TH32831B - เอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลสและการเตรียมตลอดจนการใช้งาน?ของมัน - Google Patents

Abstract

ได้เปิดเผยถึงเอนไซม์ปลดปล่อยทรีฮาโลส (trehalose) ที่ไฮโดรไลซ์พันธระหว่างส่วน ทรีอาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลือในนอนรีดิวซิงแคซคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีอาโลสเป็นหน่วย ทางปลายและมีดีกรีของการพอลิเมอไลซ์กลูโคสเป็น 3 หรือมากกว่า อย่างจำเพาะ น้ำหนักโมเลกุล ของเอนไซด์เป็นประมาณ 57,000 ถึง 68,000 ดาลตันบน SDS-PAG และจุดไอโซอีเลคทริคคือ ประมาณ 3.3 ถึง 4.6 บนไอโซอีเลคโทรโฟเรซิส เอนไซม์นึ้มีประโยขน์ในการเตรียมทรีฮาโลส ในระดับอุตสากราม และทรีฮาโลสที่เตรียมโดยวิธีนี้สามารถรวมเข้าในผลิตภัณฑ์อาหาร ตลอดจน องค์ประกอบทางเครื่องสำอาง และเภสัชกรรมได้โดยสะดวก

Claims (44)

1. ขบวนการสำหรับเตรียมทรีฮาโลส (trehalose) ประกอบด้วย (a) การปล่อยให้เอนไซม์ทำปฏิกิริยาบนสารละลายที่มีนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ที่มี โครงสร้างทรีอาโลสเป็นหน่วยทางปลายและมีดีกรีกลูโคสพอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า เพื่อสร้างทรีฮาโลสเอนไซม์ดังกล่าวสามารถไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อกันพันธะรหว่างส่วนทรีฮาโลส และส่วนไกลโคซิลที่เหลืออยู่ในนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ดังกล่าว (b) การทำให้ทรีฮาโลสที่ได้บริสุทธิ์และ (c) การแยกทรีฮาโลสที่บริสุทธิ์แล้ว ออกมา

2.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวในขั้นตอน (a) ถูกใช้ไปพร้อมกับ เอนไซม์สำหรับสร้างนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ ที่สามารถสร้างนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ ชนิดหนึ่งหรือ มากกว่าที่มีโครงสร้างทรีอาโลสเป็นหน่วยทางปลายและมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า

3. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอน (a) ยังประกอบด้วยขั้นตอนของการยอมให้ กลูโคอะไมเลสทำปฏิกิริยาบนสารละลายที่ได้ในขั้นตอน (a)

4. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอน (b) ประกอบด้วยขั้นตอนการนำสารละลาย ที่ได้ที่มีทรีฮาโลสในขั้นตอน (a) ไปยังคอลัมน์โครมาโตกราฟีที่ใช้ในคอลัมน์ที่บรรจุด้วยเรซินแลก เปลี่ยนแคทไอออนที่เป็นกรดแต่เพื่อให้ทรีฮาโลสบริสุทธิ์

5. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอน (b) ยังประกอบด้วยขั้นตอนการตกผลึก ของทรีฮาโลสในสารละลายที่ได้ในขั้นตอน (b) ให้เป็นทรีฮาโลสที่เป็นผลึกในรูปไฮดรัส หรือ แอนไฮดรัส

6. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งส่วนไกลโคซิลดังกล่าวประกอบด้วยส่วนที่เหลือของ กลูโคสชนิดหนึ่งหรือมากกว่า

7. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวมีคุณสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์ ไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธระหว่างส่วนทรีฮาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลืออยู่ใน นอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคส พอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า (2)น้ำหนักโมเลกุล ประมาณ 57,000 ถึง 68,000 ตาลตันบนโซเดียมโดเดซิลเฟต -พอลิอะคริลาไมด์ เจอลอีเลคโทรเรซิส (SDS-PAGE) (3) จุดไอโซอีเลคทริค (pl) ประมาณ 3.3 ถึง 4.6 บนไอโซอีเลคโทรโฟเรซิสที่ใช้แอมโฟไลท์ (4) อุณหภูมิที่เหมาะสม ประมาณ 35-45ํซ เมื่อบ่มที่ pH 7.0 เป็นเวลา 30 นาที (5) pH ที่เหมาะสม ประมาณ 6.0 ถึง 7.5 เมื่อบ่มที่ 40ํซ เป็นเวลา 30 นาที (6) ความเสถียรต่ออุณหภูมิ เสถียรที่อุณหภูมิประมาณ 30-45ํซ เมื่อบ่มที่ pH7.0 เป็นเวลา 60 นาที และ (7) ความเถียรต่อ pH เสถียรที่ pH ประมาณ 5.0-10.0 เมื่อบ่มที่ 25 ํซ เป็นเวลา 16 ซ.ม.

8. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวมีลำดับกรดอะมิโนบางส่วนหนึ่งลำดับ หรือมากกว่าที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย (1) ลิวซีน -แอสสปาติคแอซิด -ทริพโตเฟน -อะลามีน -กลูตามิคแอซิด-อะลานีน -X1-X2- ไกลซีน- แอสปาติคแอซิด (เมื่อ X1 หมายถึง ซีรีนหรืออะลานีน และ X2 หมายถึง อะลานีน หรือกลูตามิคแอซิด) (2)แอสปาติคแอซิด -กลูตามิคแอซิด-อาร์จีนีน -อะลานีน-วาลีน-ฮิสติดีน-ไอโซลิวซีน-ลิวซีน- กลูตามิคแอซิด -X3 (เมื่อ X3 หมายถึง กลูตามิคแอซิด หรือ แอสปาติคแอซิด ) และ (3) X4 ไกลซีน -กลูตามิคแอซิด-ไกลซีน -แอสปาราจีน-ธรีโอนีน -ทริพโตเฟน --ไกลซีน - แอสปาติคแอซิด-ซีรีน (โดยที่ X4 หมายถึง ฮิสติดีน หรือ กลูตามีน )

9. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวเป็นเอนไซม์ที่อนุพัทธ์มาจากจุลชีพ

10. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวคือจุลชีพที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จุลชีพจากสกุล (Rhizobium ,Artrobacter,Brevibacterium และ Micrococcus

11. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 10 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล (Rhizobium หรือ Rhizobium sp. M-11(FERM BP-4310

12. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 10 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Arthrobacter คือ Arthrobacter sp. Q36(FERM BP-4316)

13. ขบวนการสำหรับเตรียมองค์ประกอบของแซคคาไรด์ที่มีทรีฮาโลสที่ประกอบรวมด้วย (a) การปล่อยเอนไซม์ทำปฏิกิริยาบนสารละลายที่มีนอนรีดิวชิง แซคคาไรด์ที่มี โครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลายและมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า เพื่อสร้างทรีอาโลส เอนไซม์ดังกล่าวสามารถไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธะรหว่างส่วน หรือฮาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลืออยู่ในนอนรีดิวซิง แซคคาไรด์ และ (b) การแยกองค์ประกอบของแซคคาไรด์ที่ได้ที่ีธรีฮาโลสและแซคารไรด์อื่นออกมา

14. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวในขั้นตอน (a) ถูกใช้ไปพร้อมกับ เอนไซม์สำหรับสร้างนอนรีดิวซิง แซคคาไรด์ที่สามารถสร้างนอนรีดิวซิง แซคคาไรด์ชนิดหนึ่งหรือ มากกว่า ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า

15. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ที่ซึ่งขั้นตอน (a) ยังประกอบด้วยขั้นตอนของการยอมให้ กลูโคอะไมเลสทำปฏิกิริยาบนสารละลายที่ได้ในขั้นตอน (a)

16. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ที่ซึ่งขั้นตอน (a) ยังประกอบด้วยขั้นตอนการตกผลึก ของทรีฮาโลสในสารละลานยที่ได้ในขั้นตอน (a) ให้เป็นทรีฮาโลสที่เป็นผลึกในรูปไฮดรัส หรือ แอนไฮดรัส

17. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ที่ซึ่งส่วนไกลโคซิลดักล่าวประกอบด้วยส่วนที่เหลือของ กลูโคสหนึ่งชนิดหรือมากกว่า

