattacac acagaagagc ctgtccctga gccccggcaa gggatccgag 1080 gtggtggccg ccacccccac cagcctgctg atttcctgga ggcaccccca cttccccaca 1140 cgctactaca ggatcaccta cggcgagacc ggcggcaaca gccccgtgca ggagttcacc 1200 gtgcccctgc agcctcccac tgccaccatc agcggcctca agcccggcgt ggactacacc 1260 atcaccgtgt acgccgtcac cgacggaagg aacggcaggc tgctgagcat ccccatcagc 1320 atcaactaca ggacc 1335 <210> 27 <211> 437 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>BPC1821 (經由GS連接子融合於抗VEGFR2黏結素之CTLA4-Ig) <400> 27
Met His Val Ala Gin Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly lie 15 10 15
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Asp Gly Lys Ala Thr Glu Val Arg Val 20 25 30
Thr Vai Leu Arg Gin Ala Asp Ser Gin Val Thr Glu Val Cys Ala Ala 35 40 45
Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser lie Cys 50 55 60
Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gin Val Asn Leu Thr lie Gin Gly Leu 65 70 75 80
Arg Ala Met Asp Thr Gly lie Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro 85 90 95
Pro Tyr Tyr Leu Gly He Gly Asn Gly Thr Gin lie Tyr Val lie Asp 100 105 110
Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gin Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys 115 120 125
Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser 130 135 140
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 145 150 155 160
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 165 170 175
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 180 185 190
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Giu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser 195 200 205
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 210 215 220
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He 225 230 235 240
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 245 250 255
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 260 265 270
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 275 280 285
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser • 14·
1482丨3-序列表.doc 201106963 290 295 300
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 305 310 315 320
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn . 325 330 335
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu '…， 340 345 350
Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu lie Ser Trp Arg His Pro 355 360 365
His Phe Pro Thr Arg Tyr Tyr Arg lie Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly 370 375 380
Asn Ser Pro Val Gin Glu Phe Thr Val Pro Leu Gin Pro Pro Thr Ala 385 390 395 400
Thr lie Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr lie Thr Val Tyr 405 410 415
Ala Val Thr Asp Gly Arg Asn Gly Arg Leu Leu Scr He Pro lie Ser 420 425 430 lie Asn Tyr Arg Thr 435 <210> 28 <211> 1425 <212> DNA <213>人工序列
<220> <223>BPC1825 (經由GS連接子融合於抗VEGFdAb之CTLM-Ig) <400> 28 atgcat,gtcg cccagccagc ggtggtgctg gccagctccc gcggcattgc ctccttcgtg 60 tgcgagtacg ccagccccgg caaggccacc gaggtgcgcg tcacggtgct ccgccaggcc 120 gatagccagg tgaccgaagt gtgtgccgct acgtacatga tggggaacga gctgaccttc 180 ctggacgact ctatctgcac cgggacctcg agcgggaacc aggtgaacct gaccatccag 240 ggcctgcgcg cgatggacac gggcctgtac atctgcaagg tggagttgat gtaccccccc 300 ccgtactacc tggggatcgg caacggcacg cagatctacg tcatcgaccc cgaaccttgc 360 cctgacagcg accaggagcc caagtctagt gacaagaccc atacctctcc ccccagcccc 420 gctccagagc tgctgggggg ctccagcgtg ucctgtuc cccccaagcc taaggacacc 480 ctgatg;uct ccagaacccc cgaggtgacc tgcgtggtcg (ggatgtgag tcacgaggac 540 cctgaggtga agitcaactg gtacgtggac ggggtggagg tgcataacgc caagaccaag 600 cctcgcgagg agcagtacaa cagtacctac cgcgtggtgt ccgtgctcac tgtgctgcat 660 caggactggc tgaacggcaa ggagtataag tgcaaggtgt ctaacaaggc cttgcccgcc 720 cccatcj;aga aaacaatctc caaggccaaa gggcagccca gggaacctca ggtgtacacc 780 ctccctccaa gccgtgacga gctgaccaag aaccaggtct ctctgacctg cttggtgaag 840 ggcttctacc ctagcgacat cgctgtggag tgggagtcca acgggcagcc cgagaacaac 900 tacaaaacca ccccgcccgt gctggactct gacggctcct tcttcctgta cagcaaactg 960 accgtgaaca agtccaggtg gcagcaggga aacgtgttca gctgcagcgt catgcatgag 1020 gccctgcata accattacac acagaagagc ctgtccctga gccccggcaa gggatccgag 1080 gtgcagctcc tggtcagcgg cggcggcctg gtccagcccg gaggctcact gaggctgagc 】140 tgcgccgcta gcggcttcac cttcaaggcc taccccatga tgtgggtcag gcaggccccc 1200 ggcaaaggcc tggagtgggt gtctgagatc agccccagcg gcagctacac ctactacgcc 】260 gacagci；tga agggcaggtt caccatcagc agggacaaca gcaagaacac cctgtacctg 1320 cagatgaact ctctgagggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccaa ggaccccagg 1380 aagclggact attggggcca gggcactctg gtgaccgtga gcagc 1425 <210> 29 <21)> 467 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> BPC1825 (經由GS連接子融合於抗VEGF dAb之CTLA4-Ig) <400〉 29
Met His Val Ala Gin Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly lie 15 10 15
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Asp Gly Lys Ala Thr Glu Val Arg Val 20 25 30
Thr Val Leu Arg Gin Ata Asp Ser Gin Val Thr Glu Vai Cys Ala Ala 35 40 45
Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser lie Cys 50 55 60
Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gin Val Asn Leu Thr lie Gin Gly Leu 148213·序列表.doc -15-
Q 201106963 65 70 75 80
Arg Ala Met Asp Thr Gly lie Cys Lys Val Glu Leu Mel 丁yr Pro Pro 85 90 95
Pro Tyr Tyr Leu Gly Me Gly Asn Gly Thr Gin lie Tyr Val lie Asp 100 105 110
Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gin Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys 115 120 125
Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser 130 135 140
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 145 150 155 160
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 165 170 175
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 180 185 190
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser 195 200 205
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 210 215 220
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 225 230 235 240
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 245 250 255
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 260 265 270
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 275 · 280 285
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 290 295 300
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 305 310 315 320
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 325 330 335
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu 340 345 350
Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser 355 360 365
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro 370 375 380
Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 385 390 395 400
Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 405 410 415
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 420 425 430
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 435 440 . 445
Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 450 455 460
Val Ser Ser 465 <210> 30 <211> 126 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 抗11^〇1 mAb 重鍵 <400> 30
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly .Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly •16·
148213·序列表.doc 201106963 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Π5 120 125 <2)0> 31 <2M> 107 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223> 抗丁1^〇1 mAb 輕鍵 <400> 3)
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Scr Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 丨le Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp 65 70 75 80
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg 100 105 <210> 32 <211> 444 <212> PRT <213>人工序列 <220> <2234iTNFctmAb (英利昔單抗）重鏈 <400> 32
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 ]0 15
Ser Met. Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe Ser Asn His 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Glu lie Arg Ser Lys Ser lie Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Me Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala 65 70 75 80
Val Tyr Leu Gin Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
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Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 -17- 148213·序列表.doc 201106963
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Va! 290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser 325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Glp Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430
Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 33 <211> 214 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>〗^TNFamAb (英利昔單抗）輕鏈 <400> 33
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Phe Val Gly Ser Ser 20 25 30 lie His Trp Tyr Gin Gtn Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Thr Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser His Ser Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 34 <211> 463 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>TNFR-Fc融合物（依那西普） <400> 34
Leu Pro Ala Gin Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser 15 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gin Thr Ala Gin Met Cys Cys 20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gin His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr -18·
148213-序列表.doc 201106963 35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gin Leu 50 55 60
Trp Asn Trp Va] Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser 65 70 75 80
Asp Gin Val Glu Thr Gin Ala Cys Thr Arg Glu Gin Asn Arg He Cys 85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gin Glu Gly Cys 100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala 115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro 130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp lie Cys Arg Pro His 145 150 155 160
Gin lie Cys Asn Val Val Ala lie Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala 165 170 175
Val Cys； Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val 180 185 190
His Leu Pro Gin Pro Va! Ser Thr Arg Ser Gin His Thr Gin Pro Thr 195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly 210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Va! Glu Val 290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val 305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 325 330 335
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 340 345 350
Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 355 360 365
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 385 390 395 400
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210〉 35 <211> 108 <212> PKT <213>人工序列 <220> <223〉抗TNFaVKdAb (PEP1-5-19) <400> 35
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Vai Thr lie 下hr Cys Arg Ala Ser Gin Ser ile Asp Ser Tyr 20 25 30
Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Val Yal Trp Arg Pro Phe -19- 148213·序列表.doc 201106963 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210〉 36 <211> 106 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> ^TNFaVKdAb (PEP1-5-490) <400> 36
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Asp Ser Tyr 20 25 30
Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp 65 70 75 80
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe 85 90 95
Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210〉 37 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223；ΜΛΤΝΡανκάΑΙ) (PEP1-5-493) <400> 37
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ala lie Asp Ser Tyr 20 25 30
Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Leu lie Pro Glu 65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin .Val Val Trp Arg Pro Phe Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 38 <211> 245 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>抗丁]^〇15。〜（ESBA105) <400〉 38
Asp Me Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gin Ser Val Ser Asn Asp 20 25 30
Val Val Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Giy Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp Tyr Asn Ser Pro Arg •20· 148213·序列表.doc 201106963 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly 丁hr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly 01y Gly 100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser 115 120 125
Gin Va.l Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 130 135 140
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 145 150 155 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 165 170 175
Gly Trp lie Asn 丁hr 丁yr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe 180 185 190
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr 195 200 205
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220
Ala Ar.g Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser 245
<210> 39 <211> 229 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>抗VEGFFab (藺尼單抗）重鏈 <400〉 39
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leo Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr 20 25 30
Gly Met Asn Trp Va) Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Gly Trp He Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser. Thr Ser Gly Gly 130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His 195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220
Asp Lys Thr His Leu 225 <210〉40 <211> 214 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223M；LVEGFFab (蘭尼單抗）輕鏈 <400> 40
Asp lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -21 - 148213·序列表.doc 201106963
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30
Leu Asn 丁rp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu lie 35 40 45
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 41 <211> 126 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>抗VEGF抗體（R84)重鏈 <400> 41
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr lie Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Gly Arg Ser Met Phe Arg Gly Val lie lie Pro Phe Asn Gly 100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 42 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223y；LVEGF抗體（R84)輕鏈 <400> 42
Asp lie Arg Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Leu -22-
148213-序列表.doc 201106963 85 90 95 Thr Phe Gly Giy Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 43 <211> 424 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> VEGFR1/2雜合物-Fc融合物（阿柏西普·VEGF·捕獲劑） <400〉 43
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu lie Pro Glu 15 10 15 lie lie His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val lie Pro Cys Arg Val 20 25 30
Thr Ser Pro Asn lie Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr 35 40 45
Leu lie Pro Asp Gly Lys Arg lie lie Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe 50 55 60
lie lie Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu lie Gly Leu Leu Thr Cys Glu 65 70 75 80 Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr Gin Thr 85 90 95
Asn Thr lie lie Asp Val Val Leu Ser Pro Scr His Gly lie Glu Leu 100 105 110 Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu 115 120 125
Asn Val Gly lie Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gin 130 135 140 His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gin Ser Gly Ser Glu 145 150 155 160 Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr lie Asp Gly Val Thr Arg Ser 1.65 170 175 Asp Glri Gly Thr Cys Ala Ala Scr Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn 180 185 190 Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 195 200 205
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 210 215 220 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Va] 225 230 235 240 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 245 250 255 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 260 265 270 Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 275 280 285 His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 290 295 300 Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly 305 310 315 320 Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 325 330 335 Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 340 345 350 Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 355 360 365 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Scr Phe Phe 370 375 380 Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe 385 390 395 400 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 405 410 415 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 420 <210> 44 <211> 108 <212> PRT <2丨3>人工序列 148213-序列表.doc 23- 201106963 <220> <223> 抗VEGFVicdAb (DOM15-10-11) <400> 44 Asp lie Gin Met Thr
Asp Arg Val Leu Arg Trp 35 Tyr His Thr 50 Ser Gly Ser 65 Glu Asp Phe
Thr lie 20 Tyr Gin Ser lie Gly Thr
Gin Ser Pro Ser Thr Cys Gin Lys
