SK9649Y1 - Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej - Google Patents
Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej Download PDFInfo
- Publication number
- SK9649Y1 SK9649Y1 SK50027-2022U SK500272022U SK9649Y1 SK 9649 Y1 SK9649 Y1 SK 9649Y1 SK 500272022 U SK500272022 U SK 500272022U SK 9649 Y1 SK9649 Y1 SK 9649Y1
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- solution
- derivative
- hydrogel
- chs
- hydrogels
- Prior art date
Links
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 117
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 112
- 125000004464 hydroxyphenyl group Chemical group 0.000 title claims abstract description 44
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 20
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 97
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 claims abstract description 97
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 97
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O tyraminium Chemical group [NH3+]CCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims abstract 5
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 claims abstract 3
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 claims description 92
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 10
- 159000000011 group IA salts Chemical class 0.000 claims description 5
- FMEVAQARAVDUNY-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethyl)phenol Chemical group NCCC1=CC=CC=C1O FMEVAQARAVDUNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 160
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 89
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 88
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 82
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 64
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 44
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 33
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 31
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 31
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 27
- 239000000463 material Substances 0.000 description 23
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 16
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 16
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 16
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 14
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 14
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N tyramine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 12
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 11
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- JISHRFRBEWKWJK-UHFFFAOYSA-N 6-amino-n-[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]hexanamide Chemical compound NCCCCCC(=O)NCCC1=CC=C(O)C=C1 JISHRFRBEWKWJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 5
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- -1 hyaluronan amides Chemical class 0.000 description 5
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 5
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- QHXLIQMGIGEHJP-UHFFFAOYSA-N picoline - borane complex Substances [B].CC1=CC=CC=N1 QHXLIQMGIGEHJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229960003732 tyramine Drugs 0.000 description 4
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N L-idopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 3
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical compound CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 2
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- UXBLSWOMIHTQPH-UHFFFAOYSA-N 4-acetamido-TEMPO Chemical group CC(=O)NC1CC(C)(C)N([O])C(C)(C)C1 UXBLSWOMIHTQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUFDYIJGNPVTAY-UHFFFAOYSA-N 6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCCCC(O)=O RUFDYIJGNPVTAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108050009363 Hyaluronidases Proteins 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000004896 Sulfotransferases Human genes 0.000 description 1
- 108090001033 Sulfotransferases Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diol Chemical compound CCCC(O)O CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 208000015100 cartilage disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 description 1
- 201000005043 chondromalacia Diseases 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
- C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
- C08J3/075—Macromolecular gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L101/00—Compositions of unspecified macromolecular compounds
- C08L101/12—Compositions of unspecified macromolecular compounds characterised by physical features, e.g. anisotropy, viscosity or electrical conductivity
- C08L101/14—Compositions of unspecified macromolecular compounds characterised by physical features, e.g. anisotropy, viscosity or electrical conductivity the macromolecular compounds being water soluble or water swellable, e.g. aqueous gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej, ktorý obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny, HA-TA, alebo jeho farmaceuticky prijateľnú soľ podľa všeobecného vzorca (I), kde n je v rozmedzí 2 až 7 500 a kde R1 je H+ alebo ión alkalickej soli, alebo soli alkalických zemín a R2 je OH alebo tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II), pričom v rámci jednej molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny alebo jeho farmaceuticky prijateľnej soli podľa všeobecného vzorca (I) je aspoň jeden R2 tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II), a pričom aspoň dva tyramínové substituenty podľa všeobecného vzorca (II) sú spojené prostredníctvom kovalentnej väzby v ktorejkoľvek orto polohe fenylových skupín, a ďalej obsahuje chondroitín sulfát alebo jeho farmaceuticky prijateľnú soľ vybranú zo skupiny obsahujúcej alkalické soli alebo soli alkalických zemín.
Description
Oblasť techniky
Technické riešenie sa týka hydrogélu na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej v zmesi s chondroitín sulfátom so zlepšenou mierou degradácie.
Doterajší stav techniky
Kyselina hyalurónová (tiež hyaluronan, HA) je polysacharid zo skupiny glykozaminoglykánov, ktorý sa skladá z disacharidických jednotiek zložených z kyseliny D-glukurónovej a N-acetyl-D-glukozamínu. Ide o polysacharid, ktorý je ľahko rozpustný vo vodnom prostredí, kde v závislosti od molekulovej hmotnosti a koncentrácie vytvára viskózne roztoky až viskoelastické hydrogély. HA je prirodzenou zložkou medzibunkovej hmoty tkanív. Väzbou na špecifické povrchové bunkové receptory je molekula hyaluronanu schopná interagovať s bunkami vo svojom okolí a regulovať ich metabolické procesy (Xu, Jha a kol. 2012). Z týchto dôvodov sú materiály obsahujúce hyaluronan, prípadne jeho deriváty často využívané na výrobu prípravkov používaných v biomedicínskych aplikáciách. Hydrogély na báze hyaluronanu v organizme podstupujú prirodzenú degradáciu pôsobením špecifických enzýmov (hyaluronidáz), prípadne pôsobením reaktívnych foriem kyslíka (ROS), vďaka čomu dochádza po ich implantácii do organizmu k ich postupnému vstrebaniu (Stern, Kogan a kol. 2007).
Na dosiahnutie mechanicky odolnejších materiálov a z dôvodu spomalenia ich biodegradácie bol vyvinutý rad typov hydrogélov obsahujúcich kovalentne zosietený hyaluronan. Takéto hydrogély sú využívané ako materiály na viskosuplementáciu synoviálnej tekutiny, augmentáciu mäkkých tkanív, slúžia ako podporné štruktúry na kultiváciu a implantáciu buniek a pod. (Tognana, Borrione a kol. 2007, Buck Ii, Alam a kol. 2009, Li, Raitcheva a kol. 2012, Salwowska, Bebenek a kol. 2016).
V minulosti boli taktiež vyvinuté rôzne typy derivátov hyaluronanu, ktoré sú schopné podstupovať prechod sol-gel za fyziologických podmienok in situ (Burdick and Prestwich 2011, Prestwich 2011). Na tieto účely je možné využiť napr. fenolické deriváty hyaluronanu. Calabro a kol. (Calabro, Akst a kol. 2008, Lee, Chung a kol. 2008, Kurisawa, Lee a kol. 2009) opisujú v spisoch EP1587945B1 a EP1773943B1 postup prípravy fenolických derivátov hyaluronanu reakciou karboxylov prítomných v štruktúre D-glukurónovej kyseliny hyaluronanu s aminoalkyl-derivátmi fenolu, napr. tyramínom. Produktom tejto reakcie sú amidy hyaluronanu (Darr a Calabro 2009).
