CN107074854B - 咪唑并[4，5-c]吡啶衍生的SSAO抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及作为SSAO活性抑制剂的化合物。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在治疗或预防其中抑制SSAO活性有益的医学病症和抑制肿瘤生长中的用途。

Description

咪唑并[4，5-c]吡啶衍生的SSAO抑制剂
技术领域
本发明涉及作为SSAO活性抑制剂的化合物。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在治疗或预防其中抑制SSAO活性有益的医学病症(例如炎性疾病、免疫性疾病)和抑制肿瘤生长中的用途。
背景技术
氨基脲敏感性胺氧化酶(semicarbazide-sensitive amine oxidase，SSAO)活性是由血管黏附蛋白-1(Vascular Adhesion Protein-1，VAP-1)或含铜胺氧化酶3(AmineOxidase，Copper Containing 3，AOC3)(属于含铜胺氧化酶家族的酶(EC.1.4.3.6))表现出的酶活性。因此，SSAO酶的抑制剂也可以调节VAP-1蛋白的生物学功能。这种酶家族的成员对氨基脲的抑制敏感，并在伯胺氧化脱氨为醛、过氧化氢和氨中根据以下反应利用铜离子和蛋白质衍生的6-羟基多巴醌(topa quinone，TPQ)辅因子：
R-CH2-NH2+O2→R-CHO+H2O2+NH3
人SSAO的已知底物包括内源性甲胺和氨基丙酮以及一些异生胺如苄胺[Lyles，Int.J.Biochem.Cell Biol.1996，28，259-274；Klinman，Biochim.Biophys.Acta 2003，1647(1-2)，131-137；Mátyus等，Curr.Med.Chem.2004，11(10)，1285-1298；O′Sullivan等，Neurotoxicology 2004，25(1-2)，303-315]。与其他含铜胺氧化酶类似，DNA序列分析和结构确定表明，组织结合的人SSAO是由两个90-100kDa亚基组成的同源二聚体糖蛋白，其通过单个N末端跨膜结构域锚定于质膜[Morris等，J.Biol.Chem.1997，272，9388-9392；Smith等，J.Exp.Med.1998，188，17-27；Airenne等，Protein Science 2005，14，1964-1974；Jakobsson等，Acta Crystallogr.D Biol.Crystallogr.2005，61(Pt 11)，1550-1562]。
SSAO活性已见于多种组织中，包括血管和非血管平滑肌组织，内皮，以及脂肪组织[Lewinsohn，Braz.J.Med.Biol.Res.1984，17，223-256；Nakos&Gossrau，FoliaHistochem.Cytobiol.1994，32，3-10；Yu等，Biochem.Pharmacol.1994，47，1055-1059；Castillo等，Neurochem.Int.1998，33，415-423；Lyles&Pino，J.Neural.Transm.Suppl.1998，52，239-250；Jaakkola等，Am.J.Pathol.1999，155，1953-1965；Morin等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2001，297，563-572；Salmi&Jalkanen，TrendsImmunol.2001，22，211-216]。此外，SSAO蛋白见于血浆中，这种可溶性形式看来具有与组织结合形式相似的特性[Yu等，Biochem.Pharmacol.1994，47，1055-1059；等，J.Immunol.1998，161，1549-1557]。最近已经显示循环中的人和啮齿动物SSAO来源于组织结合形式[等，Am.J.Pathol.2003，163(5)，1921-1928；Abella等，Diabetologia2004，47(3)，429-438；Stolen等，Circ.Res.2004，95(1)，50-57]，而在另一些哺乳动物中，血浆/血清SSAO也由称为AOC4的单独基因编码[Schwelberger，J.Neural.Transm.2007，114(6)，757-762]。
这种丰富的酶的准确生理作用尚未完全确定，但SSAO及其反应产物看来可在细胞信号传导和调节中具有数种功能。例如，最近的研究结果表明，SSAO在GLUT4介导的葡萄糖摄取[Enrique-Tarancon等，J.Biol.Chem.1998，273，8025-8032；Morin等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2001，297，563-572]和脂肪细胞分化[Fontana等，Biochem.J.2001，356，769-777；Mercier等，Biochem.J.2001，358，335-342]中发挥作用。此外，SSAO已被证明参与炎症过程(其中其作为白细胞黏附蛋白)[Salmi&Jalkanen，TrendsImmunol.2001，22，211-216；Salmi&Jalkanen，in“Adhesion Molecules：Functions andInhibition”K.Ley(Ed.)，2007，pp.237-251]，也可能在结缔组织基质发育和维持中发挥作用[Langford等，Cardiovasc.Toxicol.2002，2(2)，141-150；等，Am.J.Pathol.2003，163(5)，1921-1928]。此外，最近已发现SSAO与血管发生之间的联系[Noda等，FASEB J.2008，22(8)，2928-2935]，并且基于这种联系，预期SSAO的抑制剂具有抗血管发生作用。
在人中的几项研究已经证明，在例如充血性心力衰竭、糖尿病、阿尔茨海默病和炎症的病症中，血浆中的SSAO活性升高[Lewinsohn，Braz.J.Med.Biol.Res.1984，17，223-256；Boomsma等，Cardiovasc.Res.1997，33，387-391；Ekblom，Pharmacol.Res.1998，37，87-92；等，J.Immunol.1998，161，1549-1557；Boomsma等，Diabetologia 1999，42，233-237；Meszaros等，Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet.1999，24，299-302；Yu等，Biochim.Biophys.Acta 2003，1647(1-2)，193-199；Mátyus等，Curr.Med.Chem.2004，11(10)，1285-1298；O′Sullivan等，Neurotoxicology 2004，25(1-2)，303-315；del MarHernandez等，Neurosci.Lett.2005，384(1-2)，183-187]。引起这些酶活性变化的机制尚不清楚。已经表明，由内源性胺氧化酶产生的活性醛和过氧化氢促进心血管疾病、糖尿病并发症和阿尔茨海默病的进展[Callingham等，Prog.Brain Res.1995，106，305-321；Ekblom，Pharmacol.Res.1998，37，87-92；Yu等，Biochim.Biophys.Acta 2003，1647(1-2)，193-199；Jiang等，Neuropathol Appl Neurobiol.2008，34(2)，194-204]。此外，SSAO的酶活性参与炎症部位的白细胞外渗过程，其中SSAO已显示在血管内皮上强烈表达[Salmi等，Immunity2001，14(3)，265-276；Salmi&Jalkanen，in“Adhesion Molecules：Functions andInhibition”K.Ley(Ed.)，2007，pp.237-251]。因此，已经提出对SSAO的抑制在预防糖尿病并发症和炎性疾病中具有治疗价值[Ekblom，Pharmacol.Res.1998，37，87-92；Salmi等，Immunity 2001，14(3)，265-276；Salter-Cid等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005，315(2)，553-562]。
WO2007146188教导了阻断SSAO活性会抑制白细胞募集，降低炎症反应，并预期有益于预防和治疗例如癫痫的发作。
