TW200812687A - Apparatus for the separation of a resin from a reaction mixture - Google Patents

Description

200812687 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明涵蓋用於自反應混合物中、特別是自醱酵液中分 離樹脂之裝置，及使用此裝置自反應混合物中分離樹脂之 過程。 【先前技術】 自反應混合物中分離產物有時可能非常複雜且乏味，導 致低的產物產率且有時亦導致低純度。舉例而言，當固體 存在於具有使自固體中分離產物複雜的不同性質之反應混 合物時，證明此問題。另一實例為醱酵過程，其中諸如微 生物之生物製劑在有機或無機物質上生長，且在生長期間 或在生長之後，生物製劑產生感興趣之有機物質。通常， 過濾所得醱酵液以移除無用的生物質量（亦即，微生物細 胞），且在分批或層析管柱中用結合感興趣之特定產物之 樹脂處理所得澄清濾液。接著洗滌樹脂以移除不必要的雜 貨，且用適合之溶劑混合物溶離所要產物。在下游過程期 間，合成及天然樹脂被廣泛地用於恢復及純化醱酵產物。 最近，以上方法已藉由在醱酵期間添加樹脂或在過濾之 前將樹脂添加至收集液中來實施，如下列各者中所揭示 的：Journal Ind. Microbiol. 5:283-288 ; Journal of Industrial Microbiology 1996，16，305-308 ; J· Antibiot· 55:14卜 146 ; Biotechnology and Bioengineering, 78(3):280-288, (2002) ； Letters in Applied Microbiology 2003, 37, 196-200 ;美國專利申請案 US 2005/0170475 A1 及J. Nat. Prod. 2002, 65, 570-572。 122588.doc 200812687 此方法具有右干優點，例如，其可增加醱酵之生產力且/ 或改良產物穩定性，且/或增加萃取率。 在該等過程中，存在關於自反應混合物（例如，完全酸 酵液）中分離樹脂之顧慮，其提出嚴肅的技術問題，尤其 在該過程係以工業規模進行時。 ’、 -種用於自反應混合物中分離樹脂之已知I置為，，膨服 床吸附 其由現為GE Healthcare group之部分之 Amersh謹Bi〇sciences供應，該，，膨脹床吸附，，為使用 STREAMLINEtm吸附劑之單元操作及用於自粗原料直接回 收蛋白質之管柱。然而，膨脹床吸附技術最常用 於蛋白質之初步捕獲。 在 J· Antibiot· 55:141-146，（2002)中，將 8.9x33 cm 之管 柱用於捕獲產物。 在 Biotechnology and Bioengineering，78(3):280-288，（2002) 中，僅處理醱酵液之小樣本，而非處理全部醱酵液。在此 〇 等樣本中，樹脂藉由重力沈降且傾析含有細胞之培養液。 在 Letters in Applied Microbiology 2003，37，196-200 中’藉由以1670g離心分離含有菌絲體之培養樣本與樹脂 1 0分鐘，且丟棄培養上澄液。 美國專利申請案US 2005/0170475 A1揭示藉由用1〇公克 XAD 16珠子攪拌6小時來處理一公升醱酵液。接著離心分 離混合物並移除上澄液。 J· Nat· Pr〇d· 2002，65，570-572揭示使用線網過濾籃自 1〇〇〇 L醱酵液收集二十公升xad 16樹脂。 122588.doc 200812687 此項技術中存在璧+ Μ & e 、 ;自反應混5物（特別是整個醱酵液 分離樹脂之更多裝置的需要。 【發明内容】 在實加例中，本發明提供一種用於自反應混合物中分 離树月曰之衣置’其中該裝置為—旋轉圓柱形管柱，苴呈有 一側孔及各自配備-由—支撐栅格支撐之多層㈣的兩個 凸緣（管柱之任一末端上一個）。

