SU1735367A1 - Посевна питательна среда дл получени аминогликозидного антибиотического комплекса - Google Patents

Abstract

Использование: микробиологическа  и медицинска  промышленность, способ получени  аминогликозидного антибиотического комплекса. Сущность изобретени : посевна  питательна  среда дл  получени  аминогликозидного антибиотического комплекса с помощью продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini, содержаща  источники углерода, азота, фосфора и соли. Применение посевной среды позвол ет увеличить активность культу- ральной жидкости на 20% за счет использовани  соевой муки и глюкозы вместо дорогосто щего глицерина и кукурузного экстракта. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к микробиологической и медицинской промышленности, в частности к способу получени  аминогликозидного антибиотического комплекса, со- сто щего из карбамоилтобрамицина (тобрамицин - медицинский препарат, представл ет интерес в химиотерапии инфекций , обусловленных грамотрицательны- ми бактери ми, в том числе Ps. aeruginosa), карбамоилканамицина и апрамицина (примен етс  в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней).

Известны различные посевные питательные среды дл  получени  аминогликозидного антибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин.

Наиболее близким к изобретению  вл етс  процесс, согласно которому вегетативный посевной материал культуры Streptomyces cremeus subsp. nebramycini выращивают на посевной среде следующего состава, мас.%: кукурузный экстракт 2,0; глицерин 2,0; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; животный жир 0,75; водопроводна  вода остальное.

Недостатком прототипа  вл етс  низка  антибиотическа  активность культу- ральной жидкости в конце ферментации.

Целью изобретени   вл етс  увеличение антибиотической активности культу- ральной жидкости.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в качестве источников углерода, азота и фосфора используют соевую муку и глюкозу при следующих количественных соотношени х компонентов, мас.%:

Соева  мука2,4 - 2,6

Глюкоза0,9 - 1.1

Мел0,4 - 0,6

Животный жир0,65 - 0,85

ВодаОстальное.

Соева  мука  вл етс  источником углерода , азота, фосфсра, микроэлементов. Глюкоза  вл етс  легкоутилизирующимс  источником углерода. Использование этих двух компонентоЕ в заданных пределах позвол ет получить в посевной среде опти (Л

С

-ч со ел со о VI

мальное соотношение углерод:азот, что приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости. Применение этих двух компонентов в заданных соотношени х позвол ет исключить из состава среды дефицитный дорогосто щий глицерин и кукурузный экстракт, который не  вл етс  стандартным сырьем.

Пример 1 (по известному способу). В качестве объекта исследовани  используют культуру Streptomyces cremeus subsp. nebramycini (штаммы 2242, 9871). Вегетативный инокул т выращивают при 37±1°С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (коэффициент заполнени  0,7) с числом оборотов мешалки 150 об/мин на среде следующего состава, мас.%: глицерин 2,0; кукурузный экстракт 2,0; животный жир 0,75; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; водопроводна  вода остальное; рН среды до стерилизации 7,4+1,0.

Посевной материал используют при проведении ферментации в аппаратах вместимостью 30 л (коэффициент заполнени  0,5) и в колбах (N/750100 мл среды) на качалке с числом оборотов 240 об/мин, добавл   его в количестве 2% от объема культуральной жидкости. Ферментации провод т при 37 ± ±1°С на регламентной ферметационной среде следующего состава, мас.%: мука соева  3,5; глюкоза 1,5; животный жир 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводна  вода остальное , рН среды 6,2 0,1. Количество подаваемого воздуха 1 об./1 об. среды в 1 мин, работа мешалки непрерывна , 150 об/мин. Продолжительность ферментации 72 ч.

Антибиотическую активность культуральной жидкости определ ют методом диффузии в агар с использованием тест- культуры Bacillus subtilis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл. Суммарна  антибиотическа  активность культуральной жидкости 2800 мкг/мл дл  штамма 9871 и 1400 мкг/мл дл  штамма 2242.

Пример 2. Вегетативный инокул т продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini (штаммы 2242,9871) выращивают по примеру 1 на среде следующего состава , мас.%: соева  мука 2,5; глюкоза 1,0;

мел 0,5; животный жир 0,75; водопроводна  вода остальное; рН среды до стерилизации 6,2±1,0.

При приготовлении этой среды контро- лируют концентрацию фосфора в среде, котора  должна быть в пределах 18-20 мг%, в противном случае добавл ют фосфат кали . Посевной материал используют на стадии ферментации по схеме примера 1. Сум- марна  антибиотическа  активность культуральной жидкости составл ет дл  штаммов 9871 и 2242 3340 мкг/мл и 1680 мкг/мл соответственно.

Пример 3-9. Биосинтез аминоглико- зидного антибиотического комплекса провод т по примеру 2.

Концентрации ингредиентов посевной среды и антибиотические активности куль- туральных жидкостей представлены в таб- лице.

Концентрации мела и жира в пределах 0,4-0,6 и 0,65-0,85 мас.%-соответственно, устанавливаемые исход  из их оптимального действи  на стабилизацию рН и пенога- шение культуральной жидкости, не оказывают заметного вли ни  на активность культуральной жидкости.

Из приведенной таблицы следует, что оптимальными  вл ютс  концентрации му- ки соевой и глюкозы 2,4-2,6 и 0,9-1,1 мас.% соответственно. При этих значени х ингре- диентов активность культуральной жидкости возрастает на 20%, что приводит к увеличению выхода антибиотического ком- плекса и соответственно к снижению его себестоимости.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Посевна  питательна  среда дл  получени  аминогликозидного антабиотиче- ского комплекса с помощью продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini, содержаща  источники углерода, азота, фосфора, мел, жир животный и воду, отличающа с  тем, что, с целью увеличени  антмбмо- тической активности культуральной жидкости , в качестве источников углерода, азота и фосфора используют соевую муку и глюкозу при следующих количественных соотношени х компонентов, мас.%: Соева  мука2,4-2,6

   Глюкоза0,9-1,1

   Мел0,4-0,6

   Жир животный0,65 - 0,85

   ВодаОстальное