TW200524928A - Substituted naphthyridine derivatives as inhibitors of macrophage migration inhibitory factor and their use in the treatment of human diseases - Google Patents

Substituted naphthyridine derivatives as inhibitors of macrophage migration inhibitory factor and their use in the treatment of human diseases Download PDF

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Jagadish Sircar
Sunil K C Kumar
Wen-Bin Ying
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Avanir Pharmaceuticals
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Description

2 Ο Ο524®72i&〇c 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明是有關於包含一萘啶（naphthyridine)骨架之巨 噬細胞遷移抑制因子（MIF)抑制劑，其可用於多種疾病之 治療，包括與MIF活性相關之病理狀況治療之應用。 【先前技術】 淋巴因子（lymphokine)，即巨噬細胞遷移抑制因子 (macrophage migration inhibitory factor，MIF)，/視爲是巨 噬細胞在主動免疫防禦功能的媒介者（傳遞者），而其表現 和延遲過敏、免疫調節、發炎和細胞免疫性有相互關係， 參見 Metz 和 Bucala 之文章 〇4dv· /mww ⑽/. 66:197-223, 1997)。巨噬細胞遷移抑止因子(MIFs)，其尺寸是在12-13 kDa之間，已經在幾個哺乳動物和鳥類種類中被識別出來; 參見下列文章，例如：Galat等Fed.五wr. 5W.
319:233-236，1993;Wistow 等 iVoc. Ya"· 5^/· USA 90:1272.1275，1993;Weiser 等 Proc. Wa". jcai Sc/· USA 86:7522-7526, 1989;Bernhagen 等 365:756-759, 1993;Blocki 等 Sc/mm 2:2095-2102，1993;與
Blocki 等 360:269-270，1992。雖然起先是只認爲 MIF能夠阻塞巨噬細胞遷移，但MIF也影響巨噬細胞附 著，且能誘導巨噬細胞表現白細胞間素-1-貝它、白細胞間 素-6和腫瘤壞疽因子-阿法，上溯調節HLA-DR，增加一 氧化氮合成酶和一氧化氮濃度，和活化刺激巨噬細胞殺死 腫瘤細胞和抑止黴漿菌（M少αρ/α㈣α 2005獅釓。 αν/ι/m)成長，經由不同於干擾素-伽瑪作用之機制。除了可 能做爲免疫侵襲（immunoevasive)分子，當配合給予血清蛋 白質或HIV gpl20於不完全弗氏佐劑（Freunds)或微脂粒 (liposomes)時’ MIF 亦能充當免疫輔佐劑 (immunoadjuvant)，引致之抗原誘發增殖可與完全弗氏佐 劑所引致反應相比。此外，MIF被認爲是糖皮質激素 (glucocorticoid)反調節者和血管生成（angi〇genic)因子。做 爲少數被糖皮質激素誘導而非抑制之蛋白質之一，MIF可 將糖皮質激素之免疫抑止效果調弱。也因此，MIF是調節 糖皮質激素之免疫抑止效果之重要因素。所以當使用超量 外來的糖皮質激素（例如臨床用藥時以壓制發炎，免疫力 之類的），而使MIF之活性/基因表達被過度誘發時，會導 致明顯毒性，因爲MIF自己會惡化發炎的/免疫反應，參 見 Buccala 等之文章（如/7.及叩.CAew· 33:243-252, 1998) 〇 MIF被認爲是經由一特定接收器作用於細胞而依次活 化細胞內一連串反應，包括erk隣酸化和MAP激酶 (kinase) 以及上溯調節基質金屬蛋白酶 (metalloproteases)、c-jun、c_fos 與 IL-1 mRNA(看 Onodera 等 J. 5/〇/· C72d 275:444-450，2000)，它也持有內切酵素 活性，例如它能互變異構化(tautomerize)適當基質（例如多 巴色素dopachrome)。而目前仍不清楚是否此酵素活性會 調節對MIF的生物反應和該蛋白質在活體外Vitr0和在活 體內vivo之活性。定位突變變異的MIF已產生突變種， 20052i48^i8d〇c 具有原本活性但還無法具有酵素活性（Hermanowski-Vosatka 等 38:12841-12849，1999)，Swope 等 人描述在細胞素（cytokine)活性和MIF催化位置之間有一 直接關連（Swope 等，五17(13)··3534-3541，1998)。 相同地，目前不清楚僅經由抑止多巴色素互變異構酶來確 認MIF活性的抑止劑之策略是否能產生有臨床價値的MIF 抑止劑。而評估MIF之抑制與其細胞表面接收器之能力也 是極有限，因爲目前所知其並無高親和度的接收器。
由於已知MIF具有細胞素活性而能集中巨噬細胞至感 染位置以及其細胞性（誘導）免疫，所以引起進一步發掘 MIF抑止劑之興趣。此外，MIF也是巨噬細胞附著、噬菌 作用和殺死癌細胞活性之媒介者(傳遞者），參見Weiser等 之文章（J. /mm ⑽ 〇/· 147:2006-2011，1991)。因此，抑制
MIF間接導致抑制細胞素、成長因子、化學增活劑 (chemokines)和淋巴因子等，其不然的話可能被巨噬細胞 帶到一發炎位置。人類MIF之cDNA已從T-細胞線分離 出來，並轉譯出一蛋白質，具有分子量約12.4kDa，有 115個氨基酸基形成一同質三元體（homotrimer)爲活化型 (Weiser 等 Proc. Natl. Acad. Sci. A 认.·Ί 521-1516, 1989)。起初MIF是在活性的Τ-細胞中被發現，但現在有 報告亦發現在各種的組織包括肝臟、肺臟、眼睛角膜、卵 巢、腦、心臟、脾臟、腎臟、肌肉部位和其他的組織，見 Takahashi 等人之文章（M/crM/o/. 43(1):61_67, -11- 20052卿doc 1999)。MIF另一特徵是其缺乏一傳統領導序列（即一無領 導序列的蛋白質）來引導傳統分泌經由ER/Golgi途徑。 若有一種MIF抑止劑（或一種確認MIF抑止劑之方 法），其機制是經由中和MIF之細胞素活性，則該種抑止 劑（或方法）是要比其他的類型的抑止劑更加優越。例如， 關於互變異構酶和發炎反應之間之關連是有爭議性的。再 者’細胞內作用之抑止劑常常是有毒的，因爲其作用有關 標的或其活性標的是位於細胞內部。想要辯識出功能基與 接受器錯合物之小分子抑止劑就已經極爲困難，更不用說 是發展或改良。對於如MIF之細胞素的理想抑制劑應是其 能改變MIF本身，使MIF從細胞釋放時即被有效地中和 掉了。故有此作用活性之小分子是遠優於抗體，因爲其與 利用蛋白質或化學物質做爲藥品之差別是很大的。參見下 列文章：Metz與Bucala (如上）；Swope與Lolis於穴ev· Physiol· Biochem. Pharmacol 139Λ-32，等人 於 M i^v· 15(1):47-54, 1999; Nishihira 於 /«Λ J· Mol. Med· 2(1): 17-28，1998; Bucala 於 iV. 7·
Sc/. 840:74-82，1998;Bernhagen 等人於 J· Mo/· MW. 76(3-4):151-161, 1998; Donnelly 與 Bucala 於 Mo/· Med. 3(ll):502-507，1997; Bucala 等人於 10(14):1607- 1613, 1996 。 【發明內容】 2 Ο Ο 5 2 doc 由於各種的組織中均有識別出MIF而且MIF和許多 病理症狀有關聯，所以在此領域中似有需要辯識出MIF的 抑止劑。當然也需要包含此抑止劑之藥劑組成，以及應用 其於治療如免疫有關的疾病或其他MIF引致的病理症狀如 腫瘤相關血管生成之方法。下列較佳實施例可達到這些需 求並提供其他的優點。 較佳實施例中，MIF抑止劑之通用化學式是如同下面 之化學式(la)、（lb)、（Ic)與(Id): 200524i96^.d〇c
(la) (Ic)
(lb)
(Id)
-14- 200524TOd〇〇 其中包含ΑΔ體異構物、則期藥（prodrug)與其醫藥可接 受之鹽類，而〜R，Ri，R2，X，Y與Z之定義見下面之描 述。 較佳實施例之MIF的抑止劑是對許多醫療領域有效 用，並可應用於治療對待各種的機能失調、疾病或病理狀 況’包括但是不限於’各種免疫有關的反應、腫瘤成長（例 如前列腺癌、乳癌、肺癌、肝癌、皮膚癌、腦癌、骨癌、 大腸癌、睪九癌寺）、腎小球型腎炎（glomerulonephritis)、 發炎、瘧疾性貧血、敗血性休克、敗血病、腫瘤關聯血管 φ 生成、玻璃體視網膜病（vitreoretinopathy)、牛皮癬、移植 對抗主體疾病（組織排斥）、異位皮膚炎、類風濕性關節炎、 發炎性腸躁症、發炎性肺疾病、中耳炎、Crohn氏症、急性 呼吸窘迫倂發症、延遲類型過敏症、移植排斥、中樞神經 系統疾病之免疫促進與發炎病症（例如阿滋海默症、帕金森 氏症、多發性硬化症等）、肌營養不良（萎縮）、止血疾病（例 如凝血病（coagulopathy)、靜脈閉塞疾病等）、過敏性神經 炎、肉芽腫、糖尿病、移植對抗主體疾病、慢性腎傷害、 脫毛症(毛髮掉落）、急性胰臟炎、關節疾病、心臟功能障礙 Φ (例如心臟收縮功能障礙、心臟擴張功能障礙）、心肌梗塞、 充血性心Μ哀竭、心血管疾病（例如再狹窄（restenosis)、動 脈粥樣硬化）、骨關節炎、腹膜炎、腎病和其他等等。其使 用方法包括施用一有效量之一種或多種MIF抑止劑，如同 較佳實施例所述，最好是以一種醫藥的組成施用到一需要 的動物。同樣地，在另一實施例中，醫藥的組成是包含實 -15· 2 Ο Ο524927§f doc 施例之一種或多種MIF抑止劑並加上醫藥可接受之運送劑 (載劑）及/或稀釋劑。 本發明之第一實施例提供抑制巨噬細胞遷移抑制因子 之一化合物，該化合物具有自下列所選之一結構式：
V
R
-16- 20052鄕 doc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其中R 是自於下列族群包括··氯，院基，取代院基，嫌基3取代嫌 基，環烷基，取代環烷基，芳香族烴基（芳基aryl)，取代芳基， 芳基烷基（arylalkyl)，取代芳基烷基，酿基烷基（acyiaikyl)，取 代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar，與— (CH2)WNR4R5; R!係選自於下歹[|族群包括：—CN，，〇，一 N〇2，-C(=0)R3，-C(=〇)〇H，-nhc(=o)r3，_C(=0)0R3，一 C(=0)NR4R5，-NR3C(=〇)R3，—SO2NR4R5，-NR3S〇2R3 一 nhso2r3, -s(o)wr3, -(CH2)wNR4R5,與一(CH2)wC(=〇)Ar; r2
係运自於下列族群包括：-CH2R3，-NR4R5，-OR3,與—R3· 是獨立選自於下列族群包括:烷基，取代烷基，烯基，取代烯 基，環院基，取代環院基，芳基，取代芳基，芳基院基，取代芳 基院基，醯基院基，取代酿基院基，雜環，取代雜環；R4與R5 分別獨立選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取 代烯基，環院基，取代環院基，芳基，取代芳基，芳基院基，取 代芳基院基，醯基院基，取代醯基院基，雜環，取代雜環，或者 R4與R5合倂而包含雜環或取代雜環；X選自於下列族群 包括氫，鹵素，-F，—C1，一CN，—NO，一NO、一〇CF3，一CF3，-NHSO2R3， -C(=0)R3? ~C(=0)0R35 -C(=0)NR4R5?— NR3C(=0)R3，一NR3S〇2R3，一S(〇）mR3，-R3，一〇R3，—sr3，一 C(=0)0H，-NHC(=0)R3,與-NR4R5; Y選自於下歹[]族群包括 氫，鹵素，—F，-C1，-CN，-N〇，—N〇2，-OCF3，-CF3，-nhso2r3， 一 c(=o)r3， -C(=〇)OR3， 一 c(=〇)NR4R5，- NR3C(=0)R3，-NR3S02R3，-S(〇)WR3，一R3，—〇R3，—sr3，-C(=0)0H，-NHC(=0)R3,與-NR4R5; z選自於下歹!i族群包括 -17- 2 Ο Ο 5 2 492备:doc 氫，鹵素，—F，—C1，-CN，-N〇，—N02，—〇cf3，-CF3，— NHS02R3， - C(=0)R3， -C(=0)〇r35 —c(=o)nr4r5， 一 NR3C(=〇)R3，-NR3S02R3，-S(0)為，—r3，—〇r3，一Sr3，一 C(=0)0H，-nhc(=0)r3,與-nr4r5; Ar選自於下列族群包括 芳基與取代芳基；〃7可獨立爲0，1，2, 3或4;以及/7爲 〇，1 或 2 〇 依照本案第一較佳實施例，具有下列一結構式之一化 合物：
,Ν、 r2
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其中R 選自於下列族群包括：氫，Ci-Cu烷基，C2-Ci2烯基，c3-C12環院基，c6-c12芳基，c7-c12芳基烷基，C7-Ci2烷基芳 基，CVCu醯基院基，雜環烷基，C3-Ci2烷基雜環， 與CyCn雜環，其中R以一或多個取代基來取代之而該 取代基選自於下列族群包括氫，-F, —C1，—CN，-NO, -N02, _ c(〉o)r3，-c(=〇)or3，-〇c(=〇)r3，-c(=〇)nr3r3,-取 3C(=0)R3，-S02nr3r3，-NR3S02R3，—〇R35 —sr3，一 NHs〇2R3? -s(o)wr3， -c(=o)oh，-nhc(=o)r3，- (CH2)wC(=0)Ar，與-(CH2)WNR3R3; Ri選自於下歹丨J族群包括— -18- 2〇〇52f爆 oc CN，-NO，- N〇2 -CC—rw Γ卜β / (〜0)R3，-c(=0)〇l，-〇c(=o)R3，一 c(-o)nr3r3，—取 c( np Qp ( 〇)R3，-S〇2NR3R3，—NR3S〇2R3，一 3， 3，〜NHS02R3，—S(〇)wR -C(=0)0H，- NHC(，3,-(叫斗 (翻於 列族群包括-NR4R5〜πρ 3 35 r 群包括kb院基c ；：與-R3; R3獨立選自於下列族 芳基，CVCu芳基院基2 12嫌基，C3-Cl2環院基，C0_Cl2 c3-c12雜環院基c c 7_Cl2院基芳基，C2_Cl2酿基院基， R3以-或多個取代某二烷基雜環與C2-Cl2雜環，其中 旬醜p 代基來取代之而該取代基選自於下赚群
包括氫，-F，〜C1〜PM ’ 5 〜N0, -N02, -CN，-N0, -N02, CVCu ’ 一 Cl-Cl2硫院基；R4與R5獨立選自於下列族群 1 兀基，c2-c12 烯基，c3_Ci2 環烷基，C6-Ci2 芳 ’ C7~方基院基，C7_Ci2烷基芳基，C2_Ci2醯基院基， 雜環烷基，c^Ci2烷基雜環，與以一或多個取代基來 取代之C2_CU雜環，而該取代基選自於下列族群包括氫，一 F’ -C1’ -CN，—N0, -N02, —CN，-NO, —n〇2, CVCn 烷氧基， 與Q-Cq硫烷基，或者R4與R5合倂包含以一或多個取 代基來取代之雜環，而該取代基選自於下列族群包 括氫，-F，—Cl，—CN，-NO, -N02, -CN，—N0, -N〇2, -OCF3, -CF^Ci-Cu烷氧基，與Cl_Cl2硫烷基；χ選自於下列族群 包括氫，戈—Cl，-CN，-NO，—Not —〇CF3，-CF3，- nhso2r3， —c(=o)r3， -c(=〇)〇r3， —oc(:o)r3,- C(=0)NR3R35 -NR3C(=0)R35 ~so2nr3r3? -nr3so2r35 -OR3，-S(0)wR3，-SR3，-C(=〇)〇h，-nhc(=o)r3，- (CH2)wC(=〇)Ar與—(CH2)WNR3R3; γ選自於下列族群包括 -19- 200524^^§d〇c 氫，-F，-Cl，-CN，-NO, -N〇2,-〇CF3, -CF3, -NHSO2R3, -C(=0)R3， - c(=o)or3， -0C(=0)R3， - C(=0)NR3R3， - NR3C(=0)R3，-SO2NR3R3，-NR3SO2R3，-OR3，- S(〇)wR3，- SR3，-C(=0)0H，-NHC(=0)R3，-(CH2)wC(=0)Ar，與-(CH2)WNR3R3; Z選自方令下歹}J族群包括氫，一F，-Cl，-CN，-NO，- N〇2，-OCF3，—CF3，-NHS02R3，- C(=0)R3，- C(=0)0R3，-0C(=0)R3，一 c(=0)NR3R3，-NR3C(=〇)R3，-S02NR3R3, -NR3S02R3, 〜〇r3，-S(0)wR3, _SR3, -C(=0)0H, -NHC(=0)R3, _(CH2)mC(=〇)Ar，與_(Ch2)wNR3R3; Arg立選自 於下列族群包括以一或多個取代基來取代之c 、 該取代基選自於下列族群包括氫，_F6-cu芳基而 5匕1，〜CXr NO〗，一CN，-N0, -N02, Cl.Cl2 烷基，c”Ci2 户βΝ，、N〇,〜 C!1 2硫烷基；以及m獨立爲ο，！，2」或4。凡氧基，與Ci_ 依照本案第一較佳實施例，具有下列 合物： 卜結擒式之1 0丫〜 ζ -20- 1 2
R 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之輪、 選自於下列族群包括氫，6_(：12烷基，c2_c <類，其中R 環烷基，c6-c12芳基，c7、Cl2芳基烷基c 2燦基，c3_Ci2 ，7 12烷基芳基， 12醯基抬其 r r 、 C^ci2 基’ 12雑環烷基，C3_C12烷基雜環與 維環，宜由R丨、〗—， 基選自a 或多個取代基來取代之而該取代 购S〇2R、列族群包括氫，〜F，-c1，-CN，-NO，-NO!，- C(^°)NR 'C(=〇)R3? -C(.〇)OR35 _〇ce〇)R3?- 〇R3, 〜SR3 3 —NR3C( = 〇)R3，〜S〇2NR3R3, -nr3so2r3，—
Rl _ & =、S(〇)wR3，—(CIi2)wC(=0)Ar，與—(CH2)-NR3R3; c(>0)〇i^ 下列族群包括〜CN，—N〇5 —N〇29 -C(=0)R3，— 職 3C(》〇3，-〇C(=0)R3，〜nhso2r3，—c(=o)nr3r3，— S(0)為说3，-S〇2NR3R3，-取3S02R3，-〇R3，一sr3，— 列族群包 f、((：^2)；^( = 0)&與—(CH2)wNR3R3; R2 選自於下 群包括C舌-NR4R5, -〇R3，與一R3; R3獨立選自於下列族 芳基烷基，C2-Cl2烯基，CVC12環烷基，c6-c12 C3、cu 方基烷基，C7_C12烷基芳基，C2-C12醯基烷基， 反3以〜;1瓚烷基，C3_C12烷基雜環，與C2-C12雜環，其中 包括氫卖多個取代基來取代之而該取代基選自於下列族群 烷氧 i;F，—C1，—CN，—N0,-N〇2, -CN，-N0,_N〇2, Cl_Ci2 包括c’/、Cl<12硫烷基；R4與R5獨立選自於下列族群 其Cl_Cl2烷基，c2-c12烯基，c3_c12環烷基，C6-Ci2芳 C7<12芳基烷基，C7-Cl2烷基芳基，C2-C12醯基烷基， 3 CU、雜環垸基，C3-Ci“完基雜環，與以一或多個取代基 來取代之C^-Cu雜環而該取代基選自於下列族群包括 氫’ -F, -C1’ -CN，-N0, —n〇2, -CN，—N0, -N〇2, CVCu 院 氧基與Ci-Cu硫烷基，或者r4與Rs合倂包括以—或多 個取代基來取代之一 C^Cn雜環而該取代基選自於下列 族群包括氫，-F，-C1，—CN，一N0，—N〇2，—CN，—N0，，〇2 -21- 20052^,doc 烷基，Cl_Ci2烷氧基，Ci_CQ硫烷基與以一或多個 又代基來取代之Ci-Ci2院基而該取代基選自於下列族群包 括氫，-F與—Cl; X選自於下列族群包括氫，_F，—C1，一 OCF3, —CF3, 烷基，與以一或多個取代基來取代之c^
Cu烷基而該取代基選自於下列族群包括氫，_F與—γ 選自於下列族群包括氫，-F，-Cl，-OCR，—CF3, Ci-Ci2烷基， 與以一或多個取代基來取代之Ci_Cl2烷基而該取代基選自 於下列族群包括氫，-F，與—Cl; Z選自於下列族群包括 氫，-F，-C1，—〇CF3, -CF3, CVC12烷基，與以一或多個取代 基來取代之CVCu烷基而該取代基選自於下列族群包括春 氫，-F，與-Cl; Ar選自於下列族群包括以一或多個取代基 來取代之C6_CU芳基而該取代基選自於下列族群包括氫，一 F，-Cl，烷基，與以一或多個取代基來取代之 烷基而該取代基選自於下列族群包括氫，_F，與—以及2 所是獨立爲0, 1，2, 3或4。 依照本案第一較佳實施例，R:包括 — (CH2)wC(=〇)Ar 〇 依照本案第一較佳實施例，R!包括 〜 φ C(=0)0CH2CH3。 依照本案第一較佳實施例，R!包括 —NH_ C(=0)CH3 〇 依照本案第一較佳實施例，&包括-CN。 依照本案第一較佳實施例，&包括—N〇2。 依照本案第一較佳實施例，心包括-NH2。 依照本案第一較佳實施例，r2包括 -22- 2005243 路 doc
依照本案第一較佳實施例，r2包括 依照本案第一較佳實施例， R包括 -(CH山C(=0)Ar。 依照本案第一較佳實施例，X選自於下列族群包括氫， 氟與氯；其中γ選自於下列族群包括氫，氟與氯；以及其 中z選自於下列族群包括氫，氟與氯。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依熙本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： 200524§2§f. d〇c
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
H〆、CH3 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 φ 一化合物： -24- 20052娜 f.doc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 # 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
-25- 200524^if.d〇c 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -26- 20052條 d〇c
O CH, 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
Ο CH3 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
O CK -27- 20052爾 £doc 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -28- 2005249^ifdoc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 · 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -29- 20052辑 £d〇c
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
ch2 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： 200524§i37§fdoc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 Φ 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -31- 20052興
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 φ 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -32- 20052494 f.doc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： _
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： 20052娜 doc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： Μ
CH3 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -34- 200524Q2§if. d〇c
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 · 依照本案第一較佳實施例，提供.具有下列一結構式之 一化合物： -35- 20052纖doc Y〇
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -36- 20052條 doc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物：
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： 20052娜 doc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： #
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，提供具有下列一結構式之 一化合物： -38- 2〇〇52^8fdoc
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類。 依照本案第一較佳實施例，第一較佳實施例之化合物 · 可與一醫藥上可接受之載劑或稀釋劑倂用提供。 第二實施例中提供降低病人MIF活性之一方法，包括 施用於病人一有效劑量之一化合物，該化合物具有自下列 所選之一結構式：
-39- 20052郷 doc
0^^R2
或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其中R 是選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基， 環烷巷，取代環烷基，芳香族烴基(芳基aryl)，取代芳基，芳基 -40- 20052獨· 烷基（arylalkyl)，取代芳基烷基，醯基烷基（acylalkyl)，取代醯 基烷基，雜環，取代雜環，-(CI^CeCOAi·，與_(CH2)wNR4R5;
Ri係远自於下列族群包括：—CN，-NO，〜n〇2，-C(=0)R3 -C(=0)0H，-NHC(=0)R3，—C(=0)0R3，—c(=〇)NR4R5，一 NR3C(二 0)R3， -S〇2NR4R5， -NR3S02R3， —NHSO2R3，- S(0)wR3，-(CH2)WNR4R5,與-((：Η2)；„(^(=0)ΑΓ; R2 係選自於下 列族群包括：-CH2R3，-NR4R5，-〇r3,與〜r3; 是獨立選自 於下列族群包括:烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基， 取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷 基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環；R4與r5分別獨立選自 於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷 基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯 基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，或者R4與R5合 倂而包含雜環或取代雜環；X選自於下列族群包括氫，鹵 素，-F，-C1，-CN，-NO, -N〇2, -OCF3, 一CF3, -NHS02R3, - c(=o)r3，—c(=o)or3，-c(=o)nr4r5，—nr3c(=o)r3，- NR3S02R3，-S(0)WR3，-R3，-〇R3，-SR3，-C(=0)OH，-nhc(=o)r3,與—nr4r5; Y選自於下列族群包括氫，鹵素，-F， 一 C1， 一CN， —NO， _N〇2，—〇CF3， —CF3， 一NHS〇2R3，一 c(=o)r3， -c(=o)or3， -c(二〇)nr4r5， -nr3c(=o)r3，- NR3S02R3，—S(0)WR3，—R3，—〇R3，—SR3，-C(=〇）〇H，— NHC(=0)R3,與-NR4R5; z選自於下歹U族群包括氫，鹵素，-F? -Cl， -CN? -NO, 一N〇2，—〇CF3， 一 CF3， 一 NHS02R3， 一 c(=o)r3， -c(=o)or3， -c(=〇)nr4r5， —nr3c(=〇)r3， - NR3SO2R3，- S(0)WR3，-R3，-〇R3，-SR〕，-C(=0)0H，一 -41- 2〇〇52^8£doc NHC(=0)R3,與-NR4R5; Ar選自於下歹丨J族群包括芳基與取代 芳基；m可獨立爲〇，1，2,3或4;以及η爲〇，1或2。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療炎症（inflammation)之方法，其包括施用一有效劑量 之第一實施例之化合物於該動物上。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療敗血性休克之方法，其包括施用一有效劑量之第一 實施例之化合物於該動物上。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療關節炎之方法，其包括施用一有效劑量之第一實施 ® 例之化合物於該動物上。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療癌症之方法，其包括施用一有效劑量之第一實施例 之化合物於該動物上。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療急性呼吸窘迫倂發症之方法，其包括施用一有效劑 量之第一實施例之化合物於該動物上。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 Φ 中治療發炎性（inflammatory)疾病之方法，其包括施用一有 效劑量之第一實施例之化合物於該動物上。該發炎性疾病 可包括類風濕性關卽炎（rheumatoid arthritis)、骨關節炎 (osteoarthritis)、發炎性腸躁症或氣喘。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療心臟疾病之方法，其包括施用^~'有效劑量之第一^實 施例之化合物於該動物上。該心臟疾病可包括心臟功能障 -42- 2〇〇52m〇c 礙、心肌梗塞、充血性心臟衰竭、心血管再狹窄(restenosis) 或動脈粥樣硬化。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療自體免疫疾病之方法，其包括施用一有效劑量之第 一實施例之化合物於該動物上。該自體免疫疾病可以包括 糖尿病、采或多發性硬化症(multiple sclerosis)。
依照本案第一實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中抑制免疫反應之方法，其包栝施用一有效劑量之第一實 施例之化合物於該動物上。 依照本案第一實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中減少血管生成（angi〇genesis)之方法，其包括施用一有效 劑量之第一實施例之化合物於該動物上。 依照本案第二實施例之一目的，提供一種於暖血動物 中治療與過高糖皮質激素水平相關的疾病之方法，其包括 施用一有效劑量之第一實施例之化合物於該動物上。該疾 病可以包括Cushing氏症。
第三實施例提供一種製備一化合物之製程，該製程包 括下列步驟··將化學式（3)之一化合物與p〇ci3反應：
Z OH
其中R是選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取 代烯基，環烷基，取代環烷基，芳香族烴基（芳基ary丨)，取代 芳基，芳基院基（arylalkyl)，取代芳基烷基，醯基烷基 (acylalkyl)，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，—(CH2)wC(=〇)&， -43- 20052«,oc 與-(CH丄NR4R5;仏係選自於下列族群包括：—CN，〜NO, -N〇2，-C(=0)R3，-C(=0)0H，-NHC(=0)R3，-C(=0)〇R3，一 C(=〇)NR4R5，-NR3C(=0)R3，一 SO2NR4R5，-NR3SO2R3，一 NHSO2R3，-S(0)；„R3，-(CH2)wNR4R5,與-(CH2)wC(=0)Ar; R3 是獨立選自於下列族群包括:烷基，取代烷基，烯基，取代烯 基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳 基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環；R4與r5 分別獨立選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取 代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取 代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，或者 R4與R5合倂而包含雜環或取代雜環；X選自於下列族群 包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，-NO，-N〇2，-OCF3，-CF3，-nhso2r3， -c(=o)r3， -C(=〇)〇R3， —c(=0)NR4R5，- NR3C(=0)R3，-NR3S02R3，一S(0)wR3，-R3，-〇R3，一sr3，一 C(=0)0H，-NHC(=0)R3,與—NR4R5; Y選自於下列族群包括 氫，鹵素，—F，-Cl，-CN，一NO，—N02，-OCF3，-CF3，-NHS02R3， -C(=0)R3， -C(=〇)〇R3， -C(=0)NR4R5?- NR3C(=0)R3, -NR3S02R3? -S(0)mR35 -r3? -or3? -sr3?-C卜0)0H，-NHC(=0)R3,與—NR4R5; z選自於下列族群包括 氫，鹵素，—F，—Cl，—CN，—NO，-N02，-OCF3，-CF3，一 NHS02R3， -C(=0)R3， -C(=〇)〇R3? —c(=o)nr4r5，- NR3C(=0)R3，-NR3S02R3，—s(〇)wR3，—r3，—or3，—sr3，-C(=0)0H，-NHC(=0)R3,與—NR4R5; Ar選自於下列族群包括 芳基與取代芳基；W可獨立爲0, 1，2, 3或4，而產生化學 式（4)之一化合物： -44- 20052獅版
Formula (4) 將化學式（4)之該化合物與與哌嗪（piperazine)反應，而產 生化學式（5)之一化合物：
Formula (5)
將化學式（5)之該化合物與具有化學結構R2-C(=0)C1之一化 合物反應，其中R2選自於下列族群包括-ch2r3，-NR4R5, -0R3，與-R3，而產生化學式（6)之一化合物：
Formula (6)
，而化學式（6)之該化合物適於作爲一 MIF抑制劑使用。 依照本發明之第三較佳實施例，Ri包括 -(CH山C(二0)Ar 〇 依照本發明之第三較佳實施例，Ri包括 -C(=0)0CH2CH3。 -45- 20052郷加 依照本發明之第三較佳實施例，Ri包括-NH- C(=0)CH3 〇 依照本發明之第三較佳實施例，R1包括-CN。 依照本發明之第三較佳實施例，Ri包括-N〇2。 依照本發明之第三較佳實施例’ Ri包括-nh2。
依照本發明之第三較佳實施例’ Ri包括 依照本發明之第三較佳實施例’ R2包括
依照本發明之第三較佳實施例，R包括 - (CH2)wC(=〇)Ar。 依照本發明之第三較佳實施例’ X選自於下列族群包 括氫，氟與氯；其中Y選自於下列族群包括氫，氟與氯； 以及z選自於下列族群包括氫，氟與氯。 第四實施例提供一種製備一化合物之製程，該製程包 括下列步驟：將環己胺與化學式（13)之一化合物反應：
其中R是選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取 ，'環T’取代環垸基，芳香族烴基(芳基_， 芳基，方基院基（arylaikvl) ϊν你·^甘 、yiaikyl)，取代方基烷基，醯基烷 (acylalkyl)，取代醯基烷基雜環 % ^ ^ 兀盎，雑壞，取代雑環，-(CH2)wC(=〇)Ar ---(CH2)mNR4R5； R4 ^ R ’ 括··氣烷基取代户一 Γ 53別獨杜選自於下列族群包 基芳其職芳基，取代_，賴基，取代環院 基，方基，取代絲，方缝基，取㈣絲基，醯総基，^ -46· 20052郷 doc 醯基烷基，雜環，取代雜環，或者R4與R5合倂而包含雜環 或取代雜環；X選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，-NO，-N02，-OCF3，-CF3，-NHS02R3，-C(=0)R3，-C(=0)0R3，-c(=o)nr4r5，-NR3C(=0)R3, -NR3S02R3，- S(0)WR3，-R3，-OR3，—sr3，-C(=0)0H，—nhc(=o)r3,與一 NR4R5; Y選自於下歹[J族群包括氫，鹵素，-F，一Cl，-CN，一 NO， - no2， -ocf3， - cf3， -nhso2r3， -c(=〇)r3， -
c(=o)or3，-c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-nr3so2r3，-S(0)wR3，-R3，-OR3，-SR3，-C(=0)0H，-nhc(=o)r3,與-NR4R5; Z選自於下歹[J族群包括氫，鹵素，-F，一 Cl，一 CN，一 NO， -no2， -ocf3， -cf3， -nhso2r3，-c(=o)r3， -
C(=0)0R3，-C(=0)NR4R5，-NR3C(=0)R3，-NR3SO2R3，-S(0)wR3，-R3，-OR3，-SR3，-C(=0)0H，-NHC(=〇)R3,與-NR4R5; R3是獨立選自於下列族群包括:烷基，取代烷基，烯 基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷 基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜瓌； Αι·選自於下列族群包括芳基與取代芳基；m可獨立爲〇，1， 2, 3或4，而產生化學式（14)之一化合物：
將化學式（14)之該化合物與P0C13反應，而產生化學式（15) 之一化合物： -47- 20052«,oc
N
Formula (15) 將化學式（15)之該化合物與哌嗪（piperazine)反應，而產生 化學式（16)之一化合物：
將化學式（16)之該化合物與具有化學結構r2-c(=o)ci之一 化合物反應，其中R2選自於下列族群包括-CH2r3，-NR4R5,-0R3，與-R3，而產生化學式（17)之一化合物：
〇
N
Formula (17)
其中化學式（17)之該化合物適於用作一 MIF抑制劑 依照第四較佳實施例，R2包括^ 依照第四較佳實施例，包括/ 依照第四較佳實施例，R包括-(CH2)wC(=0)Ar -48- 20052郷 doc 依照第四較佳實施例，χ選自於下列族群包括氫，氟 與氯；Y選自於下列族群包括氫，氟與氯；以及Z選自於 下列族群包括氫，氟與氯。 第五實施例提供一種製備一化合物之製程，該製程包 括下列步驟··將P0C13與及三氟醋酸與化學式（23)之一化 合物反應：
Z 0H
其中I係選自於下列族群包括：-CN，-NO, -N02，-c(=o)r3， -c(=o)oh5 -nhc(=o)r3， -C(=〇)〇r3， 一 c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-so2NR4R5，—NR3S〇2R3，一 NHS02R3, 一S(0)wR3, 一(CH2)wNR4R5,與一(CH2)wC(=〇)Ar; R3 是獨立選自於下列族群包括··院基，取代院基，烯基，取代儲 基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基院基，取代芳 基院基，醯基院基，取代酿基院基，雜環，取代雜環· 分別獨立選自於下列族群包括:氫，烷基，取代院基，燦基，取 代儲基，環院基，取代環院基，芳基，取代芳基，芳基院基取 代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，或者 R4與R5合倂而包含雜環或取代雜環；χ選自於下列族群 包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，-NO，—QCF^ - nhso2r3，-c(:〇)r3，一 c(=〇)〇r3，—C〇〇)NR4R5，一 NR3C(=〇)R3，-NR3S〇2R3，一S(〇)wR3，—r3，—〇R3，SRh — C(=0)〇H，-NHC(=0)R3,與—NR4R5; Y 選自於下列族群^括 -49- 20052郷 doc 氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，-NO，-N02，-OCF3，-CF3，— nhso2r3, -c(=o)r3， -c(=o)or3， -c(=o)nr4r5，- NR3C(=0)R3，-NR3S02R3，-S(0)wR3，-R3，-OR3，-SR3，-C(=0)0H，-NHC(=0)R3，與-NR4R5; z選自於下列族群包括 氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，-NO，-NO!，—OCF3，-CF3，- nhso2r3? -c(=o)r3， -c(=o)or3， -c(=o)nr4r5， - NR3C(=0)R3，-NR3SO2R3，-S(0)WR3，-R3，-OR3, -SR3，-C(=0)0H，-NHC(=0)R3,與-NR4R5; Ai*選自於下歹〇矣群包括 芳基與取代芳基；m可獨立爲0, 1，2, 3或4，而產生化學 式（24)之一化合物：
Formula (24) 將化學式（24)之該化合物與下列化學式之一化合物反應：
其中R2選自於下列族群包括-CH2R3, -NR4R5, -OR3，與-R3,而產生化學式（25)之一化合物：
z
Formula (25). -50- 2〇〇52«,oc 將化學式（25)之該化合物與具有化學結構RX’之一化合物 反應，其中X’包括鹵素，而其中R是選自於下列族群包 括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷 基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代 醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar與 -(CH2)WNR4R5，而產生化學式（26)之一化合物：
其中化學式(26)之該化合物適於用作一 MIF抑制劑 依照第五較佳實施例 依照第五較佳實施例 依照第五較佳實施例 依照第五較佳實施例 依照第五較佳實施例 依照第五較佳實施例 I 包括-(CH2)wC(=0)Ar Ri 包括-c(=o)och2ch3 Ri 包括-nh-c(=o)ch3。 Ri包括-CN。
Ri包括-NO〗。 R!包括-NH2。
依照第五較佳實施例，R2包括 依照第五較佳實施例，R2包括 依照第五較佳實施例，R包括-(CH2)wC(=0)Ar。 52 娜 d〇c 依照第五較佳實施例，X選自於下列族群包括氫，氟 與氯；Y選自於下列族群包括氫，氟與氯；以及z選自 於下列族群包括氫，氟與氯。 依照第五較佳實施例，R包括苯甲基(benzyl)。 第六實施例提供一種製備一化合物之製程，該製程包 括下列步驟：將P〇Cl3與化學式（3a)之一化合物反應： OH Ο
，而產生化學式(4a)之一化合物：
將化學式（4a)之該化合物與哌嗪(piperazine)反應， 化學式（5a)之一化合物： 而產生
-52- 20052m，〇e 將化學式（5a)之該化合物與具 化合物反應，其中r2選人七學結構R2-C(=0)C1之— NR4R5, -0R3，與—r3,而方、列族群包括—CH2R3，-烷基，取代烷基，烯基，取代^是獨立選自於下列族群包括 基，取代雜，芳雜基，取代3,驗，職環院基，芳 烷基，雜環，取代雜環；r4^ R ^基，酿基院基，取代醯基 括:氫，院基，取代院基，稀基，;立=於下列族群包
基，芳，代芳基，芳基院基:取代芳院:代= 醯基fee基，雜環，取代雜環，或者R4與R5合倂而包含雜環 或取代雜環，而產生化學式(6a)之一化合物：
Formula (6a)
，其中化學式(6a)之該化合物適於用作一 MIF抑制劑。 依照第六較佳實施例’ R2包括/"^7或/^7。 第七實施例提供一種製備一化合物之製程，該製程包 括下列步驟：將環己胺與化學式（13a)之一化合物反應： -53- 20〇52 輝 doc
，而產生化學式（14)之一化合物：
將化學式（14)之該化合物與P〇Cl3反應，而產生化學式（15a) 之一化合物：
Formula (15a)
將化學式（15a)之該化合物與哌嗪（piperazine)反應，而產生 化學式（16a)之一化合物：
