CN102458471A - 用于治疗或预防眼病的TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗眼病的TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的组合，并提供了结合TNFα或TNFα受体和/或VEGF或VEGF受体的抗原结合蛋白。

Description

用于治疗或预防眼病的TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的组合
背景技术
视力损耗（Vision loss）已经成为发达经济的一个主要健康问题。失明或视力不良影响着超过300万40岁以上的美国公民，且这随着年龄显著增加。例如，年龄为80岁或以上的那些人占美国人口的约8%，但是尽管如此，占失明的几乎70%。通常与年龄有关的眼病包括年龄相关性黄斑变性 (AMD)、白内障、糖尿病黄斑水肿、视网膜静脉阻塞 (RVO)和青光眼。
年龄相关性黄斑变性(AMD)是发达国家中失明的主要原因。AMD存在2个主要的临床表现。萎缩性(干燥性)AMD的特征在于视网膜色素上皮 (RPE)和视神经视网膜的变性。萎缩性AMD的早期与玻璃疣在RPE细胞层下的形成有关。早期的萎缩性AMD可以发展成晚期疾病，其中RPE彻底变性，并在黄斑区域中形成边界清楚的RPE萎缩区域：“地理性萎缩”。在该疾病形式中，RPE的变性导致黄斑视杆和视锥的继发性死亡，且在这些情况下，这会导致严重的年龄相关的视力损耗。一部分AMD患者会发展，可以视作所述疾病的不同形式或另一种并发症。大约10-20%的AMD患者会发展脉络膜新血管生成 (CNV)。当发生时，该疾病形式称作“湿性AMD”，且这可以与一些最严重的视力损耗相关联。在湿性AMD中，新的脉络膜血管生长穿过玻璃膜中的裂缝，并增殖进入RPE和视神经视网膜中以及下面。目前没有确定的方式用于治疗非常流行的萎缩型AMD，也没有确定的方式用于防止早期干燥的AMD发展成地理性萎缩或湿性AMD (Petrukhin K, Expert Opin Ther Targets (2007) 11: 625-639)。
糖尿病黄斑水肿 (DME)是糖尿病患者的阅读视力损耗的最常见的原因。DME在29岁或以上的已经具有糖尿病的个体中的患病率是大约30% (Klein R 等人 Ophthalmology 1984: 91; 1464-1474)。DME与IL-6、VEGF和其它细胞因子的水平的增加有关，存在血液-视网膜屏障的泛化故障，从异常的视网膜毛细血管渗漏，并在视网膜下空间形成微动脉瘤。当前的DME治疗的目标是，减轻水肿和渗漏，产生提高的视敏度。良好的血糖控制和激光光凝术或抗血管生成治疗的目标是，防止或延迟糖尿病眼的中央黄斑区的进一步衰退。还已经使用皮质类固醇的玻璃体内注射。
在穿过视网膜静脉的血流阻塞以后，发生视网膜静脉阻塞。这可能是由于紧密关联的视网膜动脉中的血块形成或压力增加（由糖尿病、青光眼或高血压引起）。流出视网膜的血流量的减少，会导致眼血管中血压的泛化增加和眼中氧水平的降低。这又会导致异常的血管生长、出血和水肿、组织损伤和视力损耗。RVO存在2个主要形式：视网膜分支静脉阻塞 (BRVO)和视网膜中央静脉阻塞 (CRVO)。突然的视力模糊或视力损耗是RVO的常见特征。眼内的皮质类固醇已经被用于治疗RVO，尽管具有相关的白内障发展和眼内压升高的危险 (Kiernan DF 等人 Exp Opinion in Pharmacotherapy 2009 10(15) 2511-2525)。RVO的患病率是~ 0.2% (CRVO)至~0.7% (BRVO)。
葡萄膜炎主要影响工作年龄的人，且包括葡萄膜 (虹膜、睫状体和脉络膜)的炎症。前葡萄膜炎是葡萄膜炎的最常见形式，占葡萄膜炎病例的约75%，它主要影响虹膜和睫状体。葡萄膜炎被视作一种自身免疫病，并且病原学仍然未知。在约50%的病例中，存在与HLA-B27的关联。涉及后葡萄膜 (即脉络膜)的炎症被称作后葡萄膜炎，且视网膜的继发累及是常见的。葡萄膜炎主要是，CD4 T-细胞浸润进眼隔室中的炎性疾病 (Paroli MP 等人 2007 17(6) 938-942 Eur J Ophthalmology)。皮质类固醇仍然是治疗的主要药物，局部地眼周地或全身地给药。
TNF-α (肿瘤坏死因子-α)是一种促炎细胞因子，其已经与许多眼炎症相关联 (Theodossiadis等人, Am. J. Ophthalmol. (2009) 147: 825-830)。
已知VEGF (血管内皮生长因子)和VEGF-受体会刺激脉络膜血管和视网膜血管的血管生成，并调节这些血管的血管渗透性 (Gragoudas等人, N. Engl. J. Med (2004) 351: 2805)。
新生血管形成和渗漏是湿形式的年龄相关性黄斑变性的突出特征。现在已经批准使用适体培加尼布 (MacugenTM，其中和VEGF-A亚型165)和ranibizumab (LucentisTM，其阻断VEGF-A的所有亚型)。
炎症应答也在新生血管形成中起重要的病理生理学作用 (Sakuri等人,Invest Ophthalmol Vis Sci (2003) 44: 5349-5354; Oh等人Invest Ophthalmol Vis Sci (1999) 40: 1891-1898;Shi等人, Exp Eye Res (2006) 83: 1325-1334。
与TNFα拮抗剂有关的参考文献包括：Olson等人, Arch Opthalmol (2007) 125: 1221-1224; Shi等人, Exp Eye Res (2006) 83: 1325-1334Kociok等人, Invest Ophthalmol Vis Sci (2006) 11: 5057-5065Markomichelakis等人Am J Ophthalmol (2005) 139: 537-540。
研究表明，英夫利昔单抗的玻璃体内注射可能引起严重的眼内炎症反应，所述炎症反应表现为剂量相关的。使用阿达木单抗没有观察到这种不利事件(计划4247, 海报D913, 用于治疗顽固性糖尿病黄斑水肿的玻璃体内的TNF 抑制剂：来自泛美共同视网膜研究组的一项初步研究（Intravitreal TNF inhibitors in the Treatment of Refractory Diabetic Macular Edema: A Pilot Study from the Pan American Collaborative Retina Study Group），和计划4749, 海报D1087, 玻璃体内的TNF 抑制剂的眼的和全身的安全性：来自泛美共同视网膜研究组、视力和眼科学研究协会(ARVO)的一项初步研究（Ocular and Systemic Safety of Intravitreal TNF Inhibitors: A Pilot Study From the Pan American Collaborative Retina Study Group, The Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO)），2010年5月2-6日. Ft. Lauderdale USA)。
需要可有效地预防眼疾病进展并为更广泛的患者群体提供改善的视力的治疗方案。
发明内容
本发明涉及TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的组合，具体地，所述组合用于治疗眼病。
抗-VEGF方案和抗-TNF 方案都具有治疗AMD的基础，这些模态在机理上可能不重叠，所以对抗-VEGF 方案疗法没有成功地做出应答的患者可能对抗-TNF治疗做出应答，反之亦然。
与抗-VEGF分子的抗-血管生成活性相组合的抗-TNF的抗炎益处，会在治疗这样的眼病中提供提高的效能。
本发明涵盖了施用单独的TNFα拮抗剂和单独的VEGF拮抗剂的组合(即分开的TNFα和VEGF拮抗剂分子)。另外，本发明涵盖了施用具有双靶向功能性的单个构建体，所述构建体起TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的作用 (即能够结合和抑制、优选地阻断TNFα或TNFα受体的功能，并结合和抑制、优选地阻断VEGF或VEGF受体的功能)。单个构建体可以基于抗体骨架或其它这样的合适的骨架。受体-Fc融合体也被视作本发明的一部分。
本发明具体地涉及抗原结合蛋白。
具体地，本发明涉及TNFα/VEGF 双靶向单个构建体，其中所述TNFα拮抗剂部分是或源自人抗-TNFα抗体。所述TNFα抗体可以是阿达木单抗或戈利木单抗。
本发明具体地涉及用于治疗眼病的抗原结合蛋白，其包含与一个或多个表位-结合域相连的蛋白骨架，其中所述抗原结合蛋白具有至少2个抗原结合位点，其中的至少一个是来自表位结合域，且其中的至少一个是来自成对的VH/VL结构域，且其中至少一个抗原结合位点能够结合TNFα或TNFα受体例如TNFR1，且至少一个抗原结合位点能够结合VEGF或VEGF受体例如VEGFR2。
与一个或多个表位-结合域相连的受体-Fc融合体也是本发明的一部分，例如与VEGF或VEGF受体-结合域相连的TNFα受体-Fc融合体，或与TNFα或TNFα受体-结合域相连的VEGF受体-Fc融合体。
本发明提供了一种双靶向抗原结合分子，其包含TNFα拮抗剂部分、VEGF拮抗剂部分以及使所述TNFα拮抗剂部分与所述VEGF拮抗剂部分相连的连接物，其中所述TNFα拮抗剂部分包含在表1中列出的任一种TNFα拮抗剂的氨基酸序列；所述VEGF拮抗剂部分包含在表2中列出的任一种VEGF拮抗剂的氨基酸序列；所述连接物是长度为1–150个氨基酸的氨基酸序列；且所述双靶向分子不是DMS4000或DMS4031。连接物也可以是基于非肽的连接物，包括，例如，聚乙二醇 (PEG)和基于PEG的连接物。
本发明也提供了一种编码本发明的抗原结合蛋白的多核苷酸序列，例如编码本文所述的任意抗原结合蛋白的重链的多核苷酸序列，和编码本文所述的任意抗原结合蛋白的轻链的多核苷酸。这样的多核苷酸代表与等效多肽序列相对应的编码序列。但是，应该理解，可以将这样的多核苷酸序列与起始密码子、适当的信号序列和终止密码子一起克隆进表达载体中。
本发明也提供了一种转化的或转染的重组宿主细胞，其包含一个或多个编码本发明的抗原结合蛋白（例如本文所述抗原结合蛋白的重链和轻链）的多核苷酸。
本发明另外提供了一种用于生产本文所述的任意抗原结合蛋白的方法，所述方法包括下述步骤：在合适的培养基（例如无血清的培养基）中培养宿主细胞，所述宿主细胞包含至少一种含有编码本发明的抗原结合蛋白的多核苷酸的载体，例如第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码本文所述的抗原结合蛋白的重链的多核苷酸，且所述第二载体包含编码本文所述的抗原结合蛋白的轻链的多核苷酸。
本发明提供了一种适合全身递送或向眼局部递送的药物组合物，其包含本文所述的抗原结合蛋白和药学上可接受的载体。本发明的药物组合物可以另外包含其它的活性剂。
本发明提供了一种用于预防或治疗眼病的选自下述的TNFα拮抗剂：阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、ESBA105、PEP1-5-19、PEP1-5-490、PEP1-5-493、SEQ ID NO:2的adnectin、戈利木单抗、塞妥珠单抗、ALK-6931以及包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，其中所述TNFα拮抗剂将与选自下述的VEGF拮抗剂组合施用：贝伐单抗、ranibizumab、r84、aflibercept、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、PRS-050、PRS-051、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010和DMS1571。
本发明也提供了一种用于预防或治疗眼病的选自下述的VEGF拮抗剂：贝伐单抗、ranibizumab、r84、aflibercept、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、PRS-050、PRS-051、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010和DMS1571，其中所述VEGF拮抗剂将与选自下述的TNFα拮抗剂组合施用：阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、ESBA105、PEP1-5-19、PEP1-5-490、PEP1-5-493、SEQ ID NO:2的adnectin、戈利木单抗、塞妥珠单抗、ALK-6931以及包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体。
本发明也提供了一种双靶向抗原结合分子，其包含TNFα拮抗剂部分、VEGF拮抗剂部分以及使所述TNFα拮抗剂部分与所述VEGF拮抗剂部分相连的连接物，其中：
所述TNFα拮抗剂部分包含在表1中列出的任一种TNFα拮抗剂的氨基酸序列；
所述VEGF拮抗剂部分包含在表2中列出的任一种VEGF拮抗剂的氨基酸序列；
所述连接物是长度为1–150个氨基酸的氨基酸序列；且
所述双靶向分子不是DMS4000或DMS4031。
本发明也提供了一种双靶向抗原结合分子，其包含TNFα拮抗剂部分、VEGF拮抗剂部分以及使所述TNFα拮抗剂部分与所述VEGF拮抗剂部分相连的连接物，其中：
所述TNFα拮抗剂部分包含在表1中列出的任一种TNFα拮抗剂的氨基酸序列；
所述VEGF拮抗剂部分包含在表2中列出的任一种VEGF拮抗剂的氨基酸序列；
所述连接物是长度为1–150个氨基酸的氨基酸序列；且其中所述双靶向抗原结合分子是用于预防或治疗眼病，且每4-6周玻璃体内地给药。
本发明也提供了一种抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:69、70、71或72的重链序列和SEQ ID NO:12的轻链序列。
也提供了一种预防或治疗遭受眼病的患者的方法，所述方法包括：全身地或局部地向患者的眼施用预防或治疗有效量的本文公开的组合物或双靶向蛋白。
附图说明
图1显示了抗-TNFα/抗-VEGF mAb-dAb DMS4000的SDS-PAGE分析。
图2显示了抗-TNFα/抗-VEGF mAb-dAb DMS4000的尺寸排阻色谱曲线。
图3显示了DMS4000的抗-VEGF活性。
图4显示了DMS4000的抗-TNFα活性。
图5显示了DMS4000的药代动力学(PK)性质。
图6显示了ELISA的结果，并证实了双特异性的BPC1821 会结合VEGFR2和B7-1。
图7显示了ELISA的结果，并证实了双特异性的BPC1825显示出与VEGF和B7-1的结合。
图8描述了用于构建本发明的双靶向抗原结合分子的矩阵。
图9显示了PEP-DOM 构建体的BIAcore分析。
图10显示了PEP-DOM 构建体的BIAcore分析 (图9结合曲线的TNF/VEGF结合区的放大图)。
图11是表10所示数据的图解表示。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。黑色条表示第7天的结果。白色条表示第14天的结果。
图12是表11所示数据的图解表示。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。黑色条表示第7天的结果。白色条表示第14天的结果。
图13显示了在激光PC以后7天(第1次FS)和14天 (第2次FS)时的红外 (IR，左上图)、自发荧光(AF，左下图)和荧光素血管造影术 (FS，大图)——显示了实施例图像。1. 媒介物治疗的眼，2. 用2μg DMS1571治疗的眼，8. 用30μg EnbrelTM治疗的眼。值得注意的是， CNV损伤显得比与DMS1571治疗相对应的损伤更突出和弥散性更低。
图14是表12所示数据的图解表示。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。
图15显示了用ED1单抗（mab）染色的平坦固定的视网膜的实施例显微照片。图1A-1B和图Enbrel 8.4显示了来自用抗-VEGF (DMS1571) (1A)、仅媒介物 (1B)或Enbrel (Enbrel 8.4)处理过的眼的视网膜的平坦固定。用ED1 (CD 68，黑色) X20显影与激光烧伤部位有关的巨噬细胞。图1D显示了视网膜的恒冷箱切片 (20μm)，它显示了已经渗入视网膜的内核层 (INL)中的与激光烧伤部位有关的巨噬细胞(ED1+，黑色)。RGC，视网膜神经节细胞层；BV，血管。x20。
定义
本文使用的术语‘蛋白骨架’ 包括、但不限于免疫球蛋白(Ig)骨架，例如IgG骨架，其可以是4链或2链抗体，或者其可以仅包含抗体的Fc区，或者其可以包含一个或多个抗体恒定区，所述恒定区可以属于人或灵长类动物来源，或者其可以是人和灵长类动物恒定区的人工嵌合体。除了一个或多个恒定区以外，这样的蛋白骨架可以包含抗原结合位点，例如其中所述蛋白骨架包含完整的IgG。这样的蛋白骨架将能够与其它蛋白结构域相连，例如具有抗原结合位点的蛋白结构域，例如表位-结合域或ScFv结构域。
本文使用的术语‘受体-Fc融合体’表示，与抗体的Fc区相连的受体或细胞表面蛋白的可溶性配体或胞外结构域。在该定义内包括受体或细胞表面蛋白的这种可溶性配体或胞外结构域的片段，只要它们保留全长蛋白的生物学功能，即只要它们保留抗原结合能力。“结构域”是折叠的蛋白结构，其具有独立于蛋白的其余部分的三级结构。通常，结构域负责蛋白的离散的功能性质，并且在许多情况下，可以添加、去除或转移给其它蛋白，而不丧失该蛋白的其余部分和/或该结构域的功能。“抗体单个可变结构域” 是折叠的多肽结构域，其包含抗体可变结构域特有的序列。因此，它包括完整的抗体可变结构域和修饰的可变结构域(例如，其中一个或多个环已经被不是抗体可变结构域特有的序列所置换)，或者已被截短或包含N-端或C-端延伸的抗体可变结构域，以及至少保留全长结构域的结合活性和特异性的可变结构域的折叠片段。
“人源化的抗体”表示一类工程化的抗体，其具有源自非人供体免疫球蛋白的CDR，该分子的其余的免疫球蛋白-衍生的部分源自一种或多种人免疫球蛋白。此外，框架支持残基可以被改变，以保持结合亲和力(参见，例如，Queen 等人 Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson 等人 Bio/Technology, 9:421 (1991))。合适的人接受体抗体可以是选自常规数据库的一种（通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性），所述常规数据库例如KABAT? 数据库、Los Alamos 数据库和Swiss蛋白数据库。特征在于与供体抗体的框架区的同源性（在氨基酸的基础上）的人抗体，可以适合提供重链恒定区和/或重链可变框架区，用于插入供体CDR。以类似的方式，可以选择能够供给轻链恒定或可变框架区的合适的接受体抗体。应当指出，接受体抗体重链和轻链不需要源自相同的接受体抗体。现有技术描述了生产这样的人源化抗体的几种方法，参见例如EP-A-0239400和EP-A-054951。在一个实施方案中，本发明的抗体是人源化的抗体。
“CDR”被定义为抗原结合蛋白的互补性决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。在免疫球蛋白的可变部分中，存在3个重链和3个轻链CDR (或CDR区)。因而，本文使用的“CDR”表示所有3个重链CDR、所有3个轻链CDR、所有重链和轻链CDR或至少2个CDR。
“CDR变体”包括被至少一个氨基酸修饰的氨基酸序列，其中所述修饰可以是氨基酸序列的化学改变或部分改变 (例如改变了不超过10个氨基酸)，所述修饰允许变体保留未修饰的序列的生物学特征。例如，所述变体是结合和中和IL-18的功能变体。CDR氨基酸序列的部分改变可以是：删除或置换1个至几个氨基酸，或添加或插入1个至几个氨基酸，或它们的组合(例如改变了不超过10个氨基酸)。所述CDR变体可以在氨基酸序列中含有1、2、3、4、5或6个氨基酸置换、添加或删除的任意组合。所述CDR变体或结合单位变体可以在氨基酸序列中含有1、2或3个氨基酸置换、插入或删除的任意组合。氨基酸残基的置换可以是保守置换，例如，用一个疏水氨基酸置换一个被替代的疏水氨基酸。例如可以用缬氨酸或异亮氨酸置换亮氨酸。
术语“人抗体”表示源自人免疫球蛋白基因序列的抗体。这些全人抗体会提供重新工程化的或去免疫的啮齿动物单克隆抗体的替代品(例如人源化的抗体)，作为低免疫原性治疗抗体的来源，且它们通常使用噬菌体展示或转基因小鼠平台来制备。在一个实施方案中，本发明的抗体是人抗体。
短语“免疫球蛋白单个可变结构域”表示抗体可变结构域 (VH、VHH、VL)：其独立于不同的V区或结构域而特异性地结合抗原或表位。免疫球蛋白单个可变结构域可以以含有其它不同的可变区或可变结构域的形式(例如，同源多聚体或异源多聚体)存在，其中其它区域或结构域不是单个免疫球蛋白可变结构域的抗原结合所必需的(即其中免疫球蛋白单个可变结构域与抗原的结合独立于另外的可变结构域)。“结构域抗体”或“dAb”与“免疫球蛋白单个可变结构域”同义，后者作为本文所用的术语，能够结合抗原。免疫球蛋白单个可变结构域可以是人抗体可变结构域，但是也包括来自其它物种的单个抗体可变结构域，诸如啮齿动物(例如，如在WO 00/29004中所公开的)、铰口鲨和骆驼类(Camelid)VHHdAb。骆驼类VHH是这样的免疫球蛋白单个可变结构域多肽：其源自包括骆驼、骆马、羊驼、单峰骆驼和原驼在内的物种，且生产天然地缺少轻链的重链抗体。根据本领域可利用的标准技术，可以人源化这样的VHH结构域，且这样的结构域仍然被视作根据本发明的“结构域抗体”。本文使用的“VH”包括骆驼类VHH结构域。NARV是在包括铰口鲨在内的软骨鱼中鉴别出的另一类免疫球蛋白单个可变结构域。这些结构域也称作新颖的抗原受体可变区 (通常缩写为V(NAR)或NARV)。关于其它细节，参见Mol. Immunol. (2006) 44: 656-665和US20050043519A。
术语“表位-结合域”表示这样的结构域：其独立于不同的V区或结构域而特异性地结合抗原或表位，这可以是结构域抗体(dAb)，例如人、骆驼类或鲨鱼免疫球蛋白单个可变结构域，或它可以是作为选自下述的骨架的衍生物的结构域：CTLA-4 (Evibody)；脂质运载蛋白；蛋白A 衍生出的分子诸如蛋白A(亲和体、SpA)的Z-结构域、A-结构域 (Avimer/Maxibody)；热休克蛋白诸如GroEl和GroES；转铁蛋白 (反体)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域 (四连接素)； 人γ-晶体蛋白和人泛素 (affilins)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂的全蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；其已经进行蛋白工程化，以便实现与除了天然配体以外的配体的结合。
CTLA-4 (细胞毒性的T 淋巴细胞-相关的抗原 4)是主要在CD4+ T-细胞上表达的CD28-家族受体。它的胞外结构域具有可变结构域-样Ig 折叠。可以用异源序列置换与抗体的CDR相对应的环，以赋予不同的结合性质。被工程化成具有不同的结合特异性的CTLA-4分子也称作Evibodies。关于其它细节，参见Journal of Immunological Methods (2001) 248 (1-2): 31-45。
脂质运载蛋白是运输小疏水分子（诸如类固醇、后胆色素、类视色素和脂质）的胞外蛋白家族。它们具有刚性的β-折叠二级结构，该结构在圆锥形结构的开放末端处具有许多环，它们可以被工程化成结合不同的靶抗原。Anticalin的长度是160-180个氨基酸，且源自脂质运载蛋白。关于其它细节，参见Biochim Biophys Acta (2000) 1482: 337-350, US7250297B1和US20070224633。
亲和体是源自金黄色葡萄球菌的蛋白A的骨架，其可以被工程化成结合抗原。该结构域由大约58个氨基酸的三螺旋束组成。通过表面残基的随机化，已经制备了文库。关于其它细节，参见Protein Eng. Des. Sel. (2004) 17: 455-462和EP1641818A1。
Avimer是源自A-结构域骨架家族的多结构域蛋白。大约35个氨基酸的天然结构域采取确定的二硫键连接的结构。通过A-结构域家族表现出的天然变体的重排（shuffling），产生多样性。关于其它细节，参见Nature Biotechnology (2205) 23(12): 1556 - 1561和Expert Opinion on Investigational Drugs (June 2007) 16(6): 909-917。
转铁蛋白是单体的血清运输糖蛋白。通过将肽序列插入允许的表面环中，可以将转铁蛋白工程化成结合不同的靶抗原。工程化的转铁蛋白骨架的实例包括反体(Trans-body)。关于其它细节，参见J. Biol. Chem (1999) 274: 24066-24073。
设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)源自锚蛋白，所述锚蛋白是介导完整的膜蛋白与细胞骨架的连接的蛋白家族。单个锚蛋白重复是由2个α-螺旋和1个β-转角组成的33残基基序。通过将每个重复的第一个α-螺旋和β-转角中的残基随机化，可以将它们工程化成结合不同的靶抗原。通过增加模块的数目，可以增加它们的结合界面(亲和力成熟方法)。关于其它细节，参见J. Mol. Biol. (2003) 332: 489-503; PNAS (2003) 100(4): 1700-1705;和J. Mol. Biol. (2007) 369: 1015-1028和US20040132028A1。
纤连蛋白是可以被工程化成结合抗原的骨架。Adnectin由人纤连蛋白III型 (FN3)的15个重复单位的第10个结构域的天然氨基酸序列主链组成。可以工程化在β-夹心的一个末端处的3个环，以使Adnectin能够特异性地识别目标治疗靶物。关于其它细节，参见Protein Eng. Des. Sel. (2005) 18: 435-444、US20080139791、WO2005056764和US6818418B1。
肽适体是组合的识别分子，其由恒定的骨架蛋白组成，所述骨架蛋白通常是含有插入在活性部位处的受限可变肽环的硫氧还蛋白(TrxA)。关于其它细节，参见Expert Opin. Biol. Ther. (2005) 5: 783-797。
微体源自长度为25-50个氨基酸的天然存在的微蛋白，所述微蛋白含有3-4个半胱氨酸桥，微蛋白的实例包括KalataB1和芋螺毒素和knottins。所述微蛋白具有一个环，该环可以被工程化成包含最多25个氨基酸，而不影响微蛋白的总体折叠。关于工程化的knottin结构域的其它细节，参见WO2008098796。
其它表位结合域包括这样的蛋白：所述蛋白已经被用作骨架，以工程化不同的靶抗原结合性质，包括人γ-晶体蛋白和人泛素 (affilins)、人蛋白酶抑制剂的kunitz类型结构域、Ras-结合蛋白AF-6的PDZ-结构域、全蝎毒素(蝎毒素)、C-型凝集素结构域 (四连接素)，综述参见：Handbook of Therapeutic Antibodies (2007, Stefan Dubel编)中的第7章 – Non-Antibody Scaffolds，和Protein Science (2006) 15:14-27。本发明的表位结合域可以源自这些替代性的蛋白结构域中的任一种。
“双可变结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)”是双特异性的、四价的免疫球蛋白G (IgG)-样分子 (Wu等人Nature Biotechnology (2007) 25: 1290-1297)。可以将DVD-Ig定义为包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n，其中VD1是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，C是恒定结构域，X1代表氨基酸或多肽(连接物)，X2代表Fc区，且n是0或1 (WO 2007024715)。在本发明的上下文中，VDI 会结合TNFα或TNFα受体，且VD2 会结合VEGF或VEGF受体，或反之亦然。
本文使用的术语“成对的VH结构域”、“成对的VL结构域”和“成对的VH/VL结构域”表示，当与它们的配偶体可变结构域成对时，仅特异性地结合抗原的抗体可变结构域。在任一对中，总是存在一个VH和一个VL，术语“成对的VH结构域”表示VH配偶体，术语“成对的VL结构域”表示VL配偶体，且术语“成对的VH/VL结构域”表示在一起的2个结构域。
本文使用的术语“抗原结合蛋白”表示能够结合TNFα和/或VEGF的抗体、抗体片段，例如结构域抗体(dAb)、ScFv、FAb、FAb2和其它蛋白构建体，诸如受体-Fc融合体。抗原结合分子可以包含至少一个Ig 可变结构域，例如抗体、结构域抗体、多个结构域抗体例如哑铃状体、dAb-dAb 线内融合体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、ScFv、双特异抗体、mAbdAb、DVD-Ig、亲和体、异源缀合物抗体或双特异性体，包括具有对TNFα或TNFα受体的第一特异性和对VEGF或VEGF受体的第二特异性的双特异性抗体。在一个实施方案中，所述抗原结合分子是抗体。在另一个实施方案中，所述抗原结合分子是dAb，即免疫球蛋白单个可变结构域，诸如VH、VHH或VL，其独立于不同的V区或结构域特异性地结合抗原或表位。抗原结合分子可以能够结合2种靶物，即它们可以是双靶向蛋白。抗原结合分子可以是抗体和抗原结合片段的组合，例如，与单克隆抗体相连的一个或多个结构域抗体和/或一个或多个 ScFv。抗原结合分子也可以包含非-Ig结构域，例如作为选自下述的骨架的衍生物的结构域：CTLA-4 (Evibody)；脂质运载蛋白；蛋白A衍生的分子诸如蛋白A (亲和体、SpA) 的Z-结构域、A-结构域 (Avimer/Maxibody)；热休克蛋白诸如GroEl和GroES；转铁蛋白(反体)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域 (四连接素)；人γ-晶体蛋白和人泛素 (affilins)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂的全蝎毒素kunitz类型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；它们已经就那些蛋白工程化，以便实现与TNFα和/或VEGF的结合。本文使用的“抗原结合蛋白”能够拮抗和/或中和人TNFα和/或VEGF。另外，抗原结合蛋白可以如下阻断TNFα和/或VEGF活性：通过结合TNFα和/或VEGF，并阻止天然配体结合和/或活化受体。
本文使用的“VEGF拮抗剂”包括能够降低和/或消除VEGF的至少一种活性的任意化合物。作为实例，VEGF拮抗剂可以结合VEGF，且该结合可以直接地降低或消除VEGF活性，或它可以通过阻断至少一种配体与受体的结合而间接地起作用。
本文使用的“TNFα拮抗剂” 包括能够降低和/或消除TNFα的至少一种活性的任意化合物。作为实例，TNFα拮抗剂可以结合TNFα，且该结合可以直接地降低或消除TNFα活性，或它可以通过阻断至少一种配体与受体的结合而间接地起作用。
与抗原结合蛋白关联地使用的术语“特异性地结合”是指，该抗原结合蛋白会结合它的靶蛋白(例如TNFα、TNFR、BEGF、VEGFR)，且不结合或不显著地结合其它的(例如，无关的)蛋白。但是，该术语不排除下述事实，即针对特定物种(例如人)中的靶蛋白的抗体也可能与其它物种(例如非人灵长类动物)中的其它靶蛋白形式交叉反应。
术语“KD”表示平衡解离常数。在本发明的一个实施方案中，所述抗原结合位点会以最大1mM的KD结合抗原，例如对于每个抗原10nM、1nM、500pM、200pM、100pM的KD（通过BiacoreTM测得）。在本发明的一个实施方案中，所述抗原结合位点会以对于每个抗原10nM或更小、1nM或更小、500pM或更小、200pM或更小、100pM或更小的KD（通过BiacoreTM测得）结合抗原。
本文使用的术语“抗原结合位点”表示能够特异性地结合抗原的构建体上的位点，这可以是单个结构域，例如表位-结合域，或它可以是在标准抗体上可以发现的成对的VH/VL结构域。在本发明的有些方面，单链Fv (ScFv)结构域可以提供抗原结合位点。
术语“mAb/dAb”和dAb/mAb” 在本文中用于表示本发明的抗原结合蛋白。这2个术语可以互换使用，且意在具有本文使用的相同含义。
术语“恒定的重链1”在本文中用于表示免疫球蛋白重链的恒定结构域CH1。
术语“恒定的轻链”在本文中用于表示免疫球蛋白轻链的恒定结构域CL。
术语“文库”表示异质多肽或核酸的混合物。文库由成员组成，每个成员具有单个多肽或核酸序列。就这一方面而言，“文库”与“所有组分”同义。
“通用框架”是这样的单个抗体框架序列：其对应着在Kabat 所定义的序列(“Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 美国卫生和人类服务部)中保守的抗体区域，或对应着Chothia和Lesk, J. Mol. Biol. (1987) 196: 910-917所定义的人种系免疫球蛋白所有组分或结构。
具体实施方式
本发明提供了适用于眼的组合物，其包含TNFα拮抗剂和/或VEGF拮抗剂。本发明也提供了用于预防或治疗眼病的TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的组合。本发明也提供了一种预防或治疗眼病的方法，其中施用与VEGF拮抗剂相组合的TNFα拮抗剂。可以单独地、顺序地或同时地施用TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂。
本发明涵盖了施用单独的TNFα拮抗剂和单独的VEGF拮抗剂的组合(即分开的TNFα和VEGF拮抗剂分子)。另外，本发明涵盖了施用能够结合2种或更多种抗原的单个分子或构建体，例如本发明涵盖了具有双靶向功能性的分子，其起TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂的作用(即能够结合和抑制、优选地阻断TNFα或TNFα受体的功能，并结合和抑制、优选地阻断VEGF或VEGF受体的功能)。例如，本发明提供了一种双靶向分子，其能够结合TNFα和VEGFR2等。在一个实施方案中，所述双靶向分子能够结合TNF受体和VEGF受体。
本发明的TNFα拮抗剂可以使通过TNF受体的信号传递抑制了30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%或100%。本发明的VEGF拮抗剂可以使通过VEGF受体的信号传递抑制了30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%或100%。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是人抗原结合蛋白，具体地人抗-TNFα抗体或其片段或人抗-TNFR抗体或其片段。在一个实施方案中，所述VEGF拮抗剂是人抗原结合蛋白，具体地人抗-VEGF抗体或其片段或人抗-VEGFR抗体或其片段。在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白是TNFα/VEGF 双靶向单个构建体，其中所述TNFα拮抗剂部分是人。在一个具体实施方案中，所述TNF拮抗剂是或源自阿达木单抗或戈利木单抗。
所述拮抗剂可以基于本文所述的抗体骨架或其它这样的合适的骨架。这样的拮抗剂可以是抗体或表位结合域，例如dAb。受体-Fc融合体被视作本发明的一部分。
本发明的拮抗剂可以作为单独分子的混合物共同施用，它们可以同时施用(同时地)，或者相互在指定的时间段内施用(顺序地)，例如相互在1个月、1周内或24小时内，例如相互在20小时内、或在15小时内、或在12小时内、或在10小时内、或在8小时内、或在6小时内、或在4小时内、或在2小时内、或在1小时内、或在30分钟内。本发明的拮抗剂可以作为分开的制剂或作为单个制剂（例如含有2种拮抗剂的脂质体）共同施用。
在本发明范围内的TNFα拮抗剂（其可以与本发明的VEGF拮抗剂组合施用，或其可以用于制备本发明的双靶向分子）包括下面在表1中列出的那些。
表1: TNFα拮抗剂
Figure 721661DEST_PATH_IMAGE001
。
除了通过表1中的名称指出的TNFα拮抗剂以外，根据本发明的TNFα拮抗剂包括含有SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO: 31的轻链的抗体。
在本发明范围内的VEGF拮抗剂（其可以与本发明的TNFα拮抗剂组合施用，或其可以用于制备本发明的双靶向分子）包括下面在表2中列出的那些。
表2: VEGF拮抗剂
Figure 701118DEST_PATH_IMAGE002
