SK7342002A3 - Process for recovering statin compounds from a fermentation broth - Google Patents

Process for recovering statin compounds from a fermentation broth Download PDF

Info

Publication number
SK7342002A3
SK7342002A3 SK734-2002A SK7342002A SK7342002A3 SK 7342002 A3 SK7342002 A3 SK 7342002A3 SK 7342002 A SK7342002 A SK 7342002A SK 7342002 A3 SK7342002 A3 SK 7342002A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
salt
compound
ammonium
organic
solution
Prior art date
Application number
SK734-2002A
Other languages
English (en)
Inventor
Vilmos Keri
Lajos Deak
Ilona Forgacs
Csaba Szabo
Edit Arvai Nagyne
Original Assignee
Biogal Gyogyszergyar
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22609918&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK7342002(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Biogal Gyogyszergyar filed Critical Biogal Gyogyszergyar
Publication of SK7342002A3 publication Critical patent/SK7342002A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
    • B82B3/00—Manufacture or treatment of nanostructures by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/52—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change in the physical state, e.g. crystallisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/013—Esters of alcohols having the esterified hydroxy group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/02—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
    • C07C69/22—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen having three or more carbon atoms in the acid moiety
    • C07C69/33—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen having three or more carbon atoms in the acid moiety esterified with hydroxy compounds having more than three hydroxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/26—All rings being cycloaliphatic the ring system containing ten carbon atoms
    • C07C2602/28—Hydrogenated naphthalenes