Formula (16a) -54- 20052« 將化學式（16a)之該化合物與具有化學結構r2—c(=〇)cl之一 化合物反應，其中R2選自於下列族群包括—CH2R3，一 NH，-OR3，與-1,而R3是獨立選自於下列族群包括: 烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基
醯基烷基，雜環，取代雜環，或者 基烷基，醯基烷基，取代 與r5合倂而包含雜環 或取^雜。環，而產生化學式（I7a)之一化合物：
，其中化學式（na)之該化合物適於用作一 mIF抑制劑。
第八實施例提供一種製備〜化合物之製程，該製程包 括下列步驟：將POCb與及三氟醋酸與化學式（23a)之一化 合物反應： -55-
20052H
，而產生化學式（24a)之一化合物：
將化學式（2 4 a)之該化合物與具下列化學式之一化合物反 應··
，其中R2選自於下列族群包括-CH2R3，-NR4R5，-0R3， 與-R3,而R3是獨立選自於下列族群包括:烷基，取代烷基， 烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基 · 烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜 環；R4與R5分別獨立選自於下列族群包括：氫，烷基，取代 烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳 基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環， 取代雜環，或者R4與R5合倂而包含雜環或取代雜環， 而產生化學式（25a)之一化合物： -56- 200524928 14467pif.doc
? 將化學式（25a)之該化合物與具有化學結構RX之一化合物 反應’其中X包括鹵素，而R是選自於下列族群包括:氫， 烷基，取代院基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基# 烷基，雜環，取代雜環，—(CH2)wC(=0)Ar，與-(CH2)WNR4R5 ; Ar選自於下列族群包括芳基與取代芳基；而μ係獨立爲 0, 1，2, 3或4，而產生化學式（26a)之一化合物：
，其中化學式(26a)之該化合物適於用作一 MIF抑制劑。 R2包括 R2包括
依照第八較佳實施例， 依照第八較佳實施例， 依照第八較佳實施例，R包括-(CH2)wC(=0)Ar。 依照第八較佳實施例，R包括苯甲基。 57- 200524928 14467pif.doc 爲讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更明 顯易懂，下文特舉較佳實施例，作詳細說明如下。在此所 述之該些實施例之各方面參見下列詳細敘述即可明瞭。而 所述之各參考文獻或有描述特定程序、化合物與或組成物 之細節，其完整內容亦一倂倂入參考。 【實施方式】 較·佳實施例之詳細說明 爲讓本發明之較佳實施例和其他目的、特徵、和優點 能更明顯易懂，下文特舉出例子以作詳細說明。本發明之 φ 較佳實施例揭露，並非用以限定本發明，任何熟習此技藝 者’在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動 與潤飾。 一些名詞在此定義以幫助了解下列之較佳實施例。 ’’MIF活性（activity)”使用於此代表一廣義之名詞，依 照其常見含意使用，包括，但非限制，一活性或一效果至 少在部份經由（被）巨噬細胞遷移抑制因子而有所改變。MIF 活性包括，但是不有限於，巨噬細胞遷移抑止、互變異構 酶活性(例如使用苯丙酮酸鹽phenylpyruvate或多巴色素）、冒 內毒素所致休克、發炎、糖皮質激素（glucocorticoid)反向調 節、誘導胸腺嘧啶核甘（thymidine)至3T3纖維母細胞 (fibroblasts)、誘導erk磷酸根化反應和MAP激酶活性。 ’’運輸輸出export”使用於此代表一廣義之名詞’依照 其常見含意使用，包括，但非限制，一代謝性活動過程’ 其可以是或非能量依賴性的，以輸送一轉譯細胞產物到細 胞薄膜或這細胞外空間，經由一範本(canonical)領導序列之 -58- 20052492|ifd〇c 機制，亦即非經由標準領導序列所致之分泌。此外，”運輸 輸出export”與領導序列依賴性分泌是不同的，因其對 brefeldin A和其他的類似化合物有抵抗力（亦即，蛋白質輸 出不是經由ER/Golgi輸送;故brefeldin A預期在蛋白質輸 出之運送沒有直接效果）。在此之使用中，”輸出”亦可以是 表示爲π非標準分泌”。 ”無領導序列的蛋白質"使用於此代表一廣義之名詞， 依照其常見含意使用，包括，但非限制，一蛋白質或多（胜） 肽，其缺少一範本領導序列，其從一細胞內部輸出到細胞 外之周遭環境。所謂在細胞外周遭環境之無領導序列的蛋 白質是指，蛋白質位於細胞外空間或和細胞薄膜外表面有 相連。在較佳實施例範圍內，無領導序列的蛋白質包括： 自然發生產生之蛋白質，諸如巨噬細胞遷移抑制因子和其 碎片’以及基因工程而使其缺少一領導序列並輸出之蛋白 質’或基因工程之蛋白質使其包括一無領導序列蛋白質/或 其片斷與另一蛋白質之融合體。 ’’抑制劑（物）inhibitor”使用於此代表一廣義之名詞， 依照其常見含意使用，包括，但非限制，一種分子（如自然 或合成化合物），其可以改變MIF形態及/或跟MIF之單株 抗體競爭，以及至少減少MIF的活性或其從細胞的輸出， 當與缺少抑制劑時的活性或輸出相較。換句話說，一”抑制 劑’’會改變形態及/或活性及/或輸出，假設有抑制劑和沒有 抑制劑相較時，在MIF總量、MIF活性或在細胞外及/或細 胞內之MIF蛋白質探測上有一統計上的重大改變。 -59- 200524928 14467pif.doc ”結合劑binding agent”使用於此代表一廣義之名詞， 依照其常見含意使用，包括，但非限制，任何可以結合至 MIF之分子，包括抑制劑。 一般而言，MIF抑制劑抑止MIF之生理作用，故對治 療MIF可能爲致病因子之疾病是有功用的。 在特定之較佳實施例中，提供MIF之抑制劑，具有如 同下面之通用化學結構式(la)、（lb)、（Ic)與（Id):
-60- 2〇〇524^ifd〇c
200524928 14467pif.doc 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其中R 是選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基， 環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷 基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH山C(=0)Ar，與-(CH山NI^RkRi係選自於下列族群包 括：-CN，-NO, -N02, -C(=0)R3, -C(=0)0H，-NHC(=0)R3, - c(=o)or3, -c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-so2nr4r5，-nr3so2r3，-nhso2r3，-s(o)wr3，-(CH2)wNR4R5，與-(CH2)wC(=0)Ar; R2係選自於下列族群包括：-(：112113，-NR4R5, -OR3,與一R3; R3是獨立選自於下歹丨J族群包括:烷基， 取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取 代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基， 雜環，取代雜環；R4與R5分別獨立選自於下列族群包括:氫^ 烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯_ 烷基，雜環，取代雜環，或者R4與R5合倂而包含雜環或取 代雜環；X選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，、 NO， - no2， - ocf3， - cf3, -nhso2r3， -c(二 o)r3，、 c(=o)or3，-c(=o)nr4r5，-nr3c(二o)r3，-nr3s〇2r3，、 S(0)wR3，-R3，—〇R3，—sr3，—C(二0)0H，一NHC(=〇)R3,與、 NR4R5; Y選自於下歹[J族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN NO， 一n〇2， 一ocf3， -cf3， 一NHS〇2R3， -C(-0)R3,
c(=o)or3，-c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-nr3s〇2r35 s(o)wr3，-R3，-〇R3，—sr3，—C(=0)0H，一NHC(=〇)R3，|^ NR4R5; Z選自於下列族群包括氫，鹵素，一F，-Cl，-CH -62- 200524928 14467pif.doc no， —no2， —ocf3， 一 cf3， —nhso2r3， —c(=o)r3，- c(=o)or3，-c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-nr3so2r3，-s(o)wr3，—r3，-〇r3，-sr3，-c(=o)oh，-nhc(=o)r3,與一 NR4R5; Ar選自於下列族群包括芳基與取代芳基；w可獨立 爲0, 1，2, 3或4;以及η爲0, 1或2。 較佳實施例中，提供降低病人MIF活性之方法，經由 施用一有效劑量之具有下列結構式（la)、（lb)、（Ic)或（Id) 之一化合物：
-63- 2〇〇524織心
(Ic) (la)
-64- 200524928 14467pif.doc 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其中R 是選自於下列族群包括:氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基， 環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷 基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC〇〇)Ai·，與係選自於下列族群包 括：-CN，-NO, -N02, -C(=0)R3, -C(=0)0H，-NHC(=0)R3, -C(=0)0R3，—C(=〇)NR4R5，-NR3C(=0)R3，- S02NR4R5，-nr3so2r3，-nhso2r3，-s(o)wr3，-(CH2)wNR4R5，與-(CH2：UC(=〇)Ar; R2係選自於下列族群包括：—CH2R3，-NR4R5, -〇R3,與—R3; r3是獨立選自於下列族群包括:烷基， 取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取 代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基， 雜環，取代雜環；R4與R5分別獨立選自於下列族群包括:氫， i：完基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基 院基，雜環，取代雜環，或者r4與r5合倂而包含雜環或取 代雜環；X選自於下列族群包括氫，鹵素，_F，-Cl，-CN，-NO，-no2，-〇cf3，- cf3，- nhso2r3，-c(=o)r3, - c(=o)or3，-C(=〇)NR4R5，—nr3c(=o)r3，-nr3so2r3，一 S(0)wR3，-R3，—〇R3，_sr3，—c(=0)0H，-NHC(=0)R3,與-NR4R5; Y選自於下列族群包括氫，鹵素，—F，-C1，-CN，一 no， -no2，-〇cf3， - cf3， - nhso2r3，- c(=o)r3， - C(=0)0R3? -C(=〇)NR4R5，-nr3c(=o)r3，—nr3so2r3，-S(0)wR3，—R3，—〇R3，—SR3，一c(=〇)〇H，-NHC(=0)R3,與一 NR4R5; z選自於下列族群包括氫，鹵素，—F，—cl，—CN，- -65- 2〇〇52獨· no， -no2， -ocf3，- cf3，—nhso2r3，-c(=o)r3，- C(=0)0R3，-C(=0)NR4R5，-NR3C(=0)R3，— nr3so2r3，-s(o)wr3，-r3，-OR3，-SR3，-c卜0)0H，-nhc(=o)r3,與-NR4R5; Ar選自於下列族群包括芳基與取代芳基；m可獨立 爲0，1，2,3或4;以及^爲〇，1或2。 上述在此使用之名詞並定義如下："烷基”使用於此代 表一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限 制，一直鏈或分支、非環狀或環狀、非飽和或飽和之脂肪 碳氫化合物，包含 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 或更多個碳原子， 而••較低的lower院基’’與院基意思相同，但是包含1、2、 3、4、5或6個碳原子。代表性的飽和直鏈烷基包括：甲 基、乙基、η-丙基、η-丁基、η-戊基、n-己基之類的；而飽 和分支烷基包括：異丙基、丁基、異丁基、化〜丁基， 異戊基之類的。非飽和烷基包含至少一雙鍵或三鍵結合在 鄰近碳原子之間（分別地以’’烯基alkenyl”或”炔基aikynyp表 之）。代表性的直鏈和分支烯基包括：乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲 基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2、3-雙乙基-2-丁烯基之 類的；而代表性的直鏈和分炔基包括：乙炔基、丙炔基、 1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔 基之類的。 ”環烷基”使用於此代表一廣義之名詞，依照其常見含 意使用，包括，但非限制，包含單一、雙或多同素環狀 物。環院基亦可以”環狀烷基cyclic alkyls”或，，同素環狀物 -66- 2〇〇52m,〇c homocyclic rings”來表之。代表性的飽和環狀烷基包括：環 丙基、環丁基、環戊基、環己基、-CH2環丙基、-CH2環丁 基、-CH2環戊基、-CH2環己基之類的；而非飽和環狀院基 包括··環戊烯基和環己烯基之類的。環狀烷基包括萘烷 (decalin)和金剛烷（adamantane)。 ”芳基aryl”使用於此代表一廣義之名詞，依照其常見 含意使用，包括’但非限制’一芳香族碳環屬，諸如苯基 或萘基。較佳，芳基包含6到7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、Π、18、19或20或更多個碳原子。 “芳基烷基arylalkyl”使用於此代表一廣義之名詞，依 照其常見含意使用，包括，但非限制，一院基上至少一院 基氫原子被一芳基取代，該芳基例如：苯甲基、-CH2(1或 2-萘基）、-(CH2)2苯基、-(CH2)3苯基、-CH(苯基）2之類 的。 ”芳基雜環heten)ar*yr使用於此代表一廣義之名詞，依 照其常見含意使用，包括，但非限制，一種5或6到10個 單元(member)的芳香族雜環，而至少有一個（或2、、4或 更多個雜原子）雜原子從氮，氧和硫之中所選出，並包含 至少一個碳原子，包括單環和雙環族。代表性的芳基雜環 包括但不限於：呋喃基（furyl)、苯並呋喃基 (benzofuranyl)、噻吩基（thiophenyl)、苯並噻吩基 (benzothiophenyl)、吼略基（pyrrolyl)、D引 D朵基（indolyl)、異 口引D朵基（isoindolyl)、氮吲卩朵基（azaindolyl)、卩比卩定基 (pyridyl)、喹啉基（quinolinyl)、異喹啉基（isoquinolinyl)、 嚼哗基（oxazolyl)、異卩惡Π坐基（isooxazoiyl)、苯並卩惡哗基 -67- 20052獨· c (benzoxazolyl)、Π比哩基（pyrazolyl)、咪哩基（imidazolyl)、 苯並咪卩坐基（benzimidazolyl)、噻哗基（thiazolyl)、苯並噻口坐 基（benzothiazolyl)、異噻哩基（isothiazolyl)、噠嗪基 (pyridazinyl)、嚼 D定基（pyrimidinyl)、ti比嗓基（pyrazinyl)、三 D秦基（triazinyl)、鄰二氮雜萘基（cinnolinyl)、鄰苯二甲嗪基 (phthalazinyl)與唼哗啉基（quinazolinyl) 〇 ”芳基雜環烷基heteroarylalkyl”使用於此代表一廣義之 名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一種烷基 有至少一烷基氫原子被一芳基雜環屬所取代，芳基雜環例 如：-CH2吡啶基或-CH2嘧啶基之類的。 ’’雜環族heterocycle或雜環環狀物heterocycle ring’’使 用於此代表一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括， 但非限制，一種5到7個單元的單環雜環環狀物，或一種7 到14個或更多個單元的多環雜環環狀物，雜環可以是飽 和、非飽和或芳香族，並且包含1到4個或更多個雜原 子，其可從氮、氧和硫之中任選，而氮和硫雜原子可選擇 性氧化，而氮雜原子或可選擇性地被四級化（quaternized)， 包括上述雜環之任一雙環融合至一苯環而成之三環（或更 高環數的）雜環環狀物。雜環可經由任一雜原子或碳原子 而附著。雜環族包括如上所定義之芳基雜環。因此，除了 上述芳香族芳基雜環，雜環族也包括（但不限於）：嗎啉 基（morpholinyl)、Π比略院酮基（pyrr〇lidinonyl)、D比略院基 (pyrrolidinyl)、嚒B定基(piperidinyl)、海洇基（hydantoinyl)、 戊內醯胺基（valerolactamyl)、氧丙環基（oxiranyl)、氧雜環 丁院基（oxetanyl)、四氫咲喃基（tetrahydrofuranyl)、四氫卩比 -68- 2〇〇524m,d〇c 喃 基 （tetrahydropyranyl) 、 四氫卩比陡基 (tetrahydropyridinyl)、四氫喷U定基（tetrahydropyrimidinyl)、 四氫噻吩基（tetrahydrothiophenyl)、四氫硫代吡喃基 (tetrahydrothiopyranyl)之類的。雜環環狀物也包括下列結 構：
“雜環烷基，”使用於此代表一廣義之名詞，依照其常見含意 使用’包括，但非限制’上面任一院基其至少一個院基氫 原子被一雜環所置換，如-CH2嗎啉基之類的。 ’’取代substituted，’’使用於此代表一廣義之名詞，依照 其常見含意使用，包括，但非限制，上面任一族群(例如： 烷基、芳基、芳基烷基、芳基雜環、芳基雜環烷基、雜環 族或雜環烷基）其中至少一氫原子是被取代基取代。在keto 取代，如-C(=0)-時，二個氫原子被取代。取代時”取代基 (物）substituents”在本文較佳實施例範圍內包括：鹵素、 氫氧基、氰基、硝基、氨基、院胺基（alkylamino)、雙院胺 基、院基、院氧基、硫院基（alkylthio)、鹵院基、芳基、取 代芳基、芳基烷基、取代芳基烷基、芳基雜環、取代芳基 雜環、芳基雜環烷基、取代芳基雜環烷基、雜環、取代雜 環、雜環烷基、取代雜環烷基、-NRaRb、-NRaC(=0)Rb、-ORa、-NRaC(=0)NRaRb、-NRaC(=0)0Rb、一NRaS〇2Rb、一 C(=〇）Ra、一C(=〇）ORa、一C(—0)NRaRb、一〇C(=〇）NRaRb、一 SH -SRa、-SORa、-S(=0)2Ra、-0S(=0)2Ra 或一 -69- 2〇〇524a,d〇c S(=0)20Ra，其中Ra與Rb可相同或不同’分別任意爲氫、 烷基、鹵烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳基烷基、 取代芳基烷基、芳基雜環、取代芳基雜環、芳基雜環院 基、取代芳基雜環烷基、雜環、取代雜環、雜環烷基或取 代雜環烷基。 ’’鹵素，，使用於此代表一廣義之名詞’依照其吊見S思 使用，包括，但非限制爲，氟、氯、溴和_基° "鹵院基’’使用於此代表一廣義之名5司’依照其吊見白 意使用，包括，但非限制，一烷基有至少一氫原子被鹵素 所取代，諸如三氟甲基之類的。 ，’烷氧基alkoxy”使用於此代表一廣義之名詞，依照其 常見含意使用，包括，但非限制，一烷基經一氧原子橋接 (即-〇-烷基）諸如甲氧基或乙氧基之類的。 ’’硫烷基thioalkyl”使用於此代表一廣義之名詞，依照 其常見含意使用，包括，但非限制，一'院基經一'硫原子橋 接（即-S-烷基）諸如甲基硫基或乙基硫基之類的。 •’院基磺酿基alkylsulfonyl，π使用於此代表一廣義之名 詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基經一 磺醯基橋接（即-S02-烷基）諸如甲基磺醯基或乙基磺醯基之 類的。 ”院（基）胺基’’和”雙院胺基”使用於此代表一廣義之名 詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基或二 烷基經一氮原子橋接（就是—N-烷基）諸如甲基胺基、乙基胺 基、雙甲胺基或雙乙胺基之類的。 -70- 200524928 14467pif.doc ”氫氧基烷基’’使用於此代表一廣義之名詞，依照其常 見含意使用，包括，但非限制，一烷基取代有至少一氫氧 根。 ”單-或雙-(環烷基）甲基"使用於此代表一廣義之名詞， 依照其常見含意使用，包括，但非限制，一甲基屬取代有 一或兩個環烷基，諸如環丙基甲基或雙環丙基甲基之類 的。 π院基鑛基烷基alkylcarbonylalkyl”或”醯基院基 acylalkyl”使用於此代表一廣義之名詞，依照其常見含意使 | 用，包括，但非限制，一烷基取代有一個-c(=o)烷基。 ”院基碳基氧基院基alkylcarbonyloxyalkyl”使用於此代 表一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限 制，一烷基取代有一個-C(=0)0烷基或一個-0C(=0)烷 基。 ’’烷基氧基烷基alkyloxyalkyl”使用於此代表一廣義之 名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基取 代有一-〇-院基。 _ “芳基碳基芳基arylcarbonylaryl”使用於此代表一廣義 之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一芳基 取代有一個-C(=0)芳基。 “芳基羰基氧基芳基arylcarbonyloxyaryl”使用於此代表 一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制’ 一芳基取代有一個-C(=〇)〇-芳基或-〇C(=0)芳基。 -71- 20052m% ifdoc “芳基氧基芳基aryloxyaryl”使用於此代表一廣義之名 詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基取代 有一^個-0-方基。 “院基羰基芳基aikyicarbonylaryl”使用於此代表一廣 義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷 基取代有一個<(=0)芳基。 “院基鎖基氧基芳基alkylcarbonyloxyaryl”使用於此代 表一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限 制，一烷基取代有一個-C(=0)0-芳基或-0C(=0)芳基。 “烷基氧基芳基alkyloxyaryl”使用於此代表一廣義之 名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基取 代有一個-〇-芳基。 “芳基鑛基院基arylcarbonylalkyl”使用於此代表一廣 義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一芳 基取代有一個-C(=0)烷基。 “芳基鑛基氧基院基arylcarbonyloxyalkyl”使用於此代 表一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括，但非限 制，一芳基取代有一個-C(=0)0-烷基或-0C(=0)烷基。 “芳基氧基院基aryloxyakyl”使用於此代表一廣義之名 詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一芳基取代 有一個-0-烷基。 ”烷基硫烷基alkylthioalkyl”使用於此代表一廣義之名 詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基取代 有一-S-院基。 2〇〇524^pifd〇c ”單-或雙-(烷基）胺基”使用於此代表一廣義之名詞，依 照其常見含意使用，包括，但非限制，一胺基分別取代有 一烷基或二個烷基。 ’’單-或雙-(烷基）胺基烷基”使用於此代表一廣義之名 詞，依照其常見含意使用，包括，但非限制，一烷基取代 有一單-或雙（烷基)胺基。 此處之環狀系統，除了分離單環部分單元外，尙包括 融合環狀物、橋接環狀物與螺旋狀環部分（spiro ring moieties) 〇
-73- 200524¾. 下列編號之化學結構式圖形將使用於較佳實施例中：
X R (Ic)
X R (Id) -74- 2〇〇52im,oc 如上所示，萘陡（naphthyridine)環上之氮原子可位於環 上之5, 6, 7或8之位置。較佳實施例之代表性化合物之化 學結構式如下所示。該些化學結構中，下列之結構標記代 表一吡啶環而其氮原子佔據環上5, 6, 7或8之位置：
下列所提供之化學結構式中，如此標示之卩比U定環包括一甲 基或一氯原子做取代基。當有此種取代基存在時，若吡啶 環之氮原子位於環上5之位置，則取代基則佔據環上6，7 或8之位置。若吡啶環之氮原子位於環上6之位置，則取 代基則佔據環上5, 7或8之位置。若吡啶環之氮原子位於 環上7之位置，則取代基則佔據環上5, 6或8之位置。若 吡啶環之氮原子位於環上8之位置，則取代基則佔據環上5, 6或7之位置。於更佳實施例中，吡啶環之氮原子位於環 上8之位置，若有取代基存在，則則佔據環上6之位置。
-75- 2 f· 8mr 267 944 412 5 c do
-76- 200524928 14467pif.doc
-77- 200524928 14467pif.doc
-78- 200524928 14467pif.doc
-79- 200524纖-
3 4
NIC H3 4
4 4
2 4
5 4 -80- 200524燄-
-81- 200524928 14467pif.doc
-82- 20052492®doc
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-84- 200524928 14467pif.doc
-85- 200524928 14467pif.doc
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-87- 200524928 14467pif.doc
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-89- 20052mdoc
-90- 200524928 14467pif.doc
-91- 200524928 14467pif.doc
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248 249 250
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H3 NIC H3 H3 NIC 6 5 2 H3 c -92- 2 24
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-94- 200524928 14467pif.doc
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IN H3、c \H3c 4 8 2
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8 8 2
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9 8 2 o 9 2 9 2
-96- 200524928 14467pif.doc
-97- 200524928 14467pif.doc
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-100- 20052歸 doc
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-105- 20052釋 doc
-106- ((p 招2 5002 c do
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-109- 20052娜 doc
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• · -112- 20052郷 doc
-113- 20052郷 doc
-114- 200524928 14467pif.doc
-115- 20052獨 fdoc
-116- 200524縱版
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Cl
CN 0
481 -117- 200524^,doc
-118- 20052獨 fd〇c
-119- 52獨·
-120- 20052«fdoc
-121- 20052獨·
-122- 200524^ifdoc
-123- 20052492814467pif.doc
H3、c _N /CH3 6 3 5
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IN 7 H33c 5 H3、c
\H38 c 3 5
IN H3
NIC H3 4 4 5 -124- 200524^ifdoc
-125- 20052鄕 doc
-126- 200524織fdoc
-127- 2〇〇524^ifdoc
128- 200524Q^§if. d〇c
-129- 20052娜 doc
-130- 200524織 doc
599
600
OEt 601
OEt 602
OEt 603
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OEt 605
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607 -131- 200524»,οε
-132- 200524^,doc
-133- 20052獨 fd〇c
-134- 20052獨 fdoc 較佳實施例的化合物一般可能是以自由酸或自由鹼形 式來應用。或者，較佳實施例的化合物可能是以酸或鹼附 加鹽之形式來應用。較佳實施例中自由鹼性氨基化合物之 酸附加鹽，或許是經由此領域所熟知方法製備，或許是從 有機和無機酸所製備。適當有機酸包括：順丁烯二酸（馬來 酸）、反丁烯二酸、安息香酸、維他命C酸、丁二酸、甲磺 酸、醋酸、草酸、丙酸、酒石酸、水楊酸、檸檬酸、葡萄 糖醛酸、乳酸、苯乙醇酸、肉桂酸、丁氨二酸、硬脂酸、Φ 棕櫚酸、乙醇酸、麩胺酸和苯磺酸。適當無機的酸包括氫 氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。自由酸的鹼性附加 鹽，可能同樣是經由由此領域所熟知方法製備，或許是從 適當鹼來製備，適當鹼，諸如從鹼和鹼土金屬所選之陽離 子(例如鋰、鈉、鉀、鎂、鋇或鈣)以及銨陽離子。所謂結構 式（la)、（lb)、（Ic)或（Id)之’’醫藥上可接受的鹽類”是包括任 一和全部可使用之鹽類種類。 結構式（la)、（lb)、（Ic)或(Id)之化合物係根據此領域者 所熟知之有機合成技術所製備，並根據實施例中所提供之 Φ 代表性方法所製備。一般而言，結構式（la)之化合物可根據 下列反應式而製備。値得注意的是，該些合成途徑中萘啶 環之氮原子位於環上8的位置。但是，該些合成途徑對於 製備較佳實施例中萘啶環氮原子位於環上5、6或7的位置 之化合物也是適用的，討論如下。 -135· rpif. doc 製備中間物1-苯甲某-4-羥某-2-氧某-1，2-二氣-丨1，81-蔡 啶-3-羧酸乙酯 製備化學式（la)化合物之較佳中間物爲1-苯甲基-4-羥 基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯，如化學式（3) 所示。此合成所使用之起始物質爲2-氯基-3-吡啶羧酸。爲 製備化學式（lb)之化合物，將氯基吡啶羧酸與一二級氨基 化合物反應。僅用以描述下列合成途徑，使用苯甲胺做一 起始物質。但是，此處要注意的是二級胺類亦可用作起始 物質，包括取代的苯甲胺如4-甲氧基苯甲胺或4-氟基苯甲 胺。 合成中間物1-苯甲基-4·經基-2-氧基-1，2· 一^氣-[1，8]-蔡 啶-3-羧酸乙酯之第一步驟是生產2-苯甲基氨基尼古丁 酸，如反應式1中之化學式（1)所示： 反應式1
(1) 2-苯甲基氨基尼古丁酸（1)再用於製備1-苯甲基-1//-吡啶並[2,3W][l，3]噁嗪-2,4-二酮，如反應式2中化學式（2) 所示。 136- 52 獨 fd〇c
(1) (2) 丙二酸二乙酯然後與1-苯甲基_1//_吡啶並[2,3-刃[1，3] 噁嗪-2,4-二酮（2)反應而產生中間物1-苯甲基-4-羥基-2-氧 基-1，2-二氫-[1，8]·萘啶-3-羧酸乙酯（3)如反應式3所示： 反應式3
(2) (3) 此反應中亦可使用其他雙酯類，若化學式（la)(或化 學式（Ib)，（Ic)或(Id))化合物之取代基心適於使用不同種類 之羧酸根取代，例如丙二酸二乙酯、丙二酸二丙酯之類。 此外，羧酸根也可以其他結構基取代，如氰基，如下所 述。 製備化學式（la)之化合物-1-苯甲某-2-氣基-44(4-噻 吩-2-羰某哌嗪-1·某卜1,2-二氤41，81·萘啶-3-羧酸乙酯 一較佳實施例之一化合物可利用中間物1-苯甲基-4-羥基-2-氧基-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯做起始物質而 製備。化合物製備係利用反應式4所示之一連串反應。 -137- 20052霄 doc 反應式4
上述反應中，將2-噻吩碳醯氯與1-苯甲基-2-氧基-4-峨曉-1-基-1，2 - _*氨-[1，8]-奈卩疋-3-殘酸乙醋反應而產生目標 化合物，1-苯甲基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二氫_[1，8]_萘啶-3·羧酸乙酯，如反應式4之化學式（6) 所示。較佳情況爲若取代基R不是2-噻吩，則於反應中可 使用其他碳醯氯化合物。 -138-
中間物1-茏甲某-4-羥某-2-氣某-1_2-二氣-Π,8μ蓥啶1 3-羧酸乙酯之氰基衍牛物 包括氰基作爲取代基I之化學式（la)化合物，其製 備可利用中間物1-苯甲基-4-羥基-2-氧基-1，2-二氫_[1，8卜萘 啶-3-羧酸乙酯做起使物。中間物經反應式5所示之反應而 氰基官能化： 反應式5
製備化學式（la)之化合物-1-苯甲基-4-丨4-f嚓盼-2-羯某)_峨曝-1_某1_2-氣某_1,2__>氣-3_氨某奈D定 如製備反應式4中化學式（5)與（6)之化合物，最終產 物係經由與哌嗪之反應，接著與2-噻吩碳醯氯之反應而製 備。如上所述，較佳情況爲若取代基R不是2-噻吩，則於 反應中可使用其他碳醯氯化合物。製備1-苯甲基-4-[4-(噻 吩-2-羰基）-哌嗪-1_基]-2-氧基-1，2-二氫-3-氰基[1，8]-萘啶之 一連串反應如反應式6所示。 -139- 200521227p8,〇c
Cl
製備通用結構式（la)之化合物 較佳化學式（la)之化合物包括l_R-4-[4-(噻吩-2-羰 基）-峨曝-1-基]-2-氧基-1，2_—*氣-[1，8]-奈卩定-3-竣酸乙醋’其 中萘啶環上位置1之取代基R爲氫，烷基，取代烷基，環烷 基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷 基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)WC(=0)AI·，或一(CH2)WNR4R5，其中 m 爲 0， 1，2, 3 或 4。此處合成之起始物質爲2-氯基-3-吡啶羧酸與4-甲氧基 苯甲胺。此處合成之一連串步驟顯示於反應式7 : -140- 200524¾. 反應式7
(11) (12)
(12) (13)
OH
(13) (I4) -141- 200524綱 if. doc C1
COOEt (14)
(15)
°yQ
XT
COOEt R-X，X=Halogen ~^NaH, DMF,~ Room Temp, 3h α
N 丨 R16 反應之最終步驟中，選擇一合適鹵化物(R-X)作爲反應 物，以產生萘啶環上位置1所想要之取代基(R)。而製備產 物之另一可行最終步驟，顯示於反應式8 : 反應式8
(15) (16) 較佳，哌嗪結構之取代基不是2-噻吩，可使用對應之 N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1-哌嗪#酸丁酯 接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩_2_基_甲酮。 -142- 2〇〇524i%d〇c 製備甲腈位於萘啶結構之位置3之涌用結構式（la) 之化合物 較佳化學式（la)之化合物包括1-R-2-氧基-4-[4-(噻吩- 2-羰基）_哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]萘啶-3-甲腈 (carbonitriles)，其中萘Π定環上位置1之取代基R可爲氫， 烷基，取代烷基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基， 芳基院基，取代芳基院基，酸基院基，取代酿基院基，雜環， 取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ai·或-(CH2)WNR4R5，其中 m 爲0, 1，2, 3或4。2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1_基]-φ 1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈，如反應式9之化學式20所 示，係製備作爲一關鍵中間物，從4-羥基-1-(4-甲氧基苯甲 基）-2_氧基_1，2__^氣-[1，8]_蔡陡-3-竣酸乙醋開始合成’如反 應式7之化學式13所示。此關鍵中間物然後與適當鹵化 物（R-X)反應而產生目標化合物。此合成之一連串步驟顯 示於反應式9 : 反應式9
-143- 20052條doc
MeO
OH
hT 、rr、〇
POCI3, Et3N
90 °C, overnight
Cl
Cl
TFA, Refluxed 18 24 h
19
cn n Dabco, 110 °C 丨I Ί Ί +
Cl
N K ° overnight 19
°γΟ> °γ^}
N 〇 X IR+
NaH, DMF, RT, 3h
or K2C03, DMA, 90 °C
NIR 20 較佳，若哌嗪部分結構之取代基不是2-噻吩，可使用 對應之N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1-哌嗪竣 -144- 200524928 14467pif.doc 酸t-丁酯接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲 酮。 製備萘啶結構之位置6取代之通用結構式（la)化合物 選擇2,6二氯-5-氟基-尼古丁酸作爲一起始物質而製 備氟基取代位於萘啶結構位置6之結構式（la)之化合物。 酯化2,6二氯-5-氟基-尼古丁酸，利用亞硫醯氯處理、接著 與無水乙醇回流而得到2,6-二氯-5-氟基-尼古丁酸乙酯，如 反應式10之化學式21所示。當此酯與亞硫醇與氫化鈉反 應，生成2-氯基-6-乙硫基-5-氟基-尼古丁酸乙酯，如反應 φ 式10之化學式22所示。製備6-乙硫基-5-氟基-2-(4-甲氧 基-苯甲基氨基)-尼古丁酸乙酯，如反應式10之化學式23 所^氨化2 -氯基-6 -乙硫基-5 -氣基-尼古丁酸乙醋’轉化 成5-氟基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸乙酯，如反應 式10之化學式24所示，經由與乙醇與raney nickel回流 而得。5-氟基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸乙酯然 後與氯甲酸三氯甲酯反應而產生6-氟基-1-(4-甲氧基-苯甲 基）-1Η-吡啶並[2,3_d][l，3]噁嗪-2,4-二酮，如反應式10之化 學式25所示。該些一連串反應顯示於反應式10。 β -145- 200524^,〇〇 反應式10
COOH 1. SOCI2l Tol., reflx. Cl 2. EtOH, 0.5 h, reflx
ΡΝγ^^〇〇〇ΒΝ3Ηι EtSH C丨入N人Cl THF, -20 〇C
F
COOEt Cl 22 21
選擇2_羥基尼古丁酸作爲一起始物質以製備氯基取代 位於萘啶結構位置6之化合物。以次氯酸鈉氯化2_羥基尼 古丁酸而得5-氯基-2-羥基-尼古丁酸，如反應式11之化學 式26所示。以亞硫醯氯處理該中間物接著與甲醇回流， 而產生2,5-二氯-尼古丁酸甲酯，如反應式11之化學式27 所示。以P-甲氧基苯甲胺來氨化2,5-二氯-尼古丁酸甲酯而 得5-氯基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸甲酯，如反應 式11之化學式28所示，其轉化成6-氯基-1-(4-甲氧基-苯 甲基)-1//-吡啶並[2,3d][l，3]噁嗪-2,4-二酮，如反應式11之 化學式29所示，經由與氯甲酸三氯甲酯反應，顯示於反 應式11。 -146- 20052爾 doc 反應式11
aCOOH OH
COOH OH 1. SOCI2> DMF, reflx.
NaOCI, NaOH 48 h, RT 2. MeOH, 0.5 h, reflx. COOMe Cl 26 27
2-溴基-5-甲基尼古丁酸乙酯，如反應式12之化學式 31，用作一起始物質以製備甲基取代位於萘啶結構位置6 之化合物。製備該起始物質係利用縮合丙醛與氰醋酸乙酯 接著環化所得中間物如反應式12所示。以p-甲氧基苯甲 胺氨化2-溴基-5-甲基尼古丁酸乙酯而得5_甲基-2-(4-甲氧 基-苯甲基氨基）-尼古丁酸乙酯，如反應式12之化學式32 所示，而再轉化成6-甲基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶並 [2,3d][l，3]噁嗪-2,4-二酮，如反應式12之化學式33所 __ 示，係經由與氯甲酸三氯甲酯反應，顯示於反應式12。 反應式12
Η CN COOEt
Piperidine, HOAc RT, 24 h
CN COOEt 1. DMFDMA, EtOH, reflux, overnight
2. HBr, HOAc, 60 °C
COOEt Br 30 -147- 31 200524職·
製備萘啶結構上位置6-取代之化合物係利用酸酐中間 物，分別如反應式1〇，11與12中之化學式25, 29與33 所示。該些化合物之合成路徑於上述所描述之未取代類似 物頗爲相似。製備該些化合物之一連串反應顯示於反應式 13 與 14 〇
反應式 13 (Y = F· CL CHQ
反應式 14 (Y = F, Cl，CHQ
-148- 200524^pifdoc
較佳，若哌嗪部分結構之取代基不是2-噻吩，可使用 對應之N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1_哌嗪羧 酸t-丁酯接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲 酮，如反應式13與14。 I 製備通用結構式（Ic)之化合物 較佳化學式（Ic)之化合物包括l-R-4-[4-(嚷吩-2-鑛 基）-哌嗪-1-基]-2·氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯，其 中萘啶環位置1之取代基R可爲氫，烷基，取代烷基，環 烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基 烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar，或-(CH2)WNR4R5，而 m 爲 0，1，2, 3 或 4 〇 此合成之起始物質爲4-氨基吡啶以boc基保護，經正# 鋰化（ortholithiation)再轉化成4-特-丁氧羰基氨基-尼古丁 酸，如反應式15之化學式35所示，接著以乾冰淬滅。中 間物與氯甲酸三氯甲酯反應而產生1//-吡啶並[4,3d][l，3]噁 嗪-2,4-二酮，如反應式15之化學式36所示，其然後轉化 成4_氯基-2-氧基·1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯，如反應 式15之化學式37所示。4-氯基_2·氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘 啶-3-羧酸乙酯與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮反應而得2-氧 基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，6卜萘啶-3-羧 -149- 200524¾.〇c 酸乙酯，如反應式15之化學式38所示，其與對應之烷基 鹵化物（R-X)反應而產生1-N-取代-2-氧基-4-[4_(噻吩-2-擬 基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯，顯示於反 應式15。 反應式15 NH.
