SU1233799A3 - Способ получени 5- @ 3- @ 2-/2,2,2-трифторэтил/-гуанидин @ -пиразол-1-ил @ -валерамида - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к получению биологически активных вешеств, в частности к способу получени  5- (2,2,2-трифторэтил)-гуани- дин -пиразол-1-илу-валерамида,  в- л юшегос  антагонистом гистамина Н-2 и ингибирующего секрецию кислоты желудочного сока.

Известно, что физиологически активное соединение гистамин, который образуетс  в организме животных способен в процессе про влени  его активности соедин тьс  с некоторыми специфическими рецепторами, из которых известны по меньшей мере два определенных и отличных один от другого типа. Первый носит название рецептор Н-1, и действие гистамина на данный рецептор блокируетс  (ан- тагонизируетс ) классическими анти- гистаминовыми лекарствами, такими как мепирамин. Второй рецептор гистамина носит название рецептор Н-2, и действие гистамина на данный ре- цептор блокируетс  такими лекарствами , как циметидин. Одним из результатов блокировани  действи  гистамина на рецептор Н-2  вл етс  инги- бирование секреции кислоты желудочнго сока, и соединение, обладающее такой способностью, находит применение дл  лечени   звы желудка и двенадцатиперстной кишки и других заболеваний , вызванных раздражением за счет желудочной кислотности,.

Цель изобретени  - разработка способа получени  нового соединени   вл ющегос  активным антагонистом гистамина Н-2 и сильно ингибирующег секрецию кислоты желудочного сока,,

Пример. (2,2,2-Tpи- фтopэтил)-гyaнидинo -пиразол-1-ил - валеронитрил (13 г) добавл ют в течение 10 мин к концентрированной сеной кислоте (65 мл) при одновременном перемешивании. Полученный раствор поддерживают при 20 С в течение 18 ч и затем разбавл ют льдом (300м и подщелачивают с помощью 10,8 н. гидрата окиси натри  ,до достижени  рН 9. Смесь экстрагируют этилацета- том (3x200 мл), зкстракт высушиваю ( над сульфатом магни ) и выпаривают в вакууме до получени  в остатке масла, которое кристаллизуетс . Сырой продукт перекристаллизовывают и EtOAc, в результате чего получают

10

15

337992

7,2 г 5-13- 2-(2,2,2-трифторзтил)- гуанидино -пиразол-1-ил -валерамид, т. шт. 13Ь°С. ЯМР-спектр (d DMCO): 7,4 (d, IH); 5,65 (d, I H), 4,0 (m, 5 4H); 2,1 (t, 2 H); 2,6 (m, 4H).

Исходный м;,.териал получают следующим образом.

Гидрид натри  в виде пастообразной массы (6,16 г 61 мас.%-ной суспензии в жидком парафине) ввод т отдельными порци ми в течение 30 мин в раствор 3-нитропиразола (17,4 г) в обезвоженном диметилформамиде (150 мл) с внешним охлаждением льдом с целью поддержани  температуры раствора 20-30 0. Смесь перемешивают в течение 45 мин и к почти прозрачному раствору добавл ют 5-бромвалеронитрил (25 г) в течение 30 мин при 25-30 0, затем смесь перемешивают в течение 4 ч. Добавл ют воду (450 мл) и EtOAc (450 мл), верхний слой отдел ют , высушивают (над MgS04) и вьтари- вают в вакууме до получени  в остатке масла, которое представл ет собой смесь 5-(З-нитропиразол-2-ил)-валеро- нитрила и 5-(5-нитропиразол- -ил)-ва- леро штрила. Это масло раздел ют на две (по 15 г) порции, которые фракци- - онируют, пропуска  их через колонку с силикагелем (диаметр 3,5 см, длина 100 см). Элюирование осуществл етс 

20

25

при давлении 2 атм смесью этилацетат- петролейный эфир (т. кип. 60-80 С)

в соотношении 3:7 (об.). Сначала элю- ируетс  3:5 изомер, а затем 1:3 изомер . Получаемый 5-(3-нитропиразол- -1-ил)-валеронитрил имеет т. пл. 32- 33° С.

К раствору 5-(3-нитропиразол- - -ил)-в,алеронитрила (3,16 г) в обезвоженном тетрагидрофуране (200 мл) добавл ют палладий (5%) на угле (1,8 г). Смесь перемешивают при 20 С

в атмосфере водорода. В течение 4 ч абсорбируетс  3,2 л водорода. Ката- лиз,атор отфильтровывают , фильтрат вьтаривают в вакууме, в результате чего получаетс  5-(3-аминопиразол- 1-ил)-валеронитрил в виде масла. В раствор 5-(3-аминопиразол-1 ил)-валеронитрила (7,0 г) в ацето- нутриле (25 мл) ввод т 2,2,2-трифтор- этилизотиоцианат (6,02 г). Спуст 

15 мин растворитель выпаривают в

вакууме, в результате чего получаетс  5-|3- 3-(2,2,2-трифторэтил)- тиоуроидо -пиразол-1 -ил -валерснитрил в виде белого кристаллического твердого.вещества, т. пл, 96-98 С.