18.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ที่ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวมีสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์ ไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธะระหว่างส่วนทรีฮาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลืออยู่ใน นอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคส พอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า (2) น้ำหนักโมเลกุล ประมาณ 57,000 ถึง 68,000 ตาลตันบนโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต -พอลิอะคริลาไมด์ เจล อีเลคโทรโฟเรซิส (SDS-PAGE) (3) จัดไอโซอีเลคทริค (pI) ประมาณ 3.3 ถึง 4.6 บนไอโซอีเลคโทรโฟเรซินโดยใช้แอนโฟไลท์ (4) อุณหภูมิที่เหมาะสม ประมาณ 35-45 ํซ เมื่อบ่มที่ pH 7.0 เป็นเวลา 30 นาที (5) pH ที่เหมาะสม ประมาณ 60. ถึง 7.5 เมื่อบ่มที่ 40 ํซ เป็นเวลา 30 นาที (6) ความเสถียรต่ออุณหภูมิ เสถียรถึงที่อุณหภูมิประมาณ 30-45 ํซ เมื่อบ่มที่ pH7.0 เป็นเวลา 60 นาที และ (7) ความเสถียรต่อ pH เสถียรที่ pH ประมาณ 5.0 ถึง 10.0 เมื่อบ่มที่ 25 ํซ เป็นเวลา 16ซ.ม.

19. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ซึ่งเอนไซม์ดังกล่าวมีลำดับของกรดอะมิโนบางส่วน หนึ่งลำดับหรือมากกว่า ที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย (1) ลิวซีน -แอสสปาติคแอซิด -ทริพโตเฟน -อะลามีน -กลูตามิคแอซิด-อะลานีน -X1-X2- ไกลซีน- แอสปาติคแอซิด (เมื่อ X1 หมายถึง ซีรีนหรืออะลานีน และ X2 หมายถึง อะลานีน หรือกลูตามิคแอซิด) (2)แอสปาติคแอซิด -กลูตามิคแอซิด-อาร์จีนีน -อะลานีน-วาลีน-ฮิสติดีน-ไอโซลิวซีน-ลิวซีน- กลูตามิคแอซิด -X3 (เมื่อ X3 หมายถึง กลูตามิคแอซิด หรือ แอสปาติคแอซิด ) และ (3) X4 ไกลซีน -กลูตามิคแอซิด-ไกลซีน -แอสปาราจีน-ธรีโอนีน -ทริพโตเฟน -ไกลซีน - แอสปาติคแอซิด-ซีรีน (โดยที่ X4 หมายถึง ฮิสติดีน หรือ กลูตามีน )

20.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 13 ที่เอนไซม์ดังกล่าวเป็นแอนไซม์ที่อนุพัทธ์มาจากจุลชีพ

21. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 20 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าว คือ จุลชีพเลือกจากกลุ่มที่ประกอบ ด้วยจุลชีพจากสกุล (Rhizobium ,Artrobacter,Brevibacterium และ Micrococcus

22. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 21 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Rhizobium คือ Rhizobium sp. M-11(FERM BP-4310)

23. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 21 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Artrobacter คือ Artrobacter sp. Q36 (FERM BP -4316

24. ขบวนการสำหรับเตรียมองค์ประกอบที่มีทรีฮาโลส ประกอบรวมด้วย (a) การปล่อยเอนไซม์สำหรับสร้างนอนรีดิวซิง แซคคาไรด์ (I) ร่วมกับแอนไซม์ที่ ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ทำปฏิกิริยาบนสารละลายที่มีไฮโดรไลเสทของแป้งชนิดไม่สมบูรณ์ที่มี พลังรีดิวซ์ชนิดหนึ่งหรือมากกว่า ซึ่ีงมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชันเป็นเวลา 3 หรือมากกว่า เพื่อสร้าง ทรีอาโลส เอนไซม์ (I) ดังกล่าว สามารถสร้างนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ ที่มีโครงสร้างหรือฮาโลสเป็น หน่วยทางปลายและมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซซันเป็น 3 หรือมากกว่าและเอนไซด์ (II) ดังกล่าว สามารถไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธะระหว่างส่วนทรีฮาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลือ อยู่ในนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ดังกล่าว (b) การแยกทรีฮาโลสที่ได้พร้อมด้วยหรือปราศจากแซคคาไรด์อื่น ๆ และ (c)การรวรมธรีฮาโลสเข้ากับหรือปราศจากแซคคาไรด์อื่นให้เป็นวัสดุสำหรับองค์ประกอบ

25.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์อาหาร

26. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ซึ่งคือ องค์ประกอบของเครื่องสำอาง

27. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ซึ่งคือ องค์ประกอบทางเภสัชกรรม

28. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ที่ซึ่งส่วนไกลโคซิลดังกล่าว ประกอบด้วยส่วนที่เหลืออยู่ ของกลูโคสชนิดหนึ่งหรือมากกว่า

29. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ที่ซึ่งเอนไซฒ์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ดังกล่าว มีคุณสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์ ไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธะระหว่างส่วนทรีฮาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลือใน นอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคส พอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า (2) น้ำหนักโมเลกุล ประมาณ 57,000 ถึง 68,000 ตาลตันบนโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต -พอลิอะคริลาไมด์ เจลอีเลคโทรโฟเรซิส (SDS-PAGE) (3) จัดไอโซอีเลคทริค (pI) ประมาณ 3.3 ถึง 4.6 บนไอโซอีเลคโทรโฟเรซินโดยใช้แอนโฟไลท์ (4) อุณหภูมิที่เหมาะสม ประมาณ 35-45 ํซ เมื่อบ่มที่ pH 7.0 เป็นเวลา 30 นาที (5) pH ที่เหมาะสม ประมาณ 60. ถึง 7.5 เมื่อบ่มที่ 40 ํซ เป็นเวลา 30 นาที (6) ความเสถียรต่ออุณหภูมิ เสถียรถึงที่อุณหภูมิประมาณ 30-45 ํซ เมื่อบ่มที่ pH7.0 เป็นเวลา 60 นาที และ (7) ความเสถียรต่อ pH เสถียรที่ pH ประมาณ 5.0 ถึง 10.0 เมื่อบ่มที่ 25 ํซ เป็นเวลา 16ซ.ม.

30.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ซึ่งเอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ดังกล่าวมีลำดับ ของกรดอะมิโนบางส่วนหนึ่งลำดับหนึ่งหรือมากกว่าที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย (1) ลิวซีน -แอสสปาติคแอซิด -ทริพโตเฟน -อะลามีน -กลูตามิคแอซิด-อะลานีน -X1-X2- ไกลซีน- แอสปาติคแอซิด (เมื่อ X1 หมายถึง ซีรีนหรืออะลานีน และ X2 หมายถึง อะลานีน หรือกลูตามิคแอซิด) (2)แอสปาติคแอซิด -กลูตามิคแอซิด-อาร์จีนีน -อะลานีน-วาลีน-ฮิสติดีน-ไอโซลิวซีน-ลิวซีน- กลูตามิคแอซิด -X3 (เมื่อ X3 หมายถึง กลูตามิคแอซิด หรือ แอสปาติคแอซิด ) และ (3) X4 ไกลซีน -กลูตามิคแอซิด-ไกลซีน -แอสปาราจีน-ธรีโอนีน -ทริพโตเฟน -ไกลซีน - แอสปาติคแอซิด-ซีรีน (โดยที่ X4 หมายถึง ฮิสติดีน หรือ กลูตามีน )

31. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 24 ที่ซึ่งแอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ดังกล่าวเป็น เอนไซม์ที่อนุพัทธ์มาจากจุลชีพ

32. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 31 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าว คือ จุลชีพที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบ ด้วยจุลชีพจากสกุล (Rhizobium ,Artrobacter,Brevibacterium และ Micrococcus

33. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 32 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Rhizobium คือ Rhizobium sp. M-11(FERM BP-4310)

34. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 32 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Artrobacter คือ Artrobacter sp. Q36 (FERM BP -4316)

35.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1,13 หรือ 24 ที่ซึ่งสารละลายดังกล่าวมีนอนรีดิวซิง แซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชัน เป็น 3 หรือมากกว่า จะได้มาโดยการไฮโดรไลซ์บางสวนของสารละลายของสารที่มีเนื่อแป้ง โดยใช้ อะไมเลสที่มีหรือไม่มีเอนไซม์ที่เอาแขนงออก

36.วิธีการลดดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชันของการดีดิวซ์ไฮโดรไลเสทของแป้งแบบ ไม่สมบูรณ์โดยไม่เพิ่มพลังรีดิวซ์ของมัน ซึ่งประกอบด้วยขั้นตอนของการยอมให้เอนไซม์ที่สร้าง นอนรีดิวซ์ แซคคาไรด์ (1) พร้อมกับเอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ทำปฏิกิริยาบนสารละลาย ที่มีไฮโดรไลเสทของแป้งแบบไม่สมบูรณ์ที่มีพลังรีดิวซ์ ชนิดหนึ่งหรือมากกว่าที่มีดีกรีของกลูโคส พอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า เอนไซม์ (I) ดังกล่าวสมารถสร้างนอนรีดิวซ์ แซคคาไรด์ชนิด หนึ่งหรือมากกว่าที่มีโครงสร้างทรีอาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกลีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชัน เป็น 3 หรือมากกว่าและเอนไซม์ (II) ดังกล่าวสามารถไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธะรหว่างส่วน ทรีฮาโลส และส่วนไกลโคซิลที่เหลืออยู่ในนอนรีดิวซิง แซคคาไรด์ดังกล่าว

37. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 36 ที่ซึ่งส่วนไกลโคซิลดังกล่าว ประกอบด้วยส่วนที่เหลือของ กลูโคสหนึ่งชนิดหรือมากกว่า

38. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 36 ที่ซึ่งแอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ดังกล่าว มีคุณสมบัติ ทางเคมีฟิสิกส์ต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์ ไฮโดรไลซ์อย่างจำเพาะต่อพันธะระหว่างส่วนทรีฮาโลสและส่วนไกลโคซิลที่เหลือใน นอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ที่มีโครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคส พอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า (2) น้ำหนักโมเลกุล ประมาณ 57,000 ถึง 68,000 ตาลตันบนโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต -พอลิอะคริลาไมด์ เจลอีเลคโทรโฟเรซิส (SDS-PAGE) (3) จัดไอโซอีเลคทริค (pI) ประมาณ 3.3 ถึง 4.6 บนไอโซอีเลคโทรโฟเรซินโดยใช้แอนโฟไลท์ (4) อุณหภูมิที่เหมาะสม ประมาณ 35-45 ํซ เมื่อบ่มที่ pH 7.0 เป็นเวลา 30 นาที (5) pH ที่เหมาะสม ประมาณ 60. ถึง 7.5 เมื่อบ่มที่ 40 ํซ เป็นเวลา 30 นาที (6) ความเสถียรต่ออุณหภูมิ เสถียรถึงที่อุณหภูมิประมาณ 30-45 ํซ เมื่อบ่มที่ pH7.0 เป็นเวลา 60 นาที และ (7) ความเสถียรต่อ pH เสถียรที่ pH ประมาณ 5.0 ถึง 10.0 เมื่อบ่มที่ 25 ํซ เป็นเวลา 16ซ.ม.

39.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 36 ซึ่งเอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ดังกล่าว มีลำดับของ กรดอะมิโนบางส่วนหนึ่งลำดับหรือมากกว่า ที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย (1) ลิวซีน -แอสสปาติคแอซิด -ทริพโตเฟน -อะลามีน -กลูตามิคแอซิด-อะลานีน -X1-X2- ไกลซีน- แอสปาติคแอซิด (เมื่อ X1 หมายถึง ซีรีนหรืออะลานีน และ X2 หมายถึง อะลานีน หรือกลูตามิคแอซิด) (2)แอสปาติคแอซิด -กลูตามิคแอซิด-อาร์จีนีน -อะลานีน-วาลีน-ฮิสติดีน-ไอโซลิวซีน-ลิวซีน- กลูตามิคแอซิด -X3 (เมื่อ X3 หมายถึง กลูตามิคแอซิด หรือ แอสปาติคแอซิด ) และ (3) X4 ไกลซีน -กลูตามิคแอซิด-ไกลซีน -แอสปาราจีน-ธรีโอนีน -ทริพโตเฟน -ไกลซีน - แอสปาติคแอซิด-ซีรีน (โดยที่ X4 หมายถึง ฮิสติดีน หรือ กลูตามีน )

40.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 36 ซึ่งเอนไซม์ที่ปลดปล่อยทรีฮาโลส (II) ดังกล่าว เป็นแอนไซม์ ที่อนุพันธ์มาจากจุลชีพ

41. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 40 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าว คื อจุลชีพที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จุลชีพจากสกุล Rhizobium ,Artrobacter,Brevibacterium และ Micrococcus

42. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 41 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Rhizobium คือ Rhizobium sp.M-11(FERM BP-4310)

43. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 41 ที่ซึ่งจุลชีพดังกล่าวจากสกุล Artrobacter คือ Artrobacter sp. Q36 (FERM BP -4316)

44.กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 36 ที่ซึ่งสารละลายดังกล่าวที่มีนอนรีดิวซิงแซคคาไรด์ที่มี โครงสร้างทรีฮาโลสเป็นหน่วยทางปลาย และมีดีกรีของกลูโคสพอลิเมอไรเซชันเป็น 3 หรือมากกว่า จะได้มาโดยการไฮโดรไลซ์บางส่วนของสารละลายของสารที่มีเนื้อแป้งโดยใช้อะไมเลสที่มีหรือไม่มี เอนไซม์ที่เอาแขนงออก