SU786914A3 - Способ получени антибиотического комплекса - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности и касаетс  производства антибиотиков.

Предложенные антибиотики новые и способ их получени  в патентной и научно-технической литературе не описан.

Целью изобретени   вл етс  получение антибиотического комплекса общей формулы:

;оосн о он

СНдСНг .«

NlCHjlf

V

з-Т ОL-r-J Г он

о L,

где R - водород (антибиотик мусетамицин )

Нз

О

{антибиотик марцелГ

или

он

oil

ломицин).

10 Эта цель достигаетс  тем, что

штамлм Ас t i nosporang i urn sp. ATCC 31127 выращивают в аэробных услови х в питательной среде, содержащей источники азота и углерода с последующим делением из культуральной жидкости комплекса и раэлелением его на мусетамицин и марцелломицин.

Кроме того, целевой продукт выдел ют экстракцией органическим раст2Q ворителем, несмешивающимс  с водой.

А антибиотический комплекс раздел ют с помощью гель-фильтрационной хроматографии.

Мусетамицин и марцелломицин допол25 нйтел.но очищают с помо1цью жидкостной хроматографии под высоким давлением .

Штамм АсtiпоSроrangiurn sp.ATCC 31127 получен из образца почвы, вз того в Онтарио (Канада) и депонирован в Американской коллекции типов культур, Бамингтон Д.С. Штамм образует спор нгиаподобное тело (ложный cnopaHr iftJ на конце спорофоры, представл ющее собой агломерацию плотно извитой цепи спор. Споры .переплетаютс  с воздушными гифами. Спорангиеподобное тело и воздушный мицелий.образуютс  на глюкозо-аспарагиновомагаре , тирозиновом агаре, агаре с дрожжевым и солодовым экстрактом и агаре с овс ной мукой. Споры в телах спорангиевого типа гладкие на поверхности, эллипсо идальные по форме и неподвижные. Первичный мицелий разветвленный, не разделенный перегородками и не об разующий фрагменты. хорошо растет, на большинстве агаровых сред. Культуральные свойства. Сахарозо-нитратный агар. Рост умеренный, субстратный мицелий желтовато-красный , воздушный мицелий скудный, беловатый, пигмент отсутствует . Глюкозо-аспарагиновый агар. Рост хороший, субстратный мицелий от крас новато-оранжевого ,до красного, воздушный мицелий обильныйJ с сероватой листвой, пигмент - отсутствует или красновато-оранжевый. Глицерино-аспарагиновый агар. Рос хороший, субстратный мицелий розовый воздушный мицелий умеренный светлосерый до бледно-розового, пигмент от сутствует или красновато-розовый. Крахмальный агар с неорганическими сол ми. Рост умеренный, субстратный мицелий красновато-оранжевый до  рко-красного, воздушный мицелий пло хой, зеленовата  листва, пигмент све ло-оранжевый, частично светло-желтый Тирозиновый агар. Рост хороший, субстратный мицелий бурый до красновато-бурого , субстратный мицелий зеленовата , листва, пигмент темиобурый Агар с солодовым н дрожжевым экст рактом. Рост хороший, субстратный мицелий  рко-красный(Воздушный мицелий умеренный, цвета аероватой листв частично зеленовато-розовой, пигмент светлобурый. Агар с овс ной мукой. Рост умеренный , субстратный мицелий  ркий красновато-оранжевый, воздушный мицелий цвета сероватой листвы,пигмент  рко-оранжевый. Физиологические свойства. Оптимальный рост при 28-с. Умерен ный рост при 20-37°С. Медленный рост при , не растет при 10° и . Нитраты восстанавливает, на агаре со сн тым молоком образует мицелиаль ный пигмент от  рко-желтовато-красно го до пурпурного цвета. 