O′Rourke等(J Neural Transm.2007；114(6)：845-9)检查了SSAO抑制剂在神经系统疾病中的潜力，其先前已经在大鼠卒中模型中证实了SSAO抑制的效力。对复发-缓解性实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)(一种与人多发性硬化症共享很多特征的小鼠模型)进行了SSAO抑制剂的检测。数据显示了小分子抗SSAO治疗在该模型中以及因此在人多发性硬化症的治疗中的潜在临床益处。
SSAO敲除动物表型明显正常，但表现出响应于多种炎性刺激而诱发的炎症反应的明显降低[Stolen等，Immunity 2005，22(1)，105-115]。此外，通过使用抗体和/或小分子在人疾病的多种动物模型(例如角叉聚糖诱发的爪炎症、唑酮诱导的结肠炎、脂多糖诱导的肺部炎症、胶原诱导的关节炎、内毒素诱导的葡萄膜炎)中已经证明在野生型动物中其功能的拮抗作用在降低白细胞浸润、降低疾病表型的严重程度和降低炎性细胞因子和趋化因子的水平中具有保护作用[Kirton等，Eur.J.Immunol.2005，35(11)，3119-3130；Salter-Cid等，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005，315(2)，553-562；McDonald等，Annual Reports inMedicinal Chemistry 2007，42，229-243；Salmi&Jalkanen，in“Adhesion Molecules：Functions and Inhibition”K.Ley(Ed.)，2007，pp.237-251；Noda等，FASEB J.200822(4)，1094-1103；Noda等，FASEB J.2008，22(8)，2928-2935]。这种抗炎性保护似乎被提供在广泛的均具有独立的致病机制的炎症模型中，而不仅限于一种特定的疾病或疾病模型。这会表明SSAO可以是调节炎症反应的关键点，因此SSAO抑制剂很可能是在广泛的人疾病中有效的抗炎药物。VAP-1也涉及纤维化疾病(包括肝和肺的纤维化疾病)的进展和维持。Weston和Adams(J Neural Transm.2011，118(7)，1055-64)总结了涉及VAP-1在肝纤维化中的实验数据，并且Weston等(EASL Poster 2010)报道，阻断VAP-1加速了四氯化碳诱导的纤维化的消退。此外，VAP-1已涉及肺的炎症(例如Singh等，2003，Virchows Arch 442：491-495)，表明VAP-1阻断剂可减低肺部炎症，并因此通过治疗疾病的促纤维化和促炎症两方面来治疗囊性纤维化是有益的。
SSAO(VAP-1)在胃癌中上调，并且已经在人黑素瘤、肝肿瘤和头颈肿瘤的肿瘤脉管系统中被鉴定到(Yoong KF，McNab G，Hubscher SG，Adams DH.(1998)，J Immunol 160，3978-88.；Irjala H，Salmi M，Alanen K，Gre′nman R，Jalkanen S(2001)，Immunol.166，6937-6943；Forster-Horvath C，Dome B，Paku S，等(2004)，Melanoma Res.14，135-40.)。一份报告(Marttila-lchihara F，Castermans K，Auvinen K，Oude Egbrink MG，JalkanenS，Griffioen AW，Salmi M.(2010)，J Immunol.184，3164-3173.)已经显示，携带无酶活性VAP-1的小鼠生长黑素瘤较慢，并且具有降低的肿瘤血管数量和直径。这些肿瘤的降低的生长也反映于骨髓抑制细胞浸润减低(降低60-70％)中。令人鼓舞的是，VAP-1缺乏对正常组织中的血管或淋巴结形成没有影响。
先前已经公开了作为SSAO抑制剂的不同结构类别的小分子，例如在WO 02/38153(四氢咪唑并[4，5-c]吡啶衍生物)、WO 03/006003(2-茚满基肼衍生物)、WO 2005/014530(烯丙基肼和羟胺(氨基氧基)化合物)和WO 2007/120528(烯丙基氨基化合物)中。另外的SSAO抑制剂在WO2013/037411和WO2013/038189中公开。
专利申请PCT/US2012/066153(作为WO2013/078254公开)公开了显然可用作丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂的化合物。这些化合物在结构上与要求保护的化合物相关，并且具有被苯基-环丁烷胺取代基取代的双环杂芳环体系。
本文中描述的发明涉及一类新的具有生物学、药理学和药代动力学特征的SSAO抑制剂，所述特征使其适合用作广泛的人炎性疾病和免疫疾病中的预防或治疗剂。该治疗能力设计为在阻止SSAO酶的作用、降低促炎酶产物(醛、过氧化氢和氨)的水平，同时还降低免疫细胞的黏附能力，并相应地降低其活化和最终的外渗。其中预期这样的活性在治疗上有益的疾病包括所有这样的疾病：其中免疫细胞在病理状况(例如多发性硬化、关节炎和血管炎)的引发、维持或消退中发挥重要作用。
我们的共同未决国际专利申请PCT/GB2014/050765涉及式(I)的SSAO抑制剂或者其可药用盐或N-氧化物：
其中：
Y选自氢、羟基、-NH2、-NH-C1-4-烷基、-NH-卤代-C1-4-烷基或-C1-4-烷氧基；
Z选自氢、卤素、羟基、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、卤代-C1-4-烷氧基、-CONH2、-SO2NH2、-NH2、-NHC1-4-烷基或-NH卤代-C1-4-烷基；
R1是苯环或者5或6元杂芳环，每种环任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、氰基-C1-4-烷基、3-7元环烷基环、-OR5、-NR6C(O)OR5、-NR6C(O)R5、-NR6C(O)NR4AR4B、-C(O)NR4AR4B、-C(O)R5、-C(O)OR5和-NR6S(O)2R5；其中
R4A、R4B、R5和R6各自独立地选自氢、C1-4-烷基或卤代-C1-4-烷基，或
R4A和R4B与它们所连接的氮一起形成3-7元环氨基，其任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、羟基、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、卤代-C1-4-烷氧基、-CONH2、-SO2NH2、-NH2、-NHC1-4-烷基、-NH卤代-C1-4-烷基；
X是-N＝；
W是苯环或者5或6元杂芳环，其选自吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、唑基、噻唑基或咪唑基，其中任一种环任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、氰基、氧代C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、氰基-C1-4-烷基、-OR5、-NR7AR7B、-NR6C(O)OR5、-NR6C(O)R5、-NR6C(O)NR7AR7B、-C(O)NR7AR7B、-C(O)R5、-C(O)OR5、-SO2R5、-SO2NR7AR7B和-NR6S(O)2R5；
R7A和R7B独立地是氢、C1-4-烷基或卤代-C1-4-烷基。
V选自键、-O-、-N(R6)-、-(C＝O)-、-CONR6-、-NR6C(O)-或-C1-4-亚烷基-，其中所述C1-4亚烷基任选地被卤素取代，并且其中所述C1-4亚烷基的任一个碳原子可以被-O-或-N(R6)-替换；
R3选自氢、-C1-4-烷基、-C1-4-烷基-C1-4-烷氧基或3-7元杂环或3-7元环烷基环，或者5或6元杂芳环，任一种环任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、氧代、羟基、氰基、C1-4-烷基、卤素-C1-4-烷基、氰基-C1-4-烷基、-OR5、-NR4AR4B、-NR6C(O)OR5、-NR6C(O)R5、-NR6C(O)NR4AR4B、-C(O)NR4AR4B、-C(O)R5、-C(O)OR5、-SO2R5、-SO2NR4AR4B和-NR6S(O)2R5；
前提是：基团-WVR3和/或R1不是：
其中
n是0、1或2；
R’和R”独立地选自H、-C1-C6烷基、-(C＝O)-C1-C6烷基和-(C＝O)OC(CH3)3；并且
R”’是H、OH或C1-C6烷基。
我们的共同未决国际专利申请PCT/GB2014/050765还涉及式(Ia)的SSAO抑制剂或者其可药用盐或N-氧化物：
其中：
Y选自氢、羟基、-NH2、-NH-C1-4-烷基、-NH-卤代-C1-4-烷基或-C1-4-烷氧基；
Z选自氢、卤素、羟基、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、卤代-C1-4-烷氧基、-CONH2、-SO2NH2、-NH2、-NHC1-4-烷基或-NH卤代-C1-4-烷基；