Zosietenie fenolických derivátov hyaluronanu môže byť iniciované prídavkom peroxidázy (napr. chrenovej peroxidázy) a zriedeného roztoku peroxidu vodíka. Chrenová peroxidáza (Horseradish peroxidase, HRP, E.C.1.11.1.7) je v súčasnej dobe využívaná ako katalyzátor organických a biotransformačných reakcií (Akkara, Senecal a kol. 1991, Higashimura a Kobayashi 2002, Ghan, Shutava a kol. 2004, Shutava, Zheng a kol. 2004, Veitch 2004). Hydrogély na báze hydroxyfenylových derivátov hyaluronanu môžu byť využívané ako injekčne aplikovateľné matrice na riadené uvoľňovanie biologicky aktívnych látok alebo ako materiály vhodné na kultiváciu a implantáciu buniek (Kurisawa, Lee a kol. 2010). Wolfová a kol. opisujú v spise CZ303879 konjugát hyaluronanu a tyramínu obsahujúci alifatický linker vložený medzi reťazec polyméru a tyramín. Prítomnosť alifatického linkera umožňuje vyššiu efektivitu sieťovacej reakcie a dodáva sieti vyššiu elasticitu.
Chondroitín sulfát (ChS) je ďalším zástupcom glykozaminoglykánov, ktorý je často využívaný na prípravu materiálov určených na využitie v liečbe degeneratívnych chorôb, napr. osteoartrózy (OA). Reťazec ChS je tvorený disacharidickými jednotkami zloženými z N-acetylgalaktozamínu (GalNAc) a kyseliny idurónovej (IdoA). Disacharidické jednotky ChS môžu byť sulfatované v polohe 4 a 6 GalNAc a prípadne aj v polohe 2 IdoA. Chondroitín sulfát je lineárny, sulfatovaný a negatívne nabitý glykozaminoglykán zložený z opakujúcich sa monomérnych jednotiek N-acetyl-D-galaktozamínu a kyseliny D-glukurónovej navzájom prepojených β(1^3) a β(1^4) O-glykozidickými väzbami (pozri štruktúrny vzorec chondroitín sulfátu).
kde
R1 je H alebo Na,
R2 je H, O-SO2-OH alebo O-SO2-Ona.
SK 9649 Υ1
Zdrojom chondroitín sulfátu sú živočíšne spojivové tkanivá, kde sa viaže na proteíny a tvorí tak súčasť proteoglykánov. Sulfatácia chondroitínu sa uskutočňuje pomocou sulfotransferáz v rôznych polohách a rôznom zastúpení. Jedinečný vzorec sulfatácie jednotlivých polôh v polymérnom reťazci kóduje špecifickú biologickú aktivitu chondroitín sulfátu. Ten je dôležitým stavebným blokom chrupky v kĺboch, ktorým dodáva odolnosť v tlaku a obnovuje rovnováhu v zložení kĺbového maziva (Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E. S., Nogovitsin E. A. 2009. Polymér 50: 1805). Chondroitín sulfát sa spoločne s glukozamínom používa ako výživový doplnok na liečenie alebo tiež na prevenciu vzniku osteoartritídy u ľudí (napr. Flextor®, Advance Nutraceutics, Ltd.) alebo zvierat (napr. Gelorendog®, Contipro Pharma, Ltd.). Z farmaceutického hľadiska sa chondroitín sulfát považuje za liečivo s oneskoreným nástupom účinku tlmenia bolesti pri degeneratívnom ochorení kĺbov (Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571).
In vitro a in vivo štúdie ukázali, že ChS inhibuje účinok hyaluronidáz. Inhibičný účinok ChS na enzýmy je spôsobený tvorbou elektrostatických (iónových) interakcií. Tiež bolo preukázané, že ChS je schopný zachycovať ROS, a tým chrániť pred degradáciou zložky extracelulárnej matrice (Balí, Cousse a kol. 2001, Xiong and Jin 2007).
Využitie kombinácie hyaluronanu a chondroitín sulfátu na prípravu prostriedku na ochranu ľudských alebo živočíšnych buniek a tkanív pred traumatizáciou opisuje dokument EP0136782 (1983). Podobne dokument US6051560 (1992) opisuje využitie zmesi hyaluronanu a chondroitín sulfátu ako viskosuplementačných materiálov počas oftalmologických zákrokov. Patent WO030417024 opisuje viskóznu kompozíciu obsahujúcu terapeuticky účinné množstvo zmesi ChS a HA na výrobu liekov určených na liečbu kĺbov ľudí s poškodením chrupky spôsobeným chondromaláciou alebo OA stupňa I a II, ktorá využíva intraartikulárne podanie zmesi. V patentovej literatúre sa taktiež nájdu dokumenty, ktoré opisujú prostriedok na parenterálne podanie vhodný na prevenciu a liečbu poškodenia kĺbovej chrupky u ľudí alebo zvierat, ktorý sa skladá z terapeuticky účinného množstva chondroitín sulfátu, hyaluronanu a glukozamínu (WO2004034980, 2002). Dokument EP2219595 opisuje formuláciu na báze polysacharidov, najmä glykozaminoglykánov, a ich zmesi s flavonoidmi, ktorá tvorí hydrogély s predĺženým časom biodegradácie. Uvedený dokument opisuje aj hydrogél obsahujúci hyaluronan, derivát hyaluronanu zosietený butándiol 1,4-diglycidyléterom a ChS, ktorý vykazuje zvýšenú odolnosť proti degradácii pôsobením enzýmu hyaluronidázy.
Podstata technického riešenia
Technické riešenie sa týka hydrogélu na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej, ktorého podstatou je, že obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny (HA-TA) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ podľa všeobecného vzorca (I)
____________________________________________0), kde n je v rozmedzí 2 až 7 500 a kde R1 je H+alebo ión alkalickej soli alebo soli alkalických zemín a R2 je OH alebo týra mínový substituent podľa všeobecného vzorca (II):
pričom v rámci jednej molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli podľa všeobecného vzorca (I) aspoň jeden R2 je tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II) a pričom aspoň dva tyramínové substituenty podľa všeobecného vzorca (II) sú spojené prostredníctvom kovalentnej väzby v ktorejkoľvek ortopolohe fenylových skupín, a ďalej obsahuje
SK 9649 Υ1 chondroitín sulfát alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ vybranú zo skupiny obsahujúcej alkalické soli alebo soli alkalických zemín.
Alkalické soli alebo soli alkalických zemín hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny podľa všeobecného vzorca (I) alebo chondroitín sulfátu sú výhodne vybrané zo skupiny obsahujúcej Na+, K+, Ca2+, Mg2+.