(Boc)2〇，THF，RT
HN
1. BuLi, TMEDA, -78 °C 2. C〇2, -78 〇C - RT
34
35
37
較佳，若哌嗪部分結構之取代基不是2-噻吩，可使用 對應之N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1-哌嗪羧 酸t-丁酯接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲 酮。 或者’中間物4-氣基-2-氧基· 1，2-_*氨-[1，6]-奈陡-3-殘 酸乙酯，如反應式15之化學式37，可由反應式16之4-氯 基吡啶或尼古丁酸製備而得。以LDA正鋰化4-氯基吡啶接 -150- 200524928 14467pif.doc 著以乾冰淬滅，或鋰化尼古丁酸接著以六氯乙烷淬滅而得 氯基尼古丁酸中間物，如反應式16之化學式39所示。氨 化此中間物可得3_(4_甲氧基-苯甲基氨基)-尼古丁酸，如反 應式16之化學式40,其轉化成1-(4-甲氧基_苯甲基 吡啶並[4U][1，3]噁嗪-2,4-二酮如反應式16之化學式41 所示，經由氯甲酸三氯甲酯處理之。此中間物可轉化成如 反應式15之化學式37之4-氯基_2_氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘 啶-3-羧酸乙酯，顯示於反應式16。 反應式16
1· LDA，THF，-78〇C
39
1. BuLi, LTMP, THF, -78 °C 2. C2CI6, -78 °C - RT
C〇〇H
2. C02, -78 °C - RT
39 40 41
製備甲腈基取代位於萘啶結構之位置3之通用結構式 (Ic)之化合物 較佳化學式（Ic)之化合物包括l-R-4-[4-(噻吩-2-羰 基）·哌嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3_甲腈，其中甲 腈基取代萘啶位置3之萘啶環上位置1之取代基R可爲氫， -151- 200524928 14467pif.doc 烷基，取代烷基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基, 芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環， 取代雜環，-(CHbhCeCOAi·，或-(CH2)WNR4R5,而 m 爲 0, 1，2, 3或4。製備該些化合物係利用中間物4-氯基-1-(4-甲 氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，6]_萘啶-3-羧酸乙酯，如 反應式16之化學式42 ，經由使用類似於上述[1，8]萘啶 系列化合物之反應與方法。合成該些化合物之一連串步驟 顯示於反應式17。 反應式17
-152- 2〇〇52ia,〇c
Dabco, 110 °C
+
X I R overnight
NaH, DMF, RT, 3 h or
K2C03, DMA, 90 °C 較佳，若哌嗪部分結構之取代基不是2-噻吩，可使用 對應之N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1-哌嗪羧 酸t-丁酯接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲 酮。 製備涌用結構式（lb)之化合物 較佳化學式（lb)之化合物包括l-R-4-[4-(噻吩-2-羰 基）-哌嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，7]-萘啶-3-羧酸乙酯，其 中萘啶環位置1之取代基R可爲氫，烷基，取代烷基，環烷 基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷 基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar，或-(CH2)WNR4R5，而 m 爲 0，1，2, 3 或 4。製備該些化合物可利用吡啶3,4-雙羧酸作爲一起始物 質。吡啶3,4-雙羧酸與醋酸酐反應而得furo[3,4-c|吡啶-1，3-二酮，如反應式18之化學式43，其可轉化成吡咯並[3,4-c] -153- 2〇〇52m,〇c 吡啶-1，3-二酮，如反應式18之化學式44，經由與乙醯胺 反應。此中間物經Hoffmann降解而製備3-氨基異尼古丁 酸。還原氨化3-氨基異尼古丁酸而得3-(4-甲氧基-苯甲基 氨基）異尼古丁酸，如反應式18之化學式46所示。製 備此中間物可利用六甲基二砂胺鋰（lithium hexamethyl disilazide)與p-甲氧基氯甲苯來烷基化3-氨基異尼古丁酸， 顯示於反應式18。 反應式18
中間物3-(4-甲氧基-苯甲基氨基）異尼古丁酸，如反 應式18之化學式46，用於合成通用結構式（lb)之化合 物，利用合成通用結構式（la)化合物之類似反應式與方 法。可用於合成該些化合物之一連串反應顯示於反應式 19 〇 反應式19
-154 200524928 14467pif.doc
製備甲膳某位於萘啶結構位置3之通用結構式（lb)化 合物 較佳化學式（lb)之化合物包括l-R-4-[4-(噻吩-2-羰 基）-峨曉-1-基]-2_氧基-1，2-_^氣-[1，7]-察B定-3-甲膳’其中甲 腈基取代萘啶位置3之萘啶環上位置1之取代基R可爲氫， 烷基，取代烷基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基， 芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環， 取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar，或-(CHANH，而 m 爲 0， 1，2, 3或4。該些化合物製備係利用中間物4-羥基-ΙΟ-甲氧基 -苯甲基 ）-2-氧基-1，2-二氫-[1，7]-萘啶-3-羧酸乙 酯，如反應式20之化學式47，經由使用類似於上述[1，8] 萘啶系列化合物之反應與方法。合成該些化合物之一連串 步驟顯示於反應式20。 -155-
20052H 反應式20
47
or K2C03> DMA, 90 °C
NaH, DMF, RT, 3 h
-156· 200524928 14467pif.doc 較佳，若哌嗪部分結構之取代基不是2-噻吩，可使用 對應之N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1-哌嗪羧 酸t-丁酯接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲 酮。 製備通用結構式（Id)之化合物 較佳化學式（Id)之化合物包括l-R-4-[4-(噻吩-2-羰 基）-峨曉-1-基]-2 -氧基-1，2-_*氣-[1，5]-奈卩定s-3·竣酸乙醋’ 其中萘啶環上位置1之取代基R可爲氫，烷基，取代烷基， 環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳 基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar 或-(CH2)WNR4R5，其中 m 爲 0， 1，2, 3 或 4。製備該些化合物可利用吡啶2,3-雙羧酸作爲一起始物 質。吡啶2,3-雙羧酸與醋酸酐反應而得fUr〇[3,44]吡啶-5,7_ 二酮，如反應式21之化學式48，其可轉化成吡咯並[3,44] 吡啶-5,7-二酮，如反應式21之化學式49所示，經由與乙 醯胺反應。此中間物經Hoffmann降解製備3-氨基吡啶-2-羧酸。還原氨化3-氨基吡啶-2-羧酸而得3-(4-甲氧基-苯甲 基氨基）-吡啶-2羧酸，如反應式21之化學式51所示。製 備此中間物可利用六甲基二矽胺鋰與P-甲氧基氯甲苯來烷 基化3-氨基異尼古丁酸而製備，顯示於反應式21。 200524928 14467pif.doc 反應式21
中間物3-(4-甲氧基-苯甲基氨基吡啶_2_羧酸，如反 應式21之化學式51，可用於合成通用結構式(Id)之化合 物，利用合成通用結構式（la)之化合物類似之反應式及方 法。可用於合成該些化合物之一連串反應顯示於反應式 22 〇 反應式22
-158- 200524928 14467pif.doc
製備製備甲腈基位於萘啶結構位置3之通用結構式 (Id)化合物 較佳化學式（Id)之化合物包括l-R-4-[4-(噻吩-2-羰 基）-哌嗪-1-基]-2-氧基·1，2-二氫-[1，5]-萘啶_3_甲腈，其中甲 腈基取代萘啶位置3之萘啶環上位置1之取代基R可爲氫， 院基，取代院基，環院基，取代環院基，芳基，取代方基， 芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環， 取代雜環，-(CH山C(=0)Ar，或-(CH2)WNR4R5,而 m 爲 0, 1, 2, 3或4。該些化合物製備係利用中間物4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-_^氨-[1，5]-奈陡-3-竣酸乙醋’ 如反應式23之化學式52,經由使用類似於上述[1，8]萘啶 系列化合物之反應與方法。合成該些化合物之一連串步驟 顯示於反應式23。 反應式23
-159- 200524928 14467pif.doc
£ O
POCI3, Et3N
Me〇x^ 90 °C, overnight Μ
N
Cl
CN N 、〇 TFA, Refluxed 24 h
ΝΗ
MeO
ci ,N、丄 /CN
+
N 〜0 ,N、 、N〆 Dabco, 110 °C overnight
CN 〇
X - R
NaH, DMF, RT, 3 h
or K2C03, DMA, 90 °C
5 〇 較佳，若哌嗪部分結構之取代基不是2-噻吩，可使用 對應之N-醯基哌嗪，經由以對應氯醯酸化物醯化1-哌嗪竣 酸t-丁酯接著再去保護，而不使用哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲 酮。 MIF做爲藥物標的 -160- 200524928 14467pif.doc 巨噬細胞遷移抑制因子（MIF)似是適合做藥品標的分 析，因其活性似與各種的病生理狀況有牽連。例如，MIF 顯示爲發炎的反應和細胞增殖之重要傳遞物（媒介）。關於這 點，MIF顯示可做爲一細胞素、一腦下垂體荷爾蒙，做糖 皮質激素-誘導免疫調節物，而最近更發現其可做一神經免 疫調節物和在神經方面之功能，參見Takahashi等人，
Med. 4:Ί0Ί1998; Bucala, Ann. N.Y. Acad. Sci. 840:74-82，1998; Bacher 等人，Mol. Med. ^/(4):217-230, 1998。此 外，最近亦發現抗MIF抗體有許多用途，包括減低腫瘤成 φ 長與血管生成，參見Ogawa等人,72(4):309-314， 2000; Metz及Bucala (同上）。同樣地，抑止MIF之小分子 對於治療發炎反應、減少血管生成、病毒感染、細菌感 染、癌症治療（特別是腫瘤形成與細胞凋亡apoptosis)、移 植對抗主體疾病及相關組織排斥治療等領域均有重大價 値。MIF的抑止劑是對許多醫療領域有效用，包括但是不 限於，各種免疫有關的反應、腫瘤成長、腎小球型腎炎 (glomerulonephritis)、發炎、瘧疾性貧血、敗血性休克、腫 瘤關聯血管生成、玻璃體視網膜病（vitreoretinopathy)、牛 ® 皮癬、移植對抗主體疾病（組織排斥）、異位皮膚炎、類風濕 性關節炎、發炎性腸躁症、中耳炎、Crohn氏症、急性呼吸 窘迫倂發症、延遲類型過敏症和其他等等。MIF的抑止劑 亦可用於治療壓力與糖皮質激素（glucocorticoid)功能相關疾 病例如反向調節糖皮質激素之作用；或推翻糖皮質激素所 媒介之抑制花生四嫌酸根（arachidonate)的釋放（Cys-60所 -161· 2〇〇52iad〇c 根據之催化MIF氧化還原酶或JABI/CSNS-MIF-反應所根據 之機制）。 MIF抑止劑應用範例之一可經由下列事實說明之，在 內毒素激化後，MIF於血漿中可偵測的濃度在急性期間（1-8 小時)遞增，在8小時達到頂點，並在後急性期間(>8小時） 維持達20小時之久。不論是何種機制，MIF可能是經由活 化的T-細胞和巨噬細胞在內毒素-誘導休克之發炎前期所產 生，如對感染之區域化反應。若經發炎前期刺激物如低劑 量之LPS或TNF-α或IFN-r所激化釋放，巨噬細胞-衍生 φ 之MIF極可能成在內毒素休克急性期間MIF之來源。在內 毒素休克後急性期間，此時感染不再限於一區域位置，則 對應LPS釋放MIF之腦下垂體和巨噬細胞均是可能的MIF 來源。參看如美國專利號第6,080,407號，有描述抗MIF 抗體之實驗結果，且在此全文倂入參考。 較佳實施例之抑止劑可在LPS激化後救治老鼠，調節 如IL-1 /5和TNF-α之水平。此外，MIF之抑止劑亦用於治 療各種發炎狀況。關於這點，抑止MIF活性及/或釋放或可 用來治療發炎反應和休克。不論經由介入早期以及晚期休 胃 克反應，都可以達到有益效果。在這方面，但不限於MIF 抑止之保護效果的任一理論或機制，抗MIF之硏究顯示引 入抗MIF抗體可導致循環血液中TNF-α水平相當程度的 (高至35-40%)的減少。該減少是與活體外MIF在巨噬細胞 之TNF-α誘導活性一致，並建議可能MIF某方面與內毒素 施用後1_2小時血漿中產生的TNF-α高峰有關，儘管此時 -162- 2〇〇52^8fd〇c 循環中尙不能偵測到MIF。因此，MIF抑止或許對治療發 炎反應早期有幫助。 MIF也和發炎反應後期有關，故有機會可運作於其他 的治療如抗TNF-α治療無效的發炎反應後期。MIF抑止能 防止在動物以高濃度（即引誘釋放腦下垂體MIF至循環中之 濃度）的內毒素與TNF-α激化所致的致命休克。因此，抑止 MIF和保護TNF刺激動物之能力，代表中和MIF或許在敗 血性休克較遲或後急性期間有效。 如同在此所證實，TNF-α和IL-1/5水平至少在某些實 φ 例是與MIF水平有相互關係。因此，一抗MIF小分子或許 可用在各種的TNF-α及/或IL-1/3相關疾病狀況，包括器 官排斥、免疫導致和發炎性的中樞神經疾病（例如阿茲海默 症、帕金森氏症或多重硬化症等等）、肌營養不良（退 化）、止血疾病（例如凝血病、靜脈閉鎖疾病等等）、過敏神 經炎、肉芽腫、糖尿病、移植對抗主體疾病、慢性腎臟損 害、脫毛（毛髮掉落）、急性胰腺炎、關節疾病、充血心臟衰 竭、心臟血管疾病（再狹窄或動脈硬化症）和骨關節炎。 更進一步之支持證據，指出類固醇（其爲細胞素生產的 ® 強力抑止齊〇會增強MIF之表現，參見Yang等人，Mo/. Md. 4(6):413-424，1998; Mitchell 等人，J· 5比/· C/2d 274 (25):18100-18106, 1999; Calandra 及 Bucala，0/7.及以. Immunol. 7 7(1):77-88, 1997; Bucala, FASEB J. 70(14):1607-1613，1996。因此，或許利用MIF抑止劑加上類固醇治 療’對治療的細胞素導致之病生理狀況如發炎、休克和其 他的細胞素-媒介之病理學的階段，特別是慢性發炎的狀況 -163- 2〇〇52iad〇c 如類風濕性關節炎有特殊的效用。如此的結合性治療或許 對已經啓動或發作致病性或其他的發炎反應也有益。例如 臨床證明，敗血性休克症狀發作後再施用類固醇只有少許 益處，參看 Bone 莩乂，从心2g/· J. 377: 653-658, 1987;
Spring 等人，从以从丄 3": 1137-1141，1984。結合類 固醇/MIF抑止治療或許能克服上述障礙。更進一步，熟知 此技藝者能了解此治療方法，可被修正去局部地及/或系統 地抑止MIF釋放及/或活性。 試驗組 要經由多種分析方法方能決定一化合物做爲MIF抑止 劑之有效性。較佳實施例的適當抑止劑是能夠減少一種或 更多和MIF及/或MIF輸出相關聯之活性。結構式（la)、 (lb)、（Ic)或(Id)或任一其他結構式的一化合物，可以評估其 做MIF抑止劑之活性，經由一種或多種公認的分析，包括 (但是不限於)下列分析。 該些分析可分成三類，分析監測其輸出、分析監測其 受動器（effector)或結合小分子以及監測其MIF活性。當 然，這些分析的結合應用也包括在本發明之應用範圍之 內。出人意外地，似乎MIF之抗原決定位定位（epitope mapping)可做爲生物學活性之評估方式。例如，當利用一 單株抗體（如從R&D系統Minneapolis可購買的）來偵測 時，一抑止劑之存在可阻止偵測出MIF從細胞（如THP-1細 胞)輸出，而一多株抗體卻偵測到MIF之存在。更進一步， 細胞（活體內）或試管（活體外）分析可用於監測那些可能的抑 止MIF活性之抑止劑。或者，二種分析(就是結合和活性分 -164- 200524928 14467pif.doc 析)可以結合成單一的分析，其偵測一試驗化合物之結合(例 如’去取代單株抗體或抑止其結合之能力）並影響MIF活 性。此類分析包括結合一 ELISA類型分析(或類似結合分析） 和一 MIF互變異性分析或類似功能分析。熟知此技藝者知 道使用何種分析並不重要，只要是能夠監測該化合物對 MIF之結合能力即可。此外，該分析寧可監測該化合物抑 止MIF活性之能力，因爲其選擇出和生物學上活化的MIF 產生交互作用的化合物，而非使MIF不作用的化合物。 而且，該化合物所表現出抑止單株抗體結合到生物學 fp 上活化的和不活化的MIF(即小分子抑止）之能力，必然代表 一化合物（如一小分子）與MIF產生交互作用，若不是改變 MIF的形態就是阻塞一抗體結合所必需的抗原決定位。在 其他的實施例中，MIF抑止的活性亦可經由干擾包括MIF 之一多肽錯合物之形成所造成;干擾如此一複雜錯合物可能 造成型態上之改變而抑止偵測。因此，使用監測MIF型態 改變的分析，對於測量化合物之間競爭之分析如小分子和 mAb ’是相當有幫助的，亦或是做爲該分析之替代。許多 此領域著名的分析包括，量熱法、圓二色性（CD)，螢光能 ® 量遷移，光線-散射，核磁共振（NMR)，表面電漿子共振 (SPR)，閃爍逼近分析（參看美國專利第5,246,869號）之類 的。也參見 W002/07720-A1 和 W097/29635-A1。因此，熟 知此技藝者能使用任一分析，只要能指出結合能力，最好 是接近MIF活化位置的型態改變或變化。下列描述幾個更 複雜之鄰近度分析和型態分析，該討論只是作示範和解 釋，並非限制較佳實施例的技術類型。 -165- 20052爆。c 在一實施例中，圓二色性（圓偏光二向性，CD)被用於 決定候選抑止劑之結合。使用圓二色性（CD)主要是根據， 大多生物學之蛋白質高分子是由不對稱單體單位如L-氨基 酸所組成，因此多具有光學活性。而堅硬結構如DNA或一 阿法螺旋狀多肽也具有適當分光鏡系統可量測之光學性 質。事實上，利用容易量測之分光鏡參數的改變，能成爲 選擇之方法以確認結構狀況和在各種情況下結構狀況之改 變，以及觀察高分子中被擾動的單獨基或隸屬於高分子的 單獨基被擾動。更進一步，CD分析時常被使用於探查多種 φ 高分子和小分子以及鍵結分子（ligands)的相互作用，參見 Durand 等，5/叩/2；^· J· 27(2):147-151，1998; Kleifeld 等， 3夕（26):7702_7711，2000; Bianchi 等，㈣ 35(42):13844-13852，1999; Sarver 等， 7434(2):304-316, 1999。 巴斯德原理所示，光學活性分子必定得不對稱，亦即 該分子和其的鏡像不能重疊。平面極化光線是結合左側圓 極化光線和右側圓極化光線同相旅行。極化光線和一不對 稱分子相互作用的結果導致某一側極化光於一吸收區之優 先作用，而觀察一吸收差異（就是一二色性），參見Urry， D.W.的「觀察生化分子之光譜學方法，美國醫學協會ΙΠ.， ρρ·33-120 (1969)」；Berova 和 Woody，「圓二色性:原理和應 用，JohnWiley&Son，紐約（2000)」。 圓二色性（圓偏光二向性）是一吸收現象，肇因於一 色團和平面極化光線在一指定波長交互作用。吸收帶可爲 正或負，依該色團之右側與左側圓極化要素之吸收差異而 -166- 20〇52 響。ifd〇c 定。不像光學旋轉分散（ORD)，其從真正相互作用地區數毫 微米外測量背景値和色團之貢獻値；CD之優點是在於真正 發生地點、於特定波長測量光學性質。圓二色性是針對色 團之電子過渡做量測。參見Berova和Woody，「圓二色性： 原理和應用，John Wiley& Son，紐約（2000)」。 應用圓二色性量測高分子溶液可確認形態狀況（Berova 和Woody，「圓二色性：原理和應用，John Wiley& Son，紐約 (2000)」）。該技術能辨認任意的螺旋捲屈、阿法螺旋和貝 它鏈形狀態的高分子。在蛋白質，阿法螺旋狀纖維蛋白質 φ 顯示一吸收曲線，類似那些的阿法螺旋狀多肽，但是在已 知球狀蛋白質的結構，如溶解酵素和核糖核酸酶 (ribonuclease)，螺旋狀結構並不易經由X光線結晶學解 出。關於球狀蛋白質結構之另一困難，在於其分子之強勢 芳香族色團吸收帶在28〇nm。下面以肌血球素和脫肌血球 素做螺旋狀結構改變之一有趣的例子。移除輔基血紅素 (heme)後，剩下的脫肌血球素所有的剩餘圓二色性橢圓率 被降低了 25%。該分子中有10-15個單位被展開而致使螺 旋形狀喪失。其他的非肽、光學活性色團包括位於一高分 ® 子主要的氨基酸序列之酪氨基酸、色氨基酸、苯基丙氨基 酸和锍基丙氨基酸。非肽橢圓率的例子包括核糖核酸酶中 二硫化物過渡和胰島素中锍基丙氨基酸過渡。 因此，圓二色性可用於篩選候選抑止劑去影響MIF形 態之能力。 在某些實施例中，MIF-結合劑或抑止劑錯合物形成， 可以經由偵測包括MIF和偵測標定結合劑之一錯合物之存 -167- 20052郷- 在而決定。下面描述更多細節，例如經由螢光極性，螢光 能量信號偵測，提供決定的信號水平，代表MIF-結合劑分 子錯合物之形成。所以，在有或沒有一候選抑止劑存在 時，以螢光能量信號對MIF-結合劑錯合物形成之對照，可 以確認是否該抑止劑對MIF和結合劑之間的相互作用是否 有影響。例如，結合劑或許是一 MIF基質、一抗-MIF抗體 或一已知抑止劑，當然，抑止劑亦可以此法來測驗之。 如上所述，一較佳實施例也包括以螢光能量信號決定 MIF_結合劑錯合物形成。螢光能量信號偵測或許是，例如 φ 經由營光極性或螢光共振能量遷移，或經由其他的螢光機 制。如實施例之一例，MIF多肽或許被抑止劑標示並包含 一能量遷移分子供給-接受對，而決定能量遷移分子供給者 轉至接受者之螢光共振能量遷移。 在實施例中，候選抑止劑及/或結合劑是被標示，而在 較佳實施例中，候選抑止劑及/或結合劑是能夠產生一螢光 能量信號。依照所選擇之特殊的螢光能量技術，候選抑止 劑及/或結合劑有可能經由共價或非-共價地附上一適當報告 分子，例如任一螢光物質（如螢光團），來做標示以便偵測。® 螢光報告基和其所適用之方法可參照如：Haugland (1996 年螢光探針和硏究化學品手冊-第6版或1999年螢光探針 和硏究化學品手冊-第7版，分子探針，Eugene或 h 11 p: //\v w w. p r 〇 b e s. c 〇 m /1 i t/)及其所引之參考文獻。在較佳實 施例中較優良之螢光團是螢光素、若丹明（rhodamine)、德 州紅、AlexaFluor-594、AlexaFluor-488、奧勒岡綠、 -168- 200524928 14467pif.doc BODIPY-FL和Cy-5。然而，任一適當螢光團均可使用，而 在一些實施例中或許並未列出之營光團是較佳之選擇。 在此所述，一螢光能量信號包括任一螢光放射、激 化、能量遷移、淬滅或去淬滅等等。典型螢光能量信號或 經由一螢光標示候選抑止劑及/或結合劑對光線一適當波長 的反應所促成。一般螢光能量信號產生涉及一適當能量源 (例如對應選擇螢光報告基或螢光團之一適當波長光線)激化 螢光團，其短暫地將能量狀況從一基態激到一受激態。受 激的營光團依次以可偵測的光線之形式放出能量，而與激 φ 化波長不同之波長（通常較長波長），並因此其返回能量基 態。較佳實施例中所使用之螢光能量信號，依不同螢光 團、基質和偵測法，而以熟知此技藝者所知之技術而調 整。 在特定實施例中，螢光能量信號是一營光極性（FP)信 號。在其他的實施例中，螢光精力信號或許是一螢光共振 能量遷移（FRET)信號。在其他的較佳實施例，螢光能量信 號有可能是一螢光淬滅（FQ)信號或一螢光共振光譜(FRS)信 號。（關於FP、FRET、FQ和FRS之細節參見· W097/39326、W099/29894 與 Haugland，1996 年螢光探針 和硏究化學品手冊-第6版，第456頁以及其所述之參考文 獻）。 FP，測定螢光團平均角置換之方法（由於分子旋轉散 佈）^發生在從光源吸收一光子和隨後放射的一光子之間， 視螢光團受激狀態旋轉散佈之範圍和比例而定，視分子的 大小與形狀、溶液黏度和溶解溫度而定(Perrin，1926 J. -169- 200524928 14467pif.doc Λπ/.1:390)。當黏度和溫度保持不變，FP直接地與螢光團 分子量或尺寸有關。極性價値是不同平面（例如直立和水平 的）所量測的螢光強度比率，因此是無單位而不會被螢光團 強度所影響。低分子量螢光團，如標示候選抑止劑及/或結 合劑，能夠在溶液中快速分子自轉(即低非等向性），故引致 低螢光極性讀取値。但當錯合至一複雜的高分子量分子諸 如MIF，與錯合物連結之螢光團部分在溶液中展示較緩慢 分子自轉(即高非等向性），導致高螢光極性讀取値。 自由的標示候選抑止劑及/或結合劑與MIF:抑止劑及/ φ 或結合劑錯合物之極性價値的差異，可用於決定錯合與自 由之比率。該差異亦可用於探知一實驗物(即候選人抑止劑） 在錯合物形成及/或在初錯合物穩定度之影響，例如經由比 較有與無實驗物之FP。FP測定法可用於測量沒有分離的反 應物。 如上所述，較佳實施例一方面利用單株抗體、已知抑 止劑，或其他的結合劑之結合或置換及/或抑止劑和MIF錯 合物之形成，以提供一方法來確認改變MIF活性的一抑止 _ 劑。出人意外地，較佳實施例之抑止劑的識別是以如此不 傳統之方式所識別出。關於這點，某一類的化合物確顯示 出禁止/減少單株抗體結合到細胞自然產生活化的MIF之能 力；但不影響抗體辨識不活化的（重組)MIF(商業購買）之能 力，並在活體實驗中顯示明顯調控MIF的活性。因此，抗 體結合或許是酵素活性之較佳評估方法，省略針對每個候 選化合物跑昂貴和複雜酵素分析之需要。如熟知此技藝者 所知，省略酵素分析可導致該分析適於高通量使用。 -170- 200524?i78p,d〇c 更進一步，如熟知此技藝者所知，如此分析可用於不 同於MIF之其他方面，只要酵素或生物活性可能經由一結 合分析所決定。例如，任一酵素或其他的多肽，只要其生 物學上活化型可被一單株抗體辯識，但其不能辯識不活化 型(例如小分子抑止型）。對酵素而言，單株抗體可能結合至 活化位置，但是被一小分子置換。如此，任一小分子置換 該抗體，或許是可能的酵素抑止劑的一個線索。如熟知此 技藝者所知，該抗體可認出一抗原決定位，其抗原決定位 依酵素活化狀態改變形態，而一小分子和抗原決定位結合 φ 排除抗體結合到這抗原決定位，亦可充當酵素活性評估 法，即使抗原決定位不是在該活化位置。因此，在此利用 這類型的分析或許擴充到任一多肽上，當抗體置換可預期 喪失活性。如此，在最簡單的型態來說，任一多肽例如酵 素和其相關中和抗體，都可用於篩選置換抗體之小分子， 因此確認可能的抑止劑。 MIF-結合劑/候選抑止劑錯合物或許可經由各種的技術 識別’來顯示在MIF和如上所述其他分子之間的相互作 用’例如’共純化、共沈澱、共免疫沈澱、放射或螢光檢 — 測分析、西方免疫點墨法、親和力補獲法包括親和技術諸 如固態正反鍵結吸附技術、親和層析法和表面親和電漿子 共振、NMR之類的（參看如美國專利第5,352,660號）。決定 如此一錯合物之存在可能用抗體，包括單株、多株、嵌合 和單鏈抗體之類的，其特定結合到MIF或結合劑。 標示的MIF及/或標示的結合劑/候選抑止劑也能用於 探知一錯合物之存在。該分子之標示有可能是經由共價或 -171- 200524928 14467pif.doc 非共價附上一適當報告分子基，例如任一種酵素、螢光物 質、化學冷光物質和放射性的物質。適當酵素的例子包 括，但是不限於，辣根過氧化酶、鹼磷酸酯酶、半乳糖 甘酶（galactosidase)和膽磷酯酶（acetylcholinesterase)。適當 營光物質的例子包括，但是不限於：饊花素 (umbelliferone)、螢光素、螢光素異硫氰酸酯、若丹明、雙 氯三嗪胺（dichlorotriazinylamine)螢光素、丹醯氯化物、藻 紅朊（phycoerythrin)、德州紅、AlexaFluor-594 、 AlexaFluor-488、奧勒岡綠、B0DIPY-FL 和 Cy-5。適當冷 _ 光物質包括，但不限於：發光胺，而適當放射性的物質包 括放射性的磷[32P]、碘[1251或mI]或氚[3H]。 MIF與結合劑及/或抑止劑會在下面條件結合，並經過 一段時間以充分准許該些物質形成一分子間錯合物。形成 的如此錯合物之適當條件狀況是熟知此技藝者已知的，並 依所使用溶液狀況和偵測錯合物方法及/或偵測溶液中自由 基質方法而調整。 錯合物中標示的結合劑及/或候選抑止劑和MIF之關 係，及/或非錯合物之一部份的結合劑或候選抑止劑之關 _ 係，可依照較佳實施例經由偵測基質產生一螢光能量信號 來決定。典型地，如熟知此技藝者已知的，螢光能量信號 之光源之選擇是依照螢光報告基和基質之標定而決定。試 驗溶液，包含(a)MIF和（b)偵測性標示結合劑及/或候選抑止 劑，會暴露能量光源以產生一螢光能量信號，其依照特殊 的螢光能量信號以各種的已知儀器和技術來量測識別。在 較佳實施例中，營光能量信號是一螢光極性信號，可利用 -172- 200524928 14467pif.doc 光學螢光儀配置極化過濾器來測量。在特定較佳實施例 中，螢光極性分析同時發生在各個反應室中，使用一 LJL CRITERIONO分析(L几生物系統，Sunnyvale，CA)讀盤儀 來讀取，例如提供一高通量篩選(HTS)，在各反應室中有不 同反應構成要素或狀況。其他適於獲得螢光極性讀取當儀 器的例子包括P〇LARSTARTM(BMG實驗技術，Offenburg， Germany)，BEACON™(Panvera 公司，Madison，WI)與 P0LARI0NTM(Tecan 公司，NC)等儀器。 在MIF和結合劑及/或候選抑止劑之間形成之一錯合物 φ 的存在是經由各種的方法來決定，如上所述，包括螢光能 量信號方法。該方法可能包括，舉例但不限於FP、FRET、 FQ、其他的螢光分析，共純化、共沈澱、共免疫沈澱、放 射或螢光檢測分析、西方免疫點墨法、親和力補獲法包括 親和技術諸如固態正反鍵結吸附技術、親和層析法和表面 親和電漿子共振、圓二色性之類的。有效之親和技術請參 看例如：Scopes，R.K.，蛋白質純化：原理和應用，1987，NY;
Weir，D.M.，實驗免疫學手冊,1986，Blackwell 和 Hermanson，應 G.T.等，固定親和鍵結分子技術，1992，在此其全文倂入參胃 考；敘述關於分離和辯識錯合物技術，包括親和技術細 節。在許多實施例中，MIF可與結合劑及/或候選抑止劑經 特定鍵結結合，若MIF與結合劑及/或候選抑止劑之Ka大 於或等於約1〇4 M-1，寧可大於或等於約1〇5Μ-1，較佳是 大於或等於約1〇6Μ-1，最好是大於或等於約1〇7Μ-1到 l〇uM-l。結合物之親和度有可能是從依照螢光能量信號方 -173- 200524928 14467pif.doc 法和已知慣例資料處置技術產生的資料來計算所得，參見 Scatchard 等，/⑽·从广 &/· 57:660 (1949)之描述。 例如，在多個實施例中當螢光能量信號是一螢光極性 信號時，自由標示候選抑止劑及/或結合劑的螢光非等向性 (在極化光）可在無MIF時決定，和完全鍵結基質之螢光非 等向性（在極化光）亦可以MIF滴定劑量來決定。在極化光 之螢光非等向性隨標示候選抑止劑及/或結合劑在螢光團受 激態之總計的旋轉運動量而改變，因此自由和完全鍵結候 選抑止劑及/或結合劑之非等向性可有效地用於決定抑止劑 · 及/或結合劑連結至MIF之比例，在一設定的實驗狀況，例 如，那些一候選實驗物有存在之情況，（參見如： Lundblad^, \996 Molec. EndocrinoL 10:607; Dandliker 等， 1971 /mmtz⑽cAem. 7:799; Collett，E·，極化光：基礎及應用， 1993) 〇 較佳實施例之部份關於使用的分子間能量轉移篩檢 MIF-結合劑錯合物之形成和穩定度及/或MIF-候選抑止劑錯 合物形成。 能量遷移（ET)是從二分子之間：一能量-捐贈"供給者’’分 子和一能量-承受’’接受者”分子’經一共振作用產生。能量 遷移在什麼時候發生：（1) ’’供給者’’之放射光譜和’’接受者π 的吸收光譜重疊（2)’’供給者’’和’’接受者’’彼此是在一定距離 範圍內（例如少於約l〇nm)。能量遷移效率主要由’’供給者” 和”接受者”接近距離而定，依照距離之六次方減少。ET測 定故強有力反射出”供給者’’和’’接受者’’化合物之距離’而 -174- 20052獨 fdoc ET之改變也敏感地反射出化合物之接近，如”供給者”和”接 受者π之接合或分離。 因此較佳實施例一方面提供一種試驗候選MIF抑止劑 的方法，經由接觸MIF或包括至少一個ΕΤ供給者或接受 者分子之MIF-結合劑錯合物，激化ΕΤ供給者以產生一激 化的ΕΤ供給者分子和探知經由ΕΤ供給者能量遷移到ΕΤ 接受者所產生之一信號。如此所述，本方法使用任一適當 ΕΤ供給者和接受者，只要能做爲供給者-接受者對。 在較佳實施例中，經螢光共振能量遷移（FRET)產生一 φ 可偵測的信號，是經由ET供給者和接受者分子之間能量遷 移造成，如前面所討論。FRET是在一分子或在二種不同類 型的分子之間發生，當能量從一激化的供給螢光團直接地 轉移到一接受營光團（見Wu等 2後 1-13, 1994)。 在較佳實施例的其他的方面，關於分析試驗候選抑止 劑影響MIF輸出之能力。 分析第一步是於細胞外探測MIF。爲了分析，使用表 現MIF細胞（例如THP-1細胞）。若不是該試驗細胞可自然 φ 產生此蛋白質就是其能經由一轉殖載體產生此蛋白質。最 好該細胞可正常表現該蛋白質，而轉殖只是增加表現。如 此，對於表現MIF和IL-1，THP1細胞是較佳。當化驗病 毒·衍生蛋白質時如HIV ，假如細胞不’’自然’’生產此蛋白 質，則可輕易地以一適當載體轉殖而使細胞表現所要的蛋 白質。 -175- 2〇〇52娜· 表現之後，經由各種的已知方法和程序來偵測MIF， 方法包括流動細胞儀配合抗體染色、等焦顯微鏡、影像分 析、免疫沈澱細胞透明質或培養、西方點墨偵測細胞培 養、ELISA、卜或2-D膠分析、HPLC或生化試驗分析。適 於初期篩選之分析爲ELISA 〇MIF之輸出或可經由其他的 分析證實，較佳是經由代謝標示後免疫沈澱細胞培養。表 現MIF蛋白質細胞先以35S-蛋氨酸及/或35S-锍基丙氨酸在 無蛋氨酸中及/或無锍基丙氨酸之培養液，脈衝式標示15 分鐘，追加過量蛋氨酸及/或锍基丙氨酸之培養液。培養液 分段收集，如在微離心機離心澄清。溶解緩衝液包含 1%ΝΡ-40, 0.5%脫氧膽酸(DOC)，20mM Tris，PH 値 7.5, 5mM EDTA，2mM EGTA，10nM PMSF，10ng/ml 抑肽酶 aprotinin， lOng/ml亮肽抑酶leupeptin和lOng/ml胃蛋白酶抑制素 pepstatin，加到這澄清培養液中。加入一抗MIF抗體並培 養在寒冷環境，然後加入一沈澱第二抗體或免疫球蛋白結 合蛋白質如蛋白質 A-Sepharose®或 GammaBind™-Sepharose®，做進一步培養。平行進行做一控制組的是監 測一細胞質蛋白質，而最好以一細胞質蛋白質抗體進行免 疫沈澱。免疫結合物沈澱以冰冷溶解緩衝液沖洗。結合物 再以冰冷IP緩衝液沖洗（0.15M NaCl，10mM鈉磷酸鹽PH 値7.2, 1%D0C，l%NP-40, 0.1%SDS)。免疫結合物直接地倒 入SDS-凝膠緩衝液而以電泳跑SDS-PAGE。凝膠處理標示 螢光、乾燥並暴於X光軟片。此外，細胞有可能設計生產 一被報告基標示之MIF，因此一活化MIF之存在與否可經 由這報告基之活性來評估。 -176- 200524¾.〇c 不限於任一理論，本發明抑止劑之功能是經由直接和 自然生產MIF錯合物交互作用，而改變蛋白質的形態足以 阻塞其生物活性。此相互作用有可能經由X光結晶學測量 MIF-化合物共同結晶來決定相互作用的正確位置。一位於 凹口之區域位置應該是負責MIF互變異構酶活性。 篩選分析MIF輸出抑止劑，視抑止劑類型和活性之特 質而改變。分析可在試管W^o)或在活體〇 v/vc)中試 驗。大致而言，在試管中之分析是設計來評估MIF活性或 多重化，而在活體分析是評估在一模式細胞或動物系統 MIF活性，細胞外和細胞內區域化。在任一的分析中，與 控制組相較有統計上有意義的增或減是表示增強或禁止。 有一種試管分析是經由檢查候選化合物對於MIF禁止 巨噬細胞遷移能力之影響測得。人類末稍血液單核細胞是 較佳的指示性細胞，在一洋菜滴分析系統，描述請參見 Weiser 等，Ce//· /wmwwo/· 90:167-178，1985 與 Harrington 等, /· 以0:752-759，1973。其他能夠試驗分析巨噬細 胞遷移系統也可使用，參見Hermanowski-Vosatka等， Biochem. 38:12841-12849，1999。 另一種試管（活體外）分析是設計測量MIF催化多巴色 素（dopachrome)之D-同分異構物互變異構化的能力（參看 Rosengren 等，Mo/· MW· 2:143-149, 1996; Winder 等，J. Ο// Sc/· 706:153-166，1993; Aroca 等，J. 277:393， 397)。簡單來說，此方法是在有或沒有候選抑止劑時，提 供D·多巴色素予MIF而監測催化互變異構化成爲5,6·雙氫 氧基吲哚-2-羧酸（DHICA)之能力。然而，欲觀察一快速反 -177- 2 Ο Ο524Q》务if doc 應速度最好使用d-多巴色素的甲基酯。互變異構化的偵測 可經由任一種的標準方法進行。 在一類似分析中，試驗MIF催化苯丙酮酸 (phenylpyruvate)互變異構化的能力（參看Johnson等， 3外48):16024-16033，1999)。該方法中，典型苯丙 酮酸或（P-氫氧苯）丙酮酸的酮化是以光譜儀監測。更進一 步，產物形成或可經該些化合物和MIF治療而確認並隨後 轉變到蘋果酸以1H NMR分析。 在活體分析可使用被包含一 MIF核酸分子之載體所暫 φ 時或穩定轉感染之細胞。該些細胞最好是在有或沒有一候 選化合物時，測量MIF活性(例如細胞调亡ap0pt〇sis調節 或增殖等）或細胞外和細胞內區域化。當試驗細胞凋亡時， 可使用各種細胞分析，包括如染劑染色以顯微鏡檢查核酸 碎片和細胞孔隙性。 其他的分析可在細胞或動物系統進行，經由提供該系 統重組或自然產生形式的MIF，或在有或無試驗化合物時 引誘內生性MIF表現’而決定在那個系統病理上的有統計 重要意義的增加或減少。例如，LPS可用於誘導一毒性休 ® 克反應。 在此簡單描述之分析或可用於確認特定於MIF之一抑 止劑。 描述在此的任一分析中，試驗細胞可自然表現MIF (例 如THP-1細胞)或再引入一種轉譯此蛋白質之重組DNA分 子後，可表現MIF。轉感染和轉殖程序是此領域所眾知， 包括CaJO/r媒介轉感染、電注法（eiectr〇p〇ration)、以病毒 -178- 2〇〇524^ifd〇c 載體感染、DEAE-聚合葡萄糖媒介轉感染之類的。除了上 述蛋白質，另一種可使用的蛋白質包括嵌合MIF蛋白質(即 融合MIF蛋白質與其他蛋白質或蛋白質碎片），或蛋白質 序列處理而缺少一領導序列。同樣地，一融合物亦可設計 是與分泌、輸出或細胞質留滯等方面相關。前述任何相關 序列可用於融入建造包含MIF之融合物來幫助辯識抑止 劑。宿主細胞也能表現MIF，當其被一病毒之類的感染 後。經由一領導序列而輸出之分泌蛋白質，是此領域所已 知且包括，人類絨毛膜促性腺激素(hCGa )、成長荷爾蒙、 肝細胞生長因子、運鐵蛋白、神經生長因子、血管內皮生 長因子、卵白蛋白和類胰島素生長因素。同樣，已知細胞 質蛋白質包括：新黴素磷酸轉移酶、/3-半乳糖甘酶、肌動 蛋白和其他的細胞支架（cytoskeletal)蛋白質，和酵素如蛋白 質激酶-A或C。最有用之細胞質或分泌蛋白質是那些可輕 易以便利方法諸如ELISA分析的。此三種蛋白質(無領導序 列的、分泌和細胞質蛋白質）之產生可以經由宿主細胞自然 地共同表現，經由共同轉殖入宿主細胞，或各別轉殖入到 不同宿主細胞。再者，在此所述之分析中，細胞或許是穩 定地被轉殖或僅是短暫表現該蛋白質。 免疫沈澱分析可用於決定抑止效果。自然表現MIF或 經引入一載體而表現MIF之細胞，以35S-蛋氨酸及/或35S-疏基丙氨酸在無蛋氨酸及/或無疏基丙氨酸之培養液，脈衝 式標示15分鐘或更長。之後，追加含過量但無標示之蛋氨 酸及/或锍基丙氨酸的培養液沖洗，沖洗液附加肝素假如無 領導序列的蛋白質是肝素結合。細胞然後培養於相同追加 -179- 2〇〇524_ifdoc 培養液中不同時間。不同濃度之候選抑止劑或增強劑加到 培養中。收集和澄清培養上清液。將上清液和抗-MIF免疫 血漿或一單株抗體一起培養，或假如使用一肽標籤則將上 清液與抗_標籤抗體一起培養，接者加入一成形試藥諸如 Staphylococcus aureus Cowan-I 株、蛋白質 A-Sepharose®、Gamma-bindTMG-Sepharose⑧。免疫結合物離心 沈澱以含 1% NP-40, 0.5%脫氧膽酸，EGTA，PMSF，aprotinin， leupeptin與pepstatin緩衝液沖洗。結合物再以含鈉磷酸鹽 PH値7.2，脫氧膽酸，NP-40與SDS之緩衝液沖洗。免疫結 __ 合物直接地倒入SDS-凝膠緩衝液而以跑SDS-PAGE分離 之。凝膠處理標示螢光、乾燥並曝於X光軟片。 ELISA或是較適用於探知和定量細胞上清液中MIF的 總量。ELISA適用於高通量篩選之監測。96孔盤上覆以抗-MIF抗體或抗-標籤（示）抗體，清洗並以2%BSA阻塞之。加 入上清液至盤中。接者培養和清洗，加入一第二抗體（例如 抗MIF抗體）。該第二抗體或是結合到一標籤或到偵測試藥 如一酵素或到生物素（維生素H)。更進一步培養之後，加入 一成形試藥，並以ELISA盤讀儀定出MIF之總量。該成 # 形試藥是結合到第二抗體（典型爲抗-同質異構抗體）酵素之 受質或結合到streptavidin酵素之受質。已知適當酵素包括 辣根過氧化酶，其作用在受質上（例如ABTS)上而導致色差 反應。當然與其使用一第二抗體結合到酵素，也可以使用 抗-MIF抗體直接地結合到辣根過氧化酶，或其他的相當的 偵測試藥。若需要，細胞上清液可濃縮以增強偵測水平。 更進一步，偵測方法如ELISA之類的，可用於監測細胞內 •180- 20052讎 doc 和細胞外的MIF水平。若需要測量細胞內之水平，最好使 用細胞溶解混和物。若需要測量細胞外之水平，最好使用 細胞培養液。 ELISA亦適合用於高通量篩選多種候選抑止劑或增強 劑。該分析可便利使用於細胞和96孔盤。不論是自然表現 或穩定表現MIF之試驗細胞，以足夠的量被覆在盤中，以 充分表現產物偵測，例如約20,000細胞/每孔。然而，假如 細胞不自然表現此蛋白質，可經由諸如：電注法或Ca2P04-媒介轉感染以達到短暫表現。對電注法來說，96孔盤中每 一孔注入100/^1的細胞混合液（例如150,000細胞/ml)和 DNA載體（5 μ g/ml)。細胞是以一 96-孔電極儀（例如 ECM600電注系統，Genetronics公司）進行電注法。電注法 最理想的狀況是依特定的宿主細胞類型以實驗決定的。電 壓、電阻和脈衝長短是標準的改變參數。電注法準則可由 製造業者獲得或參考實驗手冊，諸如：目前分子生物學手 冊（Ausubel 等（ed.)，Wiley Interscience，1987)。細胞以等量培 養液稀釋並培養48小時。電注法可用在多種細胞類型，包 括哺乳動物細胞、酵母菌細胞或細菌之類的。培養後，加 入有或沒有抑止劑之培養液和細胞進一步培養1-2天。此 時，收集培養基和蛋白質分析之。最好是用ELISA來偵測 蛋白質。試驗初始濃度50//M。假如所使用之劑量造成輸 出一統計上重要的減少或單株抗體偵測的減少，試驗抑止 劑則更進一步試驗劑量反應。 或者，濃縮上清液可在SDS-PAGE凝膠跑電泳再轉移 至一固體如尼龍或硝化纖維上。然後MIF經由一免疫點墨 -181- 20052郷 doc 法偵測(參看Harlow，抗體:實驗手冊1988)，利用抗體對包 含一等向性（isotopic)或非等向性報告基之MIF。該些報告 基包括，但不限於：酵素、輔因子、染劑、放射性同位 素、化學冷光分子、螢光分子和生物素（維生素H)。較佳情 況，報告基是1251或辣根過氧化酶，可經由和2,2’-azino-雙-3-乙苯噻唑啉（ethylbenzthiazoline)磺酸。這些偵測分析 也適用於當MIF包含一肽標籤，而該抗體結合到該肽標籤 上。其他的分析組包括：根據尺寸大小或電荷分離之層析 法，包括HPLC和親和層析法。 或者，可用生化試驗來定量細胞培養液中活化的MIF 之總量。例如，MIF的生化活性是經由一巨噬細胞遷移分 析測量。細胞以一包含MIF表現載體轉感染，再培養約30 小時，期間加入一候選抑止劑或增強劑。培養之後，細胞 移至一低血漿培養液中做進一步培養16小時。培養液離心 分離並澄清。加入包含蛋白質酵素抑止劑之緩衝液到培養 液，或者，如下所述溶解細胞以決定內部水平。MIF的生 化活性是經由巨噬細胞遷移分析或同分異構酶（isomerase) 活性，或一增殖分析來測量。一增殖分析是加入不同量的 溶出液至靜止的3T3細胞來測量。胸腺喃11定核甘滴定加至 培養液而大槪24小時後測量TCA沈澱量。與活性攸關的 染劑MTT之偵測量減少也可用於測量增殖。使用純化重組 人類FGF-2做一標準。其他適當的生化試驗可用於評估其 他的功能，諸如CPS誘導毒性休克、TSST-1誘導毒性休 克、膠原質誘導關節炎等等。 20052獨 £d〇c 其他的活體外之血管增生分析包括測量內皮細胞在膠 原質膠範圍內之增殖(Goto等，實驗室硏究69:508，1993)， 共培養腦毛細內皮細胞在膠原質膠而以一室與輸出MIF蛋 白質細胞分開（Okamure 等，及.C· 7狀:1471，1992; Abe 等， J· C/h· 92:54，1993)，或細胞遷移試驗（Warren 等，
Clin· Invest· 95Λ789, 1995)。 抗體之製浩 ”抗體antibody，”使用於此代表一廣義之名詞，依照其 常見含意使用，包括，但非限制，多株、單一特定 (monospecific)和單株抗體，前述抗體與抗原結合的碎片。 而關於較佳實施例的抗-MIF/目標（祀）抗體，名詞”抗原••使 用於此代表一廣義之名詞，依照其常見含意使用，包括， 但非限制，是一巨噬細胞遷移抑制因子多肽或一目標(靶）多 肽、或其變異或其功能上碎片。一抗-MIF/靶抗體，或如此 抗體與抗原結合的碎片，可經由對於目標(靶）多肽或其抗原 決定位之指定結合活性而辯識出來；而目標（靶）多肽或其抗 原决定位的ί辰度至少約lxl〇5M 1，一*般至少約lxlO6 ， 最好至少大約lxl〇8 Μ·1。一抗_MIF/靶抗體的Fab、 F(ab’)2、Fd和Fv碎片，其保留MIF/靶多肽-特定抗原決定 位之指定結合活性，是包含在較佳實施例範圍內。在此所 感興趣的是’那些結合到多肽之抗體以及其被結合的一抑 止小分子所取代。此領域所熟知的是，如此移位有可能是 結構改變的結果，因此而改變抗原決定位之本質、和抗原 決定位之競爭性結合或從抗原決定位立體排除。在某一例 中’該酵素的活化位置是與一特殊的抗體之抗原決定位， -183- 20052爾ifd〇c 而經由一小分子結合於或接近該活化位置，這抗體喪失免 疫反應活性，因此該抗體喪失免疫活性可被使用做爲辯識 偵測酵素活性。 此外，”抗體”使用於此代表一廣義之名詞，依照其常 見含意使用，包括，但非限制，可以是自然產生抗體和非 自然產生抗體，包括如單鏈抗體、嵌合、雙重功用和人類 化的抗體與，和其抗原-結合碎片。該些非自然產生抗體可 以以固態縮氨酸（肽）合成製造，或許以重組方式產生，亦可 ^ 以如經由篩選重組樣品庫包括可變重鏈和可變輕鏈而獲得 (Huse 等，Scz—ce，246:1275-1281 (1989))。其他的抗體如嵌 合、人類化、CDR-移植、單鏈和雙重功用抗體之製造方法 是已知，可參見（Winter 與 Harris, /wmwwo/· ZWa少 74:243-246 (1993); Ward 等，TW/ii/re 347:544-546 (1989); Harlow 與 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1992); Borrabeck， 办 2d ed·，（1995); Hilyard 等，iVoieh
