SU1287747A3 - Способ получени 5- @ 3- @ 2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидино @ пиразол-1-ил @ -валерамида и его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей - Google Patents

Description

ным гуанидина,  вл ющихс  антагонистами гистамина Н-2 и ингибиторами секреции желудочного сока, а именно к способу получени  5- 3- 2-С:2.,2,2- трифторэтил)гуанидино пиразол-1-ил - валерамида и его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей

Цель изобретени  - способ получени  гуанидинового производного,  в- л ющегос  более сильным антагонистом гистамина Н-2 по сравнению со структурным- аналогом - 3- 2-гуанидиноти- азол-4-илметил-тио пропионамидом.

водород больше не абсорбируетс . Смесь фильтруют и фильтрат выпаривают в вакууме. Получают 5-(3-аминопира- 3ол-1-ил)-валерамид в виде масла, которое кристаллизуетс . Этот продукт (2,5 г) перемешивают в 25 мл ацетонитрила и добавл ют к нему 2,17 г 2,2,2-трифторэтилизотиоцианат. Через 18 ч смесь фильтруют и осадок на фильтре промывают ацетонитрилом, затем диэтиловым эфиром. Получают 5-{3- 3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуре- идо пиразол-1-.ил валерамид с т.пл. 172-1 74°С. 5-{3- 2-(2, 2,2-трифторэтил ) гуанидино пиразол-1-ил1валера- мид  вл етс  антагонистом рецептора Н-2 гистамина (или просто гистамина Н-2), ингибирует секрецию кислоты

Пример 1. К раствору 0,5 г 2,2,2-трифторэтил1-тиоуре- идо пиразол-Т-ил валерамида в 6-мо- л рном растворе аммиака в этиловом

спирте (6 мл) добавл ют 0,56 г окиси 20желудочного сока у теплокровных жиртути в течение 5 мин. Смесь переме-нотных и в св зи с этим находит ценшивают 1 ч и фильтруют.Фильтрат вы-ное применение дл  лечени  пептичеспаривают в вакууме до .получени  в ос-ких  зв ( звы желудка и двенадцатитатке масла, которое раствор ют вперстой кишки) и других заболеваний,

этилацетате, к раствору прибавл ют вызванных или обостр емых кислотноспетролейный эфир (с т. кип. бО-ВО С),тью желудочного сока, в том числе

выделившийс  осадок отфильтровывают,стрессовых  зв и желудочно-кишечных

сушат. Получают (2,2,2-три-кровотечений, вызванных травмами. фторэтил)-гуанидино пиразол-1-ил ва- Активность антагониста гистамина

лерамид в виде кристаллического твер- Н-2 может быть продемонстрирована по- с т.пл. 128-132°С.

дого вещества Выход 76%.

ЯМР-спектр (ДМЗО), м.д.: 7,4 (д.1Н), 5,65 (g. 1Н), 4,0 (м, 1н), 2,1 (т, 2н), 2,6 (и, 4н) .

средством стандартных испытании, например , по способности соединени  ин- гибировать вызванную гистамином положительную хронотропную ответную 35 реакцию при спонтанном биении правого

предсерди  морских свинок или по

Исходный материал может быть полу- способности этого соединени  ингиби- чен следующим образом,ровать вызванное гистамином поглош,еРаствор 0,2 г 5-(3-нитропиразол- ние аминопирина в кислотное простран- -1-ил)валеронитрила в 1 мл концент- 40 ство париетальных клеток (т.е. обкладочных клеток желез желудка),

.Испытани  на морских свинках осуществл ютс  следующим образом. Правое предсердие морской свинки подве- 45 шивают с нат жением 1 г (изометрическое нат жение) в тканевой ванне

рированнои серной кислоте выдерживают П15И 20°С в течение 19 ч. Смесь разбавл ют 4 мл воды, подщелачивают 10,8 нормальной гидроокисью натри  до рН 10 и экстрагируют этилаце- татом (3x5 мл). Экстракты высушивают (над MgSO ) и выпаривают в вакууме до получени  в остатке твердого белого вещества, которое пере- кристаллизовывают из этанола, в результате чего получаетс  5-(3-нит- ропиразол-1-ил)валерамид с т.пл, 129-13РС.

