JP7189878B2 - ヒトcd160を結合する結合物及びその使用 - Google Patents
ヒトcd160を結合する結合物及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7189878B2 JP7189878B2 JP2019536858A JP2019536858A JP7189878B2 JP 7189878 B2 JP7189878 B2 JP 7189878B2 JP 2019536858 A JP2019536858 A JP 2019536858A JP 2019536858 A JP2019536858 A JP 2019536858A JP 7189878 B2 JP7189878 B2 JP 7189878B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- igg1
- conjugate
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
- C07K16/464—Igs containing CDR-residues from one specie grafted between FR-residues from another
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
Description
に相当する。
図1Aは、H7候補並びにIgG1フォーマット及びIgG1 E345KにおけるそのバリアントのCHO WTと比較したCHO-hCD160への結合を示す。
図1Bは、H7候補並びにIgG4フォーマット及びIgG4 H310A-H435QにおけるそのバリアントのCHO WTと比較したCHO-hCD160への結合を示す。
図1Cは、H7候補IgG4(ELB01101)並びにIgG4フォーマットにおけるH7 D12バリアント(ELB01103)、FcRnヌル変異(ELB01104)、Fabバリアント(ELB01122)及びFab-リンカー-Fabバリアント(ELB01132)のYT2C2(NK細胞株)への結合を示す。図1Cでは、各曲線は、以下のものに対応する:黒い円:ヒトIgG4、黒い三角形:ELB01101(H7 IgG4)、黒い逆三角形:ELB01103、黒い正方形:ELB01104、黒いひし形:ELB01122、黒い星:ELB01132。
図2は、ラットの角膜血管新生モデルにおけるAflibercept(Eylea(登録商標))と比較した、IgG4フォーマットにおける抗CD160抗体(ELB01101)の経時的有効性の評価を示す。このバーグラフには、平均と標準誤差が示されている。図2では、2種類のバーのうち、白いバー(%)は8日目の血管新生を示し、黒いバー(%)は12日目の血管新生を示す。
図3Aは、親CL1-R2、ベバシズマブ、ラニビズマブと比較した、ウサギの硝子体内ルートの投与に続く、異なるIgGフォーマットにおけるH7及びH7バリアントの平均血清濃度の時間変化を示す。
図3Bは、親CL1-R2、ベバシズマブ、ラニビズマブと比較した、ウサギの静脈内ルートの投与に続く、異なるIgGフォーマットにおけるH7及びH7バリアントの平均血清濃度の時間変化を示す。
図4は、レーザー誘発性脈絡膜血管新生についてのサルのモデル(108のレーザー照射部位についてグレード3及び4の合計スコア)での臨床的関連病変の総数(グレード3及び4)に対する抗CD160 H7 IgG4(ELB01101)の影響。レーザー誘発病変の総数は、抗CD160(H7 IgG4 ELB 01101)で治療された動物又は担体対照について108個(9回のレーザー照射を行った12個の目に相当)であった。
図5は、サルのモデルにおける脈絡膜血管新生のレーザー誘発性病変の瘢痕の治癒に対する抗CD160 H7(ELB01101)の影響を示す。治癒の状態と病変の開口部は、フォンヴィレブランド因子に対する抗体で標識した後、免疫組織化学分析により個別に推定された。治癒中(つまり、RPE膜で覆われているということ)のスポットの割合(%)を、治癒された又は未治癒の開口状のスポットの割合(%)と比較したものを、棒グラフで表す。中央の脈絡膜瘢痕がある開口状のスポットの割合は、グラフ上、プレーンな黒いバーとして表され、中央の脈絡膜瘢痕のない開口状スポットの割合は黒い斜線入りのバーとして表され、治癒中のスポットの割合(RPE瘢痕で覆われたスポット)は白色のバーとして表される。
実験に応じて様々なタイプの光ファイバーバイオセンサーを実装したOctet K2機器(Pall ForteBio)を使用し、バイオレイヤー干渉法の原理を利用して、マウス抗hCD160 CL1-R2若しくはその誘導体(キメラIgG1及びキメラIgG4)又は本発明に係る結合物(H7 IgG1、H7 IgG4)の、表1に記載の親和性の決定及び比較を実施した。本発明に係る抗体がそれらの標的に結合する能力は、ヒトCD160タンパク質/抗体相互作用を測定することにより研究された。
ヒト化抗CD160候補H7に由来するバリアントを得るために、H7抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメイン(それぞれVH及びVL)の特定の相補性決定領域(CDR)における残基の部位特異的変異導入を、Fabフォーマットのバリアントのファージディスプレイにより、タンパク質及びhCD160を過剰発現するCHO細胞での選択と組み合わせた。
H7バリアントの結合能力を、表面プラズモン共鳴(SPR)によって試験した。このために、Biacore 3000(GE Healthcare)を使用した。pH 4.5の酢酸緩衝液中のヒトCD160(R&D Systems)50μg/mlを、CM5チップ(GE Healthcare)に1250-2000レゾナンスユニット(RU)で固定した。固定したヒトCD160の完全性は、抗huCD160 H7 IgG1抗体を使用して確認した。動態測定のために、2倍ずつ希釈(0.15μM-10μM)して得られた段階的濃度のヒトECD160を、25℃、流速30μl/minのBiacoreP20緩衝液でもって、PBSに2回注入した。
クローンFJ1516MP02F04又はF04及びFJ1516MP02D12又はD12は、存在するバリアントによりH7抗体よりも高い親和性でCD160に結合できるかどうかを調べるために、IgGでフォーマットした。FJ1516MP02A09又はA09バリアントは、他とは大きく異なる結合/解離プロファイルも持つ唯一の代表であり、この点で、IgGフォーマットでもさらに調べる。
眼科学の場合、F04及びD12バリアントは、抗体の全身半減期を短縮するバリアントを産生することにより、又は、Fc領域のない抗体フラグメントのフォーマットを提案することにより、硝子体内半減期を減少させすぎることなく、治療用抗CD160抗体又はフラグメントの全身半減期を短縮するために、Fc受容体(FcR)及び/若しくはその他のものと相互作用しないか又は最小限の相互作用を行うように選択されたフォーマット(たとえば、IgG4又はIgG1 N297Q)で生成された。
<H7候補とそのバリアントをIgG4又はIgG1 N297Q+/-FcRnヌル突然変異でフォーマットすることによる全身半減期並びにFcR及びFcRnの関与の低減>
眼科学の場合、治療用抗CD160抗体の全身半減期を短縮する最初の可能性は、Fc受容体(FcR)と相互作用しないように又は最小限で相互作用するように選択されたIgG4 S228P-R409K又はIgG1 N297Q構造上の可変領域をクローニングすることにより、F04及びD12バリアントをフォーマットすることである。このバックボーンでは、MabのFc領域にS228P/R409K/H310A/H435Q又はI253Aの変異体を挿入して、ヒト新生児Fc受容体(FcRn及び「FcRnヌル変異体」(Olafsen、2012))との相互作用を減らすことも可能である。これは、表4で示すような、重鎖と軽鎖の様々な組み合わせによって実現できる。
全身半減期を低減し、硝子体(IVT)に注射された治療用抗体のFcRとFcRnsの関与を減らす他の方法は、H7抗体とそのバリアントを抗体フラグメント(Fab、Fab’2など)でフォーマットすることである。したがって、H7とそのバリアントは、対応するフォーマット(表4を参照)を生成するために、H7の軽鎖(配列番号57)を次の重鎖の1つと組み合わせることにより、Fabフォーマット(遺伝子操作によって合成され、細菌又はCHO細胞で産生される以下のFab定常鎖を含む)でフォーマットされる。
