SU1602393A3 - Способ получени гибридомы, продуцирующей моноклональные антитела к интерферону типа омега - Google Patents
Способ получени гибридомы, продуцирующей моноклональные антитела к интерферону типа омега Download PDFInfo
- Publication number
- SU1602393A3 SU1602393A3 SU874203388A SU4203388A SU1602393A3 SU 1602393 A3 SU1602393 A3 SU 1602393A3 SU 874203388 A SU874203388 A SU 874203388A SU 4203388 A SU4203388 A SU 4203388A SU 1602393 A3 SU1602393 A3 SU 1602393A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- interferon
- serum
- omega
- medium
- suspended
- Prior art date
Links
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims abstract description 51
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims abstract description 51
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims abstract description 8
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 7
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims abstract 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 5
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims abstract 3
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 claims abstract 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims abstract 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims abstract 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 3
- -1 omega-1 and 1 h Proteins 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 2
- HHVIBTZHLRERCL-UHFFFAOYSA-N sulfonyldimethane Chemical compound CS(C)(=O)=O HHVIBTZHLRERCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims 1
- 241000171835 Musculus Species 0.000 claims 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 244000309466 calf Species 0.000 claims 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 claims 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 claims 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 102100027562 39S ribosomal protein L36, mitochondrial Human genes 0.000 abstract 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 abstract 1
- 101000650297 Homo sapiens 39S ribosomal protein L36, mitochondrial Proteins 0.000 abstract 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 abstract 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 abstract 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 108010045648 interferon omega 1 Proteins 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100134910 Caenorhabditis elegans oig-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100036479 Interferon omega-1 Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003165 hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000007626 photothermal therapy Methods 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002215 polytrimethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/249—Interferons
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к гибридомной технологии и может быть использовано при получении МОН АТ к интерферону типа омега. Животное MUS MUSCULUS L. подвергают двукратной иммунизации гибридным интерфероном - 1 ч. интерферона типа омега-1 и 1 ч. интерферона типа α-2 и затем двукратной иммунизации интерфероном типа омега-1. Полученные иммунные клетки селезенки культивируют в сывороточной среде дл кисточной культуры. Получают миеломные клетки линии Р3Х63 AG8,653. Клеточные культуры раздельно промывают и суспендируют в бессывороточной среде дл клеточной культуры. Суспензии объедин ют, суспендируют, осадок суспендируют в среде, содержащей 45% RPMJ 1640, 50% ПЭГ и 5% ДМСО, суспензию встр хивают, добавл ют бессывороточную среду дл клеточной культуры, а затем среду с 10% эмбриональной тел чьей сыворотки. Смесь центрифугируют, осадок суспендируют в среде с 20% эмбриональной тел чьей сыворотки, гипоксантином, аминоптерином и тимидином. В суспензию внос т перитонеальные макрофаги, инкубируют и отбирают целевой продукт.
Description
Изобретение относитс к гибридом- i ной технологии и может быть использовано при получении монАТ к интерферону типа омега.
Способ осуществл ют следующим образом.
Селезеночные клетки животного, прошедшего предварительную иммутизацию интерфероном типа омега или гибридным интерфероном, состо щим из одной части интерферона типа омега-1. и одной части интерферона типа альфа, предпочтительно интерфероном типа омега-1 или интерферонами типов омега- 1 и альфа-х и последующую дополнительную иммунизацию интерфероном типа омега, предпочтительно интерфероном типа омега-1, подвергают сли нию с миеломными клетками, которые предпочтительно сами не продуцируют антитела, например с миеломными клетками линии P3X63Ag 8,653.
Получаемые при этом гибридомные культуры подвергают скринингу с целью идентификации тех клонен, которые .: продущ руют направленные против интерферона типа омега моноклональные антитела (монАТ). Ят этой цели, например, исполвзуют биологические опыты, которые могут подтвердить
О
ю
со (:о со
ы
внзывne fyro полученными птитепами 1тейтп.-1лизаци ю биологических активностей интерферона типа омега., например антивирусной активности„
Из напученных по способу хг ти культур, которые обозначают как ОИГ-4 , , ОМГ-6, ПМГ-7 и ОМГ-8 - и которые про вл ют существенное уменьшение антивирусной активности интерЛерона типа омега-1, выбирают клоны ОМГ-4, ОМГ-5 и ОМГ-7, которые используют дл произволсгва монАТ. Дл этой цели выбранные линии гиб- ридомных клеток культивируют in vivo или in vitro. Клетки выбранных клонов инокулируют в мьпией породы Balb/.c, которым предварительно ввод т пристан или неполную среду Фройн да. Через 7-18 дней собирают асцит- ную жидкость, из которой монАТ вьще- л ют путем осаждени сульфатом аммони и последующей аффиной хроматографии или же- другими известными методами. Образовавшиес антитела можно также только обогащать в ос- цитной жидкости.
