CN101489639A - 从反应混合物中分离树脂的装置 - Google Patents

Abstract

提供用于从反应混合物中分离树脂的装置。该装置包括装有侧孔，两个入口/出口，和两个法兰的柱。各法兰装有被支撑载网所支撑的多层网筛。该柱本身连接于支撑结构体上。提供了使用这一装置从反应混合物中除去树脂的方法，其中反应混合物被添加到装置中，和树脂被滤出，作为废物留下保留在柱中。剩下的树脂然后洗涤和洗脱，得到提纯的产物。

Description

从反应混合物中分离树脂的装置

相关申请的交叉引用

本申请要求了美国临时申请No.60/819,951(2006年7月10日申请)，美国临时申请No.60/834,606(2006年7月31日申请)，和美国临时申请No.60/847,805(2006年9月27日申请)的权益。上述这些申请中的每一个以它们的全部内容被引入这里供参考。

本发明的领域

本发明包含从反应混合物中、特别地从发酵液中分离树脂的装置，以及使用这一装置从反应混合物中分离树脂的方法。

本发明的背景

从反应混合物中分离产物的过程有时是非常复杂的并且令人讨厌的，导致低产量的产物和有时还导致低纯度。例如，当在具有不同性质的反应混合物中存在固体物时，显示出这一问题，使得从反应混合物中分离产物的过程变复杂。另一个例子是发酵过程，其中生物制剂(如微生物)在有机或无机类的物质上生长，并且在该生长过程中或之后，该生物制剂产生所述的有机物质。典型地，发酵所得的发酵液经过过滤除去耗尽的生物量(即，微生物细胞)，并且所得的澄清滤液分批次或在色谱柱中用能够结合所述产物的树脂进行处理。树脂然被洗涤以除去不希望有的杂质，然后所需产物用合适的溶剂混合物洗脱。合成和天然树脂广泛地用于在下游过程中发酵产物的回收和提纯。

最近，以上方法已经通过在发酵过程中树脂的添加或通过树脂添加到过滤之前的收获发酵液中来进行，这已公开在Journal　Ind.Microbiol.5：283-288，Journal of Industrial Microbiology 1996，16，305-308，J.Antibiot.55：141-146，Biotechnology and Bioengineering，78(3)：280-288，(2002)，Letters in Applied Microbiology 2003，37，196-200，US专利申请US2005/0170475 A1中，和在J.Nat.Prod.2002，65，570-572中。

这一方法具有几个优点，例如，它能够提高发酵的生产能力和/或改进产物稳定性，和/或提高提取率。

在这些方法中，曾有关于从反应混合物例如整个发酵液中分离树脂的顾虑，它具有严重的技术问题，尤其当在工业规模上进行该方法时。

从反应混合物中分离树脂的已知装置是由现在属于GE Healthcare集团的一部分的Amersham Biosciences所供应的“膨胀床吸附”，它是采用吸附剂和那些用于直接从粗原料中回收蛋白质的柱的一个单元操作。然而，膨胀床吸附(“EBA”)技术是主要用于蛋白质的初级捕获。

在J.Antibiot.55：141-146，(2002)中，8.9×33cm柱用于捕获该产物。

在Biotechnology and Bioengineering，78(3)：280-288，(2002)中，仅仅发酵液的小样品被处理，并且不是整个发酵液被处理。在这些样品中树脂通过重力来沉降并且含有细胞的培养液被滗析出来。

在Letters in Applied Microbiology 2003，37，196-200中，含有菌丝体的培养物样品和树脂通过在1670g下的10分钟离心作用被分离，然后培养物上层清液被废弃掉。

