TH28285B - เอนไซม์ที่สร้างนอน - รีดิววิงแซคคาไรด์และการเตรียมและการใช้งานของมัน - Google Patents

Abstract

ได้เปิดเผยถึงเอนไซม์ที่สร้างนอน - รีดิวซิงค์แซคคาไรด์ชนิดใหม่ การเตรียมและการใช้งานของของมันเอนไซม์นั้นได้มา จากเซลล์เพาะเลี้ยงของจุลชีพ เช่น Rhizobium sp. M - 11(FERM BP -4316) และ Arthrobacter sP.Q36 (FERMBP -4316) และสามารถสร้างนอนรีดิวซิงค์แซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเมื่อปล่อยให้ออกฤทธิ์ ต่อไฮโดรไลเลสบางส่วนของแป้ง ชนิดรีดิวซ์ กลูโคอะไมเลส และแอลฟาอะไมเลสเมื่อปล่อยให้ออกฤทธิ์ต่อนอนรีดิวซิงค์แซคคาไรด์จะได้ทรีฮาโลสออกมา นอนแซคคาไรด์เหล่านี้ และทรีฮาโลสมีประโยชน์เป็นอย่างมากต่อผลิตภัณฑ์อาหารเครื่องสำอางค์ และทางเภสัชกรรม

Claims (36)

1.เอนไซม์ที่สร้างนอน - รีดิวซิงค์แซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างที่มีทรีฮาโลส เมื่อให้ออกฤทธิ์ต่อไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์

2. เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่โครงสร้างทรีฮาโลสในนอน- รีดิวซิงแซคคาไรด์ดังกล่าว อยู่ที่หน่วยตรงปลายของมัน และไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์เป็นไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์หนึ่ง หรือมากกว่าหนึ่งชนิดทีมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซซัน 3 หรือมากกว่า

3. เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ซึ่งอนุพัทธ์จากจุลชีพ

4. เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 3 โดยที่จุลชีพดังกล่าว เป็นสมาชิกที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยพวกในสกุลRhizobium Arthrobacter Brevubacterium FlavobacteriumMicrococcus Curtobacterium Mycobacterium Terrabacter และ มิวแทนท์ของมัน

5. เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ที่มีสมบัติทางเคมีฟิสิคดังนี้ (1) การออกฤทธิ์ สร้างนอน - รีดิว ซิงค์แซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยตรงปลายเมื่อปล่อยให้ออกฤทธิ์ ต่อไฮโดรไลเลสบางส่วนของแป้งชนิดรี ดิวซ์หนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งชนิด ทีมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไลเซซัน 3 หรือมากกว่า (2) น้ำหนักโมเลกุล ประมาณ 76,000 - 87,000 ดอลตันบนโซเดียมโตเตซิล ซัลเฟต -พอลิอะคริลาไมด์เจล อีเลค โทรโฟเรซิส (SDS - PAGE) (3) จุดไอโซอีเลคทริค (Pi)ประมาณ 3.6 -4.6 บนไอโซอีเลคโทรโฟเรซิสโดยใช้แอมโฟไลท์ (4) อุณหภูมิที่เหมาะสมประมาณ 35 -40 *ซ เมื่อบ่มที่ pH 7.0 เป็นเวลา 60 นาที (5) pH ที่เหมาะสมประมาณ 6.4 -7.2 *ซ เมื่อบ่มที่ 40*ซ เป็นเวลา 60 นาที (6) ความเสถียรต่ออุณหภูมิเสถียรต่ออุณหภูมิของประมาณ 35 - 40 *ซ เมื่อบ่มที่ pH 7.0 เป็นเวลา 60 นาที (7) ความเสถียรต่อ pH เสถียรต่อpH ประมาณ 5.5-11.0 เมื่อบ่มที่ 25*ซ เป็นเวลา 16 ชั่วโมง

6. เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ที่มีลำดับของกรดอะมิโนชนิดบางส่วนหนึ่งหรือมากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย (1)x1-อาร์จินีน -ธรีโอนีน-โปรลีน -X2-ซีรีน -ธรีโอนีน -ไธโรซีน -อาร์จินีน -ลิวซีน- (โดยที่สัญลักษณ์"X1" หมายถึง วาลีน หรือ เมธิโอนีน และสัญลักษณะ "X2" หมายถึงอะลานีน หรือวาลีน ) (2) ไกลซีน-วาลีน -กลูทามีค แอซิด -แอสปาร์ติค แอซิด-ธรีโอนีน -อะลานีน -เฟนิลอะลานีน - เฟนิลอะลานีน-อาร์จินีน -ไทโรซีน (3) ลิวซีน-วาลีน-กลูตามีน -ลิวซีน-ธนรีโอนีน -เมธิโอนีน -โปรลีน -ไกลซีน -วาลีน โปรลีน และ (4) กลูตามิค แอซิด-ไกลซีน-อาร์จินีน -X3- ซีรีน -X4- ไทโรซีน --อะลานีน -X5- อะลานีน ( โดยที่สัญญลักษณ์"X3" หมายถึง ไกลซีน หรือกลูตามีน,"X4" โปรลีน หรืออาร์จินีน และ "x5" วาลีน หรือกลูตามิค แอซิด X

