TW200936052A - Composition for protection of plant disease, new mycovirus and use thereof - Google Patents

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200936052 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明是關於抑制植物病害真菌之新穎真菌病毒 (my co virus)、與此等有關之基因•核酸•蛋白質、存在於該 真菌病毒（my co virus)內之植物病害真菌弱毒菌株、含有此等 之植物病害防除劑、真菌病毒（mycovirus)生產方法、植物病 害真菌弱毒化方法、植物病害防除方法等等。 【先前技術】 〇 植物病害有因氣象·土壤等環境的因子而發生者、因病 毒•細菌•真菌（絲狀菌）等感染性因子而發生者、經由生理 的障害而發生者、因這些複合的因子而發生者。目前在植物 病害之中，大多包括構成糧食、花、花木、樹木等生產的抑 制因子者，故對經濟的影響很大。 植物病害中，真菌是最重要的病害因子之一。約80% 的植物病害被認爲是由真菌引起。 舉例而言，稻熱病（稻瘟病）是發生在世界各地最重要的 © 植物病害之一》病原菌是黴菌（絲狀菌）的一種：稻熱病病菌 (學名「Magwapori/ie orjyzae」）。稻熱病病菌在25°C左右是 發育•孢子形成•感染的適溫，也喜歡濕潤的環境。因此， 經由夏季的低溫、多雨、日照不足等氣象因子多次發生，造 成米的欠收、品質低下，給與經濟大大的打撃。 其他紋枯病、銹病、白粉病（powdery mildew)、碳疸 病、菌核病、露菌病（downy mildew)、灰黴病（botrytis cinerea) 等，也以真菌爲原因之經濟影響大的植物病害多所存在。因 此，目前正嘗試新農藥的開發、品種改良等等（關於稻熱病 -4- 200936052 的防除，例如參照專利文獻1、2)。 在此，以下説明有關本發明事項之真菌病毒 (mycovirus)。 感染真菌類（Fungi，以下同）的病毒稱爲真菌病毒 (mycovirus)。其中，基因體爲雙股 RNA之真菌病毒 (mycovirus)已有報告》此等真菌病毒（mycovirus)潛在地感染 宿主菌，大多對宿主的外形幾乎沒有影響。 基因體爲雙股RNA之真菌病毒（mycovirus)，目前被分 ❹ 類爲分體病毒科（學名「Partitiviridae」，以下同）、整體病毒 科（學名「Totiviridae」，以下同）、金色病毒科（學名 「Chrysoviridae」，以下同）等5科。分體病毒科病毒在病毒 粒子中具有兩個大約相同大小的直鏈狀雙股RN A，全基因量 爲4至6kbp。整體病毒科病毒於病毒粒子中具有1條4至 7kbp之直鏈狀雙股RNA。其他在栗樹枝枯病（chestnut blight) 菌（學名），已發現菌內在性存 在，具有 9至 13kbp雙股 RNA之病毒（低毒性病毒 ❹ （Hypoviridae)等）。 金色病毒科病毒具有球形的病毒樣粒子，具有四成分的 雙股RNA。此外，已知分體病毒科以及整體病毒科之病毒同 樣具有編碼RdRP(RNA-指導之RNA聚合酶（RNA-directed RNA polymerase) ; RNA依賴性RNA聚合酶，以下同）之區 域。屬於金色病毒科之病毒，例如 Hv 1 45 S V(「Helminthosprium victoriae 1 4 5 S virus」，以下 同）、PcV(「Pencillium chrysogenum virus」，以下同）、 AbV 1 (「Agaricus bisporus virus 1」，以下同）等（參照非專利 200936052 文獻1等）。 近年，對於特定的植物病害，以真菌病毒（mycovirus) 等弱毒化其病原菌，使用其弱毒菌來防除病害之方法經檢 討，已有一部分實用化。舉例而言，已發現使用抑制栗樹枝 枯病菌毒性之病毒性雙股RNA的全長cDNA弱毒化其菌， 應用於栗樹枝枯病防除之方法（參照非專利文獻2等）；抑制 紫紋羽病菌（學名「Helicobasidiummompa」）之雙股RNA病 毒，使用其內在雙股RNA之紫紋羽病菌弱毒菌株防除紫紋 〇 羽病之方法（參照非專利文獻3、專利文獻3等）等已揭示。 【專利文獻1】特開2004- 1 43045號公報 【專利文獻2】特開2003-250370號公報 【專利文獻3】特開200 1 -78752號公報 【非專利文獻 1 】C. M. Fauquet，Mary Ann Mayo, J. Maniloff，U. Desselberger，L. A. Ball, 4tVirus Taxonomy: Classification and Nomenclature of Viruses; Eighth Report Of The International Committee On Taxonomy Of Viruses' Elsevier Academic Press: p591-595 【非專利文獻 2 】Gil H.Choi and Donald L.Nuss，“Hypovirulence of chestnut blight fungus conferred by an infectious viral cDNA." Science. 1992 Aug 7;257(5071):800-3 【非專利文獻 3 】H.Osaki et al，“Detection of Double-Stranded RNA Vims from a Strain of the Violet Root Rot Fungus Helicobasidium mompa Tanaka,5 Virus Genes 25:2,139-145,2002 【發明内容】 [發明之揭示] [發明欲解決之課題] 按照上述，植物病害真菌對植物、作物的品質及收穫量 等帶來重大影響。另一方面，抑制植物病原真菌之真菌病毒 200936052 (mycovirus)的發現少，使用如此真菌病毒（mycovirus)之植物 病害防除的試驗也幾乎沒有被進行。因此，本發明以提供抑 制植物病害真菌之新穎真菌病毒（mycovirus)以及植物病害 的新穎防除手段等爲主要目的。 [解決課題之手段] 本發明者們獨特地採集天然存在之植物病害真菌，進行 對此等真菌抑制性作用之真菌病毒（mycovirus)的探索。其結 果單離、鑑定具有植物病害真菌抑制作用之具有2.8至3.6 kb 〇 之四種類雙股RNA之新穎真菌病毒（mycovirus)，並得到其 全長序列。 因此，本發明提供具有植物病害真菌抑制作用、具有 2.8至3.6kb之四種類雙股RN A之天然存在、並經發明者們 單離之新穎真菌病毒（mycovirus)，其基因、其鹼基序列、其 序列中至少含有具規定機能之特定部分序列之核酸、該序列 所編碼之一或複數種蛋白質等。 該真菌病毒（mycovirus)在雙股 RNA序列中含有 〇 RdRp(RNA依賴性RNA合成酵素）的保留結構單位（motif)， 且編碼此區域之RNA的鹼基序列與已知的金色病毒科病毒 具有相同性。因此，推測將該真菌病毒（mycovirus)分類爲金 色病毒科的新種病毒。 按照上述，該真菌病毒（mycovirus)具有抑制植物病害真 菌生長等之作用。因此，舉例而言，使該真菌病毒（mycovirus) 感染宿主菌等使內在於宿主菌，可製作植物病害真菌的弱毒 菌株》 此外，舉例而言，經由附加（散布、塗布等）本發明有關 200936052 之真菌病毒（mycovirus)及/或至少含有所製作植物病害真菌 的弱毒菌株之植物病害防除劑於植物（稻等），可防除其植物 病害是有可能的。 其他，本發明有關之真菌病毒（mycovirus)有如下特徴。 向來真菌病毒（mycovirus)是經由菌絲融合從宿主菌的 細胞垂直傳播到細胞，因此被認爲在真菌病毒（mycovirus) 的生活環中，不存在宿主菌的細胞外存在階段。對此，經由 本發明者們的硏究，瞭解本發明有關之真菌病毒（mycovirus) 〇 也可存在於細胞外。 由於可不依賴菌絲融合從細胞外感染宿主菌，因此可在 接合型的不同菌主·菌株間廣泛地感染本發明有關之真菌病 毒（mycovirus)，且可對宿主菌高效率感染。亦即經由此可簡 易且高效率進行植物病害真菌之弱毒化及植物病害防除的 可能性高。 此外，由於本發明有關之真菌病毒（mycovirus)也存在於 細胞外，例如以液體培養基培養宿主菌，從其培養上清液回 Ο 收真菌病毒（mycovirus)，可簡易且比較大量地生產真菌病毒 (mycovirus) 〇 [發明的效果] 經由本發明可簡易且高效率的防除植物病害是有可能 的。 【實施方式】 [實施發明之最佳態樣] <有關本發明之病毒> 本發明包含全部具有植物病害真菌抑制作用、具有2.8 200936052 至3.6kb之四種類雙股RNA之真菌病毒（mycovirus)。 該真菌病毒（mycovirus)各病毒粒子具有2.8至3.6kb的 四種類雙股RNA的任一，且其四種類病毒粒子以同時存在 之狀態生存、繼代。又上述栗樹枝枯病菌真菌病毒（mycovirus) 以及紫紋羽病菌真菌病毒（mycovirus)皆由12kb以上的單一 成分雙股RN A所構成，與本發明有關之真菌病毒（myc0Virus) 的構造大大的不同。因此，全然不同的病毒種之可能性高， 此外對宿主菌之弱毒化作用的機制也大大不同的可能性高。 φ 按照上述，該真菌病毒（mycovirus)在雙股RNA序列中 含有RdRp(RNA依賴性RNA合成酵素）的保留結構單位，且 編碼此區域之RNA的鹼基序列與金色病毒科病毒具有相同 性。因此，推測將該真菌病毒（mycovirus)分類爲金色病毒科 的新種病毒。 該真菌病毒（mycovirus)的四種類雙股RNA的鹼基序列 分別示於序列號碼1至4,該鹼基序列所編碼之蛋白質的胺 基酸序列分別示於序列號碼5至8。 〇 又序列表記載之鹼基序列以全部DNA序列記載，但本 發明有關的序列包括此等之序列，也包含全部RNA時之序 列（胸腺嘧啶置換爲尿嘧啶者）（以下同）。 序列解析之結果，關於編碼RdRp(RNA依賴性RNA合 成酵素）之區域的鹼基序列，該真菌病毒（mycovirus)與 Hvl45SV的相同性爲22%、類似性爲39%，該真菌病毒 (mycovirus)與PcV的相同性爲23%、類似性爲38%，該真菌 病毒（mycovirus)與AbVl的相同性爲28%、類似性爲45%。 因此，本發明有關之真菌病毒（mycovirus)包含全部之與 200936052 金色病毒科病毒（例如Hvl45SV、PcV、AbVl之任一）基因體 中編碼RdRp(RNA依賴性RNA合成酵素）之區域的相同性爲 20至100%者或類似性爲40至100%者。此處，所謂「相同 性」是指鹼基序列完全一致，所謂「類似性」是指經由置換 腺嘌呤與鳥嘌呤、或置換胸腺嘧啶（尿嘧啶）與胞嘧啶之鹼基 序列是完全一致。 本發明有關之真菌病毒（mycovirus)是內在性存在於規 定的稻熱病病菌內。因此，舉例而言，經由從潛在感染該真 f| 菌病毒（mycovirus)之稻熱病病菌株分離、回收病毒等，可取 得該真菌病毒（mycovirus)。又，關於內在有本發明有關之真 菌病毒（mycovirus)之稻熱病病菌，可以和一般的稻熱病病菌 同樣的培養基、培養條件培養。 作爲本發明有關之真菌病毒（mycovirus)，可舉出例如本 發明者們鑑定、命名之M〇CVl(稻熱病病菌金色病毒 l(Magnaporthe.oryzae chrysovirus 1))° 該病毒至少內在於稻 熱病病菌（學名「Magnaporthe oryzae」）的「S-0412-II la」 〇 株內。該稻熱病病菌的菌株雖向獨立行政法人産業技術總合 硏究所特許生物寄存中心以及獨立行政法人製品評價技術 基礎機構特許生物寄存中心申請寄存，但因內在病毒的理由 而申請被拒絕。本菌株被保存在國立大學法人東京農工大學 農學部植物病理學硏究室，於遵守各法令之條件下可分讓給 第三者。 此外，稻熱病病菌（學名「Magnaporthe oryzae」）的 「S-0412-II la」株已於美國的國際寄存機構ATCC(American Type Culture Collection ’ 地址：1 0801 University Boulevard -10- 200936052