Leu Gin 55 Asp Phe 70 Tyr Tyr
Arg Ala 25 Pro Oly 40 Ser Gly
Ala Thr 85 Thr Phe G!y Gin Gly Thr Lys 100
Thr Leu Cys Gin Val Glu 105
Ser Leu 10 Ser Gin Lys Ala Val Pro Thr lie 75 Gin Tyr 90 lie Arg
Ser Ala Ser Trp He Gly 30 Pro Lys Leu 45 Ser Arg Phe 60 Ser Ser Leu Met Phe Gin Gly
Val Gly 15 Pro Glu Leu Ile Ser Gly Gin Pro 80 Pro Met 95 <210> 45 <211> 86 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> CT01 <400> 45
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu lie Ser Trp Arg His 1 5 10 15 Pro His Phe Pro Thr Arg Tyr Tyr Arg He Thr Tyr Gly Glu Thr Gly 20 25 30 Gly Asn Ser Pro Val Gin Glu Phe Thr Val Pro Leu Gin Pro Pro Thr 35 40 45 Ala Thr lie Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr lie Thr Val 50 55 60
Tyr Ala Val Thr Asp Gly Arg Asn Gly Arg Leu Leu Ser lie Pro lie 65 70 75 80 Ser He Asn Tyr Arg Thr 85 <210> 46 <211> 1767 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>FC失效之抗TNFamAb (阿達木單抗）-DOM15-26-593重鏈 (Fc失效之DMS4⑻0 mAbdAb重鏈）
<400> 46 atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcacagcgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg cggcggactg gtgcagcccg gcagaagcct gagactgagc 120 tgtgccgcca gcggcttcac cttcgacgac tacgccatgc actgggtgag gcaggcccct 180 ggcaagggcc tggagtgggt gtccgccatc acctggaata gcggccacat cgactacgcc 240 gacagcgtgg agggcagatt caccatcagc cgggacaacg ccaagaacag cctgtacctg 300 cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacc gccgtgtact actgtgccaa ggtgtcctac 360 ctgagcaccg ccagcagcct ggactactgg ggccagggca ccctggtgac agtctcgagc 420 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 480 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcctgt gaccgtgtcc 540 tggaatagcg gagccctgac ctccggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 600 ggcctgtact ccctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 660 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaaag tggacaagaa agtggagccc 720 aagagctgcg ataagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct ggccggcgcc 780 cctagcgtgt tcctgttccc ccccaagcct aaggacaccc tgatgatcag caggaccccc 840 gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgagc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga gcagtacaac 960 agcacctacc gcgtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag 1020 gagtacaagt gcaaagtgag caacaaggcc ctgcctgccc ctatcgagaa aaccatcagc 1080 aaggccaagg gccagcctag agagccccag gtctacaccc tgcctccctc cagagatgag 1140 148213-序列表.doc 24- 201106963 ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1260 ctggacagcg atggcagctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gagcagatgg 1320 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc 1380 cagaai>agtc tgagcctgtc ccctggcaag tcgaccggtg aggtgcagct gctggtgtct 1440 igcggcggac tggtgcagcc tggcggcagc ctgagactga gctgcgccgc cagcggcttc 1500. accttcaagg cctaccccat gatgtgggtg cggcaggccc ctggcaaggg cctggaatgg 1560 gtgtccgaga tcagccccag cggcagctac acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg 1620 ttcaccatca gccgggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg 1680 gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc aaggaccccc ggaagctgga ctactggggc 1740 cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc 1767 <210> 47 <211> 564 <212〉 PRT <213>人工序列 <220> <223> FC失效之抗TNFamAb (阿達木單抗）-DOM15-26-593重鏈 (Fc 失效之DMS4000 mAbdAb 重鍵）
<400> 47 Glu Val Gin I Ser Leu Arg Ala Met His 35 Ser Ala lie 50 Glu GW Arg 65 Leu Gin Met Ala Lys Val Gin Glv Thr 115 Val Phe Pro 130 Ala Leu Gly 145 Ser Trp Asn Va! Leu Gin Ser Ser Leu 195 Ser Asn Thr 210 Thr His Thr 225 Ser Val Phe
Leu Val 5 Leu Ser 20 Trp Val Thr Trp Phe Thr Asn Ser 85 Ser Tyr 100 Leu Val Leu Ala Cys Leu Ser Gly 165 Ser Ser 180 Gly Thr Lys Val Cys Pro
Leu Phe 245 rg Thr Pro Glu Val 260 Lys Phe lr〇 Glu Va) 275 la Lys Thr 290 ’aI Leu Thr 05 ：ys Lys Val ;er Lys Ala ro Ser Arg 355 〖aI Lys Gly 370 丨ly Gin Pro 85 ,sp Gly Ser
Lys Pro Val Leu Ser Asn 325 Lys Gly 340 Asp Glu Phe Tyr Glu Asn Phe Phe
Glu Ser Cys Ala Arg Gin Asn Ser 55 lie Ser 70 Leu Arg Leu Ser Thr Val Pro Ser 135 Val Lys 150 Ala Leu Gly Ser Gin Thr Asp Lys 215 Pro Cys 230 Pro Pro Thr Cys Asn Trp Arg Glu 295 His Gin 310 Lys Ala Gin Pro Leu Thr Pro Ser 375 Asn Tyr 390 Lys Lys
Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro 10 Gly Phe Thr
Ala Ser 25 Ala Pro 40 Gly His Arg Asp A13 Glu Thr Ala 0 105 Ser Ser 120 Ser Lys Asp Tyr Thr Ser Leu Ser τ 185 Jvr He 200 Lys Val Pro Ala Lys Pro Val Val 265 Tyr Val 280 Glu Gin Asp Trp Leu Pro Arg Glu r 345 Lys Asn 360 Asp He Lys Thr Leu Thr
Phe Asp 30 Gly Lys Gly Leu Glu 45 Ala Asp
He Asp Tyr 60 Asn Ala Lys 75 Asp Thr Ala 90 Ser Ser Leu
Asn Ser Val Tyr
Asp Tyr 110 Ala Ser Thr Lys Gly 125 Gly Gly
Ser Thr Ser 140 Phe Pro Glu 155 Gly Val His 170 Ser Val Val Cys Asn Val Glu Pro Lys 220 Pro Glu Leu 235 Lys Asp Thr 250 Va] Asp Val Asp Gly Val Tyr Asn Ser 300 Leu Asn Gly 315 Ala Pro He 330 Pro Gin Val Gin Val Ser Ala Val Glu 380 Thr Pro Pro 395 Val Asp Lys
Pro Val Thr Phe Thr Va) 190 Asn His 205 Ser Cys Ala Gly Leu Met Ser His 270 Giu Val 285 Tyr Val Lys Glu Glu Lys Tyr Thr 350 Leu Thr 365 Trp Glu Val Leu Ser Arg
Gly Arg 15 Asp Tyr Trp Val Ser Val Leu Tyr 80 Tyr Cys 95 Trp Gly Pro Ser Thr Ala Thr Val 160 Pro Ala 175 Pro Ser Lys Pro Asp Lys Ala Pro 240 lie Ser 255 Glu Asp His Asn Val Ser Tyr Lys 320 Thr He 335 Leu Pro Cys Leu Ser Asn Asp Ser 400 Trp Gin 148213-序列表.doc -25· 201106963 405 410 415
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Thr Gly 435 440 445
Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 450 455 460
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr 465 470 475 480
Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Lea Glu Trp Val 485 490 495
Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 500 505 510
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 515 520 525
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 530 535 540
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 545 550 555 560
Thr Val Ser Ser <2I0> 48 <211> 1758 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> EtanSTG593 <400> 48 ctgcccgctc aggtggcctt cactccclac gccccagagc ccggctctac ctgcaggctg 60 aggga£tact acgaccagac cgcccagatg tgctgcagca agtgcagccc cggccagcac 120 gccaaagtgt tctgcaccaa gaccagcgac accgtgtgcg atagctgcga ggacagcacc 180 tacacccagc tgtggaactg ggtccccgag tgcctgagct gcggctctag gtgtagcagc 240 gaccaggtcg agacccaggc ctgcaccagg gaacagaacc ggatctgcac atgcaggccc 300 ggctggtact gcgccctcag caaacaggag ggctgcaggc tgtgtgcccc cctcaggaag 360 tgcaggcccg ggtttggcgt ggccaggccc ggaaccgaga ctagcgacgt ggtgtgcaaa 420 ccctgcgccc ccggcacctt cagcaatacc actagcagca ccgacatctg caggcctcac 480 cagatctgca acgtggtggc cattcccggc aacgcaagca tggacgccgt gtgcaccagc 540 accagcccca ccaggtcaat ggcccctgga gccgtgcatc tgccccagcc cgtgagcacc 600 agaagccagc acacccagcc tacccccgag cccagcaccg cccctagcac cagcttcctg 660 ctgcctatgg gcccctcccc tcccgccgag ggctcaaccg gcgacgaacc caagagctgc 720 gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcaccagaac tcctgggcgg acccagcgtg 780 ttcctgticc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gcaggacccc cgaggtgacc 840 tgtgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac 960 agggtggtga gcgtcctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaaa 1080 ggccagccca gggagccaca ggtgtacaca ctgcccccca gcagggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctatc ccagcgatat cgccgtggag 1200 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccgt cctggactcc 1260 gacgggagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc 1320 aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1380 ctgagcctga gccccggcaa gtcgaccggt gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga 1440 ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag 1500 gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc cctggcaagg gcctggaatg ggtglccgag 1560 atcagcccca gcggcagcta cacctactac gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc 1620 agccgggaca acagcaagaa caccctgtac ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac 1680 accgccgtgt actactgcgc caaggacccc cggaagctgg actactgggg ccagggcacc 1740 ctggtgaccg tgagcagc 1758 <210> 49 <211> 582 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> EtanSTG593 <400> 49
Leu Pro Ala Gin Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser 15 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gin Thr Ala Gin Met Cys Cys -26-