7.เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 2โดยที่ นอน - รีดิวเซิงแซคคาไรด์ ดังกล่าวเป็นแอลฟา -ไกล โคซิลทรีอาโลส ที่แสดงโดยสูตร Gn-T โดยสัญลักษณ์ G หมายถึงส่วนกลูโคส สัญญลักษณ์ n เป็นจำนวนเต็มหนึ่งหรือมากกว่า และสัญญลักษณ์" T" เป็นแอลฟา ,แอลฟา - ทรีฮาโลส เรวิดิว

8. กรรมวิธีสำหรับเตรียมเอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ซึ่งประกอบด้วย การเพาะเลี้ยงจุลชีพที่สามารถสร้างเอนไซม์ในอาหารเพาะเลี้ยงนิวเทรียนท์ และเก็บเอนไซม์จากเซลล์เพาะเลี้ยงที่ได้

9. กรรมวิธีของข้อถือสิทธิที่ 8 โดยที่จุลชีพดังกล่าว เป็นสมาชิกที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยพวกในสกุลRhizobium Arthrobacter Brevubacterium Flavobacterium Micrococcus Curtobacterium Mycobacterium Terrabacter และ มิวแทนท์ของมัน

10. วิธีสำหรับการลดกำลังการรีดิวซ์ของไฮโดรไลเลสบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์มีขั้นตอนของการปล่อยให้เอนไซม์ของข้อถือสิทธิข้อที่ 1 ออกฤทธิ์ต่อสารละลายที่มีไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์หนึ่งชนิดหรือมากกว่าที่มีดีกรีของกลูโคสพอริเมอ์ไรเซชัน 3 หรือมากกว่า

11. วิธีของข้อถือสิทธิที่ 10โดยที่ไฮโดรไลสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์ดังกล่าวเป็น ไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์หนึ่งชนิดหรือมากกว่าที่มีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอร์ไรเซชัน 3 หรือมากกว่า

12. นอน-รีดิวชิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลส ซึ่งผลิตโดย (a) ปล่อยให้เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ออกฤทธิต่อสารละลายที่มีไฮโดรไลเสทบางส่วน ของแป้งชนิดรีดิวซ์เพื่อให้เกิดนอน-รีดิวซิงแซคคาไรค์ดังกล่าวและ (b) เก็บนอน-รีดิวซิงแซคคาไรค์ดังกล่าวโดยมีหรือปราศจากไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้ง ชนิดรีดิวซ์ที่ครบส่วน

13. แซคคาไรด์ของข้อถือสิทธิที่ 12 โดยที่โครงสร้างทรีฮาโลสในนอน-รีดิวชิงแซคคาไรด์ ดังกล่าวอยูที่หน่วยทางปลายของมน

14. แซคคาไรด์ของข้อถือสิทธิที่ 13 โดยที่ แอลฟา-ไกลโคซิลทรีฮาโลสแสดงโดยสูตรของ Gn-T โดยสัญลักษณ์ "G" หมายถึงกลูโคส เรชิดิว สัญลักษณ์ "n" เป็นจำนวนเต็มหนึ่งหรือมากกว่า และ สัญลักษณ์"T" เป็นแอลฟา, แอลฟา-ทรีฮาโลส เรชิคิว

15. แซคคาไรด์ของข้อถือสิทธิที่ 12 โดยที่ไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์ดังกล่าวเซชัน 3 หรือมากกว่า

16. องค์ประกอบที่มีนอน-รีดิวชิงแซคคาไรด์ของข้อถือสิทธิที่ 12

17. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 16 ที่เป็นผลิตภัณฑ์อาหาร

18. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 16 ที่เป็นเครื่องสำอาง

19. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 16 ที่เป็นสารทางเภสัชกรรม

20. ทรีฮาโลสที่ผลิตได้โดยกรรมวิธีที่ประกอบรวมด้วย (a) ปล่อยให้เอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ออกฤทธิ์ต่อสารละลายที่มีไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์เพื่อให้เกิดนอน-รีดิวชิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลส (b) ให้กลูโคอะไมเลส หรือ แอลฟา-กลูโคสิเดสออกฤทธิต่อนอน-รีดิวชิงแซคคาไรด์ที่ไค้เพื่อ ให้เกิดเป็นทรีทโลส และ (c) เก็บทรีฮาโลสที่ไค้

