FI92716B - Uudet monoklonaaliset vasta-aineet IFN-omegalle, niiden valmistusmenetelmät ja niiden käyttö IFN-omegan puhdistamiseen ja osoittamiseen - Google Patents
Uudet monoklonaaliset vasta-aineet IFN-omegalle, niiden valmistusmenetelmät ja niiden käyttö IFN-omegan puhdistamiseen ja osoittamiseen Download PDFInfo
- Publication number
- FI92716B FI92716B FI874273A FI874273A FI92716B FI 92716 B FI92716 B FI 92716B FI 874273 A FI874273 A FI 874273A FI 874273 A FI874273 A FI 874273A FI 92716 B FI92716 B FI 92716B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ifn
- omega
- antibody
- omg
- monoclonal
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims description 9
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 7
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 6
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 7
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 2
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010059724 Micrococcal Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001254 nonsecretory effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000003901 oxalic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/249—Interferons
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
1 92716
Uudet monoklonaaliset vasta-aineet IFN-omegalle, niiden valmistusmenetelmät ja niiden käyttö IFN-omegan puhdistamiseen ja osoittamiseen. - Nya monoklonala anti-kroppar för IFN-omega, deras framställningsförfaranden och deras användning för rening och pävisning av IFN-omega.
Julkaisussa Nucleic Acids Res. 13^ 4739-4749 (1985) on kuvattu uusia I-tyypin interferoneja, jotka rakenteeltaan ja antigeeniominaisuuksiltaan oleellisesti eroavat tähän mennessä tunnetuista a- ja β-interferoneista. Tälle uudelle interferoniluokalle annettiin sen vuoksi nimeksi INF-omega.
Patenttijulkaisussa EP-A-0.236.920, joka tuli julkiseksi 16.9.1987, kuvattujen uusien monoklonaalisten vasta-aineiden avulla, esimerkiksi uuden monoklonaalisen vasta-aineen OMG-2 avulla, voitiin lisäksi oleellisesti parantaa IFN-omegan puhdistamista. Nämä vasta-aineet ovat kuitenkin spesifisiä sekä IFN-a:n että myös IFN-omegan suhteen.
Tässä hakemuksessa kuvattujen vasta-aineiden avulla ei voitu kuitenkaan tehdä immunomääritysmenetelmää IFN-omegan osoittamiseen, koska IFN-omega-spesifisen vasta-aineen määrä oli aivan liian vähäinen polyklonaalisessa immunoglobuliinissa, jota käytettiin peittämiseen. Lisäksi tällainen testi ei olisi ollut spesifinen IFN-omegalle, koska, kuten edellä jo mainittiin, se olisi tunnistanut sekä polyklonaaliset että monoklonaaliset vasta-aineet ja myös IFN- a:n.
IFN-omegan osoittaminen ja kvantitasoiminen on täytynyt sen vuoksi tähän mennessä tehdä yksinomaan biologisten testien avulla, kuten esimerkiksi mittaamalla antiviraalinen aktiivisuus. Nämä osoitusmenetelmät ovat yleensä erittäin herkkiä, mutta aikaa ja työtä vaativia ja tarkkuudeltaan huonoja. Tämän vuoksi olisi toivottavaa voida kehittää 2 9271 6 immunomääritysmenetelmä, esimerkiksi ELISA- tai IRMA-tyyppinen testi, jonka avulla olisi mahdollista määrittää IFN-omega yksinkertaisella, nopealla ja tarkalla tavalla. Koska IFN-omega on liuoksessa monomeerinä, tällaisen testin kehittämiseen tarvitaan kuitenkin vähintään kaksi vasta-ainetta, jotka voivat tunnistaa IFN-molekyylin eri epitoopit. Monoklonaaliset vasta-aineet eivät ole välttämättömiä, mutta niillä on kuitenkin lukuisia etuja antiseerumeihin verrattuna.
Nyttemmin on yllättäen havaittu, että mainitut ongelmat voidaan poistaa uusien monoklonaalisten vasta-aineiden avulla. Keksinnön mukaisesti valmistetut vasta-aineet ovat spesifisiä IFN-omegalle; niiden avulla valmistetuilla immunomäärityksillä voidaan IFN-omega osoittaa ja kvantita-tisoida, mutta ne eivät reagoi muihin ihmisinterferoneihin, kuten α-, β- tai gamma-interferoneihin.
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat siten uudet monoklonaaliset vasta-aineet, jotka reagoivat spesifisesti IFN-omega-tyyppisen ihmisinterferonin, mutta ei kuitenkaan muiden ihmisinterferonien kanssa, ja näiden valmistusmenetelmät, näiden käyttö IFN-omegan puhdistamiseen ja IFN-omegan osoittamiseen, esimerkiksi immunomääritysmenetelmien avulla, joissa voidaan käyttää näitä vasta-aineita IFN-omega -tyyppi sen ihmisinterferonin spesifiseen osoittamiseen, jolloin lisäksi käytetään myös polyklonaalisia vasta-aineita.
Mainitut vasta-aineet valmistetaan keksinnön mukaisesti seuraavalla tavalla: Tähän tarvittavat vasta-aineita tuottavat hybridomasolu-linjat saadaan solufuusioiraalla vastaavasti immunisoitujen koe-eläinten pernasoluja (kts. Köhler ja Milstein,
II
3 92716 4 ΐ
Nature 256, 495-497 (1975)), esimerkiksi hiiren pernasoluja, myeloomasolujen kanssa, jotka mielellään eivät itse tuota mitään vasta-aineita, esimerkiksi linjan P3X63Ag8.653 myeloomasolujen kanssa (kts. Kearney et ai., J. Immunol.
123, 1548 (1979)). Tämä menetelmä muodostuu perimmältään siitä, että hiiren tai muuhun sopivaan eläimeen ruiskutetaan immunogeeniä. Tämän jälkeen immunisoiduista hiiristä, joiden seerumit sisältävät vasta-aineita ruiskutettua immunogeeniä vastaan, otetut pernasolut fuusioidaan myeloomasolujen kanssa. Saadaan hybridisoluja, joita kutsutaan hybridomiksi ja jotka lisääntyvät in vitro. Hybridomien populaatio analysoidaan ja käsitellään siten, että eristetään yksittäisiä klooneja, joista kukin erittää yhtä, antigeenispesifistä vasta-ainelajia. Jokainen tällä tavoin saatu yksittäinen vasta-ainelaji on yhden yksittäisen, immunisoidusta eläimestä säadun B-solun tuote, jota muodostui reaktiona immunogeenisen aineen spesifiseen immunogeeniseen rakenteeseen. Jos elävään isäntään viedään siten immuno-geenistä ainetta, isännän immuunijärjestelmä reagoi muodostaen vasta-aineita immunogeenisellä aineella olevia kaikkia tunnistettavia kohtia vastaan. Tämä vaikutus, nimittäin vasta-aineiden muodostuminen torjuntataisteluna tunkeutujaa vastaan, käsittää siten sen, että immunogeeniselle aineelle muodostuu affiniteetiltaan ja spesifisyydeltään erilaisia vasta-aineita.