10%-ний раствор сн того молока не пептонизирует и не коагулирует, о.кра шивает в красновато-оранжевый цвет. Желатин разжижает, меланин образует . Усваивает арабинозу, О-ксилозу, рибозу, L-рамнозу, D-глюкозу, О-галактозу , фруктозу, маннозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, мелабиозу, раффинозу , растворимый крахмал, глицерин, инозит, маннит. Не усваивает 0-арабинозу, малезитозу , целлюлозу, сорбит, фульцит. Антибиотический комплекс получают культивированием штамма Асtimosporanglum sp. АТСС 31127 в аэробных услови х в водной питательной среде, содержащей -усваив.емые источники углерода , например сахарозу, лактозу, мальтозу, маннозу, фруктозу, глюкозу, глицерин и растворимый крахмал. В качестве усваиваемого источника азота используют, например, рыбную муку, пептон, соевую муку, арахисовый порошок , порошок сем н хлопчатника или кукурузный экстракт. В среду также ввод т неорганические соли, такие как соли натри , кали , аммони , кальци , фосфата, сульфата, хлорида, бромида, нитрата, карбоната. Выращивание осуществл ют при тем (Пературе 20-37-С, предпочтительно при температуре 270с. Среда должна быть слабощелочна . Ферментацию провод т в колбах Эрленмейера или ферментерах разной емкости . Дл  ферментации в резервуарах получают затравочный материал в питательном бульоне путем инокул ции небольшого объема культуральной среды. Затравку перенос т в асептических услови х в резервуар с ферментативной средой. В культуральную среду вдувают стерильный воздух. Получение антибиотического комплекса достигают после инкубации в течение 190-210 ч во взбалтываемых ферментерах . За ходом ферментации след т путем анализа ферментативной среды на воздействие организма, чувствительного к комплексу, например D.pneum oniac, St.pyogefies или S.aureus. Антибиотический комплекс извлекают из ферментативной среды экстрагированием не смешивающимс  с водой органическим растворителем, как этилацетат, метилизобутилкетон или н-бутанол при рН 7,5-8,5. Органическую фазу затем фильтруют и высушивают с получением твердого комплекса. Антибиотики мусеттамицин и марцелломицин разде.п ют друг от друга и других компонентов комплекса хроматографией на колонке, заполненного сефадексом LH - 20. Компоненты комплекса затем элюируют из адсорбента подход щим органическим растворителем, таким как хлороформ . Многочнс.ченные фракции со- бирают и при полход щем разведении. определ ют их адсорбирующую способность при 490 нм. Полученные величины нанос  на график в зависимости от номеров фракций дл  определени  пиков дл  компонентов элюированных из колонки. Подход щие. фракции соедин ют и упаривают с по- лучением отдельных твердых антибиотиков .

