CN109082397A - 饲用乳酸菌的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供饲用乳酸菌的培养方法，属于微生物技术领域，将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到pH为6.3‑6.7、含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中进行震荡培养，获得饲用乳杆菌发酵液；其中乳清蛋白水解物为：将乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液酸水解。本发明培养方法能实现高密度培养，所用发酵培养基能够阻止氧对饲养乳酸菌的伤害，为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养。

Description

饲用乳酸菌的培养方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及饲用乳酸菌的培养方法。
背景技术
进入新世纪，我国的畜禽养殖业有了飞速的发展。规模化养殖进程越来越快，科技养殖也有了广泛的应用。但是养殖业一直以来存在的弊端却没有得到很好的解决。如抗生素长期滥用导致的药物残留和细菌耐药性，对人类的健康潜在着很大的危害。再者在畜禽养殖中产生的粪便和污水，如果没有妥善的处理或利用，则会严重的污染环境，影响人类的生存。微生态学理论的提出和深入研究，是解决养殖业存在问题的主要手段，逐渐受到人们的重视。微生态制剂以其无残留、无毒副作用、无耐药性、成本低、效果显著、对环境无污染等特点，逐渐得到养殖界的认同。
乳酸菌具有改善肠道微生态环境、增加营养物质利用率、提高动物机体免疫力等多种生物学功能，已被广泛的应用于发酵食品、动物饲料和保健食品中。乳酸菌是生产微生物发酵饲料过程中使用最广泛也是最常用的一类菌。我国农业部允许用作饲料添加剂的乳酸菌有：干酪乳杆菌、植物乳杆菌、粪链球菌、屎链球菌、乳酸片球菌、嗜酸乳杆菌、乳链球菌、唾液乳杆菌等。乳酸菌是肠道内的正常菌群，它们通过降解碳水化合物生成乳酸和其他有机酸使肠道环境的pH下降从而抑制其他微生物杂菌的生长繁殖，抵抗革兰氏阴性致病菌，维持肠道中正常的生态平衡；增强体液免疫和细胞免疫，增强抗感染能力，增加机体肠黏膜的免疫调节活性，降解氨、吲哚、粪臭素等有害物质，并可产生一种特殊的抗菌活性蛋白-乳酸菌素，能有效抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长。乳酸菌的生产主要通过液体培养，但由于乳酸菌对营养和培养条件要求比较苛刻，并且在生长过程中不断消耗营养底物和产生有机酸等代谢产物，抑制了菌体自身的生民繁殖，采用常规方法培养时培养液中的活菌数一般只能达到107～109cfu/mL，较低的生物量制约了乳酸菌的工业化生产及应用。高密度培养(HDC)是提高微生物产量的有效途径和手段，由于不同菌种(或菌株)所能达到的最高菌体浓度相差较大目前对高密度培养没有确切定义，一般是指在液体发酵培养中，采用一定的技术手段和设备将菌体密度提高到常规培养数倍以上的培养技术。相对于普通陪养，高密度培养的优势在于可减少培养体积、缩短生产周期，获得较高的目标菌体密度，减少动力消耗从而降低生产成本。乳酸菌的高密度培养已广泛应用于乳制品行业而在词料行业中的研究和应用才刚刚起步，仍有诸多技术难题尚待解决。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能实现高密度培养的饲用乳酸菌发酵培养基，其所用培养基能够阻止氧对饲养乳酸菌的伤害，为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
饲用乳酸菌的培养方法，将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到pH为6.3-6.7、含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中进行震荡培养，获得饲用乳杆菌发酵液；其中乳清蛋白水解物为：将乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液酸水解。本发明培养方法能实现高密度培养，所用培养基用乳清蛋白水解过程中D构型酸的存在能够增加酸水解过程中D-型氨基酸的生成，而D-型氨基酸和一定聚合度的菊粉的存在使得到的乳清蛋白酸水解物能被饲用乳酸菌中存在的异型乳酸菌利用，而产生中间产物乙酰磷酸被转化成乙酸，即一分子葡萄糖产生两分子的三磷酸腺苷，这使得在发酵培养基内营养物质不变的情况下为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养。