Manassas，VA 20 1 1 0-2209 USA)辦理國際寄存（寄存日：2008 年5月15日’寄存號碼：PTA-9137)。又，本菌株的原産地 是越南。 病毒的分離、回收方法可採用公知的方法。例如以液態 氮等冷凍、破碎菌體，以規定的緩衝液懸浮後，經由離心分 離等分離病毒，可回收病毒。 此外，按照上述，該病毒亦可存在於細胞外。因此，舉 例而言，以液體培養基培養含有真菌病毒（mycovirus)的植物 〇 病害真菌（規定的稻熱病病菌等），亦可從其培養上清液分 離、回收病毒。該病毒本身可時常在國立大學法人東京農工 大學農學部植物病理學硏究室調製，可時常分讓給第三者。 <本發明有關之基因、核酸、蛋白質等> 本發明者們對本發明有關之真菌病毒（mycovirus)之一 進行序列解析，得到全長的鹸基序列（序列號碼1至4)。因 此，本發明包含全部該真菌病毒（mycovirus)基因、該驗基序 列或具有其一部分之核酸、此等鹼基序列所編碼之蛋白質 〇 等。 本發明包含具有序列號碼1至4的四種類序列之真菌病 毒（mycovirus)基因。 又本發明也包含全部具有此等鹼基序列的全部或一部 分之核酸。核酸可包含全部的雙股、單股之任一，又DNA、 cDNA、RNA 等。 舉例而言，序列號碼1至4的全部或任一之序列、該序 列中具有規定機能之特定部分的序列、具有與此等同等鹼基 序列之cDNA、倂入與此等同等之鹼基序列的重組載體（質 -11- 200936052 體、病毒等）等也包含於本發明。 序列解析的結果得知在序列號碼1的序列部分存在 RdRp(RNA依賴性RNA合成酵素）的保留結構單位，以及在 序列號碼3的序列部分與La France病病毒的雙股RNA片段 具有相同性。因此，依據目的、用途，例如亦可製作、使用 至少具有作爲有規定機能之特定部分的此等序列部分之核 酸、重組載體等。 又，對於本發明有關之核酸（或基因）也廣泛包含與上述 〇 鹼基序列具有相同性之核酸，例如在嚴格條件下與其鹼基序 列互補的鹼基序列所組成之核酸雜交、且具有稻熱病病菌抑 制作用者。此處之嚴格條件，雙股核酸的Tm値等可經由公 知技術獲得。 又本發明也包含上述之真菌病毒（mycovirus)基因及核 酸所編碼的全部蛋白質。本發明有關的蛋白質之胺基酸序列 示於序列號碼5至8。 序列號碼5是序列號碼1記載之鹼基序列中開放譯讀架 〇 (open reading frame)的胺基酸序列，序列號碼6是序列號碼 2記載之鹸基序列中開放譯讀架的胺基酸序列，序列號碼7 是序列號碼3記載之鹼基序列中開放譯讀架的胺基酸序列、 序列號碼8是序列號碼4記載之鹼基序列中開放譯讀架的胺 基酸序列。 又本發明有關之蛋白質，不僅具有序列號碼5至8之任 一之胺基酸序列者，也包含全部與彼等具有相同性且保持其 機能者。 舉例而言，將上述核酸倂入重組載體’使於其宿主強制 12- 200936052 表現，則有可能性可大量調製此等蛋白質。至於宿主可考慮 利用大腸菌類、酵母類、培養細胞等公知者。真菌病毒 (my C0 Virus)對真菌之感染，考慮具有高增殖性且利用也比較 簡便之酵母類，作爲宿主可能以酵母類爲最適合。重組載體 可考慮利用公知者。 又舉例而言，使用倂入序列號碼1至4之任一之複數載 體’經由共表現其複數四種類之基因，有可能再構成真菌病 毒（mycovirus)。此情形可考慮利用公知的宿主及公知的重組 〇 載體，但以同時導入複數載體之點而言，可能以酵母類爲最 適合。 <關於植物病害真菌弱毒菌株> 本發明有關之植物病害真菌弱毒菌株，包含全部內在本 發明有關之真菌病毒（mycovirus)者。亦即，例如包含已內在 該真菌病毒（my co virus)之稻熱病病菌等之菌株以及使感染 該真菌病毒（mycovirus)之植物病害真菌之菌株兩種。 作爲使真菌病毒（mycovirus)感染至植物病害真菌等之 〇 手段，例如有按照向來於菌絲融合時使宿主菌感染之方法。 又按照上述，由於本發明有關之真菌病毒（my co virus)亦可存 在於細胞外，例如可從細胞外直接地感染宿主菌。 作爲該植物病害真菌弱毒菌株之例，可舉出上述之 S-0412-II la株。該菌株是經本發明有關之真菌病毒 (myco virus)感染之稻熱病病菌的菌株。因此，形態的性質、 培養的性質、孢子形成、生理學的、化學分類學的性質與基 本公知的稻熱病病菌相同。但比一般的稻熱病病菌成長慢， 菌絲爲非同心圓狀地成長，色素沉著也不均。此外’可見到 -13- 200936052 氣中菌絲異常的發達，觀察到扇形形成及溶菌。 <關於植物病害防除劑> 本發明有關之植物病害防除劑包含全部至少含有本發 明有關之真菌病毒（mycovirus)或本發明有關之植物病害真 菌弱毒菌株之任一方者。此外，亦可含有該真菌病毒 (mycovirus)與該植物病害真菌弱毒菌株的兩方，亦可含有其 他的成分。 作爲其他的成分，例如亦可含有規定的載劑、黏結劑、 〇 增黏劑、固著劑、防腐防黴劑、溶劑、安定化劑、抗氧化劑、 抗紫外線劑、結晶析出防止劑、消泡劑、物性向上劑、著色 劑等。此外，其他的農藥成分，例如亦可含有殺蟎劑、殺線 蟲劑、殺菌劑、抗病毒劑、誘引劑、除草劑、植物生長調整 劑、協同劑。 作爲載劑例如可使用固體載劑、液體載劑之任一或兩 方。作爲固體載劑，例如可舉出澱粉、活性碳、大豆粉、小 麥粉、木粉、魚粉、粉乳等之動植物性粉末、滑石、高嶺土、 〇 膨潤土、沸石、矽藻土、白碳、黏土、礬土、碳酸鈣、氯化 鉀、硫酸銨等礦物性粉末。作爲液體載劑，例如可舉出水、 異丙醇、乙二醇等醇類，環己酮、甲基乙基酮等酮類，丙二 醇單甲基醚、二乙二醇單正丁基醚等醚類，煤油、輕油等脂 肪族烴類，二甲苯、三甲基苯、四甲基苯、甲基萘、溶劑油 (solvent naphtha)等芳香族烴類，N-甲基-2-吡咯酮等醯胺 類，脂肪酸之甘油酯等酯類，大豆油、油菜籽油等植物油。 作爲黏結劑、增黏劑、固著劑，例如可舉出澱粉、糊精、 纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基 -14- 200936052 纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥甲基澱粉、 普路蘭（pullul an)、海藻酸鈉、海藻酸銨、海藻酸丙二醇酯、 關華豆膠（guar gum)、刺槐豆膠（locust bean gum)、阿拉伯 膠、三仙膠（xanthan gum)、動物膠、酪蛋白、聚乙烯醇、聚 乙烯氧化物、聚乙二醇、乙烯-丙烯嵌段聚合物、聚丙烯酸 鈉、聚乙烯吡咯烷酮等。 本防除劑之劑型無特別限定。例如可適用乳劑、懸浮 劑、粉劑、粒劑、錠劑、水合劑、水溶劑、液劑、水懸劑、 © 顆粒水合劑、氣溶膠劑、膏劑、油劑、乳狀劑等之形態。 <關於植物病害真菌抑制性真菌病毒（my co virus)生產方法> 本發明有關之植物病害真菌抑制性真菌病毒 (myco virus)生產方法包含全部之至少含有以液體培養基等 培養含有真菌病毒（my co virus)之植物病害真菌，從該培養上 清液回收真菌病毒（mycovirus)之步驟者》 按照上述，本發明有關之真菌病毒（mycovirus)亦可存在 於宿主菌之細胞外。因此，例如以液體培養基等培養經真菌 〇 病毒（mycovirus)感染之植物病害真菌，經由離心分離將菌體 分離後，從其培養上清液分離、回收病毒，可簡易且比較的 大量地回收病毒。 但本發明有關之真菌病毒（mycovirus)並不狹義限定於 經由該生產方法所得到者。亦即，例如從內在真菌病毒 (mycovirus)之稻熱病病菌分離、回收所取得者也廣義地包含 於本發明。 <關於植物病害真菌弱毒化方法> 按照上述，例如經由使本發明有關之真菌病毒 -15- 200936052 (myco virus)感染至特定的植物病害真菌，抑制該宿主菌的生 長等而可弱毒化該菌。關於真菌病毒（mycovirus)的感染手 段，可採用和上述同樣的方法。 <關於植物病害防除方法> 本發明有關之植物病害防除方法包含全部之至少含有 將上述之稻熱病防除劑付加於特定植物（稻等）之步驟。 作爲使防除劑付加於植物之手段，例如可舉出將防除劑 塗布於葉的表面或裏面之方法、使用規定之載劑等使防除劑 〇 付著於葉的表面或裏面之方法、將防除劑散布或供給於葉之 方法等。 防除劑之塗布量或散布量隨有效成分的濃度、製劑的形 態、對象病害及作物的種類、病害的被害程度、施用場所、 施用方法、施用時期、混用、倂用藥劑及肥料等之使用量、 種類等各種條件可適宜地選擇。 舉例而言，以調整爲lxio3至lxl01G個/mL稻熱病病菌 弱毒菌株的分生子含有液，噴霧或供給每一葉1至 〇 l，〇〇〇mL，又使葉每1mm2塗布或附著lxio3至lxl01Q個稻 熱病病菌弱毒菌株的分生子於葉表面或裏面，有可抑制植物 病害之可能性。 本發明可適用於真菌爲主要病因之全部植物病害是有 可能的。作爲適用可能性之某一植物病害，例如可舉出以下 者（不限定於這些）。 作爲稻科植物之植物病害，例如稻熱病（原因菌 「oryzae」）、稻胡麻葉枯病（原因菌「CocW/o6o/wj ）、紋枯病（原因菌「cwcwweWjj )、馬 -16 - 200936052 鹿苗病（水稻徒長病）（原因菌「Gi66ere//a/j</iA:wroi」）、苗萎调病 (原因菌「F u s a r i u m 菌」、「R h i ζ 〇 p u s 菌」、「P y t h i u m 菌」、 「7WcAi)i/er/naWn_i/e」）、稻曲病（原因菌「C/flWcepiWren·?」）、小 麥類之赤黴病（原因菌「GfZ>6ere//azeae」、「Fwsflriww civewaceww」、 「Fwsflri’ww cw/zworw/w」、「Mo”ograp/ze//fl m_va/e」）、雪腐病（原因菌 「Pythium 菌」、「Typhula 菌」、「Mo«ogra/>/je//a «z_vat"s j、