-Fab CH1 IgG1 D12 ELB01122(配列番号37)
Fab’2フォーマットは、D12バリアント(配列番号38)(組換え又は酵素切断(enzymatic cleavage)(Ides Fabricator、GeNovis))に対して、1つではなく2つのジスルフィド架橋を使用して、又はロイシンジッパーを使用して若しくは使用せずに生成される。
腫瘍学で比較された様々なフォーマットは、H7及びIgG1フォーマットの3つのバリアントD12、F04、A09、そしてGenmabのHexabodyフォーマット及びD12についてのBiteフォーマットである。
4.1)抗CD160の熱安定性に対するH7バリアントの変異の影響の評価
タンパク質の安定性の研究では、熱安定性を評価する。熱安定性は、i)その一次配列に由来する3次元構造にリンクしたタンパク質の固有の安定性(凝集体を形成する性質)、並びにii)サンプルの保存及び製剤条件(pH、塩、及びサンプルの成分)によるものである。Sypro Orange(Thermofischer Scientific、S 6650、バッチ1608495)のもとの形態又は変性形態のタンパク質の疎水性領域に結合する能力に基づく方法によって、様々なIgGフォーマットにおける抗hCD160 H7候補のバリアントの熱安定性が評価された。
親和性は、ビオチン化CD160タンパク質がストレプトアビジンバイオセンサー上で10 nMで捕捉され、分析物が抗CD160である設計で、実施例2に記載のように測定された。試験した抗CD160の濃度は3.13、6.25、12.5、25、50及び100nMであり、グリシン濃度(pH2)は各再生について10mMであった。
抗CD160 H7抗体並びにIgG4及びIgG1フォーマット及びIgG1 E345Kフォーマットにおけるそのバリアント(D12及びA09)の結合能力は、蛍光強度中央値(the median fluorescence index)(MFI)を測定することにより、非トランスフェクト(トランスフェクションされていない)CHO-S細胞と比較して、組換えCHO-S-hCD160株(クローン2G10)で発現される表面CD160の標識中に評価された(図1を参照)。このために、5×105 2G10(CHO-S-CD160)及び非トランスフェクトCHO-S細胞を、これらの各抗体2μg及び適切な対照アイソタイプで標識した。図1によると、試験されたすべての抗CD160(アイソタイプ、IgGフォーマット、又はバリアントに関係なく)は、CHO-S細胞によって組換え的に発現されたヒトCD160を特異的に認識する。
Cell Player GFP-AngioKitアッセイ(Essen Biosciences)で、VEGF又はFGFによって誘発される血管形成に対する効果について、10個の抗体を評価した。このサンプルセットは、Avastin抗VEGF抗体とLucentis抗体フラグメントで構成されている。レンチウイルス発現システムを使用して蛍光タンパク質(Green Fluorescent Protein又はGFP)で事前標識された凍結ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を解凍し、6枚の96ウェルアッセイプレートで2日間、ヒト皮膚線維芽細胞と共培養した。抗体及び参照物質(VEGF、FGF-2、対照培地)を、様々な濃度で様々なウェルに加え、そのアッセイプレートをIncuCyte生細胞イメージングシステムに入れた。蛍光及び位相差(10×)画像を10日間12時間ごとに撮影し、管の長さと分岐点の数を解析しました。培養培地(必要に応じて抗体とともに)及びアッセイの上澄みを2~3日ごとに交換した。
角膜血管新生モデルをラットで開発した。このモデルは、特に、角膜内の新生血管の出現をモニターする容易な観察を可能にし、これにより、本発明に係る抗体を含む、抗血管新生特性を有する分子の評価が可能となる。
D0:麻酔後、各ラットの片目に手術用顕微鏡下での外科的介入を行った。このため、70°Cでエタノールを塗布して角膜を完全に上皮除去し、角膜輪部を切開すると、D4の角膜新血管が出現する。
グループあたり10匹のラット(IgG4対照アイソタイプの3匹を除く)を次のように使用する。
-グループ2:50μlで、Aflibercept(登録商標)(Eylea)250μgの結膜下注射
-グループ3:50μlで、IgG4対照アイソタイプ500μlの結膜下注射
-グループ4:50μlで、本発明に係るH7 IgG4抗体500μgの結膜下注射
D8及びD12について:角膜の血管新生に対する治療の効果を評価するために、手術を行った目の写真を手術用顕微鏡で観察した後に撮影する。血清及び硝子体液のサンプルを、D+12の解剖時に採取する。
手術が行われた目の写真は、D0と2つの異なる日:D7とD12に撮影された。撮影された写真は、D12までの、角膜血管新生の変化、特にアイソタイプ対照における血管密度と血管の長さの発達を示している。
本実施例の目的は、抗hCD160 ELB候補(ELB011候補を含む)の様々なフォーマットの全身及び眼の薬物動態(PK)プロファイルを、マウスIgG1抗CD160 CL1-R2及びベバシズマブのプロファイルと比較することである。眼での滞在時間が長く、全身半減期が最も短い最適化された抗CD160候補をスクリーニングするために、54匹の有色ウサギ(HY79b株)を使用したPK実験を行った。ウサギに硝子体内(IVT)又は静脈内(IV)注射で同量(0.5mg)の試験物質を投与し、ELB011リード(並びにELB021プログラムからのELB02104及びELB02114抗CD160 mAbs)に対するLC-MS/MSにより、又はCL1-R2及びIgG及びFabコンパレーター用の市販のELISAを使用して(ここではそれぞれ市販の製剤のベバシズマブ(Avastin)及びラニビズマブ(Lucentis)を使用)、血清抗体濃度を決定した。これにより、各候補の静脈内ボーラス投与後の薬物動態パラメータをモデル化することができ、したがって各薬物の出力動態パラメータを計算することができた。
様々な抗CD160の薬物動態(PK)及び硝子体内(IVT)注射による500μgの1回の投与後のそれらの対照の実験は、ニュージーランド白ウサギを用いて行う。
実験の設計を表12に示す。この実験には、エンドトキシンレベルが0.5EU/mlであり、濃度5mg/mlの8種類の抗CD160フォーマット(表12を参照)並びに2つのコントロール、ベバシズマブ(Avastin)及びラニビズマブ(Lucentis)を有する、10グループ(1グループあたり3匹のウサギ)が含まれる。
2つの注射ルート(静脈内(IV)対硝子体内(IVT))でのウサギ血清サンプルにおける異なるELB011抗ヒトCD160候補(インタクト(intact)IgG及びIgGフラグメントとして)の定量化は、高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析(LC-MS/MS)法により行った。方法開発の戦略は、ウサギ血清中のすべてのELB011(及びELB021)薬物の濃度の測定に適した1つの汎用LC-MS/MS法を得ることを目的とした。サンプルは、磁気ビーズでのプロテインLアフィニティー精製による対象薬物の濃縮、その後のDTT及びヨードアセトアミドを使用した還元及びアルキル化、先のトリプシン消化によって調製した。最終抽出物は、陽イオンエレクトロスプレーを使用したMS/MS検出を備えたHPLCで分析した。H7ヒト化候補に基づくすべての抗CD160(ELB011及びELB021プログラムから)に共通する1つのトリプシンペプチド(VL軽鎖の1つのCDRを含むASQSISNHLHWYQQKPGQAPR)を、多重反応モニタリング(MRM)法によりモニターした。選択されたペプチドは軽鎖のCDR領域にマップされ、他の前臨床マトリックスへのアッセイの直接転送が可能になり、ヒトマトリックスでの分析が可能になる。この方法は、最初に適格性が確認され、次にウサギ血清中の各結合物の定量に適用された。
2つの他の抗CD160 mAb(それぞれIgG1及び六量体IgG1E345KフォーマットとしてのELB02104及びELB02114、H7-A09抗CD160)も同じ方法に従って定量化した。