G 在另-實施例中，本發明提供—種用於自反應混合物中 分離樹脂之過程，丨包含給管柱裝上反應混合物、自反應 混合物濾去樹脂、洗滌樹脂及自樹脂溶離產物，其中樹脂 在整個過程期間保持在管柱中。 【實施方式】 本發明之裝置允許自反應混合物中分離樹脂，同時避免 操料與樹脂之實體接觸（亦即，樹脂自反應混合物之手 動私除）又’此裝置允許進行產物自樹脂之溶離，無需 為了溶離步驟而自過濾器手動地移除樹脂且將其置於管柱 中。^此，當進行大規模反應時，此裝置係較佳的。此 外*產物較濃時，此裝置尤其有利，從而避免產物與環 土兄之接觸，自操作者觀點看，此亦係一所需要之因素。 本t明提供一種用於自反應混合物中分離樹脂之裝置， 其中該裴置為旋轉圓柱形管柱，其具有一側孔及各自配備 一由一支撐栅格支撐之多層網篩的兩個凸緣（管柱之任一 、上個）。較佳地，反應混合物為來自固相化學合成 去之醱酵液或混合物。較佳地，樹脂為聚合吸附樹脂。更 122588.doc 200812687 佳地，樹脂為聚苯乙烯/二乙烯苯吸附樹脂（例如， Amberlite XAD16，Amberlite XAD4，Diaion HP20， Amberlite XAD1600，Amberlite XAD1180，Diaion HP21，

Sepabeads SP825 ， Sepabeads SP850 ， Sepabeads SP70 ， Sepabeads SP7〇0或Sepabeads SP2〇7)或聚丙稀系吸附樹脂 (例如，Amberlite XAD7 或 Diaion HP2MG)。Amberlite XAD 為 Rohm and Haas Co·之商標，且Diaion 及 Sepabeads 樹

u 脂係由Mitsubishi Chemical供應。亦存在此等類型樹脂之 其他供應商。或者，可使用起不同吸附相互作用（例如， 離子交換、親和力、金屬親和力、疏水性相互作用等）之 樹脂。 4十加〜〜私且 < —平乂住貫施例。以下 實施例不欲限制本發明n且熟f此項技術者應認識 到，存在在本發明之範疇内的其他實施例。 如圖1中所陳述的’該褒置包含一附著至一支撐結構2之 0柱：官柱1 ’以使得圓柱形管柱1可藉由至支標結構2的 =附著:_繞其水平轴㈣’徑向轴㈣。管柱! 車乂仏為一空的層析管柱。 寸且可固定咬移動_ “構2可具有任何形狀或尺 ”構允坤(例如，安裝在輪上)，其限制條件為： 4、·，口構允許管柱i旋轉。至少— 十勹 圍繞其徑向細Α 可匕括允許管柱；i 管柱ϊ可藉由至少—為了付&本發明， 夕附者點Μ安裝至支撐社描？ ，土 在兩個附著點10(管柱！之每 牙-構2’但較佳存 10較佳位於管柱J的中間且# =，且此等附著點 佳被此徑向相對地定位。較 122588.doc 200812687

么地’兩個附著點10各自包括一焊接在管柱戈之外側辟之 中間的轴(垂直於管柱”，其中該等附著點1〇在管柱二目 對側上。較佳地，該等軸經由一轴承系統與支擇結構2接 觸，允許管柱1旋轉，且一個軸被連接至一空氣驅動馬達 以促進旋轉。圓柱形管柱,包括一側孔3及兩個凸緣4/5(其 可被稱為頂凸緣4及底凸緣5)，其中當管柱】處於垂直位置 時’頂凸緣4位於比底凸緣5高的垂直位置。凸緣仍各自 配備；網筛6’其較佳為多層的且由一支撐栅格7支撐。側 ^ 3較佳大致定位在該圓筒之縱向部件之中心且較佳與圓 筒之内部部件連通。另外，圓柱形管柱1之末端係於管柱 之每一側上連接至人口 8/出〇9。之尺寸可根據待過 慮之樹脂的量及分離之難度改變，且熟習此項技術者應能 夠確定適當的管柱尺寸。 視情況，當所需操作溫度不同於環境溫度時，管柱^可 為夹套的。 υ 車乂乜，界定網篩6之篩孔尺寸，使得樹脂及所附著之產 物保留在管柱1内，而濾出反應混合物之其餘部分(例如， I溶廢料，在醱酵反應之狀況下，包括微生物細胞、反應 。物之不，谷及/或未使用組份）。較佳地，提供圖中未顯 ^之額外孔及連接件，其在凸緣4/5之任一末端或兩個末 立而上以允許處理流體流動且允許諸如壓力計及/或溫度計 之儀錶之安裳。 交it地圖1中出現之裝置的部件1-5及7-10係由選自金 屬。至、塑膠、玻璃及玻璃襯裏材料組成之群之材料製 122588.doc -10- 200812687 成’其中該材料係根據洗滌及溶離過程中所使用之溶劑而 j擇。更佳地，該材料為金屬合金，且最佳為不銹鋼。較 佳地，網篩6係由金屬合金·或塑膠製成。較佳地，任何密 封墊或0形環係由與所用溶劑相適合之材料製成。較佳 地’该材料為聚四氟乙烯（pTFE)。 凸、、彖4/5用於穩定該系統。因此，只要能支撐管桎i，該 等凸緣可具有任何所要形狀。