。
本发明提供了用于治疗眼病的抗原结合蛋白，其包含与一个或多个表位-结合域相连的蛋白骨架，其中所述抗原结合蛋白具有至少2个抗原结合位点，其中的至少一个是来自表位结合域，且其中的至少一个是来自成对的VH/VL结构域，且其中至少一个抗原结合位点会结合TNFα或TNFα受体，且至少一个抗原结合位点会结合VEGF或VEGF受体。
这样的抗原结合蛋白包含与一个或多个表位-结合域（例如结构域抗体）相连的蛋白骨架，例如Ig骨架诸如IgG，例如单克隆抗体，其中所述结合蛋白具有至少2个抗原结合位点，其中的至少一个是来自表位结合域，且其中至少一个抗原结合位点会结合TNFα或TNFα受体，至少一个抗原结合位点会结合VEGF或VEGF受体，以及它们的生产和使用方法，特别是用于眼治疗中。
本发明的这样的抗原结合蛋白也称作mAbdAb。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白的蛋白骨架是Ig骨架，例如IgG骨架或IgA骨架。IgG骨架可以包含抗体的所有结构域 (即 CH1、CH2、CH3、VH、VL、CL)。本发明的抗原结合蛋白可以包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE的IgG骨架。
本发明的抗原结合蛋白具有至少2个抗原结合位点，例如它具有2个结合位点，例如其中第一结合位点具有对抗原上的第一表位的特异性，且第二结合位点具有对相同抗原上的第二表位的特异性。在另一个实施方案中，存在4个抗原结合位点、或6个抗原结合位点、或8个抗原结合位点、或10个或更多个抗原结合位点。在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白具有对超过一种抗原（例如2种抗原、或3种抗原或4种抗原）的特异性。
在另一个方面，本发明涉及能够结合TNFα或TNFα受体以及VEGF或VEGF受体的抗原结合蛋白，其包含至少一个具有2个或更多个式I结构的同源二聚体：
Figure 808751DEST_PATH_IMAGE003
其中
X表示包含重链恒定结构域2 (CH2)和重链恒定结构域3 (CH3)的恒定抗体区；
R1、R4、R7和R8各自表示表位-结合域；
R2表示选自下述的结构域：恒定的重链1(CH1)和表位-结合域；
R3表示选自下述的结构域：成对的VH和表位-结合域；
R5表示选自下述的结构域：恒定的轻链(CL)和表位-结合域；
R6表示选自下述的结构域：成对的VL和表位-结合域；
n表示独立地选自下述的整数：0、1、2、3和4；
m表示独立地选自下述的整数：0和1，
其中所述恒定的重链1 (CH1)和所述恒定的轻链(CL)结构域相结合；
其中存在至少一个表位结合域；
且当R3表示成对的VH结构域时，R6表示成对的VL结构域，使得2个结构域一起能够结合抗原。
在一个实施方案中，R6表示成对的VL，R3表示成对的VH。
在另一个实施方案中，R7和R8中的任一个或二者表示表位结合域。
在另一个实施方案中，R1和R4中的任一个或二者表示表位结合域。
在一个实施方案中，R4存在。
在一个实施方案中，R1、R7和R8表示表位结合域。
在一个实施方案中，R1、R7和R8和R4表示表位结合域。
在一个实施方案中，(R1)n、(R2)m、(R4)m和(R5)m= 0，即不存在，R3是成对的VH结构域，R6是成对的VL结构域，R8是VHdAb，且R7是VLdAb。
在另一个实施方案中，(R1)n、(R2)m、(R4)m和(R5)m是0，即不存在，R3是成对的VH结构域，R6是成对的VL结构域，R8是VHdAb，且(R7)m= 0，即不存在。
在另一个实施方案中，(R2)m，和(R5)m是0，即不存在，R1是dAb， R4是dAb，R3是成对的VH结构域，R6是成对的VL结构域，(R8)m和(R7)m= 0，即不存在。
在本发明的一个实施方案中，所述表位结合域是dAb。
在本发明的另一个方面，所述抗原结合蛋白是双特异性抗体，其具有对TNFα或TNFα受体的第一特异性和对VEGF或VEGF受体的第二特异性。
在本发明的另一个方面，所述抗原结合蛋白是双可变结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)。
在本发明的另一个方面，所述抗原结合蛋白是dAb-dAb 线内融合体。
在本发明的另一个方面，所述抗原结合蛋白是受体-Fc融合体，其可以与一个或多个表位-结合域相连。受体-Fc融合体包含免疫球蛋白骨架，即它们包含抗体的Fc部分，该Fc部分与受体或细胞表面蛋白的可溶性配体或胞外结构域以及一个或多个表位结合域相连。这样的受体-Fc-表位结合域融合体也可以称作受体-Ig-表位结合域融合体。Fc部分可以选自任意同种型的抗体，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白具有对VEGF的特异性，例如它们包含受体-Fc融合体，该融合体连接到会结合VEGF的表位结合域上，例如dAb、anticalin或会结合VEGF的adnectin。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白具有对VEGFR2的特异性，例如它们包含受体-Fc融合体，该融合体连接到会结合VEGFR2的表位结合域上，例如dAb或会结合VEGFR2的adnectin。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白具有对TNFα的特异性，例如它们包含受体-Fc融合体，该融合体连接到会结合TNFα的表位结合域上，例如dAb或会结合TNFα的adnectin。
在一个实施方案中， 本发明的抗原结合蛋白具有对TNFα或TNFα受体以及VEGF或VEGF受体的特异性，例如它们包含TNFα受体-Fc融合体，该融合体连接到会结合VEGF或VEGF受体的表位结合域上。另一个实例是包含VEGF受体-Fc融合体的抗原结合蛋白，该融合体连接到会结合TNFα或TNFα受体的表位结合域上。
应该理解，本文所述的任意抗原结合蛋白能够中和一种或多种抗原，例如它们能够中和TNFα，和/或它们还能够中和VEGF。
贯穿本说明书关于本发明的抗原结合蛋白使用的术语“中和”和其语法变体是指，与在没有这样的抗原结合蛋白存在下的靶物活性相比，在有本发明的抗原结合蛋白存在下，完全地或部分地降低了靶物的生物活性。中和可以是由于但不限于下述的一个或多个原因：阻断配体结合，阻止配体活化受体，减量调节受体，或影响效应物功能。
可以以几种方式测量中和水平，例如在IL-8分泌试验中，在MRC-5细胞中，这可以如例如在实施例1.3中所述地进行。在该试验中，通过评估在有中和抗原结合蛋白存在下IL-8分泌的抑制，测量TNFα的中和。还可以在测量配体与受体的结合的抑制的试验中，测量中和水平，这可以如例如在实施例1.3中所述地进行。在该试验中，通过评估在有中和抗原结合蛋白存在下配体和它的受体之间的结合的减少，测量VEGF的中和。
其它评估中和的方法（例如，通过评估在有中和抗原结合蛋白存在下配体和它的受体之间的结合的减少）是本领域已知的，且包括，例如，BiacoreTM试验。
在本发明的一个替代性的方面，提供了抗原结合蛋白，其具有与本文例证的抗原结合蛋白至少基本上等效的中和活性。
本发明的抗原结合蛋白具有对TNFα或TNFα受体的特异性，例如它们包含能够结合TNFα的表位-结合域，和/或它们包含会结合TNFα的成对的VH/VL。所述抗原结合蛋白可以包含能够结合TNFα的抗体。所述抗原结合蛋白可以包含能够结合TNFα的dAb。
本发明的抗原结合蛋白也具有对VEGF或VEGF受体的特异性。在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白能够同时地结合TNFα和VEGF。
应该理解，本文所述的任意抗原结合蛋白可以能够同时地结合2种或更多种抗原，例如，使用合适的试验（诸如在实施例3中所述的试验）通过化学计量分析测得。
这样的抗原结合蛋白的实例包括VEGF抗体，其具有作为TNFα拮抗剂的表位结合域，例如抗-TNFα adnectin，所述表位结合域连接至重链的C-端或N-端或轻链的C-端或N-端。实例包括这样的抗原结合蛋白：其包含在SEQ ID NO: 20或22中所述的重链序列和在SEQ ID NO: 21中所述的轻链序列，其中重链和轻链之一或二者另外包含一个或多个结合TNFα的表位-结合域，例如选自在SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 17中所述的那些的表位结合域。
在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白包含连接至作为TNFα拮抗剂的表位结合域上的抗-VEGF抗体，其中所述抗-VEGF抗体具有与下述抗体相同的CDR：所述抗体具有SEQ ID NO:20或22的重链序列和SEQ ID NO: 21的轻链序列。
这样的抗原结合蛋白的实例包括TNFα抗体，其具有作为VEGF拮抗剂的表位结合域，所述表位结合域连接至重链的C-端或N-端或轻链的C-端或N-端。实例包括这样的抗原结合蛋白：其包含在SEQ ID NO: 10中所述的重链序列和在SEQ ID NO: 12中所述的轻链序列，其中重链和轻链之一或二者另外包含一个或多个能够拮抗VEGF（例如通过结合VEGF或结合VEGF受体例如VEGFR2）的表位-结合域。这样的表位-结合域可以选自在SEQ ID NO: 1、18、19、23或44中所述的那些。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合构建体包含：SEQ ID NO: 14的重链序列和SEQ ID NO: 12的轻链序列，或SEQ ID NO：15的重链序列和SEQ ID NO：12的轻链序列，或SEQ ID NO：24的重链序列和SEQ ID NO：12的轻链序列。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合构建体包含在WO0212502、US2007/0003548、US7250165、EP01309691或WO0212500（它们都通过引用整体并入本文）中公开的抗-TNFα 结合蛋白。
在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白包含连接至作为VEGF拮抗剂的表位结合域上的抗-TNFα抗体，其中所述抗-TNFα抗体具有与下述抗体相同的CDR：所述抗体具有SEQ ID NO:10的重链序列和 SEQ ID NO: 12的轻链序列。
这样的抗原结合蛋白的其它实例包括具有抗-VEGF 表位结合域的抗-TNFα抗体，所述表位结合域连接至重链的C-端或N-端或轻链的C-端或N-端上，其中所述VEGF 表位结合域是选自下述的VEGF dAb：在WO2007080392 (它通过引用并入本文)中所述的任一个VEGF dAb序列，具体地在SEQ ID NO:117、119、123、127-198、539和540中所述的dAb；或选自下述的VEGF dAb：在WO2008149146 (它通过引用并入本文)中所述的任一个VEGF dAb序列，具体地被描述为DOM15-26-501、DOM15-26-555、DOM15-26-558、DOM15-26-589、DOM15-26-591、DOM15-26-594和DOM15-26-595的dAb；或选自下述的VEGF dAb：在WO2007066106 (它通过引用并入本文)中所述的任一个VEGF dAb序列；或选自下述的VEGF dAb：在WO 2008149147 (它通过引用并入本文)中所述的任一个VEGF dAb序列；或选自下述的VEGF dAb：在WO 2008149150 (它通过引用并入本文)中所述的任一个VEGF dAb序列。
在WO2007080392、WO2008149146、WO2007066106、WO2008149147和WO 2008149150中的这些具体的序列和有关的公开内容通过引用并入本文，如同明确地写入本文中，意图提供公开内容，用于整合进本文的权利要求书中，和作为用于本发明的上下文中的可变结构域和拮抗剂的实例。
这样的抗原结合构建体的其它实例包括具有一个或多个抗-TNFα 表位结合域的抗-VEGF抗体，所述表位结合域连接至重链的C-端或N-端或轻链的C-端或N-端上，其中所述TNFα 表位结合域是选自下述的TNF-α dAb：在WO04003019 (它通过引用并入本文)中公开的任一种TNFα dAb，具体地被描述为TAR1-5-19、TAR1-5和TAR1-27的dAb。在WO04003019中的这些具体的序列和有关的公开内容通过引用并入本文，如同明确地写入本文中，意图提供公开内容，用于整合进本文的权利要求书中，和作为用于本发明的上下文中的可变结构域和拮抗剂的实例。
这样的抗原结合构建体的其它实例包括具有一个或多个抗-TNFR1 表位结合域的抗-VEGF抗体，所述表位结合域连接至重链的C-端或N-端或轻链的C-端或N-端上，其中所述TNFR1 表位结合域是选自下述的TNFR1 dAb：在WO04003019 (它通过引用并入本文)中公开的任一种TNFR1 dAb序列，具体地被描述为TAR2-10和TAR2-5的dAb；或选自下述的TNFR1 dAb：在WO2006038027 (它通过引用并入本文)中公开的任一种TNFR1 dAb序列，具体地在SEQ ID NO: 32-98、167-179、373-401、431、433-517和627中所述的dAb；或选自下述的TNFR1 dAb：在WO2008149144 (它通过引用并入本文)中公开的任一种TNFR1 dAb序列，具体地被描述为DOM1h-131-511、DOM1h-131-201、DOM1h-131-202、DOM1h-131-203、DOM1h-131-204、DOM1h-131-205的dAb；或选自下述的TNFR1 dAb：在WO2008149148 (它通过引用并入本文)中公开的任一种TNFR1 dAb序列，具体地被描述为DOM1h-131-206的dAb。
在WO2006038027和WO2008149144中的这些具体的序列和有关的公开内容通过引用并入本文，如同明确地写入本文中，意图提供公开内容，用于整合进本文的权利要求书中，和作为用于本发明的上下文中的可变结构域和拮抗剂的实例。
抗原结合蛋白的其它实例包括连接到具有对VEGFR2的特异性的表位结合域上的TNFR2-Ig融合体，所述表位结合域例如抗-VEGFR2 adnectin，其连接至TNFR2-Ig融合体的C-端或N-端，例如包含在SEQ ID NO:34中所述的TNFR2-Ig序列的抗原结合蛋白，其另外包含一个或多个结合VEGFR2的表位-结合域，例如在SEQ ID NO:18中所述的adnectin。
这样的抗原结合蛋白的其它实例包括连接到具有对VEGF的特异性的表位结合域上的TNFR2-Ig融合体，所述表位结合域例如例如抗-VEGF dAb或抗-VEGF anticalin，其连接至TNFR2-Ig融合体的C-端或N-端，例如包含在SEQ ID NO:34中所述的TNFR2-Ig序列的受体-Fc-表位结合域融合体，其另外包含一个或多个结合VEGF的表位-结合域，例如在SEQ ID NO:1中所述的dAb，或在SEQ ID NO:19中所述的anticalin。
贯穿本说明书，根据Kabat编号规则，对可变结构域序列和全长抗体序列的氨基酸残基编号。类似地，在实施例中使用的术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”遵守Kabat编号规则。关于其它信息，参见Kabat 等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, 美国卫生和人类服务部, National Institutes of Health (1987)。
但是，尽管我们在本说明书中使用可变结构域序列和全长抗体序列的氨基酸残基的Kabat编号规则，本领域技术人员会明白，存在可变结构域序列和全长抗体序列的氨基酸残基的替代性的编号规则。也存在CDR序列的替代性的编号规则，例如在Chothia 等人 (1989) Nature 342: 877-883中所述的那些。抗体的结构和蛋白折叠可以是指，其它残基被视作CDR序列的一部分，且是技术人员会理解成这样的。
技术人员可利用的CDR序列的其它编号规则包括“AbM” (University of Bath)和“接触” (University College London) 方法。可以确定使用Kabat、Chothia、AbM和接触方法中的至少2种方法时的最小重叠区，以提供“最小结合单位”。最小结合单位可以是CDR的子部分。
具有CDR变体的抗原结合蛋白也被视作本发明的一部分。这样的抗原结合蛋白也可以具有一个或多个具有相同或不同的抗原-特异性的其它表位结合域，所述表位结合域连接至重链的C-端和/或N-端、和/或轻链的C-端和/或N-端、和/或受体-Fc或受体-Fc-dAb融合体的N-端或C-端上。
在本发明的一个实施方案中，提供了本文所述的根据本发明的抗原结合蛋白，其包含恒定区，使得所述抗体或受体-Fc融合体具有减少的ADCC和/或补体活化或效应物功能。在一个这样的实施方案中，所述重链恒定区可以包含IgG2或IgG4 同种型的天然有缺陷的恒定区或突变的IgG1恒定区。合适的修饰的实例描述在EP0307434中。一个实例包含在位置 235和237处的丙氨酸残基的置换(EU索引编号, Kabat等人, (1983) “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 美国卫生和人类服务部)。
在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白的Fc部分是功能上有缺陷的。这样的Fc缺陷可以给抗原结合蛋白提供提高的安全性特性。
本发明也提供了一种降低抗原结合蛋白的CDC功能的方法，其中将表位结合域放置在抗体的重链上，具体地，将表位结合域放置在重链的C-端上。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白会保留Fc功能性，例如能够具有ADCC和CDC活性之一或二者。
本发明的抗原结合蛋白可以具有一些效应物功能。例如如果免疫球蛋白骨架含有源自具有效应物功能的抗体的Fc区，例如如果免疫球蛋白骨架包含来自IgG1的CH2和CH3。根据已知的技术，可以改变效应物功能的水平，所述技术例如：通过CH2结构域中的突变，例如，其中IgG1 CH2结构域具有一个或多个在选自239和332和330的位置处的突变，例如所述突变选自S239D和I332E和A330L，使得所述抗体具有增强的效应物功能；和/或例如，改变本发明的抗原结合蛋白的糖基化特性，使得存在Fc区的岩藻糖基化的减少。
在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白包含作为结构域抗体(dAb)的表位-结合域，例如所述表位结合域可以是人VH或人VL，或骆驼类VHH或鲨鱼dAb (NARV)。
在一个实施方案中，所述抗原结合蛋白包含作为选自下述的骨架的衍生物的表位-结合域：CTLA-4 (Evibody)；脂质运载蛋白；蛋白A 衍生出的分子诸如蛋白A(亲和体、SpA)的Z-结构域、A-结构域 (Avimer/Maxibody)；热休克蛋白诸如GroEl和GroES；转铁蛋白 (反体)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域 (四连接素)； 人γ-晶体蛋白和人泛素 (affilins)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂的全蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；其已经进行蛋白工程化，以便实现与除了天然配体以外的配体的结合。
本发明的抗原结合蛋白可以包含连接至adnectin表位结合域上的蛋白骨架，例如具有连接至重链C-端上的adnectin 的IgG骨架，或它可以包含连接至adnectin上的蛋白骨架，例如具有连接至重链N-端上的adnectin 的IgG骨架，或它可以包含连接至adnectin上的蛋白骨架，例如具有连接至轻链C-端上的adnectin 的IgG骨架，或它可以包含连接至adnectin上的蛋白骨架，例如具有连接至轻链N-端上的adnectin 的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至CTLA-4表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的CTLA-4 的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的CTLA-4的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的CTLA-4的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的CTLA-4的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至脂质运载蛋白表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的脂质运载蛋白的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的脂质运载蛋白的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的脂质运载蛋白的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的脂质运载蛋白的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至SpA表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的SpA的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的SpA的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的SpA的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的SpA的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至亲和体表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的亲和体的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的亲和体的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的亲和体的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的亲和体的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至affimer表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的affimer的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的affimer的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的affimer的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的affimer的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至GroEI表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的GroEI的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的GroEI的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的GroEI的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的GroEI的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至转铁蛋白表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的转铁蛋白的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的转铁蛋白的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的转铁蛋白的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的转铁蛋白的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至GroES表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的GroES的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的GroES的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的GroES的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的GroES的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至DARPin表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的DARPin的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的DARPin的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的DARPin的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的DARPin的IgG骨架。
在其它实施方案中，它可以包含连接至肽适体表位结合域上的蛋白骨架，例如IgG骨架，例如具有连接至重链N-端上的肽适体的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至重链C-端上的肽适体的IgG骨架，或它可以包含例如具有连接至轻链N-端上的肽适体的IgG骨架，或它可以包含具有连接至轻链C-端上的肽适体的IgG骨架。
在本发明的一个实施方案中，存在4个表位结合域，例如4个结构域抗体，2个表位结合域可以具有对相同抗原的特异性，或在所述抗原结合蛋白中存在的所有表位结合域可以具有对相同抗原的特异性。
通过使用连接物，可以将本发明的蛋白骨架连接至表位-结合域上。类似地，通过使用连接物，可以将本发明的受体-Fc融合体连接至表位结合域上。通过使用连接物，也可以将DVD-Ig的VDI和VD2结构域连接到一起，等等。合适的连接物的实例包括这样的氨基酸序列：其长度可以是1个氨基酸至150个氨基酸，或1个氨基酸至140个氨基酸，例如， 1个氨基酸至130个氨基酸，或1至120个氨基酸，或1至80个氨基酸，或1至50个氨基酸，或1至20个氨基酸，或1至10个氨基酸，或5至18个氨基酸。这样的序列可以具有它们自己的三级结构，例如，本发明的连接物可以包含单个可变结构域。在一个实施方案中，连接物的大小等于单个可变结构域。合适的连接物的大小可以是1至20埃，例如小于15埃、或小于10埃、或小于5埃。
在本发明的一个实施方案中，使用包含1-150个氨基酸（例如1-20个氨基酸，例如1-10个氨基酸）的连接物，将至少一个表位结合域直接连接至Ig骨架上。
这样的连接物可以选自在SEQ ID NO: 3-8、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:66-68中所述的那些中的任一种，或多个这样的连接物。例如，所述连接物可以是‘TVAAPS’，或者所述连接物可以是‘GGGGS’或多个这样的连接物。
在本发明的一个实施方案中，所述连接物是‘STG’ (SEQ ID NO:25)。
连接物可以是具有1个或2个氨基酸变化的本文所述的任意连接物。用于本发明的抗原结合蛋白中的连接物可以包含包含单独的或与其它连接物组合的一个或多个GS残基集合，例如‘GSTVAAPS’或‘TVAAPSGS’或‘GSTVAAPSGS’或多个这样的连接物。在一个实施方案中，所述连接物包含‘GSTVAAPSGS’或由其组成。
在一个实施方案中，所述连接物包含GS(TVAAPSGS) x2 (例如‘GSTVAAPSGSTVAAPSGS’ SEQ ID NO:66)或由其组成。在一个实施方案中，所述连接物包含GS(TVAAPSGS) x 3 (例如‘GSTVAAPSGSTVAAPSGSTVAAPSGS’ SEQ ID NO:67)或由其组成。在一个实施方案中，所述连接物包含GS(TVAAPSGS) x 4 (例如‘GSTVAAPSGSTVAAPSGS TVAAPSGSTVAAPSGS’ SEQ ID NO:68)或由其组成。
在一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(PAS)n(GS)m’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(GGGGS)n或p(GS)m’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(TVAAPS)n或p(GS)m’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(GS)m(TVAAPSGS)n或p’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(GS)m(TVAAPS)p(GS)m’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(PAVPPP)n(GS)m’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(TVSDVP)n(GS)m’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘(TGLDSP)n(GS)m’连接至Ig骨架上。在所有这样的实施方案中，n = 1-10，且m = 0-4，且p=2-10。
这样的连接物的实例包括：(PAS)n(GS)m，其中n=1，且m=1 (SEQ ID NO：145)，(PAS)n(GS)m，其中n=2，且m=1 (SEQ ID NO：146)，(PAS)n(GS)m，其中n=3，且m=1 (SEQ ID NO：147)，(PAS)n(GS)m，其中n=4，且m=1，(PAS)n(GS)m，其中n=2，且m=0，(PAS)n(GS)m，其中n=3，且m=0，(PAS)n(GS)m，其中n=4，且m=0。
这样的连接物的实例包括：(GGGGS)n(GS)m，其中n=1，且m=1，(GGGGS)n(GS)m，其中n=2，且m=1，(GGGGS)n(GS)m，其中n=3，且m=1，(GGGGS)n(GS)m，其中n=4，且m=1，(GGGGS)n(GS)m，其中n=2，且m=0 (SEQ ID NO：148)，(GGGGS)n(GS)m，其中n=3，且m=0 (SEQ ID NO：149)，(GGGGS)n(GS)m，其中n=4，且m=0。
这样的连接物的实例包括：(GS)m(TVAAPS)p，其中p=1，且m=1，(GS)m(TVAAPS)p，其中p=2，且m=1，(GS)m(TVAAPS)p，其中p=3，且m=1，(GS)m(TVAAPS)p，其中p=4，且m=1)，(GS)m(TVAAPS)p，其中p=5，且m=1，或(GS)m(TVAAPS)p，其中p=6，且m=1。
这样的连接物的实例包括： (TVAAPS)n(GS)m，其中n=1，且m=1，(TVAAPS)n(GS)m ，其中n=2，且m=1 (SEQ ID NO：150)，(TVAAPS)n(GS)m，其中n=3，且m=1 (SEQ ID NO：151)，(TVAAPS)n(GS)m，其中n=4，且m=1，(TVAAPS)n(GS)m，其中n=2，且m=0，(TVAAPS)n(GS)m，其中n=3，且m=0，(TVAAPS)n(GS)m，其中n=4，且m=0。
这样的连接物的实例包括：(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=1，且m=1，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=2，且m=1 (SEQ ID NO：66)，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=3，且m=1 (SEQ ID NO：67)，或(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=4，且m=1 (SEQ ID NO：68)，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=5，且m=1 (SEQ ID NO：152)，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=6，且m=1 (SEQ ID NO：153)，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=1，且m=0 (SEQ ID NO：8)，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=2，且m=10，(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=3，且m=0，或(GS)m(TVAAPSGS)n，其中n=0。
这样的连接物的实例包括：(TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=2，且m=1，(TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=3，且m=1 ，(TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=4，且m=1，(TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=2，且m=0，(TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=3，且m=0，(TVAAPSGS)p(GS)m，其中p=4，且m=0。
这样的连接物的实例包括： (PAVPPP)n(GS)m，其中n=1，且m=1 (SEQ ID NO：154)，(PAVPPP)n(GS)m，其中n=2，且m=1 (SEQ ID NO：155)，(PAVPPP)n(GS)m，其中n=3，且m=1 (SEQ ID NO：156)，(PAVPPP)n(GS)m，其中n=4，且m=1，(PAVPPP)n(GS)m，其中n=2，且m=0，(PAVPPP)n(GS)m，其中n=3，且m=0，(PAVPPP)n(GS)m，其中n=4，且m=0。
这样的连接物的实例包括： (TVSDVP)n(GS)m，其中n=1，且m=1 (SEQ ID NO：157)，(TVSDVP)n(GS)m，其中n=2，且m=1 (SEQ ID NO：158)，(TVSDVP)n(GS)m，其中n=3，且m=1 (SEQ ID NO：159)，(TVSDVP)n(GS)m，其中n=4，且m=1，(TVSDVP)n(GS)m，其中n=2，且m=0，(TVSDVP)n(GS)m，其中n=3，且m=0，(TVSDVP)n(GS)m，其中n=4，且m=0。
这样的连接物的实例包括：(TGLDSP)n(GS)m，其中n=1，且m=1 (SEQ ID NO：160)，(TGLDSP)n(GS)m，其中n=2，且m=1 (SEQ ID NO：161)，(TGLDSP)n(GS)m，其中n=3，且m=1 (SEQ ID NO：162)，(TGLDSP)n(GS)m，其中n=4，且m=1，(TGLDSP)n(GS)m，其中n=2，且m=0，(TGLDSP)n(GS)m，其中n=3，且m=0，(TGLDSP)n(GS)m，其中n=4，且m=0。
在另一个实施方案中，在表位结合域和Ig骨架之间没有连接物。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘TVAAPS’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘TVAAPSGS’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘GS’连接至Ig骨架上。在另一个实施方案中，所述表位结合域通过连接物‘ASTKGPT’连接至Ig骨架上。