H7及びH7バリアントの薬物動態パラメータを、親のマウス抗ヒトCD160 CL1-R2の薬物動態パラメータと比較するために、ウサギ血清中のマウスIgG1濃度を、市販のマウスIgG1 ELISA定量セットを使用し、ELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)を利用して、製造元の推奨に従って測定した(Cat.No. E90-105、Lot No. E90-105-39、Bethyl Laboratoriesから)。
両方の注射ルートについて、ノンコンパートメント解析を使用し、測定された血清濃度より、すべての血清濃度時間曲線について次の薬物動態パラメータを観察し及び計算した。
- TMax(H)(血清ピーク濃度の時間)、
- TLag(H)(薬物投与と最初に観察された血清濃度と間の遅延(十分なデータがある場合))、
- AUC0-t obs(H μg/ml)(対数台形規則を使用した、0からCラストまでの血清濃度時間曲線下の面積)、
- AUC0-inf obs(H μg/ml)(0から無限大まで推定された血清濃度時間曲線下の面積(AUC0-t + Cラスト/Ke))、
- Cラスト(最後に観察された濃度)、
- 除去Ke(H-1)(対数線形回帰で得られた血清濃度の時間曲線の末端部分の勾配(十分なデータがある場合))、
- 末端T1/2(H)(観察された半減期又は末端半減期、T1/2=-ln2/Keによって計算)、
- Vd(静脈内ボーラス投与後の分布量(L)、Vd=投与量/(Ke×AUC0-inf)(静脈内ボーラス投与のみ))
-CL(クリアランス(L/H)CL=Ke×Vd(静脈内ボーラスのみ))。
F%(AUC0-inf)(参照フォームへの絶対生物利用能=AUC0-inf試験×参照用量/AUC0-inf参照×試験用量(AUC0-infが測定可能な場合))。
- 目の出力(mg):血清中に放出された薬物の総不変量
- 出力(%量):血清中に放出された薬物の%量(これは硝子体投与後の目についての薬物量の絶対生物利用能である)
- 50%の出力時間(±):血清に入った注入量の50%を観察するまでの時間(グラフから推定)
- 最大時間%(H):累積薬物出力動態が平坦になるまでの時間(=薬物の眼内滞留時間)
- 出力速度(mg/H):血清中の薬物投与速度
- 最大出力速度(mg/H):出力速度曲線のピーク
- 最大出力速度の時間(H):ピークの時間
表13は、静脈内に0.5mg(0.19mg/Kg)投与した後の、主に観察された薬物動態パラメータを示す。
図3Aからわかるように、静脈内ボーラス後、ELB01101、ELB01103、ELB01104、ELB01122、ELB01132、ELB02104、及びELB02114の血清濃度は、注射後急速に減少し(分布期)、そして、ELB01122及びELB01132(1,9及び4,6H)を除いて古典的な緩やかな消失期である第2段階(T1/2の範囲:52から188時間)が続く。表13に示すように、CMax(3.360~4.297μg/ml)は、ELB01122、ELB01132、ELB02104及びELB02114の最初のサンプリング時間である0.083時間(2分)で観察されるが、ELB01101、ELB01103及びELB01104については最長時間の後(0.139~0.444時間)で観察される。平均分布容積とクリアランスは、それぞれ0.05~0.35L及び0.005~0.1051L/Hである。
図3Bからわかるように、血清濃度は注射後の眼からの薬物のゆっくりとした放出に従ってゆっくりと増加し、最高プロファイルレベルはベバシズマブの硝子体内投与後に観察され、最低プロファイルレベルはELB01122及びELB01132の硝子体内投与後に観察される。
表15は、各項目の両投与ルートに従う平均血清濃度のデコンボリューション解析後のELB011候補のウサギにおける薬物動態パラメータを示す。
静脈内(IV)又は硝子体内(IVT)に0.5mg(0.19mg/Kg)を投与した後のELB011及びELB021の候補の予想される血清PKプロファイル(すなわち、観察される主な血清薬物動態パラメータ)及び血清半減期の順位(T1/2とも表記)は、対応するフォーマットにより予想される差異に従っている(Gadkarら、2015)によって説明されている。
可能性のあるELB011候補の中から、適切なNHPモデルにおける用量効果試験で比較する2つの候補、1つのIgGフラグメントと1つの全IgGを最終的に選択した。
この研究の目的は、(1)抗hCD160の2つのフォーマット(H7 IgG4(ELB01101)及び非グリコシル化H7 IgG1(ELB01111))を単回硝子体内注射によりカニクイザルに投与した場合において、これらに関する目の耐性を決定すること、並びに、(2)カニクイザル(macaca fascicularis)モデルにおけるレーザー誘発性脈絡膜新生血管に対するこれらのアイソフォームの1つの可能性のある予防効果を評価することである。
有効性(予防効果)の安全性及び用量の評価は、最も関連性の高いNHPレーザー誘発性chNVモデルで開始した。実際、この動物モデルは、新生血管型(すなわちウェット型)の加齢性黄斑変性を有するヒトにおける抗血管新生薬の薬理学的効能の予測因子としての確立された実績がある。
(動物及び動物飼育条件)
合計17匹のオスのカニクイザル(2~3歳)を使用した。これらは、投与開始時には2.7~3.2kgの体重があった。動物を実験室環境に慣れさせるために、動物を受け入れてから治療を開始するまでの間に、最低4週間の順応期間を設けた。動物は、自動散水弁を備えたステンレス鋼ケージに社会的に収容した(1ケージ1グループあたり最大3匹)。相対湿度30%~70%、温度20°C~26°Cを通常維持した。12時間の光/12時間の暗闇のサイクルを維持した。食物は、動物のサイズと年齢に適した量を提供した(PMI Nutrition International Certified Primate Chow No.5048を1日2回提供した)。逆浸透及び紫外線放射によって処理された水は、各動物が自動給水システムから自由に利用できた。サルは、眼科研究における動物の使用に関するARVO宣言に従って使用した。
表16に記載されているように、第1段階では、2つのIgGフォーマット(IgG4及びIgG1 N297Q)におけるH7バリアント1mgの硝子体内投与の耐性(全体及び眼の耐性)を、レーザー誘発されていない3つのサルの目で比較した。
試験物質(凝集物がなく、エンドトキシン含有量が非常に低い(0.025EU/mg未満)もの(表17を参照))を、使用日に、用量要件を満たすのに適切な濃度の参照製品(PBS)で希釈して20mg/mLに調製した。
この研究では、以下のパラメータについて評価した:死亡率と臨床徴候、体重、体重の変化、食欲、眼科検査、フルオレセイン血管造影、肉眼的病理学検査及び免疫組織化学検査。
死亡/死亡寸前のコントロールを、研究の期間全体において、通常、1日2回(午前中に1回及び午後中に1回)実施した。投与期間と観察期間について、詳細な検査を毎週実施した。個々の体重を毎週測定した。飼料の個々の評価は、食欲を目視検査して毎日評価して行った。
活性のあるChNV病変の発生は、フルオレセイン血管造影法(FA)により評価した。これは、レーザー照射の前に一度行い、レーザー傷害後の14日目と29日目に行った。14日目と29日目の静止画像上の個々のレーザースポットによって定義されたChNV病変は、漏出ついて半定量的に評価した。
効能評価の第2段階で、イメージングデータ(フルオレセイン血管造影又は蛍光血管造影)を1日目(レーザー後、投与前)に取得し、次のように光凝固後14日目及び29日目に再び取得した。
安楽死させた後、眼球を摘出し、硝子体液を収集し、ドライアイス上に置いた後、冷凍庫で-80℃に保管した。第2段階におけるすべての動物の左目の残りの組織は、免疫組織化学分析に使用した。特定された左目の脈絡膜を準備し、「フラットマウント」としてマウントし、IHC研究によりフォンヴィレブランド因子(vWF)で染色した。簡単に説明すると、フラットマウントをPBS+1%Tritonバッファーによって各ステップ間で少なくとも5分間3回洗浄し、PBS+1%Triton+0.1%アジ化ナトリウム中の1%BSAで30分間ブロックし、ウサギポリクローナル、フォンヴィレブランド因子(ab6994の1/200、Abcam)に送り、又は陰性対照(1/350 X0936 Dako/NRbIgG)ターゲットに4°Cで48時間さらし、最後にAlexaFluor 488結合ヤギ抗ウサギIgG(A11008/Life テクノロジー)に4°Cで一晩さらした。抗CD160で治療され又は治療されていないレーザースポット病変は、陽性vWF染色について半定量的に個別に評価され、20倍の対物倍率での視野と比較して、病変のサイズ及び性質に基づいて1、2又は3のスコアが与えられた。共焦点顕微鏡を使用したさらなる分析を行い、必要に応じて病変の性質を確認した。