Koska kahden paikan immunometrinen määritys perustuu vasta-aine:antigeeni:vasta-aine-rakenteen muodostumiseen, valitaan siten yleensä kaksi erilaista monoklonaalista vasta-ainetta, jotka eivät estä toistensa sitoutumista antigeeniin.
Esillä olevassa tapauksessa koe-eläimet esi-immunisoidaan tätä varten INF-omegalla tai hybridi-interferonilla, joka muodostuu IFN-omegal:n osasta ja IFN-a:n osasta, 92716 parhaiten IFN-omegal:11a tai IFN-omegal/a2:11a, minkä jälkeen vielä kerran immunisoidaan INF-omegalla, parhaiten IFN-omegal:11a.
Seuraavassa solufuusiossa saadaan hybridomaviljelmiä, jotka tämän jälkeen seulotaan niiden kloonien identifioimiseksi, jotka tuottavat IFN-omegaa vastaan suunnattuja vasta-aineita. Tähän käytetään mieluummin biologisia testejä, esimerkiksi testejä, joissa valmistetut vasta-aineet voivat neutraloida iFN-omegan biologisen aktiivisuuden, esimerkiksi antiviraalisuuden aktiivisuuden.
Viidestä näin saadusta viljelmästä, joista käytettiin nimiä OMG-4, OMG-5, OMG-6, OMG-7 ja OMG-8 ja joilla johdonmukaisesti oli IFN-omegal:n antiviraalista aktiivisuutta alentava vaikutus., valittiin vasta-aineiden tuottoon kloonit OMG-4, OMG-5 ja OMG-7.
Valittuja hybridomasolulinjoja voidaan tätä varten viljellä in vitro tai vivo, jolloin kuitenkin in vivo viljelmää pidetään parhaana:
Valitun kloonin soluja siirrostetaan pristaanilla tai Freund'in epätäydellisellä apuaineella esikäsiteltyihin Balb/c-hiiriin (kts. Miiller et ai., J. Immunol. Methods 87, 193-196 (1986)). 7-18 päivän kuluttua kerätään Ascites-neste ja muodostuneet vasta-aineet rikastetaan tai eristetään tästä saostamalla ammoniumsulfaatilla ja sen jälkeen affiniteettikromatografiän avulla tai muilla kirjallisuudesta tunnetuilla menetelmillä.
Haluttu vasta-aine voidaan luonnollisesti analogisesti eristää tai rikastaa vastaavan in vitro-viljelmän solu-vijelysupernatantista.
9271 6
Edellä jo mainittiin, että näin keksinnön mukaisesti valmistettuja uusia vasta-aineita voidaan käyttää IFN-omegan, parhaiten IFN-omegal:n puhdistamiseen ja osoittamiseen.
Jos keksinnön mukaisesti saatuja vasta-aineita on tarkoitus käyttää IFN-omegan pitkälle vietyyn puhdistamiseen, niin nämä sidotaan parhaiten kovalenttisesti biologisesti inaktiiviseen kantajaan. Vasta-aineen kovalenttinen sitominen tapahtuu tällöin vastaavaan aktivoituun kantajaan, parhaiten dekstraanipohjäiseen kantajaan, esimerkiksi Pharmacia-yhtiön, Uppsala, CNBr-aktivoituun sefaroosiin tai CH-aktivoituun sefaroosiin. Puhdistettavan omegal-interferonin, joka tarkoituksenmukaisesti saadaan joko patenttijulakisussa EP-A-0.170.204 kuvatulla menetelmällä tai keksinnön mukaisesti patenttijulkaisussa EP-A-0.236.920 kuvattujen uusien plasmidien avulla, pumpataan tehopuhdistusta varten heikosti emäksisessä pH-arvossa, esimerkiksi pH-arvossa 7-8, parhaiten kuitenkin pH-arvossa 7,5, näin valmistetun vasta-aine-affiniteettikantajan yli, pestään niin kauan pH-arvossa 7,5, että eluaatti ei sisällä proteiinia, ja lopuksi sitoutunut interferoni eluoidaan happamella alueella, esimerkiksi 0,1-molaarisen sitruunahapon 25-prosenttisessa etyleeniglykolissa. Tämän jälkeen näin saadut proteiinipatoiset jakeet kromatografoidaan vahvasti happamella kationivaih-timellä, esimerkiksi kationivaihtimella Mono-S, Pharmacia. Edellä olevan eluaatin ihmisinterferoni absorboituu tällöin heti kationivaihdin-pylväästä ja tämän jälkeen eluoidaan NaCl-gradientin avulla.
Jos uusien vasta-aineiden avulla niitä antigeenejä käyttämällä on tarkoitus osoittaa tai kvantitatiivisesti määrittää omega-interferoni, esimerkiksi IFN-omegal, niin tähän on käytettävissä tavanomaisia immunomääritystekniikoita.
Nämä tekniikat perustuvat siihen, että määrätyn "antigeenisen" aineen ja yhden tai useamman vasta-aineen välille 92716 muodostuu kompleksi, jossa kompleksin yksi osa tai useampi osa voi olla leimattu. Tämä mahdollistaa "antigeenin" osoittamisen ja/tai kvantitativiisen määrittämisen kompleksisen leimatun "antigeenin" tai vasta-aineen erottamisen jälkeen.
Kilpailevan immunomääritystekniikan tapauksessa "antigeeninen aine" kilpailee tutkittavassa nestenäytteessä tunnetun määrän kanssa leimattua "antigeeniä" rajoitetusta määrästä vasta-aineiden sitoutumiskohtia. Leimatun, vasta-aineeseen sitoutuneen "antigeenin" määrä on siten kääntäen verrannollinen näytteessä olevan "antigeenin" määrään.