「Myrz’oic/eroWm’a 6orea/z··?」）、裸黑穩病（原因菌「tAsii/ago WMi/α」）、 腥黑稳病（原因菌「乃‘心如«⑽verja」）、眼紋病（原因菌 「·Ρ·?βΜ£/〇£；βΓ£：〇5ρ〇Α·β//α /zerpoiric/iozWes」）、葉枯病（原因菌 r Septoria tritici」)、葉枯病（原因菌「Phaeosphaeria nodorum j )、白粉病 (powdery mildew)(原因菌 r Blumeria graminis」)。 作爲其他的植物病害，例如柑橘類的黑點病（原因菌 「DiaporiAe c/in·」）、小黑點病（原因菌「Diapori/ie medwia、y4/ier”crn'a ciiW」）、瘡痂病（原因菌「£Asz>ioe ）、褐色腐敗病（原 因菌「P/zyiop/ii/iora 」）、綠黴病（原因菌 r Penicillium j )、青黴病（原因菌「尸e«/c!7/z’Mm "α/z’CMW」）、蘋果的褐 腐病（原因菌「Μοηζ7ζ·«ι·ύΐ ;ηα//」）、黑星病（原因菌「Fe«iMria ）、斑點落葉病（原因菌「J/iermrWa rna/i」）、黑點病（原 因菌「M_yc〇577/iflere//fl pom/」）、垢斑病（原因菌「G/oeode·? powz’gewa」）、垢點病（原因菌「々gop/iidayfl/waice/wh」）、輪紋病 (原因菌 r Botryoaphaeria berengeriana j )、褐斑病（原因菌 r Diplocarpon mali」)、赤星病（原因菌「（?少 mwojporawgiM/w ）、腐爛病（原因菌「FflAsii ceraia^ermfl」）、梨子的黑 星病（原因菌 「Fewiwn'fl 」）、赤星病（原因菌 「Gymnosporartgium asiaticum j )、輪紋病（原因菌 r Botryosphaeria -17- 200936052 ）、胴枯病（原因菌「）、桃子的 縮葉病（原因菌「ί/e/or/wan5」）、灰星病（原因菌「Mom7im’a /rwe"co/fl、Mom7i’m_a /rwci/ge«fl」）、黑星病（原因菌「C/ai/oi^oriw/n cflr/?o/)/zz7wm」）、褐色腐敗病（原因菌「·Ρλο/ηο/?Λ·ζ·ί sp·」）、櫻桃的 灰星病（原因菌「从〇« 沿 ηία/rwcifco/a」、「）、幼 果菌核病（原因菌「Λ/〇«ζ7/ηζ_β ）、梅樹的黑星病（原因菌 「C7a<i〇577〇rZw7w car/>o/?/n7w/M」）、葡萄的黑痘病菌（原因菌「·Ε/·π·«〇0 a/w/?e"na」）、晚腐病（原因菌「Co"eioiri_c/iM/w acwiaiwm」、「G7omere"a ❹ cz'wgw/αία」）、褐斑病（原因菌「_PiSewi/ocerc〇5/7〇ra vz7h」）、蔓割病 (原因菌「vzYico/fl」）、柿之角斑落葉病（原因菌 r Cercospora kaki」)、圓星落葉病（原因菌「iKycov/iaere/Za «awae」）、茶的輪斑病（原因菌「/ongz_ieM」、 「ί/ieae」）、褐色圓星病（原因菌「i^eMi/ocercoeorflf oce"a，a」、「Cercospora c/iaae」）、茶餅病（原因菌「·Εχο6α·ϊίΆ·Μ/η vexawi」）、網餅病（原因菌「·Εχσ6α57·ί/ζ·Μ»ι /·β"·£；Μ/αίΜ/«」）、瓜類的 蔓枯病（原因菌「Mycosj^aereZ/ii me/om)」）、蔓割病（原因菌 © Fusai-ium 」）、黑星病（原因菌「Cladosporium cwcM/werim/m」）、褐斑病（原因菌「caMHcoZa」）、蕃前 的葉黴病（原因菌「化/vk /w/va」）、輪紋病（原因菌「//如似… j〇/a«i」）、節子的褐紋病（原因菌「jP/jowo/^z··? vexan·?」）、煤斑黴 病（原因菌「Λ〇^ονβ//〇·ϊίβ//α «⑽ra55z·/」）、油菜科野菜的白銹病（原 因菌「macroj/jora」）、白斑病（原因菌「Cercospore/Za δ^*α5>57·£：αβ」、「PieMc/ocerc〇5pore//fl ca/»ie//ae」）、洋菌的灰色腐敗病（原 因菌「·0οίΓ>^·5 ίζ/出」）、草莓的蛇眼病（原因菌「M_yc〇5p//iiere//a /rflgariae」）、馬鈴薯的早疫病（原因菌「5〇/iim·」）、大 -18- 200936052 豆的莖疫病（原因菌「户办邮純柯似」）、紫斑病（原因菌 「Cercojpora hA：Mc/n_z_」）、紅豆的莖疫病（原因菌「·ΡΑ>·ίο/7Αί/ι〇Γα Wg«ae」）、花生的褐斑病（原因菌「flracAWs」）、 甜菜的褐斑病（原因菌「Cerco^orfl 6ehcoia」）、葉腐病（原因菌 「TTiiiMaiep/jorwj ct/cwmerfi」）、草的彎胞葉枯病（原因菌「Cwrvw/aWa 菌」）、幣斑病（原因菌「Sc/eroi/m’a /zo;noeocflrr/7fl」）、長蠕胞黴 葉枯病（原因菌「CocWo6o/wi菌」）、薔薇的黑星病（原因菌 「Di;?/ocar/7〇« rojaej )、菊的白绣病（原因菌「Pwcci’m’fl/jori’ami」）、 ❹ 各種作物的露菌病（downy mildew)(原因菌fPerowoi/^ra菌」、 「菌」、「·Ρ/β5/ηο_ρύτ/·α 菌」、「firewia 菌」)、疫病(原 因菌「·Ρ/ϊ>^ο；7Λί/ζ〇λ·ύτ 菌」）、白粉病（powdery mildew)(原因菌 「Erysiphe 菌 j ' r 5/wwerz'fl 菌」、「《Sp/iflrenJiAecfl 菌」、「Ρθί/οίρ/iaerefl 菌」、「·P/^Z/acizWa 菌」、「C/nci>zM/a 菌」、「（9ύ/ΐο/?ίί·ί 菌」）、銹病（原 因菌「PwccWa菌」、「C/romyces·菌」、「(菌」）、黑斑病（原 因菌「j/ier”aria菌」）、灰黴病cinez-ea)(原因菌「5〇卜少沿 ci«erea」）、菌核病（原因菌「5Wero"«iii Λ·£τ/β/·〇ίί·οη//η」）、白紋羽 〇 病（原因菌「Λ〇5·β//ί«ζ·α wecairix」）、紫紋羽病（原因菌「/ίβ/ι·£：ο6α5·ι·ί/ζ·Μ»ί wompfl」）、白絹病（原因菌「Sc/eroiiw/w ro//y"」）、其他各種土壤 病害（原因菌「菌」、「Λ/π·ζ〇£τίο«ζ·α菌」、「P少i/n'wm菌」、 「jp/zatno/nycej 菌」、「菌」、「Fer"ci//iM/n 菌」、「P/aswodz’op/zora 6raj5z_care 等」）〇 【實施例1】 在實施例1中從57株稻熱病病菌試驗偵測內在性雙股 RNA。 首先，磨碎57株獨特採集之稻熱病病菌的各菌體，以 -19- 200936052 酚SDS法抽出核酸後，經由DNase 1及S1核酸酶選擇性地 分解DNA與單股核酸，得到菌體內在性之雙股RNA液。然 後於1 %瓊脂糖凝膠、20V進行電泳1 8小時，以溴化乙錠染 色。 其結果57株之中，在11株偵測到雙股RN A的帶 (band)。其中分別於7株偵測到2.8至3.6kb之4成分的帶， 3株偵測到1 .0至2.6kb之3成分的帶，1株偵測到1.0至3.6kb 之8成分的帶。 Q 又第1圖顯示57株稻熱病病菌中9株的雙股RNA偵測 結果之電泳照片。第1圖中，第1行是DNA記號，第2至 10行是從菌體調製之樣品。在第1圖中，相對於第6行及第 8行未偵測出雙股RNA的帶，第2行、第3行、第4行、第 5行及第10行偵測出2.8至3.6kb之4成分的帶，第7行偵 測出1 .〇至2.6kb之3成分的帶，第9行偵測出1.0至3.6kb 之8成分的帶。 上述之實驗結果，從一株偵測出複數的帶之點以及考慮 〇 雙股RNA的長度，從11株稻熱病病菌所偵測出的雙股RNA 是構成真菌病毒（mycovirus)的雙股RNA之可能性高。亦即 本實施例的結果暗示這些稻熱病病菌株中，內在新穎的真菌 病毒（mycovirus) ° 【實施例2】 實施例2是根據實施例1的結果，比較內在雙股RNA 之菌株與未內在之菌株的成長速度。 實施例1中關於未偵測出內在性雙股RNA之菌株與偵 測出之菌株，分別以PDA培養基培養，從培養開始至6日 -20- 200936052 後及ι〇日後觀察菌落。 結果，未偵測出內在性雙股RNA之菌株，菌絲以同心 圓狀成長，色素沉著也均一。另一方面，偵測出內在性雙股 RNA之菌株，比未偵測出的菌株成長慢，菌絲以非同心圓狀 成長，色素沉著也不均一。此外，可見到氣中菌絲的異常發 達，並觀察到扇形形成及溶菌。 亦即，內在雙股RNA之菌株與未內在之菌株比較，可 見到生長抑制。這些實驗結果暗示，實施例1所得之雙股 〇 RNA(真菌病毒（mycovirus))有稻熱病病菌的生長抑制因子 (弱毒化因子）。 【實施例3】 實施例3是以低濃度的環己亞胺（cycloheximide)(蛋白 質合成抑制劑）處理內在雙股RNA之菌株，嘗試製作真菌病 毒（mycovirus)治癒株。 添加環己亞胺（cycloheximide)0.25 至 0.50pg/ml 製作 YG平板，將以實施例2培養之菌株（偵測出內在性雙股RN A 〇 之菌株）移植於此。然後所形成之菌落中，將回復正常生長 的部位進一步移植到別的 YG平板，得到環己亞胺 (cycloheximide)處理菌株。結果顯示環己亞胺 (cycloheximide)處理菌株比一般的稻熱病病菌株生長更好。 接著，從所得之環己亞胺（cycloheximide)處理菌株以與 實施例1同樣的方法抽出雙股RNA，經由電泳，嘗試偵測出 雙股RNA的帶。’結果，來自環己亞胺（cycloheximide)處理 菌株未偵測出雙股RNA的帶。 此外，也以別的手法製作真菌病毒（mycovirus)治癒菌 -21 - 200936052 株，進行同樣的實驗。 以實施例2培養之菌株在PDA培養基或燕麥粉培養基 上生長約1至3週後，單離分生子，將該分生子移植到一個 新的PDA培養基，篩選已脫落真菌病毒（mycovirus)的菌落 爲真菌病毒（mycovirus)治癒菌株。 結果，該治癒菌株比病毒保持菌株的生長明顯變得良 好。此外，與上述同樣經由電泳，嘗試偵測出雙股RNA的 帶之結果，未從治癒菌株偵測出之雙股RNA的帶。 © 這些結果顯示，內在於稻熱病病菌之雙股RNA是真菌 病毒（mycovirus)，以及該真菌病毒（mycovirus)是稻熱病病菌 的生長抑制因子。 【實施例4】 實施例4是調査本發明有關之真菌病毒（mycovirus)是 否也存在於稻熱病病菌的菌體外。 在實施例1中偵測出2.8至3.6kb之4成分的內在性雙 股RNA的帶之菌株中，將3株移植於液體培養基並培養後， 〇 離心培養液，回收其培養上清液。接著，所得之培養上清液 於1 %瓊脂糖凝膠、20V電泳1 8小時，然後以溴化乙錠染色。 結果，在這些菌株的培養上清液中，也在與菌內在性雙 股RNA相同位置偵測出雙股RNA的帶。 此結果顯示本發明有關之真菌病毒（mycovirus)不僅存 在於稻熱病病菌的菌體內，也存在於菌體外。 【實施例5】 實施例5是調査存在於菌體外的真菌病毒（mycovirus) 對正常菌株（未保持真菌病毒（mycovirus)之菌株）是否有感 -22- 200936052 染能力。 首先，將實施例1中偵測出2.8至3.6kb之4成分以上 的內在性雙股RNA的帶之菌株移植於液體培養基，培養4 週後，離心培養液，回收其培養上清液。關於該培養上清液， 以和實施例4同樣的步驟，在1%瓊脂糖凝膠進行電泳的結 果可確認雙股RNA的帶。關於所得之培養上清液，使用 0.22μί的濾器進行過濾滅菌。 然後將50ml的YG培養基加入100ml燒瓶，將稻熱病 © 病菌的正常菌株（未保持真菌病毒（myco virus)之菌株）接種 於此，培養3日後添加500μί所得之培養上清液，觀察菌體 的生長。 