在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白包含至少一个抗原结合位点，例如至少一个能够结合人血清白蛋白的表位结合域。
在一个实施方案中，存在至少3个抗原结合位点，例如存在4或5或6或8或10个抗原结合位点，且所述抗原结合蛋白能够结合至少3或4或5或6或8或10种抗原，例如它能够同时地结合3或4或5或6或8或10种抗原。
本发明也提供了用于药学中的本文公开的抗原结合蛋白，例如用于制备药物，所述药物用于治疗眼的疾病(或者在本文中称作‘眼病’)，例如糖尿病黄斑水肿 (DME)、囊样黄斑水肿、葡萄膜炎、AMD (年龄相关性黄斑变性)、脉络膜新生血管AMD、地理性萎缩、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞 (BRVO和/或CRVO)和其它黄斑病变和眼血管病变。在一个实施方案中，要治疗的疾病是AMD。在另一个实施方案中，要治疗的疾病是DME。
本发明提供了一种治疗遭受眼病的患者的方法，所述眼病例如糖尿病黄斑水肿、囊样黄斑水肿、葡萄膜炎、AMD (年龄相关性黄斑变性)、脉络膜新生血管AMD、地理性萎缩、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞 (BRVO和/或CRVO)和其它黄斑病变和眼血管病变，所述方法包括：施用治疗量的本发明的抗原结合蛋白。
本发明的抗原结合蛋白可以用于治疗眼病，例如糖尿病黄斑水肿、囊样黄斑水肿、葡萄膜炎、AMD (年龄相关性黄斑变性)、脉络膜新生血管AMD、地理性萎缩、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞 (BRVO和/或CRVO)和其它黄斑病变和眼血管病变或与TNFα和/或VEGF的过量产生有关的任意其它疾病。
在一个具体实施方案中，所述疾病是AMD，具体地脉络膜新生血管AMD。
在本发明中使用的蛋白骨架包括：含有抗体的所有结构域的完整单克隆抗体骨架、常规抗体的Fc部分，或者本发明的蛋白骨架可以包含非常规的抗体结构，诸如单价抗体或非常规的抗体结构的Fc部分。这样的单价抗体可以包含成对的重链和轻链，其中重链的铰链区被修饰，使得所述重链不会同源二聚体化，诸如在WO2007059782中所述的单价抗体。其它单价抗体可以包含成对的重链和轻链，其与缺少功能可变区和CH1区的第二重链二聚体化，其中所述第一和第二重链被修饰，使得它们会形成异源二聚体而不是同源二聚体，产生具有2个重链和1个轻链的单价抗体，诸如在WO2006015371中所述的单价抗体。这样的单价抗体可以提供本发明的蛋白骨架，表位结合域可以与其相连。这样的单价抗体的Fc区可以提供本发明的免疫球蛋白骨架，受体或细胞表面蛋白的可溶性配体、胞外结构域和表位结合域可以与其相连。在这样的单价结构中，可能具有与第一重链相连的受体或细胞表面蛋白的可溶性配体或胞外结构域，和一个或多个与第二重链相连的表位结合域。
在本发明中使用的表位-结合域是独立于不同的V区或结构域而特异性地结合抗原或表位的结构域，这样可以是结构域抗体，或可以是作为选自下述的骨架的衍生物的结构域：CTLA-4 (Evibody)；脂质运载蛋白；蛋白A 衍生出的分子诸如蛋白A(亲和体、SpA)的Z-结构域、A-结构域 (Avimer/Maxibody)；热休克蛋白诸如GroEl和GroES；转铁蛋白 (反体)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域 (四连接素)； 人γ-晶体蛋白和人泛素 (affilins)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂的全蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；其已经进行蛋白工程化，以便实现与除了天然配体以外的配体的结合。在一个实施方案中，这可以是结构域抗体或其它合适的结构域，诸如选自下述的结构域：CTLA-4、lipocallin、SpA、亲和体、avimer、GroEl、转铁蛋白、GroES和纤连蛋白。在一个实施方案中，这可以选自：dAb、亲和体、锚蛋白重复蛋白(DARPin)和adnectin。在另一个实施方案中，这可以选自：亲和体、锚蛋白重复蛋白(DARPin)和adnectin。在另一个实施方案中，这可以是结构域抗体，例如选自人、骆驼类或鲨鱼 (NARV)结构域抗体的结构域抗体。
表位-结合域可以连接至蛋白骨架的一个或多个位置处。这些位置包括蛋白骨架的C-端和N-端，例如IgG的重链C-端和/或轻链C-端，或例如IgG的重链N-端和/或轻链N-端。
在一个实施方案中，将第一表位结合域连接至蛋白骨架上，并将第二表位结合域连接至第一表位结合域上，例如在蛋白骨架是IgG骨架的情况下，可以将第一表位结合域连接至IgG骨架的重链C-端上，并可以将该表位结合域在它的C-端处连接至第二表位结合域上，或者例如，可以将第一表位结合域连接至IgG骨架的轻链C-端上，并可以将该第一表位结合域在它的C-端处进一步连接至第二表位结合域上，或者例如，可以将第一表位结合域连接至IgG骨架的轻链N-端上，并可以将该第一表位结合域在它的N-端处进一步连接至第二表位结合域上，或者例如，可以将第一表位结合域连接至IgG骨架的重链N-端上，并可以将该第一表位结合域在它的N-端处进一步连接至第二表位结合域上。
当所述表位-结合域是结构域抗体时，可以将一些结构域抗体安置在骨架内的特定位置。
用于本发明中的结构域抗体可以连接在常规IgG的重链和/或轻链的C-端末端。另外，有些dAb可以连接至常规抗体的重链和轻链的C-端末端。
表位-结合域可以连接至受体-Fc融合体的一个或多个位置处。这些位置包括受体-Fc融合体的C-端和N-端。例如，它们可以直接地连接至受体-Fc融合体的Fc部分上，或者它们可以连接至受体-Fc融合体的受体或细胞表面蛋白部分的可溶性配体或胞外结构域上。在受体或细胞表面蛋白的可溶性配体或胞外结构域连接至Fc部分的N-端上的情况下，表位-结合域可以直接地连接至Fc部分的C-端上，或直接地连接至受体或细胞表面蛋白的可溶性配体或胞外结构域的N-端上。
在一个实施方案中，将第一表位结合域连接至受体-Fc融合体上，并将第二表位结合域连接至第一表位结合域上，例如可以将第一表位结合域连接至受体-Fc融合体的C-端上，并可以将该表位结合域在它的C-端处连接至第二表位结合域上，或者例如，可以将第一表位结合域连接至受体-Fc融合体的N-端上，并可以将该第一表位结合域在它的N-端处进一步连接至第二表位结合域上。当所述表位-结合域是结构域抗体时，可以将一些结构域抗体安置在骨架内的特定位置。
在将dAb 的N-端与抗体恒定结构域 (CH3或CL)融合的构建体中，肽连接物可以帮助dAb结合抗原。实际上，dAb的N-端末端的位置紧密靠近参与抗原结合活性的互补性-决定区(CDR)。因而，短的肽连接物会起蛋白骨架的表位-结合域和恒定结构域之间的隔离物的作用，这可以允许dAb CDR更容易地到达抗原，其因此可以以高亲和力进行结合。
使dAb连接至IgG上的环境随它们所融合的抗体链而异。当融合在IgG骨架的抗体轻链的C-端末端处时，预期每个dAb位于抗体铰链和Fc部分附近。这样的dAb的位置可能彼此远离。在常规抗体中，Fab 片段之间的角度以及每个Fab片段和Fc部分之间的角度可以存在非常显著的差异。对于mAbdAb，Fab 片段之间的角度不可能存在很大差异，同时关于每个Fab片段和Fc部分之间的角度，也可以观察到一些角度限制。
当融合在IgG骨架的抗体重链的C-端末端处时，预期每个dAb位于Fc部分的CH3结构域附近。预期这不会影响Fc对Fc受体(例如 FcγRI、II、III，FcRn)的结合性质，因为这些受体会与CH2结构域 (对于FcγRI、II和III类受体)啮合，或与CH2和CH3结构域之间的铰链 (例如 FcRn受体) 啮合。这样的抗原结合蛋白的另一个特征是，预期两种dAb在空间上彼此靠近，条件是，通过提供适当的连接物来提供柔性，这些dAb甚至可以形成同源二聚体物质，因此产生Fc部分的‘拉链样’四级结构，这可以增强构建体的稳定性。
这样的结构考虑可以辅助选择最合适的位置，以将表位-结合域（例如dAb）连接到蛋白骨架（例如抗体）上，或连接到受体-Fc融合体上。
抗原大小、其位置(在血液中或在细胞表面上)、其四级结构(单体或多聚体结构)可变化。因存在铰链区，常规抗体无需特别设计就能作为衔接构建体(adaptor construct)起作用，其中在Fab片段的末端的两个抗原结合位点的方向可大幅度地变化，因此能适应抗原的分子特性及其环境。相比之下，连接到抗体或其它蛋白骨架(例如包含无铰链区抗体的蛋白骨架)上的dAb可能直接或间接地具有较小的结构柔韧性。
理解溶液状态和Ab的结合模式也是有帮助的。积累了很多证据表明，体外dAb在溶液中可主要以单体、同源二聚体或多聚体形式存在(Reiter等人, J Mol Biol (1999) 290: 685-698; Ewert等人, J Mol Biol (2003) 325: 531-553, Jespers等人, J Mol Biol (2004) 337: 893-903; Jespers等人, Nat Biotechnol (2004) 22: 1161-1165; Martin等人,Protein Eng. (1997) 10: 607-614; Sepulvada等人, J Mol Biol (2003) 333: 355-365)。这很容易让人联想到在体内观察到的Ig结构域的多聚体化事件，例如Bence-Jones蛋白(它们为免疫球蛋白轻链的二聚体(Epp等人, Biochemistry (1975) 14: 4943-4952; Huan等人, Biochemistry (1994) 33: 14848-14857; Huang等人, Mol immunol (1997) 34: 1291-1301) 和淀粉样蛋白纤维(James等人J Mol Biol. (2007) 367: 603-8) 。
例如，可能希望使倾向于在溶液中二聚体化的结构域抗体与Fc部分的C-端末端连接，这优先于与轻链C-端末端或受体-Fc融合体的N-端末端连接，因为与Fc的C-端末端连接将使得那些dAb在本发明的抗原结合蛋白的背景下二聚体化。
本发明的抗原结合蛋白可包含对单一抗原具有特异性的抗原结合位点，或可具有对两种或更多种抗原具有特异性或对单一抗原上的两个或多个表位具有特异性的抗原结合位点，或可存在每一个都对相同或不同的抗原上的不同表位具有特异性的抗原结合位点。
具体地，本发明的抗原结合蛋白可以用于治疗与TNFα和VEGF有关的疾病，例如眼病，例如糖尿病黄斑水肿、囊样黄斑水肿、葡萄膜炎、AMD (年龄相关性黄斑变性)、脉络膜新生血管AMD、地理性萎缩、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞 (BRVO和/或CRVO)和其它黄斑病变和眼血管病变。
可以组合地施用来治疗任一种前述眼病（具体地AMD）的具体的TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂如下。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是英夫利昔单抗，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是依那西普，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ESBA105，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-19，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-490，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是PEP1-5-493，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010. 。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是SEQ ID NO:2的adnectin，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是戈利木单抗，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是塞妥珠单抗，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是ALK-6931，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是贝伐单抗。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是r84。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是aflibercept。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是CT01。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-10-11。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是DOM15-26-593。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是PRS-050。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是PRS-051。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是MP0112。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是CT-322。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是ESBA903。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0030。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是EPI-0010。在一个实施方案中，所述TNFα拮抗剂是包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，且所述VEGF拮抗剂是DMS1571。
上述组合中的每一个也可以用于制备本发明的双靶向分子。本发明的双靶向分子的具体的且非限制性的实例如下：Fc活化的DMS4000 (SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:12)、Fc有缺陷的DMS4000 (SEQ ID NO:47和SEQ ID NO: 12)、DMS4031 (SEQ ID NO: 16和SEQ ID NO:12)、DOM-PEP 线内融合体(SEQ ID NO:62)、PEP-DOM 线内融合体(SEQ ID NO: 64)、具有选自SEQ ID NO:69-72的重链和SEQ ID NO:12的轻链的双靶向分子、以及在SED ID NO:72-140中列出的那些。
通过用包含本发明的抗原结合蛋白的编码序列的表达载体转染宿主细胞，可以生产本发明的抗原结合蛋白。通过将抗原结合蛋白的这些编码序列置于与常规的调节控制序列的可操作关联下，生产表达载体或重组质粒，所述调节控制序列能够控制在宿主细胞中的复制和表达和/或从宿主细胞的分泌。调节序列包括启动子序列，例如CMV启动子和信号序列，其可以源自其它已知的抗体。类似地，可以产生具有DNA序列的第二表达载体，所述DNA序列编码互补的抗原结合蛋白轻链或重链。在某些实施方案中，除了所涉及的编码序列和选择标记之外，这种第二表达载体与第一表达载体相同，以确保尽可能地有功能地表达每条多肽链。或者，抗原结合蛋白的重链和轻链编码序列可以存在于单个载体上，例如在相同载体的2个表达盒中。
通过常规技术，用第一载体和第二载体共转染选定的宿主细胞（或仅用单个载体转染），以创建包含重组的或合成的轻链和重链的本发明的转染的宿主细胞。然后通过常规技术，培养转染的细胞，以生产本发明的工程化的抗原结合蛋白。通过合适的试验，例如ELISA或RIA，从培养物筛选包括重组重链和/或轻链的结合体的抗原结合蛋白。可以采用相似的常规技术，构建其它抗原结合蛋白。
本领域技术人员可以选择适用于在本发明的方法和组合物构建中采用的克隆和亚克隆步骤的载体。例如，可以使用常规的pUC克隆载体系列。一种载体pUC19可从供应点商业获得，例如Amersham (Buckinghamshire, United Kingdom)或Pharmacia (Uppsala, Sweden)。另外，能够容易地复制的、具有丰富的克隆位点和选择基因（例如，抗生素抗性）并且易于操作的任何载体，可以用于克隆。因而，克隆载体的选择不是本发明的限制因素。
通过适用于放大异源DNA序列的表达的基因，例如，哺乳动物二氢叶酸还原酶基因(DHFR)，也可以表征表达载体。其它载体序列包括：聚腺苷酸（poly A）信号序列，例如来自牛生长激素（BGH）的，以及β珠蛋白启动子序列（betaglopro）。通过本领域技术人员公知的技术，可以合成在本文中有用的表达载体。
这些载体的组件，例如复制子、选择基因、增强子、启动子、信号序列等，可以从商业来源或天然来源获得，或通过已知的方法合成，用于指导重组DNA的产物在选定的宿主中的表达和/或分泌。为了这个目的，也可以选择其它合适的表达载体，其中许多类型在本领域已知用于哺乳动物、细菌、昆虫、酵母和真菌表达。
本发明还包括用含有本发明的抗原结合蛋白的编码序列的重组质粒转染的细胞系。对于这些克隆载体的克隆和其它操作而言有用的宿主细胞也是常规的。然而，来自各种大肠杆菌菌株的细胞可以用于克隆载体的复制和本发明的抗原结合蛋白的构建中的其它步骤。
适用于表达本发明的抗原结合蛋白的宿主细胞或细胞系包括：哺乳动物细胞诸如NS0、Sp2/0、CHO (例如DG44)、COS、HEK、成纤维细胞(例如，3T3)和骨髓瘤细胞，例如它们可以在CHO或骨髓瘤细胞中表达。可以使用人细胞，因而允许分子用人糖基化模式来修饰。或者，可以采用其它真核细胞系。合适的哺乳动物宿主细胞的选择，以及用于转化、培养、扩增、筛选和产物生产和纯化的方法，是本领域已知的。参见，例如，以上引述的Sambrook 等人。
可以证明，细菌细胞可用作宿主细胞，其适合表达本发明的重组Fab或其它实施方案(参见，例如，Plückthun, A., Immunol. Rev. (1992) 130: 151-188)。但是，由于在细菌细胞中表达的蛋白倾向于未折叠的形式或不正确地折叠的形式或非糖基化形式，必须筛选在细菌细胞中生产的任何重组Fab，以保留抗原结合能力。如果细菌细胞表达的分子以适当地折叠的形式产生，该细菌细胞将是期望的宿主，或者，在替代性的实施方案中，可以在细菌宿主中表达分子，然后进行重新折叠。例如，用于表达的各种大肠杆菌菌株，是生物技术领域中公知的宿主细胞。枯草芽孢杆菌、链霉菌属、其它芽孢杆菌属等的各种菌株，也可以用于该方法中。
当希望时，本领域技术人员已知的酵母细胞菌株也可用作宿主细胞，以及昆虫细胞（例如果蝇和鳞翅目昆虫）和病毒表达系统。参见，例如，Miller 等人, Genetic Engineering (1986) 8: 277-298, Plenum Press和其中引用的参考文献。
可以构建载体的一般方法、生产本发明的宿主细胞所需的转染方法、从这些宿主细胞生产本发明的抗原结合蛋白所必需的培养方法，都可以是常规技术。通常，本发明的培养方法是无血清培养方法，通常通过在悬浮液中无血清地培养细胞。同样地，生产以后，可以根据本领域的标准方法，从细胞培养物内容物纯化本发明的抗原结合蛋白，所述方法包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱色谱法、凝胶电泳等。这些技术属于本领域技能，不会限制本发明。例如，在WO 99/58679和WO 96/16990中描述了改变的抗体的制备。
表达抗原结合蛋白的又一个方法可以利用在转基因动物中的表达，例如如美国专利号4,873,316所述。这涉及利用动物的酪蛋白启动子的表达系统，当其被转基因地掺入哺乳动物中时，允许雌性动物在它的奶中产生希望的重组蛋白。
在本发明的另一个方面，提供了一种生产本发明的抗体的方法，所述方法包括下述步骤：培养用编码本发明的抗体的轻链和/或重链的载体转化或转染的宿主细胞，并回收由此生产的抗体。
根据本发明，提供了一种生产本发明的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括下述步骤；
(a)    提供一种载体，所述载体包含编码所述抗原结合蛋白的多核苷酸；
(b)    用所述载体转化哺乳动物宿主细胞 (例如CHO)；
(c)    在有助于所述抗原结合蛋白从所述宿主细胞分泌进所述培养基中的条件下，培养步骤(b)的宿主细胞；
(d)    回收步骤(c)的分泌的抗原结合蛋白。
根据本发明，提供了一种生产本发明的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括下述步骤；
(a) 提供编码抗原结合蛋白的重链的第一载体；
(b) 提供编码抗原结合蛋白的轻链的第二载体；
(c) 用所述第一载体和第二载体转化哺乳动物宿主细胞（例如，CHO）；
(d) 在有助于所述抗原结合蛋白从所述宿主细胞分泌进所述培养基中的条件下，培养步骤（c）的宿主细胞；
(e) 回收步骤（d）的分泌的抗原结合蛋白。
通过希望的方法表达以后，然后使用合适的试验，检查抗原结合蛋白的体外活性。采用当前常规的ELISA试验形式来评估抗原结合蛋白与它的靶物的定性和定量结合。另外，也可以使用其它体外试验来证实中和效力，然后进行的人类临床研究，以评价抗原结合蛋白在体内的持久性，不考虑一般的清除机制。
治疗的剂量和持续时间与本发明的分子在人循环中的相对持续时间有关，可以由本领域技术人员根据要治疗的病症和患者的一般健康来调整。预见到，可能需要在延长的时间段（例如，四到六个月）内的重复给药（例如，每周一次或每2周一次）来实现最大治疗效果。
本发明的治疗剂的给药模式可以是向宿主的眼递送药物的任何适合的途径。全身给药可以足以递送有效量的本发明的抗原结合蛋白和药物组合物，这是通过被动给药，例如静脉内给药或皮下给药。本发明的抗原结合蛋白和药物组合物也可以更局部地递送至眼，这是通过局部施用例如滴眼剂或凝胶、玻璃体内注射、前眼房给药或眼周给药，即经由眼球后、眼球周、subtenon或结膜下注射进行巩膜下给药，或通过递送至下直肌、上直肌或外直肌。其它局部给药途径可以允许本发明的抗原结合蛋白和药物组合物在更低的剂量更容易地到达眼的后段。已经描述，在兔模型中局部施用会使抗体片段渗透至眼的后段(Williams KA等人, (2005))。已经描述了抗体片段或完整的单克隆抗体的玻璃体内注射，且对于产品ranibizumab和贝伐单抗而言，能够被AMD患者良好地耐受。
在一个实施方案中，玻璃体内地施用TNF拮抗剂和VEGF拮抗剂。在一个实施方案中，玻璃体内地施用VEGF拮抗剂，并通过其它局部给药方式（例如也玻璃体内地或结膜下地）施用TNF拮抗剂，具体地ESBA105。在一个实施方案中，玻璃体内地施用TNF拮抗剂，且局部地施用VEGF拮抗剂。
可能有用的是，靶向递送抗原结合蛋白至眼的特定区域，诸如眼的表面，或泪小管或泪腺，或者可以进行眼内递送(例如至眼的前房或后房，诸如玻璃质液)，和递送至诸如虹膜、睫状体、泪腺等眼结构。因此，本发明另外提供了一种将组合物直接地递送至眼的方法，所述方法包括，通过选自下述的方法，给眼施用所述组合物：眼内注射、局部递送(例如滴眼剂)、眼周给药和使用缓释制剂。
也可能有用的是，与眼渗透促进剂（例如癸酸钠）或与粘度增强剂（例如羟丙基甲基纤维素 (HPMC)）一起，将所述抗原结合蛋白递送至眼，例如通过局部递送 (例如作为滴眼剂)。因此，本发明另外提供了用于例如向眼局部递送的组合物，其包含：(a)本发明的抗原结合蛋白，以及(b) 眼渗透促进剂和/或(c) 粘度增强剂。
通过玻璃体内的植入物，也可以递送本发明的抗原结合蛋白和药物组合物。使用专门的23至26 计量注射针，可以实现眼球后注射和眼球周注射，且比玻璃体内注射具有更少的侵害。Subtenon注射会使所述组合物接触巩膜更长的时间，这可以辅助穿透后眼。已经描述了在兔模型中将蛋白注射在结膜之下紧邻处，这允许分子更直接地跨巩膜扩散，以到达眼的后段。
也可以使用持续释放药物递送系统，其允许物质在更长的时间范围内释放进眼中或眼周围，所以可以以更低的频率给药。这样的系统包括胶束、凝胶、水凝胶、纳米颗粒、微胶囊或植入物，它们可以填充或包被治疗组合物。通过注射，或通过以前所述的任一种其它更低侵害的途径（即通过眼周或巩膜下途径），可以将这些递送进眼的玻璃质中。这样的持续释放系统和局部递送途径的实例包括：热敏感的缓释水凝胶，其用于巩膜下施用或玻璃体内施用基于纳米颗粒的制剂，该制剂靶向后视网膜和RPE层 (Janoira KG,等人, (2007)；Birch DG (2007))。递送系统和局部给药途径的许多其它组合是可能的，且可以考虑用于抗原结合蛋白的组合物和本发明的药物组合物。
在一个具体实施方案中，通过玻璃体内注射，玻璃体内地施用本发明的抗原结合蛋白。在一个具体实施方案中，每4-8周，优选地每6-8周，玻璃体内地施用本发明的抗原蛋白，具体地双靶向构建体。在一个具体实施方案中，通过结膜下注射，施用抗原结合蛋白。在一个具体实施方案中，局部地施用本发明的抗原结合蛋白。在另一个实施方案中，经由持续释放药物递送系统，施用本发明的抗原结合蛋白。在一个具体实施方案中，经由静脉内注射，施用本发明的抗原结合蛋白。在一个具体实施方案中，经由皮下注射，施用本发明的抗原结合蛋白。
在本发明的一个具体实施方案中，所述抗原结合蛋白是DMS4000或由SEQ ID NO:69、70、71或72的重链序列和SEQ ID NO:12的轻链序列组成的抗原结合蛋白，其每4-8周通过玻璃体内注射进行施用。
本发明的治疗剂可以制备成药物组合物，其含有在药学上可接受的载体中的有效量的本发明的抗原结合蛋白作为活性成分。在本发明的预防药中，可以在生理pH缓冲水性混悬液或溶液，其含有准备好注射的形式的抗原结合蛋白。用于肠胃外施用的组合物通常包含溶于药学上可接受的载体（例如水性载体）中的本发明的抗原结合蛋白或其混合液的溶液。可以使用多种水性载体，例如，0.9% 盐水、0.3% 甘氨酸等。这些溶液可以制成无菌的，一般没有颗粒物质。通过常规的公知的灭菌技术（例如，过滤），可以将这些溶液灭菌。组合物可以含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂等。本发明的抗原结合蛋白在这种药物制剂中的浓度可以广泛地变化，即，从低于约0.5%、通常在或至少约1%到多达15或20%（按重量计算），主要基于液体体积、粘度等，根据选定的特定给药模式，进行选择。
因而，用于肌肉内注射的本发明的药物组合物可以制备成含有1 mL 无菌缓冲水，和约1 ng至约200 mg（例如约50 ng至约30 mg或更多、或约5 mg至约25 mg）本发明的抗原结合蛋白。类似地，用于静脉内输注的本发明的药物组合物可以制备成含有约250 ml 无菌林格氏溶液，和约1至约30或约5 mg至约25 mg本发明的抗原结合蛋白/ml 林格氏溶液。用于制备肠胃外施用的组合物的实际方法是公知的，或者对于本领域技术人员而言是显而易见的，更详细地描述在，例如，Remington's Pharmaceutical Science, 第15版, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania。关于静脉内施用的本发明抗原结合蛋白制剂的制备，参见：Lasmar U和Parkins D“The formulation of Biopharmaceutical products”, Pharma. Sci.Tech.today, 第129-137页, 第3卷 (2000年4月3日)；Wang, W “Instability, stabilisation and formulation of liquid protein pharmaceuticals”, Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188; Stability of Protein Pharmaceuticals A部和B部，Ahern T.J., Manning M.C.编, New York, NY: Plenum Press (1992)；Akers,M.J. “Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations”, J. Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300; Imamura, K 等人 “Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the dried state”, J Pharm Sci 92 (2003) 266-274; Izutsu, Kkojima, S. “Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying”, J Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039; Johnson, R, “Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization”, J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922;和Ha, E Wang W, Wang Y.J. “Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability”, J. Pharm Sci, 91, 2252-2264,(2002)，它们的所有内容通过引用并入本文，并向读者特别地提及。
在一个实施方案中，当在药物制品中时，本发明的治疗剂以单位剂量形式存在。本领域技术人员可容易地确定合适的治疗有效剂量。根据患者的体重，可以为患者计算合适的剂量，例如合适的剂量可以是在下述范围内：0.00001-20mg/kg，例如0.0001-20mg/kg，例如0.1-20mg/kg，例如1-20mg/kg或例如1-15mg/kg，例如10-15mg/kg。为了有效地治疗本发明适用的人类病症，合适的剂量可以是在下述范围内的本发明的抗原结合蛋白：0.0001-1000 mg，例如0.001-1000mg，例如0.01-500mg，例如500mg，例如0.1-100mg或0.1-80mg或0.1-60mg或0.1-40mg或例如1-100mg或1-50mg，其可以肠胃外地（例如皮下地、静脉内地或肌肉内地）或局部地施用。如果必要，可以按照医师酌情选择的合适时间间隔，重复这种剂量。
在要将治疗剂直接地施用进眼中（例如通过玻璃体内注射）的情况下，优选地，所述剂量应当使得，施用给每只人眼的蛋白总量不超过2 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是大约2 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是大约1.8 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是大约1.6 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是大约1.4 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是大约1.2 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是大约1.0 mg。在一个实施方案中，施用给单只人眼的蛋白总量是小于2.0 mg、小于1.8 mg、小于1.6 mg、小于1.4 mg、小于1.2 mg或小于1.0 mg。
可以低压冻干本文所述的抗原结合蛋白进行保存，并在使用前在适合的载体中重构。已经证实，这种技术对于常规的免疫球蛋白是有效的，且可以采用本领域已知的低压冻干法和重构技术。
存在几种本领域已知的方法，它们可以用于找到在本发明中使用的表位-结合域。
术语“文库”表示异质多肽或核酸的混合物。文库由成员组成，每个成员具有单个多肽或核酸序列。就这一方面而言，“文库”与“所有组分”同义。文库成员之间的序列差异是造成文库中存在多样性的原因。文库可呈简单的多肽或核酸的混合物的形式，或可呈用核酸文库转化的生物体或细胞的形式，例如细菌、病毒、动物或植物细胞等等。在一个实例中，每一个单独的生物体或细胞仅含有一个或有限个数的文库成员。有利的是，为了表达由核酸编码的多肽，将所述核酸整合进表达载体中。因此，在一个方面，文库可呈宿主生物体群体的形式，每一生物体含有表达载体的一个或多个拷贝，所述表达载体含有核酸形式的单个文库成员，其可被表达以产生它的对应的多肽成员。因此，宿主生物体群体具有编码多种多肽的众多所有组分的可能性。
“通用框架”是这样的单个抗体框架序列：其对应着在Kabat 所定义的序列(“Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 美国卫生和人类服务部)中保守的抗体区域，或对应着Chothia和Lesk, J. Mol. Biol. (1987) 196: 910-917所定义的人种系免疫球蛋白所有组分或结构。可以存在单个框架或一组这样的框架，业已发现它们可衍生出几乎任意的结合特异性，尽管只在高变区中变化。
在一个实施方案中，用算法BLAST 2 Sequences，使用缺省参数(Tatusova, T. A.等人, FEMS Microbiol Lett, (1999) 174: 187-188)，制备并测定本文所定义的氨基酸和核苷酸序列比对和同源性、相似性或同一性。
当在本文所述方法中使用展示系统(例如联系核酸的编码功能与核酸编码的肽或多肽的功能特性的展示系统)时，例如选择dAb或其它表位结合域时，通常有利的是扩增或增加编码所选择的肽或多肽的核酸的拷贝数。这提供了有效方法来获得足够量核酸和/或肽或多肽，以用于通过本文所述方法或其它合适的方法进行另外轮次的选择，或用于制备另外的谱(例如亲和力成熟谱)。因此，在某些实施方案中，选择表位结合域的方法包括使用展示系统(例如联系核酸的编码功能和核酸编码的肽或多肽的功能特性的展示系统，例如噬菌体展示)，并另外包括扩增或增加编码所选择的肽或多肽的核酸的拷贝数。可用任何合适的方法例如通过噬菌体扩增、细胞生长或聚合酶链式反应扩增核酸。
在一个实例中，所述方法采用联系核酸编码功能和核酸编码的多肽的物理、化学和/或功能特性的展示系统。这样的展示系统可包含多个可复制的遗传包(genetic package)，例如噬菌体或细胞(细菌)。展示系统可包含文库，例如噬菌体展示文库。噬菌体展示是展示系统的实例。
业已阐述多种合适的噬菌体展示系统(例如单价展示和多价展示系统) (参见，例如，Griffiths等人, 美国专利号6,555,313 B1 (通过引用并入本文)；Johnson等人, 美国专利号5,733,743 (通过引用并入本文)；McCafferty等人, 美国专利号5,969,108 (通过引用并入本文)；Mulligan-Kehoe, 美国专利号5,702,892 (通过引用并入本文)；Winter, G.等人, Annu. Rev. Immunol.(1994) 12: 433-455; Soumillion, P.等人,Appl. Biochem. Biotechnol. (1994) 47(2-3): 175-189;  Castagnoli, L.等人,Comb. Chem.High Throughput Screen (2001)4(2): 121-133)。在噬菌体展示系统中展示的肽或多肽可在任何合适的噬菌体上展示，举例而言，所述细菌噬菌体例如丝状噬菌体(例如fd、M13、F1)、裂解性噬菌体(例如T4、T7、λ)或RNA噬菌体(例如MS2)。
通常产生或提供展示作为含合适噬菌体衣壳蛋白(例如fd pIII蛋白)的融合蛋白的肽或噬菌体多肽的谱的噬菌体文库。融合蛋白可在噬菌体衣壳蛋白的末端或若需要在内部位置展示肽或多肽。例如，被展示的肽或多肽可存在于pIII的氨基末端到结构域1的位置。(pIII的结构域1也被称为N1)。可将被展示的多肽直接融合到pIII (例如pIII的结构域1的N-末端)，或用接头融合到pIII。若有需要，融合体可进一步包含标签(tag) (例如myc表位、His标签)。用任何合适的方法可产生包含作为含噬菌体衣壳蛋白的融合蛋白展示的肽谱或多肽谱的文库，例如通过将编码被展示的肽或多肽的噬菌体载体或噬菌粒载体的文库引入到合适的宿主细菌，并培养所得到的细菌以产生噬菌体(例如若有需要，则用合适的辅助噬菌体或补充质粒(complementing plasmid))。可用任何合适的方法(例如沉淀和离心)从培养物回收噬菌体文库。
