SU1735369A1

SU1735369A1 - Способ получени аминогликозидного антибиотического комплекса

Info

Publication number: SU1735369A1
Application number: SU904731518Q
Authority: SU
Inventors: Галина Николаевна Вострокнутова; Виктор Николаевич Ковалев; Лариса Петровна Жиганова; Галина Михайловна Симонова; Нина Алексеевна Саитова; Ольга Александровна Белоусова
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Биотехнологии
Priority date: 1990-08-16
Filing date: 1990-08-16
Publication date: 1992-05-23

Abstract

Использование: микробиологическа и медицинска промышленность. Сущность изобретени : культуру Streptomyces cremeus subsp nebramycini выращивают на посевной питательной среде, после чего внос т в питательную среду, содержащую соевую муку, животный жир, глюкозу, хлористый аммоний, мел и водопроводную воду , при этом через 30-36 ч после начала культивировани внос т раствор сернокислого марганца. При этом с 24 по 48 ч культивировани в культуральной жидкости поддерживают насыщение кислородом на уровне 6-10%. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Description

Изобретение относитс к микробиологической и медицинской промышленности. в частности к способу получени аминогли- козидного комплекса, состо щего из карба- моилтобрамицина (тобрамицин медицинский препарат представл ет интерес в химиотерапии инфекций, обусловленных грамотрицательными бактери ми, в том числе Ps. aerugihosa), карбамоилканамици- на и апрамицина (примен етс в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней ).

Известны способы получени антибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин.

Наиболее близким к изобретению вл етс способ, согласно которому вегетативный посевной материал культуры Streptomyces cremeus subsp. nebramycini выращивают .на посевной среде следующего состава, мас.%: кукурузный экстракт 2,0: глицерин 2,0; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3: мел 0,5; животный жир 0,75.

Процесс ферментации ведетс на среде следующего состава, мас.%: мука соева 3.5: глюкоза 1,5: животный жир 1.5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1.1: мел 0.7. водопроводна вода остальное .

До начала процесса ферментации в среду внос т сернокислый марганец в концентрации 0,025%. Количество подаваемого воздуха составл ет один объем на один объем среды в 1 мин. работа мешалки непрерывна с числом оборотов 150 об/мин.

Недостатком известного способа вл етс низка антибиотическа активность культуральной жидкости в конце ферментации .

Целью изобретени вл етс увеличение антибиотической активности культуральной жидкости.

Поставленна цель достигаетс тем, что сернокислый марганец вноситс на стадии ферментации не сразу, а через 30-36 ч роста, в течение вторых суюк ферментации, когда идет интенсивное накопление биомассы.

Ч

W

ел

W

о ю

процент насыщени кислорода в культу- ральной жидкости поддерживаетс на уровне 6-10%.

Пример 1 (по известному способу). В качестве объекта исследовани используют культуру Streptomyces cremeys subsp. nebramycinl (штаммы 2242, 9871). Вегетативный инокул т выращивают при 37±1°С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (k3an. 0,7), с числом оборотов мешалки 150 об/мин на среде следующего состава, мас.%: глицерин 2,0; кукурузный экстракт 2,0; животный жир 0,75; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; водопроводна вода остальное , рН среды до стерилизации 7,4 ±0,1.

Посевной материал (рН 5,5-7,0), не содержащий посторонней микрофлоры, в количестве 2% от объема культуральной жидкости используют при проведении ферментации при 37±1°С в аппаратах вместимостью 30 л (kaan.r 0,5) и в колбах ( 100 мл среды; Vioo 25 мл среды) на качалке с числом оборотов 240 об/мин на среде следующего состава, мас.%: соева мука 3,5; животный жир 1,5; глюкоза 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводна вода остальное, рН среды 6,2 ±0,1.

До начала процесса ферментации в среду внос т раствор сернокислого марганца до конечной концентрации 0,025%.

Продолжительность ферментации 72 ч. Антибиотическую активность культуральной жидкости определ ют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Bacillus subtllis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл. Суммарна антибиотическа активность культуральной жидкости 2800 мкг/мл (дл штамма 9871 и 1400 мкг/мл дл штамма 2242).

Примеры 2-14. Вегетативный инокул т культуры Streptomyces cremeus subsp. nebramecini как в примере 1. Посевной материал культивируют на ферментационной известной среде (примеры 1-7) и на среде, содержащей нетрадиционные виды сырь (примеры 8-14). Врем внесени сернокислого марганца в среду варьируют.

Полученные данные по вли нию времени внесени сернокислого марганца вереду на антибиотическую активность культуральной жидкости представлены в таблице.

Из таблицы следует, что оптимальным временем внесени сернокислого марганца вл етс 30-36 ч роста культуры. Внесение сернокислого марганца в культуральную

жидкость на эти часы ферментации приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости на 20% по сравнению с прототипом.

Пример 15. Процесс ферментации

провод т,как в примере 1. В течение вторых суток ферментации, когда удельна скорость роста продуцента максимальна , улучшают услови аэрации посредством увеличени расхода воздуха и числа оборотов мешалки, поддержива процент насыщени кислорода в культуральной жидкости на уровне дес ти. Суммарна антибиотическа активность культуральной жидкости на 72 ч ферментации 3360 мкг/мл дл штамма

9871 и 1680 мкг/мл дл штамма 2242.

Пример 16. Процесс ферментации провод т,как в примере 13, при этом с 24 до 48 ч роста продуцента увеличивают обороты мешалки в аппарате,поддержива процент

насыщени кислорода на уровне шести, На 36 ч ферментации в культуральную жидкость внос т стерильно раствор сернокислого марганца до конечной концентрации 0,025%. На 72 ч роста суммарна антибиотическа активность культуральной жидкости 4620 мкг/мл дл штамма 9871 и 2310 мкг/мл дл штамма 2242.

Из полученных данных следует, что увеличение аэрации в течение вторых суток

ферментации приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости на 10-20%

Claims

1. Способ получени аминогликозидного антибиотического комплекса, включающий культивирование продуцента Streptomyces cremeus subsp nebramycini в питательной среде с внесением раствора

сернокислого марганца, отличающий- с тем, что, с целью увеличени антибиотической активности культуральной жидкости, раствор сернокислого марганца внос т через 30-36 ч после начала культивировани .

2. Способ поп. 1.отличающийс тем, что с 24 по 48 ч культивировани в культуральной жидкости поддерживают уровень насыщени кислорода на уровне 6-10%.