JPS6379892A - 有機化学化合物、その微生物学的製法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な有機化学化合物、その微生物学的ｇｌｌ
性法及びその、家畜の生産を増大せしめる試剤としての
使用法に関する。

本発明による化合物は次の性質とパラメータで特徴づけ
ることができる： １）　　ＩＲ吸収スペクトル（ＫＢｒ）、これは次の波
長（ＣＩ−′）に特性吸収帯を示す：３３８８．１４０
９． ２９３６．１３５５． １７３１．１１８８． １６３９．１０７３． １５３６、　９７２． ８１１． ６５２． ２）重水素化ピリジン中杭生物質の、ｐｐ糟で表示して
ｆ：ｌＳ１図に示す如き”Ｃ核磁気共鳴スペクトル、こ
のスペクトルはテトラメチルシランを内部標準とする抗
生物質の重水素化ビリノン溶液について７５．４８ＭＨ
ｚの磁場で記録した；３）重水素化ビリノン中で記録し
た無水酢酸との反応後の抗生物質の、ｐｐｍで表示して
ｔｊＳ２図に示す如き”Ｃ核磁気共鳴スペクトル。この
スペクトルはテトラメチルシランを内部標準とする酢酸
塩の溶液について７５．４８ＭＨｚの磁場で記録した； ４）元素分析（３０℃で高真空下に２日間乾燥した後）
： Ｃ５７，４−５６，８ Ｈ８，６−８，８ Ｎ　　３，３−　３．４ ０２６．１−２８．３ ここに、高分子量天然生成物の場合、元素分析の誤差範
囲は一般に普通より大きくてよいことを指摘しなければ
ならない、この理由のために実験式の正確な決定は可能
でない［Ｒ．Ｂ．ウッドワード（Ｗｏｏｄｗａｒｄ）、
アンプバンチ・ヘミ−（Ａｎｇｅｗ。

Ｃｈｅｍ、）−６９，５Ｏ−５１（１９５７）］：５）
　シリカゲルでの薄層プレートでのクロマトグラフィー
後に、この化合物はチモール／Ｈ，ＳＯ。

又はＣ１□／トリジン試薬で染色できる。この試薬は一
般的な方法によって５１製した［１＃照、Ｅ、スクール
（Ｓｔａｈｌ）、薄層りｃｔｖトゲラフイー（ＤＬｉｎ
ｎｓｃｈｉｃｈｔ　　ｃｈｒｏｍａＬｏＨｒａｐｈｉｅ
）第２版、スブリンが一社（Ｓ　ｐｒｉｎｇｅｒ　　Ｖ
　ｅｒｌａｇ、　Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、　Ｎ　ｅｗＹ
ｏｒｋ）１１９６７　］； ６）　この化合物の抗バクテリア作用が第１表に示す通
りである、 によって特徴づけることができる。

本発明による新規な抗生物質は７ンノマイシン（ａｎｎ
ｏ論ｙｃｉｎ）と命名される。

本発明は更に炭素及び窒素源及び鉱物塩を含有する栄養
媒体中での培養時に（１）〜（５）で示した性質及びパ
ラメータを有する化合物を産生ずるストレプトマイシー
ト科の新しい微生物に関する。

これらのうちストレプトミセス属の新しい微生物種Ｂ５
５７２は本発明との関連で特に重要である。

この種は、通常の放線菌（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ
）の単離法に従い、土壌試料懸濁液をベトリ皿に接種し
、これを４〜６週間培養し、そして個々のコロニーを繰
返し２次培養することにより濃縮しそして単離される［
ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）、Ｓ、Ｔ、及びクロ
ス（Ｃｒｏｓｓ）、　Ｔ　、　微生物学的方法（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓｉｎ　　Ｍ　ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、ブー
ス（Ｂ　ｏｏｔｈＬ　Ｃ、ｉｉ　ｅ　４　ｔ２９５−３
３４頁における放線菌［（Ａｃｔｉｎｏｉ＊ｙｃｅｔｅ
ｓ）ｗ７カデミツク社（Ａ　ｃａｄｅｅＩｉｃ　Ｐ　ｒ
ｅｓｓ、　Ｌ　ｏｎｄｏｎ−Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ）］。

研究所名Ｂ５５７２の新しい入トレプ）ミセス種は、ド
イツ微生物登録（Ｇ　ｅｒｍａｎ　　ＲｅｓｉｓＬｅｒ
ｏｒ　　　Ｍ　ｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ管　Ｇ　ｒ
ｉｓｅｈａｃｈｓｔｒａｓｓｅ　８　　ｖ３４００　ｔ
Ｇ６ｔｔｉｎｇｅｎ＊　Ｆ　ＲＧ）に、１９８６年８月
１３日イ寸けでＤＳＭ３８１７号としてファイルされた
。

更に本発明による化合物は、ストレプトマイシート科の
適当な微生物を、同化しうる炭素及び窒素源及び鉱物塩
を含有する栄養媒体中で好気性条件下に培養し、そして
化合物を常法によって単離する場合に得られることが発
見された。