R1是苯环或者5或6元杂芳环，每种环任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、氰基-C1-4-烷基、-OR5、-NR6C(O)OR5、-NR6C(O)R5、-NR6C(O)NR4AR4B、-C(O)NR4AR4B、-C(O)R5、-C(O)OR5和-NR6S(O)2R5；其中
R4A、R4B、R5和R6各自独立地选自氢、C1-4-烷基或卤代-C1-4-烷基，或
R4A和R4B与它们所连接的氮一起形成3-7元环状氨基，其任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、羟基、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、卤代-C1-4-烷氧基、-CONH2、-SO2NH2、-NH2、-NHC1-4-烷基、-NH卤代-C1-4-烷基；
X是-N＝；
W是苯环或者5或6元杂芳环，任一种环任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、氰基、C1-4-烷基、卤代-C1-4-烷基、氰基-C1-4-烷基、-OR5、-NR7AR7B、-NR6C(O)OR5、-NR6C(O)R5、-NR6C(O)NR7AR7B、-C(O)NR7AR7B、-C(O)R5、-C(O)OR5、-SO2R5、-SO2NR7AR7B和-NR6S(O)2R5；
R7A和R7B独立地是氢、C1-4-烷基或卤代-C1-4-烷基。
V选自键、-O-、-N(R6)-、-(C＝O)-、-CONR6-、-NR6C(O)-或-C1-4-亚烷基-，其中所述C1-4亚烷基任选地被卤素取代，并且其中所述C1-4亚烷基的任一个碳原子可以被-O-或-N(R6)-替换；
R3是氢或3-7元杂环或3-7元环烷基环(选自环丙基、环戊基或环己基)，或者5或6元杂芳环，任一种环任选地被一个或更多个选自以下的取代基取代：卤素、氧代、羟基、氰基、C1-4-烷基、卤素-C1-4-烷基、氰基-C1-4-烷基、-OR5、-NR4AR4B、-NR6C(O)OR5、-NR6C(O)R5、-NR6C(O)NR4AR4B、-C(O)NR4AR4B、-C(O)R5、-C(O)OR5、-SO2R5、-SO2NR4AR4B和-NR6S(O)2R5。
发明简述
本发明涉及落入PCT/GB2014/050765的一般公开内容(但其中未具体列举)的一组具体化合物。本发明化合物具有本文中所公开的效用。
发明详述
根据本发明，提供了选自以下的化合物：
4-{5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}吗啉；
4-{5-[3-(2，4-二氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
5-[3-(2，4-二氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(烷-4-基)嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
4-{5-[3-(2-氟-4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
4-{5-[3-(4-氯苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(烷-4-基)吡啶-2-胺；
2-(4，4-二氟哌啶-1-基)-5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶；
4-{5-[3-(5-氯吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
4-{4-甲基-5-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}吗啉；
4-{5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(烷-4-基)吡啶-2-胺；
4-{5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}硫代吗啉；
N-环丙基-5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-胺；
5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)吡啶；
2-(4-氟哌啶-1-基)-5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶；
5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-[2-(吗啉-4-基)乙基]吡啶-2-胺；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-[2-(吗啉-4-基)乙基]吡啶-2-胺；
N-环丙基-5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-胺；
N-环丙基-5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-胺；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(丙烷-2-基)吡啶-2-胺
5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
5-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
4-{4-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}吗啉；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
4-{4-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}吗啉；
2-甲基-5-{2-[4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}吡啶；
5-{2-[2-氟-4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}-2-甲基吡啶；
4-{3-氟-4-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}吗啉；
5-{2-[3-氟-4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}-2-甲基吡啶；
N-{4-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}烷-4-胺；
5-甲基-2-{2-[4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}吡啶；
5-{2-[4-(4-氟哌啶-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}-2-甲基吡啶；
2-氯-5-[3-(4-氯苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶；
2-氯-5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶；
及其可药用盐。
预期本发明的化合物可以以水合物和溶剂合物的形式制备。任何本文中(包括本文中的权利要求书中)提及“本发明涉及的化合物”或“本发明的化合物”或“本发明化合物”等包括提及所述化合物的盐、水合物和溶剂合物。术语“溶剂合物”在本文中用于描述包含本发明化合物和化学计量量的一种或更多种可药用溶剂分子(例如乙醇)的分子复合物。当所述溶剂是水时，使用术语“水合物为。
本发明的各化合物可以以无定形形式和/或数种多晶型形式存在并且可以以不同的晶体习性获得。本文中(包括本文中的权利要求书中)任何提及“本发明涉及的化合物”或“本发明的化合物为或“本发明化合物”等包括提及无论是无定形或多晶型形式的化合物。
定义
除非另有说明或指明，否则以下定义应适用于整个说明书和所附权利要求书。
本文中使用的术语“本发明的化合物”是指上述39种化合物，并且包括其可药用盐、水合物和溶剂合物。
“可药用”意指可用于制备一般是安全、无毒且不是生物学或其他方面不期望的药物组合物，并且包括可用于兽用以及人药用。
本文中使用的“治疗”包括预防指定疾病或病症，或者一旦确立则改善或消除该疾病。
“有效量”是指赋予治疗对象的治疗效果的化合物量。治疗效果可以是客观的(即，可通过一些测试或标记物测量)或主观的(即，对象给出效果指示或感觉到效果)。