Образовавшеес антитело можно аналогично обогащать или же выдел ть из насадочной жидкости соответствующей клеточной культуры, подготовленной in vitro. Получаемое по способу монАТ можно использовать не только дл доказательства наличи интерЛерона типа омега, но и дл очистки интерферона типа омега, предпочтительно интерферона типа омега-1.
Если получаемое монАТ предназначено дл тонкой очистки интерферона ти омега, то его предпочтительно ко- валентно св зывают с биологически неактивным носителем. При этом кова лентна св зь антитела осуществл етс на соответственно активированном носителе, предпочтительно Hai декстр новой основе, например, на активированной бромистым цианом или группой СН сефарозе. При этом подлежа- 1ЧИЙ очистке интерферон типа омега, например омега-1, в виде раствора пропускают над полученным монАТ на носителе при слабооснойной величине рН, например при рН 7-8, предпочтительно 7s, 5, после чего промывают при рН 7,5 до тех пор, пока Ьлюат больше не содержит протеина. Затем св занный интерферон элюируют в кислой области, например, при По
мощи Ojl М лимонной кислоты в 25%- ном этиленгликоле. Получаемые таким образом содержар1ие протеин фракции подвергают хроматографии на сильнокислом катионите, например, на ка- тионите Моно-С, При этом человеческий интерферон в упом нутом элюате немедленно абсорбируетс катиони- том и затем элюируют при помощи градиента хлористого натри .
Если монАТ используют в качестве антигена дл доказательства наличи или дл количественного определени интерферона типа омега, то можно использовать общеизвестные методы с использованием иммунопроб.
Пример 1, Получение моно- клональных антител, специфических относительно интерферона типа омега .
Иммунизаци ,
Самку мьппи типа BaLb/c возраста около восьми недель подвергают иммунизации высокоочш енным (степень тистоты 95%) гибридным интерфероном типа омега-1/о62 следующим образом. Перва иммунизаци : 200 мкг указанного интерферона вместе с полным адъю- вантом Фройнда (внутрибрющинно), втора иммунизац т : 200 мкм указанного интерферона вместе с полным составом добавки Фройнда (внутрибрюшинно), Втора иммунизаци осуществл етс по истечении 5 недель после первой иммунизации.
0
По истечении восьми недель после второй иммунизации мышь подвергают дальнейшей иммунизации с помощью 70 мкг очищенного интерферона типа омега-1 (степень чистоты 90%) при использовании неполного адъюванта Фройнда (внутрибрюшинно), Через 12 дней берут прабу сьгооротки.. Опыты по нейтрализации показывают, что сыворотка мьшш имеет относительно высокие титры нейтрализующих антител против интерферона типа омега-1 (полна нейтрализатщ при разбавлении сыворотки до 1000-кратного, частична нейтрализаци при 1000-кратном разбавлении). Опыт по нейтрализации осуществл ют следующим образом: 100 мкг разбавленной пробы сыворотки в среде клеточных культур
смешивают с 100 мкг раствора интер- - Ферона типа омега-1 (100 антивирусных ед./мп) и в .течение 90 мин инкубируют при .Затем антивирусну активность проб определ ют биологичеким методом с использованием клеток А549 рака легких, инфицированных ри русом энцефало-миокардита. Через 5 недель после третьей иммунизации мышей еще раз инт едируют 70 мкг очищенного интерферона типа омега-1 (степень чистоты 90%) без добавки.
Получен ие и скрининг гибридом.