Исследуемый организм

Бактерии

Streptococcus pnemoniae

Streptococcus pyogenus

Staphy1ococcus aureus

Staphy1ococcus aureus

Escherichia coli

Escherichia coli

Rlebsiella pneumoniae

Proteus mirabilis Грибки

Минимальные ингибиторные концентрации , лег/мм Компоненты мусетамицин и марцелломицин подвергают дальнейшей очистке с применением жидкостной хроматографии под высоким давлением, в табл. 1 представлен противомикробный спектр мусетамицина и марцеломицина . Таблица 1

LDgQ, дающа  острое отравление при внутрибрюшинном введении мышам, составл ет 9,8-21,12 мк/кг мусетамицина и 6,35-10,56 мг/кг дл  марцелломицина Обработка животных ферментативным бульоном, содер кащим антибиотический комплекс, вызывает 73% ингибировани  роста опухолей по сравнению с необработанными контрольными опухол ми. Антибиотический комплекс и его компоненты мусетамицин и марцелломицин , их соли и смеси оказывают как противомикробное, так и противоопухолевое действие. Препараты могут быть в любой лекарственной форме - таблетках, капсулах , пилюл х, порошках и гранулах, а также жидкие препараты дл  пероралького введени , такие как растворы, суспензии, сиропы и элексиры. Дл  применени  в качестве антибактериального средства препараты ввод т в организм таким образом, что бы концентраци  активного ингредиента превышала минимальную ингибиторную концентрацию. Дозировка дл  применени  в качестве противоопухолевого средства дл  млекопитающего составл ет 2,5-10 мг/м при однократной инъекции дл  марцелломицина и 10-40 мг/м при однократной инъекции дл  мусетамицина. Способ по сн етс  следующими примерами . Пример 1. Штамм микроорганизма Actinosporangiurn sp. ( ATCC 31127) выращивают на среде косого агара, содержащей 2 г Б -глюкозы, 20 г овс ной муки, 2 г соевого пептона и 2 г агара в одном литре дистиллированной воды. После вУращивани  в течение не менее 6 дней при . 27°С споры перенос т в колбу Эрленмейера емкостью в 500 мл, содержащую 100 мл стерильной среды, содержащей 30 гD-глюкозы, 10 г соевой муки, 10 г Фармамедиа и 3 г CaCOj на один литр дистиллированной воды. Полученhyi:; ;супьтуру выдерживают в термостате при 2.1-С во взбалтыгзающем много русном смесителе, дел иощем 210 об/ /мин. Через 48 ч 4 млкультуры перенос т в колбу Эрлеымейера емкостью 500 МЛ, содержащую 100 мл стерильной продуцирующей среды, содержащей 50 г глицерина, 20 г соевой муки, 10 г арахисового порошка и 10 г CaCQj на один литр дистиллиЕЗОванной воды. Культуру выдерл ивают в термостате при в течение 144 часов, помещенном в устройстве дл  взбалтывани , производ щего 230 об/мин. В этот момент определ ют антибиотическую активность культурального и фильтрата , про вл ющуюс  за счет антибиотического комплекса кислоты.

П р и м .е р 2. Антибиотический комплекс получают в ферментерах со взбалтыванием с применением 48-часоБОй культуры, описанной в примере 1. 400 мл культуры перенос т в 10 л стерильной продуцирующей среды, описанной в примере 1, содержащей 0,01% силиконового антипенного средства Ходак Р1, содержащейс  во взбалтывателе емкостью 14 л. Взбалтыватель устанавливают в систему ферментеров. Поддерживают температуру , скорость потока воздуха (i л/мин, скорость перемешивани  300 06./МИН. Антипенное средство Ходаг Р1 подают автоматически по мере необходимости дл  контрол  пенообразовани . Примерно через 210 ч инкубацию заканчивают, и -в культуральной среде и мицеллии наход т антибиотический комплекс. Пример 3. Ферментер-резервуар с 37,8 л стерильной продуцирующей среды (как в п.римере 1) инокулируют 1,89 л вегетативной культуры (полученной по методике примера 1}, и смесь перемешивают с помощью пропеллерной мешалки, делающей 300 оборото в минуту,. осуществл ют аэрацию со скоростью 85 л/мин, и смесь выдерживают в термостате при в течение 190 ч. В культуральном фильтрате.и мицелии наход т антибиотический комплекс .

Пример 4. Резервуар-ферментер с 3028 л продуцирующей среды (см пример 1) инокулируют 152 л вегетативной культуры (получение см. в примере 1 , перемешиваемой пропеллерной мешалкой, делающей 155 об/мин, аэрируют при скорости подачи воздуха 141,6 л/мин и выдерживают при в течение 190 ч. В этот момент в культуральном фильтрате и мицелии обнаруживают присутствие комплекса.

Пример 5. Весь.ферментативный бульон (7 л) со значением рН 8,1 перемешивают с равным объемом метилизобутилкетона в течение 20-30 мин. Затем добавл ют большое количество диатомовой земли в качестве фильтрую цего средства и после тщательного перемешивани  смеси ее фильтруют через фильтровальное средство при ва- куумировании. Фильтрат раздел ют на две фазы, из которых нижнюю (водную отбрасывают. Органическую фазу упаривают под вакуумом до небольшого объема (50-100 мл),разбавл ют Скеллисольвом В и осаждают твердое вещество  рко-красного цвета, которое высушивают под вакуумом с получением 1,9 г комплекса.

Пример 6. Весь ферментативный бульон (8000 л) при pri 8,0-8,5 охлаждгшт до и интенсивно- перемешивают с 3000 л метилизобутилкетона в течение 30 мин при 20-ЗООс. К эмульсии добавл ют 360 кг фильтровального средства и смесь интенсивно перемешивают в течение еще одного часа . Затем смесь отстаивают в течение примерно 30 мин, после чего 23002500 л органической фазы декантируют и охлаждают до . Добавл ют еще 800 л метилизобутилкетона при перемешивании смеси в течение 20 мин, декантируют после отстаивани  в течение 30 мин и смесь соедин ют с охлажденной первой фракцией с получением общего объема экстракта 33003400 л. Смесь фильтруют с получением i,B конечном счете 3100-3200 л метилизобутилкетонового экстракта, не содержацдего твердых частиц и нерастворимой водной фазы. Органический экстракт концентрируют под вакуумом при О-Ю-с до окончательного объема 6 л. Полученный концентрат добавл ют к 60 л Скеллисольва В с перемешиванием при 20-25°С. Выпавший осадок собирают на нутч-фильтре, промывают 10 л Скеллисольва В и отсасывают с получением 900-1000 г несколько масл нистого и темно-красного аморфного продукта. Полученный продукт перемешивают с избытком эфира, фильтруют через воронку Бюхнера, промывают дополнительным количеством эфира, отсасывают в состо нии и высушивают под вакуумом с получением 351 г аморфного антибиотического комплекса красного цвета.

Пример 7. Сефадекс LH-20, пропитанный в течение 68 ч хлороформом , помещают в колонку, заполненную продуктом Фармасиа SK 25/100 (внутренний диаметр - 25 мм, высота - 100 TvUvi) , снабженную с каждого конца регулируемыми насадками из тефлона . Коло1П у наполн ют таким образом , чтобы она оыла полностью наполнена от одного конца до другого с образованием эффективного сло  высотой 90-95 см. Комплекс богеминовой кислоты (500 мг) раствор ют в 10 мл хлороформа и ввод т в колонку, которую затем .про вл ют хлороформом, пропускаем1г;1м сгре-рху вниз со скорое- тью 1 мл/мин. .1 актированную жидкость собирают в виде фракций по 6 мл в сборнике фракций. Образцы, помещенны в пронумерованные пробирки, разбавл ют 80-ти кратным количеством хлоро форма и помещают в калориметр Боша при 490 MJU. Отмечают четыре следующие полосы антрациклиновых пигмента: P пробиркиВес после упаривани  1-4 5-11 Перва  полоса 66 мг 12-14 15-21 Втора  полоса 36 мг 22-35 36-44 Треть  полоса 18 мг 4546-57 Четверта  полоса 48 мг 58 Полученные твердые вещества хроматографируют на силикагеле Бринкман на 607254, помещенном на пластины дл  тонкослойной хроматографии, с применением системы растворителей, содержащей толуол и метанол (80:20) . Перва  полоса, как показывают резуль таты тонкослойной хроматографии, отражает комплексную неактивную смесь. Втора  полоса дает характерную оранжево-красную зону с величиной R 0,75. Эта фракци  также неактивна, и, как было найдено, она содержит преимущественно пирромицинон. Треть  фракци  элюировани  образует единичную зону с величиной Rj, равной при мерно 0,3. Эта фракци , как было установлено , соответствует .мусетамицин обладающему высокой активностью при испытании на системах лейкемий L-121 и Р-388 у мышей. Последн   полоса да ет зону со значением R, примерно 0,3 и содержит преимущественно марцелломицин . Этот компонент также обладает высокой активностью при испытании на два типа лейкемий у мышей. Хот  как мусетамицин, так и марцелфракци  Описани

0

1-й компонент, смесь , неактивный 6,74 44

2-й компонент, смесь, неактивный 53 впадина - отбрасывают 70

3-й компонент, одно соединение мусетамицин , активный

75

впадина - отбрасывают 110

4-й компонент, смесь, содержаща  преимущественно марцелломицин, активный

-2.00 последующие фракции

показано тонкослойной хроматографией

XX преимущественно п -пирримицинон.

XX

4,18

0,385

1,45 0,198

4,03 1,72 ломицин при тонкослой})ой хроматографии дают величину R, , составл ющую примерно 0,3, мусетамицин движетс f немного быстрее. При разделении смеси мусеттамицина и марцелломицина образуютс  две зоны, весьма близкие по цвету. Пример 8. Стекл нную колонку диаметром 15,2 см и высотой 184 см снабжают у ее основани  незабивающимс  фильтром, на вершину которого помещают слой стекловолокна, а еще выше круглую пластинку из полиэтилена. Последнюю отрезают до диаметра 14,9 см с целью набухами  в хлороформе . Сефадекс , 8,73 кг перемешивают в течение 3 ч в хлороформе; фильтруют и твердый материал повторно наслаивают хлороформом, после чего отстаивают в течеьиге 16 ч. Смесь затем перемешивают в 15 -пп и загружают в колонку. 30 i- образца комплекса (получение отглсано з примере 6} нагревагот с 1,5 л хлороформа в течение 15 мин, а затем леремешивают в течение 16 ч. После филыровани  отдел ют 7,5 г нерастворенного материала, содержащего некоторое количество активного вещества. Фильтрат ввод т в колонку и начинают вести про вление хлороформо:-, подаваемым сверху вниз. В теченне всей операции поддерживают скорость потока хлороформа 16 мл/мин. Перед тем, как цветообразование достигнет дна сло  гел , начальный объем элюента л ет 1445 мл. В этот л омеит собирать фракции по 100 мл,- и эту операцию продоллсают до получени  совершенно светлой жидкости (всего 906 фракций) . Равные 1 оличества как.цбй п той фракции разбавл ют и поднергают анализу, как описано в npiiwepe 7, Четыре компонента, способны к разделению , что показано . Т ц а 2 Вес после у париваии  , г

П р и м ер 9. Твердое вещество 421,4 мг, полученное из третьего компонента примера 8, раствор ют в избытке кип щего хлороформа, и раствор фильтруют в гор чем состо нии через гофрированную фильтровальную Зумагу. Фильтрат кип т т до получени менее 20 мл на паровой бане. Затем к теплому раствору добавл ют Скеллисольв В до достижени  момента помутнени , после чего добавл ют несколько капель хлороформа. После ох лаждени  до температуры окружаюгцей среды смесь помещают на ночь в холодильник при -20°С. Собирают кристаллические пластинки  рко-красного цвета и высушивают под вакуумом с получением 358 мг мусетамицина, т.пл. 162-1бЗОс.

Пример 10. Мусетамицин, промытый этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТК) , пропускают через четыре системы колонок jU-СТИРАГЕЛЬ с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы со.скоростью потока 0,7 мл/мин в начале процесса. Производ т дев ть опытов с использов нкем по 100 г. Элюирование записывают с помощью детектора показател  преломлени  и собирают фракции, дающие основной пик (37,5-45 мин). Осйовную фракцию, вз тую из дев ти опытов, соедин ют иупаривают досуха под вакуумом. Аморфное твердое вещество темно-красного цвета 660 мг раствор ют в 22 мл смеси растворителей (45:55) из ацетонитрила и 0,01 М ацетата натри , рН 4,0. Смесь центрифугируют дл  удалени  небольшого количества .суспендированного материала, и прозрачный верхний слой перенос т в за.крытую пенициллиновую скл нку. Часть (1,25 мл, примерно 37 мг) раствора темно-красного цвета загружают.в инъектор, а затем образе загружают в колонку. Образец хроматографируют в колонке из нержавеющей стали длиной 1 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной Фенил/ПОРАСКЛОМ В (размеры частиц 3775 мкм). Подвижна  фа5а содержит смесь ацетонитрила и 0,01 М ацетата натри  (35:65) с рН 4,0 (скорость потока - 1,9-2,0 мл/мин). Элюирование записывают с помощью регистратора показател  преломлени . Фракции собирают с интервалами в 75 с с помощью автоматического сборщика фракций . Собирают фракции в 120 пробирок и колонку промываЕот со скоростью 3,0 MJi/мин метанолом в течение 15 мин, водой в течение 15 м-ин, смесью ацетонитрила и 0-,01 М ацетата нари  (35:65) при рН 4 в течение 15 ми Скорость потока снижают до 2,0 мл/ми и систему нейтрализуют за 5 мин пере инъецированием. По 25 мкм элюента ка5кдой п той пробирки хроматографируют на аналитической системе дл  оп

ределени  состава перед комбинированием пробирок. Аналитическа  система содержит колонку из нержавеющей стали длиной 61 см и внутренним диаметром .2,1 мм, заполненную Фенил/КОРАСИЛОМ .(состоит из твердых стекл нных шари-j ков, покрытых одним слоем кремнезема, к которому присоединен дифенилдихлорсилан , размер частиц 37-50 мкм).

Подвижна  фаза представл ет собой смесь (45:55) ацетонитрила с 0,01 М ацетатом натри  с рН 4., О, при скорости потока 0,7 мл/мин. Элюент записывают с помощью УФ-детектора при 254 нм. Комбина.ию пробирок выполн ют на основании анализа хроматограмм. Пробирки 21-120 содержат целевой мусеттамицин . Содержимое этих пробирок соедин ют и упаривают под вакуумом (45°С). Остатки темно-красного цвета промывают несколько раз метанолом и дважды по 100 мл дихлорметаном. Остаток затем растирают со 100 мл хлороформа и фильтруют дл  удалени  неорганических солей. Твердый осадок затем упаривают досуха с помощью сухого азота и высушивают под вакуумом с помощью фосфорного ангидрида.

Мусеттамнцин, очищенный по методике , приведенной выше, характеризуетс  следующими данными:

Кристаллический порошок темнокрасного цвета.

Молекул рна  формула: .Молекул рный вес: 715,76.

Элементарный анализ:

Теоретически: С 60,41; Н 6,34; N 1,95.

Найдено: С 60,27; Н 6,59;Kl,99.

Учитыва  поправки на присутствие 0,83 воды и 0,83 остатка:

С 60,27,. Н 6,50, N 1,99.

ИК-спектр: Спектр поглощени  инфракрасных лучей дл  мусеттамицина ( гранулы КВг)показывает большие полосы при следующих длинах волн: 3480, 2970, 2930, 2820, 2770, 1735, 1600, 1450, 1320, 1295, 1220, 1160, 1010 и 990 см

УФ-спектр: При концентрации 0,013 г/л в метаноле мусеттамицин показывает с.педующие максимумы поглощени : 233 MJU, 57,7, 256 ми, 33,2, 284 MJJ, 14,5, 466 MJJ, 14,3, 490 мд(, 17,4, 510 мр, 14,6, 524 MJJ, 12,9 и 570 мМ, 3,3.

Т. пл. 210-2120С.

Растворим в большинстве органических растворителей, нерастворим в воде , алифатических углеводородах и эфире.

Claims (2)