Koncentrácia chondroitín sulfátu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli je v rozsahu 0,5 až 50 mg/ml hydrogélu podľa technického riešenia, výhodne v koncentrácii 1 až 20 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml.
Obsah zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu je v rozsahu 5 až 30 mg/ml, výhodne 10 mg/ml hydrogélu podľa technického riešenia.
Podľa ďalšieho výhodného uskutočnenia technického riešenia hydrogél ďalej obsahuje kyselinu hyalurónovú alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v koncentrácii 1 až 20 mg/ml, výhodne 5 až 10 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml hydrogélu podľa technického riešenia.
Kovalentná väzba môže byť v rámci jednej molekuly derivátu kyseliny hyalurónovej podľa všeobecného vzorca (I) v ktorejkoľvek ortopolohefenylových skupín aspoň dvoch tyramínových substituentov všeobecného vzorca (II), ktoré sa v tejto molekule nachádzajú. Ide o takzvané intramolekulárne zosieťovanie. Tiež môže byť kovalentná väzba v ktorejkoľvek ortopolohe fenylových skupín aspoň dvoch tyramínových substituentov všeobecného vzorca (II), ktoré sa nachádzajú v rôznych molekulách derivátu kyseliny hyalurónovej podľa všeobecného vzorca (I). To predstavuje navzájom prepojenú sieť medzi molekulami derivátu HA.
Príklad kovalentne zosieteného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu (crossHA-TA) je schematicky ukázaný, pozri vzorec (III):
Takéto hydrogély podľa technického riešenia vykazujú zvýšenú odolnosť proti biodegradačným pochodom vznikajúcim pôsobením hydrolytických enzýmov a reaktívnych foriem kyslíka.
Podľa výhodného uskutočnenia je hmotnostne stredná molárna hmotnosť (Mw) hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu podľa všeobecného vzorca (I) v rozsahu 5 x 104 až 1,5 x 106 g.moľ1, výhodne 2,5 x 105 až 1 x 106 g.moľ1, výhodnejšie 8 x 105g.moľ1. PI je v rozsahu 1 až 3.
Podľa ďalšieho uskutočnenia technického riešenia je stupeň substitúcie (DS) hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu všeobecného vzorca (I) v rozsahu 0,5 až 10 %, výhodne 1 až 4 %, výhodnejšie 1 %.
Podľa ďalšieho výhodného uskutočnenia je Mw chondroitín sulfátu v rozsahu 5 x 103 až 95 x 103 g.moľ1, ďalej výhodne 10 x 103 až 40 x 103 g.moľ1.
Podľa výhodného uskutočnenia hydrogél obsahuje hyaluronan (HA) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ s Mw v rozsahu 5 x 104 až 2,5 x 106 g.moľ1, výhodne 1,5 x 106 až 2,5 x 106 g.moľ1, výhodnejšie 2,0 x 106 g.moľ1.
Takéto hydrogély podľa technického riešenia môžu byť použité v kozmetike, medicíne a regeneratívnej medicíne, najmä na prípravu materiálov na regeneráciu tkaniva, augmentáciu tkaniva, prípravu scaffoldov pre tkanivové inžinierstvo, ako matrica na riadené uvoľňovanie biologicky aktívnych látok a liečiv a viskosuplementáciu synoviálnej tekutiny.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1: Porovnanie rýchlosti degradácie roztokov HA s prídavkom ChS pomocou ROS
Obr. 2: Porovnanie rýchlosti degradácie materiálov pomocou ROS
Obr. 3: Kumulatívna degradácia hydrogélu [%] BTH 30 U/mg
Príklady uskutočnenia
DS = stupeň substitúcie = 100 % * molárne množstvo modifikovaných disacharidických jednotiek hyaluronanu/molárne množstvo všetkých disacharadických jednotiek derivátu hyaluronanu. Stupeň substitúcie bol stanovený pomocou 1H NMR spektroskopiou.
Hmotnostne stredná molárna hmotnosť (Mw) a index polydisperzity (PI) boli stanovené metódou SEC-MALLS.
Infračervené spektrá pripravených derivátov boli získané metódou FT-IR.
Bol použitý chondroitín sulfát vo farmaceutickej kvalite na injekčné podanie od Bioiberica, ES.
Príklad 1
Syntéza tyramínovaného derivátu HA (HA-TA)
Syntéza 6-amino-N -[2(4hydroxyfenyl)etyl]hexánamidu
6-[(terc-Butoxykarbonyl)amino]hexanová kyselina (1,00 g, 4,3 mmol) bola rozpustená v 50 ml tetrahydrofuránu (THF). K roztoku kyseliny bol pridaný 1,1'-karbodiimidazol (0,70 g, 4,3 mmol). Zmes bola zahrievaná na 50 °C počas šesťdesiatich minút. Potom bola reakčná nádoba premytá inertným plynom. K reakčnej zmesi bol pridaný tyramín (0,59 g, 4,3 mmol). Zmes bola ďalej zahrievaná ďalšie 2 hodiny. Potom bol destiláciou za zníženého tlaku odstránený THF. Odparok bol rozpustený v 50 ml etylacetátu. Roztok bol premytý 150 ml čistenej vody (rozdelené do troch dielov). Organická vrstva bola vysušená nad molekulovým sitom. Etylacetát bol odstránený destiláciou za zníženého tlaku. Odparok bol rozpustený v 50 ml MeOH a k roztoku boli pridané 2 ml trifluóroctovej kyseliny (TFA). Roztok bol zahrievaný 6 hodín pod spätným chladičom. Rozpúšťadlo bolo odstránené destiláciou za zníženého tlaku. Odparok bol rozpustený v 50 ml etylacetátu. Roztok bol premytý 150 ml čistenej vody (rozdelené do troch dielov). Organická vrstva bola vysušená nad molekulovým sitom. Etylacetát bol odstránený destiláciou za zníženého tlaku.
m = 0,75 g (70 % teórie)
1H NMR (D2O, ppm) δ: 1,17 (m, 2 H, Y-CH2- hexánovej kyseliny); 1,48(m, 2 H, β- CH2- hexánovej kyseliny); 1,58 (m, 2 H, δ-CH2- hexánovej kyseliny); 2,17 (t, 2 H, - CH2-CO-); 2,73 (m, 2 H, -CH2-Ph); 2,91 (m, 2 H, -CH2-NH2); 3,42 (m, 2 H, -CH2- NH-CO-); 6,83 (d, 2 H, arom); 7,13 (d, 2 H, arom).