Description

Spôsob izolácie statinových zlúčenín z fermentačnej pôdy
Oblasť techniky
Vynález sa týka spôsobov izolácie požadovaných chemických produktov reakcií vykonávaných vo vodnej fermentačnej pôde. Vynález sa ďalej týka izolácie pravastatinu, kompaktinu a lovastatinu z fermentačnej pôdy, a najmä izolácie pravastatinu pripraveného fermentáciou kompaktinu.
Doterajší stav techniky
Komplikáciám kardiovaskulárnych chorôb, ako infarktu myokardu, mŕtvici a periférnej vaskulárnej chorobe, sa pričíta polovina úmrtí v USA. Vysoká hladina nízkohustotného lipoproteínu (LDL) v krvnom obehu je dávaná do súvislosti s koronárnymi léziami, ktoré bránia prietoku krvi a môžu prasknúť a spôsobiť trombózu. Goodman a Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics 879 (9. vydanie, 1996). Ukázalo sa, že zníženie LDL hladiny v plazme pri pacientoch s kardiovaskulárnou chorobou a pacientov, ktorí síce kardiovaskulárnou chorobou netrpia, ale sú postihnutí hypercholesterolémiou, znižuje riziko klinické príhody. Scandinavian Simvastatin Survival Study Group, 1994; Lipid Research Clinics Program, 1984a, 1984b.
Statinové liečivá sú v súčasnosti terapeuticky najúčinnejšie liečivá, ktoré sú dostupné na znižovanie hladiny LDL v krvnom obehu pacienta ohrozeného kardiovaskulárnou chorobou. Do tejto triedy liečiv okrem iných patrí kompaktin, lovastatin, simvastatin, pravastatin a fluvastatin. Mechanizmus pôsobenia statinových liečiv bol do určitej miery objasnený. Statiny narušujú syntézu cholesterolu $ iných sterolov v pečeni tým, že kompetitívne inhibujú 3-hydroxy-3-metylglutarylkoenzým A reduktázu (HMG-CoA reduktázu). HMG-CoA reduktáza katalyzuje konverziu HMG-CoA na mevalonát, čo je stupeň, ktorý určuje rýchlosť pri biosyntéze cholesterolu. Jeho inhibicia preto vedie k zníženiu rýchlosti tvorby cholesterolu v pečeni.
Pravastatin je generický názov chemickej zlúčeniny [1S-[Ια(β*,δ*)2α,βα,8β(R*) , 8aa] ]-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-p, δ, 6-trihydroxy-2-metyl-8-(2-metyl-l-oxobutoxy)-1-naftalénheptánovej kyseliny (registračné číslo CAS 81093-370). Molekulárna štruktúra pravastatinu vo forme voľnej kyseliny zodpovedá vševšeobecnému vzorcu la, kde R predstavuje hydroxyskupinu. Laktónová forma je znázornená všeobecným vzorcom Ib, v ktorom je vyznačené číslovanie atómov.
(Ib)
Pravastatin, kompaktin (zlúčenina všeobecného vzorca Ib, kde R predstavuje vodík), lovastatin (zlúčenina všeobecného vzorca Ib, kde R predstavuje skupinu CH3), simvastatin a fluvastatin vždy obsahujú alkylový reťazec, ktorý je zakončený skupinou karboxylovej kyseliny uzatvorenú v laktóne a ktorý nesie dve hydroxyskupiny v polohách β a a vzhľadom na skupinu karboxylovej kyseliny. Tento alkylový reťazec je tou časťou molekuly, ktorá sa viaže k HMG-CoA reduktáze. Skupina karboxylovej kyseliny a hydroxyskupina v polohe b majú sklon k laktonizácii (pozri všeobecný vzorec Ib). Laktonizovatelné zlúčeniny, ako statiny, sa môžu vyskytovať vo forme voľnej kyseliny alebo vo forme laktónu alebo ako rovnovážna zmes obidvoch týchto foriem. Laktonizácia je pri výrobe statinových liečiv zdrojom spracovateľských ťažkosti, pretože forma voľnej kyseliny a forma laktónu majú rozdielnu polaritu. Pri čistení jednej formy dôjde pravdepodobne k odstráneniu druhej formy spolu s nečistotami, čo povedie k nižšiemu výťažku. Pri spracovaní laktonizovateľných zlúčenín za účelom ich izolácie vo vysokom výťažku je preto zvyčajne nutné postupovať veľmi opatrne.
Pravastatin oproti iným statinom vykazuje dôležitú terapeutickú výhodu. Pravastatin selektívne inhibuje syntézu cholesterolu v pečeni a tenkom čreve, ale syntézu cholesterolu v periférnych bunkách v podstate neovplyvňuje. Koga, T. et al., Biochim. Biophys. Acta, 1990, 1045, 115 až 120. Táto selektivita je pravdepodobne sčasti spôsobená prítomnosťou hydroxyskupiny v polohe 6 hexahydronaftalénového jadra. Poloha C-6 je v kompaktine obsadená atómom vodíka a v lovastatine metylskupinou. Pravastatin má nižšiu schopnosť prenikať lipofilnými membránami periférnych buniek ako iné lipofilnejšie kongenery, Serajuddin et al., J. Pharm. Sci., 1991, 80, 830 až 834, a lokalizovanejšie pôsobenie v pečeni a čreve sa pripisuje obmedzenej mobilite pravastatinu.
Podľa US patentu č. 4 346 227, ktorý je citovaný náhradou za prenesenie jeho obsahu do tohto textu, bol pravastatin po prvý raz izolovaný ako metabolit kompaktinu M. Tanakou et al. počas štúdie metabolizmu kompaktinu. Podľa tohto patentu je pravastatin možné získať fermentáciou kompaktinu pri použití rôznych mikroorganizmov: Absidia coerulea IFO 4423 spóry, Cunninghamella echinulata IFO 4445, Streptomyces rosochromogenus NRRL 1233, Syncephalas trum racemosum IFO 4814 a Syncephalastrum racemosum IFO 4828. Pravastatin sa po fermentácii z fermentačnej pôdy izoluje tak, že sa pôda okyslí na pH 3, pravastatin a iné nehydrofilné organické látky sa extrahujú etylacetátom a extrakt sa premyje vodným roztokom chloridu sodného. Pravastatin vo forme voľnej kyseliny sa laktonizuje tak, že sa k nemu pridá katalytické množstvo trifluóroctovej kyseliny, vzniknutá zmes sa zneutralizuje zriedeným hydrogenuhličitanom sodným, vysuší síranom sodným a odparí do sucha. Zvyšok sa prečistí preparatívnou vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) s obrátenými fázami. Odborníkovi v tomto odbore bude zrejmé, že HPLC s obrátenými fázami pri výrobe chemických zlúčenín vo veľkom meradle nepredstavuje hospodárny spôsob čistenia.
US patent č. 5 942 423 sa týka mikrobiálnej hydroxylácie kompaktinu na pravastatin pri použití kmeňa Äctinomadura. Jediným spôsobom izolácie uvedeným v príkladoch uskutočnenia je izolácia nepatrných množstiev vyplývajúcich z analytického meradla, v ktorom sa uskutočňuje HPLC analýza fermentačnej pôdy. Ako vyplýva z všeobecnejšej diskusie o izolácii pravastatinu z fermentačnej pôdy, prednostným spôsobom jeho izolácie je HPLC.
Ešte nevybavená PCT prihláška rovnakého prihlasovateľa č. PCT/U500/19384 sa týka mikrobiálnej hydroxylácie kompaktinu na pravastatin pri použití kmeňa Micromonospora maculata, ktorý je nezvyčajne rezistentný voči antifungálnym účinkom kompaktinu.
US patent č. 5 202 029 sa týka spôsobu čistenia inhibitorov HMG-CoA reduktázy pri použití HPLC. Po oddelení nečistôt na HPLC stĺpci je inhibítor HMC-CoA reduktázy z HPLC stĺpca eluovaný ako látka rozpustená v elučnom činidle. Elučné činidlo sa sčasti odparí a prídavkom vody sa indukuje kryštalizácia inhibítoru HMC-CoA reduktázy.
US patent č. 5 616 595 sa týka kontinuálneho spôsobu izolácie zlúčenín nerozpustných vo vode z fermentačnej pôdy tangenciálnou filtráciou. Fermentačná pôda sa cirkuluje cez filter. S každým cyklom sa koncentrácia fermentačnej pôdy zvyšuje, pretože pri filtrácii dochádza k úbytku vody. Po dosiahnutí požadovanej koncentrácie sa skoncentrovaná fermentačná pôda suspenduje pri použití rozpúšťadla, v ktorom je požadovaná zlúčenina rozpustná. Vzniknutá suspenzia sa nechá cirkulovať cez filter. Ako filtrát sa zhromaždí roztok požadovanej zlúčeniny, ktorá sa z filtrátu izoluje a pripadne podrobí ďalšiemu prečisteniu. 0 tomto spôsobe sa uvádza, že je použitelný pri rade rôznych zlúčenín, vrátane lovastatinu, pravastatinu a simvastatinu.
Spôsob izolácie lovastatinu vo forme laktónu je opísaný v US patente č. 5 712 130. Pri tomto spôsobe sa lovastatin z fermentačnej pôdy extrahuje butylacetátom. Výsledný roztok sa potom centrifuguje a oddelená vodná fáza sa odloží. Organická fáza sa podrobí vákuovej destilácii pri teplote nad 40° C, čo (okrem skoncentrovania roztoku) podporuje laktonizáciu odstraňovaním vody. Po ochlazdení vykryštaluje lovastatinlaktón, ktorý po prekryštalizovaní vykazuje čistotu 90 % alebo vyššiu. Odborníkovi v tomto odbore je zrejmé, že tento spôsob nie je vhodný na izoláciu statinu vo forme volnej karboxylovej kyseliny alebo vo forme karboxylátovej soli.
V súčasnosti je z ekonomického hľadiska najvýhodnejšie pripravovať pravastatin enzymatickou hydroxyláciou kompaktinu v polohe C-6. Známe spôsoby izolácie statinu z fermentačnej pôdy však nie sú vhodné na izoláciu pravastatinu vo forme sodnej soli, nedosahujú farmaceutický vhodné úrovne čistoty alebo je za účelom dosiahnutia vysokej čistoty nutné vykonať chromatografickú separáciu.
Riešenie podľa vynálezu splňuje dopyt v tomto odbore po účinnom spôsobe izolácie pravastatinu z fermentačnej pôdy v preparatívnom meradle, pri ktorom sa získa produkt vo vysokom výťažku a s vysokou čistotou, bez toho aby bolo nutné aplikovať chromatografické čistenie.
Podstata vynálezu
Úlohou vynálezu je vyvinúť efektívny spôsob izolácie statinovej zlúčeniny z vodnej fermentačnej pôdy, predovšetkým spôsob čistenia pravastatinu, kompaktinu a lovastatinu v priemyselnom meradle bez potreby chromatografickej separácie.