本発明の方法を行なうために、ストレプトマイシート種
Ｂ５５７２（及びその突然変異体及び変種）が特に使用
できる。

この種は放線菌目、ストレプトマイシート科及びストレ
プトミセス属のバクテリヤに属する。これは土壌から単
離した。

Ｂ５５７２種は、バーギーズ・マニュアル・オプ・デタ
ーミネイティブ・バクテリオロノ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｆ　　ＤｅＬｅｒｍｉｎａｔｉ
ｖｅ　　ＢａｅｔｅｒｉｏｌｏｇＦ）を第８版（１９７
４）及びインターナショナル・ジャーナル・オブφシス
テマチック・バクテリオロノー（Ｉ　ｎｔｅｒｒ＋ａｔ
ｉｏｎａｌ　　Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　　ｏｆＳｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ　　ＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇＶ）＊　１６　＊
３１３−３４０（１９６６）及びザ・プロ力すオテス（
ＴｈｅＰｒｏｋａｒｙｏＬｅｓ）、２＋２０２８−２０
９０（１９８１）に従い、分類学的に決定した： 上−蔓１免 ラフイ／−ス及び〃ラクトースを含む基本寒天培地（Ｉ
ＳＰ媒体９号）及びＩＳＰ媒体３＋７号においてだけ適
度な胞子形成が［察された。他の媒体（ＩＳＰ媒体１＋
２号及び４〜６号）では非常に小さい好気性菌糸体ある
いは基質菌糸体だけが生成した。

ｉ　　　ＩＳＰ　　　’ＪＰ’２８℃；７咀１片色ニア
日後に淡い桃色 胞子＠：ＲＦ型又は胞子鎖形態：レクタス・７レキシビ
リＸ　（Ｒｅｃｔｕｓ　　ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｓ）胞子
：平滑（電子ＩＩ＠頷）、円筒形、巾約１．２〜１．４
μ−１長さ１．８〜２．４μ論基質菌糸体： 色：淡褐色ないし赤褐色 主−Ｊｌヱー 最適温度は２８℃である（ＩＳＰ媒体２号、２日間）、
生長はフロツムフェニコール（ｃｈｌｏｒａ論ｐｈｅｎ
ｉｃｏｌ）（１０１’　ｇ）：エリスロマイシン（１０
μｇ）、サルファ７ラゾール（ｉｏｏμｇ）、ストレプ
トマイシン（１０μｇ）、テトラシフリン（１０μｇ）
、フンノンｆｉｌ（ｆｕｓｉｄｉｅ　　ａｃｉｄ）（１
０μｇ）及びノボビオシン（５μｇ）によって禁止され
た（ＩＳＰ媒体２号、２８℃、２日問）。良好な生長（
基質菌糸体）はＩＳＰ媒体３＋７号で起こり、ＩＳＰ媒
体３号ではまばらに好気性菌糸体が生成した。

Ｂ５５７２の胞子形成が起こる上述の媒体の組成を下に
示す： ＩＳＰ　　７−チロシン寒天 グリセロール　　　　　　　　　１５　　　ｇＬ−チロ
シン　　　　　　　　　　　０．５　　ｇＬ−アスパラ
ギン　　　　　　　　　１ｇＫ　２　ＨＰ　Ｏ４（無水
）　　　　　　　　　　０，５　　ｇＭｇＳＯ４・７Ｈ
，ＯＯ，５ｇ ＮａＣＩ　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ０５ｇＦ　
ｅｓ　Ｏｓ　”　７　Ｈ２ｏ　　　　　　　　　Ｏ，Ｏ
ｆ　ｇＨ２０，脱イオン　　　　　　　　１０００　　
−２痕跡元素溶液　　　　　　　　　　　１　　　ｍ１
ｐＨ７，２−７，４ パクト寒天　　　　　　　　　　　２０　　　ｇ」１友
１１１ ＦｅＳＯ，φ７Ｈ２００，１ｇ ＭｎＣ１２・４　Ｈ２００，１ｇ ＺｎＳ　Ｏ，φ７　Ｈ２Ｏ０，１ｇ Ｈ２０，脱イオン　　　　　　　　　１００　　　輪２
７　ノース　よ〃ラフ　−ス　　む　　寅（Ｎ　Ｈ＝ｈ
Ｓ　Ｏ４２，６４ｇ ＫＨ，ＰＯ，（無水”）　　　　　　　　　　２．３８
　ｇＫ、ＨＰＯ，・３　Ｈｚｏ　　　　　　　　５．８
５　ｇＭｇＳ　Ｏ４・７　Ｈ２０１，００ｇ Ｈ，Ｏ，脱イオン１０００　　　ｍ１ ｐＨ６，８−７，０ ディ７コ寒天　　　　　　　　　　１５　　　ｇラフィ
ノース又は〃ラクトース　　１０　　　ｇ本ＣｕＳ　０
４　中５　Ｈ２Ｏ０，６４ｇＦｅＳＯ，・７Ｈ，ＯＯ，
１１ｇ ＭｎＣ１２φ４　Ｈ２００，７９ｇ Ｚ　ｎＳ　Ｏ４・７　Ｈ２００，１５ｇＨ２０，脱イオ
ン　　　　　　　　　１００　　　鶴２更なる媒体に対
しては、インド・シエイ・シスト　・　バ　り　ト　（
Ｉｎｔ、　　　Ｊ、　　５ｙｓｔ、　　　Ｂａｃｔ）１
６，３　１３〜３４０（１９６６）を参照。