Указанную тиомочевйну (12,5 г) раствор ют в 8 М растворе аммиака в EtOH (120 мл). К раствору добавл ют окись ртути (12,8 г) и смесь перемешивают при 20 С в течение 30 мин. Полученную смесь фильтруют, фильтрат вьшаривают в вакууме, в результате чего получаетс  (2,2,2-три- фторэтил)-гуанидино -пиразол-1-ил - валеронитрил В виде масла. Образец этого масла раствор ют в ацетоне и добавл ют 5 М эквиваленты малеиновой кислоты. К образующемус  прозрачному раствору добавл ют диэтиловый эфир, в результате чего получаетс  кристаллический малеат, т. пл. 123-125 С

Кроме того, (2,2,2-трифтор этил)-гуанидино -пиразол-1-ил -вале- ронитрил может быть получен в результате реакции 3-аминопиразола с 2,2,2-триф горэтилизотиоцианатом, реакции полученной тиомочевины с аммиаком в присутствии окиси ртути и ал- килировани  у атома азота в -м по- ложении 3- 2-(2,2,2-тpифtopэтил)- -гуанидино -пиразола с 5-бромвалеро- нитрилом.

Активность антагониста гистамина Н-2,может быть продемонстрирована посредством стандартных испытаний предложенного соединени  ингибиро- вать вызванную гистамином положительную хронотропную ответную реакцию при спонтанном биении правого предсерди  морских свинок или по способности этого соединени  ингибировать вызванное гистамином поглощение ами- нопирина в кислотное пространство париетальных клеток (т.е. обкладочных клеток желез желудка). I

Испытани  на морских свинках осуществл ют следующим образом.

Правое предсердие морской свинки подвешивают с нат жением 1 г (изометрическое нат жение) в тканевой ванне с термостатическим регулированием (80°С) емкостью 25 мм, содержащей насьщенный кислородом (95% 0 5% СО) буфер Krebs-Hehseteit (рН7,4) Ткань стабилизируют в течение 1 ч, и в течение этого времени ее промывают 2-4 раза. Отдельные сокращени  регистрируют посредством датчика силового смещени  с использованием измерител  деформации, мгновенные частоты сокращени  регистрируют пос33799

редством кардиотахометра. Получают значение контрольной ответной реакции на 1 мкмоль гистамина, после чего ткань промьшают три раза и снова 5 привод т в равновесное состо ние до основного показател  частоты. После установлени  равновеси , дл щегос  15 мин, ввод т испытываемое соединение по желаемой конечной концент- 10 рации. Через 10 мин после введени  соединени  снова ввод т гистамин (1 мкмоль) и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной )5 реакцией на гистамин. Результат выражен в процентах от контрольной реакции на гистамин. После этого стандартными методами определ ют кажущуюс  константу диссоциации антагонис- 20 та гистамина Н-2.

Испытание с -аминопропином осуще- . ствл ют следующим образом.

Удал ют слизистую оболочку желудка из мышц дна желудка и промывают 25 ее в буфере 1 (содержащем 1 л раствора , г: NaCi 8,007; КСГ 0,201; 0,113; KHjPO 0,204; CaC E - 0,132; MgCl 0,101; глюкоза 1 с регулированием рН до 7,4 посредством 3Q NaOH). Ткань тонко измельчают, суспензируют в буфере и промывают три раза буфером 1. Затем ткань суспензируют в -диспергирующей среде (Кол- лагеназа (Sigma Chemical Со Тип У; 100 мг) и альбумин коровьей сыворот- ки (Mibs habaratories Ltd, фракци -У; 00 мг (в 100 мл буфера 1) в количестве 50 мл на 10 г чистого веса ткани , и термостатируют при 30 С и рН 7,4 (поддерживаетс  путем непрерывного регулировани ) при перемешивании в атмосфере кислорода. Через несколько минут ткани дают возможность осесть и поверхностный жидкостный слой удал ют. Ввод т свежую .порцию диспергирующей среды и продолжают термостатирование с использованием ткани, котора  в большей своей части диспергируетс  в железы и целые клетки через 40-60 мин. Оставшиес  большие кусочки ткани удал ют путем фильтрации через нейлоновую сетку .