13C NMR(D2O, ppm) δ: 24 (γ-C- hexánovej kyseliny); 26 (δ-C- hexánovej kyseliny); 33 (β-C- hexánovej kyseliny); 35 (-C-CO-); 39 (-C-NH2); 40 (C-Ph); 63 (-C-NH-CO- ); 115 (C3 arom); 126 (C1 arom); 130 (C2 arom.); 153 (C4 arom.); 176 (-CO-).
Príprava aldehydického derivátu (HA-CHO)
Hylauronan (10,00 g, Mw. = 2 x 106 g.mol-1) bol rozpustený v 750 ml 2,5 % (w/w) roztoku Na2HPO4 . 12 H2O. Roztok bol vychladený na 5 °C. K vzniknutému roztoku bolo pridaných 2,60 g NaBr a 0,05 g 4-acetamido-2,2,6,6-tetrametylpiperidín-1- oxylu. Po dôkladnej homogenizácii roztoku boli k reakčnej zmesi pridané 3 ml roztoku NaClO (10 - 15 % dostupného O2). Reakcia pokračovala za stáleho miešania 15 min. Reakcia bola ukončená prídavkom 100 ml 40 % roztoku propán-2-olu. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný precipitáciou propán-2-olom.
IČ (KBr): 3417, 2886, 2152, 1659, 1620, 1550, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm'1. 1H NMR (D2O) δ: 2,01 (s, 3 H, CH3-), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér, -O-CH(OH)-), 5,27 (geminálny glykol -CH- (OH)2).
a) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerom (Mw = 3 x 105 g.mol-1, DS = 2 %)
Aldehydický derivát HA (= 3 x 105 g.mol-1, DS = 9 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino-N -[2-(4- hydroxyfenyl)etyl]hexánamid (medziprodukt (I)) (1,25 g, 5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán-2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 °C , 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm'1. 1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny) 1,51 (m, 2 H, P-CH2-aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 2,78 x 105 g.moľ1
DS (1H NMR): 2,1 %
b) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerom (Mw = 8 x 105 g.moľ1, DS = 1 %)
Aldehydický derivát HA (Mw = 8 x 105 g.moľ1, DS = 5 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino- N -[2-(4- hydroxyfenyl)etyl]hexánamid (medziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán-2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 °C, 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm-1.
1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,51 (m, 2 H, e-CH2- aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 8,09 x 105 g.moľ1
DS (1H NMR): 1,1 %
c) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerom (Mw = 1,5 x 106 g.mol-1, DS = 0,5 %)
Aldehydický derivát HA (Mw = 1,5 x 106 g.moľ1, DS = 0,5 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino-N -[2-(4- hydroxyfenyl)etyl]hexán-amid (medziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciu a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán- 2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 oC , 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm’1. 1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny)1,51 (m, 2 H, β -CH2- aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2- aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom.).
SEC MALLS: Mw = 1,5 x 106 g.moľ1
DS (1H NMR): 0,5 %
d) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerem (Mw = 5 x 104 g.moľ1, DS = 10 %)
Aldehydický derivát HA (Mw = 5 x 104 g.mol-1, DS = 10 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino-N -[2-(4-hydroxy- fenyl)etyl]hexanamid (medziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán- 2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 °C, 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm-1.
1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,51 (m, 2 H, e-CH2- aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2-aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H, arom.).
SEC MALLS: Mw = 5 x 104 g.mol’1
DS (1H NMR): 10 %
Príklad 2
Príprava hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 20 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na ich prípravu bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 1).
Tabuľka 1 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 20 mg/ml
Roztok A | Roztok B | ||
HRP........... | ... 0,48 U/ml | H2O2....... | 2,0 mmol/l |
HA-TA........ | .... 20 mg/ml | HA-TA.... | 20 mg/ml |
NaCl........... | .... 9 g/l | NaCl....... | 9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 2), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 2 Finálne zloženie hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 20 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP.................. | ......0,24 U/ml |
crossHA-TA...... | .......20 mg/ml |
NaCl................. | ......9 g/l |
Príklad 3
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 0,5 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 3).
Tabuľka 3 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 0,5 mg/ml
Roztok A | RoztokB | |
HRP........0,48 U/ml | H2O2......... | .....2,0 mmol/l |
HA-TA....20 mg/ml | HA-TA...... | ....20 mg/ml |
ChS........0,5 mg/ml | ChS.......... | ....0,5 mg/ml |
NaCl.......9 g/l | NaCl......... | ...9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 4), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 4 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 0,5 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP................ | .....0,24 U/ml |
crossHA-TA.... | .....20 mg/ml |
ChS................ | ....0,5 mg/ml |
NaCl............... | ....9 g/l |
Príklad 4
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov Aa B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 5).
Tabuľka 5 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml
Roztok A | Roztok B | ||
HRP.................. | ...........0,48 U/ml | H2O2................. | ...........2,0 mmol/l |
HA-TA.............. | ...........20 mg/ml | HA-TA............... | ...........20 mg/ml |
ChS................... | ...........3,3 mg/ml | ChS................... | ...........3,3 mg/ml |
NaCl................. | ..........9 g/l | NaCl................. | ...........9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 6), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 6 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP.................. | .......0,24 U/ml |
crossHA-TA....... | ........20 mg/ml |
ChS................... | ......3,3 mg/ml |
NaCl.................. | .......9 g/l |
Príklad 5
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 7).
Tabuľka 7 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Roztok A | Roztok B | ||
HRP.................. | ..........0,48 U/ml | H2O2................... | .............2,0 mmol/l |
HA-TA.............. | ...........20 mg/ml | HA-TA................ | ............20 mg/ml |
ChS................... | ...........10 mg/ml | ChS.................... | ............10 mg/ml |
NaCl................. | ..........9 g/l | NaCl................... | ............9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 8), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 8 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP............................. | ...0,24 U/ml |
crossHA-TA................. | .....20 mg/ml |
ChS.............................. | ....10 mg/ml |
NaCl............................ | ...9 g/l |
Príklad 6
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 50 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov Aa B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol'1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 9).
Tabuľka 9 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 50 mg/ml
Roztok A | Roztok B | ||
HRP.................. | ...........0,48 U/ml | H2O2.................. | ............2,0 mmol/l |
HA-TA.............. | ..........20 mg/ml | HA-TA............... | ...........20 mg/ml |
ChS.................. | ..........50 mg/ml | ChS................... | ............50 mg/ml |
NaCl................. | ...........9 g/l | NaCl.................. | ............9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 10), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 10 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 50 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP................ | ....0,24 U/ml |
crossHA-TA.... | .........20 mg/ml |
ChS................. | ......50 mg/ml |
NaCl............... | .....9 g/l |
Príklad 7
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 5 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 11).