本オートクレーブで処理後、無菌条件下に濾過したラフ
イ／−ス又は〃ラクトースの溶液を添加した。′Ｒ１１
！−濃度１０ｇ／２゜Ｃ源の利用は、インド・ジエイ・
シスト・バク）、１６，３１３〜３４０（１９６６）に
従い基本寒天培地で検査した。負の対照のために、Ｃ源
のない基本寒天培地での生長を比較した。

ｑ鬼１０ｇｊ！　　　　　　　　Ｌえ１対照（Ｃ源なし
）　　　　　　　　− Ｄ−グルコース　　　　　　　　± Ｄ−キシロース　　　　　　　　士 Ｄ−７ラビノース　　　　　　　− Ｌ−ラム／−ス　　　　　　　　＋ Ｄ−フルクトース　　　　　　　　− Ｄ−γラクトース　　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　　　＋ Ｄ−マンニトール　　　　　　　＋ メソ−イノシトール　　　　　　− サリシン　　　　　　　　　　　− サッカロース　　　　　　　　　− リボース　　　　　　　　　　　＋ マンノース　　　　　　　　　　＋ マルトース　　　　　　　　　　− ラクトース　　　　　　　　　　− メリビオース　　　　　　　　　− セルロース　　　　　　　　　　− アセテート　　　　　　　　　　− 本十；生長；−＝無生長；±＝不明瞭な結果形態学的デ
ータによれば、イスラエル（イエルサレム）の土壌試料
から単離された種Ｂ５５７２は、ストレプトマイシート
のシナモミウス（Ｃｉｎｎａｍｏｓ＋ｅｕｓ）群より割
り当てられる。生理学的性質はバーギーズー７二、：Ｌ
アル（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ）に記述され
ている種のいずれとも完全には一致しない。

分類学的同定：ストレプ）ミセス種 本発明の化合物の製造法に対して、通常の炭素及び窒素
源及び必要な塩を含有する栄養媒体が使用される０次の
ものが炭素源として使用することができる： 炭水化物特に多糖類例えば殿粉、オリゴ糖類例えばラフ
ィノース、及び単糖類例えばマンノース及びがラクトー
ス。更に糖アルコール例えばマンニトール及びグリセロ
ールも炭水化物源として適当である。更に天然産の混合
物例えばモルト抽出物又は醸造可溶物、及び言及した可
能性の混合物も使用することができる。

Ｎ源としては、通常の含窒素栄！！媒体成分、例えばア
ミノ酸、蛋白質、加水分解した蛋白質、アンモニウム塩
、天然産の複合物質例えばダイズ粉、粉ミルク及びこれ
らの適当な混合物を使用することができる。

鉱物塩は栄１！媒体中において補助物質として必要とさ
れ、例えばカリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネ
シウム、鉄、亜鉛及びマンガンの燐酸塩、硫酸塩又は塩
酸塩を含む。これらの物質の濃度は広い限界内で変える
ことができ、必要な鉱物塩の濃度は時に言及した炭素又
は窒素源中に又は用いる水中に不純物として存在する。

最後に、非常に広い種類の消泡剤例えばポリオール又は
シリコーンも補助物質として使用することができる。

本発明による化合物の製造法は、通常の固体、半固体又
は液体の栄養媒体を用いて行なうことができる。水性の
液体栄養媒体は好適である。

本方法において、栄養媒体は一般的な常法により、例え
ば傾斜試験管又はフラスコ培養によって接種される。

培養は好気性条件下に行なわれ、そして一般的な常法例
えば振とうフラスコ中での振とう培養、空気攪拌培養又
は水中培！！（ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　　ｃｕｌｔｕｒｅ
ｓ）を用いて行なうことができる。培養は好ましくは、
ばっ気式発酵器例えば通常の水中発酵タンクでの好気性
水中法を用いて行なわれる６培豊は連続式又はバッチ式
で行なうことが可能である。パッチ式は好適である。

製造工程を行なう場合、好気性条件が使用される。培養
は通常の方法に従い、例えば振どう培養又はばっ気弐発
＃器培養を用いて行なうことができる。栄養溶液成分の
百分率比は、広い範囲内で変えることができるが、一般
に炭素源は０．５〜８％、好ましくは０．６〜６％、窒
素源は０．　１〜５％、好ましくは０．５〜２％、そし
て塩は通常の濃度、好ましくはｏ、ｏｏｉ〜０．５重量
％で存在する。消泡剤は０．５％までの濃度で存在する
。用いる殺菌温度は１００〜１４０℃、好ましくは１２
０〜１３０℃である。

成長培養物のｐＨは好ましくは約６〜８．５、待に６１
．５〜８．０に維持されるべきである。過度に急な酸性
領域へのｐＨの低下は有機又は無機塩基好ましくはＣａ
　ＣＯ＊を添加することによって防止することができる
１発酵技術において通常のように、無菌の有機又は無機
酸例えばＨ２ＳＯ，或いは無菌のアルカリ液例えばＮａ
ＯＨをある間隔で培養溶液中に注入する自動ｐＨ１１節
機も使用できる。

