RU2054044C1 - Способ получения рекомбинантного человеческого свободного от метионина на n-конце гамма-интерферона - Google Patents
Способ получения рекомбинантного человеческого свободного от метионина на n-конце гамма-интерферона Download PDFInfo
- Publication number
- RU2054044C1 RU2054044C1 SU4894482A RU2054044C1 RU 2054044 C1 RU2054044 C1 RU 2054044C1 SU 4894482 A SU4894482 A SU 4894482A RU 2054044 C1 RU2054044 C1 RU 2054044C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- interferon
- gamma
- free
- methionine
- cysteine
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Использование: медицина, производство рекомбинантного человеческого несодержащего цистеина гамма-интерферона, свободного от метионина на N-конце, используемого для приготовления ценного терапевтического средства - гамма-интерферона. Сущность изобретения: способ осуществляется путем экспрессии плазмиды pIBM в штамме E. Coli Е 392, депонированном в Национальном Депозитарном Центре для промышленных микроорганизмов и клеточных культур под номером 845, и последующим культивированием его в ферментере при 36 - 38oС в условиях аэрации, после чего продукт очищают, ренатурируют и элюируют с удалением сопутствующих растворителей и примесей.
Description
Изобретение касается способа получения рекомбинантного, не содержащего цистеина, человеческого гамма-интерферона, свободного от метионина на N-конце, который может использоваться в медицине.
Известны способы получения рекомбинантного человеческого цистеин-содержащего гамма-интерферона и не содержащего цистеина гамма-интерферона с помощью его экспрессии в бактериальных клетках. По этим способам рекомбинантный интерферон содержит дополнительно метионин у его N-терминала, который остается как инициирующая аминокислота в бактериальном синтезе.
Известен способ получения не содержащего цистеина гамма-интерферона, свободного от метионина на его N-конце, который основан на секретоспособной экспрессиии в бактериальных клетках и на использовании альфа-амилазного промотора и сигнальной последовательности для секреции.
Недостатки известных способов получения рекомбинантного человеческого цистеин-содержащего, или не содержащего цистеин, гамма-интерферона, состоят в том, что они приводят к получению протеина, дополнительно содержащего метионин на N-конце, присутствие которого нежелательно, поскольку это делает продукт иммуногенным и его длительное введение в качестве терапевтического препарата может привести к образованию специфических антител.
Недостаток способа приготовления рекомбинантного, не содержащего цистеина, гамма-интерферона, свободного от метионина на его N-конце, заключается в том, что удаление этого метионина осуществляется секрецией в периплазматическом пространстве бактерий. Во время транспортировки существует опасность конформационных изменений, которые также могут привести к иммуногенности препарата. Другим недостатком является исключительно низкий выход интерферона 3 млн. ед. на 1 л культуры.
В отношении способа очистки известные способы основаны на иммуносорбции гамма-интерферона или на использовании других хроматографических сорбентов.
Недостатком иммуносорбции в качестве способа очистки гамма-интерферона является использование дорогостоящих, высокоспецифичных моноклональных антител, приготовление которых требует особой технологии, а также существует опасность загрязнения конечного продукта трансформирующими факторами и вирусами, происходящими от гибридомных линий. В результате могут возникать конформационные изменения гамма-интерферона (денатурация), что приводит к снижению его биологической активности.
Недостатком хроматографического способа без использования моноклональных антител является то, что поскольку этот способ основан на тиол-сефарозной хроматографии, то он применим только для цистеин- содержащего гамма-интерферона.
Гамма-интерферон, как и многие другие рекомбинантные протеины, может быть легко агрегирован в растворах, которые не содержат денатурирующие или хаотропные агенты. После удаления гуанидин-хлорида по некоторым из хорошо известных методов (ультрафильтрация, гель-фильтрация, диализ) гамма-интерферон агрегируют. В результате выход растворимого, биологически активного гамма-интерферона может изменяться как функция от температуры, начальной концентрации протеина, скорости обмена растворителя, присутствия моно- и бивалентных ионов, и, вероятно, от других, пока еще неизвестных факторов. Все это препятствует стандартизации технологии, снижает выход и повышает стоимость конечного продукта.
Цель изобретения обеспечить способ получения рекомбинантного человеческого, не содержащего цистеина, гамма-интерферона, свободного от метиона на его N-конце, который бы гарантировал высокий выход и высокую степень чистоты продукта, так же как и полное растворение в водных, биологически приемлемых растворах, не содержащих денатурирующих или хаотропных веществ.