Смесь 3,6 г 5-(3-нитропиразол-1- ил)валерамида и 3%-ного (вес/вес) паллади  на угле (0,54 г) перемешивают мл изопропанола в атмосфере водорода. Температуру поддерживают ниже 40°С за счет внешнего ох- i

с термостатическим регулированием (30°С), емкостью 25 мм, содержащей насыщенный кислородом (95% 02, 5%

50 СО) буфер Krebs Hehseleit (,4). Ткань стабилизируетс  в течение одного часа и в течение этого времени она промываетс  2-4 раза. Отдельные сокращени  регистрируютс  посредст55 вом датчика силового смещени , с использованием измерител  деформации и мгновенные частоты сокращени  регистрируютс  посредством кардиотахо- метра. Получают значение контрольной

водород больше не абсорбируетс . Смесь фильтруют и фильтрат выпарива в вакууме. Получают 5-(3-аминопира- 3ол-1-ил)-валерамид в виде масла, которое кристаллизуетс . Этот продукт (2,5 г) перемешивают в 25 мл ацетонитрила и добавл ют к нему 2,17 г 2,2,2-трифторэтилизотиоциана Через 18 ч смесь фильтруют и осадок на фильтре промывают ацетонитрилом, затем диэтиловым эфиром. Получают 5-{3- 3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуре- идо пиразол-1-.ил валерамид с т.пл. 172-1 74°С. 5-{3- 2-(2, 2,2-трифторэтил ) гуанидино пиразол-1-ил1валера- мид  вл етс  антагонистом рецептора Н-2 гистамина (или просто гистамина Н-2), ингибирует секрецию кислоты

с термостатическим регулированием (30°С), емкостью 25 мм, содержащей насыщенный кислородом (95% 02, 5%

СО) буфер Krebs Hehseleit (,4). Ткань стабилизируетс  в течение одного часа и в течение этого времени она промываетс  2-4 раза. Отдельные сокращени  регистрируютс  посредством датчика силового смещени , с использованием измерител  деформации и мгновенные частоты сокращени  регистрируютс  посредством кардиотахо- метра. Получают значение контрольной

31

ответной реакции на 1 мкмол гиста- мина, после чего ткань промывают три раза и снова привод т в равновесное состо ние до основного показател  частоты. После установлени  равнове- си , дл щегос  15 мин,ввод т испытываемое соединение до желаемой ко- нечной концентрации. Через 10 мин после введени  соединени  снова ввод т гистамин (1 мкМоль) и ответ- ную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин . Результат выражают в процентах от контрольной реакции на Гистамин. После этого стандартными методами определ ют кажущуюс  константу диссоциации антагониста гистамина Н-2.

Испытание с аминопирином осуще- ствл ют следующим образом. Удал ют слизистую оболочку желудка из.мышцы дна желудка и промывают ее в Буфере 1 (содержащем на 1 л раствора 8,007 NaCl; 0,201 г КС1, 0,113 г , 0,204 г KHjPQ , 0,132 г , -0,101 г MgClj и 1 г глюкозы, с регулированием величины рН до-7,4- посредством NaOH). Ткань тонко измельчают, суспензируют в Буфере 1 и промывают три раза Буфером 1. Затем ткань сус- цензируют в диспергирующей среде - Коллагеназа (Sigma Chemicalio Тип У, 100 мг) и альбумин коровьей сыворотк ( Miles laboratories Ltd фракци  - У, 100 мг) в Буфере 1 (100 мл), 50 мл на 10 г чистого веса ткани - и тер- мостатируют при и величине рН рН 7,4 (поддерживаемой путем непрерывного регулировани ) при перемеши- вании в атмосфере кислорода. По прошествии 30 мин ткани дают возможност осесть и поверхностный жидкост ный слой удал ют. Ввод т свежую порцию диспергирующей среды и продолжают термостатирование с испол ьзованием ткани, котора  в большей своей части диспергируетс  в железы и целые клетки по прошествии 40-60 мин. Любые оставшиес  большие кусочки ткани удал ют путем фильтрации через нейлоновую сетку. Смесь желез и клеток извлекают путем центрифугировани  при 200 г и суспензируют в Буфере 1, содержащем 1 % альбумина коровьей сы- воротки (Miles Laboratories Фракци  У). Железы и клетки промывают три раза Буфером 1 и суспензируют в Буфере 2(содержащем Eagles