サルの血液は大腿静脈穿刺によって採取した。
予定された安楽死まで生き残った動物は、予定された剖検(解剖)の前に一晩絶食させた。動物室から剖検エリアに移す前に、鎮静剤(注射用ケタミンHCl(USP))を筋肉内注射で投与した。動物は、ペントバルビタールナトリウムの静脈内注射による麻酔後の脇下又は大腿動脈の切開による放血させる。
局所抗生物質(トブラマイシン0.3%)を、治療の前日、注射後、注射の翌日に2回、2つの目に使用した。
6匹のオスのカニクイザル(Macaca fascicularis)(1.5~3.5歳、体重1.5~6kg)の2つのグループで、脈絡膜血管新生(CNVを次のようにして誘発した。目の洗浄前に、散瞳薬(塩化ベンザルコニウム(Zephiran(商標)))を処置前に各目にさした。
第2段階の1日目、ChNV処置の前に、散瞳薬を両目にさした。病変のレーザー誘発段階又は硝子体内(IVT)注射の前に、動物に鎮静剤ケタミン(5mg/kg)、グリコピロレート(0.01mg/kg)及びデクスメデトミジン(0.01mg/kg)の混合物を筋肉内注射した。そして、適切な麻酔を維持するためにイソフルラン/酸素混合物を投与するための気管内チューブを挿管し、ケタミン(5mg/kg)の混合物で動物を麻酔した。投与(必要と考えられる場合のみ)の手順終了後、動物に、必要に応じて、デクスメデトミジンの拮抗薬であるアチパメゾール0.1mg/kgの筋肉内注射をした。動物はまた、治療グループに分け、体重でランダム化した。
<耐性についての結果、まとめ>
<死亡率と臨床徴候>
臨床検査及び眼科検査では、出血、体重の変化又は肉眼的所見に対する治療の影響は、偶発的な又は処置関連の及び実験室で飼育される霊長類に典型とされるもの以外のものはないことが示された。治療の体重の増加などの体重に関連する影響はなかった。体重に対する治療に関連した影響はなく、肉眼で見える影響もなかった。H7 IgG1 N297Qを投与された動物に28日目で、非常にわずかな硝子体の混濁が観察された。それらは臨床的に重要であるとは考えられず、そのような変化は硝子体内投与ルートを使用した場合に一般的に観察される。
前処理でいくつかのマイナーな二次観察が記録された。しかし、すべての動物は研究に利用できると判断した。第1段階では、投与後にわずかな変化のみが観察された。3/6目の硝子体及び前房に少数の細胞が認められた(No.1002及びNo.1003)。
<蛍光血管造影の結果の分析>
1日目に、すべての動物の眼は、脈絡膜血管新生(CNV)を評価するための、9つのレーザー病変についての計画/設計通りに処置された。一部の動物では9つ以上の病変が認められたが、9つの病変のみについて評価した。
レーザー病変をvWFの陽性染色について半定量的に個別に評価し、レーザー病変のサイズと性質にスコアが与えた。
(1)蛍光標識の存在、少量の場合
(2)vWF陽性の血管/毛細血管の存在、中程度の場合
(3)血管の量が、関心領域(病変の中心及び周辺)の平均よりも大きかった場合。
20倍の倍率で、レーザー病変の点は、視野に対する病変のサイズに応じて1、2又は3のスコアを与え、その病変は、点状病変が開いているか、中心脈絡膜を有するか、又はRPE瘢痕で完全に覆われているかによって特徴付けた。
図4及び図5並びに表18及び表19に見られるように、担体(PBS)と比較したH7 IgG4のIVT注射のレーザー誘発性脈絡膜血管新生に対する効能と予防効果は次のように示された。
実施例9で示したように、最適化されていない抗CD160 IgG4(ELB01101)の各目あたり1mgの単回硝子体内注射は、眼の主要な毒性の兆候がなく臨床関連病変の発生をレーザースポットの総数に対して50%防止した。
レーザー誘発性ChNV手順は、実施例9の手順と同じである。1日目に、ChNVを評価するために、グループあたり5匹の動物の目を、初期出力300mW、80μmの初期スポットサイズ、0.1秒の持続時間で810nmダイオードレーザーを使用して、各目の黄斑の領域の周りにある網膜の主要血管の間に9つのスポットレーザー創傷パターンを生成させた。各処置で、1グループあたり合計90のレーザーサイト(試験項目ごとに、1グループあたり5匹の動物、1匹あたり2つの目、各目あたり9つのサイト)を評価した。
病変レベル部位での網膜の厚さに対する抗CD160候補の影響を評価するために、網膜及び異なる病変部位のスペクトル領域光干渉断層法(SD-OCT)分析による追加のステップを実施した。SD-OCT分析は、中間用量群(ELB01103について1mg、ELB01132について0.6mg)並びに14日目及び28日目におけるビヒクル群でのみ実施した。そのため、散瞳薬(トロピカミド1%及び/又は2.5%フェニレフリン)によって瞳孔を広げる。実施例9に示したように、フルオレセイン血管造影を行うために動物を麻酔する。両目における5つのレーザー病変部位の連続画像を取得した。線維血管膜面積を各部位で測定し、各スポットの総体積を計算した。各病変の外側の(通常の網膜の厚さとしての)3つの網膜厚さの測定値と比較した、各病変部位の網膜厚さの測定を行った。必要に応じて、追加のスキャン又は画像を取得した。
動物の最終手順は、実施例9に示した手順と同じであった。動物には、限定的な剖検検査を行い、採取した組織の評価をする。
この研究では、実施例9と比較して、これら2つの抗CD160候補の効能を評価するための分析をさらに行う。実際、各抗CD160アイソフォームの効能を評価するために、まず、14日目と28日目にそれぞれの予防効果を評価した(以下の内容について)。
- 臨床関連の個々の病変のChNV面積と網膜の厚さ
- そして、第二に、それらのそれぞれの治療効果を、14日目に確立したアクティブな病変に対する経時的影響(14~28日目)を調べることによって評価した。
- 臨床関連病変の個々の平均ChNV面積(ピクセル単位)
- 病変の種類(すべてのグレード、臨床関連病変(グレード3及び4)並びにグレード4のみ)に応じた、2つの中間用量(ELB01103について1mg及びELB0113について0.6mg)についての個々及び平均の網膜厚さ。
NHP ChNVモデルで得て、ELB01103及びELB01132の効能と耐性に関するプロファイリングの結果を以下に示す。
ELB01101について、使用されたELB01103又はELB01132の硝子体内の用量が何であれ、臨床検査及び眼科検査では、出血、体重の変化又は肉眼的所見に対する治療の影響は、偶発的な又は処置関連の及び実験室で飼育される霊長類の典型的とされるもの以外のものはないことが示された。レーザー曝露により、処置がされたすべての目で同様の手順関連の目の変化が生じ、例えば網膜瘢痕、出血、中心窩出血が生じた。脈絡網膜の出血は時間とともに改善し、28日目までにほとんどの目で消失した。
図6Aに示すように、有意なフルオレセイン漏出の時間経過(0~14日目及び0~28日目)に伴う高グレードの臨床関連病変(グレード3及び4)の発生率を調べることによって、IgG4(ELB01103)としてのH7バリアントD12の阻害セッティングにおける有効性を最初に評価した。フルオレセイン血管造影図の半定量的評価によって有効性データを示す可能性がいくつかある。
図7Aに示すように、有意なフルオレセイン漏出の時間経過に伴う高グレードの臨床関連病変(グレード3及び4)の発生率を調べることによって、F7リンカーFab(ELB01132)としてのH7バリアントD12の予防における効能を最初に評価した。2つの低用量(0.23mg及び0.6mg)で効能がある。しかし、最高用量(2mg)ではChNV病変の予防はまったくない。一貫して、ELB01132の中程度の用量(0.6 mg)は、観察された効能の読み取り値(データは示していない)が何であれ、14日目までにChNV病変の出現を防ぐことに非常に効果的である。このことは、臨床関連の漏出(グレード3又は4)をグループ間で、及び縦断的に(少なくとも1つのグレード4の病変の目の数又は目の割合で(データは示していない)、比較した場合に当てはまる。ELB01132の0.6mgの用量の効能は、ELB01101の効能よりも優れている。