Цель достигается способом получения рекомбинантного человеческого, не содержащего цистеин гамма-интерферона, свободного от метионина на N-конце посредством экспрессии искусственного гена гамма-интерферона в микроорганизмах рода E.coli, в частности, штамма E.coli депонированного в Национальном Банке депонирования промышленных микроорганизмов и клеточных культур под депозитарным номером 845, причем рекомбинантный штамм, содержащий экспрессивную плазмиду pIBМ, культивируется в питательной среде, содержащей обычно пептонную основу и дрожжевой экстракт в качестве источников азота, обогащенной L-триптофаном и L-метионином, и в присутствии тетрациклина. Параметры ферментации выбраны таким образом, что они обеспечивают быстрое проявление экспонентного роста, контролируемого в ходе процесса добавлением глюкозы. Прекращение аэроации в конце процесса благоприятствует удалению метионина на N-конце, также как и образованию тел включения, имеющих высокое процентное содержание интерферона в межклеточном пространстве бактерий. После экстракции рекомбинантный человеческий, не содержащий цистеина гамма-интерферон, подвергают дополнительной хроматографической обработке на колонне с карбоксиметилсефарозой, чтобы удалить растворитель, и ренатурации.
После получения интерферона необходимо для адсорбции и сохранения интерферона на ионообменнике, чтобы концентрация гуанидин-хлорида была ниже 0,35М, но не ниже 0,1 М. При более низкой концентрации гуанидин-хлорида интерферон агрегирует слишком быстро.
Чтобы получить хорошие результаты, экстракт, содержащий гамма-интерферон, разбавляют ледяным буфером с рН 5,0-8,5 и молярностью 0,005-0,1 М, пока не будет достигнута концентрация гуанидин-хлорида 0,7-1,0 М. Немедленно после зарядки колонны карбоксиметил-сефарозой, растворы гамма-интерферона и ледяного буфера смешивают так, чтобы разведение обеспечило для прохождения через колонну конечную концентрацию гуанидин-хлорида 0,35 М. Гуанидин-хлорид удаляют длительным промыванием колонны соответствующим буфером. Гамма-интерферон элюируют градиентом хлорида натрия от 0,1 до 0,6 М в соответствующем буфере.
Продукт разводят апирогенной водой до физиологической концентрации натрия хлорида и смешивают с 10%-ным раствором декстрана до конечной концентрации 2% с использованием его в качестве стабилизатора (5).
Преимущество способа согласно изобретению заключается в том, что получают гамма-интерферон, метионин которого в N-терминала был удален внутриклеточно, а не путем секреции, так что выход гамма-интерферона очень высок и превышает 1 млрд.ед на литр культуры, что чистота полученного рекомбинантного человеческого не содержащего цистеина гамма-интерферона составляет более 99,6% что он сохраняет всю свою биологическую активность, после лиофилизации в присутствии подходящего стабилизатора, и растворим в водных растворах, не содержащих денатурирующих или хаотропных агентов, и, кроме того, технология избегает применения моноклональных антител для очистки рекомбинантного протеина, что могло бы загрязнить продукт, что используют недорогие технические средства для хроматографии, которые широко применяются на практике, и что теперь имеется возможность автоматизированного широкомасштабного производства с использованием ионообменника, который может быть регенерирован и стерилизован при многократном промышленном использовании.
П р и м е р. Штамм-продукт LE 392 E.coli, носитель рекомбинантной плазмиды pIBМ, сохраняют при -70оС в культуре с 15% глицерина. После контроля чистоты и активности материал для посева культивируют в течение 7 ч при 37оС и встряхивании в питательной среде, идентичной ферментативной среде, в объеме 10% рабочего объема ферменте, а ферментацию осуществляют в стандартном бактериологическом ферментере, снабженном перемешивающим устройством и имеющей рабочий объем 4 л, в питательной серде со следующим составом:
Измельченный (тритури-
рованием) пептон 25 г
Дрожжевой экстракт 5 г
Хлорид натрия 5 г
Na2HPO4 6 г
K2HPO4 3 г
(NH4)2SO4 3 г
MgSO4-1M 2 мл
CaCl2 100 мМ 100 мл
Глюкоза 20% 50 мл
L-триптофан 20 мкг/мл 5 мл
L-метионин 20 мкг/мл 5 мл
Тетрациклин 10 мкг/мл 1,2 мл
Ферментацию начинают при начальном рН 7,1-7,2 и начальном объеме аэрации 0,5 л/1л/мин, температуре 37,2оС и 400 об/мин перемешивающего устройства.