Получение гибридом осуществл ют при использовании несецернируюгщх клеточных линий P3X63Ag8.653. По истечении 4 дней после последней иммуниза1щи берут селезенку мыши; клетки селезенки механически удал ют из ткани, суспендируют в среде дл клеточной культуры (среда: RPMI 1640 с добавкой пенициллина в виде натриевой соли; 100 ед/мл) и стрептомицина в виде сульфатной соли (50 ед/мл) и центрифугируют в течение 10 мин при 1000 об/мин в центрифз ге типа Бекманн TI-6. 2х1П миеломных клеток (культивированных в упом нутой среде с добавкой 10% эмбриональной тел чьей сыворотки) собирают центрифугированием и пром1 вают один раз бессывороточной средой дл клеточной культуры. Клетки селезенки и миеломные клетки затем повторно суспендируют в бессывороточной среде дл клеточной культуры, суспензии . соедин ют и повторно центрифугируют. Недостаточную жидкость удал ют, клетки суспендируют в 3 мл сред1,1, состо щей из 45% среды RPMI 1640, 50% полиэтилен гликол с молекул рным весом 4000 и 5% диметилсульфокс1ида, и в течение 90 с осторожно встр хивают. Затем оставл ют сто ть в течение 60 с. В течение 90 с по капл м прибавл ют 3 мл бессыворлточной гтита- тельной среды, суспензию в течение 60 с оставл ют сто ть, затем по капл м в течение 90 с добавл ют Дальнейшие 6 мл 6ecciiiBopoTo4no4 питательной среды и, наконеп, посто нно пе- ремеигива , медленно прибавл ют 12 мл питательно) среды с 10% эмПриональ- ной тел чьей сыворотки, оставл ют сто ть в течение 10 мин и затем довод т до объема 50 мл доба лением среды дл клеточной культуры с 10%
1602393
0
эмбриональной тел чьей сыворотки. Клетки собирают центрифугированием, суспендируют в 40П мл среды ГАТ (с 2 добавкой 20% эмбриональной тел чьей сыворотки, гипоксантина 1,., ам1 ноптерина 4x10 М и тимидина 1,6x10 М) . К этой суспензт-га прибавл ют перитонеальные макрофаги из 10 мышей пород1 1 BaLb/c (приблизительно 50000 кл./мл).
Суспензию пипеткой подают на плас- . тинки, кажда из которых снабжена 5 48 углублени ми (каждое углубление имеет ем1 ;ость 0,5 мл). Пластинки инкубируют при 37°С (95% воздуха, 5% двуокиси углерода, насыщение .во- )д ным паром). По истечении трех дней к каждой культуре прибавл ют 0,5 мл среды ГАТ. Из всего 800 исходных культур по истечении 2-3 недель приблизительно 300 культур показьюа- ют рост гибридомных клеток. Последую- скрининг осутцествл ют следующим образом.Над осадочные жидкости по меньшей мере 10-20% слитых гибридомных культур смепмвают с одинаковым объемом раствора человеческого интер- 0 ферока типа омега-1 (20 антивираль- ных ед./мп), нркубируют в течение 90 мин при 37 с и затем исследуют по меньшей мере два раза с соблюдением промежутка в одну неделю. 5 из куль- 5 тур, которые далее обозначаютс как ОМГ-4, ОМГ-5, ОМГ-6, ОМГ-7 и ОМГ-8, во всех опытах всегда про вл ют уменьшение антивирусной активности. Все культуры клонируют путем лими- тирую1чего разбавлени и клоны снова исследуют на нейтрализующую активность . Из каждой культуры 3-5 положительных клонов подвергают дальней0
inefi обработке. Дл пол Чени антител на живом организме 3-10x10 клеток каждой гибридной культуры внутрибрю- 1 й-;нно инокулируют в мыши породы Balb/c, которым за 2-3 дн до этого внутрибрюшинно инъецируют 0,5 м.п неполного .адъюванта Фройвда или за 7-10 дней до этого - 0,5 мл приста- на. По истечении 7-21 дн собирают образовавшуюс астц-гтную жидкость. Содержащиес в ней антитела обога- .-цают до степени чистоты выше 90% путем осажг;ени 50% сульфата аммони и а(хЬинной хроматографии на св занном с носителем протеине А. Дл всех гибридом на 1 мл асцитной жидкости получают приблизительно 2-5 мг чистого антитела.
Характеристика антител ОМГ-4, OJIT-S и ОМГ-7.