結果在觀察的第3天，未添加培養上清液的菌株中菌絲 的先端筆直地增長，表現正常的生長；而添加培養上清液之 菌株中菌絲的先端不怎麼增長，變成纏繞狀態。 此結果認爲存在於培養上清液中的真菌病毒 (mycovirus)感染稻熱病病菌正常菌株，抑制其生長。亦即本 Ο 實驗結果暗示存在於菌體外的真菌病毒（mycovirus)對正常 的菌株有感染能力。 【實施例6】 實施例6是關於已感染真菌病毒（mycovirus)之稻熱病 病菌株，測定其分生子數。 將實施例1中偵測出2.8至3.6kb之4成分以上的內在 性雙股RNA的帶之菌株移植於YG平板，培養2週後’以直 徑4mm的鑽孔器萃取菌體並採集》 接著於1.5ml試管加入5%甘油，加入採集之菌體，混 -23- 200936052 合、懸浮5分鐘。然後使用血球計算盤計測存在於懸浮液中 之分生子數。 結果在稻熱病病菌之正常菌株（對照組，未保持真菌病 毒（mycovirus)之菌株）中分生子數爲33><104個/mL，而內在 真菌病毒（my co virus)之稻熱病病菌株中分生子數爲lxlO4個 /mL以下。 此結果顯示本發明有關之真菌病毒（mycovirus)抑制宿 主菌的分生子形成。亦即本發明暗示，抑制植物病害菌的增 ❹ 殖，並可抑制其傳播、感染擴大等之可能性。 【實施例7】 實施例7是解析從稻熱病病菌抽出之雙股RNA的鹼基 序列。 (1)雙股RNA的抽出、純化 一開始使用以下步驟進行雙股RNA的抽出、純化。 實施例1中偵測出雙股RNA之一個菌株，以液態氮冷 凍後磨碎，對〇.lg菌體添加lml抽出緩衝液（2xSTE、 O 1%SDS、ΙΟιηΜβ-硫氫乙醇）。於該溶液添加與抽出緩衝液等 量之PCI(50%酚、48%氯仿、2%異戊醇），在室溫充分攪拌 30分鐘，離心分離（8,000rpm，20分鐘，室溫），採集其上清 液（水相）。然後於採集之上清液添加等量的100%乙醇（最終 濃度爲50%乙醇/lxSTE溶液）進行乙醇沈澱。 將所得沉澱物（核酸）溶解於17.5%乙醇/lxSTE溶液， 65°C、1〇分鐘加熱處理後在冰中急冷，離心分離（8,000rpm， 10分鐘，4 °C)，採集其上清液。於該上清液添加纖維性纖維 素充塡劑（商品名「CF11」，Whatman公司製），在4°C條件下 -24- 200936052 攪拌30至60分鐘後，塡充於管柱（直徑1.5 cm，高12cm)。 接著供給17.5%乙醇/lxSTE溶液於管柱，除去非吸著 部分（fraction)後供給lxSTE溶液，溶出、回收吸著部分 (fraction)。爲除去溶出部分（fraction)中的混入DNA，添加 25U 的 DNaseI(Takara-bioInc_製）在 37°C 反應 30 分鐘後，進 行乙醇沉澱得到目的之雙股RNA。 (2) cDNA 選殖 繼續以所得雙股RNA作爲模板，合成cDNA後進行 ❹ cDNA選殖。 關於所得雙股RNA，使用隨機引子、SuperScriptlll反 轉錄酶（Invitrogen公司製，以下同）合成第一股cDNA。接著 以RNase Η處理後，使用DNA聚合酶I合成第二股cDNA。 以T4DNA聚合酶將合成之雙股cDNA末端平滑化後，以 QIAquick PCR純化套組（Qiagen公司製，以下同）純化。 然後磷酸化修飾該末端後，將該cDNA倂入pUCl 9質 體載體（Takara-bio Inc.製，以下同），使該重組載體轉形於 〇 大腸菌得到各CDNA的選殖株。並進行各cDNA選殖株的序 列測定。 根據所得各鹼基序列資訊作成連續（contig)序列的結 果，存在於菌體中之四種類的雙股RNA，皆可取得大約全長 的鹼基序列。 (3) 經由5’RACE法之兩末端序列的解析 繼續根據那些序列資訊合成基因專一的反意義引子，以 與上述同樣的步驟從菌體抽出、純化雙股RNA，使用 SuperScriptlll反轉錄酶及其引子合成cDNA，以RNaseH處 -25- 200936052 理得到單股的第一股cDNA。 然後使用末端去氧核苷酸基轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase)(Takara-bio Inc.製）於其單股 cDNA 附加去氧胞嘧啶同聚物作爲錨序列（anchor sequence) »接著合成附加去氧鳥嘌呤同聚物之接頭引子 (adapter primer)，合成基因專一的反意義引子，經由PCR 法增幅兩引子夾住的部分，合成cDNA。 然後以T4DNA聚合酶末端平滑化其cDNA，以QIAquick 〇 PCR純化套組純化，其末端經磷酸化修飾後，將該cDNA倂 入PUC 19質體載體，使該重組載體轉形大腸菌得到各cDNA 選殖株。並進行各cDNA選殖株之序列測定。 經由以上步驟，得到新穎真菌病毒（mycovirus)的基因資 訊之全長序列。該真菌病毒（mycovirus)是由四種類的雙股 RNA構成。各雙股RNA的序列示於序列號碼1至4。此外， 由於將雙股RNA置換爲cDNA來進行序列測定，在序列表 中「尿嘧啶」被置換爲「胸腺嘧啶」。 Ο 又所得鹼基序列進行解析之結果，示於序列號碼1之 RNA序列含有存在於整體病毒（Totiviridae)及其近親病毒等 之RdRp(RNA依賴性RNA合成酵素）的保留結構單位。此 外，示於序列號碼3之RNA序列含有具有與La France病病 毒的L3雙股RNA片段相同性之區域。 此結果顯示本發明有關之四種類的雙股RNA是新穎真 菌病毒（mycovirus)的基因資訊。 【實施例8】 實施例8是關於本發明有關之真菌病毒（mycovirus)之 i -26- 200936052 病毒粒子，進行生化學的特性解析。 以液態氮冷凍稻熱病病菌S-0412-II la株，以硏缽磨 碎。於該樣品添加4至6倍容量的0.1M磷酸緩衝液（ρΗ7.〇)， 以混合器攪拌。然後對磷酸緩衝液添加40%容積之丁醇.氯 仿（容積比1:1)，攪拌30分鐘、離心（8,000xg，1〇分鐘）並回 收上清液，重覆此操作數回。 然後於該上清液添加聚乙二醇（平均分子量6,000)使終 濃度爲8%、氯化鈉使終濃度爲1%以溶解，放置在4°C 3小 © 時使病毒彼此凝集，離心（12,000xg，20分鐘）得到經由聚乙 二醇凝集之病毒沉澱物。 將該病毒沉澱物溶解於適量之0.05M磷酸緩衝液 (PH7.0)，離心（6,000 xg，5分鐘）除去溶解殘留之不純物，回 收該上清液。 然後分注20%廉糖使成爲從離心試管的底約lcm左右 的高度作爲緩衝，使回收之上清液分層、超離心（1 00,000><g， 2時間），將該沉澱物溶於少量的0.05M磷酸緩衝液（PH7.0) © 將此作爲部分純化病毒製備物。 將該病毒製備物的一部分進行SDS-PAGE(7.5%凝膠， Tris-glycine 緩衝液（pH8.8)，20mA，90 分鐘），以 CBB (考馬 斯亮藍）染色，進行病毒蛋白質之主成分（外殼蛋白質）的分子 量解析。 此結果偵測出約70kDa大小來自病毒粒子之蛋白質的 帶。 因此，以SDS-酚法從偵測出該70kDa蛋白質之成分進 行核酸抽出。結果偵測出2.8至3.6kbp之4成分的兩股RNA。 -27- 200936052 以上，經由本實施例可確認本發明有關之真菌病毒 (mycovirus)之病毒粒子的存在。 【實施例9】 實施例9是以噴霧接種法檢討本發明對植物病害真菌 的防除是否有效。 將稻熱病病菌S-0412-II la株接種於燕麥粉培養基平 板，在25 °C的室內培養。_接種後第15日未充分產生分生子 時，於平板倒入滅菌蒸餾水2mL左右，以筆擦搓培養基表面 〇 移除氣菌絲，將該平板置於黑光（black light)下3日誘導分 生子形成，倒入滅菌蒸餾水lmL左右，再次以筆擦搓培養基 表面回收氣菌絲及分生子，得到分生子含有液。接種後第15 曰充分產生分生子時，於平板倒入滅菌蒸餾水2mL左右，以 筆擦搓培養基表面回收氣菌絲及分生子，得到分生子含有 液。此外，以與實施例3同樣的步驟製作稻熱病病菌的真菌 病毒（mycovirus)完全治癒株作爲對照組，以同樣的步驟從該 菌得到分生子含有液。 〇 然後以拭鏡紙（kimwipe)或紗布過濾這些分生子含有 液，調整分生子濃度爲2><106個/mL，添加0.02%(v/v)的 Tween20作爲分生子懸浮液》 然後，使用噴嘴對稻苗（考慮稻熱病病真實的抵抗性基 因型與菌的種類，適宜選擇之品種播種後第2至3週者）均 勻地噴霧分生子懸浮液，將植物體在26°C、相對濕度100% 的接種箱中靜置24小時後，將罐移到溫室並維持室溫於23 至3 0°C，噴霧接種後培養7日。然後在噴霧接種後第7日計 測每一定葉面積形成3至4mm罹病性病斑的數目。 -28- 200936052 結果示於第2圖。第2圖是顯示接種稻熱病病菌之葉中 病斑數的圖。圖中縱軸代表接種稻熱病病菌之葉中病斑數。 圖中「混合感染株」是表示噴霧調製自感染本發明有關之真 菌病毒（my co virus)的稻熱病病菌之分生子懸浮液時的病斑 數’「完全治癒株」是表示噴霧調製自稻熱病病菌的真菌病 毒（my covirus)完全治癒株之分生子懸浮液時的病斑數（對照 組）。 按照第2圖所示，與對照組比較，噴霧調製自感染本發 〇 明有關之真菌病毒（mycovirus)的稻熱病病菌之分生子懸浮 液時病斑數顯著減少。此結果顯示本發明對植物病害真菌的 防除是有效的。 【實施例1 〇】 實施例10是以打孔器付傷接種法檢討本發明對植物病 害真菌的防除是否有效。 以與實施例9同樣的步驟調製分生子懸浮液，使該液附 著於3%瓊脂膜（完全不含養分），切取瓊脂膜爲約2mm2製作 〇 瓊脂片。以接種用打孔器剪在23至30°C溫室栽培之稻的第 4葉，取得浸潤狀的傷，將瓊脂片裝於該付傷部分，將植物 體靜置在26°C、相對濕度1〇〇%的接種箱24小時後，將罐移 到溫室並維持室溫於23至30°C ’接種後培養14日。然後計 測接種後第1 4日之病斑的大小。 此結果爲，與對照組比較’接種調製自感染本發明有關 之真菌病毒（mycovirus)之稻熱病病菌的分生子懸浮液時’病 斑的大小顯著變小。該結果顯示與實施例9同樣，本發明對 植物病害真菌的防除是有效的。 -29- 200936052 【實施例11】 實施例11是以電子顯微鏡鑑定存在於菌體外之病毒粒 子。 將稻熱病病菌S-0412-II la株培養於YG培養基（酵母菌 萃取物0.5%、葡萄糖2%)中，從該培養上清液單離病毒粒 子。離心該培養上清液（l〇,〇〇〇xg，5分鐘），超離心該上清 液（100，000xg，30分鐘）得到含有病毒粒子之沉澱物。將該 沉澱物溶解於0.05M磷酸緩衝液（ρΗ7·0)，使用磷鎢酸 ❹ （phosphotungstic acid)或醋酸鈾負染色，以電子顯微鏡（倍 率：><20,000~40,000)觀察 ° 結果示於第3圖。第3圖爲得自稻熱病病菌S-04 12-11 la 株的培養上清液之病毒粒子的電子顯微鏡照片。按照第3圖 所示，經由電子顯微鏡，可鑑定本發明有關之真菌病毒 (mycovirus)的病毒粒子。該病毒粒子是約30至40nm的正 六角形狀，包在被膜（envelope)狀的構造內。 【圖式簡單說明】 Ο 第1圖顯示實施例1之57株稻熱病病菌中之9株的雙 股RNA偵測結果的電泳照片。 第2圖顯示實施例9中接種稻熱病病菌之葉的病斑數的 圖。 第3圖爲實施例11中本發明有關之病毒粒子的電子顯 微鏡照片。 【主要元件符號說明】 Μ 〇 -30- 200936052 序列表 <110>國立大學法从京農工大學 巻山裕琴(Moriyama，Hir⑽itsu) 福原敏fj(Fukuiiara，Toshiyuki) 有江力(Arie，Tsutomu) 寺岡徹(Teraoka，Tohru) <120>新穎真菌病毒 > 植物病害真菌弱毒菌株~植物病害防除劑~真菌病毒生産方法~植物 病害真菌弱毒化方法'以及植物病害防除方法 <130> NK003-P01 <160> 8 <170> Patentln version 3.1