υ 本發明提供一種用於自反應混合物中分離樹脂之過程， 其包=給官柱裝上反應混合物、自反應混合物濾出樹脂及 所附著之產物、洗滌樹脂及所附著之產物及自樹脂溶離產 物’其中樹脂在整個過程期間(亦即，在過滤、洗= 離步驟期間）保持在管柱中。 二將參看圖2至圖4描料發明之過程之一較佳實施例 (砰5之’如應用於來自醱酵液之反應混合物的該過程之 -較佳實施例）。以下實施例不欲限制本發明之範疇，且 ，習此項技術者應認識到，存在在本發明之範田壽内的其他 實施例。 如圖2至圖4中所陸# & 厅陳过的，獒供一種用於自反應混合物分 離樹脂之製程，其包含於其 、 3於&柱1中加入反應混合物、自反 應混合物濾、出樹脂免私 无4树月曰及自樹脂溶離產物，其中樹 脂在整個製程期間留在瞢 在g柱1中。產物可藉由任何機制（包 括（但不限於）吸收、 於7』 附 '離子相互作用、親和力相互作

用及疏水性相互作用彳阶4 M )附者至树脂。較佳地，產物係選自 由巨環内酯類（特別是气 A 巨大内酯）、多肽類、醣肽類、 122588.doc 200812687 核芽酸類及蒽環黴素類組成之群。更佳地，產物係選自由 埃博黴素（Epothilone)(特別是埃博黴素D)、絲裂徽素、产 孢素、博萊黴素（Bleomycin)、道諾黴素（Daun〇ruMci勾及 氟達拉賓（Fludarabine)組成之群。最佳地，產物為埃博黴 素D。 較佳地’經由管柱1之側孔3加入反應混合物，同時維持 • 管柱1處於水平位置，如圖2中所示。較佳地，接著濾去樹 Q 脂’同時藉由在經由入口 8/出口 9中之至少一者將反應混 合物之廢料推出管柱1的同時使樹脂保持在管柱i中，管柱 1仍維持處於水平位置。較佳地，藉由重力推出廢料，但 亦可使用壓力、真空或兩者之任意組合。壓力及/或真空 可藉由將泵或其他壓力產生設備附接至入口8/出口 9中之 任一者或兩者及/或側孔3而施加至管柱1。或者，壓力及/ 或真工可經由凸緣4/5中之任一者或兩者上的一額外口或 連接件而施加至管柱1。 〇 廢料可為不需要且可藉由過濾過程排除之生物體或任何 ./、他組伤。生物體可含有微生物細胞、酸酵培養基（例 如’麵粉、澱粉、碳酸鈣等）之不溶及/或未使用組份。較 佳地’廢料經由入口 8/出口 9中之一離開管柱1。視情況， 入口 8/出口 9兩者可用於移除廢料，因此使過濾表面加 七°視情況，可使用壓力或真空以加速過濾。較佳地，如 圖2中所描繪的，在阻塞之狀況下，可使用廢棄反應混合 物或使用新溶劑藉由反沖洗清洗網篩6。用於反沖洗之溶 劑較佳為與洗滌所用相同之溶劑。 122588.doc -12- 200812687 —洗滌樹腊及戶斤附著之產物係ϋ由添;^容劑至管柱i進 劑可經由側孔3或人σ 8/出口 之任-者添加。 較么地’洗滌包括在添加溶劑至管柱1之前將管柱1移動至 垂直位置（如圖3所示）。較佳地，該溶劑係選自由下列各物 組f之群：、水’酸性水（例如，諸如鹽酸及硫酸之無機酸 水洛液，或諸如甲酸或乙酸之有機酸水溶液等），驗性水 (例如’諸如氫氧化鈉及氫氧化鉀之氫氧化物鹼性水溶 液’或諸如碳酸納或碳酸卸之碳酸鹽驗性水溶液等），緩 衝溶液，溶解或部分溶解於水或緩衝溶液中之有機溶劑， 及其混合物。較佳地，有機溶劑包括(但不限於)丙_、甲 酵、乙醇、異丙醇、四氫咬喃、乙腈、二甲基甲醯胺、二 甲基亞砜及/或乙酸乙酯。較 — 孕乂彳土地有機〉谷劑為甲醇。較 佳地’溶劑為水。可借用纺 使用與產物之穩定性及溶解度相容的 任何緩衝液。緩衝液包括以 括（仁不限於）醋酸鹽、碳酸鹽、碳 υ 酸氮鹽、填酸鹽及錄化合物（例如，醋酸鈉或醋酸）。較佳 地，如圖3中所陳述的，溶劑# 土 /合Μ係自最上部入口 /出口 8添加 或使用壓力自最底部入口 /屮 出9添加。較佳地，在洗滌期 間敢小置或無產物與樹脂分開。 較佳地’重複洗滌以確保廢料之分離。較佳地，管柱1 可彺復旋轉（亦即，水平至番古 十至垂直且反之亦然）。自底部洗務 可使樹脂懸浮。 w 較佳地，如圖4中所險被+ w 所陳麵，產物之溶離係、藉由將管柱i 置於垂直位置且經由頂部入口 / 出口 8添加適合之溶劑 行。較佳，該溶劑係選自由 了用於洗滌步驟之相同溶劑 122588.doc -13 - 200812687 (如上所述）、不混水有機溶劑及其混合物組成 制條件為：用於溶離之$ 限 劑在組成及比例上不等同於用於 ::之溶劑。舉例而言，當水與洗滌步驟中所 機 劑之比率比用於洗❹驟的要小，以使得產物可在 驟期間溶離且在洗蘇步驟期間不溶離。所需之特定比率：