Ďalšou úlohou vynálezu je získať pravastatin vo vysoko čistej forme a vo vysokom výťažku tak, aby bolo možné dosiahnuť významnú stereoselektivitu a regioselektivitu mikrobiálnych transformácií, ako tiež vyššie výťažky a väčšiu hospodárnosť. Pravastatin sa z pôdy izoluje s minimálnou spotrebou rozpúšťadla, je čistený s vysokým výťažkom a mení sa na svoju farmaceutický vhodnú sodnú sol.
Pri tomto spôsobe sa pravastatin extrahuje z vodnej fermentačnej pôdy do organického rozpúšťadla, potom spätne extrahuje do bázického vodného roztoku a prípadne následne reextrahuje do organického rozpúšťadla alebo sa vodný roztok skoncentruje, čím sa získa vodný alebo organický roztok, ktorý je vzhľadom na počiatočnú koncentráciu pravastatinu vo fermentačnej pôde obohatený pravastatinom. Pravastatin sa získa z obohateného roztoku vyzrážaním vo forme soli s kovom alebo amónnej soli a táto sol sa potom prečistí prekryštalizovaním. Prekryštalizovaná sol sa transsalifikuje za vzniku sodnej soli pravastatinu a všetok nadbytok sodných iónov sa zachytí ionexovou živicou. Sodnú sol pravastatinu je potom možné z roztoku izolovať prekryštalizovaním, lyofilizáciou alebo iným spôsobom.
Nasleduje podrobnejší opis vynálezu.
Predmetom vynálezu je spôsob izolácie pravastatinu, kompaktinu a lovastatinu z vodnej fermentačnej pôdy. Vynález je ilustrovaný na izolácii sodnej soli pravastatinu z fermentačnej pôdy. Tento spôsob je však možné použiť aj na čistenie iných zlúčenín pripravených mikrobiálnym alebo enzymatickým spôsobom.
Enzymatická hydroxylácia kompaktinu
Sodná sol pravastatinu sa syntetizuje enzymatickou hydroxyláciou kompaktinu, ako spôsobom opísaným v US patente č. 5 942 423 alebo 4 346 227. Hydroxylačnou pôdou, z ktorej má byť pravastatin izolovaný, môže byť akákoľvek vodná pôda, ktorá je známa na fermentáciu kompaktinu v priemyselnom meradle. Pokiaľ je pôda po dokončení fermentácie neutrálna alebo bázická, pridáva sa k nej kyselina, aby sa pH pôdy upravilo na asi 1 až asi 6, prednostne na asi 1 až asi 5,5, a výhodnejšie na 2 až 4. Ako kyseliny, ktoré je možné je možné použiť, je možné uviesť kyselinu chlorovodíkovú, kyselinu sírovú, kyselinu trifluóroctovú alebo akúkoľvek inú protickú kyselinu, prednostne kyselinu, ktorej IM roztok vo vode má pH nižšie ako 1. Okyslením fermentačnej pôdy sa všetky pravastatin karboxylátové soli premenia na voľnú kyselinu a/alebo laktón.
Izolácia sodnej soli pravastatinu
Spôsob podľa vynálezu zahŕňa stupeň vytvorenia obohateného roztoku pravastatinu, stupeň získania soli pravastatinu z obohateného roztoku, stupeň prečistenia soli pravastatinu, stupeň transsalifikácie soli pravastatinu na sodnú soľ pravastatinu a stupeň izolácie sodnej soli pravastatinu.
V prvom stupni sa pravastatin získa z vodnej fermentačnej pôdy v relatívne vysoko koncentrovanom roztoku sekvenciou operácií extrakcie a spätnej extrakcie. Fermentácia sa typicky uskutočňuje pri veľmi vysokom zriedení. Zriedením pôda dosahuje vyšší maximálny enzymatický potenciál. Nevýhodou vysokého zriedenia je, že kým sa nezíska požadovaný produkt v obohatenejšej forme, musí sa manipulovať s veľkým objemom fermentačného média. Veľký objem tiež kladie striktné požiadavky na spôsob izolácie. Na separáciu tak veľkých objemov sú chromatografické postupy zvyčajne nepraktické, predovšetkým keď je rozpúšťadlom voda. Pokiaľ sa izolácia vykonáva extrakciou, potom organické rozpúšťadlo musí mať dostatočnú polaritu, aby mohlo súperiť s vodou o priaznivé rozdelenie produktu, ale nesmie byť natoľko polárne, aby bolo v podstate rozpustné vo vode. Pokiaľ je extrakcia neefektívna, izolácia požadovaného produktu vo vysokom výťažku vyžaduje použitie veľkých objemov organického rozpúšťadla, s čím sú spojené zdravotní a bezpečnostné rizika pre personál pracujúci s fermentačným zariadením alebo v jeho blízkosti.
Zistili sme, že alkylformiáty s 2 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti a alkylestery s 1 až 4 atómami uhlíka karboxylových kyselín s 2 až 4 atómami uhlíka sú schopné vysoko účinne extrahovať pravastatin z vodnej fermentačnej pôdy. Rozdeľovači koeficient pravastatin laktónu je typicky 1000 : 1 alebo vyšší a rozdeľovači koeficient voľnej kyseliny je 10 : 1 alebo vyšší. Alkylskupiny môžu mať reťazec lineárny, rozvetvený alebo cyklický. Ako prednostné estery je možné uviesť etylformiát, n-propylformiát, i-propylformiát, n-butylformiát, s-butylformiát, i-butylformiát, t-butylformiát, metylacetát, etylacetát, n-propylacetát, izopropylacetát, n-butylacetát, s-butylacetát, izobutylacetát, terc-butylacetát, metylpropionát, etylpropionát, n-propylpropionát, i-propylpropionát, butylpropionát, metylbutyrát, etylbutyrát, n-propylbutyrát, i-propylbutyrát, butylbutyráty, metylizobutyrát, etylizo butyrát, propylizobutyráty a butylizobutyráty. Zistili sme, že z týchto prednostných organických rozpúšťadiel sú osobitne vhodné etylacetát, i-butylacetát, propylacetát a etylformiát. Najvýhodnejším extrakčným rozpúšťadlom je i-butylacetát. Namiesto esterov je možné použiť iné organické rozpúšťadlá, ako halogénované uhľovodíky, aromatické zlúčeniny, ketóny a étery. Ako ich príklady je možné uviesť dichlórmetán, chloroform, tetrachlórmetán, 1,2-dichlóretán, benzén, butylmetylketón, dietyléter a metylterc-butyléter.
V obohacovacom stupni spôsobu podľa nášho vynálezu sa vytvorí organický extrakt tak, že sa organické extrakčné rozpúšťadlo, prednostne zvolené z hore uvedeného zoznamu, uvedie do styku s fermentačnou pôdou. Hodnota pH fermentačnej pôdy je od asi 1 do asi 6, prednostne od asi 2 do asi 4.
Je možné použiť akékoľvek zariadenie prispôsobené na miešanie veľkých objemov kvapalín pri vsádzkovom alebo kontinuálnom spôsobe. Pretože sa fermentácia typicky vykonáva ako vsádzková, je prirodzenou voľbou vsádzkový spôsob izolácie. Je teda možné použiť obvyklé veľkoobjemové miešače a usadzovacie nádrže alebo zariadenie prispôsobené ako na miešanie, tak aj na separáciu fáz. V prednostnom rozpracovaní tohto aspektu vynálezu sa menšia časť, prednostne menej ako 50 % objemových, extrakčného rozpúšťadla uvedie do styku s fermentačnou pôdou, prednostne pri miernom mechanickom miešaní. Po uvedení do styku a oddelení fáz sa extrakčné rozpúšťadlo obsahujúce pravastatin oddelí od fermentačnej pôdy ochudobnenej o pravastatin. Pôdu je možné uviesť do styku s organickým extrakčným rozpúšťadlom raz alebo viackrát, a všetky výsledné organické extrakty je možné spojiť. Objem výsledného organického extraktu obsahujúceho pravastatin môže byť väčší alebo menší ako objem fermentačnej pôdy.
Druhou operáciou vedúcou k vzniku obohateného roztoku pravastatinu je spätná extrakcia pravastatinu do bázického vodného roztoku. Spätnou extrakciou sa odstraňujú niektoré alebo všetky nepoláme organické nečistoty a pokiaľ je prítomný pravastatin-laktón, spätná extrakcia podporuje opätovné otvorenie jeho laktónového kruhu. Bezo toho aby sme sa akokoľvek chceli obmedzovať konkrétnou chemickou teóriou alebo mechanizmom, podľa zavedenej chemickej teórie je pravastatin v bázickom vodnom extrakte vo forme karboxylátového aniónu. Spätnú extrakciu je možné použiť za účelom skoncentrovania pravastatinu tak, že sa použije vodná báza v objeme, ktorý je menší ako objem organického extraktu. Bázou je prednostne hydroxid sodný, hydroxid amónny alebo hydroxid draselný, prednostne hydroxid amónny alebo hydroxid sodný, a bázický vodný roztok má hodnotu pH prednostne v rozmedzí od asi 7,0 do asi 13,7, výhodnejšie od asi 7 do asi 13 a najvýhodnejšie od asi 7,5 do asi 11. Extrakčné rozpúšťadlo sa s bázickým vodným roztokom uvádza do styku, kým množstvo pravastatinu v organickej fáze nie je v podstate vyčerpané, čo sa stanoví chromatografiou na tenkej vrstve alebo akýmkoľvek iným postupom, vrátane subjektívneho posúdenia, že došlo ku kontaktu, ktorý je dostatočný na úplnú extrakciu. Za účelom optimálnej izolácie je možné uskutočniť viacnásobnú spätnú extrakciu. Keď je však organickou fázou butylacetát, je jediná spätná extrakcia vysoko efektívna. Prednostne sa spätná extrakcia vykonáva pri použití bázického vodného roztoku v objeme, ktorý je menší ako jedna tretina objemu organického extraktu, prednostne menej ako jedna štvrtina, a najvýhodnejšie predstavuje asi jednu pätinu objemu organického extraktu. Koncentrácia obohateného vodného roztoku, z ktorého sa neskoršie získa pravastatin, .prednostne leží v rozmedzí od asi 2 do asi 50 g/liter, výhodnejšie od asi 5 do asi 15 g/liter.
Vodný extrakt je ďalej možné skoncentrovať destiláciou, prednostne vákuovou destiláciou, aby sa zvýšila koncentrácia roztoku. Pred ďalším skoncentrovaním vodného extraktu destiláciou by sa hodnota pH mala upraviť na asi 7 až asi 13,7, prednostne na asi 7, 5 až asi 11 a výhodnejšie na asi 8 až asi 10. Vákuovú destiláciu je možné vykonávať tak, že sa vodný extrakt zahrieva na teplotu od asi 30 do asi 80 “C za absolútneho tlaku 667 Pa až 16 kPa. Voľba iných podmienok vákuovej destilácie leží v rozsahu schopnosti odborníkov v odbore, ktorého sa tento spôsob týka.