在整个说明书和所附权利要求书中，给定的化学式或名称还应包括其所有的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物和前药形式。此外，给定的化学式或名称应包括其所有互变异构体和立体异构形式。互变异构体包括烯醇和酮形式。立体异构体包括对映体和非对映体。对映体可以以其纯形式存在，或以两种对映体的外消旋(相等)或不等的混合物形式存在。非对映体可以以其纯形式存在，或作为非对映体的混合物存在。非对映体还包括几何异构体，其可以以纯的顺式(cis)或反式(trans)形式存在，或者作为它们的混合物存在。
本发明的化合物可以原样使用，或在适当情况下作为药理学上可接受的盐(酸或碱加成盐)使用。下面提到的药理学上可接受的加成盐意在包含化合物能够形成的治疗活性的无毒的酸和碱加成盐形式。具有碱性的化合物可以通过用适当的酸处理该碱形式而转化为其可药用酸加成盐。示例性的酸包括无机酸，例如氯化氢、溴化氢、碘化氢、硫酸、磷酸；以及有机酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、乙醇酸、马来酸、丙二酸、草酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、富马酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸(pamoic acid)、苯甲酸、抗坏血酸等。示例性碱加成盐形式是钠、钾、钙盐和与可药用胺(例如氨、烷基胺、二苄乙二胺(benzathine)和氨基酸(例如精氨酸和赖氨酸))的盐。本文中使用的术语加成盐还包括化合物及其盐能够形成的溶剂合物，例如水合物、醇化物等。
一方面，本发明涉及用于治疗的本发明化合物。如上限定的化合物可用作SSAO活性的抑制剂。因此，它们可用于治疗或预防抑制SSAO活性对其有益的病症和疾病。更具体地，它们可用于治疗或预防炎症、炎性疾病、免疫或自身免疫性疾病，或者抑制肿瘤生长。
特别地，据信本发明化合物可用于治疗或预防关节炎(包括类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎和银屑病关节炎)、滑膜炎、血管炎、舍格伦病(Sjogren’sdisease)、与肠炎症相关的病症(包括克罗恩病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎、炎性肠病和肠易激综合征)、动脉粥样硬化、多发性硬化、阿尔茨海默病、血管性痴呆、帕金森病、脑淀粉样血管病、伴皮层下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebralautosomal dominant arteriopathy with subcortical infacts andleukoencephalopathy)、肺部炎性疾病(包括哮喘、慢性阻塞性肺病和急性呼吸窘迫综合征)、纤维化疾病(包括特发性肺纤维化、心脏纤维化、肝纤维化和系统性硬化病(硬皮病))、皮肤炎性疾病(包括接触性皮炎、特应性皮炎和银屑病)、眼部炎性疾病(包括年龄相关性黄斑变性、葡萄膜炎和糖尿病视网膜病)、全身炎症反应综合征、脓毒症、肝的炎症和/或自身免疫性病症(包括自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、酒精性肝病、硬化性胆管炎和自身免疫性胆管炎)、糖尿病(I型或II型)和/或其并发症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、缺血性疾病(包括卒中和缺血-再灌注损伤)或心肌梗死和/或其并发症、或癫痫。
在一个实施方案中，据信本发明的化合物可用于治疗或预防选自以下的疾病：类风湿关节炎、骨关节炎、肝纤维化、慢性阻塞性肺病、多发性硬化症、舍格伦病、阿尔茨海默病、帕金森病、炎性肠病和血管性痴呆。
鉴于上述介绍中提到的证据，VAP-1在数种癌症(包括胃癌、黑素瘤、肝癌和头颈肿瘤)中上调，并且携带无酶活性VAP-1的小鼠黑素瘤生长较慢，并且鉴于VAP-1与血管发生之间的联系，还预期本发明的化合物是抗血管发生的，并因此可用于通过抑制肿瘤生长来治疗癌症。
因此，本发明包括用于治疗或预防上述病症和疾病的本发明化合物。本发明还包括所述化合物在制备用于治疗或预防上述病症和疾病的药物中的用途。本发明还包括用于治疗或预防此类病症和疾病的方法，包括向需要此类治疗的哺乳动物(包括人)施用有效量的如上所限定的化合物。
本文中描述的方法包括这样的方法，其中鉴定对象需要特定的所述治疗。鉴定需要此类治疗的对象可以是根据对象或卫生保健专业人员的判断，并且可以是主观的(例如意见)或客观的(例如可通过测试或诊断方法测量)。
在另一些方面，本文中的方法包括这样的方法，其还包括监测对象对于治疗施用的应答。这样的监测可以包括对作为治疗方案的标志物或指标的对象组织、流体、标本、细胞、蛋白质、化学标志物、遗传物质等的定期取样。在另一些方法中，通过对适用于此类治疗的相关标志物或指标的评估来将对象预筛选或鉴定为需要此类治疗。
在一个实施方案中，本发明提供了监测治疗进展的方法。所述方法包括在患有或易患本文中所描述的病症或其症状的对象中确定诊断标志物(标志物)(例如，本文中由本文中化合物调节的任何靶标或细胞类型)或诊断测量(例如，筛选、测定)水平的步骤，其中所述对象已被施用足以治疗疾病或其症状的治疗量的本文中化合物。该方法中确定的标志物水平可以与健康正常对照或其他受影响患者中已知的标志物水平进行比较，以确定对象的疾病状态。在一些优选实施方案中，在比确定第一水平更晚的时间点确定对象中的第二标志物水平，并且比较两个水平以监测疾病的过程或治疗的效力。在某些优选的实施方案中，根据本发明在开始治疗之前确定对象中标志物的治疗前水平；然后可将治疗前的标志物水平与治疗开始后对象中的标志物水平进行比较，以确定治疗的效力。
在某些方法实施方案中，确定对象中标志物或标志物活性的水平至少一次。标志物水平与例如先前或随后从同一患者、另一患者或正常对象中获得的另一测量的标志物水平的比较可用于确定根据本发明的治疗是否具有期望的效果，从而允许适当调节剂量水平。可以使用本领域已知的或本文中描述的任何合适的取样/表达测定方法进行标志物水平的确定。优选地，首先从对象取出组织或流体样品。合适样品的实例包括血液、尿、组织、口腔或颊细胞，以及含有根的毛发样品。其他合适的样品将是本领域技术人员已知的。可以使用本领域已知的任何合适的技术来进行样品中蛋白质水平和/或mRNA水平(例如，标志物水平)的确定，其包括但不限于：酶免疫测定、ELISA、放射性标记/测定技术、印迹/化学发光法、实时PCR等。
组合物
目前优选的本发明实施方案是包含本发明化合物和一种或更多种可药用载体和/或赋形剂的药物组合物。
对于临床应用，将本发明的化合物配制成用于多种施用方式的药物制剂。应当理解，本发明的化合物可以与生理上可接受的载体、赋形剂或稀释剂一起施用。本发明的药物组合物可以通过任何合适的途径施用，优选通过经口、经直肠、经鼻、局部(包括口含和舌下)、舌下、经皮、鞘内、经黏膜或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)施用。
另一些制剂可以方便地以单位剂量形式存在，例如片剂和缓释胶囊剂，以及在脂质体中，并且可以通过药学领域中公知的任何方法制备。药物制剂通常通过将活性物质或其可药用盐与常规可药用载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。赋形剂的实例是水、明胶、阿拉伯胶、乳糖、微晶纤维素、淀粉、淀粉羟乙酸钠、磷酸氢钙、硬脂酸镁、滑石、胶体二氧化硅等。此类制剂还可含有其他药理活性剂和常规添加剂，例如稳定剂、润湿剂、乳化剂、矫味剂、缓冲剂等。通常来说，活性化合物的量为制剂的按重量计0.1-95％，优选用于肠胃外用途的制剂为按重量计0.2-20重量％，更优选用于口服施用的制剂为按重量计1-50％。
制剂还可以通过已知的方法(例如制粒、压制、微囊化、喷涂等)制备。制剂可以通过常规方法以片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、混悬剂、栓剂或注射剂的剂型制备。液体制剂可以通过将活性物质溶解或混悬在水或其他合适的载剂中来制备。片剂和颗粒剂可以以常规方式包衣。为了在长时间内维持治疗有效的血浆浓度，可将本发明的化合物并入缓释制剂中。
特定化合物的剂量水平和剂量频率将根据多种因素而变化，包括所使用的具体化合物的效力、该化合物的代谢稳定性和作用时长、患者的年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、排泄速率、药物组合、待治疗病症的严重程度和进行治疗的患者。每日剂量可以例如为每千克体重约0.001mg至约100mg，以单次或多次剂量施用，例如每千克体重约0.01mg至约25mg。通常来说，经口给予这样的剂量，也可以选择肠胃外施用。