ϋ 取決於產物及所使用之樹脂，且可由熟習此項技術者在製 ㈣發期間經由常規實驗容易地確定。不混水有機溶劑包 括(但不限於)甲苯及二氯甲烷。較佳地’含有產物之溶離 液係自底部入口 /出口 9收集。 對每一步驟（過濾、洗滌、溶離）之各種過程參數（溫度、 壓力、時間等)的限制係基於用於裝置之材料的穩定性以 及樹脂及所附著之產物的穩定性。該等限制對熟習此項技 術者而言係顯而易見的。 已根據某些較佳實施例描述了本發明，其他實施例對熟 習此項技術者而言將自考慮本說明書變得顯而易見。本發 明係藉由參考詳細描述本發明之過程及組成之以下實例而 進一步定義。熟習此項技術者將顯而易見，在不脫離本發 明之範疇的情況下，可實現對材料及方法之許多修改。 實例 實例1 ··自含有埃博黴素之反應混合物中分離樹脂 藉由在吸附樹脂存在之條件下醱酵黃色黏球菌 (Myx〇coccus xanthus)菌株進行埃博黴素D之製造，如以全 文引用之方式併入本文中的Lau J，Frykman S5 Hegentin 122588.doc -14- 200812687

Ou S5 Tsuruta H? Licari P? Optimizing the Heterologous Production of Epothilone D in Myxococcus xanthus，Biotechnology and Bioengineering，78(3):281-288，（2002)中所描述的。在酿酵過 程的最後，以如下方式使用上述設備將樹脂自細胞分離： 將8300 L含有233.6 g埃博黴素D之醱酵液及180 L XAD16(購自Rohm & Haas Co·之苯乙烯/二乙烯苯聚合吸附 樹脂）經由側孔3裝入處於水平位置之具有100 cm之高度及 60 cm之内徑的管柱1。過濾、在2小時内進行。將管柱1移動 至垂直位置且用800 L純水以600 L/h之流動速率洗滌樹 脂，直至觀察不到混濁。在用過的醱酵液中偵測不到活 性。 接著使用2300 L 84:16(v/v)之甲醇/水混合物自樹脂溶離 產物埃博黴素D，以96.1 %之產量回收224.5 g之EPO D活 性。將所獲得溶液提供給純化過程之後續步驟，如以全文 引用之方式併入本文中的Arslanian RL，Parker CD，Wang PK，Mclntire JR，Lau J5 Starks C，Licari PJ，Large-Scale Isolation and Crystallization of Epothilone D from Myxococcus xanthus Cultures，J. Nat· Products，65:570-572 (2002)中所報告的。 實例2 :自含有絲裂黴素之反應混合物中分離樹脂 可將8100 L收集液與2000 L曱醇及200 L XAD4樹脂結 合，並在室溫下攪拌16小時。接著可經由側孔3將懸浮液 裝入處於水平位置之管柱1中以過濾樹脂。接著可將管柱1 移動至垂直位置且用1〇〇〇 L純水反沖洗洗滌。可接著用曱 醇溶離產物絲裂黴素，且可恢復收集液中所含的約95%之 122588.doc -15 - 200812687 原始活性’其中計劃回收係基於除以收集液中之產物之量 (原始活性）的溶離液中之產物之預期量。以下實例之預測 產量係類似地測定。 實例3 ·自3有絲裂徽素之反應混合物中分離樹脂 可將7_ L收集液與2_ L甲醇及18〇 [ XAm6樹脂結 合，並在室溫下授拌16小時。