JP6522585B2 - Cxcr5に対するモノクローナル抗体 - Google Patents
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Description
用語「免疫グロブリン」(Ig)は、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる1又は数個のポリペプチドからなるタンパク質を示す。免疫グロブリンの一形態は、抗体の基本構造単位を構成する。この形態は四量体であり、免疫グロブリン鎖の2つの同一の対から構成され、それぞれの対は、一つの軽鎖及び一つの重鎖を有する。軽鎖は2つの部位:可変ドメイン(VL)及び定常ドメイン(CL)、を有しており、軽鎖の文脈において、同様に定常領域と呼ぶことができる。重鎖も同様に、2つの部位:可変ドメイン(VH)及び定常領域(CH)を有する。それぞれの対において、軽鎖及び重鎖可変ドメインは、ともに抗原への結合に関与しており、定常領域は、抗体エフェクター機能に関連している。全長免疫グロブリン「軽鎖」(通常、約25kDa)は、N末端の可変ドメイン遺伝子(通常、約110アミノ酸)、及び、C末端のκ又はλ定常ドメイン(それぞれCκ及びCλ)遺伝子によってコードされている。全長免疫グロブリン「重鎖」(通常、約50kDa)は、同様に、可変ドメイン遺伝子(通常、約116アミノ酸)、及び、本明細書中で後述する他の定常領域遺伝子の一つ(通常、約330アミノ酸)によってコードされている。ギリシャ文字:[アルファ]、[デルタ]、[イプシロン]、[ガンマ]、および[ミュー]で表される、哺乳動物の重鎖の5つのタイプが存在する。重鎖のタイプはそれぞれ、IgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMのような抗体のアイソタイプを定義する。定常領域は、同じアイソタイプのすべての抗体において同一であるが、異なるアイソタイプの抗体では異なる。重鎖[ガンマ]、[アルファ]及び[デルタ]は、3つのIg定常ドメイン(CH1、CH2及びCH3)からなる定常領域、及び柔軟性のためのヒンジ領域を有し、重鎖[ミュー]及び[イプシロン]は、4つのIg定常ドメイン(CH1、CH2,CH3及びCH4)及びヒンジ領域からなる定常領域を有している。
本発明は、CXCR5に特異的な新規モノクローナル抗体、より具体的には、完全ヒトモノクローナル抗体の発見に基づいている。特に、それらは、CXCR5のヒト及びマカク(例えば、カニクイザル(Macaca fascicularis))形態の両方に特異的である、すなわち、それらは交差反応性である。CXCR5のアンタゴニストとしてのこれらの抗体は、多発性硬化症(MS)、リウマチ性関節炎(RA)又はシェーグレン症候群等の炎症性及び/又は自己免疫障害若しくは疾患を治療するために有用であり得る。それらは、膵がん、B−CLL若しくはCXCR5/CXCL13経路に関与する他の種類のがんの治療に使用することができる。
配列番号:1:mAb 40C01及び12A01に対する可変重鎖(アミノ酸配列)
配列番号:2:mAb 40C01に対する可変軽鎖(アミノ酸配列)
配列番号:3:mAb 40C01−VH1に対する可変重鎖(アミノ酸配列)
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配列番号:5:mAb 40C01−Vk1に対する可変軽鎖(アミノ酸配列)
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配列番号:7:mAb 40C01−Vk3に対する可変軽鎖(アミノ酸配列)
配列番号:8〜19:mAb 40C01シリーズのCDR配列(アミノ酸配列)
配列番号:20〜34:mAb 40C01シリーズのFR配列(アミノ酸配列)
配列番号:35:ヒトCXCR5(アミノ酸配列)
配列番号:36:カニクイザルCXCR5(アミノ酸配列)
配列番号:37:アカゲザルCXCR5(アミノ酸配列)
配列番号:38:重鎖定常領域−ヒトIgG1、アロタイプG1m(f)(アミノ酸配列)
配列番号:39:重鎖定常領域−ヒトIgG2 DI−NQ−HC2hサブタイプ(アミノ酸配列)
配列番号:40:重鎖定常領域−ヒトIgG4 S228P−R409Kサブタイプ(アミノ酸配列)
配列番号:41:mAb 40C01に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:42:mAb 40C01に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:43:mAb 40C01−VH1に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜57は、リーダー配列をコードする。