Alternatívu na získanie pravastatinu z obohateného vodného roztoku neskoršie pri spôsobe podľa vynálezu predstavuje možnosť získať pravastatin z obohateného organického roztoku. Obohatený organický roztok pravastatinu sa získa reextrakciou pravastatinu do organického rozpúšťadla potom, čo bol vodný extrakt opäť okyslený kyselinou, prednostne kyselinou trifluóroctovou, kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou octovou alebo kyselinou fosforečnou, prednostne kyselinou sírovou alebo fosforečnou, na pH od asi 1,0 do asi 6,5, výhodnejšie od asi 2,0 do asi 4,0. V závislosti od podmienok môže byť karboxylátový anión pravastatinu protónovaný na pravastatin - voľnú kyselinu, ktorá je menej polárna ako karboxylát, alebo laktonizovaný na ešte menej polárnu formu.
Pravastatin sa reextrahuje do reextrakčného rozpúšťadla zvoleného z organických rozpúšťadiel uvedených hore ako rozpúšťadlá vhodné na extrakciu pravastatinu z fermentačnej pôdy. Organické rozpúšťadlo môže, ale nemusí, byť rovnaké ako rozpúšťadlo použité na extrakciu pravastatinu z fermentačnej pôdy. Pri tejto reextrakcii sa dosiahne ďalšie obohatenie pravastatinu reextrakciou do množstva organického rozpúšťadla, ktoré predstavuje prednostne menej ako asi 50 % objemových vodného extraktu, výhodnejšie asi 33 % objemových až asi 20 % objemových, a ešte výhodnejšie asi 25 % objemových objemu vodného extraktu. Ako je ďalej ilustrované v príklade 1, je teda pravastatin možné skoncentrovať zo 100 litrov fermentačnej pôdy na 8 litrov obohateného organického roztoku s 89% výťažkom, vztiahnuté na počiatočný organický extrakt. Odborník v tomto odbore však bude schopný pomocou viacnásobnej extrakcie dosiahnuť vyšší výťažok prečisteného pravastatinu. Hore však bolo opísané iba prednostné uskutočnenie jednonásobnej extrakcie. Pri tomto prednostnom uskutočnení sa dosahuje rovnováha medzi nákladmi na rozpúšťadlá a vysokým výťažkom produktu. Odchýlky od tohto prednostného spôsobu, ktorými sa dosiahne ďalšie zlepšenie výťažku opakovanými extrakciami a z ktorých je hore opísané len jedno uskutočnenie, nezbytne nemusia predstavovať odklon od ducha vynálezu. Pred spracovaním za účelom získania pravastatinu z obohateného organického roztoku vysolovaním sa obohatený organický roztok prednostne vysuší, čo je možné realizovať pri použití obvyklých sušiacich činidiel, ako síranu horečnatého, síranu sodného, síranu vápenatého, siliky, perlitu apod., a pripadne odfarbi aktívnym uhlím. Vysušený a/alebo odfarbený obohatený organický roztok sa potom oddelí pri použití obvyklých spôsobov, napríklad filtráciou alebo dekantáciou.
V nasledujúcom stupni spôsobu podía vynálezu sa z obohateného vodného alebo organického roztoku získa sol pravastatinu.
Sol sa získa vyzrážaním z obohateného roztoku.
Zrážanie sa vyvolá tak, že sa k obohatenému roztoku pridá sol kovu, amoniak, amín, amónna sol alebo sol aminu.
Ako soli kovov, ktoré je možné použiť, je možné menovať hydroxidy, alkoxidy, halogenidy, uhličitany, boritany, fosforečnany, tiokyanatany, octany, dusičnany, sírany, tiosírany a akékoľvek ďalšie soli, ktoré sú vysoko rozpustné vo vode. Ako kovy je možné uviesť lítium, sodík, draslík, vápnik, horčík, meď, železo, nikel, mangán, cín, zinok a hliník. Prednosť majú soli obsahujúce nasledujúce katióny kovov: Li+,
Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Cu2+, Fe2+, Fe3+, Ni2+, Mn2+, Sn2+, Zn2+ a Al3+.
V soliach, ktorými sa indukuje zrážanie soli pravastatinu s kovom, sa ako katiónom kovov najväčšia prednosť venuje katiónom sodným a draselným.
Pravastatin je tiež možné vyzrážať vo forme amónnej alebo aminovej soli prídavkom amoniaku alebo amínu. Amínom iŕiôže byť primárny, sekundárny alebo terciárny amín. Je možné použiť akýkoľvek alkyl- alebo arylamín, ktorý nie je bránený takým spôsobom, aby to znemožnilo iónové interakcie medzi amínovým dusíkom a karboxyskupinou pravastatinu. Ako neobmedzujúce príklady amínov je možné uviesť metyl-, dimetyl-, trimetyl-, etyl-, dietyl-, trietylamín a iné primárne, sekundárne a terciárne amíny s 1 až 6 atómami uhlíka v každom z uhľovodíkových zvyškov, a ďalej morfolín, N-metylmorfolín, izopropylcyklohexylamín, piperidín apod. Bez ohľadu na absenciu, prítomnosť alebo viacnásobnosť substitúcie na dusíku sa soli vznikajúce reakciou s amoniakom alebo aminom ďalej označujú ako amóniové soli. Pod týmto termínom sa teda rozumejú ako soli s amínmi, tak soli s amoniakom.
Zrážanie amóniovéj soli parvastatinu je tiež možné vyvolať prídavkom amónnej soli, a to buď samotnej alebo v kombinácii s amoniakom, amínu alebo soli kovu. Prednosť sa venuje nasledujúcim amónnym solím: chloridu amónnemu, NH4C1; bromidu amónnemu,
NH4Br; jodidu amónnemu, NH4I;
síranu amónnemu, (NH4)2SO4; dusičnanu amónnemu, NH4NO3; fosforečnanu amónnemu, (NH4)3PO4; siričitanu amónnemu, (NH4)2S2O4;
octanu amónnemu,
NH4OAc a tiokyanatanu amónnemu, NH4SCN. Najväčšiu prednosť má chlorid amónny.
Soli kovov, amóniové soli a vysokovriace kvapalné a pevné aminy je možno pridávať obvyklými spôsobmi, prednostne v priestoroch s dobrým vetraním, buď ako pevné látky, kvapaliny in substancia alebo roztoky vo vodných alebo organických rozpúšťadlách. Pridávanie plynného amoniaku vyžaduje špeciálne zariadenie na zachádzanie s leptavými plynmi. Také zariadenia, ako tlakové nádoby, regulátory, ventily a potrubia sú dobre dostupné. Amoniak je možno zavádzať do horného priestoru nad obohateným roztokom za tlaku okolia alebo, pokial sa používajú tlakové nádoby, za zvýšeného tlaku. Alternatívne je amoniak možné nechať prebublávať roztokom, ktorý sa prednostne mieša, aby sa znížilo zanášanie prívodnej trubky vyzrážanou amónnou solou pravastatinu.
V prednostnom rozpracovaní spôsobu podía vynálezu sa pravastatin z obohateného roztoku získa ako amóniová sol prídavkom amoniaku alebo amínu. Vo výhodnejšom rozpracovaní sa pravastatin z obohateného roztoku získa vo forme amóniovej soli tak, že sa k obohatenému roztoku pridá plynný amoniak. Pri použití amoniaku sa získa vysoko polárna amónna sol pravastatinu, ktorá sa ľahko a vo vysokom výťažku vyzráža z antirozpúšťadla. V najvýhodnejšom rozpracovaní sa pravastatin získa ako amóniová sol pravastatinu prídavkom plynného amoniaku a amóniovej soli. Ako amóniovej soli sa najväčšia prednosť venuje chloridu amónnemu, ktorého výhodou je, že sa v prípade neúplného vysušenia obohateného organického roztoku vytvorí koncentrovaný vodný roztok chloridu amónneho.
Teplotu, pri ktorej by sa mali pridávať kovová sol, amoniak, amín a/alebo amóniová soľ, je možné stanoviť rutinnými skúškami uskutočnenými ako reakcie v malom meradle s monitorovaním jej exotermickosti. V prednostnom rozpracovaní sa neumožní zvýšenie teploty roztoku nad 40’C. Hoci je možné použiť i tak vysoké teploty, ako je 80’C, bez toho, aby došlo k významnému rozkladu pravastatinu, rad rozpúšťadiel použitých na účely tohto vynálezu bude vrieť pri teplotách nižších. Pokial sa používa amoniak, teplota prednostne leží v rozmedzí od asi -10 do asi 40’C.
Ako náhle sa zrážanie zastaví alebo sa inými prostriedkami určí, že pravastatin bol v podstate spotrebovaný, malo by sa pridávanie ukončiť. Keď sa použije amoniak alebo prchavý amín, nádoba by mala byť vetraná, aby došlo k rozptýleniu nadmerných výparov. Kryštály sa potom izolujú filtráciou, dekantáciou rozpúšťadla, odparením rozpúšťadla alebo iným takým spôsobom, prednostne filtráciou.
Po prípadnom premytí vyzrážaných kryštálov sa soi pravastatinu prečistí jednonásobným alebo viacnásobným prekryštalizovaním. Za účelom prečistenia sa soi pravastatinu najskôr rozpustí vo vode. Prednostne sa používa minimálne množstvo vody. Pokial bola získaná amínová soi namiesto soli s kovom alebo amoniakom, bude potrebné použiť väčšie množstvo vody. Po úplnom rozpustení soli pravastatinu sa polarita roztoku zníži prídavkom antirozpúšťadla. Antirozpúšťadlom je vodorozpustné organické rozpúšťadlo alebo rozpúšťadlová zmes, v ktorých je pravastatin špatné rozpustný. Ako vhodné vodorozpustné organické rozpúšťadlá je možné uviesť acetón, acetonitril, alkylacetáty, izobutanol a etanol.
Soi pravastatinu je možné nechať prekryštalizovať spontánne alebo je možné jej prekryštalizovanie indukovať tak, že sa vykonajú ďalšie stupne, ako je pridanie spoločného iónu, ochladenie alebo pridanie očkovacích kryštálov. Indukované prekryštalizovanie prídavkom spoločného iónu sa uskutočňuje tak, že sa k zmesi pridá soi obsahujúca rovnaký ión kovu alebo amóniový ión, aký je obsiahnutý v soli pravastatinu. Ako soli na indukciu prekryštalizovania solí pravastatinu sú vhodné soli kovov a amóniové soli, ktoré je možné použiť na vyzrážanie soli pravastatinu z obohateného roztoku. Pri prednostnom spôsobe, kde sa pravastatin získa ako amóniová sol, sa za účelom indukcie prekryštalizovania soli pravastatinu pridáva prv použitá chloridová sol s amoniakom alebo amínom. V najvýhodnejšom rozpracovaní, pri ktorom sa získa amóniová sol pravastatinu je pridávanou solou najvýhodnejšie chlorid amónny.
Prekryštalizovanie je možné vykonávať pri asi -10°C až asi 60’C, prednostne pri asi 0 až asi 50’C a najvýhodnejšie pri asi 0 až asi 40’C. Potom, čo je sol pravastatinu z roztoku v podstate prekryštalizovaná, sa kryštály izolujú a je možné ich premyť napríklad zmesou izobutylacetátu a acetónu v pomere 1:1 a vysušiť. Sušenie je možné vykonávať pri teplote okolia, prednostne však pri mierne zvýšenej teplote nižšej ako asi 45’C, prednostne pri asi 40’C. Aby sa dosiahol dobrý účinok, ako pri postupoch podlá príkladov 7 a 8, je prekryštalizovanie prípadne možné opakovať. Každé opakovanie prebieha s výťažkom 92 až 96 %.
Pravastatin dokonca aj po prekryštalizovaní obsahuje organickú nečistotu, ktorej relatívny retenčný čas pri HPLC je 0,9. Na základe HPLC chromatogramu získaného pri použití UV detekcie sa predpokladá, že táto organická nečistota tvorí asi 0,2 % celkového produktu. Organickú nečistotu je možné odstrániť nasledujúcim postupom.
Sol pravastatinu sa rozpustí vo vode, prednostne v minimálnom množstve alebo pri použití objemu 6 ml/g. K vzniknutému roztoku sa pridá asi 0,2 % objemového izobutanolu. Hodnota pH zmesi sa prídavkom hydroxidu sodného zvýši na asi 8 až asi 14, prednostne asi 10 až asi 13,7, a zmes sa udržuje pri teplote asi 10 až asi 50’C počas 10 až 200 minút, prednostne pri teplote od asi 20 do asi 30’C počas 60 až 100 minút. Výsledný roztok sa opäť okyslí minerálnou alebo organickou kyselinou, prednostne kyselinou chlorovodíkovou alebo sírovou, na pH asi 4 až asi 9, výhodnejšie na asi 5 až asi 9, a najvýhodnejšie na asi 6 až asi 7,5. Po úprave pH sa k roztoku za účelom vysolenia soli pravastatinu pridá chlorid amónny. Pokiaľ sa použije voda v množstve asi 6 ml/g, odporúča sa pridať asi 2,0 až 2,3 g chloridu amónneho na gram soli pravastatinu. Chlorid amónny sa prednostne pridáva po častiach počas 4 až 6 hodín.
Po prídavku chloridu amónneho môže amóniová soľ pravastatinu vykryštalizovať spontánne. V inom prípade je prekryštalizovanie možné indukovať ochladením, zaočkovaním alebo inými obvyklými spôsobmi. Hoci sa prekryštalizovanie prednostne indukuje prídavkom spoločného iónu, napríklad prídavkom chloridu amónneho, je možné ho indukovať tiež zriedením antirozpúšťadlom ako v hore opísanom stupni prekryštalizovania. Túto operáciu je však nutné vykonávať opatrne, aby nedošlo k nechcenému vyzrážaniu solí pravastatinu. Ako je podrobnejšie uvedené v príklade 1, množstvo organické nečistoty s relatívnym retenčným časom 0,9 sa zníži pod detekovateľný limit a amóniová soľ pravastatinu sa získa v asi 99,3% čistote, čím sa dosiahne čistota, ktorá je prijateľná pri farmaceutickom použití. V tomto štádiu spôsobu podľa vynálezu je možné získať amóniovú soľ pravastatinu, ktorá obsahuje menej ako asi 0,7 % hmotnostného organických nečistôt.
Po odstránení organických nečistôt prekryštalizovaním sa soľ pravastatinu transsalifikuje na sodnú soľ pravastatinu. Pod pojmom transsalifikácia sa rozumie proces, ktorým sa katión molekuly organickej soli zamení za iný. Pri transsalifikácii sa pravastatin najskôr uvoľní zo svojej soli s kovom alebo amóniovej soli tak, že sa soľ rozpustí vo vodnom rozpúšťadle, k vodnému roztoku sa pridá akákoľvek protická kyselina, ako kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, trifluóroctová alebo octová a pravastatin sa z vodného roztoku extrahuje organickým rozpúšťadlom. Protická kyselina sa k vodnému roztoku pridáva v množstve, ktoré ho neutralizuje alebo okyslí, prednostne okyslí na pH asi 1 až asi 6, výhodnejšie asi 2 až asi 4. Pred prídavkom alebo po prídavku protickej kyseliny k vodnému roztoku sa vodný roztok uvedie do styku s organickým rozpúšťadlom nemiešatelným s vodou, ako izobutylacetátom alebo akýmkoľvek iným organickým rozpúšťadlom nemiešatelným s vodou. Potom, čo sa vodný roztok uvedie do styku s organickým rozpúšťadlom nemiešatelným s vodou a zmieša sa s protickou kyselinou, sa od vodnej fázy oddelí organická fáza obsahujúca pravastatin a po jej prípadnom premytí vodou za účelom odstránenia amóniových zvyškov sa pravastatin spätne extrahuje vodným hydroxidom sodným. Prednostne sa používa hydroxidu sodný iba v miernom molárnom nadbytku vzhľadom na množstvo pravastatinu, prednostne v množstve menej ako 1,1 ekvivalentu, výhodnejšie menej ako 1,02 ekvivalentu. Po extrakcii do vodného hydroxidu sodného sa nadbytok sodných katiónov zachytí, aby sa dosiahla ekvivalencia sodných katiónov a pravastatinu takmer 1 : 1. Zachytávanie sa vykonáva pri použití ionexovej živice nerozpustnej vo vode. Vhodnými ionexovými živicami sú živice katiónového a chelátového typu, prednostne silne a slabo kyslé ionexy.
K silne kyslým katexovým živiciam, ktoré je možné použiť, patria katexy obsahujúce skupiny sulfónovej kyseliny (SO3“H+) . Ako ich príklady je možné uviesť komerčné produkty Amberlite® IR-118, IR-120, 252H; Amberlyst® 15, 36; Amberjet® 1200 (H) (Rohm and Haas); Dowex® radu 50WX, Dowex® HCR-W2, Dowex® 650C, Dowex® Maratón C, Dowex® DR-2030 a Dowex® HCR-S, ionexové živice (Dow Chemical Co.); živice radu Diaion® SK 102 až 116 (Mitsubishi Chemical Corp.) a Lewatit SP 120 (Bayer). Prednostnou silne kyslou katexovou živicou je Amberlite® 120, Dowex® 50 WX a rad Diaion® SK.
K slabo kyslým katexovým živiciam patria živice obsahujúce pendantné skupiny karboxylovej kyseliny. Ako slabo kyslé katexové živice je možné uviesť komerčné produkty Amberlite® CG-50, IRP-64, IRC 50 a C 67, rady Dowex® CCR, rady Lewatit® CNP a rady Diaion® WK, z ktorých sa najväčšia prednosť venuje živiciam Amberlite® IRC50, Lewatit® CNPBO a Diaion® WK 10. Menšiu prednosť majú ionexové živice chelátového typu. Ako niektoré z druhov dostupných na trhu je možné uviesť Duolite® C-718 a C-467 (Rohm & Haas).
Roztok obsahujúci sodnú sol pravastatinu a nadbytok sodných katiónov je možné uviesť do styku s ionexovou živicou akýmkoľvek spôsobom známym v tomto odbore, napríklad tak, že sa roztok nechá prejsť stĺpcom alebo lôžkom živice alebo že sa roztok v nádobe mieša s dostatočným množstvom živice. Spôsob kontaktu nie je rozhodujúci. Po zachytení nadbytku sodných iónov by pH roztoku sodnej soli pravastatinu malo byť v rozmedzí od asi 6,5 do asi 10, prednostne od asi 7,4 do asi 7,8, hoci pH bude závisieť od zriedenia. Zníženie pH roztoku sodnej soli pravastatinu z vyššej hodnoty na nižšiu a jeho ustálenie na nižšej hodnote je dôkazom, že zachytávanie nadbytku sodných iónov je v podstate dokončené. Po dokončení zachytávania sa roztok sodnej soli pravastatinu obvyklým spôsobom od živice oddelí. Roztok je možno zhromaždiť ako eluát zo stĺpca alebo lôžka, alebo je ho možné odfiltrovať, dekantovať apod.
Sodnú soľ pravastatinu je z roztoku sodné soli pravastatinu možné izolovať kryštalizáciou.
Efektívna kryštalizácia môže najskôr vyžadovať čiastočné odstránenie vody, čo je možné uskutočniť vákuovou destiláciou alebo nanofiltráciou. V prednostnom rozpracovaní sa vodný roztok sodnej soli pravastatinu pred kryštalizáciou skoncentruje na asi 20 až asi 50 % (hmotn./objem) . V prípade potreby je možné po skoncentrovaní vodného roztoku sodnej soli pravastatinu upraviť pH na asi 7 až asi 10 pri použití ionexovej živice v H+ forme.
Kryštalizácii môže napomáhať prídavok vodorozpustného organického rozpúšťadla alebo organickej rozpúšťadlovej zmesi. V tejto súvislosti je možné uviesť predovšetkým acetón a zmesi acetónu a acetonitrilu, etanolu a acetonitrilu, a etanolu a etylacetátu. Jedným z najvýhodnejších rozpúšťadlových systémov na kryštalizáciu sodnej soli pravastatinu je zmes vody, acetónu a acetonitrilu v pomere 1:3: 12, ktorý vznikne tak, že sa roztok sodnej soli pravastatinu skoncentruje na asi 30 % (hmotn./objem) a potom sa k nemu pridá príslušný objem zmesi acetónu a acetonitrilu v pomere 1 : 4. Inou velmi vhodnou kryštalizačnou rozpúšťadlovou zmesou je zmes vody a acetóu v pomere 1 : 15.
Sodnú sol pravastatinu je možné tiež izolovať lyofilizáciou vodného roztoku sodnej soli pravastatinu.
Pokiaľ sa izolácia vykonáva kryštalizáciou alebo inými spôsobmi, ktoré zlepšujú čistotu produktu, sodná soľ pravastatinu izolovaná pri realizácii tohto vynálezu v podstate neobsahuje pravastatin laktón. Ako dokladajú ďalej uvedené príklady, je možné izolovať sodnú soľ pravastatinu, ktorá obsahuje menej ako 0,5 % hmotn. celkovej nečistoty. Pri použití prednostných rozpracovaní vynálezu, z ktorých dve sú opísané v príkladoch 1 a 15, je možné izolovať sodnú soľ pravastatinu, ktorá obsahuje 0,2 hmotn. alebo menej celkovej nečistoty. Ako hlavné nečistoty podieľajúce sa na celkovej nečistote je možné uviesť sodnú soľ epipravastinu, sodnú soľ 3'-OH kompaktinu, sodnú soľ 6-hydroxyizokompaktinu a pravastatin laktón.
Vynález je bližšie objasnený v nasledujúcich príkladoch uskutočnenia. Tieto príklady majú výhradne ilustratívny charakter, a rozsah vynálezu v žiadnom ohľade neobmedzujú.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Prečistenie pravastatinu
Fermentačná pôda (100 litrov) sa prídavkom kyseliny sírovej okyslí na pH asi 2,5 až asi 5,0. Okyslená fermentačná pôda sa extrahuje izobutylacetátom (3 x 50 litrov). Výťažok extrakcie izobutylacetátom je podľa HPLC analýzy kalibrovanej k vnútornému štandardu v pôde 95 %. Podmienky HPLC (s obrátenými fázami): stĺpec Ci8, veľkosť častíc 5 pm, dĺžka 150 mm, priemer 4,6 mm; mobilná fáza: 45% metanol/voda, 0,1% trietylamín, 0,1% ľadová kyselina octová; prietok 1,3 ml/min; teplota stĺpca 25° C; vstrekovaný objem 10 pl; vnútorný štandard etylparahydroxybenzoát; detekcia: UV λ = 238 nm.
Spojené izobutylacetátové fázy sa extrahujú vodou (35 litrov) pri pH od asi 7,5 do asi 11,0 upraveným prídavkom koncentrovaného hydroxidu amónneho. Získaný vodný roztok pravastatinu sa opäť okyslí na pH asi 2,0 až asi 4,0 prídavkom 5M kyseliny sírovej a spätne extrahuje izobutylacetátom (8 litrov).
Výsledný roztok pravastatinu v izobutylacetáte sa čiastočne vysuší perlitom a síranom sodným. Roztok pravastatinu sa dekantuje, filtráciou zbaví sušiaceho činidla a odfarbí aktívnym uhlím (1,7 g). Roztok sa prefiltruje, aby sa zbavil aktívneho uhlia a umiestni sa do nádoby opatrenej prívodom plynu.
Do horného priestoru nad roztokom sa pri 15 až 25’C za rýchleho miešania zavedie plynný amoniak. Potom, čo sa zrážanie zdá byť ukončené, sa prívod amoniaku zastaví a k zmesi sa na uľahčenie filtrácie pridá chlorid amónny. Vyzrážané kryštály amónnej soli pravastatin karboxylátu sa zhromaždia filtráciou a premyjú izobutylacetátom a potom acetónom, čím sa získa amónna soľ pravastatinu s asi 94% čistotou, stanovené HPLC s UV detekciou λ = 238 nm.
Amónna soľ sa pravastatinu nasýteného roztoku : Soľ ďalej chloridu prekryštalizovanim z nasledujúcim postupom: aktívnej látky sa rozpustí vo sa pri asi 35 až 40°C izobutylacetátom (96 ml). Výsledný roztok sa ochladí na obsahujúca prečistí amónneho pravastatinu vode (960 ml) . Vzniknutý zriedi acetónom (96
162 g roztok ml) a asi 30 až 32’C a prídavkom pevného chloridu amónneho sa indukuje kryštalizácia amónnej soli pravastatinu. Chlorid amónny sa pridáva až dovtedy, keď ďalší prídavok nevedie k žiadnemu zjavnému prírastku kryštálov. Po pridaní chloridu amónneho sa roztok ochladí na 0 až 26°C. Kryštály amónnej soli pravastatinu sa zhromaždia filtráciou, premyjú izobutylacetátom a acetónom ako predtým a vysušia pri asi 40’C. Získajú sa kryštály amónnej soli pravastatinu (155,5 g) s asi 98% čistotou podľa stanovenia HPLC za hore uvedených podmienok.
Amónna soľ pravastatinu sa prečistí ďalším prekryštalizovanim nasledujúcim postupom. Amónna soľ pravastatinu (155,5 g aktívnej látky) sa rozpustí vo vode (900 ml). K vzniknutému roztoku sa pridá izobutanol (2 ml). Hodnota pH výslednej zmesi sa prídavkom koncentrovaného roztoku hydroxidu sodného zvýši na asi 10 až asi 13,7. Získaný roztok sa 75 minút mieša pri teplote okolia a prídavkom kyseliny sírovej zneutralizuje na pH 7. Kryštalizácia amónnej soli pravastatinu sa indukuje prídavkom pevného chloridu amónneho. Kryštály (150 g) sa zhromaždia filtráciou a premyjú acetónom. Pomocou HPLC za hore uvedených podmienok sa zistí, že bola získaná amónna soľ pravastatinu s čistotou asi 99,3 %.
Amónna sol pravastatinu sa transsalifikuje na sodnú soľ nasledujúcim spôsobom. Kryštály amónnej soli pravastatinu sa rozpustia vo vode (1800 ml). K vodnému roztoku sa pridá izobutylacetát (10,5 litra). Výsledný roztok sa prídavkom kyseliny sírovej okyslí na pH asi 2 až asi 4, čím sa pravastatin premení späť na voľnú kyselinu. Izobutylacetátová fáza obsahujúca pravastatin sa premyje vodou (5 x 300 ml) . Pravastatin sa potom premení na sodnú soľ a spätne extrahuje do inej vodnej fázy tak, že sa izobutylacetátový roztok vírivým pohybom premieša s vodou (900 až 2700 ml), pričom sa prerušovane pridáva 8M hydroxid sodný, kým sa pH nezvýši na asi
7,4 až asi 13.
Roztok sodnej soli pravastatinu sa potom zmieša s ionexovou živicou, aby sa zachytil nadbytok sodných katiónov. Po oddelení sa vodná fáza 30 minút pri teplote okolia mieša s ionexovou živicou Amberlite® IRC 50 v H+ forme. V miešaní sa pokračuje, kým sa nedosiahne pH asi 7,4 až asi 7,8.
Roztok sa potom prefiltruje, aby sa odstránila živica a sčasti pri zníženom tlaku skoncentruje na hmotnosť 508 g. Skoncentrovaný roztok sa zriedi acetonitrilom (480 ml), čím sa získa rozpúšťadlová zmes acetonitrilu a vody 1,4 : 1. Roztok sa mieša s aktívnym uhlím (5 g), aby sa odfarbil. Po odfiltrovaní aktívneho uhlia sa získa sodná soľ pravastatinu vo forme kryštálov (90% výťažok) tak, že sa k zmesi pridá ďalší acetón a acetonitril za vzniku zmesi vody, acetónu a acetonitrilu v pomere 1 : 3 : 12 (5,9 litrov) za chladenia na asi -10 až asi 0°C. Sodná sol pravastatinu sa získa v celkovom výťažku 65 % s čistotou asi 99,3 %, vztiahnuté na východiskovú fermentovanú aktívnu látku a merané pomocou HPLC za hore opísaných podmienok.
Príklad 2
Postupuje sa spôsobom opísaným v príklade 1, ale vypustí sa prekryštalizovanie zo zmesi vody, acetónu a acetonitrilu. Lyofilizáciou koncentrovaného roztoku sodnej soli pravastatinu vo vode sa získa sodná sol pravastatinu s asi 99% čistotou v asi 72% výťažku. Porovnanie s konečnou čistotou produktu získaného podlá príkladu 1 ukazuje, že prekryštalizovanie sodnej soli pravastatinu v porovnaní s lyofilizáciou vedie k trocha čistejšiemu produktu.
Príklady 3 až 6
Spôsobom opísaným v príklade 1 sa z fermentačnej pôdy izoluje sodná sol pravastatinu. Výťažky a čistota získaných produktov sú uvedené v tabulke 1 spolu so zodpovedajúcim organickým rozpúšťadlom, ktoré bolo použité na transsalifikáciu.
Tabulka 1
Príklad Organické Výťažok Čistota
číslo rozpúšťadlo (%) (%)
3 dichlórmetán 63 96, 6
4 etylacetát 58 99, 5
5 etylformiát 51 99, 6
6 butylmetylketón 61 99, 5
Príklad 7
Spôsobom opísaným v príklade 1, pri ktorom sa však sodná sol pravastatinu ďalej prečistí tak, že sa raz zopakuje prekryštalizovanie amónnej soli pravastatinu, sa získa sodná sol pravastatinu s asi 99,6% čistotou v 58,4% výťažku.
Príklad 8
Spôsobom opísaným v príklade 1, pri ktorom sa však sodná sol pravastatinu ďalej prečistí tak, že sa dvakrát zopakuje prekryštalizovanie amónnej soli pravastatinu, sa získa sodná sol pravastatinu s asi 99,8% čistotou v 53% výťažku.
Príklad 9
Spôsobom opísaným v príklade 1 sa fermentačná pôda (100 litrov) okyslí prídavkom kyseliny sírovej na pH od asi 2,5 do asi 5,0. Okyslená fermentačná pôda sa extrahuje izobutylacetátom (3 x 50 litrov). Spojené izobutylacetátové fázy sa potom extrahujú vodou (35 litrov) pri pH asi 7,5 až asi 11,0 upraveným prídavkom koncentrovaného hydroxidu amónneho.
Namiesto opätovného okyslenia a extrakcie izobutylacetátom za vzniku ďalej obohateného organického roztoku, ktoré sa uskutočňujú pri postupe podlá príkladu 1, sa vodný extrakt pri zníženom tlaku skoncentruje na koncentráciu 140 g/liter. Vzniknutý koncentrovaný roztok má pH asi 4,0 až asi 8. Nadbytok amoniaku sa odparí.
K skoncentrovanému roztoku sa počas 4 hodín pomaly po častiach pridajú kryštály chloridu amónneho (405 g) a amónna sol pravastatinu sa nechá vykryštalizovať pri teplote okolia.
Kryštály sa izolujú filtráciou, premyjú nasýteným roztokom chloridu amónneho a pri 40’C pridajú k vode (1 liter) . Po rozpustení sa teplota zníži na 30°C a k roztoku sa po častiach počas 2 hodín pridá chlorid amónny (330 g). Roztok sa potom mieša 15 hodín pri teplote okolia. Kryštály amónnej soli pravastatinu sa izolujú filtráciou, premyjú izobutylacetátom a potom acetónom a vysušia. Získané kryštály sa ďalej prečistia prekryštalizovaním, premenia na sodnú soľ a izolujú spôsobom opísaným v príklade 1. Získa sa sodná sol pravastatinu s čistotou asi 99,6 % vo výťažku 64,7 %.
Príklad 10
Postupuje sa podľa príkladu 1, ale sodná soľ pravastatinu sa prekryštalizuje zo zmesi vody a acetónu v pomere 1 : 15. Získa sa produkt v celkovom výťažku, vztiahnuté na fermentovanú aktívnu látku, 64 % s 99,6% čistotou podlá HPLC.
Príklad 11
Postupuje sa podľa prvých dvoch odsekov príkladu 9. Získa sa skoncentrovaný vodný extrakt (140 g/liter). Tento extrakt sa rozdelí na tri rovnaké časti. Skoncentrovaný roztok sa potom prídavkom IM kyseliny chlorovodíkovej okyslí na pH od asi 4,0 do asi 8,0. Ďalej sa postupuje podľa tretieho odseku príkladu 9, ale chlorid amónny sa nahradí soľou uvedenou v tabuľke 2. Z každej z troch častí sa vyzráža soľ pravastatinu, ktorá sa premení na sodnú soľ.
Tabuľka 2
Soľ Čistota (%) Výťažok (%)
chlorid amónny 99,3 42
chlorid sodný 99,4 38
chlorid lítny 99,1 34

Claims (42)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Spôsob izolácie sodnej soli zvolenej z pravastatinu, kompaktinu a lovastatinu z fermentačnej pôdy, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa (a) stupeň vytvorenia obohateného roztoku zlúčeniny;
    (b) stupeň získania soli zlúčeniny z obohateného roztoku;
    (c) stupeň prečistenia soli zlúčeniny;
    (d) stupeň transsalifikácie soli zlúčeniny na sodnú sol zlúčeniny, v ktorom sa
    i) zlúčenina uvolni zo svojej soli, ii) zlúčenina uvedie do styku s vodným roztokom hydroxidu sodného, čím sa získa vodný roztok sodnej soli zlúčeniny a iii) nadbytok sodných ióntov sa zachytí tak, že sa vodný roztok sodnej soli zlúčeniny uvedie do styku s ionexovou živicou nerozpustnou vo vode; a (e) stupeň izolácie sodnej soli zlúčeniny z vodného roztoku sodnej soli zlúčeniny.
  2. 2. Spôsob podía nároku 1, vyznačujúci sa tým, že obohateným roztokom je obohatený vodný roztok, ktorý sa pripraví tak, že sa vykoná (a) stupeň, v ktorom sa kyslá fermentačná pôda uvedie do styku s organickým extrakčným rozpúšťadlom, a tým sa získa organický extrakt zlúčeniny;
    (b) stupeň, v ktorom sa organický extrakt spätne extrahuje tak, že sa uvedie do styku s bázickým vodným roztokom, čim sa získa vodný extrakt; a (c) stupeň, v ktorom sa vodný extrakt skoncentruje, čím sa získa obohatený vodný roztok zlúčeniny.
  3. 3. Spôsob podlá nároku 1, vyznačujúci sa tým, že obohateným roztokom je obohatený organický roztok, ktorý sa pripraví tak, že sa vykoná (a) stupeň, v ktorom sa kyslá fermentační pôda uvedie do styku s organickým extrakčným rozpúšťadlom a tým sa získa organický extrakt zlúčeniny;
    (b) stupeň, v ktorom sa organický roztok spätne extrahuje tak, že sa uvedie do styku s bázickým vodným roztokom, čím sa získa vodný extrakt zlúčeniny; a (c) stupeň, v ktorom sa z vodného extraktu reextrahuje zlúčenina tak, že sa vodný extrakt uvedie do styku s organickým reextrakčným rozpúšťadlom, čím sa získa obohatený organický roztok zlúčeniny.
  4. 4. Spôsob podlá nároku 2, vyznačujúci sa tým, že skoncentrovanie vodného extraktu sa vykonáva vákuovou destiláciou.
  5. 5. Spôsob podía nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa kyslá fermentačná pôda uvádza do styku s organickým extrakčným rozpúšťadlom pri pH od asi 1 do asi 6.
  6. 6. Spôsob podía nároku 2, vyznačujúci s a tým, že sa spätná extrakcia bázickým vodným roztokom vykonáva pri pH od asi 7,0 do asi 13,7.
  7. 7. Spôsob podía nároku 2, vyznačuj ú c i . sa tým, že organické extrakčné rozpúšťadlo je zvolené zo súboru skladajúceho sa z alkylformiátov s 2 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, alkylesterov s 1 až 4 atómami uhlíka, alkylkarboxylových kyselín s 2 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, dichlórmetánu, dichlóretánu, chloroformu, tetrachlórmetánu a butylmety1ketónu.
  8. 8. Spôsob podía nároku 7, vyznačujúci sa tým, že organickým extrakčným rozpúšťadlom je acetát.
  9. 9. Spôsob podía nároku 3, vyznačujúci sa tým, že sa kyslá fermentačná pôda uvádza do styku s organickým extrakčným rozpúšťadlom pri pH od asi 1 do asi 6.
  10. 10. Spôsob podía nároku 3, vyznačujúci sa tým, že sa spätná extrakcia bázickým vodným roztokom vykonáva pri pH do asi 7,0 do asi 13,7.
  11. 11. Spôsob podía nároku 3, vyznačujúci sa tým, že sa reextrakcia zlúčeniny organickým rozpúšťadlom uskutočňuje pri pH od asi 1 do asi 6.
  12. 12. Spôsob podía nároku 3, vyznačujúci sa tým, že organické extrakčné rozpúšťadlo a organické reextrakčné rozpúšťadlo je vždy nezávisle zvolené zo súboru skladajúceho sa z alkylformiátov s 2 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, alkylesterov s 1 až 4 atómami uhlíka, alkylkarboxylových kyselín s 2 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, dichlórmetánu, dichlóretánu, chloroformu, tetrachlórmetánu a butylmety1ketónu.
  13. 13. Spôsob podía nároku 12, vyznačujúci sa tým, že organickým extrakčným rozpúšťadlom a organickým reextrakčným rozpúšťadlom sú acetáty.
  14. 14. Spôsob podía nároku 13, vyznačujúci sa tým, že organickým extrakčným rozpúšťadlom a organickým reextrakčným rozpúšťadlom je izobutylacetát.
    15. Spôsob podía nároku 1, v y z n a č u j ú c i s a t ý m, že sa stupeň získania soli zlúčeniny vykonáva pri teplote od asi -10 do asi +60’C. 16. Spôsob podía nároku 1, v y z n a č u j ú c i s a t ý m, že sa v stupni získania soli zlúčeniny sol zlúčeniny
    vyzráža prídavkom soli kovu, amoniaku, amínu alebo amóniovej soli k obohatenému roztoku.
  15. 17. Spôsob podía nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sa sol zlúčeniny vyzráža prídavkom amóniovej soli.
  16. 18. Spôsob podía nároku 17, vyznačujúci sa tým, že amóniová sol je zvolená zo súboru skladajúceho sa z chloridu amónneho, NH4C1; bromidu amónneho, NH4Br; jodídu amónneho, NH4I; síranu amónneho, (NH4)2SO4; dusičnanu amónneho, NH4NO3; fosforečnanu amónneho, (NH4)3PO4; siričitanu amónneho, (NH4)2S2O4; octanu amónneho, NH4OAc a tiokyanatanu amónneho, NH4SCN.
  17. 19. Spôsob podía nároku 18, vyznačujúci sa tým, že amóniovou solou je chlorid amónny.
  18. 20. Spôsob podlá nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sol zlúčeniny sa vyzráža prídavkom plynného amoniaku.
  19. 21. Spôsob podlá nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sol zlúčeniny sa vyzráža prídavkom plynného amoniaku a amóniovej soli.
  20. 22. Spôsob podlá nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sol zlúčeniny sa vyzráža prídavkom soli kovu.
  21. 23. Spôsob podlá nároku 22, vyznačujúci sa tým, že sol je zvolená zo súboru skladajúceho sa zo solí lítia, solí sodíka, solí draslíka, solí vápnika, soli horčíka, solí medi, solí železa, solí niklu, solí mangánu, solí cínu, solí zinku a solí hliníka.
  22. 24. Spôsob podlá nároku 23, vyznačujúci sa tým, že sol kovu je zvolená zo súboru skladajúceho sa zo solí obsahujúcich ióny Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Cu2+, Fe2+, Fe3+, Ni2+, Mn2+, Sn2+, Zn2+ a Al3+.
  23. 25. Spôsob podlá nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sol zlúčeniny sa vyzráža prídavkom soli amínu.
  24. 26. Spôsob podlá nároku 25, vyznačujúci sa tým, že sol amínu obsahuje amínovú časť zvolenú zo súboru skladajúceho sa z primárnych, sekundárnych a terciárnych alkylamínov vždy s 1 až 3 atómami uhlíka v každej z alkylových častí.
  25. 27. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že stupeň čistenia soli zlúčeniny zahŕňa stupeň prekryštalizovania soli zlúčeniny.
  26. 28. Spôsob podľa nároku 27, vyznačujúci sa tým, že prekryštalizovanie soli zlúčeniny zahŕňa
    (a) stupeň rozpustenia soli zlúčeniny vo vode, ktorým sa získa vodný roztok soli zlúčeniny; (b) stupeň zriedenia vodného roztoku soli antirozpúšťadlom; a zlúčeniny (c) stupeň pridania soli, ktorá obsahuje rovnaký kovu, amóniový ión alebo aminiový ión ako zlúčeniny. ión soľ 29. Spôsob podľa nároku 28, vyznačuj ú c i s a
    tým, že antirozpúšťadlo je zvolené zo súboru skladajúceho sa z etylacetátu, izobutylacetátu, izobutanolu, acetónu, acetonitrilu a etanolu.
  27. 30. Spôsob podľa nároku 28, vyznačujúci sa tým, že soľou obsahujúcou rovnaký ión kovu, amóniový ión alebo aminiový ión ako soľ zlúčeniny je amóniová sol.
  28. 31. Spôsob podľa nároku 30, vyznačujúci sa tým, že amóniová soľ je zvolená zo súboru skladajúceho sa z chloridu amónneho, NH4C1; bromidu amónneho, NH4Br; jodidu amónneho, NH4I; siranu amónneho, (NH4)2SO4; dusičnanu amónneho, NH4NO3; fosforečnanu amónneho, (NH4)3PO4; siričitanu amónneho, (NH4)2S2O4; octanu amónneho, NH4OAc a tiokyanatanu amónneho, NH4SCN.
  29. 32. Spôsob podľa nároku 31, vyznačujúci sa tým, že amóniovou soľou je chlorid amónny.
  30. 33. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci tým, že uvoľnenie zlúčeniny zo soli zlúčeniny zahŕňa (a) stupeň rozpustenia soli zlúčeniny vo vodnom rozpúšťadle, (b) stupeň pridania protickej kyseliny k vodnému rozpúšťadlu, a (c) stupeň extrakcie zlúčeniny z vodného rozpúšťadla do organického rozpúšťadla za vzniku organického roztoku zlúčeniny, pričom ďalej sa zlúčenina uvedie do styku s vodným roztokom hydroxidu sodného spätnou extrakciou organického roztoku zlúčeniny vodným roztokom hydroxidu sodného.
  31. 34. Spôsob podía nároku 33, vyznačujúci sa tým, že extrakcia zlúčeniny sa uskutočňuje pri pH od asi 1 do asi 6.
  32. 35. Spôsob podía nároku 33, vyznačujúci sa tým, že organické rozpúšťadlo je zvolené zo súboru skladajúceho sa z alkylformiátov s 2 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, alkylalkanoátov s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 2 až 4 atómami uhlíka v alkánovej časti, dichlórmetánu, dichlóretánu, chloroformu, tetrachlórmetánu a butylmetylketónu.
  33. 36. Spôsob podía nároku 35, vyznačujúci sa tým, že organickým rozpúšťadlom je izobutylacetát.
  34. 37. Spôsob podlá, nároku 33, vyznačujúci sa tým, že spätná extrakcia organického roztoku zlúčeniny do vodného roztoku hydroxidu sodného sa uskutočňuje pri pH od asi
    6,5 do asi 13,7.
  35. 38. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že stupeň izolácie sodnej soli zlúčeniny zahŕňa (a) stupeň skoncentrovania vodného roztoku sodnej soli zlúčeniny a (b) zriedenie vodného roztoku sodnej soli zlúčeniny organickým rozpúšťadlom alebo organickou rozpúšťadlovou zmesou.
  36. 39. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že stupeň izolácie sodnej soli zlúčeniny zahŕňa stupeň lyofilizácie vodného roztoku sodnej soli zlúčeniny.
  37. 40. Spôsob podľa nároku 38, vyznačujúci sa tým, že stupeň skoncentrovania vodného roztoku sodnej soli zlúčeniny sa vykonáva vákuovou destiláciou.
  38. 41. Spôsob podľa nároku 38, vyznačuj úci tým, že stupeň skoncentrovania vodného roztoku sodnej soli zlúčeniny sa vykonáva nanofiltráciou.
    42. Spôsob podľa nároku 38, v y z načuj ú c i sa tým, že vodný roztok sodnej soli zlúčeniny sa zriedi acetónom. 43. Spôsob podľa nároku 38, v y z načuj ú c i sa tým, že vodný roztok sodnej soli zlúčeniny sa zriedi organickou rozpúšťadlovou zmesou zvolenou zo súboru
    skladajúceho sa zo zmesi acetónu a acetonitrilu, zmesi etanolu a acetonitrilu a zmesí etanolu a etylacetátu.
  39. 44. Spôsob podľa nároku 38, vyznačujúci sa tým, že stupeň izolácie sodnej soli zlúčeniny sa uskutočňuje pri teplote od asi -10’C do asi 160°C.
  40. 45. Sodná sol pravastatinu, ktorá v podstate neobsahuje pravastatin laktón.
  41. 46. Sodná sol pravastatinu podía nároku 45, ktorá obsahuje 0,5 % hmotn. alebo menej celkovej nečistoty.
  42. 47. Sodná sol pravastatinu podía nároku 46, ktorá obsahuje
    0,2 % hmotn. alebo menej celkovej nečistoty.
SK734-2002A 1999-11-30 2000-11-28 Process for recovering statin compounds from a fermentation broth SK7342002A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16805699P 1999-11-30 1999-11-30
PCT/US2000/032391 WO2001039768A1 (en) 1999-11-30 2000-11-28 Process for recovering statin compounds from a fermentation broth

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK7342002A3 true SK7342002A3 (en) 2004-03-02

Family

ID=22609918

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK734-2002A SK7342002A3 (en) 1999-11-30 2000-11-28 Process for recovering statin compounds from a fermentation broth

Country Status (22)

Country Link
US (3) US6444452B1 (sk)
EP (1) EP1265604B1 (sk)
JP (5) JP3881240B2 (sk)
KR (1) KR20030026920A (sk)
CN (2) CN1754872A (sk)
AT (2) ATE342717T1 (sk)
AU (1) AU1804601A (sk)
CA (1) CA2393057C (sk)
CY (1) CY1105925T1 (sk)
DE (3) DE60031447T2 (sk)
DK (1) DK1265604T3 (sk)
ES (2) ES2239937T1 (sk)
HR (1) HRP20020454A2 (sk)
HU (1) HUP0204012A3 (sk)
MX (1) MXPA02005283A (sk)
PL (1) PL364918A1 (sk)
PT (1) PT1265604E (sk)
RU (1) RU2002114072A (sk)
SK (1) SK7342002A3 (sk)
WO (1) WO2001039768A1 (sk)
YU (1) YU39102A (sk)
ZA (1) ZA200203912B (sk)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7141602B2 (en) * 1998-09-18 2006-11-28 Lek Pharmaceuticals D.D. Process for obtaining HMG-CoA reductase inhibitors of high purity
US6682913B1 (en) * 1999-02-03 2004-01-27 Institute For Drug Research Ltd. Microbial process for preparing pravastatin
YU39102A (sh) * 1999-11-30 2006-01-16 Biogal Gyogyszergyar Rt Postupak dobijanja statina iz fermentacione smeše
KR20020062340A (ko) * 1999-12-14 2002-07-25 비오갈 기오기스제르갸르 알티. 신규 형태의 프라바스타틴 나트륨
US20050215636A1 (en) * 2000-10-05 2005-09-29 Vilmos Keri Pravastatin sodium substantially free of pravastatin lactone and EPI-pravastatin, and compositions containing same
JP3737801B2 (ja) * 2000-10-05 2006-01-25 テバ ジョジセルジャール レースベニュタールシャシャーグ プラバスタチンラクトン及びエピプラバスタチンを実質的に含まないプラバスタチンナトリウム、並びにそれを含む組成物
JP2002121172A (ja) * 2000-10-16 2002-04-23 Sankyo Co Ltd プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法
DE10119718A1 (de) * 2001-04-21 2002-10-31 Boehringer Ingelheim Pharma Verfahren zur kontinuierlichen Herstellung inhalierfähiger Arzneistoffe, Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens und nach diesem Verfahren hergestellter Arzneistoff
JP2003026634A (ja) * 2001-07-17 2003-01-29 Mercian Corp プラバスタチンナトリウム塩の製造方法
US6716615B2 (en) 2002-02-27 2004-04-06 Yung Shin Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. Strains of saccharaothrix, process for producing pravastatin using the strains and isolation process of (HMG)-CoA reductase
KR100540761B1 (ko) * 2002-08-09 2006-01-16 코바이오텍 (주) 프라바스타틴 나트륨의 제조방법
EP1477471A1 (en) * 2003-05-14 2004-11-17 Chunghwa Chemical Synthesis & Biotech Co., Ltd. Process for purifying pravastin sodium from a fermentation broth
ES2251894T3 (es) * 2003-11-24 2009-04-01 Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag Procedimiento de purificacion de pravastatina.
WO2005054253A1 (en) * 2003-12-05 2005-06-16 Biocon Limited Process for the purification of macrolides
WO2006046130A2 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of pravastatin
US20060194984A1 (en) * 2005-02-09 2006-08-31 Vilmos Keri Methods of making pravastatin sodium
JP4813841B2 (ja) * 2005-07-25 2011-11-09 キユーピー株式会社 プラバスタチンナトリウムの製造方法
DE102006028817A1 (de) * 2006-06-21 2007-12-27 Evonik Degussa Gmbh Aufarbeitung von Reaktionslösungen aus Ganzzell-Biotransformationen
WO2009078033A2 (en) * 2007-12-18 2009-06-25 Themis Medicare Limited Isolation and recovery of simvastatin in lactone form or in the form of an acid salt from the harvested fermentation broth
CN102046582B (zh) * 2008-04-02 2013-09-18 中化帝斯曼制药有限公司荷兰公司 普伐他汀萃取
IN2009MU00380A (sk) * 2009-02-18 2010-04-02
CN102993145B (zh) * 2011-09-19 2015-06-03 北大方正集团有限公司 一种提取纯化洛伐他汀的方法

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4319039A (en) * 1979-06-15 1982-03-09 Merck & Co., Inc. Preparation of ammonium salt of hypocholesteremic fermentation product
DK149080C (da) 1980-06-06 1986-07-28 Sankyo Co Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre
ATE69602T1 (de) * 1985-09-13 1991-12-15 Sankyo Co Hydroxy-ml-236b-derivate, deren herstellung und anwendung.
US4857547A (en) * 1988-01-07 1989-08-15 Merck & Co., Inc. Novel HMG-CoA reductase inhibitors
US4857522A (en) * 1988-03-21 1989-08-15 E. R. Squibb & Sons, Inc. Derivatives of pravastatin for inhibiting cholesterol biosynthesis
US5180589A (en) * 1988-03-31 1993-01-19 E. R. Squibb & Sons, Inc. Pravastatin pharmaceuatical compositions having good stability
US5099035A (en) * 1989-02-27 1992-03-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Mevinic acid derivatives useful as antihypercholesterolemic agents and method for preparing same
US5140012A (en) * 1990-05-31 1992-08-18 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for preventing onset of restenosis after angioplasty employing pravastatin
US5202029A (en) * 1991-03-13 1993-04-13 Caron Kabushiki Kaisha Process for purification of hmg-coa reductase inhibitors
US5157025A (en) * 1991-04-01 1992-10-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for lowering serum cholesterol employing a phosphorus containing ace inhibitor alone or in combination with a cholesterol lowering drug
NZ250609A (en) * 1992-12-28 1995-07-26 Sankyo Co Hexahydronaphthalene esters and ring closed lactones; preparation and medicaments
SI9300303A (en) 1993-06-08 1994-12-31 Krka Tovarna Zdravil Process for isolation of hypolipemic effective substance
US5616595A (en) 1995-06-07 1997-04-01 Abbott Laboratories Process for recovering water insoluble compounds from a fermentation broth
US5942423A (en) 1995-06-07 1999-08-24 Massachusetts Institute Of Technology Conversion of compactin to pravastatin by actinomadura
US5883109A (en) * 1996-07-24 1999-03-16 Bristol-Myers Squibb Company Method for lowering serum lipid levels employing an MTP inhibitor in combination with another cholesterol lowering drug
AU6726398A (en) * 1997-02-20 1998-09-09 Gist-Brocades B.V. Nitrogen feed in statin fermentation
AU9264598A (en) 1997-08-22 1999-03-16 Gist-Brocades B.V. Statin production by fermentation
SI9800046A (sl) * 1998-02-18 1999-08-31 LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. Postopek za pridobivanje inhibitorjev HMG-CoA reduktaze visoke čistosti
SI20072A (sl) * 1998-09-18 2000-04-30 LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. Postopek za pridobivanje inhibitorjev HMG-CoA reduktaze
CN1590363A (zh) 1999-02-03 2005-03-09 药物研究所有限公司 结晶形式的普伐他汀的钠盐及其制备方法
US6682913B1 (en) * 1999-02-03 2004-01-27 Institute For Drug Research Ltd. Microbial process for preparing pravastatin
HUP9902352A1 (hu) 1999-07-12 2000-09-28 Gyógyszerkutató Intézet Kft. Eljárás pravasztatin mikrobiológiai előállítására
YU39102A (sh) * 1999-11-30 2006-01-16 Biogal Gyogyszergyar Rt Postupak dobijanja statina iz fermentacione smeše
JP3737801B2 (ja) * 2000-10-05 2006-01-25 テバ ジョジセルジャール レースベニュタールシャシャーグ プラバスタチンラクトン及びエピプラバスタチンを実質的に含まないプラバスタチンナトリウム、並びにそれを含む組成物

Also Published As

Publication number Publication date
DK1265604T3 (da) 2007-02-05
US20020187531A1 (en) 2002-12-12
CY1105925T1 (el) 2011-04-06
EP1265604A1 (en) 2002-12-18
JP2006055174A (ja) 2006-03-02
KR20030026920A (ko) 2003-04-03
ATE382344T1 (de) 2008-01-15
CN1754872A (zh) 2006-04-05
JP2008109948A (ja) 2008-05-15
ES2239937T1 (es) 2005-10-16
WO2001039768A1 (en) 2001-06-07
AU1804601A (en) 2001-06-12
JP2004350687A (ja) 2004-12-16
EP1265604B1 (en) 2006-10-18
DE60031447D1 (de) 2006-11-30
ES2273737T3 (es) 2007-05-16
JP2003515334A (ja) 2003-05-07
YU39102A (sh) 2006-01-16
ZA200203912B (en) 2003-08-21
JP2006273861A (ja) 2006-10-12
RU2002114072A (ru) 2004-07-20
JP4343987B2 (ja) 2009-10-14
DE60037687D1 (de) 2008-02-14
HUP0204012A3 (en) 2003-12-29
DE60031447T2 (de) 2007-08-30
ATE342717T1 (de) 2006-11-15
PL364918A1 (en) 2004-12-27
HUP0204012A2 (hu) 2003-03-28
CA2393057A1 (en) 2001-06-07
JP3881240B2 (ja) 2007-02-14
CA2393057C (en) 2008-01-29
DE04010770T1 (de) 2005-10-20
US6444452B1 (en) 2002-09-03
US20040115781A1 (en) 2004-06-17
HRP20020454A2 (en) 2005-10-31
EP1265604A4 (en) 2004-06-16
MXPA02005283A (es) 2003-10-06
PT1265604E (pt) 2006-12-29
CN1433305A (zh) 2003-07-30
US6689590B2 (en) 2004-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4343987B2 (ja) スタチン化合物の単離精製方法
JP2015212300A (ja) プラバスタチンラクトン及びエピプラバスタチンを実質的に含まないプラバスタチンナトリウムの製造方法
HRP20020683A2 (en) Method of purifying a fermentation broth
NZ525256A (en) Method of purifying pravastatin
EP1481674B1 (en) Process for recovering statin compounds from a fermentation broth
US6936731B2 (en) Pravastatin sodium substantially free of pravastatin lactone and epi-pravastatin, and compositions containing same
EP1798214A1 (en) Process for recovering statin compounds from a fermentation broth
ZA200302968B (en) Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt.
US20050003499A1 (en) Ion-exchange filtration of fermentation broth
US20050215636A1 (en) Pravastatin sodium substantially free of pravastatin lactone and EPI-pravastatin, and compositions containing same