US专利申请US 2005/0170475 A1公开了通过与10克的XAD16珠粒一起搅拌六小时来处理1升发酵液的方法。混合物然后被离心处理，和上层清液被除去。

J.Nat.Prod.2002，65，570-572公开了使用丝网式过滤篮从1000L发酵液中收集20升的XAD16树脂。

在现有技术中需要更多的从反应混合物中，尤其从整个发酵液中分离树脂的装置。

本发明的概述

在一个实施方案中，本发明提供了从反应混合物中分离树脂的装置，其中该装置是具有侧孔和两个法兰(flange)的旋转圆筒柱，所述法兰中一个在所述柱的任一端，这些法兰各自装有由支撑载网(supportnet)所支持的多层网筛(net screen)。

在另一个实施方案中，本发明提供了从反应混合物中分离树脂的方法，该方法包括在柱中填装反应混合物，从所述反应混合物滤出树脂，洗涤树脂，和从树脂中洗脱出产物，其中在整个过程中树脂保留在柱中。

附图的简述

图1是处于垂直位置的本发明装置的一个实例的侧视图的示意图。

图2是在从反应混合物中过滤树脂的过程中处于水平位置的本发明装置的一个实例的侧视图的示意图。

图3是在树脂的洗涤过程中处于垂直位置的本发明装置的一个实例的侧视图的示意图。

图4是在从树脂中洗脱产物的过程中处于垂直位置的本发明装置的一个实例的侧视图的示意图。

本发明的详细说明

本发明的装置允许从反应混合物中分离树脂，同时避免操作员与树脂的直接接触，即从反应混合物中手工除去树脂。同样，这一装置具备了从树脂中洗脱产物而不需要手工从过滤器上除去树脂的特性，并将它置于柱中以进行洗脱步骤。因此，当大规模进行反应时这一装置是优选所需的。另外，当产物有应用潜力时这一装置是尤其有利的，因此避免产物与环境的接触，这也是从操作员观点考虑的令人希望的因素。

本发明提供了从反应混合物中分离树脂的装置，其中该装置是具有侧孔和两个法兰的旋转圆筒柱，所述法兰中一个在所述柱的任一端，这些法兰各自装有由支撑载网所支持的多层网筛。优选，反应混合物是由固相化学合成得到的发酵液或混合物。优选，树脂是聚合物吸附剂树脂。最优选，树脂是聚苯乙烯/二乙烯基苯吸附剂树脂(例如，AmberliteXAD16，Amberlite XAD4，Diaion HP20，Amberlite XAD1600，AmberliteXAD1180，Diaion HP21，Sepabeads SP825，Sepabeads SP850，SepabeadsSP70，Sepabeads SP700 or Sepabeads SP207)或聚丙烯酸吸附剂树脂(例如，Amberlite XAD7 or Diaion HP2MG)。Amberlite XAD是Rohm andHaas Co.的商标，以及Diaion和Sepabeads树脂由Mitsubishi Chemical供应。还有这些类型的树脂的其它供应商。另外地，可以使用以不同的吸附相互作用(例如，离子交换，亲合性，金属亲合性，疏水性相互作用，等等)来工作的树脂。

现在参考图1来描述本发明装置的优选实施方案。下列实施方案不希望限制本发明的范围，本领域中的技术人员将会认识到还有在本发明范围内的其它实施方案。

如在图1中所述，该装置包括附着于支撑结构体2上的圆筒柱1，使得圆筒柱1围绕在该支撑结构体2的至少一个连接点10沿着圆筒柱的水平(即径向)轴可旋转。该柱1优选是空的色谱柱。该支撑结构体2可以是任何形状或尺寸，并且可以是固定的或移动的(例如，装在轮子上)，前提条件是它允许柱1旋转。该至少一个连结点10可以包括让柱1沿着其径向轴旋转的任何机构。虽然，与本发明一致，该柱1可以通过至少一个连结点10安装到支撑结构体2上，优选有两个连接点10，一个在柱1的任一侧上，并且这些连结点10优选位于柱1的中间，并且优选沿直径地彼此对置。优选，两个连接点10各自包括在柱1的外壁的中间上焊接的、垂直于柱1的轴，其中该连结点10位于柱1的相对侧上。优选，该轴通过轴承系统与支撑结构体2相接触，允许柱1旋转，并且一个轴连接到空气驱动的马达以促进旋转。该圆筒柱1包括侧孔3，和两个法兰4/5，它们可被称作顶部法兰4和底部法兰5，其中当柱1处于垂直位置时顶部法兰4位于比底部法兰5更高的垂直位置。该法兰4/5各自装有网筛6，它优选是多层的，并且被支撑载网7所支撑。该侧孔3优选大约位于圆筒的纵向部分的中心上并且优选与圆筒的内部部分连通。另外，圆筒柱1的末端在该柱的每一侧上连接于入口/出口8和9。柱1的尺寸可以根据被过滤的树脂量和分离的难度来改变，本领域中的技术人员能够确定合适的柱尺寸。