Измельченный (тритури-
рованием) пептон 25 г
Дрожжевой экстракт 5 г
Хлорид натрия 5 г
Na2HPO4 6 г
K2HPO4 3 г
(NH4)2SO4 3 г
MgSO4-1M 2 мл
CaCl2 100 мМ 100 мл
Глюкоза 20% 50 мл
L-триптофан 20 мкг/мл 5 мл
L-метионин 20 мкг/мл 5 мл
Тетрациклин 10 мкг/мл 1,2 мл
Ферментацию начинают при начальном рН 7,1-7,2 и начальном объеме аэрации 0,5 л/1л/мин, температуре 37,2оС и 400 об/мин перемешивающего устройства.
Когда культура достигает экспоненциальной фазы роста, объем аэрации увеличивают до 1л/1л/мин. На шестом часу от начала ферментации в культуру добавляют 40 мл 20% глюкозы, и после окончания экспоненциального роста, аэрацию прерывают, и культуру перемешивают еще в течение часа с 400 об./мин.
Культуральную жидкость охлаждают и собирают биомассу. Выход составляет приблизительно 20 г клеточной массы (литр культуры). Биомассу разделяют и экстрагируют гамма-интерферон из частиц белка, а затем частично очищают фракционной преципитацией.
Полученный раствор гамма-интерферона разбавляют при перемешивании ледяным раствором 0,05 М ацетата натрия при рН 6,0 до концентрации гуанидин-хлорида 0,7 М. Приготовленный таким образом раствор загружают в колонну с карбоксиметил-сефарозой ("Фармация", 2,6х10 см, уравновешена 0,05 М ацетат-натриевым буфером с рН 6,0), причем немедленно перед адсорбцией посредством насоса и мешалки раствор гамма-интерферона разбавляют ледяным буфером до концентрации гуанидин-хлорида 0,35 М. Загрузку осуществляют со скоростью 1100 мл/ч. Колонну промывают 3-4 объемами буфера со включением 20-минутного градиента 2х60 мл 0,1-0,6 М хлорида натрия в 0,05 ацетат-натриевом буфере с рН 6,0 со скоростью элюирования 2 мл/мин. Гамма-интерферон элюируют при концентрации хлорида натрия 0,40-0,44 М. Выход чистого гамма-интерферона составляет почти 1 мг чистого протеина на 1 г бактериальной массы.
Определение степени чистоты полученного гамма-интерферона осуществляют двумя независимыми путями:
электрофорезом в присутствии натрий-додецил-сульфата и последующей денсиметрией плос, и хроматографией при высоком давлении на колонне Pro-RPC ("Фармация", Швеция, 5х20 мм). Градиент 20 мин 0,01% трифторуксусная кислота 100% ацетонитрил в 0,01% трифторуксусной кислоте и адсорбция при 280 нм чистота продукта 99,9% при использовании электрофореза и свыше 99,9% с использованием аналитической хроматографии.
электрофорезом в присутствии натрий-додецил-сульфата и последующей денсиметрией плос, и хроматографией при высоком давлении на колонне Pro-RPC ("Фармация", Швеция, 5х20 мм). Градиент 20 мин 0,01% трифторуксусная кислота 100% ацетонитрил в 0,01% трифторуксусной кислоте и адсорбция при 280 нм чистота продукта 99,9% при использовании электрофореза и свыше 99,9% с использованием аналитической хроматографии.
Определение аминокислоты у N-терминала полученного рекомбинантного не содержащего цистеина гамма-интерферона осуществляют мечением аминокислоты у N-терминала. В качестве аминокислоты у N-терминала полученного человеческого не содержащего цистеина гамма-интерферона обнаружен глютамин. Присутствие метионина или других аминокислот не установлено.