Engineering: A practical approach (1992)) ° 較佳實施例中，培養抗-MIF/靶抗體可利用一免疫原 (immunogen)，例如，分離縮氨酸（肽）包括MIF活化位置或 目標多肽，可經由自然來源或重組產生，如上所述，或 MIF/目標多肽的一免疫原（抗原）碎片（例如：抗原序列包括 8-30或更多連續氨基酸序列），包括如上所述之合成縮氨 酸。MIF/目標多肽之非-抗原縮氨酸部份有可能變成抗原性 的，經由結合附著素（hapten)至運送分子諸如牛血漿蛋白質 (BSA)或鑰孔帽貝血藍素（KLH)，或經由融合蛋白質形式表 達該縮氨酸部份。多種運送分子和其他的方法可用以結合 -184- 2〇〇524m,〇c 附著素到運送分子上是爲人所熟知的（參見同上Harlow和 Lane，1992) 〇 在如兔子、山羊、老鼠或其他的晡乳動物中培養多株 抗體之方法是此領域所熟知。此外，單株抗體之獲得方法 也是此領域所熟知（參見同上Harlow和Lane，1992)。例如 從目標多肽-免疫化之哺乳動物獲得的脾臟細胞可融入到一 適當骨髓瘤細胞株如SP/02骨髓瘤細胞，以產生融合細 胞。選殖之融合細胞株行利用一標籤目標多肽或其功能碎 片來確認轉殖株能分泌目標多肽單株抗體且有想要之特定 φ 性。能夠表現有想要之特定性或親和力的目標多肽單株抗 體之融合細胞，可以被分離並做爲該抗體之穩定來源，而 對如標準試驗組之製備極有用。同樣，表現單鏈目標多肽 之重組噬菌體也提供對標準試驗組之製備極有用的單株抗 體。 MIF抑止劑之使用方法逛應用 MIF的抑止劑有各種適合的使用，如上所述。MIF候 選抑止劑可從各種來源分離或取得，諸如細菌、蕈類、植 物、寄生蟲、化學樣品庫（小分子）、縮氨酸（肽）或肽衍生物 ® 之類的。而熟知此技藝者可辨識抑止之發生，當觀察到與 控制水平不同之一統計重要變化。 既然MIF在病理學和體內平衡有多種角色，抑止MIF 活性或MIF在細胞外區域化則可能有治療效果。例如最近 硏究有顯不MIF是內毒素血症（endotoxemia)之媒介（傳遞 者），而抗-MIF抗體會保護老鼠免於LPS誘導之致命性。 參看 Bernhagen 等，365:756-759，1993; Calandra 等， -185- 20052獨 f_doc J. Exp. Med· /7Ρ:1895·1902，1994; Bernhagen 等， 2:198-201，1994。更進一步，抗-MIF 抗體顯著 增加以葛藍陽性菌誘導敗血性休克之老鼠的倖存率，見 Bernhagen 等，J. Mo/. Med. 76:151-161，1998。其他的實驗顯 示MIF在腫瘤細胞成長之相關性以及反義抑止MIF導致去 下垂(apoptotic)刺激之抵抗，參見 Takahashi 等，A/6>/. A/ed. 4:707-714, 1998; Takahashi 等，AZ/crMh/· /所m助〇/. 心(1):61-67, 1999。此外，發現MIF是糖皮質激素作用之反 向調節者，也指出抑止MIF細胞外區域化之方法可治療各 種病理的狀況，包括自體免疫、發炎、內毒素血症和成人 呼吸窘迫倂發症、發炎性腸躁症、中耳炎、發炎性關節疾 病與克隆氏（Crohn)症，參見Bernhagen等，丄Λ^/· Mel 76:151-161，1998; Calandra 等，377:68-71，1995; Donnelly 等，Mei 灸320-323，1997。因爲 MIF 也認爲 是血管生成相關的，抑止此細胞素MIF可能有抗-血管生成 活性，以及特殊效用於血管生成相關疾病，包括但不限於 癌、糖尿病視網膜疾病、牛皮癖、血管疾病、生育力、肥 胖和糖皮質激機能失調的遺傳疾病如：庫氏（Cushing’s)症 與愛迪生氏（Addison’s)症。 MIF活性或輸出的抑止劑可用於治療，也可會同結合 至特殊細胞的特定細胞表面接收器之一標的基一倂使用。 抑止劑或增強劑之施用一般遵從已知使用程序。較佳實施 例之組成是依照施用方法而定，包括如口服、吸入、靜 脈、顱內、腹膜內、皮下或肌肉內施用。其他的實施例 中，描述在此之組成或許做爲如長期釋放植入的一部份來 -186- 2〇〇52m,〇c 施用。在其他的實施例中，較佳實施例之組成或許是調配 成冷凍乾燥物，利用適當輔藥幫助冷凍乾燥物維持穩定並 隨後再水合。 在另一實施例，提供包含一種或更多種MIF的抑止劑 醫藥組成。爲了方便施用，較佳實施例的化合物可被配方 爲醫藥組成。較佳實施例的組成包含一種或更多種較佳實 施例的MIF抑止劑(亦即結構式(la)、（lb)、（Ic)或(Id))的化 合物和一醫藥上可接受的運送劑及/或稀釋劑。MIF的抑止 劑在組成中之含量是能有效地治療一特殊的疾病；也就 是，其總量能充分地達到減少MIF水平或活性、徵候，及/ 或最好對病人之毒性是在可接受範圍內。較佳情況，較佳 實施例中該醫藥的組成可能包括一 MIF的抑止劑，其用量 從每劑量約少於O.Olmg到約超過lOOOmg，依施用程序而 定；較佳是從大約 0.025, 0.05, 0.075, 0.1，0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 或 0.9 mg 到大約 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125，150，175, 200, 225, 250, 300, 350, 375, 400, 425, 450, 500, 600, 700, 800 或 900 mg，而更佳是從大約 1，2, 3, 4, 5, 6，7，8，9，10，15, 20 或 25 mg 到大約 30，35, 40, 45，50，55 或60 mg。而某些實施例中，亦可使用較高或較低之劑量， 而適當之劑量或濃度是可由熟知此領域者視情況調整。 適當的藥劑運送劑及/或稀釋劑是熟知此領域者所已知 的。若該組成要配方成液體溶液，則適合運送劑及/或稀釋 劑包括食鹽水和無菌水，以及可能包括抗氧化劑、緩衝 液、制菌劑和其他普通的添加物。組成也能配方成藥九、 膠囊、顆粒或錠劑，其包含，除了一 MIF抑止劑之外，尙 •187- 2〇〇52m,〇c 有稀釋劑、分散劑和表面活化劑、結合劑和滑潤劑。熟知 此領域者可更進一步以其他適當方式配方此MIF的抑止 劑’依據公認程序實行，參考諸如Remington的醫藥科 學，PA1990 。 此外’前期藥是也包含在較佳實施例範圍內。前期藥 實際是一種共價鍵的運送劑，會在活體中釋放結構式(la)、 (lb)、（Ic)或（Id)的一化合物，當前期藥施用到病人身上。前 期藥一般經由修改功能基而製備，所謂修改就是經慣例操 作或活體中裂開而產生其想要化合物。 而關於立體異構物，結構式（la)、（lb)、（Ic)與（Id)的化 合物可能有立體中心，並可能以光學混和物外消旋化合 物、外消旋酸混合物和個別的對映體(enantiomers)或非對映 體（diastereomers)之形式存在。全部的同質異構形式均包含 在較佳實施例範圍內，包括其混合物。再者，結構式（la)、 (lb) ' (Ic)與（Id)的化合物之某些結晶形式可能以多形體存 在’亦包括在較佳實施例內。此外，某些結構式（la)、 (lb)、（Ic)與（Id)的化合物可和水或其他有機溶劑形成水合 物。如此之水合物是同樣包含在較佳實施例範圍內。 在其他實施例中，提供治療各種的症狀或疾病之方 法’包括發炎疾病、關節炎、免疫相關的症狀之類的。此 方法包括施用較佳實施例的一化合物到一溫血動物，以一 總劑量足以治療該症狀或疾病。此方法包括系統施用較佳 實施例之一 MIF的抑止劑，最好是以醫藥組成形式施用。 如此所述，系統施用包括口服和非口服方法的施用。口服 施用，一 MIF抑止劑的適當醫藥組成包括粉狀物、顆粒、 2〇〇52492|fd〇c 藥九、錠劑和膠囊以及液體、糖漿、懸浮液和乳狀液。組 成亦可包括添味劑、防腐劑、懸浮劑、濃稠劑和乳化劑以 及其他的醫藥添加物。而非口服施用，較佳實施例化合物 有可能是以水狀注射溶液製備，可能包含，除了 MIF活性 及/或輸出抑止劑之外，緩衝液、抗氧化劑、制菌劑和其他 的適當常見添加劑。 如上所述，施用較佳實施例的一化合物有可能治療多 種症狀或疾病。特別是，較佳實施例的化合物可施用到一 溫血動物治療發炎、癌、免疫疾病之類的。 MIF抑制化合物可以與其他醫藥化合物合倂使用於治 療。於較佳實施例中，MIF抑制化合物係與傳統藥物倂用 於治療疾病、或MIF爲病因之症狀，或]y[IF於該疾病流程 中爲重要或相關因素之狀況。於特定較佳實施例中，係提 供醫藥組成包括一種或多種MIF抑制化合物，其包括但不 限於結構式（la)、（lb)、（Ic)或（Id)的化合物，而與一種或多 種額外的醫藥化合物倂用，其包括但不限於治療各種癌 症、氣喘、或其他呼吸疾病、敗血症、關節炎、發炎性腸 燥症(IBD)或其他發炎性疾病、免疫病症、或其他MIF爲致 病因之疾病與症狀的藥物。 於特定較佳實施例中，將一種或多種MIF抑制化合物 與一種或多種非類固醇抗發炎藥物(NS AIDs)或其他醫藥物 合倂使用’以治療關節炎或其他發炎性疾病。較佳化合物 包括但不限於：NSAIDS例如··阿司匹靈、非類固醇抗發 炎藥（NSAIDs)例如：阿斯匹林（aspirin)、希樂深 (celecoxib)、一水 酸鎂膽驗（choline magnesium •189- 20052獨 fdoc trisalicylate)、雙可芬納绅鹽（diclofenac potasium)、雙可芬 納鈉鹽（diclofenac sodium)、雙福尼塑（diflunisal)、依托朵 雷（etodolac)、芬苯氧苯丙酸（fenoprofen)、福比伯芬 (flurbiprofen)、布洛芬（ibuprofen)、茵朵美沙松（消炎痛， indomethacin)、可朵伯芬（ketoprofen)、可朵雷（ketorolac)、 美拉敏酸(melenamic acid)、納伯美酮(nabumetone)、甲氧丙 萘酸（naproxen)、甲氧丙萘酸鈉（naproxen sodium)、歐沙伯 莘（oxaprozin)、拍羅希坎 （piroxicam)、羅芬可希 (rofecoxib)、水楊酿水楊酸（salsalate)、沙林戴（sulindac)與 甲苯醯吡咯乙酸（tolmetin);以及皮質類固醇例如：可體松 (cortisone)、氫化可體松(hydrocortisone)、甲基脫氫皮質醇 (methylprednisolone)、脫氫皮質酮（強體松，prednisone)、脫 氫皮質醇（prednisolone) '倍氯美松雙丙酸酯 (beclomethasone dipropionate)、布達松耐（budesonide)、氟 美松磷酸鈉鹽（dexamethasone sodium phosphate)、氟尼縮松 (flunisolide)、氟替卡松丙酸酯（fluticasone propionate)、去 炎松丙酮（丙炎松，triamcinolone acetonide)、倍氟美松 (betamethasone)、氟新龍（fluocinolone)、氟新龍醋酸酯 (Huocinonide)、倍氟美松雙丙酸酯（betamethasone dipropionate)、倍氟美松戊酸酯（betamethasone valerate)、 達松耐（desonide)、去經米松（desoximetasone)、去炎松 (triamcinolone)、氯貝它索丙酸（clobetasol propionate)與氟 美松（dexamethasone) 〇 於特定較佳實施例中，將一種或多種MIF抑制化合物 與一種或多種貝他刺激物（beta stimulants)、吸入皮質類固 -190 - 200524^,doc 醇、抗組織胺、荷爾蒙或其他醫藥物合倂使用，以治療氣 喘、急性呼吸窘迫症或其他呼吸道疾病。較佳化合物包括 但不限於：貝他刺激物，例如：一般處方之支氣管擴張 藥；吸入皮質類固醇，例如：倍氯美松、氟替卡松 (fluticasone)、去炎松、莫美他松（mometasone)與脫氫皮質 酮（強體松，prednisone)之各形式如強體松、脫氫皮質醇 (prednisolone)、甲基脫氫皮質醇（methylprednisolone);抗 組織胺，例如：阿扎他啶（azatadine)、吡氯；氧胺/假麻黃 驗（carbinoxamine/pseudoephedrine) ' 西替利曉（cetirizine)、 賽庚陡（cyproheptadine)、 右旋氯苯吡胺 (dexchlorpheniramine)、菲索特芬那陡（fexofenadine)、氯雷 他 D定（loratadine)、異丙嗪（promethazine)、B比爷明 (tripelennamine)、溴苯D比胺（brompheniramine)、氯苯Π比胺 (cholopheniramine)、D比咯醇胺（clemastine)、苯海拉明 (diphenhydramine);以及荷爾蒙例如腎上腺素。 於特定較佳實施例中，係於一醫藥組成中將一種或多 種MIF抑制化合物與治療IBD之醫藥化合物例如咪唑留硫 嘌呤（azathiopdne)或皮質類固醇，合倂使用。 於特定較佳實施例中，係於一醫藥組成中將一種或多 種MIF抑制化合物與治療癌症之醫藥化合物如太平洋紫杉 醇(paclitaxel)合倂使用。 於特定較佳實施例中，係於一醫藥組成中將一種或多 種MIF抑制化合物與抑制免疫化合物合倂使用。於特定較 佳實施例中，將一種或多種MIF抑制化合物與一種或多種 治療自體免疫疾病之藥物合併使用，自體免疫疾病例如： -191- 200524幕。c 萊姆病(Lyme disease)、紅斑性狼瘡Lupus (如全身性紅斑性 狼瘡 Systemic Lupus Erythematosus (SLE))或後天免疫不全 症候群（愛滋病aids)。該治療自體免疫疾病之藥物可包 括蛋白酶抑制劑如：茚地那韋（indinavir)、安普那韋 (amprenavir)、沙嗤那韋（saquinavir)、洛匹那韋 (lopinavir)、利托那韋（ritonavir)與奈非那韋(nelfinavir);核 苷反轉錄酶抑制劑如：齊多夫啶（zidovudine)、亞伯卡韋 (abacavir)、拉米夫陡（lamivudine)、去經肌苷（didanosine)、 扎西他賓（zalcitabine)與司他夫啶（stavudine);核苷酸反轉 φ 錄酶抑制劑如：特諾福韋（tenofovir disoproxil fumarate); 非核苷反轉錄酶抑制劑如：地拉韋定（delavirdine)、依發韋 侖（efavirenz)與奈韋拉平(nevirapine);生物反應修正劑如： 依那西普（etanercept)、因福利美（infliximab)與其他抑制或 干擾腫瘤壞死因子之化合物；抗病毒藥物如：拉米夫啶 (lamivudine)與齊多夫 D定(zidovudine)。
於特定較佳實施例中，將一種或多種MIF抑制化合物 與一種或多種治療敗血症之醫藥化合物如類固醇或抗感染 藥劑合倂使用。類固醇之例子包括皮質類固醇例如：可體 松（cortisone)、氫化可體松（hydrocortisone)、甲基脫氫皮質 醇（methylprednisolone)、脫氫皮質酮（強體松，prednisone)、 脫氫皮質醇（prednisolone)、倍氯美松雙丙酸酯 (beclomethasone dipropionate)、布達松耐（budesonide)、氟 美松磷酸鈉鹽（dexamethasone sodium phosphate)、氟尼縮松 (flunisolide)、氟替卡松丙酸酯（fluticasone propionate)、去 炎松丙酮（丙炎松，triamcinolone acetonide)、倍氟美松 -192- 2〇〇52m,〇c (betamethasone)、氟新龍（fluocinolone)、氟新龍醋酸酯 (fluocinonide)、倍氟美松雙丙酸酯（betamethasone dipropionate)、倍氟美松戊酸酯（betamethasone valerate)、 達松耐（desonide)、去經米松（desoximetasone)、去炎松 (triamcinolone)、氯貝它索丙酸（clobetasol propionate)與氟 美松（dexamethasone)。抗感染劑包括，但不受限制於，驅 蟲藥物[甲苯咪唑(mebendazole)];抗生素包括氨基醣苷化合 物（aminoclycosides)[慶大黴素（gentamicin)、新黴素
(neomycin)、妥布黴素（tobramycin)];抗黴菌（antifungal)抗 生素[兩性黴素 b(amphotericin b)、氟康哗(fluconazole)，灰 黃黴素（griseofulvin)、依達康卩坐（itraconazole)、契陀康口坐 (ketoconazole)、制黴菌素（nystatin)、麥卡丁（micatin)、癖 退（tolnaftate)];頭孢菌黴素類（cephalosporins)[西華克樂-氯 頭孢菌素（cefaclor)、頭孢唑啉（cefazolin)、頭孢噻肟 (cefotaxime)、頭孢他陡（ceftazidime)、頭孢三嗪 (ceftriaxone)、頭孢咲新（cefuroxime)、苯甘孢黴素
(cephalexin)];貝他內醯胺（beta-lactam)抗生素[頭孢替坦 (cefotetan)、美羅培南（meropenem)];氯黴素 (chloramphenicol);巨環類抗生素（macrolides)[阿奇紅黴素 (azithromycin)、克拉利索黴素（clarithromycin)、紅黴素 (erythromycin)];盤尼西林(青黴素，penicillins)[盤尼西林G 鈉鹽（penicillin G sodium salt)、萬博黴素（amoxicilln)、安 比西林（ampicillin)、雙氯青黴素（dicloxacillin)、乙氧萘黴 素（nafcillin)、派伯西林（piperacillin)、鐵卡黴素 (ticarcillin)];四環素類（tetracyclines)[強力黴素 -193-
20052H (doxycycline)、美滿黴素（minocycline)、四環黴素
(tetracycline)];枯草桿菌素（bacitracin)、氯林可黴素 (clindamycin)、黏菌素甲磺酸鈉鹽(colistimethate sodium)、 多黏菌素b硫酸鹽（polymyxin b sulfate)、萬古黴素 (vancomycin);抗病毒類（antivirals )包括無環鳥苷 (acyclovir)、金岡丨J院胺（amantadine)、去經肌苷 (didanosine)、依發韋侖（efavirenz)、膦甲酸（foscarnet)、丙 氧鳥苷（ganciclovir)、茚地那韋（indinavir)、拉米夫啶 (lamivudine)、奈非那韋（nelfinavir)、利托那韋（ritonavir)、 沙喹那韋（saquinavir)、司他夫卩定（stavudine)、伐昔洛韋 (valacyclovir)、纈更昔洛韋（valganciclovir)、齊多夫陡 (zidovudine)；喹諾酮類（quinolones)[環丙沙星 (ciprofloxacin)、左氧氟沙星（levofloxacin)];石黃胺類 (sulfonamides)[磺胺喃陡（sulfadiazine)、磺胺異 D惡口坐 sulfisoxazole)];颯（sulfones)[氨苯碉（dapsone)];咲喃卩坐酮 (furazolidone)、甲硝卩坐（metronidazole)、戊院眯 (pentamidine)、氨苯擴胺（sulfanilamidum crystallinum)、加 替沙星（gatifloxacin)與異卩惡卩坐/三甲氧；氨喃D定 (sulfamethoxazole/trimethoprim) 〇 於治療特定疾病時，可能較適於將一種MIF抑制劑與 一種麻醉劑合倂使用，以治療病患。麻醉劑之例子、包括： 乙醇、丁哌卡因（bupivacaine)、氯普魯卡因 (chloroprocaine)、左旋丁 哌卡因（levobupivacaine)、利多卡 因（lidocaine)、甲峨卡因（mepivacaine)、柏卡因（procaine)、 羅比卡因（ropivacaine)、地卡因（tetracaine)、地氟醚 -194- 20052響— (desflurane)、異氟醚（isoflurane)、氯胺酮（ketamine)、異丙 酌（propofol)、七氟醚（sevoflurane)、可待因（codeine)、芬太 尼（fentanyl)、氫化嗎啡酮（hydromorphone)、麻卡因 (marcaine)、替陡（meperidine)、美沙酮（methadone)、嗎 啡、氧化可待因酮（oxycodone)、雷米芬太尼 (remifentanil)、舒芬太尼（sufentanil)、美妥芬諾 (butorphanol)、那布芬（nalbuphine)、曲馬多（tramadol)、苯 坐卡因（benzocaine)、狄布卡因（dibucaine)、氯化乙院（ethyl chloride)、賽羅卡因（xylocaine)與菲那5比陡 (phenazopyridine) ° 實施例 較佳實施例之MIF抑制劑可以利用範例1所描述之方 法製備。 範例1 合成2-苯甲某氨某尼古丁酸Π) 添加苯甲胺（14 mL，126.8 mmol)至溶於D比D定之氯基尼 古丁酸（10 g，63.4 mmol)溶液中並回流整夜。蒸飽吡P定而 殘餘物溶於IN NaOH。溶液以水稀釋而調整pH爲10至 11，且以二氯甲烷清洗。水相以10%冷鹽酸溶液中和調整 pH至6-7。過濾形成固體、冷水清洗並在真空乾燥而產生 12.2 g (84 %) 2-苯甲基氨基尼古丁酸（1)爲白色固體。 MP: 148 0C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 4.69 (d，J = 3·6 Hz，2H)， 6.61 (dd，J = 4·9, 7.7 Ηζ，1Η)，7·23 (m，1Η)，7·29 (m，4Η)， 8.08 (dd? J = 1.8, 7.0 Hz, 1H), 8.28 (dd, / = 1.8, 7.0 Hz, 1H), 8.47 (br· s，1H)，13.10 (s，1H); EIMS: 229 (M+l)，251 (M+23). -195-
合成1-苯甲某-1//-吡啶並丨2Uinjl蜈卩秦·2.4-二酮ί2) 緩慢添加氯甲酸三氯甲酯（2.5 mL，21 mmol)至溶於 dioxane之（1) (4 g，17·5 mmol)懸浮液，氮氣下回流8 h。 冷卻溶液且真空移除溶劑。殘餘物溶於二氯甲烷並以飽和 碳酸氫鈉溶液清洗。有機相以硫酸鈉乾燥、蒸發而得殘餘 物。殘餘物以醚再結晶而產生3.02 g (68 %) 1-苯甲基-1//-吡啶並[2,3d][l，3]噁嗪-2,4-二酮（2)爲白色固體。MP: 168 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 5,35 (s，2H)，7.26 (m，1H)，7.30 (m，2Η)，7·39 (m，3Η)，8·41 (dd，J = 1.5, 7·5 Ηζ，1Η)，8·72 (dd5 / = 1.5, 7.5 Ηζ，1H); EIMS: 277 (Μ+23). 製備2-苯甲基氨基尼古丁酸（1)與1-苯甲基-1//-吡 啶並[2,3d][l，3]噁嗪-2,4-二酮（2) —連串反應如下：
合成1-茏甲某-4·羥某-2-氬某-1.2·二氤41,81-萘啶-3-羧 馨 酸乙酯（3) 緩慢添加丙二酸二乙酯（〇·6 mL，4 mm〇l)至溶於雙甲 基乙醯胺（20 mL)之NaH (60 %溶於礦物油，164 mg，4.1 mmol)懸浮液，鈍氣室溫下攪拌0.5 h。 1-苯甲基-1斤-吡啶 並[2,3 4][1，3]噁嗪-2,4-二酮（2) (1 g，4 mmol)加至溶液中， 110 °C加熱4 h (TLC control)。冷卻溶液並倒入冰水中。 溶液pH値以冷1 〇% HC1調整至3。過濾所產生固體以水清 -196-
20052U 洗並真空乾燥而產生940 mg (72 %) 1·苯甲基-4-經基-2-氧 基-1，2-一氨_[1，8]_蔡陡_3_竣酸乙醋（3)爲白色固體。ΜΡ: 143 °C; ]H-NMR (DMSO-d6)： δ 1.29 (t, J = 6.9 Hz, 3H)5 4.31 (q，J = 6·9 Hz，2H)，5·55 (s，2H)，7.23 (m，5H)，7.36 (m，1H)， 8·45 (dd，《/= 1.5, 7.5 Hz，1H)，8.70 (dd，J= 1·5, 7·5 Hz，1H); EIMS: 325 (M+l)，347 (M+23). 合成 1_苯甲某-4-氛某-2-氣某-1，2_^氣-Π，81-蔡淀-3-錢 酸乙酯（4) 1-苯甲基·4-羥基-2-氧基-1，2-二氫_[1，8]_萘啶-3-羧酸乙 酯（3) (0.94 g，2.9 mmol)之溶液加熱於純P〇Cl3、於90 °C、3 h。冷卻溶液而多餘P0C13於真空下蒸餾。殘餘物溶 於水以固體碳酸氫鈉中和，再以二氯甲烷淬取。有機層依 序以飽和碳酸氫鈉溶液、水與鹽水沖洗，再蒸發而產生 0·9 g (98 %) 1_苯甲基-4-氯基-2-氧基-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（4)爲白色固體。 MP·· 109 °C; ^-NMR (DIVISORS 1.31 (t， J = 6·9 Hz， 3H)， 4·37 (q， J = 6·9 Hz， 2H)， 5.62 (s，2H)，7.27 (m，5H)，7.51 (dd，J = 4.7, 8.0 Hz，1H)，8.46 (dd， J = 1·5, 7·5 Hz，1H)，8.80 (dd，J = 1.5, 7.5 Hz，1H); EIMS: 343 (M+l)，365 (M+23)· 製備1-苯甲基-4-羥基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧 酸乙酯（3)與1-苯甲基-4-氯基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-羧酸乙酯（4) 一連串反應如下： -197- 200524m,d〇c
合成1-苯甲某-2-氣某-4-哌嗪-1-某-1,2-二氤-丨1.81-萘 啶-3-羧酸乙酯（5) 溶於二氯甲烷之1-苯甲基_4_氯基-2-氧基-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（4) (1.2 g，3.5 mmol)溶液於室溫緩 慢添加至哌嗪（0.9 g，10.5 mmol)溶於二氯甲烷之攪拌溶 液。溶液於室溫攪拌整夜。蒸發溶劑而將殘餘物懸浮於水 中、短暫震盪並以二氯甲烷淬取。綜合有機層依序以水與 鹽水、飽和碳酸氫鈉溶液沖洗，再蒸發而產生1.12 g (82 %) 1-苯甲基-2-氧基-4-哌嗪-1-基-1，2-二氫·Π，8]_萘啶-3-羧 酸乙酯（5)爲黃色固體。MP·· 120°C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t，J = 6.9 Ηζ，3Η)，2.28 (m，4Η)，3.03 (m，4Η)，4·28 (q， J = 6.9 Hz，2H)，5·55 (s，2H)，7.16-7.28 (m，5H)，7.36 (m， 1H)，8.25 (dd5 J = 1.5, 7·5 Hz，1H)，8.63 (dd，J = 1.5, 7.5 Hz， 1H); EIMS: 393 (M+l)? 415 (M+23). 合成1-苯甲某-444-(嗦吩-2-羰某某1-2-氯某-1,2-二氤-Π.81_萘啶-3-羧酸乙酯（6) 2-噻吩碳醯氯（0.16 mL，1.5 mmol)於0 °C鈍氣下 添加至溶於吡啶（5 mL)之1-苯甲基-2-氧基-4-哌嗪-l-基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3_羧酸乙酯（5)(392 mg，lmm〇l)攪拌 溶液。溶液升至室溫再攪拌18 h。溶液倒至冰水、過濾固 體以水清洗、乾燥、再以醚與乙酸乙酯再結晶而得256 mg -198- 20052爾 doc (51 %) 1-苯甲基-4-[4-(噻吩-2-羰基V哌嗪-1-基卜2-氧基-1，2· 二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（6)爲白色固體。ΜΡ: 168 °C; ]H-NMR (DMSO-d6): δ 1.29 (t? J = 6.9 Hz? 3H)? 3.16 (m, 4H)? 3.88 (m，4H)，4.31 (q，/ = 6·9 Hz，2H)，5.56 (s，2H)，7·15 (dd5 J = 3.5, 4.9 Hz, 1H)，7.20-7.29 (m，5H)，7.38 (dd，= 4.6, 8.2 Hz，1H)，7.97 (d，J = 4.9 Hz，1H)，8.35 (dd，= 1.5, 7.5 Hz， 1H)，8.66 (dd，/ = 1.5, 7·5 Hz，1H); EIMS: 503 (M+l)，525 (M+23). Anal· C27H26N404S (C，H，N). 製備1-苯甲基-2-氧基-4-哌嗪-1_基-1，2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-羧酸乙酯（5)與1-苯甲基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-2-氧基_1，2·二氫-[1，8]·萘啶-3-羧酸乙酯（6) —連串 反應如下：
合成 1 -本甲某-4 -禅某_ 2 _氣某-1,2 -—>氣-『1，81-奈症贿3 -翔 酸環己醯胺Π) 添加環己烷（1.18 mL，10.35 mmol)至溶於二甲苯之1-苯甲基-4-羥基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3·羧酸乙酯（3) (1.68 g，5.17 mmol)攪拌溶液，於140 QC加熱3 h。冷卻溶 液並於真空移除溶劑。殘餘物懸浮於水中並以二氯甲烷淬 取。綜合有機層依序以水與鹽水、飽和碳酸氫鈉溶液沖 洗，再蒸發而產生1.6 g (82 %) 1_苯甲基-4-羥基-2_氧基- -199- 200524¾^ 1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸環己醯胺（7)爲白色固體。 MP: 143 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 1.22 - 1.87 (m? 10Η), 3.87 (m，1H)，5.62 (s，2H)，7.20 -7.32 (m，5H)，7·43 (dd，J = 4·6, 8.0 Hz，1H)，8.48 (dd，J = 1·5, 7·5 Hz，1H)，8.77 (dd，J = 1.5, 7·5 Hz，1H), 10.20 (s，1H); EIMS: 378 (M+l). 合成1-苯甲某-4-氛基-2-氣基-1，2- 一>氣-丨1，81-蔡瞭-3-甲 腈（8) 溶於純P〇Cl3之1-苯甲基-4-羥基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸環己醯胺（7) (1.3 g，3.44 mmol)溶液加熱 於90 °C整夜。冷卻溶液而多餘P〇Cl3於真空下蒸餾。殘 餘物懸浮於水中，以飽和碳酸氫鈉鹼化並以二氯甲烷淬 取。綜合有機層依序以飽和碳酸氫鈉溶液、水與鹽水沖 洗、硫酸鈉乾燥，再蒸乾。殘餘物以丙酮再結晶而得530 mg (52 %)卜苯甲基-4-氯基-2·氧基-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（8)爲白色固體。MP: 188 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 5·61 (s，2Η)，7.21 — 7.31 (m，5Η)，7·56 (dd，J = 4.8, 8.0 Ηζ， 1H)，8.53 (dd，J = 1.6, 8.0 Hz，1Η)，8.86 (dd，J = 1.6, 8.0 Hz， 1H); EIMS: 296 (M+l). 製備1-苯甲基_4-羥基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧 酸環己醯胺(7)與苯甲基-4-氯基氧基-1，2-二氫-[i，8]-萘 啶-3-甲腈（8)之一連串反應如下：
-200- 200524928 14467pif.doc 合成1-茏田甚-2-氣某-4-哌嗪-1-某-1,2-二氤-Π.81-萘 啶-3-甲腈（9)
溶於二氯甲烷之1-苯甲基-4-氯基-2·氧基_1，2_二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（8) (530 mg, 1·79 mmol)溶液室溫下緩慢 添加至哌嗪（463 mg，5.37 mmol)攪拌溶液。室溫下再攪拌 溶液整夜並以二氯甲烷稀釋。溶液依序以飽和碳酸氫鈉溶 液、水與鹽水沖洗、硫酸鈉乾燥，再蒸乾而得610 mg (98 %) 1-本甲基-2-氧基-4·峨嗦-1-基-1，2- 一^氣-[1，8]-奈陡-3-甲 腈（9)爲白色固體。 MP: 211 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 2·93 (m，4Η)，3·57 (m，4Η)，5.53 (s，2Η)，7·20 - 7·27 (m，5Η)， 7.34 (dd，= 4.8, 8.0 Ηζ，1Η)，8·26 (dd，/ = 1.6, 8·0 Ηζ，1Η)， 8.65 (dd，= 1.6，8.0 Ηζ，1H); EIMS: 296 (M+l)· EIMS: 346 (M+l)· 合成1-苯甲某-2-氢某-4-丨4-(嗦吩-2-羰某V哌嗪-1-某卜 1,2-二氤-丨1，81_萘啶-3-甲腈Π0)
2-噻吩碳醯氯（0.16 mL，1.5 mmol)添加至0 °C溶於 吡啶之1-苯甲基-2-氧基-4·哌嗪-1-基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（9) (345 mg，1 mmol)攪拌溶液。溶液升至室溫再於 室溫下攪拌溶液整夜。溶液倒入冰水中、過濾固體、以水 清洗並乾燥。粗產物以急驟層析法純化，沖提梯度爲溶於 CH2C12之 0 - 3 % MeOH 而得 273 mg (45 %) 1-苯甲基-2-氧基-4_[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（1〇)爲白色固體。MP: 263 °C; b-NMR (DMSO-d6): δ 3.75 (m，4Η)，3·94 (m，4Η)，5·58 (s，2Η)，7·15 (dd，J = 3.5, 4.8 Hz，1H)，7·19 - 7·29 (m，5H)，7·40 (dd，J = 4.8, 8·0 Hz， 1H)，7.52 (dd，= 4.0, 5.2 Hz，1H)，8·35 (dd，= 1.6, 8.0 Hz， -201- 200524928 14467pif.doc 1H), 8.72 (dd? J = 1.6, 8.0 Hz5 1H); EIMS: 456 (M+l). Anal. C25H21N502S (C，H，N)· 製備1-苯甲基_2-氧基-4-哌嗪-1-基_1，2-二氫_[1，8]_萘 D定-3-甲腊（9)與1-苯甲基-2-氧基- 4-[4-(嚷吩-2_滕基）-峨曉-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（10)之一連串反應如下：
合成2-(4-甲氧基-苯甲某氨基V尼古丁酸Π1) P-甲氧基苯甲胺（8.24 mL，63.5 mmol)添加至溶於吡 啶之2-氯基尼古丁酸（5 g，31.7 mmol)溶液中並回流整夜。 蒸餾吡啶而殘餘物溶於IN NaOH。溶液以水稀釋而調整pH 至10-11並以二氯甲烷清洗。水相以10%冷鹽酸溶液中和 調整pH至4-5。過濾形成固體、冷水清洗並在真空乾燥而 產生6.32 g (77 %) 2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸（11) 爲白色固體。MP: 229 〇C; b-NMR (DMS〇-d6): δ 3.72 (s， 3Η)，4·60 (d，J = 3·6 Ηζ，2Η)，6.40 (dd，J = 4·9, 7·7 Ηζ，1Η)， 6.62 (d? J = 7.6 Hz, 2Η)? 7.25 (d? J - 7.6 Ηζ5 2Η), 8.09 (dd5 J =1.8, 7·0 Hz，1H)，8.26 (dd，J = 1.8, 7.0 Hz，1H)，8·48 (br. s， 1H)，13.11 (s，1H); EIMS: 259 (M+l)，281 (M+23)· -202- 200524928 14467pif.doc 合成1彳4-甲氣某·茏田甚VI//-卩B：啶並丨2U1H,31噁嗪二 2,4-二酮 Π2) 氯甲酸三氯甲酯（3.36 mL，27.8 mmol)緩慢添加至溶 於dioxane之2_(4_甲氧基-苯甲基氨基)-尼古丁酸（11) (6 g， 23.23 mmol)懸浮液並氮氣下回流18 h。冷卻溶液且真空移 除溶劑。殘餘物溶於二氯甲烷並以飽和碳酸氫鈉溶液清 洗。有機相以硫酸鈉乾燥、蒸發而得殘餘物。殘餘物以醚 再結晶而產生4.47 g (67 %) 1-(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶 並[2,3d][l，3]噁嗪-2,4-二酮（12)爲白色固體。MP: 160 °C; 'H-NMR (DMSO-de)： δ 3.71 (s? 1Η), 5.27 (s, 2H), 6.85 (d, J =7·0 Hz，2H)，7.33 (m，3H)， 8.40 (dd，J = 1.5, 7·5 Hz，1H)， 8.75 (dd，1.5, 7.5 Hz，1H); EIMS: 286 (M+23). 製備2-(4-甲氧基-苯甲基氨基)-尼古丁酸（丨^與^(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶並[2,3-岣[1，3]噁嗪-2,4-二酮（12)之 一連串反應如下： <
合成4-羥基-1-(4-甲氧基—二莖-甲蓋12-氧某2-二氣-Π、81·萘啶-3-羧酸乙酯Π11 丙二酸二乙酯（2.37 mL，15.61 mmol)緩慢添加至溶於 雙甲基乙醯胺（40 mL)之NaH (60 %溶於礦物油，〇 62 g， 15·61 mmol)懸浮液並於細戒室溫下擾ί半〇5 h。1·(4-甲氧 -203- 200524928 14467pif.doc 基-苯甲基）-1//-吡啶並[2,3d][l，3]噁嗉-2,4-二酮（12) (4·47 g，15.61 mmol)加至溶液中，於110 〇C加熱3 h (TLC control)。冷卻溶液並倒入冰水中。溶液pH値以冷10% HC1調整至3。過濾產生固體、以水清洗並真空乾燥。粗產 物以乙酸乙酯再結晶而得1.2 g (21 %) 4-羥基_1-(4-甲氧基-苯甲基）·2·氧基_1，2_二氫_[1，8]_萘啶-3-羧酸乙酯（13)爲白 色固體。ΜΡ·· 153 °C; i-NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t，/ = 7.0 Ηζ，3Η)，3·68 (s，3Η)，4.32 (q，J = 7.0 Ηζ，2Η)，5·47 (s，2Η)， 6.81 (d? J = 7·7 Hz，2H)，7.21 (d，/ = 7·6 Hz，2H)，7·36 (d， J = 7·6 Hz，1H)，8.42 (dd，J = 1.5, 7.5 Hz，1H)，8.73 (dd，J = 1·5, 7·5 Hz，1H)，13.00 (S，1H); EIMS: 355 (M+l). 製備4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2_氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（13)之一連串反應如下：
合成4-氯某-1-(4-甲氣某-苯甲基V2-氣基-1,2-二氯-Π，81-萘啶-3-羧酸乙酯Π4) 4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-羧酸乙酯（13) (0.40 g，1.13 mmol)與三乙胺（393 // L，2.82 mmol)之溶液於純POCl3中加熱於90下3 h。冷 卻溶液而多餘P〇Cl3於真空下蒸餾。殘餘物懸浮於飽和碳 酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體溶於二氯甲烷，依 -204- 200524928 14467pif.doc 次以飽和碳酸氫鈉、水及鹽水清洗。有機相以硫酸鎂乾 燥並蒸發而產生400 mg (95 %) 4-氯基-1-(4-甲氧基-苯甲 基）-2-氧基-1，2-一氫-[1，8]·•蔡陡-3_錢酸乙酯（14)爲白色固 體。1H-NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t，·/ = 7.0 Hz, 3H)，3.62 (s， 3H)? 4.30 (q5 J = 7.0 Hz, 2H)? 5.47 (s? 2H)? 6.81 (d5 J = 7.7
Hz? 2H)? 7.21 (d? J = 7.6 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.40 (dd3 J = 1.5, 7.5 Hz, 1H), 8.71 (dd, J = 1.5, 7.5 Hz, 1H); EIMS: 373 (M+l). 合成4-氯某-2-氣某二氫41，8卜萘啶-3-羧酸乙酯 (15) 4-氯基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-羧酸乙酯（13) (0.40 g，1.07 mmol)溶於純三氟醋酸 (TFA)之溶液回流3 h。冷卻溶液而多餘TFA於真空下蒸 餾。殘餘物懸浮於飽和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過 濾。固體以水沖洗並室溫乾燥而產生252 mg (93 %) 4-氯 基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶_3_羧酸乙酯（15)爲白色固 體。 MP: 172 0C; 1H-NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t，J = 7·〇 Hz，3H)，4.35 (q，J = 6.9 Hz，2H)，7·41 (dd，J = 4.7, 8.0 Hz， 1H)，8.34 (dd，J = 1.5, 7.5 Hz，1H)，8.69 (dd，J = 1.5, 7.5 Hz， 1H)，12.90 (s，1H); EIMS: 253 (M+l). 製備4-氯基-1_(4-甲氧基-苯甲基）_2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（14)與4-氯基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（15)之一連串反應如下： -205- 200524928 14467pif.doc
13 合成 2 -氣某-4 -『4 _ (瞎吩_ 2 _端某）_峨曉_ 1 _某Ί _ 1，2 >氣-Π.81-萘啶-3-羧酸乙酯Π6) 室溫下添加DABCO (0.57 g，5.14 mmol)至4-氯基-2-氧 基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（15) (0.65 g，2.57 mmol) 與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮（0.60 g，3.08 mmol)溶於雙甲 基乙醯胺之溶液中。溶液110 °C加熱整晚。冷卻溶液並倒 入冰水中。固體過濾、以水沖洗並乾燥而產生420 mg (39 %) 2-氧基-4·[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1_基]-1，2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-羧酸乙酯（16)爲白色固體。MP: 239 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t，7.0 Hz，3H)，3.13 (m，4H)，3.87 (m， 4H)，4.30 (q，J = 7·0 Hz，2H)，7.15 (dd5 J = 3.5, 4.8 Hz，lH)， 7.40 (dd，J = 4.8, 8.0 Hz，1H)，7.45 (d，J = 3.6 Hz，1H)，7.80 (d5 J = 4.8 Hz? 1H)5 8.24 (dd5 J = 1.5? 7.5 Hz, 1H)? 8.56 (dd5 J = 1.5, 7.5 Hz，1H) 12.25 (s，1H); EIMS: 413 (M+l). 製備2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（16)之一連串反應如下： -206- 200524928 14467pif.doc
於萘啶部分之N-1位置烷基化以製備化合物 標示爲17至28之化合物係利用通用程序A或通用程 序B製備。 攀
涌用程序A 固體2·氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2·二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（16) (455 mg，1.1 mmol)室溫下分批 添加至NaH於DMF之攪拌懸浮液中（60 %溶於礦物油，53 mg，1.32 mmol)。溶液室溫下攪拌1 h而得到黃色清澈溶 液。添加對應之烷基鹵化物(132 mmol)至溶液中並攪拌3 h。溶液倒入冰水而過濾形成固體、以水沖洗並乾燥。粗產 物以急驟層析法純化，沖提梯度爲溶於二氯甲烷之0 - 2 % φ 甲醇而產生標題化合物。
涌用程序B 2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）·哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8卜 萘啶-3-羧酸乙酯（16) (455 mg，1.1 mm〇l)溶液、對應烷基 鹵化物（1·65 mmol)與溶於DMF之無水碳酸绅（5.5 mmol) 於90 T加熱整夜。溶液冷卻並於真空下移除DMF。殘餘 物懸浮於水中、短暫震盪、過濾並室溫乾燥。粗產物以急 -207- 200524928 14467pif.doc 驟層析法純化，沖提梯度爲溶於二氯甲烷之〇 - 2 %甲醇 而產生標題化合物。 合成1彳4-醋酸某-苯甲基）-2-氣某-444-(嚓吩-2-羰某）-哌嗪-1-某M.2-二氤41,81-萘啶-3-羧酸乙酯Π7) 此化合物之製備係利用4-醋酸基苯甲基溴化物（305 mg，1.32 mmol)，依照通用程序A而產生275 mg (45 %)之 白色固體。MP: 123 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1·37 (t，/ = 6·9 Ηζ，3Η)，2·19 (s，3Η)，3·22 (m，4Η)，3.95 (m，4Η)，4·40 (q， J = 6.9 Hz, 2H)? 5.81 (s5 2H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.16 (m, 1H)? 7.22 (d5 J = 8.0 Hz? 2H)5 7.45 (m5 1H)? 7.47 (d? J = 3·2 Hz，1H)，7.84 (d，= 4.8 Hz，1H)，8·41 (dd，/ = 1.5, 7.5 Hz, 1H), 8.70 (dd? J = 1.5, 7.5 Hz? 1H); EIMS: 561 (M+l). Anal· (C29H28N406S) C，H，N· 合成M2-雙甲某氨某乙某）-2-氣某-444-(噻吩-2-羰 某V哌嗪-1-某Μ，2-二氤·Π，8卜萘啶-3·羧酸乙酯Π8) 此化合物之製備係利用2-雙甲基氨基氯乙烷鹽酸化合 物（188 mg，1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生223 mg (35 %)之白色固體。MP: 134。(：； h-NMR (DMS〇-d6): δ 1.35 (t，《7 = 7.0 Ηζ，3Η)，2·20 (S，6Η)，3.02 (m，4Η)，3.90 (m， 4H), 4.30 (q5 J - 7.0 Hz5 2H)5 4.50 (m? 2H)? 7.15 (dd? J = 3.5, 4.8 Hz，1H)，7·41 (dd，J = 4.8, 8.0 Hz，1H)，7.45 (d，J = 3.6 Hz，1H)，7.81 (d，J = 4·8 Hz，1H)，8.38 (dd5 J = 1.5, 7.5 Hz， 1H)，8.76 (dd，J = 1.5，7.5 Hz，1H); EIMS: 484 (M+l)· Anal· (C24H29N504S) C，H，N. -208- 200524928 14467pif.doc 合成1·甲某-2·氢某-4-丨4彳嚓吩-2-羝某V腑瞌-卜基L· 1.2- 二氫-丨Ml-萘啶-3-羚酸乙酯Π9) 此化合物之製備係利用甲基碘（82 pL，1.32 mmol)，依 照通用程序A而產生102 mg (22 %)之白色固體。MP 164 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t，6·8 Hz，3H)，3.13 (m，4Η)，3·64 (s，3Η)，3·88 (m，4Η)，4.31 (q，J = 6·8 Ηζ，2Η)， 7.15 (dd，= 3.6, 4.8 Hz，1H)，7·38 (dd，= 4.8, 8.0 Hz，1H)， 7.45 (d, J = 3.6 Hz? 1H)? 7.79 (d? J = 4.8 Hz, 1H), 8.34 (dd, J =1.6, 8.0 Hz, 1H)? 8.70 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H); EIMS: 427 (M+l). Anal· (C21H22N404S) C，H，N· 合成1“4-氟某-茉甲某V2-氬某-4-「4-〔嗦吩-2-锶某V哌 嗪-1-某1-1，2_二氤-丨1,81-蔡啶-3-羧酸乙酯（20) 此化合物之製備係利用4-氟基苯甲基溴化物（162 μΐ^， 1·32 mmol)，依照通用程序Α而產生355 mg (62 %)之白 色固體。MP 196 0C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1·24 (t，J = 6.8 Ηζ，3Η)，3·20 (m，4Η)，3.90 (m，4Η)，4.31 (q，J = 6·8 Ηζ，2Η)， 5·57 (s5 2Η)，7·10 - 7·20 (m，3Η)，7·30 - 7.40 (m，3Η)，7·56 (d9 J = 3.6 Ηζ? 1Η)? 7.81 (d? J = 4.8 Ηζ? 1Η)? 8.30 (dd? J = 1.6, 8.0 Ηζ，1Η)，8·70 (dd，J = 1·6, 4.4 Ηζ，1H); EIMS: 521 (M+l)· Anal· (C27H25FN404S) C，Η，Ν· 合成2-氬某-1-丙某-444V嚓盼-2-锶某哌嗪-1-某1- 1.2- 二氤41.81-萘啶-3-羧酸乙酯（2Π 此化合物之製備係利用1-碘丙烷（129 μί，1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生140 mg (28 %)之黃色固 體。MP 92-96 〇C; W-NMR (DMSO-d6): δ 0.91 (t, = 7·2 Hz， 3H), 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H)5 1.6 (m? 2H), 3.13 (s, 4H)? 3.88 (s，4H)，4.3 (m，4H)，7·1 (m，1H)，7.4 (m，1H)，7·45 (dd，J = -209- 200524928 14467pif.doc 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz5 1H), 8.34 (dd, J = 1.6, 8·0 Hz，1H)，8.70 (dd，J = 1·6, 4·4 Hz，1H); EIMS m/z 455 (M+H). 合成1-丁某-2-氬某-444-(嚓吩-2-羰某哌嗪-l-某μ 1，2·二氤-Π，8卜萘啶-3-羧酸乙酯（22) 【0294】此化合物之製備係利用碘丁烷（151 μ、1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生200 mg (39 %)之黃色固 體。MP 90_96 °C; iH-NMR (DMSO-d6): 0.92 (t，J = 7.2 Hz， 3H)，1.3 (m，5H)，1.6 (m，2H)，3.13 (s，4H)，3·88 (s，4H)， 4.32 (m，4H)，7.15 (m，1H)，7.38 (m，1H)，7.45 (dd，J = 1.2, 3.6, 1H)，7.79 (dd，《/= 1.2, 5.2 Hz，1H)，8.34 (dd，J= 1.6, 8.0 Hz，1H)，8.70 (dd，= 1.6, 4.4 Hz，1H); EIMS m/z 469 (M+H)· 合成1-烯丙某-2·氣某-444-(嚓吩-2-羰某V哌曝-1-某1-1,2-二氤-Π,8卜萘啶-3-羧酸乙酯（23) 此化合物之製備係利用烯丙基碘（134 μί，1.32 mmol)， 依照通用程序B而產生170 mg (34 %)之黃色固體。MP 89-96 0C; h-NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t5 J = 7.2 Hz，3H)， 3·15 (s，4H)，3·89 (s，4H)，4.31 (q5 = 7.2 Hz，2H)，5.0 (m， 4H)，5.9 (m，1H)，7.15 (m，1H)，7.39 (dd，J = 4.8, 8.0 Hz，1H)， 7.46 (dd，J = 0.8，3.6 Hz)，7.79 (dd，J = 0.8，4·8 Hz，1H)， 8.34 (dd，J = 1.6, 8.0 Hz，1H)，8.68 (dd，J = 1.6, 4.8 Hz，1H); EIMS m/z 453 (M+H). 合成1-(2-氟某-苯甲某V2-氬某-4-丨4-(嚓吩-2-羝某）-哌 曉-1-基1義1，2-—>氣-『1，81-蔡口定-3-雜酸乙酉旨 (24) 此化合物之製備係利用2-氟基苯甲基溴化物（162 μΙ 1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生170 mg (30 %)之黃色 固體。 MP 105-1 10 0C;咕-NMR (DMSO-d6): δ 1·29 (t，J = -210- 200524928 14467pif.doc 7.2 Hz, 3H), 3.19 (s, 4H), 3.91 (s, 4H), 4.30 (q, J = 7.2 Hz, 2H)，5.60 (s，2H)，6.81 (m，1H)，7.04 (m，1H)，7.2 (m，3H)， 7.39 (m5 1H), 7.46 (dd? J = 0.8, 3.6 Hz, 1H)5 7.80 (dd, J = 0.85 4.8 Hz，1H)，8.38 (dd，J = 1.6, 8·0 Hz，1H)，8·63 (dd，J = 1.6, 4.4 Hz? 1H); EIMS m/z 521 (M+H). 合成M3-氟某-苯甲某）-2-氣某-4-丨4“嚓盼-2-羰某V哌 嗪-1-某卜：L2-二氤41,81-萘啶-3-羧酸乙酯（25) 此化合物之製備係利用3-氟基苯甲基溴化物（162 μ、 1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生190 mg (33 %)之黃色 固體。MP 105-110 0C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.29 (t，《7 = 6·8 Ηζ，3Η)，3·18 (s，4Η), 3·89 (s，4Η)，4·31 (q，·/ = 6·8 Ηζ， 2Η)，5·56 (s, 2Η)，7·1 (m，4Η)，7·4 (m，3Η)，7·79 (d，= 4.4 Ηζ，1Η)，8.36 (d，J = 7.6 Ηζ，1Η)，8·67 (d，= 3·2 Hz, 1H); EIMS m/z 521 (M+H). 合成M3-雙甲某氨某-丙某）-2-氣某-4-丨4-(嚓吩-2-羰 某）-哌嗪-1-某1-1，2-二氣41，81-蔡啶-3-羧酸乙酯（26) 此化合物之製備係利用Θ -雙甲基氨丙基鹽酸化合物 (209 mg，1.32 mmol)，依照通用程序B而產生110 mg (20 %)之黃色固體。MP 84 - 94 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1·30 (t，J = 7.2 Ηζ，3Η)，1·7 (m，2Η)，2·14 (s，6Η)，2.30 (t，·/ =6·8 Ηζ，2Η)，3·13 (b5 4Η)，3·88 (b5 4Η)，4.3 (m，4Η)，7.2 (m， 1Η)，7.3 (m，1Η)，7.45 (dd5 1.2, 3·6 Ηζ，1Η)，7·79 (dd，= 0·8, 4·8 Hz，1H)，8.34 (dd，J = 2.0, 8.0 Hz，1H)，8.70 (dd，J = 2.0, 4.8 Hz, 1H); EIMS m/z 498 (M+H)· 合成2-氣某-W2-氣某-2·苯某-乙某）-4-丨4·(嚓吩-2-羰 某）-哌嗪-1-某2-二氣-Π，81-萘啶-3-羧酸乙酯（27) -211- 200524928 14467pif.doc 此化合物之製備係利用2-溴基苯乙酮（262 μί，1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生58 mg (10 %)之紅色固 體。MP 115 0C; iH-NMR (DMSO-d6): δ 1.29 (t，= 7·2 Hz， 3H)，3·21 (s，4H)，3.92 (s，4H)，4.31 (q，J = 7·2 Hz，2H)，5.89 (s, 2H), 7.16 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 7.4 (m, 1H)? 7.47 (d5 J - 3.2 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.74 (t? J = 7.2 Hz, 1H)? 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H)3 8.12 (d, J = 7.6 Hz, 2H)? 8.38 (d? J =8.0 Hz? 1H)5 8.56 (d5 J = 4.8 Hz? 1H); EIMS m/z 531 (M+l). 合成4-羥某-M4-甲氣某苯甲某）-2·氧某-1,2-二氣- Γ1.81-菩啶-3-羧酸環R醯胺（29) 添加環己烷（1.18 mL，10.35 mmol)至4-羥基-1-(4-甲 氧基·苯甲基）-2·氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（13) (1.80 g，5.17 mmol)溶於二甲苯之攪拌溶液並於140°C加熱 3 h。冷卻溶液並於真空移除溶劑。殘餘物懸浮於水中並以 二氯甲烷淬取。綜合有機層依序以水與鹽水、飽和碳酸氫 鈉溶液沖洗，再蒸發而產生1.68 g (82 %) 4-羥基-1-(4-甲氧 基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸環己醯胺 (29)爲白色固體。1^«\149°(：;111以1^11(01^30-〇16):5 1.2-1.4 (m，5H)，1.55 (m，1H)，1.70 (m，2H)，1.90 (m，2H)，3.69 (s，3H)，3·86 (m，1H)，5.54 (s，2H)，6·81 (d，J = 8·8 Hz，2H)， 7.20 (d，J = 8·8 Hz，2H)，7.43 (m，1H)，8.47 (dd，J = 2.0, 8.0 Hz, 1H)，8.79 (dd，J = 1.6, 4·8 Hz，1H)，10.22 (d，J = 7.2 Hz， 1H); EIMS m/z 408 (M+l). 合成2.4·二氯41,81-萘啶-3-甲腈（30) 4_羥基-1_(4-甲氧基苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-羧酸環己醯胺(29) (1.4 g，3·44 mmol)溶於純P0C13之 溶液於90 °C加熱整夜。冷卻溶液而多餘P〇Cl3於真空下 -212- 200524928 14467pif.doc 蒸餾。殘餘物懸浮於水中，以飽和碳酸氫鈉鹼化並以二氯 甲烷淬取。綜合有機層依序以飽和碳酸氫鈉溶液、水與鹽 水沖洗、硫酸鈉乾燥，再蒸乾。殘餘物以丙酮再結晶而得 624 mg (81 %) 2,4-二氯-[1，8]-萘啶-3-甲腈（30)之棕色固 體。 MP: 231; i-NMR (DMSO-d6): δ 7.95 (m，1H)，8.78 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 9.33 (dd? J = 2.0? 4.4 Hz, 1H); EIMS m/z 224 (M+l). 製備4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]_萘啶-3_羧酸環己醯胺（29)與2,4-二氯-[1，8]-萘啶-3_甲 腈（30) —連串反應如下：