При электрофорезе на полиакрила- милном геле с использованием доде- иилсульФата натри , проводимом в невосстанавливаю1п 1хс услови х, и жидкостной гель-хроматографии под -to давлением все антитела про вл ют удерживаклцую характеристику, идентичную с иммуноглобулином R. В опыте по нейтрализатщи, в котором исследуют торможение.антивирусной активности 5 интерферонов, все антитела в концентрации 100 микг/мл нейтрализуют активность интерферона типа омега-1, но не активность интерферона типов льфа-2с, бета и гамма. Выше указан-2о ные клоны депонирапгЧны под номерами 87081404 (ОМГ-4), 87081402 (ОМГ-5) и 87081403 (ОМГ-7) в European Collection of Animal Cell Cultures. Centre for Applie d Micro- 5 biolof y and Research (Великобритани ) . Пример 2. Анализ с использованием св занной с энзимом пробы дл определени ин-зо терферона типа омега-1.
Антитела ОМГ-5, и ОМГ-7 ковалент- но св зывают с пероксидазой из хрена . Дл этого 2 мл пероксидазы в воде -j сметивают с 0,2 мл 100 мМ перйодата натри , встр хивают при комнатной температуре в течение 40 мин и подвергают диализу при 4 С в течение ночи при рН 4,4 с исполвзованием дО 2x500 мл 1 мМ ат1етата натри . Затем раствор довод т до рН примерно 8 добавлением 0,1 Н бикарбоната натри с рН 9,5, К раствору добавл ют раст,- вор. моноклонального антитела (ОМГ-5, дз 2 мл с 1,6 мг/мл; или ОМГ-7, 1,5 мл с 4,7 мг/мл, каждый раз в 10 мМ бикарбоната натри с рН 9,5), после чего встр хивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавл ют CQ 100 мкл раствора бората натри (4 мг/мл ввода) и раствор инкубируют на лед ной бане в течение 2 ч. Яа- тем по капл м добавл ют 3 мл холодного насыщенного раствора сульфата аммони и инкубируют на лед ной ба- не в. течение 1 ч. Образовавшийс оса- дов, св занный с пероксидазой иммуноглобулина , собирают ггутем центри55
з Q
5
фугировани , раствор ют в содержагцем фосФатньпЧ буфер изотоническом растворе поваренной соли с рП 7,4 и стабилизируют путем добавлени t мл- раствора альбумина сыворотки крупного рогатого скота (10 мг/мл в содержащем фосфатный буфер растворе поваренной соли). Получаемый раствор замораживают при минус 70°С.
Определение интерферона типа омега-1 с использованием св занных с энзимом иммунопроб на твердом носителе осуществл ют следуюпщм образом. Дл покрыти пластинок используют антитела ОМГ-2, ОМГ-5 или ОМГ-7 в концентрации 10 мкг/мл в 0,1 М карбоната натри с рИ 9,5 (100 мкл на углубление) и пластинки инкубируют либо при комнатной температуре в течение часа, либо при 4-8°С в течение ночи. Раствор антитела уда1шют, углублени промывают 200 мкл воды и заполн ют 100 мкл раствора альбумина сыворотки крупного рогатого скота (5 мг/мл) в Содержащем фосфатный буфер изотоническом растворе поваренной соли с рН 7,4 (далее раствор АС/ПС). Затем добавл ют 100 мкл раствора интерферона типа омега-1 с концентрацией 20 нг/мл и перемешивают. Затем во все углублени подают 50 мкл раствора, св занного с энзимом антитела (ОМГ-5/пероксидаза или ОМГ-7/пе- роксидаза), (раствор разбавлен в соотношении 1:10000 в АС/ПС) и пластинки инкубируют при комнатной температуре в течение 3ч. Затем раствор удал ют, углублени трижды промывают водой и заполн ют 100 мкл субстратного раствора (3 мг/мл о-фени- лендиамина, 1 мг/мл пербората натри в 0,067 М нитрата кали , рН 5). Через 30 мин инкубации при комнатной температуре в каждое углубление пипеткой подают 100 мкл 4 н серной кислоты, после чего замер ют оптическую плотность-при 492 нм. При всех исследуемых пробах (используемое дл покрыти антитело и св занные с пе- роксилазои антитела) достигаютс завис п ие от дозы изменени абсорб- 1ЩИ. Дл выполнени покрыти также используют 10 мкл/мл иммуноглобулина против интерферона типа омега-1, полученного путем двукратной имму- низации кролика интерфероном типа омега-1 и частичной очистки из сыворотки осаждением 50%-ным сульфатом
аммони . Анализ с использованием св занной с энзимом пробы можно использовать не только дл количественного определени интерферона типа омега-1, но и, например, дл определени содержани типа омега-1 в летЧкоцитарных интерферонах или других интерфероновых -препаратах, полученных из клеточньпс культур.