148213-序列表.doc 201106963 20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gin His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr 35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gin Leu 50 55 60
Trp A:»n Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser 65 70 75 80
Asp Gin Val Glu Thr Gin Ala Cys Thr Arg Glu Gin Asn Arg lie Cys 85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gin Glu Gly Cys 100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala 115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro 130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp lie Cys Arg Pro His 145 150 155 160
Gin lie Cys Asn Val Val Ala lie Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala 165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val 180 185 190
His Leu Pro Gin Pro Val Ser Thr Arg Ser Gin His Thr Gin Pro Thr 195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly 210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Va] Thr Cys Val Val Va] Asp Val Ser His 275 280 285
Glu Asp Pro Glu Va] Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val 305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 325 330 335
Tyr Ly：s Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 340 345 350
Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 355 360 365
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Va! Ser Leu Thr 370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 385 390 395 400
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Glri Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445
His Asri His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser 450 455 460
Thr Gly Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro 465 470 475 480
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys 485 490 495
Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 500 505 510
Trp Val Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp 5]5 520 525
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 丨le Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 530 535 540
Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 545 550 555 560
Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 565 570 575
Leu Val Thr Val Ser Scr 580 <210> 50 <211> 1827 27- 148213-序列表.doc 201106963 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> EtanTV4593 <400> 50 ctgcccgctc aggtggcctt cactccctac gccccagagc ccggctctac ctgcaggctg 60 agggagtact acgaccagac cgcccagatg tgctgcagca agtgcagccc cggccagcac 120 gccaaagtgt tctgcaccaa gaccagcgac accgtgtgcg atagctgcga ggacagcacc 180 tacacccagc tgtggaactg ggtccccgag tgcctgagct gcggctctag gtgtagcagc 240 gaccaggtcg agacccaggc ctgcaccagg gaacagaacc ggatctgcac atgcaggccc 300 ggctggtact gcgccctcag caaacaggag ggctgcaggc tgtgtgcccc cctcaggaag 360 tgcaggcccg ggtttggcgt ggccaggccc ggaaccgaga ctagcgacgt ggtgtgcaaa 420 ccctgcgccc ccggcacctt cagcaatacc actagcagca ccgacatctg caggcctcac 480 cagatctgca acgtggtggc cattcccggc aacgcaagca tggacgccgt gtgcaccagc 540 accagcccca ccaggtcaat ggcccctgga gccgtgcatc tgccccagcc cgtgagcacc 600 agaagccagc acacccagcc tacccccgag cccagcaccg cccctagcac cagcttcclg 660 ctgcctatgg gcccctcccc tcccgccgag ggctcaaccg gcgacgaacc caagagctgc 720 gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcaccagaac tcctgggcgg acccagcgtg 780 ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gcaggacccc cgaggtgacc 840 tgtgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac .900 ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac 960 agggtggtga gcgtcctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaaa 1080 ggccagccca gggagccaca ggtgtacaca ctgcccccca gcagggagga gatgaccaag 1140
aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctatc ccagcgatat cgccgtggag 1200 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccgt cctggactcc 1260 gacgggagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc 1320 aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1380 ctgagcctga gccccggcaa gaccgtggcg gcgcccagca cggtggccgc cccctccacc 1440 gtcgccgcgc caagcaccgt ggctgctccg tcgaccggtg aggtgcagct gctggtgtct 1500 ggcggcggac tggtgcagcc tggcggcagc ctgagactga gctgcgccgc cagcggcttc 1560 accttcaagg cctaccccat gatgtgggtg cggcaggccc ctggcaaggg cctggaatgg 1620 gtgtccgaga tcagccccag cggcagctac acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg 1680 ttcaccatca gccgggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg 1740 gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc aaggaccccc ggaagctgga ctactggggc 1800 cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc 1827 <210> 51 <211> 605 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> EtanTV4593 <400> 51 Leu Pro Ala Gin Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gin Thr Ala Gin Met Cys Cys 20 25 30 Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gin His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr 35 40 45 Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gin Leu 50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser 65 70 75 80 Asp Gin Val Glu Thr Gin Ala Cys Thr Arg Glu Gin Asn Arg lie Cys 85 90 95 Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gin Glu Gly Cys 100 105 110 Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala 115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro 130 135 140 Gly Thr Phe Ser Asn Th'r Thr Ser Ser Thr Asp lie Cys Arg Pro His 145 150 155 160 Gin lie Cys Asn Val Val Ala lie Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala 165 170 175 Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val 180 185 190 His Leu Pro Gin Pro Val Ser Thr Arg Ser Gin His Thr Gin Pro Thr 195 200 . 205 Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly 28- 148213·序列表.doc 201106963 210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 丁rp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val 305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 325 330 335
Tyr Lys； Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 340 345 350
Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 355 360 365
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 385 390 395 400
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 405 410 , 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr 450 455 460
Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro 465 470 475 480
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Gly Glu Val Gin Leu Leu Val Ser 485 490 495
Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 500 505 510
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gin 515 520 525
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly .530 535 540
Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser 545 550 555 560
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 565 570 575
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu 580 585 590
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 595 600 605 <210> 52 <211> 37 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG18 引子 <400> 52 attatgggat ccaccggcga ggtgcagctg ttggtgt 37 <210> 53 <211> 40 <212〉 DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG19 引子 <400> 53 gctggggccc ttggtgctag cgctcgagac ggtgaccagg 40 <210> 54 <211> 44 •29- 148213-序列表.doc 201106963 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG26 引子 <400> 54 ctcgagcgct agcaccaagg gccccagcga catccagatg accc <210> 55 <211> 37 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <223> AVG21 引子 <400> 55 ttatgtcaag cttttaccgt ttgatttcca ccttggt <210> 56 <211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG22 引子 <400> 56 attatgggat ccaccggcga catccagatg acccagtctc c <210> 57 <211> 37 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG36 引子 <400> 57 gcgccgccac cgtacgtttg atttccacct tggtccc <210> 58 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG37 引子 <400> 58 caaacgtacg gtggcggcgc cgagcgaggt gcagctgttg gtgtc <210> 59 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> AVG25 引子 <400> 59 ttatgtcaag cttttagctc gagacggtga ccag <210> 60 <211〉 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>AVG24 引子 <400> 60 ggtggaaatc aaacgtacgg tggcggcgcc gagcga -30· 1482Π-序列表.doc 201106963 <210> 61 <211> 693 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> DOM15-26-593-PEP1-5-19 内嵌融合物 <400> 61 gaggtgcagc tgttggtgtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttaag gcttatccga tgatgtgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtttcagag atttcgcctt cgggttctta tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaagatcct 300 cggaagttag actactgggg tcagggaacc ctggtcaccg tctcgagcgc tagcaccaag 360 ggccccagcg acatccagat gacccagtct ccatcctctc tgtctgcatc tgtaggagac 420 cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag agcattgata gttatttaca ttggtaccag 480 cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctatagtg catccgagtt gcaaagtggg 540 gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct gggacagatt tcactctcac catcagcagt 600 ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac tgtcaacagg ttgtgtggcg tccttttacg 660 ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa egg 693