任选地，当所需的操作温度与环境温度不同时，该柱1可以有夹套。

优选地，网筛6的网眼大小被确定之后使得树脂和所附的产物保留在柱1的内部，同时反应混合物的剩余部分(例如，对于发酵反应的情况，不溶性废物包括微生物细胞，反应混合物的不溶性和/或未利用的组分)被滤出。优选地，在法兰4/5当中的一个或两个上存在附加的口(port)和连接(connection)，它们在附图中没有示出，以便允许加工流体的流动和允许仪表设备如压力计和/或温度计的安装。

优选，在图1中示出的部分1-5和7-10是从选自金属合金、塑料、玻璃和玻璃衬里的(glass-lined)材料中的一种材料制造的，其中该材料根据在洗涤和洗脱过程中使用的溶剂来进行选择。更优选地，该材料是金属合金，和，最优选，不锈钢。优选，该网筛6是从金属合金或塑料制造的。优选地，任何衬垫或O形环是由与所使用的溶剂相容的材料制成的。优选，该材料是聚四氟乙烯(PTFE)。

该法兰4/5用来稳定该系统。因此，它们能够具有任何所需形状，只要柱1被支撑就可以。

本发明提供从反应混合物中分离树脂的方法，该方法包括在柱中填充反应混合物，从反应混合物中过滤出树脂和所附产物，洗涤树脂和所附产物，和从树脂中洗涤出产物，其中在整个过程中(即在过滤、洗涤和洗脱的步骤中)树脂保留在柱中。

本发明方法的优选实施方案-尤其，应用于来自发酵液的反应混合物的本发明方法的优选实施方案-现在参考图2-4进行描述。下列实施方案不希望限制本发明的范围，本领域中的技术人员将会认识到还有在本发明范围内的其它实施方案。

如图2-4中所述，提供了从反应混合物中分离树脂的方法，该方法包括在柱1中填装反应混合物，从反应混合物滤出树脂，洗涤树脂，和从树脂中洗脱出产物，其中在整个过程中树脂保留在柱1中。该产物可以由任何机理附着于树脂，其中包括但不限于，吸收，吸附，离子相互作用，亲合性相互作用，和疏水性相互作用。优选，该产物选自大环内酯(特别，poliketide大环内酯)，多肽，糖肽，核苷酸和蒽环类(anthracyclines)。更优选，该产物选自埃坡霉素(Epothilone)(特别是埃坡霉素D)，丝裂霉素，环孢菌素，博来霉素，柔红菌素，和氟达拉宾。最优选，该产物是埃坡霉素D。

优选，反应混合物通过柱1的侧孔3装载，同时维持柱1在水平位置，如图2中所示。优选，树脂然后被滤出，同时通过保留在柱1中来维持柱1在水平位置，同时反应混合物的废物经由入口/出口8/9的至少一个从柱1中排出。优选该废物利用重力被排出，但是也可以使用压力、真空或任何这些的结合。压力和/或真空可以通过将泵或其它压力诱导设备连接于该入口/出口8/9当中的任一个或两者，和/或连接于侧孔3而被施加于柱1。另外地，压力和/或真空通过在法兰4/5当中的任一个或两者上的附加口或连接被施加于柱1。

该废物可以是生物量或不想要的任何其它组分并且能够由过滤过程排除掉。该生物量可以含有微生物细胞，发酵介质的不溶性和/或未利用的组分(例如，面粉，淀粉，碳酸钙，等等)。优选，该废物通过入口/出口8/9当中的一个从柱1中排出。任选地，入口/出口8/9两者可用于除去该废物，因此使得过滤表面加倍。任选，压力或真空可用于加速该过滤。优选地，在阻塞的情况下，网筛6能够使用废反应混合物或通过使用新鲜溶剂通过逆向冲洗(back flush)来清洗，如在图2中所示。用于逆向冲洗的溶剂优选是与用于洗涤的相同溶剂。

洗涤该树脂和所附产物是通过将溶剂添加到柱1中来进行的。溶剂可以通过侧口3或通过入口/出口8/9当中的任何一个来添加。优选地，洗涤包括在将溶剂添加到柱1中之前移动柱1至垂直位置，如图3中所示。优选，溶剂选自水，酸性水(例如，无机酸水溶液，如盐酸和硫酸，或水性的有机酸如甲酸或乙酸，等等)，碱性水(例如，氢氧化物碱水溶液如氢氧化钠和氢氧化钾水溶液，或碳酸盐碱水溶液如碳酸钠或碳酸钾水溶液，等等)，缓冲剂溶液，可溶或部分可溶于水或缓冲剂溶液中的有机溶剂，以及它们的混合物。优选，该有机溶剂包括，但不限于丙酮，甲醇，乙醇，异丙醇，四氢呋喃，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，和/或乙酸乙酯。优选，该有机溶剂是甲醇。优选，溶剂是水。能够使用与产物的稳定性和溶解度相适应的任何缓冲剂。缓冲剂包括，但不限于乙酸盐，碳酸盐，碳酸氢盐，磷酸盐，和铵化合物(例如，乙酸钠或乙酸)。优选，溶剂从最上面的入口/出口8，或使用压力从最低的入口/出口9添加，如图3中所示。优选，在洗涤过程中最少量的产物或没有产物从树脂上分离开。

优选，重复洗涤以确保废物的脱离。优选，该柱1可以来回旋转，即，水平至垂直旋转，反之亦然。来自底部的洗涤液允许树脂的悬浮。

优选，产物的洗脱是通过将该柱1放置在垂直位置，和通过顶部入口/出口8添加合适溶剂来进行的，如图4中所示。优选，溶剂选自可用于洗涤步骤(如上所述)的相同溶剂，与水不混溶的有机溶剂，和它们的混合物，前提条件是，用于洗脱的溶剂在组成和比例上不同于用于洗涤中的溶剂。例如，当用于洗涤步骤中的水和有机溶剂的混合物也用于洗脱时，与用于洗涤步骤时相比用于洗脱步骤时水与有机溶剂的比率是更低的，使得在洗脱步骤中该产物可以被洗脱和洗涤步骤中不会。所需要的具体比率将取决于产物和所使用的树脂，并且可以容易地由本领域中技术人员在工艺过程开发中的常规实验来确定。与水不混溶的有机溶剂包括，但不限于甲苯和二氯甲烷。优选，含有产物的洗脱液是从底部入口/出口9收集的。

对于各步骤(过滤，洗涤，洗脱)的各种工艺参数(温度，压力，时间，等等)的限制是以用于该装置的材料的稳定性以及树脂和所附产物的稳定性为基础的。此类限制对于本领域中的技术人员是显而易见的。

在参考某些优选实施方案描述本发明之后，其它实施方案在考虑说明书之后对于本领域中技术人员是明显的。本发明进一步通过参考详细描述本发明的方法和组合物的下列实施例来阐述。对于本领域中的那些技术人员而言明显的是，在不脱离本发明的范围的前提下可以同时对于材料和方法实施许多改进。

实施例

实施例1：从含有埃坡霉素的反应混合物中分离树脂

埃坡霉素D的生产是通过在吸附树脂的存在下发酵黄色粘球菌(Myxococcus xanthus)菌株来进行，如在Lau J，Frykman S，Regentin R，OuS，TsurutaH，LicariP，Optimizing the Heterologous Production ofEpothilone D in Myxococcus xanthus，Biotechnology and Bioengineering，78(3)：281-288，(2002)中所述，它以全部内容引入这里供参考。在发酵过程结束时，通过使用如上所述的设备按照以下方式将树脂与细胞分离：

经由侧孔3将含有233.6g的埃坡霉素D和180L的XAD16(可从Rohm & Haas Co.商购的苯乙烯/二乙烯基苯聚合物吸附剂树脂)的8300L的发酵过的发酵液装入到处于水平位置的具有100cm的高度和60cm的内径的柱1中。该过滤是在2小时中进行的。该柱1移到垂直位置和树脂用800L的净化水在600L/h的流速下洗涤，直至没有观察到混浊度为止。在用过的发酵液中没有检测到活性物(activity)。

然后通过使用2300L的84:16(v/v)甲醇/水混合物从树脂中洗脱该产物，埃坡霉素D，以96.1％的收率回收224.5g的EPO D活性物。按照在Arslanian RL，Parker CD，Wang PK，McIntire JR，Lau J，Starks C，Licari PJ，Large-Scale Isolation and Crystallization of Epothilone D fromMyxococcus xanthus Cultures，J.Nat.Products，65：570-572(2002)中所报道，所获得的溶液进行净化过程的下一步，它以全部内容引入这里供参考。

实施例2：从含有丝裂霉素的反应混合物中分离树脂

8100L的所收获发酵液能够与2000L的甲醇和与200L的XAD4树脂掺混，并且在室温下搅拌16小时。悬浮液然后经由侧孔3被装入到水平位置的柱1中，以过滤树脂。该柱1然后移动至垂直位置，然后在回冲洗中用1000L的净化水逆向洗涤。然后用甲醇洗脱该产物丝裂霉素，，并且在所收获发酵液中包含的最初活性物的约95％应该被回收，其中预测回收率是以在洗脱液中产物的预期量除以在收获发酵液(最初的活性物)中产物的量为基础的。类似地测定下列实施例的预测收率。

实施例3：从含有丝裂霉素的反应混合物中分离树脂

7800L的所收获发酵液能够与2000L的甲醇和180L的XAD16树脂掺混，并且在室温下搅拌16小时。悬浮液然后经由侧孔3被装入到水平位置的柱1中，以过滤树脂。该柱1然后移动至垂直位置，然后在逆向冲洗中用1000L的净化水洗涤。然后用甲醇洗脱该产物丝裂霉素，并且能够回收在所收获发酵液中包含的最初活性物的约92％。

实施例4：从含有丝裂霉素的反应混合物中分离树脂

丝裂霉素的发酵能够在2％(w/v)的XAD7树脂存在下进行。在发酵过程结束时，发酵液能够经由侧孔3被装载到水平位置的柱1中。用过的发酵液被除去，同时树脂用净化水洗涤。能够通过使用6倍柱体积的乙酸乙酯以85％提取率回收该产物丝裂霉素。

实施例5：从含有环孢菌素的反应混合物中分离树脂

2850L的环孢菌素发酵的发酵液能够与350L的甲醇和200L的XAD16树脂掺混，然后在室温下搅拌16小时。悬浮液然后经由侧孔3被装入到水平位置的柱1中，以过滤树脂。该柱1然后移动至垂直位置，然后在逆向冲洗中用1000L的净化水洗涤。然后用甲醇洗脱该产物环孢菌素，，并且能够回收在所收获发酵液中包含的最初活性物的约85％。

实施例6：从含有柔红菌素的反应混合物中分离树脂

在发酵过程结束时，8500L的柔红菌素收获发酵液能够在酸性条件和在搅拌下在30℃下处理20小时。然后用NaOH溶液调节pH至6，然后添加200L的HP20树脂，悬浮液在室温下接着搅拌另外16小时。悬浮液能够进行过滤，经由侧孔3装载到水平位置的柱1中。该柱1然后移动至垂直位置，并用1000L的净化水洗涤。然后用丙酮洗脱该产物柔红菌素，并且能够回收在所收获发酵液中包含的最初活性物的约70％。

实施例7：从含有博来霉素的反应混合物中分离树脂

博来霉素的发酵能够在10000L发酵罐中在3％(w/v)的HP20树脂存在下进行。在发酵过程结束时，发酵液能够经由侧孔3被装载到水平位置的柱1中。用过的发酵液被除去，同时树脂用净化水洗涤。通过使用7倍柱体积的80:20(v/v)净化水/丙酮混合物以90％提取率回收该产物博来霉素。

实施例8：从含有氟达拉宾的反应混合物中分离树脂

在1000L不锈钢反应器中，在pH 7下，2400g的2氟腺嘌呤(Fluoroadenine)能够悬浮于400L的磷酸盐缓冲液/二甲基甲酰胺80:20(v/v)混合物中。6000g的阿拉伯糖基尿嘧啶(ARA-U)和8400g的大肠杆菌NP25细胞浆(cell paste)然后与100L的XAD16树脂一起添加。该悬浮液然后在60℃下搅拌24小时，然后使用处于水平位置的柱1进行过滤以除去所消耗的细菌细胞和未结合的副产物。该柱1然后移动至垂直位置，然后用400L的净化水洗涤。然后用90:10(v/v)二甲基甲酰胺/净化水混合物洗脱该产物氟达拉宾，然后通过将附加的水添加到萃取液中来进行沉淀。

Claims (43)