Определение соотношения растворимый/агрегированный интерферон проводят центрифугированием раствора интерферона при 25 000 об/мин. Осадок (нерастворимый интерферон) отделяют. Растворимый интерферон в супернатанте осаждают 20% трихлоруксусной кислотой. После центрифугирования в течение 30 мин при 10 000 об/мин осадок растворяют в буфере для электрофореза и анализируют на полиакриламидном геле в присутствии найтрийдодецил-сульфата параллельно с осадком нерастворимого интерферона. После окрашивания геля количество протеина в полосах определяют денсиметрией.
Денсиметрическое определение показывает, что весь протеин (100%) находится в растворимом состоянии.
Концентрацию гамма-интерферона в растворе определяют и независимо с использованием молярного коэффициента затухания Е280 11 700.
Определение биологической активности осуществляют на основе защитного действия интерферона в отношении цитопатического действия вируса везикулярного стоматита на человеческой клеточной линии WISH. Анализ проводят на титровальных чашечках при понижающейся концентрации интерферона. В качестве единицы активности взята концентрация интерферона, при которой наблюдается 50% -ная защита клеток. Применяется лабораторный стандарт, калиброванный согласно международному стандарту.
В случаях, когда исследуют активность лиофилизированных препаратов, содержимое ампул восстанавливают 1 мл апирогенной воды через различные периоды времени (от 7 до 3 мес) после лиофилизации.
Препараты интерферона, исследованные таким образом, показали специфическую активность, равную примерно 5х107 ед/мг.
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО СВОБОДНОГО ОТ МЕТИОНИНА НА N-КОНЦЕ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА, предусматривающий экспрессию безцистеинового гамма-интерферона в штаммах E. coli, трансформированных рекомбинантной плазмидой ДНК РМВ, содержащей синтетический ген, кодирующий гамма-интерферон, при культивировании в условиях аэрации с последующей очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что интерферон экспрессируют в штамм E. coli, депонированном в Национальное банке промышленных микроорганизмов клеточных культур под N 845, аэрацию увеличивают при вступлении бактерий в экспотенциальную фазу роста не позднее чем за 1 ч до отделения биомассы, а очистку проводят путем адсорбции на твердофазной подложке из карбоксиметилсефарозы в растворе 0,1 - 0,35 М гуанидинхлорида с последующим элюированием 0,4 - 0,55 М раствором NaCl.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
BG91006 | 1990-01-24 | ||
BG9100690A BG52073B2 (en) | 1990-01-24 | 1990-01-24 | Method for the preparation of recombinant human noncystein -interferon, free of n-end methionine |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2054044C1 true RU2054044C1 (ru) | 1996-02-10 |
Family
ID=3922678
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4894482 RU2054044C1 (ru) | 1990-01-24 | 1991-01-24 | Способ получения рекомбинантного человеческого свободного от метионина на n-конце гамма-интерферона |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0446582B1 (ru) |
JP (1) | JPH05176789A (ru) |
BG (1) | BG52073B2 (ru) |
DE (1) | DE69106407T2 (ru) |
ES (1) | ES2066237T3 (ru) |
RU (1) | RU2054044C1 (ru) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1309423C (zh) | 1999-11-12 | 2007-04-11 | 马克西根控股公司 | 干扰素γ偶联物 |
CA2390292A1 (en) | 1999-11-12 | 2001-05-25 | Maxygen Holdings Ltd. | Interferon gamma conjugates |
WO2002010370A1 (fr) * | 2000-07-31 | 2002-02-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Procede de production d'une proteine recombinee |
US7038015B2 (en) | 2001-04-06 | 2006-05-02 | Maxygen Holdings, Ltd. | Interferon gamma polypeptide variants |
US6958388B2 (en) | 2001-04-06 | 2005-10-25 | Maxygen, Aps | Interferon gamma polypeptide variants |
HUP0303645A3 (en) * | 2001-04-06 | 2005-12-28 | Maxygen Holdings Ltd Georgetow | Interferon gamma polypeptide variants |
AU2003239774A1 (en) | 2002-07-03 | 2004-01-23 | Maxygen Holdings Ltd. | Full-length interferon gamma polypeptide variants |
BG66458B1 (bg) | 2005-03-21 | 2014-10-31 | Иван Иванов | Средство за конкурентно инхибиране на ендогенен гама интерферон |