<2I0> 62 <2I1> 231 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223> DOM15-26-593-PEP1-5-19内嵌融合物 <400> 62
Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr 20 25 30
Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys G1y Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Glu He Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ly.s Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Asp lie Gin Met Thr 115 120 125
Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Yal Gly Asp Arg Val Thr He 130 135 140
Thr Cyis Arg Ala Ser Gin Ser lie Asp Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gin 145 150 155 160
Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ser Ala Ser Glu 165 170 175
Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 180 185 190
Asp Phc Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr 195 200 205
Tyr Tyr Cys Gin Gin Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gin Gly 210 215 220
Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 225 230 <210> 63 <211> 690 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> PEP1-5-19-DOM15-26-593 内嵌融合物 <400> 63 gacatccaga tgaeccagtc tccatcctct ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gageattgat agttatttac attggtacca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatetatagt gcatccgagt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 -31 - 148213-序列表.doc 201106963 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag gttgtgtggc gtccttttac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgtacggtg gcggcgccga gcgaggtgca gctgttggtg 360 tctgggggag gcttggtaca gcctgggggg tccctgcgtc tctcctgtgc agcctccgga 420 ttcaccttta aggcttatcc gatgatgtgg gtccgccagg ctccagggaa gggtctagag 480 tgggtttcag agatttcgcc ttcgggttct tatacataci acgcagactc cgtgaagggc 540 cggttcacca tctcccgcga caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg 600 cgtgccgagg acaccgcggt atattactgt gcgaaagatc ctcggaagtt agactactgg 660 ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 690 <210> 64 <211> 230 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> PEP1-5-19-DOM15-26-593 内嵌融合物 <400〉 64
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Asp Ser Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Val Val Trp Arg Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro 115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys 130 135 140
Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 145 150 155 160
Trp Val Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp 165 170 175
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 180 185 190
Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 195 200 205
Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 210 215 220
Leu Val Thr Val Ser Ser 225 230
<210> 65 <211> 352 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223> DMS1571-DOM 15-26-593抗VEGF dAb之 具有myc標籤之Fc格式化型式（以該序列之二聚體形式存在） <400> 65
Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr 20 25 30
Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Glu lie Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 32· 148213·序列表.doc 201106963 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 130 135 140
Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr 180 185 190
Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu 195 200 205
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 210 215 220
Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro 225 230 235 240
Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin 245 250 255
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 260 265 270
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 275 280 285
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val 290 295 300
Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 305' 310 315 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 325 330 335
Pro Gly Lys Gly Ser Glu Gin Lys Leu lie Ser Glu Glu Asp Leu Asn 340 345 350 <210> 66 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <223>連接子 <400> 66
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 15 10 15
Gly Ser <210〉 67 <211> 26 <212> PFT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 67
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 15 10 15
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser 20 25 <210> 68 <21l> 34 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 68
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 15 10 15
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser -33- 148213-序列表.doc 201106963 25 30 20
Gly Ser <210> 69 <21l> 571 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>具有GSTVAAPSGS連接子之Fc失效之抗TNFa mAb (阿達木單抗）-DOM15-26-593重鏈 <400> 69
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg „1 , 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr , 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly His Me Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160
Ser 丁卬 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175
Val Leu Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser 290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365
Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Oly Ser Thr 435 440 445
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly Gly 450 455 460
Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser -34- 148213-序列表.doc 201106963 465 470 475 480
Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro 485 490 495
Giy Lys Gly Leu Glu Trp Va! Ser Glu He Ser Pro Ser Gly Ser Tyr 500 505 510
Thr Tvr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp 515 520 525
Asn Scr Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 5:10 535 540
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr 545 550 555 560
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 565 570 <210> 70 <211> 579 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>具有GS(TVAAPSGS)x2連接子之Fc失效之抗TNFamAb (阿達木單抗）-DOM15-26-593重鏈 <400> 70
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly His Me Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
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148213·序列表.doc 201106963
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148213·序列表 _doc 201106963
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Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 245 250 255
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Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 275 280 285
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148213·序列表.doc 201106963
Pro S'er Va] Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 260 265 270
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255
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Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350
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Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp •66-
148213-序列表.doc 201106963 245 250 255
Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Va) Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn 290 295 300
Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pto 325 330 335 lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val 355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Me Ala Va] 370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys.Thr Val Ala Ala Pro Ser Glu Val Gin Leu Leu Val Ser Gly 450 455 460
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 465 470 475 480
Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val'Arg Gin Ala 485 490 495
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Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 515 520 525
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Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125
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Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 丁yr Phe Pro 145 150 155 . 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170 175 •67- M8213-序列表.doc 201106963
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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285
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Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val 355 360 365
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Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr His Thr Ser lie Leu Gin Ser 500 505 510
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Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly lie Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 100 105 110 -68·
148213·序列表.doc 201106963
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Thr Lys Gly Pro Ser Va) Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 145 150 155 160
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Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255
Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn. Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285
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Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 305 310 3】5 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 lie Glu Lys Thr lie Scr Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val 355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 370 375 380
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Pro Va] Leu Asp Ser Asp Gly Scr Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly lie Arg Arg Ser 450 455 460
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Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu Me 35 40 45
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Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 •70·
148213-序列表.doc 201106963
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arii Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp lie Gin Met Thr 210 215 220
Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie 225 230 235 240
Thr Cy：i Arg Ala Ser Gin Trp He Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gin 245 250 255
Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr His Thr Ser lie 260 265 270
Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Set Gly Ser Gly Thr 275 280 285
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Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu 340 345 350 •71 · 148213-序列表.doc 201106963
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 275 280 285
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 290 295 300
Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 305 310 315 320
Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 325 330 335
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Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 435 440 445
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 450 455 460
Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 465 470 475 480 •72-
1482Π-序列表.doc 201106963
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 485 490 495
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 500 505 510
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 515 520 525
Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly 530 535 540
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Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gin Ser Val Ser Asn Asp
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Val Val Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
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Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
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Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Ser Ala Ser Gin Asp He Ser 130 135 140
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Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu ISO 185 190
Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Thr Val 195 200 205
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Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 275 280 285
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 290 295 300
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 305 310 315 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 325 <210> 112 <211> 574 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> ESBA105-r84 DVD-Ig重鏈 •73· 148213-序列表.doc 201106963 <400> 112
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe 50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Gin Val Gin Leu 115 120 125
Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val 130 135 140
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala lie Ser Trp 145 150 155 160
Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glia 丁rp Met Gly Gly Phe Asp 165 170 175
Pro Glu Asp Gly Glu Thr lie Tyr Ala Gin Lys Phe Gin Gly Arg Val 180 185 190
Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser 195 200 205
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Ser Met Phe Arg Gly Val lie lie Pro Phe Asn Gly Met Asp Val Trp 225 230 235 240
Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 245 250 255
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 260 265 270
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 275 280 285
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 290 295 300
Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 305 310 315 320
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 325 330 335
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 340 345 350
Lys Thr His Thr Cys Pro Fro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 355 360 365
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 370 375 380
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Val Val Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
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Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Ala Ser Gin Asp Me Ser •76· 148213-序列表.doc 201106963 1:30 135 140
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Val Val 丁rp Tyr Gin G]n Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
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148213·序列表.doc 201106963
Asp lie Val Met Thr ] Asp Arg Val
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Thr Leu 20 Tyr Gin Phe Asn Gly Thr
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Leu Ser Ala Ser Gin Ser Ala Pro
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148213-序列表.doc 201106963 20 25 30
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Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr 15 10 15 -81 - 148213-序列表.doc 201106963
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Pro Arg Gin Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly 245 250 <210> 124 <211> 698 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>貝伐珠單抗王8丑八105〇1^叹以，重鏈 <400> 124
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148213·序列表.doc 201106963
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S 201106963
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Glu Leu Gin Ser Glv υ ,。 〇 210 y VaI Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu tv. ?!5 〇 220 225 Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro GIu Asp Phe Ala
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Ala Met Thr Val Asn λ nt. r, 10 »5 2〇 Sp Arg GIu Phe Pro GIu Met Asn Leu Glu Ser Val
Thr Pro 卷t Thr Leu Thr Leu Leu 仏 Gly His Asn Uu 仏 A|a Lys
Val & Met Uu 丨丨e ser (j|y Arg Cys Gin Glu Val Lys Ala Val Leu
Sy Arg m Lys Glu 於 Ss LyS Tyr Tm Ala SP G丨y Gly Lys His
Val Ala Tyr Ue ^ Pr。Ser Ala Val Arg Sp His Val lie Phe ?Sr Ser Glu Gly Gk Leu Hjs Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val
Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu G?u Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys
Ala AU Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser He Leu lie Pro Arg Gin Ser
Glu Thr Cys Ser Pr〇 Gly Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Ser Asp Val * ]5〇 16〇
Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu lie l〇5 i7〇 J75
Ser Trp Asp 巧又 His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr Arg lie Thr Tyr i〇U jgj ]qq
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<223>具有GS(TVAAPSGS)x2連接子之Fc失效之抗TNFa mAb (阿達木單抗）-DOMl5-26_593重鏈 <400> 142 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120 cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180 gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300 tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360 agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660 cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900 aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080 gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320 acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca cagtggctgc accttccggg 1380 tcaaccgtcg ccgcccccag cggaagcgag gtgcagctgc tggtgtctgg cggcggactg 1440 gtgcagcctg gcggcagcct gagactgagc tgcgccgcca gcggcttcac cttcaaggcc 1500 taccccatga tgtgggtgcg gcaggcccct ggcaagggcc tggaatgggt gtccgagatc 1560 agccccajicg gcagctacac ctactacgcc gacagcgtga agggccggtt caccatcagc 1620 cg£gacaaca gcaagaacac cctgtacctg cagatgaaca gcctgcgggc cgaggacacc 1680 gccgtgtact actgcgccaa ggacccccgg aagctggact actggggcca gggcaccctg 1740 gtgaccgtga gcagc 1755 <210> 143 <211> 1779 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>具有GS (TVAAPSGS)x3連接子之Fc失效之抗TNFamAb (阿達木單抗）-DOM15-26-593重鏈 <400> 143 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120 cctggca&gg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180 97- 1482 Π-序列表.doc 201106963 gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300 tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360 agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660 cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900 aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080 gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320 acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca ccgtcgccgc accaagcggg 1380 tcaacagtgg ccgctccctc cggcagcact gtggctgccc ccagcggaag cgaggtgcag 1440 ctgctggtgt ctggcggcgg actggtgcag cctggcggca gcctgagact gagctgcgcc 1500 gccagcggct tcaccttcaa ggcctacccc atgatgtggg tgcggcaggc ccctggcaag 1560 ggcctggaat gggtgtccga gatcagcccc agcggcagct acacctacta cgccgacagc 1620 gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg 1680 aacagcctgc gggccgagga caccgccgtg tactactgcg ccaaggaccc ccggaagctg 1740 gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagc 1779 <210> 144 <211> 1803 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <223>具有GS(TVAAPSGS)x4連接子之Fc失效之抗TNFa mAb (阿違木單抗）-DOM15-26-593重鏈 <400> 144 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60 agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120 cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180 gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300 tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360 agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt actccctgag cagcglggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660 cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780 cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900 aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080 gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320 acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca ccgtcgccgc accaagcgga 1380 tctaccgtcg cagccccttc cgggtcaaca gtggccgctc cctccggcag cactgtggct 1440 gcccccagcg gaagcgaggt gcagctgctg gtgtctggcg gcggactggt gcagcctggc 1500 ggcagcctga gactgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcaaggccta ccccatgatg 1560 tgggtgcggc aggcccctgg caagggcctg gaatgggtgt ccgagatcag ccccagcggc 1620 agctacacct actacgccga cagcgtgaag ggccggttca ccatcagccg ggacaacagc 1680 aagaacaccc tgtacctgca gatgaacagc ctgcgggccg aggacaccgc cgtgtactac 1740 tgcgccaagg acccccggaa gctggactac tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 1800 age 1803 <210> 145 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 98-
148213-序列表.doc 201106963 <220> <223>連接子 <400> 14.5
Pro Ala Ser Gly Ser <210> 146 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 146
Pro Asp Ala Ser Gly Ser <210> 147 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列
<220> <223>連接子 <400>147
Pro Asp Asp Ala Ser Gly Ser <210> 148 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> M8
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 149 <211> )5 <212> PRT <213>人工序列 <223>連接子 <400〉 149
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 15 10 15 <210> 150 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 150
Tbr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser 1 5 10 <210> 151 99· 148213·序列表.doc 201106963 <2il> 20 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 151
Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala-Ala Fro Ser Thr Val Ala Ala 15 10 15
Pro Ser Cly Ser 20 <210〉 152 <211> 42 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 152
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 15 10 15
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 20 25 30
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser 35 40 <210〉 153 <211> 50 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 153
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 15 10 15
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 20 25 30
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser 35 40 . 45
Gly Ser 50 <210> 154 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 154
Pro Ala Val Pro Pro Pro Gly Ser <210> 155 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 155
Pro Ala Val Pro Pro Pro Pro Ala Val Pro Pro Pro Gly Ser 1 5 10 -100- 148213-序列表.doc 201106963 <2!0> 156 <21]> 20 <212> ?RT <213>人工序列 <220〉 <223>連接子 <400> ；I56 Pro Ala Val Pro Pro Pro Pro Ala Val Pro Pro Pro Pro Ala Val Pro 15 10 15
Pro Pro Gly Ser 20 <210> 157 <211> δ <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 157 Thr Val Ser Asp Val Pro Gly Ser
<210> 158 <21]> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 158 Thr Val Ser Asp Val Pro Thr Val Ser Asp Val Pro Gly Ser 1 5 10 <210> li!9 <211> 20 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>連接子
<400> 159 Thr Val Ser Asp Val Pro Thr Va! Ser Asp Val Pro Thr Val Ser Asp 15 10 15
Val Pro Gly Ser 20 <210> 160 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 160 Thr Gly Leu Asp Ser Pro Gly Ser <210> 16) <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 148213-序列表.doc 101 - 201106963 <220> <223>連接子 <400> 161
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Gly Ser 1 5 10 <210> 162 <211> 20 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>連接子 <400> 162
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp 15 10 15
Ser Pro Gly Ser 20 •102· 1482丨3·序列表.doc

Claims (1)

  1. 201106963 七、申請專利範圍： 1. 一種包含TNFa拮抗劑及VEGF拮抗劑之組合物，其用於 預防或治療眼部疾病。 2. 如請求項1之組合物，其中該TNFa拮抗劑及該VEGF拮抗 劑為抗原結合蛋白。 3. 如請求項1之組合物，其中該TNFa拮抗劑及該VEGF拮抗 劑以雙靶向蛋白質形式存在。 4. 如請求項3之組合物，其中該雙靶向蛋白質包含至少一 φ 對結合TNFa或TNFa受體之VH/VL域及至少一對結合 VEGF或VEGF受體之VH/VL域。 5. 如請求項4之組合物，其中該雙靶向分子為DVD-Ig。 6. 如請求項3之組合物，其中該雙靶向蛋白質為雙特異性 抗體。 7. 如請求項3之組合物，其中該雙靶向蛋白質為dAb-dAb内 嵌融合物。 8. 如請求項3之組合物，其中該雙靶向蛋白質為連接於一 ® 或多個抗原決定基結合域之受體-Fc融合物。 9. 如請求項2之組合物，其中該TNFa拮抗劑為抗TNFa抗 體。 10·如請求項2之組合物，其中該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗 體。 11.如請求項3之組合物，其中該雙靶向蛋白質之該TNFa拮 抗劑部分為抗TNF抗體且其中該雙靶向蛋白質之該VEGF 拮抗劑部分為抗VEGF抗原決定基結合域。 148213.doc 201106963 12’如明求3項之組合物，其中該雙靶向蛋白質之該VEGF拮 抗劑部分為抗VEGF抗體且該雙靶向蛋白質之該TNFa拮 抗劑部分為抗TNF抗原決定基結合域。 13’如明求項8、11或12之組合物’其中該抗原決定基結合 域為dAb。 14·如°月求項13之組合物，其中該dAb為人類dAb。 15.如凊求項8、丨丨或12之組合物其中該抗原決定基結合 域源自非Ig骨架。 1 6.如明求項15之組合物’其中該抗原決定基結合域係選自 φ CTLA-4(伊維體（Evib〇dy))、脂質運載蛋白、蛋白質a衍 生刀子（諸如蛋白質A之Z結構域（親和抗體（Affibody)， SPA)、A結構域（高親和性多聚體（Avimer)/最大抗體 (MaXlb〇dy))、熱休克蛋白（諸如GroEI及GroES)、運鐵蛋 白（運載體（trans-body))、錨蛋白重複蛋白（DARPin);肽 適體C型凝集素結構域（四連接素（Tetranectin))、人類 γ_晶狀體球蛋白及人類泛素（親和素（affilins))、PDZ結構 域、壤毒素、人類蛋白酶抑制劑之庫尼茲型結構域籲 (kumtz type domain)及纖維結合蛋白（黏結素 (adnectin)) ° 1 7.如請求項8、11或12之組合物，其中該抗原決定基結合 域利用由1至30個胺基酸組成之連接子直接附接於該抗 原結合蛋白。 1 8.如請求項17之組合物，其中該連接子係選自SEq id NO: 3-8及25中所示者或其任何組合或多者。 148213.doc 201106963 19. 20. 21. 22. 鲁23. 24.