474

MEM (500 мл) Лпротин (Sigma Chemical Со, 10 мг) и Hepes (т.е. (2-ок- сиэтил) пипераз.ин-1 -ил этансульфокис- лоты, 1500 ммоль% 20 мл), при поддержании величины рН 7,4, посредством NaOH 150 мл на 10 г чистого веса ткани). Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода при температуре в течение по меньшей мере одного часа, после чего ее можно использовать. Тканевую суспензию термостатируют вместе с испытываемым соединением и аминопирином (10 мкмоль) меченым в диметилами- новой группе (0,1 мк дюйм /мл), в течение 20 мин. Затем поглощение ами- нопирина стимулируют путем добавлени  гистамина и ингибитора фосфоди- эстеразы ICI 63197 (Biochem Soc. Special Publication 1, 1973, с. 127- 132) до конечных концентраций 10 мол  и 5 X 10 мол  соответственно. По прошествии 18 мин клетки (железы) извлекают из термостатированной среды i путем фильтрации суспензии через стекл нный микрофибрильный фильтр. Клетки (железы) быстро (в течение менее чем 10 с) промывают три раза охлажденным льдом Буфером 1. Амино- пирин, меченый С , удерживаемый тканью , измер ют с помощью сцинтилл ци- онного счетчика и степень ингибирова- ни  поглощени  испытываемым соединением рассчитывают путем сопоставлени  с контрольным образцом. Затем с помощью графиков, полученных в р де испытаний , проводимых при различных концентраци х , рассчитывают концентрацию испытываемого соединени , дающую ингибирование на 50%.

(2,2,2-трифторэтил) -гуани- дино пиразол-1-ил1-валерамид испытывалс  в экспериментах с аминопирином.

Оно активно в концентрации 0,0036 мкмоль. Структурный аналог - 3-(2-гуанидинотиазол-4-илметилтио - пропионамид в данном тесте активен в концентрации 0,29 мкмоль, т.е. менее активен, чем (2,2,2- трифторэтил) гуанидино пиразол-1-ил|- валерамид приблизительно в 100 раз.

Ингибирование секреции кислоты желудочного сока может быть продемонстрировано стандартньми испытани ми, например, по способности соединени , при вводе его путем внутривенной инъекции через желудок или через рот ингибировать секрецию кислотного

желудочного сока, например, у крыс или у собак, у которых имеетс  желудочный свищ или денервированные углублени  дна желудка и у которых секреци  желудочного сока стимулируетс  путем ввода секретогенного агента , например, гистамина, пентагаст- рина, бетанехола или пищи.

Испытание на крысах проводитс  следующим образом.

Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримьшечного ввода уретана (1,5 г/кг) и в трахею ввод т полую хирургическую иглу. Гибкую трубку пропускают через пищевод в желудок и укрепл ют ее путем ст гивани  в области щёи. Многодырчатую пластмассовую трубку (диаметром 3 мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез в двенадцати- персной кишке и закрепл ют, прив зыва  ее посредством хирургической нити к привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/л NaCl) пропускают через желудбк,посредством вставленной в пищевод полой иглы, со скоростью 7 мл/мин и извлекают его из пилори- ческого отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах.

Секреци  кислоты стимулируетс  путем подкожного ввода специфического агониста Н-2 димаприта, вводимого дозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг/ч. Выделение кислоты рассчитываетс  путем титровани  20 ммоль гидрата окиси натри  10- минутных образцов до конечного значени  рИ 6,4 (выдел емых в течение 10 мин).

.Когда секреци  достигает посто нного значени  (плато на кривой, три последовательных показани  с расхождением в пределах 5%), испытываемое соединение вводитс  путем внутривенной инъекции через полую иглу, введеную в левую наружную  ремную вену, Затем измер ют секрецию в течение последующих двух часов, Приготавливают основной раствор каждого испытываемого соединени  (10 мг/мл в диметил- сульфоксиде) и разбавл ют соответствующим образом солевым раствором так, чтобы обеспечивалась возможност ввода в организм дозы 1мг/кг (диме- тилсульфоксид 2%),

Испытание на собаках с хроническим свищем осуществл ют следующим образом.

0

Испытани  провод т на самках собак коротконогой гончей породы весом 9-12 кг, имеюш 1х хронический желудочный свищ, В течение ночи их не корм т , но дают воду сколько требуетс  В ходе эксперимента собаки наход тс  в сто чем положении.

При вводе испытываемого соединени  путем внутривенной инъекции свищ открываетс  и после полного убеждени  в том, что базальна  секреци  не происходит в течение 30 мин, начинают осуществл ть непрерывное внутривенное вливание секретогенного агента

(гистамина, 0,5 мкмоль/кг/ч или пен- тагастрина, 2 мкг/кг/ч) в солевом растворе (15 мл/ч). Пробы желудочной кислоты собирают каждые 15 мин. Измер ют объем каждой пробы, 1-миллиметровую аликвотную .пробу титруют до нейтральной 100 млмоль NaOH с целью определени  концентрации кислоты. Когда достигаетс  посто нна  секреци  (плато кривой, 1-2 ч), путем внутривенной инъекции испытываемое соединение в солевом растворе и пробы кислоты желудочного сока собирают . в течение дальнейших 2-3 ч, в ходе чего непрерывно продолжаетс  вливание секретогенного агента.

При исследовании испытываемого соединени  путем внутрижелудочного ввода после полной убежденности в отсутствии базальной секреции в тече5 ние 30 мин испытываемое соединение, содержащеес  в 25 мл 0,5%-ной (вес/об) оксипропилметилцеллюлозы и 0,1%-но- го (вес/об) Твина 80 в воде (Твин - торгова  марка), вливаетс  по капл м

О в желудок через дозирующую пробку, вставленную в свищ. Спуст  один час свищ снова открываетс , и тотчас начинают вливание секретоген1-юго аген5

0

45

50

55

та, как описано выше. Пробы кислоты желудочного сока измер ют, как описано выше, и приближение секреции кислоты к посто нному значению сравнивают с приближением секреции кислоты к посто нному значению дл  контрольного животного, в организм которого ввод т путем внутрижелудочного вливани  лишь один носитель.

При изучении испытываемого соединени , вводимого через рот, это соединение используетс  в форме желатиновых капсул вместе с 15 мл воды, Че рез час после ввода свищ открываетс  и тотчас начинают внутривенное влиJO

71287747

вание секретогенного агента. Пробы желудочной кислоты измер ют так же, как указано выше, и приближение секреции кислоты к посто нному значению (к плато кривой) сравнивают с приближением секреции дл  контрольного животного, в которое не вводилось испытываемое соединение.

Испытание на собаках с денервиро- ванным углублением дна желудка осуществл ют следующим образом. Испытани  провод т на самцах собак коротконогой гончей породы весом 14-22 кг. Денервированные углублени  в области железы дна желудка у этих собак полу- чают обычньм способом. В течение 4- 6 недель лсивотные поправл ютс  от операции, и в дальнейший период в течение 2-3 мес до обычного использовани  проводитс  подготовка таблиц и нормализаци  секреторных реакций. Собак не корм т в течение 23 ч перед экспериментом (по желанию, дают воду), и в процессе эксперимента пов зку, которой они перев заны, расслабл ют. После промывки углублени  теплой водой путем подкожной инъекции вливают гистамин со скоростью 10 мкг/мин. Така  доза агониста приводит к менее, чем максимальному (60-90% от макси- мал ьного) увеличению выделени  кислоты при всех используемых дозах. Выделени  желудочного сока из углублени  собирают через каждые 15 мин в градуированные стекл нные пробирки и измер ют объем секреторных выделений , приближаюш;ийс  к 0,1 мл. Пробу в количестве 500 мкл разбавл ют 5 мл солевого раствора и величину рН довод т до 7,0 посредством 100 ммоль NaOH. Общее выделение кислоты рассчитывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенного желудочного сока. Испытываемые соеди8