Immunometrisissä menetelmissä käytetään sen sijaan leimattuja vasta-aineita. Tällaisessa menetelmässä on kompleksin kanssa sitoutuneen leimatun vasta-aineen määrä verrannollinen siihen määrään "antigeenistä" ainetta, jonka nestenäyte sisältää.
Immunometriset määritykset sopivat erityisesti monivalens-sisten "antigeenien", so. "antigeenisten" aineiden osoittamiseen, jotka kykenevät muodostamaan samanaikaisesti kompleksin kahden tai useamman vasta-aineen kanssa. Tällaisissa määritysmenetelmissä käytetään tyypillisesti tietty määrä leimaamatonta vasta-ainetta sidottuna kiinteään kan-^ tajaan, joka ei liukene tutkittavaan nesteeseen, ja tietty • · määrä liukoista vasta-ainetta, jossa on leimaus, jolloin on mahdollista osoittaa ja/tai kvantitatiivisesti määrittää sen ternäärisen kompleksin määrä, joka muodostuu kiinteä-faasisen vasta-aineen, "antigeenin" ja leimatun vasta-aineen välillä.
: Tätä varten saatetaan tavallisesti kiinteään faasin sidottu vasta-aine ensin kosketukseen tutkittavan näytteen kanssa, jotta "antigeeni" voitaisiin poistaa näytteestä muodostamalla binäärinen kiinteäfaasinen vasta-aine: antigeeni-kompleksi. Sopivan inkubointiajan jälkeen loput nestenäyt- «
II
92716 teestä, mukaanlukien reagoimaton "antigeeni", mikäli tätä on mukana, poistetaan pesemällä kiinteä kantaja ja sen jälkeen saatetaan kantaja kosketukseen liuoksen kanssa, joka sisältää tunnetun määrän leimattua vasta-ainetta.
Toisen inkubointijakson jälkeen, jossa leimatun vasta-aineen annetaan muodostaa "antigeenin" kanssa kompleksin, jonka leimaamaton vasta-aine sitoo kiinteään kantajaan, kiinteä kantaja pestään toisen kerran tarkoituksella poistaa reagoimaton leimattu vasta-aine. Yksinkertaisessa "kyllä-ei"-määrityksessä, jossa määritetään, onko antigeeniä mukana tutkittavassa näytteessä, tutkitaan pesty kiinteä kantaja. Osoitetun leimatun vasta-aineen määrää verrataan negatiiviseen kontrollinäytteeseen, jossa "antigeeniä" ei ole. Leimatun vasta-airueen toteaminen määrinä, jotka ovat huomattavasti taustatasoa, joka saadaan negatiivikont-rollista, korkeampia, ilmoittaa epäillyn antigeenin mukanaolon. Kvantitatiiviset osoittamiset ovat mahdollisia siten, että verrataan leimattujen vasta-aineiden mittaustuloksiin, jotka saadaan kalibroiduilla näytteillä, jotka sisältävät tunnettuja määriä "antigeeniä". - Tällaista määritysmenetelmää kutsutaan usein "kahden paikan" tai "Sandwich"-määritykseksi, koska antigeeni on sitonut kaksi vasta-ainetta eri kohtiin pinnallaan.
Edellä kuvatuissa määritysmenetelmissä tulevat kantajina kysymykseen esimerkiksi tavanomaiset kantajat, kuten lasi, polystyreeni, polypropyleeni, polyetyleeni, dekstraani, nailon, amylaasi, luonnonselluloosa tai kemiallisesti muunnettu selluloosa, polyakryyliamidi, agaroosi tai magnetiitti ja leimoina tulevat kysymykseen entsyymit, radioisotoopit, metallikelaatit tai fluoresoivat, kemiluminoivat tai bioluminoivat yhdisteet.
8 92716
Entsyymeinä mainittakoon esimerkiksi malaattidehydrogenaasi, stafylokokki-nukleaasi, delta-5-steroidi-isomeraasi, α-glyseriini-fosfaattidehydrogenaasi, triosefosfaatti-isomeraasi, piparjuuri-peroksidaasi, alkalinen fosfataasi, asparaginaasi, glukoosioksidaasi, β-galaktosidaasi, ribo-nukleaasi, ureaasi, katalaasi, glukoosi-6-fosfaattide-hydrogenaasi, glukoamylaasi tai asetyylikoliiniesteraasi,
Radioisotooppeina mainittakoon 3H, 12^I, *27l, 32P, ja 14C$ flauoresoivina yhdisteinä mainittakoon fluoreskeiini-isotiosyanaatti, rodamiini, fyeytriini, fykosyaniini, allofykosyaniini, o-ftaalialdehydi tai fluoreskamiini, kerniluminoivina yhdisteinä mainittakoon luminoli, isoluminoli, aromaattinen akridiniumesteri, imidatsoli, akridiniumsuola tai oksaalihappoesteri ja bioluminoivina yhdisteinä mainittakkoon lusiferin, lusideraasi tai ekvoriini.
Keksinnön mukainen vasta-aine voi lisäksi olla liitetty pienimolekyyliseen hapteeniin, kuten biotiiniin, dinitro-fenyyliin, pyridoksaaliin tai fluoreskamiiniin. Nämä · hapteenit voidaan sen jälkeen tunnistaa toisella spesifi sellä reaktiolla, esimerkiksi biotiini avidiinin avulla tai fluoresakamiini spesifisen antihapteeni-vasta-aineen avulla.
Lisäksi voidaan leimana käytetyn entsyymin aktiivisuutta 1 käyttää mitattavan signaalin vahvistamiseen.
Erityisen suositeltavaa on kuitenkin käyttää leimana piparjuuriperoksidaasia, koska tämä entsyymi voi reagoida lukuisten substraattien kanssa. Lisäksi se on suhteellisen « 4 il 9 9271 6 pieni ja se voidaan liittää erittäin helposti vasta-aineen kanssa, esimerkiksi perjodaatti-menetelmällä.
Omega-interferonin, parhaiten IFN-omegal:n osoittamiseen tai kvantitatiiviseen määrittämiseen tulee kuitenkin parhaiten kysymykseen, mikäli IFN-omega on leimattu radioaktiivisesti, kilpaileva RIA (Radioimmunoassay)-määritys, jossa käytetään erityisesti polyklonaalisia vasta-aineita tai vasta-aine-seerumeita, IRMA (immunoradio-metrische Assay)-menetelmä, mikäli vasta-aine on leimattu radioaktiivisesti, ja ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)-menetelmä, mikäli vasta-aine on leimattu entsyymillä.