    25. 26. 27. 28. 如μ求項11或12之組合物，其中該抗原決定基結合域連 接於該抗原結合蛋白重鏈之Ν端。 如#求項11或12之組合物，其中該抗原決定基結合域連 接於该抗原結合蛋白輕鏈之ν端。 如》s求項11或12之組合物，其中該抗原決定基結合域連 接於該抗原結合蛋白重鏈之C端。 如请求項11或12之組合物，其中該抗原決定基結合域連 接於邊抗原結合蛋白輕鏈之C端。 如。月求項2至1 2中任一項之組合物，其中該抗原結合蛋 白匕s SEQ ID NO: 1〇中所示之重鏈中所含之CDRH1、 CDRH2及CDRH3以及SEq ID N〇: 12中所示之輕鏈中所 含之 CDRL1、CDRL2 及 CDRL3。 如请求項23之組合物’其包含SEq m N〇: 14、15、47、 69、70、71或72之重鏈序列及SEq m no: 12之輕鏈序 列。 如4求項3至1 2中任一項之組合物，其中該組合物係每4_ 6週經玻璃體内投與。 如凊求項1至1 2中任一項之組合物，其中該組合物包含 另一活性劑，視情況為消炎劑。 一種如請求項1至26中任一項之組合物的用途，其用於 製造用於預防或治療眼部疾病之藥劑。 一種用於預防或治療眼部疾病之TNFa拮抗劑，其係選自 由乂下、‘且成之群.阿達木單抗（adaiimUniab)、英利昔單 抗（.nfliximab)、依那西普（etanercept)、ESBA105、 148213.doc 201106963 PEPl-5-19、PEPl-5-490、PEPl-5-493、SEQ ID NO: 2之 黏結素、戈利木單抗（golimumab)、塞妥珠單抗 (certolizumab)、ALK-693 1 及包含 SEQ ID NO: 30 之重鍵 及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體，其中該TNFa拮抗劑將 組合選自由以下組成之群之VEGF拮抗劑投與：貝伐珠 單抗（bevacizumab)、蘭尼單抗（ranibizumab)、r84、阿柏 西普（aflibercept)、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、 PRS-050、PRS-051、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010及 DMS1571。 29. —種用於預防或治療眼部疾病之VEGF拮抗劑，其係選 自由以下組成之群：貝伐珠單抗、蘭尼單抗、r84、阿柏 西普、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、PRS-050、PRS-051、MP0012、CT-322、 ESBA903、EPI-0030、EPI-0010及DMS1571，其中該VEGF拮抗劑將組合 選自由以下組成之群之TNFa拮抗劑投與：阿達木單抗、 英利昔單抗、依那西普、ESBA105、PEPl-5-19、PEPl-5-490、PEP 1-5-493、SEQ ID NO: 2之黏結素、戈利木單 抗、塞妥珠單抗、ALK-6931及包含SEQ ID NO: 30之重 鏈及SEQ ID NO: 31之輕鏈的抗體。 3 0.如請求項28之TNFa拮抗劑或如請求29項之VEGF拮抗 劑，其中該TNFa拮抗劑為阿達木單抗且該VEGF拮抗劑 為蘭尼單抗。 3 1. —種醫藥組合物，其包含如請求項1至24中任一項之組 合物及醫藥學上可接受之載劑。 148213.doc 201106963 32.如請求項3 1之醫藥組合物，其中該組合物包含另一活性 劑，視情況為消炎劑。 33· —種聚核苷酸序列，其編碼如請求項2至24中任一項之 抗原結合蛋白。 3 4 · -種聚核苦酸序列’其編碼如請求項5、6或9至2 4中任 一項之組合物的重鏈或輕鏈。 3 5.如請求項34之聚核苷酸序列，其中該序列如SEq id NO: 11、13或46中所示。 36. —種重組轉型或轉染宿主細胞，其包含一或多種如請求 項33至35中任一項之聚核苷酸序列。 37. —種產生如請求項2至24中任一項之組合物的方法該 方法包括培養如請求項36之宿主細胞及分離該抗原結合 蛋白之步驟。 3 8.如π求項！至丨2中任一項之組合物，其經由玻璃體内途 徑遞送。 士 长項1至1 2中任一項之組合物，其經由眼周途徑遞 送。 士月长項3 9之組合物，其經由經鞏膜、結膜下、眼球筋 膜下、眼球周、局部、眼球後途徑遞送或其遞送至下直 肌、上直肌或外直肌。 求項1至1 2中任一項之組合物，其中該眼部疾病為 尿病丨生汽斑水腫、囊樣黃斑水腫、葡萄膜炎、 AMD(年齡#關黃斑變性）、脈絡膜新生灰管性AMD、糖 m視網膜病變、視網膜靜脈阻塞及其他黃斑病及眼 148213.doc 201106963 血管病變。 42. —種以如請求項1至24中任一項之組合物或雙革巴向蛋白 質於製造供預防或治療罹患眼部疾病之患者之藥劑中的 用途，其中該藥劑用於全身或局部投與該患者之眼部。 43. 如請求項42之用途，其中該患者罹患至少一種以下疾病 或病症：糖尿病性黃斑水腫、囊樣黃斑水腫、葡萄膜 炎、AMD(年齡相關黃斑變性）、脈絡膜新生血管性 AMD、糖尿病性視網膜病變、視網膜靜脈阻塞及其他黃 斑病及眼血管病變。 44. 一種雙靶向抗原結合分子，其包含TNFa拮抗劑部分、 VEGF拮抗劑部分及連接該TNFa拮抗劑部分於該VEGF拮 抗劑部分之連接子，其中： 該TNFa拮抗劑部分包含任一列於表1中之TNFa拮抗劑 的胺基酸序列； 該VEGF拮抗劑部分包含任一列於表2中之VEGF拮抗 劑的胺基酸序列； 該連接子為長度為1-150個胺基酸之胺基酸序列；且 該雙靶向分子不為DMS4000或DMS4031。 45. —種雙靶向抗原結合分子，其包含TNFa拮抗劑部分、 VEGF拮抗劑部分及連接該TNFa拮抗劑部分於該VEGF拮 抗劑部分之連接子，其中： 該TNFa拮抗劑部分包含任一列於表1中之TNFa拮抗劑 的胺基酸序列； 該VEGF拮抗劑部分包含任一列於表2中之VEGF拮抗 148213.doc 201106963 劑的胺基酸序列； 该連接子為長度為1-150個胺基酸之胺基酸序列；且盆 中該雙靶向抗原結合分子用於預防或治療眼部疾病且係 每4-6週經玻璃體内投與。 46. 如請求項44或45之雙乾向分子，其中該連接子係選自 SEQ ID NO: 3-8、25、66-68 及 145-162 中所示者或其任 何組合或多者。 47. 如請求項44或45之雙乾向抗原結合分子，其由seq ID 籲 N0: 62或SEQ ID NO: 64之胺基酸序列組成。 48. —種抗原結合蛋白，其包含沾卩ID no: 69、70、71或72 之重鏈序列及SEQ ID NO: 12之輕鏈序列。 49_ 一種醫藥組合物’其包含如請求項48之抗原結合蛋白及 另一活性劑，視情況為消炎劑。 5 0. 種聚核普酸序列，其編碼如請求項4 8之抗原結合蛋 白。 φ 5 1.如請求項50之聚核苷酸序列，其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 141、142、143 或 144及 SEQ ID NO·· 11。 148213.doc
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