展示系统可包含含有任何所需多样性量的肽谱或多肽谱。例如，所述谱可含有具有对应于由一种生物体、一组生物体、所需组织或所需细胞类型表达的天然存在多肽的氨基酸序列的肽或多肽，或可含有具有随机或随机化氨基酸序列的肽或多肽。若有需要，多肽可享有共同核心或骨架。例如，谱或文库中的所有多肽可基于选自以下的骨架：蛋白A、蛋白L、蛋白G、纤连蛋白结构域、anticalin、CTLA4、所需酶(例如聚合酶、纤维素酶)或来自免疫球蛋白超家族的多肽，例如抗体或抗体片段(例如抗体可变结构域)。在谱或文库中的多肽可包含随机或随机化氨基酸序列的限定区及共有氨基酸序列的区。在某些实施方案中，谱中所有或基本上所有多肽为所需类型，例如所需的酶(例如聚合酶)或所需的抗体的抗原结合片段(例如人VH或人VL)。在某些实施方案中，多肽展示系统包含多肽谱，其中每一个多肽包含抗体可变结构域。例如，谱中的每一个多肽可含有VH、VL或Fv (例如单链Fv)。
可用任何合适的方法将氨基酸序列多样性引入到肽或多肽或骨架的任何所需区域中。例如，可通过用任何合适的诱变方法(例如低保真度PCR、寡核苷酸介导的诱变或定点诱变、用NNK密码子多样化)或任何其它合适的方法制备编码多样化的多肽的核酸文库，来将氨基酸序列多样性引入靶区域，例如抗体可变结构域的互补决定区或疏水结构域。若有需要，可使待多样化的多肽区域随机化。构成谱的多肽的大小是主要的选择问题，多肽大小不必一致。谱中的多肽可具有至少三级结构(即形成至少一个结构域)。
选择/分离/回收
可用任何合适的方法从谱或文库(例如在展示系统中)选择、分离和/或回收表位结合域或结构域群。例如，基于选择特性(例如物理特性、化学特性、功能特性)来选择或分离结构域。合适的选择性功能特性包括谱中的肽或多肽的生物活性，例如结合通用配体(例如超抗原)、结合靶配体(例如抗原、表位、底物)、结合抗体(例如通过在肽或多肽上表达的表位)和催化活性。(参见例如，Tomlinson等人, WO 99/20749; WO 01/57065; WO 99/58655)。
在某些实施方案中，从基本上所有结构域共享共同的选择性特征的肽或多肽文库或谱中选择和/或分离蛋白酶抗性肽或多肽。例如，结构域可选自其中基本上所有结构域具有以下特征的文库或谱：结合共同的通用配体、结合共同的靶配体、结合共同抗体(或被共同抗体结合)或拥有共同的催化活性。该选择类型尤其可用于制备基于具有所需生物活性的母体肽或多肽的结构域谱，例如当实施免疫球蛋白单一可变结构域的亲和力成熟时。基于结合共同通用配体的选择可产生含有作为原始文库或谱组分的所有或基本上所有结构域的结构域集或群。例如，可通过淘选或用合适的亲和基质选择、分离和/或回收结合靶配体或通用配体(例如蛋白A、蛋白L或抗体)的结构域。可通过将配体(例如通用配体、靶配体)溶液加入到合适的容器(例如试管、培养皿)中并使配体沉积或覆盖在容器壁上来实施淘选。可洗掉过量配体，可将结构域加到容器中，并将容器保持在适于肽或多肽结合固定化配体的条件下。可洗掉未结合的结构域，并可例如用任何合适的方法(例如刮擦或降低pH)来回收结合的结构域。
合适的配体亲和基质通常含有配体共价或非共价连接其上的固相支持体或珠粒(例如琼脂糖)。可在适用于使结构域与基质上的配体结合的条件下用批处理、柱处理或任何其它合适的处理使亲和基质与肽或多肽(例如业已与蛋白酶温育的谱)结合。可洗掉不结合亲和基质的结构域，用任何合适的方法洗脱并回收已结合的结构域，例如用较低pH的缓冲液、用温和变性剂(例如尿素)或用竞争结合配体的肽或结构域洗脱。在一个实例中，在适用于使谱中的结构域与靶配体结合的条件下让生物素化的靶配体与谱结合。用固定化(例如在珠粒上)的抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素回收已结合的结构域。
在某些实施方案中，通用配体或靶配体是抗体或其抗原结合片段。与在文库或谱的肽或多肽中基本上保守的肽或多肽的结构特征结合的抗体或抗原结合片段尤其可用作通用配体。适于用作分离、选择和/或回收蛋白酶抗性肽或多肽所用的配体的抗体和抗原结合片段可为单克隆或多克隆的，并可用任何合适的方法制备。
文库/所有组分
可用任何合适的方法制备或获得编码和/或含有表位结合域的文库。可设计文库以编码基于目标结构域或骨架(例如选自文库的结构域)的结构域，或可用本文所述方法从另一文库中选择文库。例如，可用合适的多肽展示系统来制备富含结构域的文库。
可用任何合适的方法容易地产生编码所需结构域类型的所有组分的文库。例如，可获得编码所需多肽类型(例如免疫球蛋白可变结构域)的核酸序列，并且可例如通过用易错的聚合酶链式反应(PCR)系统扩增核酸、通过化学诱变(Deng等人,J. Biol. Chem., 269:9533 (1994))或用细菌增变株(Low等人,J. Mol. Biol., 260:359 (1996))来制备每一个含有一个或多个突变的核酸集合。
在其它实施方案中，为了多样化可以特定的核酸区作为靶标。用于在所选择的位置进行突变的方法在本领域亦众所周知，包括例如在用或不用PCR时使用错配的寡核苷酸或简并的寡核苷酸。例如，通过将突变靶向抗原结合环来产生合成的抗体文库。业已将随机或半-随机抗体H3和L3区添加到种系免疫球蛋白V基因区段，以产生含未突变框架区的大文库(Hoogenboom和Winter (1992) 同上; Nissim等人(1994) 同上; Griffiths等人(1994) 同上; DeKruif等人(1995) 同上)。业已将所述多样性延伸到包括某些或所有其它抗原结合环(Crameri等人Nature Med. (1996) 2: 100; Riechmann等人Bio/Technology (1995) 13: 475; Morphosys, WO 97/08320, 同上)。在其它实施方案中，为了多样化可通过例如采用第一PCR产物为“大引物(mega-primer)”的两步PCR策略来靶向核酸的特定区(参见，例如，Landt, O.等人, Gene(1990) 96: 125-128)。例如通过SOE PCR也可完成靶向的多样化(参见，例如，Horton, R.M.等人,Gene(1989)77: 61-68)。
可通过改变确定多肽序列的编码序列致使可将许多可能的氨基酸(例如所有20种氨基酸或其子集)引入到该位置来实现在所选位置的序列多样性。用IUPAC命名法，最多能的密码子是NNK，其编码所有氨基酸以及TAG终止密码子。可使用NNK密码子以引入所需多样性。也使用达到同样目的的其它密码子，包括NNN密码子，该密码子导致产生另外的终止密码子TGA和TAA。这样的靶向方法可使得靶区域的全序列范围得到探索。
某些文库包含作为免疫球蛋白超家族成员(例如抗体或其部分)的结构域。例如，文库可包含具有已知主链构象的结构域(参见，例如，Tomlinson 等人, WO 99/20749)。
可在合适的质粒或载体中制备文库。本文所用载体指分离的元件(discrete element)，其用于将异源DNA引入到细胞中用于表达和/或其复制。可使用任何合适的载体，包括质粒(例如细菌质粒)、病毒或噬菌体载体、人工染色体和游离型载体。这样的载体可用于简单克隆和诱变，或表达载体可用于驱动文库表达。载体和质粒通常含有一个或多个克隆位点(例如多接头)、复制起始点和至少一个选择标记基因。表达载体可进一步含有驱动多肽转录及翻译的元件，例如增强子元件、启动子、转录终止信号、信号序列等等。可以以使其可操作地连接编码多肽的克隆插入物的方式排列这些元件，由此当所述表达载体保持在适于表达的条件下(例如在合适的宿主细胞中)时可表达并产生所述多肽。
克隆载体和表达载体通常含有使得所述载体可在一个或多个所选择的宿主细胞中复制的核酸序列。在克隆载体中，通常该序列为能使得载体独立于宿主染色体DNA复制的序列，包括复制起始点或自主复制序列。对于多种细菌、酵母和病毒，所述序列众所周知。来自质粒pBR322的复制起始点适用于大部分革兰氏阴性细菌，2微米质粒起始适用于酵母菌，各种病毒复制起始点(例如 SV40、腺病毒)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。除非在哺乳动物细胞(例如COS细胞)中使用的复制起始点能够复制高水平DNA，否则哺乳动物表达载体通常不需要复制起始点。
克隆载体或表达载体可含有也被称为选择标记的选择基因。此类标记基因编码使转化的宿主细胞在选择培养基中存活或生长必不可少的蛋白质。因此，未用含有选择基因的载体转化的宿主细胞将不能在培养基中存活。典型的选择基因编码的蛋白赋予抗生素及其它毒素(例如氨苄青霉素(ampicillin)、新霉素(neomycin)、甲氨蝶呤(methotrexate)或四环素(tetracycline))抗性，互补的营养缺陷或提供在生长培养基中不能获得的关键营养素。
合适的表达载体可含有多种组分，例如复制起始点、选择标记基因、诸如转录调控元件(例如启动子、增强子、终止子)等一种或多种表达调控元件和/或一种或多种翻译信号、信号序列或前导序列等。若存在，表达调控元件和信号序列或前导序列可由载体或其它来源提供。例如，编码抗体链的已克隆的核酸的转录和/或翻译调控序列可用于指导表达。
可提供启动子用于在所需宿主细胞中进行表达。启动子可为组成型或诱导型。例如，可让启动子可操作地连接编码抗体、抗体链或其部分的核酸，致使其指导该核酸转录。可利用多种适用于原核宿主的启动子(例如用于大肠杆菌的β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统、lac、tac、T3、T7 启动子)和真核宿主的启动子(例如, 猴肾病毒40早期或晚期启动子、劳氏肉瘤病毒长末端重复启动子、巨细胞病毒启动子、腺病毒晚期启动子、EG-1a 启动子)。
另外，表达载体通常包含用于选择携带载体的宿主细胞的选择标记，并在可复制的表达载体情况下包含复制起点。编码赋予抗生素或药物抗性的产物的基因为常用选择标记，可用于原核细胞(例如β-内酰胺酶基因(氨苄青霉素抗性)、四环素抗性的Tet基因)和真核细胞(例如新霉素(G418或遗传霉素(geneticin))、gpt (霉酚酸)、氨苄青霉素或潮霉素(hygromycin)抗性基因)。二氢叶酸还原酶标记基因使得可用甲氨蝶呤在多种宿主中选择。在酵母中通常将编码宿主的营养缺陷型标记物的基因产物的基因(例如LEU2、URA3、HIS3)用作选择标记。还涵盖使用病毒(例如杆状病毒)或噬菌体载体和能够整合到宿主细胞基因组的载体(例如逆转录病毒载体)。
适用于在原核细胞(例如细菌细胞，例如大肠杆菌)或哺乳动物细胞中表达的表达载体包括例如：pET载体(例如，pET-12a、pET-36、pET-37、pET-39、pET-40，Novagen等)、噬菌体载体(例如pCANTAB 5 E, Pharmacia)、pRIT2T (蛋白A融合载体, Pharmacia)、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、pEF-1 (Invitrogen, Carlsbad, CA)、pCMV-SCRIPT、pFB、pSG5、pXT1 (Stratagene, La Jolla, CA)、pCDEF3 (Goldman, L.A.,等人,Biotechniques,21:1013-1015 (1996))、pSVSPORT (GibcoBRL, Rockville, MD)、pEF-Bos (Mizushima, S.,等人, Nucleic Acids Res.(1990) 18: 5322) 等。可利用适用于不同表达宿主的表达载体，所述不同表达宿主例如原核细胞(大肠杆菌)、昆虫细胞(果蝇(Drosophila Schnieder) S2细胞, Sf9)、酵母(甲醇毕赤酵母(P. methanolica)、巴斯德毕赤酵母(P. pastoris)、酿酒酵母(S. cerevisiae))细胞和哺乳动物细胞(例如COS细胞)。
载体的某些实例为能使对应于多肽文库成员的核苷酸序列表达的表达载体。因此，可通过让表达多肽文库成员的单个克隆单独增殖并表达来进行用通用配体和/或靶配体的选择。如上所述，特定的选择展示系统为噬菌体展示。因此，可使用噬菌体或噬菌粒载体，例如，载体可为具有大肠杆菌复制起始点(用于双链复制)以及此外的噬菌体复制起始点(用于产生单链DNA)的噬菌粒载体。所述载体的操作及表达在本领域众所周知(Hoogenboom和Winter (1992) 同上; Nissim等人(1994) 同上)。简而言之，载体可含有β-内酰胺酶基因以赋予噬菌粒选择性，并含有表达盒上游的lac启动子，所述表达盒可含有合适的前导序列、多个克隆位点、一个或多个肽标签、一个或多个TAG终止密码子和噬菌体蛋白pIII。因此，用各种大肠杆菌阻抑菌株和非阻抑菌株并加入葡萄糖、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)或辅助噬菌体(例如VCS M13)，载体能够作为不表达而只产生大量的多肽文库成员的质粒进行复制，或作为生产噬菌体进行复制，所述生产噬菌体中某些在其表面含有多肽-pIII融合体的至少一个拷贝。
抗体可变结构域可包含靶配体结合位点和/或通用配体结合位点。在某些实施方案中，通用配体结合位点为超抗原(例如蛋白A、蛋白L或蛋白G)的结合位点。可变结构域可基于任何所需的可变结构域，例如人VH (例如VH1a、VH1b、VH2、VH3、VH4、VH5、VH6)、人Vλ (例如VλI、VλII、VλIII、VλIV、VλV、VλVI或Vκ1)或人Vκ (例如Vκ2、Vκ3、Vκ4、Vκ5、Vκ6、Vκ7、Vκ8、Vκ9或Vκ10)。
另一类技术涉及选择人工隔室(artificial compartment)的所有组分，所述人工隔室使得基因可与其基因产物相连接。例如，可在由油包水乳剂形成的微胶囊中选择编码所需基因产物的核酸的选择系统阐述于WO99/02671、WO00/40712和Tawfik & Griffiths Nature Biotechnol (1998) 16(7): 652-6中。可将编码具有所需活性的基因产物的遗传元件分区到微胶囊中，然后在微胶囊内转录和/或翻译以产生其各自的基因产物(RNA或蛋白质)。随后挑选产生具有所需活性的基因产物的遗传元件。本方法通过经由多种手段检测所需活性来选择目的基因产物。
表位结合域的表征
可通过为本领域技术人员所熟悉的方法检测结构域与其特异性抗原或表位的结合，所述方法包括ELISA。在一个实例中，用单克隆噬菌体ELISA检测结合。
可按照任何合适程序实施噬菌体ELISA：以下提出例示性方案。
可通过ELISA针对所选择的抗原或表位的结合情况来筛选每一轮选择产生的噬菌体群，以鉴定“多克隆”噬菌体抗体。然后可通过ELISA筛选来自这些群中的单个受感染的细菌菌落的噬菌体，以鉴定“单克隆”噬菌体抗体。也期需针对与抗原或表位的结合情况来筛选可溶性抗体片段，这还可通过ELISA用例如针对C-或N-末端标签的试剂来进行(参见例如Winter等人Ann. Rev. Immunology (1994) 12: 433-55和其中引用的参考文献)。
通过PCR产物的凝胶电泳(Marks等人1991,同上; Nissim等人1994同上)、用探针探测(Tomlinson等人, 1992) J. Mol. Biol. 227, 776)、或通过对载体DNA测序、或通过用常见的切割酶（诸如BSTNI）进行限制酶切消化分析，也可以评估所选择的噬菌体单克隆抗体的多样性。
dAb的结构
在例如用本文所述噬菌体展示技术从所选择的V-基因所有组分选择dAb的情况下，这些可变结构域包含通用框架区，由此可以通过本文所定义的特定通用配体来识别它们。通用框架区、通用配体等的使用阐述于WO99/20749中。
当使用V-基因所有组分时，多肽序列中的变化可位于可变结构域结构环内。任一可变结构域的多肽序列可通过DNA改组或通过突变来改变，致使提高每一可变结构域与其互补对的相互作用。DNA改组为本领域所知，由例如Stemmer, 1994, Nature 370: 389-391和美国专利号6,297,053教导，它们通过引用并入本文。其它诱变方法为本领域技术人员所熟知。
用于构建dAb的骨架
i.选择主链构象
免疫球蛋白超家族成员在其多肽链方面都共享相似的折叠。例如，尽管抗体就其一级序列而言高度不同，但与预期的相反，序列比较和晶体结构显示抗体的6个抗原结合环中的5个(H1、H2、L1、L2、L3)采用少数主链构象或规范结构(Chothia和Lesk J. Mol. Biol. (1987) 196: 901; Chothia等人Nature (1989) 342: 877)。因此，环长度及关键残基分析使得可预测在大部分人抗体中存在的H1、H2、L1、L2和L3的主链构象(Chothia等人J. Mol. Biol. (1992) 227: 799; Tomlinson等人EMBO J.(1995) 14: 4628; Williams等人J. Mol. Biol.(1996) 264: 220)。尽管就序列、长度及结构(由于使用D区段)而言H3区更多样，但其由于环长度短而同样形成少数主链构象，这要视长度及环中及抗体框架中关键位置的特定残基的存在情况或残基类型而定(Martin等人J. Mol. Biol. (1996) 263: 800; Shirai等人FEBS Letters (1996) 399: 1)。
有利地的是，从结构域文库(例如VH结构域文库和/或VL结构域文库)组装dAb。在一个方面，对结构域文库进行设计，其中选择某些环长度和关键残基以确保成员的主链构象是已知的。有利的是，为了使其无功能的几率最小化，它们是在自然界发现的免疫球蛋白超家族分子的真正构象，其如上所述。种系V基因区段用作一个合适的基本框架用于构建抗体或T-细胞受体文库；其它序列也有用。可以以低频率发生变化，以使少数功能成员可拥有改变的主链构象，所述构象并不影响其功能。
规范结构理论还可用于评估由配体编码的不同的主链构象的数量，以基于配体序列预测主链构象，并为多样化选择不影响规范结构的残基。已知在人Vκ结构域中，L1环可采用4种规范结构中的1种，L2环具有单一的规范结构，对于L3环90%的人Vκ结构域采用4种或5种规范结构中的1种(Tomlinson等(1995)见上述)；因此，在单独的Vκ结构域中，不同的规范结构可联合以产生一系列不同的主链构象。已知Vλ结构域编码L1、L2和L3环的一系列不同的规范结构，且Vκ和Vλ结构域可与可编码H1和H2环的若干规范结构的任何VH结构域配对，那么在这5种环中观察到的规范结构组合的数目将极大。这表明主链构象多样性的产生对于产生大范围的结合特异性可能是必需的。然而，通过基于单一已知主链构象构建抗体文库，业已发现与预期相反，对于产生足以靶向基本上所有抗原的多样性并不需要主链构象多样性。甚至更意想不到的是，单一主链构象不必为共有结构 – 单一天然存在的构象可用作整个文库的基础。因此，在一个特别的方面，dAb拥有单一的已知主链构象。
所选择的单一主链构象可以是所考虑的免疫球蛋白超家族类型分子中的普通的一种。当观察到大量天然存在的分子采用该构象时，所述构象就是普通构象。因此，在一个方面，单独考虑对于免疫球蛋白结构域的每一结合环的不同主链构象的天然存在情况，然后为不同环选择天然存在的可变结构域，所述可变结构域拥有所期需的主链构象组合。如果没有一个可以利用，那么可选择最接近的等同物。可通过选择编码所需主链构象的种系基因区段来产生对于不同环的所期需的主链构象组合。在一个实例中，所选择的种系基因区段在自然界中频繁表达，具体而言，在所有天然种系基因区段中它们可能是最频繁地表达。
在设计文库的过程中，可以单独考虑对于6个抗原结合环中的每一个的不同的主链构象发生率。对于H1、H2、L1、L2和L3，选择20%-100%的天然存在的分子的抗原结合环所采用的既定构象。通常，其观察到的发生率超过35% (即35%至100%之间)，理想情况为超过50%或甚至超过65%。由于绝大多数H3环不具有规范结构，因而优选选择在这些不展示规范结构的环中普通的主链构象。因此，对于每一种环，选择在天然所有组分中最经常观察到的构象。在人抗体中，对于每一种环而言最普遍的规范结构(CS)如下：H1-CS 1 (79%所表达的所有组分)、H2 - CS 3 (46%)、L1 - CS 2 Vκ(39%)、L2 - CS 1 (100%)、L3 - CS 1 Vκ(36%) (计算假设κ:λ比率为70:30, Hood等人, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. (1967) 48: 133)。对于具有规范结构的H3环，在第94位残基-第101位残基含有盐桥的长7个残基的CDR3 (Kabat等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 美国卫生和人类服务部)似乎是最普遍的。在EMBL数据库中有至少16种人抗体序列含有形成该构象所需的H3长度和关键残基，在用作抗体建模的基础的蛋白质数据库中有至少两种晶体结构(2cgr和1tet)。规范结构的这种组合的最频繁表达的种系基因区段为VH区段3-23 (DP-47)、JH区段JH4b、Vκ区段O2/O12 (DPK9)和Jκ区段Jκ1。VH区段DP45和DP38也是合适的。因此，可将这些区段组合用作构建具有所期需单一主链构象的文库的基础。
或者，代替基于处于孤立状态的每一结合环的不同的主链构象的天然发生率来选择单一主链构象，将主链构象组合的天然发生率作为用于选择单一主链构象的基础。例如，在抗体情况下，可确定对于抗原结合环中的任何两个、三个、四个、五个或所有六个的规范结构组合的自然发生率。此时所选择的构象可为天然存在的抗体中的普通构象，并且可在天然所有组分中最经常地观察到。因此，例如在人抗体中，当考虑5种抗原结合环H1、H2、L1、L2和L3的天然组合时，确定规范结构的最频繁的组合，然后与H3环的最普遍的构象联合，作为选择单一主链构象的基础。
规范序列的多样化
选择了几种已知主链构象或单一已知主链构象后，就可通过改变分子的结合位点来构建dAb，以产生含结构和/或功能多样性的所有组分。这意味着产生变体，致使在其结构和/或其功能方面具有足够的多样性，由此它们能够提供一系列的活性。
通常通过在一个或多个位置改变所选择的分子来产生所期需的多样性。可随机选择待改变的位置，或它们可能已被选定。然后通过以下方式来实现变异：随机化，在随机化期间由任意氨基酸或其天然或合成的类似物取代氨基酸残基产生极大量的变体；或者用一种或多种限定的氨基酸子集置换氨基酸残基，产生更有限数目的变体。
业已报道用于引入所述多样性的各种方法。可用易错PCR (Hawkins等人, J. Mol. Biol. (1992) 226: 889)、化学诱变(Deng等人, J. Biol. Chem. (1994) 269: 9533)或细菌增变株(Low等人, J. Mol. Biol. (1996)260: 359)来将随机突变引入编码分子的基因中。用于突变所选位置的方法在本领域亦众所周知，包括用或不用PCR使用错配的寡核苷酸或简并寡核苷酸。例如，通过以抗原结合环作为目标进行突变产生若干合成的抗体文库。使结合人破伤风类毒素- Fab的H3区随机化以产生一系列新的结合特异性(Barbas等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89: 4457)。随机或半-随机H3和L3区业已被添加到种系V基因区段以产生含未突变框架区的大文库(Hoogenboom & Winter J. Mol. Biol.(1992) 227: 381; Barbas等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89: 4457; Nissim等人,EMBO J.(1994) 13: 692; Griffiths等人EMBO J. (1994) 13: 3245; De Kruif等人,J. Mol. Biol. (1995) 248: 97)。所述多样化业已延伸到包括某些或所有其它抗原结合环(Crameri等人Nature Med. (1996)2: 100; Riechmann等人Bio/Technology (1995) 13: 475; Morphosys, WO97/08320, 同上)。
由于环随机化有可能产生大约超过1015种针对单独的H3的结构，以及同样大量的其它5种环的变体，因而用目前的转化技术或甚至通过用无细胞系统以产生代表所有可能组合的文库是不可行的。甚至对于在超过6 x 1012种不同抗体中构建的最大文库中的一些，使用诸如核糖体展示等技术，在该设计的文库中仅能表示一部分潜在的多样性 (He和Taussig, Nucleic Acid Research 1997 25(24): 5132)。
在一个实施方案中，仅那些直接参与产生或修饰所期需的分子功能的残基被多样化。对于很多分子而言，功能应为结合靶标，因此多样性应该集中在靶标结合位点，同时避免改变对于分子的整体包装或对于维持所选择的主链构象很重要的残基。
在一个方面，使用其中仅那些抗原结合位点的残基被改变的dAb文库。这些残基在人抗体所有组分中极具多样性，并且已知为高分辨的抗体/抗原复合体的接触点。例如，在L2中，已知在天然存在的抗体中位置50和53是多变的，并观察到其与抗原接触。相比之下，常规方法将使由Kabat等(1991,上述)定义的相应的互补决定区(CDR1)中的所有残基多样化，与文库中多样化的两个残基相比某些有7个残基被多样化。就产生一系列抗原结合特异性所需的功能多样性而言，这代表显著改进。
实际上，抗体多样性是两个过程的结果：种系V、D和J基因区段的体细胞重组致使产生天然的初始所有组分(primary repertoire) (所谓的种系和连接多样性)和导致产生重排的V基因的体细胞超突变。人抗体序列分析显示，初始所有组分多样性集中在抗原结合位点中心，而体细胞超突变将多样性散布在在初始所有组分中高度保守的抗原结合位点的外围区域(参见Tomlinson等人, J. Mol. Biol.(1996) 256: 813)。这种互补很可能进化为搜寻序列间隔的有效策略，尽管对于抗体明显是独特的，但这可能容易地应用到其它多肽所有组分。被改变的残基是形成靶标结合位点的那些残基的子集。若有需要，靶标结合位点中不同的(包括重叠的)残基子集在选择期间在不同阶段被多样化。
在抗体所有组分情况下，当某些而不是所有抗原结合位点残基被多样化时，产生了初始“天然的”所有组分。本文上下文所用术语“天然的”或“假的”指没有预先确定靶标的抗体分子。这些分子类似于尚未经历免疫多样化的个体的免疫球蛋白基因所编码的分子，所述尚未经历免疫多样化的个体的例子为胎儿及新生儿个体，其免疫系统尚未受到多种抗原刺激物的攻击。然后针对一系列抗原或表位选择该所有组分。若有需要，可在初始所有组分中被多样化的区域之外引入另外的多样性。可选择这种成熟的所有组分用于改变功能、特异性或亲和力。
应该理解，本文所述序列包括与本文所述序列具有基本同一性的序列，例如至少90%同一性，例如至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%或至少95%、或至少96%、或至少97%或至少98%、或至少99%同一性。
对于核酸，术语“基本同一性”表明当对两种核酸或其指定序列以适当的核苷酸插入或缺失进行最佳比对及比较时，它们有至少约80%的核苷酸、通常至少约90%-95%、或至少约98%-99.5%的核苷酸相同。或者，当区段在选择性杂交条件下与互补链杂交时存在基本上同一性。
对于核苷酸和氨基酸序列，术语“同一”表明当两个核酸或氨基酸序列之间以适当插入或缺失进行最佳比对和比较时的相同程度。或者，当DNA区段在选择性杂交条件与互补链杂交时存在基本上同一性。
两个序列之间的同一性百分比是序列共有的同一位置数量的函数(即%同一性= 同一位置数目/位置总数x 100)，为了两个序列的最佳比对需要考虑空位数目及每一空位长度。可用数学算法完成序列比较和两个序列之间同一性百分比的测定，其如以下非限制性实施例所述。
可用GCG软件包中的GAP程序、用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重，来测定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。还可用被整合到ALIGN程序(2.0版)的E. Meyers和W. Miller算法(Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))、用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来测定两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。另外，可用业已整合到GCG软件包中的GAP程序的Needleman和Wunsch (J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970))算法、用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6，来测定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。
举例而言，本发明的多肽序列可与SEQ ID NO: 14编码的参照序列同一，也就是说100%同一，或其与参照序列比较可包括至多特定整数数目的氨基酸改变，使得%同一性小于100%。这样的改变选自至少一个氨基酸缺失、置换(包括保守的和非保守的置换)或插入，并且其中所述改变可发生在参照多肽序列的氨基端或羧基端位置，或这些末端位置之间的任何位置，其各自散布在参照序列的氨基酸之中，或在参照序列内的一个或多个邻接基团中。通过用SEQ ID NO: 14编码的多肽序列中的氨基酸总数乘以各自同一性百分比的数字百分比(除以100)，然后从SEQ ID NO: 14编码的多肽序列中的氨基酸总数减去该乘积，求出对应于既定%同一性的氨基酸改变的数目，或：
na≤xa - (xa · y),
其中na为氨基酸改变数目，xa为SEQ ID NO: 14所编码的多肽序列中氨基酸的总数，y为例如：对于70%为0.70、对于80%为0.80、对于85%为0.85等，其中在从xa减去xa与y的任何非整数乘积之前将其四舍五入成最接近的整数。
实施例
实施例1
1.1双靶向抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (DMS4000)的制备
通过将dAb融合至mAb (阿达木单抗)重链的C-端，生产抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (命名为DMS4000)。为了构建重链表达盒，采用编码替代性的mAbdAb的重链的载体DNA作为起点。使用限制性酶SalI和HindIII，切离dAb部分。通过PCR (使用编码SalI和HindIII末端的引物)，扩增DOM15-26-593（抗-VEGF dAb），并使用相同限制位点连接进已经切离dAb的载体主链中，产生在mAb和dAb之间的‘STG’ (丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸) 连接物。
选择序列验证过的克隆(对于轻链和重链，分别是SEQ ID NO:11和13)，并进行大规模DNA制备，并使用瞬时转染技术，通过轻链和重链(SEQ ID NO:12和14)的共转染，在哺乳动物HEK293-6E细胞 (加拿大国家研究委员会)中表达抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb。
进一步修饰抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb重链的序列，以具有针对抗-VEGF dAb进行密码子优化的序列，并掺入L235A和G237A 突变 (Kabat编号)，以灭活FC效应物功能 (DMS4000 mAbdAb重链Fc有缺陷的SEQ ID NO 46和47)。
1.2双靶向抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (DMS4000)的纯化和SEC分析
根据确定的方法，使用蛋白-A 亲和色谱法，从澄清的表达上清液中纯化抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (命名为DMS4000)。通过分光光度法，通过测量在280nm的吸光度，测定纯化的样品的浓度。纯化的样品的SDS-PAGE分析(图1)显示，未还原的样品在~170kDa泳动，而还原的样品显示出在~25和~60kDa泳动的2个带，分别对应着轻链和dAb-融合的重链。
对于尺寸排阻色谱法(SEC)分析，将抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb应用于预平衡的Superdex-200 10/30 HR柱 (连接至Akta Express FPLC 系统)上，并在0.5ml/min在PBS中运行。尺寸排阻色谱曲线显示作为对称峰运行的单一物质 (图2)。
1.3双靶向抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (DMS4000)的结合亲和力
VEGF受体结合试验
本试验测量VEGF165与VEGF R2 (VEGF受体)的结合，及实验分子封阻该相互作用的能力。用VEGF受体(R&D Systems, 目录号: 357-KD-050) (0.5μg/ml终浓度，在0.2M碳酸钠/碳酸氢钠pH9.4中)过夜包被ELISA板，洗涤并用2% BSA/PBS封闭。在将VEGF (R&D Systems, 目录号: 293-VE-050)和实验分子(在含0.1%BSA的0.05%吐温20TMPBS中稀释)预温育1小时，随后加入到板(3ng/ml VEGF终浓度)中。用生物素化的抗-VEGF抗体(0.5μg/ml终浓度) (R&D Systems, 目录号: BAF293)和过氧化物酶缀合的抗-生物素第二抗体(1:5000稀释) (Stratech, 目录号: 200-032-096)检测VEGF与VEGF受体的结合，并在用等体积1M HCl终止反应后，用比色底物(Sure Blue TMB 过氧化物酶底物, KPL)在OD450处显示。
MRC-5/TNFα试验
用人肺成纤维细胞MRC-5细胞，测定实验分子防止人TNFα结合人TNFR1及中和IL-8分泌的能力。用TNFα (500pg/ml) (Peprotech)温育系列稀释的实验样品1小时。然后用MRC-5细胞(ATCC, 目录号CCL-171)的悬浮液 (5x103细胞/孔)对其进行1:2稀释。过夜温育后，将样品稀释10倍，用IL-8 ABI 8200细胞检测试验 (FMAT)，测定IL-8释放，其中用抗-IL-8 (R&D Systems, 目录号208-IL)包被的聚苯乙烯珠粒、生物素化的抗-IL-8 (R&D Systems, 目录号BAF208)和抗生蛋白链菌素Alexafluor 647 (Molecular Probes, 目录号S32357)，测定IL-8浓度。以647nm荧光发射来定位试验读数，用包括在该试验中的IL-8标准曲线内推(interpolate)未知的IL-8浓度。
如上所述，测定对VEGF和TNFα的结合亲和力。用GraphPad Prism，分析试验数据。用S形剂量响应曲线确定效价值，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb的抗-VEGF效价(图3)计算为57pM，而对照抗-VEGF mAb给出的EC50值为366pM。在抗-TNFα生物试验(图4)中，效价为10pM，而抗-TNFα对照mAb产生的EC50为22pM。综上所述，试验数据表明，该双靶向mAbdAb对两种抗原(TNFα和VEGF)都有效。
1.4双靶向抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (DMS4000)的大鼠PK
在大鼠中检测该分子的体内药代动力学性质。内给3只大鼠静脉地施用抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb，在10天(240小时)时段内采集血清样品。通过针对TNFα和VEGF二者的ELISA，评估给药后不同时间点时残留的药物浓度。结果如图5所示。
PK参数证实，该分子具有可与抗-TNFα mAb相比的体内药代动力学性质。不认为所观察到的VEGF组分的更短t1/2β具有意义，其可能是试验假象。进一步的细节如表3所示。
表3
。
1.5  替代性的抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (DMS4031)的制备
以与在实施例1.1中所述类似的方式，使用由STG连接物连接至VEGF dAb的重链C-端上的相同的抗-TNFα mAb (阿达木单抗)，构建替代性的抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb (命名为DMS4031)。在该情况下使用的抗-VEGF dAb 是DOM15-10-11。使用瞬时转染技术，通过轻链和重链(SEQ ID NO:12和16)的共转染，在哺乳动物HEK293-6E细胞 (加拿大国家研究委员会)中表达该分子。表达该分子，得到与在实施例1.2中所述类似的mAbdAb表达水平，但是，当在实施例1.3所述的相同VEGF 试验中测试效价时，在该试验中发现具有不可检测水平的VEGF与VEGF受体的结合的抑制。
实施例2
双靶向抗-TNFα/抗-VEGF mAbdAb的Biacore分析