П р и м е р 3. Определение интерферона типа омегапутем иммунометрии
Антитело ОМГ-7 известными приемами маркируют системой N-сзтсцинимидил (2,3 н) пропионат (далее: H-NCn : 110 Ci/ммоль), Дл этой цели в сили- конизированной емкости в вакууме сушат досуха 1 мС1 раствора H-NCJI.
чего трижды промывают 250 мкл воды. Затем добавл ют 200 мкл раствора маркированного антитела (100 нг/мл в АС/ПС; на трубку примерно 27000 имп/мин) и инкубируют при в течение 20 ч. Затем шарики трижды промывают 20 мкп воды, перевод т в полипропиленовые трубки и добавл ют 4 мп сцинтиллирующей среды, после чего замер ют св занную радиоактивность. Использование изобретени позвол ет получать монАТ высокой специфичности к интерферону типа омега.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ получени гибридомы, про- дуцируюп ей моноклональные антителаЗатем пипеткой добавл ют 50 мкг раст-2Q к интерферону типа омега, заключаювора мон AT Of ir-7 (4,7 мг/мл) в содержащем буфер растворе поваренной соли с рН 7,4 и 3 мкл 1 М боратно- го буфера с. рП 8,5. По истечение 24 ч при 4°С избыточны H-NCIT уда.т1 ют 25 20 мкл 1 М глигщна в боратном буфере, разбавл ют 250 мкл 50 мМ калий-фосфатного буфера с рИ 7,4j 150. м11 хлористого натри и 5 мг/мп альбумина сыворотки крупного рогатого ско- ЗО та и отдел ют от маркированного антитела путем хроматографии на колонке (0,5x20 мс), содержащей сефадекс G 50 М, Антитело показывает специр |1йс в том, что животное Mus.mus - culus L. подвергают двукратной иммунизации гибрид1№1м интерфероном, состо щим из 1 ч интерферона типа омега-1 и 1 ч, интерферона типа о6-2 и затем двукратной иммунизации интер фероном типа омега-1, полученные иммунные клетки селезенки, предварительно прокультивированные в сывороточной среде дл клеточной культуры, и миеломные клетки несецернирующей линии РЗХбЗАр, 8,653 раздельно промывают и суспендируют в бессывороточ- ной среде дл клеточной культуры.фическую активность примерно 10 Ci/r 5 суспензии объедин ют, центрипротеина . Дл осуществлени опыта протравленные полистирольные шарики диаметром 6,5 мм снабжают покрытием из антитела ОМГ-2 (10 мкг/мл в О,1 М карбоната натри с рН 9,5; 1 ч при комнатной температуре). -Шарики подают в раствор АС/ПС, инкубируют в трубках в течение часа и затем два раза промывают 250 мкл воды. К шарикам добавл ют 200 мкл раствора интерферона типа 6мега-1 в повышаю- прхс концентраци х в АС/ПС, инкубируют при 4°С в течение 3 ч, послефугируют,осадок суспендируют в среде , содержащей 45% RPMI 1640, 50% полиэтиленгликол и 5% диметилсуль- фокс да, суспензию встр хивают, до- до бавл ют бессывороточную среду дл кл точной культуры, а затем среду с 10% эмбриональной тел чьей сыворотки, центрифугируют, осадок суспендируют в среде с 20% эмбриональной тел чьей 45 сыворотки, гипоксантином, аминоптери ном и тимидином, в суспензию внос т перитонеальные макрофаги мышей, инкубируют и отбирают целевой продукт.р |1йс в том, что животное Mus.mus - culus L. подвергают двукратной иммунизации гибрид1№1м интерфероном, состо щим из 1 ч интерферона типа омега-1 и 1 ч, интерферона типа о6-2, и затем двукратной иммунизации интерфероном типа омега-1, полученные иммунные клетки селезенки, предварительно прокультивированные в сывороточной среде дл клеточной культуры, и миеломные клетки несецернирующей линии РЗХбЗАр, 8,653 раздельно промывают и суспендируют в бессывороточ- ной среде дл клеточной культуры.фугируют,осадок суспендируют в среде , содержащей 45% RPMI 1640, 50% полиэтиленгликол и 5% диметилсуль- фокс да, суспензию встр хивают, до- бавл ют бессывороточную среду дл клеточной культуры, а затем среду с 10% эмбриональной тел чьей сыворотки, центрифугируют, осадок суспендируют в среде с 20% эмбриональной тел чьей сыворотки, гипоксантином, аминоптери- ном и тимидином, в суспензию внос т перитонеальные макрофаги мышей, инкубируют и отбирают целевой продукт.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19863633323 DE3633323A1 (de) | 1986-10-01 | 1986-10-01 | Neue monoklonale antikoerper gegen ifn-omega, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendung zur reinigung sowie zum nachweis von ifn-omega |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1602393A3 true SU1602393A3 (ru) | 1990-10-23 |