単回の両側硝子体内注射によるH7バリアントD12抗CD160の2つのアイソフォームの投与は、カニクイザルで最大3mgのELB01103/目及び2mgのELB01132/目で臨床的に十分に許容できる。対照と比較した場合、両方の試験項目は、臨床関連病変の面積及び/又は厚さの変化によって測定されるように、ChNV進行の減少と関連していた。一般に、ELB01103の効能は、ELB01132で観察されたものよりも高かった。実際、ELB011032の効能は用量の関数及び読み取られた効能の関数として大きく変動するが、ELB01103は、分析された効能の読み取り値が何であれ、明確な用量効果がある。しかし、一貫して、ELB01132の中間用量(0.6mg)はChNV病変の出現を防ぐために非常に効果的である。
7人のCLL患者から単離されたPBMCは、抗体CL1-R2(ネズミ抗CD160 IgG1)、IgG1フォーマットの抗CD160 H7、又はBY55(ネズミ抗CD160 IgM)(CD19/CD5/CD3/CD56パネル)で標識した(図8を参照)。CD160標識の蛍光強度を測定するために、CD5+CD19+腫瘍細胞を分析した。CD160発現は、すべてのCLLサンプルにおいて様々な強度検出できる。図8によれば、H7 IgG1抗体は、CLLサンプル6/7の腫瘍細胞に効率的に結合し、これはCL1-R2又は市販のBY55抗CD160 mAbよりも優れている。
IgG1フォーマットの抗CD160抗体H7は、ADCCのメカニズムによりCD160を発現している細胞を殺す(図9を参照)。
図10、図11及び図12が示すように、IgG1フォーマットにおける抗CD160 H7抗体はNK細胞を活性化する。
図12が示すように、IgG1及びE345K/IgG1フォーマットにおける抗CD160 H7抗体に由来するバリアントは、NK細胞を活性化する能力が高くなっている。健康なドナーの血液から精製されたNK細胞を、単独又は抗CD160 H7 IgG1抗体の存在下で、又は、ElsaLysによって0.001~10μg/mlの用量で作成されたバリアントELB02102、ELB02103、若しくはELB02104(3つのうちいずれもIgG1フォーマットで)、ELB02112、ELB02113若しくはELB02114(3つのうちいずれもE345K/IgG1フォーマットで)の存在化で96ウェルプレートのウェル(1ウェルあたり1×106細胞)で24時間培養した。10μg/mlのヒトIgG1を陰性アイソタイプ対照として使用し、抗CD16(ebioscience cat#16-0166)を陽性アイソタイプ対照として使用した。
IgG1及びE345K/IgG1フォーマットにおける抗CD160 H7抗体に由来するバリアントは、NK及びCD8+T細胞をより効果的に標識する(図13を参照)。
<眼科適応症に対する抗CD160との可能な二重特異性(bsab):抗CD160 H7又は親和性成熟と組み合わせられる潜在的な第2結合価>
文献(Labrijnら、2014)に記載されている手順を、親抗体である抗hCD160 IgG1 F405L(クローンH7)又はその誘導体由来の二重特異性IgGの開発と、実証実験として抗hアンジオポエチン2からなるIgG1 K409Rに適用した。
抗CD160及びその抗Xパートナー抗体(特にXがアンジオポエチン2又はCD200Rの場合)や抗CD160/抗-X二重特異性の併用療法は、水酸化ナトリウム(NaOH)バッファーで誘導された角膜血管新生のウサギモデルにおける各抗体(100μg及び500μg)又はbsabの100μg及び500μgでの効能や、効能の相加性及び/又は相乗効果について評価される(文献(Campos-Molloら、2011)に記載されているように)。
抗CD160 CL1-R2、ELB02101(H7 IgG1)抗体、及びELB02104、ELB02114及びELB01103フォーマットにおけるH7バリアントの結合能力を、標識された細胞の割合(=結合の割合)を測定することにより(図14を参照)、組換え細胞株CHO-S-hCD160-GPI(クローン2G10)で発現した表面ヒトCD160-GPI(グリコシルホスファチジルイノシトール)の標識中に、及び、トランスフェションされていないCHO-S細胞と比較して組換え細胞株CHO-S-hCD160-TMで発現した表面ヒトCD160-TM(膜貫通)の標識中に評価した。このために、2×105個のCHO-S-hCD160-GPI、CHO-S-hCD160-TM及び非トランスフェクトCHO-S細胞を、これらの抗体それぞれ1μg及び適切な対照アイソタイプで標識した。
図15に示すように、IgG1フォーマット(ELB02104)の抗CD160 H7抗体に由来するA09バリアントは、対照アイソタイプと比較してT CD4 CD45High CD160+リンパ球を再活性化できる。ELB02104は、HVEM-CD160の相互作用を遮断することにより、HVEMタンパク質によって誘導されるTCD4細胞の阻害を取り除く。
IgG1(ELB02104)及びE345K/IgG1(ELB02114)フォーマットにおけるH7 A09バリアント抗体は、H7 IgG1(ELB02101)及び親CL1-R2 mAbと比較して、NK細胞刺激活性によりDC成熟細胞を誘導する能力が向上している。
1. Giustiniani et al., J Immunol. 2009 Jan 1;182(1):63-71 - Identification and characterization of a transmembrane isoform of CD160 (CD160-TM), a unique activating receptor selectively expressed upon human NK cell activation
2. El-Far et al., J Transl Med. 2014 Sep 2;12:217. doi: 10.1186/s12967-014-0217-y. CD160 isoforms and regulation of CD4 and CD8 T-cell responses.
EA Kabat, TT Wu, C Foeller, HM Perry, KS Gottesman (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest
3. Diebolder et al., Science. 2014 Mar 14;343(6176):1260-3. doi: 10.1126/science.1248943 - Complement is activated by IgG hexamers assembled at the cell surface. Diebolder CA
4. de Jong et al., Published online 2016 Jan 6. doi: 10.1371/journal.pbio.1002344 - A Novel Platform for the Potentiation of Therapeutic Antibodies Based on Antigen-Dependent Formation of IgG Hexamers at the Cell Surface
5. Wang et al., Mol. Cell. 2016 Jul 7;63(1):135-45. doi: 10.1016/j.molcel.2016.05.016 - Molecular Basis of Assembly and Activation of Complement Component C1 in Complex with Immunoglobulin G1 and Antigen.
6. Krzystolik et al., Arch Ophthalmol. 2002 Mar;120(3):338-46 - Prevention of experimental choroidal neovascularization with intravitreal anti-vascular endothelial growth factor antibody fragment.
7. Gadkar et al., Invest Ophthalmol Vis Sci. 2015 Aug;56(9):5390-400. doi: 10.1167/iovs.15-17108 - Design and Pharmacokinetic Characterization of Novel Antibody Formats for Ocular Therapeutics