21. ทรีฮาโลสของข้อถือสิทธิที่ 20 โดยที่ขั้นตอน (b) ยังมีตอนของการตกผลึกทรีฮาโลสดังกล่าว

22. ทรีฮาโลสของข้อถือสิทธิที่ 21 โดยที่ทรีฮาโลสดังกล่าวเป็นผลึกทรีฮาโลสชนิดไฮดรัสหเอแอนไฮดรัส

23. ทรีฮาโลสของข้อถือสิทธิที่ 20 โดยที่ของผสมที่ได้ในขั้นตอน (b) ได้รับการใส่ต่อลงใน คอลัมน์โครมาโตรกราฟีโดยใช้เรซินแลกแคทไอออนชนิดที่เป็นกรดแรงเพึ่อเพิ่มส่วนประกอบของทรีฮาโลส

24. ทรีฮาโลสของข้อถือสิทธิที่ 20 โดยที่โครงสรัางทรีฮาโลสในนอน-รีดิวซิงแซคคาไรค์ ดังกล่าวอยู่ที่หน่วยทางปลายของมัน

25. แซคคาไรด์ของข้อถือสิทธิที่ 24 โดยที่นอน-รีคิวซิงแซคคาไรด์ดังกล่าวเป็น แอลฟา-ไกลโคซิล ทรีฮาโลสที่แสดงโดยสูตรของ Gn-T โดยสัญลักษณ์ "G" หมายถึงกลูโคส เรซิดิว สัญลักษณ์"n" เป็นจำนวนเต็มหนึ่งหรือมากกว่า และ สัญลักษณ์ "T" เป็นแอลฟา, แอลฟา-ทรีฮาโลส เรซิคิว

26. ทรีฮาโลสของข้อถือสิทธิที่ 20 โดยที่ไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีคิวซ์ดังกล่าว เป็นไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีคิวซ์หนึ่งชนิดหรือมากกว่า ที่มีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไร-เซชัน 3 หรือมากกว่า

27. องค์ประกอบที่มีทรีฮาโลสที่ได้โดย (a) ปล่อยไหเอนไซม์ของข้อถือสิทธิที่ 1 ออกฤทธิต่อสารละลายที่มีไฮโดรไลเสทบางส่วน ของแป้งชนิดรีคิวซ์เพื่อให้เกิดนอน-รีคิวซิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลส (b) ให้กลูโคอะไมเลสหรือแอลฟา-กลูโคสิเดสออกฤทธิ์ตอนอน-รีคิวซิงแซคคาไรด์ที่ไรด์เพื่อ ให้เกิดเป็นทรีฮาโลส และ (c) รวมทรีฮาโลสที่ได้เข้าไปในผลิตภัณฑ์

28. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 โดยที่ขั้นตอน (b) ยังมีขั้นตอนของการตกผลึก ทรีฮาโลสดังกส่าว

29. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 28 โดยที่ทรีฮาโลสดังกล่าวเป็นผลึกทรีฮาโลสชนิด ไฮครส หรือแอนไฮดรัส

30.องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 โดยที่ของผสมที่ได้ในขั้นตอน (b) ได้รับการใส่ต่อลงในคอลัมน์ โครมาโตกราฟีโดยใช้เรซินแลกแคทไอออนชนิดที่เป็นกรดแรงเพื่อเพิ่มส่วนประกอบของทรีฮาโลส

31. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 โดยที่โครงสร้างทรีฮาโลสในนอน -รีดิวซิงแซคคาไรด์ดังกล่าวอยู่ที่หน่วยทางปลายของมัน

32. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 31 โดยที่นอน -รีดิวซิงแซคคาไรด์ดังกล่าวที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสหรือแอลฟา-ไกลโดวิลหรือฮาโลสแสดงโดยสูตรของ Gn-T โดยสัญลักษณ์ "G" หมายถึงกลูโคส เรซิดิว สัญลักษณ์"n" เป็นจำนวนเต็มหนึ่งหรือมากกว่า และ สัญลักษณ์ "T" เป็นแอลฟา, แอลฟา-ทรีฮาโลส เรซิคิว

33. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 โดยที่ไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์ดังกล่าวเป็นไฮโดรไลเสทบางส่วนของแป้งชนิดรีดิวซ์หนึ่งชนิดหรือมากกว่าที่มีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอร์ไรเซชัน 3 หรือมากกว่า

34. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 ที่เป็นผลิตภัณฑ์อาหาร

35. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 ที่เป็นเครื่องสำอาง

36. องค์ประกอบของข้อถือสิทธิที่ 27 ที่เป็นสารทางเภสัชกรรม