作为优选，盐酸溶液浓度为3.5-4.5mol/L，盐酸溶液中含有0.22-0.25mM D构型酸。
作为优选，D构型酸选自D-酒石酸、D-二乙酰酒石酸、D-扁桃酸或D-樟脑酸。
作为优选，乳清蛋白水解物的制备方法为：
1)向乳清蛋白中加入乳清蛋白重量的5.8-8.0％的菊粉，混合均匀得混合料；
2)按料液比为1:4.2-5.8向步骤1得混合料中加入所述的盐酸溶液，混合均匀后在95-105℃下冷凝回流10-15h进行酸水解，即得乳清蛋白水解物。该制备方法得到的乳清蛋白水解物具有较高的营养价值，其中还含有呈鲜味的氨基酸谷氨酸和天冬氨酸及呈甜味的氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸，能够提高饲用乳酸菌对培养基的利用率，培养饲用乳酸菌的培养基也可以直接用于饲料中，能够提高饲养动物的摄食率。
作为优选，饲用乳杆菌种子液的制备方法为：将冷冻保藏的饲用乳杆菌接种于MRS液体培养基中，于35-40℃培养10-15h，连续活化三代后，即得种子液。
作为优选，发酵培养基含有乳清蛋白水解物20-32g/L、酵母粉2-6g/L、葡萄糖14-25g/L、缓冲盐5-10g/L、Mg2+水溶性化合物0.3-0.5g/L、Fe2+水溶性化合物0.1-0.3g/L、MnSO40.04-0.06g/L；所述Mg2+水溶性化合物为MgSO4、MgCl2和MgCO3和Mg(OH)2；所述Fe2+水溶性化合物为FeSO4、FeCl2、FeCO3和(NH4)2Fe(SO4)2；所述缓冲盐选自磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐或碳酸盐。该培养基中各组分的浓度和比例适当，碳源和氮源的比例，能够满足乳酸菌的生长需要，进而配合适当的培养条件而实现乳酸菌的高密度培养，同时该培养基采用乳清蛋白水解物部分替代乳酸菌培养基中的氮源，生产成本低，培养效果好。
作为优选，发酵培养的条件为：种子液的接种量为1.8-2.3v/v％，震荡培养温度为30-38℃、转速为100-120rpm、时间为14-16h。
作为优选，菊粉的聚合度为12-22。该聚合度的菊粉在乳清蛋白的水解过程中部分水解成葡萄糖，为饲养乳酸菌提供碳源，未被水解的菊粉在饲养乳酸菌发酵初期能够在培养基的表面能形成微晶体，微晶体之间相互作用能够阻止氧对饲养乳酸菌的伤害，且未被水解的菊粉能随着饲养乳酸菌发酵产生有机酸的增加而溶于水中水解成葡萄糖和果糖，能持续为饲养乳酸菌提供营养物质，提高饲用乳酸菌的繁殖数量；此外，乳清蛋白酸水解物含有，而该聚合度的菊粉和D-型氨基酸的存在使得到的乳清蛋白酸水解物能被饲用乳酸菌中存在的异型乳酸菌利用，而产生中间产物乙酰磷酸被转化成乙酸，即一分子葡萄糖产生两分子的三磷酸腺苷，这使得在发酵培养基内营养物质不变的情况下为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养。
进一步优选，菊粉的聚合度为15-18；菊粉含有2.7-3.5％的γ-菊粉。该聚合度的菊粉能够使得发酵培养基的培养效果达到最佳，菌体密度提高1个对数级，活菌数可达1010cfu/mL，实现高密度培养；同时γ-菊粉中含有较多分子内氢键，具有较低的溶解度，这使得乳清蛋白水解物中残余的菊粉在饲养乳酸菌发酵的过程中能逐步水解，持续为饲养乳酸菌发酵提供营养物质，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，活菌数可达1011cfu/mL。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1)本发明培养方法能实现高密度培养，所用培养基中各组分的浓度和比例适当，碳源和氮源的比例，能够满足乳酸菌的生长需要，进而配合适当的培养条件而实现乳酸菌的高密度培养，同时该培养基采用乳清蛋白水解物部分替代乳酸菌培养基中的氮源，生产成本低，培养效果好；
2)本发明培养方法用培养基用乳清蛋白水解物含有菊粉和D-型氨基酸，能够阻止氧对饲养乳酸菌的伤害，还能为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养；