接著可經由側孔3將懸浮液 裝入處於水平位置之管柱i以過濾樹脂。接著可將管柱1移 .(、 動至垂直位置並用100〇 L純水反沖洗洗滌。接著可用甲醇 溶離產物絲裂黴素，且可恢復收集液中所含的約92%之原 始活性。 實例4:自含有絲裂黴素之反應混合物中分離樹脂 可在2 /〇(w/v)之XAD7樹脂存在之情況下進行絲裂黴素之 醱酵。在醱酵過程的最後，接著可經由側孔3將醱酵液裝 入處於水平位置之管柱！。可接著在用純水洗滌樹脂之同 時除去用過的醱酵液。接著應使用6倍管柱容積之乙酸乙 CJ 醋以85%之萃取率回收產物絲裂黴素。 實例5 ·自含有環孢素之反應混合物中分離樹脂 可將2850 L環孢素醱酵液與350 L甲醇及200 L XAD1 6樹 脂結合，並在室溫下攪拌16小時。接著可經由側孔3將懸 浮液裝入處於水平位置之管柱j以過濾樹脂。可接著將管 柱1移動至垂直位置且用1〇〇〇 [純水反沖洗洗滌。可接著 用甲醇溶離產物環孢素，且可恢復收集液中所含的約85% 之原始活性。 實例6·自含有道諾黴素之反應混合物中分離樹脂 122588.doc -16- 200812687 在醋酵過程的最後，將8500 L道諾黴素收集液在酸性條 件下於30 C下授拌處理20小時。可接著用ν&〇η溶液將pH 調整為6,且可接著添加· LiiP2〇樹脂，且可接著將懸 〉于液在室溫下搜拌另外16小時。可接著過遽懸浮液、經由 側孔3將懸浮液裝入處於水平位置之管柱1。可接著將管柱 1移動至垂直位置且用1000 1純水洗滌。可接著用丙酮溶 . 冑產物㈣黴素’且可恢復收集液中所含的約70%之原妒 A 活性。 ° (| 實例7:自含有博萊黴素之反應混合物中分離樹脂 可在3%(w/v)之ΗΡ2〇樹脂存在之條件下在1〇〇〇〇 L的醱酵 才曰中進行博萊彳數素之酸酵。在酸酵過程的最後，可接著經 由側孔3將醱酵液裝入處於水平位置之管柱i。可接著在用 純水洗滌樹脂的同時除去用過的醱酵液。接著應使用7倍 官柱容積之8(h2〇(v/v)之純水/丙酮混合物以9〇%之萃取率 回收產物博萊徽素。 ϋ 實例8 ··自含有氟達拉賓之反應混合物中分離樹脂 在1000 L之不銹鋼反應器中，可將2400 g的2-氟腺嘌呤 懸浮在pH為7的400 L磷酸鹽緩衝液/二甲基甲醯胺8〇:2〇 (v/v)混合物中。可接著將6000 g阿拉伯糖尿嘧啶（ARA-lJ) 及8400 g E.Coli NP25細胞糊狀物添加1〇〇 L XAD16樹脂。 可接著在60°C下將懸浮液攪拌24小時，且接著使用處於水 平位置之管柱1過遽以除去無用的細菌細胞及非結合副產 物。可接著將管柱1移動至垂直位置並用4 0 0 L純水洗務。 可接著用90:1 〇(v/v)之二甲基甲醯胺/純水混合物溶離產物 122588.doc -17- 200812687 氟達拉賓，且藉由添加額外水至 σ 平取物而沈澱。 【圖式簡單說明】 圖1為處於垂直位置的本發 @ ^ — 知73之哀置之一實施例之側視 圖的示意圖。 圖2為在自反應混合物濾、去樹脂期間處於水平位置的本 卷明之裝置之一實施例之側視圖的示意圖。 圖3為在洗滌樹脂期間處於垂直位置的本發明之裝置之 一實施例之側視圖的示意圖。 圖4為在自樹脂溶離產物期間處於垂直位置的本發明之 裝置之一實施例之側視圖的示意圖。 【主要元件符號說明】 1 管柱 支撐結構 2 Ο 3 4 5 6 7 8 9 10 側孔 凸緣 凸緣 網篩 支擇柵格 入口 出u p付著點 122588.doc -18-