Family
ID=6310754
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU874203388A SU1602393A3 (ru) | 1986-10-01 | 1987-09-29 | Способ получени гибридомы, продуцирующей моноклональные антитела к интерферону типа омега |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5317089A (ru) |
| EP (1) | EP0262571B1 (ru) |
| JP (1) | JP2622260B2 (ru) |
| KR (1) | KR960009724B1 (ru) |
| AT (1) | ATE83262T1 (ru) |
| AU (1) | AU616158B2 (ru) |
| CA (1) | CA1320160C (ru) |
| DD (1) | DD269165A5 (ru) |
| DE (2) | DE3633323A1 (ru) |
| DK (1) | DK172801B1 (ru) |
| ES (1) | ES2052534T3 (ru) |
| FI (1) | FI92716C (ru) |
| GR (1) | GR3006846T3 (ru) |
| HU (1) | HUT45092A (ru) |
| IE (1) | IE59836B1 (ru) |
| IL (1) | IL84040A (ru) |
| NO (1) | NO173831C (ru) |
| NZ (1) | NZ222006A (ru) |
| PH (1) | PH30662A (ru) |
| PT (1) | PT85830B (ru) |
| SU (1) | SU1602393A3 (ru) |
| ZA (1) | ZA877354B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA013993B1 (ru) * | 2004-06-16 | 2010-08-30 | Верениум Корпорейшн | Композиции для ферментативного обесцвечивания хлорофилла и способы |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3852166T2 (de) * | 1987-09-30 | 1995-04-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | Analytische Vorrichtung für enzymimmunologische Tests. |
| US7087726B2 (en) | 2001-02-22 | 2006-08-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
| WO2004099231A2 (en) | 2003-04-09 | 2004-11-18 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
| US8895700B2 (en) | 2010-02-18 | 2014-11-25 | Janssen Biotech, Inc. | Monkey homolog of human interferon omega |
| JP6466904B2 (ja) * | 2013-03-15 | 2019-02-06 | ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド | インターフェロンアルファ及びオメガ抗体アンタゴニスト |
| TWI713453B (zh) | 2014-06-23 | 2020-12-21 | 美商健生生物科技公司 | 干擾素α及ω抗體拮抗劑 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI77877C (fi) * | 1979-04-20 | 1989-05-10 | Technobiotic Ltd | Foerfarande foer framstaellning och rening av human le-formig interferonprotein. |
| DE3306060A1 (de) * | 1983-02-22 | 1984-08-23 | Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim | Neue immunglobulin-produzierende hybridzellinien, deren verwendung und verfahren zu deren herstellung |
| DE3584198D1 (de) * | 1984-08-01 | 1991-10-31 | Boehringer Ingelheim Int | Neue genetische sequenzen, die durch sie codierten interferon-peptide vom typ i und diese sie produzierende organismen. |
| DE3574145D1 (en) * | 1984-08-27 | 1989-12-14 | Genentech Inc | Novel, distinct family of human leukocyte interferons, compositions containing them, methods for their production, and dna and transfected hosts therefor |
| DE3607835A1 (de) * | 1986-03-10 | 1987-09-24 | Boehringer Ingelheim Int | Hybridinterferone, deren verwendung als arzneimittel und als zwischenprodukte zur herstellung von antikoerpern und deren verwendung sowie verfahren zu ihrer herstellung |
-
1986
- 1986-10-01 DE DE19863633323 patent/DE3633323A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-09-23 AT AT87113896T patent/ATE83262T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-09-23 ES ES87113896T patent/ES2052534T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-23 EP EP87113896A patent/EP0262571B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-23 DE DE8787113896T patent/DE3783002D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-28 US US07/102,160 patent/US5317089A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-29 SU SU874203388A patent/SU1602393A3/ru active