微生物が適度な程度まで酸素及び栄養と接触することを
保証するのは好都合である。これは常法例えば振とう及
び攪拌によって行なうことができる。

培養温度は約１６〜４２℃、好ましくは２４〜３２℃、
特に好ましくは約２８°Ｃである。培養期間は広範囲に
変えることができ、例えば栄１！媒体の組成及び培養温
度がこの期間に影響する。それぞれの場合に理想的な条
件は同業者によって容易に決定することができる。

本発明による培養汁中で濃縮される化合物の量は一般に
培養の開始から約１〜７日、好ましくは１〜４日後にそ
の最大値に達することが明らかになった。

微生物学的方法において一般であるように、外米の感染
は培１！媒体において防止されなければならない、この
目的のために、通常の注意例えば栄養媒体、培！フラス
コ及びばっ気に必要な空気に気を使うべきである。装置
の殺菌に対しては、水蒸気又は乾燥殺菌が例えば使用で
きる。

培養中に泡が望ましくない量で生ずるならば、通常の化
学的消泡剤例えば液体油脂、油／水乳化液、パラフィン
、高級アルコール例えばオクタデカ７−ル、シリコーン
油及びポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレン化
合物が添加できる。

泡は通常の槻械的装置（例えば遠心力）を用いても抑制
又は排除することができる。

本発明による活性化合物はダラム陽性バクテリヤに対し
て抗生物質活性を示す。

アンノマイシンの微生物学的活性を第１表に示す、試験
法は通常の寒天拡散法であった０本発明による活性化合
物アンノマイシンの、特定した濃度のメタノール溶液１
００μ２を、試験胞子を特定の力価で含有する栄養媒体
の予じめ開けた孔（９■φ）の中へ入れた。ａいて寒天
板を特定する温度で培養した。特定の培養期間後、アン
ノマイシンによる禁止の面積の直径を測定した。

本発明による化合物は一般的に通常の物理的／化学的方
法で単離することができる。単離は例えば通常の抽出法
、沈殿法人１／又はクコマドグラフィー法で行なうこと
ができる６分離した化合物は言及した方法の助けを借り
で超Ｍ製してもよい。

しかしながら多くの場合には、存在しうる不純物が化合
物の活性に不利な共合に１５饗しないから必ずしも必要
でない。

上述した単離及び精製法において、両分が本発明による
化合物を高濃度及び高純度で含有することを検知するた
めに、好ましくは抗生物質活性の決定が用いられる。こ
の決定に適当な試験胞子は特に黄色ブドウ球菌１７５６
及び枯草＠ＡＴＣＣ２７８５９である。

本発明による化合物は例えば液体水性栄１１媒体を用い
る場合、次のように単離及び精製することができる：培
養上澄液の濃縮後、培！！炉液及１菌糸体を常法（例え
ば遠心分離）によって分離する。

本発明による化合物は、通常の抽出法、沈殿法乃ｆ／　
／　Ｖ　Ｉ＋ｊ　口Ｗ　ｌ−／ｌ’　−ｔ　７１−　律
ｒｆ１　ｎｈ　ｌ＋ｆ−ｈ）ｎ　ｆ培１１枦液から単離
でき、適当ならばＭｕすることができる。クロマトグラ
フィーはカフムクひマトグ５Ｐフィーの形で行ないうる
。使用できる吸着剤は通常のＷｔ機又は有機吸着剤例え
ば酸化アルミニウム、シリカゾル、珪酸マグネシウム、
活性炭、セルロール、セルロース誘導体、合成樹脂例え
ばポリアミド、例えばアセチル化ポリアミド、又はデキ
ストランデルである。流出剤としては、本発明の化合物
が溶解する多種類の溶媒又は溶媒混合物が使用できる。

メタノール又は２：１：１の比のブタノール：氷酢酸：
水の混合物が好適に使用される。

クロマトグラフィー法、例えば疎水性吸着剤への非特異
的吸着或いは一方デル拡散クロマトグラフィーは、本発
明の化合物の単離に好適に使用される。

本発明の化合物の商業的製造は、好ましくは疎水性担体
樹脂［例えばリュワボール（Ｌｅｗａｐｏｌｅ　）：バ
イエル社（Ｂａｙｅｒ　　ＡＧ）製の疎水性担体樹脂】
での吸着及び続く脱着で行なわれる６脱着は例えは短鎖
の脂肪族アルコール好ましくはメタノール又はエタノー
ルを用いて行なうことができる。

このように予備精製したｉｉＩ分は常法により再精製す
ることができる。デル拡散クロマトグラフィーは有利に
使用することができる。セファデックス（Ｓ　ｅｐｈａ
ｄｅｘ）Ｌ　Ｈ２０＠でのクロマトグラフィーは成功裏
に進行する。：、のようにして得られる生成物は一般に
４０％以上の純度である。

本発明による化合物は菌糸体から単離することができる
。この目的のために、菌糸体を好ましくは遠心分離によ
って発醇汁から分離し、そして繰返し、好ましくは２回
水と混和しうる溶媒で抽出する。ここに使用しうる溶媒
は低級（Ｃ＋〜Ｃ４）アルコール例えばエタノール又は
インプロパツール、及びケトンであり、アセトンが特に
好適である。