配列番号:44:mAb 40C01−VH1に対する可変重鎖(コドン最適化核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜57は、リーダー配列をコードする。
配列番号:45:mAb 40C01−VH2に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜57は、リーダー配列をコードする。
配列番号:46:mAb 40C01−VH2に対する可変重鎖(コドン最適化核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜57は、リーダー配列をコードする。
配列番号:47:mAb 40C01−Vk1に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:48:mAb40C01−Vk2に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:49:mAb40C01−Vk3に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:50:mAb40C01−Vk3に対する可変軽鎖(コドン最適化核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:51:mAb最適化42F03に対する可変重鎖。
配列番号:52:mAb最適化42F03に対する可変軽鎖。
配列番号:53:mAb 80A10に対する可変重鎖。
配列番号:54:mAb 80A10に対する可変軽鎖。
配列番号:55:mAb 80A11に対する可変重鎖。
配列番号:56:mAb 80A11に対する可変軽鎖。
配列番号:57:mAb 80B09に対する可変重鎖。
配列番号:58:mAb 80B09に対する可変軽鎖。
配列番号:59:mAb 80D11に対する可変重鎖。
配列番号:60:mAb 80D11に対する可変軽鎖。
配列番号:61:mAb 42F03に対する可変重鎖。
配列番号:62:mAb 42F03に対する可変軽鎖。
配列番号:63:軽鎖定常領域−ラムダ定常遺伝子3(アミノ酸配列)。
配列番号:64:軽鎖定常領域−カッパユニーク定常遺伝子(アミノ酸配列)。
配列番号:65:mAb 12A01に対する可変軽鎖。
配列番号:66:mAb最適化42F03に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:67:mAb最適化42F03に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:68:mAb 80A10に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜75は、リーダー配列をコードする。
配列番号:69:mAb 80A10に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:70:mAb 80A11に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:71:mAb 80A11に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:72:mAb 80B09に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:73:mAb 80B09に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:74:mAb 80D11に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜75は、リーダー配列をコードする。
配列番号:75:mAb 80D11に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:76:mAb 42F03に対する可変軽鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜63は、リーダー配列をコードする。
配列番号:77:mAb 42F03に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:78:mAb 12A01に対する可変重鎖(核酸配列)。この配列のヌクレオチド1〜60は、リーダー配列をコードする。