45

50

Смесь желез и клеток центрифуги- руют при 200 g и суспензируют в буфере 1, содержащем 1% альбумина коровьей сьгооротки (Miles Laboratories Ltd, Фракци  У). Затем железы и клетки промывают три раза буфером 1 и суспензируют в буфере 2, содержащем lagb MEM (500 мл), Апротин (Sigma Chemical Со, 10 мг) и HEPES (т.е. (2-оксиэтил) пиперазин-1-ил этансульфокислоты ; 150ммоль; 20мл), при поддержании рН 7,4 посредством NaOH (150 мл на 10 г чистого веса ткани). Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода при 32°С в течение по меньшей мере i ч, после чего ее можно использовать .

Тканевую суспензию термостатируют вместе с испытуемым соединением и аминопирином (10 мкмоль), меченым С в диметиламиновой группе (0,1 мк- ), в течение 20 мин. Затем поглощение амидопирина стимулируют путем добавлени  гистамина и ингибитора фосфодиэстеразы ICI 63197 до конечных концентраций 10 и 5х10 мо л  соответственно. По истечении I8 мин клетки/железы извлекают из термостатированной среды путем фильтрации суспензии через стекл нный микрофибрильный фильтр. Клетки / железы быстро (в течение менее чем 10 с) промывают три раза буфером 1, охлажденным льдом. Аминоп ирин, меченый с , удерживаемый тканью, измер ют с помощью сцйнтилл ционного счетчика и степень ингибировани  поглощени  испытьгоаемым соединением рассчитьгеают путем сопоставлени  с контрольным образцом. Затем с помо- щью графиков, полученных в р де испытаний, проводимых при различных концентраци х, рассчитьгеают концентрацию испытуемого соединени , дающую ингибирование на 50%.

Предлагаемое соединение испытывают либо в экспериментах с предсердием морских свинок, либо в экспериментах с аминопирином. Это соединение , подвергнутое испытанию в экспериментах с предсердием морских свинок,  вл етс  активным и при концентрации в тканевой ванне 10 мкмоль или ниже показывает полное ингибирование ответной реакции при этой концентрации . Все соединени , подвергнутые испытанию в экспериментах с аминопирином, показывают 50%-ное ингибирование поглощени  аминопири- дина при концентрации 3 мкмоль или менее.

Ингибирование секреции кислоты желудочного сока демонстрируют стандартными испытани ми, например по способности соединени  при вводе его путем внутривенной инъекции, через желудок или через рот, ингибировать секрецию кислотного желудочного сока , например, у крыс или собак, у

которьгк имеетс  желудочный свищ или денервированные углублени  дна желудка и у которых секреци  желудочного сока стимулируетс  путем ввода секретогенного агента,, например гистамина, пентагастрина, бета- нехола или пищи.

Испытание на крысах провод т следующим образом .

Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримьшечного ввода уретана (1,5 г/кг), в трахею ввод т полую, хирургическую иглу. Гибкую трубку пропускают через пищевод в желудок и укрепл ют ее путем ст гивани  в области щей. Многодырочную пластмассовую трубку (диаметром 3мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез в двенадцатиперстной кишке и закрепл ют, прив зыва  ее

посредством хирургической нити к

привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/л NaCi) пропускают через желудок (посредством вставленной в пищевод полой иглы) со скоростью 7 мл/мин, извлекают его из пилори- ческого отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах. Секрецию кислоты стимулируют путем подкожного ввода специфического агониста Н-2 димаприта, вводимого дозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг.ч. Выделение кислоты рассчитывают путем титровани  20 ммоль гидрата, окиси натри  10-минутных

образцов до конечного значени  рН 6,4 (выдел емых в течение 10 мин).

Когда секреци  достигает посто нного значени  (плато на-кривой - три последовательных показани  с расхождением в пределах 5%), испытуемое соединение вводитс  путем внутривенной инъекции через полую иглу, введенную в левую наружную  ремную вену. Затем измер ют секрецию в течение последующих 2 ч. Приготавливают основной раствор каждого испытуемого соединени  (10 мг/мл в диметилсуль- фоксиде) VI разбавл ют соответствующим образом солевым раствором, так

чтобы обеспечивалась возможность ввода в организм дозы 1 мг/кг (ди- метилсульфоксид - 2%) .