<210〉1 <211> 3557 <212> DNA <213> 稻熱病病菌金色病毒 l(Magnaporthe oryzae Chrysoviirus 1) <400> 1

60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 gcaaaaaara raataaagct ttcctttttt gcactcacgt ctcgcttgtt gtaractgct tgttattatc ttgagctgtg tgatcgaagg aacccgactg gcttcagaca cttctgcaat ggcggaaaga tacggtgagg acgtgggctc gttagggtct ggggagccgg tgttcggtgc gtcgtacacc aatatctggc actctacgct actggcgagc gacgggtcgg tggccgccga ggggccggcg ttgtatgcga tcgttctccc tctgagctgc ggcaaatcta gtttggcgtc agtgttaagc gggtatgaca tagacgacat ggtcgtgaac gcggacgcga tgcaagcaga tgacgagtgg cgcgcgatgc tcgacgcgcg gacgaagggc tgggcgtacg aagataaggc agcgtaccgc ctggcgaacg acctgatgct gcgccgggca aggcggttcc ttcgttcgtt tgagggtgac gacaacgccc ctgtcgtgta cgtgcacacg cgggagttgg cgacggcgct ggggctgaag ataatatttg atgggtacgt ggaggaggcg gcctggctgt cctgccgccg tcagctggag tcggacgcgg tgacgcgaga ccgtgacctg cgggcgtatc ggggccaagt ggcagcgaac cgcgcgcacg caatacgcca tcggcaacct gagcccatcc cgttcacatc gcactcccgc ttggccgaag ctgccgaagc ggcgatcagg caggctggac tgtgcgtcgg gaacccgcgc gacctagcgg acagaaccag gttgtgcggc gcgcccccgc aagtcatgct tgacctggcg cattcaatct gccgtgacaa gcacaggccg gcgtggttgc gggcggtggc tgccaagcta ctgaggtaca ggatgggtga ggtgttgccg caggaggcgc tagcggctga 960 1020 200936052 taactacagc gagtgggcca gggtgataca cgcggctgac caacataggg tggctgaggc gccggcgcag gagctgagag gcccgaactg gtcagaggtg ttcccgtacg gcgcaggcaa ctcgcggttt gcgttggtta agataggcga ttggattgat tatacgggca ctagcgccat gggcttcggg tatgagtggt tccggcagat ggtaaccaga cgtgaaggga cgtacgagca agcgagttgc atgctactga tgggtgatgt gtttgactac atggcccctg agttgcaccc gctgatccag cgcctgccta tggggtcgct gaagctggac cactatgcgg aggttgcaaa agagatacac cgattggtgc gctcgagtgt cacgctactg ggtcgcaggc tagacgccgg gcaactgtcc gtgtgtactt actgggactg cttggctggg cgctatttgg gttcgggcga catggagaag gagctggctg atcggactag cgagcagaag ccacgcgtct gggtatcgcg agacggaaca cagtcagccg accggttcgc gcacgagttc gcgtgcgaag tgcgcgcgct ❹ actgcaccag acgatcgctg acgggggcga gcgcatgcgt tcagtcacgg acatggtggc ctccttcgac acatttctgg agtaccgcaa gaagtgggtg aggccaggct ccgtcactgg tagccccaaa accgacattt accttcaggc cgtgagtgag cgcgagagca tgatcgcgga agttgccgac gacctggctg cgatgggtac atatgtgcta gcaaacgtcc ggctgaacaa ggccgcgact ttcgagttcc ctgagttccc cgctatagtg aagcgcgtgc tggcggacta cgtaccgaac agtttcacca gatacttcat taagaacgag atcggcaagc cggcagggcg gccgctctac ccatcacacc tcttgcacta cgtggtgggg cagttcgcgc tttacgcgct tatgaaggca cagcctatcc ctaaggtacg cttaaccgcc gaacgtgatg tggctatgga ❹ cgagcactgg atgtggatgc aggccaggga gttcactgtg ggcgtgatgc tggattacga caacttcaat gagaagcacg agtttgcgga catgcaactt attatgaggg agctgaaagg gctgtaccgc acggcgggcg tgttgagccc cgacctcaaa gccatgatag actgggtggc ggaggcgtac gaccgcactg tcttggagta cgatggggag ctgcacaact ttaagcacgg catgctgtcg gggcaggccc ccacttccgc tataaacaac ataatcaacg gcgctaataa gcggctgctg ataaggcagg tggaggagct gaccggtcgt gtgatattcc agaagcgcac gtccggcggc gacgacgtgg ccggtgagac ctattcactg tatgacgctt acctggctgt taaatgcggg cagctgatgg ggctggcctt caaggacgtg aagcagctcc tcagctccga ctactacgag tttttccggc tgttcgtaag cgtggagggc gtgaacgggt cgctgccacg 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 200936052 cgctttaggt agcatatgtt cgggacaatg gtcgaacagc gtgaaggcta aattcgttga tccagcggca aaactgtcct cagtgaccga ggccgcattc aagatatcgc gccgcgcggg aggaaacgcc acgttccgtg agaagttgtg cgccaccgcc ttcaagaagt gggcgacgta caatgagcag gtgctggtga agggcttcat acatggcgag aggcactctg gcggtcttgg agtgcctatg agcgacggtt cggtgctcga tatagagccg atccagtggc ccgacgaaga aatggtgcga ctgaaaggac tgccctcgga cgccagtcgg gtagtggtgg ctgacgctgt tgagcaggcc gcccaactgg tcgggcgcga cagtgtcgaa gccgtcgatg ttgtcgccaa caggttgagc gagcaagtgt ttaaggcgaa tgtcgctgca atggaggggt cgagaatcgg ccaattacta gggtcatggg aagggcctcg cactgtaagg gtgcgagatg tgctgcgaat 座 agcagaggcc gacgtggccg cgacggcgcc gaccgtggaa gagttcaggg cggcgtacgc aaaacacaag acaatgatag attattaccg gcaggtaggg gccagatacg acgcactcgc aggtgtggtc aagccgaagg cgcgtgagag gctggcgcgt gcgtcgtgca acgggacgcc gtgcgactac aagaaactgc acttctggaa ggagaagctc actatgtacg gttgcggaac gtacctgctg accgaggaca cctacgatgc tgcaagtatg ctggcgttgg tggtgagcgc ggagctatca aacgaggctg taagccgcag gctggctgaa tgtgcggttg cgctgaatag ggccggaatg gtgaactact gagtgcgtgg gtgggcgccg ttccatactt cttacactgt gaggtgtaag tacccca <210> 2

©<211> 3073 <212> DNA <213〉稻熱病病菌金色病毒 l(Magnaporthe oryzae Chrysoviirus 1) <400> 2 gcaaaaaaga gaataaagct ttctcctttt tgcacagtaa ctgaagcact gactggcacc acatccagcc gcaacaagtc ctcagagcta ccgacaccgc cacaaacact caacaccgca acacaccaac taaactagca catcatgggc ttgacgcttg acccagcaca ccggtggcgt tcgaccgacc tggcgttcgc gcctgtgaat gaagtgagcg tgcaaagcgc tgtgcggggc agggatgata gtgaagcggc agggacgggg ttcaccgggg ataaggccac caaggcatgg tatgatggcg ccggtcgtgt gccgatcgac gacatgtgtc tggcagccgg gatgcgcgcc ggcgtgctta gactggcagt ggaggtcggg tcagcgaggc ccagctcggc tgacgagtct 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3557 60 120 180 240 300 360 420 480 200936052 gtggtgcagt ggagatctgt gccgtactcg tacgtgggca agccgctcac agtatcgctc agccacgccg ggaggcactt cgtggcgcgg ccggcgttaa acgagaatgt ggctatggcc atgtacgagg caccgaccgc agacaagtgg gtggctgcga cgaacttcaa gctgccgaga accgtggccg cacctggtgc cgcgccgcaa gtgccaggcc tgcccaacgg cggcggaggc gctaacctgg ggttgccgaa caactttgac gcagtgcgca gggtgctcgt ggaatgcgcg cgtggcgacg actacgggta taggctcttc agcatggcgc gggtggtgct gcatgctgag actatgcgaa ggtcgggaat atcgccgcga gcgactccga gcatggacga ccagaacatg ttcagcataa caacaggcga tacgcctcac ttaactgaag cccaaatcaa taactacgcg tatgcttata atcacaccga gcaatcaccg cagtatcgag ctttcttggc gatggggctg cggggcgtgg ggcactacgc gatacccgga actatatatt ccgacggcga ctatcctgta o gagtgtgccg ttaaccaccc gatcgcgttc gtccgcgtcg ggggtccccc gcctgcgaat gtggctccgg atccagctca ctacacggct gtcctgtcca acccgggcct cgctttgtca tactactggg cgtacgccta ttccatgggg ttgggccgcg tcgcgggggc catactagcg caggctagca tagctccgca catctggggg tctgcggcgg tcgcacccta caagaattgc acgccaaagt tggacgcggc ggcctacttg ctgctgccag accaggagac cgcacatgtg actgcggaca gcgctcgcga gctcgtggct aacgcggccg tgctgtcgga ggcttacttg gctggaatag gggctacgct gttgagcgcg agggatagcg ggcaccagga caccgcgctg atgatgcggg cggtcacaga aaagctgtcg gacccagaga cgagacgcgg tgccatgctt ❿ tctataacta gccggctgtg cccgggcggg gtggggatgg aatggctaag cccgttcagc tacgacgtct tagacggcac tgagcggtgc attagagctt ggcggaatca cggcttcttg ttggcgctat atgatacgtc gcccgtggct gctttggccc cactgttttc tacaggcgtg cctatgaata actcactgct ggataagaag agcgtggtga ccggggcgga gtaccctcag ctggtggcgt gcgcactagc gggcagggcg gagctggccg ggcggtgtga acggccgtcg cccgcctacc ttgcagcatt ggcgggccac agcgcacgca tgcgcgcgtg gaccgtagtg gtgacagtgc tgggagtggt accgccagct tcggacgacg aggaccacgc tgacgtgcaa gagcaggccg cgagcagaca agagtcgtca agcagcgtaa gacccctcag cagccagagc gacaggagtg tcacccgggg ccacggtacc gccgagccgg cccaggcagg ggcagggccg 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 200936052 tcgagtcccc caccagtcgc gccgctgaga gggatgcggt tgggttcgcg tgcgcgcagt cataaaggct cattgtctgc accgcaagac ccgatacccg agacggggga ggagccggtc aggcaacctg acggggcagg ggcgaagcca aaggtgcagg ccatcctaga ggcgcctaaa ccggccctag agccgccctc gtggaatagc tgggcctccg aagtggcttc ggtcgaggcc aggctggcag gagcggatga agggccgagg gggaagatag tggagcccga gtaccggggg attgcaccgt cgcgcagcac aaccacggtg gctacgtcgc ggtccgtggt gccttcagcg gcctctgcag cgtccggaac cgtggtgtca atgggcaggc gggccaaggg caaagaacga gaggtggaac gagcagacca ggttgagtca tcgagtggca gttccgacca ggccagtggg ggatcgcgcg gtgaggagct atagcgtgcc aggtaacgag acgatggttg gatgagtaac gctgctgcgg ttggggcgtg cagccgccga tgcgtctgac ggtcgtgata acgcgtggcg o ctcccggcgg ggctgggcca cgcatccggc gaggcgcgtg ctacaaggct gtatgtttgg gtggcccgct gagctgcgcg ggcaccttaa tgagcacctc gaggacccac agctccatga tgtgacataa gataaaacaa aacaaaataa taaataaata agataagata agataaataa gataaataaa taagtaaaat gaagtaaaat aataataaaa atattaaaat aaaaatatta aaataaaata aaataacact gccgtagggt ttgcccaaca ctacggcggc gcgtttgttg ttagaactgg gactctaaca agtgacgaac ta’cggatgaa gtaaatgaat caaggtagag tgaacactgc cgtagggttt acccaacact gcggcggtgc gcttcttgtt agaactgggg attctaacaa gta