8. Labrijn et al., Nat Protoc. 2014 Oct;9(10):2450-63. doi: 10.1038/nprot.2014.169. Epub 2014 Sep 25. - Controlled Fab-arm exchange for the generation of stable bispecific IgG1
Claims (19)
- ヒトCD160に特異的に結合し、
配列番号14で定義される軽鎖の可変ドメイン(VL)と、
配列番号11、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29及び配列番号30から選択される重鎖の可変ドメイン(VH)と
を有する結合物。 - 請求項1に記載の結合物において、
前記結合物は、定常領域として、IgG1又はIgG4の定常領域を有するモノクローナル抗体であることを特徴とする結合物。 - 請求項1又は2に記載の結合物において、
重鎖定常ドメインとして、配列番号15,配列番号16,配列番号31~配列番号35,配列番号43及び配列番号44及びそれらの非グリコシル化変異体から選択される配列と、
軽鎖定常ドメインとして、配列番号22~24から選択される配列と
を有するモノクローナル抗体であることを特徴とする結合物。 - 請求項1~3のいずれか1項に記載の結合物において、
配列番号57で定義される配列を含む軽鎖と、
配列番号45~51,9,10,12,58~64から選択される重鎖と
を有することを特徴とする結合物。 - 請求項1に記載の結合物において、
前記結合物はFab、Fab’、F(ab’)2から選択されるフラグメントであって、
配列番号57で定義される軽鎖と、
配列番号36~38から選択される配列を含む重鎖と
を有することを特徴とする結合物。 - 請求項1~5のいずれか1項に記載の結合物において、
多重特異性又は少なくとも二重特異性の誘導体であり、CD160結合部位及び他の抗原との結合部位を少なくとも1つ含む結合物である、又は、配列番号52によって定義される結合物である
ことを特徴とする結合物。 - 請求項6に記載の結合物において、
前記他の抗原は以下の抗原から選択されることを特徴とする結合物:
VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、PlGF、VEGF-R2、アンジオポエチン2、アンジオポエチン様(angiopoietin like)4、CD200R、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC、PDGF-DD、PDGF-R、FGF2又はFGFβなどのFGF、βアミロイド、スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)、C’5、IL6、MER TK、CD115、TNFα、IL8、HGF、TGFβ、IGF1、IL1、IL2、EGF、KGF、G-CSF、GM-CSF、α-v、β-3又はα-v,β-5インテグリン、膜貫通型又は可溶性CD146、MMP1、MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP-2、アンギオゲニン、PD-ECGF、血小板活性化因子、プロスタグランジンE、プレイオトロピン、クラスII MHC、t HP59、CM101、CD3、CD25、CD28、PD1、CTLA4、4-1BB、LAG-3、ICOS、CD16、CD3、CD47、CD20、CD19、CD5、CD180、CD200、CD40、CD20、CD37、CD38、CD148及びCD180。 - 請求項1~6のいずれか1項に記載の結合物を少なくとも1種含む組成物。
- 請求項8に記載の組成物において、
以下の抗原の少なくとも1種を対象とする少なくとも1種の他の抗体、又は、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ若しくはベルツズマブから選択される抗体、を更に含むことを特徴とする組成物:
VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、PlGF、VEGF-R2、アンジオポエチン2、アンジオポエチン様4、CD200、CD200R、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC、PDGF-DD、PDGF-R、FGF2又はFGFβなどのFGF、βアミロイド、スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)、C’5、IL6、MER TK、CD115、TNFα、IL8、HGF、TGFβ、IGF1、IL1、IL2、EGF、KGF、G-CSF、GM-CSF、α-v,β-3又はα-v,β-5インテグリン、膜貫通又は可溶性CD146、MMP1、MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP-2、アンギオゲニン、PD-ECGF、血小板活性化因子、プロスタグランジンE、プレイオトロピン、クラスII MHC、HP59、CM101、CD37、CD38、CD25、CD28、CD40、PD1、CTLA4、4-1BB、LAG-3、ICOS、CD16、CD3、CD47、CD20、CD19、CD5、CD180、CD200、CD40、CD20、CD37、CD38、CD148、CD180。 - 薬剤として使用される、請求項1~7のいずれか1項に記載の結合物、又は請求項8若しくは9に記載の組成物。
- 請求項1~7のいずれか1項に記載の結合物及び請求項9に記載の抗原の1種を対象とする少なくとも1つの抗体を含む製品であって、
新生血管性の眼病、糖尿病、糖尿病性失明、原発性糖尿病性網膜症又は加齢黄斑変性症、関節リウマチ、子癇前症、子癇又は癌から選択される、又は、血管新生を引き起こす病理学的状態の治療及び/又は予防における同時、個別又は逐次使用のための製品。 - 抗血管新生剤、免疫調節剤及び/又は細胞毒性薬剤として使用される請求項10に記載の結合物又は組成物。
- 請求項10又は12に記載の結合物であって、
血管新生性の眼の病理学的状態、糖尿病、糖尿病性失明、原発性糖尿病性網膜症又は加齢黄斑変性症、関節リウマチ、子癇前症、子癇又は癌から選択される、又は、病理学的状態の予防及び/又は治療のために使用する結合物。 - 以下の癌の治療のために使用される、請求項1~7のいずれか1項に記載の結合物、又は、請求項8若しくは9に記載の組成物:
乳癌、大腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、腎臓癌(kidney cancer)、前立腺癌、膀胱癌又は腎細胞癌(renal carcinoma)などの泌尿生殖器腫瘍、結腸癌、ホジキンリンパ腫、肝臓癌、子宮頸癌、悪性黒色腫、卵巣癌、中皮腫及び膠芽腫、血液癌、AML、MM、リンパ腫、慢性リンパ性白血病若しくは有毛細胞白血病、又は固形腫瘍、黒色腫、RCC、肺がん、類表皮肺がん、神経芽細胞腫、卵巣がん、乳がん、又は、胃がん。 - レツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ又はベルツズマブ、抗CD37抗体、抗CD38抗体又は抗CD40抗体から選択される少なくとも1種の他の抗CD20抗体
と組み合わせて血液癌の治療に使用する、
請求項1~7のいずれか1項に記載の結合物、又は、請求項8若しくは9に記載の組成物。 - 請求項1~7のいずれか1項に記載の結合物の1種をコードする単離された核酸。
- 請求項16に記載の核酸を含むベクター。
- 請求項17に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項18に記載の宿主細胞を培養することを含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の結合物の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1750152A FR3061716B1 (fr) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | Nouveaux composes ciblant le cd160 humain |
FR17/50152 | 2017-01-06 | ||