对实验mAbdAb进行BIAcore分析，以测定它们结合其相应抗原的动力学结合常数及解离常数。在BIAcoreTM3000设备上进行分析。设备温度设定为 25℃。将HBS-EP缓冲液用作运行缓冲液。以设备最高可能比率，采集实验数据。根据生产商的说明书，用标准胺偶联化学，用蛋白A包被研究级的CM5芯片上的一个流动池，同样处理第二个流动池，但用缓冲液代替蛋白A以产生参照表面。然后将用蛋白A包被的流动池用于捕获 mAbdAb。如表2中所详述，作为2x系列稀释液注入抗原。一式二份地运行几种稀释液。代替配体的单独的缓冲液注入，用于本底扣除。用设备软件自带的动力学Wizard，以随机顺序注入样品。在每个循环结束时，通过注入10mM甘氨酸、pH 1.5，使表面再生。用BIAevaluation软件 4.1，进行数据处理和动力学拟合。显示重复结果(来自同一次运行)平均值的数据如表4所示。显示的DMS4031的多个值代表在单独场合的两次实验运行。由于所分析的配体的浓度，787nM的值可能高估了亲和力。
表4
Figure 815071DEST_PATH_IMAGE005
实施例3
抗原结合蛋白的化学计量评估(使用Biacore?)
该实施例是预测性的。它提供了进行其它试验的指导，在所述其它试验中，可以测试本发明的抗原结合蛋白。
通过伯胺偶联，将抗-人IgG固定化在CM5生物传感器芯片上。将抗原结合蛋白捕获在该表面上，然后，使单个浓度的TNFα或VEGF穿过，该浓度足以使结合表面饱和，且观察到的结合信号达到完全的R-max。然后使用给出的公式，计算化学计量：
化学计量=Rmax*分子量(配体)/分子量(分析物)*R (固定化的或捕获的配体)
在同时计算超过一种分析物结合的化学计量的情况下，使不同的抗原在饱和抗原浓度顺序地穿过，并如上计算化学计量。该工作可以在Biacore 3000上、在25℃、使用HBS-EP运行缓冲液来进行。
实施例4
经由GS连接物与抗-VEGFR2 adnectin融合的CTLA4-Ig的设计和构建(BPC1821)
构建编码CTLA4-Ig的密码子-优化的DNA序列 (包含在N-端处的HindIII位点和在C-端处的BamHI位点，以便利克隆)，并克隆进含有CT01 adnectin的哺乳动物表达载体(来自加拿大国家研究委员会的pTT 表达载体，具有修饰的多克隆位点(MCS))中。这允许将adnectin经由GS 连接物融合在CTLA4-Ig的C-端。得到的抗原结合蛋白被命名为BPC1821。BPC1821的DNA和蛋白序列分别给出在SEQ ID. No. 26和27中。
使用293fectin (Invitrogen, 12347019)，将编码BPC1821的表达质粒瞬时转染进HEK 293-6E细胞 (加拿大国家研究委员会)中。24小时后，将胰蛋白胨饲料加入细胞培养物中，并在96小时后收获上清液。使用蛋白A柱，纯化BPC1821，然后在结合试验中测试。
实施例5
VEGFR2和B7-1结合ELISA (BPC1821)
用在PBS中的0.4μg/ml重组人VEGFR2 Fc 嵌合体(R&D Systems, 357-KD-050)包被96-孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含有0.05%吐温-20的Tris-缓冲的盐水，洗涤平板2次。将200 μL 封闭溶液 (在DPBS缓冲液中的5% BSA)加入每个孔中，将平板在室温温育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。在封闭溶液中在平板上连续稀释BPC1821和2种阴性对照抗体(Sigma I5154和双特异性的IGF1R–VEGFR2抗原结合构建体BPC1801 –重链SEQ ID NO:163和轻链SEQ ID NO:164)。温育1小时以后，洗涤平板。使用来自GE Healthcare的ECL生物素化模块，生物素化重组人B7-1 Fc 嵌合体(RnD Systems, 140-B1-100)。在试剂盒推荐水平的四分之一，进行标记。在封闭溶液中稀释生物素化的B7-1至1μg/mL，将50μL加入每个孔中。温育平板1小时，然后洗涤。在封闭溶液中稀释ExtrAvidin过氧化物酶(Sigma, E2886) 1000倍，将50μL加入每个孔中。另一个洗涤步骤以后，将50μl OPD SigmaFast底物溶液加入每个孔中，并在15分钟以后，通过加入25μL 3M硫酸，终止反应。使用基础终点方法，使用VersaMax可调微量培养板读数器 (Molecular Devices)，在490nm读出吸光度。
图6显示了ELISA结果，并证实，双特异性的BPC1821显示出对VEGFR2和B7-1的结合。阴性对照抗体没有显示出对VEGFR2和B7-1的结合。从2 μg/ml的起始浓度，稀释对照浓度。
实施例6
经由GS连接物与抗-VEGF dAb融合的CTLA4-Ig的设计和构建(BPC1825)
将编码与抗-VEGFR2 adnectin融合的CTLA4-Ig的DNA 质粒用作基础质粒，以构建双特异性的CTLA4-Ig-抗-VEGF dAb。如下制备载体：通过用BamHI和EcoRI消化基础质粒，以去除adnectin序列。用BamHI和EcoRI限制酶切编码抗-VEGF dAb的DNA序列，并连接进载体中。得到的双特异性的CTLA4-Ig-抗-VEGF dAb命名为BPC1825，其中dAb经由GS 连接物融合至CTLA4-Ig的C-端。BPC1825的DNA和蛋白序列分别给出在SEQ ID NO:28和29中。
使用293fectin (Invitrogen, 12347019)，将编码BPC1825的表达质粒瞬时转染进HEK 293-6E细胞 (加拿大国家研究委员会)中。24小时后，将胰蛋白胨饲料加入细胞培养物中，并在96小时后收获上清液。将上清液用作结合试验中的实验物。
实施例7
VEGF和B7-1结合ELISA (BPC1825)
用在PBS中的0.4μg/ml 人VEGF165 (自制材料)包被96-孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含有0.05%吐温-20的Tris-缓冲的盐水，洗涤平板2次。将200 μL 封闭溶液 (在DPBS缓冲液中的5% BSA)加入每个孔中，将平板在室温温育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。在封闭溶液中在平板上连续稀释BPC1825和2种阴性对照抗体(Sigma I5154和BPC1824 – CTLA4-Ig-抗-IL-13 dAb融合体– SEQ ID NO:165)。温育1小时以后，洗涤平板。使用来自GE Healthcare的ECL生物素化模块，生物素化重组人B7-1 Fc 嵌合体(RnD Systems, 140-B1-100)。在试剂盒推荐水平的四分之一，进行标记。在封闭溶液中稀释生物素化的B7-1至1μg/mL，将50μL加入每个孔中。温育平板1小时，然后洗涤。在封闭溶液中稀释ExtrAvidin过氧化物酶(Sigma, E2886) 1000倍，将50μL加入每个孔中。另一个洗涤步骤以后，将50μl OPD SigmaFast底物溶液加入每个孔中，并在15分钟以后，通过加入25μL 3M硫酸，终止反应。使用基础终点方法，使用VersaMax可调微量培养板读数器 (Molecular Devices)，在490nm读出吸光度。
图7显示了ELISA结果，并证实，双特异性的BPC1825显示出对VEGF和B7-1的结合。阴性对照抗体没有显示出对VEGF和B7-1的结合。从2 μg/ml的起始浓度，稀释Sigma I5154 IgG的浓度。
实施例8
经由STG或TVAAPPSTG连接物与VEGF dAb融合的TNFα受体Fc融合体的设计和构建
构建了编码人TNFα受体Fc融合体(依那西普)的密码子-优化的DNA序列，并与来自DMS4000 构建体的DOM15-26-593 抗-VEGF dAb一起克隆进哺乳动物表达载体(pTT5)中。
给受体Fc侧接额外的序列，以提供N-端Campath1 信号肽，并在C-端处提供STG 连接物或TVAAPSTVAAPSTVAAPSTVAAPSTG 连接物，用于融合至dAb上。侧接序列包括AgeI 限制位点和SalI 限制位点，以便利克隆进含有dAb的载体中。得到的抗原结合蛋白分别被命名为EtanSTG593和EtanTV4593。EtanSTG593的DNA和蛋白序列分别给出在SEQ ID No:48和49中，EtanTV4593的DNA和蛋白序列分别给出在SEQ ID No: 50和51中。
实施例9
EtanSTG593和EtanTV4593纯化和VEGF和TNFα结合分析
使用293Fectin (Invitrogen)进行转染，在HEK 293-6E细胞 (加拿大国家研究委员会)中，独立地表达EtanSTG593和EtanTV4593 质粒。5天后，收获EtanSTG593和EtanTV4593，并通过MAb Select Sure (GE Healthcare) 亲和色谱法进行纯化，分别得到分批样品M4004和M4005。在F1缓冲液(0.1M 柠檬酸盐pH6, 10% PEG300, 5% 蔗糖)或ET缓冲液(10mM Tris pH7.4, 4% D-甘露醇, 1% 蔗糖)中配制蛋白。通过在HiLoad Superdex S200 10/300 GL柱 (GE Healthcare)上的尺寸排阻色谱法，进一步纯化蛋白，以降低聚集体的水平。
在ProteOn XPR36机器 (BioRad TM)上进行结合分析。通过伯胺偶联，将蛋白A固定化在GLM芯片上。将要测试的构建体捕获在蛋白A 表面上。在256 nM、64 nM、16 nM、4 nM和1nM，使用分析物TNFα和VEGF。将0 nM (即单独的缓冲液)TNFα和VEGF用于重复参照结合曲线。
ProteOn的新颖的6x6流动池布置（set up）允许同时捕获最多6种构建体，且也允许6种分析物浓度流过捕获的抗体，每个循环共产生36种相互作用。
为了再生蛋白A表面，使用50 mM NaOH，这会去除捕获的构建体，并允许另一个捕获和结合循环开始。将得到的数据拟合至ProteOn分析软件自带的1:1模型。使用HBS-EP作为运行缓冲液，并在25℃的温度，进行运行。
表5: VEGF结合结果
Figure 466894DEST_PATH_IMAGE006
。
表6: TNFα结合结果
实施例10–预测实施例
10.1制备双靶向抗原结合蛋白
通过在2个以前鉴别出的抗原结合蛋白（例如抗体片段或整个单克隆抗体）之间导入物理连接，可以工程化双靶向抗原结合构建体。通过在2个部分之间编码遗传连接序列，可以导入所述物理连接。连接物在长度和氨基酸组成方面的性质，可能影响双特异性试剂的一个或两个部分的性质。在使用多个抗体或抗体片段来制备双特异性物的情况下，可以采用实验方案来鉴别先导物的最佳组合。
使用多种确定地记载的体内 (例如: Harlow, E和Lane, D (1998) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press)和体外(例如: Barbas III, CF 等人 (2001) Phage Display, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press)技术，可以可以在分离中鉴别和开发针对确定的靶物的单个结合部分（诸如mAb、FAb、ScFv、dAb 等），以递送具有已知的效价、效能和生物物理学性能性质的药剂。从这些单个的药剂中，会产生许多不同的双特异性的机会，它们仅受到建立它们所需的分子工程的复杂性程度的限制。希望的分子结构通常由要治疗的病症的性质决定。例如，对于长期给药，偏向于递送固有地长体内半衰期的分子形式。这可以如下最容易地实现：通过包含IgG抗体的Fc区，其递送长终末半衰期（由于补救再利用途径）。因而，基于mAb或其它Fc的双特异性物是常用的形式。
为了开发基于mAb的双靶向分子，一个潜在的方案是，将抗体片段连接至完整IgG上。在分子水平，这可以如下实现：将限制位点导入mAb链的末端之一处，并插入抗体片段，使得mAb链延长额外的功能单位。可能需要改变在功能单位之间的连接物的性质，以优化双特异性物的总性质。如果可得到多种接近相同靶物的不同抗体片段，使用该方案，可以将它们彼此进行直接对比。通常在哺乳动物细胞（通常瞬时转染的HEK293细胞，但是对于稳定的细胞系和大规模生产而言，则用CHO细胞）中表达该性质的双特异性物。对于TNF/VEGF 双特异性物，可以以此方式将抗-TNFα mAb连接至VEGF 结合蛋白（诸如抗体片段）上，或者，可以将抗-VEGF mAb连接至抗-TNFα 结合蛋白上。例如，可以以此方式利用的TNFα和VEGF拮抗剂分别列出在表1和2中。在这样的实践中，如果所有可能的试剂都可得到，将测试所有可能的组合。
可以如下制备非基于mAb的双特异性物：以与遗传融合体总体上类似的方式，将2个抗体片段或结合抗原的其它蛋白连接到一起。2个单元的接头通常用可以以经验为主地确定其长度和序列组成的连接物来表示。这样的分子允许分子工程的自由（因为它们的模块的、单链性质），并提供在哺乳动物细胞以外的系统中表达的可能性。
图8显示了根据本发明可以使用的可能的双靶向构建体的矩阵。在SEQ ID NO:73-140中，给出了在图8中所示的许多可能的双靶向构建体的序列。在这些特异性的双靶向分子中，‘TVAAPS’ 连接物(SED ID NO:4)被用于连接组分部分，例外是，DVD-Ig、与N-端 ScFv的DVD-Fab融合体 (SEQ ID NO:116-118) 和与N-端 VH dAb的融合体 (SEQ ID NO:133、134)中的重链，其中所述连接物是‘ASTKGPS’ (SEQ ID NO:6)。SEQ ID NO:73-140仅仅是示例性的，技术人员会明白，其它连接物和构建体是可能的。
表7: 在图8中使用的缩写
Figure 729565DEST_PATH_IMAGE008
。
10.2测试双靶向抗原结合蛋白的需要的特征
效价/亲和力:适合进一步开发的双特异性分子的基础性质是对抗原的动力学结合亲和力(通常通过表面等离子体共振 (SPR)形式（例如BIAcore）来测定)，其又可以用于预测在施用治疗量以后的最小药理学有效浓度（基于先前的抗原浓度和可用性的知识）。还可以预测亲和力与中和效价有关，后者是通常通过体外试验来评估的一种性质，其决定了介导特定药理学作用的化合物浓度。这可以是受体/配体结合事件的抑制，或下游应答途径的刺激/抑制。例如，通过它阻止受TNF调节的其它细胞因子的生产的程度，可以评估TNF拮抗剂的效价。其常见形式是，MRC-5细胞响应于TNF而分泌的IL8的减少。对于VEGF拮抗剂，受体磷酸化降低的程度是抗-VEGF剂的抑制作用的直接后果，而HUVEC细胞的增殖的减少与该作用具有生物学关联。与动力学亲和力一样，需要双特异性物表现出对两种抗原的靶物效价。
生物物理学：因为已知常规的mAb具有良好的表达特性、生物物理学特性和药代动力学特性，需要任意可开发的双特异性分子表现出类似的特征。在瞬时的和稳定的细胞培养过程中测定表达水平，且需要是在与常规治疗抗体相同的正常范围内。需要使双特异性物顺从与mAb类似的纯化过程(例如蛋白-A捕获)和生产临床级物质所需的其它下游加工(DSP)步骤。需要纯化的蛋白表现出清洁的、对称的尺寸排阻色谱法(SEC)特性、在生物相容的缓冲液中在高(>25mg/ml)蛋白浓度的稳定性、和对许多应激条件(温度、pH、冻融、脱酰胺条件等)的耐受性。
药代动力学(PK)/药效动力学(PD)：需要双特异性的抗原结合蛋白的药代动力学特性与靶物的性质和疾病性质（setting）相一致。在大多数情况下，通过它们的长血清半衰期，确定地鉴别出抗体，且这是通常希望的特性。通常，在啮齿动物和灵长类动物物种中评估PK，并将双特异性物的终末半衰期 (t1/2β)与针对相同靶物的抗体药剂相对比(在以完全不同速率代谢两种活性的情况下，假定双特异性物会反映更迅速地清除的物质)。双特异性分子的PK试验会理想地在单个试验 (桥连试验)中测量2种活性，从而确信，在循环中的残余药物是完整的且完全双功能的(例如，将TNF固定化在平板上，将含有药物的样品加入平板中，并通过加入例如生物素化的VEGF（其本身通过抗-生物素药剂来检测），测定存在的双特异性物的量)。对双特异性化合物的其它体内分析包括，在疾病模型中测试，条件是，存在这样的模型，且确定地理解了双特异性物与宿主物种的交叉反应性。对于TNF/VEGF 双特异性物，这可以包括炎症（其中炎症被增加的血管渗漏加重）或血管增生性病症（其中局部环境中巨噬细胞的活化会加重疾病状态）。在灵长类动物中，这样的模型也可以允许衍生出某些药效动力学的标志物，其活性可能在药剂的循环等中起作用。
安全性：双特异性形式的相对新颖性(即使组分部分和靶物存在先例)会产生安全性和耐受性的问题。象任何生物药一样，需要全范围的毒理学试验，更加关注与双特异性分子形式有关的任何假定的问题。这可能包括：额外的预料之外的药理学或增加的免疫原性的可能性。可以如下解决该后一种可能性：使用在计算机环境（in silico）中的工具，寻找可以用于构建分子的该方面的风险特性（risk profile）的T-细胞表位。
基于许多相同的亲和力、效价和生物物理学性能标准，可以判断非基于mAb的双特异性形式 (例如2个抗体或抗体-样片段的直接融合)，尽管有些性能（具体地PK）可以随不同的分子形式而变化。这样的分子也可以在不同的表达系统中(例如，在原核细胞中)生产，它们自身可以建立不同的需求，特别是在纯化、DSP和安全性研究方面。
实施例11
TNF/VEGF dAb-dAb线内融合体(ILF)
下面详述了用于构建dAb-dAb 线内融合体的方法，以便制备TNF-VEGF 双特异性物。但是，如上在实施例10中所述，相同的方案可以用于制备任何其它双特异性物（基于具有类似的靶物特异性的抗体或抗体片段）。
通过将2个单个结构域抗体(dAb) 遗传融合进dAb-dAb 线内融合体(ILF)中，构建具有抑制TNFα和VEGF的潜力的双特异性分子。为了构建这些分子，通过噬菌体展示，分离出针对两种靶物独立地选择的dAb，并使用多种合适的技术，通过几轮亲和力成熟，实现针对靶物的高亲和力和效价。为ILF选择的最终分子是DOM15-26-593 (抗-VEGF) (SEQ ID NO:1)和PEP1-5-19 (抗-TNFα) (SEQ ID NO:35)。
DOM15-26-593是对人VEGF-A具有大约1nM的单体亲和力的VH dAb。PEP1-5-19是对人TNFα具有大约8nM的单体亲和力的Vκ dAb。制备2种不同的ILF构建体，一种含有在氨基端处的DOM15-26-593 dAb (下面缩写为“DOM-PEP”)，一种含有在该位置处的PEP1-5-19 dAb (“PEP-DOM”)。在ILF中的2个dAb被短连接物隔开，所述短连接物源自与VH或Vκ dAb的C端天然结合的序列。因此，具有在N-端处的VH dAb的ILF包括连接物“ASTKGPS” (SEQ ID NO:6 – 从VH自然延伸成CH1)，具有在N-端处的PEP1-5-19的ILF包括连接序列 “TVAAPS” (SEQ ID NO:4 - 从Vκ自然延伸成Ck)。
为了制备ILF，修饰哺乳动物短暂表达载体pTT5 (NRC, Canada)，以包括分泌信号和适当的克隆位点。这些在下面的表8中详述。为了制备DOM-PEP构建体，使用下述的各个基因特异性的引物，扩增与DOM15-26-593 dAb和PEP1-5-19结构域 dAb相对应的单个片段。将连接序列和限制位点掺入引物序列中。
表8
注：DNA序列中的限制位点标有下划线
Figure 460761DEST_PATH_IMAGE009
。
使用AVG18和AVG19，扩增用于DOM-PEP 构建体的DOM15-26-593，并使用AVG26和AVG21，扩增用于DOM-PEP 构建体的PEP1-5-19。在纯化以后，分别用BamHI和NheI、以及NheI和HindIII，消化PCR片段，并纯化片段。然后将它们加入使用载体pTT5 的改进形式的3-片段连接中，所述改进形式含有允许缉拿该BamHI-HindIII片段插入在真核启动子下游的多克隆位点。使用标准技术，对得到的菌落进行连接、转化和分析，核苷酸序列分析证实，得到的载体含有插入物，该插入物具有SEQ ID NO:61所示的序列，这预测SEQ ID NO:62所示的翻译产物。
对于PEP-DOM 构建体，用AVG22和AVG36扩增PEP1-5-19 dAb，并使用AVG37和AVG25扩增DOM15-26-593 dAb。分别用BamHI和BsiWI (PEP)以及BsiWI和HindIII (DOM)消化这些片段。发现DOM片段被较差地消化，这归因于在引物的5’末端上的短突出端。因此，用AVG25和AVG24重新扩增PCR产物，以延长该突出端，并重复消化，将片段与消化的PEP插入物和如上所述的pTT5 载体一起加入3-片段连接中。使用标准技术，对得到的菌落进行连接、转化和分析，核苷酸序列分析证实，得到的载体含有插入物，该插入物具有SEQ ID NO:63所示的序列，这预测SEQ ID NO:64所示的翻译产物。
通过DNA maxiprep，制备用于转染的测序的克隆，并使用标准的方法，将DNA转染进HEK293-6E细胞 (加拿大国家研究委员会)中。在澄清培养基以后，通过蛋白-A 亲和色谱法，从转染的细胞上清液中收获重组蛋白，并将纯化的物质缓冲液更换进PBS中，并定量。然后通过下述的表面等离子体共振 (SPR)，评估这些蛋白的结合TNFα和VEGF的能力。
使用许多被认为会结合远离dAb CDR区的VH或Vκ dAb的单克隆抗体(或者，可以使用蛋白A或蛋白L)，经由mAb，将DOM-PEP和PEP-DOM蛋白捕获在传感器表面上，使TNF和VEGF 配体流过捕获的双特异性物，并分析结合特征。分析表明，当所述化合物被2种不同的抗-Vκ dAb之一捕获时，测试的TNF 配体的结合会受损，表明该捕获抗体会在空间上干扰配体结合。因此，将进一步的分析限制在被抗-VH dAb单克隆抗体捕获的双特异性物上。
大约1600个应答单位(RU)的抗-VH单克隆被捕获在蛋白-A 表面上，并使实验化合物经过复合物。设计实验方案，以提供结合活性的定性测量（而不是定量测量），因此不可能估测动力学等。用PEP-DOM蛋白得到了最清楚的数据，其中2个dAb都明显地能够独立地和同时地结合配体，如累加结合曲线所证实的(图9和10)。
图9中曲线的结合事件的更靠近分析证实了两种配体与PEP-DOM蛋白的结合。
也观察了DOM-PEP与TNFα和VEGF结合的可能性 (数据未显示)。
实施例12
体内研究：大鼠激光-诱导的脉络膜新血管生成(CNV)：分别测试DMS1571 (VEGF-dab)和Enbrel TM
原理
在以前的实验中得到的结果表明，抗-VEGF拮抗剂DMS1571 (DOM 15-26-593抗-VEGF dAb 的一种Fc格式化形式，其作为SEQ ID NO:65的二聚体存在)在大鼠激光-诱导的脉络膜新生血管形成 (CNV) 模型中是有效的。该实验的目的是，进一步评价该分子在大鼠CNV 模型中的剂量范围，并另外在相同模型中进行TNFα拮抗剂 (EnbrelTM)的剂量范围研究。也在该研究中测试了DMS4000。
方法学
动物
在这些研究中使用12-周龄Dark Agouti (DA)大鼠(Harlon Olac)。在操作之前，通过以0.175 ml/100g腹膜内注射氯胺酮 (37.5%, Dodge Animal Health Ltd.)、Dormitor (25%, Pfizer Animal Health, Kent)和无菌水 (Pfizer Animal Health, Exton, PA)的混合物，手术地麻醉动物，并用局部的1%托吡卡胺 (Alcon Laboratories, Fort Worth, TX)和2.5% 去氧肾上腺素 (Akorn, Inc., Decatur, IL)的组合，扩大瞳孔。所有动物实验都符合在眼和视力研究中使用动物的ARVO声明（ARVO Statement on the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research）。
实验CNV
通过使用激光光凝固 (PC)破裂玻璃膜，在2-4月龄雌性DA大鼠组中单向地诱导实验CNV。使用连接至裂隙灯眼底镜上的二极管-泵入的532 nm氩激光(Novus Omni Coherent Inc., Santa Clara, CA)，进行染料激光器PC，并手持式平凹接触镜 (Moorfields Eye Hospital, London, UK) 应用于角膜上，以中和眼力（ocular power）。使8个损伤 (532 nm，150 mW，0.15秒，100 μm 直径) 以标准化的方式以视神经为中心以500μm半径分布在视乳头周围 (离视神经盘1-1.5 mm)，并避开每只眼中的主要血管。将激光损伤的形态学终点鉴别为空化气泡的暂时出现，即与玻璃膜的破裂有关的征兆(对于背景参照，一般的方法公开在：Campos, Amaral, Becerra, & Fariss, 2006 A novel imaging technique for experimental choroidal neovascularization. Invest Ophthalmol Vis Sci, 47(12), 5163-5170，它通过引用整体并入本文)。从该研究中排除没有导致空化气泡形成的激光斑点。
体内成像
在损伤产生后7天，使用共焦高分辨率扫描激光检眼镜 (SLO) 荧光素血管造影术 (FA) (0.3ml 5%腹内注射的荧光素钠，从英国伦敦Moorfields眼科医院（Moorfields Eye Hospital, London, UK）得到的FS)，制备CNV和有关渗漏的体内图像数据，随后在手术后14天，进行第二个成像时段。基于以前在未治疗的大鼠的激光PC以后拍摄的血管造影照片中荧光素染色强度和面积的变化时程的历史对照研究，选择时间点。这些历史研究表明，在PC后4天首次观察到荧光素染色，且以后染色强度迅速增加，在光凝固后大约14天达到它的峰值 (关于方法的一般背景，参见：Kamizuru等人, 2001; Monoclonal antibody-mediated drug targeting to choroidal neovascularization in the rat. Invest Ophthalmol Vis Sci, 42(11), 2664-2672; Takehana等人, 1999 Suppression of laser-induced choroidal neovascularization by oral tranilast in the rat. Invest Ophthalmol Vis Sci, 40(2), 459-466，它们通过引用整体并入本文)。在这些研究的实验CNV的时程中没有进行其它评估，表明荧光素渗漏在光凝固后大约5周开始减少。在注射FS之前，拍摄基线反射 (在488nm和790nm)和自发荧光(激发488nm，发射>498nm)图像，以帮助确定FA图像中的损伤。在FS注射以后，立即记录动脉-静脉阶段。此后，在注射后1分钟记录荧光素血管造影照片，并在注射后4分钟再次记录，后一个4 min 数据集用于统计分析。
图像数据的评价和统计分析
通过晚期 (FS注射后4 ±1分钟) 荧光素血管造影术的定量评估，评价药物治疗的作用。将渗漏定义为与反射图像中的损伤相对应的超荧光区的存在。在定量之前，将在分析中使用的所有图像的增益和亮度标准化。通过将渗漏直径(μm)乘以该区域中的平均像素亮度值(0至1)，定量晚期荧光素血管造影术中的渗漏强度和面积。使用未成对的T-检验，对比实验组之间的结果。认为< 0.05的P值是统计上显著的。将数据显示为平均值± SEM，除非另外指出。在进行图像分析之前，将标识弄乱，并以掩蔽的方式进行定量。
大鼠CNV损伤中巨噬细胞的免疫组织化学检测
立即摘出以前在CNV研究中已经进行荧光血管造影术的眼，并在4%对甲醛中固定。然后从每只动物的治疗过的眼制备洗眼杯，并在4个蝴蝶式切口以后进行平坦固定。使用ED1 mAb，通过免疫组织化学染色，测定血管损伤的巨噬细胞含量，随后通过计数ED1阳性细胞——ED1 (CD68) mAb (目录号MCA341 Serotech, Kidlington, Oxford, UK)，进行定量。
治疗
下表(表9)显示了给每个实验组施用的治疗
。
在每种情况下, 在即将开始激光PC之前，通过玻璃体内注射，施用化合物。
激光-诱导的CNV研究的结果
在PC以后7天和14天，在2个时间点，对治疗过的眼进行高放大率荧光素血管造影术。针对与实验CNV有关的脉络膜渗漏和与指出的治疗有关的其它血管异常，对图像分级。以近-红外反射 (IR)和自发荧光模式(AF)，记录图像。在注射荧光素造影剂之前，使用IR图像定位视网膜中的损伤。在RPE (视网膜色素上皮) 水平记录所有图像。
DMS1571 (VEGF-Dab)和Enbrel TM 在大鼠CNV中的作用
表10: DMS1571
Figure 536350DEST_PATH_IMAGE011
。
在7天和14天时评估的DMS1571的CNV渗漏的平均值±SEM
注射1.0-媒介物、2.0-2μg DMS1571、3.0-1μg DMS1571、4.0-0.5μg DMS1571、5.0-0.2μg DMS1571、6.0-0.1μg DMS1571药剂，然后立即诱导激光损伤。在所有情况下，每组N=5只动物。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。
图11是表10所示数据的图解表示。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。黑色条表示第7天的结果。白色条表示第14天的结果。
表11: Enbrel TM
Figure 571564DEST_PATH_IMAGE012
。
在7天和14天时评估的实验Enbrel TM 的CNV渗漏的平均值±SEM
注射7.0-媒介物、8.0-30μg EnbrelTM、9.0-10ug EnbrelTMl、10.0-3μg Enbrel、11.0-1μg EnbrelTM、12.0-0.3μg EnbrelTM药剂，然后立即诱导激光损伤。在所有情况下，每组N=5只动物。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。
图12是表11所示数据的图解表示。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。黑色条表示第7天的结果。白色条表示第14天的结果。
图13显示了在激光PC以后7天(第1次FS)和14天 (第2次FS)时的红外 (IR，左上图)、自发荧光(AF，左下图)和荧光素血管造影术 (FS，大图)——显示了实施例图像。1. 媒介物治疗的眼，2. 用2μg DMS1571治疗的眼，8. 用30μg EnbrelTM治疗的眼。值得注意的是， CNV损伤显得比与DMS1571治疗相对应的损伤更突出和弥散性更低。箭头指示在对照和EnbrelTM治疗的动物中的新生血管形成，但是在DMS1571 动物中没有。
表12: DMS4000
Figure 94950DEST_PATH_IMAGE013
。
在7天和14天时评估的DMS4000的CNV渗漏的平均值±SEM
注射13.0-2μg DMS4000、14.0-媒介物药剂，然后立即诱导激光损伤。在所有情况下，每组N=5只动物。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。
图14是表12所示数据的图解表示。以2μl的体积，通过玻璃体内注射，施用所有化合物。
DMS1571 (VEGF-dab)和Enbrel TM 对大鼠CNV损伤的巨噬细胞含量的影响
表13 –CNV损伤中的ED1阳性细胞(巨噬细胞)的定量
Figure 587111DEST_PATH_IMAGE014
* p<0.0016相对于对照，在每种情况下，n=5只眼。
图15显示了用ED1 mab染色的平坦固定的视网膜的实施例显微照片。图1A-1B和图Enbrel 8.4显示了来自用抗-VEGF (DMS1571) (1A)、仅媒介物 (1B)或Enbrel (Enbrel 8.4)处理过的眼的视网膜的平坦固定。用ED1 (CD 68，黑色) X20显影与激光烧伤部位有关的巨噬细胞。图1D显示了视网膜的恒冷箱切片 (20μm)，它显示了已经渗入视网膜的内核层 (INL)中的与激光烧伤部位有关的巨噬细胞(ED1+，黑色)。RGC，视网膜神经节细胞层；BV，血管。x20。
结论
结果表明，DMS1571可以有效地显著减弱CNV疾病。在大于1μg的剂量，观察到强烈的且稳健的作用，0.5μg剂量表现出次于最大的作用，在小于0.5μg的剂量，该治疗剂是无效的。实验表明，30μg剂量的EnbrelTM在该模型中也是有效的，且更低的剂量是无效的。发现VEGF抑制剂（由DMS1571例证）和TNFα抑制剂（由EnbrelTM例证）能够在啮齿动物模型中独立地减弱脉络膜新生血管疾病，这表明，包含VEGF和TNFα能力的单一治疗实体（由DMS4000例证）在脉络膜新生血管AMD的治疗中是有用的。观察到，DMS4000 (其中TNFα 结合功能不可与结合大鼠TNFα相比)在大鼠CNV 模型中表现得与在等效剂量的DMS1571一样好。
从荧光血管造影术照片可以看出，当对比DMS1571处理过的眼和EnbrelTM处理过的眼时，EnbrelTM处理过的眼具有特有的图式形成，其中与DMS1571处理过的眼相比，损伤显得更突出和弥散性更低。损伤图式形成中的这些差异高度地指示DMS1571 (VEGF拮抗剂)和EnbrelTM(TNFα拮抗剂)治疗剂的独立作用机理。该论断得到下述发现的进一步支持：即在EnbrelTM治疗组中，明显更少的巨噬细胞被募集至CNV血管损伤。
实施例13体内研究：大鼠激光-诱导的脉络膜新血管生成(CNV)：测试DMS1571 (VEGF-dab)和Enbrel TM 的组合
在该实施例中使用的方法与在实施例12中给出的那些基本上相同。
下面的表14显示了为每个实验组给出的治疗。 
Figure 156632DEST_PATH_IMAGE015
* 媒介物 - 50mM醋酸钠10mM TrisHCL pH7.4, 104mM NaCl, 0.025%吐温80, 4% 甘露醇, 1% 蔗糖
#在一起施用DMS1571和EnbrelTM的情况下，各自使用1μl。
表15:  DMS1571 (VEGF-dab)和Enbrel TM 在大鼠CNV中的作用
Figure 431756DEST_PATH_IMAGE016
。
实施例14–DME模型–预测实施例
预见到，本文公开的抗原结合蛋白可有效地治疗和/或预防糖尿病黄斑水肿(DME)。这可以在糖尿病黄斑水肿模型中验证，其中在引发高血糖症以后，观察到DME和视网膜血管泄漏，参见Ishida, T. Usui和K. Yamashiro等人(VEGF164 is proinflammatory in the diabetic retina, Invest Ophthalmol Vis Sci 44 (2003), 第2155–2162页)。
序列
Figure 871965DEST_PATH_IMAGE017
Figure 207131DEST_PATH_IMAGE018
Figure 777132DEST_PATH_IMAGE019
Figure 715001DEST_PATH_IMAGE020
Figure 212979DEST_PATH_IMAGE021
。
Figure 263160DEST_PATH_IMAGE023
Figure 443868DEST_PATH_IMAGE024
Figure 858669DEST_PATH_IMAGE025
Figure 129113DEST_PATH_IMAGE026
Figure 784403DEST_PATH_IMAGE028
Figure 86333DEST_PATH_IMAGE029
Figure 262100DEST_PATH_IMAGE030
Figure 208376DEST_PATH_IMAGE032
Figure 597769DEST_PATH_IMAGE033
Figure 882120DEST_PATH_IMAGE034
Figure 592849DEST_PATH_IMAGE035
Figure 683165DEST_PATH_IMAGE036
Figure 864747DEST_PATH_IMAGE037
Figure 382316DEST_PATH_IMAGE038
Figure 282139DEST_PATH_IMAGE039
Figure 644988DEST_PATH_IMAGE040
Figure 136591DEST_PATH_IMAGE042
Figure 586027DEST_PATH_IMAGE043
Figure 752566DEST_PATH_IMAGE044
Figure 643162DEST_PATH_IMAGE045
Figure 376948DEST_PATH_IMAGE047
Figure 114223DEST_PATH_IMAGE048
Figure 921642DEST_PATH_IMAGE049
Figure 313626DEST_PATH_IMAGE051
Figure 402061DEST_PATH_IMAGE052
Figure 63986DEST_PATH_IMAGE053
Figure 530740DEST_PATH_IMAGE054
Figure 910905DEST_PATH_IMAGE055
                                序列表
 
 
<110> GLAXO GROUP LIMITED
      Peter ADAMSON
      Gerald Wayne GOUGH
      Peter Franz ERTL
      Volker GERMASCHEWSKI
      Michael STEWARD
 
<120> 抗原结合蛋白
 
 
<130> PB63684 WO
 
<150> 61/181887          
<151> 2009-05-28 
 
<160> 165
 
<170> 用于Windows4.0版的FastSEQ
 
<210> 1
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF dAb DOM15-26-593
     
 
<400> 1
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser
        115    
 
 
<210> 2
<211> 94
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α adnectin
 
<400> 2
Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr
            20                  25                  30         
Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe
        35                  40                  45             
Thr Val Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro
    50                  55                  60                 
Gly Val Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met
65                  70                  75                  80 
Pro Leu Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr
                85                  90                 
 
 
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> G4S连接物
 
<400> 3
Gly Gly Gly Gly Ser
 1               5 
 
 
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 4
Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5      
 
 
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 5
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Thr
 1               5         
 
 
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 6
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
 1               5         
 
 
<210> 7
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 7
Gly Ser
 1     
 
 
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 8
Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser
 1               5             
 
 
<210> 9
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 信号肽序列
 
<400> 9
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
 1               5                  10                  15     
Val His Ser
           
 
 
<210> 10
<211> 445
<212> PRT
<213> 智人
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)重链
 
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30          
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                  
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95      
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125             
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                 
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
 
 
<210> 11
<211> 642
<212> DNA
<213> 智人
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)轻链
 
<400> 11
gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcct ctgtgggcga tagagtgacc 60
atcacctgcc gggccagcca gggcatcaga aactacctgg cctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgcc gccagcaccc tgcagagcgg cgtgcccagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacgtgg ccacctacta ctgccagcgg tacaacagag ccccttacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgatgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gtctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaagtgca gtggaaagtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaaa gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600
ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gc                    642
 
<210> 12
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)轻链
 
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                
 
 
<210> 13
<211> 1710
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)-DOM15-26-593重链
      (DMS4000 mAbdAb重链)
     
 
<400> 13
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360
agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660
cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggacctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagtcgaccg gtgaggtgca gctgttggtg 1380
tctgggggag gcttggtaca gcctgggggg tccctgcgtc tctcctgtgc agcctccgga 1440
ttcaccttta aggcttatcc gatgatgtgg gtccgccagg ctccagggaa gggtctagag 1500
tgggtttcag agatttcgcc ttcgggttct tatacatact acgcagactc cgtgaagggc 1560
cggttcacca tctcccgcga caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg 1620
cgtgccgagg acaccgcggt atattactgt gcgaaagatc ctcggaagtt agactactgg 1680
ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc                                  1710
 
<210> 14
<211> 564
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)-DOM15-26-593重链
      (DMS4000 mAbdAb重链)
     
 
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270         
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                 
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365             
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Thr Gly
        435                 440                 445            
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
    450                 455                 460                 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
465                 470                 475                 480
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                485                 490                 495    
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
            500                 505                 510        
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
        515                 520                 525            
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    530                 535                 540                
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
545                 550                 555                 560
Thr Val Ser Ser
               
 
 
<210> 15
<211> 568
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM 15-26-抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)重链
 
<400> 15
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu Val
        115                 120                 125            
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser
    130                 135                 140                
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val
145                 150                 155                 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp
                165                 170                 175    
Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr
            180                 185                 190        
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
        195                 200                 205            
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr
    210                 215                 220                
Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
                245                 250                 255    
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
            260                 265                 270        
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
        275                 280                 285            
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
    290                 295                 300                
Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
305                 310                 315                 320
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
                325                 330                 335    
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
            340                 345                 350        
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
        355                 360                 365            
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
    370                 375                 380                
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
385                 390                 395                 400
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
                405                 410                 415    
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            420                 425                 430        
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        435                 440                 445            
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    450                 455                 460                
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
465                 470                 475                 480
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                485                 490                 495    
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            500                 505                 510        
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        515                 520                 525            
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
    530                 535                 540                
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
545                 550                 555                 560
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                565            
 
 
<210> 16
<211> 556
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)-DOM15-10-11重链
      (DMS4031 mAbdAb重链)
     
 
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Thr Gly
        435                 440                 445            
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
    450                 455                 460                
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
465                 470                 475                 480
Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                485                 490                 495    
Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
            500                 505                 510        
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
        515                 520                 525            
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met
    530                 535                 540                
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
545                 550                 555    
 
 
<210> 17
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNFR1 dAb (DOM1h-131-206)
 
<400> 17
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala His Glu
            20                  25                  30         
Thr Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser His Ile Pro Pro Asp Gly Gln Asp Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys
                85                  90                  95     
Ala Leu Leu Pro Lys Arg Gly Pro Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110        
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                
 
 
<210> 18
<211> 86
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGFR2 adnectin
 
<400> 18
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Arg His
 1               5                  10                  15     
Pro His Phe Pro Thr Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly
            20                  25                  30         
Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe Thr Val Pro Leu Gln Pro Pro Thr
        35                  40                  45             
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
    50                  55                  60                 
Tyr Ala Val Thr Asp Gly Arg Asn Gly Arg Leu Leu Ser Ile Pro Ile
65                  70                  75                  80 
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr
                85     
 
 
<210> 19
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF anticalin
 
<400> 19
Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys
 1               5                  10                  15     
Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val
            20                  25                  30         
Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys
        35                  40                  45             
Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu
    50                  55                  60                 
Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His
65                  70                  75                  80 
Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr
                85                  90                  95     
Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val
            100                 105                 110        
Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys
        115                 120                 125            
Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser
    130                 135                 140                
Glu Thr Cys Ser Pro Gly
145                 150
 
 
<210> 20
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 替代性的抗-VEGF抗体重链
 
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Tyr
            100                 105                 110        
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190        
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
        195                 200                 205            
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
    210                 215                 220                
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255    
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270        
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285            
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
    290                 295                 300                
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335    
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350        
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365            
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
    370                 375                 380                
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                405                 410                 415    
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
            420                 425                 430        
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445        
 
 
<210> 21
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF抗体 (贝伐单抗)轻链
 
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                
 
 
<210> 22
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 替代性的抗-VEGF抗体 (贝伐单抗)重链
 
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190        
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
        195                 200                 205            
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
    210                 215                 220                
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255    
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270        
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285            
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
    290                 295                 300                
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335    
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350        
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365            
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
    370                 375                 380                
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                405                 410                 415    
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
            420                 425                 430        
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445        
 
 
<210> 23
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF dAb DOM15-26
 
<400> 23
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser
        115    
 
 
<210> 24
<211> 568
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593-抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)重链
 
<400> 24
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu Val
        115                 120                 125            
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser
    130                 135                 140                
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val
145                 150                 155                 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp
                165                 170                 175    
Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr
            180                 185                 190        
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
        195                 200                 205            
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr
    210                 215                 220                
Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
                245                 250                 255    
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
            260                 265                 270        
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
        275                 280                 285            
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
    290                 295                 300                
Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
305                 310                 315                 320
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
                325                 330                 335    
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
            340                 345                 350        
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
        355                 360                 365            
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
    370                 375                 380                
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
385                 390                 395                 400
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
                405                 410                 415    
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            420                 425                 430        
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        435                 440                 445            
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    450                 455                 460                
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
465                 470                 475                 480
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                485                 490                 495    
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            500                 505                 510        
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        515                 520                 525            
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
    530                 535                 540                
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
545                 550                 555                 560
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                565            
 
 
<210> 25
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 25
Ser Thr Gly
 1         
 
 
<210> 26
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1821 (经由GS连接物与抗-VEGFR2 adnectin融合的CTLA4-Ig)
 
<400> 26
atgcatgtcg cccagccagc ggtggtgctg gccagctccc gcggcattgc ctccttcgtg 60
tgcgagtacg ccagccccgg caaggccacc gaggtgcgcg tcacggtgct ccgccaggcc 120
gatagccagg tgaccgaagt gtgtgccgct acgtacatga tggggaacga gctgaccttc 180
ctggacgact ctatctgcac cgggacctcg agcgggaacc aggtgaacct gaccatccag 240
ggcctgcgcg cgatggacac gggcctgtac atctgcaagg tggagttgat gtaccccccc 300
ccgtactacc tggggatcgg caacggcacg cagatctacg tcatcgaccc cgaaccttgc 360
cctgacagcg accaggagcc caagtctagt gacaagaccc atacctctcc ccccagcccc 420
gctccagagc tgctgggggg ctccagcgtg ttcctgtttc cccccaagcc taaggacacc 480
ctgatgatct ccagaacccc cgaggtgacc tgcgtggtcg tggatgtgag tcacgaggac 540
cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggggtggagg tgcataacgc caagaccaag 600
cctcgcgagg agcagtacaa cagtacctac cgcgtggtgt ccgtgctcac tgtgctgcat 660
caggactggc tgaacggcaa ggagtataag tgcaaggtgt ctaacaaggc cttgcccgcc 720
cccatcgaga aaacaatctc caaggccaaa gggcagccca gggaacctca ggtgtacacc 780
ctccctccaa gccgtgacga gctgaccaag aaccaggtct ctctgacctg cttggtgaag 840
ggcttctacc ctagcgacat cgctgtggag tgggagtcca acgggcagcc cgagaacaac 900
tacaaaacca ccccgcccgt gctggactct gacggctcct tcttcctgta cagcaaactg 960
accgtggaca agtccaggtg gcagcaggga aacgtgttca gctgcagcgt catgcatgag 1020
gccctgcata accattacac acagaagagc ctgtccctga gccccggcaa gggatccgag 1080
gtggtggccg ccacccccac cagcctgctg atttcctgga ggcaccccca cttccccaca 1140
cgctactaca ggatcaccta cggcgagacc ggcggcaaca gccccgtgca ggagttcacc 1200
gtgcccctgc agcctcccac tgccaccatc agcggcctca agcccggcgt ggactacacc 1260
atcaccgtgt acgccgtcac cgacggaagg aacggcaggc tgctgagcat ccccatcagc 1320
atcaactaca ggacc                                                  1335
 
<210> 27
<211> 437
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1821 (经由GS连接物与抗-VEGFR2 adnectin融合的CTLA4-Ig)
 
<400> 27
Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly Ile
 1               5                  10                  15     
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Asp Gly Lys Ala Thr Glu Val Arg Val
            20                  25                  30         
Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln Val Thr Glu Val Cys Ala Ala
        35                  40                  45             
Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser Ile Cys
    50                  55                  60                 
Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val Asn Leu Thr Ile Gln Gly Leu
65                  70                  75                  80 
Arg Ala Met Asp Thr Gly Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro
                85                  90                  95     
Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp
            100                 105                 110        
Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gln Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
        115                 120                 125            
Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser
    130                 135                 140                
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
145                 150                 155                 160
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                165                 170                 175    
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
            180                 185                 190        
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
        195                 200                 205            
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
    210                 215                 220                
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
225                 230                 235                 240
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
                245                 250                 255    
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
            260                 265                 270        
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
        275                 280                 285            
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
    290                 295                 300                
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu
            340                 345                 350        
Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Arg His Pro
        355                 360                 365             
His Phe Pro Thr Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly
    370                 375                 380                
Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe Thr Val Pro Leu Gln Pro Pro Thr Ala
385                 390                 395                 400
Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr
                405                 410                 415    
Ala Val Thr Asp Gly Arg Asn Gly Arg Leu Leu Ser Ile Pro Ile Ser
            420                 425                 430         
Ile Asn Tyr Arg Thr
        435        
 
 
<210> 28
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1825 (经由GS连接物与抗-VEGF dAb融合的CTLA4-Ig)
 
<400> 28
atgcatgtcg cccagccagc ggtggtgctg gccagctccc gcggcattgc ctccttcgtg 60
tgcgagtacg ccagccccgg caaggccacc gaggtgcgcg tcacggtgct ccgccaggcc 120
gatagccagg tgaccgaagt gtgtgccgct acgtacatga tggggaacga gctgaccttc 180
ctggacgact ctatctgcac cgggacctcg agcgggaacc aggtgaacct gaccatccag 240
ggcctgcgcg cgatggacac gggcctgtac atctgcaagg tggagttgat gtaccccccc 300
ccgtactacc tggggatcgg caacggcacg cagatctacg tcatcgaccc cgaaccttgc 360
cctgacagcg accaggagcc caagtctagt gacaagaccc atacctctcc ccccagcccc 420
gctccagagc tgctgggggg ctccagcgtg ttcctgtttc cccccaagcc taaggacacc 480
ctgatgatct ccagaacccc cgaggtgacc tgcgtggtcg tggatgtgag tcacgaggac 540
cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggggtggagg tgcataacgc caagaccaag 600
cctcgcgagg agcagtacaa cagtacctac cgcgtggtgt ccgtgctcac tgtgctgcat 660
caggactggc tgaacggcaa ggagtataag tgcaaggtgt ctaacaaggc cttgcccgcc 720
cccatcgaga aaacaatctc caaggccaaa gggcagccca gggaacctca ggtgtacacc 780
ctccctccaa gccgtgacga gctgaccaag aaccaggtct ctctgacctg cttggtgaag 840
ggcttctacc ctagcgacat cgctgtggag tgggagtcca acgggcagcc cgagaacaac 900
tacaaaacca ccccgcccgt gctggactct gacggctcct tcttcctgta cagcaaactg 960
accgtggaca agtccaggtg gcagcaggga aacgtgttca gctgcagcgt catgcatgag 1020
gccctgcata accattacac acagaagagc ctgtccctga gccccggcaa gggatccgag 1080
gtgcagctcc tggtcagcgg cggcggcctg gtccagcccg gaggctcact gaggctgagc 1140
tgcgccgcta gcggcttcac cttcaaggcc taccccatga tgtgggtcag gcaggccccc 1200
ggcaaaggcc tggagtgggt gtctgagatc agccccagcg gcagctacac ctactacgcc 1260
gacagcgtga agggcaggtt caccatcagc agggacaaca gcaagaacac cctgtacctg 1320
cagatgaact ctctgagggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccaa ggaccccagg 1380
aagctggact attggggcca gggcactctg gtgaccgtga gcagc                 1425
 
<210> 29
<211> 467
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1825 (经由GS连接物与抗-VEGF dAb融合的CTLA4-Ig)
 
<400> 29
Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly Ile
 1               5                  10                  15     
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Asp Gly Lys Ala Thr Glu Val Arg Val
            20                  25                  30         
Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln Val Thr Glu Val Cys Ala Ala
        35                  40                  45             
Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser Ile Cys
    50                  55                  60                 
Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val Asn Leu Thr Ile Gln Gly Leu
65                  70                  75                  80 
Arg Ala Met Asp Thr Gly Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro
                85                  90                  95     
Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp
            100                 105                 110        
Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gln Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
        115                 120                 125            
Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser
    130                 135                 140                
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
145                 150                 155                 160
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                165                 170                 175    
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
            180                 185                 190        
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
        195                 200                 205            
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
    210                 215                 220                
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
225                 230                 235                 240
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
                245                 250                 255    
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
            260                 265                 270        
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
        275                 280                 285            
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
    290                 295                 300                
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu
            340                 345                 350        
Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
        355                 360                 365            
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro
    370                 375                 380                
Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
385                 390                 395                 400
Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
                405                 410                 415    
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
            420                 425                 430        
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
        435                 440                 445            
Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
    450                 455                 460                
Val Ser Ser
465        
 
 
<210> 30
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb重链
 
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125    
 
 
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb轻链
 
<400> 31
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
            100                 105        
 
 
<210> 32
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (英利昔单抗)重链
 
<400> 32
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30         
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
    130                 135                 140                
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                165                 170                 175    
Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190        
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205            
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220                
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255    
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270        
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285            
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val
    290                 295                 300                
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335    
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350        
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365            
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380                
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
                405                 410                 415    
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
            420                 425                 430        
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                
 
 
<210> 33
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (英利昔单抗)轻链
 
<400> 33
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                
 
 
<210> 34
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> TNFR-Fc融合体(依那西普)
 
<400> 34
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
 1               5                  10                  15     
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
            20                  25                  30         
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
        35                  40                  45             
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
    50                  55                  60                 
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
                85                  90                  95     
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
            100                 105                 110        
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
        115                 120                 125            
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
    130                 135                 140                
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145                 150                 155                 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
                165                 170                 175    
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
            180                 185                 190        
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
        195                 200                 205            
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
    210                 215                 220                
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
                245                 250                 255    
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270        
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        275                 280                 285            
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300                
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
305                 310                 315                 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            340                 345                 350        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        355                 360                 365            
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    370                 375                 380                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                405                 410                 415    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430        
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445            
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    450                 455                 460            
 
 
<210> 35
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α Vk dAb (PEP1-5-19)
 
<400> 35
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 36
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α Vk dAb (PEP1-5-490)
 
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                  
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe
                85                  90                  95      
Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105    
 
 
<210> 37
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α Vk dAb (PEP1-5-493)
 
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Asp Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Leu Ile Pro Glu
65                  70                  75                  80 
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105        
 
 
<210> 38
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α scFv (ESBA105)
 
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110        
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125            
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
    130                 135                 140                
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
                165                 170                 175    
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
            180                 185                 190        
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
        195                 200                 205            
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser
                245
 
 
<210> 39
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF Fab (ranibizumab)重链
 
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190        
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
        195                 200                 205            
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
    210                 215                 220                
Asp Lys Thr His Leu
225                
 
 
<210> 40
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF Fab (ranibizumab)轻链
 
<400> 40
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                
 
 
<210> 41
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF抗体 (R84)重链
 
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45             
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60                 
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Thr Gly Arg Ser Met Phe Arg Gly Val Ile Ile Pro Phe Asn Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125    
 
 
<210> 42
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF抗体 (R84)轻链
 
<400> 42
Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 43
<211> 424
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> VEGFR1/2杂合体- Fc融合体(aflibercept -VEGF-Trap)
 
<400> 43
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu
 1               5                  10                  15     
Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val
            20                  25                  30          
Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr
        35                  40                  45             
Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe
    50                  55                  60                  
Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu
65                  70                  75                  80 
Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr Gln Thr
                85                  90                  95     
Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu
            100                 105                 110        
Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu
        115                 120                 125             
Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln
    130                 135                 140                
His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu
145                 150                 155                 160
Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser
                165                 170                 175    
Asp Gln Gly Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn
            180                 185                 190        
Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
        195                 200                 205            
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
    210                 215                 220                 
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225                 230                 235                 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                245                 250                 255    
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
            260                 265                 270        
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
        275                 280                 285            
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
    290                 295                 300                
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
305                 310                 315                 320
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
                325                 330                 335    
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
            340                 345                 350        
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
        355                 360                 365            
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
    370                 375                 380                
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
385                 390                 395                 400
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
                405                 410                 415    
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            420                
 
 
<210> 44
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-VEGF Vk dAb (DOM15-10-11)
 
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Arg Gly
            100                 105            
 
 
<210> 45
<211> 86
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> CT01
 
<400> 45
Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Arg His
 1               5                  10                  15     
Pro His Phe Pro Thr Arg Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly
            20                  25                  30         
Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe Thr Val Pro Leu Gln Pro Pro Thr
        35                  40                  45             
Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val
    50                  55                  60                 
Tyr Ala Val Thr Asp Gly Arg Asn Gly Arg Leu Leu Ser Ile Pro Ile
65                  70                  75                  80 
Ser Ile Asn Tyr Arg Thr
                85     
 
 
<210> 46
<211> 1767
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)-DOM15-26-593重链 FC有缺陷的
      (DMS4000 mAbdAb重链 Fc有缺陷的)
     
 
<400> 46
atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcacagcgag 60
gtgcagctgg tggagtctgg cggcggactg gtgcagcccg gcagaagcct gagactgagc 120
tgtgccgcca gcggcttcac cttcgacgac tacgccatgc actgggtgag gcaggcccct 180
ggcaagggcc tggagtgggt gtccgccatc acctggaata gcggccacat cgactacgcc 240
gacagcgtgg agggcagatt caccatcagc cgggacaacg ccaagaacag cctgtacctg 300
cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacc gccgtgtact actgtgccaa ggtgtcctac 360
ctgagcaccg ccagcagcct ggactactgg ggccagggca ccctggtgac agtctcgagc 420
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 480
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcctgt gaccgtgtcc 540
tggaatagcg gagccctgac ctccggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 600
ggcctgtact ccctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 660
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaaag tggacaagaa agtggagccc 720
aagagctgcg ataagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct ggccggcgcc 780
cctagcgtgt tcctgttccc ccccaagcct aaggacaccc tgatgatcag caggaccccc 840
gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgagc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaactgg 900
tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga gcagtacaac 960
agcacctacc gcgtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag 1020
gagtacaagt gcaaagtgag caacaaggcc ctgcctgccc ctatcgagaa aaccatcagc 1080
aaggccaagg gccagcctag agagccccag gtctacaccc tgcctccctc cagagatgag 1140
ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1260
ctggacagcg atggcagctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gagcagatgg 1320
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc 1380
cagaagagtc tgagcctgtc ccctggcaag tcgaccggtg aggtgcagct gctggtgtct 1440
ggcggcggac tggtgcagcc tggcggcagc ctgagactga gctgcgccgc cagcggcttc 1500
accttcaagg cctaccccat gatgtgggtg cggcaggccc ctggcaaggg cctggaatgg 1560
gtgtccgaga tcagccccag cggcagctac acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg 1620
ttcaccatca gccgggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg 1680
gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc aaggaccccc ggaagctgga ctactggggc 1740
cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc                                     1767
 
<210> 47
<211> 564
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)-DOM15-26-593重链 FC有缺陷的
      (DMS4000 mAbdAb重链 Fc有缺陷的)
     
 
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335     
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365             
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430         
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Thr Gly
        435                 440                 445            
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
    450                 455                 460                 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
465                 470                 475                 480
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                485                 490                 495    
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
            500                 505                 510        
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
        515                 520                 525            
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    530                 535                 540                
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
545                 550                 555                 560
Thr Val Ser Ser
               
 
 
<210> 48
<211> 1758
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> EtanSTG593
 
<400> 48
ctgcccgctc aggtggcctt cactccctac gccccagagc ccggctctac ctgcaggctg 60
agggagtact acgaccagac cgcccagatg tgctgcagca agtgcagccc cggccagcac 120
gccaaagtgt tctgcaccaa gaccagcgac accgtgtgcg atagctgcga ggacagcacc 180
tacacccagc tgtggaactg ggtccccgag tgcctgagct gcggctctag gtgtagcagc 240
gaccaggtcg agacccaggc ctgcaccagg gaacagaacc ggatctgcac atgcaggccc 300
ggctggtact gcgccctcag caaacaggag ggctgcaggc tgtgtgcccc cctcaggaag 360
tgcaggcccg ggtttggcgt ggccaggccc ggaaccgaga ctagcgacgt ggtgtgcaaa 420
ccctgcgccc ccggcacctt cagcaatacc actagcagca ccgacatctg caggcctcac 480
cagatctgca acgtggtggc cattcccggc aacgcaagca tggacgccgt gtgcaccagc 540
accagcccca ccaggtcaat ggcccctgga gccgtgcatc tgccccagcc cgtgagcacc 600
agaagccagc acacccagcc tacccccgag cccagcaccg cccctagcac cagcttcctg 660
ctgcctatgg gcccctcccc tcccgccgag ggctcaaccg gcgacgaacc caagagctgc 720
gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcaccagaac tcctgggcgg acccagcgtg 780
ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gcaggacccc cgaggtgacc 840
tgtgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 900
ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac 960
agggtggtga gcgtcctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 1020
tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaaa 1080
ggccagccca gggagccaca ggtgtacaca ctgcccccca gcagggagga gatgaccaag 1140
aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctatc ccagcgatat cgccgtggag 1200
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccgt cctggactcc 1260
gacgggagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc 1320
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1380
ctgagcctga gccccggcaa gtcgaccggt gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga 1440
ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag 1500
gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag 1560
atcagcccca gcggcagcta cacctactac gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc 1620
agccgggaca acagcaagaa caccctgtac ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac 1680
accgccgtgt actactgcgc caaggacccc cggaagctgg actactgggg ccagggcacc 1740
ctggtgaccg tgagcagc                                               1758
 
<210> 49
<211> 582
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> EtanSTG593
 
<400> 49
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
 1               5                  10                  15     
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
            20                  25                  30         
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
        35                  40                  45             
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
    50                  55                  60                 
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
                85                  90                  95     
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
            100                 105                 110        
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
        115                 120                 125            
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
    130                 135                 140                
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145                 150                 155                 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
                165                 170                 175    
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
            180                 185                 190        
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
        195                 200                 205            
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
    210                 215                 220                
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
                245                 250                 255    
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270        
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        275                 280                 285            
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300                
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
305                 310                 315                 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            340                 345                 350        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        355                 360                 365            
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    370                 375                 380                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                405                 410                 415    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430        
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445            
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser
    450                 455                 460                
Thr Gly Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
465                 470                 475                 480
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys
                485                 490                 495    
Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
            500                 505                 510        
Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp
        515                 520                 525            
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
    530                 535                 540                
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
545                 550                 555                 560
Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                565                 570                 575    
Leu Val Thr Val Ser Ser
            580        
 
 
<210> 50
<211> 1827
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> EtanTV4593
 
<400> 50
ctgcccgctc aggtggcctt cactccctac gccccagagc ccggctctac ctgcaggctg 60
agggagtact acgaccagac cgcccagatg tgctgcagca agtgcagccc cggccagcac 120
gccaaagtgt tctgcaccaa gaccagcgac accgtgtgcg atagctgcga ggacagcacc 180
tacacccagc tgtggaactg ggtccccgag tgcctgagct gcggctctag gtgtagcagc 240
gaccaggtcg agacccaggc ctgcaccagg gaacagaacc ggatctgcac atgcaggccc 300
ggctggtact gcgccctcag caaacaggag ggctgcaggc tgtgtgcccc cctcaggaag 360
tgcaggcccg ggtttggcgt ggccaggccc ggaaccgaga ctagcgacgt ggtgtgcaaa 420
ccctgcgccc ccggcacctt cagcaatacc actagcagca ccgacatctg caggcctcac 480
cagatctgca acgtggtggc cattcccggc aacgcaagca tggacgccgt gtgcaccagc 540
accagcccca ccaggtcaat ggcccctgga gccgtgcatc tgccccagcc cgtgagcacc 600
agaagccagc acacccagcc tacccccgag cccagcaccg cccctagcac cagcttcctg 660
ctgcctatgg gcccctcccc tcccgccgag ggctcaaccg gcgacgaacc caagagctgc 720
gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcaccagaac tcctgggcgg acccagcgtg 780
ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gcaggacccc cgaggtgacc 840
tgtgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 900
ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac 960
agggtggtga gcgtcctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 1020
tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaaa 1080
ggccagccca gggagccaca ggtgtacaca ctgcccccca gcagggagga gatgaccaag 1140
aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctatc ccagcgatat cgccgtggag 1200
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccgt cctggactcc 1260
gacgggagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc 1320
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1380
ctgagcctga gccccggcaa gaccgtggcg gcgcccagca cggtggccgc cccctccacc 1440
gtcgccgcgc caagcaccgt ggctgctccg tcgaccggtg aggtgcagct gctggtgtct 1500
ggcggcggac tggtgcagcc tggcggcagc ctgagactga gctgcgccgc cagcggcttc 1560
accttcaagg cctaccccat gatgtgggtg cggcaggccc ctggcaaggg cctggaatgg 1620
gtgtccgaga tcagccccag cggcagctac acctactacg ccgacagcgt gaagggccgg 1680
ttcaccatca gccgggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa cagcctgcgg 1740
gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc aaggaccccc ggaagctgga ctactggggc 1800
cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc                                     1827
 
<210> 51
<211> 605
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> EtanTV4593
 
<400> 51
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
 1               5                  10                  15     
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
            20                  25                  30         
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
        35                  40                  45             
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
    50                  55                  60                 
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
                85                  90                  95     
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
            100                 105                 110        
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
        115                 120                 125            
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
    130                 135                 140                
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145                 150                 155                 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
                165                 170                 175    
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
            180                 185                 190        
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
        195                 200                 205            
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
    210                 215                 220                
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
                245                 250                 255    
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270        
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        275                 280                 285            
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300                
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
305                 310                 315                 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            340                 345                 350        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        355                 360                 365            
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    370                 375                 380                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                405                 410                 415    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430        
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445            
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
    450                 455                 460                
Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro
465                 470                 475                 480
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Gly Glu Val Gln Leu Leu Val Ser
                485                 490                 495    
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
            500                 505                 510        
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln
        515                 520                 525            
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly
    530                 535                 540                
Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
545                 550                 555                 560
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
                565                 570                 575    
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu
            580                 585                 590        
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        595                 600                 605
 
 
<210> 52
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG18引物
 
<400> 52
attatgggat ccaccggcga ggtgcagctg ttggtgt                          37
 
<210> 53
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG19引物
 
<400> 53
gctggggccc ttggtgctag cgctcgagac ggtgaccagg                       40
 
<210> 54
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG26引物
 
<400> 54
ctcgagcgct agcaccaagg gccccagcga catccagatg accc                  44
 
<210> 55
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG21引物
 
<400> 55
ttatgtcaag cttttaccgt ttgatttcca ccttggt                          37
 
<210> 56
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG22引物
 
<400> 56
attatgggat ccaccggcga catccagatg acccagtctc c                     41
 
<210> 57
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG36引物
 
<400> 57
gcgccgccac cgtacgtttg atttccacct tggtccc                          37
 
<210> 58
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG37引物
 
<400> 58
caaacgtacg gtggcggcgc cgagcgaggt gcagctgttg gtgtc                 45
 
<210> 59
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG25引物
 
<400> 59
ttatgtcaag cttttagctc gagacggtga ccag                             34
 
<210> 60
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AVG24引物
 
<400> 60
ggtggaaatc aaacgtacgg tggcggcgcc gagcga                           36
 
<210> 61
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 - PEP1-5-19线内融合体
 
<400> 61
gaggtgcagc tgttggtgtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttaag gcttatccga tgatgtgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gtctagagtg ggtttcagag atttcgcctt cgggttctta tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaagatcct 300
cggaagttag actactgggg tcagggaacc ctggtcaccg tctcgagcgc tagcaccaag 360
ggccccagcg acatccagat gacccagtct ccatcctctc tgtctgcatc tgtaggagac 420
cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag agcattgata gttatttaca ttggtaccag 480
cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctatagtg catccgagtt gcaaagtggg 540
gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct gggacagatt tcactctcac catcagcagt 600
ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac tgtcaacagg ttgtgtggcg tccttttacg 660
ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa cgg                              693
 
<210> 62
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 - PEP1-5-19线内融合体
 
<400> 62
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr
        115                 120                 125            
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
    130                 135                 140                
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln
145                 150                 155                 160
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Glu
                165                 170                 175    
Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
            180                 185                 190        
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
        195                 200                 205            
Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly
    210                 215                 220                
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
225                 230    
 
 
<210> 63
<211> 690
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> PEP1-5-19-DOM15-26-593线内融合体
 
<400> 63
gacatccaga tgacccagtc tccatcctct ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattgat agttatttac attggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatagt gcatccgagt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag gttgtgtggc gtccttttac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtacggtg gcggcgccga gcgaggtgca gctgttggtg 360
tctgggggag gcttggtaca gcctgggggg tccctgcgtc tctcctgtgc agcctccgga 420
ttcaccttta aggcttatcc gatgatgtgg gtccgccagg ctccagggaa gggtctagag 480
tgggtttcag agatttcgcc ttcgggttct tatacatact acgcagactc cgtgaagggc 540
cggttcacca tctcccgcga caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg 600
cgtgccgagg acaccgcggt atattactgt gcgaaagatc ctcggaagtt agactactgg 660
ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc                                  690
 
<210> 64
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> PEP1-5-19-DOM15-26-593线内融合体
 
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
        115                 120                 125            
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys
    130                 135                 140                
Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145                 150                 155                 160
Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp
                165                 170                 175    
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
            180                 185                 190        
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
        195                 200                 205            
Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
    210                 215                 220                
Leu Val Thr Val Ser Ser
225                 230
 
 
<210> 65
<211> 352
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DMS1571 - myc标记的Fc格式化形式的DOM 15-26-593 抗-VEGF dAb
      (作为该序列的二聚体存在)
 
<400> 65
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95      
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125             
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
        195                 200                 205            
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
    210                 215                 220                 
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225                 230                 235                 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
                245                 250                 255    
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
            260                 265                 270        
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
        275                 280                 285            
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys Gly Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn
            340                 345                 350        
 
 
<210> 66
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 66
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5                  10                  15     
Gly Ser
       
 
 
<210> 67
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 67
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5                  10                  15     
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser
            20                  25     
 
 
<210> 68
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 68
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5                  10                  15     
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
            20                  25                  30         
Gly Ser
       
 
 
<210> 69
<211> 571
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GSTVAAPSGS连接物的
　　　抗-TNF-α mAb (阿达木单抗) Fc有缺陷的-DOM15-26-593重链
 
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly
    450                 455                 460                
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
465                 470                 475                 480
Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro
                485                 490                 495    
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr
            500                 505                 510        
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
        515                 520                 525            
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
    530                 535                 540                
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr
545                 550                 555                 560
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                565                 570    
 
 
<210> 70
<211> 579
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GS(TVAAPSGS) x2连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)
       Fc有缺陷的-DOM15-26-593重链
 
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Glu
    450                 455                 460                
Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
465                 470                 475                 480
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro
                485                 490                 495     
Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
            500                 505                 510        
Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
        515                 520                 525             
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
    530                 535                 540                
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
545                 550                 555                 560
Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
                565                 570                 575    
Val Ser Ser
           
 
 
<210> 71
<211> 587
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GS(TVAAPSGS) x3连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)
　　　Fc有缺陷的-DOM15-26-593重链
 
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr
    450                 455                 460                
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly
465                 470                 475                 480
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                485                 490                 495    
Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro
            500                 505                 510        
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr
        515                 520                 525            
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
    530                 535                 540                
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
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Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr
                565                 570                 575    
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            580                 585        
 
 
<210> 72
<211> 595
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GS(TVAAPSGS) x4连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗)
      Fc有缺陷的-DOM15-26-593重链
 
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205            
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr
    450                 455                 460                 
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Glu
465                 470                 475                 480
Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
                485                 490                 495     
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro
            500                 505                 510        
Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
        515                 520                 525             
Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
    530                 535                 540                
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
545                 550                 555                 560
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                565                 570                 575    
Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            580                 585                 590        
Val Ser Ser
        595
 
 
<210> 73
<211> 585
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 依那西普-DOM15-26-593
 
<400> 73
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
 1               5                  10                  15     
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
            20                  25                  30         
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
        35                  40                  45             
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
    50                  55                  60                 
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
                85                  90                  95     
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
            100                 105                 110        
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
        115                 120                 125            
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
    130                 135                 140                
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145                 150                 155                 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
                165                 170                 175     
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
            180                 185                 190        
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
        195                 200                 205             
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
    210                 215                 220                
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
                245                 250                 255    
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270         
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        275                 280                 285            
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300                 
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
305                 310                 315                 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            340                 345                 350        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        355                 360                 365            
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    370                 375                 380                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                405                 410                 415    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430        
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445            
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
    450                 455                 460                
Val Ala Ala Pro Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu
465                 470                 475                 480
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
                485                 490                 495    
Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
            500                 505                 510        
Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr
        515                 520                 525            
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
    530                 535                 540                
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
545                 550                 555                 560
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly
                565                 570                 575    
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            580                 585
 
 
<210> 74
<211> 577
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 依那西普-DOM15-10-11
 
<400> 74
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
 1               5                  10                  15     
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
            20                  25                  30         
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
        35                  40                  45             
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
    50                  55                  60                 
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
                85                  90                  95     
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
            100                 105                 110        
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
        115                 120                 125            
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
    130                 135                 140                
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145                 150                 155                 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
                165                 170                 175    
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
            180                 185                 190        
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
        195                 200                 205            
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
    210                 215                 220                
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
                245                 250                 255    
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270        
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        275                 280                 285            
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300                
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
305                 310                 315                 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            340                 345                 350        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        355                 360                 365            
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    370                 375                 380                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                405                 410                 415    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430        
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445            
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
    450                 455                 460                
Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
465                 470                 475                 480
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
                485                 490                 495    
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
        515                 520                 525            
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
    530                 535                 540                
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
545                 550                 555                 560
Met Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                565                 570                 575    
Arg
   
 
 
<210> 75
<211> 619
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 依那西普-VEGF anticalin
 
<400> 75
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
 1               5                  10                  15     
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
            20                  25                  30         
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
        35                  40                  45             
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
    50                  55                  60                 
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
                85                  90                  95     
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
            100                 105                 110        
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
        115                 120                 125            
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
    130                 135                 140                
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145                 150                 155                 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
                165                 170                 175    
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
            180                 185                 190        
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
        195                 200                 205            
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
    210                 215                 220                
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
                245                 250                 255    
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270        
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        275                 280                 285            
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300                
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
305                 310                 315                 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            340                 345                 350        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        355                 360                 365            
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    370                 375                 380                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                405                 410                 415    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430        
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445            
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
    450                 455                 460                
Val Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly
465                 470                 475                 480
Thr Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met
                485                 490                 495    
Asn Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His
            500                 505                 510        
Asn Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu
        515                 520                 525            
Val Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala
    530                 535                 540                
Asp Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp
545                 550                 555                 560
His Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg
                565                 570                 575    
Gly Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu
            580                 585                 590        
Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu
        595                 600                 605            
Ile Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly
    610                 615                
 
 
<210> 76
<211> 554
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-贝伐单抗 DVD-Ig重链
 
<400> 76
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                  
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu
        115                 120                 125            
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
    130                 135                 140                
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
145                 150                 155                 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
                165                 170                 175    
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys
            180                 185                 190        
Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu
        195                 200                 205            
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
    210                 215                 220                
Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
                245                 250                 255    
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
            260                 265                 270        
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
        275                 280                 285            
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
    290                 295                 300                
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
305                 310                 315                 320
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
                325                 330                 335    
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
            340                 345                 350        
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
        355                 360                 365            
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
    370                 375                 380                
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
385                 390                 395                 400
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                405                 410                 415    
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val
            420                 425                 430        
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
        435                 440                 445            
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
    450                 455                 460                
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
465                 470                 475                 480
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
                485                 490                 495    
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
            500                 505                 510        
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
        515                 520                 525            
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
    530                 535                 540                
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
545                 550                
 
 
<210> 77
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-贝伐单抗 DVD-Ig轻链
 
<400> 77
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser
    130                 135                 140                
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val
        195                 200                 205            
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 78
<211> 577
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-r84 DVD-Ig重链
 
<400> 78
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30         
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Gln
        115                 120                 125            
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
    130                 135                 140                
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
145                 150                 155                 160
Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
                165                 170                 175    
Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
            180                 185                 190        
Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr Met
        195                 200                 205            
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
    210                 215                 220                
Thr Gly Arg Ser Met Phe Arg Gly Val Ile Ile Pro Phe Asn Gly Met
225                 230                 235                 240
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                245                 250                 255    
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
            260                 265                 270        
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
        275                 280                 285            
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
    290                 295                 300                
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val
305                 310                 315                 320
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
                325                 330                 335    
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
            340                 345                 350        
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
        355                 360                 365            
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
    370                 375                 380                
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
385                 390                 395                 400
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
                405                 410                 415    
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
            420                 425                 430        
Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        435                 440                 445            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    450                 455                 460                
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
465                 470                 475                 480
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
                485                 490                 495    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            500                 505                 510        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        515                 520                 525            
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys
    530                 535                 540                
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
545                 550                 555                 560
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                565                 570                 575    
Lys
   
 
 
<210> 79
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-r84 DVD-Ig轻链
 
<400> 79
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
    130                 135                 140                
Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
        195                 200                 205            
Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 80
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-ranibizumab DVD-Fab
 
<400> 80
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30         
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu
        115                 120                 125            
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
    130                 135                 140                
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly
145                 150                 155                 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
                165                 170                 175    
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys
            180                 185                 190        
Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu
        195                 200                 205            
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
    210                 215                 220                
Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
                245                 250                 255    
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
            260                 265                 270        
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
        275                 280                 285            
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
    290                 295                 300                
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
305                 310                 315                 320
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
                325                 330                 335    
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
            340                 345                 350        
Lys Thr His Leu
        355    
 
 
<210> 81
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-ranibizumab DVD-Fab
 
<400> 81
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser
    130                 135                 140                
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val
        195                 200                 205            
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 82
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-DOM15-26-593 mAb-dAb重链
 
<400> 82
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30         
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110         
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
    130                 135                 140                 
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                165                 170                 175    
Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190        
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205             
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220                
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255    
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270        
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285            
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val
    290                 295                 300                 
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335    
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350        
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365            
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380                
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
                405                 410                 415    
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
            420                 425                 430        
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala Ala
        435                 440                 445            
Pro Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
    450                 455                 460                
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys
465                 470                 475                 480
Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
                485                 490                 495    
Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp
            500                 505                 510        
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        515                 520                 525            
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    530                 535                 540                
Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
545                 550                 555                 560
Leu Val Thr Val Ser Ser
                565    
 
 
<210> 83
<211> 558
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-DOM15-10-11 mAb-dAb重链
 
<400> 83
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30         
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
    130                 135                 140                
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                165                 170                 175    
Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190        
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205            
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220                
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255    
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270        
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285            
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val
    290                 295                 300                
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335    
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350        
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365            
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380                
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
                405                 410                 415    
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
            420                 425                 430        
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala Ala
        435                 440                 445            
Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
    450                 455                 460                
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly
465                 470                 475                 480
Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
                485                 490                 495    
Leu Ile Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
            500                 505                 510        
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
        515                 520                 525            
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln
    530                 535                 540                
Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
545                 550                 555            
 
 
<210> 84
<211> 600
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-VEGF anticalin重链
 
<400> 84
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn His
            20                  25                  30         
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala
65                  70                  75                  80 
Val Tyr Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Cys Ser Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
    130                 135                 140                
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                165                 170                 175    
Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190        
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205            
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220                
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255    
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270        
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285            
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val
    290                 295                 300                
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335    
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350        
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365            
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380                
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
                405                 410                 415    
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
            420                 425                 430        
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala Ala
        435                 440                 445            
Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr
    450                 455                 460                
Leu Lys Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu
465                 470                 475                 480
Ser Val Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu
                485                 490                 495    
Ala Lys Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala
            500                 505                 510        
Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly
        515                 520                 525            
Lys His Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile
    530                 535                 540                
Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys
545                 550                 555                 560
Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe
                565                 570                 575    
Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg
            580                 585                 590        
Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly
        595                 600
 
 
<210> 85
<211> 336
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-DOM15-26-593 mAb-dAb轻链
 
<400> 85
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Glu Val Gln Leu
    210                 215                 220                
Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
225                 230                 235                 240
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp
                245                 250                 255    
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser
            260                 265                 270        
Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
        275                 280                 285            
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
    290                 295                 300                
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro
305                 310                 315                 320
Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                325                 330                 335    
 
 
<210> 86
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-DOM15-10-11 mAb-dAb轻链
 
<400> 86
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met
    210                 215                 220                
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
225                 230                 235                 240
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr
                245                 250                 255    
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser
            260                 265                 270        
Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        275                 280                 285            
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    290                 295                 300                
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln
305                 310                 315                 320
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                325            
 
 
<210> 87
<211> 370
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 英利昔单抗-VEGF anticalin轻链
 
<400> 87
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Gly Ser Ser
            20                  25                  30         
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Ser
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Trp Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly
    210                 215                 220                
Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val
225                 230                 235                 240
Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr
                245                 250                 255    
Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu
            260                 265                 270        
Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys
        275                 280                 285            
Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile
    290                 295                 300                
Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln
305                 310                 315                 320
Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro
                325                 330                 335    
Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg
            340                 345                 350        
Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser
        355                 360                 365            
Pro Gly
    370
 
 
<210> 88
<211> 575
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-贝伐单抗 DVD-Ig重链
 
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
    130                 135                 140                
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                165                 170                 175    
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
            180                 185                 190        
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
        195                 200                 205            
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
225                 230                 235                 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
                245                 250                 255    
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
            260                 265                 270        
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
        275                 280                 285            
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
    290                 295                 300                
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
305                 310                 315                 320
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
                325                 330                 335    
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
            340                 345                 350        
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        355                 360                 365            
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    370                 375                 380                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
385                 390                 395                 400
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                405                 410                 415    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
            420                 425                 430        
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
        435                 440                 445            
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
    450                 455                 460                
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
465                 470                 475                 480
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
                485                 490                 495    
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
            500                 505                 510        
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
        515                 520                 525            
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    530                 535                 540                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
545                 550                 555                 560
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                565                 570                 575
 
 
<210> 89
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-贝伐单抗 DVD-Ig轻链
 
<400> 89
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser
    130                 135                 140                
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val
        195                 200                 205            
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 90
<211> 578
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-r84 DVD-Ig重链
 
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
    130                 135                 140                
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                165                 170                 175    
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
            180                 185                 190        
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
        195                 200                 205            
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                
Ala Thr Gly Arg Ser Met Phe Arg Gly Val Ile Ile Pro Phe Asn Gly
225                 230                 235                 240
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
            260                 265                 270        
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
        275                 280                 285            
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
    290                 295                 300                
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val
305                 310                 315                 320
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
                325                 330                 335    
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
            340                 345                 350        
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
        355                 360                 365            
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
    370                 375                 380                
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
385                 390                 395                 400
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
                405                 410                 415    
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
            420                 425                 430        
Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
        435                 440                 445            
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
    450                 455                 460                
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
465                 470                 475                 480
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
                485                 490                 495    
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
            500                 505                 510        
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
        515                 520                 525            
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp
    530                 535                 540                
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
545                 550                 555                 560
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
                565                 570                 575    
Gly Lys
       
 
 
<210> 91
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-r84 DVD-Ig轻链
 
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
    130                 135                 140                
Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr
        195                 200                 205            
Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 92
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-ranibizumab DVD-Fab
 
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110        
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
    130                 135                 140                
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                165                 170                 175    
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
            180                 185                 190        
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
        195                 200                 205            
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                
Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
225                 230                 235                 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
                245                 250                 255    
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
            260                 265                 270        
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
        275                 280                 285            
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
    290                 295                 300                
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
305                 310                 315                 320
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
                325                 330                 335    
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
            340                 345                 350        
Asp Lys Thr His Leu
        355        
 
 
<210> 93
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-ranibizumab DVD-Fab
 
<400> 93
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser
    130                 135                 140                
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val
        195                 200                 205            
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 94
<211> 601
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-VEGF anticalin重链
 
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45              
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110         
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125            
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
    130                 135                 140                 
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190        
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
        195                 200                 205             
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
    210                 215                 220                
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255    
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285            
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser
    290                 295                 300                
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
                325                 330                 335    
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
            340                 345                 350        
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
        355                 360                 365            
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
    370                 375                 380                
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala
        435                 440                 445            
Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp
    450                 455                 460                
Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu
465                 470                 475                 480
Glu Ser Val Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu
                485                 490                 495    
Glu Ala Lys Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys
            500                 505                 510        
Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly
        515                 520                 525            
Gly Lys His Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val
    530                 535                 540                
Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val
545                 550                 555                 560
Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp
                565                 570                 575    
Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro
            580                 585                 590        
Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly
        595                 600    
 
 
<210> 95
<211> 336
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-DOM15-26-593 mAb-dAb轻链
 
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Glu Val Gln Leu
    210                 215                 220                
Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
225                 230                 235                 240
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp
                245                 250                 255    
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser
            260                 265                 270        
Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
        275                 280                 285            
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
    290                 295                 300                
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro
305                 310                 315                 320
Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                325                 330                 335    
 
 
<210> 96
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-DOM15-10-11 mAb-dAb轻链
 
<400> 96
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met
    210                 215                 220                
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
225                 230                 235                 240
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr
                245                 250                 255    
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser
            260                 265                 270        
Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        275                 280                 285            
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    290                 295                 300                
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln
305                 310                 315                 320
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                325            
 
 
<210> 97
<211> 370
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 阿达木单抗-VEGF anticalin轻链
 
<400> 97
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly
    210                 215                 220                
Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val
225                 230                 235                 240
Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr
                245                 250                 255    
Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu
            260                 265                 270        
Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys
        275                 280                 285            
Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile
    290                 295                 300                
Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln
305                 310                 315                 320
Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro
                325                 330                 335     
Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg
            340                 345                 350        
Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser
        355                 360                 365             
Pro Gly
    370
 
 
<210> 98
<211> 580
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -贝伐单抗 DVD-Ig重链
 
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
    130                 135                 140                
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
                165                 170                 175    
Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
            180                 185                 190        
Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser
        195                 200                 205            
Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
    210                 215                 220                
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His
225                 230                 235                 240
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                245                 250                 255    
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
            260                 265                 270        
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
        275                 280                 285            
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
    290                 295                 300                
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser
305                 310                 315                 320
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
                325                 330                 335    
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
            340                 345                 350        
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
        355                 360                 365            
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
    370                 375                 380                
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
385                 390                 395                 400
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
                405                 410                 415    
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
            420                 425                 430        
Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
        435                 440                 445            
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
    450                 455                 460                
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
465                 470                 475                 480
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
                485                 490                 495    
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
            500                 505                 510        
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
        515                 520                 525            
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr
    530                 535                 540                
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
545                 550                 555                 560
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
                565                 570                 575    
Ser Pro Gly Lys
            580
 
 
<210> 99
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -贝伐单抗 DVD-Ig轻链
 
<400> 99
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110        
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
        115                 120                 125            
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn
    130                 135                 140                
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu
145                 150                 155                 160
Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
                165                 170                 175    
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
            180                 185                 190        
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro
        195                 200                 205            
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
    210                 215                 220                
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
225                 230                 235                 240
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
                245                 250                 255    
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
            260                 265                 270        
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
        275                 280                 285            
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
    290                 295                 300                
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
305                 310                 315                 320
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325        
 
 
<210> 100
<211> 583
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -r84 DVD Ig重链
 
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Thr Lys Gly Pro Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
    130                 135                 140                
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
                165                 170                 175    
Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile
            180                 185                 190        
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser
        195                 200                 205            
Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
    210                 215                 220                
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Arg Ser Met Phe Arg Gly Val Ile
225                 230                 235                 240
Ile Pro Phe Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
                245                 250                 255    
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
            260                 265                 270        
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
        275                 280                 285            
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
    290                 295                 300                
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
                325                 330                 335    
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
            340                 345                 350        
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
        355                 360                 365            
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
    370                 375                 380                
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
385                 390                 395                 400
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
                405                 410                 415    
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
            420                 425                 430        
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
        435                 440                 445            
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
    450                 455                 460                
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
465                 470                 475                 480
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
                485                 490                 495    
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
            500                 505                 510        
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
        515                 520                 525            
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys
    530                 535                 540                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
545                 550                 555                 560
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                565                 570                 575    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            580            
 
 
<210> 101
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -r84 DVD-Ig轻链
 
<400> 101
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110        
Ser Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
        115                 120                 125            
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
    130                 135                 140                
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
145                 150                 155                 160
Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
                165                 170                 175    
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
            180                 185                 190        
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro
        195                 200                 205            
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
    210                 215                 220                
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
225                 230                 235                 240
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
                245                 250                 255    
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
            260                 265                 270        
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
        275                 280                 285            
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
    290                 295                 300                
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
305                 310                 315                 320
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325        
 
 
<210> 102
<211> 362
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -ranibizumab DVD-Fab重链
 
<400> 102
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
    130                 135                 140                
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr
145                 150                 155                 160
Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
                165                 170                 175    
Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
            180                 185                 190        
Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser
        195                 200                 205            
Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
    210                 215                 220                
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His
225                 230                 235                 240
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                245                 250                 255    
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
            260                 265                 270        
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
        275                 280                 285            
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
    290                 295                 300                
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser
305                 310                 315                 320
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
                325                 330                 335    
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
            340                 345                 350        
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu
        355                 360        
 
 
<210> 103
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -ranibizumab DVD-Fab轻链
 
<400> 103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110        
Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
        115                 120                 125            
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn
    130                 135                 140                
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu
145                 150                 155                 160
Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
                165                 170                 175    
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
            180                 185                 190        
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro
        195                 200                 205            
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
    210                 215                 220                
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
225                 230                 235                 240
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
                245                 250                 255    
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
            260                 265                 270        
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
        275                 280                 285            
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
    290                 295                 300                
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
305                 310                 315                 320
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325        
 
 
<210> 104
<211> 572
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -DOM15-26-593 mAb-dAb重链
 
<400> 104
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
    130                 135                 140                
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145                 150                 155                 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
                165                 170                 175    
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val
            180                 185                 190        
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
        195                 200                 205            
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
    210                 215                 220                
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
                245                 250                 255    
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
            260                 265                 270        
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
        275                 280                 285            
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
    290                 295                 300                
Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305                 310                 315                 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
                325                 330                 335    
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
            340                 345                 350        
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
        355                 360                 365            
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
    370                 375                 380                
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385                 390                 395                 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp
                405                 410                 415    
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
            420                 425                 430        
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
        435                 440                 445            
Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly
    450                 455                 460                
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
465                 470                 475                 480
Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala
                485                 490                 495    
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser
            500                 505                 510        
Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
        515                 520                 525            
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
    530                 535                 540                
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp
545                 550                 555                 560
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                565                 570        
 
 
<210> 105
<211> 564
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -DOM15-10-11 mAb-dAb重链
 
<400> 105
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
    130                 135                 140                
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145                 150                 155                 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
                165                 170                 175    
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val
            180                 185                 190        
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
        195                 200                 205            
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
    210                 215                 220                
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
                245                 250                 255    
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
            260                 265                 270        
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
        275                 280                 285            
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
    290                 295                 300                
Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305                 310                 315                 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
                325                 330                 335    
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
            340                 345                 350        
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
        355                 360                 365            
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
    370                 375                 380                
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385                 390                 395                 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp
                405                 410                 415    
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
            420                 425                 430        
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
        435                 440                 445            
Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
    450                 455                 460                
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
465                 470                 475                 480
Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
                485                 490                 495    
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser
            500                 505                 510        
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
        515                 520                 525            
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
    530                 535                 540                
Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
545                 550                 555                 560
Glu Ile Lys Arg
                
 
 
<210> 106
<211> 606
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -VEGF anticalin重链
 
<400> 106
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ala Phe Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Asp Arg Gly Ile Ala Ala Gly Gly Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
            100                 105                 110        
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
    130                 135                 140                
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145                 150                 155                 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
                165                 170                 175    
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val
            180                 185                 190        
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
        195                 200                 205            
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
    210                 215                 220                
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
                245                 250                 255    
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
            260                 265                 270        
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
        275                 280                 285            
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
    290                 295                 300                
Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305                 310                 315                 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
                325                 330                 335    
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
            340                 345                 350        
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
        355                 360                 365            
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
    370                 375                 380                
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385                 390                 395                 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp
                405                 410                 415    
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
            420                 425                 430        
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
        435                 440                 445            
Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser
    450                 455                 460                
Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe
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Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu
                485                 490                 495    
Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg
            500                 505                 510        
Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys
        515                 520                 525            
Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala
    530                 535                 540                
Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys
545                 550                 555                 560
Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu
                565                 570                 575    
Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu
            580                 585                 590        
Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly
        595                 600                 605    
 
 
<210> 107
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -DOM15-26-593 mAb-dAb轻链
 
<400> 107
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110        
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
        115                 120                 125            
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
    130                 135                 140                
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145                 150                 155                 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
                165                 170                 175    
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
            180                 185                 190        
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
        195                 200                 205            
Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Glu Val Gln Leu Leu
    210                 215                 220                
Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
225                 230                 235                 240
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val
                245                 250                 255    
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro
            260                 265                 270        
Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
        275                 280                 285            
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
    290                 295                 300                
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg
305                 310                 315                 320
Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                325                 330                 335
 
 
<210> 108
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -DOM15-10-11 mAb-dAb轻链
 
<400> 108
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110        
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
        115                 120                 125            
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
    130                 135                 140                
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145                 150                 155                 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
                165                 170                 175    
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
            180                 185                 190        
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
        195                 200                 205            
Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr
    210                 215                 220                
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
225                 230                 235                 240
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gln
                245                 250                 255    
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Ile
            260                 265                 270        
Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
        275                 280                 285            
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
    290                 295                 300                
Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly
305                 310                 315                 320
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                325        
 
 
<210> 109
<211> 369
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗- TNF-α mAb -VEGF anticalin轻链
 
<400> 109
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80 
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr
                85                  90                  95     
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110        
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
        115                 120                 125            
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
    130                 135                 140                
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145                 150                 155                 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
                165                 170                 175    
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
            180                 185                 190        
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
        195                 200                 205            
Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile
    210                 215                 220                
Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val Asp
225                 230                 235                 240
Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr Leu
                245                 250                 255    
Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu Ile
            260                 265                 270        
Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu
        275                 280                 285            
Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile Ile
    290                 295                 300                
Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu
305                 310                 315                 320
His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys
                325                 330                 335    
Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu
            340                 345                 350        
Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro
        355                 360                 365            
Gly
   
 
 
<210> 110
<211> 571
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-贝伐单抗 DVD-Ig重链
 
<400> 110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
    50                  55                  60                 
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80 
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110        
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu
        115                 120                 125            
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
    130                 135                 140                
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp
145                 150                 155                 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn
                165                 170                 175    
Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe
            180                 185                 190        
Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn
        195                 200                 205            
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro
    210                 215                 220                
His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
225                 230                 235                 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
                245                 250                 255    
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
            260                 265                 270        
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
        275                 280                 285            
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
    290                 295                 300                
Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
305                 310                 315                 320
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
                325                 330                 335    
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
            340                 345                 350        
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        355                 360                 365            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    370                 375                 380                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
385                 390                 395                 400
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                405                 410                 415    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu
            420                 425                 430        
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
        435                 440                 445            
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
    450                 455                 460                
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
465                 470                 475                 480
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
                485                 490                 495    
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
            500                 505                 510        
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
        515                 520                 525            
Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
    530                 535                 540                
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545                 550                 555                 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                565                 570    
 
 
<210> 111
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-贝伐单抗 DVD-Ig轻链
 
<400> 111
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser
    130                 135                 140                
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val
        195                 200                 205            
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 112
<211> 574
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-r84 DVD-Ig重链
 
<400> 112
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
    50                  55                  60                 
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80 
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110        
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Gln Val Gln Leu
        115                 120                 125            
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
    130                 135                 140                
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp
145                 150                 155                 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Phe Asp
                165                 170                 175    
Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
            180                 185                 190        
Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser
        195                 200                 205            
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Arg
    210                 215                 220                
Ser Met Phe Arg Gly Val Ile Ile Pro Phe Asn Gly Met Asp Val Trp
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
                245                 250                 255    
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
            260                 265                 270        
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
        275                 280                 285            
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
    290                 295                 300                
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
305                 310                 315                 320
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
                325                 330                 335    
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
            340                 345                 350        
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
        355                 360                 365            
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
    370                 375                 380                
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
385                 390                 395                 400
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                405                 410                 415    
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val
            420                 425                 430        
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
        435                 440                 445            
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
    450                 455                 460                
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
465                 470                 475                 480
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
                485                 490                 495    
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
            500                 505                 510        
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
        515                 520                 525            
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
    530                 535                 540                
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
545                 550                 555                 560
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                565                 570                
 
 
<210> 113
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-r84 DVD-Ig轻链
 
<400> 113
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser
        115                 120                 125            
Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr
    130                 135                 140                
Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
            180                 185                 190        
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
        195                 200                 205            
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala
    210                 215                 220                
Ala Pro Ser Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
225                 230                 235                 240
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
                245                 250                 255    
Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
            260                 265                 270        
Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
        275                 280                 285            
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    290                 295                 300                
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser
305                 310                 315                 320
Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
                325                 330                 335    
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
            340                 345                 350        
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
        355                 360                 365            
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
    370                 375                 380                
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
385                 390                 395                 400
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
                405                 410                 415    
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
            420                 425                 430        
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
        435                 440    
 
 
<210> 114
<211> 353
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-ranibizumab DVD-Fab重链
 
<400> 114
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
    50                  55                  60                 
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80 
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110        
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu
        115                 120                 125            
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
    130                 135                 140                
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn Trp
145                 150                 155                 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn
                165                 170                 175    
Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe
            180                 185                 190        
Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn
        195                 200                 205            
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro
    210                 215                 220                
Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
225                 230                 235                 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
                245                 250                 255    
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
            260                 265                 270        
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
        275                 280                 285            
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
    290                 295                 300                
Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
305                 310                 315                 320
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
                325                 330                 335    
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
            340                 345                 350        
Leu
   
 
 
<210> 115
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-ranibizumab DVD-Fab轻链
 
<400> 115
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser
    130                 135                 140                
Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val
        195                 200                 205            
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
    210                 215                 220                
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
            260                 265                 270        
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
        275                 280                 285            
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
    290                 295                 300                
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                325            
 
 
<210> 116
<211> 368
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-DOM15-26-593 scFv-VH dAb
 
<400> 116
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110         
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125            
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
    130                 135                 140                 
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
                165                 170                 175    
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
            180                 185                 190        
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
        195                 200                 205             
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Glu Val Gln Leu
                245                 250                 255    
Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
            260                 265                 270        
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp
        275                 280                 285            
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser
    290                 295                 300                 
Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
305                 310                 315                 320
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
                325                 330                 335    
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro
            340                 345                 350        
Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        355                 360                 365            
 
 
<210> 117
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-DOM15-10-11 scFv-Vk dAb
 
<400> 117
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110        
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125            
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
    130                 135                 140                
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
                165                 170                 175    
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
            180                 185                 190        
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
        195                 200                 205            
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Asp Ile Gln Met
                245                 250                 255    
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
            260                 265                 270        
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr
        275                 280                 285            
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser
    290                 295                 300                
Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
305                 310                 315                 320
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
                325                 330                 335    
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln
            340                 345                 350        
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        355                 360
 
 
<210> 118
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ESBA105-VEGF anticalin
 
<400> 118
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30         
Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110        
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125            
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
    130                 135                 140                
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
                165                 170                 175    
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
            180                 185                 190         
Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
        195                 200                 205            
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220                 
Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Asp Gly Gly Gly
                245                 250                 255    
Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val
            260                 265                 270        
Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr
        275                 280                 285             
Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu
    290                 295                 300                
Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys
305                 310                 315                 320
Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile
                325                 330                 335    
Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln
            340                 345                 350        
Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro
        355                 360                 365            
Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg
    370                 375                 380                 
Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser
385                 390                 395                 400
Pro Gly
       
 
 
<210> 119
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> PEP1-5-19-DOM15-10-11 dAb-dAb
 
<400> 119
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr
            20                  25                  30          
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125             
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly
    130                 135                 140                
Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln
        195                 200                 205            
Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
    210                 215                 220        
 
 
<210> 120
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> PEP1-5-19-VEGF anticalin
 
<400> 120
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr
            20                  25                  30         
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr
        115                 120                 125            
Leu Lys Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu
    130                 135                 140                
Ser Val Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu
145                 150                 155                 160
Ala Lys Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala
                165                 170                 175    
Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly
            180                 185                 190        
Lys His Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile
        195                 200                 205            
Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys
    210                 215                 220                
Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe
225                 230                 235                 240
Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg
                245                 250                 255    
Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly
            260                
 
 
<210> 121
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF adnectin-DOM15-26-593
 
<400> 121
Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr
            20                  25                  30         
Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe
        35                  40                  45             
Thr Val Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro
    50                  55                  60                 
Gly Val Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met
65                  70                  75                  80 
Pro Leu Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr Thr Val
                85                  90                  95     
Ala Ala Pro Ser Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val
            100                 105                 110        
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
        115                 120                 125            
Phe Lys Ala Tyr Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
    130                 135                 140                
Leu Glu Trp Val Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
                165                 170                 175    
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
            180                 185                 190        
Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
        195                 200                 205            
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    210                 215    
 
 
<210> 122
<211> 208
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF adnectin-DOM15-10-11
 
<400> 122
Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr
            20                  25                  30         
Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe
        35                  40                  45             
Thr Val Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro
    50                  55                  60                 
Gly Val Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met
65                  70                  75                  80 
Pro Leu Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr Thr Val
                85                  90                  95     
Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
            100                 105                 110        
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp
        115                 120                 125            
Ile Gly Pro Glu Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
    130                 135                 140                
Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
145                 150                 155                 160
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
                165                 170                 175    
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met
            180                 185                 190        
Phe Gln Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        195                 200                 205            
 
 
<210> 123
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 抗-TNF adnectin-VEGF anticalin
 
<400> 123
Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr
            20                  25                  30         
Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe
        35                  40                  45             
Thr Val Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro
    50                  55                  60                 
Gly Val Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met
65                  70                  75                  80 
Pro Leu Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr Thr Val
                85                  90                  95     
Ala Ala Pro Ser Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr
            100                 105                 110        
Trp Tyr Leu Lys Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn
        115                 120                 125            
Leu Glu Ser Val Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn
    130                 135                 140                
Leu Glu Ala Lys Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val
145                 150                 155                 160
Lys Ala Val Leu Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp
                165                 170                 175    
Gly Gly Lys His Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His
            180                 185                 190        
Val Ile Phe Tyr Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly
        195                 200                 205            
Val Lys Leu Val Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu
    210                 215                 220                
Asp Phe Glu Lys Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile
225                 230                 235                 240
Pro Arg Gln Ser Glu Thr Cys Ser Pro Gly
                245                 250
 
 
<210> 124
<211> 698
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 贝伐单抗-ESBA105 mAb-scFv,重链
 
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190        
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
        195                 200                 205            
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
    210                 215                 220                
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255    
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270        
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285            
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
    290                 295                 300                
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335    
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350        
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365            
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
    370                 375                 380                
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                405                 410                 415    
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
            420                 425                 430        
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    450                 455                 460                
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln
465                 470                 475                 480
Ser Val Ser Asn Asp Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala
                485                 490                 495    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro
            500                 505                 510        
Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        515                 520                 525            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp
    530                 535                 540                
Tyr Asn Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
545                 550                 555                 560
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
                565                 570                 575    
Ser Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
            580                 585                 590        
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr
        595                 600                 605            
Thr Phe Thr His Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    610                 615                 620                
Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
625                 630                 635                 640
Tyr Ala Asp Lys Phe Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser
                645                 650                 655    
Ala Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr
            660                 665                 670        
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp
        675                 680                 685            
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    690                 695            
 
 
<210> 125
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 贝伐单抗-ESBA105 mAb-scFv,轻链
 
<400> 125
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Val Met
    210                 215                 220                
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
225                 230                 235                 240
Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Val Trp Tyr
                245                 250                 255    
Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Phe
            260                 265                 270        
Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Tyr Gly
        275                 280                 285            
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala
    290                 295                 300                
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gln
305                 310                 315                 320
Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
                325                 330                 335    
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
            340                 345                 350        
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
        355                 360                 365            
Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly Met Asn Trp
    370                 375                 380                
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn
385                 390                 395                 400
Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe Lys Asp Arg Phe
                405                 410                 415    
Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Thr
            420                 425                 430        
Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg
        435                 440                 445            
Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
    450                 455                 460                
Ser
465
 
 
<210> 126
<211> 561
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 贝伐单抗-PEP1-5-19 mAb-dAb重链
 
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190        
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
        195                 200                 205            
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
    210                 215                 220                
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255    
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270        
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285            
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
    290                 295                 300                
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335    
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350        
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365            
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
    370                 375                 380                
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                405                 410                 415    
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
            420                 425                 430        
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    450                 455                 460                
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
465                 470                 475                 480
Ser Ile Asp Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                485                 490                 495    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro
            500                 505                 510        
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        515                 520                 525            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val
    530                 535                 540                
Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
545                 550                 555                 560
Arg
   
 
 
<210> 127
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 贝伐单抗-PEP1-5-19 mAb-dAb轻链
 
<400> 127
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met
    210                 215                 220                
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
225                 230                 235                 240
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr Leu His Trp Tyr
                245                 250                 255    
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            260                 265                 270        
Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        275                 280                 285            
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    290                 295                 300                
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gln
305                 310                 315                 320
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                325            
 
 
<210> 128
<211> 547
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 贝伐单抗-TNF adnectin重链
 
<400> 128
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190        
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
        195                 200                 205            
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
    210                 215                 220                
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255    
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270        
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285            
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val
    290                 295                 300                
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335    
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350        
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365            
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
    370                 375                 380                
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                405                 410                 415    
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
            420                 425                 430        
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
        435                 440                 445            
Val Ala Ala Pro Ser Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val
    450                 455                 460                
Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala
465                 470                 475                 480
Tyr Asn Gly Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser
                485                 490                 495    
Pro Val Arg Glu Phe Thr Val Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile
            500                 505                 510        
Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val
        515                 520                 525            
Thr Asn His His Met Pro Leu Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn
    530                 535                 540                
His Arg Thr
545        
 
 
<210> 129
<211> 314
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 贝伐单抗-TNF adnectin轻链
 
<400> 129
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125            
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140                
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175    
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190        
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205            
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Ser Asp Val
    210                 215                 220                
Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile
225                 230                 235                 240
Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr
                245                 250                 255    
Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe Thr Val Pro His
            260                 265                 270        
Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Asp
        275                 280                 285            
Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met Pro Leu Arg Ile
    290                 295                 300                
Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr
305                 310                
 
 
<210> 130
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Aflibercept-ESBA105
 
<400> 130
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu
 1               5                  10                  15     
Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val
            20                  25                  30         
Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr
        35                  40                  45             
Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe
    50                  55                  60                 
Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu
65                  70                  75                  80 
Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr Gln Thr
                85                  90                  95     
Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu
            100                 105                 110        
Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu
        115                 120                 125            
Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln
    130                 135                 140                
His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu
145                 150                 155                 160
Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser
                165                 170                 175    
Asp Gln Gly Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn
            180                 185                 190        
Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
        195                 200                 205            
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
    210                 215                 220                
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225                 230                 235                 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                245                 250                 255    
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
            260                 265                 270        
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
        275                 280                 285            
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
    290                 295                 300                
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
305                 310                 315                 320
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
                325                 330                 335    
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
            340                 345                 350        
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
        355                 360                 365            
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
    370                 375                 380                
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
385                 390                 395                 400
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
                405                 410                 415    
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile
            420                 425                 430        
Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg
        435                 440                 445            
Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Val
    450                 455                 460                
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser
465                 470                 475                 480
Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly
                485                 490                 495    
Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
            500                 505                 510        
Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg Thr Phe
        515                 520                 525            
Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly
    530                 535                 540                
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gln Val
545                 550                 555                 560
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val
                565                 570                 575    
Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly Met
            580                 585                 590        
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp
        595                 600                 605            
Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe Lys Asp
    610                 615                 620                
Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr Met Glu
625                 630                 635                 640
Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
                645                 650                 655    
Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            660                 665                 670        
Val Ser Ser
        675
 
 
<210> 131
<211> 538
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Aflibercept-PEP1-5-19
 
<400> 131
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu
 1               5                  10                  15     
Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val
            20                  25                  30         
Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr
        35                  40                  45             
Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe
    50                  55                  60                 
Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu
65                  70                  75                  80 
Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr Gln Thr
                85                  90                  95     
Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu
            100                 105                 110        
Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu
        115                 120                 125            
Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln
    130                 135                 140                
His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu
145                 150                 155                 160
Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser
                165                 170                 175    
Asp Gln Gly Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn
            180                 185                 190        
Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
        195                 200                 205            
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
    210                 215                 220                
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225                 230                 235                 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                245                 250                 255    
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
            260                 265                 270        
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
        275                 280                 285            
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
    290                 295                 300                
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
305                 310                 315                 320
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
                325                 330                 335    
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
            340                 345                 350        
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
        355                 360                 365            
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
    370                 375                 380                
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
385                 390                 395                 400
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
                405                 410                 415    
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile
            420                 425                 430        
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg
        435                 440                 445            
Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr Leu His
    450                 455                 460                
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser
465                 470                 475                 480
Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
                485                 490                 495    
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
            500                 505                 510        
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe
        515                 520                 525            
Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
    530                 535            
 
 
<210> 132
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Aflibercept-TNF adnectin
 
<400> 132
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu
 1               5                  10                  15     
Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val
            20                  25                  30         
Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr
        35                  40                  45             
Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe
    50                  55                  60                 
Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu
65                  70                  75                  80 
Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr Gln Thr
                85                  90                  95     
Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu
            100                 105                 110        
Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu
        115                 120                 125            
Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln
    130                 135                 140                
His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu
145                 150                 155                 160
Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser
                165                 170                 175    
Asp Gln Gly Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn
            180                 185                 190        
Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
        195                 200                 205            
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
    210                 215                 220                
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225                 230                 235                 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                245                 250                 255    
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
            260                 265                 270        
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
        275                 280                 285            
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
    290                 295                 300                
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
305                 310                 315                 320
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
                325                 330                 335    
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
            340                 345                 350        
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
        355                 360                 365            
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
    370                 375                 380                
Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
385                 390                 395                 400
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
                405                 410                 415    
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Ser
            420                 425                 430        
Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu
        435                 440                 445            
Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr Arg Ile
    450                 455                 460                
Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe Thr Val
465                 470                 475                 480
Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val
                485                 490                 495    
Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met Pro Leu
            500                 505                 510        
Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr
        515                 520                
 
 
<210> 133
<211> 368
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593-ESBA105 dAb-scFv
 
<400> 133
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30          
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Asp Ile Val Met Thr
        115                 120                 125            
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Leu
    130                 135                 140                
Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Val Trp Tyr Gln
145                 150                 155                 160
Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Phe Asn
                165                 170                 175    
Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Tyr Gly Thr
            180                 185                 190        
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Val
        195                 200                 205            
Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly
    210                 215                 220                
Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225                 230                 235                 240
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val
                245                 250                 255    
Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser
            260                 265                 270        
Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly Met Asn Trp Val
        275                 280                 285            
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr
    290                 295                 300                
Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe Lys Asp Arg Phe Thr
305                 310                 315                 320
Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Thr Ser
                325                 330                 335    
Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Gly
            340                 345                 350        
Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        355                 360                 365            
 
 
<210> 134
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593-TNF adnectin
 
<400> 134
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Ser Pro Val Ser Asp Val Pro
        115                 120                 125            
Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser
    130                 135                 140                
Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly
145                 150                 155                 160
Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe Thr Val Pro His Pro
                165                 170                 175    
Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Asp Thr
            180                 185                 190        
Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met Pro Leu Arg Ile Phe
        195                 200                 205            
Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr
    210                 215        
 
 
<210> 135
<211> 359
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-10-11-ESBA105 dAb-scFv
 
<400> 135
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser
    130                 135                 140                
Asn Asp Val Val Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Arg Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser
        195                 200                 205             
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly
    210                 215                 220                
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
                245                 250                 255    
Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
            260                 265                 270         
His Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
        275                 280                 285            
Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp
    290                 295                 300                 
Lys Phe Lys Asp Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr
305                 310                 315                 320
Val Tyr Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr
                325                 330                 335    
Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            340                 345                 350        
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        355                
 
 
<210> 136
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-10-11-PEP1-5-19 dAb-dAb
 
<400> 136
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
        115                 120                 125            
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp
    130                 135                 140                
Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
                165                 170                 175    
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
            180                 185                 190        
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg
        195                 200                 205            
Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
    210                 215                 220        
 
 
<210> 137
<211> 208
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-10-11-TNF adnectin
 
<400> 137
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Arg Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Thr Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Phe Gln Pro Met
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr
        115                 120                 125            
Pro Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly
    130                 135                 140                
Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg
145                 150                 155                 160
Glu Phe Thr Val Pro His Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu
                165                 170                 175    
Lys Pro Gly Val Asp Asp Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His
            180                 185                 190        
His Met Pro Leu Arg Ile Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr
        195                 200                 205            
 
 
<210> 138
<211> 401
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> VEGF anticalin-ESBA105
 
<400> 138
Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys
 1               5                  10                  15     
Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val
            20                  25                  30         
Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys
        35                  40                  45             
Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu
    50                  55                  60                 
Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His
65                  70                  75                  80 
Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr
                85                  90                  95     
Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val
            100                 105                 110        
Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys
        115                 120                 125            
Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser
    130                 135                 140                
Glu Thr Cys Ser Pro Gly Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Val Met
145                 150                 155                 160
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
                165                 170                 175    
Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Val Trp Tyr
            180                 185                 190        
Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Phe
        195                 200                 205            
Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Tyr Gly
    210                 215                 220                
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala
225                 230                 235                 240
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gln
                245                 250                 255    
Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
            260                 265                 270        
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
        275                 280                 285            
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
    290                 295                 300                
Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Gly Met Asn Trp
305                 310                 315                 320
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn
                325                 330                 335    
Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe Lys Asp Arg Phe
            340                 345                 350        
Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Thr
        355                 360                 365            
Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg
    370                 375                 380                
Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
385                 390                 395                 400
Ser
   
 
 
<210> 139
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> VEGF anticalin-PEP1-5-19
 
<400> 139
Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys
 1               5                  10                  15     
Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val
            20                  25                  30         
Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys
        35                  40                  45             
Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu
    50                  55                  60                 
Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His
65                  70                  75                  80 
Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr
                85                  90                  95     
Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val
            100                 105                 110        
Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys
        115                 120                 125            
Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser
    130                 135                 140                
Glu Thr Cys Ser Pro Gly Thr Val Ala Ala Pro Ser Asp Ile Gln Met
145                 150                 155                 160
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
                165                 170                 175    
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Ser Tyr Leu His Trp Tyr
            180                 185                 190        
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
        195                 200                 205            
Glu Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
    210                 215                 220                
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
225                 230                 235                 240
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Val Trp Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gln
                245                 250                 255    
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            260                
 
 
<210> 140
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> VEGF anticalin-TNF adnectin
 
<400> 140
Asp Gly Gly Gly Ile Arg Arg Ser Met Ser Gly Thr Trp Tyr Leu Lys
 1               5                  10                  15     
Ala Met Thr Val Asp Arg Glu Phe Pro Glu Met Asn Leu Glu Ser Val
            20                  25                  30         
Thr Pro Met Thr Leu Thr Leu Leu Lys Gly His Asn Leu Glu Ala Lys
        35                  40                  45             
Val Thr Met Leu Ile Ser Gly Arg Cys Gln Glu Val Lys Ala Val Leu
    50                  55                  60                 
Gly Arg Thr Lys Glu Arg Lys Lys Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Lys His
65                  70                  75                  80 
Val Ala Tyr Ile Ile Pro Ser Ala Val Arg Asp His Val Ile Phe Tyr
                85                  90                  95     
Ser Glu Gly Gln Leu His Gly Lys Pro Val Arg Gly Val Lys Leu Val
            100                 105                 110        
Gly Arg Asp Pro Lys Asn Asn Leu Glu Ala Leu Glu Asp Phe Glu Lys
        115                 120                 125            
Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Glu Ser Ile Leu Ile Pro Arg Gln Ser
    130                 135                 140                
Glu Thr Cys Ser Pro Gly Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Ser Asp Val
145                 150                 155                 160
Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu Leu Ile
                165                 170                 175    
Ser Trp Asp Thr His Asn Ala Tyr Asn Gly Tyr Tyr Arg Ile Thr Tyr
            180                 185                 190        
Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Arg Glu Phe Thr Val Pro His
        195                 200                 205            
Pro Glu Val Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly Val Asp Asp
    210                 215                 220                
Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asn His His Met Pro Leu Arg Ile
225                 230                 235                 240
Phe Gly Pro Ile Ser Ile Asn His Arg Thr
                245                 250
 
 
<210> 141
<211> 1731
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GSTVAAPSGS连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗) Fc有缺陷的
       -DOM15-26-593重链
 
<400> 141
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360
agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660
cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca ccgtggccgc tcccagcgga 1380
tcagaggtgc agctgctggt gtctggcggc ggactggtgc agcctggcgg cagcctgaga 1440
ctgagctgcg ccgccagcgg cttcaccttc aaggcctacc ccatgatgtg ggtgcggcag 1500
gcccctggca agggcctgga atgggtgtcc gagatcagcc ccagcggcag ctacacctac 1560
tacgccgaca gcgtgaaggg ccggttcacc atcagccggg acaacagcaa gaacaccctg 1620
tacctgcaga tgaacagcct gcgggccgag gacaccgccg tgtactactg cgccaaggac 1680
ccccggaagc tggactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag c          1731
 
<210> 142
<211> 1755
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GS(TVAAPSGS) x2连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗) Fc有缺陷的
      -DOM15-26-593重链
 
<400> 142
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360
agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660
cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca cagtggctgc accttccggg 1380
tcaaccgtcg ccgcccccag cggaagcgag gtgcagctgc tggtgtctgg cggcggactg 1440
gtgcagcctg gcggcagcct gagactgagc tgcgccgcca gcggcttcac cttcaaggcc 1500
taccccatga tgtgggtgcg gcaggcccct ggcaagggcc tggaatgggt gtccgagatc 1560
agccccagcg gcagctacac ctactacgcc gacagcgtga agggccggtt caccatcagc 1620
cgggacaaca gcaagaacac cctgtacctg cagatgaaca gcctgcgggc cgaggacacc 1680
gccgtgtact actgcgccaa ggacccccgg aagctggact actggggcca gggcaccctg 1740
gtgaccgtga gcagc                                                  1755
 
<210> 143
<211> 1779
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GS(TVAAPSGS) x3连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗) Fc有缺陷的
      -DOM15-26-593重链
 
<400> 143
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360
agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660
cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca ccgtcgccgc accaagcggg 1380
tcaacagtgg ccgctccctc cggcagcact gtggctgccc ccagcggaag cgaggtgcag 1440
ctgctggtgt ctggcggcgg actggtgcag cctggcggca gcctgagact gagctgcgcc 1500
gccagcggct tcaccttcaa ggcctacccc atgatgtggg tgcggcaggc ccctggcaag 1560
ggcctggaat gggtgtccga gatcagcccc agcggcagct acacctacta cgccgacagc 1620
gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg 1680
aacagcctgc gggccgagga caccgccgtg tactactgcg ccaaggaccc ccggaagctg 1740
gactactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagc                        1779
 
<210> 144
<211> 1803
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 具有GS(TVAAPSGS) x4连接物的抗-TNF-α mAb (阿达木单抗) Fc有缺陷的
      -DOM15-26-593重链
 
<400> 144
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ccggcagaag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcgac gactacgcca tgcactgggt gaggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgtccgcc atcacctgga atagcggcca catcgactac 180
gccgacagcg tggagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggtgtcc 300
tacctgagca ccgccagcag cctggactac tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360
agcgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480
tcctggaata gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt actccctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aagtggacaa gaaagtggag 660
cccaagagct gcgataagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctggccggc 720
gcccctagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780
cccgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaagt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gtctgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaagt gagcaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc tagagagccc caggtctaca ccctgcctcc ctccagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gtctgagcct gtcccctggc aagggatcca ccgtcgccgc accaagcgga 1380
tctaccgtcg cagccccttc cgggtcaaca gtggccgctc cctccggcag cactgtggct 1440
gcccccagcg gaagcgaggt gcagctgctg gtgtctggcg gcggactggt gcagcctggc 1500
ggcagcctga gactgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcaaggccta ccccatgatg 1560
tgggtgcggc aggcccctgg caagggcctg gaatgggtgt ccgagatcag ccccagcggc 1620
agctacacct actacgccga cagcgtgaag ggccggttca ccatcagccg ggacaacagc 1680
aagaacaccc tgtacctgca gatgaacagc ctgcgggccg aggacaccgc cgtgtactac 1740
tgcgccaagg acccccggaa gctggactac tggggccagg gcaccctggt gaccgtgagc 1800
agc                                                               1803
 
<210> 145
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 145
Pro Ala Ser Gly Ser
 1               5 
 
 
<210> 146
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 146
Pro Asp Ala Ser Gly Ser
 1               5     
 
 
<210> 147
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 147
Pro Asp Asp Ala Ser Gly Ser
 1               5         
 
 
<210> 148
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 148
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
 1               5                  10 
 
 
<210> 149
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 149
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
 1               5                  10                  15 
 
 
<210> 150
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 150
Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser
 1               5                  10                 
 
 
<210> 151
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 151
Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr Val Ala Ala
 1               5                  10                  15     
Pro Ser Gly Ser
            20 
 
 
<210> 152
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 152
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5                  10                  15     
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
            20                  25                  30         
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser
        35                  40         
 
 
<210> 153
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 153
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5                  10                  15     
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
            20                  25                  30         
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
        35                  40                  45             
Gly Ser
    50 
 
 
<210> 154
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 154
Pro Ala Val Pro Pro Pro Gly Ser
 1               5             
 
 
<210> 155
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 155
Pro Ala Val Pro Pro Pro Pro Ala Val Pro Pro Pro Gly Ser
 1               5                  10                 
 
 
<210> 156
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 156
Pro Ala Val Pro Pro Pro Pro Ala Val Pro Pro Pro Pro Ala Val Pro
 1               5                  10                  15     
Pro Pro Gly Ser
            20 
 
 
<210> 157
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 157
Thr Val Ser Asp Val Pro Gly Ser
 1               5             
 
 
<210> 158
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 158
Thr Val Ser Asp Val Pro Thr Val Ser Asp Val Pro Gly Ser
 1               5                  10                 
 
 
<210> 159
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 159
Thr Val Ser Asp Val Pro Thr Val Ser Asp Val Pro Thr Val Ser Asp
 1               5                  10                  15     
Val Pro Gly Ser
            20 
 
 
<210> 160
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 160
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Gly Ser
 1               5             
 
 
<210> 161
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 161
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Gly Ser
 1               5                  10                 
 
 
<210> 162
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223>连接物
 
<400> 162
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp
 1               5                  10                  15     
Ser Pro Gly Ser
            20 
 
 
<210> 163
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1801 (双特异性的IGF1R-VEGFR2)重链
 
<400> 163
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
            20                  25                  30         
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45             
Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60                 
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Arg Trp Ile Leu Tyr Tyr Gly Arg Ser Lys Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125            
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
    130                 135                 140                
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175    
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
            180                 185                 190        
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
        195                 200                 205            
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
    210                 215                 220                
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225                 230                 235                 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
                245                 250                 255    
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
            260                 265                 270        
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
        275                 280                 285            
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
    290                 295                 300                
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305                 310                 315                 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                325                 330                 335    
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
            340                 345                 350        
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
        355                 360                 365            
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
    370                 375                 380                
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385                 390                 395                 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
                405                 410                 415    
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
            420                 425                 430        
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
        435                 440                 445            
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser
    450                 455                 460                
Leu Leu Ile Ser Trp Arg His Pro His Phe Pro Thr Arg Tyr Tyr Arg
465                 470                 475                 480
Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe Thr
                485                 490                 495    
Val Pro Leu Gln Pro Pro Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys Pro Gly
            500                 505                 510        
Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Asp Gly Arg Asn Gly
        515                 520                 525            
Arg Leu Leu Ser Ile Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr
    530                 535                 540    
 
 
<210> 164
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1801 (双特异性的IGF1R-VEGFR2)轻链
 
<400> 164
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15     
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Gln Ser
            20                  25                  30         
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45             
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60                 
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80 
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
                85                  90                  95     
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110        
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
        115                 120                 125            
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
    130                 135                 140                
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
                165                 170                 175    
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
            180                 185                 190         
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
        195                 200                 205            
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                 215                
 
 
<210> 165
<211> 477
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> BPC1824 (CTLA4-Ig-抗-IL-13 dAb融合体)
 
<400> 165
Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly Ile
 1               5                  10                  15     
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly Lys Ala Thr Glu Val
            20                  25                  30         
Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln Val Thr Glu Val Cys
        35                  40                  45             
Ala Ala Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser
    50                  55                  60                 
Ile Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val Asn Leu Thr Ile Gln
65                  70                  75                  80 
Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu
                85                  90                  95     
Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile
            100                 105                 110        
Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gln Glu Pro Lys
        115                 120                 125            
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu
    130                 135                 140                
Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145                 150                 155                 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
                165                 170                 175    
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
            180                 185                 190        
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
        195                 200                 205            
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
    210                 215                 220                
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
                245                 250                 255    
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
            260                 265                 270        
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
        275                 280                 285            
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
    290                 295                 300                
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305                 310                 315                 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
                325                 330                 335    
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
            340                 345                 350        
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly
        355                 360                 365            
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
    370                 375                 380                
Gly Phe Val Phe Pro Trp Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
385                 390                 395                 400
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Asp Trp His Gly Lys Ile
                405                 410                 415    
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
            420                 425                 430        
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
        435                 440                 445            
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Ala Glu Asp Glu Pro Gly Tyr
    450                 455                 460                
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
465                 470                 475        

Claims (51)

1.一种用于预防或治疗眼病的组合物，其包含TNFα拮抗剂和VEGF拮抗剂。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述TNFα拮抗剂和所述VEGF拮抗剂是抗原结合蛋白。
3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述TNFα拮抗剂和所述VEGF拮抗剂以双靶向蛋白形式存在。
4.如权利要求3所述的组合物，其中所述双靶向蛋白包含至少一对结合TNFα或TNFα受体的VH/VL结构域和至少一对结合VEGF或VEGF受体的VH/VL结构域。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述双靶向分子是DVD-Ig。
6.如权利要求3或4所述的组合物，其中所述双靶向蛋白是双特异性抗体。
7.如权利要求3所述的组合物，其中所述双靶向蛋白是dAb-dAb  线内融合体。
8.如权利要求3所述的组合物，其中所述双靶向蛋白是与一个或多个表位结合域相连的受体-Fc融合体。
9.如权利要求2所述的组合物，其中所述TNFα拮抗剂是抗-TNFα抗体。
10.如权利要求2所述的组合物，其中所述VEGF拮抗剂是抗-VEGF抗体。
11.如权利要求3所述的组合物，其中所述双靶向蛋白的TNFα拮抗剂部分是抗-TNF抗体，且其中所述双靶向蛋白的VEGF拮抗剂部分是抗-VEGF 表位结合域。
12.如权利要求3所述的组合物，其中所述双靶向蛋白的VEGF拮抗剂部分是抗-VEGF抗体，且其中所述双靶向蛋白的TNFα拮抗剂部分是抗-TNF表位结合域。
13.如权利要求8、11或12所述的组合物，其中所述表位结合域是dAb。
14.如权利要求13所述的组合物，其中所述dAb是人dAb。
15.如权利要求8、11或12所述的组合物，其中所述表位结合域源自非-Ig骨架。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述表位结合域选自：CTLA-4 (Evibody)；脂质运载蛋白；蛋白A 衍生出的分子诸如蛋白A(亲和体、SpA)的Z-结构域、A-结构域 (Avimer/Maxibody)；热休克蛋白诸如GroEl和GroES；转铁蛋白 (反体)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域 (四连接素)； 人γ-晶体蛋白和人泛素 (affilins)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂的全蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)。
17.根据权利要求8或权利要求11-16中任一项所述的组合物，其中使用由1-30个氨基酸组成的连接物，将所述表位结合域直接连接至所述抗原结合蛋白上。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述连接物选自：在SEQ ID NO: 3-8和25中所述的那些或它们的任意组合或多个。
19.根据权利要求11-18中任一项所述的组合物，其中所述表位结合域连接至抗原结合蛋白重链的N-端。
20.根据权利要求11-18中任一项所述的组合物，其中所述表位结合域连接至抗原结合蛋白轻链的N-端。
21.根据权利要求11-18中任一项所述的组合物，其中所述表位结合域连接至抗原结合蛋白重链的C-端。
22.根据权利要求11-18中任一项所述的组合物，其中所述表位结合域连接至抗原结合蛋白轻链的C-端。
23.根据权利要求2-7或8-22中任一项所述的组合物，其中所述抗原结合蛋白包含：在SEQ ID NO:10所述的重链中含有的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和在SEQ ID NO:12所述的轻链中含有的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
24.根据权利要求23所述的组合物，其包含SEQ ID NO:14、15、47、69、70、71或72的重链序列和SEQ ID NO:12的轻链序列。
25.在权利要求3-8或11-24中任一项中要求保护的组合物，其中所述组合物每4-6周玻璃体内地施用。
26.在权利要求1-25中任一项中要求保护的组合物，其中所述组合物包含其它活性剂，任选抗炎剂。
27.在权利要求1-26中任一项中定义的组合物用于制备药物的应用，所述药物用于预防或治疗眼病。
28.一种用于预防或治疗眼病的TNFα拮抗剂，其选自：阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、ESBA105、PEP1-5-19、PEP1-5-490、PEP1-5-493、SEQ ID NO:2的adnectin、戈利木单抗、塞妥珠单抗、ALK-6931以及包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体，其中所述TNFα拮抗剂将与选自下述的VEGF拮抗剂组合施用：贝伐单抗、ranibizumab、r84、aflibercept、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、PRS-050、PRS-051、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010和DMS1571。
29.一种用于预防或治疗眼病的VEGF拮抗剂，其选自：贝伐单抗、ranibizumab、r84、aflibercept、CT01、DOM15-10-11、DOM15-26-593、PRS-050、PRS-051、MP0012、CT-322、ESBA903、EPI-0030、EPI-0010和DMS1571，其中所述VEGF拮抗剂将与选自下述的TNFα拮抗剂组合施用：阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、ESBA105、PEP1-5-19、PEP1-5-490、PEP1-5-493、SEQ ID NO:2的adnectin、戈利木单抗、塞妥珠单抗、ALK-6931以及包含SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:31的轻链的抗体。
30.在权利要求28中要求保护的TNFα拮抗剂或在权利要求29中要求保护的VEGF拮抗剂，其中所述TNFα拮抗剂是阿达木单抗，且所述VEGF拮抗剂是ranibizumab。
31.一种药物组合物，其包含在权利要求1-24中任一项中要求保护的组合物和药学上可接受的载体。
32.在权利要求31中要求保护的药物组合物，其中所述组合物包含其它活性剂，任选抗炎剂。
33.一种多核苷酸序列，其编码在权利要求2-24中任一项中要求保护的抗原结合蛋白。
34.一种多核苷酸序列，其编码根据权利要求5、6或9-24中任一项所述的组合物的重链或轻链。
35.在权利要求34中要求保护的多核苷酸序列，其中所述序列如在SEQ ID NO: 11、13或46中所述。
36.一种转化的或转染的重组宿主细胞，其包含在权利要求33-35中任一项中要求保护的一个或多个多核苷酸序列。
37.一种用于生产根据权利要求2-24中任一项所述的组合物的方法，所述方法包括下述步骤：培养如权利要求36所述的宿主细胞，和分离所述抗原结合蛋白。
38.在权利要求1-24中任一项中要求保护的组合物，其用于经由玻璃体内途径进行递送。
39.在权利要求1-24中任一项中要求保护的组合物，其用于经由眼周途径进行递送。
40.根据权利要求39所述的组合物，其用于经由跨巩膜的、结膜下的、sub-tenon、眼球周的、局部的、眼球后的途径进行递送，或者其用于递送至下直肌、上直肌或外直肌。
41.根据权利要求1-24中任一项所述的组合物，其中所述眼病是糖尿病黄斑水肿、囊样黄斑水肿、葡萄膜炎、AMD (年龄相关性黄斑变性)、脉络膜新生血管AMD、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞以及其它黄斑病变和眼血管病变。
42.一种预防或治疗遭受眼病的患者的方法，所述方法包括：全身地或局部地向患者的眼施用预防或治疗有效量的根据权利要求1-24中任一项所述的组合物或双靶向蛋白。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述患者遭受至少一种下述的疾病或障碍: 糖尿病黄斑水肿、囊样黄斑水肿、葡萄膜炎、AMD (年龄相关性黄斑变性)、脉络膜新生血管AMD、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞以及其它黄斑病变和眼血管病变。
44.一种双靶向抗原结合分子，其包含TNFα拮抗剂部分、VEGF拮抗剂部分以及使所述TNFα拮抗剂部分与所述VEGF拮抗剂部分相连的连接物，其中：
所述TNFα拮抗剂部分包含在表1中列出的任一种TNFα拮抗剂的氨基酸序列；
所述VEGF拮抗剂部分包含在表2中列出的任一种VEGF拮抗剂的氨基酸序列；
所述连接物是长度为1–150个氨基酸的氨基酸序列；且
所述双靶向分子不是DMS4000或DMS4031。
45.一种双靶向抗原结合分子，其包含TNFα拮抗剂部分、VEGF拮抗剂部分以及使所述TNFα拮抗剂部分与所述VEGF拮抗剂部分相连的连接物，其中：
所述TNFα拮抗剂部分包含在表1中列出的任一种TNFα拮抗剂的氨基酸序列；
所述VEGF拮抗剂部分包含在表2中列出的任一种VEGF拮抗剂的氨基酸序列；
所述连接物是长度为1–150个氨基酸的氨基酸序列；且其中所述双靶向抗原结合分子是用于预防或治疗眼病，且每4-6周玻璃体内地给药。
46.在权利要求44或45中要求保护的双靶向分子，其中所述连接物选自：在SEQ ID NO: 3-8、25、66-68和145-162中所述的那些或它们的任意组合或多个。
47.在权利要求44-46中任一项中要求保护的双靶向抗原结合分子，其由SEQ ID NO:62或SEQ ID NO 64的氨基酸序列组成。
48.一种抗原结合蛋白，其包含SEQ ID NO:69、70、71或72的重链序列和SEQ ID NO:12的轻链序列。
49.一种药物组合物，其包含在权利要求48中要求保护的抗原结合蛋白和其它活性剂，任选抗炎剂。
50.一种多核苷酸序列，其编码如权利要求48所述的抗原结合蛋白。
51.在权利要求50中要求保护的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸包含SEQ ID NO:141、142、143或144和SEQ ID NO:11。
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