〇 <210> 3 <211> 3046 <212〉 DNA <213> 稻熱病病菌金色病毒 l(Magnaporthe oryzae Chrysoviirus 1) <400〉 3 ggcaaaaaag agaataaagc tttctccttt ttgcacagca accgcggctc taccagtctc ttatcttggg caacctgacg attacgctcc tcgatcgacc agattttctc aaacagcagg acggtactta accactcgcg acgaccacgg cacgtgattg agatggcgat gggtacaaca ggcggccagt tggcctcaaa actgcgcatc gatcaagggt tgggtttgcc agacgcgttc ttacggcagg acgggaaagg tggcggggca gacggaggcg cggatggtga atgggccgcc 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3073 60 120 180 240 300 360 360 ❹ ❹ 200936052 ttcgggctgc actccggagc ggcacctgac aatgcccctc cccgcgtagt gccagccgcg ttggacgctt catcgggggc cgggcgaata gatacgttgc gcccgctggt gggggacgtc gcttacagcc tctatttacg gctgggggag accgactatg acgtcaccaa agatgaggag gccagcccaa ccgatgtgag ccactccgtg atatgctcgt acgctcttga ggtcgacggg cgcacagcgt taaaccgggc cgacgtggcc tcgcactgcg ctgtttaccc cccgatggtt cggcgagcga gtgcgacccc tgtgtcagtg acaggtgcgc tgacaacgtc gagactcacg agtgctgccg ccgcttgcga tgggctcgcg atgcacgcag ggtcgggcaa taacgctgac gtgagtctag ggataggacg cgagttcatg tacgacagag cgaggcacca ggagaatggg ctcgaatccg tgttcgtccg catgtggcta gtgcacctaa gcgtgttagc gcgccaacct gtgacgcaag tggtggaccc agcagtgttg tccgccaggt ttgcaaatat cgctgctccc gcagagagcg acgctgctcg agccatgcgg ggggtaaaga tcaacgcccg cggacttacc aacaccgcgc tggcgctgtt ggtgctaggt tgcagcgaca cctcgcaggc tgcggggctg cattatcgag cacggcgata caagtttgcg aggtccgcac tgtctatgta cggcatgcaa gggcttggca gggtggcggt tgcgctggac agggctgaag tgaccggctt agctattgta tctctagcag agaggtacgg cgcagagcat gcctgcgggg ctgggctgca gacggcattg atgatgtacg gggtgaacga tagcggaagg tatgtccaac tgaagtgtcc ggaacccgaa ttacacgacg atgtggccac cacagcagga atcagggcgc tgtcagtcaa aagttactca gacttatccg acaatcgcct gctgtcattg tccttgtttg tcggcagggc atggcgccag tcggcgggcc acctgctgcg ctcctccacc atgcagacca ccacagccga catagatgcg gtggtaaaca cactgctgcc tagccagggt gcgctgatta aggccgtggg cagtgctcac gccagagcga tgggttgggt agcgccgttg gtggacacag tgtcttatgt ggagcaaaac tatcgcctac tgtgggagga acgtggtata gtgcactgtc tcgccctcgg gctgagggtg cctaactcgg tgctggagga agccactgca gtgatagagg tcccgtaccc accggcgctg tcgccgtccg atgatcctcg ttctgccggg ccgcgggctg gcagcctagc caccctcgga ttagtggagt cgctgctgtc gtcatcgggc gagggactat gcgggtcagc gcgggctcga gggagacgcc aagctgggct tgtagcggtg ccggcacagg tggttgcatt ggctggacac cgggtgcagt tcaccctgct gagcgtagct agcggggtag ctgtgagagt ggaagagctg 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 200936052 ccaacccggc cgctactggc tgagccgctg caaaccgggc tggaggcagt cgagtacgtg caagtgccgt gggccccagc ccaggcagct cctgcgcccg cgcctcctgt ggagtttcgc gacactctgg atcagttcct gcacgcctac aagccgagta ggtcagtgtt ggagcagcct agggtggagg taacgcccag gatgcagtcg ggatcggacg tccttaacgt cgtgttgcct gaagatacgc ctgccccctt gcgcgactct atcatgggcg gcacattgac ccccgtcagc gccgcaggtg tgggcggctg tgcggaggcg atagtgaact cattgcaggc acagtatggg gtgacagtct cgaccggcga gatagaaaag gagctgcagg gggaccactc gggtggcgag ctgctgcagg tgggggcgat ggcctcggcg ctggccaagt ttggggacta ccggctagtc ttgctcgacg aacactcgca gggggtaatt ctgagggcgg gcgatagcgg gagcaagccc _ gtcacaatac acaggaatgg tgcgtcttac aacgcactgg ggcgtgggcc gggccgcgca 〇 atacgggttg ggctgcgcag ccacgggcca ccggcacgcg agccgcagcg tgagccgcgt cgcatgtcac gcagcagctg agttgcgtga ggccgcaggc gggcaccgct gcccagggtg gctggggcga gagctgtaat cgcaggtttc acggcacgct tcggcaccac attgaggcga ccagctcctc gagatgcggg cgtcgcgccg gcgcgtgacc gcgcgcgcac cgcttggcgt ggatgggtgc gcaccgccct gtacaaccga gcagccgacc ataggggccg ctaacggagc gtccggcgcc tgccgaggcg gcgcacctcc tgtcgggcgt ggtgtccggg caagcaacac catggagtag tcagccagaa caaaacaaaa caaaaacaaa aacaaaaaca aacacaaaaa caaaaccaaa accacaagaa aaactaaaat caaccactgc cgctgggttt acacagcctc ❹ gcggcagtgc gcttcttgtt aaacctaggg ttctaacaag tacsrat

<210〉 4 <211> 2383 <212> DNA <213〉稻熱病病菌金色病毒 l(Magnaporthe oryzae Chrysoviirus 1) <400〉 4 tcgaacgcag cgaccaccac caccacgcgg agctgggttc gacacagcga tgggtcagtc agtgtacgaa ccgagcgcag aattaccaac agagacccag caatcgtacg cgctatcgcc cggttcattt cagggtgatg ctctcgctgc gctttcgaca ctgggcaagg tgccggcgct ggaggtcgcg gggatagtta ggcgcggggc gaccgttcta gggaagcttg ctccgccgag tgaggatcag acgtacgccc gcttgtacag ggaggctcgc gattacgtgg gcaataacac 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3046 60 120 180 240 300 360 200936052 ggaagcggag gttgaacgcc cagtcgacag agtgtgggcc gagacctcag agcctcgctt gtctcgtact gccatggcgc gcgccgaccc ggacacgcag tggcagccgg ggctgtacct cgggatgccg tacggcccgg acgctgctag aattgtcgcc caaccgttgg acgcgcggga gccaggccac ttcagcaacc tagccccctg gatcgtcggc gtgttgaacg gcaccacagg cgcgttcgag ggcgatgcgc tgaggctctc agccaggaca accccgcatg tggatgacgg ctggttgggt gcacaggctc tgactaggca cgacatcgac gtgaggttgg cgccgtcgaa cgcggcctgt actgtctcgg tactggttgg cgtcgactac gtggccggga agccggtgct acaccacatg gcggtggcgg gctatcagga cgccagaccg cctctaaggc gcctcaccct ggcgctgtgc gaggcgctca cataccatgt cgcagtgggt ggagtactcc cggtgaacgc agtgcacaag cgccaatgct caaactacac cgacataatg tctgcggagg catacagcga o cccgcccgcg cccaaccaac tgggcccacg cgtgtccacg aacccgccgg aggggtgttt ggcacaactg gtgcaagtac accaatatga cgtgcaaacc ggggtgtcga caggagtgat gtcggcgcga gacgtgcccc cgtccgcctt ctacttcggg gggacaccta acggccgaaa cacagggtac gccataatgc gtgtggaagt ggacggcgtg atcactcacg tgttgacagg ggctgttcat atgaaagggc accccgcgtt tctgttgtca gggcgtaggc gtcagccatg cgtgagggac ggcttgtact cacctggcgc tgtctgtaag ctgttcggcg atgggggcgg cggtttgtgc atgcgcgcgg aggatgcctc gggggcagat cgcgagctac gcacggtgtg gtctgacgcg ctgtcgaacg aaaacaaaac cgcggcggta cgttcgcgag acccgctgtc ❹ agcagcgagc ctcctgatag ccatagctaa gctgaacggg tggcaagcta ggccggccgg cccgcacagc attactgcag acaccgacag gggcgaagtg cgggtgttcg tggagttttg gcccacgtca ggtccacggt ggcttgaggt ggtgtcgttt gacgaggagg tggacctcgg accggaaggc gacgacgggc aatgcgacca tccgtctgag ctggcgctgg actactggct gtcaggcttg gcgaggtaca tgctcaagga tataacccgg aacggatacc tcattaaagg ctgcgggaag tacgctcgca atgagtcgtc ccctttccaa gcgcaacaca cagccgctcc gcaagcttca tgcgatgtgg tggtgagtgc gtggcgggta gaaaccaaga ttggcccagc gaaggcgtcc tacatgtaca acttaggtgt ggctgtgtgc gccgccggag ccgtagttgc cacatctaac ctagttgatg tgaacgcgga aatccgacgt ggcgcagtag tcggcaatgg 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 200936052 gaatgtgcta gctgcgtacg ataggcgcac ccgatcagaa gtcgcacgcg ctgacctgct tgctgtgctg aaaggactgt cgagactggc gatggcgggg tccgtgcgtg tgtacagcgc cacccaagct ggcaacgacc aggcggacgt gaatgtgctg aggagcgacg gtaagagcgg gccaagtgcg agaataatgg agatagggac gctggtggag agacgaggca gcgcggctga tgccggagcg gacgcttcag gagcagcggt gtcaagcggc gtggctgcgg atacaggaca acccgtgact ttagcgggag ccgatgagtt atgggcaact ctgcggcgtt tggtgcggtg agtgctcgga caggtggcgc tgaggcgacg cctagtagct gcttgcagtg tctgcgtggc caccgttacg aattcaaact tcttacgtgt caacgtaagt acc o

1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2383

<210> 5 <211> 1127 <212> PRT <213> l(Magnaporthe oryzae Chrysoviirus 1) <400〉 5

Met Ala Glu Arg Tyr Gly Glu Asp Val Gly Ser Leu Gly Ser Gly Glu 15 10 15

Pro Val Phe Gly Ala Ser Tyr Thr Asn lie Trp His Ser Thr Leu Leu 20 25 30

Ala Ser Asp Gly Ser Val Ala Ala Glu Gly Pro Ala Leu Tyr Ala lie 35 40 45

Val Leu Pro Leu Ser Cys Gly Lys Ser Ser Leu Ala Ser Val Leu Ser 50 55 60

Gly Tyr Asp lie Asp Asp Met Val Val Asn Ala Asp Ala Met Gin Ala 65 70 75 80

Asp Asp Glu Trp Arg Ala Met Leu Asp Ala Arg Thr Lys Gly Trp Ala 85 90 95

Tyr Glu Asp Lys Ala Ala Tyr Arg Leu Ala Asn Asp Leu Met Leu Arg 100 105 110

Arg Ala Arg Arg Phe Leu Arg Ser Phe Glu Gly Asp Asp Asn Ala Pro 115 120 125 200936052

Val Val Tyr Val His Thr Arg Glu Leu Ala Thr Ala Leu Gly Leu Lys 130 135 140 lie lie Phe Asp Gly Tyr Val Glu Glu Ala Ala Trp Leu Ser Cys Arg 145 150 155 160

Arg Gin Leu Glu Ser Asp Ala Val Thr Arg Asp Arg Asp Leu Arg Ala 165 170 175

Tyr Arg Gly Gin Val Ala Ala Asn Arg Ala His Ala He Arg His Arg 180 185 190

Gin Pro Glu Pro lie Pro Phe Thr Ser His Ser Arg Leu Ala Glu Ala 195 200 205 o

Ala Glu Ala Ala lie Arg Gin Ala Gly Leu Cys Val Gly Asn Pro Arg 210 215 220

Asp Leu Ala Asp Arg Thr Arg Leu Cys Gly Ala Pro Pro Gin Val Met 225 230 235 240

Leu Asp Leu Ala His Ser lie Cys Arg Asp Lys His Arg Pro Ala Trp 245 250 255

Leu Arg Ala Val Ala Ala Lys Leu Leu Arg Tyr Arg Met Gly Glu Val 260 265 270 © Leu Pro Gin Glu Ala Leu Ala Ala Asp Asn Tyr Ser Glu Trp Ala Arg 275 280 285

Val lie His Ala Ala Asp Gin His Arg Val Ala Glu Ala Pro Ala Gin 290 295 300

Glu Leu Arg Gly Pro Asn Trp Ser Glu Val Phe Pro Tyr Gly Ala Gly 305 310 315 320

Asn Ser Arg Phe Ala Leu Val Lys lie Gly Asp Trp lie Asp Tyr Thr 325 330 335

Gly Thr Ser Ala Met Gly Phe Gly Tyr Glu Trp Phe Arg Gin Met Val 340 345 350 -10- 200936052

Thr Arg Arg Glu Gly Thr Tyr Glu Gin Ala Ser Cys Met Leu Leu Met 355 360 365

Gly Asp Val Phe Asp Tyr Met Ala Pro Glu Leu His Pro Leu He Gin 370 375 380

Arg Leu Pro Met Gly Ser Leu Lys Leu Asp His Tyr Ala Glu Val Ala 385 390 395 400

Lys Glu lie His Arg Leu Val Arg Ser Ser Val Thr Leu Leu Gly Arg 405 410 415

Arg Leu Asp Ala Gly Gin Leu Ser Val Cys Thr Tyr Trp Asp Cys Leu U 420 425 430

Ala Gly Arg Tyr Leu Gly Ser Gly Asp Met Glu Lys Glu Leu Ala Asp 435 440 445

Arg Thr Ser Glu Gin Lys Pro Arg Val Trp Val Ser Arg Asp Gly Thr 450 455 460

Gin Ser Ala Asp Arg Phe Ala His Glu Phe Ala Cys Glu Val Arg Ala 465 470 475 480

Leu Leu His Gin Thr lie Ala Asp Gly Gly Glu Arg Met Arg Ser Val 485 490 495

Thr Asp Met Val Ala Ser Phe Asp Thr Phe Leu Glu Tyr Arg Lys Lys 500 505 510

Trp Val Arg Pro Gly Ser Val Thr Gly Ser Pro Lys Thr Asp He Tyr 515 520 525

Leu Gin Ala Val Ser Glu Arg Glu Ser Met lie Ala Glu Val Ala Asp 530 535 540

Asp Leu Ala Ala Met Gly Thr Tyr Val Leu Ala Asn Val Arg Leu Asn 545 550 555 560 -11 - 200936052

Lys Ala Ala Thr Phe Glu Phe Pro Glu Phe Pro Ala He Val Lys Arg 565 570 575

Val Leu Ala Asp Tyr Val Pro Asn Ser Phe Thr Arg Tyr Phe lie Lys 580 585 590

Asn Glu He Gly Lys Pro Ala Gly Arg Pro Leu Tyr Pro Ser His Leu 595 600 605

Leu His Tyr Val Val Gly Gin Phe Ala Leu Tyr Ala Leu Met Lys Ala 610 615 620

Gin Pro lie Pro Lys Val Arg Leu Thr Ala Glu Arg Asp Val Ala Met 625 630 635 640

Asp Glu His Trp Met Trp Met Gin Ala Arg Glu Phe Thr Val Gly Val 645 650 655

Met Leu Asp Tyr Asp Asn Phe Asn Glu Lys His Glu Phe Ala Asp Met 660 665 670

Gin Leu lie Met Arg Glu Leu Lys Gly Leu Tyr Arg Thr Ala Gly Val 675 680 685

Leu Ser Pro Asp Leu Lys Ala Met lie Asp Trp Val Ala Glu Ala Tyr 690 695 700 O Asp Arg Thr Val Leu Glu Tyr Asp Gly Glu Leu His Asn Phe Lys His 705 710 715 720