Keksinnön mukaiset IFN-omega, parhaiten kuitenkin IFN-omegal, osoitetaan tai määritetään kvantitatiivisesti tutkittavassa nesteessä seuraavalla tavalla: a) Tutkittava näyte saatetaan kosketukseen kantajan kanssa, johon on sidottu määritettävän IFN-omegan vastaista polyklonaalista tai monoklonaalista vasta-ainetta, ja b) Mitataan kohdan a) muodostetun binäärisen kompleksin muodostuminen muodostamalla ternäärinen kompleksi leimatun monoklonaalisen vasta-aineen ja kohdan a) mukaisesti muodostetun binäärisen kompleksin välillä.
Esillä olevan keksinnön suorittamiseen tarvittavat omega-interferonit ovat kohteena patenttijulkaisussa EP-A- 0.170.204. Esillä olevassa keksinnössä kuvaamattomat monoklonaaliset vasta-aineet, esimerkiksi vasta-aine-OMG-2, ovat kohteena patenttijulkaisussa EP-A-0.236.920, ja sama koskee immunisointiin käytettäviä hybridi-interferoneja. Käytetyt monoklonaaliset vasta-aineet saadaan kirjallisuudesta tunnetuilla menetelmillä.
Seuraavat esimerkit selventävät keksintöä lähemmin sitä 10 92716 kuitenkaan rajoittamatta.
Esimerkki 1
Monoklonaalisten. IFN-omegalle spesifisten vasta-aineiden valmistaminen a) Immunisointi
Noin kahdeksan viikon vanhat Balb/c-naarashiiret immunisoitiin seuraavalla tavalla erittäin puhtaalla (puhtaus > 95 %) hybridi-interferonilla IFN-omega1/α2 (FI 871012): 1. Immunisointi: 200 μg Freund'in täydellistä apuainetta, intraperitoneaalisesti 2. Immunisointi: 200 μg Freund'in täydellistä apuainetta, intraperitoneaalisesti, 5 viikkoa 1. immunisoinnista .
8 kuukautta toisen immunisoinnin jälkeen hiiret immunisoitiin jälleen 70 μg:lla puhdistettua omegal-interferonia (puhtaus > 90 %) (epätäydellinen apuaine, intraperitoneaalisesti). Seeruminäyte otettiin 12 päivää myöhemmin. Neutralisointikokeet osoittivat, että hiiren seerumilla oli nyt suhteellisen korkea tiitteri neutraloivia vasta-aineita IFN-omegal:a vastaan (täydellinen neutralointi seerumin 1000-kertaiseen laimennukseen asti, osittainen neutraloituminen 1000-kertaisessa laimennuksessa) . Neutralisointitesti suoritettiin seuraavalla tavalla: 100 μΐ seeruminäytteen laimennusta soluviljelymediumissa sekoitettiin 100 μΐ kanssa IFN-omegal:n liuosta (100 antivi-raalisuusyksikköä/ml) ja inkuboitiin 90 minuuttia 37°C:ssa.
Tämän jälkeen tutkittiin näytteen antiviraalinen aktiivisuus biologisessa testissä (A549 keuhkokarsinomasolut, enkelfalo-myokardiitti-virus).
Il 11 92716
Viiden viikon kuluttua kolmannesta immunisoinnista hiiriin ruiskutettiin vielä 70 μς puhdistettua omegal-interferonia (puhtaus > 90 %) ilman apuainetta.
b) Hybridomien valmistaminen ja seulominen
Hybridomat valmistettiin alkuaan Köhler'in ja Milstein’in (anture 256, 405 (1975)) kehittämällä menetelmällä käyttämällä ei-erittävää solulinjaa P3C63Ag8.653 (Kearney et ai., J. Immunol. 123, 1548 (1979)). Tätä varten toimittiin seuraavasti:
Neljä päivää viimeisen immunisoinnin (kts. edellä) jälkeen hiirestä poistettiin perna; pernasolut irrotettiin mekaanisesti kudosyhteydestä, suspendoitiin soluviljely-mediumiin (RPMI 1640 mediuin, johon lisätty natrium-pensil-liiniä G (100 yksikköä/ml) ja streptymisiinisulfaattia (50 yksikköä/ml)) ja kerättiin sentrifugoimalla (Beckamn TJ-6 sentrifuugi, 10 minuuttia nopeudella 1000 kierr./min.).
O
Sentrifugoimalla otettiin talteen myös 2x10 myeloomasolua (viljelty edellä olevanlaisessa soluviljelymediumissa lisäämällä 10 % vasikansikiöseerumia) ja pestiin kerran seerumittomalla soluviljelymediumilla. Lopuksi pernasolut ja myeloomasolut suspendoitiin uudelleen seerumittomaan soiuviljelymediumiin, suspensiot yhdistettiin ja sentri-fugoitiin uudelleen. Supernatantti poistettiin, solut suspendoitiin 3 ml:aan fuusiointimediumia (45 % RPMI 1640 medium, 50 % polyetyleeniglykoli 4000, 5 % dimetyyli-sulfoksidi) ja ravisteltiin varovasti 90 sekuntia, minkä jälkeen annettiin seistä vielä 60 sekuntia. Tämän jälkeen lisättiin tipottain 90 sekunnin aikana 3 ml seerumitonta viljelymediumia, suspension annettiin seistä 60 sekuntia, minkä jälkeen lisättiin vielä 6 ml seerumitonta viljelymediumia 90 sekunnin aikana.
Lopuksi lisättiin hitaasti ja koko ajan sekoittaen 12 ml viljelymediumia, jossa oli 10 % vasikansikiöseerumia, 12 9271 6 jossa oli 10 % vasikansikiöseerumia, annettiin seistä 10 minuuttia ja tämän jälkeen täytettiin 50 ml:ksi soluviljelymediumilla, jossa oli 10 % vasikansikiöseerumia.
Solut kerättiin sentrifugoimalla ja suspendoitiin 400 mlraan soluviljelymediumia lisäämällä 20 % vasikansikiösee- -4 rumia seka hypoksantnnia (10 M), aminopteriiniä -7 -5 (4x10 M) ja tymidiiniä (1,6x10 M), jota jäljempänä kutsutaan HAT-mediurniksi. Tähän suspensioon lisättiin vielä peritoneaalisia makrofaageja Balb/c-hiiristä (noin 50 000/ml); lopuksi suspensio pipetoitiin soluviljely- levyille (48 syvennystä levyä kohti; 0,5 ml syvennystä kohti). Levyjä inkuboitiin 37°C:ssa (95 % ilma, 5 % CC>2, kyllästetty vesihöyryllä). 3 päivän jälkeen lisättiin jokaiseen viljelmään 0,5 ml HAT-mediumia. Yhteensä 800 tehdystä viljelmästä oli 2-3 viikon kuluttua noin 300 viljelmässä hybridomasolukasvua. Tämänjälkeinen seulonta suoritettiin seuraavasti: Vähintään 10-20-prosenttisesti yhtenäisten hybridoma-viljelmien viljelysupernatanttien kanssa sekoitettiin yhtä suuret tilavuudet HuIFN-omegal:n liuosta (20 antiviraa-lisuusyksikköä/ml), inkuboitiin 90 minuuttia 37°C:ssa ja sen jälkeen testattiin niiden antiviraalinen aktiivisuus. Kaikki viljelmät testattiin vähintään kaksi kertaa kulloinkin viikon välein. Viisi viljelmää, joille annettiin järjestyksessä nimet OMG-4, OMG-5, OMG-6, OMG-7 ja OMG-8, pienensivät intaviraalista aktiivisuutta yhtäpitävästi kaikissa testeissä. Kaikki viljelmät kloonattiin rajalaimennuksen avulla ja klooneista testattiin uudelleen neutraloiva aktiivisuus kuvatulla menetelmällä. Jokaisesta viljelmästä yhdistettiin 3-5 positiivista kloonia. Vasta-aineen in vivo tuottamista varten siirrostettiin jokaisesta hybridomaviljelmästä intraperitoneaalisesti 3-10xl06 solua Balb/c-hiiriin, joihin oli 2-3 päivää etukäteen ruiskutettu'intraperitoneaalisesti 0,5 ml Freund1in epätäydellistä apuainetta tai 7-10 päivää i 13 9271 6 etukäteen 0,5 ml pristaania. 7-21 päivän jälkeen otettiin muodostunut Ascites-neste talteen; sen sisältämät vasta-aineet rikastettiin tunnetuilla menetelmillä yli 90 % puhtauteen seostamalla 50-prosenttisella ammoniumsulfaatilla ja affiniteettikromatograafisesti kantajaan sidotun proteiinin A kautta. Ascites-nesteen ml kohti saatiin kaikilla hybridomeilla noin 2 - 5 mg puhdasta vasta-ainetta .
c) Vasta-aineiden OMG-4, OMG-5 ja OMG 7 karakterisointi
Natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidi-elektroforeesissa ei-pelkistävissä olosuhteissa sekä geelipermeaatio-korkeapainenestekromatografiässä kaikkien vasta-aineiden retentiokäyttäytyminen oli identtinen IgG-markkeriproteii-nin ja siten IgG-tyypin kanssa. Neutraalitestissä, jossa tutkittiin estovaiktuus interferonien antiviraaliseen vaikutukseen (kts. edellä), kaikki vasta-aineet neutraloivat 100 μg/ml konsentraatiossa IFN-omegal:n aktiivisuuden, mutta ei IFN-a2c:n, IFN-βιη tai IFN-gamman aktiivisuutta.
Nämä kolme kloonia tallennettiin 14.8.1987 Budapestin sopimuksen mukaisesti European Collection of Animal Cell Cultures, PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, -tallennuslaitokseen, Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG, Englanti, ECACC-numeroilla 87081401 (OMG-4), 87081402 (OMG-5) ja 87081403 (OMG-7).
Esimerkki 2
Entsyymi-immunomääritvkset (ELISA) IFN -omeqal:lle
Vasta-aineet OMG-5 ja OMG-7 sidottiin tunnetuklla menetelmillä (kts. esim. Wilson M.B. ja Nakane P.K., Immunofluorescence and Related Staining Tehniques, Herausgeber W. Knapp et al., s. 215-224; Elsevier 1978). Tätä varten toimittiin seuraavasti; 14 9271 6 2 mg:aan piparjuuri-peroksidaasia vedessä lisättiin 0,2 ml 100 mM natriumperjodaattia ja ravisteltiin 40 minuuttia huoneen lämpötilassa, dialysoitiin 2 x 500 ml 1 mM natrium-asetaattia, pH 4,4, vastaan yön aikana 4°C:ssa; tämän jälkeen liuos säädettiin 0,1 M NaHCO^rlla, pH 9,5, pH-arvoon noin 9. Tähän liuokseen lisättiin monoklonaalisen vasta-aineen liuos (OMG-5, 2 ml, jossa 1,6 mg/ml tai OMG-7; 1,5 ml, jossa 4,7 mg/ml, kulloinkin 10 mM NaHCO^:ssa, pH 9,5) ja ravisteltiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Lisättiin 100 jil NaBH^-liuosta (4 mg/ml vedessä) ja liuosta inkuboitiin vielä 2 tuntia jäähauteessa; tämän jälkeen lisättiin tipottain 3 ml kylmää kyllästettyä ammoniumsulfaattiliuosta ja inkuboitiin 1 tunti jäähauteessa. Muodostunut peroksidaasi-immunoglobuliinikonjugaatin sakka kerättiin sentrifugoi-malla, liuotettiin 1 ml:aan fosfaattipuskuroitua isotonista keittosuolaliuosta, pH 7,4 ja stabiloitiin lisäämällä 1 ml naudanseerumialbumiiniliuosta (10 mg/ml fosfaattipus-kuroidussa keittosuolaliuoksessa). Liuos pakastettiin -70°C:ssa.
IFN-omegal:n kiinteäfaasi-Sandwich-entsyymi-immunomääritykset suoritettiin yleisesti tunnetuilla menetelmillä (kts. esim. Berthold, W., Merk, W. ja Adolf, G.R., Arzneim.-Forschung./Drug res. 35^, 364-369 (1985). Mikrotiitteri-ELISA-testilevyjen päällystämiseksi käytettiin tällöin monoklonaalisia vasta-aineita OMG-2, OMG-5 tai OMG-7 10 pg/ml 0,1 M natriumkarbonaatissa, pH 9,5, (100 jul syvennystä kohti) ja levyjä inkuboitiin joko 1 tunti huoneen lämpötilassa tai yön yli 4 - 8°C:ssa. Vasta-aineliuos poistettiin, syvennykset pestiin kulloinkin 200 ul:lla vettä ja täytettiin 100 ulilla naudanseerumial-bumiinin (5 mg/ml) liuoksella fosfaattipuskuroidussa, isotonisessa keittosuolaliuoksessa, pH 7,4 (jäljempänä käytetään nimitystä PBS/BSA). Tämän jälkeen lisättiin kulloinkin 100 μΐ IFN-omegal:n liuosta konsentraatiossa
II
15 9271 6 20 ng/ml, sekoitettiin hyvin ja valmistettiin sarjalaimen-nus siirtämällä kulloinkin 100 μΐ. Lopuksi kaikkiin syvennyksiin lisättiin 50 μΐ vasta-aine-entsyymi-konjugaatin liuosta (OMG-5/peroksidaasi tai OMG-7/peroksidaasi, kantaliuos (kts. edellä) laimennettu 1:10 000 PBS/BSA-seoksessa) ja levyjä inkuboitiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen liuos poistettiin, syvennykset pestiin kolme kertaa vedellä ja täytettiin kulloinkin 100 pl:lla substraattiliuosta (orto-fenyleenidiamiini, 3 mg/ml ja natriumperboraatti, 1 mg/ml 0,067 M kaliumsitraa-tissa, pH 5). Inkuboitiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen jokaiseen syvennykseen pipetoitiin 100 pl 4 N rikkihappoa; tämän jälkeen mitattiin optinen tiheys aallonpituudella 492 nm monikanavaisella fotometrillä (ELISA-lukulaite).
Päällystys-vasta-aineen ja vasta-aine-peroksidaasi-konjugaatin kaikilla heterologisilla yhdistelmillä päästiin annoksesta riippuviin absorptiomuutoksiin.
Saadut käyrät on esitetty kuvioissa 1, 2 ja 3.
Päällystämiseen voitiin käyttää myös 10 ug/ml konsentraa-tiossa kaniini-anti-IFN-omegal-immunoglobuliinia, joka on saatu immunisoimalla kaniini kaksi kertaa IFN-omegal:11a ja puhdistamalla seerumi osittain saostamalla 50-prosentti-sella ammoniumsulfaatilla (kts. kuvio 4).
ELISA'n (kuvio 2), joka on rakennettu vasta-aineista OMG-2 (kts. EP-A-0.236.920) ja peroksidaasiin sidotusta vasta-aineesta OMG-7, spesifisyys IFN-omegalle tutkittiin siten, että käytettiin muiden humaani-interferonien preparaateja erittäin laajalla konsentraatioalueella.
Tällöin käytettiin seuraavia interferoneja: 92716
Interferoni Lähde Konsentraatioalue IFN-al rekombinantti (E.coli) 2 ng - 50 μς/ml IFN-a2c rekombinantti (E.coli) 2 ng - 50 μg/ml 2 6 IFN-αΒ rekombinantti (E.coli) 3x10-1,25x10 E/ml IFN-aF rekombinantti (E.coli) 1,4xl01-3,5x10 E/ml 2 6 IFN-β fibroblasti indusoitu 8x10-2x10 E/ml
Poly (I:C):11a IFN-gamma rekombinantti (E.coli) 2 ng - 50 |ig/ml IFN-omegal:lie käytetyssä 100 pg/ml herkkyydessä ei tällöin saatu merkittävää signaalia millekään preparaatille missään konsentraatiossa. ELISA-menetelmää voidaan sen vuoksi käyttää rekombinantti-IFN-omegal:n kvantita-tisoimiseen ja sen lisäksi myös esimerkiksi määrittämään IFN-omegal:n osuus leukosyytti-interferonissa tai muissa soluviljelmistä saaduissa interferoni-preparaateissa.
Esimerkki 3 IFN-omegal:n immunoradiometrinen määritys (IRMA)
VastJraine OMG-7 radioleimattiin sinänsä tunnetulla 3 menetelmällä N-sukkinimidyyli/2,3- H/propionaatin avulla (^H-NSP, Firma Amersham International, Englanti; 110 3
Ci/mMol). Tätä varten H-NSP:n 1 mCi liuos haihdutettiin kuiviin silikonisoidussa näyteastiassa. Tämän jälkeen lisättiin pipetoimalla 50 ug monoklonaalisen vasta-aineen OMG-7 (4,7 mg/ml) liuosta puskuroidussa keittosuola-• liuoksessa, pH 7,4, ja lisättiin 3 jul 1 M boraattipuskuria, pH 8,5. 24 tunnin jälkeen 4°C:ssa otettiin ylimääräinen H-NSP 20 μΐ.-aan 1 M glysiiniä boraattipuskunssa, laimennettiin 200 ulilla 50 mM kaliumfosfaatti-puskuria,
II
i 17 9271 6 pH 7,4, jossa oli 150 mM NaCl ja 5 jig/ml naudanseerumi-albumiinia, ja erotettiin leimatusta vasta-aineesta Sephadex G 50 M -pylväässä (0,5 x 20 cm). Vasta-aineen spesifinen aktiivisuus oli noin 10 Ci/g proteiinia.
TGestin suorittamista varten päällystettiin syövytetyt polystyreenihelmet (halkaisija 6,5 mm; Northumbria Biologicals, Englanti) vasta-aineella OMG-2 (10 jig/ml 0,1 M natriumkarbonaatissa, pH 9,5; 1 tunti huoneen lämpötilassa). Filmiä inkuboitiin 1 tunti PBS/BSA-seoksessa (kts. esimerkki 2) ja tämän jälkeen pestiin kaksi kertaa 250 jililla vettä. Helmiä inkuboitiin 3 tuntia 4°C:ssa sopivissa Eprouvette-astioissa, joissa kulloinkin oli 200 μΐ IFN-omegal-liuosta nousevissa konsentraatioissa PBS/BSA-seoksessa, ja pestiin kolme kertaa 250 ulilla vettä. Tämän jälkeen lisättiin kulloinkin 200 ui leimatun vasta-aineen liuosta (100 ng/ml PBS/BSAissa; putkea kohti noin 27000 impulssia/minuutti) ja inkuboitiin 20 tuntia 4°C:ssa. Tämän jälkeen helmet pestiin kolme kertaa 20 /ulilla vettä, siirrettiin polypropyleeniputkiin ja sitoutunut radioaktiivisuus mitattiin nestetuikelaski-messa sen jälkeen, kun oli lisätty 4 ml skintillaattori-seosta. Kuviossa 5 on esitetty sitoutuneen radioaktiivisuuden riippuvuus interferonikonsentraatiosta.
Claims (15)
1. Hybridomasolulinjat, joista käytetään nimityksiä OMG-4 (tallennettu ECACC-numerolla 87081401), OMG-5 (tallennettu ECACC-numerolla 87081402) ja OMG-7 (tallennettu ECACC-numerolla 87081403).
2. IgG-tyyppiset monoklonaaliset vasta-aineet, tunnet -t u siitä, että nämä neutraloivat omega-interferonin aktiivisuuden, mutta eivät INF-/S:n, IFN-^rn tai a-interferonin aktiivisuuden, ja ne muodostetaan viljelemällä patenttivaatimuksen 1 mukaisia hybridomasolulinjoja.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukaiset monoklonaaliset vasta-aineet, tunnettu siitä, että nämä on muodostettu klooneilla OMG-4, OMG-5 ja OMG-7, jotka on tallennettu ECACC-nu-meroilla 87081401, 87081402 ja 87081403, ja että ne 100 Mg/ml konsentraatiossa neutraloivat IFN-omegal:n aktiivisuuden, mutta eivät INF-a2c:n, IFN-/S:n tai IFN-yin aktiivisuuden.
4. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukaiset monoklonaaliset vasta-aineet, tunnettu siitä, että ne ovat leimattuja.
5. Menetelmä patenttivaatimusten 2-4 mukaisten monoklonaa-listen vasta-aineiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 1 hybridomasolulinjojen kasvun jälkeen eristetään anti-omega-interferoni-spesifiset IgG-vasta-aineet ja näin saatu monoklonaalinen vasta-aine mahdollisesti yhdistetään leiman kanssa.
6. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukaisten uusien monoklonaalis-ten vasta-aineiden käyttö omega-interferonin puhdistamiseen.
7. Omega-interferonin puhdistamiseen sopiva vasta-aine-affini-teettikantaja, tunnettu siitä, että patenttivaatimusten 2 tai 3 mukainen monoklonaalinen vasta-aine sidotaan kova-lenttisesti sopivaan aktivoituun kantajaan. li 92716
8. Menetelmä patenttivaatimuksen 7 mukaisen vasta-aine-affini-teettikantajan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen monoklonaalinen vasta-aine sidotaan kovalenttisesti sopivaan aktivoituun kantajaan.
9. Menetelmä omega-interferonin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että IFN-omega sidotaan patenttivaatimuksen 7 mukaiseen vasta-aine-affiniteettikantajaan ja sen jälkeen eluoidaan uudelleen.
10. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukaisten uusien monoklonaa-listen vasta-aineiden tai niiden patenttivaatimuksen 4 mukaisten leimattujen johdosten käyttö IFN-omegan osoittamiseen.
11. IFN-omegan osoittamiseen sopiva kitti, tunnettu siitä, että se jonkun patenttivaatimuksen 2-4 mukaista mono-klonaalista vasta-ainetta.
12. Menetelmä INF-omegan osoittamiseksi, tunnettu siitä, että näytettä inkuboidaan patenttivaatimuksen 4 mukaisen vasta-aineen kanssa ja rekisteröidään vasta-aineen reaktio IFN-omegan kanssa.
13. IFN-omegan osoittamiseen tai kvantitatiiviseen määrittämiseen sopiva kitti, tunnettu siitä, että tämä sisältää kiinteän faasin, johon a) on sidottu IFN-omegan vastainen monoklonaalinen tai poly-klonaalinen vasta-aine ja b) muodostunut binäärinen kompleksi määritetään patenttivaatimuksen 4 mukaisen monoklonaalisen vasta-aineen avulla.
14. Menetelmä IFN-omegan osoittamiseksi tai kvantitatiiviseksi määrittämiseksi, tunnettu siitä, että näytettä a) inkuboidaan IFN-omegan vastaisen monoklonaalisen tai poly-klonaalisen vasta-aineen kanssa, joka on sidottu kantajaan, b) näin saatuun näytteeseen lisätään patenttivaatimuksen 4 mukaista vasta-ainetta ja i 92716 c) määritettään näin sidotun, patenttivaatimuksen 4 mukaisen vasta-aineen pitoisuus.
15. Patenttivaatimuksen 11 tai 13 mukainen immunomäärityömenetelmä, tunnettu siitä, että tämä tunnistaa vain IFN-omegal:n, mutta ei a-, β- tai γ-tyyppisiä interferoneja. II 9271 6
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3633323 | 1986-10-01 | ||
| DE19863633323 DE3633323A1 (de) | 1986-10-01 | 1986-10-01 | Neue monoklonale antikoerper gegen ifn-omega, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendung zur reinigung sowie zum nachweis von ifn-omega |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI874273A0 FI874273A0 (fi) | 1987-09-30 |
| FI874273A FI874273A (fi) | 1988-04-02 |
| FI92716B true FI92716B (fi) | 1994-09-15 |
| FI92716C FI92716C (fi) | 1994-12-27 |
Family
ID=6310754
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI874273A FI92716C (fi) | 1986-10-01 | 1987-09-30 | Uudet monoklonaaliset vasta-aineet IFN-omegalle, niiden valmistusmenetelmät ja niiden käyttö IFN-omegan puhdistamiseen ja osoittamiseen |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5317089A (fi) |
| EP (1) | EP0262571B1 (fi) |
| JP (1) | JP2622260B2 (fi) |
| KR (1) | KR960009724B1 (fi) |
| AT (1) | ATE83262T1 (fi) |
| AU (1) | AU616158B2 (fi) |
| CA (1) | CA1320160C (fi) |
| DD (1) | DD269165A5 (fi) |
| DE (2) | DE3633323A1 (fi) |
| DK (1) | DK172801B1 (fi) |
| ES (1) | ES2052534T3 (fi) |
| FI (1) | FI92716C (fi) |
| GR (1) | GR3006846T3 (fi) |
| HU (1) | HUT45092A (fi) |
| IE (1) | IE59836B1 (fi) |
| IL (1) | IL84040A (fi) |
| NO (1) | NO173831C (fi) |
| NZ (1) | NZ222006A (fi) |
| PH (1) | PH30662A (fi) |
| PT (1) | PT85830B (fi) |
| SU (1) | SU1602393A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA877354B (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0310940B1 (en) * | 1987-09-30 | 1994-11-23 | Fujirebio Kabushiki Kaisha | Analytical element for enzyme immunoassays |
| US7087726B2 (en) | 2001-02-22 | 2006-08-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
| MXPA05010773A (es) | 2003-04-09 | 2005-12-12 | Neose Technologies Inc | Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos. |
| PL2468853T3 (pl) * | 2004-06-16 | 2015-08-31 | Dsm Ip Assets Bv | Sposób enzymatycznego odbarwiania feofityny |
| EP2536435B1 (en) * | 2010-02-18 | 2017-11-15 | Janssen Biotech, Inc. | Monkey homolog of human interferon omega |
| AU2014235003A1 (en) | 2013-03-15 | 2015-09-17 | Janssen Biotech, Inc. | Interferon alpha and omega antibody antagonists |
| TWI713453B (zh) * | 2014-06-23 | 2020-12-21 | 美商健生生物科技公司 | 干擾素α及ω抗體拮抗劑 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI77877C (fi) * | 1979-04-20 | 1989-05-10 | Technobiotic Ltd | Foerfarande foer framstaellning och rening av human le-formig interferonprotein. |
| DE3306060A1 (de) * | 1983-02-22 | 1984-08-23 | Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim | Neue immunglobulin-produzierende hybridzellinien, deren verwendung und verfahren zu deren herstellung |
| ATE67786T1 (de) * | 1984-08-01 | 1991-10-15 | Boehringer Ingelheim Int | Neue genetische sequenzen, die durch sie codierten interferon-peptide vom typ i und diese sie produzierende organismen. |
| DE3574145D1 (en) * | 1984-08-27 | 1989-12-14 | Genentech Inc | Novel, distinct family of human leukocyte interferons, compositions containing them, methods for their production, and dna and transfected hosts therefor |
| DE3607835A1 (de) * | 1986-03-10 | 1987-09-24 | Boehringer Ingelheim Int | Hybridinterferone, deren verwendung als arzneimittel und als zwischenprodukte zur herstellung von antikoerpern und deren verwendung sowie verfahren zu ihrer herstellung |
-
1986
- 1986-10-01 DE DE19863633323 patent/DE3633323A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-09-23 DE DE8787113896T patent/DE3783002D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-23 AT AT87113896T patent/ATE83262T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-09-23 EP EP87113896A patent/EP0262571B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-23 ES ES87113896T patent/ES2052534T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-28 US US07/102,160 patent/US5317089A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-29 DD DD30737687A patent/DD269165A5/de unknown
- 1987-09-29 SU SU874203388A patent/SU1602393A3/ru active
- 1987-09-30 HU HU874416A patent/HUT45092A/hu unknown
- 1987-09-30 FI FI874273A patent/FI92716C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 NO NO874107A patent/NO173831C/no unknown
- 1987-09-30 JP JP62247752A patent/JP2622260B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-30 PT PT85830A patent/PT85830B/pt unknown
- 1987-09-30 IL IL84040A patent/IL84040A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 NZ NZ222006A patent/NZ222006A/xx unknown
- 1987-09-30 CA CA000548208A patent/CA1320160C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-30 KR KR87010890A patent/KR960009724B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 ZA ZA877354A patent/ZA877354B/xx unknown
- 1987-09-30 AU AU79217/87A patent/AU616158B2/en not_active Expired
- 1987-09-30 IE IE262587A patent/IE59836B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-09-30 DK DK198705136A patent/DK172801B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-10-01 PH PH35871A patent/PH30662A/en unknown
-
1993
- 1993-01-21 GR GR930400097T patent/GR3006846T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5202234A (en) | Myocardial infarction immunoassay | |
| US4935343A (en) | Monoclonal antibodies for interleukin-1β | |
| MOLINARO et al. | MONOCLONAL DINITROPHENYL-SPECIFIC MURINE IgE ANTIBODY: PREPARATION, ISOLATION, AND CHARACTERIZATION1 | |
| US4921790A (en) | Tumor specific assay for CA125 ovarian cancer antigen | |
| US5382515A (en) | Creative kinase-MB immunoassay for myocardial infarction and reagents | |
| EP0119736A2 (en) | Two-site immunoassays using monoclonal antibodies of different classes or subclasses and test kits for performing same | |
| US4565687A (en) | Monoclonal antibodies specific for the unbound β subunit of human chorionic gonadotropin | |
| US5382522A (en) | Immunoassay for creatine kinase-MB and creatine kinase-BB isoforms and reagents | |
| EP0580859A1 (en) | Anti-eda monoclonal antibody | |
| FI92716B (fi) | Uudet monoklonaaliset vasta-aineet IFN-omegalle, niiden valmistusmenetelmät ja niiden käyttö IFN-omegan puhdistamiseen ja osoittamiseen | |
| CA1338324C (en) | Monoclonal antibody for the selective immunological determination of intact procollagen peptide (type iii) and procollagen (type iii) in body fluids | |
| NO304237B1 (no) | Antistoff samt immunogent peptid egnet til immunodiagnostisk bestemmelse av revmatoid artritt | |
| WO1990006515A1 (en) | Anti-idiotopic immunometric assay | |
| KR100375564B1 (ko) | N-펩티드의샌드위치면역학적측정법 | |
| US5679583A (en) | Monoclonal antibodies for the selective immunological determination of intact procollagen peptide (type III) and procollagen (type III) in body fluids | |
| JPH07110879B2 (ja) | モノクロナール抗体 | |
| US4767710A (en) | Cell lines for the production of monoclonal antibodies to human glycophorin A | |
| KR100426029B1 (ko) | 동종 및 이종 단백질에 대한 항체, 그 항체를 이용한 진단 및 치료방법 및 그 항체의 측정방법 | |
| JPH0667319B2 (ja) | Ａｎｐのｃ端側を認識するモノクローナル抗体 | |
| JPH0534353A (ja) | ヒト９２ｋＤａゼラチナーゼの免疫学的定量法 | |
| EP0193935B1 (en) | Method for determining human prolyl 4-hydroxylase by immunoassay | |
| JPH0677017B2 (ja) | ヒト▲ｉｖ▼型コラーゲンのサンドイツチ酵素免疫学的定量法 | |
| CA2047298A1 (en) | Myocardial infarction immunoassay | |
| JP2520249B2 (ja) | ヒトプロリルヒドロキシラ−ゼの免疫学的測定法による定量法 | |
| YUE-QI et al. | Generation of monoclonal antibodies to bovine follicle-stimulating hormone and application in an enzyme immunoassay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH |
|
| MA | Patent expired |