本发明化合物的制备
使用了以下缩略语：
Ac 乙酰基
AcOH 乙酸
Aq 水性
Ar 芳基
nBu 正丁基
Boc 叔丁氧基羰基
calcd 计算的
conc 浓的
d 天
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMA 二甲基乙酰胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EDC N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺
ES+ 电喷雾离子化
Et3N 三乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Ex 实施例
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N·，N·-四甲基脲六氟磷酸盐
HBTU O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基-脲-六氟磷酸盐
HPLC 高效液相色谱
HRMS 高分辨率质谱
Int 中间体
LCMS 液相色谱质谱法
LDA 二异丙基氨基锂
M 摩尔/升
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
[MH]+ 质子化分子离子
min 分钟
MS 质谱法
NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮
QTOF 四极杆飞行时间质谱仪
RP 反相
RT 室温
Rt 保留时间
sat 饱和
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
UPLC 超高效液相色谱
UV 紫外线
XPhos 2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯
实施例和中间体化合物
实验方法
除非另有说明，反应在室温下进行。使用配有铝帽和隔垫的加工瓶，用Biotage微波反应器进行微波反应。使用Thales H-Cube进行氢化。使用装备有RediSep或GraceResolv硅胶和C18反相色谱柱的CombiFlash Companion或Combiflash RF系统进行制备型低压色谱。在具有装备了ACE-5AQ，100×21.20mm，5mm或Phenomenex Synergi Hydro-RP 80AAXIA，100×21.20mm，4mm柱的UV检测器的Gilson系统上进行制备型反相HPLC。收集最纯净的级分，浓缩并真空干燥。化合物通常在40℃至60℃的真空烘箱中干燥，然后进行纯度分析。
通过HPLC和LCMS进行化合物分析。使用具有二极管阵列检测器的Agilent1100HPLC系统收集HPLC数据，并使用连接了Waters ZQ质谱仪的Agilent 1100HPLC系统收集LCMS数据。使用PhenomenexSynergi RP-Hydro柱(150×4.6mm，4μm)进行标准色谱法，在1.5mL/分钟和30℃下用水(+0.1％TFA)中的5-100％MeCN(+0.085％TFA)梯度进行7分钟，在200-300nm检测。通过UPLC交替进行化合物分析，使用带有Kinetex XB RP柱(100×2.1mm，1.7μm)的Agilent UPLC 1290Infinity系统，以每分钟0.5mL和40℃，用水(+0.1％TFA)中的5-100％MeCN(+0.085％TFA)的梯度，在200-300nm检测；或使用Kinetex XB RP柱(50×2.1mm，1.7μm)，以每分钟0.8mL和40℃，用水(+0.1％TFA)中的5-100％MeCN(+0.085％TFA)梯度，在200-300nm检测。
中间体的标准LCMS法，使用Phenomenex Synergi RP-Hydro柱(30×4.6mm，4μm)，以在水(+0.1％TFA)中的5-100％MeCN(+0.085％TFA)为梯度，持续1.75分钟，然后以100％维持0.75分钟，每分钟1.5mL，30℃，在200-300nm检测。中间体的标准HPLC法，使用ZorbaxXDB C18柱(50×4.6mm，1.8μm)，以在水(+0.1％TFA)中的5-100％MeCN(+0.085％TFA)为梯度持续3.0分钟，然后以100％持续0.5分钟，每分钟1.2mL，40℃，在200-300nm检测。
使用Waters QTOF电喷雾离子源测量准确质量，并使用亮氨酸脑啡肽lockmass进行校正。在正和/或负电喷雾模式下获得谱图。获得的质量范围为m/z 100-1000。将受试化合物溶于DMSO中以得到10mM储备溶液。通常用495uL乙腈稀释5μL的DMSO储备液，并随后用乙腈和水(1∶1)进一步稀释以得到2uM的终浓度。报道的质量值对应于添加氢的母体分子[MH]或减去氢的母体分子[M-H]。制备的化合物使用IUPAC命名。
中间体1
5-氟-N-(4-硝基吡啶-3-基)吡啶-2-胺
将NaH(在矿物油中的60％分散体，1.08g，27.1mmol)分批添加至THF(60mL)中的2-氨基-5-氟吡啶(3.04g，27.1mmol)溶液，并将所得混合物搅拌30分钟。添加THF(10mL)中的3-氟-4-硝基吡啶(3.50g，24.6mmol)溶液并将所得混合物搅拌16小时。将反应混合物在EtOAc(40mL)与水(40mL)之间分配，并将有机相用盐水(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂。残余物通过柱色谱纯化以得到作为红色固体的标题化合物(1.76g，30.6％)。LCMS(ES+)：235.0[M+H]+.HPLC：Rt 5.51分钟，纯度100％。
中间体2
N-(5-氯吡啶-2-基)-4-硝基吡啶-3-胺
使用2-氨基-5-氯吡啶代替2-氨基-5-氟吡啶与中间体1类似地制备中间体2，以得到作为橙色固体的标题化合物(1.24g，28.1％)。LCMS(ES+)：251.0[MH]+.HPLC：Rt 5.92分钟，纯度92.7％。
中间体3
N-(5-甲基吡啶-2-基)-4-硝基吡啶-3-胺
使用2-氨基-5-甲基吡啶代替2-氨基-5-氟吡啶与中间体1类似地制备中间体3，以得到作为红色固体的标题化合物(1.25g，30.9％)。LCMS(ES+)：231.1[MH]+.HPLC：Rt 4.43分钟，纯度80.3％。
中间体4
3-[(2，4-二氟苯基)氨基]-4-硝基吡啶-1--1-醇盐
将EtOH(60mL)中的3-氟-4-硝基吡啶N-氧化物(2.00g，12.7mmol)和2，4-二氟苯胺(2.96mL，29.1mmol)的混合物在70℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，通过真空过滤分离沉淀以得到作为黄色固体的标题化合物(2.16g，63.9％)。LCMS(ES+)：268.0[M+H]+.HPLC：Rt：5.14分钟，纯度99.3％。
中间体5-7
通过将3-氟-4-硝基吡啶N-氧化物与适当的苯胺偶联与中间体4类似地制备中间体5-7；见下表1。
表1：苯胺的SnAr形成
中间体8
3-[(4-氯苯基)氨基]-4-硝基吡啶-1--1-醇盐
将3-溴-4-硝基吡啶N-氧化物(10.0g，45.7mmol)和4-氯苯胺(17.5g，137mmol)溶于EtOH(100mL)中并加热至60℃持续18小时。将反应混合物冷却至室温并通过过滤收集沉淀物以得到作为橙色固体的标题化合物(2.83g，23-3％)。LCMS(ES+)：266.0[MH]+.HPLC：Rt5.52分钟，纯度100％。
中间体9
3-[(4-氟苯基)氨基]-4-硝基吡啶-1--1-醇盐
使用4-氟苯胺代替4-氯苯胺与中间体8类似地制备中间体9，以得到作为橙色固体的标题化合物(10.4g，45.7％)。LCMS(ES+)：250.0[MH]+.HPLC：Rt 5.15分钟，纯度99.5％。
中间体10
3-N-(2，4-二氟苯基)吡啶-3，4-二胺
将拉尼镍(Raney nickel)(在水中的约50％浆料；2.80mL)缓慢添加至中间体4(2.16g，8.08mmol)和一水合肼(1.57mL，32.3mmol)在EtOH(80mL)中的混悬液中，并将所得混合物搅拌90分钟。将混合物通过硅藻土(Celite)过滤并随后用MeOH洗涤。将合并的滤液真空蒸发并随后通过柱色谱纯化以得到作为粉红色固体的标题化合物(1.32g，73.6％)。LCMS(ES+)：222.0[M+H]+.HPLC：Rt：4.08分钟，纯度99.2％。
中间体11-16
通过以水合肼或甲酸铵将中间体1和5-9用拉尼镍还原与中间体10类似地制备中间体11-16；见下表2。
表2：用拉尼镍和水合肼或甲酸铵还原中间体1和5-9。
中间体17
3-N-(5-氯吡啶-2-基)吡啶-3，4-二胺