水性有機溶液は有機相が流出するまで真空下に濃縮され
る。今や残渣を対応する培養汁の容ｔまで水で希釈し、
凍結乾燥し、そして下記のように処理を続ける。

本発明による化合物は、活性炭又は適当な慴脂への吸着
によって培１！枦液から単離することもできる。特に適
当な方法は、本発明の化合物を、ポリスチレンに基づく
非特異的吸着剤樹脂［例えばローム・アンド・ハース社
（Ｒｏｈ■　＆　　Ｈａａｓ）製のアンバーライト（Ａ
ｍｂｅｒｌｉｔｅ）Ｘ　Ａ　Ｄ　＠或いはバイエル社製
のりュワボール０Ｃ１０３１＠］に結合させることであ
ることがわかった１本発明の化合物の脱着は、水と有機
溶媒、特に水／メタノールの混合物で分画的に行なわれ
る。ｆｆ色ブドウ球菌１７５６に活性であると決定され
た両分を、有機溶媒が完全に除去されるまで減圧下に濃
縮し、そして残渣を培１！枦液の容量の約１７．。中に
懸濁させ、そして凍結乾燥する。

培を炉液からの単離は好適である。凍結乾燥物を水で抽
出し且つ遠心分離し、モして残渣を水に再懸濁し、凍結
乾燥する０次いでこのようにして得た凍結乾燥物を、酢
酸を添加したメタノール／水の混合物に溶解する。活性
化合吻は通常のクロマトグラフィー法、好ましくはセフ
ァデックスＬＨ２００でのクロマトグラフィーにより或
いは［逆相」高速クロマトグラフィーにより溶液から得
ることができる。

活性化合物は、生長及びミルクと羊毛の産或を促進及び
加速するために、及び肉／Ｆ！１１肪比を肉に有利に移
行させるために、家畜の生産改良剤として使用される。

豚における赤痢及び酪農牛におけるケトン症を防止し且
つ治療するためのアンノマイシンの適応性は特に言及す
べきである。活性化合吻は好ましくは家畜動物に対して
使用される。

この家畜動物は反すう動物例えば牛、ひつじ及びやぎを
含む。

動物の性とは関係なく、本活性化合物は家畜のすべての
生長及び生産段階においても使用される。

活性化合物は好ましくは激しい生長及び生産段階で使用
される。動物の種類に依存して、激しい生長及び生産段
階は１ケ月〜１０年問持続する。

所望の効果を達成するために動物に投与される活性化合
物の量は、活性化合物の好ましい性質の結果として実質
的に変えることができる。この量は１日当り好ましくは
約ｏ、ｏｏｉ〜５０ｍｇ／体重ｋｇ、待に０．０１〜５
１１ｇ／ｋｇである。活性化合物の適当な量及び投与の
適当な期間は、特に家畜の種類、年令、性、生長及び生
産段階、健康及１飼育の形態に依存し、専門家によって
容易に決定することができる。

活性化合物は家畜に常法で投与される。投与の種類は特
に家畜の種類、挙動及び健康に依存する。

活性化合物は一度に投与しうる。しかしながら、活性化
合物は全生長及び生産段階にわたって或いは生長又は生
産段階の一部にわたって一時的に又は連続して投与して
もよい。連続投与の場合、投与は規則的な又は不規則的
な間隔で１日１回又は数回性なわれる。

投与はこれに適当な配合物の形で或いは純粋形で経口的
に行なわれる。

活性化合物は配合物中に単独で或いは他の生産促進活性
化合物、鉱物飼料、痕跡元素化合物、ビタミン、非蛋白
質化合物、着色剤、抗酸化剤、芳香剤、乳化剤、流動性
助剤、保存剤及び錠剤成形助剤と混合して存在しうる。

抗生物質は例えばチロシン及びバージニアマイシン（Ｖ
　ｉｒｇｉｎｉａｍｙｃｉｎ）である、鉱物飼料は例え
ば燐酸二カルシウム、酸化マグネジツム及び塩化ナトリ
ウムである。痕跡元素化合物は例えば７マル酸鉄、ヨウ
化ナトリウム、塩化コバルト、硫酸鋼及び酸化亜鉛であ
る。ビタミンは例えばビタミンＡ１ビタミンＤ、及びビ
タミンＥである。非蛋白質化合物は例えばビウレット及
び尿素である。着色剤は例えばカロチノイド例えばシト
ラナキサンチン、ゼアキサンチン及びカブサンチンであ
る。

抗酸化剤は例えばエトキシキン及びブチルヒドロキシト
ルエンである。芳香剤は例えばバニリンである。乳化剤
は例えばラクチン酸のエステル、及びレシチンである。

流動性助剤は例えばステアリン酸ナトリウム及びステア
リン酸カルシウムである。保存剤はクエン酸及びプロピ
オン酸である。

錠剤成形助剤は例えばりゲニンスルホン酸塩及びセルロ
ースエーテルである。

活性化合物は飼料及び／又は飲料水と一緒に投与しても
よい。

飼料は植物起源例えば干し草、ダイコン及び穀物副産物
の各飼料、動物起源例えば肉、脂肪、乳製品、ボーンミ
ール及び前製品の各飼料、ビタミン、蛋白質、アミ７Ｒ
例えばＤＬ−メチオニンのような各飼料、そして石灰及
び通常の塩を含む。