PCT/EP2018/050354 WO2018127586A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-01-08 | Compounds binding human cd160 and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020505013A JP2020505013A (ja) | 2020-02-20 |
JP7189878B2 true JP7189878B2 (ja) | 2022-12-14 |
Family
ID=59325344
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019536858A Active JP7189878B2 (ja) | 2017-01-06 | 2018-01-08 | ヒトcd160を結合する結合物及びその使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10975159B2 (ja) |
EP (1) | EP3565593A1 (ja) |
JP (1) | JP7189878B2 (ja) |
CN (1) | CN110381999B (ja) |
CA (1) | CA3048799A1 (ja) |
FR (1) | FR3061716B1 (ja) |
WO (1) | WO2018127586A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113613664A (zh) * | 2019-03-01 | 2021-11-05 | 阿奇洛伊斯生物制药公司 | 在抗原特异性免疫细胞中调节cd160功能的方法及其用途 |
GB202103706D0 (en) * | 2021-03-17 | 2021-04-28 | Ucl Business Ltd | CD160 binding domain |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006033386A1 (ja) | 2004-09-22 | 2006-03-30 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 安定化されたヒトIgG4抗体 |
JP2008517873A (ja) | 2004-08-09 | 2008-05-29 | インサーム (インスティテュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシェ メディカル) | mAbCL1−R2から得られる抗CD160特異的化合物の血管新生と免疫の用途 |
JP2012515746A (ja) | 2009-01-21 | 2012-07-12 | モノクローナル アンチボディーズ セラピューティックス | 抗cd160モノクローナル抗体及びその使用 |
JP2013528607A (ja) | 2010-05-28 | 2013-07-11 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 血管新生に基づく眼障害の処置のための抗cd160特異的抗体 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998021240A1 (en) | 1996-11-12 | 1998-05-22 | Dana-Farber Cancer Institute | Recombinant by55 and nucleic acids encoding same |
US7217796B2 (en) * | 2002-05-24 | 2007-05-15 | Schering Corporation | Neutralizing human anti-IGFR antibody |
EP1660534A2 (en) * | 2003-08-22 | 2006-05-31 | MedImmune, Inc. | Humanization of antibodies |
WO2006031825A2 (en) * | 2004-09-13 | 2006-03-23 | Macrogenics, Inc. | Humanized antibodies against west nile virus and therapeutic and prophylactic uses thereof |
EP2006299A1 (en) | 2007-06-18 | 2008-12-24 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Identification of new isoforms of the MHC-class I specific receptor CD160 and uses thereof |
EP2455403A1 (en) * | 2010-11-23 | 2012-05-23 | Pierre Fabre Medicament | Homogeneous humanized antibodies against JAM-A that inhibit proliferation |
US9469685B2 (en) * | 2011-01-10 | 2016-10-18 | Emory University | Antibodies directed against influenza |
AU2012326025B2 (en) * | 2011-10-18 | 2017-08-31 | Emory University | Antibodies directed against influenza |
JP6522585B2 (ja) * | 2013-05-02 | 2019-05-29 | アレス トレーディング ソシエテ アノニム | Cxcr5に対するモノクローナル抗体 |
TWI707872B (zh) * | 2014-05-29 | 2020-10-21 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 特異性結合多種癌症抗原的三特異性結合分子和其使用方法 |
CA2977142A1 (en) * | 2015-02-19 | 2016-08-25 | Darrell JOHNSTONE | Humanized filovirus antibodies and uses thereof |
TW201710286A (zh) * | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗vegf、pdgf及/或其受體之結合蛋白 |
US11001629B2 (en) * | 2015-12-28 | 2021-05-11 | Innate Pharma | Variable regions for NKp46 binding proteins |
-
2017
- 2017-01-06 FR FR1750152A patent/FR3061716B1/fr active Active
-
2018
- 2018-01-08 CA CA3048799A patent/CA3048799A1/en active Pending
- 2018-01-08 CN CN201880016030.8A patent/CN110381999B/zh active Active
- 2018-01-08 WO PCT/EP2018/050354 patent/WO2018127586A1/en unknown
- 2018-01-08 EP EP18702410.4A patent/EP3565593A1/en active Pending
- 2018-01-08 US US16/476,171 patent/US10975159B2/en active Active
- 2018-01-08 JP JP2019536858A patent/JP7189878B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008517873A (ja) | 2004-08-09 | 2008-05-29 | インサーム (インスティテュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシェ メディカル) | mAbCL1−R2から得られる抗CD160特異的化合物の血管新生と免疫の用途 |
WO2006033386A1 (ja) | 2004-09-22 | 2006-03-30 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 安定化されたヒトIgG4抗体 |
