JPS6046960B2 - 抗生物質化合物類 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規のアンスラシクリン抗生物質類とそれらの
製法おび回収法に関する。

多数のアンスラシクリン配糖体類が文献に記載されてい
る。

これらの内でドーノマイシンとアドリアマイシンが特に
癌の化学療法分野で非常に興味をもつて視られておりま
た既に人の癌に臨床的に使用されている。Ｓ．ペウセチ
カス変種シージアスの醸酵によるアドリアマイシンの製
造は米国特許第３５９００２８号に発表されている。

ドーノマイシンのアドリアマイシンへの化学的転化は米
国特許第３８０３１２４号に記載されている。冫 ドー
ノマイシン（英国特許第１００３３８３号のＳ．ペウセ
チカスの酪酵によつて製造された。

）ローンーポーレンの１３０５７Ｒ．Ｐ（以前はルビド
マイシンで現在はドーノリビシンニ英国特許第８５５９
８号、第１１８８２屹号および第１２４７５０号および
米国特許第３６１６２招号参照）と同じでありまた多分
チバのダヌボマイシン（米国特許第２０９２５５０号お
よび英国特許第９０１８３鰻に発表された。）と同一の
ものであろう。ジヒドロドーノマイシンについて米国特
許第３６８６１６３号も参照されたい。アグルコンＥ−
ピロマイシンの配糖体であるシネルピンＡとシネルピン
Ｂは英国特許第８４６１（９）号に発表されている。

〔米国特許第３８６４４冊号およびケルラー シールラ
インらのＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂｉａｌＡｑｅｎｔｓａｎ
ｄＣｈｅｍＯｔｈｅｒａｐｙ，６８ページ（１９７０）
およびＣｈｅｍｉｃａｌＡＳｔｒａｃｔｓ量１４６６１
（１９６０）も参照〕Ｊ．ＡｒｌｔｉｂｌＯｔｉｃＯ？
、２５４−２５９（１９７４）、西ドイツ特許第２３６
２７０７およびＪ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ，．ＳＯｃ？平
勇、５９５５（１９７５）に記載されているアンスラシ
クリン配糖体カルミノマイシンは種々の動物の腫瘍類に
対し活性あると報告されている。

トリパノマイシンはＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂｉａｌＡｑｅ
ｎｔｓａｎｄＣｈｅｍＯｔｈｅｒａｐｙ↓、３８５（１
９７２）に強力な原生動物抑制活性をもつと記載されて
いる。

それはε ピロマイシノンと似たアグルコン（Ａｇｌｙ
ｃＯｒ）ｅ）をもつているが同一ではない。

Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．？、１９０４（９５９）に記載の抗
生物質ピロマイシンはアグルコンＥ−ピロマイシノンお
よび配糖体の糖ロドサミンを含む。更にアンスラシクリ
ン抗生物質の例と綜合文献については米国特許ペンシル
バニア州ステートカレツヂの大学パークブレスのハマオ
，ウメザワ監修の１ｎｄｅｘ０ｆＡｎｔｉｂｉ０ｔｉｃ
ｓｆｒ０ｍＡｃｔｉｎ０ｍｙｃｅｔｅｓ（１９６７）の
次のものを参照されたい：デービドゴツトリープおよび
ボールＤ．シヨウ著（ニューヨーク州ニューヨーク市ス
プリンガーー出版ニューヨーク社）ＴｅｘｂＯＯｋＡｎ
ｔｉｂｉＯｔｉｃｓ巻１、ＭｅｃｈａｎｉｓｍＯｆＡｃ
ｔｌＯｎ，ｌ９Ｏ−２１０ページ（１９６７）にＡ．ジ
マルコによるドーノマイシンとその関係抗生物質と題す
る文献がある。

ベルギー１９７２年１２月のＷＨＯと合作のＩｎｆＯｒ
ｍｌａｔｊＯｎＢｕｌｌｅｔｉｎ，ＮＯ．ｌＯ，．Ｉｎ
ｔｅｒｒｌａｔｉＯｎａｌＣｅｎｔｅｒＯｆＩｎｆＯｒ
ｍａｔｉＯＮＯｆＡｎｔｉｂｉＯｔｉｃｓにアンスラシ
クリン類とその誘導体類が記載されている。

本発明は新のアンスラシクリン抗生物質に関する。特に
本発明は本明細書でボヘミツクアシツド混合物というア
ンスラシクリン抗生物質混合物（即ち以下にのべるミユ
ーゼツタマイシンとマー）セロマイシンの混合物をいう
）に関するもので、上記混合物はアクチノスポランジア
ムＳｐ．，最もよいのはアクチノスポランジアムＳｐ．
Ａ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３ｌｌ２７のボヘミツクアシツドを生
成する種族を水中好気性条件のもとで窒素および炭素の
同化性・源を含む水性栄養媒質中で上記有機体によつて
上記ボヘミツクアシツド混合物の実質量が生成される迄
培養しかつ任意に培養媒質から混合物を回収することに
よつて生成される。また本発明によつて全醗酵スープを
水と混和しない有機溶媒で抽出・した後クロマトグラフ
法の様な方法で種々の抗生物質化合物に分離と単離して
つくられるボヘミツクシツド混合物の二つの新規の生物
活性アンスラシクリン成分が提供される。ボヘミツクア
シツド混合物および本明細書でミユーゼツタマイシンお
よびマーセロマイシンというその生物活性成分は共に抗
菌活性および抗腫瘍活性を示すものである。ボヘミツク
アシツド混合物およびその成分であるマーセロマイシン
とミユーゼツタマイシンはアクチノスポランジアム（Ａ
ＣｔｉｒＫ）ＳＰＯｒａｎｇｉＵｎｌ）Ｓｐ．種Ｃ−３
ｅＫ１４５−２というアクチノスポランジアム属の新種
の醗酵によつて生成出来る。上記微生物はカナダ、オン
タリオ州からとつた土壌試料から得られた。この微生物
の培養はワシントン、Ｄ．Ｃ．のアメリカ型培養コレク
ション中に委託されておりＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３ｌｌ２７
としてとの永久微生物コレクション中に加えられている
。また微生物は昭和５詳４月１日に工業技術院微生物工
業技術研究所に委託された。（微工研菌寄第４０１８号
，ＦＥＲＭ一ＰＮＯ．４Ｏｌ３）多くの抗生物質培養製
造の場合の様にアクチノスポランジアムＳｐ．種Ｃ−３
６１４＼Ａ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３ｌｌ２７の醗酵は成分物質
の混合物の製造となる。

２生物活性アンラシクリン、即ちミユーゼツタマイシン
とマーセロマイシンは上記有機体によつて製造されたが
ボヘミツクアシツド混合物から分離さている。

ミユーゼツタマイシンとマーセロマイシンは次の構造式
：をもつと決定されている。

図に示すとおり上記成分の双方はアグルコンＥ−ピロマ
イシノンのアンスラシクリン配糖体類である。

ミユーゼツタマイシンは配糖体の糖２単位、Ｒ１ち２−
デオキシーＬ−フコーゼおよびＬ−ロドサミンをもつが
、マーセロマイシンは２−デオキシーＬ−アコーゼ２単
位とＬ−ロドサミン１単位をもつ。

成分の構造はそれらの赤外線および核磁気共鳴スペクト
ル分析により決定され下記物理的データと一致する。上
式中点線は結合基がその結合している環面の下に一部位
置していることを示している。

スパイク印は結合基が環面の上に位置していることを示
している。ボヘミツクアシツド混合物および個々のミユ
ーゼツタマイシンとマーセロマイシン成分は酸類、塩基
類双方と塩を生成するし混合物および成分の製薬上許容
される塩類も本発明の範囲内に包含される。

この製薬上許容される塩類には塩酸、臭化水素酸、硫酸
、硝酸および燐酸の様な強酸および金属陽イオン、例え
ばナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウ
ムの様なアルカリ金属又はアルカリ土金属陽イオンとの
塩類がある。本発明の新規のアンスラシクリン抗生物質
の製法を次に記述する。微生物 Ｃ−３６１４喝は次の形態学的特性をもつ。

この種は密に巻いた芽胞鎖の集合てある芽胞柄の先に芽
胞嚢様のもの（偽芽胞嚢）を形成する。芽胞鎖は近くの
気生菌糸としばしば組合つた粘質物質でおわれた芽胞嚢
状構造となる。芽胞膏状体と気生菌糸はグルコ−スーア
スパラギン培養基、チロシン培養基、酵母抽出一麦芽抽
出培養基およびオートミール培養基上で生成される。多
数の偽芽胞嚢の生成の他に数はずつと少いが開螺旋形の
普通の芽胞鎖も生成される。芽胞嚢状体中の芽胞は表面
滑かな長楕円体形をしており自動性でない。普通の芽胞
鎖中の芽胞は玉子形であり表面滑らかて又は時にはいぼ
いぼがある。元来の菌糸は枝分れし芽胞壁がなく切断さ
れていない。表１は種々の触質上て得た培養特性を示し
てい．る。

Ｃ−３６１４５種は試験した多くの培養基媒質上でよく
成長るが気生菌糸の生成および芽胞分裂は幾分おそい。
気生菌糸の集命色は淡緑灰色である。グルコ−スーアス
パラギン培養基、無機塩類一澱粉培養基、酵母抽出一麦
芽抽出培養基およ．びオートミール培養基において成長
の反対側は赤燈色から赤色である。それはチロシン培養
基およびペプトンー酵母抽出一鉄培養基においてはライ
ト顔料を生成する。Ｃ−３６１仙種々の生物学的特性お
よび炭水化物・利用はそれぞれ表２と３に示している。

成長温度は２０乃至３ｒＣの範囲で４３℃において増殖
は見られなかつた。Ｃ−３６１４通は特性アミノ酸成分
としてＬＬ−ジアミノピメリン酸（ＬＬ−ＤＡＰ）とグ
リシンを細胞壁内に含む。特徴の炭水化物は存在しなか
つた。Ｃ−３６１４５種の形態学的、培養的および生理
学的特性は芽胞嚢状体の生成を除いてストレプトマイセ
ス属ものと似ている。細胞壁組成もまたＩｎｔ．Ｊ．Ｓ
ｌｓｔ．ＢａｃｔｅｒｌＯｌ，２へ４３５（１９７０）
中のレチエバリーおよびレチヤバリールの分類による１
型ノ群（ストレプトマイセス型）のものと似ている。Ｃ
−３６１４喝の芽胞嚢状体は明確な芽胞嚢生成属により
生成された通常芽胞嚢と（１）後者は成長の初期段階に
おいて時間で成熟する小芽胞嚢を生成したまた（２）通
常の芽胞嚢は普通粘質物質ておおわれ−ていない点で異
なると思われる。クラシルニコフとチーシエンは１９６
１年に芽胞嚢と非常に似た芽胞体を生成する有機体につ
いてアクチノプラナセア科中の新アクチノスポランジア
ム属（後にストレプトスポランジアセア科に移された）
を提案した。

（Ｉｓｖ．Ａｋａｄ．Ｎａｕｋ．ＵＳＳＲｌＳｅｒ．Ｂ
ｌＯｌ．、１１３．１９６１）その後芽胞嚢状体は粘質
の芽胞生成体であり真の芽胞嚢とちがうことが発見され
アクチノスポランジアム属はその形態学的特性を１型群
の細胞壁組成に基ついてストレプトマイセタセア科に入
れられた。故に利用しうるすべてのデータに基づいてＣ
−３６１４潟はアクチノスポランジアム属の新種と思わ
れる。

しかし重要なことはアクチノスポランジア属の僅か２種
のみが文献に報告されている丈けでこの属は未だ充分完
成されていないことである。（ＨｊラウザーのＴｌｌｅ
ＡｃｔｉｎＯｍｙｃｅｔａｌｅｓ．ＴｈｅＪｅｎａＩｎ
ｔｌ．Ｓｙｍ．ＯｎＴａｘＯｎＯｍｙ．９月、３２９ペ
ージ１９６８．Ｖｅｂ．グスタブフイツシヤー出版、イ
エナ、１９冗参照され度い。）本発明が特殊Ｃ−３６１
柘種の使用又は上記述に充分に答える微生物に限定され
ないことは諒解されるであろう。

本発明は特に他のボヘミツクアシツド生成種又は上記微
生物からＸ線放射、紫外線放射、窒素刺戟剤処理、フエ
イジ（Ｐｈａｇｅ）露出等の種々の方法て生成出来る上
記微生物の突然変異体を含むものと考える。基礎媒質：
プリダムーゴツトリープ媒質。

※ 赤−オレンジ顔料の生成豊富。

ボヘミツクアシツド混合物の製法 ボヘミツクアシツド混合物は水性栄養媒質中に浸漬した
好気性状態てＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３ｌｌ２７又はその突然
変異体の特性をもつアクチノスポランジアムＳｐ．のボ
ヘミツクアシツドを生成する種を培養して製造出来る。

この有機体は同化性炭素源、例えは同化性含水炭素を含
んでいる栄養媒質中て成長する。適当する炭素源の例は
蔗糖、乳糖、マルトーゼ、マンノーゼ、フルクトーゼ、
グルコーゼ、グリセロールおよび可溶性澱粉がある。栄
養媒質はまた魚粉。ペプトン、大豆粉、ピーナツツ粉、
棉実粉又はコーン浸漬液の様な同化性窒素源を含有する
必要がある。栄養無機塩類もた媒質に混合出来る。この
塩類はナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウ
ム、燐酸塩、硫酸塩、塩化物、臭化物、硝酸塩、炭酸塩
又は同様のイオンを供給出来る普通の塩類ならどんなも
のでもよい。ボヘミツクアシツド混合物の製造は有機体
を充分成長させるどんな温度でも、例えば２０〜３ｒＣ
で出来るが、約２ｒＣの温度で便利に行なわれる。通常
媒質は微アルカリ性であるが、実際のＰＨは使う特定媒
質によつて広範に変え得る。５ 醗酵はエルレンマイヤ
ーフラスコ中又は種々の容量の実験室的又は工業的醸酵
機中で行なうことが出来る。

タンク醸酵を行なう場合は芽胞型の有機体をもつた少容
量の培養媒質を接種して栄養スープ中に生長性接種物を
生成するのがよい。このθ様に活性接種物を得た後無菌
状態の抗生物質大規模製造用醸酵タンク内に移す。生長
性接種物に使う媒質は大規模醗酵に使用するものと同じ
ものでよいが、他の媒質も使用来る。好気性浸漬培養法
て通常する様に殺菌空気を培５養媒質に吹込む。

一般に醸酵工業て使われる攪拌機によつて攪拌を続ける
。一般にボヘミツクアシツド混合物の最適製造はスター
ージヤー酷酵機又はタンク醸酵機内で約１９０〜２１Ｃ
＠間の培養で出来る。

酸酵状態はボヘミクツクアシツド混合物に敏感有機体、
例えばＤ．ニユーモーニアエ．５Ｔ．パイオジエネス又
はＳ．オーレウスに対し時々醗酵を検べて追及出来る。
ボヘミツクアシツド混合物は水に不混和性な有機溶媒、
成るべく酢酸エチル、メチルイソブチル５ケトン又は高
級アルコール（例えばｎ−ブタノール）の様な極性有機
溶媒、好ましくはメチルイソブチルケトンで醍酵媒質か
ら抽出して回収出来る。大部分の抗生物質活性はスープ
中に発見されるので抽出前スープを沖過する。しかしよ
い方法は全醸酵スープを約７．５乃至８．５のＰＨて有
機溶媒て抽出することてある。次いて有機相をろ過し乾
燥して固体ボヘミツクアシツド混合物を得ることが出来
る。また有機抽出液を濃縮しスケリソープＢの様な適当
なアンチリルベントで稀釈して体混合物を沈澱させるこ
とも出来る。ミユーゼツタマイシンとマーセロマイシン
の分離および単離アンスラシクリン抗生物質、ミユーゼ
ツタマイシンとマーセロマイシンはボヘミツクアシツド
混合液をセフアデツクスＬＨ２Ｏ（フアーマシアフアイ
ンケミカル社製造の有機溶媒中ゲルフイルトラントとし
て使われるデキストラン誘導体の品名）の様な適当な吸
着剤を充填したカラム上にとおしてクロマトグラフ法に
よつて互におよびボヘミツクアシツド混合物の他成分か
ら分離出来る。

次し・でボヘミツクアシツド混合物成分は吸着剤からク
ロロフォルムの様な適当する有機溶媒で溶離さわる。多
数の分別部分を集めて適当に稀めてその堤着物を４９０
Ｔ１１Ｐで検べる。それを対応する分別蕾分について図
にプロットしてカラムから溶離した成分のピークを決定
する。溶離順序から検べた通当する部分を併せて蒸発し
て個々の固体抗生物猶を得る。固体はアセトニトリル、
クロロフオルムースケリソーブＢ又はメタノールの様な
適当する有機溶媒から再晶出させてある程度精製出速る
。ミユーゼッタマイシンおよびマーセロマイシン成分は
更に実施例１０と１１に詳細記述している高圧液体クロ
マトグラフ法によつて精製出来る。この方法によつて２
抗生物質の極めて純粋な試料が得られるとわかつている
。ボヘミツクアシツド混合物又はそのミユーゼツタマイ
シンおよびマーセロマイシン成分はそれ自体よく知られ
た方法で上記の製薬上許容される塩類に転化出来る。生
物学的活性データ ミユーゼツタマイシンとマーセロマイシンの試験管内最
低抑制濃度（ＭＩＣ）は標準管稀釈法を使つて多数の微
生物について検べた。

はつかねずみにおける実際の腹腔内ＬＤ５。

はミユーゼツタマイシンについては９．８乃至２１．１
２ｍ９／Ｋ９でありまたマーセロイシンについては６．
３５乃至１０．５６ｍｇ／Ｋ９である。本発明の化合物
をまた種々の移植可能な 歯類腫瘍に対し試薬した。

使つた方法の詳細はＣａＴｌｃｅｒＣｈｅｍＯｔｈ，Ｒ
ｅｐＯｒｔｓ３，ｌ（３部）１９７２に記載されている
。

腫瘍抑制効果の最初の観察をねすみに固体筋肉内腫瘍と
して移植したウォーカー２５６カルシノサルコマを使つ
て行なつた。

ボヘミツクアシツド混合物を含む醗酵スープを動物を処
理したところ非処理対照腫瘍に比べて腫瘍成長を７３％
抑制した。部分精製したミユーゼツタマイシンを使つて
はつかねすみの２種のリンパ腺白血病、即ちＰ一３８８
とＬ −１２１０を治療した代表的結果を表５に示して
いる。１皓薬量範囲にわたる意味深い腫瘍抑制性をＰ−
３８８白血病を使つて観察した。

精製したミユーゼツタマイシンとマーセロマイシン（下
記実施例１０と１１に記載の方法により精製した。）を
Ｌ−１２１０はつかねずみ白血病に対し試験した結果を
表６に示している。これらのデータはマーセロマイシン
がこの腫瘍に対する抑制効力においてミユーゼツタマイ
シンの約４倍効力があることを示している。ボヘミツク
アシツド混合物、その成分ミユーゼツタマイシンとマー
ロマイシンおよび塩類およびそれらの混合物を含む本発
明の抗生物質化合物類は抗細菌活性と抗腫瘍活性の双方
を示す。

本発明＊＊の範囲内に上記の抗生物質の少なくとも１種
と適ａ合する製薬上許容される担体より成る製薬組成物
を包含する。組成物または他の活性抗菌剤および（又は
）抗腫瘍剤も含んでよい。組成物は治療の為の投与方法
に適したどんな製薬型も仕上げることが出来る。この組
成物の例には錠剤、カプセル、ビル、粉末、粒状の様な
経口投与用固体組成物、溶液、懸濁液、シロツプおよび
賦形剤の様な経口投与用液体組成物および無菌の溶液、
懸濁液又は乳化液の様な非経口投与用処法を含む。抗菌
剤として使用する際この組成物の活性成分濃度が治療す
る特定有機体の最低抑制濃度より大！きくなる様に投与
する。一般的には抗菌剤としての薬量は、前記した動物
実験におけるＬＤ５Ｏで記載した量に相当する９．８乃
至２１．１２ｍ９／Ｋ９程度てある。抗腫瘍剤として咄
乳動物に使う薬量は１回の静脈注射に対してマーセロマ
イシンでは２．５乃至．１０ｍｇ／Ｍ２がよくまたミユ
ーゼツタマイシンでは１０乃至４０ｍｇ／Ｍ２がよく、
従つて一般的に表現すれは２．５乃至４０ｍｇ／Ｍ２（
ここでＭ９／Ｍ２とは啼乳動物の表面積１平方メール当
たりのミリグラムで薬量を表現したものてある）てある
。次の実施例は本発明の例証に役立つが本発明を限定す
るものではない。

μスチラゲル、フェニル／コラジルおよびフェニル／ポ
ラジルＢはウオーターアソシエイツ社のシリカにオルガ
ノ−シランを化学的に結合させてつくつたル透過クロマ
トグラフ法充填剤商品名である。セフアデツクスＬＨ−
２０は吸着およびゲル枦過クロマトグラフ法に使う改良
された交叉結合したデキストランのフアーマシアフアイ
ンケミカルス社製商品名である。実施例１ フラスコ振盪醸酵 Ｄ−グルコーゼＫｇ、オトミル鯉、大豆プトンＫｇ、お
よび寒天鯉を蒸留水で１１とした寒天領斜媒質上で有機
体を成長さた。

２ｒＣて６日以上成長させた後Ｄ−グルコーゼ３０ｇ１
大豆粉１０ｇ１フアーマメデイア（テキサス州フオート
ワーズのオイルミル社の商品）１０ｇおよびＣａｃＯ３
３ｇを蒸留水て１１とした殺菌媒質１００ｍ１を含む５
００ｍ１エルレンマイヤーフラスコ中に芽胞を移した。

この生長性培養物を毎分２１０回の直径５．１ｃｍの円
をえがく様設定したジヤイロータリーチーヤ振盪機（Ｇ
５？、ニユーブランズウイツクサイエンチフイツク社）
で２ＴＣで培養した。お時間後に培養液４ｍ１をグリセ
ロール５０ｇ１大豆粉２０ｇ１ピーナツツ粉末１０ｇお
よび）ＣａＣＯ３ｌＯｇを蒸留水で１１とした殺菌媒質
１００ｍ１を含む５００ｍ１エルレンマイヤーフラスコ
中に移した。この培養液２（至）回／分に設定した振盪
機上て２７℃で１４４時間培養した。この場合ボヘミツ
クアシツド混合物の抗生物質活性は培養？液および菌糸
中に発見された。実施例２ スターージヤー醸酵 実施例１に記載の酩時間を経た生長性培養液を使つてス
ターージヤー醗酵機中でボヘミツクアシツド混合物を生
成した。

０．０１％ホダツクＦ１シリコーンアンチフオーム（イ
リノイ州スコキーのホダツグケミカル社）を含む実施例
１に記載したとおりの殺菌媒質１０１を入れた４１容量
のスターージヤーに培養液４００ｍ１を移した。

スターージヤーを酷酵機駆動装置（ニユージヤシー州ニ
ユーブランズウイツクのニユーブランズウイツクサイエ
ンチフイツク社のＦＳ−６■型）に組立てた。温度を２
７゜Ｃ１送風量を６０１／分、また攪拌機を３００ｒ′
．Ｐ．ｍ．とした。ホダツクＦ１アンチフオームは泡生
成を調節するに必要な量を自動供給した。約２１叫間後
に培養を終りボヘミツクアシツド混合物は培養枦過およ
び菌糸中に発見された。実施例３ タンク醗酵 タンク醗酵機に殺菌生成媒質（実施例１のとおり）３７
．８１と生長性培養液（実施例１のとおり製造した。

）１．８９１を入れ８５１／分の空気を吹込み羽速度３
００ｒ′．Ｐ．ｍ．て攪拌し２７℃で１（４）時間培養
した。ポヘミツクアシツド混合物は培養ｐ液および菌糸
中に発見された。実施例４ タンク酉？Ｗ 製造媒質（実施例１のとおり）３０２８１と生長培養液
（実施例１のとおり製した）１５２１を入れた醗．酵タ
ンクを羽速度１５５ｒ．ｐ．ｍ．て攪拌し１４１．６１
／分の空気を吹込み２７℃で１９叫間培養した。

この場合ボヘミツクアシツド混合物の存在が培養沖液お
よび菌糸中で認められた。実施例５ ボヘミツクアシツド混合物の単離 最終的にＰＨ８．ｌの全醸酵スープ（７１）を約等量の
メチルイソブチルケトンと２０−３紛間攪拌した。

次いで大量のけい藻土沖過助材を加えこれと充分混合し
た後この混合物をｐ過助材で真空吸引夕枦過した。淵液
は２相に分離したのて下の水相を捨てた。有機相を真空
蒸発して小量（５０−１００ｍｔ）としスケリソーブＢ
（スケリーオイル社市販の石油エーテルの沸点６０−関
℃留分で、本質的なｎ−ヘキサンより成るものの商品名
。）で稀釈し沈澱した暗赤色固体を真空乾燥してポヘミ
ツクアシツド混合物１．９ｇを得た。実施例６ ボヘミツクアシツド混合物の大規模単離 ＰＨ８．Ｏ〜８．５の全醗酵スープ３０００１を２５℃
に冷却した後３０００１のメチルイソブチルケトンと２
０〜３０℃で３紛激しく攪拌した。

この乳化液に３６０ｋ９の沖過助剤を加え混合物を更に
１時間激しく攪拌しフた。次いで３０分間静止した後２
３００〜２５００１の有機相上澄みを流し０〜１０℃に
冷却した。更に８００１のメチルソブチルケトンを混合
物に加え２紛攪拌した後３紛静止して上澄みを流し冷却
した。初めの部分と併せて全抽出液３３００〜３４００
１となつた。こ・れを手早く沖過して固体および不溶性
水相のないメチルイソブチルケトン抽出液３１００〜３
２００１を得た。有機抽出液を０〜１０℃で真空濃縮し
て最終容量Ｇとした。これを２０〜２５℃で攪拌中のス
ケリソープＢ６Ｏｌに加えた。沈澱固体をナツチエ沖過
器上身で集め１０１のスケリソープＢて洗い吸引乾燥し
て９００〜１０００ｇの幾分油状の暗赤色無定形生成物
を得た。これを過剰のエーテルを攪拌しブツフナーろ一
と上でｐ過し更にエールで洗い吸引乾燥し更に真空乾燥
して５１ｇの無定形暗赤色ボヘミツクアシツド混合物を
得た。実施例７ ボヘミツクアシツド混合物の分別 クロロフォルム中に６濁間浸漬したセフアデツクスＬＨ
−２０を両端に調節出来るテフロンチップをつけたフア
ーマシアＳＲ５／１００カラム（内径２５醜×高さ１０
０ｃｍ）中にスラリとして詰めた。

カラムはチップからチップ迄完全一杯になる様詰め有効
長さ９０〜９５Ｃ７！であつた。ボヘミツクアシツド混
合物（５００ｍ９）を１０ｍｔのクロロフォルムにとか
しカラムに入れた後クロロフォルムを１ｍ１／分の早さ
で下から流出させた。溶離した液体を６ｍ１づつの部分
に分けて集めた。偶数番号の管の試料をクロロフォルム
で８＠にうすめボーシユアンドロンブスペクル２０比色
計で４９０ｒＴ１μ読んだ。アンスラシクリン顔料の４
明瞭バッドは次のとおりであつた：得た固体を８０：２
０トルエンニメタノー溶媒系を使つてプリンクマン６０
Ｆ′２５４シリカゲル薄層板上でクロマトグラフ法にか
けた。

溶離液に対する第１バンドは薄層クロマトグラフ法によ
つて不活性混合物であることを示した。第２バンドは約
Ｒｆ＝０．７５に特徴あるピングがかつた赤ゾーンを与
えた。この分別部分も不活性であり主としてη−ピロマ
イシノンより成るとわかつた。溶離液の第３分別部分Ｒ
，＝〜０．３の単一ゾーンを与えた。これはミユーゼツ
タマイシンと決定されＬ−１２１０とＰ一３８８の双方
のはつかねずみ白血病系に試験した場合高度活性を示し
た。溶離液の最終バンドはＲ，＝〜０．３にゾーンを与
え主としてマーセロマイシンより成るものであつた。こ
の成分もはつかねずみの２種白血病について試験した場
合高度の活性を示した。薄層クロマトグラフ法における
ミユーゼツタマイシンおよびマーセロマイシンはいづれ
も約０．３のＲ，値をもつがミユーゼツタマイシンは幾
分速く動く。ミユーゼツタマイシンとマーセロマイシン
を混合したならばそれらは非常に接近した色の２ゾーン
に分解される。実施例８ 大規模分別 直径６インチ高さ７７インチガラスカラムの下端にノー
クロツグ（１１０ｃ１０ｇ）フィルターをつけその上に
ガラスウール層をおき次いで円形ポリエチレンフリット
をおいて。

このフリットは直径５Ａインチに切断しクロロフォルム
中で膨張させた。セフアデツクスＬＨ−２０（８．７３
ｋ９）をクロロフォルム中で３時間攪拌し沖過し固体を
クロロフォルム中て攪拌し更に田侍間放置した。次いて
混合物をｌ紛攪拌しカラム上に入れた。ボヘミツクアシ
ツド混合物（実施例６のとおりに製造した。）試料３０
ｇを１．５１のクロロフォルムと１５分間加熱した後１
時間攪拌した。枦過してまだ活性をもつた不溶解物質７
．５ｇを分離した。（後の試験て試料は３０〜４０％メ
タノールに完全に溶解するとわかつた。クロマトグラフ
法の結果はその方法と同様であつた。）戸液をカラムに
入れクロロフォルムを使い下方に流し初めた。試験中取
り出し流速１６ｍ１／分を保つた。ゲルベッドの底に色
が達する前に溶離剤の初めの１．４５５ｍ１を取つた。
この時点て１００ｍ１の分別捕集を初め液体が再び全く
うすくなる迄全部で９０紛別部分をとつた。５番目毎の
少量を稀釈し実施例７のとおり分析した。下記するとお
り４成分が分離されたことがわかつた。実施例９ ミユーゼツタマイシンの部分的精製 実施例８の第３成分から得た固体４２１．４ｍｇを過．
剰の沸とうするクロロフォルムに溶解しこの液をみぞの
ある戸紙をとおし枦過した。

この沖液を蒸気浴上で２０ｍ１以下に濃縮した。次いで
この温液が濁る迄スケリソープＢを滴加した後クロロフ
ォルムを数滴加えた。大気温に冷却した後混合物をーノ
２０℃の冷凍器内に入れ一夜おいた。濃赤色結晶性小板
を集め真空乾燥してユーゼツタマイシン３５８Ｔｎｇを
得た。融点１６２〜１６３′ＣＯ実施例１０ ミユーゼツタマイシンの精製 粗エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）で洗つたミ
ユーゼツタマイシンをμスチラゲル（ゲル透過クロマト
グラフ法に使うゲルフイルトラントカラム充填剤の商品
名、ウオータースアソシエイツ社の製品、スチレンジビ
ニルベンゼンの硬い交叉結合重合体より成る直径８〜１
０ミクロンの小粒）の４カラム層（５００−１００−１
００−１００Ａ）に初めに洗う為流動相としてクロロフ
ォルムを使つて流速０．７ｍ１／分とおした。

各１００ｍｇづつ９回試験した。溶離液を屈折率検出器
（ウオータースアソシエイツ〉の助けを借りて監視し各
試験にいて３７．５〜４紛において溶離する主ピークを
捕集した。９回の試験の主分別部分を併せて真空蒸発乾
固した。

この暗赤色無定形固体６６０ｍ９を２２ｍ１の４５：５
５アセトニトリル０．０１Ｍ酢酸ナトリウム溶剤（ＰＨ
４．Ｏ）にとかした。混合液を遠心分離して少量の懸濁
物質を除き透明の上澄みを密封出来るペニシリンびんに
移した。暗赤色溶液の一部（１．２５ｍｔ．〜３７ｍ９
）をＵ６Ｋ注射器（ウオータースアソシエイツ）に入れ
た後試料をカム上に入れた。試料をフェニル／ポラジル
Ｂ（ウオータースアソシエイツ社製造の分配クロマトグ
ラフィ用粒状物質の商品名、シリカに化学的に結合した
液体ジフェニルジクロロシランをもつ全体に多孔性シリ
カより成る。３７〜７５ｐ粒子大きさ。

）を充填した長さ１ｍ×内径４６ｗｕｎステンレススチ
ールカラム上でクロマトグラフ法にかけた。流動相は３
５：６５アセトニトリルニ０．０１Ｍ酢酸ナトリウムの
ＰＨ４』混合液て流速は１．９〜２．０ｍ１／分てあつ
た。溶離を屈折率モターを使つて監視した。分別部分を
７聞２間隔て自動分別捕集器（サイエンチプイツクマニ
ユフアクチヤリングストリーズ）を使つて捕集した。１
頷個の管に捕集したカラムをメタノールで３．０ｍ１／
分の流速で１紛間洗い更にアセトニトリルニ０．０１Ｍ
酢酸ナトリウム３５：６５のＰＨ４混合液て１５分．間
洗つた。

流速を２０ｍ１／分に下げ次の注入の前５分間この装置
を平衡させた。５番目毎の管の溶離液２５μｌを分析装
置でクロマトグラフ法にかけ管を併せる前の組成検査を
した。

分析装置はフェニル／コラジル（ウオータースアソシエ
イツ社製造・の分配クロマトグラフィ用の粒状物質の商
品名、ジフェニルジクロロシランが結合したシリカ単層
で被覆された固体ガラスの３７〜５０μ小粒より成る。
）を充填した６１ｃｍ×内径２．１悶スティンレススチ
ールカラムより成るものであつた。流動相はアセトニト
リルニ０．０１Ｍ酢酸ナトリウム４５：５５のＰＨ４』
混合液で流速０．７Ｔｎ１／分であつた。溶離はＷデテ
クター（ＬＤＣ）を用いて２５４ｎｍで監視した。管の
合併はクロマトグラフ分析に基いて行つた。管ＮＯ．６
ｌ−１２０が望むミユーゼツタマイシンを含むことがわ
かつた。これらの管を併せて真空蒸発（４５℃）した。
暗赤色残渣をメタノールて反復洗い更に２×１００ｍ１
塩化チレンで洗つた。次いで゛残渣を１００ｍ１のクロ
ロフォルムとすりつぶし無機塩類をｐ別した。次いで固
体を乾燥Ｎ２を使い蒸発乾固し更にＰ２Ｏ．上高圧真空
下で乾燥した。上記のとおり精製したミユーゼツタマイ
シンは次の特徴をもつ：特徴：暗赤色結晶性粉末。

分子式：Ｃ３６Ｈ４５Ｃｌ４Ｎ．分子量：７１５．７６
元素分析： 理論値：Ｃ，６Ｏ．４ｌ；Ｈ，６．３４；Ｎ，ｌ．９５
実験値：Ｃ，６Ｏ．２７：Ｈ，６．５９；Ｎ，ｌ．９９
Ｏ．８３ｌｌ２Ｏおよび０．８残渣に対し捕正した値。

Ｃ，６Ｏ．２７：Ｈ，６．５Ｏ；Ｎ，ｌ．９９
赤外線スベクトルニミユーゼツタマイシンー（ＫＢｒペ
レット）の赤外線吸収スペクトルは次の波長に主要バン
ドを示す：３４８０、２９０１２９３０１２８２０、２
７７０、１７３５、１６００１１４５０、１３２０、１
２９５、１２２０、１１６０、１０１０および９９０−
１。

紫外線スベクトルニメタノール中ミユーゼツタマイシン
０．０１３ｇ／ｌ濃度において次の最大値および吸収能
を示す：２３３ｒｒ１μ、５７．７；２５６ｒ１１μ、
３３．２；２８４ｍμ、１４．５；４６６ｒｒ１μ、１
４．３；４９０１１１μ、１７．４；５１０ｒＴ１μ、
１４．６；５２４ｍμ、１２．９および５７０ｒＴ１μ
、３．３０核磁気共鳴スベクトルニ（ａ）１００ｒＴ１
ＨＺｐｍｒスベクトルニＣＤＣＩ３中２．５ｍ９／０．
５ｍ１濃度においてスペクトルは次の化学シフト（Ｐｐ
ｍ）と型特徴を示す：７．６臥ｓ；７．３２、ｓ：７．
２１、ｓ（ＣＤＣｌ３）；５．５へｍ：５．２４、ｍ；
５．００．．ｍ；４．４８、４重項；４．１０．．ｓ；
３．６８、ｓ；４．２−３．４、ｍの重複：２．１６、
ｓ；２．５一１．５．ｍの重複および１．３−０．９．
２重項および３重項の重複。

〔ｓ＝１重項、ｍ＝多重項〕（ｂ）２５ｍ１Ｈｚｃｍｒ
スベクトルニＣＤＣｌ３中２００ｍ９／ｍｌの濃度にお
いてスペクトルは次の化学シフトと強度を示す：高圧液
体クロマトグラムニミユーゼツタマイシンのりテンショ
ン時間は次の助変数：６１ｃｍ×２．１＝フエニル／コ
ラジル支持カラム；４５：５５アセトニトリルニ０．０
１Ｍ酢酸ナトリウム、ＰＨ４；０７ｍ１／分流速；２５
４ｍｐ？デテクター；で操作するウオータースアソシエ
イツ社基本単位成分を使つて１１分加秒であるとわかつ
た。

融点：２１０−２１２加Ｃ０溶解度：殆んどの有機溶媒
に可溶性；２０℃の高濃度においてメタノールから晶出
する；水、脂肪族炭化水素およびエーテルに不溶性。

実施例１１ マーセロマイシンの精製 ＥＤＴＥで洗った粗マーセロマイシンをμスチラゲル（
ウオータースアソシエイツ社製造のゲル透過クロマトグ
ラフィに使うゲルフイルトラントカラム充填剤の商品名
、スチレンジビニルベンゼンの硬質交叉結合重合体より
成る）の４カラム層（５００−１００−１００−１００
Ａ）を使つて先づ流動相とノしてクロロフォルムで清浄
とした。

この分離の流速は０．６−０．７ｍｔ／分で、屈折率デ
テクター（ウオーターズアソシエイツ社）で溶離を監視
た。各１００ｍ９の１０回試験を行ない、かつ各々の場
合の２６一３２分に溶離する主ピークを捕集した。１（
０］分の・主分別部分を併せて真空蒸発乾した。

暗赤色無定形固体を３０−３５ｍ９の２５部分に割した
。この各々をフェニル／ポラジルＢ（ウオーターズアソ
シエイツ社製分配クロマトグラフィ用の３７−７５μ粒
子大きさの粒状状物質の商品名、シリカに化学的に結合
したジフェニルジクロロシランの液相をもつ全体多孔性
シリカより成る。）をつめた１ｍ×内径４．６ｗｒｍス
テインレンスチールカラムより成るクロマトグラフ装置
に入れる直前にＰＨ４．Ｏの４５：５５アセトニトリル
ニ０．０１Ｍ酢ナトリウム溶媒混合液５１．０ｍ１にと
かした。ＰＨ４．Ｏの４５：５５アセトニトリルニ０．
０１Ｍ酢酸ナトリウム流動相の流速は３．０ｍ１／分で
あつた示差屈折率監視器（ウオーターズアソシエイツ社
）を使つて溶離をしらべた。ＳＭＩ（サイエンチフイツ
クマニユフアクチヤリングイつンダストリーズ）分別捕
集器を使つて１．紛毎に分別部分を捕集した。５ｇＸ．
の管に捕集し、カラムをアセトニトリルで流速４．０ｍ
Ｌ／分で洗いまた次の注入前に流動相で１紛洗つた。

５番目毎の管の溶離液を管合併の前にクロマトグラフ分
析装置にかけた。

分析装置はフェニル／コラジル（ウオーターズアソシエ
イツ社製分配クロマトグラフィ用の３７−５０μ粒子大
きさの粒状物質の商品名、化学的に結合したジフェニル
クロロシランをもつシリカ単一層て被覆されている固体
ガラス小粒より成る。）をつめた６１ｃｍ×内径２．１
Ｔ１ｒＩｎスティンレススチールカラムより成るもので
あつた。流動相はＰＨ４．Ｏの４５：５５アセトニトリ
ルニ０．０１Ｍ酢酸ナトリウム溶媒混合液より成り流速
は０．６８−７．０ｍ１／分であつた。溶離剤はＵＶデ
テクターで２５４ｎｍで監視した。この装置に２５μｌ
の溶離剤を注入した。管合併は分析クロマトグラムに基
いて行なつた。一般に管ＮＯ．ｌ８−３５が特に望むマ
ーセロマイシン成分を含むことがわかつた。これらの管
を合併し４５℃て真空蒸発乾固した。残渣をメタノール
で反復して洗い２×１００ｍ１の塩化メチレンで洗つた
。残渣を７５ｍ１の塩化メチレンとすりつぶしろ過した
。ｐ液を４５℃て真空蒸発乾固し暗赤色残渣を更にＰ２
Ｏ，上て高真空乾燥した。上記のとおり精製したマーセ
ロマイシンは次の，特性をもつている。

特徴：暗赤色無定形粉末。

分子式：Ｃ４２Ｈ５５ＮＯｌ７ 分子量：８４５．９０ 元素分析： 理論値：Ｃ，５９．６４；Ｈ，６．５５；Ｎ，ｌ．６５
；０，３２．１５実験値：Ｃ，５６．３２；Ｈ６．６４
；Ｎ，ｌ．７４ｌ（２０と残渣を補正した値：
Ｃ，５８．７７；Ｈ，６．７７；Ｎ，ｌ．８２赤外線ス
ベクトルニマーセロマイシン（ＫＢｒペレット）の赤外
線吸収スペクトルは次の波長に主要バンドを示す：３４
５０１２９６０、２９４０１２８２０、２７９０、１７
３０、１６１５、１６００、１４５０、１２６０、１０
９５、１０１０および８００ｃｍ：．一１。

紫外線スベクトルニメタノール中０．０１３ｇ／Ｉの濃
度でマーセロマイシンは次の最大値および吸収能を示す
：２３３［ｎμ、４７．５：２５６１Ｔ１μ肩、２４．
７：２８４ｍμ肩、１０．６；４９０ｒＴ１Ｐ１１５．
８；４１０ｒＴ１μ肩、３．４；４６５ｒｒ１μ肩、１
３．２；４８０ｒＴ１μ肩、１４．７；５１０ｎ１μ肩
、１２．５；５２４ｍμ肩、１０．６：および５８０ｒ
ｎμ肩、１．１。

核磁気共鳴スベクトルニ （ａ）１００ｒＩ１ＨＺｐｍｒスベクトルニＣＤＣｌ３
中２５ｍ９／５ｍ１濃度でスペクトルは次の化学シフト
（Ｐｐｍ）および型特徴を示した：７．６３，ｓ７．２
４，ｓ：５．５２，ｍ：５．３０，ｍ；５．３３，ｍ（
ＣＤ２Ｃｌ２））；４．９４，ｍ；４．５０，４重項；
４．３０−３．９０，ｍの重複；３．６９，ｓ；２．７
０−０．０９，ｍの重複：および２．１９，ｓ０〔ｓ＝
１重項、ｍ＝多重項〕（ｂ）２５ｒｒ１圧Ｃｍｒスベク
トルニＣＤ２Ｃｌ２中６０ｍ９／２ｍ１の濃度において
スペクトルは次の化学シフトと強度を示す：高圧液体ク
ロマトグラムニマーセロマイシンのりテンション時間は
次の助変数：６１ａＴ１×２．１ｗ！！ｔフェニル／コ
ラジル支持カラム；４５：５５アセトニトリルニ０．０
１Ｍ酢酸ナトリウム、ＰＨ４；０．６８−７ｍ１／分流
速：２５４ｍｐＵＶデテクター；で操作するウオーター
スアソシエイツ社基本単位成分を使つて１吟２４秒であ
るとわかつた。

融点：軟化点１３４−１３５℃：徐々に粘稠となるが３
００′Ｃ迄融解しない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは水素又は式▲数式、化学式、表等があります
   ▼をもつ基を表わす。 ）されることを特徴とする抗生物質ミユーゼツタマイシ
   ンもしくはマーセロマイシン又はその製薬上許容される
   塩類。２ アクチノポランジアム属に属するボヘミツク
   アシツド生産菌を培養し、培養物からボヘミツクアシツ
   ド混合物を回収しかつ回収した混合物から個々のミユー
   ゼツタマイシンとマーセロマイシン抗生物質を分離する
   ことを特徴とする構造式：▲数式、化学式、表等があり
   ます▼（式中Ｒは水素又は式：▲数式、化学式、表等が
   あります▼をもつ基を表わす）で示されるミユーゼツタ
   マイシンおよびマーセロマイシンの製法。 ３ ボヘミツクアシツド生産菌がＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３１
   １２７又はその突然変異体の特性をもつアクチノポラン
   ジアム種のボヘミツクアシツド生産菌である特許請求の
   範囲第２項に記載の方法。 ４ ボヘミアツクアシツド生産菌がＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３
   １１２７又はその突然変異体である特許請求の範囲第２
   項に記載の方法。 ５ 水と混和しない有機溶媒を使つて全醗酵スープを抽
   出することによりボヘミツクアシツド混合物を回収する
   特許請求の範囲第２乃至４項のいずれかに記載の方法。 ６ ミユーゼツタマイシンおよびマーセロマイシン抗生
   物質をゲルろ過クロマトグラフ法によつて混合物から分
   離する特許請求の範囲第２乃至５項のいずれかに記載の
   方法。７ オルガノ−シラン類をシリカに化学的に結合
   させて生成したゲル透過クロマトグラフ充填剤を吸着剤
   として使う高圧液体クロマトグラフ法によつてマーセロ
   マイシンとミユーゼツタマイシンを精製する追加工程を
   含む特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ８ 構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは水素又は式▲数式、化学式、表等があります
   ▼をもつ基を表わす。 ）で示されることを特徴とする抗生物質ミユーゼツタマ
   イシンもしくはマーセロマイシン又はその製薬上許容さ
   れる塩類からなる抗菌剤。９ 構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは水素又は式▲数式、化学式、表等があります
   ▼をもつ基を表わす。 ）で示されることを特徴とする抗生物質ミユーゼツタマ
   イシンもしくはマーセロマイシンはその製薬上許容され
   る塩類からなる抗腫瘍剤。