Tabuľka 11 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A | Roztok B | ||
HRP........................... | ........12,8 mU/ml | H2O2......................... | .......0,6 mmol/l |
HA-TA....................... | ........20 mg/ml | HA-TA....................... | ........20 mg/ml |
NaCl.......................... | ........8 g/l | NaCl......................... | ........8 g/l |
KCl............................ | ........0,2 g/l | KCl............................ | ........0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O........ | ........2,85 g/l | Na2HPO4.12H2O....... | ........2,85 g/l |
KH2PO4...................... | ........0,2 g/l | KH2PO4..................... | ........0,2 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 12).
Tabuľka 12 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA | |
HRP........................... | ........0,24 U/ml |
crossHA-TA............... | ..........20 mg/ml |
NaCl.......................... | ..........8 g/l |
KCl............................ | .........0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O........ | .............2,85 g/l |
KH2PO4..................... | .........0,2 g/l |
2. Príprava roztoku hyaluronanu
Roztok HA s koncentráciou 5 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 v PBS.
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku hyaluronanu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 13).
Tabuľka 13 Finálne zloženie hydrogélu, obsahujúce HA s koncentráciou 5 mg/ml
Finálne zloženie | |
HRP.................... | .0,12 U/ml |
crossHA-TA........ | .....10 mg/ml |
HA...................... | ..5 mg/ml |
NaCl................... | ..8 g/l |
KCl...................... | ..0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O. | .....2,85 g/l |
KH2PO4............... | .0,2 g/l |
Príklad 8
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 20 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 14).
Tabuľka 14 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A | Roztok B | ||
HRP........................... | .........12,8 mU/ml | H2O2......................... | ........0,6 mmol/l |
HA-TA....................... | ...........20 mg/ml | HA-TA....................... | .........20 mg/ml |
NaCl.......................... | .........8 g/l | NaCl.......................... | .........8 g/l |
KCl............................ | ........0,2 g/l | KCl............................ | .......0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O........ | ...........2,85 g/l | Na2HPO4.12H2O....... | ...........2,85 g/l |
KH2PO4...................... | ........0,2 g/l | KH2PO4..................... | ........ 0,2 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 15).
Tabuľka 15 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA | |
HRP...................... | .....0,24 U/ml |
crossHA-TA........... | .......20 mg/ml |
NaCl...................... | .....8 g/l |
KCl........................ | ...0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O... | ........2,85 g/l |
KH2PO4................. | .....0,2 g/l |
2. Príprava roztoku hyaluronanu
Roztok HA s koncentráciou 40 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 vo fosfátovom pufri (PBS).
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku hyaluronanu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 16).
Tabuľka 16 Finálne zloženie hydrogélu, obsahujúce HA s koncentráciou 20 mg/ml
Finálne zloženie | |
HRP....................... | .....0,12 U/ml |
crossHA-TA............ | ........10 mg/ml |
HA......................... | .....20 mg/ml |
NaCl....................... | .....8 g/l |
KCl......................... | ....0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O.... | .......2,85 g/l |
KH2PO4.................. | .....0,2 g/l |
Príklad 9
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 5 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú a chondroitín sulfát zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 17).
Tabuľka 17 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A | Roztok B | ||
HRP........................... | ...........12,8 mU/ml | H2O2........................ | .........0,6 mmol/l |
HA-TA....................... | .............20 mg/ml | HA-TA..................... | .........20 mg/ml |
NaCl.......................... | ...........8 g/l | NaCl........................ | .........8 g/l |
KCl............................ | ........0,2 g/l | KCl.......................... | ......0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O........ | .............2,85 g/l | Na2HPO4.12H2O...... | ............2,85 g/l |
KH2PO4...................... | ...........0,2 g/l | KH2PO4.................... | .......0,2 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 18).
Tabuľka 18 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného | derivátu crossHA-TA |
HRP........................... | ...........0,24 U/ml |
crossHA-TA................ | ..............20 mg/ml |
NaCl........................... | ............8 g/l |
KCl............................. | ..........0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O........ | ...............2,85 g/l |
KH2PO4...................... | ..........0,2 g/l |
2. Príprava roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Roztok HA s koncentráciou 10 mg/ml a ChS s koncentráciou 10 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 a chondroitín sulfátu ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1 vo fosfátovom pufri (PBS).
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA a ChS v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 19).
Tabuľka 19 Finálne zloženie hydrogélu, HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 5 mg/ml
Finálne zloženie | |
HRP...................... | .....0,12 U/ml |
crossHA-TA........... | .........10 mg/ml |
HA........................ | .....5 mg/ml |
ChS....................... | .......5 mg/ml |
NaCl...................... | ......8 g/l |
KCl........................ | ...0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O.... | .........2,85 g/l |
KH2PO4................. | ......0,2 g/l |
Príklad 10
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú a chondroitín sulfát zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 20).
Tabuľka 20 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A HRP...................................12,8 mU/ml HA-TA...............................20 mg/ml NaCl..................................8 g/l KCl...................................0,2 g/l Na2HPO4.12H20....................2,85 g/l KH2PO4.............................0,2 g/l | Roztok B H2O2.................................0,6 mmol/l HA-TA..............................20 mg/ml NaCl.................................8 g/l KCl..................................0,2 g/l Na2HPO4.12H20...................2,85 g/l KH2PO4............................0,2 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 21).
Tabuľka 21 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA | |
HRP............................. | ...........0,24 U/ml |
crossHA-TA................. | ..............20 mg/ml |
NaCl............................ | ............8 g/l |
KCl............................... | ..........0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O.......... | ..............2,85 g/l |
KH2PO4........................ | ..........0,2 g/l |
2. Príprava roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Roztok HA s koncentráciou 10 mg/ml a ChS s koncentráciou 20 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 a chondroitín sulfátu s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1 vo fosfátovom pufri (PBS).
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA a ChS v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 22).
Tabuľka 22 Finálne zloženie hydrogélu, HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Finálne zloženie | |
HRP............................ | ...........0,12 U/ml |
crossHA-TA................ | ..............10 mg/ml |
HA.............................. | ............5 mg/ml |
ChS............................. | ..............10 mg/ml |
NaCl........................... | ...........8 g/l |
KCl.............................. | .........0,2 g/l |
Na2HPO4.12H2O......... | ............2,85 g/l |
KH2PO4....................... | ..........0,2 g/l |
Príklad 11
Príprava hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 5 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 1,5 x 106 g.mol-1 a DS 0,5 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 23).
Tabuľka 23 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 5 mg/ml
Roztok A | Roztok B |
HRP.............................0,12 U/ml HA-TA.........................5 mg/ml NaCl............................9 g/l | H2O2.................................0,5 mmol/l HA-TA...............................5 mg/ml NaCl..................................9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 24), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 24 Finálne zloženie hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 5 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP............................... | .....0,06 U/ml |
crossHA-TA................... | .....5 mg/ml |
NaCl.............................. | .....9 g/l |
Príklad 12
Príprava hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 30 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov Aa B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 5 x 104 g.mol-1 a DS 10 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 25).
Tabuľka 25 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 30 mg/ml
Roztok A | Roztok B | ||
HRP..................... | .............1,2 U/ml | H2O2................... | .............5 mmol/l |
HA-TA.................. | ..............30 mg/ml | HA-TA................. | .............30 mg/ml |
NaCl.................... | ...............9 g/l | NaCl.................... | ...............9 g/l |
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 26), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 26 Finálne zloženie hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 30 mg/ml
Zloženie hydrogélov | |
HRP.............................. | ....0,6 U/ml |
crossHA-TA.................. | ....30 mg/ml |
NaCl............................. | .....9 g/l |
Príklad 13
Degradácia roztokov HA s prídavkom ChS pomocou ROS
Na porovnanie rýchlosti degradácie roztokov HA s ChS pôsobením ROS boli pripravené roztoky hyaluronanu vo fosfátovom pufri (PBS) s rôznou koncentráciou ChS. Na prípravu roztokov bola použitá kyselina hyalurónová s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Roztok A obsahoval 20 mg/ml HA, roztok B 20 mg/ml HA a 0,5 mg/ml ChS, roztok C 20 mg/ml HA a 1 mg/ml ChS, roztok D 20 mg/ml HA a 3 mg/ml ChS, roztok E 20 mg/ml HA a 5 mg/ml ChS, roztok F 20 mg/ml HA a 20 mg/ml ChS.
Uskutočnenie experimentu degradácie
Rýchlosť degradácie bola vyjadrená ako percentuálny pokles viskozity roztokov pri šmykovej rýchlosti 0,1 s-1 oproti počiatočnej hodnote. Meranie poklesu viskozity sa uskutočňovalo na reometri Kinexus Malvern v konfigurácii cone-plate. Bol použitý kužeľ s priemerom 40 mm s vrcholovým uhlom 1°. Degradácia materiálu prebiehala v 10 ml striekačkách, kde do 9 ml materiálu bolo pridaných 0,5 ml roztoku CuSO4 s koncentráciou 0,25 mmol/l a následne 0,5 ml roztoku H2O2 s koncentráciou 2,5 mmol/l. Počas prebiehajúcej degradácie hydrogélov boli vo vopred daných časových intervaloch odoberané vzorky materiálu, pri ktorých bola nameraná viskozita pri teplote 25 °C a šmykovej rýchlosti 0,1 s-1. Celkový čas degradácie bol 3 h.
Obr. 1 znázorňuje degradáciu reťazcov hyaluronanu, ktorá je vyjadrená percentuálnym poklesom viskozity roztokov v čase. Z obr. 1 je vidieť vplyv koncentrácie ChS na rýchlosť degradácie hyaluronanu. So zvyšujúcou sa koncentráciou ChS klesá rýchlosť degradácie HA pôsobením ROS. Viskozita roztoku A, ktorý neobsahoval ChS, po 3 hodinách poklesla o 97 % oproti počiatočnej hodnote pred degradáciou, roztoku B (s prídavkom 0,5 mg/ml ChS) už o 89 %, roztoku C, do ktorého bolo pridaných 1 mg/ml ChS o 84 %, roztoku D (20 mg/ml HA + 3 mg/ml ChS) o 46 %, roztoku E (20 mg/ml HA + 5 mg/ml ChS) o 25 % a roztoku F (20 mg/ml HA + 20 mg/ml ChS) len o 8 %.
Príklad 14
Degradácia hydrogélov na báze zosieteného derivátu crossHA-TA pôsobením ROS
Na porovnanie rýchlosti degradácie hydrogélov pôsobením ROS boli pripravené 3 typy materiálov. Materiál A je roztok HA s koncentráciou 20 mg/ml, ktorý bol pripravený rozpustením HA s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 v PBS.
Materiál B je zmes zosieteného derivátu crossHA-TA a nezosietenej HA, ktorý bol pripravený podľa príkladu 7.
Materiály C a D sa skladali z nezosietenej HA, CHS a crossHA-TA a boli pripravené podľa príkladov 9 a 10.
Rýchlosť degradácie bola vyjadrená ako percentuálny pokles viskozity materiálov pri šmykovej rýchlosti 0,1 s-1 oproti počiatočnej hodnote. Meranie poklesu viskozity sa uskutočňovalo na reometri Kinexus Malvern v konfigurácii cone-plate. Bol použitý kužeľ s priemerom 40 mm s vrcholovým uhlom 1°. Degradácia materiálu prebiehala v 10 ml striekačkách, kde do 9 ml materiálu bolo pridaných 0,5 ml roztoku CuSO4 s koncentráciou 0,25 mmol/l a následne 0,5 ml roztoku H2O2 s koncentráciou 2,5 mmol/l. Po určitých časoch degradácie sa odoberali vzorky, pri ktorých bola nameraná viskozita pri teplote 25 °C a šmykovej rýchlosti 0,1 s-1. Celkový čas degradácie bol 3 h. Z obr. 2 je zrejmé, že prítomnosť ChS v pripravených hydrogéloch (C - 5 mg/ml ChS; D - 10 mg/ml ChS) zvyšuje ich odolnosť proti pôsobeniu ROS.
Príklad 15
Enzymatická degradácia hydrogélov na báze zosieteného derivátu crossHA-TA
Na zistenie vplyvu prítomnosti ChS na rýchlosť degradácie hydrogélov na báze crossHA-TA pôsobením bovinnej testikulárnej hyaluronidázy boli pripravené 3 typy hydrogélov:
A - hydrogély bez prídavku chondroitín sulfátu, ktoré boli pripravené podľa postupu v príklade 2,
B - hydrogély s prídavkom ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml, ktoré boli pripravené podľa postupu v príklade 4,
C - hydrogély s prídavkom ChS s koncentráciou 10 mg/ml, ktoré boli pripravené podľa postupu v príklade 5.
Rýchlosť degradácie bola vyjadrená ako nárast koncentrácie produktov degradácie, spôsobenej BTH, vyjadrený v percentách.
Hydrogély boli ponorené do degradačného média (roztok hyaluronidázy BTH s aktivitou 30 U/mg v roztoku hovädzieho sérového albumínu (BSA) s koncentráciou 0,1 mg/ml v 0,01 mol/l octanovom pufri (OP) pH 5,3). Degradácia hydrogélov prebiehala v inkubátore pri 37 °C za súčasného miešania. Po určitých časových intervaloch sa odoberali vzorky degradačného média s produktmi degradácie hydrogélov. Koncentrácia disacharidických jednotiek HA v degradačnom médiu bola stanovená spektrofotometricky ako koncentrácia N -acetylglukozamínu. Obr. 3 znázorňuje nárast koncentrácie degradačných produktov hydrogélov v médiu v čase. Z obr. je zrejmé, že prítomnosť ChS v hydrogéloch na báze crossHA-TA vedie k zníženiu rýchlosti degradácie materiálov pôsobením hyaluronidázy.
Odkazy:
Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571
Akkara, J. A., K. J. Senecal a D. L. Kaplan (1991). Synthesis and characterization of polymers produced by horseradish peroxidase in dioxane. Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry 29(11): 1561-1574. Bali, J.-P., H. Cousse a E. Neuzil (2001). Biochemical basis of the pharmacologic action of chondroitín sulfates on the osteoarticular system. Seminars in Arthritis and Rheumatism 31(1): 58-68.
Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E. S., Nogovitsin E. A. 2009. Polymer 50: 1805
Buck Ii, D. W., M. Alam a J. Y. S. Kim (2009). Injectable fillers for facial rejuvenation: a review. Journal of Plastic, Reconstructive & Aesthetic Surgery 62(1): 11-18.
Burdick, J. A. a G. D. Prestwich (2011). Hyaluronic Acid Hydrogéls for Biomedical Applications. Advanced Materials 23(12): H41-H56.
Calabro, A., L. Akst, D. Alam, J. Chan, A. B. Darr, K. Fukamachi, R. A. Gross, D. Haynes, K. Kamohara, D. P. Knott, H. Lewis, A. Melamud, A. Miniaci a M. Strome (2008). Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof. United States, The Cleveland Clinic Foundation (Cleveland, OH, US).
Darr, A. a A. Calabro (2009). Synthesis and characterization of tyramine-based hyaluronan hydrogels. Journal of Materials Science: Materials in Medicíne 20(1): 33-44.
Ghan, R., T. Shutava, A. Patel, V. T. John a Y. Lvov (2004). Enzyme-Catalyzed Polymerization of Phenols within Polyelectrolyte Microcapsules. Macromolecules 37(12): 4519-4524.
Higashimura, H. a S. Kobayashi (2002). Oxidative Polymerization, John Wiley & Sons, Inc.
Kurisawa, M., F. Lee a J. E. Chung (2009). Formation of Hydrogél in the Presence of Peroxidase and Low Concentration of Hydrogen Peroxide
Kurisawa, M., F. Lee, L.-S. Wang a J. E. Chung (2010). Injectable enzymatically crosslinked hydrogél system with independent tuning of mechanical strength and gelation rate for drug delivery and tissue engineering. Journal of Materials Chemistry 20(26): 5371-5375.
Lee, F., J. E. Chung a M. Kurisawa (2008). An injectable enzymatically crosslinked hyaluronic acid-tyramine hydrogél system with independent tuning of mechanical strength and gelation rate. Soft Matter 4: 880-887. Li, P., D. Raitcheva, M. Hawes, N. Moran, X. Yu, F. Wang a G. L. Matthews (2012). Hylan G-F 20 maintains cartilage integrity and decreases osteophyte formation in osteoarthritis through both anabolic and anticatabolic mechanisms. Osteoarthritis and Cartilage 20(11): 1336-1346.
Prestwich, G. D. (2011). Hyaluronic acid-based clinical biomaterials derived for cell and molecule delivery in regenerative medicine. J Control Release 155(2): 193-199.
Salwowska, N. M., A. Bebenek, D. A. Žgdfo a D. L. Wcisfo-Dziadecka (2016). Physiochemical properties and application of hyaluronic acid: a systematic review. Journal of Cosmetic Dermatology 15(4): 520-526.
Shutava, T., Z. Zheng, V. John a Y. Lvov (2004). Microcapsule modification with peroxidase-catalyzed phenol polymerization. Biomacromolecules 5(3): 914-921.
Stern, R., G. Kogan, M. J. Jedrzejas a L. Šoltés (2007). The many ways to cleave hyaluronan. Biotechnology advances 25(6): 537-557.
Tognana, E., A. Borrione, C. De Luca a A. Pavesio (2007). Hyalograft C: hyaluronan-based scaffolds in tissueengineered cartilage. Cells Tissues Organs 186(2): 97-103.
Veitch, N. C. (2004). Horseradish peroxidase: a modern view of a classic enzyme. Phytochemistry 65(3): 249-259.
Volpi, N. (2019). Chondroitín Sulfate Safety and Quality. Molecules (Basel, Switzerland) 24(8): 1447.
Xiong, S.-L. a Z.-Y. Jin (2007). THE FREE RADICAL-SCAVENGING PROPERTY OF CHONDROITÍN SULFATE FROM PIG LARYNGEAL CARTILAGE IN VITRO. Journal of Food Biochemistry 31(1): 28-44.
Xu, X., A. K. Jha, D. A. Harrington, M. C. Farach-Carson a X. Jia (2012). Hyaluronic Acid-Based Hydrogéls: from a Natural Polysaccharide to Complex Networks. Soft matter 8(12): 3280-3294.
Claims (5)
- NÁROKY NA OCHRANU1. Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej, vyznačujúci sa tým, že obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny (HA-TA) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ podľa všeobecného vzorca (I)(I), kde n je v rozmedzí 2 až 7 500 a kde R1 je H+ alebo ión alkalickej soli alebo soli alkalických zemín a R2 je OH alebo tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II):pričom v rámci jednej molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli podľa všeobecného vzorca (I) je aspoň jeden R2 tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II) a pričom aspoň dva tyramínové substituenty podľa všeobecného vzorca (II) sú spojené prostredníctvom kovalentnej väzby v ktorejkoľvek ortopolohe fenylových skupín, a ďalej obsahuje chondroitín sulfát alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ vybranú zo skupiny obsahujúcej alkalické soli alebo soli alkalických zemín.
- 2. Hydrogél podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že alkalické soli alebo soli alkalických zemín sú vybrané zo skupiny obsahujúcej Na+, K+, Ca2+, Mg2+.
- 3. Hydrogél podľa nároku 1 alebo nároku 2, vyznačujúci sa tým, že koncentrácia chondroitín sulfátu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli je v rozsahu 0,5 až 50 mg/ml hydrogélu, výhodne v koncentrácii 1 až 20 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml.
- 4. Hydrogél podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že obsah zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu je v rozsahu 5 až 30 mg/ml, výhodne 10 mg/ml hydrogélu.
- 5. Hydrogél podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje kyselinu hyalurónovú alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v koncentrácii 1 až 20 mg/ml hydrogélu, výhodne 5 až 10 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml hydrogélu.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ2019-36602U CZ33324U1 (cs) | 2019-09-06 | 2019-09-06 | Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové |
CZPUV2019-36602 | 2019-09-06 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK500272022U1 SK500272022U1 (sk) | 2022-07-27 |
SK9649Y1 true SK9649Y1 (sk) | 2022-11-24 |
Family
ID=68384244
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK50027-2022U SK9649Y1 (sk) | 2019-09-06 | 2020-09-03 | Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
AT (1) | AT18104U1 (sk) |
CZ (1) | CZ33324U1 (sk) |
DE (1) | DE212020000715U1 (sk) |
FR (1) | FR3104945B3 (sk) |
SK (1) | SK9649Y1 (sk) |
WO (1) | WO2021043349A1 (sk) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CZ308970B6 (cs) * | 2020-05-12 | 2021-10-27 | Contipro A.S. | Sada gelotvorných roztoků určená pro přípravu hydrogelu na bázi kovalentně zesítěného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu k prevenci pooperačních komplikací souvisejících s vytvořením kolorektální anastomózy a její použití |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU555747B2 (en) | 1983-08-09 | 1986-10-09 | Cilco Inc. | Chondroitin sulfate and sodium hyaluronate composition |
US6051560A (en) | 1986-06-26 | 2000-04-18 | Nestle S.A. | Chrondroitin sulfate/sodium hyaluronate composition |
DE10156617A1 (de) | 2001-11-17 | 2003-05-28 | Biosphings Ag | Herstellung reiner Stereoisomere von Tricyclo[5.2.1.0··2··.··6··]-dec-9-yl-xanthogenat und Arzneimittel daraus |
ATE525076T1 (de) | 2002-10-16 | 2011-10-15 | Arthrodynamic Technologies Animal Health Division Inc | Behandlung von traumatischer synovitis und geschädigtem gelenkknorpel |
US6982298B2 (en) | 2003-01-10 | 2006-01-03 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
US7465766B2 (en) * | 2004-01-08 | 2008-12-16 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
CN101052684B (zh) | 2004-07-09 | 2014-02-12 | 克利夫兰临床基金会 | 羟基苯交联大分子网络及其应用 |
US8394782B2 (en) | 2007-11-30 | 2013-03-12 | Allergan, Inc. | Polysaccharide gel formulation having increased longevity |
KR101091028B1 (ko) * | 2009-07-02 | 2011-12-09 | 아주대학교산학협력단 | 체내 주입형 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도 |
KR101161640B1 (ko) * | 2009-08-25 | 2012-07-02 | 서울과학기술대학교 산학협력단 | 리포산이 결합된 화합물과 이의 제조방법 |
EP3067069B1 (en) * | 2009-11-11 | 2023-07-26 | Hy2Care B.V. | Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers |
CZ28434U1 (cs) * | 2015-05-18 | 2015-07-07 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanokompozit na bázi hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jejísoli obsahující nanočástice fosforečnanu vápenatého |
-
2019
- 2019-09-06 CZ CZ2019-36602U patent/CZ33324U1/cs active Protection Beyond IP Right Term
-
2020
- 2020-09-03 DE DE212020000715.2U patent/DE212020000715U1/de active Active
- 2020-09-03 SK SK50027-2022U patent/SK9649Y1/sk unknown
- 2020-09-03 AT ATGM9011/2020U patent/AT18104U1/de unknown
- 2020-09-03 WO PCT/CZ2020/050065 patent/WO2021043349A1/en active Application Filing
- 2020-09-07 FR FR2009046A patent/FR3104945B3/fr active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2021043349A1 (en) | 2021-03-11 |
CZ33324U1 (cs) | 2019-10-25 |
SK500272022U1 (sk) | 2022-07-27 |
FR3104945A3 (fr) | 2021-06-25 |
FR3104945B3 (fr) | 2021-12-10 |
DE212020000715U1 (de) | 2022-04-21 |
AT18104U1 (de) | 2024-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8481080B2 (en) | Method of cross-linking hyaluronic acid with divinulsulfone | |
EP1753787B1 (en) | Method of covalently linking hyaluronan and chitosan | |
JP5746617B2 (ja) | キトサン混合物を形成する注入可能なヒドロゲル | |
CZ20011650A3 (cs) | Zesítěné hyaluronové kyseliny | |
WO2008008857A2 (en) | Thiolated macromolecules and methods of making and using thereof | |
RU2613887C2 (ru) | Устойчивый к расщеплению сшитый низкомолекулярный гиалуронат | |
US8202986B2 (en) | Branched hyaluronic acid and method of manufacture | |
EP4038105B1 (en) | A hyperbranched polyglycerol polyglycidyl ether and its use as crosslinker for polysaccharides | |
SK9649Y1 (sk) | Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej | |
Fakhari | Biomedical application of hyaluronic acid nanoparticles | |
EP3980029B1 (en) | Means for use in preparation of hydrogel based on hydroxyphenyl derivative of hyaluronan, method of hydrogel preparation and use thereof | |
CN106714856B (zh) | 含有糖胺聚糖和蛋白质的组合物 | |
CZ33901U1 (cs) | Prostředek pro použití k přípravě hydrogelu na bázi hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu | |
RU2750000C1 (ru) | Способ получения модифицированного гиалуронана и его применение в медицине, в том числе при эндопротезировании | |
CN113943382B (zh) | 一种丙烯酸酯类修饰的透明质酸(钠)及其合成方法和应用 | |
TWI728463B (zh) | 基於硫酸化玻尿酸之水凝膠及含彼之藥學組成物 | |
Guo et al. | Heparosan crosslinked hydrogel for an injectable dermal filler: fabrication, physicochemical properties and biocompatibility | |
Trifan et al. | STRATEGIES OF HYALURONAN CHEMICAL MODIFICATIONS FOR BIOMEDICAL APPLICATIONS | |
Kumar et al. | Use of Polysaccharides: Novel Delivery System for Genetic Material | |
IT202100012737A1 (it) | Miscele di polisaccaridi e poliamminosaccaridi con proprietà reologiche migliorate | |
WO2015174872A1 (en) | Viscosupplement composition comprising ulvan for treating arthritis | |
JP2022550111A (ja) | グルコン酸亜鉛およびヒアルロン酸エステルをベースとするヒドロゲル | |
Dhanasingh | sP (EO-stat-PO)-glycosaminoglycans (GAGs) hybrid-hydrogels for medical applications | |
Stern | Hyaluronic acid: a natural biopolymer with a broad range of biomedical and industrial applications. Biotechnol Lett | |
Noh | HYALURONAN-BASED HYDROGEL SCAFFOLDS |