Gly Met Leu Ser Gly Gin Ala Pro Thr Ser Ala lie Asn Asn He lie 725 730 735

Asn Gly Ala Asn Lys Arg Leu Leu lie Arg Gin Val Glu Glu Leu Thr 740 745 750

Gly Arg Val lie Phe Gin Lys Arg Thr Ser Gly Gly Asp Asp Val Ala 755 760 765 -12 200936052

Gly Glu Thr Tyr Ser Leu Tyr Asp Ala Tyr Leu Ala Val Lys Cys Gly 770 775 780

Gin Leu Met Gly Leu Ala Phe Lys Asp Val Lys Gin Leu Leu Ser Ser 785 790 795 800

Asp Tyr Tyr Glu Phe Phe Arg Leu Phe Val Ser Val Glu Gly Val Asn 805 810 815

Gly Ser Leu Pro Arg Ala Leu Gly Ser lie Cys Ser Gly Gin Trp Ser 820 825 830

Asn Ser Val Lys Ala Lys Phe Val Asp Pro Ala Ala Lys Leu Ser Ser 835 840 845 ❹

Val Thr Glu Ala Ala Phe Lys He Ser Arg Arg Ala Gly Gly Asn Ala 850 855 860

Thr Phe Arg Glu Lys Leu Cys Ala Thr Ala Phe Lys Lys Trp Ala Thr 865 870 875 880

Tyr Asn Glu Gin Val Leu Val Lys Gly Phe lie His Gly Glu Arg His 885 890 895

Ser Gly Gly Leu Gly Val Pro Met Ser Asp Gly Ser Val Leu Asp He 900 905 910 OGlu Pro He Gin Trp Pro Asp Glu Glu Met Val Arg Leu Lys Gly Leu 915 920 925

Pro Ser Asp Ala Ser Arg Val Val Val Ala Asp Ala Val Glu Gin Ala 930 935 940

Ala Gin Leu Val Gly Arg Asp Ser Val Glu Ala Val Asp Val Val Ala 945 950 955 960

Asn Arg Leu Ser Glu Gin Val Phe Lys Ala Asn Val Ala Ala Met Glu 965 970 975

Gly Ser Arg He Gly Gin Leu Leu Gly Ser Trp Glu Gly Pro Arg Thr 980 985 990 -13- 200936052

Val Arg Val Arg Asp Val Leu Arg lie Ala Glu Ala Asp Val Ala Ala 995 1000 1005

Thr Ala Pro Thr Val Glu Glu Phe Arg Ala Ala Tyr Ala Lys His 1010 1015 1020

Lys Thr Met He Asp Tyr Tyr Arg Gin Val Gly Ala Arg Tyr Asp 1025 1030 1035

Ala Leu Ala Gly Val Val Lys Pro Lys Ala Arg Glu Arg Leu Ala 1040 1045 1050

Arg Ala Ser Cys Asn Gly Thr Pro Cys Asp Tyr Lys Lys Leu His ^ 1055 1060 1065 〇

Phe Trp Lys Glu Lys Leu Thr Met Tyr Gly Cys Gly Thr Tyr Leu 1070 1075 1080

Leu Thr Glu Asp Thr Tyr Asp Ala Ala Ser Met Leu Ala Leu Val 1085 1090 1095

Val Ser Ala Glu Leu Ser Asn Glu Ala Val Ser Arg Arg Leu Ala 1100 1105 1110

Glu Cys Ala Val Ala Leu Asn Arg Ala Gly Met Val Asn Tyr 1115 1120 1125

〇 <210> 6 <211> 801 <212> PRT <213〉稻熱病病菌金色病毒 l(Magnaporthe oryzae Chrysoviirus 1) <400〉 6

Met Gly Leu Thr Leu Asp Pro Ala His Arg Trp Arg Ser Thr Asp Leu 15 10 15

Ala Phe Ala Pro Val Asn Glu Val Ser Val Gin Ser Ala Val Arg Gly 20 25 30

Arg Asp Asp Ser Glu Ala Ala Gly Thr Gly Phe Thr Gly Asp Lys Ala 35 40 45 -14- 200936052

Thr Lys Ala Trp Tyr Asp Gly Ala Gly Arg Val Pro lie Asp Asp Met 50 55 60

Cys Leu Ala Ala Gly Met Arg Ala Gly Val Leu Arg Leu Ala Val Glu 65 70 75 80

Val Gly Ser Ala Arg Pro Ser Ser Ala Asp Glu Ser Val Val Gin Trp 85 90 95

Arg Ser Val Pro Tyr Ser Tyr Val Gly Lys Pro Leu Thr Val Ser Leu 100 105 110

Ser His Ala Gly Arg His Phe Val Ala Arg Pro Ala Leu Asn Glu Asn 115 120 125 o

Val Ala Met Ala Ala Cys Met Tyr Glu Ala Pro Thr Ala Asp Lys Trp 130 135 140

Val Ala Ala Thr Asn Phe Lys Leu Pro Arg Thr Val Ala Ala Pro Gly 145 150 155 160

Ala Ala Pro Gin Val Pro Gly Leu Pro Asn Gly Gly Gly Gly Ala Asn 165 170 175

Leu Gly Leu Pro Asn Asn Phe Asp Ala Val Arg Arg Val Leu Val Glu 180 185 190 © Cys Ala Arg Gly Asp Asp Tyr Gly Tyr Arg Leu Phe Ser Met Ala Arg 195 200 205

Val Val Leu His Ala Glu Thr Met Arg Arg Ser Gly lie Ser Pro Arg 210 215 220

Ala Thr Pro Ser Met Asp Asp Gin Asn Met Phe Ser lie Thr Thr Gly 225 230 235 240

Asp Thr Pro His Leu Thr Glu Ala Gin lie Asn Asn Tyr Ala Tyr Ala 245 250 255 15- 200936052

Tyr Asn His Thr Glu Gin Ser Pro Gin Tyr Arg Ala Phe Leu Ala Met 260 265 270

Gly Leu Arg Gly Val Gly His Tyr Ala lie Pro Gly Thr lie Tyr Ser 275 280 285

Asp Gly Asp Tyr Pro Val Glu Cys Ala Val Asn His Pro He Ala Phe 290 295 300

Val Arg Val Gly Gly Pro Pro Pro Ala Asn Val Ala Pro Asp Pro Ala 305 310 315 320

His Tyr Thr Ala Val Leu Ser Asn Pro Gly Leu Ala Leu Ser Tyr Tyr 325 330 335 ❹

Trp Ala Tyr Ala Tyr Ser Met Gly Leu Gly Arg Val Ala Gly Ala lie 340 345 350

Leu Ala Gin Ala Ser He Ala Pro His lie Trp Gly Ser Ala Ala Val 355 360 365

Ala Pro Tyr Lys Asn Cys Thr Pro Lys Leu Asp Ala Ala Ala Tyr Leu 370 375 380

Leu Leu Pro Asp Gin Glu Thr Ala His Val Thr Ala Asp Ser Ala Arg 385 390 395 400

Glu Leu Val Ala Asn Ala Ala Val Leu Ser Glu Ala Tyr Leu Ala Gly 405 410 415 lie Gly Ala Thr Leu Leu Ser Ala Arg Asp Ser Gly His Gin Asp Thr 420 425 430

Ala Leu Met Met Arg Ala Val Thr Glu Lys Leu Ser Asp Pro Glu Thr 435 440 445

Arg Arg Gly Ala Met Leu Ser lie Thr Ser Arg Leu Cys Pro Gly Gly 450 455 460 -16 - 200936052

Val Gly Met Glu Trp Leu Ser Pro Phe Ser Tyr Asp Val Leu Asp Gly 465 470 475 480

Thr Glu Arg Cys lie Arg Ala Trp Arg Asn His Gly Phe Leu Leu Ala 485 490 495

Leu Tyr Asp Thr Ser Pro Val Ala Ala Leu Ala Pro Leu Phe Ser Thr 500 505 510

Gly Val Pro Met Asn Asn Ser Leu Leu Asp Lys Lys Ser Val Val Thr 515 520 525

Gly Ala Glu Tyr Pro Gin Leu Val Ala Cys Ala Leu Ala Gly Arg Ala 530 535 540 〇

Glu Leu Ala Gly Arg Cys Glu Arg Pro Ser Pro Ala Tyr Leu Ala Ala 545 550 555 560

Leu Ala Gly His Ser Ala Arg Met Arg Ala Trp Thr Val Val Val Thr 565 570 575

Val Leu Gly Val Val Pro Pro Ala Ser Asp Asp Glu Asp His Ala Asp 580 585 590

Val Gin Glu Gin Ala Ala Ser Arg Gin Glu Ser Ser Ser Ser Val Arg 595 600 605 ©Pro Leu Ser Ser Gin Ser Asp Arg Ser Val Thr Arg Gly His Gly Thr 610 615 620

Ala Glu Pro Ala Gin Ala Gly Ala Gly Pro Ser Ser Pro Pro Pro Val 625 630 635 640

Ala Pro Leu Arg Gly Met Arg Leu Gly Ser Arg Ala Arg Ser His Lys 645 650 655

Gly Ser Leu Ser Ala Pro Gin Asp Pro He Pro Glu Thr Gly Glu Glu 660 665 670

Pro Val Arg Gin Pro Asp Gly Ala Gly Ala Lys Pro Lys Val Gin Ala 675 680 685 -17- 200936052 lie Leu Glu Ala Pro Lys Pro Ala Leu Glu Pro Pro Ser Trp Asn Ser 690 695 700

Trp Ala Ser Glu Val Ala Ser Val Glu Ala Arg Leu Ala Gly Ala Asp 705 710 715 720

Glu Gly Pro Arg Gly Lys lie Val Glu Pro Glu Tyr Arg Gly He Ala 725 730 735

Pro Ser Arg Ser Thr Thr Thr Val Ala Thr Ser Arg Ser Val Val Pro 740 745 750

Ser Ala Ala Ser Ala Ala Ser Gly Thr Val Val Ser Met Gly Arg Arg _ 755 760 765 〇

Ala Lys Gly Lys Glu Arg Glu Val Glu Arg Ala Asp Gin Val Glu Ser 770 775 780

Ser Ser Gly Ser Ser Asp Gin Ala Ser Gly Gly Ser Arg Gly Glu Glu 785 790 795 800

Leu

<210> 7 <211> 812 <212〉 PRT

<213>稻熱病病菌金色病毒1(厘&£1^?01：1：116 0巧2&6〇1巧80丫^]：118 1) <400〉 7

Met Ala Met Gly Thr Thr Gly Gly Gin Leu Ala Ser Lys Leu Arg He 15 10 15

Asp Gin Gly Leu Gly Leu Pro Asp Ala Phe Leu Arg Gin Asp Gly Lys 20 25 30

Gly Gly Gly Ala Asp Gly Gly Ala Asp Gly Glu Trp Ala Ala Phe Gly 35 40 45

Leu His Ser Gly Ala Ala Pro Asp Asn Ala Pro Pro Arg Val Val Pro 50 55 60 -18- 200936052

Ala Ala Leu Asp Ala Ser Ser Gly Ala Gly Arg lie Asp Thr Leu Arg 65 70 75 80

Pro Leu Val Gly Asp Val Ala Tyr Ser Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Glu 85 90 95

Thr Asp Tyr Asp Val Thr Lys Asp Glu Glu Ala Ser Pro Thr Asp Val 100 105 110

Ser His Ser Val lie Cys Ser Tyr Ala Leu Glu Val Asp Gly Arg Thr 115 120 125

Ala Leu Asn Arg Ala Asp Val Ala Ser His Cys Ala Val Tyr Pro Pro 130 135 140 ❹

Met Val Arg Arg Ala Ser Ala Thr Pro Val Ser Val Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160

Thr Thr Ser Arg Leu Thr Ser Ala Ala Ala Ala Cys Asp Gly Leu Ala 165 170 175

Met His Ala Gly Ser Gly Asn Asn Ala Asp Val Ser Leu Gly He Gly 180 185 190

Arg Glu Phe Met Tyr Asp Arg Ala Arg His Gin Glu Asn Gly Leu Glu 195 200 205 ^ Ser Val Phe Val Arg Met Trp Leu Val His Leu Ser Val Leu Ala Arg 210 215 220