US9359421B2 (en) | 2008-04-08 | 2016-06-07 | Tigo Gmbh | Suppressor of the endogenous interferon-gamma |
BG66517B1 (bg) | 2008-04-08 | 2016-02-29 | Tigo Gmbh | Супресор на ендогенния човешки гама - интерферон |
FR3052462A1 (fr) | 2016-06-14 | 2017-12-15 | Dna Script | Variants d'une adn polymerase de la famille polx |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4855238A (en) * | 1983-12-16 | 1989-08-08 | Genentech, Inc. | Recombinant gamma interferons having enhanced stability and methods therefor |
EP0168008A3 (en) * | 1984-07-10 | 1986-12-30 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Stable composition of gamma-interferon |
US4828990A (en) * | 1984-12-27 | 1989-05-09 | Naoki Higashi | Method for purifying an interferon |
JPS61177996A (ja) * | 1985-02-02 | 1986-08-09 | Green Cross Corp:The | インタ−フエロン−γの製造法 |
DK623188A (da) * | 1987-11-09 | 1989-05-10 | Otsuka Pharma Co Ltd | Fremgangsmaade til inkubation af rekombinante proteinekspressionsceller |
-
1990
- 1990-01-24 BG BG9100690A patent/BG52073B2/xx unknown
-
1991
- 1991-01-22 ES ES91100777T patent/ES2066237T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-22 EP EP19910100777 patent/EP0446582B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-22 DE DE1991606407 patent/DE69106407T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-24 JP JP707491A patent/JPH05176789A/ja active Pending
- 1991-01-24 RU SU4894482 patent/RU2054044C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
T. Arakawa, N.K. Altor, J.R. Tsu, J. Biol. Chem., 1985, 260, 14435. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BG52073B2 (en) | 1996-04-30 |
EP0446582A1 (en) | 1991-09-18 |
JPH05176789A (ja) | 1993-07-20 |
ES2066237T3 (es) | 1995-03-01 |
EP0446582B1 (en) | 1995-01-04 |
DE69106407D1 (de) | 1995-02-16 |
DE69106407T2 (de) | 1995-05-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
von Ehrenstein | [76] Isolation of sRNA from intact Escherichia coli cells | |
RU2054044C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного человеческого свободного от метионина на n-конце гамма-интерферона | |
US5196323A (en) | Process for preparing and purifying alpha-interferon | |
EP0344796A2 (en) | Crystalline human granulocyte colony stimulating factor and process for preparing the same | |
KR102186997B1 (ko) | 단백질 정제의 신규한 방법 | |
CN104844684A (zh) | 以金属离子螯合亲和色谱柱为固相载体的蛋白质复性方法 | |
CA1340281C (en) | Process for preparing and purifying alpha-interferon | |
Sodek et al. | Large-scale preparation and some properties of penicillopepsin, the acid proteinase of Penicillium janthinellum | |
JP3805378B2 (ja) | rDSPAα1の製造の方法 | |
CN1085253A (zh) | 网柱菌属二肽氨肽酶 | |
US20040137571A1 (en) | Method for purifying a fermentation-derived product | |
EP0092829A2 (en) | Process for semi-synthesis of human insulin and alkaline protease for use therein | |
CN1142281C (zh) | 重组人红细胞生成素制剂的制备生产方法 | |
JPH04300898A (ja) | 新規糖タンパク複合体およびその製造方法 | |
CN110129393B (zh) | 胶原蛋白三肽及其制备工艺 | |
RU2809355C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pET32a-TNF-Thy, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО БЕЛКА α-ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ - ТИМОЗИН АЛЬФА 1, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BL21 (DE3)/pET32A-TNF-Thy - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО | |
US11926853B2 (en) | Botulinum toxin producing method | |
CN114480353B (zh) | 一种制备重组人奥克纤溶酶的方法 | |
RU2634408C1 (ru) | Способ получения активной фармацевтической субстанции рекомбинантного бисметионилгистона Н1.3 | |
RU2294372C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b И ИНТЕРФЕРОНСОДЕРЖАЩИЙ ПРЕПАРАТ (ВАРИАНТЫ) | |
RU2326944C2 (ru) | Способ получения и препарат аналога рекомбинантного интерферона гамма человека | |
WO2009041858A1 (fr) | Procédé de fabrication de c-petide recombinante de la proinsuline humaine | |
CN1446912A (zh) | 一种重组葡激酶冻干制剂、制备方法和应用 | |
Ward | Recovery of Cell Products | |
WO2021262041A1 (ru) | Способ получения высокоочищенного рекомбинантного ингибитора с1-эстеразы человека |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050125 |