合成4-氛某-2-氬某-1.2·二氤41.8卜萘啶甲腈QI1 室温添加醋酸銨（6.81 g，88.37 mmol)至溶於醋酸之2,4-二氯·Π，8]-萘啶-3-甲腈（30)懸浮液中並於140 °C加熱45 分。冷卻溶液並倒入冰水中。過濾形成固體、以冷水沖洗 並懸浮於飽和碳酸鈉溶液中。室溫攪拌後、過濾形成固 體、以冷水沖洗並於室溫真空乾燥而產生8.0 g (48 %) 4-氯基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（31)爲白色固體。 MP: 310 °C; h-NMR (DMSO-d6): δ 7.58 (dd，/ = 4.4, 8·0 Hz， 1H)，8·50 (d，/ = 2.0, 8.0 Hz，1H)，8.83 (dd，/ = 4.4, 1·6 Hz， 1H)，13.03 (S，1H); EIMS: 206 (M+l). -213- 200524928 14467pif.doc 替代可行$1 溶於TFA之1-(4-甲氧基苯甲基）-4-氯基-1，2-二氫-2-氧 基-1，8-奈陡-3_甲腈（32) (326 mg，1 mmol)溶液回流 24 h。 冷卻溶液並於減壓蒸除多餘TFA。殘餘物溶於水、以碳酸 氫鈉驗化並過濾。固體以大量清水沖洗並乾燥而產生197 mg (95 %) 4·氯基_2_氧基-1，2·二氫_[1，8]_萘啶-3-甲腈（31) 爲白色固體。ΜΡ: 310 °C; iH-NMR (DMSO-d6): δ 7.58 (dd，J =4·4, 8·0 Ηζ，1Η)，8·50 (d，/ = 2.0, 8.0 Ηζ，1Η)，8.83 (dd，《7 =4.4, 1·6 Ηζ，1Η)，13.03 (s，1H); EIMS: 206 (M+l). 合成1-(4-田氧莘苯甲某V4-氡某-1·2-二氤-2-氣某-1-8-萘啶-3-甲膳(32) 4_羥基-1·(4·甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫·Π，8]_萘 啶-3-羧酸環己醯胺（29) (1.22 g，3 mmol)與三乙胺（1.04 mL，7·5 mmol)之溶液加熱於純p〇ci3中、90 °C整夜。冷 卻溶液而多餘P0C13於真空下蒸餾。殘餘物懸浮於飽和碳 酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體溶於二氯甲烷，依 次以飽和碳酸氫鈉、水及鹽水清洗。有機相以硫酸鎂乾燥 並蒸發而產生0.83 g (85 %)，1-(4-甲氧基苯甲基）-4-氯基-1，2-二氫-2-氧基-1，8-萘啶-3-甲腈（32)之棕色固體。MP 195 〇C· b-NMR (DMS〇-d6): δ 3.69 (s，3H)，5.42 (s，2H)， 6·83 (d，/ = 8·8 Ηζ，2Η)，7·29 (d，J = 8·8 Ηζ，2Η)，7·55 (m， 1Η)，8·50 (dd，J = 2.0, 8.0 Hz, 1Η)，8.88 (dd，J = 1.6, 4.8 Ηζ， 1H); EIMS m/z 326 (Μ+1)· 製備4-氯基-2-氧基·1，2-二氫-[1，8]_萘啶-3-甲腈（31)與 1-(4-甲氧基苯甲基）_4_氯基-1，2-二氫-2-氧基-1，8-萘啶-3-甲 腈（32)之一連串反應如下·· -214- 200524928 14467pif.doc
合成 2 _氣某_ 4 _『4 _ (嗦吩-2 -锻某）_卩肢曉-1 -某1·1，2·—>氣雜 『1,81-萘啶-3-甲腈（33) 室溫添加 l，4-Diazabicyclo[2.2.2]-octane (8.60 g，77 mmol)至溶於雙甲基乙醯胺之4-氯基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（31) (7.9 g，38 mmol)與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮（11.30 g，57 mmol)溶液中。溶液加熱於110 整 夜。冷卻溶液並倒入至冰冷10%氯化銨溶液。過濾形成固 體、以冷水沖洗並於室溫真空乾燥而產生7.1 g (51 %) 2-氧基·4-[4-(嚷吩-2-擬基）_峨曉-1-基]-1，2-一^氣-[1，8]_蔡卩定-3-甲腈（33)爲白色固體。MP 320 °C; b-NMR (DMSO-d6)·. δ 3·69 (m，4Η)，3·90 (m，4Η)，7.16 (dd，J = 3.6, 4.8 Ηζ，1Η)， 7·30 (dd，J = 4.4, 8·0 Ηζ，1Η)，7.49 (d，J = 3·6 Ηζ，1Η)，7.80 (d，J = 4·8 Ηζ，1Η)，8·20 (dd，J = 2.0, 8.0 Hz, 1Η)，8.60 (d， =3.2 Ηζ? 1Η)? 12.20 (S9 1H); EIMS: 366 (Μ+1). 製備2-氧基-4-[4-(嚷吩-2-凝基）-曖曉-1-基]-1，2- 一*氫 Π，8]-萘啶-3-甲腈（33)之一連串反應如下： -215- 200524928 14467pif.doc
於萘啶部分之N-1位置烷某化以製備化合物 標示爲34至48之化合物係利用2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（33) (400 mg， 1.1 mmol)與對應烷基鹵化物，以上述之通用程序A或通用 程序B來製備。 合成1-甲某-2-氬某-4-丨4-(嚓吩-2-羰某V哌嗪-1-某卜 1，2·二氤41·8卜萘啶-3-甲腈Π4) 此化合物之製備係利用甲基碘（82 μ、1.32 mmol)， 依照通用程序A而產生221 mg (53%)之白色固體。MP 266 0C; h-NMR (DMS〇_d6): δ 3.62 (s，3H)，3·69 (m5 4H)， 3·91 (m5 4Η)，7·16 (dd，J = 3.6, 4·8 Ηζ，1Η)，7·37 (dd，J = 4.8, 8·0 Hz, 1Η)，7.48 (d，J = 4.4 Ηζ，1Η)，7·79 (d，J = 4·8 Hz, 1H)，8.29 (dd，J = 1.6, 8.0 Hz，1H)，8.74 (dd5 J = 1.6, 4.8 Hz， 1H); EIMS: 380 (M+l). Anal. (C19H17N502S) C，H，N. 合成2-氣某-444-(嚓吩-2-羰某）-哌嗪-1-某M-乙烯某-K2-二氤-Π.81·蓥啶-3-甲膳（35) 此化合物之製備係利用烯丙基碘（121 fiL，1.32 mmol)， 依照通用程序A而產生283 mg (63 %)之白色固體。MP 228 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.71 (m，4H)，3.92 (m，4H)， 4.94 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.02 (dd, / = 1.2, 10.4 Hz5 1H), 5.08 -216- 200524928 14467pif.doc (dd，J = 1.2，10·4 Hz，1H)，5.92 (m，1H)，7.16 (dd，J = 3.6, 4.8 Hz, 1H)? 7.37 (dd, J = 4.8, 8.0 Hz? 1H), 7.49 (d5 J = 3.6 Hz，1H)，7.81 (d，J = 4.8 Hz，1H)，8.32 (dd，J = 1·6, 8·0 Hz， 1H), 8.71 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS: 405 (M+l). Anal. (C21H19N5O2S) C? Η, N. 合成1-丁某-2-氢某-444-(嚓吩-2_羰某哌嗪-1-某卜 1，2-二氤-丨1，81·萘啶-3-甲腈（36) 此化合物之製備係利用碘丁院（151 gL，1.32 mmol)， 依照通用程序A而產生296 mg (64 %)之白色固體。MP 143 °C; ^-NMR (DMSO-d6)： δ 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32 (m，2H)，1.59 (m，2H)，3·67 (m，4H)，3.90 (m，4H)，4.34 (t，J =7·6 Hz，2H)，7.16 (dd，J = 4·4, 5·2 Hz，1H)，7.36 (dd，J = 4.8, 8.2 Hz, 1H)? 7.49 (dd? J = 1.2, 3.6 Hz, 1H)? 7.80 (dd, J = 1.2? 4.2 Hz? 1H), 8.32 (dd? J = 2.0, 8.2 Hz5 1H)? 8.71 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H); EIMS: 422 (M+l). Anal· (C22H23N502S) C， H5 N. 合成M3-氟某-苯甲某）-2-氣某-4_丨4-(嚓吩-2-羰基）-晚 曝-1 -某1 -1,2->氣-f 1，81 -奈卩正-3 -甲月青 (37) 此化合物之製備係利用3-氟基苯甲基溴化物（162 μ、 1.32 mmol)，依照通用程序Α而產生262 mg (50 %)之白 色固體。MP 231 0C; W-NMR (DMSO_d6): δ 3.73 (m，4H)， 3·93 (m，4Η)，5·55 (s，2Η)，7.06 (m，3Η)，7.17 (m，1Η)，7·30 (m，2H)，7.49 (d，J = 3.6 Hz，1H)，7.80 (d，J = 5.2 Hz，1H)， 8.33 (d? J = 8.0 Hz, 1H), 8.68 (d5 J - 4.4 Hz? 1H); EIMS: 474 (M+l). Anal· (C25H2〇FN502S) C，H，N. 合成2-氣某-1-(2-氯某-2-苯某-7」某）-444-(噻吩 -卩Μ _ 1 -1 -1，2- —> g _『1,81 _胃 @ -3 - ¥ 月胃(38) -217- 200524928 14467pif.doc 此化合物之製備係利用2-溴基苯乙酮（262 mg，1·32 mmol)，依照通用程序Α而產生113 mg (21 %)之白色固 體。MP 269 〇C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.78 (m，4H)，3.94 (m，4Η)，5·88 (s，2Η)，7·17 (dd，J = 3.6, 4·8 Ηζ，1Η)，7.37 (dd, / = 4.4, 8·0 Hz，1H)，7.50 (d，J = 3.6 Hz，1H)，7.59 (m，2H)， 7·74 (m，1H)，7.80 (dd，J = 1.2, 4.2 Hz, 1H)，8.12 (d，J = 7.6 Hz, 1H), 8.39 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 8.59 (dd? J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS: 484 (M+l). Anal. (C26H21N503S) C，H，N. 合成1-(4-氟某-苯甲某）-2-氬某-444-(嚓吩-2-羝某）-酸 嗪-1-某卜1,2-二氤-Π·8μ萘啶-3-甲腈（39) 此化合物之製備係利用4-氟基苯甲基溴化物（162 pL， 1.32 mmol)，依照通用程序A而產生361 mg (69 %)之白 色固體。MP 271 0C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.72 (m，4H)， 3·92 (m，4Η)，5·52 (s，2Η)，7·10 (m，2Η)，7·16 (dd，J = 3·6, 4·8 Ηζ，1Η)，7·33 - 7·39 (m，3Η)，7·49 (dd5 J = 1.2, 3·6 Ηζ， 1Η)，7·80 (dd，J = 1·2, 4.8 Ηζ，1Η)，8.33 (dd，J = 1.6, 8·0 Ηζ， 1Η)5 8.70 (dd? J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS: 474 (Μ+1). Anal. (C25H2〇FN502S) C，Η，Ν. 合成1-(2-氟某·苯甲某V2-氣某-4-丨4彳嚓吩-2-羰基H 曝-1-某 1-1，2->氣-『1，81-奈口定-3-甲睛(40) 此化合物之製備係利用2-氟基苯甲基溴化物（162 pL， 1.32 mmol)，依照通用程序A而產生370 mg (71 %)之白 色固體。MP 286 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.74 (m, 4H)， 3·92 (m，4Η)，5·58 (s，2Η)，6.89 (m，1Η)，7.03 (m，1Η)， 7·16 - 7.26 (m，3H)，7.37 (dd，= 4.4, 8.0 Hz，1H)，7·50 (dd， J = 1.2, 4.0 Hz, 1H), 7.80 (d5 J = 4.8 Hz, 1H)5 8.34 (dd? J = -218- 200524928 14467pif.doc 1.6, 8·4 Hz，1H)，8·65 (dd，J = 1·6, 4.8 Hz，1H); EIMS: 474 (M+l). Anal. (C25H2〇FN502S) C，H，N. 合成醋酸-2 -丨3 -氨某-2_氣某嗦吩锻某峨唪_ 1-某卜:L2-二氤-Π,8卜萘啶-1-某丨-乙酯Γ4Π 此化合物之製備係利用醋酸α-溴基乙酯（145 μί，1.32 mmol)，依照通用程序Α而產生326 mg (65 %)之白色固 體。MP 189 °C; h-NMR (DMSO-d6): δ 1.88 (s，3H)，3·70 (m， 4Η)，3.92 (m，4Η)，4·30 (t，J = 5·6 Ηζ，2Η)，4·60 (t，J = 5·6 Hz, 2Η)? 7.16 (dd, J = 3.6, 4.8 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 4.4, 8.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 1.2, 3.2 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz，1H)，8.33 (dd，= 1.6, 8·0 Hz，1H)，8.72 (dd，J = 1.6, 4.4 Hz? 1H); EIMS: 452 (M+l). Anal· (C22H21N504S) C，H，N. 合成2-氬某-1_丙某-4-丨4·(噻吩-2-羰某V哌嗪-1-某1-1,2-二氤-Π，8卜萘啶-3-甲腈（42) 此化合物之製備係利用1-碘丙烷（129 μ、1.32 mmol)，依照通用程序Α而產生234 mg (52 %)之白色固 體。MP 196 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 0·90 (t，J = 7·6 Hz， 3Η)，1.64 (m，2Η)，3·67 (m，4Η)，3.91 (m，4Η)，4.28 (m，2Η)， 7.16 (dd，J = 3.6, 4·8 Hz，1H)，7.36 (dd，J = 4.4, 8·0 Hz，1H)， 7.48 (dd，J = 1.2, 3.6 Hz, 1H)，7.80 (dd，*7 = 1.2, 4·2 Hz，1H)， 8.29 (dd? J = 1.65 8.0 Hz? 1H)? 8.73 (dd? J = 1.6? 4.4 Hz, 1H); EIMS: 408 (M+l). Anal. (C21H21N502S) C，H，N. 合成雙甲某-丙某V2-氣某-4-『4彳_吩-2-羰基）-哌嗪-1-某卜:L2-二氤41，8卜萘啶-3-甲腈（43) 此化合物之製備係利用新戊基碘（175 μ、1·32 mmol)，依照通用程序Α而產生223 mg (46 %)之白色固 體。MP 232 0C; b-NMR (DMSO-d6): δ 0.89 (s，9H)，3.70 (m， -219- 200524928 14467pif.doc 4H), 3.92 (m5 4H), 4.35 (s, 2H), 7.16 (dd5 J = 3.6, 4.8 Hz, 1H)，7.34 (dd，/ = 4.8, 8.0 Hz，1H)，7.49 (dd，/ = 1.2, 4.0 Hz， 1H), 7.80 (dd? J = 1.2, 4.2 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H)，8.69 (dd，/ = 1.6，4.8 Hz，1H); EIMS: 436 (M+l)· Anal· (C23H25N502S) C，H，N· 合成1-(4-氰基-苯甲某V2-氣某-4-丨4_(噻吩-2-羰某V哌 嗪-1_某卜：L2_二氤-Π·8卜萘啶-3-甲腈（44) 此化合物之製備係利用α-溴基_p-tolunitrile (259 mg， 1·32 mmol)，依照通用程序B而產生353 mg (66 %)之白色 固體。MP 241 °C; ^-NMR (DMSO_d6): δ 3.73 (m，4H)，3.91 (m，4H)，5.61 (s，2H)，7.10 (m，2H)，7.16 (dd，J = 3.6, 4.8 Hz， 1H)? 7.37 (dd? J = 4.8, 8.0 Hz, 1H)? 7.44 (m5 2H)? 7.50 (dd? J =1.2, 3·6 Hz，1H)，7.74 (m，2H)，7.80 (d，= 4.8 Hz, 1H)， 8.34 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 4.0 Hz, 1H); EIMS: 481 (M+l). Anal· (C26H2GN602S) C，H，N. 合成 1_!哀{=11某-2靡氣某-4_『4-(瞎吩_2-锻某)-峨曝_1-某1_ 1，2-二氤-『1，8卜萘啶-3-甲腈（45) 此化合物之製備係利用溴基甲基環己烷（183 μ、1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生243 mg (48 %)之白色固 體。MP 192 0C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.05 — 1.13 (m，5H)， 1.53 - 1.65 (m，5Η)，2·80 (m5 1Η)，3·69 (m，4Η)，3·91 (m， 4Η), 4.21 (d? J = 7.6 Hz, 2H), 7.16 (dd5 J = 3.6? 5.2 Hz? 1H)? 7.34 (dd，J = 4.8, 8.0 Hz，1H)，7.48 (dd，J = 1.2, 3·6 Hz，1H)， 7.80 (dd，J = 1.2, 4.8 Hz，1H)，8.28 (dd，J = 1.6, 8.0 Hz，1H)， 8.72 (dd, J = 2.0, 4.8 Hz, 1H); EIMS: 462 (M+l). Anal. (C25H27N502S) C，H，N· -220- 200524928 14467pif.doc 合成丨3-氰某·2·氣某-4-丨4-(噻吩-2-锶某V哌嗪-1-基上· 1.2-二氣-『1,81·萘啶-1·某卜醋酸乙酯（46) 此化合物之製備係利用溴醋酸乙酯（146 nL，1·32 mmol)，依照通用程序Β而產生267 mg (54 %)之白色固 體。MP 236 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.19 (t，J = 7.2 Hz， 3H)，3.76 (m，4H)，3·92 (m，4H)，4.12 (q，J = 7·2 Hz，2H)， 5.07 (s，2H)，7.16 (dd，/ = 4.0, 5·2 Hz，1H)，7.40 (dd，/ = 4.4, 8.0 Hz, 1H)5 7.49 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H)? 7.80 (d? J = 4.8
Hz，1H)，8.34 (dd，/ = 1.6, 8.0 Hz, 1H)，8.68 (dd，= 1.6, 4.4
Hz，1H); EIMS: 452 (M+l). Anal. (C22H21N504S) C，H，N. 合成M3-雙甲某氨基-丙基）-2-氢某-444-(噻吩 某）-哌嗪-1-某l-h2-二氤-丨1，8卜蓥啶-3-甲腈（47) 此化合物之製備係利用β-雙甲基氨基丙基鹽酸化合物 (209 mg，1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生194 mg (39 〇/〇)之白色固體。MP 176 °C; iH-NMR (DMS〇-d6): δ 1·73 (m，2Η)，2·11 (s，6Η)，2·29 (m，2Η)，3·68 (m，4Η)，3.91 (m， 4Η)，4·34 (t5 J = 7·6 Hz, 2Η)，7·16 (dd，J = 3.6, 4·8 Ηζ，1Η), 7·35 (dd，J = 4.4, 8.0 Ηζ，1Η)，7·48 (d，J = 3·6 Ηζ，1Η), 7·8〇 (dd，J = 1.2, 5.2 Ηζ，1Η)，8.31 (dd，J = 1.6, 8·0 Ηζ，1Η)，8.74 (dd? J = 1.2? 4.4 Hz? 1H); EIMS: 451 (M+l). Anal. (C23H26N602S) C，H，N· 合成1-環丙某甲某-2-氧某-444-(噻吩-2-羰某暖Ρϋ 某卜：L2·二氣萘啶-3-甲腈（48) 此化合物之製備係利用溴基甲基環丙烷（128 μί，1.32 mmol)，依照通用程序Β而產生278 mg (60 %)之白色固 體。MP 189 °C; W-NMR (DMS〇-d6): δ 0.42 (m，4H), 1·28 (m? 1Η)? 3.70 (m? 4Η), 3.90 (m5 4Η)? 4.23 (d? J = 7.2 Hz, 2H), -221- 200524928 14467pif.doc 7.16 (dd5 J = 3.6, 4.8 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 4.4, 8.0 Hz, 1H), 7.49 (dd5 J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.32 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H)? 8.73 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H); EIMS: 420 (M+l). Anal. (C22H21N5O2S) C? H? N. 醯化嘛哼fV代於菩啶部分以製備化合物 標示爲49至55之化合物係利用1_苯甲基_2_氧基-4-哌 嗪-1-基-1，2-二氫-[Μ]-萘啶-3-羧酸乙酯（5)，以通用程序 C或通用程序D製備。
通用稈序C 於氬氣0°C下添加對應之醯氯（1·5 mmol)至溶於吡啶 (5 mL)之1_苯甲基-2·氧基-4·峨嗦-1-基-1，2-一^氮- [1，8]-蔡卩定-3-羧酸乙酯（5) (392 mg，1 mmol)攪拌溶液中。溶液升至室 溫再攪拌整夜。溶液倒入冰水並過濾形成固體。固體以大 量清水沖洗、乾燥並以急驟層析法純化，沖提梯度爲溶於 二氯甲烷之0-2 % MeOH。
通用稃序D 室溫下依序添加草醯氯(2 mmol)與DMF (2滴）至對應 酸（1.5 mmol)於CH2C12之攪拌溶液中，再於氬氣下攪拌2 h。室溫真空下移除溶劑而得對應之醯氯。氬氣下添加1-苯 甲基-2-氧基-4-哌嗪-1-基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯 (5) (392 mg，1 mmol)於無水吡啶（5 mL)之溶液至殘餘物並 短暫震盪。溶液於室溫氬氣下攪拌整夜。溶液倒入冰水並 過濾形成固體。固體以大量清水沖洗、乾燥並以急驟層析 法純化，沖提梯度爲溶於二氯甲烷之0-2 % MeOH。 合成1-苯甲基-4-(4-環戊烷羝某-哌嗪-1-基）-2-氣基-1.2-二氤·丨1,81-荛陡·3·羧酸乙酯（49、 -222- 200524928 14467pif.doc 此化合物之製備係利用通用程序C。白色固體，產量 64 %，mp 170 °C. ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.28 (t? J = 6.8 Hz，3H)，1.6 (m，8H)，3.05 (m，5H)，3.74 (m5 4H)，4.29 (q，J =7·2 Hz，2H)，5.56 (s，2H)，7.25 (m5 5H)，7.38 (m，1H)，8.34 (dd，《7 = 1.6，7.6 Hz, 1H)，8.67 (dd，J = 1.6，4.4 Hz，1H); EIMS m/z 489 (M+l). 合成4-(4-苯甲醯-哌嗪-1-某）-1-苯甲某-2-氣某二 氤萘啶-3-羧酸乙酯（50) 此化合物之製備係利用通用程序C。白色固體，產量 90 %，mp 220 0C. ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.29 (t? J = 6.8 Hz，3H)，3·1 (m，4H)，3.5 - 4.0 (m，4H)，4.30 (q，/ = 6·8 Hz， 2H)，5.56 (s，2H)，7.23 (m，5H)，7·40 (m，6H)，8.33 (dd，= 2.0, 8.4 Hz, 1H)? 8.66 (dd? J = 2.0, 4.8 Hz, 1H); EIMS m/z 497 (M+l). 合成1-苯甲某-444-(4-氛某-苯甲醯哌睡-1-某卜2-氣 某-1.2-二氣-丨1、81-萘啶-3-羧酸乙酯（51) 此化合物之製備係利用通用程序C。白色固體，產量， 86 %，mp 110-115 °C. !H-NMR (DMSO-d6)： δ 1.29 (t? J = 7.2 Hz，3H)，3.1 (m，4H)，3.5 - 4.0 (m，4H)，4.31 (q，/ = 7.2 Hz，2H)，5.56 (s，2H)，7.25 (m，5H)，7.38 (m，1H)，7.46 (d，/ =6·4 Hz，2H)，7.54 (d，J = 6.4 Hz，2H)，8·33 (dd，J = 1.6, 8.0 Hz? 1H)? 8.66 (J = 1.6, 4.8 Hz, 1H); EIMS m/z 531 (M+l). 合成1-苯甲某_4-丨4_(6-氛某-啦啶-3-羰某）-哌嗪-1-某1-2-氣某-1,2-二氣41，8卜萘啶-3-羧酸乙酯（52) 此化合物之製備係利用通用程序C。黃色固體，產量 89 %，mp 125_130 0C. ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.29 (t? J = 6·8 Hz，3H)，3·15 (m，4H)，3·5 - 4.0 (m，4H)，4.31 (q，J = 6.8 -223- 200524928 14467pif.doc
Hz，2H)，5.56 (s，2H)，7·27 (m，5H)，7.38 (m，1Η)，7.65 (d5 J =6.8 Hz? 1H), 7.96 (dd, J = 2.4, 8.0 Hz, 1H), 8.33 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz? 1H), 8.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.67 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz? 1H); EIMS m/z 532 (M+l). 合成1·苯甲基-2-氣某-4-丨4彳吡啶-4-羰某）·哌嗪-1-甚1-1.2·二氤41、81-萘啶-3-羧酸乙酯（53) 此化合物之製備係利用通用程序C。黃色固體，產量 32 %，mp 130-135 °C. ]H-NMR (DMSO-d6)： δ 1.29 (t5 J = 7·2 Hz，3H)，3.08 (b，2H)，3.20 (b，2H)，3.50 (b，2H)，3.90 (b， 2H), 4.31 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 5.56 (s? 2H), 7.25 (m, 5H)? 7.36 (m? 1H)? 7.40 (d5 J = 5.6 Hz, 2H), 8.32 (d, J = 7.2 Hz? 1H), 8.66 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 5.2 Hz, 2H); EIMS m/z 498 (M+l). 合成1 -苯甲某-2-氣某-4-丨4彳吡晾-2-羰某哌嗪-1 -基.1二 K2-二氣41，8卜萘啶-3·羧酸乙酯（54) 此化合物之製備係利用通用程序C。黃色固體’產量 23 %，mp 112-117 °C. !H-NMR (DMSO-d6)： δ 1.30 (t? J = 7.2 Hz，3H)，3.12 (b，2H)，3.20 (b，2H)，3.66 (b，2H)，3.91 (b， 2H)，4·32 (q5 J = 7·2 Hz，2H)，5.56 (s，2H)，7.26 (m，5H)， 7.37 (m，1H)，7.51 (m，1H)，7.63 (d，J = 8·0 Hz，1H)，7.96 (t， J 二 7.6 Hz，1H)，8.61 (d，/ = 4.0 Hz，1H)，8.66 (d，= 3 6 Hz， 1H); EIMS m/z 498 (M+l). 合成1-苯甲基-2-氣某-4·丨4-〔噻吩-3-锻基1 H 1，2-二氤41，8卜萘啶-3-羧酸乙酯（55) 此化合物之製備係利用通用程序D。白色固體’ 68 %，mp 115 °C. ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.29 (t, J = 7 2 Hz，3H)，3·14 (b，4H)，3.75 (b，4H)，4.30 (q，J = 7·2 HZ，2H)， -224- 200524928 14467pif.doc 5.56 (s，2H)，7.25 (m，6H)，7.37 (m，1H)，7.65 (m，1H)，7.85 (dd, J = 1.2, 2.8 Hz, 1H)5 8.34 (dd5 J = 2.0, 8.0 Hz, 1H)5 8.67 (dd，J = 2.0, 4.8 Hz，1H); EIMS m/z 503 (M+l). 醯化哌嗪取代萘啶甲腈部分製備化合物 標示爲56至64之化合物係利用1-苯甲基-2-氧基-4-哌 嗪-1-基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（9)，以前述通用程序 C或通用程序D所製備。 合成 1-本甲基_4·(4-環戊院鎖基-峨曉-1-基）_2·氣基-1,2-二氤41,81-萘啶-3-甲腈（56) 此化合物之製備係利用通用程序C。棕色固體，產量 64 %，mp 197 °C. ^-NMR (DMSO-d6): δ 1.7 (m? 8H)? 3.07 (m，1H)，3.70 (m，8H)，5.55 (s5 2H)，7.23 (m5 5H)，7.37 (m， 1H)，8.31 (dd，/ = 1.6, 8.0 Hz，1H)，8.69 (dd，/ = 1.6, 4.8 Hz， 1H); EIMS m/z 442 (M+l). 合成4-(4-苯甲醯-哌嗪-1·基）-1-苯甲某-2-氣基-1，2-二 氣萘啶-3-甲腈（57) 此化合物之製備係利用通用程序C。白色固體，產量 71 %，mp 287 °C. W-NMR (DMSO-d6): δ 3·7 (m，8H)，5·55 (s，2Η), 7·23 (m，5Η)，7·35 (m，lH)，7·49 (m5 5Η)，8·31 (dd，J =1.6? 8.4 Hz? 1H)? 8.69 (dd? J - 1.6, 4.8 Hz? 1H); EIMS m/z 450 (M+l). 合成1-苯甲某-4-丨4-(4-氯基-苯甲醯哌嗪-1-基卜2-氧 某-L2-二氤-丨1，8卜蔡啶-3-甲腈（58)
此化合物之製備係利用通用程序C。黃色固體，產量 75 %，mp 298 0C· W-NMR (DMSO-d6): δ 3.7 (m，8H)，5.55 (s，2H)，7.25 (m，5H)，7.36 (m，1H)，7.55 (m，4H)，8.30 (dd5 J -225- 200524928 14467pif.doc =1.6, 8.0 Hz，1H)，8.69 (dd，J = 1.6, 4.4 Hz，1H); EIMS m/z 484 (M+l). 合成 1 -本甲某-4-『4-(6-氛某-D比症-3 锻某)-口欣哼-2-氫基-1,2-二氤-「1.81-萘啶-3-甲腈（59) 此化合物之製備係利用通用程序C。白色固體，產胃 89 %，mp 250 °C. ^-NMR (DMSO-d6): δ 3.75 (m5 8H) 5.55 (s，2H)，7·25 (m，5H)，7·37 (m，1H)，7·65 (d，J = 8.4 Hz 1H)，8·00 (dd，= 2.4, 8.0 Hz，1H)，8.30 (dd，J = 1.6, 8·4 Hz 1H)，8.56 (dd，·/ = 0.4, 2·4 Hz，1H)，8.69 (dd，J = 1.2, 4·4 Hz 1H); EIMS m/z 485 (M+l). 合成1-苯甲某-2-氣某-444-(吡啶-4-羰某V哌嗥 1.2- 二氣41、81·萘啶-3-甲腈（60) 此化合物之製備係利用通用程序C。棕色固體，產4 93 %，mp 275 °C. W-NMR (DMSO-d6): δ 3·55 (b，2H)， 3·65 (b，2Η)，3·76 (b，2Η)，3.92 (b，2Η)，5.55 (s，2Η)，7·25 (m， 5H)，7.36 (m，1H)，7.48 (d，J = 6.0 Hz，2H)，8.29 (dd，J =： 1.6, 8·0 Hz，1H)，8.70 (m，3H); EIMS m/z 451 (M+l). 合成1-苯甲某-2-氣某-4-丨4-(附啶-2-羰某V哌嗪 1.2- 二氤4L81-菩啶-3-甲腈（6Π 此化合物之製備係利用通用程序C。棕色固體，產量 47 %，mp 256 °C. ]H-NMR (DMSO-d6)： δ 3.70 (m5 6H)5 3.94 (m，2H)，5.55 (s，2H)，7.25 (m，5H)，7.36 (m，1H)，7.52 (m，1H)，7.68 (m, 1H)，7.97 (m，1H)，8.34 (dd3 J = 1.6, 8.0 Hz， 1H)，8.64 (m，1H)，8.69 (m，1H); EIMS m/z 451 (M+l). 合成1-苯甲某-2-氬某-4-丨4-(噻吩-3-羰某V哌嗪 1、2-二氤41,81·菩啶-3-串腈（62) -226- 200524928 14467pif.doc 此化合物之製備係利用通用程序D。棕色固體，產量 96 %，mp 257 °C· h-NMR (DMSO-d6): δ 3·75 (m，8H)， 5.55 (s，2Η)，7.25 (m，6Η)，7.35 (m，1Η)，7.65 (m，1Η)，7·88 (dd，/ = 1.2, 2·8 Hz，1H)，8.31 (dd，J = 1.6, 8·0 Hz，1H)，8.69 (dd，J = 1.6, 4·4 Hz，1H); EIMS m/z 456 (M+l)· 合成1-苯甲某-4-丨4-(5-氟某-噻吩-2-羰某）-哌嗪-1-某1-2-氬某-1，2-二氤_『1·81_葵啶-3-甲腈（63) 此化合物之製備係利用通用程序D。白色固體，產量 80 %，mp 226 °C. h-NMR (DMSO-d6): δ 3.73 (m，4H)， 3.93 (m，4H)，5.55 (s，2H)，6.82 (d，= 4·4 Hz, 1H)，7.25 -7.31 (m，6H)，7·37 (dd，J = 4.0, 8·0 Hz，1H)，8.33 (d，J = 8.0 Hz, 1H)? 8.69 (d, J = 4.4 Hz, 1H); EIMS m/z 474 (M+l). Anal. (C25H20FN5O2S) C? Η, N. 合成1-苯甲某-444-(5-氛某-噻盼-2-羝某V哌嗪-1-基1二 2-氬某-1,2-二氣41,81-萘啶-3-甲腈（64) 此化合物之製備係利用通用程序D。白色固體，產量 77 %，mp 249 °C. !H-NMR (DMSO-d6): δ 3.73 (m? 4H), 3.92 (m，4H)，5.55 (s，2H)，7·21 - 7.29 (m，6H)，7.36 (dd，/ = 4.8, 8.0 Hz，1H)，7.41 (d，J = 4·0 Hz，1H)，8.33 (dd，/ = 1.2, 8.0 Hz，1H)，8.69 (dd，J = 1.6, 4.8 Hz，1H); EIMS m/z 490 (M+l). Anal. (C25H20CIN5O2S) C? H? N. 合成2.6-二氯-5-氟基-尼古丁酸乙酯（65) 溶於亞硫醯氯（200 mL)與甲苯（200 mL)之2,6-二氯_ 5-氟基尼古丁酸（43 g，205 mmol)懸浮液回流3 h而得一清 澈溶液。冷卻溶液並於真空移除溶劑。殘餘物冰浴冷卻1並 慢慢加入冷無水乙醇。〇 攪拌15 min後，氬氣下回流30 min。冷卻溶液且真空移除溶劑。殘餘物溶於醋酸乙酯並依 -227- 200524纖· 次以飽和NaHC03溶液、水與鹽水清洗。有機相以硫酸鎂 乾燥並蒸發而產生48.5 g (99 %) 2,6-二氯-5_氟基_尼古丁酸 乙酯（65)爲無色濃稠油狀。W-NMR (DMSO-d6): δ 1.32 (t, J = 7.2 Hz? 3H)? 4.37 (q? J = 7.2 Hz, 2H), 8.46 (d, J = 8.0 Hz，1H); EIMS m/z 238 (M). 合成2-氛某-6-乙硫某-5-氟某-尼古丁酸乙酯（66) 乙硫醇（15.08 mL，204 mmol)慢慢添加至溶於THF之 NaH (60 %溶於礦物油，8.15 g，204 mmol)攪拌液中並室溫 攪拌30 min而得白色濃稠懸浮液。懸浮液以冷THF稀釋， 冷卻至〇 °C再於-20弋氬氣下移至已冷卻2,6·二氯-5-氟基-尼古丁酸乙酯（65) (48.5 g，204 mmol)於THF之溶液，維 持溫度低於-10 °C。溶液攪拌於-20、15 min並升至室 溫。溶液倒入水中以醋酸乙酯淬取。有機層以硫酸鎂乾 燥、低壓濃縮而產生53 g (98 %) 2-氯基-6_乙硫基-5_氟基-尼古丁酸乙酯（66)爲棕色液體。W-NMR (DMSO-d6): δ 1.33 (m? 6H)? 3.19 (q? J = 7.2 Hz, 2H)? 4.33 (q? J = 7.2 Hz, 2H)? 8.10 (d? J = 9.6 Hz? 1H); EIMS m/z 264 (M+l). 合成6-乙硫某-5-氟某-2“4-甲氣基-苯甲某氨基屁古 丁酸乙酯（67) 灌注氬氣至溶於無水乙醇之2-氯基-6-乙硫基-5-氟基-尼古丁酸乙酯（66) (53g，201mmol)溶液並室溫添加p_甲氧 基苯甲胺（52.5mL，402mmol)。氬氣下溶液回流整夜。冷卻 溶液於低壓蒸除溶劑。殘餘物溶於二氯甲院、短暫震盪並 過濾。過濾物以水清洗、硫酸鎂乾燥並濃縮。粗產物以急 驟層析法純化，沖提梯度爲己烷：CH2C12 (1:1)而得47 g (64 %) 6-乙硫基-5-氟基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸 -228- 200524928 14467pif.doc 乙酯（67)爲黏稠油狀，其於數天室溫真空保存會轉成白色 固體。Mp 59 °C. W-NMR (DMSO-d6): δ 1.18 (t，7 = 7·2
Hz，3H)，1·29 (t，/ = 7·2 Hz，3H)，3.08 (q，J = 7·2 Hz，2H)， 3.71 (s，3H)，4·26 (q，J = 7.2 Hz，2H)，4.62 (d，/ = 5.6 Hz， 2H)，6·87 (m，2H)，7.24 (m，2H)，7.71 (d，J = l〇 Hz, 1H)， 8.32 (m, 1H); EIMS m/z 365 (M+l). 製備2,6_一·氣_5-氣基-尼古丁酸乙醋（65)，2-氣基-6-乙 硫基-5-氟基_尼古丁酸乙酯（66)與6-乙硫基-5-氟基-2-(4-甲 氧基-苯甲基氨基)-尼古丁酸乙酯（67)之一連串反應如下：
F CI
1. SOCI2, Tol., reflx. f
COOH
Cl N Cl 2. EtOH, 0.5 h, reflx
C〇〇EtNaH, EtSH F Cl THF, -20 °C s
66 COOEt
Cl 65
EtOH, reflx. overnight 〇Me NH2 Φ OMe 合成5-氟某-2-(4-甲氧基-苯甲某氬某古丁酸乙酯· (68) 添加剛活化之raney nickel (50 g)至溶於無水乙醇之中 6-乙硫基_5_氟基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸乙酯 (67) (31 g，85 mmol)溶液中並回流48 h。冷卻並以celite 過濾。過濾物於低壓蒸乾而得24 g (93 %) 5-氟基-2-(4-甲氧 基-苯甲基氨基）_尼古丁酸乙酯（68)爲黏稠油狀’其於數 天室溫真空保存會轉成白色固體。Mp 90 °C· 'H-NMR (DMSO-d6): δ 1·30 (t，J = 7.2 Hz, 3H)，3.71 (s，3H)，4.29 (q， -229- 200524928 14467pif.doc J = 7.2 Hz, 2H), 4.55 (d, J = 5.6 Hz, 2H)9 6.87 (m, 2H), 7.26 (m，2H)，7.96 (dd，J = 3.2, 8·8 Hz，1H)，8.12 (m，1H)，8.35 (d， J = 3.2 Hz，1H); EIMS m/z 305 (M+l). 合成6-氟某-1彳4-甲氣某-苯甲某吡啶並丨2,3-βΓΙ.31 噁嗪·2,4-二酮（611 慢慢添加氯甲酸三氯甲酯（11.41 mL，94.63 mm〇l)至溶 於二噁烷之5_氟基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基)-尼古丁酸乙酯 (68) (24 g，78.86 mmol)溶液並氮氣下回流4 h。冷卻溶液且 真空移除溶劑。殘餘物以醚再結晶而產生21.5 g (90 %) 6-氟基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶並[2,3d][l，3]噁嗪-2,4-二酮（69)爲白色固體。MP: 143 °C; ^-NMR (DMSO_d6)·· δ 3.71 (s，3Η)，5.27 (s，2Η)，6·85 (m，2Η)，7·35 (m，2Η)， 8.40 (dd，J = 2.8, 6·8 Ηζ，1Η)，8·82 (d，J = 2·8 Ηζ，1H); EIMS: 303 (M+l). 製備5-氟基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸乙酯 (68)，6-氟基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-1//•吡啶並[2,3d][l，3]噁 嗪-2,4-二酮（69)之一連串反應如下：
合成5-氲某-2-羥某-尼古丁酸Π0) 添加次氯酸鈉（14 % available chorine, 35 mL，82.21 mmol)至 2-羥基尼古丁酸（7 g，50.3 mmol)於 10 % NaOH 水 -230- 20052驚 * 溶液之攪拌溶液中。溶液室溫攪拌48 h。加入亞硫酸鈉 (3.150g，25 mmol)水溶液並室溫攪拌30 min。溶液以冷水 稀釋並以稀HC1調pH至2 °過瀘形成固體、以水清洗並 乾燥而產生6.8 g (78%) 5-氯基-2-羥基-尼古丁酸（70)爲白 色固體。MP: 276 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 8.23 (d，J = 2.8 Hz, 1H)? 8.29 (d? J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 174 (M+l). 合成2.5-二氡-屁古丁酸甲酯（71) 溶於亞硫醯氯（200 mL)與DMF (1 mL)之5-氯基-2-羥 基·尼古丁酸（70) (6 g，3.46 mmol)懸浮液回流3 h而得清 澈溶液。冷卻溶液而多餘亞硫醯氯真空蒸乾。殘餘物冰浴 冷卻並慢慢添加無水冷甲醇。〇 °C攪拌15 min後，溶液氬 氣下回流1 h。冷卻溶液且真空移除溶劑。殘餘物溶於醋酸 乙酯並依次以飽和NaHC03溶液、水與鹽水清洗。有機相 以硫酸鎂乾燥並蒸發而產生4.3 g (60 %) 2,5-二氯-尼古丁 酸甲酯（71)爲無色濃稠油狀。1H-NMR (DMSO-d6): δ 3.88 (s5 3H)? 8.39 (d5 J = 2.8 Hz, 1H)? 8.70 (d, J - 2.8 Hz, 1H); EIMS m/z 206 (M). 製備5-氯基-2-羥基-尼古丁酸（70)與2,5-二氯-尼古 丁酸甲酯（71)之一連串反應如下：
48 h, RT
C〇〇H 'OH
^wCOOH NaOCI, NaOH c, k又OH
70 2. MeOH, 0.5 h, reflx. 1. SOCI2, DMF, reflx.