更に試料は補助的飼料、ＷＲ製飼料及び混合飼料も含む
、これらは各飼料を、エネルギー及び蛋白質の供給に関
して及びビタミン、鉱物塩及び痕跡元素の供給に関して
均衡のとれた栄養を保証する組成物中に存在する。

活性化合物の飼料中の濃度は通常約１〜５００ｐｐ論、
好ましくは３０〜２００　ｐｐｍである。

活性化合物はそのままで或いは予備混合物又は飼料濃厚
物の形で飼料に添加しうる。

次のものは本発明による活性化合物を含有する牛の飼料
の組成物の例である： 飼料の粒状ミール６９．９５％、粉砕したトウモロコシ
の穂軸１０％、ダイズミール８％、アル７アル７アミー
ル５％、糖９５％、尿素０．６％、燐酸カルシウム０．
５％、炭酸カルシウム０．５％、普通の塩０．３％及び
プレミックス０．１５％、このプレミックスはビタミン
Ａ７０，０００１　、Ｕ、、ビタミンＤ、７，０００　
Ｉ、Ｕ、、ビタミンＥ１００ｍｇ、マン〃ン５０ｍｇ、
亜鉛３０ｍｇ及びコバルト０．０６ｍｇを含有する。

活性化合物は必要な量でプレミックスと混合される。

精製された及び単離されたアン／マイシンを用いること
は絶対的に必要ではない。その製造中に製造される混合
物或いは製造される培文汁又は精製してない菌糸体を、
適当ならば乾燥後に用いることも可能である。多くの目
的に対して、本発明の化合物及びその、予しめ超精製し
てない混合物の粗製形を用いることは十分である。

次の実施例は本発明の新規な化合物の製造及び生物学的
作用を例示する。

実施例Ａ １日当り粗く粉砕した羊の飼料６５０ｇ及び乾燥したま
ぐさの穂軸２５０ｇを与えている羊から、反すうＱ（ｒ
ｕｍｅｎ　　ｆｌｕｉｄ）を反すう管から取り出した。

調製した飼料を、自動飼料供給磯により、１２の等しい
部分に分けて２時間毎に与え、また穂軸を２つの等しい
部分に分けて８．３０及び１６゜１５時に与えた０反す
う液を取出した直後に次の処理に供した二反すう液接種
物２，５ｍｊ！を、二酸化炭素を吹き込んだ且つ更に次
の成分を含有する容量１３ｍ１の試験管中に入れた： 微粉砕して調製した羊の飼料　　１００Ｂ緩衝溶Ｑ　　
　　　　　　　　　　　　７．５ｍｊ！実験を始める前
に二酸化炭素で飽和したａＳ溶液の組成は次の通りであ
った： ＮａｚＨＰ０４　　　　　　　　４，６１ｇ／水２ＮＪ
ＬＨＣＯ３１２，２５ｇ／水１ ＮａＣ１０，５９ｇ／水２ ＫＣＩ　　　　　　　　　　　　　０．７１ｇ／水２Ｍ
ｇＣｌ□　　　　　　　　　　　０．３２ｇ／水２Ｃａ
Ｃｌｚ　　　　　　　　　　　　Ｏ、１３ｇ／水２各試
験管をブンゼン栓で密閉し、３９℃で培養した、１．２
，４．６及び８時間後、調製物を手で振とうした。２４
時間培養した後、発酵液１．０ｍｌを調製物から除去し
、１０％燐酸（２−メチル吉草ｌｌｉ！５．７μモルを
含有）０．２ｍｌを含有するエラペンドル７　（Ｅ　ｐ
ｐｅｎｄｏｒｆ　）容器にピペットで入れた。試料を１
１，０００ｇの遠心分離にかけ、上澄液中の揮発性脂肪
酸の濃度をガスクロマトグラフィーで決定した。

酢酸とプロピオン酸の比を各実験で決定した。

陰性の対照物で得られた値を１００に設定し、これに対
して差を比較した。生成するプロピオン酸が多ければ多
いほど、酢酸とプロピオン酸の比が小さくなり、対照と
比べての比の数は小さくなった（低い比の値＝酢酸／プ
ロピオン酸の比の減少＝飼料の利用の改善）。

更に対照（＝１００）と比べての全脂肪酸の濃度を各実
験において決定した。

量　　　　　　酢酸／プロピオン酸　全脂肪酸μ／　製 対照　　　　１００　　　　　　１００２０　　　　　
８８．２　　　　１０４．７１００　　　　　６０．９
　　　　１０３，８２５０　　　　　５５．５　　　　
１０５，２１０００　　　　　４１．８　　　　１０３
．１実施例１ 予備培養に対する接種物質のｉＩＩ！１ｔ１１の三角フ
ラスコ中においてメルク社（Ｍｅｒｅｋ、　［）Ｈａ＠
５ｔａｄｔ）製の無菌「栄養溶液Ａ」カッ（ＣＡＳＯ■
）１５０ｍｊ！にストレプトマイシート！Ｂ５５７２の
生長期の細胞を接種し、オービタル（ｏｒｂｉｔａｌ）
振とう槻により２８０ｒｐ−で３日間、２８℃下に培養
した。なお「栄養溶液Ａ」は次の組成を有した： カゼインからのペプトン　　　　　１５ｇダイズミール
からのペプトン　　　　５ｇＤ−グルコース　　　　　
　　　　　２．５ｇＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　５ｇ水　　　　　　　　　　　　
　　１００１００Ｏまでこの生長した培養物は更なる発
酵バッチのための接種物質として役立った。

実施例２ 予備培養物の製造 上述の組成の栄養溶液２０！及び消泡剤［ユニオン・カ
ーバイド社（Ｕｎｉｏｎ　　Ｃａｒｂｉｄｅ）製サグ（
Ｓ　ＡＧ）５６９３１２０＋４！を、攪拌磯とばり気兵
を備えた発酵Ｂ（３０１）中に入れ、１２０℃で殺菌し
た。溶液を冷却した後、この発酵器に上述の如く製造し
たストレプトマイシー）ＢＳ５７２の振どう培養物３０
０ｓｊ！を接種し、攪件代（翼型攪件機）を３００　ｒ
ｐｍで駆動しながら無菌空気１０！／分（０，５Ｗｍ）
でばっ気し、そして２８℃の温度及び０．５バールの表
面圧下に発酵させた。２日間発酵させた後、内容物を６
００２の発酵器でのバッチに対する接種物として用いた
。

実施例３ タンクでの発酵 ６００！の発酵器中において、次の組成スキムミルクの
粉末　　　　　　　１０゜イースト自己消化物　　　　
　　　　１．５ｇデキストリン　　　　　　　　　　　
４０ｇＤ−グルコース　　　　　　　　　　５ｇ消泡剤
（サグ５６９３　）　　　　　　　　１　ｍｇ水道水　
　　　　　　　　　　１０００＋ｊ！の栄養溶液４００
２をｐＨ７まで調節し、１２０℃で６０分間殺菌し、２
８℃まで冷却し、実施例２に従？て製造した接種物２０
２を接種した。発酵を２８℃、無菌空気１８０Ｒ／分（
０，４５Ｗｍ）のばっ気速度、１．０パールの表面圧及
び１００ｒｐ＋１での攪拌（翼型攪件槻）下に行なった
。３〜４日間発酵した後に７ンノマイシンが生成した時
、培養物を集めた。

実施例４ ａ）実施例３の４００２の発酵から得られた培養汁を、
ウェスト７アリア（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ）分離器中にお
いて約２００１７時で分離した。上澄液のｐＨを６Ｎ　
　ＨＣＩで４．０に調節し、リュワボール０Ｃ１０３１
■（バイエル社）５０１を充填した直径３０ｃｍのカラ
ムに移した。洗浄を脱鉱物水３００１及ｖ（３０％）水
性メタノール３００１で連続的に行ない、そして脱着を
純粋なメタノールで行なった。肌着物を減圧下に濃縮し
、本釣２０２中に懸濁させ、凍結乾燥し、本発明による
粗活性化合物２１５ｇを得た。活性化合物含量は３％で
あった。

ｂ）菌糸体をアセトン３０！と共に３０分間攪拌し、次
いで濾過した。濾過残渣を再びアセトン２０１と共に３
０分間攪拌し、再び濾過した。今や精製した炉液を減圧
下に約１５２まで濃縮し、次いで脱鉱物水で１５０１ま
で希釈した。ｐＨを６Ｎ　　ＨＣＩで４．０に調節した
後、この溶液をリュワボール０Ｃ１０３１＠の２０１を
充填した直径２０ｃｍのカラムに移した。このカラムを
脱鉱物水１５０ｇ及び３０％水性メタノール１５０１で
連続的に洗浄し、メタノール１５０１で脱着させた。今
やこの脱着物を減圧下に濃縮し、水約１Ｏｌ中に懸濁さ
せ、本発明による粗化合物９６ｇを得た。活性化合物の
含量は３％であった。

実施例５ 本発明による化合物の、抽出、デル・クロマトグラフィ
ー及び逆相クロマトグラフィーによる精製 実施例４ａによって製造した粗生成物１０ｇを水１００
ｍｊｉ中に懸濁させ、そのｐＨを０．２ＮＫＯＨで８．
０に調節した。今やこの懸濁液を２０分間攪拌し、次い
で遠心分離した。沈降物を水５０ｍ１中に懸濁させ、凍
結乾燥した。純度１２％の粗生成物１．５ｇを得た。

そのような粗生成物２．７ｇを、酢酸に関して５０ｍＭ
である５０％水性メタ／−ル性溶液３０輸２に溶解し、
セファデックスＬＨ２０＠でのゲル濾過に供した。直径
５ｃ＋ａ及び長さ１ｍのカラムを用いた。

流速はｆ６０ｍｌ／時であった。２０１ずつ画分を取っ
た。抗生初学に従い黄色ブドウ球菌１７５６に対して活
性は画分を一緒にし、減圧下に濃縮し、凍結乾燥した。

この結果活性化合物含量４５％を有する本発明の抗生物
質３１４ｍｇを得た。

このようにして得た調製物１８０ｍｇを、分取用ＲＰ−
１８カラムを通して６０１１Ｉｇの部分に分けた。

この場合リヒロソルブ（Ｌ　１ｃｈｒｏｓｏｒｂ＠）Ｒ
Ｐ　１８７μ曽（メルク社）を充填した直径１６ａ＋−
及び長さ２５ｃ論のカラムを用いた。用いた流出液は、
ＨコＰＯ，を用いてｐＨ２，１に調節した０、ＩＭＫＨ
２ＰＯ，及びアセトニトリルの、級衝溶ａ／アセトニト
リル比６／４の混合物であった。流速は１５ａｊｉ／分
であった。１６ｍｊ；ずつ画分を集めた。