3)本发明培养方法用培养基的制备方法制得的乳清蛋白水解物中含有D-型氨基酸，而D-型氨基酸和一定聚合度的菊粉的存在使得到的乳清蛋白酸水解物能被饲用乳酸菌中存在的异型乳酸菌利用，而产生中间产物乙酰磷酸被转化成乙酸，即一分子葡萄糖产生两分子的三磷酸腺苷。
本发明采用了上述技术方案提供饲用乳酸菌的培养方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
体现发明特征与优点的典型实施例将在以下的说明中详细叙述。应理解的是本发明能够在不同的实施例上具有各种的变化，其皆不脱离本发明的范围，且其中的描述在本质上是当作说明之用，而非用以限制本发明。
乳清属于工业生产干酪和干酪素的副产品，是在制造干酪或干酪素时，奶凝结成凝乳块后分离出的半透明液体。工业上生产吨的干酪就会排出吨的乳清。因此，乳清资源十分地丰富。乳清浓缩蛋白是由乳清经过特殊的工艺浓缩精制而得到的一类蛋白质，约占乳蛋白质的20％。由于乳酸菌缺乏生物合成的途径，不能合成其生长所必需的一些氨基酸、维生素等营养物质，并且水解完整蛋白的能力很弱，因此乳酸菌的生长对营养的要求十分苛刻。如果将乳清蛋白作为乳酸菌高密度生长所必需的氮源，需要对乳清蛋白进行一定程度的水解。使其容易被乳酸菌吸收利用，加速生长繁殖。乳清蛋白水解产物中含有大量的生物活性肽和丰富的氨基酸，这些肽和氨基酸在细胞生理活动及代谢功能的调节中具有极其重要的作用。
本发明一实施方式提供了饲用乳酸菌的培养方法，将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到pH为6.3-6.7、含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中进行震荡培养，获得饲用乳杆菌发酵液；其中乳清蛋白水解物为：将乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液酸水解。本发明培养方法能实现高密度培养，所用培养基用乳清蛋白水解过程中D构型酸的存在能够增加酸水解过程中D-型氨基酸的生成，而D-型氨基酸和一定聚合度的菊粉的存在使得到的乳清蛋白酸水解物能被饲用乳酸菌中存在的异型乳酸菌利用，而产生中间产物乙酰磷酸被转化成乙酸，即一分子葡萄糖产生两分子的三磷酸腺苷，这使得在发酵培养基内营养物质不变的情况下为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养。
于本发明一实施方式中，盐酸溶液浓度为3.5-4.5mol/L(例如3.52mol/L、3.83mol/L、4.0mol/L、4.2mol/L、4.35mol/L等)，盐酸溶液中含有0.22-0.25mM D构型酸，例如0.225mM、0.23mM、0.238mM、0.24mM、0.243mM、0.247mM等。
于本发明一实施方式中，D构型酸选自D-酒石酸、D-二乙酰酒石酸、D-扁桃酸或D-樟脑酸。
于本发明一实施方式中，乳清蛋白水解物的制备方法为：
1)向乳清蛋白中加入乳清蛋白重量的5.8-8.0％的菊粉(例如5.88％、6.5％、6.74％、7.0％、7.5％、7.85％等)，混合均匀得混合料；
2)按料液比为1:4.2-5.8(例如1:4.25、1:4.6、1:4.83、1:5.0、1:5.5等)向步骤1得混合料中加入所述的盐酸溶液，混合均匀后在95-105℃(例如95.5℃、98℃、100℃、102℃、103.7℃、104℃等)下冷凝回流10-15h(例如10.5h、12h、12.5h、13h、14.5h等)进行酸水解，即得乳清蛋白水解物。该制备方法得到的乳清蛋白水解物具有较高的营养价值，其中还含有呈鲜味的氨基酸谷氨酸和天冬氨酸及呈甜味的氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸，能够提高饲用乳酸菌对培养基的利用率，培养饲用乳酸菌的培养基也可以直接用于饲料中，能够提高饲养动物的摄食率。
于本发明一实施方式中，饲用乳杆菌种子液的制备方法为：将冷冻保藏的饲用乳杆菌接种于MRS液体培养基中，于35-40℃培养10-15h，连续活化三代后，即得种子液。