配列番号:79:mAb 40C01−VH1−IgG1に対する可変重鎖(アミノ酸配列)
配列番号:80:mAb 40C01−VH1−IgG2_DI−NQ−HC2h−サブタイプに対する重鎖(アミノ酸配列)
配列番号:81:mAb 40C01−Vk3−c−カッパに対する軽鎖(アミノ酸配列)
1.1.ヒト及びマカクCXCR5発現安定細胞株の製造
ヒトCXCR5をコードするコドン最適化DNA(NCBI参考文献 NM_001716.3、配列番号:35のアミノ酸配列をコードする)、及び、カニクイザル(Macaca fascicularis)CXCR5(配列番号:36参照)は、C末端タグ有り又は無しで遺伝子合成によって製造された。カニクイザルCXCR5に対する配列は、公的データベースでは入手できなかった。cDNA配列は、それゆえ、ヒトCXCR5及びアカゲザル(Macaca mulatta)(NCBI参照 XM_001100017.2、配列番号:37のアミノ酸配列をコードする)を基にした縮重(degenerate)オリゴヌクレオチドプライマーを用いてRT−PCRにより、カニクイザル脾臓DNA(Biochain社より購入した)からクローン化した。全長DNAは、哺乳類細胞発現ベクターpcDNA4(Invitrogen社)へサブクローニングされた。コドン最適化hCXCR5を過剰発現する安定な細胞株:チャイニーズハムスター卵巣細胞CHO−hCXCR5;イヌ胸腺細胞株Cf2Th−hCXCR5;ハムスター線維芽細胞株R1610−hCXCR5;ヒト胎児腎臓細胞株HEK293−hCXCR5、及び、コドン最適化カニクイザルCXCR5:チャイニーズハムスター卵巣細胞cCXCR5−CHOは、ジーンポーター(Genlantis社)等の市販のトランスフェクション試薬を使用してトランスフェクションすることによって得られた。トランスフェクトされたCXCR5遺伝子が発現する細胞は、ネオマイシン(G418)で選択された。ネオマイシン耐性で、細胞表面上に高レベルのCXCR5を発現する安定なクローンは、市販の抗−CXCR5mAb(mAb 190、R&D systems社)を使用したFACS解析によって同定された。
ヒト又はカニクイザルCXCR5を含む常磁性プロテオリポソーム(Paramagnetic Proteoliposomes、PMPLs)は、Mirzabekovら(2000)に記載された方法に基づいたMSMが所有する技術を使用したMSMタンパク技術によって調整された。簡潔には、CXCR5を過剰発現した細胞を集め、細胞の膜を界面活性剤の独自の混合物中で溶解した。非多孔性の常磁性ビーズの表面に、ストラプトアビジンとCXCR5条のC末端タグを認識知る抗体とを共有結合させた。結合させたビーズは、可溶化した細胞溶解物からC末端にタグ化されたCXCR5を捕捉するために使用された。汚染物質を除去するために、徹底的に洗浄した後、ビーズは、0.1〜1%のビオチン化DOPEを含有する界面活性剤で可溶化した脂質と混合した。ビーズの周りに脂質二重膜が自己集合し、CXCR5が天然の環境へと戻る間に、界面活性剤は透析によって除去される。市販の抗−CXCR5−PE結合抗体(R&D systems社)は、Guava(登録商標)easyCyteフローサイトメトリー(ミリポア社)によって、正しい配置においてCXCR5が含まれたビーズであるか(すなわち、ビーズの表面において露出された細胞外部分)を証明するために使用された。hCXCR5−PMPLを製造するために使用された条件は、カニクイザルCXCR5に対するPMPLsを製造するためにも使用された。
ファージディスプレイ技術は、標的とするCXCR5を生じるPMPLを用いて、DYAX社のヒトFab−ファージ410抗体ライブラリーから、CXCR5に対する中和抗体を同定するために使用された。ヒト及びカニクイザルCXCR5に対する選択の変更するラウンドを採用し、特異的にヒトCXCR5に結合するFab(4〜5ラウンドの選択)若しくはヒト及びカニクイザルCXCR5に結合する交差反応性Fabを選択するために、いくつかの異なる選択目的が採られた。