Claims (1)

1. 200812687 十、申請專利範圍·· 1 · 一種用於占 轉圓細二反應混合物分離樹脂之裝置，其包含-可旋 筛。开/…其中該圓柱形管柱之每—末端具備一網 长項1之裝置，其中位於該圓柱 該等網筛係裝配至-支撐栅格。开”柱母末㈣ 3·如請求項2之裳置，其中 撐 …、 ϋ 4.如前述技击 #叉保柵格设有-凸緣。 層。 員中任一項之裝置，其中該網篩包含多個 5 ·如鈿述請求項中任一 向軸旋轉。 、▲置，其中該管柱可圍繞一徑 6.=項5之裝置’其中該管柱係藉由至少一個附著點 徑向：:一其中該附著點可使該管柱圍繞- 7· 置’其中該管柱係藉由兩個附著點安裝 :’其令該等附著點係彼此徑向相對地定 便遠&柱圍繞一徑向軸旋轉。 由：^;:7之裝置’其中該兩個附著點中之每一點係藉 ^至該管柱之—外表面上之軸接合，其中每一轴 係凌配至該支撐結構。 統與該支撐結構接觸 9·如％求項8之裝置，其中該 統盥社* ^ 孕H由一軸承系 10 ·如請求項8或9之奘罢 甘+ 達。 戈9之4置，其中至少-個軸係連接至一,, 122588.doc 200812687 11. 12. 13. 14. η 15. 16. 17. υ 1δ· 19. 20. 21. 士刖述明求項中任一項之裝置，其中該圓柱形管柱設有 一與該圓筒之内部部件連通之側孔。 月求項11之裝置，其中該側孔係定位在該圓筒之縱向 部件上。 月求員12之裝置，其中該側孔係大致定位在該圓筒之 縱向部件之中心。 如前述請求項中任-項之裝置，其中每-凸緣設有至少 一個與該圓筒之該内部部件連通之入口 /出口。 如：述晴求項中任—項之裝置，其中該網篩或該網筛之 ϋ亥等多個層形成一含有附著產物之該樹脂保留在該管桎 内同日守使该反應混合物之剩餘部分通過的篩孔尺寸。 月求項14至15中任一項之裝置，其中該等凸緣中之一 者2兩者設有可處理流體流動及/或安裝儀錶之額外孔。 如前述請求項中任-項之裝置，其中該管柱設有一絕緣 層。 如請求項17之裝置，其中該絕緣層為一夾套。 如前述請求項中任一項之裝置，其中該管柱、該支撐結 構^側孔、該人σ/該出口、該等凸緣及該支撐栅格係 由選自由金屬合金、塑膠、玻璃襯裏材料及玻璃組成之 群之材料製成。 如前述請求項中任一項之裝置’其中該管柱、該支撐結 構、該侧孔、該入口 /該出口、該等凸緣及該支撐柵格係 由金屬合金製成。 月求項20之裝置，其中該金屬合金為不銹鋼。 122588.doc 200812687 22·如前述請求項中任一項之裝置 1至圖4中。 其中該裝置係描繪於圖 23· —種用於自反應混合物分離樹脂之製程，其包含於該管 柱中加入反應混合物、自該反應混合物濾出該樹脂、洗 滌該樹脂及自該樹脂溶離產物，其中該樹脂在整個製程 期間保留在該管柱中。 24·如請求項23之製程，其包含：