COOMe Cl 71 合成5-氛基-2-(4-甲氣某-苯甲某氨某屁古丁酸甲酯 -231- (72) 200524928. 14467pif.doc 灌注氬氣至溶於無水甲醇之2,5-二氯_尼古丁酸甲酯 (71) (25g，121mmol)溶液並室溫添加口_甲氧基苯甲胺（34·5 mL，266mmol)。溶液氬氣下回流整夜。冷卻溶液於低壓蒸 除溶劑。殘餘物溶於二氯甲烷、短暫震盪並過濾未溶固 體。過濾物以水清洗、硫酸鎂乾燥並濃縮。粗產物以急驟 層析法純化，沖提梯度爲己烷：CH2C12 (1:1)而得16.2 g (44 %) 5-氯基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基)-尼古丁酸甲酯（72)爲 白色固體。Mp 94。0：. W-NMR (DMSO-d6): δ 3.71 (s，3H)， 3.82 (s，3Η)，4.59 (d，J = 5.6 Ηζ，2Η)，6·87 (m，2Η)，7.24 (m， 2H)，8·06 (d，/ = 2.8 Hz，1H)，8.27 (m，1H)，8.32 (d，J = 2·8 Hz，1H); EIMS m/z 307 (M+l)· 合成6-氯某-1_M-甲氣基-苯甲某Vl/i-吡啶並『2,3· 丑11^11喔嗪-2,4-二酮(Ί?Λ 慢慢添加氯甲酸三氯甲酯（5.40 mL，44.82 mmol)至5- 氯基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸甲酯（72) (12.5 g， 4〇·75 mmol)溶於二噁烷之溶液並氮氣下回流4 h。冷卻溶液 且真空移除溶劑。殘餘物以醚再結晶而產生11.80 g (91 %) 6-氯基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶並[2,3d][l，3]噁嗪-2,4- 二酮（73)爲白色固體。MP: 173 °C; ^-NMR (DMSO-d6): 3.71 (s，3H)，5·25 (s，2H)，6·85 (m，2H)，7.33 (m，2H)，8·49 (d? J = 2.8 Hz? 1H)5 8.82 (d5 J = 2.8 Hz? 1H); EIMS: 319 (M+l). 製備5-氯基-2-(4-甲氧基-苯甲基氨基）-尼古丁酸甲酯 (72) ，6-氯基-l_(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶並[2,3d][l，3]噁 嗪-2,4-二酮（73)之一連串反應如下： -232- 2〇〇524a,d〇c
71 72 73 合成6-氟某-4-羥某-M4-甲氧基-苯甲某）-2-氧某-1,2-二氤41.81-萘啶-3-羧酸乙酯（74) 緩慢添加丙二酸二乙酯（10.79 mL，71.38 mmol)至溶於 雙甲基乙醯胺（200 mL)之NaH (60 %溶於礦物油，3.13 g， 78.24 mmol)懸浮液，鈍氣室溫下攪拌0.5 h。6-氟基-1-(4-甲氧基·苯甲基）-1//-吡啶並-[2,3-4-[1，3]-噁嗪_2,4_二酮（69) (21.5 g，71.31 mmol)加至溶液中，110 °C 加熱 4 h (TLC control)。冷卻溶液並倒入冰水中。溶液pH値以冷10% HC1調整至3。過濾所產生固體以水清洗並真空乾燥而產生 26.01 g (98 %) 6_氟基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]_萘啶-3-羧酸乙酯（74)爲淡黃色固體。MP: 163 °C; !H-NMR (DMSO-d6)： δ 1.27 (t9 J = 7.2 Hz, 3H)5 3.68 (s，3H)，4.27 (q，J 二 7.0 Hz, 2H)，5.43 (s，2H)，6.81 (m，Hz， 2H)，7.19 (m，2H)，8.26 (dd5 J = 2.8, 8.0 Hz, 1H)，8.74 (d，J = 2·8 Hz，1H)，13.00 (br· S，1H); EIMS: 373 (M+l). 合成6-氛某-4-羥某-M4-甲氣某-苯甲某V2-氣某-1,2-二氤41.81-葵啶-3-羧酸乙酯（75) 緩慢添加丙二酸二乙酯（6.02 mL，71.38 mmol)至溶於 雙甲基乙醯胺（200 mL)之NaH (60 %溶於礦物油，3.13 g， -233- 200524928 14467pif.doc 78.24 mmol)懸浮液中，室溫氬氣下攪拌0.5 h。6_氯基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-1//-吡啶並-[2,3-刃-[1，3]-噁嗪-2,4_二酮 (73) (21.5 g，71.31 mmol)加至溶液中，110QC 加熱 4 h (TLC control)。冷卻溶液並倒入冰水中。溶液pH値以冷10% HC1調整至3。過濾所產生固體以水清洗並真空乾燥而產生 14.0 g (99 %) 6-氯基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）·2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（75)爲白色固體。ΜΡ: 198 °C; ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.28 (t? J = 7.2 Hz, 3H), 3.68 (s，3H)，4.30 (q，J = 7.2 Hz，2H)，5.43 (s，2H)，6·81 (m，Hz， 2H)5 7.20 (m5 2H), 8.43 (d? J = 2.8 Hz? 1H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz? 1H); EIMS: 389 (M+l). 製備6-氣基-4-經基-1-(4 -甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2_ 二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（74)與6-氯基-4-羥基-1-(4-甲 氧基-苯甲基）-2-氧基_1，2_二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（75) 之一連串反應如下： 〇
COOEt / COOEt
MeO
69R = F 73R = CI OH NaH, DMA 110°C,4h
合成 4 -氛某-6-氣基-1-(4 -甲氣基-苯甲基）-2 -氧某-1,2-二氚81-萘啶-3-羧酸乙酯（76) 6-氟基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1,2-二氫-[1，8]·萘啶_3-羧酸乙酯（74) (7.0 g，18.79 mmj)與三乙胺 (5.2 mL, 37.58 mmol)之溶液加熱於純 P0C13、90 下 3 -234- 200524928 14467pif.doc h。冷卻溶液而多餘P〇Cl3於真空下蒸餾。殘餘物懸浮於飽 和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體溶於二氯甲 烷，依次以飽和碳酸氫鈉、水及鹽水清洗。有機相以硫酸 鎂乾燥並蒸發而產生6.2 g (85 %) 4-氯基-6-氟基-1-(4-甲氧 基-苯甲基）-2-氧基-1，2·二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（76) 爲黃色蠟狀固體。1H-NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t，/ = 7·2 Ηζ， 3Η)，3·70 (s，3Η)，4·37 (q，/ = 7·2 Ηζ，2Η)，5·51 (s，2Η)，6·84 (m，2Η)，7·24 (m，2Η)，8·37 (dd，J = 2.8, 8.0 Ηζ，1Η)，8·82 (d， J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 391 (M+l). 合成4.6-二氛-M4-甲氣某-苯甲某V2-氯某-1，2-二氤-Γ1.81-蓥啶-3-羧酸乙酯（77) 6-氯基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（75) (6.0 g，15.43 mmol)與三乙胺 (5.36 mL，38.57 mmol)之溶液加熱於純 P0C13、90 °C 下 3 h。冷卻溶液而多餘POC13於真空下蒸餾。殘餘物懸浮於飽 和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體溶於二氯甲 烷，依次以飽和碳酸氫鈉、水及鹽水清洗。有機相以硫酸 鎂乾燥並蒸發而產生6.2 g (85 %) 4,6-二氯-1-(4-甲氧基-苯 甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8卜萘啶-3-羧酸乙酯（77)爲黃色 蠟狀固體。1H-NMR (DMSO-d6): δ 1·30 (t，J = 7·2 Hz，3H)， 3.69 (s，3H)，4.38 (q5 J = 7·2 Hz，2H)，5.50 (s，2H)，6·82 (m， 2H)，7.24 (m，2H)，8.48 (d，J = 2·4 Hz，1H)，8.87 (d，J = 2.4 Hz，1H); EIMS: 407 (M). -235- 200524928 14467pif.doc 合成4-氯基-6-氟基-2-氧基-1 ·2-二氤-Π,8卜菩瞭-3-错酸 乙酯（78) 溶於純TFA之4_氯基-6_氟基_1-(4-甲氧基_苯甲基)_2_ 氧基-1，2-二氫-[1，8]·萘陡 _3_ 殘酸乙酯（76) (6.0 g，15.35 mmol)溶液回流3 h。冷卻溶液而多餘TFA於真空下蒸餾。 殘餘物懸浮於飽和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固 體以水沖洗並室溫乾燥而產生4.1 g (98 %) 4-氯基-6_氟基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（78)爲白色固體。 MP: 217 °C; 1H_NMR (DMSO_d6): 1.28 (t，J = 7.2 Hz，3H)， 4·35 (q，J = 7.2 Hz, 2H)，8·24 (dd，J = 2.8, 8·0 Hz，1H)，8.75 (d5 J = 2.8 Hz，1H)，13.00 (s，1H); EIMS: 271 (M+l)· 合成4,6-二氯-2_氧基-1，2-二氤-Π,81-萘晗-3-羧酸Z酯 (19) 溶於純TFA之4,6-二氯-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-一氣-[1，8]-奈B定-3-殘酸乙酯（77) (6.0 g，14.73 mmol)溶 液回流3 h。冷卻溶液而多餘TFA於真空下蒸餾。殘餘物 懸浮於飽和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體以水 沖洗並室溫乾燥而產生4.2 g (99 %) 4,6-二氯-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（79)爲白色固體。MP: 228 °C; 1H-NMR (DMSO_d6): δ 1.29 (t，J = 7.2 Hz，3H)，4.37 (q5 J = 7.2 Hz，2H)，8.38 (d，J = 2.4 Hz，1H)，8.75 (d，J = 2.4 Hz， 1H)，13.10 (s，1H); EIMS: 287 (M)· 製備4-氣基-6-氣基-1-(4 -甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（76)，4,6·二氯-1_(4-甲氧基-苯 甲基)-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘卩定-3-殘酸乙酯（77)，4-氯基· 6-氟基-2-氧基-1，2-一氫-[1，8]-萘卩定-3-竣酸乙酯（78)與4,6- -236- 200524928 14467pif.doc 二氯-2-氧基_1，2_二氫-[1，8]-萘啶-3_羧酸乙酯（79)之一連串 反應如下：
取代哌嗪衍牛物氨化4-氛某-萘啶部分 標示爲80至82之化合物係利用4-氯基-6-氟基-2-氧 基·1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（78)或4,6-二氯-2-氧 基-1，2-二氫-[1，8]_萘啶-3-羧酸乙酯(79)與對應哌嗪衍生物反 應，以通用程序Ε而製備。 通用程序Ε 室溫添加DABCO (2 mol當量）至溶於雙甲基乙醯胺之 4·氯基-6-氟基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（78) 或4,6-二氯-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（79) (1 mol.當量）以及對應之哌嗪衍生物（1.2 mol.當量）之溶液 中。溶液於110 °C加熱3 h。冷卻溶液並倒入冰水中。固 體過濾、以水沖洗並乾燥而產生對應產物。 合成6-氣基-2-氣基嗦吩-2-端基脈曝-1-某1-1,2-二氤8卜萘啶-3-羧酸乙酯（80) 此化合物係利用4-氯基-6-氟基-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（78)與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮並依照通 用程序 E 製備。產量 3.16 8(66^0),1^^ 124 - 133 ^^11- -237- 200524928 14467pif.doc NMR (DMSO-d6)： δ 1.26 (t? J = 7.2 Hz, 3H), 3.11 (m, 4H), 3·88 (m，4H)，4.28 (q，= 7·2 Hz，2H)，7.15 (dd，= 3·6, 4·8 Hz，1H)，7.45 (dd，/= 1.2, 3.6 Hz，1H)，7.79 (dd，1.2, 4.8 Hz，1H)，8.05 (dd，J = 2.8, 8·0 Hz，1H)，8.63 (d，J = 2.8 Hz， 1H) 12.40 (s? 1H); EIMS: 431 (M+l). 合成6-氟某-4-丨4-(呋喃-2-羰基）·哌嗪-1-某1-2-氣某- 1.2- 二氤4K81-萘啶-3-羧酸乙酯（81) 此化合物係利用4-氯基-6-氣基-2-氧基_1，2- —^氯-[1，8]_ 萘啶-3-羧酸乙酯 （78)與2-呋喃甲醯哌嗪（2-furoyl piperazine)並依照通用程序E製備。產量3.11 g (74 %)， MP 207 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 1.27 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 3.11 (m，4H)，3·90 (m，4H)，4.29 (q，/= 6·8 Hz，2H)，6.65 (dd， J = 2.0, 3.6, Hz, 1H), 7.04 (d5 J = 3.6 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 1.6 Hz? 1H)? 8.06 (dd, J = 2.8? 8.0 Hz, 1H), 8.63 (d, J = 2.8 Hz，1H) 12.40 (s，1H); EIMS: 415 (M+l)· 合成 6 -氛某_ 4 _ j 4 (口卷吩一2 -羯某、一 _曉 1 -某] 2 -氣某一 1.2- 二氣-丨1，8卜蔡啶-3-羧酸乙酯（82) 此化合物係利用4,6-二氯-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（79)與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮並依照通用 程序 E 製備。產量 6.4 g (73 %)，MP 242 °C; iH-NMR (DMSO-d6)： δ 1.28 (t5 J = 7.2 Hz, 3H)? 3.12 (m5 4H)3 3.87 (m5 4H)，4.28 (q，J = 7·2 Hz，2H)，7.15 (dd5 J =3.6, 4·8 Hz，1H)， 7.46 (dd，J = 1.2, 3·6 Hz，1H)，7.80 (d，J = 4·8 Hz，1H)，8·17 (d5 J = 2.4 Hz5 1H), 8.61 (d? J = 2.8 Hz? 1H) 12.40 (s? 1H); EIMS: 447 (M). 製備6-氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]·萘啶-3-羧酸乙酯（80)，6·氟基-4-[4-(呋喃-2- -238- 200524928 14467pif.doc 羰基）-哌嗪-1_基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]萘啶-3-羧酸乙酯 (81)與6-氯基-4-[4-(噻吩-2-羰基）_哌嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二 氫-[1/8]-萘啶_3_羧酸乙酯（82)之一連串反應如下：
°yQ
82R = CI，X = S 烷基化6-取代蔡啶部分之N-1位置以製備化合物 標示爲83至91之化合物係利用6-氟基-2_氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯 (80)或6-氟基·4-[4-(呋喃-2-羰基）·哌瞭小基]-2·氧基·1，2· 二氫-[1，8]_萘啶-3_羧酸乙酯（81)或6-氯基-4-[4_(噻吩-2-锻基）-峨曉_1_基]-2-氧基-1，2-二氯-[1，8]-蔡陡-3-竣酸乙酯 (82)與對應烷基鹵化物，以通用程序Β製備。 合成1-苯甲基-6-氟基-2-氣某-4·丨4·(卩寒吩-2-搬某 嗪-1-基Μ,2-二氤-Π.81-萘啶-3-羧酸乙酯〔83) 此化合物係利用6-氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-擬基）_哌 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]·萘啶-3-羧酸乙酯（80)與苯甲基溴 化物並依照通用程序Β製備。產量152 mg (21 %)，ΜΡ 130 °C; ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H)? 3.15 (m? 4H)，3.90 (m，4H)，4.32 (q，J = 7.2 Hz，2H)，5.55 (s，2H)， 7.14 - 7·川（m，6H)，7.45 (d，J = 3·6 Hz，1H)，7.80 (d，J = -239- 2〇〇52m,〇c 4.8 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H)5 8.74 (d, J = 2.8 Hz，1H); EIMS: 521 (M+l). Anal. (C27H25FN404S) C，H，N. 合成6-氟某-M3-氟某苯甲某V2-M某-4-丨4·(嗦吩-2-羰 某峨曉-1 -某Ί-1、2_一>氣-丨1，8〗-蔡瞭-3-雜酸7，酷（84) 此化合物係利用6-氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（80)與3-氟基苯 甲基溴化物並依照通用程序Β製備。產量113 mg (8 %)， MP 113 °C; ]H-NMR (DMSO-d6): δ 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.15 (m, 4H), 3.90 (m? 4H)5 4.33 (q5 J = 7.2 Hz? 2H)? 5.55 (s, 2H)，7·08 (m，3H)，7·15 (dd，J = 3.6, 5·2 Hz，1H)，7.34 (m， 1H)? 7.46 (dd? J = 1.2? 3.6 Hz, 1H)? 7.80 (dd5 J = 1.2, 5.2 Hz, 1H)，8.17 (dd5 = 2.8, 8·8 Hz，1H)，8.74 (d，J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 539 (M+l). Anal. (C27H24F2N404S) C，H，N. 合成6-氟某-2-氫某-1-(2-氬某-2·苯某-7,某V444-(嚓 吩-2·羰某哌嗪-1-某Μ，2-二氣41，8卜萘啶-3-羧酸乙酯（85) 此化合物係利用6-氟基_2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌 嗪_1_基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（80)與2-溴基苯 乙酮並依照通用程序Β製備。產量293 mg (38 %)，ΜΡ 262 °C; b-NMR (DMS〇_d6): δ 1·29 (t, J = 7.2 Hz，3H)，3·19 (m， 4H)，3.92 (m，4H)，4.32 (q，J = 7·2 Hz, 2H)，5.88 (s，2H)， 7.16 (dd，J = 3.6, 4.8 Hz, 1H)，7.47 (ddX2, 3·6 Hz，1H)， 7.61 (m, 2H)，7.72 (m, 1H)，7.81 (d，4·8 Hz，1H)，8.11 (m， 2H)，8.18 (dd5 J = 2.8, 8.8 Hz，1H)，8.65 (d，J = 2.8 Hz，1H); EIMS: 549 (M+l). Anal. (C28H25FN405S) C，H，N. -240- 200524928 14467pif.doc 佥成_J-苯甲基-6-氟基·4-[4-〔眹嘀-2-锶華V哌嗪-1-某1-2-氧基-1,2-_>氣_丨1，81·蔡陡_3_雜酸乙酷（86) 此化合物係利用6-氟基-4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘陡-3-竣酸乙酯（81)與苯甲基溴 化物並依照通用程序B製備。產量391 mg (47 %)，MP 119 °C; W-NMR (DMSO_d6): δ 1.27 (t，J = 7·2 Hz，3H)，3.15 (m， 4H)，3·92 (m，4H)，4·29 (q，/ = 7·2 Hz，2H)，5.54 (s，2H), 6.65 (dd, J = 1.6, 3.2, Hz, 1H), 7.05 (d? J = 3.6 Hz? 1H)? 7.20 (m，5H)，7.87 (d，/ = 3·2 Hz，1H)，8.18 (dd，J = 2.8, 8.8 Hz， 1H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 505 (M+l). Anal. (C27H25FN405) C，H，N. 合成_6_氟基-1-(3-氟基苯甲某V444彳眹喃-2-羰基）-哌 嗦-1 -基〗-2_氧基-1，2·二氣-丨1,81-蔡瞭-3-错酸乙酉旨（87) 此化合物係利用6-氟基-4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（81)與3-氟基 苯甲基溴化物並依照通用程序B製備。產量421 mg (49 %)， MP 121 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.27 (t，J = 7·2 Hz，3H)， 3·15 (m，4H)，3·92 (m，4H)，4.29 (q，J = 7.2 Hz，2H)，5.53 (s， 2H)，6.65 (dd，J = 1·6, 3.2, Hz，1H)，7.05 (m，4H)，7.33 (m5 1H)5 7.87 (d? J = 1.6 Hz? 1H)? 8.18 (dd? J = 2.8? 8.8 Hz, 1H)5 8·73 (d，J = 2.8 Hz，1H); EIMS: 523 (M+l). Anal· (C27H24F2N4〇5) C，H，N. 合成6-氟某-444-(眹喃-2-羰某V暖嗪-1-某卜2-氣某-1-(2-氬某-2-苯某-乙某VL2-二氤-Π，8卜萘啶-3·羧酸乙酯（88) 此化合物係利用6-氟基-4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌嗪-1-基]-2-氧基-1，二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸乙酯（81)與2-溴基苯 乙酮並依照通用程序Β製備。產量298 mg (34 %)，ΜΡ 134 -241- 200524928 14467pif.doc 0C; W-NMR (DMSO-d6): δ 1.27 (t，J = 7.2 Hz，3H)，3.19 (m， 4H)，3.94 (m，4H)，4.31 (q，J = 7.2 Hz，2H)，5.88 (s，2H)， 6.66 (dd，/ = 1.6, 3.2, Hz，1H)，7.07 (d，= 3.6 Hz，1H)，7.61 (m5 2H)，7.74 (m，1H)，7.88 (d，/ = 1.2 Hz, 1H)，8.11 m，2H)， 8.20 (dd? J = 2.8? 8.8 Hz? 1H)? 8.64 (d5 J = 2.8 Hz5 1H); EIMS: 533 (M+l). Anal. (C28H25FN406) C，H，N. 合成1-苯甲某-6-氯基-2-氬某-444-(嚓吩-2-羰某）·哌 嗪-1-某M，2-二氤4L81-萘啶-3-羧酸乙酯Γ89) 此化合物係利用6 -氣基-4-[4-(嚷吩簾基）-峨曉-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]_萘啶-3-羧酸乙酯（82)與苯甲基 溴化物並依照通用程序B製備。產量319 mg (59 %)，MP 197 °C; WNMR (DMSO-d6): δ 1.28 (t，/ = 7·2 Hz，3H)，3.15 (m，4H)，3·95 (m，4H)，4.32 (q，= 7·2 Hz，2H)，5·52 (s，2H)， 7.15 - 7.28 (m，6H)，7.46 (d，J = 3·6 Hz，1H)，7.80 (d，J = 4·8 Hz，1H)，8.29 (d，J = 2.8 Hz，1H)，8.73 (d，/ = 2.8 Hz， 1H); EIMS: 537 (M+l)· Anal· (C27H25C1N404S) C，H，N. 合成6-氯某·Μ3-氟某苯甲某）-2-氧某-444-(噻吩-2-羝 某哌嗪-1-某卜:L2-二氤-Π.81-萘啶-3-羧酸乙酯（90) 此化合物係利用6-氣基-6-氣基-4-[4-(嚷吩-2-羯基）-峨 嗪-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3·羧酸乙酯（82)與3-氟基苯甲基溴化物並依照通用程序B製備。產量207 mg (37 %)? MP 186 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 1.28 (t5 J = 7.2 Hz，3H)，3.16 (m5 4H)，3·92 (m，4H)，4.32 (q，/ = 7·2 Hz，2H)， 5.24 (s，2H)，7·07 (m，3H)，7.15 (dd，J = 3.6，5.2 Hz, 1H)， 7·30 (m，1H)，7.47 (dd，= 1·2, 3·6 Hz，1H)，7.80 (d，J = 4.8 Hz, 1H)5 8.29 (d5 J = 2.8 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 555 (M+l). Anal. (C27H24C1FN404S) C，H，N. -242- 200524928 14467pif.doc 合成 θ-氛基_2·氣基-1-(2-氣某-2-苯某-乙革）-4·『4-(嚀 吩-2-羰基）-哌嗪二1-基1-1，2-二氣-丨1.81-巷啶-3-羧酪7._^” 此化合物係利用6_氯基_4_[4_(噻吩-2_羰基）-ρ底嗪-;μ 基]·2_氧基-1，2-二氫_[1，8]_萘啶-3·羧酸乙酯（82)與2-溴基 苯乙酮並依照通用程序Β製備。產量333 mg (59 %)，ΜΡ 227 °C;】H-NMR _SO-d6): δ 1.29 (t，/ = 7.2 Hz, 3H)，3.20 (m，4H)，3·92 (m，4H)，4.32 (q，J = 7.2 Hz，2H)，5.87 (s，2H)， 7.17 (dd，= 3.6, 4.8 Hz，1H)，7·48 (dd，= 1·2, 3·6 Hz，1H)， 7.61 (m，2H)，7.73 (m，1H)，7.81 (dd，/ = 1.2, 4·8 Hz，1H)， 8.11 (m, 2H)? 8.32 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 565 (M+l). Anal· (C28H25C1N405S) C5 Η, N. 合成6-氟某-4-羥某-1-(4-甲氣某苯甲某）-2-氬某-12-一 氤-『1,81-葵啶-3-羧酸環Η醯胺（92) 添加環己烷（6.14 mL，53.65 mmol)至6-氟基_4-羥基-1-(4-甲氧基·苯甲基）-2·氧基_1，2_二氫-[1，8]-萘啶-3·羧酸乙 酯（74) (10 g，26.82 mmol)溶於二甲苯之攪拌溶液中並140 °C加熱3 h。冷卻溶液並於真空移除溶劑。殘餘物懸浮於水 中並以二氯甲烷淬取。綜合有機層依序以水與鹽水、飽和 碳酸氫鈉溶液沖洗，再蒸發而產生146 g (65 %) 6-氟基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧 酸環己基醯胺（92)爲白色固體。MP: 176 °C; 1H-NMR (DMSO-d6): δ 1·25-1·41 (m，5H)，1.54 (m，1H)，1.66 (m，2H)， 1.87 (m，2H)，3.68 (s，3H)，3·86 (m，1H), 5.51 (s，2H)，6.81 (d，J = 8.8 Hz，2H)，7.20 (d，J = 8·8 Hz，2H)，8.31 (d5 J = 8.0 Hz，1H)，8·83 (s，1H)，10.24 (s，1H); EIMS m/z 426 (M+l). -243- 20〇524^ifd〇c 合成6-氡某-4-羥某-1-(4-甲氣某苯甲某）-2-氣某-1.2-二 氤41,81-萘啶-3-羧酸環Η醯胺（93) 添加環己烷（6.15 mL，53.70 mmol)至6-氯基-4-羥基· 1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2·二氫-[1，8]·萘啶-3_羧酸乙 酯（75) (10.44 g，26.85 mmol)溶於二甲苯之攪拌溶液中並 140°C加熱3 h。冷卻溶液並於真空移除溶劑。殘餘物懸浮 於水中並以二氯甲烷淬取。綜合有機層依序以水與鹽水、 飽和碳酸氫鈉溶液沖洗，再蒸發而產生10.6 g (89 %) 6·氯 基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶· 3-羧酸環己醯胺（93)爲白色固體。MP: 193 °C; 1H-NMR (CDC13): δ 1.24-1.99 (m，10H)，3·47 (s，3H)，3·93 (m，1H)， 5·59 (s，2Η)，6·78 (m，2Η)，7.37 (m，2Η)，8.39 (d5 J = 2·4 Ηζ， 1H)，8.60 (d，J = 2.4 Hz，1H)，10.15 (s，1H); EIMS m/z 442 (M+l). 製備6-氟基-4-經基-1-(4 -甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2_ 二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸環己醯胺（92)與6-氯基-4-羥基-1-(4 -甲氧基-苯甲基）-2-氧基-1，2-一氫-[1，8]-萘B定-3-殘酸環己 醯胺（93)之一連串反應如下：
74R = F 75 R = Cl 92R = F 93 R = Cl -244- 200524928 14467pif.doc 合成4-氯某-6-氟某-1-(4-甲氣基苯甲某V2-氣某-1，2-二 氤_『1，81_萘啶-3-甲腈(94) 6-氟基-4-羥基_1-(4·甲氧基-苯甲基）-2-氧基·1，2-二氫-[Μ]-萘啶-3-羧酸環己醯胺（92) (7.46 g，17.53 mmol)與三 乙胺（6.1 mL，43.83 mmol)之溶液加熱於純P0C13、90 °C 整夜。冷卻溶液而多餘P〇Cl3於真空下蒸餾。殘餘物懸浮 於飽和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體溶於二氯 甲烷，依次以飽和碳酸氫鈉、水及鹽水清洗。有機相以硫 酸鎂乾燥並蒸發而產生4.2 g (69 %) 4-氯基-6-氟基-1-(4-甲 氧基苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-1，8-萘啶-3-甲腈（94)爲白色 固體。MP 195 °C. W-NMR (DMSO-d6): δ 3·69 (s，3H)， 5·51 (s，2Η)，6.82 (d，J = 8·8 Hz, 2Η)，7·29 (d，J = 8.8 Ηζ， 2Η)，8.48 (dd，J = 2.8, 8.4 Ηζ，1Η)，8.96 (d，J = 2·8 Ηζ，1H); EIMS m/z 344 (Μ+1). 合成4,6-二氯-Μ4-甲氣某苯甲某V2-氣某-1，2-二氯-Π，81-萘啶-3-甲腈(95) 6-氯基-4-羥基-1-(4-甲氧基-苯甲基）-2_氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-羧酸環己醯胺（93) (10.6 g，24 mmol)與三乙 胺（8.33 mL，60 mmol)之溶液加熱於純P0C13、90 °C整 夜。冷卻溶液而多餘P〇Cl3於真空下蒸餾。殘餘物懸浮於 飽和碳酸氫鈉溶液中、短暫震盪並過濾。固體溶於二氯甲 烷，依次以飽和碳酸氫鈉、水及鹽水清洗。有機相以硫酸 鎂乾燥並蒸發而產生8.2 g (95 %) 4,6-二氯-1-(4-甲氧基苯 甲基）-2-氧基-1，2-_^^氮-1，8-察陡-3-甲膳（95)爲白色固體。 MP 208 0C. ^-NMR (DMSO-d6): δ 3.69 (s，3H)，5.50 (s， -245- 200524928 14467pif.doc 2H)，6.82 (m，2H)，7·87 (m，2H)，8·59 (d，J = 2.8 Hz，1H)， 8.94 (d，J = 2.8 Hz，1H); EIMS m/z 362 (M+2). 合成4·氯甚-6-氟某-2-氬某-1,2-二氫-丨l,g上蓋 (96) 溶於純TFA之4-氯基-6-氟基-1-(4-甲氧基苯甲基)_2_ 氧基-1，2·二氫·1，8-萘啶-3-甲腈（94) (4.3 g，12·50 mmol)溶 液回流24 h。冷卻溶液並於減壓蒸除多餘TFA°殘餘物溶 於水、以碳酸氫鈉鹼化並過濾。固體以大量清水沖洗並乾 燥而產生2.6 g (96 %) 4-氯基-6-氟基-2-氧基-1，2-一氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（96)爲白色固體。MP: 272 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 8.26 (dd? J = 2.85 8.2 Hz? 1H)? 8.81 (d? J = 2.8 Hz，1H)，13.03 (S，1H); EIMS: 224 (M+l). 合成4,6-二氡-2-氧某-1，2-二氫-Γ1,8卜萘瞭-3-甲腈（97) 溶於純TFA之4,6-二氯-1-(4-甲氧基苯甲基）-2-氧基-1，2-二氫-M-萘啶-3-甲腈（95) (8.2 g5 22.70 mmol)溶液回 流24 h。冷卻溶液並於減壓蒸除多餘TFA。殘餘物溶於 水、以碳酸氫鈉鹼化並過濾。固體以大量清水沖洗並乾燥 而產生 5.2 g (96 %) 4,6-二氯-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（97)爲黃色固體。1^:247 °0：;111»^乂11(〇1^〇-d6)·· δ 8.45 (dd，J = 2.4 Hz，1H)，8.82 (d5 J = 2.4 Hz，1H)， 13.17 (S, 1H); EIMS: 240 (M). 製備4-氯基-6-氟基-1-(4-甲氧基苯甲基>2-氧基-1，2-二 氫-1，8-萘啶-3-甲腈（94)，4,6-二氯-1-(4-甲氧基苯甲基）-2-氧基_1，2_二氫-1，8-萘啶-3-甲腈（95)，4-氯基_6_氟基_2-氧 基·1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（96)與 4,6_二氯_2·氧基-1，2-二氫-Π，8]-萘啶-3-甲腈（97)之一連串反應如下： -246- 200524928 14467pif.doc
93 R = Cl 95R = CI
取代哌嗪衍生物氨化4-氯基-萘啶甲腈部分 標示爲98至101之化合物係利用4-氯基-6-氟基-2-氧 基-1，2-二氫-[1，8卜萘啶-3-甲腈（96)或4,6-二氯-2-氧基-1，2-二氫-[1,8]-萘啶-3-甲腈（97)與對應哌嗪衍生物反應， 以前述通用程序E製備。 合成6-氟某-2-氬某-444-(嚓吩-2-羰某哌嗪-1-某1-1，2·二氤-Π，8卜萘啶-3-甲腈（98) 此化合物係利用4·氯基-6-氟基_2_氧基·1，2-二氫-[1，8]· 萘啶-3-甲腈（96)與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮且依照通用程 序Ε而得4.85 g (79 %) 6_氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（98)爲黃色固體。 MP 244 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3·72 (m，4H)，3.91 (m， 4Η)，7.16 (dd，J = 3.6, 4·8 Ηζ，1Η)，7·49 (d，= 3·6 Ηζ，1Η)， 7.80 (d，J = 5·2 Ηζ，1Η)，8.05 (dd，J = 2.8, 7·2 Ηζ，1Η)，8.70 (d5 J = 2.8 Ηζ5 1H); EIMS: 384 (Μ+1). 合成6-氟某-2-氬某-444-(呋喃-2-羝某八卩/^-丨-某卜 1,2-二氤-Γ1，8μ萘啶-3-甲腈 Γ99) 此化合物係利用4-氯基-6-氟基-2-氧基-1，2-二氫-[^卜 萘啶-3-甲腈（96)與2-呋喃甲醯哌嗪且依照通用程序Ε而得 -247· 200524928 14467pif.doc 2.87 g (71 %) 6·氣基-2-氧基-4-[4-(呋喃-2-鑛基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]·萘啶-3-甲腈（99)爲白色固體。MP 312。0; 'H-NMR (DMSO-d6): δ 3.69 (m3 4H)3 3.93 (m5 4H), 6.66 (dd? / = 1.6, 3·6 Hz，1H)，7.08 (d，J = 3.6 Hz，1H)，7·89 (d，J = 1·6 Hz，1H)，8·07 (dd，= 2.8, 9·2 Hz，1H)，8.69 (d，J = 2.8 Hz，1H)，12.30 (s5 1H); EIMS: 368 (M+l). 合成6_氛某_2_氣基-4··丨嗦吩-2 -羯某峨曉-1-某1_ 1，2_-：=：氫-Π,8卜萘啶-3-甲腈 Π00) 此化合物係利用4,6_一^氯-2-氧基-1，2-^氮-[1，8]-蔡陡_ 3-甲腈（97)與哌嗪-1-基-噻吩-2-基-甲酮且依照通用程序ε 而得6.8 g (74 %) 6-氯基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基)-哌嗪_ 1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（100)爲黃色固體。MP 158 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.64 (m，4H)，3.90 (m5 4H)， 7.16 (dd，J = 3.6, 4·8 Hz，1H)，7·49 (dd，J = 1·2, 3.6 Hz，1H)， 7.81 (dd? J = 1.2? 5.2 Hz? 1H)? 8.21 (d? J = 2.4 Hz? 1H)? 8.66 (d, J = 2.4 Hz? 1H); EIMS: 400 (M+l). 合成6-氛基-2-氧基-4_丨4-(映喃-2-滕基喊曉-1-某l_ 1，2-二氯41.8卜萘啶-3-甲腈Π01) 此化合物係利用4,6 -一^氯-2-氧基-1，2_一^氨-[1，8]-蔡〇定_ 3-甲腈（97)與2-呋喃甲醯哌嗪且依照通用程序E而得2.27 g (71 %) 6-氯基-2-氧基-4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌嗪-1-基]-i，2_ 二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（101)爲黃色固體。MP 303 QC;1H-NMR (DMSO-d6)： δ 3.76 (m? 4H), 3.93 (m? 4H)5 6.65 (dd5 J - 1.6, 3.6 Hz，1H)，7.09 (d，/= 3.6 Hz，1H)，7.89 (d，1.6 Hz， 1H)，8.21 (d，J = 2.4 Hz，1H)，8.66 (d，J = 2.4 Hz, 1H)，12.36 (s5 1H); EIMS: 384 (M+l). -248- 200524928 14467pif.doc 製備6_氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-锻基）-哌嗪-1-基]-1，2·二氫-[1，8]·萘啶-3_甲腈（98)，6-氟基-2-氧基-4-[4-(呋喃· 2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（99)，6-氯 基-2-氧基·4_[4-(嚷吩-2·鑛基）-峨曉-1-基]—^氣-[1，8]-奈 啶-3-甲腈（1〇〇)與6-氯基-2-氧基-4-[4-(呋喃-2-羰基)-哌嗪-1-基]·1，2·二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（101)之一連串反應如 下： ογ0
96R = F 97R = CI
99 r = f, X = 0 100R = CI，X = S 101 R = CI,X = 0 烷基化6-取代萘啶甲膳部分之N-l位置以製備化合物 標示爲102至113之化合物係利用6-氟基_2_氧基_4_ [4·(噻吩·2_羰基）-哌嗪_1_基]·ι，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（98) 或6-氟基-2-氧基-4_[4-(呋喃-2-羰基）-哌嗪-1_基]-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（99)或6-氯基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰 基）哌嗪-1-基]_1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（100)或6-氯 基-2·氧基-4-[4_(呋喃-2-羯基）-哌嗪-1-基]-1,2-二氫-[1，8]-萘 啶-3-甲腈（101)與對應烷基鹵化物，以前述通用程序b製備 而得。 •249- 200524928 14467pif.doc 合成1-本甲基-6-窺某-2-氣某-4-丨4-(嚷吩-2-滕某峨 嗪-1-基1-1,2-二氤-丨1，81-萘啶-3-甲腈Π02) 此化合物係利用6-氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌 嗪-1-基]-1，2_二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（98)與苯甲基溴化物並 依照通用程序Β製備。產量317 mg (43 %)，ΜΡ 173 〇C; ^-NMR (DMSO-d6)： δ 3.73 (m? 4H)? 3.92 (m? 4H)? 5.53 (s? 2H)，7.22 - 7.30 (m，6H)，7.49 (d，J = 3.6 Hz，1H)，7·80 (dd， J = 1.2, 5·2 Hz，1H)，8.16 (dd，J = 2.8, 9·2 Hz，1H)，8.77 (d5 J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 474 (M+l). Anal. (C25H20FN5O2S) C，H，N. 合成 氛某-1 - (3-氣某本甲某)-2_氣某-4-『4-(瞎吩-2-羯 某V哌嗪-1_某M.2-二氤-「1.8卜萘啶-3-甲腈Π03) 此化合物係利用6-氣基-2-氧基-4-[4-(嚷吩-2-鑛基）-峨 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（98)與3-氟基苯甲基溴 化物並依照通用程序B製備。產量428 mg (56 %)，MP 137 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.73 (m，4H)，3.93 (m5 4H)，5.52 (s，2H)，7.06 - 7.10 (m，3H)，7.16 (dd，《7 = 3.6, 4.8 Hz，1H)， 7.33 (m，1H)，7.50 (d，/ 二 3.6 Hz，1H)，7.80 (dd，J = 1.2, 5.2 Hz，1H)，8.17 (dd，J = 2.8, 9·2 Hz，1H)，8.77 (d，J = 2.8 Hz， 1H); EIMS: 492 (M+l). Anal. (C25H19F2N5〇2S) C，H，N. 合成 6_氯某-2-氧某氣基-2 -本某-乙某）-4-『4-(嚷 吩-2·羰某VP/S嗪-1-某卜;L2-二氣-『1,81-萘啶_3_甲腈Π04) 此化合物係利用6-氟基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌 嗪-1-基]_1，2_二氫_[1，8]_萘啶-3-甲腈（98)與2-溴基苯乙酮並 依照通用程序B製備。產量293 mg (38 %)，MP 262 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 3·79 (m，4H)，3.95 (m，4H)，5.87 (s， 2H)，7·16 (dd，J = 3·6, 5·2 Hz，1H)，7.51 (d，/ = 3·6 Hz，1H)， -250- 200524928 14467pif.doc 7.59 (m, 2H), 7.50 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 1.2, 4.8 Hz, 1H), 8.12 (m5 2H), 8.23 (dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1H)? 8.70 (d, J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 502 (M+l). Anal. (C26H2〇FN503S) C，H，N. 合成1·苯甲某-6_氟某·4-「4-(映喃-2-羰某哌嗪-1-某1-2-氣某-1，2 -奈症-3-甲睛（105) 此化合物係利用6-氟基-2_氧基-4-[4-(呋喃-2-羰基）_哌 嗪-1-基]-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（99)與苯甲基溴化物並 依照通用程序B製備。產量136 mg (18 %), MP 216 〇C; !H-NMR (DMSO-d6)： δ 3.72 (m, 4H), 3.95 (m? 4H)? 5.53 (s, 2H), 6.66 (dd? J = 2.0, 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.21 - 7.28 (m, 5H), 7.89 (d5 J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 2.85 9.2 Hz, 1H), 8.77 (d? J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 458 (M+l). Anal. (C25H20FN5O3) C, Η, N. 合成6-氟某-1-(3-氟某苯甲某）-2-氣某-444彳呋喃-2-羰 基哌嗪-1-某Μ，2-二氣·丨1.8卜萘啶-3-甲腈Π06) 此化合物係利用6-氟基-2-氧基-4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌 曉-1-基]-1，2 -^氣-[1，8]-蔡卩定-3-甲膳（99)與3_氣基本甲基漠 化物並依照通用程序Β製備。產量297 mg (38 %)，ΜΡ 211 0C; WNMR (DMS〇-d6): δ 3.72 (m，4H)，3·95 (m5 4H)，5.52 (s，2H)，6.67 (dd5 J = 1.6, 3.6, Hz, 1H)，7.06 - 7.10 (m，4H)， 7.33 (m，1H)，7.89 (d，J = 1·6 Hz，1H)，8.18 (dd，J 二 2.8, 9.2 Hz, 1H)? 8.78 (d5 J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 476 (M+l). Anal. (C25H19F2N503) C，H，N. 合成 β-氣某_4-『4-(卩夫喃_2_锻某峨曉-1-某卜2_氣基_1_ (2-氣某-2_苯某-乙某二氤-丨1,81-萘啶-3·甲腈Π07) 此化合物係利用6-氟基-2-氧基_4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]·萘啶·3_甲腈（99)與2-溴基苯乙酮， -251- 200524928 14467pif.doc * 並依照通用程序B製備。產量242 mg (31 %；)，MP 293 0C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.79 (m，4H)，3.98 (m，4H)，5.87 (s， 2H)，6.67 (dd，/ = 1.6, 3.2 Hz，1H)，7.10 (d，J = 3.6 Hz，1H) 7.59 (m，2H)，7.73 (m，1H)，7·90 (d，/ = 1.6 Hz，1H)，8.12 (m， 2H), 8.21 (dd, J = 2.8? 9.2 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 2.8 Hz, 1H); EIMS: 486 (M+l). Anal. (C26H20FN5O4) C, Η, N. 合成1-苯甲基-6-氯某-2-氣某-444-(嚓盼-2-锻某V哌 曝-1-某 1-1,2-蔡瞭-3-甲睛 Q08) 此化合物係利用6-氯基-2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌 嗪_1_基]_1，2-二氫_[1，8]_萘啶-3-甲腈（100)與苯甲基溴化物並 依照通用程序B製備。產量184 mg (37 %)，MP 221 °C; 'H-NMR (DMSO-d6)： 3.75 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 5.51 (s, 2H)，7.15 - 7.30 (m，6H)，7.50 (d，/ = 3·6 Hz，1H)，7.81(d，J =5.2 Hz? 1H)? 8.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H)? 8.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H); EIMS: 490 (M+l). Anal. (C25H2〇C1N502S) C，H，N. 合成6-氢某-M3-氟某苯甲某）-2-氣某-4-丨4-(嚓盼-2-羰 某）-_嗪_1-某1-1.2-二氣-『1，81-萘啶-3-甲腈（109) 此化合物係利用6-氣基-2-氧基-4-[4-(嚷吩-2-鑛基）-峨 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]_萘啶-3-甲腈（100)與3-氟基苯甲基 溴化物並依照通用程序B製備。產量214 mg (42 %)，MP 204 0C; iH-NMR (DMS〇-d6): δ 3.76 (m，4H)，3.92 (m，4H)， 5·51 (s，2H)，7.06 (m，3H)，7.16 (dd，J = 3.6, 4·8 Hz，1H)， 7·33 (m，1H)，7.50 (dd，J = 1.2, 3·6 Hz，1H)，7.80 (dd，= 1.2, 5.2 Hz，1H)，8·33 (d，J = 2·4 Hz，1H)，8.75 (d，J = 2.4 Hz， 1H); EIMS: 508 (M+l). Anal· (C25H19C1FN502S) C，H，N. -252- 200524928 14467pif.doc 合成6-氯基-2-氣基-1-(2-氯某-2-苯革-7,革）-4-丨4-(曝 吩-2-羰某哌嗪-1-某M,2-二氤-Π·81-萘晾-3-田膳ΠΙΟ) 此化合物係利用6-氣基_2_氧基- 4-[4-(嚷吩-2-凝基）-峨 嗪-1-基]_1，2_ 一氫_[1，8]_萘陡-3-甲腈（100)與2_溴基苯乙酮 並依照通用程序B製備。產量117 mg (23 %)，MP 316 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3·81 (m，4H)，3.94 (m，4H)，5·86 (s， 2Η)，7.17 (dd，/= 3.6, 5·2 Ηζ，1Η)，7.51 (dd，1·2, 3.6 Ηζ， 1H)，7.61 (m，2H)，7.73 (m，1H)，7.81 (dd5 J = 1.2, 5·2 Hz， 1H)5 8.12 (m, 2H), 8.36 (dd? J = 2.4 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 2.4 Hz5 1H); EIMS: 518 (M+l). Anal· (C26H20ClN5O3S) C，H，N. 合成1-苯甲某-6-氡某-444-(呋喃-2-羰某V哌嗪-1-某1-2-氣某-1,2-二氣41.81-蔡啶-3-甲腈Π11) 此化合物係利用6-氣基_2_氧基-4_[4_(咲喃-2-鑛基）-峨 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（101)與苯甲基溴化物並 依照通用程序B製備。產量223 mg (31 %)，MP 196 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3.75 (m，4H)，3·94 (m，4H)，5.51 (s， 2H)，6·66 (dd，J = 1.6, 3·6 Hz，1H)，7·09 (d，/ = 3·2 Hz，1H)， 7.22 - 7.28 (m，5H), 7.89 (d，J = 1·6 Hz，1H)，8.32 (d，/ = 2.4 Hz，1H)，8.76 (d，= 2.4 Hz，1H); EIMS: 474 (M+l)· Anal. (C25H2GC1N503) C，H，N· 合成6-氛某-1-Π-Μ某苯甲某V2-氣某-444-(呋喃-2-羰 某）-哌嗪-1-某1-12-二氤-丨1,81-萘啶-3-甲腈（112) 此化合物係利用6-氯基-2-氧基-4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌 嗪-1-基]-1,2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（101)與3-氟基苯甲基 溴化物並依照通用程序B製備。產量113 mg (15 %)，MP 134 °C; W-NMR (DMSO-d6): δ 3·75 (m，4H)，3.95 (m，4H)， 5·51 (s，2H)，6.66 (dd，J = 1.6, 3·2, Hz，1H)，7.06 - 7.10 (m， -253- 200524928 14467pif.doc 4H)，7.33 (m，1H)，7.89 (d，·/ = 2.0 Hz，1H)，8.33 (dd，/ = 2·4 Hz, 1H), 8.75 (d, J = 2.4 Hz, 1H); EIMS: 492 (M+l). Anal· (C25H19C1FN503) C，H，N. 合成6-氛某-4·丨4“拈嘀-2-羰某）·哌嗪-1-某1-2-氣某-1· 〔2-氣某-2-苯某-乙某）-12-二氤-Π,81-萘啶-3-甲腈Π 13) 此化合物係利用6-氯基-2-氧基_4-[4-(呋喃-2-羰基）-哌 嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（101)與2-溴基苯乙酮 並依照通用程序Β製備。產量233 mg (31 %)，ΜΡ 328 °C; ^-NMR (DMSO-d6): δ 3.81 (m，4H)，3.97 (m，4H)，5.86 (s， 2H), 6.66 (dd, J = 1.6, 3.2 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 3.2 Hz, 1H) 7.59 (m，2H)，7.73 (m，1H)，7.90 (d，J = 1·6 Hz，1H)，8.14 (m， 2H), 8.37 (d, J = 2.0 Hz? 1H), 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H); EIMS: 502 (M+l). Anal. (C26H20C1N5〇4) C，H，N· 合成1-茉田甚-4-餺甚-3-(甲某碏醯丨1.8卜萘啶-2Π/η- m (ii4) 緩慢添加醋酸甲磺醯乙酯（1.3 mL，9.83 mmol)至溶於雙 甲基乙醯胺（20 mL)之NaH(60 %溶於礦物油，433 mg，10.81 mmol)懸浮液，於室溫氬氣下攬拌0.5 h。1-苯甲基-1//-吡啶 並[2,3d][l，3]噁嗦-2,4-二酮(2) (2.5 g，9.83 mmol)加至溶液 中，110 加熱4 h (TLC control)。冷卻溶液並倒入冰水 中。溶液pH値以冷10% HC1調整至4。過濾所產生固體以 水清洗並真空乾燥而產生950 mg (30 %) 1-苯甲基-4-羥基-3-(甲基磺醯）-[1，8]-萘啶-2(1//)-酮（114)爲白色固體。MP: 155 °C. W-NMR (DMSO-d6): δ 3·51 (s，3H)，5·57 (s，2H)， 7.23 (m5 1Η)，7.27 (m，4Η)，7.43 (m，1Η)，8.48 (dd，J = 2·0, 8·0 Hz，1H)，8.79 (dd，J = 2.0, 8.0 Hz，1H); EIMS m/z 331 (M+l). -254- 200524928 14467pif.doc 合成1-苯甲某-4-氛某-3-(甲某磺醯V1.8-萘啶-2Π/η-酮 Π15) 添加三乙胺（1.2 mL，8.6 mmol)至溶於純P0C13之1-苯 甲基-4-羥基·3_(甲基磺醯）-[1，8]-萘啶-2(1//)-酮（114) (0.94 g， 2.9 mmol)懸浮液，於90 °C加熱3 h。冷卻溶液而多餘 P〇Cl3於真空下蒸餾。殘餘物溶於水以固體碳酸氫鈉中和， 再以二氯甲烷淬取。有機層依序以飽和碳酸氫鈉溶液、水 與鹽水沖洗，再蒸發而產生1-苯甲基-4-氯基-3-(甲基磺 醯MM]-萘啶-2(1//)-酮（115)爲黃色固體。產量0.92 g (92 %)，mp 191 °C. ^-NMR (DMSO-d6): δ 3.50 (s? 3H)? 5.65 (s，2H)，7.28 (m，5H)，7.55 (m，1H)，8.70 (dd，J = 1.6, 8.4 Hz， 1H)，8.84 (dd5 / = 1.6, 4.4 Hz，1H); EIMS m/z 349 (M+l). 製備1-苯甲基-4-羥基·3_(甲基磺醯）_[1，8]_萘啶_2(l//)_ 酮（114)與1-苯甲基-4-氯基_3-(甲基磺醯）-[1，8]-萘啶-2(1//)-酮（115)之一連串反應如下：
合成1-苯甲某-3-甲磺醯-444-(噻吩-2-羰基V曖嗪-1-基ΜΗ41·81-蓥啶-2-酮 Π16) 於室溫添加DABCO (0.57 g，5.0 mmol)至溶於Ν-甲基 吡咯烷酮（pyirolidone)之1-苯甲基-4-氯基-3-(甲基磺醯）-[1，8]-萘啶-2(1Η)-酮（115) (0.88 g，2.5 mmol)與哌嗪-1_基-噻 -255- 200524928 14467pif.doc 吩-2-基·甲酮（0.60 g，3·08 mmol)溶液中。溶液加熱於u〇 T、15 min。溶液冷卻並倒入冰10 %氯化銨水溶液。固體 過濾、以水沖洗並乾燥而產生0.95 g (74 %) 1-苯甲基-3-甲 磺醯_4-[4_(噻吩-2-羰基）-哌嗪_1_基]萘啶_2_酮 (116)爲頁色固體。MP: 223 °C; H_NMR (DMSO-de): δ 3,37 (s，3Η)，3·59 (m，4Η)，3·93 (b，4Η)，5·59 (s，2Η)，7.2 (m，6Η)， 7.38 (m, 1H), 7.47 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5·2 Hz，1H)，8·46 (dd，/ = 1.6, 8.0 Hz, 1H)，8.70 (dd，/ = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS m/z 509 (M+l). 製備1-苯甲基-3_甲磺醯-4-[4_(噻吩_2-羰基）-哌嗪-1-基]-1//-[1，8]-萘啶_2-酮（116)之一連串反應如下：
115 116 合成肶.啶氩某甲酸-特-丁酯Π17) 室溫以添加漏斗慢慢添加4-氨基吡啶(25 g，265 mmol) 至溶於THF之雙碳酸二特丁酯（63·75 g，292 mmol)攪拌溶液 中。溶液室溫再攪拌1 h。於低壓移除溶劑與殘餘物於醚中 再結晶而得43.5 g (84 %)吡啶-4-基-氨基甲酸-特-丁酯 (117)爲白色固體。MP: 260 QC; 1H-NMR (DMSO-d6): δ 1.48 (s，9Η)，7·40 (dd，j = 1 2, 4 8 Hz, 1Η)，8.33 (dd，J = 1.2, 4·8 Hz，1H)，9.93 (s，ijj); EIMS m/z 195 (M+l)· 氣羝某氣某-屁Θ 丁酸（118) -256- 200524928 14467pif.doc 於-40 QC 下添加 n-Buli (1·6 M soln，155 mL，249 mmol) 至溶於THF之TMEDA (37.36 mL，249 mmol)攪拌溶液中。 溶液升至室溫10 min再攪拌10 min。溶液冷卻至-78 °C。 慢慢添加溶於THF之吡啶-4-基-氨基甲酸-特-丁酯（117) (22 g，113.26 mmol)溶液。溶液於3 h內升至室溫。室溫下 璣拌15 min，溶液再冷卻至-78 °C且添加剛搗碎之乾冰。 溶液升至室溫，攪拌川min並倒入冰10 % NH4C1溶液 中。溶液以IN NaOH溶液鹼化並以二氯甲烷清洗。以冰10
% HC1溶液將水相之pH調至4。過濾形成固體、以水清洗 逝真空乾燥室溫而得16.3 g (30 %) 4-特-丁氧羰基氨基-尼 古丁酸（118)爲白色固體。MP.^GO^C^H-NMRPMSO-d6): δ 1.49 (s, 9H), 8.23 (d, J = 6.0 Hz, 1H)5 8.55 (d, J = 6.0 Hz3 1H)，8.96 (s，1H); EIMS m/z 238 (M+l)· 製備吡啶-4-基-氨基甲酸-特-丁酯（117)，4-特-丁氧羰 _氨基-尼古丁酸（118)之一連串反應如下：
(Boc)2〇，THF, RT
HN
117
1. BuLi, TMEDA, -78 °C 2· C〇2, -78 〇C - RT
118
合成1//-叶[^定並[4,3-31丨1，31噁嗉-2,4-二酮（119) 慢慢添加氯甲酸三氯甲酯（9 mL，75 mmo1)至溶於二噁 烷之4·特-丁氧羰基氨基-尼古丁酸（II8) (I6·2 g，68 mmol) 溶液並氮氣下回流4 h。冷卻溶液且真空移除溶劑。殘餘物 以醚再結晶而產生1〇·92 g (98 %) 1斤-吡啶並[4,3d][l，3]噁 -257- 200524928 14467pif.doc
嗪-2,4-二酮（119)爲白色固體。MP: 243 °C; b-NMR (DMSO-d6): )3 δ 7.32 (d? J = 6.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 6.0 Hz, 1H)，9.11 (s，1H); EIMS m/z 165 (M+l). 合成4-氛某-2·氣基-1.2-二氤41、61-萘啶-3-羧酸^11· (120) 緩慢添加丙二酸二乙酯（13.77 mL，91 mmol)至溶於雙 甲基乙醯胺之NaH (60 %溶於礦物油，3.63 mg，91 mmol)懸 浮液且室溫鈍氣下攪拌0.5 h。1//-吡啶並[4,3-β[1，3]噁嗪_ 2,4-二酮（119)(15 g，91 mmol)加至溶液中，於 110 °C 加熱 整夜。冷卻溶液並倒入冰水中。以飽和NaHC03溶液鹼化 且以二氯甲烷淬取。以冰10 % HC1溶液將水相之pH調至 3並以n-BuOH淬取。蒸發丁醇所得殘餘物溶於P0C13並於 90 °C加熱3 h。冷卻溶液而多餘P0C13於真空下蒸餾。殘 餘物懸浮於水中、以固體NaHC03中和且以醋酸乙酯淬 取。有機層依序以飽和NaHC03溶液、水與鹽水清洗，以 Na2S04乾燥並蒸乾而得殘餘物。粗產物以急驟層析法純化 而得0.8 g (3 %) 4-氯基·2·氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3_羧酸 乙酯（120)爲白色固體。MP: 219 0C; iH-NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t，/= 7·2 Hz, 3Η)，4.37 (q，7·2 Ηζ，2Η)，7·30 (d，J = 5·6 Ηζ，1Η)，8·63 (d，J = 5·6 Hz, 1Η)，9·05 (s，1Η)，12.80 (s5 1H); EIMS: 253 (M+l). 製備 1//-吡啶並[4,3-d][l，3]噁嗪-2,4-二酮（119)，4·氯 基-2-氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯（120)之一連串反 應如下： -258- 200524928 14467pif.doc
合成 2-氣某-4-『4-(嚷吩-2瞻滕某）_峨曉-1-某1-1,2-—‘氣-Π、61-萘啶-3-羧酸乙酯Π21) 室溫添力口 DABCO (0.7 g，6.3 mmol)至溶於 DMA 之 4-氯基-2·氧基-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯（120)(0.8 g， 3·16 mmc^)與哌嗪-1-基-噻吩-2_基-甲酮（0.93 g，4.74 mmol) 溶液中。溶液加熱於110 °C下2 h。溶液冷卻並倒入至冰 10 %氯化銨水溶液。固體過濾、以水沖洗並乾燥而產生 1.2 g (92 %) 2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）_哌嗪-1-基]-1，2-二 氫-[1，6]-萘啶_3_羧酸乙酯（121)爲白色固體。MP: 231 °C; ^-NMR (DMSO-d6)： δ 1.28 (t? J = 7.2 Hz5 3H)? 3.18 (m5 4H), 3.89 (m5 4H), 4.27 (q, J = 7.2 Hz? 2H)? 7.14 (dd? J = 3.65 4.8 Hz, 1H)，7.18 (d，J = 6 0 Hz，1H)，7.47 (d，J = 3.6 Hz, 1H)， 7.80 (d? J = 4.8 Hz5 1H)9 8.51 (d5 J = 5.6 Hz, 1H)? 8.91 (s5 1H); EIMS m/z 413 (M+l). 製備2-氧基_4-[4-(噻吩-2-羰基）哌嗪-1-基]-1，2-二氫- [1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯（121)之一連串反應如下：
120 121 -259- 200524928 14467pif.doc 烷基化6-取代丨1,61萘啶部分N-1位置製備化合物 標示爲122至124化合物係利用2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯（121)與對 應烷基鹵化物，以前述通用程序B製備而得。 合成M4-氟某-茏甲某V2-氬某-444-(噻吩-2-羰某哌 隆_-1·基卜1,2-二氤-Π·61-萘啶-3-羚酸乙酯Π22)
此化合物係利用2-氧基-4_[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪_1_ 基]_1，2_二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯（121)與4-氟基苯甲基溴 化物並依照通用程序Β製備。產量210 mg (55 %)，ΜΡ 132 °C; ^-NMR (DMSO-de)： δ 1.30 (t? J = 7.2 Hz? 3H), 3.21 (m? 4H)，3.91 (m，4H)，4.31 (q，J = 7·2 Hz，2H)，5.41 (s，2H)， 7.13 — 7.29 (m，5H)，7.41 (d，J = 6.0 Hz，1H)，7.47 (dd，J = 1.2, 3.6 Hz, 1H)5 7.80 (dd? J = 4.8, 1.2 Hz? 1H), 8.57 (d, J =6.0 Hz，1H)，9.09 (s，1H); EIMS: 521 (M+l)· Anal. (C27H25FN4O4S) C，H，N· 合成1-Π·氩某茏甲基）-2-氣某-444-(噻吩-2-羝某V哌 嗪-1-某二氤-Π.61-萘啶-3-羧酸乙酯Π23) 此化合物係利用2-氧基-4_[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1，2-二氫-[1，6]-萘啶-3-羧酸乙酯（121)與3-氟基苯甲基溴 化物並依照通用程序Β製備。產量113 mg (22 %)，ΜΡ 135 〇C; W-NMR (DMS0-d6): δ 1.28 (t，J = 7·2 Hz，3H)，3.22 (m， 4H)，3.92 (m，4H)，4.32 (q，J = 7.2 Hz, 2H)，5.44 (s，2H)， 6.98 (d5 J = 7.6 Hz5 1H)? 7.10 (m? 2H)5 7.16 (dd? J = 3.6, 4.8 Hz，1H)，7.34 (m，2H)，7.47 (dd，J = 1.2, 3.6 Hz，1H)，7.80 (dd，J = 1.2, 4.8 Hz，1H)，8.56 (d，J = 6·0 Hz，1H)，9·09 (s， 1H); EIMS: 521 (M+l). Anal· (C27H25FN4rhS) C，H，N. -260- 200524928 14467pif.doc 合成_ 2_氧基-1_ί2-氬某-2-茉某某V4-丨4-(嚓吩-2_羰 基）-哌遽1-基Ll1,2_二氤-Π.61-萘啶_3-羧酴7」酯Π24) 此化合物係利用2-氧基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1,2-二氫-[1，6]-萘啶_3_羧酸乙酯（121)與2-溴基苯乙酮並 依照通用程序B製備。產量127 mg (24 %)，MP 157 °C; W-NMR (DMSO_d6): δ 1·27 (t，= 6·8 Hz，3H)，3·24 (m，4H)， 3.93 (m5 4H)? 4.26 (q, J = 7.2 Hz? 2H), 5.85 (s? 2H), 7.15 (dd5 J = 3.6, 5·2 Hz，1H)，7.47 (m，2H)，7.62 (m，2H)，7.74 (m， 1H)，7.80 (d，/ = 5·2 Hz，1H)，8.13 (d，/ = 5·2 Hz，1H)，8.32 (d? J = 7.2 Hz, 2H)? 8.56 (d, J = 6.0 Hz? 1H)? 9.12 (s, 1H); EIMS: 531 (M+l). Anal· (C28H26N405S) C，H，N. 合成1 -本甲某-4-輝某-3-硝某-1,8-菩症-2( 1//)-嗣（125) 緩慢添加硝基醋酸乙酯（8.7 mL，78 mmol)至溶於雙甲 基乙醯胺之NaH(60 %溶於礦物油3 3.46 mg，87 mmol)懸浮 液中並於室溫氬氣下攪拌〇·5 h。1-苯甲基-1//-吡啶並[2,3-刃[1，3]噁嗪·2,4-二酮(2) (2·5 g，9.83 mmol)加至溶液中，於 110 GC機熱12 h (TLC control)。溶液冷卻並以墊狀celite 過濾。過濾液以水稀釋而以冷10 % HC1調整pH至2。過 濾所產生固體以水清洗並真空乾燥而產生白色固體。產量 9.7g，42 %，mp ca 182 0C (not sharp)· ^-NMR (DMSO-d6)： δ 5.53 (s，2H)，7·25 (m，6H)，8.46 (dd，J = 2.0，7.6 Hz，1H)， 8.63 (dd，J = 2.0, 4.8 Hz，1H); EIMS m/z 298 (M+l)· 合两1·苯田甚-4-氯某-3_硝某-1，8-萘啶-2Π/Γ)-酮Π26) 添加三乙胺（12.2 mL，88 mmol)至溶於純POCl3之1-苯 甲基-4·羥基-3-硝基-M-萘啶-2(1//)-酮（125) (8.7 g，29 mmol) 懸浮液並於90 〇C加熱3 h。冷卻溶液而多餘POCh於真空 -261- 200524928 14467pif.doc
下蒸餾。殘餘物溶於水以固體碳酸氫鈉中和，再以二氯甲 烷淬取。有機層依序以飽和碳酸氫鈉溶液、水與鹽水沖 洗，再蒸發而產生黃色固體。產量9.2g，98 %，Mp ca 215°C (not sharp). W-NMR (DMSO-d6): δ 5.66 (s，2H)，7.28 (m， 5H)，7.61 (m，1H)，8.57 (dd，J = 1.6, 8·4 Hz，1H)，8.89 (dd， =1.6, 4.8 Hz，1H); EIMS m/z 316 (M+l). 製備1-苯甲基-4_羥基-3-硝基-1，8-萘啶-2(1//)-酮（125) 與1·本甲基_4_氣基-3-硝基-1，8 -奈陡-2( 1//)-酿（126)之連 串反應如下：
125 126 合成1_苯甲某-3-硝某-4-丨4彳嚷盼-2-羰某V哌嗪·1·基卜 1//-Π.8卜萘啶·2-酮 Π27) 室溫添加DABC0 (6.26 g，55 mmol)至溶於Ν-甲基卩比略 烷酮之1-苯甲基_4_氯基-3-硝基-1，8-萘啶-2(1//)-酮（126) (8.81 g，28 mmol)與哌嗪-1·基-噻吩_2·基-甲酮（6.57 g，33
mmol)溶液中。溶液加熱於11〇 °C下2 h。溶液冷卻並倒入 至冰10 %氯化銨水溶液。固體過濾、以水沖洗並乾燥而 產生黃色固體。產量 llg (83 %)，mp 255。(：· 'H-NMR (DMSO-d6): δ 3.26 (m，4H)，3.90 (m，4H)，5·61 (s，2H)，7.15 (m, 1H), 7.25 (m5 5H), 7.47 (m? 2H)? 7.80 (d? J = 5.2 Hz, 1H), 8 43 (d，J = 7.6 Hz，1H)，8.76 (d，J = 4.4 Hz，1H); EIMS m/z 476 (M+l). -262- 200524928 14467pif.doc 合成3-氬某-1-苯甲某-4-丨4-(嚓吩-2_羰某）·哌嗪-1-基1二 1Η-『1·81-萘啶-2-酮 Π28) 1-苯甲基-3-硝基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1//_ [1，8]-萘啶-2_酮（127) (475 mg，1 mmol)與 Pd/C (10 %，50 mg) 溶於乙醇之溶液於室溫氫氣下攪拌整夜。溶液以墊狀celite 過濾並濃縮而得黃色固體，產量75 %，mp 210°C。 4- NMR (DMSO-d6): δ 3·05 (b，2H)，3·35 (b，2H)，3.70 (b，2H)， 4.00 (b，2H)，5.54 (s，2H)，5.68 (s，2H)，7·2 (m，7H)，7.47 (dd， J = 1.2, 3.6 Hz，1H)，7.77 (dd，J = 1.2, 5·2 Hz，1H)，8.24 (dd， J = 2.0, 8.0 Hz? 1H), 8.31 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz? 1H); EIMS m/z 446 (M+l). 製備1-苯甲基-3-硝基-4-[4-(噻吩-2-羰基）-哌嗪-1-基]-1//-[1，8]-蔡陡-2-醒（127)與3-氨基-1-苯甲基-4-[4-(嚷吩-2-鑛 基）-哌嗪-1-基]-1Η-[1，8]-萘啶-2-酮（128)之一連串反應如 下··
合成1-苯甲基·4-『4-(眹喃-2-羰某V哌嗪-1-某卜2-氬某-1,2-二氤-丨1、8卜萘啶-3-田膳（Ί29、 此化合物係利用2-氯代呋喃與1-苯甲基-2-氧基-4-哌 嗪-1-基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（9)且依照通用程序C製 -263- 200524928 14467pif.doc 備而得。反應產生卜苯甲基_4-[4_(呋喃-2-鑛基）-哌嘹-1-基]-2-氧基-1，2-二氫-[1，8]-萘啶-3-甲腈（129)爲白色固體。 MP: 206 °C; W-NMR (DMSO-d6): 3·60 (m，4H)，3·76 (m，4H)， 5.51 (s，2Η)，6.65 (dd，J = 3.5, 4·8 Ηζ，1Η), 7·1〇 (dd，J = 3.5, 4.8 Hz，1H)，7.20 - 7·35 (m，5H)，7.42 (dd，/ = 4.8, 8·0 Hz， 1H)? 7.92 (d? J = 5.2 Hz，1H)，8.39 (dd，= 1.6, 8.0 Hz， 1H)，8·73 (dd，J = 1.6，8.0 Hz，1H); EIMS: 440 (M+l)·
Anal. C25H21N503 (C，H，N). 範例2 用以評估潛在MIF抑制化合物活性之各試驗描述於 下。 巨噬細胞遷移試驗 巨喊細胞遷移利用洋采滴分析和毛細管方法量測，如 同於 Harrington 和 Stastny 等，J. ⑽〇/. 110(3):752-759, 1973之描述。將含有巨噬細胞之樣品加到血球容積管（75 毫米長與1.2毫米內直徑）中。該管以熱密封，並在1〇〇χ G 下離心3分is，於Sykes-Moore室內於細胞-流質界面剪 離，並埋於一滴矽酮油脂內。該培養室包含一控制蛋白質 (BSA)或一樣品。在37°C培養24和48小時後測量遷移區 域，經由描圖巨噬細胞遷徙扇形像以及使用面積測量儀測 量遷移區域大小而決定。 或者，將96孔盤之每孔中央先置入覆上丨微升的 0.8%(w/V)Sea Plaque洋菜水狀液液體。該盤然後在光箱中 溫和地暖化直到洋菜滴變乾。包含巨噬細胞懸浮液，其含 有高達約25%(v/v)於培養液中的巨噬細胞(有或沒有mif'或 其他控制）且包含0.2%洋菜(w/v)並已加熱窆37艺，將2微 -264- 200524928 14467pif.doc 升之懸浮液加到事先處理的盤孔中，冷卻到4°C下5min。 每個孔然後塡滿培養液，並培養在5% C02-95%空氣、37 °〇下48hr。在24和48hr後測量從洋菜滴來算所得之遷 移，經由測量小滴邊緣到遷移圓周之距離。 遷移試驗 重組鼠科與人類原始類型和鼠科突變種MIF之單核細 胞遷移抑止活性的分析，係使用的人類周圍血單核細胞或 T-細胞耗損(depleted)單核細胞，以修改之Boyden室形式。 Cakein AM標定之單核細胞以2.5〜5xl06/mL濃度懸浮在 在RPMI 1640培養液中，並包含L-麩酸胺(無石碳酸紅)和 0.1mg/mL人類血漿蛋白質或牛血漿蛋白質。將一部份(200 //L)的細胞懸浮，加到一 U形底之96孔盤中，再加入事先 預溫到37°C在RPMI 1640中之MIF，而MIF在細胞懸浮中 之最終濃度爲1，10，1〇〇和l〇〇〇ng/mL。將該盤置入一溫 度_控制讀盤儀之中，混合30秒培養在37t下10-20min。 在培養期間，加入28//L濃度10或25ng/mL預溫的人類單 核細胞趨化性蛋白質1 (MCP-1; Pepro科技公司，NJ)，或 RPMI 1640 與 0.1mg/mL HAS 加入到 ChemoTX 盤孔底部 "0111*〇探針公司，]^〇;3毫米孔直徑，5//1^過濾器孔隙尺 寸）。小心地將過濾盤組合至基盤。從培養器移出處理過的 細胞懸浮，加入30//L到過濾盤之各孔中。組合盤在37°C 下於潮濕含5% C02之室中培養90min。培養之後，細胞懸 浮是從過濾器表面抽出而過濾器與基盤分離，以50//L的 IX HBSS·清洗過濾器片段三次。在清洗之間，用橡皮刮 (NeuroProbe)移除剩餘的HBSS%空氣乾燥過濾器，然後直 -265- 200524928 14467pif.doc 接以螢光盤讀儀閱讀，刺激波長在485nm而發射波長在 535nm。趨化性（趨藥性）或任意遷移指數是定義爲：一特定 組孔盤之平均過濾器結合螢光除以孔中過濾器平均螢光， 但不包含MCP-1也不包含MIF。螢光標定細胞之滴定顯 示，此試驗組偵測營光水平線和細胞數目（未顯示）有一線性 關係。 互變異構酶試驗 互變異構化反應可參見Rosengren等人，Mo/. Med. 2(1):143-149, 1996。評估係利用 D-多巴色素（dopachrome)馨 轉變成5,6-雙氫基氧基吲哚-2-羧酸。製備lml樣品匣，將 包含0.42mM基質和1.4// g的MIF溶解在含O.lmM EDTA 和10mM鈉磷酸鹽緩衝液PH値6.0之一溶液中，而監看 iminochrome在475nm吸收度之減少率。L-多巴色素用做一 控制組。此外，反應產品可利用HPLC監測，HPLC利用包 括20mM KH2P〇4緩衝液(PH値4.0)和15%甲醇之動相與 1.2ml/min之流速。螢光儀偵測是在295/345nm。 或者，互變異構化反應利用苯丙酮酸鹽或(P-氫氧）苯丙 φ 酮酸鹽來評估，參見 Johnson 等，J&16024-16033， 1999。苯丙酮酸之酮化在288 nm(s= 17300 M」cnT1)監測， 而(p-氫氧）苯丙酮酸之酮化在300 ηηι(ε= 21600 M'1 cnT1)監 測。試驗混和包含50 mM Na2HP04緩衝液（1 mL，pH 6.5)與 一部份足夠稀釋麗？溶液（0.5-1.0/^的2.3 11^/11^溶液， 最終濃度爲93-186 nM)，以產生起始率。該試驗先加入少 量（1-3.3 // L)的溶於乙醇之苯丙酮酸鹽或（p-氫氧）苯丙酮酸 鹽。苯丙酮酸鹽或(P-氫氧）苯丙酮酸鹽之結晶形式是只以對 -266- 200524928 14467pif.doc 映體 enol 異構物存在（Larsen 等，jcia CT^m. 5 2&92-96，1974)。基質濃度可從10至150 Μ，而乙醇濃度 小於0.5% ν/ν時並未明顯抑止MIF活性。 免疫沈澱與西方點墨分析法 細胞培養實驗是設計來辯識候選化合物活性、MIF表 現、運輸和輸出。免疫沈澱之細胞和培養液條件，可參見 以前的描述(Florkiewicz 等，GrowiA 4:265-275，1991;
Florkiewicz 等，/⑽· ΜΓ· /ad· 5^/· 6別：109-126)，除了 400 β 1的溶解緩衝液（1% NP-40, 0.5%脫氧膽酸，20mM Tris PH # 値 7.5，5mM EDTA，2mM EGTA> O.OlmM 苯基甲基磺醯氟 化物，lOng/ml蛋白酶抑制劑aprotinin，lOng/ml亮抑酶肽 leupeptin，10ng/ml peptstatin)是在離心15分鐘以澄清培養
液收集後才加入。細胞或培養液收集各部分與抗MIF之單 株或多株抗體一起培養，加入GammaBindTM-Sepharose® (Pharmacia，瑞典)再培養30分鐘。離心沈澱免疫錯合物， 溶解緩衝液清洗三次，再清洗四次配合冰冷免疫沈澱緩衝 液(0.15M氯化鈉，0,01M磷酸鈉PH値7.2，1%脫氧膽酸， 1%ΝΡ-40，0.1%鈉硫酸十二酯）。免疫錯合物會直接解離在 SDS凝膠樣品緩衝液中一 125mM Tds，PH値6.8, 4%SDS， 10%甘油，0.004%溴石碳酸藍，2mM EGTA，而經由12% SDS-PAGE分開。凝膠處理標示螢光、乾燥並在-70°C下暴 於X光軟片。當新黴素磷酸根轉移酵素做免疫沈澱時，使 用一兔子抗_NPT抗體（5端-3端，Boulder，CO)。 西方點墨分析中，蛋白質從12%SDS-PAGE凝膠轉到 一硝化纖維薄膜（孔隙尺寸0.45/zm)，在寒冷緩衝液包含 -267- 200524928 14467pif.doc 25mM 3-[雙甲基（氫氧甲基）甲基氨基]-2-氫氧丙烷磺酸而 PH値9.5，20%甲醇下90分鐘在0.4安培。西方點墨分析 細胞培養液，培養液離心（在800g、10分鐘），以薄膜過濾 (10kDa 爲界，Centricon_10 Amicon)來濃縮上清液 10 倍。 在還原條件下樣品再溶於16%SDS Tris-glycin凝膠 (Novex)，在20V移到硝化纖維薄膜(Novex)上3小時。將 薄膜和兔子多株抗鼠抗體（l:l〇〇〇)(Torrey Pines生化實驗 室，CA)培養，然後和辣根過氧化酶-結合物（l:l〇〇〇)(Pierce 公司，IL)培養。MIF可經由氯萘酹（chloronaphthol)/H202顯肇 像看見。重組MIF(2ng從R&D系統購買）跑電泳並轉做標 準組。薄膜浸於 10mM Tris，PH 値 7.5，150mM NaCl，5mM NaN3，0.35%聚氧乙稀-山梨酉享酉干單月桂酸（polyoxyethylene-sorbitan monolaurate)和5%脫脂乾奶粉(康乃馨公司，CA)在 室溫下lhr。薄膜與一單株抗體（從R&D系統購買，目錄 號碼MAB289)或多株抗體(R&D系統cat#AF_289-PB山羊 多株血漿）一起培養。培養之後，薄膜在室溫以10次的緩 衝液清洗，含150mM NaCl，500mM鈉磷酸鹽PH値7.4， ^ 5mM NaN3，0.35%poly〇xyethylene-sorbitan monolaurate。當 用單株ί几體時’薄膜培養在包含1 // g/ml兔子抗鼠 IgG(H+L，affimpm*e3 Jackson免疫硏究實驗室）之緩衝液在 室溫下30分鐘。對多株抗體之偵測，培養使用兔子抗山羊 抗體（Sigma目錄號碼G5518)。薄膜以上述1L的緩衝液清 洗，並在l〇〇ml包含15// Ci125I-蛋白質A(ICN生物化學公 司，CA)的緩衝液中培養ihr，再以1L的緩衝液清洗。其 放射訊號可經由自動放射偵測測量。 -268- 200524928 14467pif.doc 細胞外區域化試驗 爲了更進一步評價在活體內候選化合物調整MIF輸出 之能力，使用老鼠巨噬細胞RAW 264.7細胞(鼠類巨噬細胞 株，美式培養庫，VA)。RAW 264.7巨噬細胞（3xl06細胞/ 每孔）覆在12-孔組織培養盤（Costar公司），培養在 RPMI/1%去活胎牛血漿(FBS)中（Hydone實驗室）。培養在在 潮濕大氣和5%C02、37°C下中三小時，之後分離非附著細 胞以RPMI/1%FBS清洗兩次。細胞和LPS(0111:B4)或 TSST_1培養24小時，其中TSST-1大槪純度95%並再懸浮· 在無致熱質水中，濃度從1 pg/ml到1000 ng/ml(做劑量反 應實驗）。而對於時間點實驗，在以1 ng/ml之TSST-1或 LPS激化後之0.5、1、2、4、8和24小時間隔點，將各平 行培養之條件化培養液分離出來。而爲硏究抑止效果，在 含有0.01//M到10//M候選化合物或緩衝液（做控制組） 下，RAW 264.7細胞（3xl06細胞/每孔）和1 ng/ml的 LPS(0111:B4)或1 ng/ml的TSST-1培養24小時。在細胞條 件化培養液中的MIF以過濾器濃縮，而剩下在樣品中之 φ MIF經由西方點墨法分析，而MIF帶狀密度經由 Stratagene Eagle Eye™測量。 經由加入1 ng/ml之TSST-1或LPS培養24小時， RAW細胞可被誘導表現MIF。如上所述之方法測量MIF在 條件化培養液的量。當與緩衝液單獨培養細胞相較，候選 化合物減低MIF在條件化培養液中可免疫偵測之水平，而 其降低程度係與濃度相關。 細胞培養、轉感染與代謝標不 -269- 200524928 14467pif.doc 從美式培養庫獲得細胞（ATCC No. CRL1650)培養在 48-孔盤中整夜，所用DMEM中補充10%胎牛血漿，2mM L-截酸fee，丙嗣酸納，ι〇〇ηΜ非必須氨基酸和50//g/ml gentamycin。標靶細胞然後以2//g/ml的CsCl-純化質體 DNA 在感染緩衝液（140 mM NaCl，3 mM KC1，1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 〇·9 mM Na2HP04, 25 mM Tris，pH 7·4)轉感 染。每孔加入300 // 1的DNA於轉感染緩衝液中。細胞培 養30分鐘在37°C，抽取緩衝液。加入溫培養液補充100// m的chloroquine培養1.5hr。分離培養液而細胞以培養液洗 兩次。然後培養細胞40-48hr。用pMAMneo (糖皮質激素-誘導哺乳類表現載體而包含一抗新黴素基因，Clontech， CA)共同轉感染所要的質體，其包含篩選標記一新黴素磷酸 根轉移酵素。當2//g的質體和10/zg的pMAMneo共同轉 感染，經免疫螢光顯微鏡觀察，大於70%的轉感染細胞均 表現MIF和neo。 爲免疫沈澱分析，以在1ml的無蛋氨酸和锍基丙氨酸 之DMEM中100/zCi的35S-蛋氨酸與35S-锍基丙氨酸 (Trans 35S-label，ICN生醫公司，CA)來代謝脈衝標示標靶 細胞15分鐘。標示之後，細胞單層以補充過量（l〇mM)無標 示蛋氨酸和锍基丙氨酸之DMEM清洗1-2分鐘。細胞然後 培養在2ml的培養液一定時間’細胞上清液做免疫沈源以 偵測無領導序列蛋白質之存在。追加培養液有補充指定濃 度調節劑。 或者，爲了 ELISA分析，標靶細胞以250 //卜PH値 1.4的0.1M碳酸鈉溶液清洗一次、1到2分鐘，並馬上抽 -270- 200524928 14467pif.doc 取。亦可使用一高鹽溶液。細胞以包含0.5%FBS加25// g/ml肝素之培養液清洗，然後細胞培養在相同培養液一定 時間。追加培養液有補充指定濃度調節劑。對於被轉譯包 含一領導序列蛋白質如hCG-α或任一其他非肝素結合蛋白 質之載體轉感染之細胞，或可省略碳酸鹽洗和包含肝素培 養液。 MIF抑制劑之高涌量篩潠試驗 MIF抑制劑高通量篩選試驗是在96-孔進行，使用 THP-1細胞生產MIF，程序如下。如上所述，MIF分析是 φ 以ELISA進行。以5χ106細胞/ml濃度將ΤΗΡ-1細胞再懸 浮至包含20/z g/ml細菌LPS之RPMI培養液中，細胞培養 18-20小時。收集細胞上清液和和抑制劑培養。96-孔 ELISA盤（Costar編號3590)上覆以濃度4/z g/ml之MIF單 株抗體(R&D系統目錄號碼MAB289)在37°C下二小時。未 稀釋培養上清液加到ELISA盤，培養在室溫二小時。清洗 然後加入一附有生物素之MIF多株抗體（R&D系統#AF-289-PB)，接著加入鏈親和素（Streptavidin)-HRP和發色基 _ 質。MIF的量經由MIF標準曲線外插計算而得。 HPLC分析血漿中候潠抑制劑 在評估任一小分子在活體中的影響之前，最好能在體 液諸如血液中能夠定量地探知該化合物。先確立一分析方 法能夠重複測量試驗化合物，諸如MIF抑制劑，然後測量 它在生物體液的濃度。 RP-HPLC是在惠普公司HP-1100系統、以Symmetry Shield RP-8管柱(4.6x75毫米內徑，Milford)進行。動相是 -271- 200524928 14467pif.doc 包含0.1%三氟醋酸的35%乙腈/水之等相溶液。在235nm 測量吸收度。測量血漿中試驗化合物之量，先將血漿中蛋 白質以50%乙腈(4°C整夜）分離，接著離心在14000rpm下 30分鐘。RP_HPLC分析上清液而以標準校正曲線計算化合 物濃度。依據此程序，反相HPLC用於偵測候選化合物於 線性範圍1.5-800ng，利用失效樣品。當上述的分析性技術 用於偵測施用候選化合物（〇.4mg/20公克老鼠）動物之血 清，可定量量出候選化合物的流通循環濃度。 若上述方法可以定量候選化合物，則其可能評估化合 物不同施用路線的功效與辯識其生化活性。要測試時間相 關血漿生化活性，候選化合物是經由腹腔內注射（i.p.)和口 灌注至動物身上。
在活體抑ih MIF 下面活體實驗目的是爲了證實最初候選化合物在活體 分析抑止MIF之結果。LPS-誘導毒性是與MIF生產過剩以 及TNF-α和IL-1 /3相關連。既然動物可經由中和或禁止這 些發炎媒介物而保護免於內毒素休克。選擇本模式是因爲 其提供可重複和快速致命模式的敗血病和敗血性休克。 每個實驗之前製備新鮮（含）脂多醣（LPS)。LPS(大腸桿 菌 0111:B4 株，Sigma)是經由添加 〇.5%TEA(lml USP 水 + 5ml三乙氨)至含5mg內毒素的小瓶內重新製備。重新製 備後，溶液培養在37°C30分鐘。其次，溶液震盪在56-60 °C熱水浴30秒三次。震盪之後，混合連續渦旋混和3分 鐘。LPS溶液準備好可供使用。 IL-1 Θ和TNF-α與血漿中MIF夕倬測 -272- 200524928 14467pif.doc 十隻8-10星期大（20土2公克)雌BALB/c老鼠（Charles River實驗室，Kingston，NY)以五隻爲一籠，可自由進食飲 水使其適應環境直至實驗前一週。實驗當天，老鼠稱重並 任意分配爲有相等平均身體重量的不同組。先將200 /zL 的候選化合物或只有緩衝液以i.P.注射至老鼠上，之後馬上 i.p.注射LPS(大腸桿菌0111:B4株，10mg或5mg/每公斤身 體重量）與/3 -D-半乳糖胺（50mg/每公斤身體重量）。每劑量 之LPS(0.2ml針對20公克老鼠)是腹腔內施用，並摻雜含 有最終濃度爲50mg/ml之万_D-半乳糖胺。從心臟的穿刺動 物而蒐集血液樣品。標準蒐集程序是在LPS施用4小時後 蒐集。依照製造商手冊，使用血漿分離儀（Microtainer(R) Becton Dickinson)分離血漿。老鼠血漿中il-1沒和TNF_ α，是依照製造公司之指示，經由”ELISA IL-ly5或老鼠 TNF-α免疫分析”測試組測量(R&D系統，MN)。在老鼠血 榮之MIF濃度是以二明治式ELISA而定量（ChemiKine MIF 組，Chemicon，CA)。樣品分析是一式二份而結果平均。 鼠類LPS模式 十隻8-10星期大（20±2公克）雌BALB/c老鼠如前所述 飼養。實驗當天，老鼠稱重並任意分配爲有相等平均身體 重量5隻動物的兩組。200//L的候選化合物或只有緩衝液 以i.P.注射至老鼠上（平均20mg/公斤化合物），之後i.p.注 射LPS(大腸桿菌055B5株，40，1〇, 5, 2或0.5mg/公斤重量) 與半乳糖胺（50mg/公斤重量）。頭18小時每二小時觀 察老鼠一次，每天兩次觀察七天。使用Kaplan-Meier評估 方法來評價動物倖存率。 -273- 200524928 14467pif.doc 活體試驗中，使用標準統計學來對照各組數據，用 Fisher試驗來比對分類數據，而Mantel-Cox試驗用於連續 變數。若欲決定IL-1水平線是否與血漿中MIF有相互關 係，則可用Fisher試驗。分析採用Stat Viewfi.O軟體 (Abacus Concepts，Berkeley)。 全部報告P値則考慮少於 0.05正負値爲具統計重要性。 起始對照實驗決定鼠科動物模式系統（雌Balb/c老鼠) 內生的MIF之基準水平線，更決定LPS(10mg/公斤）處理後 內生的MIF所增加比例和範圍。LPS(Sigma 0111:B1)和 50mg/公斤/3-D-半乳糖胺摻合施用至雌Balb/c老鼠。在 LPS/半乳糖胺施用後〇, 2, 5和6小時，以HPLC測量血漿 中MIF水平。在此代表性實驗之起始點，即決定內生的 MIF基準水平。當施用候選化合物(於50%水溶液)和i〇mg/ 公斤LPS至老鼠上，可偵測到其循環MIF水平有顯著減 少。在更進一步實驗，血漿中MIF和IL_l/3是經由EUSA 測量。MIF和IL-1/3兩者之間有一種直接且重要之相互關 連。此種相互關連也顯示觀察在MIF和TNF-α之間。在 一類似實驗中，施用20mg/公斤之候選化合物後觀察到在血 漿中IL-1 和TNF-α之減少。 LPS誘導毒性休克實驗顯示出MIF和TNF-a之中心角 色。LPS刺激巨噬細胞之類的細胞生產MIF，而導致促使 巨噬細胞之類的細胞之TNF-a分泌，建議MIF可能在LPS 致病因素中扮演一重要角色。爲試驗是否候選化合物能防 止LPS所致休克，採用在以召七—半乳糖胺激化之BALB/c 老鼠中致命LPS所致休克模式。在注射一致死劑量的 -274- 200524928 14467pif.doc LPSP，5和10mg/公斤）時以候選化合物治療，則將倖存率 增加。其效果視所用LPS濃度而調整，表示當使用一高濃 度的LPS，候選化合物的效果是可飽和且特定的。候選化 合物以濃度相關之方式可保護老鼠免於LPS所致休克模 式。 MIF抑制劑於膠原導致關節炎樟式 二十隻DBA/lLacJ老鼠，HM2星期大，在第0天從 尾部以牛膠原質類型II(CII 100//g)乳化在Freunds完全輔 劑(FCA ; GibcoBRL)賦予免疫性(激化）。在第7天，第二劑 量的膠原質是經由相同路線注入（乳化在Freunds不完全輔 劑中）。第14天，皮下注射老鼠l〇〇mg的LPS(055:B5)。在 第70天老鼠腹腔內注射40/z g的LPS (0111:B4)。依照腳 爪厚度分組，經由卡鉗測量、隨機化以分成一平均起始 組。緩衝液中之候選化合物是在第71、72、73和74天施 用到老鼠（〇.4mg/劑量總共八劑，大約20mg/公斤的身體重 量）。在第74天檢查老鼠腳爪厚度。在此實驗中，衰退老 鼠（嚴重關節炎惡化）在第70天i.p注射最終劑LPS，刺激 細胞素產生與急性發炎。跟只有溶劑之控制組相比較，其 顯示候選化合物治療的老鼠緩慢發生腳爪浮腫。在後期時 間點’相較於控制組’在治療組之動物並沒有產生嚴重的 膠原質誘致關節炎。 在其他實驗，十五隻DBA/1J老鼠，10-12星期大，在 第0天從尾部以牛膠原質類型II(CII 100//g)乳化在 Freunds完全輔劑賦予免疫性(激化）。在第21天，第二劑量 的膠原質是經由相问路線注入（乳化在Freunds不完全輔劑 -275- 200524928 14467pif.doc 中）。第28天，皮下注射老鼠100/z g的LPS(055:B5)。第 71天老鼠注射i.p.40// g的LPS(0111:B4)。分組於治療程序 如上所述。在第74天收集血液樣品和測量細胞素。當與未 處理CIA樣品相較，候選化合物減低血漿MIF水平。此 外，並偵測到其更明顯的抑止血漿中之TNF-α。 以潠擇化合物抑制MIF -互變異構酶試驗組 下列之MIF抑制劑係利用較佳實施例之方法所製備。 下列化學結構式中，“COOEt”是指具化學式-C(=0)0CH2CH3之族群而“Et”是指具化學式-CH2CH3之族· 群。互變異構酶試驗組之結果指出任一 MIF抑制化合物在 濃度爲1〇〇 μΜ或更低時均顯示出顯著抑制MIF之活性。
-276- 200524928 14467pif.doc
-277- 200524928 14467pif.doc
ο
Ν Ν
F 1013
CK3 1015 〇，
,Ν、 、Ν
1016
1019 Ο CH,
-278- 200524928 14467pif.doc
-279- 200524928 14467pif.doc
MIF抑制劑（物） 下列之MIF抑制劑係利用較佳實施例之方法所製備， 並預期具有相當好抑制MIF活性之能力。下列化學結構式 中，“COOEt”是指具化學式-C(=〇)〇CH2CH3之族群而“Et” 是指具化學式-CH2CH3之族群。 -280- 200524928 14467pif.doc
〇 CH3
2002
2003
2004
2005
c
KC3
2006 2007 2008 -281- 200524928 14467pif.doc
2009
2010
2011
2012
2015
COOEt
-282- 200524928 14467pif.doc
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-284- 200524928 14467pif.doc
-285- 200524928 14467pif.doc 在此文中引用的所有參考其全部的內容在這裡入倂爲 參考。關於合倂參考的出版物和專利或者專利之應用或與 說明書之揭露矛盾，但此說明書是打算取代和/或者優先於 互相矛盾的材料。 在坦裡使用之術語”包括（comprising)，，是同義於，，包 S 、含有”或者”特徵爲（characterized by)，，，並且開放式 和不排除附加、未描述之元件或者方法步驟。 所有說明書或專利範圍所使用描述成分、反應條件等 的量之數字均可理解是以“大約，，之範圍而言。因此，除非 有指出相反狀況，說明書或專利範圍之數字參數等均爲槪 略範圍而是本發明所描述之目的、性質而略有變動。非以 當量原則來限制專利範圍，但至少任一數字參數應以有效 數字與一般消去法來詮釋之。 上面所描述揭露本發明的數個方法和材料等。本發明 得以修正方法和材料以及變更製造方法和設備。這樣的修 正對於欲實踐發明之熟知此技藝者是顯而易見。因而本發 明不欲局限於這裡所揭露的特定實施例，但是其包含本發 明的真實範圍和精神之內所覆蓋之所有修正和選擇。 雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以 限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神 和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護 範圍當視後附之申請專利範圍所界定者爲準。

Claims (1)

  1. 200524928 14467pif.doc 十、申請專利範圍： 1. 一種抑制巨噬細胞遷徙抑制因子之化合物，該化合物 具有以下之一種化學結構式：
    -287- 200524928 1446/pif. doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其 中·· R選自於下列族群包括氫，烷基，取代烷基，烯基，φ 取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳 基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜 環，取代雜環，-(CH山C(=0)Ar 與-(CH2)wNR4R5; I選自於下列族群包括-〇队40，402，-c(=〇)r3，-c(=o)oh，-nhc(=o)r3，-c(=〇)〇r3，-c(=〇)nr4r5, -nr3c(=o)r3, -so2nr4r5, -nr3so2r3, -nhso2r3，一s(o)wr3, 一(CH山NR4R5 與-(CH2)wC(=0)Ar; -288- 200524928 14467pif.doc R2選自於下列族群包括-ch2r3，-nr4r5，-or3 與-R3 ; R3獨立選自於下列族群包括烷基，取代烷基，烯 基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基， 芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基， 雜環，取代雜環； R4與r5分別獨立選自於下列族群包括氫，烷基， 取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基， 取代醯基烷基，雜環與取代雜環，或r4與r5合倂 而包括雜環或取代雜環； X選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，- NO，一 NO], _ocf3，-cf3，- nhso2r3，-c(=o)r3，-c(=o)or3, 一c(=o)nr4r5, -NR3C(=0)R3, -NR3S02R3, - S(0)mR3，一R3，一〇R3，一SR3，—C(=〇）〇H，一NHC(=0)R3, 與-nr4r5 ; Y選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，- no5 -no2，-ocf3，-cf3，-nhso2r3，-c(=o)r3，- C(=0)0R3, -C(=〇)NR4R5, -NR3C(=0)R3，-NR3S02R3, -s(o)wr3，一r3，一〇r3，一sr3，—C(=〇）〇H，一nhc(=o)r3, 與-NR4R5; Z選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，-N〇，一 N〇2， 一〇cf3， 一 cf3， 一 nhso2r3， 一c(=o)r3，一 c(=o)or3, -c(=o)nr4r5, -NR3C(=0)R3, -NR3S02R3, -S(0)wR3, -R3, -〇R3, -SR3, -C(=0)0H，-nhc(=o)r3 與- NR4R5 » -289- 200524928 14467pif.doc Al*選自於下列族群包括芳基與取代芳基； Μ獨立爲〇, 1，2, 3或4 ;以及 «爲0, 1或2。 2.如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其 R選自於下列族群包括氫，C^Cu烷基，C2-C12 烯基，c3-c12環烷基，c6-c12芳基，c7-c12芳基烷基， c7-c12烷基芳基，c2-c12醯基烷基，c3-c12雜環烷基， C3-C12烷基雜環，與C2_C12雜環，其中R以一或多 個取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括 氫，-F，-Cl，_CN，-NO, -NO】，-C(=0)R3, -C(=0)0R3,- oc(=o)r3, -c(=o)nr3r3, -nr3c(=o)r3, -so2nr3r3， -nr3so2r3，-〇r3，-sr3，-nhso2r3，-s(o)wr3，- C(=0)0H， -NHC(=0)R3， -(CH2)wC(=0)Ar 與- (CH2)mNR3R3 ； -290- 200524928 14467pif.doc 選自於下列族群包括-〇^，-^0，-1^02，-C(=0)R3，-C(=0)0R3，—0C(=0)R3，-C(=0)NR3R3，- nR3C(s〇)r3，—SO2NR3R3，-NR3SO2R3，-0R3，-sr35 -NHS〇2r39 ^S(0)mR3, -C(=0)0H，-NHC(=0)R3， 一(CH2)mC〇〇)Ar 與-(CH2)wNR3R3 ; h選自於下列族群包括-NR4R5，-OR3與-r3; R3獨立選自於下列族群包括CVCu烷基，c2-c12 燦基，C^Ci2環烷基，c6_C12芳基，c7-c12芳基烷基， 院基芳基，c2-c12醯基烷基，c3-c12雜環烷基， C3_CU烷基雜環與C2_C12雜環，其中r3以一或多個 取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括氫，一 ^ C1，-CN，-NO, —N〇2, —CN，-NO, -N02, Ci-Cu 烷 氧基與CrCu硫烷基； R4與Rs分別獨立選自於下列族群包括CVCu '兀基二C2-Cl2稀基，kCn環院基，C6-C12芳基，c7-f12芳基院基，C7_Cl2院基芳基，C2-C12醯基院基，C3-=雜職基，C3:Cl2院__ ^12雜環以一或 〜取代基來取代之_取代基選自於下列族群包括 心，—N。，'叫，-CN，-N◦，-Nq2, Cl_Cl2 Π =Cl2硫院基’或R4與R5合倂而包含- 自多個取代基來取代之而該取代基選 自方々下歹〇矢群包括氫，—F，_C1， CN，〜N0, 一斷、〇c 2， 硫院基； 院氧基與Ci_Ci2 X選自於下列族群旬括齊 -N〇2，-OCF3，^包括HC1，—CN，-N〇, 3，~nhs〇2R3，-C(=〇)r3, •291- 200524928 14467pif.doc c(=〇)〇r3，-oc(=o)r3, -c(=o)nr3r3, -nr3c(=o)r3, - SO2NR3R3，-NR3SO2R3，-OR3，-S(〇)wR3，- SR3，-C(=0)0H， - NHC(=0)R3， - (CH2)wC(=0) Ar 與- (CH2)WNR3R3 ; Y選自於下列族群包括氫，-F，-Cl，-CN，-NO, -N〇2， - OCF3， - CF3， -NHSO2R3， - c(=o)r3， - c(=o)or3, -oc(=o)r3, -c(=o)nr3r3, -nr3c(=o)r3, -S02NR3R3，-NR3S02R3，-or3，- s(o)wr3，-SR3，-C(=0)0H， -NHC(=0)R3， -(CH2)wC(=0)Ar 與- (CH2)WNR3R3 ; z選自於下列族群包括氫，-F，-Cl，-CN，-NO, -N02， - OCF3， -CF3， - NHSO2R3， -c(=o)r3， - C(=0)〇R3, —〇c(=〇)R35 一c(=o)nr3r3, -nr3c(=o)r3, -S02NR3R3，-NR3S02R3，-or3，- s(o)wr3，-SR3，-C(=0)0H， - NHC(=0)R3， -(CH2)wC(=0)Ar 與一 (CH2)wNR3R3 ; Ar獨立選自於下列族群包括C6-C12芳基以一或 #個取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括 氫，-F，-C1，—CN，—NO, -NO〕，-CN，-NO, -N〇2, Ci-Cn 太完基，cvc12烷氧基與硫烷基；以及 w獨立爲0, 1，2, 3或4。 3· 請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -292- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其 R選自於下列族群包括氫，Q-Cu烷基，C2-C12 烯基，c3-c12環烷基，c6-c12芳基，c7-c12芳基烷基， c7-c12烷基芳基，c2-c12醯基烷基，c3-c12雜環烷基， C3-C12烷基雜環與C2-C12雜環，其中R以一或多個 取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括氫，-F，-C1，—CN，-NO，-N〇2，一NHS02R3，—C(=〇)R3，— C(=〇)OR3, -0C(=0)R3, -C(=0)NR3R3, -NR3C(=0)R3,- so2nr3r3，-nr3so2r3，-or3，-sr3，-s(o)wr3, - (CH2)wC(=0)Ar 與-(CH2)WNR3R3 ; l選自於下列族群包括-CN，-NO, -N02，- c(=o)r3， 一 c(=o)or3，一〇c(=〇）r3， -nhso2r3,- C(=0)NR3R3, -NR3C(=〇）R3, 一S〇2NR3R3, 一NR3S02R3,一 0R3， -SR3， -S(0)wR3， -(CH2)wC(-0)Ar 與- (CH2)mNR3R3 ； R2選自於下列族群包括-NR4R5，-OR3與-r3; -293- 200524928 14467pif.d〇c R3獨立選自於下列族群包括Ci-Ci2烷基，C2_Cl2 烯基，c3-c12環烷基，c6_Ci2芳基，c7_Ci2芳基烷基， I2院基芳基，cvc12醯基烷基，C3-Cl2雜環烷基， C^C!2烷基雜環與c^c12雜環，其中R3以一或多個 取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括氫，一 F，-C1，—CN，-NO, -N02, —CN，—N〇, —N〇2, Cl-Cl2 烷 氧基與硫烷基； ^ R4與R5分別獨立選自於下列族群包括CkC12 烷基，c2-c12烯基，c3-c12環烷基，c6_Cl2芳基，c7_ 芳基烷基，CVCu烷基芳基，c：rCi2醯基烷基，c3- C12雜環烷基，Q-Cu烷基雜環與C2-Ci2雜環以一或 多個取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括 F，—C1，-CN，—N0, —N〇2, —CN，—N〇, —N〇2, Ci Ci2 k與基與Cl-Cl2硫烷基或I與R5合倂而包含一 C^CU雜環以一或多個取代基來取代之而該取代基選 自於下列族群包括氫，-F，—C1，γ队-：ΝΚ\ -Wh，-™厂NO, —N〇2, Cl_Cl2 烷基，C&2’ 烷氧基， 硫院基與Cl_C：12魏以-龄㈣代基來取代之而該 取代基選自於下列族群包括氫，與— X選自於下列麵包括氫，戈〜C1，—0CF3 —CF3, 院翻W12脑以1多_代基來取代 之而該取代基選自於下列族群包括氫，-F與—cl; γ選自於下列族群包括氫，〜^eF3 ’_eF3 院基與Cl-Cl2院基以1多_代基來取代 之而妓取代基選自於下列族群包括氫，—？與—ci; -294- 200524928 14467pif.doc Z選自於下列族群包括氫，-F，—Cl，〜〇eF3, 烷基與Cl-Cu烷基以一或多個取代基來取 之而該取代基選自於下列族群包括氫，—F與〜C1 ; Ar選自於下列族群包括芳基以一或多個 取代基來取代之而該取代基選自於下列族群包括氫，〜 F，-Cl，Q-Cu烷基與Cl_Ci2烷基以一或多個取代基 來取代之而該取代基選自於下列族群包括氫，〜F與〜 C1 ;以及 〜 w獨立爲0, 1，2, 3或4。 4·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中I包括—(CH2)wC(=〇)Ar。 5·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中&包括-c(=0)0CH2ch3。 6·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中R!包括—NH-C(=0)CH3。 7.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中&包括-CN。 8·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物’其中I包括-N〇2。 9·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中Ri包括_NH2。 10.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中r2包括 -295- 200524928 14467pif.doc 11·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑
    制因子之化合物，其中R2包括 12·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中R包括-(CH2)wC(=〇)Ar。 13·如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其中X選自於下列族群包括氫，氟與 氯；其中Y選自於下列族群包括氫，氟與氯；以及其中Z 選自於下列族群包括氫，氟與氯。 14.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 15.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    -296- 200524928 14467pif.doc 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 16.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 17.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    Μ Η广 CH3 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 18.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -297- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 19.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 20.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -298- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 21.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 22.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    -299- 200524928 14467pif.doc 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 23.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 24.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 25.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -300- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 26.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 27.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -301- 200524928 14467pif.doc
    0 CH, 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 春 28.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    CH3 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 29.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -302- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 30.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 31.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -303- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 32.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 33.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -304- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 34.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 35.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -305- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 36.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 37.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -306- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 38.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    0 丫0 ch3 或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 39.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -307- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 40.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 41.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -308- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 42.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 43.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -309- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 44.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 45.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -310- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 46.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 47.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式： -311- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 48.如申請專利範圍第2項所述之抑制巨噬細胞遷徙抑 制因子之化合物，其具有一化學結構式：
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽 類。 49. 一種包含如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物與一醫藥上可接受載劑或稀釋劑之 組成。 -312- 200524928 14467pif.doc 50. —種將化合物應用於製備降低MIF活性之藥劑的 方法，該藥劑得用於有需要之病人，而該化合物具有選自 下列族群之一化學結構式：
    X" 、〇 R
    -313- 200524928 14467pif.doc
    或其立體異構物、前期藥或其醫藥可接受之鹽類，其 R選自於下列族群包括氫，烷基，取代烷基，烯基， 取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳 基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜 環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar 與-(CH2)WNR4R5 ; I選自於下列族群包括-〇队40，402，-C(=〇)R3，-C(=0)0H，-NHC(二 0)R3，-C卜0)0R3，-C(二〇)NR4R5, —NR3C(=0)R3, -S02NR4R5, 一NR3S02R3, - nhso2r3? -s(o)wr3， -(CH2)wNR4R5 與- (CH2)wC(=0)Ar ； -314- 200524928 14467pif.doc R2選自於下列族群包括-CH2R3，-NR4R5, -OR3 與-R3 ; R3獨立選自於下列族群包括烷基，取代烷基，烯 基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基， 芳2基纟完基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基， 雜環，取代雜環； R4與R5分別獨立選自於下列族群包括氫，烷基， 取代ί完基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基， 取代醯基烷基，雜環與取代雜環，或R4與R5合倂而 包括雜環或取代雜環； X選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，- NO，-no2，一 〇cf3，- cf3，- nhso2r3，-c(=o)r3，-c(=o)or3, 一c(=o)nr4r5, -NR3C(=0)R3, -NR3S02R3, -s(o)wr3，-R3，-〇R3，-SR3，-C(=0)0H，-nhc(=o)r3 與-nr4r5 ; Y選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，- NO，-no2，- ocf3，-cf3，-nhso2r3，- c(=o)r3，- C(=0)0R3, -C(=〇)NR4R5, -NR3C(=0)R3, -NR3S02R3, -S(0)mR3，-r3，-or3，-sr3，-c(=o)oh5 -nhc(=o)r3 與-nr4r5 ; z選自於下列族群包括氫，鹵素，—F，-Cl，-CN，- NO，- no2，- ocf3，-cf3, -nhso2r3，-c(=o)r3，-C(=0)0R3, -c(=o)nr4r5, -nr3c(=o)r3, -nr3so2r3, -s(o)wr3，-r3，-or3，-sr3，-C(=0)0H，-nhc(=o)r3 與一nr4r5 ; -315- 200524928 14467pif.doc Ar選自於下列族群包括芳基與取代芳基； 所獨立爲0, 1，2, 3或4 ;以及 «爲0, 1或2。 51. —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物炎症 (inflammation)之一藥劑的方法。 52· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物敗血性 休克之一藥劑的方法。 53. —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物關節炎 之一藥劑的方法。 54· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物癌症之 一藥劑的方法。 55· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物急性呼 吸窘迫倂發症之一藥劑的方法。 56· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物發炎性 病症之一藥劑的方法。 57.如申請專利範圍第56項所述之應用於製備治療溫 血動物發炎性病症之藥劑的方法，其中該發炎性疾病是選 自於下列族群包括類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis)、 骨關節炎(osteoarthritis)、發炎性腸躁症與氣喘。 -316- 200524928 14467pif.doc 58. —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物心臟疾 病之一藥劑的方法。 59. 如申請專利範圍第58項所述之應用於製備治療溫 血動物心臟疾病之藥劑的方法，其中該心臟疾病選自於下 列族群包括心臟功能障礙、心肌梗塞、充血性心臟衰竭、 心血管再狹窄(restenosis)與動脈粥樣硬化。 60· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物自體免 疫疾病之一藥劑的方法。 61·如申請專利範圍第60項所述之應用於製備治療溫 血動物自體免疫疾病之樂劑的方法，其中該自體免疫疾病 選自於下列族群包括糖尿病、氣喘與多發性硬化症。 62· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備壓抑一溫血動物免疫反 應之一藥劑的方法。 63· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備減少一溫血動物血管生 成（angiogenesis)之一藥劑的方法。 64· —種將如申請專利範圍第1項所述之抑制巨噬細 胞遷徙抑制因子化合物應用於製備治療一溫血動物中與過 高糖皮質激素水平相關疾病之一藥劑的方法。 65·如申請專利範圍第64項所述之應用於製備治療溫 血動物中與過高糖皮質激素水平相關疾病之藥劑的方法， 其中該疾病爲庫氏症(Cushing’s disease)。 200524928 14467pif.doc 66. —種製備化合物之製程，該製程包括下列步驟： 將化學式（3)之一化合物與P0C13反應： Z OH
    其中R選自於下列族群包括氫，烷基，取代烷基， 烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳 基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷 基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar 與-(CH2)wNR4R5; R!選自於下列族群包括-CN，-NO, -N〇2, -C(=0)R3, -C(=0)0H，-NHC(=0)R3，-C(=0)0R3, -C(=0)NR4R5, -NR3C(=0)R3，-S02NR4R5，-NR3S02R3，-NHS02R3，-S(0)wR3, -(CH2)WNR4R5 與-(CH2)wC(=0)Ar; R3 獨立選 自於下列族群包括烷基，取代烷基，烯基，取代烯基， 環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取 代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜 環；R4與R5分別獨立選自於下列族群包括氫，烷基， 取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳 基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基， 取代醯基烷基，雜環與取代雜環，或R4與Rs合倂而 包括雜環或取代雜環；X選自於下列族群包括氫，鹵 素，一F，—C1，—CN，—N〇，-N〇2，一 〇CF3，一 CF3，— NHSO2R3，-C(=0)R3，-C(=〇)〇R3，-C(=〇)NR4R55 - NR3C( = 0)R3, 一NR3S02R3, -S(0)mR3, -尺3, —OR3，-SR3， -318- 200524928 14467pif.doc -C(=0)0H，-NHC(=0)R3 與-NR4R5; Y 選自於下歹丨J族群 包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，-NO，-N〇2, -OCF3，- cf3， -nhso2r3， -c(=o)r3， -c(=o)or3， - c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-nr3so2r3，-s(o)wr3，-r3, -or3, -sr3, -c(=o)oh，-nhc(=o)r3 與-nr4r5; z 選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，-NO, - no2， -ocf3， -cf3， - nhso2r3， - c(=o)r3，- c(=o)or3, -c(=o)nr4r5, -nr3c(=o)r3, -nr3so2r3， -s(o)wr3，-r3，-or3，-sr3，-c(=o)oh，-nhc(=o)r3 與-NR4R5; Ar選自於下列族群包括芳基與取代芳基； 以及⑺獨立爲0，1，2, 3或4 ;而產生化學式(4)之一 化合物：
    將化學式（4)之該化合物與哌嗪反應，而產生化學 式之一化合物（5):
    Formula (5) 將化學式（5)之該化合物與具化學式R2-C(=0)C1 之一化合物反應，其中R2選自於下列族群包括-CH2R3, -NR4R5, 一0R3與—r3，而產生化學式（6)之一化 -319- 200524928 14467pif.doc
    Formula (6) 其中化學式（6)之該化合物適於用作一 MIF抑制
    67. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中 I 包括-(CH2)wC(=0)Ar。 68. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中 Ri 包括-C(=0)0CH2CH3。 69. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中 Ri 包括-NH-C(=0)CH3。 70. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中I包括-CN。 71. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中I包括-N02。 72. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中I包括-NH2。 73. 如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中r2包括 74.如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程
    其中R2包括 -320- 200524928 14467pif.doc 75·如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中 R 包括-(CH2)/wC(:=〇)Ar。 76·如申請專利範圍第66項所述製備化合物之製程， 其中X選自於下列族群包括氫，氟與氯；其中γ選自於下 列族群包括氫，氟與氯；以及其中Z選自於下列族群包括 氫，氟與氯。 77. —種製備化合物之製程，該製程包括下列步驟： 將化學式（13)之一化合物與環己烷進行反應：
    其中R選自於下列族群包括氫，烷基，取代烷基， 烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳 基，芳基院基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷 基，雜環，取代雜環，-(CH2)wC(=0)Ar 與-(CH^NIURs; R4與R5分別獨立選自於下列族群包括氫，烷基，取 代院基，烦基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基， 取代;芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代 醯基院基，雜環與取代雜環，或r4與r5合倂而包括 雜環或取代雜環；X選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，—NO，—NO〗，—OCF3，-CF3，-NHS02R3, -C(=0)R3? -C(=〇)〇r3? -C(-0)NR4R5, -NR3C(=0)R3, ~ NR3S02R3, —S(0)wR3，一R3, _〇r3, —SR3, 一C(=0)〇H，-NHC(=0)R3與—Nr4r5; Y選自於下歹丨J族群包括氫，鹵 素，-F，-C1，一 CN，-NO, - N02，- OCF3，- CF3，- -321- 200524928 14467pif.doc nhso2r3, -c(=o)r3，-c(=o)or3, -c(=o)nr4r5， - NR3C(=0)R3，-NR3SO2R3，_S(0)wR3，-R3，-0R3，- sr3, -c(=o)oh，-nhc(=o)r3與-nr4r5; z 選自於下列 族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，-NO, -N02, -OCF3, - cf3， - nhso2r3， -c(=o)r3， -C(=0)0R35 - c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-nr3so2r3，-s(o)wr3，-r3, -or3, -sr3, -c(=o)oh，-nhc(=o)r3 與-NR4R5; R3 獨立選自於下列族群包括烷基，取代烷基，烯基，取代 烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基院 基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環， 取代雜環；Ar選自於下列族群包括芳基與取代芳基； 以及Μ獨立爲〇，I 2, 3或4 ’而產生化學式（14)之 化合物： z QH Ο
    、ιτ Formula (14) 將化學式（14)之該化合物與POCI3反應，而產生 化學式（15)之一化合物：
    Formula (15) 將化學式（15)之該化合物與峨曉反應’而產生化 學式（16)之一化合物： -322- 200524928 14467pif.doc
    Formula (16) 將化學式（16)之該化合物與具化學式R2-C(=0)C1 之一化合物反應，其中R2選自於下列族群包括-CH2R3，-NR4R5，-0R3，與-R3，而產生化學式（17)之 一化合物： 〇 丫 r2
    z N
    Formula (17) 其中化學式（Π)之該化合物適於用作一 MIF抑制 劑 78.如申請專利範圍第77項所述製備化合物之製程
    其中R2包括 79.如申請專利範圍第77項所述製備化合物之製程
    其中R2包括 80. 如申請專利範圍第77項所述製備化合物之製程， 其中 R 包括-(CH2)wC(=0)Ar。 81. 如申請專利範圍第77項所述製備化合G之製程， 其中X選自於下列族群包括氫，氟與氯；其中Υ選自於下 -323- 200524928 14467pif.doc 列族群包括氫，氟與氯；以及其中Z選自於下列族群包括 氫，氟與氯。 82. —種製備化合物之製程’該製程包括下列步驟： 將化學式（23)之一化合物與P〇Cl3與三氟醋酸進 行反應： Z OH
    R1 N N 、0 Formula (23) X
    MeO ‘ 其中Ri選自於下列族群包括-CN，-NO，-N〇2，- c(=o)r3，-c(=o)oh，-nhc(=o)r3，-c(=o)or3，-c(=o)nr4r5, -nr3c(=o)r3, -so2nr4r5, —nr3so2r3, - NHS02R3， -S(0)wR35 -(CH2)wNR4R5 與- (CH2)wC(=0)Ar;R3獨立選自於下列族群包括烷基，取 代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基， 取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代 醯基烷基，雜環，取代雜環；R4與R5分別獨立選自於 下列族群包括氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基， 環烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取 代芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環與取代雜 環，或R4與R5合倂而包括雜環或取代雜環；X選自 於下列族群包括氫，鹵素，-F，-C1，-CN，-NO, -N02，-OCF3，-CF3，- NHSO2R3，- c(=o)r3，- c(=o)or3，-c(=o)nr4r5，-nr3c(=o)r3，-NR3S02R3，—S(0)wR3，-R3, -OR3, -SR3, -C(=0)0H，-NHC(=0)R3 與一NR4R5; Y -324- 200524928 14467pif.doc 選自於下列族群包括氫，鹵素，-F，-Cl，-CN，-NO, - no2, -ocf3， - cf3， -nhso2r3， -c(=o)r3， - c(=o)or3, -C(=0)NR4R5, -NR3C(=0)R3, -NR3S02R3, -S(0)wR3, -R3, -OR3, -SR3, -c(=o)oh，-NHC(=0)R3 與- NR4R5; Z選自於下歹[J族群包括氫，鹵素，一F，一Cl，一 CN，-NO, -N02，-OCF3, -CF3, -NHS02R3, -C(=0)R3, - c(=o)or3, -c(=o)nr4r5, -nr3c(=o)r3, -NR3S02R3，-S(0)wR3, -R3, -OR3, -SR3, -C(=0)0H，-nhc(=o)r3 與- NR4R5; Ar獨立選自於下列族群包括芳基與取代芳基； 以及W獨立爲〇, 1，2, 3或4，而產生化學式（24)之一 化合物：
    Formula (24) 將化學式（24)之該化合物與具下列化學式之一化 合物反應：
    其中R2選自於下列族群包括-ch2r3，-NR4R5, -0R3與-R3，而產生化學式（25)之一化合物：
    Formula (25). -325- 200524928 14467pif.doc 匕學式（25)之該化合物與具化學式RX’之一化 合物反應，其中X’包R胃自方令 包括氫，烷基，取代丨完基，稀基，取代稀基，環丨完基， 取代環烷基，芳基，取代芳2基，芳2基丨完基，取代芳基院 基，醯基烷基，取代醯基院基，雜環，取代雜環， -(CH山C(=〇)Ai·與-(CH山NR4R5 ’而產生化學式（26) 之一化合物：
    其中化學式(26)之該化合物適於用作一 MIF抑制 劑。 83.如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中 R!包括-(CH2)wC(=0)Ar。 84·如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中 R!包括-c〇=o)och2ch3。 85. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中 Ri 包括-NH-C(=0)CH3。 86. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中Ri包括-CN。 87·如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中Ri包括-N02。 -326- 200524928 14467pif.doc 88. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中I包括-NH2。 89. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中R2包括。 90. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中R2包括 91. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中 R 包括 _(ί：Η2)π(=0)ΑΓ。 92. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中X選自於下列族群包括氫，氟與氯；其中Υ選自於下 列族群包括氫，氟與氯；以及其中Ζ選自於下列族群包括 氫，氟與氯。 93. 如申請專利範圍第82項所述製備化合物之製程， 其中R包括苯甲基。 94. 一種製備化合物之製程，該製程包括下列步驟： 將化學式（3a)之一化合物與P0C13進行反應：
    Formula (3a) ，而產生化學式(4a)之一化合物： 327- 200524928
    將化學式（4a)之該化合物與哌嗪反應，而產生化 學式（5a)之一化合物：
    將化學式（5a)之該化合物與具化學式R2-C(=0)C1 之一化合物反應，其中R2選自於下列族群包括-CH2R3, -NR4R5, -OR3與-R3，其中R3選自於下歹丨J族群 包括烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基，取代 環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基， 醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環，其中R4 與R5分別獨立選自於下列族群包括氫，烷基，取代烷 基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取 代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯 基烷基，雜環與取代雜環，或R4與R5合倂而包括雜 環或取代雜環，而產生化學式（6a)之一化合物： -328- 200524928
    其中化學式（6a)之該化合物適於用作一 MIF抑制 劑。 95. 如申請專利範圍第94項所述製備化合物之製程， ΓΛ 〇 其中R2包括或。 96. —種製備化合物之製程，該製程包括下列步驟： 將化學式（13a)之一化合物與環己烷進行反應：
    ，而產生化學式（14a)之一化合物：
    -329- 200524928 14467pif.doc 將化學式（14a)之該化合物與P〇Cl3反應，而產生 化學式（15a)之一化合物：
    將化學式（15a)之該化合物與哌嗪反應，而產生化 學式（16a)之一化合物：
    Formula (16a) 將化學式（16a)之該化合物與具化學式R2—C(==C))C：1 之一化合物反應，其中R2選自於下列族群包括_ CH2R3，-NR4R5，~*〇尺3與-R3 ’其中R3選自方令下歹[]方矣君羊 包括烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基， 環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基《完_ 醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環；r4 g 分別獨立選自於下列族群包括氫，烷基，取代院_ 基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取代 芳基院基，取代芳基院基，酿基院基，取代酿g _ 雜環與取代雜環，或R4與R5合倂而包括雜環 雜環，而產生化學式（17a)之一化合物： -330- 200524928 14467pif.doc
    Formula (17a) 其中化學式（17a)之該化合物適於用作一 MIF抑制 劑。 97.如申請專利範圍第96項所述製備化合物之製程， 其中r2包括
    98. —種製備化合物之製程，該製程包括下列步驟： 將化學式（23a)之一化合物與P0C13與三氟醋酸進 行反應：
    Formula (23a) ，而產生化學式（24a)之一化合物：
    Formula (24a) -331- 200524928 將化學式（24a)之該化合物與具下列化學式之一化 合物反應，
    其中R2選自於下列族群包括-CH2R3, -NR4R5, -〇R3與—R3，其中R3選自於下列族群包括烷基，取代烷 基，烯基，取代烯基，環烷基，取代環烷基，芳基，取 代芳基，芳基烷基，取代芳基烷基，醯基烷基，取代醯 φ 基烷基，雜環，取代雜環；R4與R5分別獨立選自於下 列族群包括氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環 烷基，取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代 芳基烷基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環與取代雜 環，或R4與R5合倂而包括雜環或取代雜環，而產生 化學式（25a)之一化合物：
    將化學式（25a)之該化合物與具化學式RX之一化 合物反應，其中X包括鹵素，其中R選自於下列族群 包括氫，烷基，取代烷基，烯基，取代烯基，環烷基， 取代環烷基，芳基，取代芳基，芳基烷基，取代芳基烷 基，醯基烷基，取代醯基烷基，雜環，取代雜環， -332- 200524928 14467pif.doc -(CH2)mC(=0)Ar 與-(CH2)WNR4R5，其中 Ar 選自於下 列族群包括芳基與取代芳基；以及w獨立爲0, 1，2, 3 或4，而產生化學式(26a)之一化合物：
    Formula (26a) 其中化學式(26a)之該化合物適於用作一 MIF抑制 劑。
    99·如申請專利範圍第98項所述製備化合物之製程， 其中R2包括 100.如申請專利範圍第98項所述製備化合物之製程， 其中R2包括
    101.如申請專利範圍第98項所述製備化合物之製程/ 其中 R 包括-(CH2)wC(=0)Ar。 102·如申請專利範圍第％項所述_備化合物之製程， 其中R包括苯甲基。 -333- 200524^9^8100 七、 指定代表圖： (一） 本案指定代表圖爲：無 (二） 本代表圖之元件符號簡單說明：無 八、 本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明 特徵的化學式： 20052493^〇c
    -8-
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UY (1) UY28483A1 (zh)
WO (1) WO2005021546A1 (zh)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UY27304A1 (es) * 2001-05-24 2002-12-31 Avanir Pharmaceuticals Inhibidores del factor inhibidor de la migración de los macrófagos y métodos para su identificación
TW200418829A (en) * 2003-02-14 2004-10-01 Avanir Pharmaceutics Inhibitors of macrophage migration inhibitory factor and methods for identifying the same
CA2600175A1 (en) * 2005-03-24 2006-03-20 Avanir Pharmaceuticals Thienopyridinone derivatives as macrophage migration inhibitory factor inhibitors
GB0605689D0 (en) * 2006-03-21 2006-05-03 Novartis Ag Organic compounds
AU2007334323B2 (en) 2006-12-18 2011-03-10 Amgen Inc. Naphthalenone compounds exhibiting prolyl hydroxylase inhibitory activity, compositions, and uses thereof
AU2007334321B2 (en) 2006-12-18 2012-03-08 Amgen Inc. Azaquinolone based compounds exhibiting prolyl hydroxylase inhibitory activity, compositions, and uses thereof
US7569726B2 (en) 2007-04-18 2009-08-04 Amgen Inc. Indanone derivatives that inhibit prolyl hydroxylase
ES2442847T3 (es) 2007-04-18 2014-02-13 Amgen, Inc Quinolonas y azaquinolonas que inhiben la prolil hidroxilasa
EP2150251B9 (en) 2007-05-04 2013-02-27 Amgen, Inc Thienopyridine and thiazolopyridine derivatives that inhibit prolyl hydroxylase activity
EP2155746A2 (en) 2007-05-04 2010-02-24 Amgen, Inc Diazaquinolones that inhibit prolyl hydroxylase activity
US9643922B2 (en) 2008-08-18 2017-05-09 Yale University MIF modulators
US9540322B2 (en) 2008-08-18 2017-01-10 Yale University MIF modulators
WO2011056566A2 (en) * 2009-10-26 2011-05-12 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for treatment of cancer
US9050334B2 (en) 2010-07-16 2015-06-09 Innov88 Llc MIF inhibitors and their uses
JP5916730B2 (ja) * 2010-09-06 2016-05-11 グアンジョウ インスティテュート オブ バイオメディスン アンド ヘルス，チャイニーズ アカデミー オブ サイエンスィズ アミド化合物
US9133164B2 (en) * 2011-04-13 2015-09-15 Innov88 Llc MIF inhibitors and their uses
CN103360388B (zh) * 2012-04-10 2017-11-14 江苏先声药业有限公司 5‑氨基‑1，4‑二氢‑1，8‑萘啶衍生物及其药物组合物和用途
WO2015095052A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Controlled Chemicals, Inc. Isoindolin-1-ones as macrophage migration inhibitory factor (mif) inhibitors
CR20190338A (es) 2016-12-22 2019-09-09 Amgen Inc Inhibidores de kras g12c y métodos para su uso
JOP20190272A1 (ar) 2017-05-22 2019-11-21 Amgen Inc مثبطات kras g12c وطرق لاستخدامها
ES2928576T3 (es) 2017-09-08 2022-11-21 Amgen Inc Inhibidores de KRAS G12C y métodos de uso de los mismos
CN107556309B (zh) * 2017-09-11 2020-12-01 浙江永宁药业股份有限公司 多取代四氢萘啶类化合物的药物用途及其制备方法
AU2019262589B2 (en) 2018-05-04 2022-07-07 Amgen Inc. KRAS G12C inhibitors and methods of using the same
US11045484B2 (en) 2018-05-04 2021-06-29 Amgen Inc. KRAS G12C inhibitors and methods of using the same
EP3790886A1 (en) 2018-05-10 2021-03-17 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors for the treatment of cancer
MA52765A (fr) 2018-06-01 2021-04-14 Amgen Inc Inhibiteurs de kras g12c et leurs procédés d'utilisation
WO2019241157A1 (en) * 2018-06-11 2019-12-19 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors for treating cancer
MX2020012261A (es) 2018-06-12 2021-03-31 Amgen Inc Inhibidores de kras g12c que comprenden un anillo de piperazina y uso de estos en el tratamiento del cancer.
CA3104647A1 (en) * 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Naphthyridinone compounds useful as t cell activators
WO2020006018A1 (en) * 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Substituted naphthyridinone compounds useful as t cell activators
JP2020090482A (ja) 2018-11-16 2020-06-11 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤化合物の重要な中間体の改良合成法
AU2019384118A1 (en) 2018-11-19 2021-05-27 Amgen Inc. KRAS G12C inhibitors and methods of using the same
JP7377679B2 (ja) 2018-11-19 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド がん治療のためのｋｒａｓｇ１２ｃ阻害剤及び１種以上の薬学的に活性な追加の薬剤を含む併用療法
CN111471059B (zh) * 2019-01-23 2022-12-02 药捷安康(南京)科技股份有限公司 Pde9抑制剂及其用途
EP3939588A4 (en) * 2019-03-08 2023-01-11 Transthera Sciences (Nanjing), Inc. USES OF PHOSPHODIESTERASE INHIBITORS
EP3738593A1 (en) 2019-05-14 2020-11-18 Amgen, Inc Dosing of kras inhibitor for treatment of cancers
SG11202112855WA (en) 2019-05-21 2021-12-30 Amgen Inc Solid state forms
AR119821A1 (es) 2019-08-28 2022-01-12 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de piridopirimidinonilo sustituidos útiles como activadores de células t
AR120823A1 (es) 2019-12-23 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Compuestos bicíclicos sustituidos útiles como activadores de células t
EP4225742A1 (en) 2020-10-05 2023-08-16 Enliven Therapeutics, Inc. 5- and 6-azaindole compounds for inhibition of bcr-abl tyrosine kinases
WO2022093817A1 (en) * 2020-10-26 2022-05-05 Yale University Macrophage migration inhibitory factor inhibitors, and methods of making and using same

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4324893A (en) * 1979-04-18 1982-04-13 American Home Products Corporation 4-Amino-3-carboxy or cyano-1,2-dihydro-2-oxo-1,8-naphthyridine derivatives
US4299814A (en) * 1979-05-25 1981-11-10 Monsanto Company Radioimmunoassay of MIF
US4284768A (en) * 1980-07-02 1981-08-18 American Home Products Corporation 1,2-Dihydro-4-amino-2-oxo-3-quinoline-carboxylic acid derivatives
ZW2485A1 (en) * 1984-02-22 1986-09-24 Wellcome Found Cloning of dna for protozoal antigens
US5733933A (en) * 1984-03-19 1998-03-31 The Picower Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
US5700447A (en) * 1992-05-21 1997-12-23 The Picowder Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
US5801200A (en) * 1984-03-19 1998-09-01 The Picower Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
US5869534A (en) * 1992-05-21 1999-02-09 The Picower Institute For Medical Research Glycosylation of lipids and lipid-containing particles, and diagnostic and therapeutic methods and materials derived therefrom
US5733524A (en) * 1984-03-19 1998-03-31 The Picower Institute For Medical Research Methods and materials for the diagnosis and treatment of conditions such as stroke
AU592753B2 (en) 1984-05-24 1990-01-25 Ciba-Geigy Ag Lymphokine in pure foem, novel monoclonal antibodies hybridoma cell lines, processes and applications
US4708937A (en) * 1984-10-15 1987-11-24 Brigham & Women's Hospital Purified migration inhibitory factor also having colony stimulating factor activity
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
GB8602626D0 (en) * 1986-02-04 1986-03-12 Ciba Geigy Ag Neurite-promoting factor
EP0263072B1 (en) 1986-10-03 1994-03-23 Ciba-Geigy Ag Novel lymphokine related peptides
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
FI82144C (fi) * 1989-03-22 1991-01-10 Wallac Oy Foerfarande foer samtidig bestaemning av flera ligander.
GB8915414D0 (en) 1989-07-05 1989-08-23 Ciba Geigy Novel cytokines
US5328990A (en) * 1991-04-26 1994-07-12 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Isolation of macrophage migration inhibition factor from ocular lens
CA2054602C (en) * 1991-10-31 2003-04-22 Anthony Pawson Method for assaying for a substance that affects an sh2-phosphorylated ligand regulatory system
US5624804A (en) * 1991-12-20 1997-04-29 The Rockefeller University Immunochemical detection of In vivo advanced glycosylation end products
JP4708510B2 (ja) 1993-05-17 2011-06-22 サイトカイン ファーマサイエンシズ，インコーポレーテッド サイトカイン媒介毒性に関係する疾患の治療における遊走阻止因子の抑制
US6774227B1 (en) 1993-05-17 2004-08-10 Cytokine Pharmasciences, Inc. Therapeutic uses of factors which inhibit or neutralize MIF activity
US6030615A (en) * 1993-05-17 2000-02-29 The Picower Institute For Medical Research Combination method for treating diseases caused by cytokine-mediated toxicity
US5650295A (en) * 1995-06-02 1997-07-22 Human Genone Sciences, Inc. Macrophage migration inhibitory factor-3
US6492428B1 (en) 2000-07-26 2002-12-10 The Picower Institute For Medical Research Compounds having MIF antagonist activity
US6420188B1 (en) * 1996-02-16 2002-07-16 The Picower Institute For Medical Research Screening assay for the identification of inhibitors for macrophage migration inhibitory factor
JP2000512737A (ja) 1996-04-18 2000-09-26 アリアッド ファーマスーティカルズ，インク． 試験管内蛍光偏光検定法
US5883224A (en) 1996-04-19 1999-03-16 Cytokine Sciences, Inc. Characterization of transfer factors and methods of use
JPH1171351A (ja) 1997-08-29 1999-03-16 Ss Pharmaceut Co Ltd 置換キノロン誘導体及びこれを含有する医薬
US6413939B1 (en) * 1997-10-31 2002-07-02 The Picower Institute For Medical Research Inducible phosphofructokinase and the Warburg effect
DK1036192T3 (da) 1997-12-05 2003-06-10 Upjohn Co Fluorescensbaserede screeningsanalyser med høj hastighedforproteinkinaser og phosphataser
EP1101106A4 (en) * 1998-07-28 2006-05-03 Bd Biosciences Systems And Rea DEVICE AND METHOD FOR ANALYZING CELLULAR MOTILITY
US6214343B1 (en) * 1999-05-24 2001-04-10 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Prevention and treatment of necrotizing enterocolitis
WO2001028993A2 (en) * 1999-10-19 2001-04-26 Merck & Co. Inc. Tyrosine kinase inhibitors
CA2389229A1 (en) * 1999-10-29 2001-05-10 The Picower Institute For Medical Research Compounds having mif antagonist activity
CA2431904A1 (en) * 2000-12-20 2002-08-01 Merck & Co., Inc. (halo-benzo carbonyl)heterocyclo fused phenyl p38 kinase inhibiting agents
UY27304A1 (es) * 2001-05-24 2002-12-31 Avanir Pharmaceuticals Inhibidores del factor inhibidor de la migración de los macrófagos y métodos para su identificación
JP4117462B2 (ja) * 2001-07-03 2008-07-16 株式会社大塚製薬工場 ナフチリジンおよびキノリン誘導体
US6822097B1 (en) * 2002-02-07 2004-11-23 Amgen, Inc. Compounds and methods of uses
JP2006511445A (ja) * 2002-06-07 2006-04-06 コーティカル・ピーティーワイ・リミテッド マクロファージ遊走阻止因子（ｍｉｆ）のサイトカインまたは生物学的活性を阻害するナフタレン誘導体
TW200418829A (en) * 2003-02-14 2004-10-01 Avanir Pharmaceutics Inhibitors of macrophage migration inhibitory factor and methods for identifying the same

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0413695A (pt) 2006-10-24
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CA2531506A1 (en) 2005-03-10
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CN1839133A (zh) 2006-09-27
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JP2007503388A (ja) 2007-02-22
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PE20051112A1 (es) 2006-02-03

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