于本发明一实施方式中，发酵培养基含有乳清蛋白水解物20-32g/L、酵母粉2-6g/L、葡萄糖14-25g/L、缓冲盐5-10g/L、Mg2+水溶性化合物0.3-0.5g/L、Fe2+水溶性化合物0.1-0.3g/L、MnSO4 0.04-0.06g/L；例如发酵培养基可含有乳清蛋白水解物20.5g/L、酵母粉2.3g/L、葡萄糖14.8g/L、缓冲盐5g/L、Mg2+水溶性化合物0.3g/L、Fe2+水溶性化合物0.1g/L、MnSO4 0.04g/L，发酵培养基也可含有乳清蛋白水解物25.7g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖16.8g/L、缓冲盐7.7g/L、Mg2+水溶性化合物0.457g/L、Fe2+水溶性化合物0.175g/L、MnSO4 0.043g/L，发酵培养基还可含有乳清蛋白水解物32g/L、酵母粉6g/L、葡萄糖25g/L、缓冲盐5g/L、Mg2+水溶性化合物0.5g/L、Fe2+水溶性化合物0.1g/L、MnSO4 0.06g/L。其中，Mg2+水溶性化合物为MgSO4、MgCl2和MgCO3和Mg(OH)2；Fe2+水溶性化合物为FeSO4、FeCl2、FeCO3和(NH4)2Fe(SO4)2；缓冲盐选自磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐或碳酸盐(例如磷酸盐可以为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠等，柠檬酸盐可以为柠檬酸钠、柠檬酸三铵等，乙酸盐可以为乙酸钠等，碳酸盐可以为碳酸钠、碳酸钙、碳酸氢钠等)。该培养基中各组分的浓度和比例适当，碳源和氮源的比例，能够满足乳酸菌的生长需要，进而配合适当的培养条件而实现乳酸菌的高密度培养，同时该培养基采用乳清蛋白水解物部分替代乳酸菌培养基中的氮源，生产成本低，培养效果好。
于本发明一实施方式中，发酵培养的条件为：种子液的接种量为1.8-2.3v/v％(1.88％、1.9％、1.93％、2.05％、2.1％、2.25％等)，震荡培养温度为30-38℃、转速为100-120rpm、时间为14-16h。
于本发明一实施方式中，菊粉的聚合度为12-22，例如12.5、15.6、17、18、20.3、21等。该聚合度的菊粉在乳清蛋白的水解过程中部分水解成葡萄糖，为饲养乳酸菌提供碳源，未被水解的菊粉在饲养乳酸菌发酵初期能够在培养基的表面能形成微晶体，微晶体之间相互作用能够阻止氧对饲养乳酸菌的伤害，且未被水解的菊粉能随着饲养乳酸菌发酵产生有机酸的增加而溶于水中水解成葡萄糖和果糖，能持续为饲养乳酸菌提供营养物质，提高饲用乳酸菌的繁殖数量；此外，乳清蛋白酸水解物含有，而该聚合度的菊粉和D-型氨基酸的存在使得到的乳清蛋白酸水解物能被饲用乳酸菌中存在的异型乳酸菌利用，而产生中间产物乙酰磷酸被转化成乙酸，即一分子葡萄糖产生两分子的三磷酸腺苷，这使得在发酵培养基内营养物质不变的情况下为饲用乳酸菌提供更多的ATP，延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养。
于本发明一实施方式中，菊粉的聚合度为15-18，例如15.5、16、17、17.3、17.8等；菊粉含有2.7-3.5％的γ-菊粉，例如2.78％、3.05％、3.2％、3.3％、3.48％等。该聚合度的菊粉能够使得发酵培养基的培养效果达到最佳，菌体密度提高1个对数级，活菌数可达1010cfu/mL，实现高密度培养；同时γ-菊粉中含有较多分子内氢键，具有较低的溶解度，这使得乳清蛋白水解物中残余的菊粉在饲养乳酸菌发酵的过程中能逐步水解，持续为饲养乳酸菌发酵提供营养物质，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，活菌数可达1011cfu/mL。
下面，结合具体实施例对本发明一实施方式的饲用乳酸菌的培养方法作进一步说明。
实施例1：
饲用乳酸菌的培养方法，种子液的接种量为1.8v/v％将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中，在发酵温度为30℃、转速为100rpm的条件进行发酵培养14h，获得饲用乳杆菌发酵液；其中乳清蛋白水解物是对加入了菊粉的乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液中酸水解得到的。
上述发酵培养基含有乳清蛋白水解物20g/L、酵母粉2g/L、葡萄糖14g/L、缓冲盐5g/L、Mg2+水溶性化合物0.3g/L、Fe2+水溶性化合物0.1g/L、MnSO40.04g/L；Mg2+水溶性化合物为MgSO4；Fe2+水溶性化合物为FeSO4；其中；缓冲盐为柠檬酸钠。
上述菊粉的聚合度为15；菊粉含有2.7％的γ-菊粉。
上述乳清蛋白水解物的制备方法为：按料液比为1:4.2向添加了菊粉的乳清蛋白中加入浓度为3.5mol/L的盐酸溶液，在95℃下冷凝回流10h进行酸水解；其中菊粉的添加量为乳清蛋白重量的5.8％；盐酸溶液浓度为3.5mol/L，盐酸溶液中含有0.22mM D构型酸；D构型酸选自D-酒石酸。
实施例2：
饲用乳酸菌的培养方法，种子液的接种量为2.05v/v％将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中，在发酵温度为34℃、转速为110rpm的条件进行发酵培养15h，获得饲用乳杆菌发酵液；其中乳清蛋白水解物是对加入了菊粉的乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液中酸水解得到的。
上述发酵培养基含有乳清蛋白水解物26g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖20g/L、缓冲盐7.5g/L、Mg2+水溶性化合物0.4g/L、Fe2+水溶性化合物0.2g/L、MnSO40.05g/L；Mg2+水溶性化合物为MgCl2；Fe2+水溶性化合物为FeCl2；其中缓冲盐为重量比为1:0.8:0.4的磷酸二氢钾、柠檬酸钠和乙酸钠。
上述菊粉的聚合度为17；菊粉含有3.2％的γ-菊粉。
上述乳清蛋白水解物的制备方法为：按料液比为1:5.0向添加了菊粉的乳清蛋白中加入浓度为4.0mol/L的盐酸溶液，在100℃下冷凝回流12h进行酸水解；其中菊粉的添加量为乳清蛋白重量的7.5％；盐酸溶液浓度为4.0mol/L，盐酸溶液中含有0.235mM D构型酸；D构型酸选自D-扁桃酸。
实施例3：
饲用乳酸菌的培养方法，种子液的接种量为2.3v/v％将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中，在发酵温度为38℃、转速为120rpm的条件进行发酵培养16h，获得饲用乳杆菌发酵液；其中乳清蛋白水解物是对加入了菊粉的乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液中酸水解得到的。
上述发酵培养基含有乳清蛋白水解物32g/L、酵母粉6g/L、葡萄糖25g/L、缓冲盐10g/L、Mg2+水溶性化合物0.5g/L、Fe2+水溶性化合物0.3g/L、MnSO40.06g/L；Mg2+水溶性化合物为MgCO3；Fe2+水溶性化合物为(NH4)2Fe(SO4)2；其中缓冲盐为碳酸钙。
上述菊粉的聚合度为18；菊粉含有3.5％的γ-菊粉。
上述乳清蛋白水解物的制备方法为：按料液比为1:5.8向添加了菊粉的乳清蛋白中加入浓度为4.5mol/L的盐酸溶液，在105℃下冷凝回流15h进行酸水解；其中菊粉的添加量为乳清蛋白重量的8.0％；盐酸溶液浓度为4.5mol/L，盐酸溶液中含有0.25mM D构型酸；D构型酸选自D-二乙酰酒石酸。
对比例1：
饲用乳酸菌的培养方法，种子液的接种量为2.05v/v％将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中，在发酵温度为34℃、转速为110rpm的条件进行发酵培养15h，获得饲用乳杆菌发酵液。
上述发酵培养基含有乳清蛋白水解物26g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖20g/L、缓冲盐7.5g/L、Mg2+水溶性化合物0.4g/L、Fe2+水溶性化合物0.2g/L、MnSO40.05g/L；Mg2+水溶性化合物为MgCl2；Fe2+水溶性化合物为FeCl2；其中缓冲盐为重量比为1:0.8:0.4的磷酸二氢钾、柠檬酸钠和乙酸钠。
上述乳清蛋白水解物的制备方法为：按料液比为1:5.0向添加了菊粉的乳清蛋白中加入浓度为4.0mol/L的盐酸溶液，在100℃下冷凝回流12h进行酸水解；其中菊粉的添加量为乳清蛋白重量的7.5％；盐酸溶液浓度为4.0mol/L，盐酸溶液中含有0.235mM D构型酸；D构型酸选自D-扁桃酸。
对比例2：
饲用乳酸菌的培养方法，种子液的接种量为2.05v/v％将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中，在发酵温度为34℃、转速为110rpm的条件进行发酵培养15h，获得饲用乳杆菌发酵液。
上述发酵培养基含有乳清蛋白水解物26g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖20g/L、缓冲盐7.5g/L、Mg2+水溶性化合物0.4g/L、Fe2+水溶性化合物0.2g/L、MnSO40.05g/L；Mg2+水溶性化合物为MgCl2；Fe2+水溶性化合物为FeCl2；其中缓冲盐为重量比为1:0.8:0.4的磷酸二氢钾、柠檬酸钠和乙酸钠。
上述菊粉的聚合度为17；菊粉含有3.2％的γ-菊粉。
上述乳清蛋白水解物的制备方法为：按料液比为1:5.0向添加了菊粉的乳清蛋白中加入浓度为4.0mol/L的盐酸溶液，在100℃下冷凝回流12h进行酸水解；其中菊粉的添加量为乳清蛋白重量的7.5％；盐酸溶液浓度为4.0mol/L。
利用实施例2、对比例1和对比例的培养基进行培养饲用乳酸菌，将冷冻保藏的饲用乳杆菌接种于MRS液体培养基中，于37℃培养12小时，连续活化三代后，作为种子液；以2v/v％的接种量将种子液分别接种于实施例2、对比例1和对比例的培养基中振荡培养；发酵过程中不通气，于34℃，转速100rpm条件下发酵14-16小时，获得饲用乳杆菌发酵液，计算活菌数，结果如表1所示。
表1活菌数计算结果
由表1活菌数计算结果可知，实施例2培养饲养乳酸菌得到的活菌数高于对比例1和对比例2，这说明乳清蛋白的水解过程中菊粉的加入能够延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养；而乳清蛋白水解过程中D构型酸的存在能够增加酸水解过程中D-型氨基酸的生成，而D-型氨基酸和一定聚合度的菊粉的存在能延长发酵培养基对饲用乳酸菌的生长需要，提高饲用乳酸菌的酸胁迫抗性和繁殖数量，实现高密度培养。同时对比对比例1和对比例2，对比例1培养饲养乳酸菌得到的活菌数高于对比例2，这说明乳清蛋白的水解过程中菊粉的加入对培养饲养乳酸菌的影响度高于D-型氨基酸。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (8)

1.饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：将活化后的饲用乳杆菌种子液接种到pH为6.3-6.7、含有乳清蛋白水解物的发酵培养基中进行震荡培养，获得饲用乳杆菌发酵液；所述乳清蛋白水解物为：将乳清蛋白用含有D构型酸的盐酸溶液酸水解。
2.根据权利要求1所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述盐酸溶液浓度为3.5-4.5mol/L，所述盐酸溶液中含有0.22-0.25mM D构型酸。
3.根据权利要求1或2所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述D构型酸选自D-酒石酸、D-二乙酰酒石酸、D-扁桃酸或D-樟脑酸。
4.根据权利要求1所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述乳清蛋白水解物的制备方法为：
1)向乳清蛋白中加入乳清蛋白重量的5.8-8.0％的菊粉，混合均匀得混合料；
2)按料液比为1:4.2-5.8向步骤1得混合料中加入所述的盐酸溶液，混合均匀后在95-105℃下冷凝回流10-15h进行酸水解，即得乳清蛋白水解物。
5.根据权利要求1所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述饲用乳杆菌种子液的制备方法为：将冷冻保藏的饲用乳杆菌接种于MRS液体培养基中，于35-40℃培养10-15h，连续活化三代后，即得种子液。
6.根据权利要求1所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述发酵培养基含有乳清蛋白水解物20-32g/L、酵母粉2-6g/L、葡萄糖14-25g/L、缓冲盐5-10g/L、Mg2+水溶性化合物0.3-0.5g/L、Fe2+水溶性化合物0.1-0.3g/L、MnSO4 0.04-0.06g/L；所述Mg2+水溶性化合物为MgSO4、MgCl2和MgCO3和Mg(OH)2；所述Fe2+水溶性化合物为FeSO4、FeCl2、FeCO3和(NH4)2Fe(SO4)2；所述缓冲盐选自磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐或碳酸盐。
7.根据权利要求1所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述发酵培养的条件为：种子液的接种量为1.8-2.3v/v％，震荡培养温度为30-38℃、转速为100-120rpm、时间为14-16h。
8.根据权利要求4所述的饲用乳酸菌的培养方法，其特征在于：所述菊粉的聚合度为15-18；所述菊粉含有2.7-3.5％的γ-菊粉。
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