но в 10 раз и в 100 раз превышают дозу (в мг/кг), привод щую к примерно 50%-ному ингибированию секреции желудочного сока в анестезированной крысе. Никаких токсических симптом у животных с указанными введенными в них дозами не обнаружено.

5-{3- 2-(2,2,2-трифторэтил)-гуа- нидино пиразол-1-ил|валерамид может использоватьс  в форме фармацевтической композиции, котора  включает гуанидиновое производное в сочетании с нетоксичным фармацевтически пригодным разбавителем или носителем.

Эта фармацевтическа  композици  может находитьс , например, в форме пригодной дл  ввода через рот, через пр мую кишку, парэнтерально или пригодной дл  местного применени : дл  этого она может быть приготовлена ууке известными способами в форме, например , таблеток, капсул, водных или масл ных растворов или суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков, свечей, стерильно вводимых путем инъекции водных или масл ных растворов или суспензий, гадей, кремов, мазей или лосьенов.

Нар ду с гуанидиновым производным фармацевтическа  композици , соот-. ветствующа  изобретению, предназначенна  дл  ввода через рот, .пр мую кишку или парэнтерально, может со35 держать совместно вводимое (или вводимые ) одно или несколько лекарств, выбранных из числа нейтрализующих кислоту препаратов, таких как смеси гидрат окиси алюмини  - гидрат оки40 си магни ,антипепсиновых соединений - пепстатин, других антагонистов гис- тамина Н-2, - циметидин или ранити- дин, лекарств дл  вылечивани   зв, карбоноксолон или соли висмута, про50

нени  ввод тс  внутривенно (0,1 мл/кг)5 тивовоспалительных.агентов - ибупрофен , индометацин, напроксен или аспирин , простагландинов - 16,16-диме- тилпростагландин Eg, классических антигистаминов (антагонистов гиста- мина Н-2) - мрпирамин или дифенгид- рамин, антихолергических агентов - атропин или пропантелинбромид, успокаивающих средств - диазепам, хлор- дд1азопоксид или фенобарбитал.

Фармацевтическа  композици , предназначенна  дл  локального применени , может содержать также нар ду с гуанидиновым производным (2,2,2- тpифтopэтил)-гyaнидинo пиразол-1-ил|через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулы после достижени  посто нной секреции (расхождение в трех последовательных показани х в пределах 10%). Секрецию измер ют S течение трех часов после ввода испытываемого соединени .

5-{3- 2-(2,2,2-трифторэтил)гуани- дино пиразол-1-ил валерамид ввод т 55 путем внутривенной инъекции в группы, включающие две анестезированные крысы и четыре не потер вшие сознание мыши, дозами, которые соответствен-

O

747

8

но в 10 раз и в 100 раз превышают дозу (в мг/кг), привод щую к примерно 50%-ному ингибированию секреции желудочного сока в анестезированной крысе. Никаких токсических симптом у животных с указанными введенными в них дозами не обнаружено.

5-{3- 2-(2,2,2-трифторэтил)-гуа- нидино пиразол-1-ил|валерамид может использоватьс  в форме фармацевтической композиции, котора  включает гуанидиновое производное в сочетании с нетоксичным фармацевтически пригодным разбавителем или носителем.

Эта фармацевтическа  композици  может находитьс , например, в форме пригодной дл  ввода через рот, через пр мую кишку, парэнтерально или пригодной дл  местного применени : дл  этого она может быть приготовлена ууке известными способами в форме, например , таблеток, капсул, водных или масл ных растворов или суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков, свечей, стерильно вводимых путем инъекции водных или масл ных растворов или суспензий, гадей, кремов, мазей или лосьенов.

Нар ду с гуанидиновым производным фармацевтическа  композици , соот-. ветствующа  изобретению, предназначенна  дл  ввода через рот, .пр мую кишку или парэнтерально, может содержать совместно вводимое (или вводимые ) одно или несколько лекарств, выбранных из числа нейтрализующих кислоту препаратов, таких как смеси гидрат окиси алюмини  - гидрат окиси магни ,антипепсиновых соединений - пепстатин, других антагонистов гис- тамина Н-2, - циметидин или ранити- дин, лекарств дл  вылечивани   зв, карбоноксолон или соли висмута, про50

валерамидом одно или несколько классических антигистаминов (антагонистов гистамина Н-1), например мепира- мин или дифенгидрамин, и/или одно или несколько стероидных противовоспалительных агентов, например флуо- цинолон или триамцинолон.

Композици , предназначенна  дл 

128774710

ции осуществл етс  таким же образом, как и введение циметидина, причем при определении дозы вводимого препарата учитываетс  сила действи  и продолжительность действи  гуанидинового производного, соответствующего данному изобретению, в сравнении с ди- метидином. Так, каждый падиент при приеме дозы препарата через рот доллокального применени , может включатьfO жен получать (в дозированной форме)

от 1 До 10% (вес/вес) гуанидинового производного. -Предпочтительна  фармацевтическа  композици  пригодна дл  ввода в организм через рот в виде единой дозы в форме,, например, таблетки или капсулы, содержащей от 5 до 500 мг гуанидинового производного , или пригодна дл  внутривенной. Подкожной или внутримышечной инъекции в форме например, стерильной жидкости, содержащей от 0,1% до 10% (вес/вес) гуанидинового производного. Фармацевтическа  композици  обыч-- ио вводитс  в организм человека дл  :гечени  пептических  зв и других заболеваний , вызванных раздражением за счет кислотности желудка, причем введение в организм данной компози )5

20

25

от 5 до 500 мг и предпочтительно от 10 до 100 мг гуанидинового производного , при приеме дозы препарата путем внутривенной, подкожной или внутримышечной инъекции он должен получать (в дозированной форме) 0,5 мг- 50 мг, предпочтительно 2-20 мг, гуанидинового производного, причем данна  композици  вводитс  в организм 1-4 раза и предпочтительно один раз в день. Доза препарата, вводима  через пр мую кишку, приблизительно така  же, как и доза, вводима  через рот. Данна  композици  вводитьс  в организм менее часто, когда она содержит количество гуанидинового производного кратное тому, которое эффективно при вводе 1-4 раза в день.

Составитель И.Корсакова Редактор В.Ковтун Техред И.Попович Корректор Н.Корол

Заказ 7732/61 Тираж 371 Подписное ВНИШШ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г. Ужгород, ул. Проектна , 4

5

0

5

от 5 до 500 мг и предпочтительно от 10 до 100 мг гуанидинового производного , при приеме дозы препарата путем внутривенной, подкожной или внутримышечной инъекции он должен получать (в дозированной форме) 0,5 мг- 50 мг, предпочтительно 2-20 мг, гуанидинового производного, причем данна  композици  вводитс  в организм 1-4 раза и предпочтительно один раз в день. Доза препарата, вводима  через пр мую кишку, приблизительно така  же, как и доза, вводима  через рот. Данна  композици  вводитьс  в организм менее часто, когда она содержит количество гуанидинового производного кратное тому, которое эффективно при вводе 1-4 раза в день.

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-{3-[2-(2,2,2-ТРИФТОРЭТИЛ)-ГУАНИДИНО)ПИРАЗОЛ- 1-ил}ВАЛЕРАМИДА И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРИЕМЛЕМЫХ КИСЛОТНО-АДДИТИВНЫХ СОЛЕЙ, отличающийся тем, что 5-£3-[ 3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуреидо}пиразол-1-ил}валерамид. подвергают взаимодействию с аммиаком в среде этанола в присутствии окиси ртути и, в случае необходимости, полученный продукт переводят в кислотно-аддитивную соль.