両分を薄層クロマトグラフィーで分析し、そしてチモー
ル／Ｈ２ＳＯ，で染色しうる一成分からなる且つ生物学
的に活性は両分を一緒にしく１８０ｍｊ！　）、減圧下
に約７０／！まで濃縮した。

これを直径３ｃ鐘及び長さ１００Ｃ−の、１１ＩＭ水性
酢酸中セファデックスＬＨ２０［Ｆ］で満したカラムに
移した。流速は７０１１４２／時であった。１０−βず
つ画分を集めた０画分を上述の如＜＋ｒ析し、−緒にし
、凍結乾燥した。収量：純度９５％の生産物６８１゜

【図面の簡単な説明】 第１図は本発明の有機化学化合物の”Ｃ核磁気共鳴スペ
クトルを示し、そして第２図はその無水酢酸と反応後の
１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、以下の化学的及び物理的パラメータ： ａ）ＩＲ吸収スペクトル（ＫＢｒ）が次の波長（ｃｍ＾
   −＾１）に特性吸収帯を示す； ３３８８、１４０９、 ２９３６、１３５５、 １７３１、１１８８、 １６３９、１０７３、 １５３６、　９７２、 　　　　　　８１１、 　　　　　　６５２、 ｂ）重水素化ピリジン中抗生物質がｐｐｍで表示して第
   １図に示す如き＾１＾３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す
   、このスペクトルはテトラメチルシランを内部標準とす
   る抗生物質の重水素化ピリジン溶液について７５．４８
   ＭＨｚの磁場で記録した； ｃ）重水素化ピリジン中で記録した無水酢酸との反応後
   の抗生物質がｐｐｍで表示して第２図に示す如き＾１＾
   ３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す、このスペクトルはテ
   トラメチルシランを内部標準とする酢酸塩の溶液につい
   て７５．４８ＭＨｚの磁場で記録した； ｄ）元素分析（３０℃で高真空下に２日間乾燥した後）
   ： Ｃ５７．４−５６．８ Ｈ　８．６−　８．８ Ｎ　３．３−　３．４ Ｏ２６．１−２８．３ ここに、高分子量天然生成物の場合、元素分析の誤差範
   囲は一般に普通より大きくてよいことを指摘しなければ
   ならない。この理由のために実験式の正確な決定は可能
   でない［Ｒ．Ｂ．ウッドワード（Ｗｏｏｄｗａｒｄ）、
   アンゲバンテ・ヘミ−（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．）、￥
   ６９￥、５０〜５１（１９５７））］； ｅ）シリカゲルでの薄層プレートでのクロマトグラフィ
   ー後に、この化合物はチモール／Ｈ＿２ＳＯ＿４又はＣ
   ｌ＿２／トリジン試薬で染色できる。この試薬は一般的
   な方法によって調製した［参照、Ｅ．スタール（Ｓｔａ
   ｈｌ）、薄層クロマトグラフィー（Ｄ■ｎｎｓｃｈｉｃ
   ｈｔ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｅ）第２版、スプ
   リンガー社（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉ
   ｄｅｌｂｅｒｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ）、１９６７］； ｆ）この化合物の抗バクテリア作用が第１表に示す通り
   である、 によって特徴づけられる有機化学化合物。 ２、ストレプトマイシート（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔ
   ａｃｅａｅ）科、特にストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔ
   ｍｙｃｅｓ）属及び好ましくはストレプトミセス種ＢＳ
   ５７２（ＤＳＭ３８１７号に相当）の微生物を、同化し
   うる炭素及び窒素源及び鉱物塩を含有する栄養媒体中に
   おいて好気性条件下に培養し、そして所望の化合物を単
   離する特許請求の範囲第１項記載の有機化学化合物を製
   造する方法。 ３、特許請求の範囲第２項記載の方法で製造される特許
   請求の範囲第１項記載の有機化学化合物。 ４、特許請求の範囲第１〜３項において特定した化合物
   を含有するプレミックス及び／又は飼料添加物。 ５、家畜の生産を促進するために、特許請求の範囲第１
   〜３項において特定した化合物或いは特許請求の範囲第
   ４項記載のプレミックス及び／又は飼料添加物を使用す
   ること。 ６、炭素及び窒素源及び鉱物塩を含む栄養媒体中で培養
   した時に特許請求の範囲第１又は２項において特定した
   化合物を産生するストレプトマイシート科、特にストレ
   プトミセス属の微生物。 ７、ストレプトミセス種ＢＳ５７２（ＤＳＭ３８１７号
   に相当）、及びその突然変異体及び変種。 ８、特許請求の範囲第６又は７項記載の微生物を、特許
   請求の範囲第１及び２項において特定した化合物の製造
   に使用すること。