- 1987-09-29 DD DD30737687A patent/DD269165A5/de unknown
- 1987-09-30 CA CA000548208A patent/CA1320160C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-30 FI FI874273A patent/FI92716C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 AU AU79217/87A patent/AU616158B2/en not_active Expired
- 1987-09-30 IL IL84040A patent/IL84040A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 ZA ZA877354A patent/ZA877354B/xx unknown
- 1987-09-30 NO NO874107A patent/NO173831C/no unknown
- 1987-09-30 IE IE262587A patent/IE59836B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 KR KR87010890A patent/KR960009724B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 HU HU874416A patent/HUT45092A/hu unknown
- 1987-09-30 NZ NZ222006A patent/NZ222006A/xx unknown
- 1987-09-30 DK DK198705136A patent/DK172801B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 PT PT85830A patent/PT85830B/pt unknown
- 1987-09-30 JP JP62247752A patent/JP2622260B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-10-01 PH PH35871A patent/PH30662A/en unknown
-
1993
- 1993-01-21 GR GR930400097T patent/GR3006846T3/el unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA013993B1 (ru) * | 2004-06-16 | 2010-08-30 | Верениум Корпорейшн | Композиции для ферментативного обесцвечивания хлорофилла и способы |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0014519B1 (en) | Cell lines, process for preparing them and process for producing antibodies | |
| US4780401A (en) | Novel monoclonal antibodies to human renin and hybridoma cells, processes for their preparation and their applications | |
| US4814275A (en) | Monoclonal hybridoma antibody specific for a human epithelial antigen | |
| JPH09294584A (ja) | ヒト腫瘍壊死因子に対するモノクロナール抗体 | |
| US4558005A (en) | Monoclonal anti-erythropoietin | |
| SU1602393A3 (ru) | Способ получени гибридомы, продуцирующей моноклональные антитела к интерферону типа омега | |
| US5552286A (en) | Hybridoma cell lines and their monoclonal antibodies to human pluripotent granulocyte colony stimulating factor | |
| US4678747A (en) | Monoclonal antibodies for detection of an H (O) blood group antigen | |
| EP0169234A1 (en) | IMMUNOTEST FOR BIOLOGICALLY EFFECTIVE HUMAN INTERFERON GAMMA. | |
| JPS6291197A (ja) | 抗ヒトインタ−ロイキン１抗体，その製法及びその使用法 | |
| CA1337050C (en) | Monoclonal antibody selectively binding to novel g-csf derivative | |
| EP0043285B1 (en) | Method for determination of valproic acid and reagents therein | |
| CA1330768C (en) | Monoclonal anti-human granulocyte colony stimulating factor antibody | |
| CN1017349B (zh) | 抗人心房钠尿肽的单克隆抗体 | |
| US5437995A (en) | Monoclonal antibody against an acidic FGF protein and hybridoma for its production | |
| Treves et al. | Establishment of cell lines from somatic cell hybrids between human monocytes and mouse myeloma cells. | |
| EP0174874A2 (en) | Hybrid cell line producing monoclonal antibody cytolytic to trichomonas vaginalis | |
| JP4493882B2 (ja) | 抗原およびこの抗原を識別するモノクローナル抗体 | |
| EP0229794A1 (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES FOR INTERFERON GAMMA, THEIR PRODUCTION AND USE. | |
| US5130233A (en) | Method for determining the β-subunit of human prolyl hydroxylase by radioimmunoassay to detect hepatic disease | |
| EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| JP2948594B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| EP0093776A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
| JPH0219768A (ja) | ヒトアデノシンデアミナーゼの免疫学的測定方法 | |
| SU1555360A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека |