SK9649Y1 - Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej - Google Patents

Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej Download PDF

Info

Publication number
SK9649Y1
SK9649Y1 SK50027-2022U SK500272022U SK9649Y1 SK 9649 Y1 SK9649 Y1 SK 9649Y1 SK 500272022 U SK500272022 U SK 500272022U SK 9649 Y1 SK9649 Y1 SK 9649Y1
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
solution
derivative
hydrogel
chs
hydrogels
Prior art date
Application number
SK50027-2022U
Other languages
English (en)
Other versions
SK500272022U1 (sk
Inventor
Ing. Toropitsyn Evgeniy
PharmDr. Pravda Martin, PhD.
Ing. Kovářová Lenka
Ing. Bystroňová Julie
doc. RNDr. CSc. Velebný Vladimír
Original Assignee
Contipro A.S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro A.S. filed Critical Contipro A.S.
Publication of SK500272022U1 publication Critical patent/SK500272022U1/sk
Publication of SK9649Y1 publication Critical patent/SK9649Y1/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
    • C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
    • C08J3/075—Macromolecular gels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L101/00—Compositions of unspecified macromolecular compounds
    • C08L101/12—Compositions of unspecified macromolecular compounds characterised by physical features, e.g. anisotropy, viscosity or electrical conductivity
    • C08L101/14—Compositions of unspecified macromolecular compounds characterised by physical features, e.g. anisotropy, viscosity or electrical conductivity the macromolecular compounds being water soluble or water swellable, e.g. aqueous gels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej, ktorý obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny, HA-TA, alebo jeho farmaceuticky prijateľnú soľ podľa všeobecného vzorca (I), kde n je v rozmedzí 2 až 7 500 a kde R1 je H+ alebo ión alkalickej soli, alebo soli alkalických zemín a R2 je OH alebo tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II), pričom v rámci jednej molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny alebo jeho farmaceuticky prijateľnej soli podľa všeobecného vzorca (I) je aspoň jeden R2 tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II), a pričom aspoň dva tyramínové substituenty podľa všeobecného vzorca (II) sú spojené prostredníctvom kovalentnej väzby v ktorejkoľvek orto polohe fenylových skupín, a ďalej obsahuje chondroitín sulfát alebo jeho farmaceuticky prijateľnú soľ vybranú zo skupiny obsahujúcej alkalické soli alebo soli alkalických zemín.

Description

Oblasť techniky
Technické riešenie sa týka hydrogélu na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej v zmesi s chondroitín sulfátom so zlepšenou mierou degradácie.
Doterajší stav techniky
Kyselina hyalurónová (tiež hyaluronan, HA) je polysacharid zo skupiny glykozaminoglykánov, ktorý sa skladá z disacharidických jednotiek zložených z kyseliny D-glukurónovej a N-acetyl-D-glukozamínu. Ide o polysacharid, ktorý je ľahko rozpustný vo vodnom prostredí, kde v závislosti od molekulovej hmotnosti a koncentrácie vytvára viskózne roztoky až viskoelastické hydrogély. HA je prirodzenou zložkou medzibunkovej hmoty tkanív. Väzbou na špecifické povrchové bunkové receptory je molekula hyaluronanu schopná interagovať s bunkami vo svojom okolí a regulovať ich metabolické procesy (Xu, Jha a kol. 2012). Z týchto dôvodov sú materiály obsahujúce hyaluronan, prípadne jeho deriváty často využívané na výrobu prípravkov používaných v biomedicínskych aplikáciách. Hydrogély na báze hyaluronanu v organizme podstupujú prirodzenú degradáciu pôsobením špecifických enzýmov (hyaluronidáz), prípadne pôsobením reaktívnych foriem kyslíka (ROS), vďaka čomu dochádza po ich implantácii do organizmu k ich postupnému vstrebaniu (Stern, Kogan a kol. 2007).
Na dosiahnutie mechanicky odolnejších materiálov a z dôvodu spomalenia ich biodegradácie bol vyvinutý rad typov hydrogélov obsahujúcich kovalentne zosietený hyaluronan. Takéto hydrogély sú využívané ako materiály na viskosuplementáciu synoviálnej tekutiny, augmentáciu mäkkých tkanív, slúžia ako podporné štruktúry na kultiváciu a implantáciu buniek a pod. (Tognana, Borrione a kol. 2007, Buck Ii, Alam a kol. 2009, Li, Raitcheva a kol. 2012, Salwowska, Bebenek a kol. 2016).
V minulosti boli taktiež vyvinuté rôzne typy derivátov hyaluronanu, ktoré sú schopné podstupovať prechod sol-gel za fyziologických podmienok in situ (Burdick and Prestwich 2011, Prestwich 2011). Na tieto účely je možné využiť napr. fenolické deriváty hyaluronanu. Calabro a kol. (Calabro, Akst a kol. 2008, Lee, Chung a kol. 2008, Kurisawa, Lee a kol. 2009) opisujú v spisoch EP1587945B1 a EP1773943B1 postup prípravy fenolických derivátov hyaluronanu reakciou karboxylov prítomných v štruktúre D-glukurónovej kyseliny hyaluronanu s aminoalkyl-derivátmi fenolu, napr. tyramínom. Produktom tejto reakcie sú amidy hyaluronanu (Darr a Calabro 2009).
Zosietenie fenolických derivátov hyaluronanu môže byť iniciované prídavkom peroxidázy (napr. chrenovej peroxidázy) a zriedeného roztoku peroxidu vodíka. Chrenová peroxidáza (Horseradish peroxidase, HRP, E.C.1.11.1.7) je v súčasnej dobe využívaná ako katalyzátor organických a biotransformačných reakcií (Akkara, Senecal a kol. 1991, Higashimura a Kobayashi 2002, Ghan, Shutava a kol. 2004, Shutava, Zheng a kol. 2004, Veitch 2004). Hydrogély na báze hydroxyfenylových derivátov hyaluronanu môžu byť využívané ako injekčne aplikovateľné matrice na riadené uvoľňovanie biologicky aktívnych látok alebo ako materiály vhodné na kultiváciu a implantáciu buniek (Kurisawa, Lee a kol. 2010). Wolfová a kol. opisujú v spise CZ303879 konjugát hyaluronanu a tyramínu obsahujúci alifatický linker vložený medzi reťazec polyméru a tyramín. Prítomnosť alifatického linkera umožňuje vyššiu efektivitu sieťovacej reakcie a dodáva sieti vyššiu elasticitu.
Chondroitín sulfát (ChS) je ďalším zástupcom glykozaminoglykánov, ktorý je často využívaný na prípravu materiálov určených na využitie v liečbe degeneratívnych chorôb, napr. osteoartrózy (OA). Reťazec ChS je tvorený disacharidickými jednotkami zloženými z N-acetylgalaktozamínu (GalNAc) a kyseliny idurónovej (IdoA). Disacharidické jednotky ChS môžu byť sulfatované v polohe 4 a 6 GalNAc a prípadne aj v polohe 2 IdoA. Chondroitín sulfát je lineárny, sulfatovaný a negatívne nabitý glykozaminoglykán zložený z opakujúcich sa monomérnych jednotiek N-acetyl-D-galaktozamínu a kyseliny D-glukurónovej navzájom prepojených β(1^3) a β(1^4) O-glykozidickými väzbami (pozri štruktúrny vzorec chondroitín sulfátu).
kde
R1 je H alebo Na,
R2 je H, O-SO2-OH alebo O-SO2-Ona.
SK 9649 Υ1
Zdrojom chondroitín sulfátu sú živočíšne spojivové tkanivá, kde sa viaže na proteíny a tvorí tak súčasť proteoglykánov. Sulfatácia chondroitínu sa uskutočňuje pomocou sulfotransferáz v rôznych polohách a rôznom zastúpení. Jedinečný vzorec sulfatácie jednotlivých polôh v polymérnom reťazci kóduje špecifickú biologickú aktivitu chondroitín sulfátu. Ten je dôležitým stavebným blokom chrupky v kĺboch, ktorým dodáva odolnosť v tlaku a obnovuje rovnováhu v zložení kĺbového maziva (Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E. S., Nogovitsin E. A. 2009. Polymér 50: 1805). Chondroitín sulfát sa spoločne s glukozamínom používa ako výživový doplnok na liečenie alebo tiež na prevenciu vzniku osteoartritídy u ľudí (napr. Flextor®, Advance Nutraceutics, Ltd.) alebo zvierat (napr. Gelorendog®, Contipro Pharma, Ltd.). Z farmaceutického hľadiska sa chondroitín sulfát považuje za liečivo s oneskoreným nástupom účinku tlmenia bolesti pri degeneratívnom ochorení kĺbov (Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571).
In vitro a in vivo štúdie ukázali, že ChS inhibuje účinok hyaluronidáz. Inhibičný účinok ChS na enzýmy je spôsobený tvorbou elektrostatických (iónových) interakcií. Tiež bolo preukázané, že ChS je schopný zachycovať ROS, a tým chrániť pred degradáciou zložky extracelulárnej matrice (Balí, Cousse a kol. 2001, Xiong and Jin 2007).
Využitie kombinácie hyaluronanu a chondroitín sulfátu na prípravu prostriedku na ochranu ľudských alebo živočíšnych buniek a tkanív pred traumatizáciou opisuje dokument EP0136782 (1983). Podobne dokument US6051560 (1992) opisuje využitie zmesi hyaluronanu a chondroitín sulfátu ako viskosuplementačných materiálov počas oftalmologických zákrokov. Patent WO030417024 opisuje viskóznu kompozíciu obsahujúcu terapeuticky účinné množstvo zmesi ChS a HA na výrobu liekov určených na liečbu kĺbov ľudí s poškodením chrupky spôsobeným chondromaláciou alebo OA stupňa I a II, ktorá využíva intraartikulárne podanie zmesi. V patentovej literatúre sa taktiež nájdu dokumenty, ktoré opisujú prostriedok na parenterálne podanie vhodný na prevenciu a liečbu poškodenia kĺbovej chrupky u ľudí alebo zvierat, ktorý sa skladá z terapeuticky účinného množstva chondroitín sulfátu, hyaluronanu a glukozamínu (WO2004034980, 2002). Dokument EP2219595 opisuje formuláciu na báze polysacharidov, najmä glykozaminoglykánov, a ich zmesi s flavonoidmi, ktorá tvorí hydrogély s predĺženým časom biodegradácie. Uvedený dokument opisuje aj hydrogél obsahujúci hyaluronan, derivát hyaluronanu zosietený butándiol 1,4-diglycidyléterom a ChS, ktorý vykazuje zvýšenú odolnosť proti degradácii pôsobením enzýmu hyaluronidázy.
Podstata technického riešenia
Technické riešenie sa týka hydrogélu na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej, ktorého podstatou je, že obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny (HA-TA) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ podľa všeobecného vzorca (I)
____________________________________________0), kde n je v rozmedzí 2 až 7 500 a kde R1 je H+alebo ión alkalickej soli alebo soli alkalických zemín a R2 je OH alebo týra mínový substituent podľa všeobecného vzorca (II):
pričom v rámci jednej molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli podľa všeobecného vzorca (I) aspoň jeden R2 je tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II) a pričom aspoň dva tyramínové substituenty podľa všeobecného vzorca (II) sú spojené prostredníctvom kovalentnej väzby v ktorejkoľvek ortopolohe fenylových skupín, a ďalej obsahuje
SK 9649 Υ1 chondroitín sulfát alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ vybranú zo skupiny obsahujúcej alkalické soli alebo soli alkalických zemín.
Alkalické soli alebo soli alkalických zemín hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny podľa všeobecného vzorca (I) alebo chondroitín sulfátu sú výhodne vybrané zo skupiny obsahujúcej Na+, K+, Ca2+, Mg2+.
Koncentrácia chondroitín sulfátu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli je v rozsahu 0,5 až 50 mg/ml hydrogélu podľa technického riešenia, výhodne v koncentrácii 1 až 20 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml.
Obsah zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu je v rozsahu 5 až 30 mg/ml, výhodne 10 mg/ml hydrogélu podľa technického riešenia.
Podľa ďalšieho výhodného uskutočnenia technického riešenia hydrogél ďalej obsahuje kyselinu hyalurónovú alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v koncentrácii 1 až 20 mg/ml, výhodne 5 až 10 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml hydrogélu podľa technického riešenia.
Kovalentná väzba môže byť v rámci jednej molekuly derivátu kyseliny hyalurónovej podľa všeobecného vzorca (I) v ktorejkoľvek ortopolohefenylových skupín aspoň dvoch tyramínových substituentov všeobecného vzorca (II), ktoré sa v tejto molekule nachádzajú. Ide o takzvané intramolekulárne zosieťovanie. Tiež môže byť kovalentná väzba v ktorejkoľvek ortopolohe fenylových skupín aspoň dvoch tyramínových substituentov všeobecného vzorca (II), ktoré sa nachádzajú v rôznych molekulách derivátu kyseliny hyalurónovej podľa všeobecného vzorca (I). To predstavuje navzájom prepojenú sieť medzi molekulami derivátu HA.
Príklad kovalentne zosieteného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu (crossHA-TA) je schematicky ukázaný, pozri vzorec (III):
Takéto hydrogély podľa technického riešenia vykazujú zvýšenú odolnosť proti biodegradačným pochodom vznikajúcim pôsobením hydrolytických enzýmov a reaktívnych foriem kyslíka.
Podľa výhodného uskutočnenia je hmotnostne stredná molárna hmotnosť (Mw) hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu podľa všeobecného vzorca (I) v rozsahu 5 x 104 až 1,5 x 106 g.moľ1, výhodne 2,5 x 105 až 1 x 106 g.moľ1, výhodnejšie 8 x 105g.moľ1. PI je v rozsahu 1 až 3.
Podľa ďalšieho uskutočnenia technického riešenia je stupeň substitúcie (DS) hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu všeobecného vzorca (I) v rozsahu 0,5 až 10 %, výhodne 1 až 4 %, výhodnejšie 1 %.
Podľa ďalšieho výhodného uskutočnenia je Mw chondroitín sulfátu v rozsahu 5 x 103 až 95 x 103 g.moľ1, ďalej výhodne 10 x 103 až 40 x 103 g.moľ1.
Podľa výhodného uskutočnenia hydrogél obsahuje hyaluronan (HA) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ s Mw v rozsahu 5 x 104 až 2,5 x 106 g.moľ1, výhodne 1,5 x 106 až 2,5 x 106 g.moľ1, výhodnejšie 2,0 x 106 g.moľ1.
Takéto hydrogély podľa technického riešenia môžu byť použité v kozmetike, medicíne a regeneratívnej medicíne, najmä na prípravu materiálov na regeneráciu tkaniva, augmentáciu tkaniva, prípravu scaffoldov pre tkanivové inžinierstvo, ako matrica na riadené uvoľňovanie biologicky aktívnych látok a liečiv a viskosuplementáciu synoviálnej tekutiny.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1: Porovnanie rýchlosti degradácie roztokov HA s prídavkom ChS pomocou ROS
Obr. 2: Porovnanie rýchlosti degradácie materiálov pomocou ROS
Obr. 3: Kumulatívna degradácia hydrogélu [%] BTH 30 U/mg
Príklady uskutočnenia
DS = stupeň substitúcie = 100 % * molárne množstvo modifikovaných disacharidických jednotiek hyaluronanu/molárne množstvo všetkých disacharadických jednotiek derivátu hyaluronanu. Stupeň substitúcie bol stanovený pomocou 1H NMR spektroskopiou.
Hmotnostne stredná molárna hmotnosť (Mw) a index polydisperzity (PI) boli stanovené metódou SEC-MALLS.
Infračervené spektrá pripravených derivátov boli získané metódou FT-IR.
Bol použitý chondroitín sulfát vo farmaceutickej kvalite na injekčné podanie od Bioiberica, ES.
Príklad 1
Syntéza tyramínovaného derivátu HA (HA-TA)
Syntéza 6-amino-N -[2(4hydroxyfenyl)etyl]hexánamidu
6-[(terc-Butoxykarbonyl)amino]hexanová kyselina (1,00 g, 4,3 mmol) bola rozpustená v 50 ml tetrahydrofuránu (THF). K roztoku kyseliny bol pridaný 1,1'-karbodiimidazol (0,70 g, 4,3 mmol). Zmes bola zahrievaná na 50 °C počas šesťdesiatich minút. Potom bola reakčná nádoba premytá inertným plynom. K reakčnej zmesi bol pridaný tyramín (0,59 g, 4,3 mmol). Zmes bola ďalej zahrievaná ďalšie 2 hodiny. Potom bol destiláciou za zníženého tlaku odstránený THF. Odparok bol rozpustený v 50 ml etylacetátu. Roztok bol premytý 150 ml čistenej vody (rozdelené do troch dielov). Organická vrstva bola vysušená nad molekulovým sitom. Etylacetát bol odstránený destiláciou za zníženého tlaku. Odparok bol rozpustený v 50 ml MeOH a k roztoku boli pridané 2 ml trifluóroctovej kyseliny (TFA). Roztok bol zahrievaný 6 hodín pod spätným chladičom. Rozpúšťadlo bolo odstránené destiláciou za zníženého tlaku. Odparok bol rozpustený v 50 ml etylacetátu. Roztok bol premytý 150 ml čistenej vody (rozdelené do troch dielov). Organická vrstva bola vysušená nad molekulovým sitom. Etylacetát bol odstránený destiláciou za zníženého tlaku.
m = 0,75 g (70 % teórie)
1H NMR (D2O, ppm) δ: 1,17 (m, 2 H, Y-CH2- hexánovej kyseliny); 1,48(m, 2 H, β- CH2- hexánovej kyseliny); 1,58 (m, 2 H, δ-CH2- hexánovej kyseliny); 2,17 (t, 2 H, - CH2-CO-); 2,73 (m, 2 H, -CH2-Ph); 2,91 (m, 2 H, -CH2-NH2); 3,42 (m, 2 H, -CH2- NH-CO-); 6,83 (d, 2 H, arom); 7,13 (d, 2 H, arom).
13C NMR(D2O, ppm) δ: 24 (γ-C- hexánovej kyseliny); 26 (δ-C- hexánovej kyseliny); 33 (β-C- hexánovej kyseliny); 35 (-C-CO-); 39 (-C-NH2); 40 (C-Ph); 63 (-C-NH-CO- ); 115 (C3 arom); 126 (C1 arom); 130 (C2 arom.); 153 (C4 arom.); 176 (-CO-).
Príprava aldehydického derivátu (HA-CHO)
Hylauronan (10,00 g, Mw. = 2 x 106 g.mol-1) bol rozpustený v 750 ml 2,5 % (w/w) roztoku Na2HPO4 . 12 H2O. Roztok bol vychladený na 5 °C. K vzniknutému roztoku bolo pridaných 2,60 g NaBr a 0,05 g 4-acetamido-2,2,6,6-tetrametylpiperidín-1- oxylu. Po dôkladnej homogenizácii roztoku boli k reakčnej zmesi pridané 3 ml roztoku NaClO (10 - 15 % dostupného O2). Reakcia pokračovala za stáleho miešania 15 min. Reakcia bola ukončená prídavkom 100 ml 40 % roztoku propán-2-olu. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný precipitáciou propán-2-olom.
IČ (KBr): 3417, 2886, 2152, 1659, 1620, 1550, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm'1. 1H NMR (D2O) δ: 2,01 (s, 3 H, CH3-), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér, -O-CH(OH)-), 5,27 (geminálny glykol -CH- (OH)2).
a) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerom (Mw = 3 x 105 g.mol-1, DS = 2 %)
Aldehydický derivát HA (= 3 x 105 g.mol-1, DS = 9 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino-N -[2-(4- hydroxyfenyl)etyl]hexánamid (medziprodukt (I)) (1,25 g, 5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán-2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 °C , 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm'1. 1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny) 1,51 (m, 2 H, P-CH2-aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 2,78 x 105 g.moľ1
DS (1H NMR): 2,1 %
b) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerom (Mw = 8 x 105 g.moľ1, DS = 1 %)
Aldehydický derivát HA (Mw = 8 x 105 g.moľ1, DS = 5 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino- N -[2-(4- hydroxyfenyl)etyl]hexánamid (medziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán-2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 °C, 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm-1.
1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,51 (m, 2 H, e-CH2- aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 8,09 x 105 g.moľ1
DS (1H NMR): 1,1 %
c) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerom (Mw = 1,5 x 106 g.mol-1, DS = 0,5 %)
Aldehydický derivát HA (Mw = 1,5 x 106 g.moľ1, DS = 0,5 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino-N -[2-(4- hydroxyfenyl)etyl]hexán-amid (medziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciu a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán- 2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 oC , 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm’1. 1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny)1,51 (m, 2 H, β -CH2- aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2- aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom.).
SEC MALLS: Mw = 1,5 x 106 g.moľ1
DS (1H NMR): 0,5 %
d) Príprava tyramínovaného derivátu HA s C6 spacerem (Mw = 5 x 104 g.moľ1, DS = 10 %)
Aldehydický derivát HA (Mw = 5 x 104 g.mol-1, DS = 10 %) (5,00 g) bol rozpustený v 500 ml demineralizovanej vody. Pomocou kyseliny octovej bolo pH roztoku upravené na 3. K roztoku HA-CHO bol pridaný 6-amino-N -[2-(4-hydroxy- fenyl)etyl]hexanamid (medziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná 2 hodiny pri laboratórnej teplote. Potom bol do reakčnej zmesi pridaný komplex pikolín-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Zmes bola miešaná ďalších 12 hodín pri laboratórnej teplote. Produkt bol prečistený ultrafiltráciou a izolovaný z retentátu precipitáciou propán-2-olom. Precipitát bol zbavený vlhkosti a zvyškového propán- 2-olu sušením v teplovzdušnej sušiarni (40 °C, 3 dni).
IČ (KBr): 3425, 2893, 2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945, 893 cm-1.
1H NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 H, y-CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,48 (m, 2 H, δ- CH2- aminohexánovej kyseliny), 1,51 (m, 2 H, e-CH2- aminohexánovej kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-), 2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, ε-CH2-aminohexánovej kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomér), 4,54 (s, 1H anomér., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H, arom.).
SEC MALLS: Mw = 5 x 104 g.mol’1
DS (1H NMR): 10 %
Príklad 2
Príprava hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 20 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na ich prípravu bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 1).
Tabuľka 1 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 20 mg/ml
Roztok A Roztok B
HRP........... ... 0,48 U/ml H2O2....... 2,0 mmol/l
HA-TA........ .... 20 mg/ml HA-TA.... 20 mg/ml
NaCl........... .... 9 g/l NaCl....... 9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 2), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 2 Finálne zloženie hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 20 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP.................. ......0,24 U/ml
crossHA-TA...... .......20 mg/ml
NaCl................. ......9 g/l
Príklad 3
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 0,5 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 3).
Tabuľka 3 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 0,5 mg/ml
Roztok A RoztokB
HRP........0,48 U/ml H2O2......... .....2,0 mmol/l
HA-TA....20 mg/ml HA-TA...... ....20 mg/ml
ChS........0,5 mg/ml ChS.......... ....0,5 mg/ml
NaCl.......9 g/l NaCl......... ...9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 4), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 4 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 0,5 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP................ .....0,24 U/ml
crossHA-TA.... .....20 mg/ml
ChS................ ....0,5 mg/ml
NaCl............... ....9 g/l
Príklad 4
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov Aa B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 5).
Tabuľka 5 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml
Roztok A Roztok B
HRP.................. ...........0,48 U/ml H2O2................. ...........2,0 mmol/l
HA-TA.............. ...........20 mg/ml HA-TA............... ...........20 mg/ml
ChS................... ...........3,3 mg/ml ChS................... ...........3,3 mg/ml
NaCl................. ..........9 g/l NaCl................. ...........9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 6), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 6 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP.................. .......0,24 U/ml
crossHA-TA....... ........20 mg/ml
ChS................... ......3,3 mg/ml
NaCl.................. .......9 g/l
Príklad 5
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 7).
Tabuľka 7 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Roztok A Roztok B
HRP.................. ..........0,48 U/ml H2O2................... .............2,0 mmol/l
HA-TA.............. ...........20 mg/ml HA-TA................ ............20 mg/ml
ChS................... ...........10 mg/ml ChS.................... ............10 mg/ml
NaCl................. ..........9 g/l NaCl................... ............9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 8), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 8 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP............................. ...0,24 U/ml
crossHA-TA................. .....20 mg/ml
ChS.............................. ....10 mg/ml
NaCl............................ ...9 g/l
Príklad 6
Príprava hydrogélov, obsahujúcich ChS s koncentráciou 50 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov Aa B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 2,78 x 105 g.mol-1 a DS 2,1 % a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol'1. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 9).
Tabuľka 9 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 50 mg/ml
Roztok A Roztok B
HRP.................. ...........0,48 U/ml H2O2.................. ............2,0 mmol/l
HA-TA.............. ..........20 mg/ml HA-TA............... ...........20 mg/ml
ChS.................. ..........50 mg/ml ChS................... ............50 mg/ml
NaCl................. ...........9 g/l NaCl.................. ............9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 10), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 10 Finálne zloženie hydrogélov obsahujúce ChS s koncentráciou 50 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP................ ....0,24 U/ml
crossHA-TA.... .........20 mg/ml
ChS................. ......50 mg/ml
NaCl............... .....9 g/l
Príklad 7
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 5 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 11).
Tabuľka 11 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A Roztok B
HRP........................... ........12,8 mU/ml H2O2......................... .......0,6 mmol/l
HA-TA....................... ........20 mg/ml HA-TA....................... ........20 mg/ml
NaCl.......................... ........8 g/l NaCl......................... ........8 g/l
KCl............................ ........0,2 g/l KCl............................ ........0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O........ ........2,85 g/l Na2HPO4.12H2O....... ........2,85 g/l
KH2PO4...................... ........0,2 g/l KH2PO4..................... ........0,2 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 12).
Tabuľka 12 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
HRP........................... ........0,24 U/ml
crossHA-TA............... ..........20 mg/ml
NaCl.......................... ..........8 g/l
KCl............................ .........0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O........ .............2,85 g/l
KH2PO4..................... .........0,2 g/l
2. Príprava roztoku hyaluronanu
Roztok HA s koncentráciou 5 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 v PBS.
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku hyaluronanu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 13).
Tabuľka 13 Finálne zloženie hydrogélu, obsahujúce HA s koncentráciou 5 mg/ml
Finálne zloženie
HRP.................... .0,12 U/ml
crossHA-TA........ .....10 mg/ml
HA...................... ..5 mg/ml
NaCl................... ..8 g/l
KCl...................... ..0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O. .....2,85 g/l
KH2PO4............... .0,2 g/l
Príklad 8
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 20 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 14).
Tabuľka 14 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A Roztok B
HRP........................... .........12,8 mU/ml H2O2......................... ........0,6 mmol/l
HA-TA....................... ...........20 mg/ml HA-TA....................... .........20 mg/ml
NaCl.......................... .........8 g/l NaCl.......................... .........8 g/l
KCl............................ ........0,2 g/l KCl............................ .......0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O........ ...........2,85 g/l Na2HPO4.12H2O....... ...........2,85 g/l
KH2PO4...................... ........0,2 g/l KH2PO4..................... ........ 0,2 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 15).
Tabuľka 15 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
HRP...................... .....0,24 U/ml
crossHA-TA........... .......20 mg/ml
NaCl...................... .....8 g/l
KCl........................ ...0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O... ........2,85 g/l
KH2PO4................. .....0,2 g/l
2. Príprava roztoku hyaluronanu
Roztok HA s koncentráciou 40 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 vo fosfátovom pufri (PBS).
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku hyaluronanu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 16).
Tabuľka 16 Finálne zloženie hydrogélu, obsahujúce HA s koncentráciou 20 mg/ml
Finálne zloženie
HRP....................... .....0,12 U/ml
crossHA-TA............ ........10 mg/ml
HA......................... .....20 mg/ml
NaCl....................... .....8 g/l
KCl......................... ....0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O.... .......2,85 g/l
KH2PO4.................. .....0,2 g/l
Príklad 9
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 5 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú a chondroitín sulfát zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 17).
Tabuľka 17 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A Roztok B
HRP........................... ...........12,8 mU/ml H2O2........................ .........0,6 mmol/l
HA-TA....................... .............20 mg/ml HA-TA..................... .........20 mg/ml
NaCl.......................... ...........8 g/l NaCl........................ .........8 g/l
KCl............................ ........0,2 g/l KCl.......................... ......0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O........ .............2,85 g/l Na2HPO4.12H2O...... ............2,85 g/l
KH2PO4...................... ...........0,2 g/l KH2PO4.................... .......0,2 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 18).
Tabuľka 18 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
HRP........................... ...........0,24 U/ml
crossHA-TA................ ..............20 mg/ml
NaCl........................... ............8 g/l
KCl............................. ..........0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O........ ...............2,85 g/l
KH2PO4...................... ..........0,2 g/l
2. Príprava roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Roztok HA s koncentráciou 10 mg/ml a ChS s koncentráciou 10 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 a chondroitín sulfátu ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1 vo fosfátovom pufri (PBS).
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA a ChS v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 19).
Tabuľka 19 Finálne zloženie hydrogélu, HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 5 mg/ml
Finálne zloženie
HRP...................... .....0,12 U/ml
crossHA-TA........... .........10 mg/ml
HA........................ .....5 mg/ml
ChS....................... .......5 mg/ml
NaCl...................... ......8 g/l
KCl........................ ...0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O.... .........2,85 g/l
KH2PO4................. ......0,2 g/l
Príklad 10
Príprava hydrogélov, obsahujúcich HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Príprava hydrogélov, obsahujúcich nezosietenú kyselinu hyalurónovú a chondroitín sulfát zahŕňala 3 základné kroky:
1. Príprava hydrogélu obsahujúceho zosietený derivát crossHA-TA
Hydrogél obsahujúci zosietený derivát crossHA-TA bol pripravený zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, ktoré boli pripravené rozpustením jednotlivých zložiek vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 8,09 x 105 g.mol-1 a DS 1,1 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 20).
Tabuľka 20 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu zosieteného derivátu crossHA-TA
Roztok A HRP...................................12,8 mU/ml HA-TA...............................20 mg/ml NaCl..................................8 g/l KCl...................................0,2 g/l Na2HPO4.12H20....................2,85 g/l KH2PO4.............................0,2 g/l Roztok B H2O2.................................0,6 mmol/l HA-TA..............................20 mg/ml NaCl.................................8 g/l KCl..................................0,2 g/l Na2HPO4.12H20...................2,85 g/l KH2PO4............................0,2 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 bol pripravený hydrogél so zložením uvedenom v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 21).
Tabuľka 21 Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
Zloženie zosieteného derivátu crossHA-TA
HRP............................. ...........0,24 U/ml
crossHA-TA................. ..............20 mg/ml
NaCl............................ ............8 g/l
KCl............................... ..........0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O.......... ..............2,85 g/l
KH2PO4........................ ..........0,2 g/l
2. Príprava roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Roztok HA s koncentráciou 10 mg/ml a ChS s koncentráciou 20 mg/ml bol pripravený rozpustením natívneho hyaluronanu s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 a chondroitín sulfátu s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1 vo fosfátovom pufri (PBS).
3. Homogenizácia hydrogélu a roztoku s obsahom hyaluronanu a chondroitín sulfátu
Finálny hydrogél bol pripravený zmiešaním zosieteného derivátu crossHA-TA a roztoku HA a ChS v pomere 1 : 1 s následnou homogenizáciou zmesi. Finálne zloženie materiálu je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 22).
Tabuľka 22 Finálne zloženie hydrogélu, HA s koncentráciou 5 mg/ml a ChS s koncentráciou 10 mg/ml
Finálne zloženie
HRP............................ ...........0,12 U/ml
crossHA-TA................ ..............10 mg/ml
HA.............................. ............5 mg/ml
ChS............................. ..............10 mg/ml
NaCl........................... ...........8 g/l
KCl.............................. .........0,2 g/l
Na2HPO4.12H2O......... ............2,85 g/l
KH2PO4....................... ..........0,2 g/l
Príklad 11
Príprava hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 5 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov A a B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 1,5 x 106 g.mol-1 a DS 0,5 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 23).
Tabuľka 23 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 5 mg/ml
Roztok A Roztok B
HRP.............................0,12 U/ml HA-TA.........................5 mg/ml NaCl............................9 g/l H2O2.................................0,5 mmol/l HA-TA...............................5 mg/ml NaCl..................................9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 24), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 24 Finálne zloženie hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 5 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP............................... .....0,06 U/ml
crossHA-TA................... .....5 mg/ml
NaCl.............................. .....9 g/l
Príklad 12
Príprava hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 30 mg/ml
Hydrogély boli pripravené zmiešaním dvoch prekurzorových roztokov Aa B, na prípravu ktorých bol použitý vodný roztok NaCl (9 g/l). Na prípravu prekurzorových roztokov bol použitý hydroxyfenylový derivát HA-TA s Mw = 5 x 104 g.mol-1 a DS 10 %. Zloženie roztokov je uvedené v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 25).
Tabuľka 25 Zloženie prekurzorových roztokov na prípravu hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 30 mg/ml
Roztok A Roztok B
HRP..................... .............1,2 U/ml H2O2................... .............5 mmol/l
HA-TA.................. ..............30 mg/ml HA-TA................. .............30 mg/ml
NaCl.................... ...............9 g/l NaCl.................... ...............9 g/l
Zmiešaním roztoku A a roztoku B v pomere 1 : 1 boli pripravené hydrogély s finálnym zložením, uvedeným v nasledujúcej tabuľke (tabuľka 26), kde crossHA-TA je kovalentne zosieteným hydroxyfenylovým derivátom hyaluronanu.
Tabuľka 26 Finálne zloženie hydrogélov na báze hydroxyfenylového derivátu HA-TA s koncentráciou 30 mg/ml
Zloženie hydrogélov
HRP.............................. ....0,6 U/ml
crossHA-TA.................. ....30 mg/ml
NaCl............................. .....9 g/l
Príklad 13
Degradácia roztokov HA s prídavkom ChS pomocou ROS
Na porovnanie rýchlosti degradácie roztokov HA s ChS pôsobením ROS boli pripravené roztoky hyaluronanu vo fosfátovom pufri (PBS) s rôznou koncentráciou ChS. Na prípravu roztokov bola použitá kyselina hyalurónová s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 a ChS s Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol-1. Roztok A obsahoval 20 mg/ml HA, roztok B 20 mg/ml HA a 0,5 mg/ml ChS, roztok C 20 mg/ml HA a 1 mg/ml ChS, roztok D 20 mg/ml HA a 3 mg/ml ChS, roztok E 20 mg/ml HA a 5 mg/ml ChS, roztok F 20 mg/ml HA a 20 mg/ml ChS.
Uskutočnenie experimentu degradácie
Rýchlosť degradácie bola vyjadrená ako percentuálny pokles viskozity roztokov pri šmykovej rýchlosti 0,1 s-1 oproti počiatočnej hodnote. Meranie poklesu viskozity sa uskutočňovalo na reometri Kinexus Malvern v konfigurácii cone-plate. Bol použitý kužeľ s priemerom 40 mm s vrcholovým uhlom 1°. Degradácia materiálu prebiehala v 10 ml striekačkách, kde do 9 ml materiálu bolo pridaných 0,5 ml roztoku CuSO4 s koncentráciou 0,25 mmol/l a následne 0,5 ml roztoku H2O2 s koncentráciou 2,5 mmol/l. Počas prebiehajúcej degradácie hydrogélov boli vo vopred daných časových intervaloch odoberané vzorky materiálu, pri ktorých bola nameraná viskozita pri teplote 25 °C a šmykovej rýchlosti 0,1 s-1. Celkový čas degradácie bol 3 h.
Obr. 1 znázorňuje degradáciu reťazcov hyaluronanu, ktorá je vyjadrená percentuálnym poklesom viskozity roztokov v čase. Z obr. 1 je vidieť vplyv koncentrácie ChS na rýchlosť degradácie hyaluronanu. So zvyšujúcou sa koncentráciou ChS klesá rýchlosť degradácie HA pôsobením ROS. Viskozita roztoku A, ktorý neobsahoval ChS, po 3 hodinách poklesla o 97 % oproti počiatočnej hodnote pred degradáciou, roztoku B (s prídavkom 0,5 mg/ml ChS) už o 89 %, roztoku C, do ktorého bolo pridaných 1 mg/ml ChS o 84 %, roztoku D (20 mg/ml HA + 3 mg/ml ChS) o 46 %, roztoku E (20 mg/ml HA + 5 mg/ml ChS) o 25 % a roztoku F (20 mg/ml HA + 20 mg/ml ChS) len o 8 %.
Príklad 14
Degradácia hydrogélov na báze zosieteného derivátu crossHA-TA pôsobením ROS
Na porovnanie rýchlosti degradácie hydrogélov pôsobením ROS boli pripravené 3 typy materiálov. Materiál A je roztok HA s koncentráciou 20 mg/ml, ktorý bol pripravený rozpustením HA s Mw 1,91 x 106 g.mol-1 v PBS.
Materiál B je zmes zosieteného derivátu crossHA-TA a nezosietenej HA, ktorý bol pripravený podľa príkladu 7.
Materiály C a D sa skladali z nezosietenej HA, CHS a crossHA-TA a boli pripravené podľa príkladov 9 a 10.
Rýchlosť degradácie bola vyjadrená ako percentuálny pokles viskozity materiálov pri šmykovej rýchlosti 0,1 s-1 oproti počiatočnej hodnote. Meranie poklesu viskozity sa uskutočňovalo na reometri Kinexus Malvern v konfigurácii cone-plate. Bol použitý kužeľ s priemerom 40 mm s vrcholovým uhlom 1°. Degradácia materiálu prebiehala v 10 ml striekačkách, kde do 9 ml materiálu bolo pridaných 0,5 ml roztoku CuSO4 s koncentráciou 0,25 mmol/l a následne 0,5 ml roztoku H2O2 s koncentráciou 2,5 mmol/l. Po určitých časoch degradácie sa odoberali vzorky, pri ktorých bola nameraná viskozita pri teplote 25 °C a šmykovej rýchlosti 0,1 s-1. Celkový čas degradácie bol 3 h. Z obr. 2 je zrejmé, že prítomnosť ChS v pripravených hydrogéloch (C - 5 mg/ml ChS; D - 10 mg/ml ChS) zvyšuje ich odolnosť proti pôsobeniu ROS.
Príklad 15
Enzymatická degradácia hydrogélov na báze zosieteného derivátu crossHA-TA
Na zistenie vplyvu prítomnosti ChS na rýchlosť degradácie hydrogélov na báze crossHA-TA pôsobením bovinnej testikulárnej hyaluronidázy boli pripravené 3 typy hydrogélov:
A - hydrogély bez prídavku chondroitín sulfátu, ktoré boli pripravené podľa postupu v príklade 2,
B - hydrogély s prídavkom ChS s koncentráciou 3,3 mg/ml, ktoré boli pripravené podľa postupu v príklade 4,
C - hydrogély s prídavkom ChS s koncentráciou 10 mg/ml, ktoré boli pripravené podľa postupu v príklade 5.
Rýchlosť degradácie bola vyjadrená ako nárast koncentrácie produktov degradácie, spôsobenej BTH, vyjadrený v percentách.
Hydrogély boli ponorené do degradačného média (roztok hyaluronidázy BTH s aktivitou 30 U/mg v roztoku hovädzieho sérového albumínu (BSA) s koncentráciou 0,1 mg/ml v 0,01 mol/l octanovom pufri (OP) pH 5,3). Degradácia hydrogélov prebiehala v inkubátore pri 37 °C za súčasného miešania. Po určitých časových intervaloch sa odoberali vzorky degradačného média s produktmi degradácie hydrogélov. Koncentrácia disacharidických jednotiek HA v degradačnom médiu bola stanovená spektrofotometricky ako koncentrácia N -acetylglukozamínu. Obr. 3 znázorňuje nárast koncentrácie degradačných produktov hydrogélov v médiu v čase. Z obr. je zrejmé, že prítomnosť ChS v hydrogéloch na báze crossHA-TA vedie k zníženiu rýchlosti degradácie materiálov pôsobením hyaluronidázy.
Odkazy:
Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571
Akkara, J. A., K. J. Senecal a D. L. Kaplan (1991). Synthesis and characterization of polymers produced by horseradish peroxidase in dioxane. Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry 29(11): 1561-1574. Bali, J.-P., H. Cousse a E. Neuzil (2001). Biochemical basis of the pharmacologic action of chondroitín sulfates on the osteoarticular system. Seminars in Arthritis and Rheumatism 31(1): 58-68.
Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E. S., Nogovitsin E. A. 2009. Polymer 50: 1805
Buck Ii, D. W., M. Alam a J. Y. S. Kim (2009). Injectable fillers for facial rejuvenation: a review. Journal of Plastic, Reconstructive & Aesthetic Surgery 62(1): 11-18.
Burdick, J. A. a G. D. Prestwich (2011). Hyaluronic Acid Hydrogéls for Biomedical Applications. Advanced Materials 23(12): H41-H56.
Calabro, A., L. Akst, D. Alam, J. Chan, A. B. Darr, K. Fukamachi, R. A. Gross, D. Haynes, K. Kamohara, D. P. Knott, H. Lewis, A. Melamud, A. Miniaci a M. Strome (2008). Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof. United States, The Cleveland Clinic Foundation (Cleveland, OH, US).
Darr, A. a A. Calabro (2009). Synthesis and characterization of tyramine-based hyaluronan hydrogels. Journal of Materials Science: Materials in Medicíne 20(1): 33-44.
Ghan, R., T. Shutava, A. Patel, V. T. John a Y. Lvov (2004). Enzyme-Catalyzed Polymerization of Phenols within Polyelectrolyte Microcapsules. Macromolecules 37(12): 4519-4524.
Higashimura, H. a S. Kobayashi (2002). Oxidative Polymerization, John Wiley & Sons, Inc.
Kurisawa, M., F. Lee a J. E. Chung (2009). Formation of Hydrogél in the Presence of Peroxidase and Low Concentration of Hydrogen Peroxide
Kurisawa, M., F. Lee, L.-S. Wang a J. E. Chung (2010). Injectable enzymatically crosslinked hydrogél system with independent tuning of mechanical strength and gelation rate for drug delivery and tissue engineering. Journal of Materials Chemistry 20(26): 5371-5375.
Lee, F., J. E. Chung a M. Kurisawa (2008). An injectable enzymatically crosslinked hyaluronic acid-tyramine hydrogél system with independent tuning of mechanical strength and gelation rate. Soft Matter 4: 880-887. Li, P., D. Raitcheva, M. Hawes, N. Moran, X. Yu, F. Wang a G. L. Matthews (2012). Hylan G-F 20 maintains cartilage integrity and decreases osteophyte formation in osteoarthritis through both anabolic and anticatabolic mechanisms. Osteoarthritis and Cartilage 20(11): 1336-1346.
Prestwich, G. D. (2011). Hyaluronic acid-based clinical biomaterials derived for cell and molecule delivery in regenerative medicine. J Control Release 155(2): 193-199.
Salwowska, N. M., A. Bebenek, D. A. Žgdfo a D. L. Wcisfo-Dziadecka (2016). Physiochemical properties and application of hyaluronic acid: a systematic review. Journal of Cosmetic Dermatology 15(4): 520-526.
Shutava, T., Z. Zheng, V. John a Y. Lvov (2004). Microcapsule modification with peroxidase-catalyzed phenol polymerization. Biomacromolecules 5(3): 914-921.
Stern, R., G. Kogan, M. J. Jedrzejas a L. Šoltés (2007). The many ways to cleave hyaluronan. Biotechnology advances 25(6): 537-557.
Tognana, E., A. Borrione, C. De Luca a A. Pavesio (2007). Hyalograft C: hyaluronan-based scaffolds in tissueengineered cartilage. Cells Tissues Organs 186(2): 97-103.
Veitch, N. C. (2004). Horseradish peroxidase: a modern view of a classic enzyme. Phytochemistry 65(3): 249-259.
Volpi, N. (2019). Chondroitín Sulfate Safety and Quality. Molecules (Basel, Switzerland) 24(8): 1447.
Xiong, S.-L. a Z.-Y. Jin (2007). THE FREE RADICAL-SCAVENGING PROPERTY OF CHONDROITÍN SULFATE FROM PIG LARYNGEAL CARTILAGE IN VITRO. Journal of Food Biochemistry 31(1): 28-44.
Xu, X., A. K. Jha, D. A. Harrington, M. C. Farach-Carson a X. Jia (2012). Hyaluronic Acid-Based Hydrogéls: from a Natural Polysaccharide to Complex Networks. Soft matter 8(12): 3280-3294.

Claims (5)

  1. NÁROKY NA OCHRANU
    1. Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej, vyznačujúci sa tým, že obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny (HA-TA) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ podľa všeobecného vzorca (I)
    (I), kde n je v rozmedzí 2 až 7 500 a kde R1 je H+ alebo ión alkalickej soli alebo soli alkalických zemín a R2 je OH alebo tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II):
    pričom v rámci jednej molekuly hydroxyfenylového derivátu hyalurónovej kyseliny alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli podľa všeobecného vzorca (I) je aspoň jeden R2 tyramínový substituent podľa všeobecného vzorca (II) a pričom aspoň dva tyramínové substituenty podľa všeobecného vzorca (II) sú spojené prostredníctvom kovalentnej väzby v ktorejkoľvek ortopolohe fenylových skupín, a ďalej obsahuje chondroitín sulfát alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ vybranú zo skupiny obsahujúcej alkalické soli alebo soli alkalických zemín.
  2. 2. Hydrogél podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že alkalické soli alebo soli alkalických zemín sú vybrané zo skupiny obsahujúcej Na+, K+, Ca2+, Mg2+.
  3. 3. Hydrogél podľa nároku 1 alebo nároku 2, vyznačujúci sa tým, že koncentrácia chondroitín sulfátu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli je v rozsahu 0,5 až 50 mg/ml hydrogélu, výhodne v koncentrácii 1 až 20 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml.
  4. 4. Hydrogél podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že obsah zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu je v rozsahu 5 až 30 mg/ml, výhodne 10 mg/ml hydrogélu.
  5. 5. Hydrogél podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje kyselinu hyalurónovú alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v koncentrácii 1 až 20 mg/ml hydrogélu, výhodne 5 až 10 mg/ml, výhodnejšie 5 mg/ml hydrogélu.
SK50027-2022U 2019-09-06 2020-09-03 Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej SK9649Y1 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2019-36602U CZ33324U1 (cs) 2019-09-06 2019-09-06 Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové
CZPUV2019-36602 2019-09-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK500272022U1 SK500272022U1 (sk) 2022-07-27
SK9649Y1 true SK9649Y1 (sk) 2022-11-24

Family

ID=68384244

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK50027-2022U SK9649Y1 (sk) 2019-09-06 2020-09-03 Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej

Country Status (6)

Country Link
AT (1) AT18104U1 (sk)
CZ (1) CZ33324U1 (sk)
DE (1) DE212020000715U1 (sk)
FR (1) FR3104945B3 (sk)
SK (1) SK9649Y1 (sk)
WO (1) WO2021043349A1 (sk)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ308970B6 (cs) * 2020-05-12 2021-10-27 Contipro A.S. Sada gelotvorných roztoků určená pro přípravu hydrogelu na bázi kovalentně zesítěného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu k prevenci pooperačních komplikací souvisejících s vytvořením kolorektální anastomózy a její použití

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU555747B2 (en) 1983-08-09 1986-10-09 Cilco Inc. Chondroitin sulfate and sodium hyaluronate composition
US6051560A (en) 1986-06-26 2000-04-18 Nestle S.A. Chrondroitin sulfate/sodium hyaluronate composition
DE10156617A1 (de) 2001-11-17 2003-05-28 Biosphings Ag Herstellung reiner Stereoisomere von Tricyclo[5.2.1.0··2··.··6··]-dec-9-yl-xanthogenat und Arzneimittel daraus
ATE525076T1 (de) 2002-10-16 2011-10-15 Arthrodynamic Technologies Animal Health Division Inc Behandlung von traumatischer synovitis und geschädigtem gelenkknorpel
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7465766B2 (en) * 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
CN101052684B (zh) 2004-07-09 2014-02-12 克利夫兰临床基金会 羟基苯交联大分子网络及其应用
US8394782B2 (en) 2007-11-30 2013-03-12 Allergan, Inc. Polysaccharide gel formulation having increased longevity
KR101091028B1 (ko) * 2009-07-02 2011-12-09 아주대학교산학협력단 체내 주입형 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
KR101161640B1 (ko) * 2009-08-25 2012-07-02 서울과학기술대학교 산학협력단 리포산이 결합된 화합물과 이의 제조방법
EP3067069B1 (en) * 2009-11-11 2023-07-26 Hy2Care B.V. Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
CZ28434U1 (cs) * 2015-05-18 2015-07-07 Contipro Biotech S.R.O. Nanokompozit na bázi hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jejísoli obsahující nanočástice fosforečnanu vápenatého

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021043349A1 (en) 2021-03-11
CZ33324U1 (cs) 2019-10-25
SK500272022U1 (sk) 2022-07-27
FR3104945A3 (fr) 2021-06-25
FR3104945B3 (fr) 2021-12-10
DE212020000715U1 (de) 2022-04-21
AT18104U1 (de) 2024-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8481080B2 (en) Method of cross-linking hyaluronic acid with divinulsulfone
EP1753787B1 (en) Method of covalently linking hyaluronan and chitosan
JP5746617B2 (ja) キトサン混合物を形成する注入可能なヒドロゲル
CZ20011650A3 (cs) Zesítěné hyaluronové kyseliny
WO2008008857A2 (en) Thiolated macromolecules and methods of making and using thereof
RU2613887C2 (ru) Устойчивый к расщеплению сшитый низкомолекулярный гиалуронат
US8202986B2 (en) Branched hyaluronic acid and method of manufacture
EP4038105B1 (en) A hyperbranched polyglycerol polyglycidyl ether and its use as crosslinker for polysaccharides
SK9649Y1 (sk) Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej
Fakhari Biomedical application of hyaluronic acid nanoparticles
EP3980029B1 (en) Means for use in preparation of hydrogel based on hydroxyphenyl derivative of hyaluronan, method of hydrogel preparation and use thereof
CN106714856B (zh) 含有糖胺聚糖和蛋白质的组合物
CZ33901U1 (cs) Prostředek pro použití k přípravě hydrogelu na bázi hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu
RU2750000C1 (ru) Способ получения модифицированного гиалуронана и его применение в медицине, в том числе при эндопротезировании
CN113943382B (zh) 一种丙烯酸酯类修饰的透明质酸（钠）及其合成方法和应用
TWI728463B (zh) 基於硫酸化玻尿酸之水凝膠及含彼之藥學組成物
Guo et al. Heparosan crosslinked hydrogel for an injectable dermal filler: fabrication, physicochemical properties and biocompatibility
Trifan et al. STRATEGIES OF HYALURONAN CHEMICAL MODIFICATIONS FOR BIOMEDICAL APPLICATIONS
Kumar et al. Use of Polysaccharides: Novel Delivery System for Genetic Material
IT202100012737A1 (it) Miscele di polisaccaridi e poliamminosaccaridi con proprietà reologiche migliorate
WO2015174872A1 (en) Viscosupplement composition comprising ulvan for treating arthritis
JP2022550111A (ja) グルコン酸亜鉛およびヒアルロン酸エステルをベースとするヒドロゲル
Dhanasingh sP (EO-stat-PO)-glycosaminoglycans (GAGs) hybrid-hydrogels for medical applications
Stern Hyaluronic acid: a natural biopolymer with a broad range of biomedical and industrial applications. Biotechnol Lett
Noh HYALURONAN-BASED HYDROGEL SCAFFOLDS