抗体重鎖及び軽鎖は、別々にpTT5ベクターへとサブクローニングされ、ポリエチレンイミン(PEI)トランスフェクション試薬を使用してトランスフェクションした後、懸濁培養に適したHEK293T細胞中にて一時的に共発現させた。細胞は、5%CO2の加湿したインキュベータにて、37℃で振盪して3日間インキュベートされた。培養上清が回収され、細胞破片(deris)を除去するために遠心分離された。抗体は、通常の方法を使用して、プロテインAアフィニティ−クロマトグラフィーによって細胞上清から精製され、セファデックスG25で脱塩され、TBS中で調整されるFLIPRカルシウムアッセイを除き、全てのアッセイのために、抗体はPBS中で調整された。大量の抗体調整のために(>400mLの培養物)、凝集物を除くために、追加的なサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)工程がSuperdex−200樹脂上で実施された。以下のQC解析は、精製されたタンパク上で実施された:還元、非還元条件下でのSDS−PAGE:純度及び見せかけのMWの決定のためのSEC;濃度決定のためのUV分光。エンドトキシンの混入の測定は、Endosafe PTSアッセイを使用して実施された。1〜5mgの精製された抗体が、一般的には、50mL培養物より得られた。
ヒトCXCR5又は種オーソログを発現する細胞株及び初代細胞への抗−CXCR5抗体の結合は、FACSによって評価された。簡潔には、約1×105CXCR5発現細胞は、0〜100μg/mLの範囲で抗−CXCR5抗体の増加する濃度を含むFACSバッファー(1%FBS及び0.02%アジ化ナトリウム含有PBS)にて懸濁し、4℃で20分インキュベートした。細胞は、洗浄され、その後、PE標識したヤギ抗−ヒトIgG(Jackson labs社)を含むFACSバッファー中にて20分間4℃で再懸濁した。細胞はその後3回洗浄され、100μLのFACSバッファーに再懸濁され、FACScalibur装置(BD Sciences社)にて解析された。抗体濃度に対するMFIがプロットされ、EC50値を算出するためにグラフパッドプリズムソフトウエアが使用された。mAb 80A11、80A10、80B09は、ヒトCXCR5に対して高い特異性があった(データ示さず)。42F03、12A01、40C01及び80DNA11は、ヒト及びカニクイザルCXCR5の両方に結合しした(データ示さず)。実施例1.3にて同定された抗体は、ラット又はマウスCXCR5に交差反応しなかった。
CXCR5発現細胞におけるCXCL13によって誘導される細胞内カルシウムの動員(カルシウム流入)を阻害するための抗−CXCR5の能力は、カルシウム5アッセイキット(Molecular Devices社)を使用したFLIPRアッセイで決定された。R1610−hCXCR5細胞は、96ウェル平底組織培養プレートにCHO−S−SFM II無血清培地(Gibco社)を用いてウェルあたり40,000〜60,000細胞を播種し、加湿された5%CO2インキュベータ中にて細胞がウェルの底へ接着して100%近くのコンフルエントの単層を形成するように37℃で一晩培養した。細胞は、キット製造業者のプロトコールに従って、色素を載せ、その後、濃度増加した抗−CXCR5抗体(1μMまで)と1時間37℃でプレインキュベートし、洗浄し、その後、130nMのCXCL13に暴露した。カルシウムの流入の変化は、Molecular Devices社のFLEXstation III 装置で測定した。実施例1.5で同定された全ての抗体は、CXCL13が誘導する細胞内カルシウム流入を阻害することができた(データ示さず)。
CXCR5を過剰発現するL1.2細胞のCXCL13が誘導する遊走を阻害する抗−CXCR5抗体の能力は、走行性アッセイシステムにて決定した。ヒト又はカニクイザルCXCR5を安定的にトランスフェクトしたマウス プレB細胞株L1.2は、この目的のために作製された。5%の熱失活したFCS、2mMグルタミン、及び50μMメルカプトエタノールを含むRPMI培地中にて維持されたL1.2細胞は、哺乳類細胞発現ベクターpcDNA3.1hygro DEST(Invitrogens社)へクローン化されたヒト又はカニクイザルCXCR5cDNAをエレクトロポレーションによってトランスフェクトされた。CXCR5発現細胞は、600μg/mLハイグロマイシンを含む培地中で選択され、12〜14日後、96ウェル組織培養プレート中で、0.3細胞/ウェルにて細胞を播種することでシングルセルクローニングされた。育ったクローンは、R&D systems社の抗−CXCR5抗体(mAb 190)を用いて、FACSでCXCR5発現をテストした。CXCR5を高レベル発現する一つのクローン(L1.2/CXCR5 clone 19)が、さらなる使用のために増幅された。
2.1.重鎖及び軽鎖変異体
40C01重鎖(配列番号:1;VH)及び軽鎖(配列番号:2;VL)は、重鎖及び軽鎖可変領域のフレームワーク領域及びCDR配列の両方を変えることで、別々に修飾された。これらの配列の変更の目的は、そのポジションで見出される最も相同性のあるヒト生殖系列の残基へとフレームワークアミノ酸残基を変異させるため、関連する細胞性アッセイにおける力価を高めるため、アスパラギン(Asn)の異性化、Asnの脱アミド化及びメチオニン(Met)酸化を防止することにより分子の製造を改善するため、又は、in silicoで同定されたヒトT細胞エピトープの抗体を除き、それによってヒトにおける潜在的な免疫原性を減少若しくは無効化するための、いずれかである。