1.用于从反应混合物中分离树脂的装置，该装置包括可旋转的圆筒柱，其中所述圆筒柱的每一端提供有网筛。

2.根据权利要求1的装置，其中处于圆筒柱的各端的网筛是装配在支撑载网上。

3.权利要求2的装置，其中各支撑载网装有法兰。

4.根据任何前述权利要求的装置，其中该网筛包括多层。

5.根据任何前述权利要求的装置，其中该柱沿着径向轴可旋转。

6.根据权利要求5的装置，其中该柱通过至少一个连结点被安放到支撑结构体上，其中该连结点允许该柱沿着径向轴旋转。

7.根据权利要求6的装置，其中该柱通过两个连接点被安装到支撑结构体上，其中所述连结点沿直径地彼此对置以允许该柱沿着径向轴旋转。

8.根据权利要求7的装置，其中两个连接点中的每一个通过焊接到该柱的外表面上的轴连接，其中各轴被装配到支撑结构体上。

9.根据权利要求8的装置，其中每一个轴通过轴承系统与支撑结构体接触。

10.根据权利要求8或权利要求9的装置，其中至少一个轴连接到马达。

11.根据任何前述权利要求的装置，其中该圆筒柱提供有侧孔，后者与圆筒的内部连通。

12.根据权利要求11的装置，其中该侧孔位于圆筒的纵向部分上。

13.根据权利要求12的装置，其中该侧孔大约位于圆筒的纵向部分的中心。

14.根据任何前述权利要求的装置，其中各法兰提供有至少一个与圆筒的内部连通的入口/出口。

15.根据任何前述权利要求的装置，其中网筛或多层网筛形成的网眼大小允许带有吸附产物的树脂保留在柱的内部，同时允许反应混合物的剩余部分通过。

16.根据权利要求14-15中任何一项的装置，其中法兰中的一个或两个提供有附加的口以允许加工流体的流动和/或允许仪表设备的安装。

17.根据任何前述权利要求的装置，其中该柱提供有绝热层。

18.根据权利要求17的装置，其中该绝热层是夹套。

19.根据任何前述权利要求的装置，其中该柱，支撑结构体，侧孔，入口/出口，法兰，和支撑载网是由选自金属合金、塑料、玻璃衬里的材料和玻璃的材料制成的。

20.根据任何前述权利要求的装置，其中该柱，支撑结构体，侧孔，入口/出口，法兰，和支撑载网是由金属合金制成的。

21.权利要求20的装置，其中该金属合金是不锈钢。

22.根据任何前述权利要求的装置，其中该装置描述在图1-4中。

23.从反应混合物中分离树脂的方法，该方法包括在柱中填装反应混合物，从反应混合物滤出树脂，洗涤树脂，和从树脂中洗脱出产物，其中在整个过程中树脂保留在柱中。

24.根据权利要求23的方法，该方法包括：

(a)在根据权利要求1-22中任何一项所定义的装置的圆筒柱中填装反应混合物，该反应混合物含有具有所附产物的树脂；

(b)从反应混合物过滤出具有所附产物的树脂，使得剩下的反应混合物作为废物从柱中被除去；

(c)用第一种溶剂洗涤具有所附产物的树脂；和

(d)用第二种溶剂从树脂中洗脱所附产物，

其中在步骤(b)-(d)中树脂保留在柱中。

25.根据权利要求24的方法，其中当该柱处于水平位置时，经由侧孔来装载反应混合物。

26.根据权利要求23-25中任何一项的方法，其中该过滤是用处于水平位置的柱来进行的。

27.根据权利要求24到26中任何一项的方法，其中该废物是从至少一个入口/出口除去的。

28.根据权利要求27的方法，其中该废物从两个入口/出口除去的。

29.根据权利要求24-28中任何一项的方法，其中在过滤步骤中，对柱施加压力或真空以除去该废物。

30.根据权利要求24-29中任何一项的方法，其中该洗涤步骤(c)是在该柱处于垂直位置时，通过经由最上面的入口/出口添加第一种溶剂来进行的。

31.根据权利要求24-30中任何一项的方法，其中第一种溶剂选自水，酸性水，碱性水，缓冲剂溶液，有机溶剂，和它们的混合物，前提条件是，所选择的任何有机溶剂可溶或部分地可溶于水或任何所选择的缓冲剂溶液中。

32.根据权利要求31的方法，其中该有机溶剂选自丙酮，甲醇，乙醇，异丙醇，四氢呋喃，乙腈，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，乙酸乙酯，和它们的混合物。

33.根据权利要求32的方法，其中该有机溶剂是甲醇。

34.根据权利要求31的方法，其中第一种溶剂是水。

35.根据权利要求31-34中任何一项的方法，其中该缓冲剂溶液是包含选自乙酸盐，碳酸盐，碳酸氢盐，磷酸盐，和铵的缓冲剂的溶液。

36.根据权利要求24-35中任何一项的方法，其中该洗脱步骤(d)是在该柱处于垂直位置时，通过经由最上面的入口/出口添加第二种溶剂来进行的。

37.根据权利要求24-36中任何一项的方法，其中第二种溶剂选自任何第一种溶剂，与水不混溶的有机溶剂，和它们的混合物。

38.根据权利要求37的方法，其中与水不混溶的有机溶剂选自甲苯和二氯甲烷。

39.根据权利要求24-38中任何一项的方法，其中所附产物选自大环内酯，多肽，糖肽，核苷酸和蒽环类。

40.根据权利要求24-38中任何一项的方法，其中所附产物选自埃坡霉素，丝裂霉素，环孢菌素，柔红菌素，博来霉素，和氟达拉宾。

41.根据权利要求1到22中任何一项的装置用于从反应混合物中分离树脂的用途。

42.根据权利要求41的用途，其中该反应混合物包括选自大环内酯，多肽，糖肽，核苷酸，和蒽环类的产物。

43.根据权利要求41的用途，其中该产物选自埃坡霉素，丝裂霉素，环孢菌素，柔红菌素，博来霉素，和氟达拉宾。

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