   (a) 於如請求項1至22中任一項所定義之裝置之該圓柱 形s柱中加入含有具有附著產物之樹脂之反應混合物； (b) 自該反應混合物過濾具有附著產物之該樹脂，使 得剩餘反應混合物作為廢料自該管柱移除； υ (Ο用第一種溶劑洗滌具有附著產物之該樹脂；及 (d)用第二種溶劑自該樹脂溶離該附著之產物， 其中該樹脂在步驟（b)至（d)期間保留在該管柱中。 25.如請求項24之製程，其中當該管柱處於水平位置時，該 反應混合物係經由該側孔加入。 26·如請求項23至25中任一項之製程 於水平位置之該管柱進行。 27·如請求項24至26中任一項之製程 一個入口 /出口移除。 其中該過濾係利用處 其中該廢料係自至少 28·如請求項27之製程，其中該廢料係 除0 兩個入口 /出口移 29. 如請求項24至28中任一項之製程 間，對管柱施加壓力或真空以移 ’其中在該過濾步驟 除該廢料。 期 122588.doc 200812687 3〇·如請求項24至29中任一項之製程，其中 在該管柱處於垂直位置時藉由經由最上部入 該第一種溶劑進行。 出口添加 31·如請求項24至3〇中任一項之製程，其中 、 選自由水、酸性水、鹼性水、緩/種溶劑係 Ο ϋ 混合物組成之群，其限制條件為所選擇劑及其 可溶解或部分溶解於水或任何所選緩衝溶液中可有機溶劑 32·如請求項31之製程，其中該有機溶劑係選自由下列“ 择群.丙酮，甲醇’乙醇，異丙醇，四氫吱喃，乙 物。 基亞碾，乙酸乙賴，及其混合 33. 如請求項32之製程，其中該有機溶劑為甲醇。 34. 如=求項31之製程，其中該第—種溶劑為水。 35. ::未項31至34中任一項之製程，其中該緩衝溶液為勺 δ選自由醋酸鹽、碳酸鹽、 ^ 之群之緩衝劑的溶液。…鹽、鱗酸鹽及銨組成 36·如請求項24至35中任一 、 I私，其中該溶離步驟（d)係 =柱處於垂直位置時藉由經由該最上部 口) 加该弟二種溶劑進行。 J、 37·如請求項24至36中任一項之 選自由該第-種溶劑中之任二…中該第二種溶劑係 劑及其混合物組成之群。 不與水混溶之有機溶 38.如請求項π之製程，且 自由甲I β 八不/、水混溶之有機溶劑係選 自由τ本及二氯甲烷組成之群。 222588.doc 200812687 39.如請求項24至38中任一項之製程，其中該所附著之產物 係選自由巨環内酯類、多肽類、If肽類、核苷酸類及蒽 環徽素類組成之群。 40.如請求項24至38中任一項之製程，其中該所附著之產物 係選自由埃博黴素（Epothilone)、絲裂黴素、環孢素、道 諾黴素（Daunorubicin)、博萊黴素⑺leomycin)及氟達拉 賓（Fludarabine)組成之群0

   41· 一種如請求項1至22中任一項之裝置用於自反應混合物 中分離樹脂的用途。 42.如凊求項41之用途，其中該反應混合物包含選自由巨環 -曰類夕肽類、醣肽類、核發酸類及蒽環黴素類組成 之群之產物。 43. 如請求項4 1之用 儒女素、環抱素、 途，其中該產物係選自埃博黴素、 道諾黴素、博萊黴素及氟達拉賓。 絲裂 υ 122588.doc