JP2012515746A (ja) | 2009-01-21 | 2012-07-12 | モノクローナル アンチボディーズ セラピューティックス | 抗cd160モノクローナル抗体及びその使用 |
JP2013528607A (ja) | 2010-05-28 | 2013-07-11 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 血管新生に基づく眼障害の処置のための抗cd160特異的抗体 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Andersen, J. T. et al.,Anti-carcinoembryonic Antigen Single-chain Variable Fragment Antibody Variants Bind Mouse and Human Neonatal Fc Receptor with Different Affinities That Reveal Distinct Cross-species Differences in Serum Half-life,J Biol Chem.,2012年,Vol. 287(27),pp. 22927-22937 |
de Jong, R. N. et al.,A Novel Platform for the Potentiation of Therapeutic Antibodies Based on Antigen-Dependent Formation of IgG Hexamers at the Cell Surface,PLoS Biol.,2016年,Vol. 14(1):e1002344,pp. 1-24 |
Farren, T. W. et al.,Differential and tumor-specific expression of CD160 in B-cell malignancies,Blood,2011年,Vol. 118(8),pp. 2174-2183 |
Overdijk, M. B. et al.,Epidermal growth factor receptor (EGFR) antibody-induced antibody-dependent cellular cytotoxicity plays a prominent role in inhibiting tumorigenesis, even of tumor cells insensitive to EGFR signaling inhibition,J Immunol.,2011年,Vol. 187(6),pp. 3383-3390 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US10975159B2 (en) | 2021-04-13 |
CN110381999A (zh) | 2019-10-25 |
EP3565593A1 (en) | 2019-11-13 |
FR3061716A1 (fr) | 2018-07-13 |
CN110381999B (zh) | 2023-12-01 |
FR3061716B1 (fr) | 2019-05-17 |
JP2020505013A (ja) | 2020-02-20 |
CA3048799A1 (en) | 2018-07-12 |
US20200109211A1 (en) | 2020-04-09 |
WO2018127586A1 (en) | 2018-07-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7104000B2 (ja) | ヒト化またはキメラcd3抗体 | |
JP2019516394A (ja) | 新規抗pd−l1抗体 | |
JP2021511818A (ja) | Vista抗原結合性分子 | |
TW201106963A (en) | Antigen-binding proteins | |
US20240002525A1 (en) | Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof | |
JP2021501744A (ja) | 多重特異性抗体 | |
US20210269542A1 (en) | Anti-gitr antigen-binding proteins and methods of use thereof | |
CA3082559A1 (en) | Antibodies to .alpha.-synuclein and uses thereof | |
JP2021529520A (ja) | 抗sirp−ベータ1抗体及びその使用方法 | |
JP2021503911A (ja) | 抗ox40抗体及びその用途 | |
KR20230092932A (ko) | 항 pd-1/cd40 이중특이성 항체 및 그 용도 | |
JP7189878B2 (ja) | ヒトcd160を結合する結合物及びその使用 | |
US8822649B2 (en) | Anti-CLTA4, anti-GLUT2 protein for the treatment of type 1 diabetes | |
JP6863892B2 (ja) | 脳卒中を治療又は予防する方法 | |
JP2022531001A (ja) | 抗bcma抗体コンジュゲート、そのコンジュゲートを含む組成物ならびにそのコンジュゲートの製造および使用方法 | |
JP2023506667A (ja) | 抗pd-1抗体およびその使用 | |
CN116323671A (zh) | 具有增加的选择性的多靶向性双特异性抗原结合分子 | |
US20220056120A1 (en) | Methods of treating ocular pathologies using bifunctional molecules that target growth factors | |
EP4206226A1 (en) | Anti-vegf hexameric antibody and composition comprising same | |
US20210087282A1 (en) | Anti-nrp1a antibodies and their uses for treating eye or ocular diseases | |
RU2795625C2 (ru) | Антигенсвязывающие белки против gitr и способы их применения | |
KR20220029343A (ko) | 항-vegf 육량체 항체, 및 이를 포함하는 조성물 | |
KR20240087855A (ko) | Nkg2d, cd16 및 baff-r에 결합하는 단백질 | |
JP2023523601A (ja) | 抗cd19抗体及びその使用 | |
TW202136314A (zh) | 抗ccr8抗體及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201222 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20211013 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211026 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220107 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220531 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220809 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221129 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221202 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7189878 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |