SU1591814A3 - Способ получения рекомбинантного ^-интерферона - Google Patents
Способ получения рекомбинантного ^-интерферона Download PDFInfo
- Publication number
- SU1591814A3 SU1591814A3 SU864027351A SU4027351A SU1591814A3 SU 1591814 A3 SU1591814 A3 SU 1591814A3 SU 864027351 A SU864027351 A SU 864027351A SU 4027351 A SU4027351 A SU 4027351A SU 1591814 A3 SU1591814 A3 SU 1591814A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- interferon
- solution
- biomass
- column
- protein
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Изобретение относится к биотехнологии и медицине и касается получения рекомбинантного «/-интерферона. Цель изобретения - упрощение процесса. Способ заключается в том, что проводят . гомогенизацию 8-9-часовой культуры Изобретение относится к биотехнологии и медицине, касается получения высокочистого, неиммуногенного рекомбинантного интерферона и может быть использовано в медицине и ветеринарии.
Целью изобретения является упрощение процесса.
Исследование различных ферментивных образований показывает, что состав смесей, содержащих интерферон, изменяется в зависимости от условий ферментации. В частности, количество
2
биомассы Е.сЫь, содержащей кодирующую «к-интерферон ДНК-плазмиду рЕКЗЗ, центрифугирование при 4сС и 3000 об/мин в течение 1 ч, добавляют к экстракту сульфат аммония до 65%-ного насыщения с последующим отделением образовавшегося 'осадка, добавляют к надосадочной жидкости хлористый натрий и доводят рН до 7,5 с последующим центрифугированием в указанных условиях и диализом. Проводят двукратную хроматографию в спаренных колоннах на целлюлозе в первой колонне и связанном с носителем моноклональном антителе ЕВ 1-1 во второй колонне с элюцией связанного интерферона лимонной кислотой в этиленгликоле, доводят элюат до рН 4,5,. проводят хроматографию на катионите надосадочной жидкости с последующей элюцией слабым солевым градиентом с добавкой 0,5 М ацетата аммония, выделяют «/-интерферон лиофилизацией элюата.
(с
сл
ς©·
00
Иаи*.
компонента 1 -метионин-интерферона-а/, почти отделяющегося компонента, изменяется с продолжительностью ферментации: метионин— интерферон— ύί образовывается лишь после 8-9 ч ферментации.
Таким образом, в результате обрыва процесса ферментации через определенное время получают Препараты интерферона, которые не содержат метионининтерферон.
Особенностью способа является использование "тандемной" хроматогра-
1591814
Лии, т.е. комбинации из ПЕЛЕ-целлюлоз ной колонки и подсоединенной к ней иммуноаффинной колонки с высокоспецифичным, моноклональным антителом. Ионообменная колонка служит для уда- $ ления труднорастворимых составных частей пробы от антител колонны.
Для колонки с антителами моноклональный, очищенный, полученный из асцитной жидкости мыши анти-интерферон1дС наносят на. ВгСП-активизованную сефарозу 4В (фирма Фармация) в качестве носителя.
Испытание на интерферон, определение протеина и НРЬС анализ на обращенной фазе показывают, что в результате этой очистки получают 60-90% чистого интерферона-ο/. Наряду с олигомерной формой собранный интерферон содержит 2θ восстановленные формы со свободными 8Н-группами, димеры, тримеры, тетрамеры и кенативные мономеры. Эти компоненты могут быть охарактеризованы биологически и иммунологически как 25 интерферон. Часть этих компонентов можно удалить путем осаждения при рН 4,5 (аммиаком). При этом, в частности, восстанавливаются имеющиеся компоненты. с восстановленными дисульфидными' мостиками, т.е. формы со свободными δΝ-группами (компоненты 5 и 6),.Анализ этого осадка показывает, что, монбмерный интерферон удаляется лишь в незначительном количестве. ,
Для окончательной очистки примени- 3$ ют ГРЬС-аппаратуру фирмы Фармация с ΜΟΝΟ-3-колонкой типа НК10/10 (катионообменник), в которую вносят до 60 мг белка. Этот колоночный материал ·, представляет собой ионообменник высо- 1 кой проницаемости, с отличным разделительным действием и большим преимуществом, заключающимся в том, что, несмотря на относйтельно большие количества восстанавливаемого протеина,
.окончательная очистка длится лишь несколько часов, при этом используют стерилизованные буферные растворы и процесс ведут при комнатной темпера- _ туре. '
•Полученное после осаждения прозрачнре образование наносят на колонку. Особое значение при разделении ГРЬС имеет применяемый буфер. Он должен элюировать компоненты интерферона и после этого легко удаляться. Этими свойствами обладает применяемый аммоний-ацетатный буфер, который элюирует интерферон по градиентной программе., Интерферон элюируют в виде острого пика со слабо выраженными плечами. Как "плечевую" фракцию, так и более поздно элюированные компоненты отделяют от основного пика чистого интерферона. Пик чистого интерферона собирают и из'него берут аликвотные части для НРЬС-анализа, 303-гель электрофореза, определения протеина, испытания на интерферон и определе-’ ния эндотоксина.
С помощью хроматографии разделяют практически все компоненты *от главного пика и получают гомогенный интерферон, который при гель-проникающей НРЬС показывает содержание мономера свыше 99%. Обращенная фаза НРЬС показывает лишь около 1% ненативного мономера, хроматофокусировка - 2,5% ненативного мономера. ·
ΜΟΝΟ-5-колонку перед повторным применением промывают 0,5 М ПаС1+0,1 М Να-фосфата, рН=.8,0, для удаления адсорбированных примесей. Сохраняют ее в 25%-ном этаноле.
Летучий буфер можно полностью удалить' путём лиофилизации. Для это|го собранный интерферон порциями по 2 мп помещают в автоклави-_ рованные лио-ампулы (объемом 8 мл), соответственно в ампулу помещают 1 8 мг чистого интерферона. Ампулы после этого закрывают предварительно промытыми и выдерживающими давление лиопробками и охлаждают до -20°С. Лиофилизацию осуществляют при -10°С и вакууме· менее -1 мм рт.ст. После удаления буферного раствора температуру повышают до 25°С и лиофилизируют 1 ч. Вакуум сбрасывают и пробки сразу крепко прижимаются. Снабженные алю-зажима— ми ампулы хранят непосредственно после этого в хрлодидьнике или при -20°С.
В результате осуществления ферментации (относительно кратковременной) вместе с известным способом впервые стало возможно получать интерферон, который по содержанию цнтерферона более 98%, а также в отношении гомогенности, считая на различные компоненты интерферона, более чем на 95% состоит из нативного мономерного интерферона-о(.
Эта высокая степень чистоты и гомогенности позволяет получить интерферон, свободный оу солей и составных
частей буферного раствора, в твердой
6
5 15918
форме. Поэтому появилась возможность хранить ^-интерферон более месяца без стабилизаторов, что для хранения, отправки и для воздействия как лекарства имеет особое значение по сравнению с всегда стабилизированными альбумином интерферонами. Даже после 11 мес хранения при 4°С состав интерферона не ухудшается.
Π р и м е р 1 (исходное Е.соХх; интерферон-с/ Арг; 28°С).
251 г кислотно-осажденной биомассы, которую хранят при 20°С, вносят в 2500 мл 1%-ной уксусной кислоты, перемешивают в течение 0,5 ч на ледяной бане и дважды в течение 1 мин гомогенизируют с помощью ультразвука типа 45/6. Полиэтиленимин добавляют до конечной концентрации 0,25%, устанавливают значение рН 10 добавлением 5 н. ИаОН и перемешивают 2 ч на ледяной бане, непосредственно после этого значения рН добавлением 5н.
НС1 устанавливают 7,50.
Центрифугируют в течение 1 ч в центрифуге СНггзС 66С. При 4°С и 3000 об/мин получают прозрачный сырой экстракт в количестве 2540 мл с содержанием интерферона 17,1x10Ι.Ε. и с содержанием протеина 5830 мг, из чего рассчитывают удельную активность, равную 3,21x10^ Ι.Ε./мг протеина. Сульфат аммония добавляют до 65%-ного насыщения (430 г/л экстракта) . Исходное хранят в течение ночи . при 4-8°С, и образовавшийся осадок в течение 1 ч центрифугируют ца центрифуге Ϊ2-21 ΗίβΤίδρεβά, ротор ΙΑ при 4°С, 1000*0 об/мин. Прозрачный раствор (3120 мл) содержит 0,7% полученного в сыром экстракте интерферона (120х хЮ* Ι.Ε.) .
Осадок вносят в 0,01 М ЫаСХ и перемешивают при 4-8°С в течение 2 ч, устанавливают значение рН 7,50 добавлением 5н. ЫаОН и центрифугируют до получения прозрачного раствора. Прозрачный раствор диализируют с помощью патрона диализа (ЫерЬгозз АХХецго, фирма Органон техника) по отношению 0,01 М ЫаСХ до 390 м осмол/л. Содержание интерферона составляет 13,Зх х10э Ι.Ε. '(=77,6%)..
Диализат непосредственно после этого хроматографируют (тандемная хроматография) . Для предварительной колонки применяют 125 г ПЕ 52 целлюлозного порошка фирмы Ватман в тркс-ЫаСХбуфере, рН 7,5, 0,025 моль трис-НС1+ +0,2 моль ЫаСХ, что соответствчет 0,5 г колоночного материала/г биомассы. Для аффинной колонки применяют соединенный с Вг-СЫ-активированной сефарозой 4В (фирма Фармация) моноклональный анти-интерферон-1дС (ΕΒΙ I).
Ιθ Готовый коленчатый материал хранят в фосфатно-буферном растворе поваренной соли (РВ8) с азидом натрия при
4-8рС. Перед применением колонку с антителами промывают раствором 0,1 И ^5 лимонной кислоты в 25%-ном этилгликоле и непосредственно после этого отмывают до нейтральной реакции РВ8. На грамм биомассы в случае колонки с антителами необходим объем колонки 0,220 1,0 мл. Диализированный раствор интерферона сначала прокачивают через обе колонки (предварительную колонку и колонку с антителами) и элюат контролируют измерением экстинкции при 280 нм. После нанесения раствора интерферона промывают трис-ЫаСХ-буфером, рН 7,5 до тех пор, пока количество протеина в элюате не снизится до 1/20 начального количества. Непосредственно после этого колонку с антителами отсоединяют от предварительной колонки и одну промывают трисЫаСХ-буфером, рН 7,5.
Элюирование интерферона, присоединенного к антителам, осуществляют ·
0,1 М лимонной кислотой в 25%-ном этиленгликоле, причем экстракцию алюа* та осуществляют снова при 280 нм. Пик протеина, содержащий интерферон, собирают. Получают 16,8 мл элюата с содержанием интерферона 12,3x10^ Ι.Ε. (-71,9%). .Общее количество протеина составляет 54,4 кг, из чего рассчитывают удельную "активность, равную 22,6x104 Ι.Ε./мг протеина.
Для дальнейшей очистки элюат добавлением аммиака доводят до значения рН 4,5 и образовавшийся осадок отделяют. Прозрачный раствор (18,3 мл) содержит 46,3 мг протеина и 11,8х х10^ Ι.Ε. интерферона, считая на сырой протеин. Это соответствует выходу 69% (255x104 Ι.Ε./мг протеина).
Для окончательной очистки применяют РРЬС-аппаратуру фирмы Фармация с ΜΟΝΟ-8-колонкой, типц НК 10/10 (катионообменник).
Полученный после осаждения прозрачный раствор вносят в колонку, ко7
8
15918'
торую предварительно промывают 0,1 М буфером - ацетатом аммония, рН 4,5-5,0, и промывают до тех пор, пока экстинкция при 280 мм не возвратится к исход->ному значению. Элюирование адсорбированного интерферона осуществляют с малым солевым градиентом в результате примешивания 0,5 М буфера - ацетата аммония, рН 4,5-5,0. Интерферон зд .элюируют в виде острого пика. "Плечевую” фракцию (К-3) и позднее элюированные компоненты (К5-К7) отделяют от главного пика чистого интерферона.
Пик чистого интерферона собирают и иэ него отбирают аликвоты для НРЬС-анализа, 8Ь5-гель-электрофореза, определения протеина, теста на Интерферон . и определения эндотоКсичностч. В"плечевой" фракции (9,1 мп) обнаруживаю·!· 20 всего 4,1 щг протеина, содержание интерферона составляет 1,33x109 Ι.Ε. (7,7%). Отсюда получают 324x10* Ϊ.Έ./
/мг протеина. Основной сбор 9,8 мл · содержит 5;18х10^ Ι..Ε. (30>3%) чистого интерферона и всего 16,1 мг протеина, отсюда удельная активность^ составляет 322x10^ Ι.Ε./мг протеина.
</-Интерферон порциями максимально по 2 мл помещают в автоклавные лиоампулы (объем 8 мл), что соответствует количеству интерферона в ампуле • 1 - 8 мг чистого интерферона. Ампулы затем закрывают предварительно промытыми и автоклавированными лио-пробками и охлаждают до -20°С. Лиофилизацию осуществляют при -10°С и вакууме менее 1 мм рт.ст. После удаления буферного’ раствора температуру увеличивают до 25еС и продолжают лиофилизировать 1ч. Вакуум сбрасывают и пробки сразу плотно закрывают. Снабженные алю-зажимами ампулы непосредственно после этого хранят в холодильнике или .при -20&0.
Пр им е р 2. Соединение ΕΒΙ 1-антитела с СИВТ-активированной сефарозой 4 В.
ΕΒΙ-Ι антитела сначала растворяют в 0,5 М ЫаС1/0,2 М ПаНСОь, рН 8,4 (как можно меньше буферного раствора) и по отношению к буферу диализируют раствор до тех пор, пока во внешнем растворе с хлоридом бария нельзя обнаружить сульфат-ионы, Необходимо сразу же полностью удалить сульфат аммония, так как аммоний-ионы мешают дальнейшему присоединению к носителю. Концентрацию протеина устанавливают после этого 5 мг/мл добавлением буферного раствора. Для нанесения используют в качестве· носителя СИВг-активированную сефарозу 4 В (Фармация). Ее предварительно промывают.. На каждые 25 мг ΕΒΙ-Ι-антитела применяют 1 г активированной сефарозы. Соединение осуществляют в указанном буфере (рН 8,4) при комнатной температуре в течение 2 ч. После этого ΕΒΙ-1-сЪфарозу по предписанию отсасывают на фильтре и промывают. В фильтрате не остается более 5% используемого.ΕΒΙ-1-антитела. Готовая ΕΒΙ-Ι-сефароза хранится в РВ5-абзиде в холодильнике.
Claims (1)
- Формула изобретенияСпособ получения рекомбинатного οί-интерферона, предусматривающий суспендирование исходной биомассы Е.соН в буферном растворе, проведение процесса дезинтеграции ее в оптимальных 25 условиях, отделение целевой фракции супернатанта в центробежном поле при 4&С, добавление в нее.сульфата аммония до 65% насыщения с последующим отделением и перерастворением осадка, 30 диализом и двукратной хроматографической очисткой на ионообменной целлюлозе, а затем на иммуносорбенте, содержащем иммобилизованные антитела, и катионите с элюцией с использовани25 ем ацетата аммония и выделением целевого продукта, отличающийс я тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве биомассы Е.соН используют 8-9-часовую культуру штамма 4θ НВ 101, содержащую кодирующую οί-интерферон ДНК-плазмиду рЕК 33, при этом дезинтеграцию биомассы проводят при рН 7,5 - 10,0 в присутствии 0,10,25%-ного полиэтиленамина ΡΕΙ-600,45 перерастворение осадка осуществляют в 0,0ί М растворе хлористого.натрия, диализ ведут до получения раствора с осмолярностью 390-430 м осмол/л, в качестве ионообменной целлюлозы ис5θ пользуют диэтиламиноэтил-целлюлозу, затем ведут хроматографическую очистку на иммуносорбенте, содержащем иммобилизованные моноклональные антитела мыши к οί-интерферону с мол.м.55_: 150000 Да, при этом элюцию связанногос/антителами интерферона осуществляют^1 раствором лимонной кислоты в>25%-ном растворе, этиленгликоля, в-,элюате доводят рН до 4,5 раствором9 159Ϊ81Α юаммиака, отделяют образовавшийся оса- гидрофильных сульфатсодержащих полидок, а в качестве Катионита использу- меров с последующим выделением целеют сорбент -на основе монодисперсных вого продукта лиофилизацией.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3515336A DE3515336C2 (de) | 1985-04-27 | 1985-04-27 | Verfahren zur Herstellung und Reinigung von â-Interferon |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1591814A3 true SU1591814A3 (ru) | 1990-09-07 |
Family
ID=6269344
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU864027351A SU1591814A3 (ru) | 1985-04-27 | 1986-04-25 | Способ получения рекомбинантного ^-интерферона |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0203382B1 (ru) |
JP (1) | JP2566919B2 (ru) |
KR (1) | KR940010024B1 (ru) |
AT (1) | ATE94588T1 (ru) |
AU (1) | AU598460B2 (ru) |
CA (1) | CA1340281C (ru) |
DE (2) | DE3515336C2 (ru) |
DK (1) | DK186486A (ru) |
ES (1) | ES8707554A1 (ru) |
FI (1) | FI861748A (ru) |
GR (1) | GR861093B (ru) |
HU (1) | HU202883B (ru) |
IE (1) | IE61444B1 (ru) |
IL (1) | IL78604A (ru) |
NO (1) | NO166727C (ru) |
NZ (1) | NZ215969A (ru) |
PH (1) | PH30912A (ru) |
PT (1) | PT82452B (ru) |
SU (1) | SU1591814A3 (ru) |
ZA (1) | ZA863108B (ru) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4748234A (en) * | 1985-06-26 | 1988-05-31 | Cetus Corporation | Process for recovering refractile bodies containing heterologous proteins from microbial hosts |
DE3813124A1 (de) * | 1988-04-15 | 1989-10-26 | Krieg Benno | Destillierbare pufferloesungen und ihre anwendungen |
ES2161793T3 (es) * | 1994-04-09 | 2001-12-16 | Hoffmann La Roche | Proceso para la produccion de alfa-interferona. |
KR100369582B1 (ko) * | 1995-09-04 | 2003-04-03 | 동아제약 주식회사 | 재조합알파-인터페론의정제방법 |
CN100390197C (zh) * | 1998-11-12 | 2008-05-28 | 先灵公司 | 干扰素同种型的转化方法及其产物 |
ITBO20010426A1 (it) * | 2001-07-06 | 2003-01-06 | Alfa Wassermann Spa | Processo per la purificazione di proteine farmacologicamente attive mediante cromatografia in scambio cationico |
EP2292637B1 (en) | 2002-09-06 | 2016-01-06 | Genentech, Inc. | Process for protein extraction |
GB0818228D0 (en) * | 2008-10-06 | 2008-11-12 | Avecia Biolog Ltd | Purification process |
CN114814000A (zh) * | 2022-03-30 | 2022-07-29 | 深圳科兴药业有限公司 | 重组人干扰素的含量检测方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA796175B (en) * | 1978-11-24 | 1980-11-26 | Hoffmann La Roche | Purified proteins and process therefor |
FI77877C (fi) * | 1979-04-20 | 1989-05-10 | Technobiotic Ltd | Foerfarande foer framstaellning och rening av human le-formig interferonprotein. |
ZA814375B (en) * | 1980-07-01 | 1982-07-28 | Hoffmann La Roche | Interferons and process for their preparation |
CH657141A5 (de) * | 1980-07-01 | 1986-08-15 | Hoffmann La Roche | Dns-sequenzen, rekombinante expressionsvektoren zur mikrobiellen herstellung von human-leukozyten-interferonen und transformierte mikroorganismen. |
US4364863A (en) * | 1980-12-29 | 1982-12-21 | Schering Corporation | Extraction of interferon from bacteria |
DE3220116A1 (de) * | 1982-05-28 | 1983-12-01 | Dr. Karl Thomae Gmbh, 7950 Biberach | Mikrobiologisch hergestellte (alpha)- und ss-interferone, dna-sequenzen, die fuer diese interferone codieren, mikroorganismen, die diese genetische information enthalten, und verfahren zu ihrer herstellung |
US4534906A (en) * | 1982-11-01 | 1985-08-13 | Genentech, Inc. | Removal of impurities from human leukocyte interferon preparations |
DE3382547D1 (de) * | 1983-01-12 | 1992-05-27 | Chiron Corp | Sekretorische expression in eukaryoten. |
DE3306060A1 (de) * | 1983-02-22 | 1984-08-23 | Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim | Neue immunglobulin-produzierende hybridzellinien, deren verwendung und verfahren zu deren herstellung |
-
1985
- 1985-04-27 DE DE3515336A patent/DE3515336C2/de not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-04-23 DK DK186486A patent/DK186486A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-04-23 IL IL78604A patent/IL78604A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-04-24 GR GR861093A patent/GR861093B/el unknown
- 1986-04-24 PT PT82452A patent/PT82452B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-04-25 NO NO861635A patent/NO166727C/no unknown
- 1986-04-25 EP EP86105722A patent/EP0203382B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-25 DE DE86105722T patent/DE3689008D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-25 AT AT86105722T patent/ATE94588T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-04-25 HU HU861724A patent/HU202883B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-04-25 SU SU864027351A patent/SU1591814A3/ru active
- 1986-04-25 IE IE109586A patent/IE61444B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-04-25 CA CA000507598A patent/CA1340281C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-25 FI FI861748A patent/FI861748A/fi not_active Application Discontinuation
- 1986-04-25 ZA ZA863108A patent/ZA863108B/xx unknown
- 1986-04-25 ES ES554372A patent/ES8707554A1/es not_active Expired
- 1986-04-26 KR KR1019860003234A patent/KR940010024B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-04-28 PH PH33708A patent/PH30912A/en unknown
- 1986-04-28 JP JP61099256A patent/JP2566919B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-28 AU AU56775/86A patent/AU598460B2/en not_active Ceased
- 1986-04-28 NZ NZ215969A patent/NZ215969A/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU598460B2 (en) | 1990-06-28 |
CA1340281C (en) | 1998-12-22 |
NO861635L (no) | 1986-10-28 |
KR860008270A (ko) | 1986-11-14 |
JP2566919B2 (ja) | 1996-12-25 |
ES554372A0 (es) | 1987-08-01 |
ZA863108B (en) | 1987-12-30 |
IL78604A0 (en) | 1986-08-31 |
NO166727C (no) | 1991-08-28 |
NO166727B (no) | 1991-05-21 |
DE3515336A1 (de) | 1987-01-22 |
ATE94588T1 (de) | 1993-10-15 |
PT82452B (pt) | 1988-11-30 |
HU202883B (en) | 1991-04-29 |
EP0203382B1 (de) | 1993-09-15 |
PH30912A (en) | 1997-12-23 |
GR861093B (en) | 1986-08-26 |
FI861748A0 (fi) | 1986-04-25 |
HUT41073A (en) | 1987-03-30 |
JPS61282098A (ja) | 1986-12-12 |
DE3689008D1 (de) | 1993-10-21 |
ES8707554A1 (es) | 1987-08-01 |
PT82452A (de) | 1986-05-01 |
EP0203382A2 (de) | 1986-12-03 |
IL78604A (en) | 1991-11-21 |
FI861748A (fi) | 1986-10-28 |
AU5677586A (en) | 1986-10-30 |
DK186486A (da) | 1986-10-28 |
EP0203382A3 (en) | 1988-04-27 |
NZ215969A (en) | 1990-08-28 |
IE61444B1 (en) | 1994-11-02 |
KR940010024B1 (ko) | 1994-10-20 |
IE861095L (en) | 1986-10-27 |
DK186486D0 (da) | 1986-04-23 |
DE3515336C2 (de) | 1994-01-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4228154A (en) | Purification of plasma albumin by ion exchange chromatography | |
CA2816050C (en) | Method for purifying human granulocyte-colony stimulating factor from recombinant e. coli | |
SU1591814A3 (ru) | Способ получения рекомбинантного ^-интерферона | |
JP2644946B2 (ja) | IgG− モノクロナール抗体の精製方法及びその使用方法 | |
NL7907791A (nl) | Werkwijze voor het zuiveren van interferon. | |
EA035448B1 (ru) | СПОСОБ ОЧИСТКИ рчГ-КСФ | |
Fried et al. | [22] Water-soluble nonionic polymers in protein purification | |
EP0933083A1 (en) | Process for the purification of serum albumin | |
JPH05503511A (ja) | 生物分子の濃縮もしくは精製のための方法 | |
EP0035026A1 (en) | A process for preparing an injectable insulin preparation | |
US4909941A (en) | High performance liquid chromatography mobile phase | |
CN110669141A (zh) | 一种别藻蓝蛋白(APC)与Annexin V蛋白偶联方法 | |
JP3360315B2 (ja) | ヒト血清アルブミンの高度精製方法 | |
RU2054044C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного человеческого свободного от метионина на n-конце гамма-интерферона | |
EP0168008A2 (en) | Stable composition of gamma-interferon | |
CN106749626B (zh) | 一种从牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法及利用牛血的方法 | |
US20150126715A1 (en) | Highly Glycosylated Long-Acting Human Growth Hormone Protein and Production Method for Same | |
Kittur et al. | Two-step purification procedure for recombinant human asialoerythropoietin expressed in transgenic plants | |
US20140171626A1 (en) | Protein purification | |
BR112019012273A2 (pt) | processo para a purificação de antibióticos lipopolipeptídicos de caldos de cultura e usos de uma resina de troca catiônica | |
EP0408146A2 (en) | Method for the purification of therapeutically active recombinant acidic fibroblast growth factor | |
WO1992014832A1 (en) | Processes for purifying human bcdf | |
US3586607A (en) | Process for the recovery and purification of lysozyme | |
RU2067100C1 (ru) | Способ выделения гибридного белка, содержащего аминокислотную последовательность проинсулина человека | |
SU698623A1 (ru) | Способ получени ингибитора трипсина |