Gin Pro Val Thr Gin Val Val Asp Pro Ala Val Leu Ser Ala Arg Phe 225 230 235 240

Ala Asn He Ala Ala Pro Ala Glu Ser Asp Ala Ala Arg Ala Met Arg 245 250 255

Gly Val Lys lie Asn Ala Arg Gly Leu Thr Asn Thr Ala Leu Ala Leu 260 265 270 -19 200936052

Leu Val Leu Gly Cys Ser Asp Thr Ser Gin Ala Ala Gly Leu His Tyr 275 280 285

Arg Ala Arg Arg Tyr Lys Phe Ala Arg Ser Ala Leu Ser Met Tyr Gly 290 295 300

Met Gin Gly Leu Gly Arg Val Ala Val Ala Leu Asp Arg Ala Glu Val 305 310 315 320

Thr Gly Leu Ala lie Val Ser Leu Ala Glu Arg Tyr Gly Ala Glu His 325 330 335

Ala Cys Gly Ala Gly Leu Gin Thr Ala Leu Met Met Tyr Gly Val Asn 340 345 350 ❹

Asp Ser Gly Arg Tyr Val Gin Leu Lys Cys Pro Glu Pro Glu Leu His 355 360 365

Asp Asp Val Ala Thr Thr Ala Gly lie Arg Ala Leu Ser Val Lys Ser 370 375 380

Tyr Ser Asp Leu Ser Asp Asn Arg Leu Leu Ser Leu Ser Leu Phe Val 385 390 395 400

Gly Arg Ala Trp Arg Gin Ser Ala Gly His Leu Leu Arg Ser Ser Thr 405 410 415 ©Met Gin Thr Thr Thr Ala Asp lie Asp Ala Val Val Asn Thr Leu Leu 420 425 430

Pro Ser Gin Gly Ala Leu lie Lys Ala Val Gly Ser Ala His Ala Arg 435 440 445

Ala Met Gly Trp Val Ala Pro Leu Val Asp Thr Val Ser Tyr Val Glu 450 455 460

Gin Asn Tyr Arg Leu Leu Trp Glu Glu Arg Gly lie Val His Cys Leu 465 470 475 480

Ala Leu Gly Leu Arg Val Pro Asn Ser Val Leu Glu Glu Ala Thr Ala 485 490 495 -20- 200936052

Val lie Glu Val Pro Tyr Pro Pro Ala Leu Ser Pro Ser Asp Asp Pro 500 505 510

Arg Ser Ala Gly Pro Arg Ala Gly Ser Leu Ala Thr Leu Gly Leu Val 515 520 525

Glu Ser Leu Leu Ser Ser Ser Gly Glu Gly Leu Cys Gly Ser Ala Arg 530 535 540

Ala Arg Gly Arg Arg Gin Ala Gly Leu Val Ala Val Pro Ala Gin Val 545 550 555 560

Val Ala Leu Ala Gly His Arg Val Gin Phe Thr Leu Leu Ser Val Ala 565 570 575

Ser Gly Val Ala Val Arg Val Glu Glu Leu Pro Thr Arg Pro Leu Leu 580 585 590

Ala Glu Pro Leu Gin Thr Gly Leu Glu Ala Val Glu Tyr Val Gin Val 595 600 605

Pro Trp Ala Pro Ala Gin Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Pro Val Glu 610 615 620

Phe Arg Asp Thr Leu Asp Gin Phe Leu His Ala Tyr Lys Pro Ser Arg 625 630 635 640 ^ Ser Val Leu Glu Gin Pro Arg Val Glu Val Thr Pro Arg Met Gin Ser 645 650 655

Gly Ser Asp Val Leu Asn Val Val Leu Pro Glu Asp Thr Pro Ala Pro 660 665 670

Leu Arg Asp Ser lie Met Gly Gly Thr Leu Thr Pro Val Ser Ala Ala 675 680 685

Gly Val Gly Gly Cys Ala Glu Ala lie Val Asn Ser Leu Gin Ala Gin 690 695 700 -21- 200936052

Tyr Gly Val Thr Val Ser Thr Gly Glu He Glu Lys Glu Leu Gin Gly 705 710 715 720

Asp His Ser Gly Gly Glu Leu Leu Gin Val Gly Ala Met Ala Ser Ala 725 730 735

Leu Ala Lys Phe Gly Asp Tyr Arg Leu Val Leu Leu Asp Glu His Ser 740 745 750

Gin Gly Val lie Leu Arg Ala Gly Asp Ser Gly Ser Lys Pro Val Thr 755 760 765 lie His Arg Asn Gly Ala Ser Tyr Asn Ala Leu Gly Arg Gly Pro Gly 770 775 780 o

Arg Ala He Arg Val Gly Leu Arg Ser His Gly Pro Pro Ala Arg Glu 785 790 795 800

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<210〉 8 <211> 743 <212> PRT <213〉稻熱病病菌金色病毒 l(MagnaportheoryzaeChrysoviirus 1) <400〉 8

Met Gly Gin Ser Val Tyr Glu Pro Ser Ala Glu Leu Pro Thr Glu Thr ❹ 1 5 10 15

Gin Gin Ser Tyr Ala Leu Ser Pro Gly Ser Phe Gin Gly Asp Ala Leu 20 25 30

Ala Ala Leu Ser Thr Leu Gly Lys Val Pro Ala Leu Glu Val Ala Gly 35 40 45 lie Val Arg Arg Gly Ala Thr Val Leu Gly Lys Leu Ala Pro Pro Ser 50 55 60

Glu Asp Gin Thr Tyr Ala Arg Leu Tyr Arg Glu Ala Arg Asp Tyr Val 65 70 75 80 -22- 200936052

Gly Asn Asn Thr Glu Ala Glu Val Glu Arg Pro Val Asp Arg Val Trp 85 90 95

Ala Glu Thr Ser Glu Pro Arg Leu Ser Arg Thr Ala Met Ala Arg Ala 100 105 110

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Gly Pro Asp Ala Ala Arg lie Val Ala Gin Pro Leu Asp Ala Arg Glu 130 135 140

Pro Gly His Phe Ser Asn Leu Ala Pro Trp He Val Gly Val Leu Asn 145 150 155 160 ❹

Gly Thr Thr Gly Ala Phe Glu Gly Asp Ala Leu Arg Leu Ser Ala Arg 165 170 175

Thr Thr Pro His Val Asp Asp Gly Trp Leu Gly Ala Gin Ala Leu Thr 180 185 190

Arg His Asp lie Asp Val Arg Leu Ala Pro Ser Asn Ala Ala Cys Thr 195 200 205

Val Ser Val Leu Val Gly Val Asp Tyr Val Ala Gly Lys Pro Val Leu 210 215 220 OHis His Met Ala Val Ala Gly Tyr Gin Asp Ala Arg Pro Pro Leu Arg 225 230 235 240

Arg Leu Thr Leu Ala Leu Cys Glu Ala Leu Thr Tyr His Val Ala Val 245 250 255

Gly Gly Val Leu Pro Val Asn Ala Val His Lys Arg Gin Cys Ser Asn 260 265 270

Tyr Thr Asp He Met Ser Ala Glu Ala Tyr Ser Asp Pro Pro Ala Pro 275 280 285 -23 200936052

Asn uin Leu uiy Pro Arg Val Ser Thr Asn Pro Pro Glu Gly Cys Leu 290 295 300

Ala Gin Leu Val Gin Val His Gin Tyr Asp Val Gin Thr Gly Val Ser 305 310 315 320

Thr Gly Val Met Ser Ala Arg Asp Val Pro Pro Ser Ala Phe Tyr Phe 325 330 335

Gly Gly Thr Pro Asn Gly Arg Asn Thr Gly Tyr Ala lie Met Arg Val 340 345 350

Glu Val Asp Gly Val lie Thr His Val Leu Thr Gly Ala Val His Met 355 360 365

Lys Gly His Pro Ala Phe Leu Leu Ser Gly Arg Arg Arg Gin Pro Cys 370 375 380

Val Arg Asp Gly Leu Tyr Ser Pro Gly Ala Val Cys Lys Leu Phe Gly 385 390 395 400

Asp Gly Gly Gly Gly Leu Cys Met Arg Ala Glu Asp Ala Ser Gly Ala 405 410 415

Asp Arg Glu Leu Arg Thr Val Trp Ser Asp Ala Leu Ser Asn Glu Asn 420 425 430

Lys Thr Ala Ala Val Arg Ser Arg Asp Pro Leu Ser Ala Ala Ser Leu 435 440 445

Leu lie Ala lie Ala Lys Leu Asn Gly Trp Gin Ala Arg Pro Ala Gly 450 455 460

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Val Glu Phe Trp Pro Thr Ser Gly Pro Arg Trp Leu Glu Val Val Ser 485 490 495

Phe Asp Glu Glu Val Asp Leu Gly Pro Glu Gly Asp Asp Gly Gin Cys 500 505 510 -24- 200936052

Asp His Pro Ser Glu Leu Ala Leu Asp Tyr Trp Leu Ser Gly Leu Ala 515 520 525

Arg Tyr Met Leu Lys Asp lie Thr Arg Asn Gly Tyr Leu lie Lys Gly 530 535 540

Cys Gly Lys Tyr Ala Arg Asn Glu Ser Ser Pro Phe Gin Ala Gin His 545 550 555 560

Thr Ala Ala Pro Gin Ala Ser Cys Asp Val Val Val Ser Ala Trp Arg 565 570 575

Val Glu Thr Lys lie Gly Pro Ala Lys Ala Ser Tyr Met Tyr Asn Leu 580 585 590 ❹

Gly Val Ala Val Cys Ala Ala Gly Ala Val Val Ala Thr Ser Asn Leu 595 600 605

Val Asp Val Asn Ala Glu lie Arg Arg Gly Ala Val Val Gly Asn Gly 610 615 620

Asn Val Leu Ala Ala Tyr Asp Arg Arg Thr Arg Ser Glu Val Ala Arg 625 630 635 640

Ala Asp Leu Leu Ala Val Leu Lys Gly Leu Ser Arg Leu Ala Met Ala 645 650 655 ❹ Gly Ser Val Arg Val Tyr Ser Ala Thr Gin Ala Gly Asn Asp Gin Ala 660 665 670

Asp Val Asn Val Leu Arg Ser Asp Gly Lys Ser Gly Pro Ser Ala Arg 675 680 685 lie Met Glu lie Gly Thr Leu Val Glu Arg Arg Gly Ser Ala Ala Asp 690 695 700

Ala Gly Ala Asp Ala Ser Gly Ala Ala Val Ser Ser Gly Val Ala Ala 705 710 715 720 -25- 200936052

Asp i'hr Uly ϋΐη Pro Val Thr Leu Ala Gly Ala Asp Glu Leu Trp Ala 725 730 735

Thr Leu Arg Arg Leu Val Arg 740

-26-

Claims (1)

1. 200936052 七、申請專利範圍： 1. —種具有2.8至3.6kb之四種類的雙股RNA之真菌病毒 (mycovirus)，具有植物病害真菌抑制作用。 2. 如申請專利範圍第1項之真菌病毒（my co virus)，其抑制該 植物病害真菌的分生子形成。 3. 如申請專利範圍第1項之真菌病毒（mycovirus)，其具有與 金色病毒科（Chrysoviridae)病毒基因體中編碼RdRp(RNA 依賴性RNA合成酵素）之區域有相同性之雙股RNA。 0 4.如申請專利範圍第1項之真菌病毒（mycovirus)，其係對稻 科植物抑制植物病害真菌。 5. 如申請專利範圍第1項之真菌病毒（mycovirus)，其抑制稻 熱病病菌。 6. 如申請專利範圍第1項之真菌病毒（mycovirus)，具有序列 號碼1至4之序列。 7. —種真菌病毒（mycovirus)基因，具有序列號碼1至4之四 種類的序列。 Q 8. —種核酸，至少具有序列號碼1至4之任一之序列或該序 列中具有規定機能之特定部分的序列。 9.一種蛋白質，具有序列號碼5至8之任一之序列。 10. —種植物病害真菌之弱毒菌株，含有如申請專利範圍第1 項之真菌病毒（mycovirus)。 11. 如申請專利範圍第10項之弱毒菌株，其爲寄存號碼「ATCC PTA-9137」之菌株。 12. —種植物病害防除劑，至少含有如申請專利範圍第1項之 真菌病毒（mycovirus)及/或如申請專利範圍第1〇項之植物 200936052 病害真菌之弱毒菌株。 13. —種植物病害真菌抑制性真菌病毒（my co virus)生產方 法，至少包括以液體培養基培養如申請專利範圍第1項之 真菌病毒（mycovirus)，從該培養上清液回收該真菌病毒 (mycovirus)之步驟。 14. 一種植物病害真菌弱毒化方法，包括使如申請專利 1項之真菌病毒（mycovirus)感染至植物病害真菌之 驟。 15. —種植物病害真菌防除方法，包括將如申請專利 理^果1 2 Ο 項之防除劑附加於植物之工程。 ❹ 200936052 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：無。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： Μ 〇 jw\ 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：