VH1: D46E−D61A−M89V,
VH2: Y32S−D46E−D61A−M89V−M99K
Vk1:K6Q−A7S−D9S−I31A−M48I−H49Y−A51T−R65S−N76S−A80P(配列番号:5も参照)、
Vk2:R6Q−A7S−D9S−I31A−A43V−M48I−H49Y−A51T−R65S−N76S−A80P(配列番号:6も参照)、
Vk3:R6Q−A7S−D9S−I31A−A43V−M48I−H49Y−A51T−R65S−N76S−A80P−S93A (配列番号:7も参照)
モノクローナル抗体のようなマルチドメインタンパク質の安定性は、示差走査熱量測定(DSC、例を参照)を使用して一般的には調べられる。大きな利点の一つは、タンパク質の個別のドメインの間の相互作用の微調整として使用されることが可能であることである。DSCにより測定されるモノクローナル抗体の熱誘導アンフォールディングは、タンパク質構造を監視するために使用される不可欠なツールとなっている。その結果、観察される遷移の正しい解釈が不可欠である。
実験1.7に開示されたものと同様のプロトコールに従った。
図5は、IgG1、IgG2及びIgG4としての全抗体フォーマットで発現された、抗−CXCR5 40C01−VH1−Vk3及び40C01−VH2−Vk3変異体によって、L1.2−ヒト及びカニクイザルCXCR5のCXCL13が刺激する走行性の阻害を示す。算出されたIC50(半最大阻害濃度)は、表2中で要約される。全てのテストを行ったmAbは、100%の効力で走行性を阻害した。ヒトCXCR5に対する異なるIgGアイソタイプ間で、効力の差異は認められなかった。ヒトCXCR5の場合、40C01−VH2−Vk3変異体は、40C01−VH1−Vk3変異体(一桁のナノモル範囲)よりも、10〜20倍高い効力を有し(ナノモル以下の範囲のIC50)、一方でカニクイザルCXCR5の場合は、該変異体は、等しい効力である(ナノモル以下の範囲)。
ヒトリンパ球は、Ficoll−Paque Plus(GE Healthcare Life Sciences社、カタログ番号17−1440−03)を使用して、バフィーコートから単離された。B細胞は、MagCellect ヒトB細胞単離キット(R&D Systems社、カタログ番号MAGH103)を使用して、ネガティブセレクションによって精製した。精製したB細胞は、3×106細胞/mLにて、B細胞培地(2mM グルタミン、1%非必須アミノ酸、1%ピルビン酸ナトリウム、25mg/ml Pen−Strep、50μMβ−メルカプトエタノール及び10%熱不活性化FCSを含むRPMI1640)に再懸濁され、可能性のあるin vivo脱感作を克服するために4℃にて一晩保存され(Hausdorffら、1990; Tomhave ED 1994)、従って、遊走する細胞の数が増加する。B細胞は、100%の非熱不活性化ヒト血清(PAA Laboratories社、カタログ番号C11−020)中にて、100μg/mLにて開始し、0.38ng/mLまでの一連の4倍希釈の40C01変異体とともに37℃で20分間プレインキュベートした。300nMヒトCXCL13(内製)に対するヒトB細胞の遊走は、5μm孔径の96ウェル走行性プレート(ChemoTx#101−5、Neuro Probe社)を用いたChemoTx(登録商標)システムを使用して評価された。走行性は、加湿されたインキュベータ内で、5%CO2、2時間、37℃で行われて許容された。遊走した細胞は、その後、新しい96ウェルマイクロプレートに移され、数時間−80℃で保存され、解凍され、CyQuant(登録商標)(Life Technologies社、カタログ番号C7026)を用いて染色され、そしてカウントされた。阻害パーセントは、以下の式を使用して算出した:阻害パーセント=100×(1−Ab処理下の平均細胞数/処理なしの平均細胞数)
抗CXCR5 40C01−VH1−Vk3及びVH2−Vk3変異体は、Invitrogen社のモノクローナル抗体標識キット(カタログ番号A20186)を使用して、Alexa Fluor 647色素で標識された。ヒトCXCR5を安定的にトランスフェクトされたHEK−293細胞への標識したmAbの結合は、直接免疫蛍光アッセイによって調べられた。合計1×105のヒトCXCR5を過剰発現する安定HEK−293細胞は、FACSバッファー(1%BSA及び0.1%NaN3を含むPBS)中で、60μg/mLから0.33ng/mLの範囲の3倍希釈系列のAlexa Fluor 647mAbとともに、1時間、氷上でインキュベートされた。細胞はFACSバッファーで2回洗浄され、FACSCalburフローサイトメーター(BD Biosciences社)にて解析された。EC50(半最大細胞結合(%)に達する各Abの濃度及び幾何学的平均蛍光強度(Geo mean))、及びEC80は、抗体濃度の関数として、FL4蛍光(Alexa Fluor 647の発光)をプロットすることで算出された。これらのEC50及びEC80あたりは、ヒトCXCR5陽性細胞に対する各変異体の相対的結合親和性の尺度として使用された。図7で示される結果から、発明者らは、40C01−VH1−Vk3及びVH2−Vk3それぞれに対し、2.26nM及び4.6nMのEC50値を算出した。
40C01−VH1−Vk3 及びVH2−Vk3変異体は、Invitrogen社のモノクローナル抗体標識キット(カタログ番号A20186)を使用して、Alexa Fluor 647色素で標識された。血液は、ナトリウム−ヘパリンチューブ中に採取され、2時間室温に置いた。アジ化ナトリウム(NaN3)をその後、終濃度0.01%になるように全血に添加された。60μg/mLから3ng/mLの範囲の3倍希釈系列のAlexa Fluor 647標識mAbが全血サンプルへ添加され、室温で30分間インキュベートされた。フィコエリトリン(PE)標識抗−CD19(BD Pharmingen社、カタログ番号555413)及び、抗−ヒトCXCR2(R&D Systems社、カタログ番号FAB331P)mAb及びその各アイソタイプコントロールが、B細胞をゲーティングするため、及び、顆粒球上のCXCR2発現をモニタリングするために、それぞれ使用された。標識された赤血球は、その後、R&D Systems社のヒト赤血球溶解キット(カタログ番号WL1000)で溶解され、血液細胞は、FACSバッファー(PBS−1%BSA、0.1%NaN3)中に再懸濁され、FACS Calibur 3(BD Biosciences社)にてフローサイトメトリーによって解析された。EC50及びEC80あたりは、抗体濃度の関数として、FL4蛍光(Alexa Fluor 647色素の発光)をプロットすることによって算出された。図8に示された結果より、発明者らは、40C01−VH1−Vk3及びVH2−Vk3に対してそれぞれ、EC50値が、1.92nM及び7.22nMと算出した。2つの40C01変異体の結合は、CXCR2を発現する顆粒球の集団(好中球)上では検出されなかった。
カニクイザル(Macaca fascicularis)血液は、ナトリウム−ヘパリンチューブ中で採取されて、室温で保存された。アジ化ナトリウム(NaN3)は、最終濃度が0.01%になるまで全血へ加えられた。500μg/mL及び50ng/mLの抗体の希釈5μLが、45μLの血液に対し、二重(duplicate)で添加され、室温で30分間インキュベートされた。赤血球は、その後、R&D Systems社のヒト赤血球溶解キット(カタログ番号WL1000)で溶解された。Fc受容体は、Innovex社のFc受容体ブロッカー(カタログ番号NB309)を使用してブロックされた。フィコエリトリン(PE)結合ヤギ抗−ヒトFcフラグメント(Jackson Immuno Research社、カタログ番号109−116−098)及びアロフィコシアニン(APC)結合マウスIgG2b抗−ヒトCD20(BD Biosciences社、カタログ番号559776)及びその各アイソタイプコントロールは、抗−CXCR5 40C01−VH1−Vk3及びVH2−Vk3変異体mAbの結合を検出するため、B細胞をゲーティングするためにそれぞれ使用された。氷上での30分間のインキュベート後、血液細胞は洗浄され、FACSバッファー(PBS−1%BSA、0.1%NaN3)中に再懸濁され、FACS Calibur 3(BD Biosciences社)にてフローサイトメトリーによって解析された。図9に示された結果は、50μg/mLにおいて、40C01変異体の両方は、B細胞上に発現したカニクイザルCXCR5に対して強力かつ特異的な結合を示すことを表す。
ケモカインレセプターCXCR5に対するCXCL13の結合は、様々な細胞内シグナル伝達イベント、特に、p44/42マイトジェン活性化タンパク質(MAP)キナーゼ(細胞外シグナル調節キナーゼ; ERK1/2)の一時的なリン酸化(活性化)の引き金となる。このアッセイは、フローサイトメトリーを使用して、抗−CXCR5 40C01変異体による全血中のB細胞中のCXCL13刺激によるERKリン酸化の阻害を測定する。
速度論除外アッセイ(Kinetic Exclusion Assay (KinExA))は、完全ヒトIgG(サブタイプHC2h、WO2009010290に記載)抗−CXCR5 40C01抗体変異体と安定的にトランスフェクトされたHEK−293細胞上に発現したヒトCXCR5の間に平衡が確立された後に、溶液中に残存する遊離抗体の濃度を決定するために使用され、そこから、平衡解離定数(Kd)が決定された。この方法は、GPCRのような、完全な膜タンパク質に対する抗体の親和性/結合性(アビディティ)の真の測定を提供する。
クロム51標識細胞に対する抗体依存性細胞媒介細胞傷害(ADCC)アッセイは、標的としてヒトB細胞及びエフェクター細胞としてヒトNK細胞を使用して実施された。B細胞とNK細胞は、Miltenyi Biotec社からの各々のMACS細胞単離キットを使用して、ヒトPBMCから精製された。単離したB細胞は、その後、51Crで標識された。細胞傷害性を測定するために、エフェクター(E)及び標的(T)細胞を10/1 E/T比率で、抗−CXCR5−40C01−VH1−Vk2 mAb、リツキシマブ(ポジティブコントロールIgGmAb)、抗−ニワトリ−卵−リソザイムmAb(ネガティブコントロールIgGmAb)又は培地のみを用いて、37℃4時間共培養した。細胞溶解のパーセンテージは、公式を使用して算出した:特異的溶解のパーセンテージ= ((毎分の実験カウント(c.p.m.)−自発性c.p.m.)/(最大c.p.m.−自発性c.p.m.))×100。図14にて示された結果は、抗−CXCR5 40C01−VH1−Vk2 mAbが、初代ヒトB細胞に対するADCCを仲介する能力を有し、その効果は、よく記述されているFDAで承認された抗−CD20抗体、リツキシマブの効果と、勝るとはいわないまでも、同等であることを示す。
クロム51標識標的細胞に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)アッセイは、標的細胞としてヒト又はカニクイザル(Macaca fascicularis)いずれかのCXCR5を安定的に発現するL1.2細胞(上記例1.7を参照)と、エフェクター細胞としてのヒトPBMCを使用して、実施された。細胞傷害性を測定するために、エフェクター(E)と標的(T)細胞を100/1 E/T割合にて、抗−CXCR5−40C01−VH1−Vk3−IgG1 mAb、抗−CXCR5−40C01−VH1−Vk3−IgG1低フコースmAb若しくは培地のみとともに4時間37℃で共培養した。細胞溶解のパーセンテージは、式を使用して算出した:特異的な溶解のパーセンテージ= ((毎分の実験的カウント(c.p.m.)−自発性c.p.m.)/(最大c.p.m.−自発性c.p.m.))×100。図15に表された結果は、抗−CXCR5−40C01−VH1−Vk3−IgG mAbが、ヒト又はカニクイザルいずれかのCXCR5を発現するL1.2標的細胞に対してADCCを仲介するための能力を有していることを示す。さらに、同様のアッセイ条件下において、アフコシル化バージョンのこの抗体(抗−CXCR5−40C01−VH1−Vk3−IgG1_低フコース)は、ヒト若しくはカニクイザルCXCR5のいずれかを発現する標的細胞に対して増強されたADCC活性を示す。
5名のドナー由来のヒトPBMCは、濃度範囲にわたって抗−CXCR5抗体又はIgG1アイソタイプコントロール抗体の存在下で培養された。一晩のインキュベーション後、リンパ球集団内のCD19+B細胞のパーセンテージがフローサイトメーターで評価された。データは、アイソタイプコントロールに対して正規化され、各ドナーから統合された。図16中に示されるように、発明者らは、40C01−VH1−Vk3−IgG2_DI−NQ−HC2hは、B細胞の除去の原因ではないことを観察した。しかしながら、40C01−VH1−Vk3−IgG1及び40C01−VH1−Vk3−IgG1低フコースバージョンの両者とも、B細胞の除去を引き起こした。発明者らは、40C01−VH1−Vk3−IgG1低フコースバージョンは、低濃度の該抗体がB細胞除去を誘導することに必要であり、より強力であることを見出した。このデータは、40C01−VH1−Vk3−IgG1及び40C01−VH1−Vk3−IgG1低フコースは、B細胞の除去を誘導することができ、40C01−VH1−Vk3−IgG1低フコースは増強された効力を有することを証明した。
1) Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.
2) Chothia and Lesk, (1987) J. Mol. Bioi., 196: 901-917.
3) Chirgwin JM et al. (1979) Biochemistry, 18(24): 5294-9.
4) Aviv H et al. (1972) Proc Natl Acad Sci USA, 69(6):1408-12.
5) Harris JM et al. (2003) Nat Rev Drug Discov., 2(3): 214-221
6) Francis GE et al. (1998) lnt. J Hematol., 68(1): 1-18.
7) Mirzabekov et al., (2000) Please add the info of publication
8) Hoet et al., (2005) Please add the info of publication
9) Angal et al. (1993) Mol. Immunol. 30:105-108
10) Ionescu et al. (2008) J Pharm Sci, 97:1414-1426, 2008
11) Hausdorff et al. (1990) FASEB J. 4:2881-2889.
12) Tomhave et al. (1994) J Immunol. 153:3267-3275
13) Press and Hogg (1970) Biochem J. 117: 641-660
14) Burkle et al. (2007) Blood. 110:3316-33251
15) WO2009032661
16) WO2009010290
17) F. Nimmerjahn, et al (2011) Curr. Top. Microbiol. Immunol., 350:105-125
Claims (14)
- a.配列番号:3を含む、又はからなる重鎖可変ドメイン及び配列番号:5を含む、又はからなる軽鎖可変ドメイン、
b.配列番号:3を含む、又はからなる重鎖可変ドメイン及び配列番号:6を含む、又はからなる軽鎖可変ドメイン、
c.配列番号:3を含む、又はからなる重鎖可変ドメイン及び配列番号:7を含む、又はからなる軽鎖可変ドメイン、又は
d.配列番号:4を含む、又はからなる重鎖可変ドメイン及び配列番号:7を含む、又はからなる軽鎖可変ドメイン、又は
を含む、CXCR5に結合するモノクローナル抗体又はそのCXCR5結合フラグメント。 - 前記モノクローナル抗体が重鎖定常領域を含み、前記定常領域が、タイプIgG1、IgG2、IgG3又はIgG4から選択される、請求項1に記載のモノクローナル抗体。
- 請求項1又は2に記載のモノクローナル抗体又はそのCXCR5結合フラグメント、の重鎖をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項1に記載のモノクローナル抗体又はそのCXCR5結合フラグメント、の軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項1又は2に記載のモノクローナル抗体又はそのCXCR5結合フラグメント、の重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項3に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
- 請求項4に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
- a. 請求項3のポリヌクレオチド及び請求項4のポリヌクレオチド;又は
b. 請求項5のポリヌクレオチド、
を含む発現ベクター。 - a. 請求項6の発現ベクター及び請求項7の発現ベクター、又は、
b. 請求項8の発現ベクター、
を用いて形質転換された宿主細胞。 - 前記細胞が、哺乳類細胞である、請求項9の宿主細胞。
- a. 請求項9又は請求項10の宿主細胞を培養する工程、及び
b. 該宿主細胞によって製造される前記抗体を単離する工程、
を含む、請求項1又は2に記載のモノクローナル抗体を製造する方法。 - 請求項1又は2に記載のモノクローナル抗体、又は、請求項11に記載の方法によって製造されるモノクローナル抗体を含む医薬組成物。
- 薬剤として使用するための、請求項1又は2に記載のモノクローナル抗体、又は、請求項11に記載の方法によって製造されるモノクローナル抗体。
- 自己免疫若しくは炎症性疾患及びがんの治療に使用するための、請求項1又は2に記載のモノクローナル抗体、又は、請求項11に記載の方法によって製造されるモノクローナル抗体。
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