RU2722071C1 - Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 - Google Patents
Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2722071C1 RU2722071C1 RU2019135733A RU2019135733A RU2722071C1 RU 2722071 C1 RU2722071 C1 RU 2722071C1 RU 2019135733 A RU2019135733 A RU 2019135733A RU 2019135733 A RU2019135733 A RU 2019135733A RU 2722071 C1 RU2722071 C1 RU 2722071C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- cultivation
- peas
- nutrient medium
- subtilis vkpm
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, карбонат кальция, фосфат калия и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. 6 табл., 4 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, и может быть использовано для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, который составляет основу кормовой добавки «Энзимспорин».
Определенный набор питательных веществ необходим микроорганизмам для проявления их полезных свойств [1]. Для получения полноценного питания (азотистые соединения, углеводы, микро- и макроэлементы, другие биологически активные вещества) необходимо, на основании индивидуальных особенностей микроорганизмов, проводить исследования по подбору состава питательных сред [2]. Для повышения биологической активности микроорганизмов в настоящее время все чаще используют дешевые питательные среды, на их основе разрабатывают более совершенные технологии с целью значительного повышения продуктивности бактериальных культур. В состав питательной среды входят различные компоненты.
Неорганические соли используются в питательных средах как дополнительный источник N, Р, О, S, Н. Микроорганизмы лучше усваивают азот в восстановленной форме, остальные элементы - в окисленной форме. В качестве источника азота используют горох шлифованный по ГОСТ 6201-68. Однако, данных по использованию гороха шлифованного для приготовления сред для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 не найдено.
Для оптимизации питательной среды для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, были выбраны следующие неорганические соли: фосфат калия и карбонат кальция и горох шлифованный.
Известна питательная среда [3] для культивирования Bacillus subtilis следующего состава (г/л):
фосфат калия однозамещенный - 0,2-0,4;
сульфат аммония - 1.0-3.0;
цитрат натрия - 1.0-3.0;
сернокислая медь - 0.001-0.01;
сернокислый цинк - 0.002-0.005;
сернокислое железо - 0.0001-0.001;
хлористый кальций - 0.09-0.2;
сернокислый магний - 0.1-0.5;
сернокислый марганец - 0.01-0.1;
пептон - 2.0-8.0;
мальтоза - 1.0-5.0;
вода - остальное
Недостатком данной среды является многокомпонентность.
Известна аналогичная питательная среда [4] для культивирования Bacillus subtilis следующего состава (г/л):
1. Пептон - 12.0;
2. Дрожжевой экстракт - 5.0;
3. Натрий хлористый - 5.0;
4. Вода водопроводная до 1 л;
5. Канамицин - 50 мг/л;
6. Агар-Агар - 20.0;
7. Вода водопроводная до 1 л
Питательную среду формируют в емкости в виде слоя, на который укладывают полупроницаемую мембрану, например, целлофановую пленку. Сверху на пленку наносят посевную дозу штамма бактерий. Культивирование осуществляют в термостате при температуре 34-37°С в течение 20-24 ч. Далее емкость переносят в термостат с температурой 6-10°С и выдерживают при этой температуре в течение суток до образования спор бактерий.
Недостатком данной среды является то, что в состав среды входит канамицин - антибиотический препарат группы аминогликозидов. Для его приобретения требуется оформление разрешающих документов. Так же используется трудоемкая технология посева микроорганизмов.
Недостатком данной среды является то, что, пересев культуры на твердой среде нужно осуществлять каждые 15, максимум 30 дней. Это требует затрат сред, реактивов, энергоресурсов и рабочего времени.
Целью предлагаемого изобретения является увеличение количества бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 и срока хранения культуры на твердой среде, посредством культивирования на жидкой и твердой (агаризованной) питательной среде. Поставленная цель достигается тем, что в питательную среду, содержащую питательную основу и дистиллированную воду, вносится несколько неорганических солей (карбонат кальция и фосфат калия) и горох шлифованный, предварительно обработанный.
В качестве исходного штамма использовали штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, который представляет собой светло-коричневый сухой порошок из лиофильно высушенных бактерий штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Содержание спор составляет 5×109 КОЕ/г. Навеску спор взвешивали в стерильных условиях на аналитических весах, погрешность которых составляет 0,0002 г.
Из спор готовили суспензию в колбу Эрленмейера объемом 50 мл, содержащую жидкую питательную среду, которую готовят при следующем соотношении компонентов (г/л): пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, горох шлифованный, предварительно обработанный, в различных количествах, неорганическая соль в различных количествах (см. таблица 2), остальное - дистиллированная вода.
Для использования гороха шлифованного требуется его предварительная обработка. Горох шлифованный, в количестве 100 г/л промыть водопроводной водой, помесить во флакон емкостью 1 литр, и довести до литра дистиллированной водой. Закрыть флакон пробкой герметично. Затем автоклавировать в течении 1 часа при 2 Bar. После автоклавирования остудить до комнатной температуры и дважды процедить через два слоя марли. Полученный после обработки горох соединить с остальными компонентами среды и довести до 1 л дистиллированной водой. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 45 мин. Полученная среда имеет светло-желтый цвет, «чистый» запах и незначительный осадок. Охлаждали до комнатной температуры.
Затем вносили 5 г спор. Микроорганизмы (штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079) выращивали в колбах с жидкой средой в шейкер-инкубаторе «Innova 44» при 250 об/мин (эксцентриситет 5 см) и температуре 37°С в течение 24 часов. Такие условия являются оптимальными для Bacillus subtilis. Для сохранения посевного материала и подсчета колоний, после культивирования на жидкой среде, осуществляли посев на твердую питательную среду, которую готовили при следующем соотношении компонентов: пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, горох шлифованный, предварительно обработанный, в различных количествах, неорганическая соль в различных количествах (см таблица 1), агар - 18, остальное - дистиллированная вода. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 40 мин. инкубированные производиться 24 ч, температура 37°С в термостате. Затем осуществляли хранение посевного материала в течение 3-5 месяцев при температуре + 4-8°С.
Для выявления количества микроорганизмов использовали стандартный метод десятикратных разведений, с высевом в стерильных условиях в чашки Петри на твердую питательную среду,
После чего чашки с посевами инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов. В качестве контрольной пробы проводилось культивирование на средах без добавления солей и гороха шлифованного, предварительно обработанного. Для достоверности все опыты были проведены в семикратной повторности. Для культивирования использовали питательные среды (табл. 2).
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Влияние фосфата калия (K3PO4).
Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 на средах, содержащих различные концентрации фосфата калия, представлены в таблице 3.
Из приведенных данных видно, что максимальный достоверный рост количества колоний Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 наблюдался в средах с содержанием фосфата калия 0,50 г/л соли. Дальнейшее увеличении концентрации не меняет численность микроорганизмов. Для удешевления среды используем минимальную концентрацию соли, которая дает увеличение численности. Добавление фосфата калия в концентрации 0,5 г/л достоверно увеличивает количество микроорганизмов относительно контроля.
Пример 2. Влияние карбоната кальция (СаСО3).
Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 на средах, содержащих карбонат кальция, представлены в таблице 4.
Добавление карбоната кальция в питательную среду в концентрации 1,0 г/л достоверно увеличивает количество микроорганизмов относительно контроля.
Пример 3. Влияние гороха шлифованного, предварительно обработанного.
Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 в среде, содержащей, горох шлифованный, предварительно обработанный представлены в таблице 5.
При концентрации гороха шлифованного, предварительно обработанного в питательной среде 50 мл/л, наблюдалось увеличение количества колоний Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. При дальнейшем увеличении концентрации численность колоний увеличивается, но твердая среда становится мутной от осадка гороха, что делает затруднительным просмотр колоний на среде. Таким образом, 50 мл/л является оптимальной концентрацией для работы со средой.
Пример 4. Влияние гороха шлифованного, предварительно обработанного, фосфата калия и карбоната кальция на численность микроорганизмов в процессе культивирования
Были выбраны концентрации выше перечисленных ингредиентов, которые максимально увеличивают численность бактерии и качество среды. Таким образом, увеличение количества Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 достигается внесением в питательную среду: 50 мл / гороха шлифованного, предварительно обработанного; 1,0 г/л карбоната кальция; 0,5 г/л фосфата калия. Наблюдаем синергетический эффект взаимодействия компонентов (табл. 6).
Хранение посевного материала на среде с добавление гороха шлифованного, предварительно обработанного, карбоната кальция и фосфата калия возможно в течении 3-4 месяца при температуре + 4-8°С.
Литература
Биотехнология. Под ред. А.А. Баева. М.: Наука, 1984. 309 с.
1. White A., Handler P., Smith Е.L. Principles of biochemistry. Baltimore: The Johns Hopkins University School of Medicine, 1974. 1051 p.
2. Леляк А.И., Костровский В.Г., Рязанкина О.И. и др. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis // Патент РФ №2105562, заявлено 14.06.1995, опубл. 27.02.1998.
Claims (2)
- Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, содержащая пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, дистиллированную воду, агар- агар для твердой питательной среды, отличающаяся тем, что дополнительно содержит горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, карбонат кальция и фосфат калия при следующем соотношении компонентов, г/л:
-
пептон 15,0 дрожжевой экстракт 5,0 хлорид натрия 5,0 агар-агар для твердой питательной среды 18,0 горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием 50 мл карбонат кальция 1,0 фосфат калия 0,5 вода дистиллированная до 1 л
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019135733A RU2722071C1 (ru) | 2019-11-06 | 2019-11-06 | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019135733A RU2722071C1 (ru) | 2019-11-06 | 2019-11-06 | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2722071C1 true RU2722071C1 (ru) | 2020-05-26 |
Family
ID=70803281
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019135733A RU2722071C1 (ru) | 2019-11-06 | 2019-11-06 | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2722071C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2795797C1 (ru) * | 2022-06-27 | 2023-05-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Универсальная питательная среда для культивирования микроорганизмов |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2105562C1 (ru) * | 1995-06-14 | 1998-02-27 | Леляк Александр Иванович | Способ получения бактериального препарата на основе bacillus subtilis |
RU2668173C1 (ru) * | 2017-12-18 | 2018-09-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
RU2678133C1 (ru) * | 2018-01-09 | 2019-01-23 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens AP-33 |
RU2680702C1 (ru) * | 2017-12-06 | 2019-02-25 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
-
2019
- 2019-11-06 RU RU2019135733A patent/RU2722071C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2105562C1 (ru) * | 1995-06-14 | 1998-02-27 | Леляк Александр Иванович | Способ получения бактериального препарата на основе bacillus subtilis |
RU2680702C1 (ru) * | 2017-12-06 | 2019-02-25 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
RU2668173C1 (ru) * | 2017-12-18 | 2018-09-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 |
RU2678133C1 (ru) * | 2018-01-09 | 2019-01-23 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens AP-33 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2795797C1 (ru) * | 2022-06-27 | 2023-05-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Универсальная питательная среда для культивирования микроорганизмов |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106282044B (zh) | 一种生丝微菌和吡咯喹啉醌的制备方法 | |
CN104651268A (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
CN116024114B (zh) | 一种肠源枯草芽孢杆菌株及其制备方法和应用 | |
RU2580028C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
CN101153316B (zh) | 一种益生菌乳制品中干酪乳杆菌的检测方法 | |
RU2415924C1 (ru) | ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ Sinorhizobium fredii ВКМ В-2458D ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД СОЮ | |
RU2722071C1 (ru) | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 | |
RU2407786C1 (ru) | Питательная среда для выращивания deinococcus radiodurans | |
KR101156161B1 (ko) | 메밀 속성장으로부터 유래된 저영양성 바실러스 서브틸리스 에이치제이18-4 균주 및 이를 이용한 발효식품의 제조방법 | |
RU2413762C2 (ru) | ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ Bradyrhizobium japonicum ВКМ В-2456D ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД СОЮ | |
RU2680702C1 (ru) | Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 | |
RU2639516C1 (ru) | ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ Sinorhizobium fredii ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД СОЮ | |
RU2413707C2 (ru) | ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ ВИДА Sinorhizobium fredii КБ-11 ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД СОЮ | |
CN113862196B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌sd-kc-001及其应用 | |
RU2455351C1 (ru) | Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов | |
RU2751487C1 (ru) | Способ приготовления жидкой питательной среды и способ получения жидкого микробиологического препарата на основе смеси штаммов спорообразующих бактерий-антагонистов фитопатогенных грибов р. Fusarium | |
SETYATI et al. | Enzyme-producing symbiotic bacteria in gastropods and bivalves molluscs: Candidates for bioindustry materials | |
RU2303061C2 (ru) | Питательная среда для культивирования бактерий рода pseudomonas | |
RU2518282C1 (ru) | Питательная среда для глубинного культивирования туляремийного микроба | |
RU2586521C1 (ru) | ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ Sinorhizobium fredii ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД СОЮ | |
KR100193748B1 (ko) | 종속영양배양에 의한 고농도 클로렐라의 제조방법_ | |
RU2792438C1 (ru) | Селективная питательная среда с маннитом, желчью и полимиксином для выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia сухая | |
RU2789838C1 (ru) | Новый штамм-продуцент рамопланина actinoplanes ramoplaninifer | |
RU2410424C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
RU2301256C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования холерного вибриона |