1. Пример 11. Неочищенный марцелломицин , промытый ЭДТК, подвергают начальной очистке с применением системы из четырех колонок -СТИРАГЕЛЯ при использовании хлороформа в качестве подвижной фазы. Скорость потока дл  такого разделени  составл ет 0,6-0,7 МП/мин, и Элюирование записывают с помощью детектора показател  преломлени . Производ т 10 проходов по 100 мг, ив каждом случае 1робирают фракцию, элюирование которо происходит за 26-32 мин. Основную фракцию из 10 пропусканий соедин ют и упаривают досуха под вакуумом. Аморфное твердое вещество темно-крас ного цвета раздел ют на 25 фракций по 30-35 мг. Каждую фракцию раствор  ют в 1,0 мл смеси (45:55) ацетонитрила и 0,01 М ацетата натри  (рН 4,O непосредственно перед загрузкой в хр матографическую систему, представл ющую собой колонку из нержавеющей стали размером 1 м х4,6 мм,заполненн Фенил/ПОРАСИЛОМ В (содержит совершенно пористый кремнезем с жидкой фа зой из дифенилдихлорсилана, химическ св занного с кремнеземом (размеры частиц - 37-75 мкм). Подвижной фазой  вл етс  смесь (45:55) ацетоннтрила и 0,01 М ацетата натри , рН составл ет 4,0, скорость потока 3,0 мл/мин Элюирование записывают с помощью монитора разности показателей преломлени . Фракции собирают с интервалом 1,О минуты с помощью сборщика фракци М 1. Содержимое 59 пробирок собирают и колонку промывают со скоростью потока 4,0 мл/мин ацетонитрилом и в течение 15 мин подвижной фазой перед инъецированием. Элюенты, содержащивс  в каждой п той пробирке, хроматографируют на аналитической системе , после чего содержимое пробирок соедин ют. Ан алитическа  система пре ставл ет собой колонку из нержавеющей стали длиной 61 см и внутренним диаметром 2,1 мм, заполненной Фенил /КОРАСИЛОМ (содержит твердые стекл нные шарики, покрытые одним слоем кремнезема, к которому химически при соединен дифенилдихлорсилан(размер частиц - 37-50 мкм). Подвижна  фаза содержит смесь (45:55) ацетонитрила с 0,01 М ацетатом натри  (рИ 4,0}, скорость потока 0,68-7,0 мл/мин. Элюирование записывают с помощью УФ-детектора при 254 ммкм.В эту систему инъецируют 25 мл элюеита. Комбинацию пробирок производ т на основании аналитических хроматограмм. В общем, как было установлено, пробирки 18-35 содержат исключительно целевой марцелломицин. Содержимые этих пробирок соедин ют и упаривают досуха под вакуумом при . Остаток быстро промывают метанолом и дважды по 100 мл дихлорметана. Остаток растирают с 75 мл дихлорметана и смесь отфильтровывают. Фильтрат упаривают под вакуумом (45°С) досуха . Ярко-красный остаток затем высушивают в высоком вакууме над фосфорным ангидридом. Марцелломицин после описанной выше очистки характеризуетс  следующими данными: Аморфный порошок темно-красного ивета. Молекул рна  формула: C SS -IT Молекул рный вес: 845,90. Элементарный анализ: Теоретически: С 59,64; Н 6,55; N 1,65; о 32,15. Найдено: С 56,32; Н 6,64; N1,74. Поправка на воду и.остаток: С 58,77;-Н 6,77; N 1,82. ИК-спектр: Спектр поглощени  инфракрасных лучей дл  марцелломицина (гранулы КВг) показывает большие полосы со следующими длинами волн: 3450, 2960, 2940, 2820, 2790, 1730, 1615, 1600, 1450, 1260, 1095, 1010 и 800 см. УФ-спектр: При концентрации 0,013 г/л в метаноле марцелломицин показывает следующие максимумы и адсорьционные способности: 233 Mf(, 47,5, 256 мм, плато, 24,7; 284 M|J, плато, 10,6; 490 м/х, 15,8; 410 MjL), плато, 3,4; 4,65 Mju, плато, 13,2; 480 м ц, плато, 14,7; 510 м|а, плато, 12,5; 524 м|ц, плато,, 10,6; 580 MjD, плато, 1,1. Точка плавлени : разм гчение при 134-135- С, постепенное загустевание без плавлени  при температуре до 300°С. Предлагаемый способ позвол ет получить антибиотический комплекс, содержащий антибиотики марцелломицин и мусеттамицин, обладающие противоопухолевым действием. Формула изобретени  1. Способ получени  антибиотического комплекса общей формулы СООСИ О ОН Р ОН О ОН СНзу н I К(СНз)2 J U-r-г он о где R - водород (антибиотик мусеттамицин ) ( антибиотик марцелломицин ,

   157869141.6

   отличающийс  тем, чточеским растворителем, несмешивающимс 

   штамм Асtinosporang urn sp. ATCC 31127с водой.

   выращивают в аэробных услови х в пи- 3, Способ по п. 1, отличаютательной среде, со, источникищ и и с   тем, что антибиотический

   азота и углерода с последующим выде-ко «7лекс раздел ют с помощью гельлением из культуральЕЮй жидкости ком- „Фильтрационной хроматографии, плекса и.разделении его на мусета мацин 4 Способ по п. 1, отличаюи марцелломицин.щ и и с   тем, что мусетамицин и
2. 2. Способ по П.1, отлича-марцелломицнн дополнительно очищают

   ю щ и и с   тем, что целевой про-с помощью жидкостной хроматографии

   дукт выдел ют экстракцией органи-под высоким давлением.