Испытание на собаках с хроническим свищом осушествл ют следующим образом.,

Испытани  провод т на самках собак чистой бельгийской породы весом 9-12 кг, имеющих хронический желудочный свиш. В течение ночи их не корм т и лишь при желании дают воду В ходе эксперимента собаки наход тс  в сто чем положении в слегка расслабленном состо нии. При вводе испытуемого соединени  путем внутривенной инъекдии свищ открываетс , и после полного убеждени  в том, что базальна  секреци  не происходит в течение 30 мин, начинают осуществл т непрерьтное внутривенное вливание секретогенного агента (гистамина 0,5 мкмоль/кг- Ч или пентагастри- на 2 мкг/кг ч) в солевом растворе (15 мл/ч). Пробы желудочной кислоты собирают каждые 15 мин. Измер ют объем каждой пробы, 1-миллилитровую аликвотную пробу титруют до нейтральной 100 ммоль NaOH с целью определени  концентрации кислоты. Когда достигаетс  посто нна  секреи   (плато кривой; 1-2 ч), путем внутривенной инъекции ввод т испытуемое соединение в солевом растворе и про- бы кислоты желудочногЪ сока собирают в течение дальнейших 2- 3 ч, в ходе чего непрерьшно продолжаетс  вливание секретогенного агента .

При исследовании испытуемого соединени  путем внутрижелудочного ввода после полной убежденности в отсутствии базальной секреции в течение 30 мин испытуемое соединение, содержащеес  в 25 мл 0,5%-ной (мае./об.) оксипропилметилцеллюлозы и 0,1%-ного (мае./об.) Твина 80 в воде, вливаетс  по капл м в желудок через дозирующую пробку, вставленную в свищ. Спуст  1 ч свищ снова открываетс , и тотчас начинаетс  вливание секретогенного агента. Пробы кислоты желудочного сока измер ют и приближение секреции кислоты к посто нному значению сравнивают с приближением секреции кислоты к посто нному значению дл  контрольного животного, в организм которого ввод т путем внутрижелудочного вливани  лишь один носитель.

233799

При изучении испытуемого соединени , вводимого через рот, оно используетс  в форме желатиновых капсул вместе с 15 мл воды. Через 1 ч 5 после ввода свищ открываетс , и

тотчас начинаетс  внутривенное вливание секретогенного агента. Пробы желудочной кислоты измер ют и приближение секреции кислоты к посто н- 10 ному значению (к плато кривой) сравнивают с приближением секреции дл  контрольного животного, в которое не вводилось испытуемое соединение.

Испытание на собаках с денервиро- J5 ванным углублением дна желудка осуществл ют следующим образом.

Испытани  провод т на самках собак коротконогой гончей породы весом 14-22 кг. Денервированныеуглуб- 20 лени  в области железы дна желудка у этих собак получаютс  при подго- . товке их к испытани м способом Ru- dick и др. В течение 4-6 нед животные поправл ютс  от операции, и в 25 д льнейший период в течение 2-3 мес до обычного использовани  проводитс  подготовка таблиц и нормализаци  секреторных реакций. Собак не корм т в течение 23 ч перед экспериментом (по желанию дают воду) и в процессе эксперимента пов зку, которой они перев заны, расслабл ют . После промывки углублени  теплой водой путем подкожной инъекции вливают гистамин со скоростью 10 мкг/мин. Така  доза приводит к менее чем максимальному (60-90% от максимального) увеличению вьщелени  кислоты при всех используемых дозах. Выделени  желудочного сока из углублени  собирают через каждые 15 мин в градуированные стекл нные пробирки и измер ют объем секреторных выделений, приближающийс  в О, мл. Пробу в количестве 500 мкл разбавл ют 5 мл соле- вого раствора и рН довод т до 7,0 с помощью 100 ммсль NaOH. Общее выделе- кие кислоты рассчитывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенного желудочного сока. 50 Испытуемые соединени  ввод тс  внутривенно (0,1 мл/кг) через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулы после достижени  посто нной секреции (расхождение в трех последовательных показани х в пределах 10%). Секрецию измер ют в течение 3 ч после ввода испытуемого соединени .

30

35

40

55

9 1233799 10

Результаты, полученные при испы-сти или побочных эффектов данного

тании на предсердии и с использова-соединени .

нием минопирина, позвол ют пред-В соответствии с указанной метосказать активность данных соедине-j дикой соединение, полученное предний . При испытани х на собаках иложенным способом, активно в конценткрысах не обнаружено  вной токсично-рации 0,0036мкМ,а известное 0,29мкМ.

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-[3-[2-(2,2,2-ТРИФТОРЭТИЛ)-ГУАНИДИН]-ПИРАЗОЛ- 1 -ИЛ]-ВАЛЕРАМИДА, о тличающ и й с я тем, что, 5-{З-[2-(2,2,2трифторэтил)-гуанидино] -1-ил]-валеронитрил подвергают гидролизу концентрированной серной кислотой.

   > см