使用中间体2代替中间体4与中间体10类似地制备中间体17，以得到作为粉色固体的标题化合物(804mg，74.3％)。LCMS(ES+)：221.1[MH]+.UPLC：Rt 1.22分钟，纯度100％。
中间体18
N-(5-甲基吡啶-2-基)-4-硝基吡啶-3-胺
使用中间体3替代中间体4与中间体10类似地制备中间体18，以得到作为蓝色固体的标题化合物(885mg，81.4％)。LCMS(ES+)：201.2[MH]+.UPLC：Rt 0.29分钟，纯度79.2％。
中间体19
4-甲基-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-羧酸
将二氧六环(30mL)中的6-氟-4-甲基烟酸(3.38g，21.8mmol)、吗啉(2.07mL，24.0mmol)和Et3N(3.80mL，27.2mmol)溶液在110℃下加热20小时。将反应混合物冷却，通过过滤除去沉淀并蒸发滤液以得到作为浅黄色固体的标题化合物(4.77g，98.4％)。LCMS(ES+)：223.0[M+H]+.HPLC：Rt3.23分钟，纯度96.0％。
中间体20
2-[(烷-4-基)氨基]嘧啶-5-羧酸
分别使用2-氯嘧啶-5-羧酸和4-氨基四氢吡喃代替6-氟-4-甲基烟酸和吗啉与中间体19类似地制备中间体20，以得到作为灰白色固体的标题化合物(681mg，96.7％)。LCMS(ES+)：224.1[MH]+.UPLC：Rt1.57分钟，纯度90.0％。
中间体21
2-(二乙基氨基)嘧啶-5-羧酸
分别使用2-氯嘧啶-5-羧酸和二乙胺代替6-氟-4-甲基烟酸和吗啉与中间体19类似地制备中间体21，以得到作为浅橙色油状物的标题化合物(1.86g，粗品)。LCMS(ES+)：196.1[MH]+.UPLC：Rt 2.12分钟，纯度91.2％。
中间体22
N-{3-[(5-氟吡啶-2-基)氨基]吡啶-4-基}-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-甲酰胺
将Et3N(665μL，4.77mmol)添加至NMP(10mL)中的6-(吗啉-4-基)烟酸(365mg，1.75mmol)、HATU(787mg，2.07mmol)溶液中，并将所得溶液搅拌30分钟。添加中间体11(325mg，1.59mmol)并将所得溶液在65℃下搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc(25mL)和水(30mL)稀释。有机相用盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂以得到粉红色固体(628mg，粗品)。LCMS(ES+)：395.0[M+H]+。
中间体23-30
通过中间体10、12-16和18与适当的羧酸的偶联与中间体22类似地制备中间体23-30；见下表3。
表3：酰胺偶联
中间体31
N-{3-[(5-氯吡啶-2-基)氨基]吡啶-4-基}-6-氟-4-甲基吡啶-3-甲酰胺
将草酰氯(152uL，1.77mmol)滴加到DCM(6.0mL)中的2-氟-4-甲基烟酸(250mg，1.61mmol)和DMF(12uL，161umol)的混悬液中，并将所得溶液搅拌30分钟。添加中间体17(320mg，1.45mmol)和Et3N(495uL，3.55mmol)在DCM(5.0mL)中的混悬液，并将所得混合物搅拌16小时。将反应混合物用DCM(15mL)和水(30mL)稀释，有机相用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂以得到橙色油状物(576mg，粗品)。LCMS(ES+)：357.9[M+H]+。
中间体32-36
通过羧酸活化和中间体11、14-16和18的偶联类与中间体31类似地制备中间体32-36；见下表4。
表4：羧酸活化和随后的偶联
中间体37
4-溴-N-{3-[(6-甲基吡啶-3-基)氨基]吡啶-4-基}苯甲酰胺
将4-溴苯甲酰氯(658mg，3.00mmol)分批添加至中间体14(600mg，3.00mmol)在Et3N(627uL，4.49mmol)和DCM(12mL)中的混悬液中，并将所得溶液搅拌1小时。将反应物用水(20mL)稀释，分离有机相并将水相用DCM(20mL)进一步萃取。合并的有机相用盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂以得到作为黄色固体的标题化合物(923mg，80.3％)。LCMS(ES+)：383.0，385.0[M+H]+UPLC：Rt 1.99分钟，纯度95.6％。
中间体38-40
通过中间体14和18与适当的酰氯的偶联与中间体37类似地制备中间体38-40；见下表5。
表5：酰氯偶联
中间体41
5-[2-(4-溴苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基]-2-甲基吡啶
将中间体37(923mg，2.41mmol)溶于AcOH(4.5mL)中，并将所得溶液在微波反应器中在120℃下加热15分钟。将反应混合物用水(40mL)和DCM(40mL)稀释，并用固体Na2CO3碱化直至约pH 9。有机相用盐水(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂以得到作为灰白色固体的标题化合物(664mg，75.5％)。LCMS(ES+)：364.9，366.9[M+H]+.UPLC：Rt 2.16分钟，纯度98.6％。
中间体42-44
通过酸介导的中间体38-40的环化与中间体41类似地制备中间体42-44；见下表6。
表6：中间体38-40的环化。
中间体45
6-氯-N-{3-[(4-氯苯基)氨基]吡啶-4-基}吡啶-3-甲酰胺
将中间体13(302mg，1.38mmol)、6-氯烟酸(1.43g，4.54mmol)、HOBt(615mg，4.54mmol)和DIPEA(1.87mL，10.7mmol)溶于DMF(6.0mL)中，并用EDC(871mg，4.54mmol)处理。将反应物搅拌5.5天。将混合物倒入水(50mL)中并用DCM(3×50mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。将粗制物质通过柱色谱纯化以得到作为黄色胶状物的标题化合物(163mg，32.9％)。LCMS(ES+)：359.0[MH]+。
实施例1
4-{5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}吗啉
将中间体22(628mg，1.59mmol)混悬于AcOH(3.0mL)中，将所得混合物在微波反应器中在150℃下加热1小时。将反应混合物用水(30mL)和DCM(15mL)稀释，并用Na2CO3中和，直至反应混合物为pH约8。分离有机相，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂以得到粉红色固体，将其在EtOH(2.5mL)中研磨以得到作为粉红色固体的标题化合物(25.0mg，4.17％)；HRMS(ES+)计算的C20H17FN6O的[M+H]：377.1526，实测为377.1524。HPLC：Rt：4.13分钟，纯度98.4％。
实施例2-7
通过酸介导的中间体23和26-30的环化与实施例1类似地制备实施例2-7；见下表7。
表7：中间体23和26-30的环化。
实施例8
4-{5-[3-(2-氟-4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉
将中间体24(212mg，0.60mmol)溶于NMP(1.5mL)中，并添加吗啉(310μL，3.59mmol)。将所得溶液在微波反应器中在180℃下加热30分钟。将反应混合物冷却并在EtOAc(25mL)与水(25mL)之间分配。有机相用水(25mL)、盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂。残余物通过反相HPLC纯化以得到作为黄色固体的标题化合物(22.0mg，9.1％)。HRMS(ES+)计算的C23H22FN5O的[M+H]：404.1887，实测为404.1888。HPLC：Rt 4.45分钟，纯度99.3％。
实施例9-11
通过SnAr并用合适的胺环化中间体25和35与实施例8类似地制备实施例9-11；见下表8。
表8：SnAr和中间体25和35的环化。
实施例12
4-{5-[3-(5-氯吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉
将中间体31(576mg，1.61mmol)和吗啉(695μL，8.06mmol)溶于NMP(1.5mL)中，并将所得溶液在微波反应器中在180℃下加热1小时。将反应混合物在EtOAc(20mL)与水(20mL)之间分配，有机相用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。将残余物溶于AcOH(2.0mL)中并将所得溶液在微波反应器中在150℃下加热30分钟。反应混合物用水(10mL)和DCM(10mL)稀释，并通过小心添加Na2CO3碱化直到pH约9。有机相用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物通过反相HPLC纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(80.0mg，12.2％)。HRMS(ES+)计算的C21H19ClN6O的[M+H]：407.1387，实测为407.1385。UPLC：Rt：1.90分钟，纯度100％。
实施例13-24
通过SnAr和中间体32-36与合适的胺的环化和随后酸介导的环化与实施例12类似地制备实施例13-24；见下表9。
表9：SnAr和中间体32-36的环化。
实施例25
5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶
将中间体14(250mg，1.25mmol)、2-吡咯烷-1-基嘧啶-5-甲醛(221mg，1.25mmol)和Na2O4S2(652mg，3.75mmol)在EtOH(3.0mL)中的混悬液在微波反应器中在150℃下加热90分钟，45分钟后再添加Na2O4S2(652mg，3.75mmol)。然后将反应混合物倒入1M Na2CO3水溶液(25mL)中，并用DCM(2×25mL)萃取。将合并的有机相用盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂。将残余物在MeOH(5.0mL，然后4.0mL)中研磨两次以得到作为白色固体的标题化合物(127mg，28.5％)。HRMS(ES+)计算的C20H19N7的[M+H]：358.1780，实测为358.1779。UPLC：Rt 1.99分钟，纯度99.2％。
实施例26-30
通过中间体11、14、16和18与合适的醛的还原缩合与实施例25类似地制备实施例26-30；见下表10。
表10：中间体11、14、16和18的还原缩合。
实施例31
2-甲基-5-{2-[4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}吡啶
将中间体41(200mg，548umol)、吡咯烷(49.5uL，602umol)、XPhos(52.2mg，110umol)、Pd2(dba)3(50.1mg，54.8umol)和NaOtBu(63.2mg，657umol)在二氧六环(2.0mL)中的混合物在100℃下加热16小时。将反应混合物在DCM(20mL)与水(20mL)之间分配，并将有机相用盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。将所得残余物在MeOH(3.0mL)中研磨以得到作为米色固体的标题化合物(18.1mg，9.30％)。HRMS(ES+)计算的C22H21N5的[M+H]：356.1875，实测为356.1877。UPLC：Rt 2.30分钟，纯度98.7％。
实施例32-37
通过中间体41-44与适当的胺的Buchwald Hartwig偶联反应与实施例31类似地制备实施例32-37；见下表11。
表11：中间体41-44的Buchwald Hartwig偶联，
实施例38
2-氯-5-[3-(4-氯苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶
将中间体45(163mg，0.45mmol)溶于AcOH(5mL)中并在微波反应器中在100℃下加热15分钟。将反应混合物倒入水(50mL)中，用Na2CO3碱化并用DCM(3×50mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。残余物通过反相HPLC纯化以得到作为白色固体的标题化合物(55.6mg，36.0％)。HRMS(ES+)计算的C17H10Cl2N4的[M+H]：341.0361，实测为341.0352。HPLC：Rt 5.13分钟，纯度99.9％。
实施例39
2-氯-5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶
将中间体9(800mg，3.21mmol)、2-氯吡啶-5-甲醛(568mg，4.01mmol)和Na2S2O4(2.24g，12.8mmol)在EtOH(10mL)中的混悬液在微波反应器中在160℃下加热1小时。然后将反应混合物倒入1M Na2CO3溶液(50mL)中并用DCM(3×50mL)萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂。残余物通过柱色谱纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(39.0mg，7.48％)。HRMS(ES+)计算的C17H10ClFN4的[M+H]：325.0656，实测为325.0642。HPLC：Rt：4.76分钟，99.5％。
生物学测试
SSAO酶抑制剂的生物学测定
所有初步测定均在室温下用经纯化的重组表达的人SSAO进行。基本上如等(Protein Expression and Purification 46(2006)321-331)所述制备酶。此外，使用从多种组织制备的SSAO或经纯化的大鼠重组SSAO进行次级和选择性测定。通过使用14C标记的底物测量苯甲醛产生，或通过在辣根过氧化物酶(HRP)偶联反应中利用过氧化氢的产生来测定以苄胺作为底物的酶活性。简言之，将受试化合物溶解在二甲基亚砜(DMSO)中至浓度为10mM。通过在DMSO中生成1∶10的连续稀释以产生7点曲线或通过在DMSO中制备1∶3的连续稀释产生11点曲线来测定剂量-响应测量。根据化合物的效力调整顶部浓度，随后在反应缓冲液中稀释得到≤2％的最终DMSO浓度。
过氧化氢检测：
在辣根过氧化物酶(HRP)偶联反应中，10-乙酰基-3，7-二羟基苯嗪的过氧化氢氧化产生了高荧光化合物试卤灵(resorufin)(Zhout和Panchuk-Voloshina.AnalyticalBiochemistry 253(1997)169-174；Red过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒，Invitrogen A22188)。将50mM磷酸钠(pH 7.4)中的酶和化合物置于平底微量滴定板中预孵育约15分钟，然后通过添加HRP、苄胺和Amplex试剂的混合物起始反应。将苄胺浓度设定成对应于使用标准程序测定的米氏常数的浓度。然后在1-2小时内的数个时间点测量荧光强度，在544nm下激发并读取590nm处的发射。对于人SSAO测定，测定孔中试剂的最终浓度为：SSAO酶1ug/mL，苄胺100uM，Amplex试剂20uM，HRP 0.1U/mL以及不同浓度的受试化合物。将抑制作为与没有抑制剂的对照(仅稀释的DMSO)相比的信号降低％进行测量。从所有数据点中减去不含SSAO酶的样品的背景信号。将数据拟合到四参数对数模型，并使用GraphPadPrism 4或XLfit 4程序计算IC50值。
醛检测：
使用14C标记的苄胺测定SSAO活性，并通过测量放射性苯甲醛进行分析。在白色的96孔光学板(Packard)中，将20uL稀释的受试化合物在室温下用20uL SSAO酶预孵育约15分钟，并连续搅拌。所有稀释均用PBS制成。通过添加20uL含有[7-14C]盐酸苄胺(CFA589，GEHealthcare)的苄胺底物溶液引发反应。将平板如上所述孵育1小时，然后通过酸化(10uL1M HCl水溶液)停止反应。然后向每个孔中添加90uL Micro Scint-E溶液(Perkin-Elmer)，并将板连续混合15分钟。相分离立即发生，并在Topcount闪烁计数器(Perkin-Elmer)中读取活性。在最终反应孔中，人重组SSAO浓度为10ug/mL。为了优化灵敏度，与HRP偶联测定相比，降低底物浓度，以获得更高分数的放射性产物。在人SSAO测定中，苄胺浓度为40uM(0.2uCi/mL)。如上所述分析数据。
本发明的所有示例化合物在SSAO中具有1nM至1200nM的IC50值(见下表12)。
表12：SSAO抑制活性(A：＜50nM，B：50-200nM，C：200-1200nM)
HERG测定
使用IonWorks膜片钳电生理学测试本发明化合物对人ether a go-go相关基因(human ether a go-go related gene，hERG)K+通道抑制作用。使用3倍连续稀释从最大测定浓度(11uM)产生8个点浓度-响应曲线，共进行两次。以稳定表达全长hERG通道的中国仓鼠肺细胞系进行电生理记录。使用IonWorks Quattro仪器，在室温下在穿孔膜片钳配置(100ug/mL两性霉素)中测量单细胞离子电流。内部溶液含有140mM KCl、1mM MgCl2、1mMEGTA和20mM HEPES，并缓冲至pH 7.3。外部溶液含有138mM NaCl、2.7mM KCl、0.9mM CaCl2、0.5mM MgCl2、8mM Na2HPO4和1.5mM KH2PO4，并缓冲至pH 7.3。将细胞以70mV的保持电位夹持30秒，然后步进至+40mV保持1s。之后是1s的超极化步骤至30mV以引起hERG尾电流。该顺序以0.25Hz的频率重复5次。从第五脉冲的尾步骤测量电流，并参考维持电流。在使用相同的脉冲串进行hERG信号的第二次测量之前，将化合物孵育6-7分钟。每个pIC50曲线拟合需要最小17个细胞。使用对照化合物(奎尼丁)(见下表13)。
表13：hERG IC50(A：＞10uM，B：1-10uM，C：0.1M-1uM)
化合物 hERG IC50
10 A
12 A
15 A
17 A
18 A
19 A
21 A

Claims (9)

1.选自以下的化合物：
4-{5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}吗啉；
4-{5-[3-(2，4-二氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
5-[3-(2，4-二氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(烷-4-基)嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
N，N-二乙基-5-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]嘧啶-2-胺；
4-{5-[3-(2-氟-4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
4-{5-[3-(4-氯苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(烷-4-基)吡啶-2-胺；
2-(4，4-二氟哌啶-1-基)-5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶；
4-{5-[3-(5-氯吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
4-{4-甲基-5-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}吗啉；
4-{5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-4-甲基吡啶-2-基}吗啉；
5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(烷-4-基)吡啶-2-胺；
4-{5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-基}硫代吗啉；
N-环丙基-5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-胺；
5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)吡啶；
2-(4-氟哌啶-1-基)-5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶；
5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-[2-(吗啉-4-基)乙基]吡啶-2-胺；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-[2-(吗啉-4-基)乙基]吡啶-2-胺；
N-环丙基-5-[3-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-胺；
N-环丙基-5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]吡啶-2-胺；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-N-(丙烷-2-基)吡啶-2-胺
5-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
5-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
5-[3-(5-氟吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
4-{4-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}吗啉；
5-[3-(4-甲基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶；
4-{4-[3-(5-甲基吡啶-2-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}吗啉；
2-甲基-5-{2-[4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}吡啶；
5-{2-[2-氟-4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}-2-甲基吡啶；
4-{3-氟-4-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}吗啉；
5-{2-[3-氟-4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}-2-甲基吡啶；
N-{4-[3-(6-甲基吡啶-3-基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基]苯基}烷-4-胺；
5-甲基-2-{2-[4-(吡咯烷-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}吡啶；
5-{2-[4-(4-氟哌啶-1-基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-3-基}-2-甲基吡啶；
及其可药用盐。
2.药物组合物，其包含如权利要求1所述的化合物，以及一种或更多种可药用载体和/或赋形剂。
3.如权利要求1所述的化合物在制备用于治疗炎性疾病、免疫疾病或者抑制肿瘤生长的组合物中的用途。
4.如权利要求3所述的用途，其中所述炎性疾病或者免疫疾病是关节炎、滑膜炎、血管炎、舍格伦病、与肠炎症相关的病症、动脉粥样硬化、多发性硬化、阿尔茨海默病、血管性痴呆、帕金森病、脑淀粉样血管病、伴皮层下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病、肺部炎性疾病、纤维化疾病、皮肤炎性疾病、眼部炎性疾病、全身炎症反应综合征、脓毒症、肝的炎性和/或自身免疫性病症。
5.如权利要求3所述的用途，其中所述组合物用于治疗选自以下的疾病：类风湿关节炎、骨关节炎、肝纤维化、慢性阻塞性肺病、多发性硬化症、舍格伦病、阿尔茨海默病、帕金森病、炎性肠病或血管性痴呆。
6.如权利要求3所述的用途，其中所述组合物用于治疗选自以下的疾病：炎症或自身免疫性疾病。
7.如权利要求3所述的用途，其中所述组合物用于治疗选自以下的疾病：类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎和银屑病关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、肠易激综合征、哮喘、慢性阻塞性肺病、急性呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、心脏纤维化、肝纤维化、系统性硬化病、接触性皮炎、特应性皮炎、银屑病、年龄相关性黄斑变性、葡萄膜炎、糖尿病视网膜病、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、酒精性肝病、硬化性胆管炎或自身免疫性胆管炎。
8.如权利要求1所述的化合物在制备用于治疗I型糖尿病或II型糖尿病和/或其并发症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、缺血性疾病或心肌梗死和/或其并发症、或癫痫的组合物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述缺血性疾病是卒中或缺血-再灌注损伤。
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